用于肿瘤治疗的亚砜衍生物
阅读：122发布：2023-03-06
专利汇可以提供用于肿瘤治疗的亚砜衍生物专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且如所描述的式Ia至Im的亚砜衍 生物 及其可药用盐、 溶剂 合物、对映体、互变异构体和立体异构体，包括以所有比例的其混合物，用于 肿瘤 治疗 。，下面是用于肿瘤治疗的亚砜衍生物专利的具体信息内容。
1.化合物Ia至Ik和Im及其可药用盐，包括以所有比例的其混合物
2.药物，其包含至少一种权利要求1的化合物和/或其可药用盐，包括以所有比例的其混合物，及任选的赋形剂和/或辅剂。
3.根据权利要求1的化合物和其可药用盐、包括以所有比例的其混合物用于制备治疗或预防肿瘤疾病的药物的用途。
4.根据权利要求3的用途，其中肿瘤疾病是纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、成骨性肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴血管肉瘤、淋巴血管内皮肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤汶氏瘤、平滑肉瘤、横纹肌肉瘤、结肠癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳突腺癌、囊腺癌、骨髓瘤、支气管原癌、肾细胞癌、肝细胞瘤、胆管癌、绒毛膜癌、精原细胞瘤、胚胎瘤、威耳姆氏瘤、宫颈癌、睾丸癌、肺癌、小细胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、胶质瘤、星形细胞瘤、髓母细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、溶血血管母细胞瘤、听神经瘤、少突神经胶质瘤、脑膜瘤、黑色素瘤、神经母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、瓦尔登斯特伦氏巨球细胞瘤和重链疾病。
5.包含一种或多种根据权利要求1的化合物和/或其可药用盐，包括以所有比例的其混合物，和至少另一种药物活性化合物的药物。
用于肿瘤治疗的亚砜衍生物
[0001] 发明背景
[0002] 本发明的目的在于发现具有有价值的性质的新化合物，特别是可用于制备药物的那些。
[0004] 具体而言，本发明涉及化合物，其优选抑制一种或多种调控和/或调节溶血磷脂酸(或缩写为LPA)水平的酶，涉及包含这些化合物的组合物，以及涉及应用它们用于治疗疾病和病痛的方法，所述疾病和病痛诸如血管生成、癌、瘤形成、生长和增殖，动脉硬化、眼睛疾病、脉络膜新生血管和糖尿病视网膜病、炎性疾病、关节炎、神经变性、再狭窄、伤口愈合或移植排斥。具体而言，根据本发明的化合物适于治疗或预防癌症。
[0005] 自分泌运动因子(ATX)是对腹水和血浆中溶血磷脂酸水平的升高负有责任的酶(Xu等，1995，Clinical Cancer Research卷1，第1223页，和Xu等，1995，Biochem.J.卷309，第933页)。ATX将溶血磷脂胆碱(LPC)转化为溶血磷脂酸(Tokumura等，2002，J.Biol.Chem.，卷277，第39436页，和Umezu-Gozo等，2002，J.Biol.Chem.，卷158，第227页)。
LPA是细胞间酯类介质，其影响多种生物和生化过程，诸如例如，平滑肌收缩、凝血因子聚集和细胞凋亡(Tigyi等，2003Prog.Lipid Res.卷42，第498页，和Mills等，2003Nat.Rev.Cancer卷3，第582页，和Lynch等2001Prost.Lipid Med.卷64，第33页)。此外，还可在来自早期和晚期卵巢癌患者的血浆和腹水中发现浓度升高的LPA。LPA在肿瘤细胞增殖和其对相邻组织的侵入(其可导致转移)中起着作用(Xu等，1995，Clinical Cancer Research卷1，第1223页，和Xu等，1995，Biochem.J.卷309，第933页)。这些过程由LPA活化G蛋白耦联受体而开启(Contos等，2000，Mol.Pharm.卷58，第1188页)。
LPA是细胞间酯类介质，其影响多种生物和生化过程，诸如例如，平滑肌收缩、凝血因子聚集和细胞凋亡(Tigyi等，2003Prog.Lipid Res.卷42，第498页，和Mills等，2003Nat.Rev.Cancer卷3，第582页，和Lynch等2001Prost.Lipid Med.卷64，第33页)。此外，还可在来自早期和晚期卵巢癌患者的血浆和腹水中发现浓度升高的LPA。LPA在肿瘤细胞增殖和其对相邻组织的侵入(其可导致转移)中起着作用(Xu等，1995，Clinical Cancer Research卷1，第1223页，和Xu等，1995，Biochem.J.卷309，第933页)。这些过程由LPA活化G蛋白耦联受体而开启(Contos等，2000，Mol.Pharm.卷58，第1188页)。
[0006] 由于这一原因，希望降低LPA水平以用于治疗肿瘤患者。这可通过抑制参与LPA生物合成的酶而实现，所述酶例如诸如是自分泌运动因子(ATX，Sano等，2002，J.Biol.Chem.卷277，第21197页和Aoki等，2003，J.Biol.Chem.卷277第48737页)。自分泌运动因子属于核苷酸焦磷酸酶和磷酸二酯酶家族(Goding等，1998，Immunol.Rev.卷161，第11页)，并且是抗肿瘤治疗中的重要起始位点(Mills等，2003Nat.Rev.Cancer卷3，第582页，和Goto等，2004J.Cell.Biochem.卷92，第1115页)，因为其在肿瘤中以升高的程度表达并且引起肿瘤细胞增殖及侵入相邻组织，这可导致转移的形成(Nam等，2000，Oncogene，卷19第241页)。此外，自分泌运动因子与其它血管发生因子一起导致血管发生期间的血管形成(Nam等，2001，Cancer Res.卷61第6938页)。血管发生是肿瘤生长中的重要过程，其保证了对肿瘤的营养供应。由于这一原因，抑制血管发生是癌症和肿瘤治疗中的重要起点，其目的是饿死肿瘤(Folkman，2007，Nature Reviews Drug Discovery卷6，第273-286页)。
[0007] 此外，自分泌运动因子通过将LPC转化为LPA控制T细胞迁移入次级淋巴器官。T细胞不断地在健康机体的血液和次级淋巴器官，淋巴结之间迁移。为了从血流迁移进入淋巴结，T细胞必须克服专门的血管，即所谓的毛细血管后微静脉(HEV)。自分泌运动因子参与这一过程。HEV细胞分泌自分泌运动因子到血流中，自分泌运动因子结合T细胞并在其表面将LPC转化为LPA。LPA依次结合到T细胞表面的特异性受体并增加它们迁移到淋巴结的能力。用酶失活的自分泌运动因子突变体处理T细胞降低它们迁移到淋巴结的能力(Kanda，H.等，autotaxin，an ectoenzyme that produces lysophosphatidic acid，promotes the entry of lymphocytes into secondary lymphoid organs.Nat Immunol，
2008，卷9第4期，第415-423页)。用我们开发的抑制剂处理T细胞可以同样地阻断其迁移到淋巴结。
2008，卷9第4期，第415-423页)。用我们开发的抑制剂处理T细胞可以同样地阻断其迁移到淋巴结。
[0008] 在炎症期间，T细胞也可迁移入其它机体组织并推动炎症反应，这可以导致器官损伤。已经在动物模型中表明在炎症组织中的血管开始表达自分泌运动因子[(Nakasaki，T等，Involvement of the lysophosphatidi acid-generating enzyme autotaxin in lymphocyte-endothelial cell interactions Am J Pathol，2008，卷 173第 5期，第1566-1567页6)。因此可以假定自分泌运动因子也能够控制T细胞在炎症期间迁移入身体组织。增加的自分泌运动因子产生既在慢性炎症性肠道疾病的患者的炎症肠组织中确实明显(Wu，]等，Genome-wide gene expression differences in Crohn′s disease and ulcerativ colitis from endoscopic pinch biopsies：insights into distinctive pathogenesis Inflamm Bowel Dis，2007，卷13第7期，第807-821页)，也在关节炎患者 受侵袭的关节中(Nochi，H.等，Stimulatory role of lysophosphatidic acid cyclooxygenase-2induction by synovial fluid of patients with
arthritis in fibroblast-like synovial cells.J Immunol，2008.181(7)，第页)和滑液成纤维细胞中确实明显(Kehlen，A.等，IL-1beta-and
down-regulation of autotaxin mRNA and PC-1 in fibroblast-like synoviocytes patients with rheumatoid arthritis(RA).Clin Exp Immunol，2001，卷123第期，第
147-154页.)。由于T细胞迁移入组织在两种炎症性疾病中发挥作用抑制自分泌运动因子可以抑制这一过程并因而对疾病过程具有积极影响。
arthritis in fibroblast-like synovial cells.J Immunol，2008.181(7)，第页)和滑液成纤维细胞中确实明显(Kehlen，A.等，IL-1beta-and
down-regulation of autotaxin mRNA and PC-1 in fibroblast-like synoviocytes patients with rheumatoid arthritis(RA).Clin Exp Immunol，2001，卷123第期，第
147-154页.)。由于T细胞迁移入组织在两种炎症性疾病中发挥作用抑制自分泌运动因子可以抑制这一过程并因而对疾病过程具有积极影响。
[0009] 出人意料地，发现根据本发明的化合物引起对核苷酸焦磷酸酶和磷酸二酯酶家族，尤其是对自分泌运动因子的特异性抑制。根据本发明的化合物优选展示出有利的生物学活性，其可通过例如在本文中描述的测试很容易地检测。在这一类型的测试中，根据本发明的化合物优选展示出并引起抑制活性，其通常通过合适范围内的IC50值记录，优选在微摩尔范围，且更优选在纳摩尔范围。
[0010] 一般而言，可用式Ia至Im的化合物治疗所有实体瘤和非实体瘤，例如诸如，单核细胞性白血病、脑肿瘤、泌尿生殖肿瘤、淋巴系统肿瘤、胃癌、喉癌和肺癌，包括肺腺癌和小细胞性肺癌。其它的实例包括前列腺癌、胰腺癌和乳腺癌。
[0011] 如本文所讨论的那样，本发明化合物的效果与各种疾病有关。因此，根据本发明的化合物可用于预防和/或治疗受到一种或多种核苷酸焦磷酸酶和/或磷酸二酯酶(尤其是自分泌运动因子)的抑制影响的疾病。
[0012] 本发明因此涉及根据本发明的化合物，其在所述疾病的治疗和/或预防中作为药物和/或药物活性成分，以及涉及本发明的化合物在制备治疗和/或预防所述疾病的药物活性剂中的用途，以及还涉及治疗所述疾病的方法，其包括将一种或多种根据本发明的化合物给予需要此类施用的患者施用。
[0013] 可显示根据本发明的化合物在异种移植肿瘤模型中具有有益作用。
[0015] 可以通过体外试验测定某种细胞对用本发明的化合物进行处理的敏感性。通常，将细胞培养物与不同浓度的本发明的化合物合并足以使活性剂诱导细胞死亡或抑制迁移的一段时间，通常为约1小时至1周。可以使用来自活检样品的培养细胞进行体外测试。然后对处理后剩余的活细胞进行计数。
[0016] 剂量根据所用的具体化合物、具体疾病、患者状态等的不同而改变。治疗剂量通常足以减少靶组织中不良的细胞群，同时维持患者的生存力。治疗一般持续至出现明显的减轻，例如细胞负荷(cell burden)减少至少约50％，并且可以持续至在体内基本上不再检测到不良的细胞。现有技术
[0017] 其他能够抑制自分泌运动因子的亚砜在WO2009046841中有所描述。
[0018] 其他杂环衍生物在WO 2002085352、WO 2002030422、EP 1002535、WO 9818793、EP385848、FR 2637286、WO 2005097782、EP 709384、EP 396282、EP 49203中有所描述。
[0019] 发明概述
[0020] 本发明涉及式Ia至Im的化合物：
[0021]
[0022]
[0023]
[0024] 本发明还涉及这些化合物的如下所述的旋光活性形式(立体异构体)、对映体、互变异构体、外消旋物、非对映异构体和盐、水合物和溶剂合物。化合物的溶剂合物指的是惰性溶剂分子加合至化合物上，其因它们的相互吸引力而形成。溶剂合物是例如一或二水合物或醇合物。
[0025] 亚砜也可以描述为偶极共振式。硫由此呈现为手性中心，因而对映体表示为：
[0026]
[0027]
[0028] 互变异构体：
[0029]
[0030] 药学上有用的衍生物指的是例如本发明化合物的盐，还指所谓的前体药物化合物。
[0031] 前体药物衍生物指的是利用例如烷基或酰基、糖或寡肽修饰的并且在生物体内快速裂解成本发明的有效化合物的式I的化合物。
[0032] 它们还包括本发明化合物的生物可降解的聚合物衍生物，例如如Int.J.Pharm.115，61-67(1995)中所述。
[0033] 表述“有效量”表示在组织、系统、动物或人中导致例如研究人员或医师所寻求或期望的生物学或医学反应的药物或药学活性成分的量。
[0035] 表述“治疗有效量”还包括有效增加正常生理功能的量。
[0036] 本发明还涉及根据本发明的化合物的混合物，例如两种非对映体的混合物、例如比例为1∶1、1∶2、1∶3、1∶4、1∶5、1∶10、1∶100或1∶1000的两种非对映体的混合物的用途。
[0037] 这些特别优选是立体异构体化合物的混合物。
[0038] 此外，还通过如文献中(例如在标准教科书如Houben-Weyl，Methodel der organischen Chemie[有机化学方法]，Georg-Thieme-Verlag，Stuttgart所述的本身已知的方法、准确地在已知的且适合于所述反应的反应条件下制备式Ia至Im的化合物以及用于制备它们的原料。在此也可以使用在此未更详细提及的本身已知的变化形式。
[0039] 如果需要的话，起始材料也可以原位形成，从而可以不将其从反应混合物中分离出来，而是立即将其进一步转化成式Ia至Im的化合物。
[0040] 合适的惰性溶剂的实例有：烃类，如己烷、石油醚、苯、甲苯或二甲苯；氯化烃类，如三氯乙烯、1，2-二氯乙烷、四氯化碳、氯仿或二氯甲烷；醇类，如甲醇、乙醇、异丙醇、正-丙醇、正-丁醇或叔丁醇；醚类，如乙醚、二异丙基醚、四氢呋喃(THF)或二 烷；乙二醇醚类，如乙二醇单甲醚或单乙醚、乙二醇二甲醚(二甘醇二甲醚)；酮类，如丙酮或丁酮；酰胺类，如乙酰胺、二甲基乙酰胺或二甲基甲酰胺(DMF)；腈类，如乙腈；亚砜类，如二甲亚砜(DMSO)；二硫化碳；羧酸类，如甲酸或乙酸；硝基化合物，如硝基甲烷或硝基苯；酯类，如乙酸乙酯，或所述溶剂的混合物。
[0041] 特别优选乙腈、二氯甲烷和/或DMF。
[0042] 本发明所述的化合物可以以其最终的非盐形式使用。另一方面，本发明还包括这些化合物的药学上可接受的盐形式的用途，所述药学上可接受的盐可以通过本领域已知的方法由各种有机和无机酸和碱衍生得到。式Ia至Im化合物的药学上可接受的盐形式大部分是通过常规方法制备的。如果式Ia至Im化合物含有羧基，则其合适的盐之一可通过使该化合物与合适的碱反应从而产生相应的碱加成盐来形成。这类碱有例如碱金属氢氧化物，包括氢氧化钾、氢氧化钠和氢氧化锂；碱土金属氢氧化物，如氢氧化钡和氢氧化钙；碱金属醇盐，例如乙醇钾和丙醇钠；和各种有机碱，如哌啶、二乙醇胺和N-甲基-谷氨酰胺。也包括式Ia至Im化合物的铝盐。就某些式Ia至Im化合物而言，可以通过用药学上可接受的有机和无机酸处理这些化合物来形成酸加成盐，例如卤化氢，如氯化氢、溴化氢或碘化氢；其它无机酸及其相应的盐，如硫酸盐、硝酸盐或磷酸盐等；和烷基-和单芳基-磺酸盐，如乙磺酸盐、甲苯磺酸盐和苯磺酸盐；和其它有机酸及其相应的盐，如乙酸盐、三氟乙酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、苯甲酸盐、水杨酸盐、抗坏血酸盐等。因此，式I化合物的药学上可接受的酸加成盐包括以下盐：乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、精氨酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐(苯基磺酸盐)、硫酸氢盐、亚硫酸氢盐、溴化物、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、辛酸盐、氯化物、氯苯甲酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、磷酸二氢盐、二硝基苯甲酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、半乳糖二酸盐(得自粘酸)、半乳糖醛酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、谷氨酸盐、甘油磷酸盐、半琥珀酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、马尿酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、碘化物、羟乙基磺酸盐、异丁酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、偏磷酸盐、甲磺酸盐、甲基苯甲酸盐、磷酸一氢盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、油酸盐、扑姆酸盐(palmoate)、果胶酯酸盐、过硫酸盐，苯基乙酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、膦酸盐、邻苯二甲酸盐，但这并不代表限于此。
[0043] 此外，本发明化合物的碱盐包括铝盐、铵盐、钙盐、铜盐、铁(III)盐、铁(II)盐、锂盐、镁盐、锰(III)盐、锰(II)盐、钾盐、钠盐和锌盐，但这并不代表限于此。在上述盐中，优选铵盐；碱金属盐钠盐和钾盐，以及碱土金属盐钙盐和镁盐。衍生自药学上可接受的有机无毒碱的式Ia至Im化合物的盐包括以下物质的盐：伯、仲和叔胺、被取代的胺，还包括天然存在的被取代的胺、环状胺和碱性离子交换树脂，例如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、氯普鲁卡因、胆碱、N，N′-二苄基乙二胺(benzathine)、二环己基胺、二乙醇胺、二乙胺、2-二乙基氨基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、葡糖胺、氨基葡糖、组氨酸、哈胺(hydrabamin)、异丙胺、利多卡因、赖氨酸、葡甲胺、N-甲基-D-葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、聚胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙醇胺、三乙胺、三甲胺、三丙胺和三(羟基甲基)甲基胺(氨基丁三醇)，但这不代表限于此。
[0044] 可以用一些物质将含有碱性含氮基团的本发明的化合物季铵化，所述物质如(C1-C4)烷基卤化物，例如甲基、乙基、异丙基和叔丁基氯化物、溴化物和碘化物；硫酸二(C1-C4)烷基酯，例如硫酸二甲基、二乙基和二戊基酯；(C10-C18)烷基卤化物，例如癸基、十二烷基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂基氯化物、溴化物和碘化物；以及芳基(C1-C4)烷基卤化物，例如苄基氯和苯乙基溴。可以用该类盐来制备水溶性和油溶性的本发明的化合物。
[0045] 优选的上述药用盐包括乙酸盐、三氟乙酸盐、苯磺酸盐、柠檬酸盐、富马酸盐、葡糖酸盐、半琥珀酸盐、马尿酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、羟乙基磺酸盐、扁桃酸盐、葡甲胺、硝酸盐、油酸盐、膦酸盐、新戊酸盐、磷酸钠、硬脂酸盐、硫酸盐、磺基水杨酸盐、酒石酸盐、硫代苹果酸盐、甲苯磺酸盐和氨基丁三醇，但这并不代表限于此。
[0046] 式Ia至Im的碱性化合物的酸加成盐是通过将游离碱形式与足够量所需的酸接触、从而以常规方式形成盐来制备的。可以通过将盐形式与碱接触并以常规方式分离出游离碱而再生游离碱。游离碱形式在某些方面与其相应的盐形式不同，例如在某些物理性质如在极性溶剂中的溶解度方面；然而，对于本发明的目的而言，盐在其它方面与其各自的游离碱形式相当。
[0047] 如上所述，式Ia至Im的化合物的药学上可接受的碱加成盐是用金属或胺如碱金属和碱土金属或有机胺形成的。优选的金属有钠、钾、镁和钙。优选的有机胺有N，N’-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、N-甲基-D-葡糖胺和普鲁卡因。
[0048] 本发明的酸性化合物的碱加成盐是通过将游离酸形式与足够量所需的碱进行接触、从而以常规方式形成盐来制备的。可以通过将盐形式与酸接触并以常规方式分离出游离酸而再生游离酸。游离酸形式在某些方面与其相应的盐形式不同，例如在某些物理性质如在极性溶剂中的溶解度方面；然而，对于本发明的目的而言，盐在其它方面与其各自的游离酸形式相当。
[0049] 如果本发明的化合物含有一个以上能形成这类药学上可接受的盐的基团，则本发明还包括多重盐。典型的多重盐形式包括例如酒石酸氢盐、二乙酸盐、二富马酸盐、二葡甲胺、二磷酸盐、二钠盐和三盐酸盐，但这并不代表限于此。
[0050] 就上述内容而言，可以看出，本文中的表述“药学上可接受的盐”指的是包括其盐之一的形式的式Ia至Im的化合物的活性成分，特别是只要与活性成分的游离形式或更早使用的活性成分的任何其它盐形式相比该盐形式赋予了活性成分改进的药动学性质。活性化合物的药学上可接受的盐形式也可以首次为该活性成分提供了之前其不具有的所需的药动学性质，甚至可能在其体内治疗效果方面对该活性成分的药效学具有积极影响。
[0051] 本发明还涉及包含至少一种式Ia至Im的化合物和/或其药学上有用的立体异构体(包括其所有比例的混合物)并任选地包含赋形剂和/或辅剂的药物。
[0052] 药物制剂可以以每个剂量单位包含预定量的活性成分的剂量单位形式进行施用。该类单位可包含例如0.5mg至1g、优选1mg至700mg、特别优选5mg至100mg本发明的化合物，这取决于所治疗的病症、施用方法以及患者的年龄、体重和情况，或者药物制剂可以以每个剂量单位包含预定量的活性成分的剂量单位形式进行施用。优选的剂量单位制剂是包含上述日剂量或部分剂量或其相应分数的活性成分的那些。此外，这类药物制剂可以用药学领域广泛已知的方法来制备。
[0053] 药物制剂可适用于经由任何所需的适宜方法进行的施用，例如口服(包括口含或舌下)、直肠、鼻、局部(包括口含、舌下或透皮)、阴道或胃肠外(包括皮下、肌内、静脉内或真皮内)方法。该类制剂可以用药学领域中已知的所有方法来制备，例如通过将活性成分与赋形剂或辅剂合并来制备。
[0054] 适于口服施用的药物制剂可以以独立单位的形式进行施用，所述的独立单位例如胶囊或片剂；粉末或颗粒；位于水性或非水性液体中的溶液或混悬液；可食用的泡沫或泡沫食物；或水包油型液体乳剂或油包水型液体乳剂。
[0055] 因此，例如，就以片剂或胶囊形式口服施用而言，可以将活性成分组分与无毒的药学上可接受的口服惰性赋形剂例如乙醇、甘油、水等合并。粉末可以通过将化合物粉碎至适当细的大小并将其与以相似方式粉碎的药用赋形剂例如可食用的碳水化合物例如淀粉或甘露醇混合来制备。也可以存在矫味剂、防腐剂、分散剂和染料。
[0056] 胶囊是通过如上所述制备粉末混合物并填充到成型的明胶胶囊壳中来制备的。在进行填充操作前，可以向粉末混合物中加入助流剂和润滑剂，如例如高度分散的硅酸、滑石粉、硬脂酸镁、硬脂酸钙或固体形式的聚乙二醇。也可以加入崩解剂或增溶剂，如例如琼脂、碳酸钙或碳酸钠以提高胶囊被使用后药物的利用度。
[0057] 此外，如果需要或必要，也可以向混合物中掺入合适的粘合剂、润滑剂和崩解剂以及染料。合适的粘合剂包括淀粉、明胶、天然糖类如例如葡萄糖或β-乳糖、由玉米制得的甜味剂、天然和合成橡胶如例如阿拉伯胶、西黄蓍胶或藻酸钠、羧甲基纤维素、聚乙二醇、蜡类等。这些剂型中所用的润滑剂包括油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等。崩解剂非限制性地包括淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、黄原胶等。片剂是通过例如制备粉末混合物、将该混合物制粒或干压、加入润滑剂和崩解剂并将整个混合物压成片剂来制备的。粉末混合物是通过将以适当方式粉碎的化合物与上述稀释剂或基质混合并任选地与粘合剂如例如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶或聚乙烯吡咯烷酮、溶出阻滞剂如例如石蜡、吸收促进剂如例如季盐和/或吸收剂如例如膨润土、高岭土或磷酸二钙混合来制备的。可以通过用粘合剂如例如糖浆、淀粉糊、acadia胶浆或者纤维素或聚合物材料的溶液润湿并将其过筛而将粉末混合物制粒。作为制粒的一种替代选择，可以使粉末混合物通过压片机，得到形状不均匀的块状物，将其破碎从而形成颗粒。通过加入硬脂酸、硬脂酸盐、滑石粉或矿物油可对颗粒进行润滑以防止粘附在片剂铸模上。然后，将被润滑的混合物压成片剂。
也可以将本发明的化合物与自由流动的惰性赋形剂合并，然后在不进行制粒或干压步骤的情况下直接压成片剂。可以存在由虫胶隔离层、糖或聚合物物质层和蜡的光泽层组成的透明或不透明的保护层。可以向这些包衣中加入染料以便能区别不同的剂量单位。
也可以将本发明的化合物与自由流动的惰性赋形剂合并，然后在不进行制粒或干压步骤的情况下直接压成片剂。可以存在由虫胶隔离层、糖或聚合物物质层和蜡的光泽层组成的透明或不透明的保护层。可以向这些包衣中加入染料以便能区别不同的剂量单位。
[0058] 口服液体如例如溶液、糖浆和酏剂可以被制备为剂量单位形式以便给予定量包含预定量的化合物。糖浆可以通过将化合物溶解于具有合适矫味剂的水性溶液中来制备，而酏剂是用无毒的醇性媒介物制备的。混悬液可以通过将化合物分散于无毒媒介物中来制备。也可以加入增溶剂和乳化剂如例如乙氧基化的异硬脂醇和聚氧乙烯山梨醇醚类、防腐剂、矫味添加剂如例如薄荷油或天然甜味剂或糖精或其它人工甜味剂等。
[0059] 如果需要，可以将用于口服施用的剂量单位制剂包封于微囊中。也可以以释放被延长或延缓的形式来制备制剂，如例如通过将粒状材料用聚合物、蜡等进行包衣或者将其包埋于聚合物、蜡等中来制备制剂。
[0060] 式Ia至Im的化合物及其盐和生理学功能衍生物也可以以脂质体递送系统如例如单层小囊泡、单层大囊泡和多层囊泡的形式进行施用。可以由各种磷脂如例如胆固醇、硬脂胺或磷脂酰胆碱来形成脂质体。
[0061] 式Ia至Im的化合物以及其盐和生理学功能衍生物也可以用单克隆抗体作为独立载体而被递送，其中所述化合物分子与所述单克隆抗体偶联。也可以将化合物偶联到作为靶向药物载体的可溶性聚合物上。该类聚合物可包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羟丙基甲基丙烯酰氨基苯酚(polyhydroxypropylmethacrylamidphenol)、聚羟乙基天冬酰氨基苯酚(polyhydroxyehtylaspartamidphenol)或聚氧化乙烯聚赖氨酸，被棕榈酰基取代。还可以将化合物偶联到一类适于实现药物控释的生物可降解聚合物上，例如聚乳酸、聚-ε-己内酯、聚羟基丁酸、聚原酸酯类、聚缩醛类、聚二羟基吡喃、聚氰基丙烯酸酯和交联或两亲性嵌段共聚物水凝胶。
[0062] 适于经皮施用的药物制剂可以作为与接受者的表皮长期紧密接触的独立硬膏剂施用。因此，例如，可以用离子电渗疗法使活性化合物从硬膏剂中递送，如Pharmaceutical Research，3(6)，318(1986)中的通用术语所述。
[0063] 适于局部施用的药用化合物可以被配制成软膏剂、乳膏剂、混悬剂、洗剂、粉末、溶液剂、糊剂、凝胶剂、喷雾剂、气雾剂或油。
[0064] 对于眼或其它外部组织例如口和皮肤的治疗，制剂优选地以局部用软膏剂或乳膏剂的形式被应用。在配制软膏剂的情况中，可以将活性化合物与石蜡或水可混溶的乳膏基质一起应用。或者，可以用水包油型乳膏基质或油包水型基质将活性化合物配制成乳膏剂。
[0065] 适于局部应用于眼的药物制剂包括滴眼剂，其中活性化合物被溶解或混悬于适宜的载体、特别是水性溶剂中。
[0066] 适于在口中局部应用的药物制剂包括锭剂、软锭剂和漱口剂。
[0067] 适于直肠施用的药物制剂可以以栓剂或灌肠剂的形式施用。
[0068] 其中载体物质是固体的适于鼻施用的药物制剂包含具有例如20-500微米粒度的粗粉末，其可以以嗅的方式施用，即经由鼻道从靠近鼻的含粉末容器中迅速吸入。以液体作为载体物质、以鼻喷雾剂或滴鼻剂施用的适宜制剂包含活性成分在水或油中的溶液。
[0069] 适于通过吸入施用的药物制剂包含细颗粒粉或雾，所述细颗粒粉或雾可通过各种类型的含气雾剂的加压分配器、喷雾器或吹入器来产生。
[0070] 适于阴道施用的药物制剂可以以阴道栓、卫生栓、乳膏剂、凝胶剂、糊剂、泡沫或喷雾制剂的形式施用。
[0071] 适于胃肠外施用的药物制剂包括：水性和非水性无菌注射溶液，其包含抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和溶质，由此使得制剂与被治疗接受者的血液等渗；以及水性和非水性的无菌混悬液，其可以包含混悬介质和增稠剂。制剂可以位于单剂量或多剂量容器、例如密封的安瓿和小瓶中施用，并且以冷冻干燥(冻干)状态储存，以便仅需在使用前即刻加入无菌载体液体例如注射用水即可。按照处方制备的注射溶液和混悬液可以由无菌粉末、颗粒和片剂制备。
[0072] 不言而喻的是，除了上面特定提及的组份外，制剂还可以包含本领域中该特定类型制剂中常用的其它物质；因此，例如，适于口服施用的制剂可以包含矫味剂。
[0073] 式Ia至Im的化合物的治疗有效量取决于许多因素，包括例如动物的年龄和体重、需要治疗的准确疾病情况及其严重程度、制剂的性质和施用方法，并且最终由主治医生或兽医来决定。然而，本发明化合物用于治疗肿瘤生长例如结肠或乳腺癌的有效量一般为0.1至100mg/kg接受者(哺乳动物)体重/天，特别是通常为1至10mg/kg体重/天。因此，对于体重为70kg的成年哺乳动物而言，每天的实际量通常为70至700mg，其中该量可以作为每天单次剂量或者通常以每天一系列部分剂量(如例如二、三、四、五或六个部分剂量)被施用，从而使得总日剂量相同。可以以本发明化合物本身的有效量分数来确定其盐或溶剂合物或生理学功能衍生物的有效量。可认为相似剂量适用于治疗上述其它病症。
[0074] 本发明还涉及包含至少一种式Ia至Im的化合物和/或其可药用衍生物、盐、溶剂合物、对映异构体、互变异构体和立体异构体，包括其所有比例的混合物以及至少一种另外的药物活性成分的药物。
[0075] 本发明还涉及由如下的单独药包组成的组合(药盒)：
[0076] (a)有效量的式Ia至Im的化合物和/或其药学上有用的立体异构体，包括以所有比例的其混合物；和
[0077] (b)有效量的另一种药物活性化合物。
[0078] 该组合包含合适的容器，如盒、单个瓶、袋或安瓿。该组合可以包含例如单独的安瓿，各自包含有效量的式Ia至Im的化合物和/或其药学上有用的立体异构体、包括所有比例的其混合物；和有效量的溶解或冻干形式的另一种药物活性化合物。
[0079] 化合物Ia-Im优选用于肿瘤疾病的治疗，肿瘤疾病例如纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、成骨性肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴血管肉瘤、淋巴血管内皮肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤汶氏瘤、平滑肉瘤、横纹肌肉瘤、结肠癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳突腺癌、囊腺癌、骨髓瘤、支气管原癌、肾细胞癌、肝细胞瘤、胆管癌、绒毛膜癌、精原细胞瘤、胚胎瘤、威耳姆氏瘤、宫颈癌、睾丸癌、肺癌、小细胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、胶质瘤、星形细胞瘤、髓母细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、溶血血管母细胞瘤、听神经瘤、少突神经胶质瘤、脑膜瘤、黑色素瘤、神经母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、瓦尔登斯特伦氏巨球细胞瘤和重链疾病。
[0080] 优选地将式Ia至Im的化合物与已知的抗癌剂联合。
[0081] 这些已知的抗癌剂包括下面的物质：雌激素受体调节剂、雄激素受体调节剂、类维生素A受体调节剂、细胞毒性剂、抗增殖剂、异戊二烯基-蛋白转移酶抑制剂、HMG-CoA还原酶抑制剂、HIV蛋白酶抑制剂、逆转录酶抑制剂和其它血管生成抑制剂。本发明的化合物特别适于与放疗同时施用。本领域已经描述了与放疗联合的VEGF抑制的协同作用(见WO00/61186)。
[0082] “雌激素受体调节剂”指的是可以干扰或抑制雌激素与受体结合的化合物，而不管其机理如何。雌激素受体调节剂的实例包括但不限于他莫昔芬、雷洛昔芬、艾多昔芬、LY353381、LY117081、托瑞米芬、氟维司群、4-[7-(2，2-二甲基-1-氧代丙氧基-4-甲基-2-[4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]-2H-1-苯并吡喃-3-基]-苯基-2，2-二甲基丙酸酯、4，4’-二羟基二苯甲酮-2，4-二硝基苯基-腙和SH646。
[0083] “雄激素受体调节剂”指的是可以干扰或抑制雄激素与受体结合的化合物，而不管其机理。雄激素受体调节剂的实例包括非那雄胺和其它5α-还原酶抑制剂、尼鲁米特、氟他胺、比卡鲁胺、利阿唑和醋酸阿比特龙，但不限于此。
[0084] “类维生素A受体调节剂”指的是可以干扰或抑制类维生素A与受体结合的化合物，而不管其机理。该类类维生素A受体调节剂的实例包括贝沙罗汀、维甲酸、13-顺式-视黄酸、9-顺式-视黄酸、α-二氟甲基鸟氨酸、ILX23-7553、反式-N-(4’-羟基苯基)视黄酰胺和N-4-羧基苯基视黄酰胺。
[0085] “细胞毒性剂”指的是主要通过直接作用于细胞功能或抑制或干扰细胞有丝分裂而造成细胞死亡的化合物，包括烷化剂、肿瘤坏死因子、嵌入剂、微管抑制剂和拓扑异构酶抑制剂。
[0086] 细胞毒性剂的实例包括但不限于替拉扎明、Sertenef、恶病质素、异环磷酰胺、他索纳明、氯尼达明、卡铂、六甲密胺、泊尼莫司汀、二溴卫矛醇、雷莫司汀、福莫司汀、奈达铂、奥沙利铂、替莫唑胺、庚铂、雌莫司汀、英丙舒凡甲苯磺酸盐、曲磷胺、尼莫司汀、二溴螺氯铵、嘌嘧替派、洛铂、沙铂、甲基丝裂霉素、顺铂、伊罗夫文、右异环磷酰胺、顺式-胺化二氯(2-甲基-吡啶)铂、苯甲基鸟嘌呤、葡磷酰胺、GPX100、(反式，反式，反式)-二-mu-(己烷-1，6-二胺)mu-[二胺-铂(II)]二[二胺(氯)铂(II)]四氯化物、二氮杂环丙烯基精胺、三氧化二砷、1-(11-十二烷基氨基-10-羟基十一烷基)-3，7-二甲基黄嘌呤、佐柔比星、伊达比星、柔红霉素、比生群、米托蒽醌、吡柔比星、吡萘非特、戊柔比星、氨柔比星、抗瘤酮(antineoplastone)、3’-脱氨基-3’-吗啉代-13-脱氧代-10-羟基洋红霉素、Annamycin、加柔比星、依利奈法德、MEN10755和4-脱甲氧基-3-脱氨基-3-环乙亚胺基-4-甲基磺酰基-柔红霉素(见WO 00/50032)，但不限于此。
[0087] 微管抑制剂的实例包括紫杉醇、硫酸长春地辛、3’，4’-二脱氢-4’-脱氧-8’-去甲长春花碱、多西紫杉醇、根霉素、多拉司他汀、米伏布林羟乙基磺酸盐、auristatin、西马多丁、RPR109881、BMS184476、长春氟宁、念珠藻环肽、2，3，4，5，6-五氟-N-(3-氟-4-甲氧基苯基)苯磺酰胺、脱水长春碱(anhydrovinblastine)、N，N-二甲基-L-缬氨酰基-L-缬氨酰基-N-甲基-L-缬氨酰基-L-脯氨酰基-L-脯氨酸-叔丁酰胺、TDX258和BMS188797。
[0088] 拓扑异构酶抑制剂的一些实例有托泊替康、hycaptamine、伊立替康、卢比替康、6-乙氧基丙酰基-3’，4’-O-外-亚苯甲基教酒菌素、9-甲氧基-N，N-二甲基-5-硝基吡唑并[3，4，5-kl]吖啶-2-(6H)丙胺、1-氨基-9-乙基-5-氟-2，3-二氢-9-羟基-4-甲基-1H，
12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’：b，7]-吲嗪并[1，2b]喹啉-10，13(9H，15H)二酮、勒托替康、
7-[2-(N-异丙基氨基)乙基]-(20S)喜树碱、BNP1350、BNPI1100、BN80915、BN80942、磷酸依托泊苷、替尼泊苷、索布佐生、2’-二甲基氨基-2’-脱氧依托泊苷、GL331、N-[2-(二甲基氨基)乙基]-9-羟基-5，6-二甲基-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑-1-甲酰胺、asulacrine、(5a，5aB，8aa，9b)-9-[2-[N-[2-(二甲基氨基)乙基]-N-甲基氨基]乙基]-5-[4-羟基-3，
5-二甲氧基苯基]-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并(3’，4’：6，7)萘并(2，3-d)-1，3-间二氧杂环戊烯-6-酮、2，3-(亚甲二氧基)-5-甲基-7-羟基-8-甲氧基苯并[c]-啡啶 6，
9-二[(2-氨基乙基)氨基]苯并[g]异喹啉-5，10-二酮、5-(3-氨基丙基氨基)-7，10-二羟基-2-(2-羟基乙基氨基甲基)-6H-吡唑并[4，5，1-de]吖啶-6-酮、N-[1-[2(二乙基氨基)乙基氨基]-7-甲氧基-9-氧代-9H-噻吨-4-基甲基]甲酰胺、N-(2-(二甲基氨基)乙基)吖啶-4-甲酰胺、6-[[2-(二甲基氨基)乙基]氨基]-3-羟基-7H-茚并[2，1-c]喹啉-7-酮和地美司钠。
12H-苯并[de]吡喃并[3’，4’：b，7]-吲嗪并[1，2b]喹啉-10，13(9H，15H)二酮、勒托替康、
7-[2-(N-异丙基氨基)乙基]-(20S)喜树碱、BNP1350、BNPI1100、BN80915、BN80942、磷酸依托泊苷、替尼泊苷、索布佐生、2’-二甲基氨基-2’-脱氧依托泊苷、GL331、N-[2-(二甲基氨基)乙基]-9-羟基-5，6-二甲基-6H-吡啶并[4，3-b]咔唑-1-甲酰胺、asulacrine、(5a，5aB，8aa，9b)-9-[2-[N-[2-(二甲基氨基)乙基]-N-甲基氨基]乙基]-5-[4-羟基-3，
5-二甲氧基苯基]-5，5a，6，8，8a，9-六氢呋喃并(3’，4’：6，7)萘并(2，3-d)-1，3-间二氧杂环戊烯-6-酮、2，3-(亚甲二氧基)-5-甲基-7-羟基-8-甲氧基苯并[c]-啡啶 6，
9-二[(2-氨基乙基)氨基]苯并[g]异喹啉-5，10-二酮、5-(3-氨基丙基氨基)-7，10-二羟基-2-(2-羟基乙基氨基甲基)-6H-吡唑并[4，5，1-de]吖啶-6-酮、N-[1-[2(二乙基氨基)乙基氨基]-7-甲氧基-9-氧代-9H-噻吨-4-基甲基]甲酰胺、N-(2-(二甲基氨基)乙基)吖啶-4-甲酰胺、6-[[2-(二甲基氨基)乙基]氨基]-3-羟基-7H-茚并[2，1-c]喹啉-7-酮和地美司钠。
[0089] “抗增殖剂”包括反义RNA和DNA寡核苷酸诸如G3139、ODN698、RVASKRAS、GEM231和INX3001，以及抗代谢物诸如依诺他滨、卡莫氟、替加氟、喷司他丁、去氧氟尿苷、曲美沙特、氟达拉滨、卡培他滨、加洛他滨、阿糖胞苷十八烷基磷酸钠、Fosteabine钠水合物、雷替曲塞、Paltitrexid、乙嘧替氟、噻唑呋林(tiazofurin)、地西他滨、诺拉曲塞、培美曲塞、Nelzarabine、2’-脱氧-2’-亚甲基胞苷、2’-氟亚甲基-2’-脱氧胞苷、N-[5-(2，3-二氢-苯并呋喃基)磺酰基]-N’-(3，4-二氯苯基)脲、N6-[4-脱氧-4-[N2-[2(E)，4(E)-十四碳二烯酰基]甘氨酰基氨基]-L-甘油-B-L-甘露-吡喃庚糖基]腺嘌呤、aplidine、海鞘素、曲沙他滨、4-[2-氨基-4-氧代-4，6，7，8-四氢-3H-嘧啶并[5，4-b][1，4]噻嗪-6-基-(S)-乙基]-2，5-噻吩酰基-L-谷氨酸、氨基蝶呤、5-氟尿嘧啶、阿拉诺新、11-乙酰基-8-(氨基甲酰氧基甲基)-4-甲酰基-6-甲氧基-14-氧杂-1，11-二氮杂四环(7.4.1.0.0)-十四碳-2，4，6-三烯-9-基醋酸酯、苦马豆碱、洛美曲索、右雷佐生、蛋氨酸酶、2’-氰基-2’-脱氧-N4-棕榈酰基-1-B-D-呋喃阿糖基胞嘧啶和3-氨基吡啶-2-醛缩氨基硫脲。“抗增殖剂”还包括除“血管生成抑制剂”下列出的那些物质外的生长因子的单克隆抗体，诸如曲妥单抗和肿瘤抑制基因，诸如p53，其可以通过重组的病毒介导的基因转移来进行递送(例如见US专利6,069,134)。
[0090] 特别优选用本发明的化合物来治疗和预防肿瘤疾病。
[0091] 所述肿瘤优选选自鳞状上皮、膀胱、胃、肾、头和颈、食管、宫颈、甲状腺、小肠、肝、脑、前列腺、泌尿生殖道、淋巴系统、胃、喉和/或肺的肿瘤。
[0092] 该肿瘤还优选选自肺腺癌、小细胞肺癌、胰腺癌、成胶质细胞瘤、结肠癌和乳腺癌。
[0093] 还优选用其来治疗血液和免疫系统的肿瘤，优选用其来治疗选自急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、急性淋巴性白血病和/或慢性淋巴性白血病的肿瘤。
[0094] 另一方面，本发明包括通过与抗增殖剂联合施用式Ia至Im的化合物来治疗患有肿瘤诸如癌的患者的方法。合适的抗增殖剂包含表1中提供的那些。
[0095] 上下文中所有的温度都是以℃为单位给出的。在下面的实施例中，“常规的处理”是指：如果需要的话，加入水，如果需要的话，根据终产物的组成将pH调至2至10，用乙酸乙酯或二氯甲烷对混合物进行萃取，进行相分离，将有机相用硫酸钠干燥并进行蒸发，以及用硅胶色谱和/或通过结晶对产物进行纯化。
[0096] 质谱(MS)：EI(电子撞击电离)M+
[0097] FAB(快原子轰击)(M+H)+
[0098] ESI(电喷射电离)(M+H)+
[0099] APCI-MS(大气压化学电离-质谱)(M+H)+
[0100] LC/MS方法：
[0101] 溶剂A：水+0.1％TFA
[0102] 溶剂B：乙腈+0.1％TFA
[0103] 流速：2.4ml/min
[0104] 梯度：0.0min 4％的B
[0105] 2.6min 100％的B
[0106] 柱： Speed ROD RP-18e 50-4，6mm
[0107] 已合成和表征下述物质。然而，本领域技术人员也可以通过其他的方式进行这些物质的制备和表征。
[0108] 实施例1
[0109] 3，5-二氟甲基苄基4-[2-(3H-苯并三唑-5-(R)亚硫酰基)乙基]哌嗪-1-甲酸酯10a的合成
[0110]
[0111] a.将5-氟-2-硝基苯胺1(33.6g，213mmol，90％)和碳酸铯(77.1g，237mmol)悬浮在400ml的乙腈中(淡红色悬浮液)。室温将2-巯基乙醇(18.5g，237mmol)加入到该悬浮液中，在此期间反应反应混合物立即改变颜色为黄色。随后将混合物在60℃搅拌18h。过滤混合物，用乙腈清洗残留物，并将滤液蒸发至干，得到黄-橙色固体，其证实为化合物2并无需进一步纯化而进行反应。
[0112] b.将化合物2(45.5g，212mmol)悬浮在250ml的乙腈中。在室温将三乙胺(22.6g，223mmol)加入到这一深红色悬浮液中，并随后在室温搅拌混合物30分钟。在室温慢慢地逐滴加入为溶液的溶解在20ml二氯甲烷中的甲磺酰氯(25.5g，223mmol)(放热反应)，并随后在室温继续搅拌3小时，期间产物沉淀出，为黄色沉淀。将混合物在冰中冷却2小时，滤去黄色沉淀物并用大量乙腈清洗。合并滤液和洗涤液并蒸发。然后将浓缩的溶液同样地冷却，用双倍量的甲基叔丁基醚沉淀进一步的产物。同样地滤去并用乙腈清洗。合并两种过滤残留物并在真空干燥，得到化合物3的黄色固体，其无需进一步纯化而进行反应。
[0113] c.将化合物3(61.9g，212mmol)和Boc-哌嗪(47.0g，250mmol)悬浮在400ml的THF中。将在20ml THF中的25.7g(254mmol)的三乙胺溶液缓慢地逐滴加入到这一黄色悬浮液中。加入结束时，将混合物在70℃搅拌15h。将生成的沉淀滤去，用THF洗涤并丢弃。合并滤液和洗涤液并蒸发至干。将这一残留物用乙酸乙酯吸收，用水和NaCl洗涤数次，用硫酸钠干燥，过滤并蒸发至干。黄色产物4无需进一步纯化而进行反应。
[0114] d.将化合物4(40.1g，105mmol)溶解在540ml的THF中，加入海绵镍催化剂(水润湿的，10g)并在氢大气压将混合物在室温振摇15h。再加入10g的催化剂，并将混合物在氢大气压再振摇17h。将催化剂滤去并将滤液蒸发至干。将该黑色的油状残留物用乙酸乙酯吸收，用水洗涤三遍和用NaCl溶液洗涤一遍，用硫酸钠干燥，过滤并在旋转蒸发器中蒸发。暗红色的化合物5无需进一步纯化而继续处理。
[0115] e.将化合物5(32.5g，92.2mmol)溶解在冰醋酸(320ml)中并加入亚硝酸钠(6.4g，92.8mmol)。将混合物在室温搅拌2h。然后将混合物用水稀释，并将反应溶液用乙酸乙酯萃取数次。将有机相用NaHCO3溶液和NaCl溶液洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并蒸发至干。将化合物6的暗树脂样油状物无需进一步纯化而继续处理。
[0116] f.将化合物6(27.1g，74.5mmol)溶解在320ml的冰醋酸中，并在搅拌下逐滴加入15.5ml的过氧化氢(水中30％)。将混合物在室温搅拌15h，用水和乙酸乙酯稀释并然后在搅拌下先用固体NaHCO3，然后用NaHCO3溶液中和。分离有机相并用水和NaCl溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并蒸发至干。暗的无定形的结晶物鉴定为化合物7并无需进一步纯化分离为对映体。
[0117] g.将化合物7(21.0g，44.3mmol)溶解在250ml的甲醇中。用制备型SFC(每次注入8ml)通过Chiralpak AD-H 3x20cm 5μm柱和CO2(80ml)和甲醇(16ml)分离溶液。收集到两个级分并将每一级分蒸发至干。级分1含有6.9g(18.2mmol，41％)的无色固体，其随机地指定为绝对结构8b。级分2的无色固体指定为结构8a。
[0118] h.将对映体纯的化合物8a(7.00g，18.4mmol)溶解在80ml的异丙醇中，在室温搅拌下加入80ml的在异丙醇中的5-6N HCl，并将混合物在室温继续搅拌15小时。将混合物在真空蒸发至干，溶解在少量二噁烷中，与水混合，将混合物冷冻并冻干，得到高纯度的无色固体，其可作为二盐酸盐指定为化合物9a。该原料无需进一步纯化而使用。
[0119] i.将化合物9a(175mg，0.50mmol)溶解在2ml的DMF中，加入三乙胺(151μl，1.09mmol)。向分离管中加入3，5-二三氟甲基苄基醇(124mg，0.50mmol，98％)和1，1’-羰基二咪唑(80.6mg，0.50mmol)，溶解在3ml的DMF中并在室温搅拌一小时。将先前制备的化合物9a的溶液加入到这一混合物中，并将整个溶液在室温搅拌过夜。将混合物蒸发至干，将残留物用二氯甲烷吸收，用水和NaCl溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并再次蒸发至干。通过柱色谱(乙酸乙酯/MeOH)纯化残留物，得到化合物10a，为无色固体。
[0120] 对映体8b也可以类似于上述的步骤h和步骤i转化为对应的化合物10a的对映体。
[0121] 消旋体7可以通过步骤h和i同样地转化为10a的消旋体混合物。分离成对映体也可在这一阶段类似于g进行。
[0122] 实施例2
[0123] 3-氯-5-三氟甲基苄基4-[2-(2-氧-2，3.二氢-苯并噁唑基-6(R)-亚硫酰基)乙基]哌嗪-1-甲酸酯20a的合成
[0124]
[0125] j.将5-氯-2-硝基苯甲醚(48.3g，0.25mol)溶解在300ml的乙腈中。搅拌下加入在100ml乙腈中的2-巯基乙醇(17.8ml，0.25mol)和碳酸钾(69.1g，0.5mol)，并将混合物在回流下搅拌过夜。冷却反应混合物，加入500ml冰-水，并然后将混合物用400ml乙酸乙酯萃取两次。将有机相用0.2N NaOH溶液洗涤，然后用水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并在旋转蒸发器中蒸发。用乙醚结晶得到化合物12的米色晶体。
[0126] k.将化合物12(48.0g，0.209mol)悬浮在50ml的二氯甲烷中，并加入三乙胺(19ml，0.209mol)。在搅拌下在15℃的最大内部温度逐滴加入甲磺酰氯(16.2ml，0.209mol)。将混合物在室温再搅拌一小时，然后将反应混合物加到300ml的冰-水中并用
200ml的二氯甲烷萃取两次。将有机相用硫酸镁干燥，过滤并在旋转蒸发器中蒸发，得到化合物13，为油状残留物。
200ml的二氯甲烷萃取两次。将有机相用硫酸镁干燥，过滤并在旋转蒸发器中蒸发，得到化合物13，为油状残留物。
[0127] l. 将化合物13(57g，0.185mol)、哌嗪-1-甲酸叔丁酯(34.5g，0.185mol)和碳酸铯(60.1g，0.185mol)溶解在300ml的乙腈中并在60℃搅拌过夜。加入400ml的水和400ml的二氯甲烷，并分离出有机相。将其用硫酸镁干燥，过滤并在旋转蒸发器中蒸发。将残留物用乙酸乙酯作为洗脱剂在硅胶柱上纯化，得到化合物14，为无定形的固体物质。
[0128] m.将3.15g的5％Pd/C加入到在85ml的四氢呋喃中的化合物14(6.3g，15.8mmol)中。并在室温氢化16小时。滤去催化剂。蒸发溶液得到化合物15，为固体物质。
[0129] n.将化合物15(5.5g 0.015mol)溶解在70ml的47％氢溴酸中并在150℃搅拌8小时。然后将反应混合物冷却，并抽滤出沉淀晶体。将它们用少量水洗涤并干燥，得到化合物16。
[0130] o.将 化 合 物 16(1.18g，3.0mmol)、1，1- 羰 基 二 咪 唑 (0.486g，3.0mmol)、3-氯-5-三氟甲基苄基醇(0.63g，3.0mmol)和三乙胺(0.42ml，3.0mmol)溶解在20ml的DMF中并在室温搅拌过夜。将反应混合物蒸发并在50ml的水和100ml的乙酸乙酯中吸收。
将有机相分出，用硫酸镁干燥，过滤并在旋转蒸发器中蒸发。将残留物用乙酸乙酯作为洗脱剂在硅胶柱上纯化，得到化合物17，为固体物质。
将有机相分出，用硫酸镁干燥，过滤并在旋转蒸发器中蒸发。将残留物用乙酸乙酯作为洗脱剂在硅胶柱上纯化，得到化合物17，为固体物质。
[0131] p.将化合物17(0.8g，1.63mmol)和1，1-羰基二咪唑(0.265g，1.63mmol)在10ml的THF中在室温搅拌3小时。然后向该批中加入100ml的水，然后将其用100ml的乙酸乙酯萃取两次。将有机相用硫酸镁干燥，过滤并在旋转蒸发器中蒸发。用乙醇结晶得到化合物18，为浅褐色晶体。
[0132] q.将化合物18(0.72g，1.4mmol)溶解在8ml的冰醋酸中。然后加入过氧化氢(在水中30％，0.29ml 2.8mmol)，并将混合物在室温搅拌3小时。然后将该批加到100ml的冰-水中并用饱和NaHCO3溶液中和。将混合物用50ml的乙酸乙酯萃取两次。将有机相用硫酸镁干燥，过滤并在旋转蒸发器中蒸发。用乙醇结晶得到化合物19，为浅色晶体。
[0133] r.将消旋体19(0.35g，0.66mmol)通过制备HPLC在ChiralpakAD(5x40cm，20μm)上用甲醇/乙醇(25/75)(流速：100ml/min)分离，得到对映体20a和20b，为无定形固体物质。
[0134] 可以如实施例1和实施例2中所述的类似方式制备下面的化合物：3-氯-5-三氟甲基苄基4-[2-(2-氧代-2，3-二氢苯并噁唑-6(R)-亚硫酰基)乙基]哌嗪-1-甲酸酯(Ia)
[0135]
[0136] 消旋体：1H NMR(500MHz，DMSO)δ＝12.02(m，＜1H)，7.81(s，1H)，7.75(s，1H)，7.69(s，1H)，7.62(d，J ＝ 1.5，1H)，7.47(dd，J ＝ 8.1，1.5，1H)，7.25(d，J ＝ 8.1，1H)，
5.15(s，2H)，4.45-3.30(m，4H)，3.14-3.07(m，1H)，3.00-2.90(m，1H)，2.75-2.68(m，1H)，
2.47-2.27(m，5H)，Rt[min]1.80，3-氯-5-三氟甲基苄基4-[2-(3H-苯并三唑-5(R)-亚硫酰基)乙基]哌嗪-1-甲酸酯(Ib)
5.15(s，2H)，4.45-3.30(m，4H)，3.14-3.07(m，1H)，3.00-2.90(m，1H)，2.75-2.68(m，1H)，
2.47-2.27(m，5H)，Rt[min]1.80，3-氯-5-三氟甲基苄基4-[2-(3H-苯并三唑-5(R)-亚硫酰基)乙基]哌嗪-1-甲酸酯(Ib)
[0137]
[0138] 1H NMR(400MHz，DMSO)δ15.87(s，1H)，8.24(s，1H)，8.09(d，J＝8.7，1H)，7.82(s，1H)，7.78-7.67(m，3H)，5.15(s，2H)，3.55-3.14(m，5H)，3.07-2.91(m，1H)，2.81-2.72(1H)，
2.48-2.28(m，5H)，Rt[min]1.79，3，5-二溴苄基4-[2-(3H-苯并三唑-5(R)-亚硫酰基)乙基]哌嗪-1-甲酸酯(Ic)
2.48-2.28(m，5H)，Rt[min]1.79，3，5-二溴苄基4-[2-(3H-苯并三唑-5(R)-亚硫酰基)乙基]哌嗪-1-甲酸酯(Ic)
[0139]
[0140] 1H NMR(500MHz，DMSO)δ ＝ 16.03(s，1H)，8.25(s，1H)，8.10(d，J ＝ 8.6，1H)，7.79(t，J ＝ 1.6，1H)，7.74(d，J ＝ 8.5，1H)，7.58(d，J ＝ 1.6，2H)，5.06(s，2H)，
3.52-3.17(m，5H)，3.06-2.96(m，1H)，2.81-2.74(m，1H)，2.50-2.28(m，5H)，Rt[min]1.76，[0141] 3，5-二三氟甲基苄基4-[2-(3H-苯并三唑-5(S)-亚硫酰基)乙基]哌嗪-1-甲酸酯(Id)
3.52-3.17(m，5H)，3.06-2.96(m，1H)，2.81-2.74(m，1H)，2.50-2.28(m，5H)，Rt[min]1.76，[0141] 3，5-二三氟甲基苄基4-[2-(3H-苯并三唑-5(S)-亚硫酰基)乙基]哌嗪-1-甲酸酯(Id)
[0142]
[0143] 1H NMR(400MHz，DMSO)δ＝15.98(s，1H)，8.25(s，1H)，8.15-8.00(m，4H)，7.74(d，J ＝ 8.6，1H)，5.25(s，2H)，3.40-3.14(m，5H)，3.10-2.92(m，1H)，2.85-2.68(m，1H)，2.49-2.24(m，5H)，Rt[min]1.85，
[0144] 4-三氟甲基硫烷基苄基4-[2-(3H-苯并三唑-5(R)-亚硫酰基)乙基]哌嗪-1-甲酸酯(Ie)
[0145]
[0146] 1H NMR(400MHz，DMSO)δ ＝ 16.02(s，1H)，8.25(s，1H)，8.10(d，J ＝ 8.6，1H)，7.76-7.70(m，3H)，7.50(d，J ＝ 8.3，2H)，5.14(m，2H)，3.47-3.15(m，5H)，3.08-2.94(m，
1H)，2.81-2.72(m，1H)，2.48-2.27(m，5H)，Rt[min]1.85，
1H)，2.81-2.72(m，1H)，2.48-2.27(m，5H)，Rt[min]1.85，
[0147] 3-氯-4-三氟甲氧基苄基4-[2-(3H-苯并三唑-5(R)-亚硫酰基)乙基]哌嗪-1-甲酸酯(If)
[0148]
[0149] 1H NMR(500MHz，DMSO)δ ＝ 16.08(s，1H)，8.24(s，1H)，8.09(d，J ＝ 8.6，1H)，7.73(dd，J＝8.6，1.1，1H)，7.67(d，J＝2.0，1H)，7.57(dd，J＝8.6，1.1，1H)，7.45(dd，J ＝ 8.5，2.0，1H)，5.07(s，2H)，3.35-3.15(m，5H)，3.07-2.95(m，1H)，2.80-2.72(m，1H)，
2.48-2.30(m，5H)，Rt[min]1.80，
2.48-2.30(m，5H)，Rt[min]1.80，
[0150] 3-溴-5-氟甲基苄基4-[2-(2-氧代-2，3-二氢苯并噁唑-6(R)-亚硫酰基)乙基]哌嗪-1-甲酸酯
[0151]
[0152] 1H NMR(500MHz，DMSO)δ ＝ 16.10(s，1H)，8.25(s，1H)，8.10(d，J ＝ 8.6，1H)，7.74(d，J＝8.6，1H)，7.55-7.46(m，1H)，7.42(s，1H)，7.24(d，J＝9.2，1H)，5.08(s，2H)，
3.32-3.14(m，5H)，3.09-2.94(m，1H)，2.81-2.74(m，1H)，2.50-2.27(m，5H)，Rt[min]1.63，
3，5-二甲基苄基4-[2-(3H-苯并三唑-5(R)-亚硫酰基)乙基]哌嗪-1-甲酸酯(Ih)[0153]
3.32-3.14(m，5H)，3.09-2.94(m，1H)，2.81-2.74(m，1H)，2.50-2.27(m，5H)，Rt[min]1.63，
3，5-二甲基苄基4-[2-(3H-苯并三唑-5(R)-亚硫酰基)乙基]哌嗪-1-甲酸酯(Ih)[0153]
[0154] 1H NMR(500MHz，DMSO)δ ＝ 15.91(s，1H)，8.24(s，1H)，8.09(d，J ＝ 8.6，1H)，7.73(dd，J ＝ 8.6，1.1，1H)，6.93(s，3H)，4.97(s，2H)，3.35-3.13(m，5H)，3.07-2.93(m，
1H)，2.80-2.71(m，1H)，2.50-2.29(m，6H)，2.25(s，5H)，Rt[min]1.62，
1H)，2.80-2.71(m，1H)，2.50-2.29(m，6H)，2.25(s，5H)，Rt[min]1.62，
[0155] 4-三氟甲氧基苄基4-[2-(3H-苯并三唑-5(R)-亚硫酰基)乙基]哌嗪-1-甲酸酯(Ii)
[0156]
[0157] 1H NMR(400MHz，DMSO)δ ＝ 15.99(s，1H)，8.24(s，1H)，8.09(d，J ＝ 8.6，1H)，7.79-7.69(m，1H)，7.48(d，J＝8.3，2H)，7.36(d，J＝8.3，2H)，5.09(s，2H)，3.29-3.14(m，
5H)，3.08-2.94(m，1H)，2.82-2.70(m，1H)，2.49-2.25(m，5H)，Rt[min]1.62，[0158] 3-氯-4-三氟甲基苄基4-[2-(3H-苯并三唑-5(R)-亚硫酰基)乙基]哌嗪-1-甲酸酯(Ij)
5H)，3.08-2.94(m，1H)，2.82-2.70(m，1H)，2.49-2.25(m，5H)，Rt[min]1.62，[0158] 3-氯-4-三氟甲基苄基4-[2-(3H-苯并三唑-5(R)-亚硫酰基)乙基]哌嗪-1-甲酸酯(Ij)
[0159]
[0160] 1H NMR(500MHz，DMSO)δ ＝ 16.01(s，0.5H)，8.26(s，1H)，8.10(d，J ＝ 8.6，1H)，7.87(d，J ＝ 8.1，1H)，7.74(d，J ＝ 8.6，1H)，7.69(s，1H)，7.52(d，J ＝ 8.1，1H)，
5.21(m，2H)，3.29-3.16(m，5H)，3.07-2.94(m，1H)，2.84-2.70(m，1H)，2.50-2.30(m，5H)，Rt[min]1.75，
5.21(m，2H)，3.29-3.16(m，5H)，3.07-2.94(m，1H)，2.84-2.70(m，1H)，2.50-2.30(m，5H)，Rt[min]1.75，
[0161] 3-氟-4-三氟甲基苄基4-[2-(3H-苯并三唑-5(R)-亚硫酰基)乙基]哌嗪-1-甲酸酯
[0162]
[0163] 1H NMR(500MHz，DMSO)δ ＝ 15.92(m，1H)，8.25(s，1H)，8.10(d，J ＝ 8.6，1H)，7.80(t，J＝7.8，1H)，7.74(d，J＝8.7，1H)，7.48(d，J＝11.8，1H)，7.39(d，J＝8.0，1H)，
5.17(s，2H)，3.28-3.15(m，5H)，3.08-2.96(m，1H)，2.82-2.74(m，1H)，2.49-2.25(m，5H)，Rt[min]1.69，
5.17(s，2H)，3.28-3.15(m，5H)，3.08-2.96(m，1H)，2.82-2.74(m，1H)，2.49-2.25(m，5H)，Rt[min]1.69，
[0164] 1-{4-[2-(3H-苯并三唑-5(R)-亚硫酰基)乙基]哌嗪-1-基}-3-(4-三氟甲基苯基)-丙-1-酮
[0165]
[0166] 1H NMR(500MHz，DMSO)δ ＝ ≈ 20.00(s，1H)，8.25(s，1H)，8.10(d，J ＝ 8.6，1H)，7.74(d，J ＝ 8.6，1H)，7.62(d，J ＝ 8.1，2H)，7.47(d.J ＝ 8.0，2H)，3.30-3.10(m，
5H)，3.06-2.96(m，1H)，2.89(t，J ＝ 7.5，2H)，2.78-2.70(m，1H)，2.65(t，J ＝ 7.6，2H)，
2.48-2.38(m，1H)，2.37-2.18(m，4H)，Rt[min]1.64
5H)，3.06-2.96(m，1H)，2.89(t，J ＝ 7.5，2H)，2.78-2.70(m，1H)，2.65(t，J ＝ 7.6，2H)，
2.48-2.38(m，1H)，2.37-2.18(m，4H)，Rt[min]1.64
[0167] 和3-氟-5-三氟甲基苄基4-[2-(2-氧代-2，3-二氢苯并噁唑-6(R)-亚硫酰基)乙基]哌嗪-1-甲酸酯
[0168]
[0169] 1H NMR(500MHz，DMSO)δ ＝ 15.60(s，1H)，8.24(s，1H)，8.08(d，J ＝ 8.6，1H)，7.72(d，J＝8.7，1H)，7.61(d，J＝8.6，1H)，7.58-7.48(m，2H)，5.16(s，2H)，3.36-3.14(m，
5H)，3.07-2.93(m，1H)，2.81-2.74(m，1H)，2.49-2.27(m，5H)，Rt[min]1.69。
5H)，3.07-2.93(m，1H)，2.81-2.74(m，1H)，2.49-2.27(m，5H)，Rt[min]1.69。
[0170] 实施例A：自分泌运动因子测试(酶测试)
[0171] 测试描述
[0172] 应用Amplex Red试剂间接地测量自分泌运动因子活性。本文中作为对形成的H2O2的荧光指示剂测量Amplex Red。具体而言，自分泌运动因子将底物溶血磷脂胆碱(LPC)转化为磷酸胆碱和溶血磷脂酸(LPA)。这一反应之后，使磷酸胆碱与碱性磷酸酶反应以产生无机磷酸和胆碱。在接下来的步骤，通过胆碱氧化酶氧化胆碱以产生甜菜碱，并形成H2O2。在1∶1化学计量的过氧化物酶(辣根过氧化物酶)的存在下，H2O2与Amplex Red试剂反应，并且形成高度荧光的试卤灵。在反应依赖性动力学模型中测量该荧光，以将来自与本反应无关的可能的其它荧光物质的荧光信号校正出去。测试方法
[0173] 将1.5μL标准溶液或溶解于20mM Hepes(pH 7.2，具有最多7.7％的DMSO)中的各浓度的测试物质(具有名字为A(n)的物质)与10μl(16ng)高度纯化的重组自分泌运动因子在384孔黑微量滴定板中在22℃一起温育30分钟。然后通过添加5μlL-α-溶血磷脂胆碱(LPC)而起始该反应，其中LPC的终浓度是75μM。在37℃温育该混合物90分钟。温育后，加入Amplex Red试剂、过氧化物酶(辣根过氧化物酶)和胆碱氧化酶，并且立即在
485nm的激发下用“Tecan Ultra multimode”读数器在612nm测量荧光。通过检测形成的H2O2间接计算自分泌运动因子活性。
485nm的激发下用“Tecan Ultra multimode”读数器在612nm测量荧光。通过检测形成的H2O2间接计算自分泌运动因子活性。
[0174] 材料
高效检索全球专利专利汇是专利免费检索,专利查询,专利分析-国家发明专利查询检索分析平台，是提供专利分析，专利查询，专利检索等数据服务功能的知识产权数据服务商。
我们的产品包含105个国家的1.26亿组数据，免费查、免费专利分析。
分析报告
专利汇分析报告产品可以对行业情报数据进行梳理分析，涉及维度包括行业专利基本状况分析、地域分析、技术分析、发明人分析、申请人分析、专利权人分析、失效分析、核心专利分析、法律分析、研发重点分析、企业专利处境分析、技术处境分析、专利寿命分析、企业定位分析、引证分析等超过60个分析角度，系统通过AI智能系统对图表进行解读，只需1分钟，一键生成行业专利分析报告。
QQ群二维码
意见反馈
意见反馈