一种小鼠抑郁症模型的构建方法
阅读：1028发布：2020-06-08
专利汇可以提供一种小鼠抑郁症模型的构建方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种小鼠 抑郁症 模型的构建方法，所述方法包括：把小鼠放进透明鼠笼中，鼠笼一侧通过通道与天敌笼相连；把小鼠天敌随机放进天敌笼中，每天2小时，连续21天以上即可获得抑郁小鼠模型。本发明建立了一种新型小鼠抑郁模型，为探索不同抑郁类型的发病机制，及筛选 治疗 不同类型抑郁症的药物提供了研究 基础 。，下面是一种小鼠抑郁症模型的构建方法专利的具体信息内容。
1.一种小鼠抑郁模型的构建方法，其特征在于，所述方法包括：把小鼠放进透明鼠笼中，鼠笼一侧通过通道与天敌笼相连；把小鼠天敌随机放进天敌笼中，每天1.5-2.5小时，连续21天以上即可获得抑郁小鼠模型。
2.根据权利要求1所述的小鼠抑郁模型的构建方法，其特征在于，把小鼠天敌随机放进天敌笼中每天2小时。
3.根据权利要求1所述的小鼠抑郁模型的构建方法，其特征在于，所述小鼠为ICR, C57BL/6, Balb/c 品系中的任一种。
4.根据权利要求1所述的小鼠抑郁模型的构建方法，其特征在于，所述透明鼠笼，材质为有机玻璃，长×宽×高：30cm×18 cm×16 cm。
5.根据权利要求1所述的小鼠抑郁模型的构建方法，其特征在于，所述通道，材质为有机玻璃，直径为为1cm, 长为8 cm。
6.根据权利要求1所述的小鼠抑郁模型的构建方法，其特征在于，所述天敌笼，材质为有机玻璃，长×宽×高：60 cm×60 cm×60 cm，有带孔上盖。
7.根据权利要求1所述的小鼠抑郁模型的构建方法，其特征在于，所述天敌为SD大鼠或散养家猫。
一种小鼠抑郁症模型的构建方法
技术领域
[0001] 本发明涉及一种小鼠抑郁症模型的构建方法，属于病理学实验领域。
背景技术
[0002] 抑郁症是一种严重危害人类身心健康的精神疾病。据世界卫生组织最新数据显示，全球抑郁症的发病率为3.1%，而据不完全统计，目前我国抑郁症发病率高达5%～6%，而且发病率近年来呈逐年上升趋势。抑郁症不仅发病率高，而且患者往往病程漫长且容易复发，自杀率高，给许多家庭和社会造成沉重负担，根据发病源及症状表现，抑郁症可分为躁狂抑郁症、精神病性抑郁症、应激抑郁症、季节性抑郁症、产后抑郁症、更年期抑郁症、创伤后应激综合症 (PTSD)等多种类型。不同类型的抑郁症发病机制或许有所不同，因此建立不同抑郁类型的动物模型，并找到最合理的治疗方案是病理学、神经科学领域的一大重要任务。
[0003] 小鼠是当代生物学领域最主要的模式生物之一。目前，关于小鼠的抑郁模型主要有环境刺激模型、药物诱导模型、转基因小鼠、手术制备等。但现有环境刺激抑郁模型大都采用在小鼠日常活动中不常见的刺激源，比如强迫游泳、禁食、禁水、噪音、强光、电击、悬尾、社会隔离、束缚等，公开号CN102405878B的发明就采用了束缚刺激。这些作为单纯的物理应激模型存在不同的缺陷，引发不少研究者的争议。小鼠在日常活动中经常会遭遇到天敌威胁，以小鼠自身的天敌作为刺激源更应该能引起小鼠的焦虑恐惧反应，而强烈的恐惧是引起PTSD重要原因。
发明内容
[0004] 为解决现有技术和实际情况中存在的上述问题，本发明提供了一种小鼠抑郁模型的构建方法，所述方法包括：把小鼠放进透明鼠笼中，鼠笼一侧通过通道与天敌笼相连；把小鼠天敌随机放进天敌笼中，每天1.5-2.5小时，连续21天以上即可获得抑郁小鼠模型。
[0005] 优选地，把小鼠天敌随机放进天敌笼中每天2小时。
[0006] 优选地，所述小鼠为ICR, C57BL/6, Balb/c 品系中的任一种。
[0007] 优选地，所述透明鼠笼，材质为有机玻璃，长×宽×高：30cm×18 cm×16 cm。
[0008] 优选地，所述通道，材质为有机玻璃，直径为为1cm, 长为8 cm。
[0009] 优选地，所述天敌笼，材质为有机玻璃，长×宽×高：60 cm×60 cm×60 cm，有带孔上盖。
[0010] 优选地，所述天敌为SD大鼠或散养家猫。
[0011] 本发明提供了一种简单方便的小鼠抑郁模型构建方法，为不同类型抗抑郁症药物的筛选及评价提供了研究基础。
[0013] 图1是本发明实施例的小鼠抑郁症模型的构建方法的实验装置示意图。
[0014] 图2是本发明实施例的小鼠抑郁症模型的构建方法的小鼠体重变化图。
[0015] 图3是本发明实施例的小鼠抑郁症模型的构建方法的小鼠糖水偏好实验结果图。
[0016] 图4是本发明实施例的小鼠抑郁症模型的构建方法的小鼠血清皮质酮检测结果示意图。
[0017]
具体实施方式
[0018] 下面结合附图详细介绍本发明技术方案。
[0019] 如图1所示，该小鼠抑郁模型的装置包括鼠笼1（长×宽×高：30cm×18 cm×16 cm）、连接通道2（直径1cm, 长8cm）及天敌笼3（长×宽×高：60 cm×60 cm×60 cm）；连接通道2用来连接鼠笼1及天敌笼3。
[0021] 本发明公开了一种小鼠抑郁模型的构建方法，所述方法包括：把小鼠放进透明鼠笼中，鼠笼一侧通过通道与天敌笼相连；把小鼠天敌随机放进天敌笼中，每天2小时，连续21天以上即可获得抑郁小鼠模型。
[0022] 所述小鼠为ICR, C57BL/6, Balb/c 品系中的任一种。
[0023] 所述天敌为SD大鼠或散养家猫。
[0024] 试验例1：小鼠体重变化材料与方法：
32只成年雄性C57BL/6小鼠购买于郑州大学实验动物中心 (3月龄左右, 初始体重
21.3 ± 0.4 g), 单笼适应饲养一周后，随机分为实验组和对照组，每组16只。实验组每天放入如图1所示的透明鼠笼中，天敌笼不定时放入成年散养家猫，每天2小时，对照组天敌笼中不放任何东西。连续刺激21天后进行行为和生理学测试。
32只成年雄性C57BL/6小鼠购买于郑州大学实验动物中心 (3月龄左右, 初始体重
21.3 ± 0.4 g), 单笼适应饲养一周后，随机分为实验组和对照组，每组16只。实验组每天放入如图1所示的透明鼠笼中，天敌笼不定时放入成年散养家猫，每天2小时，对照组天敌笼中不放任何东西。连续刺激21天后进行行为和生理学测试。
[0025] 分别在实验的第1、7、14、21天测量两组小鼠的体重，体重变化如图2所示。
[0026] 可以看出，两组小鼠在第14天时，体重呈现明显差异(22.7 ± 0.5 vs. 27.4 ± 0.4 g; P < 0.05), 实验组小鼠明显小于对照组，第21天时两组体重差异达到极显著水平(22.0 ± 0.2 vs. 30.2 ± 0.3; P < 0.01)。
[0027] 试验例2：旷场实验旷场是由有机玻璃组成的75×45×35 cm3的无盖的箱子。它的底板用记号笔分成15×
15 cm2的格子。实验开始时，将被测鼠放在旷场一角的格子，让它自由探测10 min，用秒表记录其各种行为。测试者们记录下的主要行为指标包括：第一次离开旷场角落格子的潜伏期，运动能力（所穿越的总格子数），穿越的中心格子数量，修饰次数（用前肢摩擦鼻子或者整理毛发），中心格子和外围格子中停留的时间等。每次实验结束，测试者都用水和75%的酒精擦洗旷场，并用吹风机干燥，以减少上一只被测鼠遗留下来的气味对后面被测鼠的影响，测试结果如表1
表1 旷场测试结果
数据表示为平均数 ± 标准差。独立样本t检验或Mann-Whitney U检验；*P < 0.05，实验组vs. 对照组。
15 cm2的格子。实验开始时，将被测鼠放在旷场一角的格子，让它自由探测10 min，用秒表记录其各种行为。测试者们记录下的主要行为指标包括：第一次离开旷场角落格子的潜伏期，运动能力（所穿越的总格子数），穿越的中心格子数量，修饰次数（用前肢摩擦鼻子或者整理毛发），中心格子和外围格子中停留的时间等。每次实验结束，测试者都用水和75%的酒精擦洗旷场，并用吹风机干燥，以减少上一只被测鼠遗留下来的气味对后面被测鼠的影响，测试结果如表1
表1 旷场测试结果
数据表示为平均数 ± 标准差。独立样本t检验或Mann-Whitney U检验；*P < 0.05，实验组vs. 对照组。
[0028]结果显示，实验组小鼠穿越的中心格子数量，在中心格子的停留时间明显少于对照组 (54.36 ± 8.280 vs. 36.00 ± 2.717, P = 0.024; 57.65 ± 7.633 vs. 41.48 ±
5.125 s, P = 0.015; 实验组在后)。
5.125 s, P = 0.015; 实验组在后)。
[0029] 试验例3：高架十字迷宫测试高架十字迷宫由不锈钢钢板组成。包括5×5 cm2的中心区域，两个开放臂（30×5 cm）和封闭臂（30×5×15 cm）。封闭臂和开放臂相互对立，呈十字形。迷宫距离地面高度为70 cm。
[0030] 将小鼠放在朝向开放臂的中心区域，让其自由探究5 min, 用秒表记录下小鼠在每个臂的时间（后肢进入臂定义为进入），进入两个臂的次数；统计时使用每个臂累积的时间，统计时需要主要参数有: 开放臂的时间和频次，封闭臂的时间和频次以及中心格子停留的时间[174,175]。作为焦虑行为的参数，我们还计算了在开放臂的时间百分数（公式：开放臂时间/开放臂与封闭臂的总时间），开放臂频次的百分数（进入开放臂的频次/开放臂与封闭臂总的进入次数）。
[0031]表2 高架十字迷宫结果
数据表示为平均数 ± 标准差。 独立样本t检验或Mann-Whitney U检验；*P < 0.05，**P < 0.01实验组vs. 对照组。
数据表示为平均数 ± 标准差。 独立样本t检验或Mann-Whitney U检验；*P < 0.05，**P < 0.01实验组vs. 对照组。
[0032]试验例4：糖水偏好实验
实验前训练小鼠适应含糖饮水，每笼同时放置2个水瓶，一瓶为l％蔗糖水，一瓶为纯水，连续3天，每天交换蔗糖水和纯水的位置。实验开始前1天每组小鼠均禁食禁水24小时，然后给与每只小鼠预先称量好的两瓶水：一瓶1％蔗糖水，一瓶纯水。24 h后，取走两瓶并称重。计算两组动物的糖水偏好(糖水偏好 = 糖水消耗/糖水消耗+纯水消耗×100％)，糖水偏好实验结果见图3。
实验前训练小鼠适应含糖饮水，每笼同时放置2个水瓶，一瓶为l％蔗糖水，一瓶为纯水，连续3天，每天交换蔗糖水和纯水的位置。实验开始前1天每组小鼠均禁食禁水24小时，然后给与每只小鼠预先称量好的两瓶水：一瓶1％蔗糖水，一瓶纯水。24 h后，取走两瓶并称重。计算两组动物的糖水偏好(糖水偏好 = 糖水消耗/糖水消耗+纯水消耗×100％)，糖水偏好实验结果见图3。
[0033] 与对照组比，实验组小鼠对糖水的偏好率明显降低 (60.2% ± 1.6% vs. 89.4% ± 2.5%; P < 0.01)。
[0034] 试验例5：血清皮质酮检测实验结束后，小鼠眼球取血，血液在4℃, 3000 r/min条件下离心15min, 取上清。血清皮质酮(CORT)的测定严格按照小鼠CORT酶联免疫检测（ELASA）试剂盒（南京建成®，货号：
20160302020）。说明书所列步骤进行操作。皮质酮的测定范围为0.5―100 ng/mL,批内与批间变异系数分别为6.5% 与8.2%，试验结果如图4。
20160302020）。说明书所列步骤进行操作。皮质酮的测定范围为0.5―100 ng/mL,批内与批间变异系数分别为6.5% 与8.2%，试验结果如图4。
[0035] ELASA激素检测的结果显示，与对照组相比，实验组小鼠的血清皮质酮含量远高于对照组 （30.6 ± 5.3 vs. 22.3 ± 3.1 ng/mL; P < 0.05）。
[0036] 结论以上试验首先对数据进行Kolmogorov Smirnov正态性检验，对正态分布的数据采用独立样本T检验，对于非正态分布的数据采用Mann-Whitney U 检验，取显著水平为α= 0.05。
[0037] 综合以上实验结果可以看出，经过21天的天敌应激刺激，实验组小鼠在行为和生理上均表现出明显的抑郁现象，表明按照本方法，能够成功获得抑郁症动物模型。
[0038] 最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
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