技术领域

本发明涉及一种新的抗肿瘤剂。更准确地说，本发明涉及包括 二苯乙烯衍生物及铂配位化合物如氯氨铂的抗肿瘤剂，例如一种抗 癌的化疗药(化学治疗药，化疗剂)；涉及对包括二苯乙烯衍生物或铂 配位化合物的抗肿瘤剂的使用并且涉及应用这些有效成分治疗、抑 制、缓解肿瘤等的用途。

技术背景

现有许多化疗剂用于治疗、抑制及防止肿瘤特别是恶性实体癌。 虽然这些药剂具有缓解肿瘤的作用，可是这些人们所熟悉的药剂并 不能够解除病人因肿瘤而引起的疼痛，因为对所用药剂产生了抗药 性，造成肿瘤复发等。因此，目前需要开发更先进的抗癌药物。

尽管已知具有顺式二苯乙烯基本骨架的二苯乙烯衍生物具有有 效的有丝分裂抑制活性及细胞毒性，但是由于这些二苯乙烯衍生物 在水中的低溶解度使得它们仍然不能作为一种药物使用。

最近，已经提出将水溶性提高、对微管蛋白聚合作用具有抑制 活性的二苯乙烯衍生物尤其是Combretastatin-A4的磷酸化前体药物 (见美国专利56122)，以及本受让者的二苯乙烯衍生物(日本专利Kokai 公告JP-A-7-228558和JP-A-8-301831)用作药物，并且认为这些二苯 乙烯衍生物的临床应用是有前景的。

另一方面，希望增加这些二苯乙烯衍生物在抗癌活性和安全性 方面的功效。

本发明的目的和问题

本发明的目的之一就是开发一种更好的抗肿瘤剂，特别是开发 一种能够增加二苯乙烯衍生物功效的药物制剂，详细地说是开发及 提供一种在治疗恶性肿瘤时在抗癌活性和安全性方面呈现更好功效 的抗癌药物。

本发明公开

为了克服上述问题并达到所述目的，本发明者进行了持久研究 并且发现，二苯乙烯衍生物与铂配位化合物如氯氨铂一起给药具有 协同治疗作用，有效地增加所述铂配位化合物的肿瘤生长抑制活性， 可是，所述二苯乙烯衍生物的作用优于那些其它的化疗药及所述的 铂配位化合物如氯氨铂，因此，所述的二苯乙烯衍生物对病人而言 是一种疗效更好的化疗药。即当二苯乙烯衍生物与可用作化疗剂的 铂配位化合物特别是氯氨铂联合用用作化疗药物用于治疗实体瘤 时，其抗癌活性以及安全性协同作用解决所述问题，实现上述目的 和要求。所述发现导致完成了本发明。

现在将更详细地阐述实现本发明的过程。

为了寻找具有更好抗癌功效的化疗药物组合物，本发明者进行 了研究，如含有用于治疗各种实体瘤如肺癌的化疗药氯氨铂的组合 物对移植到小鼠的肿瘤的功效增强所证实，作为实现更理想的临床 效果的指标，对小鼠肿瘤具有彻底治愈效果以及避免进行性增加体 重降低作用。

研究结果，本发明者发现通过联合二苯乙烯衍生物与铂配位化 合物，可实现对恶性肿瘤的协同性彻底治疗作用以及避免进行性体 重降低作用，所述二苯乙烯衍生物优选在体外对微管蛋白聚合作用 具有抑制活性。

在目前已知的治疗药物中，以对微管蛋白聚合作用的抑制活性 作为主要作用的治疗剂有长春新碱、长春地辛、长春花碱等。在包 括氯氨铂等的多重药物(复方药剂)治疗中这些药剂可用于治疗实体 瘤，期望增加临床功效。可是，本实验采用同时给予长春地辛和氯 氨铂抗小鼠肿瘤，根据参考的功效，并没有记录到肿瘤彻底治愈的 作用。因此，认为功效即本发明抗肿瘤剂的肿瘤彻底治愈作用，是 本发明抗肿瘤剂固有的作用。

至于安全性(细胞毒性)，在含有长春地辛和氯氨铂的组合物中可 能记录到进行性体重降低作用，在含有下面所示的结构式(3)化合物 和氯氨铂的组合物中未观测到进行性体重降低作用：

根据上述结果，较含有氯氨铂的组合物或其它单独的化疗药而 言，显然本发明的组合物对动物尤其对人类(病人)具有更好的功效， 并且是一种抗肿瘤剂，尤其是一种可以解除病人的肿瘤疼痛的肿瘤 化疗剂。在这些研究结果的基础上完成了本发明。

本发明希望提供一种新的抗肿瘤剂，例如一种抗癌化疗药(癌症 化疗剂)，该抗肿瘤剂中可同时或分别包含有两类活性成分，即二苯 乙烯衍生物和铂配位化合物如氯氨铂。

本发明的实施方案

本发明涉及抗肿瘤剂，该抗肿瘤剂的特征是包含有一种二苯乙 烯衍生物和一种铂配位化合物。

本发明也包括作为两类药物制剂联合的二苯乙烯衍生物和铂配 位化合物，该两类药物制剂分别包含有这两种成分。抗肿瘤剂抗肿 瘤剂本发明也包括作为抗肿瘤剂或辅助抗肿瘤剂的含有用作本发明 抗肿瘤剂的二苯乙烯衍生物的药物制剂或一种含有用作本发明抗肿 瘤剂的铂配位化合物的药物制剂。

抗肿瘤剂给予本发明抗肿瘤剂并用于所述受试者的肿瘤包括发 生于动物尤其是人类的所有类型的肿瘤。本发明的抗肿瘤剂可优选 用于抑制人类肿瘤细胞的增殖。本发明的抗肿瘤剂是一种以治愈(治 疗)、抑制、防止肿瘤等为目标的药物制剂。

对该抗肿瘤剂的给药形式并没有特别的限制。铂配位化合物通 常是胃肠外给药，同时二苯乙烯衍生物目前预定通过胃肠外给药。 本发明包括两种不同给药形式组成的抗肿瘤剂。

用于本发明的二苯乙烯衍生物，这种化合物具有顺式二苯乙烯 基本骨架并且在体外具有对微管蛋白聚合作用的抑制活性及/或抗肿 瘤活性的。作为抗肿瘤活性，优选肿瘤细胞增殖抑制活性。不仅已 知化合物，而且将来发现的化合物包括在本发明的二苯乙烯衍生物 中，前提是所述新发现的化合物归类为二苯乙烯衍生物。在本发明 的二苯乙烯衍生物中可以有这样的衍生物，它们在动物体内可转化 成二苯乙烯衍生物。任何适宜的药学上允许的衍生物都可作为二苯 乙烯衍生物用于本发明，如盐、酯、溶剂化物(溶剂化产物)如它们的 水合物，前提是所述衍生物在体内使用时具有所述抗癌活性。

在具有顺式二苯乙烯基本骨架的典型二苯乙烯衍生物中，优选 下面通式(1)和(2)所代表的化合物极其相应的盐、水合物和溶剂化物 (溶剂化产物)，尤其是其药学上可接受的形式。

在上式中R1、R2和R3独立为低级烷氧基，R4、R5和R6独立为 以下任意取代基：氢原子、卤素原子(氟、氯原子等)、硝基、羟基、 低级烷氧基、磷酸酯(磷酸与羟基酯化形成的取代基：-OPO3H2，此后 相同)、磷酸酰胺(磷酸与氨基酰胺化形成的取代基：-NHPO3H2，此后 相同)、氨基低级烷氧基、低级烷基氨基烷氧基、二低级烷基氨基低 级烷氧基、巯基、低级烷基硫代基、氨基、低级烷基氨基、二低级 烷基氨基、低级烷基、氨基低级烷基、三氟甲基、低级烷酰基、低 级烷酰基氨基及氨基酸酰胺基，X为氢原子或腈基团，而Het为杂环。

上述低级烷基和低级烷氧基中碳原子的数量分别为1到5，同时 低级烷酰基中碳原子的数量为2到6。

在氨基酸酰胺基团中氨基酸酰基是由氨基酸衍生的酰基。该氨 基酸可为α-氨基酸、β-氨基酸和γ-氨基酸。优选的氨基酸实例包括甘 氨酸、氨基丙酸、亮氨酸、丝氨酸、赖氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、 苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、鸟氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、酪氨 酸、苯丙氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、精氨酸、β-氨基丙酸、色氨酸、 脯氨酸、组氨酸等。实际上，鉴于药效和安全性，优选苏氨酸和丝 氨酸。虽然这些氨基酸中的任意一个可以是L-、D-或LD-型，但是 优选L-型。

例如，所述杂环可以为四唑环、噻唑环等。如果该杂环为噻唑 环，它可以有由低级烷基、氨基、单低级烷基氨基、二低级烷基氨 基、肼基、卤素原子如氟、氯原子和低级烷氧基所示范的取代基。 在该低级烷基和低级烷氧基中碳原子的数量为1到5。

如上所述，本发明中的二苯乙烯衍生物是其结构具有顺式二苯 乙烯骨架的化合物并且该化合物具有微管蛋白聚合作用的抑制活性 和/或抗癌活性。虽然，可以通过Combretastatine-A4示范所述的二苯 乙烯衍生物，但仅仅作为一个实例，并且抑制肿瘤增殖的二苯乙烯 衍生物已在先有技术公告中公开，如专利公告(见U.S专利号 4,996,237,5,561,122和5,430,062，日本专利Kokai公告JP-A-7-228558 和JP-A-8-301831及JP-A-10-81673，对应于日本专利申请序号 236603/1996，本申请在1996年9月6日申请)。在这些专利公告中 描述的先有技术的二苯乙烯衍生物可以用作本发明的二苯乙烯衍生 物，在先有技术范围内的二苯乙烯衍生物符合本发明的二苯乙烯衍生 物的前述定义。另外，所有先有技术专利公告的内容结合到本文并 因此构成了本说明书的部分内容。

通过常规技术包括在前述公告中公开的方法，可制备前述的二 苯乙烯衍生物。值得注意的是，将来开发的二苯乙烯衍生物可用与 前述相同的方法生产和用于本发明。

在本发明的二苯乙烯衍生物中，有盐、酯及其它二苯乙烯衍生 物和在体内可转化为二苯乙烯衍生物的衍生物，该二苯乙烯衍生物 在动物体内显示前述的目标活性。

作为用于本发明的二苯乙烯衍生物，更优选下面通式(1)所代表 的化合物：

在上面式(1)中，R1、R2、R3和R5为甲氧基，R4为氨基或氨基酸酰胺 基而R6和X为氢原子。

在式(1)所代表的化合物中，特别优选下面通式(3)所代表的化合 物，也可称为化合物(3)。 命名化合物(3)为(Z)-1-(3-氨基-4-甲氧基苯基)-2-(3,4,5-三甲氧基苯基)- 乙烯-L-丝氨酸酰胺，并且该化合物可溶于水。化合物(3)可以以盐的 形式存在例如盐酸盐、乙酸盐、甲磺酸盐等等。

在日本专利Kokai公告JP-A-8-301831中广泛地公开了化合物(3) 的制备以及含有化合物(3)、其惰性的药学上可接受的载体(s)和/或 稀释剂(s)的口服和/或胃肠外给药的药用组合物的制备，所述化合物(3) 可以以药学上可接受的盐、水合物及溶剂化物的形式存在，该公告 可作为制备的参考资料。

用于本发明的铂配位化合物最好是以离子形式释放出铂的化合 物并且也具有抗癌活性的化合物，更优选具有癌细胞增殖抑制性质 的铂配位化合物。

用于本发明的铂配位化合物的具体实例优选包括氯氨铂、顺式- diamminediacoplatinum(Ⅱ)离子、氯(二次乙基三胺)-铂(Ⅱ)氯化物、二 氯(次乙基二胺)-铂(Ⅱ)、双胺(1,1-环丁烷二羧酸盐)铂(Ⅱ)(碳铂)、螺铂、 异丙铂(iproplatin)、双胺(2-丙二酸乙酯)-铂(Ⅱ)、双胺丙二酸次乙酯- 铂(Ⅱ)、aqua(1,2-二氨基二氯己烷)-硫酸铂(Ⅱ)、(1,2-二氨基环己烷)-丙 二酸铂(Ⅱ)、(4-caloxy酞酸酯)-(1,2-二氨基环己烷)铂(Ⅱ)、(1,2-二氨 基环己烷)-(异柠檬酸盐)铂(Ⅱ)、(1,2-二氨基环己烷)-顺式丙酮酸铂 (Ⅱ)、(1,2-二氨基环己烷)草酸铂(Ⅱ)、Ormaplatm和tetraplatin。

此后，关于铂络合物包括按照本发明作为化疗药的铂配位化合 物将在下面作出一些解释。

长期以来，氯氨铂或顺式-二氯二胺(dichlorodiammine)铂(Ⅱ)作为 化疗药成功地用于治疗各种人类的恶性肿瘤。最近，其它的二氨基 铂络合物作为化疗药在治疗人类的各种恶性肿瘤时也显示了功效。 例如，可通过螺铂和碳铂列举这些二氨基铂络合物。

氯氨铂和其它的二氨基铂络合物作为化疗药广泛地用于人类。 可是这些络合物对所有的病人或所有肿瘤并不都是有效治疗。期望 可增加疗效，Garalla等(Garalla,R.J.等，Ann.Intern.Med.,95,414-420, 1980)用氯氨铂联合长春地辛或Congeval等(Congeval,E.等，Cancer, 51,2751-2756,1982)周氯氨铂联合VP-16进行了大量的尝试。虽然， 这类联合应用在功效比方面取得了一定的改进，但不能够说这些方 法可以完全解除病人的肿瘤疼痛。

例如用于本发明的铂配位化合物，有那些已知用作化疗药的化 合物(见Tamura,T.等，Jpn J.Clin.Oncol.Vol.18(1).27(1988)和Fukuda, M等，Cancer Chemother.Pharmacol.,vol.26,393(1990))。

为了解除病人的肿瘤疼痛，必须增加氯氨铂和其它二氨基铂络 合物的肿瘤增殖抑制活性。

在用于本发明的铂配位化合物中，氯氨铂、碳铂和Nedaplatin的 治疗效果比较理想。虽然，可通过先有技术制备是指顺式二氯二氨 铂(Ⅱ)的化合物“氯氨铂”，但是也可以通过商业渠道获得。例如，可 以根据商品名Platinol(注册商标)从Bristol Myers-Squibb Co.或根据商 品名“randa Inj.”从NIPPON KAYAKU CO.,LTD获得氯氨铂，该氯 氨铂为用水、无菌的生理盐水或其它适宜的赋形剂配制的粉剂。

大多数用于本发明的其它铂配位化合物可通过商业渠道获得或 通过已知的或常规采用的技术制备。属于在本发明定义范围内的铂 配位化合物而言，可通过将来开发的制备方法制备或获得这些化合 物。

当将来使用本发明的抗肿瘤剂时，将足够量的可抑制肿瘤增殖 的二苯乙烯衍生物与铂配位化合物联合给予受治疗者，该受试者为 需要治疗、缓解或防止肿瘤的动物尤其是人类，，尤其是患有肿瘤细 胞增殖的人，以此抑制人类肿瘤细胞的增殖。按照前述的情形，在 药物制剂中可以组合性含有本发明中的两种有效成分并且本发明包 括这样的联合药物制剂，每种联合药物制剂混合两种不同的制剂时 获得，该两种制剂中含有本发明的两种有效成分中的一种以实现目 标抗肿瘤剂，。此外，本发明也包括含有两种有效成分中一种的药物 制剂，所述药物制剂目的是与含有本发明的其它有效成分的药物制 剂联合使用。

本发明的优选实施方案之一是联合使用有效量的可抑制肿瘤细 胞增殖的化合物(3)与氯氨铂，抑制肿瘤细胞的增殖。

抑制肿瘤细胞增殖是指抑制对治疗敏感的肿瘤细胞增殖，所述 治疗包括给予例如患肿瘤细胞增殖的人有效量的二苯乙烯衍生物如 化合物(3)和铂配位化合物如氯氨铂。在可接受的情况下，所述给药 法抑制肿瘤细胞的增殖或减小可测量大小的肿瘤。在最佳的情况下， 肿瘤完全消退。

如前所述，对本发明抗肿瘤剂给予人类的给药方法没有特别的 限制，因此，该抗肿瘤剂可以口服或胃肠外给药，如通过静脉内的、 皮下的或肌肉内的途径给药。为了立即起效，优选胃肠外给药如通 过静脉和皮下给药、通过输注给药等。在按照本发明的药物制剂的 给药方法中，二苯乙烯衍生物可与铂配位化合物同时给药或按照任 意的顺序连续给予两种药。实际上，根据使用的二苯乙烯衍生物(如 化合物(3))的单独制剂、铂配位化合物(如氯氨铂)的单独制剂、治疗 的单独癌细胞及治疗的具体患者，理想的给药方法和顺序是不同的。 在预定的给定情况下，给予二苯乙烯衍生物和铂配位化合物的最佳 方法和顺序，可以由本领域的技术人员借助于常规技术和本说明书 中包括的资料作出适宜的选择。

二苯乙烯衍生物和铂配位化合物的肿瘤增殖抑制有效量是指， 在患肿瘤细胞增殖的人中抑制肿瘤细胞增殖的治疗单位，所述肿瘤 细胞对给药方法敏感。实际上，根据所用的二苯乙烯衍生物(如化合 物(3))的个别剂型、所用的铂配位化合物(如氯氨铂)的个别剂型、治 疗的特定肿瘤细胞及治疗的个别患者，理想的治疗单位是不同的。 在预定的给予情况下，最佳的治疗单位可以由本领域的技术人员借 助于治疗实验设备和本说明书包含的资料作出适宜的选择。

当给予本发明的抗肿瘤剂时，铂配位化合物的给药计划优选按 照每个治疗单位大约1-500mg/m2体表面积作为参考确定。当用氯氨 铂和化合物(3)时，可同时给药、氯氨铂给药先于化合物(3)给药(后给 予化合物(3))、或化合物(3)给药先于氯氨铂给药(较迟给予氯氨铂)。 或者可以联合使用这些方法。至于氯氨铂的给药优选量，在同时给 予治疗单位的化合物(3)时，优选每天给予氯氨铂大约10到100mg/m2 体表面积的，各连续给予一到五天。铂配位化合物的输注剂优选一 周输注一到两次。在副作用如肾毒性和神经毒性引起停药的范围内， 所述每周输注给药优选重复数次。可以采用其它常规应用的技术同 时给予铂配位化合物，如氯氨铂或其它铂配位化合物。

本发明的抗肿瘤剂是至少含有如前所述的二苯乙烯衍生物和铂 配位化合物的药物制剂，因此在药物制剂中含有作为混合物的这两 种活性成分。可是，在联合应用的不同的药物制剂中也可以分别含 有本发明的这两种活性成分。注意，就药物制剂中包含有用于本发 明的活性成分而言，本发明自然包括含有其它药剂(第三和第四种医 疗成分等)其它抗肿瘤剂的药物制剂。此外，本发明的抗癌剂在本 发明的任意一个药物制剂(含有本发明中的两种活性成份的唯一一种 药物制剂和每一种分别含有两种活性成份中的一种用于联合用药的 单独的药物制剂)中可能包含载体、稀释剂和其它药学上可接受的物 质。

用于本发明抗肿瘤剂的药学上可接受的适宜载体和稀释剂，可 以适当使用(例如，见日本专利Kokai公告JP-A-8-301831和其它前述 的先有技术公告)，这些载体等是药物制剂制备领域的技术人员所熟 悉的。按照以上讨论，本发明的抗肿瘤剂适合胃肠外应用。在这种 情况下，通过本领域技术人员所熟悉的各种方法，与药学上可接受 的载体一起将抗肿瘤剂制备为静脉内的输注剂或注射剂。优选用常 规技术例如以单位剂量型和两种有效成分混合物的冻干形式制备所 述药物，在给药时用水或其它适宜的液体输注剂重新制备。

根据若干因素如所需要的给药量和使用的药学上可接受的载 体，本发明抗肿瘤剂的药物制剂中两种成份的比率可以在宽范围内 变化。至于总量或在药物制剂中联合给予作为本发明抗肿瘤剂的二 苯乙烯衍生物，优选使用大约0.01到1000并且特别是大约0.1到100 重量份的二苯乙烯衍生物，在该药物制剂中含有1重量份的铂配位 化合物作为本发明的抗肿瘤剂。因此，当将含有两种活性成份的本 发明的药物制剂给药给予病人时，按照前面定义的给药范围给予药 量。

如果阶梯式给予所述的药物制剂，对于分开的药物制剂可将上 述定义的给药范围按照平均比率设置。

按照本发明的药物制剂的每一个剂量可以优选含有5到500mg 的铂配位化合物，更优选10到50mg，如氯氨铂，含有0.1到10,000mg 的二苯乙烯衍生物并且更优选1到1,000mg，如化合物(3)。最好在氯 氨铂的药物制剂中含有常规量的甘露醇和/或氯化钠。作为注射液或 输注液使用的药用组合物的生理药物的值可用本领域已知的缓冲剂 进行适当调节。

优选实施方案

现在参考其优选实施方案来更详细地解释本发明。应该注意到， 所给出的实施方案仅作为实例并不是用来限制本发明。 实施例1)抗癌作用和关于安全性的试验 (制备药物制剂)

用下列成份制备输注的药物制剂，用化合物(3)作为二苯乙烯衍 生物。 化合物(3)盐酸盐：    10mg 生理盐水：           10ml

使用的氯氨铂是由NIPPON KAYAKU CO.,LTD以商标名“randa Inj.”(在1ml溶液中含有0.5mg氯氨铂的制剂)销售的药物制剂。 (在小鼠进行功效试验(抗癌活性和安全性测试))

在CDF1小鼠的背部皮肤下接种10mg小鼠结肠肿瘤(结肠26)(0 天)。一周后，测量肿瘤计算肿瘤的体积并将受试鼠分成几组(每组 n=5)。开始注射药用制剂。在背部皮肤下注射化合物(3)(1ml生理盐 水中含1mg盐酸盐)和氯氨铂(1ml“randa Inj.”含0.5mg氯氨铂)并且 在第7天、第11天和第15天注射入尾部静脉。

在第60天通过没有扪及肿瘤的个体可以认为已经彻底治愈了其 肿瘤。结果见表1。

“VP-16”是临床上经常与氯氨铂联合使用的化疗药。[+CDDP] 是指以5mg/kg/天的量给予氯氨铂而[-CDDP]是指不给予氯氨铂，[n.d.] 是指未进行实验。同时，氯氨铂、VP-16和长春地辛的剂量代表最大 剂量，在本实施例的给药计划表 中该剂量没有因为毒性而引起死亡。

通过下列公式，计算在第21天的体重变化率。结果显示在表2 中。

体重变化率(％)=[{第21天的(体重-肿瘤的重量)}-{第7天的(体 重-肿瘤的重量)}]/{第7天的(体重-肿瘤的重量)}×100 [表1] 抗癌活性试验(1) 样品 给药量 肿瘤彻底消退的例数 mg/kg/天 -CDDP +CDDP 对照 -  0/5  0/5 化合物(3) 5  n.d.  1/5 化合物(3) 10  0/5  4/5 长春地辛 2  n.d.  0/5  VP-16  30  0/5  0/5 [表2] 安全性试验(1) 样品 给药量 体重变化率 mg/kg/天 -CDDP +CDDP 对照 -  -12.0 -11.1 化合物(3) 5  n.d. -4.2 化合物(3) 10  -7.7 -1.9 长春地辛 2  n.d. -23.2  VP-16 30  -1.0 -9.9 表1的结果清楚地显示，由于协同的药物活性，与含有两种成 份中任意一种的药物制剂相比，本发明的抗肿瘤剂得到改善，尤其 是在彻底消退肿瘤的作用方面，该抗肿瘤剂是二苯乙烯衍生物与铂 配位化合物的组合。

另一方面，在临床上与氯氨铂联合使用的制剂中，如长春地辛 或VP-16，未观察到肿瘤的彻底消退。

关于安全性方面，在本发明的两种成份联合应用时没有观察到 如在长春地辛或VP-16与铂配位化合物联合应用时观测到的不需要 的体重减轻，在表2结果中清楚显示。 (实施例2)抗肿瘤作用和关于安全性的试验2 (制备药物制剂)

按照下列组成，用化合物(4)和(5)制备输注药用制剂，作为二苯 乙烯衍生物的化合物(4)和(5)的化学结构式如下： 化合物(4)(盐酸盐)    5mg 吐温80               0.5ml和 生理盐水             9.5ml 化合物(5)(盐酸盐)    10mg 吐温80               0.5ml和 生理盐水             9.5ml

按照前面实施例1的描述，将由NIPPON KAYAKU CO.,LTD销 售的制剂[“randa Inj.”](在1ml溶液中含有0.5mg氯氨铂)和由Byistol Myers-Squibb Co.销售的制剂[“paraplatin注射剂”](在1ml溶液中含 有10mg碳铂)分别用作氯氨铂和用作碳铂。 (在小鼠的功效试验(抗癌活性和安全性试验))

在CDF1小鼠的背部皮肤下接种10mg小鼠结肠肿瘤结肠26(0 天)。一周后，测量肿瘤计算肿瘤的体积并将受试小鼠分成几组(每 组n=5)。开始注射药物制剂。

在第7天、第11天和第15天将化合物(3)和(5)，氯氨铂和碳铂 注射到尾部静脉中。

在第60天通过触诊没有肿瘤的个体可以认为已经彻底治愈了它 的肿瘤。结果见表3和表4。

[+CBDCA]和[+CDDP]是指分别给予50mg/kg/天的碳铂和 5mg/kg/天的氯氨铂，而[-CBDCA]和[-CDDP]是指不给予碳铂和氯氨 铂。同时，氯氨铂和碳铂的剂量代表最大剂量，在本实施例的给药 一览表中该剂量没有因为毒性而引起死亡。

按照实施例1中应用的公式，计算在21天时的体重变化率。结 果显示在表5和表6中。

[表3] 抗癌活性试验(2) 样品 给药量 肿瘤彻底消退的例数 mg/kg/天 -CBDCA +CBDCA 对照 - 0/6  0/6 化合物(3) 20  0/6  1/6 [表4] 抗癌活性试验(4) 样品 给药量 肿瘤彻底消退的例数 mg/kg/天 -CDDP +CDDP 对照 - 0/6  0/6 化合物(4) 5  0/6  4/6 化合物(5) 20  0/6  6/6 [表5] 安全性试验(2) 样品 给药量 体重变化率 mg/kg/天 -CBDCA +CBDCA 对照 - -22.1 -9.6 化合物(3) 20 -7.4  1.8 [表6] 安全性试验(3) 样品 给药量 体重变化率 mg/kg/天 -CDDP +CDDP 对照 - -22.1 -11.4 化合物(4) 5 -7.0 -13.9 化合物(5) 20 -2.1 -0.3

在表3和4中清楚地显示，通过联合使用二苯乙烯衍生物和铂 配位化合物，本发明的抗肿瘤剂具有优良的抗癌活性。

另外，关于安全性方面，在表5和6中清楚地显示，由于应用 本发明的两种成份所以可以看到显著的进步。

最后，从表1到表6结果可看出，按照本发明联合应用二苯乙 烯衍生物和铂配位化合物，抗肿瘤剂的功效协同性地改善超出了本 领域技术人员的预料，因此可以达到实质上非常有用的抗癌作用。

本发明的作用

按照本发明的抗肿瘤剂包含二苯乙烯衍生物和铂配位化合物如 氯氨铂，将其联合或以混合物的形式用作抗肿瘤剂，尤其是作为一 种肿瘤化疗药(癌症化学治疗药、化疗剂)，由于来自两种有效成份联 合的协同作用，所述抗肿瘤剂可以非常有效地治疗、控制和预防肿 瘤，尤其是实体瘤。

因此可以应用这两种活性成份治疗、控制和改善所述肿瘤。