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用于防治血管性认知障碍的药物及其制备方法

阅读：970发布：2020-05-15

专利汇可以提供用于防治血管性认知障碍的药物及其制备方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明公开了一种用于防治血管性认知障碍的药物及其制备方法。该药物是藁本内酯质量百分比大于10％的川芎油。它是由以下制备方法制备而成：方法一：以超临界二氧化碳循环逆流方式对粉碎后的川芎进行萃取后，分离得到川芎油；或者方法二：取体积百分比≥60％的乙醇溶液对川芎进行提取，提取液去除乙醇后，分离得到川芎油。本发明的药物对治疗轻度、中度、重度血管性认知障碍具有有益效果，并且其作用明显优于市场同类产品，具有良好的开发前景。，下面是用于防治血管性认知障碍的药物及其制备方法专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种用于防治血管性认知障碍的药物，其特征在于它是藁本内酯质量百分比大于
10％的川芎油。
2.根据权利要求1所述的用于防治血管性认知障碍的药物，其特征在于该药物是藁本内酯质量百分比为10％～60％的川芎油。
3.根据权利要求2所述的用于防治血管性认知障碍的药物，其特征在于该药物是藁本内酯质量百分比为30％～60％的川芎油。
4.一种权利要求1所述的用于防治血管性认知障碍的药物的制备方法，其特征在于该制备方法如下：
方法一：以超临界二氧化碳循环逆流方式对粉碎后的川芎进行萃取后，分离得到川芎油；
或者方法二：取体积百分比≥60％的乙醇溶液对川芎进行提取，提取液去除乙醇后，分离得到川芎油。
5.根据权利要求4所述的用于防治血管性认知障碍的药物的制备方法，其特征在于所述方法一是指在萃取压力为40～60MPa，萃取温度为60～70℃，川芎与二氧化碳每小时用量的质量比为1：10～20，萃取时间为5h的条件下进行超临界二氧化碳循环逆流方式萃取；然后在分离器解析压力为9～12MPa，解析温度为48～55℃下分离得到川芎油。
6.根据权利要求5所述的用于防治血管性认知障碍的药物的制备方法，其特征在于所述方法一是指在萃取压力为40MPa，萃取温度为60℃，川芎与二氧化碳每小时用量的质量比为1：10，萃取时间为5h的条件下进行超临界二氧化碳循环逆流方式萃取；然后在分离器解析压力为10MPa，解析温度为50℃下分离得到川芎油。
7.根据权利要求4所述的用于防治血管性认知障碍的药物的制备方法，其特征在于利用所述方法二进行制备得到的川芎油再在压力为1～80MPa的真空条件下和温度为20～300℃的温度条件下，进行分子蒸馏得到藁本内酯质量百分比大于30％的川芎油。
8.根据权利要求7所述的用于防治血管性认知障碍的药物的制备方法，其特征在于利用所述方法二进行制备得到的川芎油再在压力为1～50MPa的真空条件下和温度为30～200℃的温度条件下，以分子蒸馏方式分离除去低沸点和高沸点成分及非挥发性成分，得到藁本内酯质量百分比大于30％的川芎油。

说明书全文

用于防治血管性认知障碍的药物及其制备方法

技术领域

[0001] 本发明涉及一种医药领域，具体涉及一种用于防治血管性认知障碍的药物及其制备方法。

背景技术

[0002] 血管性认知障碍(vascular cognitive impairment，VCI)为一种综合征，其特征为有明显或无明显临床中风症状的脑血管损伤伴有至少影响一个认知区域的认知障碍。VCI包括从非痴呆型血管性认知障碍到轻度痴呆血管性认知障碍乃至血管性痴呆(Vasculardementia，VaD)全过程，其中VaD是最严重的VCI。

[0003] 流行病学研究结果显示：VCI的发病率逐年上升，痴呆在富裕国家≥65岁人群中的发病率为5％～10％，其中阿尔茨海默病AD的发病率每4.3年翻一番，而VaD的发病率每5.3年翻倍。中国的情况也并不令人乐观：55岁以上人群中VaD患病率、发病率和死亡率的合并值分别为0.8％、0.27/100人·年和14.6/100人·年。1980～2011年间VaD的患病率逐年上升，具体为从0.14/100人·年升至0.57/100人·年。平均年龄72.8岁的上海居民中有84.5％存在记忆减退现象，其中轻度认知障碍MCI为25％，AD为4.7％，VaD为2.5％，混合型为1.3％。随着检测技术水平的提高，人们发现VaD在痴呆患者中所占的比例更大。对50岁以上痴呆患者进行亚分类发现AD占35.4％，VaD占21.2％，AD与VaD混合存在者为13.3％，其他痴呆占30.1％。与AD相比，VCI特别是VaD具有更大的危害性：其50％的平均生存期更短，需要更多健康护理费用，伴发疾病率更高，支付给照料者的费用也更多。

[0004] 目前，普遍认为VCI的发生、发展与大脑微环境内稳态失衡密切相关。尽管很早以前就认识到脑梗死与痴呆的密切关系，但梗死面积、梗死的个数以及梗死的位置与痴呆的关系还有待进一步阐明，因为在老年人中发生脑梗死是非常普遍的，其中有些人发生痴呆，但也有不发生痴呆的。

[0005] 西医在预防VCI方面开展了大量的研究工作，包括：改变生活饮食方式，治疗高血压、糖尿病、高脂血症、高胆固醇血症等疾病，并进行抗炎以及抗凝治疗等，从目前的研究结果来看，上述方法的有效性还有待进一步验证。部分临床研究显示美金刚Memantine、加兰他敏Galantamine、多奈哌齐Donepezil、卡巴拉汀Rivastigmine以及尼莫地平Nimodipine对VaD患者的行为、执行功能以及认知能力有一定的改善作用，但也仅停留于症状的改善水平，对疾病的本质并无明显的防治作用。也有人基于胆碱酯酶抑制剂对VaD疗效的不确定性以及毒副作用，建议不推荐使用胆碱酯酶抑制剂治疗VaD。由此可见，目前西医还无有效防治VCI的药物。

发明内容

[0006] [要解决的技术问题]

[0007] 本发明的目的是解决上述技术问题，提供一种用于防治血管性认知障碍的药物及其制备方法。

[0008] [技术方案]

[0009] 为了达到上述的技术效果，本发明采取以下技术方案：

[0010] 一种用于防治血管性认知障碍的药物，它是藁本内酯质量百分比大于10％的川芎油。

[0011] 该药物是藁本内酯质量百分比为10％～60％的川芎油。

[0012] 该药物是藁本内酯质量百分比为30％～60％的川芎油。

[0013] 所述藁本内酯质量百分比大于10％的川芎油应用于制备治疗轻度、中度或重度血管性认知障碍的药物。其中，所述藁本内酯质量百分比大于10％的川芎油对于治疗重度血管性认知障碍效果最佳。

[0014] 根据本发明更进一步的技术方案，该制备方法如下：

[0015] 方法一：以超临界二氧化碳循环逆流方式对粉碎后的川芎进行萃取后，分离[0016] 得到川芎油；

[0017] 或者方法二：取体积百分比≥60％的乙醇溶液对川芎进行提取，提取液去除[0018] 乙醇后，分离得到川芎油。

[0019] 根据本发明更进一步的技术方案，所述方法一是指在萃取压力为40～60MPa，萃取温度为60～70℃，川芎与二氧化碳每小时用量的质量比为1：10～20，萃取时间为5h的条件下进行超临界二氧化碳循环逆流方式萃取；然后在分离器解析压力为9～12MPa，解析温度为48～55℃下分离得到川芎油。

[0020] 根据本发明更进一步的技术方案，所述方法一是指在萃取压力为40MPa，萃取温度为60℃，川芎与二氧化碳每小时用量的质量比为1：10，萃取时间为5h的条件下进行超临界二氧化碳循环逆流方式萃取；然后在分离器解析压力为10MPa，解析温度为50℃下分离得到川芎油。

[0021] 根据本发明更进一步的技术方案，利用所述方法二进行制备得到的川芎油再在压力为1～80MPa的真空条件下和温度为20～300℃的温度条件下，进行分子蒸馏，得到藁本内酯质量百分比大于30％的川芎油。所述分子蒸馏是分离除去低沸点和高沸点成分及非挥发性成分，得到藁本内酯质量百分比大于30％的川芎油。

[0022] 根据本发明更进一步的技术方案，利用所述方法二进行制备得到的川芎油再在压力为1～50MPa的真空条件下和温度为30～200℃的温度条件下，以分子蒸馏方式分离除去低沸点和高沸点成分及非挥发性成分，得到藁本内酯质量百分比大于30％的川芎油。

[0023] 下面将详细地说明本发明。

[0024] 祖国医学对痴呆很早就有较为深入的认识，历代医家论述也颇多。《类证治裁.健忘论治》:“惟因病善忘者，或精血亏损，或思虑过度，或精神短乏，或上盛下虚，或上虚下盛，或心火不降、肾水不升、神明不定，或素有痰饮，或痰迷心窍，或劳心诵读、精神恍惚，或心气不足、怔忡健忘，或禀赋不足、精神恍惚，或心气志虚扰，或年老盛饮神衰。若血瘀于内而善忘如狂”。清代陈士铎《辨证录·呆病门》书中写道:“起于肝气之郁，其终也，由于胃气之衰。肝郁则木克土，而痰不能化；胃衰土不能制水，而痰不能消，于是痰积于胸中，盘踞于心外，使神明不清而成呆病矣。”

[0025] 川芎为伞形科植物川芎Ligusticum chuanxiongHort.的干燥根茎，始载于《神农本草经》。其性温，味辛、微苦；具有活血行气、祛风止痛的功效。主治血瘀气滞所致月经不调，痛经经闭，肝郁气滞而致血行不畅的胸胁疼痛，头痛，风寒湿痹，跌打肿痛等疾病。临床主要用于治疗心脑血管、呼吸、泌尿系统及妇科方面的疾病。研究表明川芎含有大量的苯酞类、酚酸类、生物碱类等化合物。具有抑制血小板聚集、阻止静脉旁路血栓形成、抗动脉粥样硬化、清除自由基、增强免疫功能、抗惊厥、抗血小板聚集和抗血栓形成、降低血液粘度、调节心脏功能、抑制学习记忆力损伤、抑制平滑肌细胞增殖、防护脑缺血症、镇静和促进睡眠、舒张平滑肌、诱导血红素氧合酶-1(HO-1)表达等作用。

[0026] 研究发现，小鼠在海马注射淀粉样蛋白Aβ1-42之后，其学习、记忆能力、脑组织Ach含量均明显降低，其海马CA1区神经元细胞内质网扩张，线粒体肿胀严重。川芎提取物治疗后可显著提高Aβ1-42小鼠的学习、记忆能力以及脑组织Ach含量，并对Aβ1-42小鼠脑皮质线粒体表现出良好的保护作用。系列研究表明，脑部微小血管的完整性不仅有助于维系神经元、胶质细胞处于正常状态，还有助于Aβ的清除。Aβ既与AD关系密切，也与血管的功能状态密切相关。研究表明，Aβ可以收缩离体脑以及全身系统血管，将Aβ用于小鼠大脑皮质可以减少CBF、损伤内皮细胞依赖性引起的舒血管效应和功能性充血；另一方面，脑缺血、缺氧可通过激活APP裂解酶-β分泌酶加速Aβ的生成，同时还可增加Aβ聚合物的形成以及tau蛋白的磷酸化；第三，Aβ收缩脑局部血管的作用也可阻碍其自身的清除。目前认为血管通路是Aβ从脑排出的主要途径。血管功能失常或丧失可导致Aβ堆积在薄壁组织以及血管中，并通过多种途径特别是增加tau蛋白磷酸化产生神经毒性，导致大脑认知功能减退。由此可见，川芎提取物防治VCI作用可能与其能够减少Aβ1-42的毒性作用有关。

[0027] 本发明用于防治血管性认知障碍的药物，即藁本内酯质量百分比大于10％的川芎油，适用于制备防治轻度、中度、重度血管性认知障碍的药物。对轻度、中度、重度血管性认知障碍的防治有显著的效果，特别是认知障碍的早、中期或称为轻度血管性认知障碍和中度血管性认知障碍的防治有显著效果。

[0028] [有益效果]

[0029] 本发明与现有技术相比，具有以下的有益效果：

[0030] 本发明从不同途径获得的藁本内酯质量百分比大于10％的川芎油均对血管性痴呆动物具有较好的防治作用，并且其作用明显优于市场同类产品，具有良好的开发前景。

具体实施方式

[0031] 下面结合本发明的实施例对本发明作进一步的阐述和说明。

[0032] 一、藁本内酯质量百分比大于10％的川芎油的制备

[0033] 方法一：取药用原料川芎的粗粉100kg，超临界流体CO2循环逆流萃取和分离，萃取压力40MPa，萃取温度60℃，萃取剂CO2用量1000公斤/时，萃取时间5小时，分离器解析压力10Mpa，解析温度50℃，得到所述的川芎挥发油。HPLC法测得藁本内酯含量为21.3％。

[0034] 方法二：取药用原料川芎的粗粉100kg，用80％乙醇渗漉提取，提取液回收除尽乙醇，水溶液分离得到所述的川芎挥发油。HPLC法测得藁本内酯含量为12.7％。

[0035] 方法三：取药用原料川芎的粗粉100kg，用90％乙醇渗漉提取，提取液回收除尽乙醇，水溶液分离得到所述的川芎挥发油。在压力为10～50Pa的真空条件下，先于50℃～120℃条件下以分子蒸馏方式分离除去低沸点成分，然后升温至80℃～200℃条件下以分子蒸馏方式收集馏出物，得到藁本内酯重量含量大于30％的川芎油。

[0036] 二、对本发明的川芎油开展药效学评价

[0037] 1，实验材料

[0038] 1.1实验药品

[0039] 川芎油：分别从上述三种方法获得，方法一至方法三获得的川芎油依次命名为川芎油Ⅰ、川芎油Ⅱ、川芎油Ⅲ；

[0040] 藁本内酯，纯度达92％，由四川省中医药科学院中药药学研究所提供；

[0041] 临用前，将川芎油和藁本内酯用食用油配制成所需浓度的油溶液备用；

[0042] 盐酸美金刚片：规格：10mg/片，Rottendorf Pharma GmbH出品，产品批号201503，批准文号：H20120268。

[0043] Aβ1-42：批号SLBG1637V，购自sigma公司。Aβ1-42的配制：Aβ1-42粉末0.1mg加入100μL无菌的生理盐水，混匀，37℃恒温箱孵育一周，即转为凝聚态；浓度为1μg/μL。

[0044] 1.2实验仪器

[0045] 小鼠跳台仪，型号ZXC-5Q，山东省医学科学院设备维修供应站生产；

[0046] DW-2000脑立体定位仪，成都泰盟科技有限公司；

[0047] Morris水迷宫，型号WMT-100，成都泰盟科技有限公司生产。

[0048] 1.3实验对象

[0049] SPF级昆明种小鼠，SPF级SD大鼠，生产合格证号是SCXK(川2013-19号)，由四川省中医药科学院的实验动物中心提供。

[0050] 1.4实验环境

[0051] 四川省中医药科学院药理毒理研究所的SPF动物实验屏障系统，室内温度20～22℃，相对湿度52％左右，照明12小时明亮，12小时黑暗。合格证号为SYXK(川)2013-100。自由饮水。全营养颗粒饲料由四川省中医药科学院实验动物中心提供。

[0052] 2，实验方法与结果

[0053] 2.1川芎油对乙醇致小鼠记忆再现障碍模型的影响

[0054] 实验方法：SPF级昆明种小鼠，体重18～22g，雌雄各半，按体重随机分为10个组：对照组、模型组、美金刚10mg/kg、川芎油Ⅰ10mg/kg、5mg/kg，川芎油Ⅱ10mg/kg、5mg/kg，川芎油Ⅲ10mg/kg、5mg/kg，藁本内酯10mg/kg。每组小鼠按给药剂量分上下午灌胃给药，连续给药3次，对照组和模型组给以等体积的食用油。末次给药后50min进行跳台法训练，将动物放入反应箱内适应3min，然后立即通以36V交流电。训练5min，并记录每次小鼠受到电击的次数(错误次数)，由此作为学习成绩。24h后进行测试，每只小鼠测定5min，测试前30min进行造模，除对照组外其他各组给予40％的乙醇0.1ml/10g。测试记录受到电击的动物数及第一次跳下平台的潜伏期以及5min内的错误次数。

[0055] 该实验的结果进行统计学分析，分析结果见表1。

[0056] 表1为川芎油对乙醇致记忆再现障碍小鼠的影响

[0057]

[0058] 与模型组比较：*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001

[0059] 由表1可见，乙醇造模的小鼠出现记忆再现障碍，模型组小鼠潜伏期明显比对照组缩短，错误次数明显增加，与对照组比较差异具有统计学意义。川芎油各样品、藁本内酯以及美金刚均可显著延长乙醇小鼠的潜伏期，减少错误次数，与模型比较有统计学差异。川芎油在同等剂量下作用明显优于藁本内酯以及美金刚。

[0060] 2.2川芎油长期低灌性血管认知障碍大鼠的影响

[0061] 实验方法：取体重为180～200g左右的雄性大鼠，将动物随机分为对照组和血管认知障碍造模组。造模组大鼠在麻醉后，固定，剃去颈部毛后酒精消毒，在无菌条件下切开颈部皮肤，仔细分离大鼠双侧颈总动脉并结扎之，缝合皮肤，消毒后正常饲养1个月后，将造模大鼠随机分为模型组、美金刚10mg/kg、川芎油Ⅰ10mg/kg、5mg/kg，川芎油Ⅱ10mg/kg、5mg/kg，川芎油Ⅲ10mg/kg、5mg/kg，藁本内酯10mg/kg。灌胃给药，每天一次，连续4周，模型组及对照组给予等体积食用油。末次给药后1小时进行Y迷宫实验。将大鼠放入Y迷宫臂的末端适应3分钟，以无规则次序变换安全区，受到电刺激的大鼠会逃到安全区，灯光刺激保持15s，熄灯后休息30秒，即完成1次测试，以所在臂为起点进行下一次测试。依此重复，每天每只大鼠训练10次，训练一天。24小时后进行测试。大鼠在受到电击后直接逃到安全区为正确反应，否则为错误反应。记录大鼠的正确反应和错误反应，并计算正确率，即正确反应次数占总测试数的百分比。

[0062] 结果如表2所示：

[0063] 表2为川芎油对长期低灌性血管认知障碍大鼠Y迷宫行为学的影响

[0064]

[0065] 与模型组比较：*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001

[0066] 由表2可见，长期低灌可引起大鼠的学习正确率以及记忆正确率均显著降低，与对照组比较有统计学差异。川芎油各样品、藁本内酯以及美金刚均可显著增加长期低灌大鼠的学习正确率以及记忆正确率，与模型比较有统计学差异。川芎油在同等剂量下作用明显优于藁本内酯以及美金刚。

[0067] 2.3川芎油对长期低灌+海马注射β-淀粉样蛋白所致血管认知障碍小鼠的影响[0068] 实验方法：SPF级昆明种雄性小鼠，18～22g，将动物随机分为对照组和血管认知障碍小鼠造模组，造模组小鼠在结扎双侧颈总动脉3个月后，运用脑立体定位仪在痴呆造模组的小鼠大脑海马区(以前囟后3mm，中线右旁开2mm，深2mm为座标)注射凝聚态的Aβ1-42 2μg/只(注射时间为2min)注射完毕后留针5min，然后缓慢退针，对照组则注射等体积的生理盐水，术后缝合伤口，肌注青霉素预防感染。在注射β-淀粉样蛋白的次日，将注射Aβ1-42的小鼠随机分为模型组、美金刚10mg/kg、川芎油Ⅰ10mg/kg、5mg/kg，川芎油Ⅱ10mg/kg、5mg/kg，川芎油Ⅲ10mg/kg、5mg/kg，藁本内酯10mg/kg。灌胃给药，每天一次，连续4周，模型组及对照组给予等体积0.05％CMC-Na。于给药三周后用Morris水迷宫法测定小鼠的学习记忆能力。

[0069] Morris水迷宫定位航行试验：将水池分为1,2,3,4象限，定位航行实验中将平台置于固定的位置并保持位置不变，水池内加入水，水温22±2℃，加入适量奶粉，使水池成为不透明的白色。隐藏平台，使水面没过平台2cm，记录90s内小鼠从入水到找到平台所需的时间，即逃避潜伏期。允许小鼠90s内找到平台，并在平台上保持10s，若小鼠在90s以内未能找到平台或未能爬上平台时,则将小鼠引导至平台上并保持10s，动物每天训练3次，连续3天。记录每次训练小鼠找到平台的逃避潜伏期等。

[0070] Morris水迷宫空间探索实验：定位航行实验结束24h后，去除平台。然后任选一相同入水点将动物放入水中，记录小鼠的游泳路径、有效区域进入次数等用成都泰盟WMT-100Morris水迷宫视频跟踪系统软件进行数据分析。

[0071] 结果如表3和表4所示：

[0072] 表3为川芎油对长期低灌+海马注射β-淀粉样蛋白所致血管认知障碍小鼠[0073] Morris水迷宫定位航行的影响

[0074]

[0075] 与模型组比较：*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001

[0076] 由表3可见，长期低灌+海马注射β-淀粉样蛋白可引起小鼠在Morris定向航行实验中的潜伏期明显延长，与对照组比较有统计学差异。川芎油各样品、藁本内酯以及美金刚均可显著缩短长期低灌+海马注射β-淀粉样蛋白小鼠的潜伏期，与模型比较有统计学差异。川芎油在同等剂量下作用明显优于藁本内酯以及美金刚。

[0077] 表4为川芎油对长期低灌+海马注射β-淀粉样蛋白所致血管认知障碍小鼠Morris水迷宫空间探索实验的影响

[0078]

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