发明领域和背景

本发明涉及精神药物和有机酸的新型化学共轭体及其用途。更具 体而言，本发明涉及精神药物(其也可以有抗增生活性和/或化学致敏 活性)和所选择的减少由精神药物引起的副作用、提高精神药物的治 疗活性和/或为了发挥抗增殖活性的有机酸的新型化学共轭体，及其在 治疗精神和/或增殖紊乱和疾病中及在化学致敏作用中的用途。与现有 领域的精神药物相比，本发明的新型化学共轭体其特征在于较高的治 疗活性和最少的不良副作用。

精神药物是通过调节神经信号转导主要作用于中枢神经系统 (CNS)的药理剂。因此，精神药物是众所周知的，在此是指在CNS 发挥活性作用以治疗CNS相关损伤的药理剂，包括，例如抗精神病 药物、抗抑郁剂、抗惊厥剂、抗焦虑剂、脑衍生酶抑制剂等。

不幸的是，精神药物给药通常与不良副作用有关，如癫痫、头痛、 疲劳、过度兴奋、眩晕和更多的，这些不良副作用严重限制了其使用。 例如，这类副作用全面的列表在“The Merck Manual of Medical Information”(Merck & Co.Inc.)中。

精神抑制药物，例如，也被称为精神抑制剂或安定药，是在治疗 中枢神经系统精神疾病和紊乱中，如精神分裂症中，广泛使用的典型 抗精神药物。安定药的抗精神病效应归因于其拮抗/阻断中枢多巴胺受 体的能力。精神抑制药物被认为是典型的抗精神药物，包括，例如吩 噻嗪类，在此类中是脂肪族化合物(例如氯丙嗪)、哌啶类(例如硫 利哒嗪)和哌嗪类(例如氟奋乃静)；丁酰苯类(例如氟哌啶醇)；硫 杂蒽类(例如氟哌噻吨)；氧化吲哚类(例如吗茚酮)；二苯氧氮平类 (例如洛沙平)和联苯哌啶类(例如匹莫齐特)。

然而，现有可用的精神抑制药物给药经常与不良副作用有关。本 领域内众所周知，精神抑制剂诱发锥体外系症状，此症状包括僵硬、 震颤、运动过慢(缓慢运动)和智力迟钝(缓慢思考)，以及迟发性 运动障碍、急性张力障碍反应和静坐不能。实际上，用精神抑制药物 长期治疗超过一年的患者约5％发展为迟发性运动障碍的病理改变。

抗精神病药物的不同类别包括非典型抗精神病药。非典型的抗精 神病药物有受体结合侧面，除多巴胺D2受体外包括与中枢5羟色胺 2受体(5-HT2)结合。非典型的抗精神病药物包括，例如氯氮平、 奥氮平和利培酮，且通常其特征为高度抗5羟色胺活性和对多巴胺D2 受体相对低的亲和力。一些非典型的抗精神病药物，如氯氮平，被认 为进一步地拮抗肾上腺素能、胆碱能和组胺能受体。

与安定药不同，非典型的抗精神病药物引起最少的锥体外系症 状，并且几乎不引起迟发性运动障碍、静坐不能或急性张力障碍反应。 然而，其给药包含其它的副作用，如体重增加、情绪障碍、性功能障 碍、镇静、直立性低血压、多涎、降低癫痫阈值及，尤其是粒细胞缺 乏症。

与典型和非典型的抗精神病药物，在此也指抗精神病药，相关的 严重副作用对其使用产生了较多的限制，并且已作出了大量努力以开 发没有这些副作用的抗精神病药物。

美国专利第6,197,764号公开了氯氮平(一个非典型抗精神病药 物)和含12-26个碳原子，优选16-22个碳原子的脂肪酸的化学共轭 体。这些共轭体的特征在于扩展了治疗效果，该共轭体允许给予其较 低的剂量以产生抗精神病的治疗作用，因此降低了发生严重副作用的 机会。因此，这些共轭体对于非共轭的非典型抗精神病药物是有益的 和有利的。然而，美国专利第6,197,764号未能公开这类包括其它抗 精神病药物的有利的共轭体，并且该专利进一步限制了包括长链脂肪 酸的共轭体。应当指出，其它抗精神病药，主要是安定药，和长链脂 肪酸的酯共轭体在本领域内众所周知。然而，这类共轭体的目标主要 在于促进大脑渗透以及延长药物在体内的寿命，并不是为了积极地减 少或预防副作用而设计。

美国专利第3,966,930号公布了氟取代的吩噻嗪衍生物，此衍生 物有显著的抑制精神特性和相对低程度的不希望有的副作用。然而， 虽然美国专利第3,966,930号要求的部分氟取代的吩噻嗪类衍生物包 括在其链中含有1-17个碳原子的酰基，但是试验数据限于仅包括来自 乙二酸或马来酸(即分别包括2和4个碳原子的有机酸)的酰基的吩 噻嗪类衍生物。与其它已知的安定药相比，公开的吩噻嗪类衍生物有 更长的疗效，所以其特征在于引发的副作用的程度相对较低。这些化 合物的延长的疗效主要归因于吩噻嗪取代基(例如氟和三氟甲基)， 而其与有机酸的共轭体目的主要在于使其容易制剂配方。

作为用精神药物，主要是安定药，治疗的结果，关于锥体外系症 状的发展的最近的研究表明包含多巴胺能受体D1和D2失调的机理， 这进一步伴发了脑内γ-氨基丁酸(GABA)系统活性的降低。

GABA是脑内重要的抑制性神经递质，已知此物质影响情绪稳定 活性、抗焦虑活性和肌肉松弛活性，且进一步已知是与某些中枢神经 系统紊乱和疾病有关。关于锥体外系症状的最近研究表明GABA激动 剂可以进一步用于减少精神抑制剂引起的副作用，因此有另外的治疗 潜能。

过去的研究已经表明GABA激动剂能干扰其它脑神经递质，且尤 其是多巴胺系统。因此，研究证明GABA激动剂能拮抗精神抑制剂引 起的多巴胺受体敏感性增加，因此能改善精神抑制剂引起的运动障碍 [1]。而且，研究表明一些已知的直接GABA激动剂(例如蝇蕈醇和SL 76002)对于氟哌啶醇引起的僵住症产生双相作用，以致于高剂量激 动剂加强氟哌啶醇-引起的僵住症，而低剂量激动剂抑制刻板性的僵住 症行为。其它研究报道了GABA激动剂进一步引起抗惊厥活性[2]。

GABA激动剂的使用是受限的，由于它们包含亲水功能基团(例 如游离羧基和游离氨基)，且因此不容易穿过血脑屏障(BBB)。然而， 实践证明这类化合物和脂肪氨基酸或肽的化学共轭基本上能促进它们 穿过血脑屏障(BBB)[3]。

的确，美国专利第3,947,579、3,978,216、4,084,000、4,129,652 和4,138,484号公开了已知的穿过血脑屏障的GABA类化合物(与 GABA药理学相关的化合物)，如γ-羟基丁内酯、γ-羟基丁酸、氨基 氧乙酸、5-乙基-5-苯基-2-吡咯烷酮、1-羟基-3-氨基-2-吡咯烷酮和β-(4- 氯苯基)-γ-氨基丁酸，当与精神抑制药物一同给药时，允许使用稍微 低剂量的精神抑制药物以获得和使用高剂量抗精神抑制药物而未给予 上述GABA类化合物获得的作用同样的抗精神病作用，同时，稍微降 低锥体外系副作用。据说，通过使用较低剂量的精神抑制药物可以获 得同样的抗精神病作用，因为GABA类化合物可以说是增强联合给予 的抗精神病药物的抗精神病活性。

最近的研究揭示一些精神药物，尤其是吩噻嗪类，在不同的细胞 系中进一步发挥有效的抗增殖活性，如神经细胞、胶质细胞、黑色素 瘤细胞、乳腺细胞、结肠细胞、前列腺细胞、淋巴瘤和白血病，以及 原代人角膜细胞[4]。已知对钙调节蛋白发挥特异性抑制作用“新半芥 型吩噻嗪类”已由国家癌症研究所(the National Cancer Institute， NCI)检测。在60种不同人癌细胞系的体外筛选中观察到吩噻嗪类的 抗增殖活性。一些吩噻嗪类进一步显示了在动物模型中明显抑制肿瘤 生长的作用。与一般人群比较，这些结果与在采用精神抑制药物治疗 的精神分裂症患者中的癌症发生的低频度一致。

WO02/43652，在此完全引入作为参考，该专利说明了各种典型 和非典型精神药物在治疗增殖性疾病中的用途。尤其是，WO02/43652 说明了环状精神药物(例如三环、二环和单环)在治疗各种肿瘤中， 包括神经胶质瘤，黑色素瘤，成神经细胞瘤，结肠、肺和前列腺癌症， 以及在治疗多药物耐受(MDR)肿瘤细胞中，如B16黑色素瘤细胞 (已知对多柔比星和秋水仙碱耐受)和成神经细胞瘤(SH-SY5T，对 5-FU和多柔比星耐受)能作为有效的药物。并且，除了教导了精神 药物在治疗MDR癌症中的活性，WO02/43652进一步教导了对于细 胞毒药物，精神药物作为化学致敏剂的用途，即作为有效致敏癌症细 胞的化合物，特别是MDR癌症细胞。

然而，尽管WO02/43652中的教导是非常有利的，特别是在治疗 MDR癌症中精神药物的抗增殖和化学致敏活性方面，但是这些精神 药物的使用非常受限于由此引起的不良副作用。

丙戊酸是具有抗惊厥活性的精神药物，因此是目前已知的并用作 癫痫症的批准药物。近来，有研究表明丙戊酸在体内和体外的确定的 细胞系中发挥抗增殖作用，并且初步报告已表明其对治疗人类血液和 实体瘤的用途。研究表明丙戊酸的抗增殖活性来自其组蛋白脱乙酰基 酶抑制(HDACI)活性[16-22]。然而，进一步的研究表明抗癫痫药(例 如抗惊厥剂)和抗癌症活性之间的普遍关系。

丁酸(BA)和4-苯基丁酸(PBA)，GABA是其衍生物，上述两 个化合物也是已知的在体外广谱赘生细胞内用作分化和抗增殖药物 [5]。丁酸和4-苯基丁酸均被认为是pleotropic剂，且它们最显著的活 性之一是在核组蛋白内可逆性增加乙酰化水平，这引起在转录活性中 染色质释放和改变[6]。人们认为这种作用机理进一步与丁酸和4-苯基 丁酸的抗癌活性有关。

因此，现有技术教导精神药物作为抗增殖剂和化学致敏剂在治疗 中枢神经系统紊乱和疾病中的用途，以及在治疗增殖紊乱和疾病如恶 性与良性肿瘤和MDR癌症中的用途。现有技教导术进一步说明GABA 激动剂(包括GABA本身)作为减少精神抑制药引起的副作用的潜在 药物的用途以及丁酸和其衍生物作为抗增殖剂的用途。

然而，对于其特征在于改善治疗活性和降低副作用的精神药物， 仍旧有广泛的认知必要，且是非常有利的，上述药物也用作抗增殖剂 和用作化学致敏剂。

发明概述

根据本发明，提供了(i)精神药物和有机酸的化学共轭体，选取 有机酸以减少由精神药物引起的副作用、以提高精神药物治疗疗效和/ 或以发挥抗增殖活性；(ii)精神药物和GABA激动剂(包括GABA 本身)的化学共轭体；(iii)精神药物和抗增殖剂的化学共轭体；(iv)精 神药物和镇痛药的化学共轭体；(v)它们的合成方法；(vi)其在治疗 和/或预防精神紊乱和疾病中的用途，同时降低常规精神药物的特征性 副作用和/或提高其促精神效能；(vii)其在治疗和/或预防增殖紊乱和 疾病中的用途；和(viii)其作为化学致敏剂的用途。

在此表明精神药物的化学共轭体其特征为将不良副作用降到最 小，提高促精神治疗活性和抗增殖活性以及化学致敏活性。在此进一 步显示与其母体化合物相比，在治疗效果方面和将副作用降到最低方 面，这类化学共轭体意外地产生协同效应。

因此，根据本发明的一方面，提供了一种化学共轭体，包含与第 二化学部分共价连接的第一化学部分，其中所述的第一化学部分是精 神药物残基，且进一步地其中所述的第二化学部分选取有机酸残基， 以便当给予精神药物本身时减少由精神药物引起的副作用，提高精神 药物的疗效和/或发挥抗增殖活性。

在本发明的一个实施方案中，精神药物残基包括一个精神药物的 任意一个残基，排除抗精神病药物。

在本发明的另一个实施方案中，第二化学部分是止痛剂残基且精 神药物是如在下文中所确定的。

根据本发明的另一方面，提供了药物组合物，包含作为活性成分 的本发明的化学共轭体和可药用载体。

本发明的药物组合物优选包装在包装材料中，且通过包装材料上 或内的印刷辨别，用于治疗中枢神经系统(CNS)紊乱或疾病，用于 治疗增殖紊乱或疾病，和/或用于与化疗药物联用和/或在化学致敏有 益的医疗条件下的化学致敏。

根据本发明的另一方面，提供了一种在受试者中治疗或预防CNS 紊乱或疾病的方法，该方法包含给予受试者治疗有效量的本发明的化 学共轭体。

根据下述的本发明的优选实施方案中的另一特征，CNS紊乱或疾 病选自精神障碍或疾病、焦虑障碍、分离性障碍、人格障碍、心境障 碍、情感障碍、神经变性疾病或障碍、惊厥性疾患、border line障碍 和精神疾病或障碍。

根据在所述的优选实施方案中的又一个特征，CNS紊乱和疾病选 自精神分裂症、妄想症、儿童精神病、杭延顿氏舞蹈病、吉累斯·德拉 图雷特氏综合征、抑郁、躁狂性抑郁、焦虑、帕金森氏症、阿耳茨海 默氏症和癫痫。

根据本发明的另一方面，提供了一种在受试者中治疗或预防增殖 紊乱或疾病的方法，该方法包含给予受试者治疗有效量的本发明的化 学共轭体。

根据下述的本发明优选实施方案中的另一特征，增殖紊乱或疾病 选自脑肿瘤、脑转移和外周肿瘤。

根据在所述的优选实施方案中的又一个特征，增殖紊乱是癌症， 如多重耐药的癌症。

根据本发明的另一方面，提供了一种化学致敏作用的方法。该方 法包含给予需要此治疗的受试者化学治疗有效量的一个或多个化疗药 物和化学致敏有效量的本发明的化学共轭体。

根据下述的本发明优选实施方案中的另一特征，受试者患有癌症 如多重耐药的癌症。

根据下述的本发明优选实施方案中的另一特征，第二化学部分与 第一化学部分通过选自下列的一个键共建连接：羧酸酯键、烷氧基羧 酸酯键、酰胺键、亚胺键和硫酯键。

根据在所述的优选实施方案中的又一个特征，第二化学部分选自 抗增殖剂残基、止痛剂残基和GABA激动剂残基。

根据在所述的优选实施方案中的又一个特征，精神药物有抗增殖 活性。

根据在所述的优选实施方案中的又一个特征，精神药物有化学致 敏活性。

根据在所述的优选实施方案中的又一个特征，精神药物残基选自 吩噻嗪类残基、吩噻嗪类衍生物残基和丙戊酸残基。

根据在所述的优选实施方案中的又一个特征，精神药物残基是抗 精神病药物残基。

根据在所述的优选实施方案中的又一个特征，抗精神病药物残基 选自典型的抗精神病药物残基和非典型精神病药物残基。

根据在所述的优选实施方案中的又一个特征，精神药物残基是抗 抑郁剂残基如，例如氟西汀残基和去甲替林残基。

根据在所述的优选实施方案中的又一个特征，精神药物残基选自 抗焦虑药物残基、抗抑郁剂残基、镇痉药残基、抗帕金森氏症药物残 基、乙酰胆碱酯酶抑制剂残基、MAO抑制剂残基、三环类精神药物 残基、二环类精神药物残基、单环类精神药物残基、吩噻嗪类残基、 苯并二氮类残基和丁酰苯类残基。

根据在所述的优选实施方案中的又一个特征，精神药物残基选自 氯丙嗪残基、奋乃静残基、氟奋乃静残基、氯哌噻吨残基、醋酸奋乃 静残基、氟哌啶醇残基、苯哌利多残基、溴哌利多残基、氟哌利多残 基、螺哌隆残基、匹莫齐特残基、哌西他嗪残基、amilsulpride残基、 舒必利残基、氯噻平残基、齐拉西酮残基、瑞莫必利残基、舒托必利 残基、阿立必利残基、奈莫必利残基、氯氮平残基、奥氮平残基、齐 拉西酮残基、舍吲哚残基、喹硫平残基、氟西汀残基、氟伏沙明残基、 地昔帕明残基、帕罗西汀残基、舍曲林残基、丙戊酸残基、替马西泮 残基、氟替马西泮残基、度氟西泮残基、奥沙西泮残基、劳拉西泮残 基、氯甲西泮残基、西诺西泮残基、氟他唑仑残基、氯吡西泮残基、 甲丙氨酯残基、卡立普多残基、醋奋乃静残基、卡奋乃静残基、地西 拉嗪残基、priciazine残基、哌泊塞嗪残基、高氟奋乃静残基、哌美 他嗪残基、perthipentyl残基、氟哌噻吨残基、哌氟替索残基、替氟 替索残基、oxypethepin残基、三氟哌多残基、五氟利多残基、 meclobemide残基、norclomipramine残基、阿莫西平残基、去甲替 林残基、普罗替林残基、瑞波西汀残基、他克林残基、雷沙吉兰残基、 amantidine残基、dulexatine残基、苯巴比妥残基和苯妥英残基。

根据在所述的优选实施方案中的又一个特征，GABA激动剂残基 选自(±)-巴氯芬残基、γ-氨基丁酸(GABA)残基、γ-羟基丁酸残基、 氨基羟乙酸残基、β-(4-氯苯基)-γ-氨基丁酸残基、4-哌啶甲酸、哌啶-4- 磺酸残基、3-氨基丙基亚膦酸残基、3-氨基丙基次膦酸残基、3-(氨基 丙基)甲基次磷酸残基、1-(氨基甲基)环己烷基乙酸残基(加巴喷丁)、 4-氨基-5-己烯酸(γ-乙烯基GABA，氨己烯酸)和3-(2-咪唑基)-4-氨 基丁酸残基。

根据在所述的优选实施方案中的又一个特征，抗增殖剂残基选自 丁酸残基和4-苯基丁酸残基。

根据在所述的优选实施方案中的又一个特征，止痛剂残基是非甾 体抗炎药物残基。

根据在所述的优选实施方案中的又一个特征，有机酸残基具有通 式-R-C(＝O)-其中，R选自被取代的或未被取代的含1-20个碳原子的 烃类残基，被取代的或未被取代的含1-20个碳原子和选自氧、氮和硫 的至少一个杂原子的烃类残基及R1，而R1是通式残基-Z-C(＝O)O- CHR2-R3其中，Z选自单键，被取代的或未被取代的含1-20个碳原子 的烃类残基及被取代的或未被取代的含1-20个碳原子和选自氧、氮和 硫的至少一个杂原子的烃类残基；R2选自氢和含1-10个碳原子的烷 基；且R3选自氢、被取代的或未被取代的含1-20个碳原子的烃类残 基及被取代的或未被取代的含1-20个碳原子和选自氧、氮和硫的至少 一个杂原子的烃类残基。

根据在所述的优选实施方案中的又一个特征，R是被取代的或未 被取代的含3-5个碳原子的烷基。

根据在所述的优选实施方案中的又一个特征，有机酸残基选自丁 酸残基、戊酸残基、4-苯基丁酸残基、4-氨基丁酸残基、维甲酸残基、 舒林酸残基、乙酰水杨酸残基、布洛芬残基、丙二酸残基、琥珀酸残 基、戊二酸残基、富马酸残基和邻苯二甲酸残基。

根据本发明的另一方面，提供了一种合成本发明化学共轭体的方 法。该方法包含有机酸和精神药物反应，以便获得与精神药物残基共 价连接的有机酸残基。

根据下述的本发明优选实施方案中的另一特征，有机酸残基通过 羧酸酯键与精神药物残基共价连接，且该方法进一步包含在发生反应 之前，将有机酸转化为其酰基氯衍生物。

根据在所述的优选实施方案中的又一个特征，有机酸残基通过硫 酯键与精神药物残基共价连接，且该方法进一步包含在发生反应之 前，将有机酸转化为其酰基氯衍生物，并将精神药物转化为其巯基衍 生物。

根据在所述的优选实施方案中的又一个特征，有机酸残基通过酰 胺键与精神药物残基共价连接，且该方法进一步包含在发生反应之 前，将有机酸转化为其酰基氯衍生物，并将精神药物转化为其胺衍生 物。

根据在所述的优选实施方案中的又一个特征，有机酸残基通过烷 氧基羧酸酯键与精神药物残基共价连接，且该方法进一步包含在发生 反应之前，将精神药物转化为其氯代烷基酯衍生物。

根据在所述的优选实施方案中的又一个特征，有机酸残基通过亚 胺键与精神药物残基共价连接，且该方法进一步包含在发生反应之 前，将有机酸转化为其醛衍生物，且将精神药物转化为其胺衍生物。 在上述方法中使用的有机酸和精神药物优选来自本发明的如上文所述 的有机酸残基和精神药物残基。

由于有机酸是包含游离氨基基团的GABA激动剂，所述方法进一 步包含在发生反应之前用保护基保护游离氨基基团，以便通过反应获 得与精神药物残基共价连接的有机酸的氨基被保护的残基，并在获得 与精神药物残基共价连接的有机酸的氨基被保护的残基后除去保护基 团。优选地，此方法进一步包含在保护后和反应前，将有机酸转化为 其酰基咪唑衍生物。

通过提供新的和有效的精神药物的化学共轭体，本发明成功地公 开了现有已知构型的缺点。对于治疗和预防精神的和/或增殖紊乱和疾 病及对于用作化学致敏剂，此共轭体将不良副作用降到最低且发挥较 高的治疗活性。

附图简述

本发明在此仅通过实施例并参考详细的附图进行叙述。现详细地 特别参照附图，强调所示的详细说明是通过实施例的方式，并仅为了 解说讨论本发明的优选实施方案，并且在提供被认为是最有用的和易 于理解的本发明的原则和概念方面的叙述的过程中显示。在这方面， 未偿试比本发明的基本理解必要的更详细的结构性细节，应用附图描 述使本领域的技术人员清楚可在事实上体现的发明的多种形式。

在附图中：

图1a和1b显示的是棒图和曲线图，通过构效关系(Structure Activity Relationship，SAR)研究获得，证明了在大鼠中腹膜内注射 5mg/Kg体重的奋乃静和其等摩尔剂量的化学共轭体，奋乃静和其根 据本发明的化学共轭体(AN167、AN168和AN130)对总的僵住症 (图1a)和催乳素的血浆水平(图1b)的影响；

图2是棒图，证明了在大鼠中用5mg/kg奋乃静和等摩尔剂量的 其根据本发明的的化学共轭体(SAR研究)处理后的总的僵住症；

图3a和3b显示的是棒图和曲线图，证明了奋乃静(5mg/kg)、 氟奋乃静(7.5mg/kg)和其根据本发明的化学共轭体(AN167、AN 168、AN180和AN187)(给予等摩尔剂量)在大鼠中对总的僵住症 的影响(图3a)和奋乃静、氟奋乃静和其GABA化学共轭体AN168 和AN187在大鼠中对催乳素血浆水平的影响；

图4a-b是对照曲线图，证明了在大鼠中，由奋乃静和其根据本发 明的化学共轭体(图4a)以及氟奋乃静和其根据本发明的化学共轭体 (图4b)引起的僵住症的时间进程；

图5a和5b显示的是棒图和对照曲线图，证明了在大鼠中，奋乃 静和本发明的GABA的化学共轭体(化合物AN168)和等摩尔剂量 的奋乃静和GABA的混合物对僵住症的影响；

图6是棒图，证明了在大鼠中，本发明的化学共轭体AN167和 AN168对总的僵住症的影响(四个独立实验的平均值)；

图7a和7b显示的是棒图，证明了在小鼠中，AN168、等摩尔剂 量的奋乃静以及等摩尔剂量的奋乃静和GABA混合物的化学共轭体对 僵住症的影响，测定了在2分钟内达到目标的动物百分数(图7a)和 动物达到目标所花费的时间(图7b)；

图8a和8b表示对照曲线图，证明了在大鼠中，口服给予奋乃静 和其化学共轭体AN168对僵住症的影响，通过“钢琴”(piano)试验法 测定(图8b表示在图8a中进行的实验3个月后进行的实验中获得的 数据)；

图9a和9b表示棒图，证明了在大鼠中通过口服给予各种浓度的 奋乃静和其AN168化学共轭体引起的总的僵住症，通过“钢琴”试验 法测定(图9b表示在图9a中进行的实验3个月后进行的实验中获得 的数据)；

图10a和10b是对照曲线图和棒图，证明了在大鼠中，口服给予 各种浓度的奋乃静和其化学共轭体AN168对僵住症时间进程的影响 (图10a)和对总的僵住症的影响(图10b)，在24小时期间通过“钢 琴”试验法测定；

图11是棒图，证明了在大鼠中，口服给予各种浓度的奋乃静和 AN168对总的僵住症的影响，通过“壁(wall)”试验法测定；

图12表示对照曲线图，证明了在大鼠中，口服给予奋乃静和AN 168对催乳素血浆水平的影响；

图13表示对照曲线图，证明了奋乃静和其本发明的化学共轭体 AN130、AN167和AN168对B16鼠类黑色素瘤细胞增殖的影响；

图14表示对照曲线图，证明了渐增浓度的奋乃静、AN168、 GABA、长春新碱和顺铂对C6大鼠神经胶质瘤细胞的成活力的影响；

图15表示对照曲线图，证明了渐增浓度的奋乃静、AN168和地 塞米松对Jurkat T淋巴瘤细胞成活力的影响；

图16是棒图，证明了各种浓度的奋乃静和AN168对用30μM 长春新碱处理的C6大鼠神经胶质瘤细胞的成活力的影响；

图17是棒图，证明了顺铂(5-50μM)及顺铂(5-50μM)和AN168 (10和15μM)联用对C6大鼠神经胶质瘤细胞成活力的影响；

图18是棒图，证明了奋乃静、AN168和顺铂对C6大鼠神经胶 质瘤细胞中的DNA断裂的影响；

图19是棒图，证明了奋乃静和其化学共轭体AN130、AN167和 AN168对正常脑细胞的影响(IC50值)；

图20是棒图，证明了等摩尔剂量的奋乃静和AN168对大鼠肌细 胞成活力的影响；

图21表示对照曲线图，证明了在大鼠中，腹膜内注射奋乃静(per) 和本发明的化合物AN167致死率的时间进程；

图22是棒图，证明了在大鼠中，腹膜内给予各种浓度的奋乃静 和/或GABA，以及等摩尔剂量的化学共轭体AN-168对D-苯丙胺引 起的攀缘行为的影响，通过在各实验组中记录2个小时期间攀缘努力 的总次数(各点代表平均值+/-SEM，及处理的动物数)；

图23表示对照曲线图，证明了在大鼠中，腹膜内给予各种浓度 的奋乃静和/或GABA，以及等摩尔剂量的化学共轭体AN-168在2个 小时期间对D-苯丙胺引起的攀缘行为的时间进程的影响；

图24是棒图，证明了在大鼠中，腹膜内给予各种浓度的奋乃静 和等摩尔剂量的化学共轭体AN-168对D-苯丙胺引起的头部运动的影 响，记录各实验组在2个小时期间(各点代表平均值+/-SEM，加入处 理的动物数)；

图25表示对照曲线图，证明了在大鼠中，腹膜内给予各种浓度 的奋乃静和等摩尔剂量的化学共轭体AN-168在2个小时期间对D-苯 丙胺引起的头部运动的时间进程的影响；

图26是棒图，证明了在大鼠中，口服给予2.5mg/kg奋乃静，有 或没有5mg/kg GABA，以及等摩尔剂量的化学共轭体AN-168对D- 苯丙胺引起的攀缘行为的影响，通过在各实验组中记录2个小时期间 攀缘努力的总次数(各点代表平均值+/-SEM及处理的动物数)；

图27是棒图，证明了在大鼠中，口服给予2.5mg/kg奋乃静，有 或没有5mg/kg GABA，以及等摩尔剂量的化学共轭体AN-168在各 实验组中2个小时期间对D-苯丙胺引起头部运动的影响(各点各点代 表平均值+/-SEM)；

图28表示对照曲线图，证明了在大鼠中，口服给予2.5mg/kg奋 乃静，有或没有5mg/kg GABA，以及等摩尔剂量的化学共轭体AN-168 对2个小时期间D-苯丙胺引起的头部运动的影响；

图29是棒图，证明了在大鼠中，口服给予各种浓度的奥氮平对 D-苯丙胺引起的攀缘行为的影响；

图30表示对照曲线图，证明了在大鼠中，口服给予各种浓度的 奥氮平对D-苯丙胺引起攀缘行为的时间进程的影响；

图31是棒图，证明了在大鼠中，口服给予各种浓度的奥氮平对 D-苯丙胺引起的头部运动的影响；

图32a-b表示曲线图和对照曲线图，分别证明了渐增浓度的AN- 216(图32a)和渐增浓度的AN-216、GABA、丙戊酸及GABA和丙 戊酸的1∶1等摩尔混合物(图32b)对人U-251恶性胶质瘤细胞成活 力的影响；

图33是棒图，证明了得自AN-216、AN-138、AN-223、丙戊酸 (表示为丙戊酸盐)及GABA和丙戊酸的1∶1等摩尔混合物的IC50值， 同时测定了其对人U-251恶性胶质瘤细胞成活力的影响；

图34表示对照曲线图，证明了渐增浓度的AN-216、AN-138、 AN-148和AN-223对人U-87神经胶质瘤细胞成活力的影响；

图35表示对照曲线图，证明了渐增浓度的AN-216、AN-138、 AN-148和AN-223对各种人U-251神经胶质瘤细胞成活力的影响；以 及

图36是棒图，证明了得自AN-216、N-138、N-148和AN-223的 IC50值，同时测定了其对人U-251和U-87神经胶质瘤细胞成活力的 影响。

优选实施方案描述

本发明是关于与有机酸共价连接的精神药物的化学共轭体，其制 备方法和其在治疗CNS紊乱和疾病，以及在增殖紊乱和疾病例如但 不限于脑肿瘤、脑转移、外周肿瘤、MDR癌症和其它增殖性疾病中 的用途，以及作为化学致敏剂。

根据本发明的化学共轭体的成分和操作可以通过参考附图和所附 的说明更好的理解。

在详细地解释本发明的至少一个实施方案之前，应当理解为，本 发明不局限于其在随后通过实施例描述和图解所阐明的结构细节和组 分排列中的应用。本发明可以有其它的实施方案或以各种途径被实施 或执行。并且，应该理解此处使用的措辞和术语是为了叙述，且不应 被认为是限制。

当转化本发明时，假设共价耦合了精神药物(其还有抗增殖活性 和/或化学致敏活性)和GABA拮抗剂、止痛剂或抗增殖剂的化学共 轭体能发挥高的精神病的和/或抗增殖治疗活性，以及化学致敏活性， 伴随将不良副作用降到最低。

上述假设的根本基础如下：CNS紊乱和疾病通过一些类型的精神 药物是可以治疗的。然而，给予精神药物典型地伴发短期和长期不良 副作用，且进一步时常地被差的药物动力学限制。不良副作用的发展 通常归因于诱发多巴胺能D1和D2受体失衡和脑内GABA系统活性 降低。

因此，假设与GABA激动剂共价耦合的精神化合物将形成发挥促 精神的活性并将副作用降到最低的化学共轭体。

尤其是，假设精神药物和GABA激动剂的这类耦合在这方面将是 非常有益的，因为它将形成同时发挥促精神活性和GABA增加活性的 化合物。

GABA系统活性增加，目前通过给予镇痛药获得，众所周知，GABA 激动剂和GABA类化合物降低由精神药物引起的副作用，且进一步提 供其它与GABA系统(例如情绪稳定和放松)相关的治疗利益。进一 步地，众所周知，GABA激动剂拮抗由精神药物引起的多巴胺能受体 敏感性增加。然而，给予确定的GABA激动剂和镇痛药受其亲水性能 限制。

因此，进一步假设由精神药物和GABA激动剂共价耦合得到的化 学共轭体其特征为(i)由精神药物部分和GABA激动剂部分引起的协 同促精神活性和GABA增加的活性；(ii)降低拟精神药物引起的副作 用；(iii)就透过血脑屏障而言，与母体化合物相比，耦合的精神药物 和GABA激动剂有改善的药物动力学；以及(iv)在脑内改善神经递质 平衡，这可导致改善的促精神活性。

并且，本领域内众所周知，一些精神药物，尤其是精神抑制药物 如吩噻嗪类和抗惊厥剂如丙戊酸，是有效的抗增殖剂。另外，当与化 疗药物联用时，一些精神药物能进一步地作为化学致敏剂。因此，进 一步地假设精神药物和有抗增殖活性的化学部分共价耦合的化学共轭 体将发挥较高的抗增殖和/或化学致敏活性。由于促精神残基和脑受体 的亲和力及其改善脑部药物动力学，这类化学共轭体在治疗增殖紊乱 和疾病，特别是在脑内，是非常有益的。

由于在下面的实施例部分中有进一步地例证，虽然减少本发明用 于实践，但是研究表明共价耦合的精神药物和选取的化学部分，该化 学部分为了降低由精神药物引起的副作用和/或提供提高治疗活性或其 它附加值的精神药物，如GABA激动剂，或为了发挥抗增殖活性，结 果形成化学共轭体，其协同作用地特征为(i)将不良副作用降到最 低；(ii)高的促精神活性；(iii)高的抗增殖活性；(vi)高的化学致敏 活性；以及(iv)降低毒性，上述所有内容均与已知的精神药物比较。 包括GABA激动剂的化学共轭体其特征进一步为协同的促精神和 GABA感应反射活性。

因此，根据本发明，化学共轭体作为抗增殖剂和/或化学致敏剂， 用于治疗CNS紊乱和疾病以及增殖紊乱和疾病。用于治疗CNS和/或 增殖紊乱和疾病的根据本发明的每一个化学共轭体包括与第二化学部 分共价连接的第一化学部分。该第一化学部分是精神药物残基，而第 二化学部分是有机酸，选择是为了减少当给予精神药物本身时由精神 药物引起的副作用，为了提高精神药物的治疗活性和/或为了发挥抗增 殖活性。

如此处使用的，术语“化学部分”指的是来自化学化合物的残基， 该残基维持其功能性。

此处的术语“残基”指的是与另一分子共价连接的分子的主要部 分，这在本领域内是充分公认的。

因此，短语“精神药物残基”指的是与另一化学部分共价连接的精 神药物的主要部分，该术语是在上文中确定的。

如上文所述，短语“精神药物”包括在中枢神经系统中发挥活性且 因此能被用于治疗各种中枢神经系统疾病或障碍的任一试剂和药物。

如果第二部分是GABA激动剂或抗增殖剂，如此处使用的，短语 “精神药物”包括如此处所述的任意一个试剂或药物，抗精神病药物除 外。

如果第二部分是止痛剂残基，短语“精神药物”包括如此处所确定 的任意一个试剂或药物。

因此，根据本发明，精神药物残基包括，例如来自抗焦虑药物的 残基如但不限于苯二氮类，来自抗精神病药物的残基如但不限于吩 噻嗪类和丁酰苯类，MAO抑制剂，抗抑郁剂，镇痉药(在此和本领 域内也指抗惊厥剂)，抗帕金森药物和乙酰胆碱酯酶抑制剂。这些精 神药物可能是三环类、二环类或单环类。

根据本发明，特别优选的精神药物是那些有氨基基团、巯基基团 或羟基基团的药物，这些术语如下文所确定的。上述基团能与有机酸 发生反应或可能是其反应衍生物。这些基团可能作为游离功能基团或 作为其它功能基团的一部分存在于精神药物中，例如氨基、羧基等， 这些术语如下文所确定的。

这些精神药物残基的有代表性的残基实例包括，不限于，典型的 和非典型的抗精神病药物残基如氯丙嗪残基、奋乃静残基、氟奋乃静 残基、氯哌噻吨残基、醋酸奋乃静残基、氟哌啶醇残基、苯哌利多残 基、溴哌利多残基、氟哌利多残基、螺哌隆残基、匹莫齐特残基、哌 西他嗪残基、amilsulpride残基、舒必利残基、氯噻平残基、齐拉西 酮残基、瑞莫必利残基、舒托必利残基、阿立必利残基、奈莫必利残 基、氯氮平残基、奥氮平残基、齐拉西酮残基、舍吲哚残基、喹硫平 残基、醋奋乃静残基、卡奋乃静残基、地西拉嗪残基、priciazine残 基、哌泊塞嗪残基、高氟奋乃静残基、哌美他嗪残基、perthipentyl 残基、氟哌噻吨残基、哌氟替索残基、替氟替索残基、oxypethepin 残基、三氟哌多残基和五氟利多残基。

这些精神药物残基的另外的有代表性的残基实例包括，不限于， 抗抑郁剂残基如氟西汀残基、氟伏沙明残基、地昔帕明残基、帕罗西 汀残基、舍曲林残基、meclobemide残基、norclomipramine残基、 阿莫西平残基、去甲替林残基、普罗替林残基、瑞波西汀残基和 dulexatine残基；抗惊厥剂残基，如丙戊酸残基、苯巴比妥残基和苯 妥英残基；抗焦虑剂残基如替马西泮残基、氟替马西泮残基、度氟西 泮残基、奥沙西泮残基、劳拉西泮残基、氯甲西泮残基、西诺西泮残 基、氟他唑仑残基、氯吡西泮残基、甲丙氨酯残基、卡立普多残基； 抗帕金森药物残基如雷沙吉兰擦机和金刚烷胺残基；以及乙酰胆碱酯 酶抑制剂残基如他克林残基。

根据本发明的优选实施方案，精神药物残基进一步发挥抗增殖活 性。这类双重活性的精神药物包括，例如吩噻嗪类及其衍生物，以及 抗惊厥剂如丙戊酸及其衍生物。

根据本发明的另一个优选实施方案，精神药物残基进一步发挥化 学致敏活性。这类双重活性的精神药物包括，例如吩噻嗪类及其衍生 物、硫杂蒽类及其衍生物、氯氮平、氯米帕明和帕罗西汀。

如此处使用的，术语“化学致敏作用”意味着在化学致敏剂存在 下，增强或提高的化疗药物的对癌症细胞的测定的细胞毒性，尤其是 多重耐药的癌症细胞，这是与在缺乏化学致敏剂时由化疗药物发挥的 细胞毒性水平相比较。

术语“化学致敏剂”和“化学致敏剂”，此处可以互换使用，描述使 癌症细胞对化疗更敏感的化合物。

如上文所述，根据本发明，精神药物残基是与第二化学部分共价 耦合，第二化学部分是有机酸残基。

如此处所确定的，短语“有机酸残基”指的是来自包括游离羧基的 有机酸的残基。

术语“游离羧基”包括“-C(＝O)OH”基团，或者是其质子化或其离 子化或盐状态。

根据本发明，选取有机酸残基为了减少如果单独给药由精神药物 引起的副作用，为了提高精神药物的治疗活性或为了提供精神药物另 外的附加值(例如增加GABA活性)和/或发挥抗增殖活性。根据本 发明，有机酸残基可能是，例如，有通式-R-C(＝O)-的残基，其中例 如R可能是含1-20个碳原子的烃类残基。

如此处使用的，术语“烃类”指的是有机化合物，包括和其基本骨 架一样，共价结合的碳原子和氢原子链。

因此，根据本发明，烃类残基可能是烷基或环烷基。

如此处使用的，术语“烷基”指的是饱和的脂肪族烃，包括直链和 支链基团。优选地，烷基基团含1-20个碳原子。

每当在此处提及数字范围时，例如“1-20”，这意味着就烷基而言， 基团可以含有1个碳原子、2个碳原子、3个碳原子等，直到包含20 个碳原子。更优选地，烷基是中间大小的含有1-10碳原子的烷基。最 优选地，烷基含3-5个碳原子。

如此处使用的，术语“环烷基”包括所有的碳的单环或稠环(即共 享一对邻近的碳原子的环系)基团，其中多个环中的一个不与π-电子 系统完全共轭。环烷基的实例包括，不限于，环丙烷、环丁烷、环戊 烷、环戊烯、环己烷、环己二烯、环庚烷、环庚三烯和金刚烷胺。

根据本发明，烃类残基可能是直链的或支链的。烃类残基进一步 可能是饱和的或未饱和的。当是未饱和的时，烃类残基在其碳链中可 能包括双键或三键。一个未饱和的烃类残基可能进一步包括芳基。

如此处使用的，“芳基”基团指的是所有的碳的单环或稠环(即共 享一对邻近的碳原子的环系)的含有与π电子系统完全共轭的多环基 团。芳基的实例包括，不限于，苯基、萘基和蒽基。

烃类残基能进一步地被取代或不被取代。当被取代时，取代基可 能是，例如，烷基、环烷基、芳基、杂芳基、杂脂环基、羟基、烷氧 基、芳氧基、氰基、卤素、氧基、酰氨基和氨基。

“杂芳基”基团指的是在环中含一个或多个原子的单环或稠环(即 共享一对邻近的碳原子的环系)，如，例如，氮、氧和硫且，另外， 含有与π电子系统完全共轭的环。杂芳基的实例包括，不限于，吡咯、 呋喃、噻吩、咪唑、唑、噻唑、吡唑、吡啶、嘧啶、喹啉、异喹啉 和嘌呤。杂环基可以被取代或不被取代。当被取代时，取代基可能是， 例如，烷基、环烷基、羟基、烷氧基、芳氧基、氰基、卤素、氧基、 酰氨基和氨基。

“杂脂肪族”基团指的是在环中含有一个或多个原子的单环或稠 环，如氮、氧和硫。环也可以含有一个或多个双键。然而，环不含完 全共轭的π电子系统。杂脂肪族基可以被取代或不被取代。当被取代 时，取代基可能是，例如，烷基、环烷基、芳基、杂芳基、卤素、三 卤代甲基、羟基、烷氧基、芳氧基、氰基、氧基、酰氨基和氨基。

“羟基”基团指的是一个-OH基。

如此处所确定的，“烷氧基”基团指的是-O-烷基和-O-环烷基基团。

如此处所确定的，“芳氧基”基团指的是-O-芳基和-O-杂芳基基团。

“氧基”基团指的是-C(＝O)-R′基团，其R′可能是，例如烷基、环 烷基或芳基。

“卤素”基团指的是氟、氯、溴或碘。

“三卤代甲基”基团指的是-CX3-基团，其中X是如此处所确定的 卤素基团。

“氨基”或“氨基”基团指的是-NH2基团。

“酰氨基”或“氨基”基团指的是-C(＝O)-NRaRb基团，其中Ra和Rb 可能是，例如氢、烷基、环烷基和芳基。

根据本发明，烃类残基在其链中能进一步地包括一个或多个散在 的杂原子。杂原子可能是，例如，氧、氮和/或硫。

烃类残基能进一步地是有通式-Z-C(＝O)O-CHR2-R3的残基，其Z 可能是，例如，单键或被取代的或未为取代的如上文所述的烃类残基； R2可能是，例如氢或含1-10个碳原子的烷基残基；R3可能是，例如， 氢或如上文所述的烃类残基。

因此，根据本发明可能被衍生化而来的有机酸的有代表性的实例 包括草酸、丙二酸、琥珀酸、戊二酸、马来酸、富马酸、邻苯二甲酸、 间苯二甲酸、对苯二甲酸、丁酸、4-苯基丁酸、4-氨基丁酸(GABA)、 戊酸、丙酸、维甲酸、乙酰水杨酸和布洛芬。

根据本发明目前最优选的实施方案，化学共轭体的第二化学部分 是GABA激动剂残基。

如此处使用的，短语“GABA激动剂残基”指的是如上文所确定的 该术语GABA激动剂残基，而术语“GABA激动剂”描述的化合物是 能激活脑内GABA系统，且是与GABA药理学相关的。因此，可以 理解，术语“GABA激动剂”包括GABA本身，而术语“GABA激动剂 残基”包括GABA激动剂本身的残基。

因此，根据本发明，GABA激动剂残基除GABA(γ-氨基丁酸) 残基本身外，包括其它能与精神药物共价耦合的GABA激动剂的残 基。

这类GABA激动剂残基的实例包括(±)-巴氯芬残基、4-哌啶甲酸、 γ-羟基丁酸残基、氨基羟乙酸残基、β-(4-氯苯基)-γ-氨基丁酸残基、哌 啶-4-磺酸残基、3-氨基丙基亚膦酸残基、3-氨基丙基次膦酸残基、3-(氨 基丙基)甲基次膦酸残基、1-(氨基甲基)环己烷基乙酸残基(加巴喷丁)、 4-氨基-5-己烯酸(γ-乙烯基GABA，氨己烯酸)和3-(2-咪唑基)-4-氨 基丁酸残基。

根据本发明另一个目前优选的实施方案，在本发明的化学共轭体 中的第二化学部分是抗增殖剂残基。

如此处使用的，术语“抗增殖剂残基”指的是如此处所确定的，以 抗增殖活性为特征的化合物的残基。

根据本发明的优选实施方案，抗增殖剂是丁酸或4-苯基丁酸。众 所周知，这些化合物发挥抗癌活性，且进一步地特征为作为GABA是 其衍生物的化合物，并且可以进一步地充当拟GABA药物。

根据本发明的另一个优选实施方案，在本发明的化学共轭体中的 第二化学部分是止痛剂。

在本发明的化学共轭体中结合镇痛药也可提供双重药理学活性， 即促精神活性和缓解疼痛。而且，目前已知的镇痛药通常有许多缺点 如差的药物动力学和不良副作用，例如显著的惊厥作用，通常与其全 身给药有关。因此，镇痛药和精神药物共轭能改善其药物动力学，并 减少这些副作用。并且，在本领域内很容易接受，一些镇痛药与GABA 活性有关。

在本发明的上下文中适用的镇痛药的有代表性的实例包括，不限 于，非甾体类抗炎药(NSAIDs)如阿司匹林、布洛芬、fenprofen、 吲哚美辛、萘普生、双氯芬酸、二氟尼柳、舒林酸和任意的其它有游 离羧酸基团或羧酸诱导剂的NSAID。适宜的镇痛药的另外的实例包括 其它含有这类游离羧酸基团或羧酸诱导剂的非麻醉的镇痛药。

因而，本发明的化学共轭体的第二化学部分包括有机酸残基，优 选GABA激动剂残基、止痛剂残基和/或抗增殖剂残基，这些术语如 上文所确定和例证的。

本发明的化学共轭体中的第二化学部分优选通过酯键与第一化学 部分共价连接。酯键可能是羧酸酯键、氧基烷基羧酸酯键、酰胺键或 硫酯键。

如此处使用的，短语“羧酸酯键”包括“-O-C(＝O)-”键。

如此处使用的，短语“氧基烷基羧酸酯键”包括“O-R-O-C(＝O)-” 键，其中R是烷基，如上文所确定的。优选地，R是甲基。

短语“酰胺键”包括“-NH-C(＝O)-”键。

短语“硫酯键”包括“-SH-C(＝O)-”键。

众所周知，这些酯键通过脑衍生化酶能被水解，如酯酶和酰胺酶， 本发明的化学共轭体充当在脑内代谢的前体药物，并且同时释放精神 药物和有机酸，因此提供了精神药物和有机酸的有益的协同药物动力 学，这已假设并被此处所述的实验结果证明(见，例如图5a-b)。

上述方法是非常有益的因为它提供了(i)精神药物和有机酸同时 作用，协同地导致降低由药物引起的副作用并导致两部分的双重活 性；(ii)前体药物对多巴胺能受体的较高的亲和力，这导致对脑增殖 性疾病的协同地较高的促精神活性和协同地较高的抗增殖活性；以及 (iii)改善两个化学部分的脑透过性。

或者，本发明的化学共轭体中的第二化学部分通过亚胺键与第一 化学部分共价连接。

如此处使用的，术语“亚胺键”是-C＝NH-键。亚胺键在本领域内 也称为“席夫碱”。

另一方面，本发明进一步提供了一种合成上文所述的化学共轭体 的方法。通常，上述方法通过有机酸和精神药物发生反应来完成，以 便获得与精神药物残基共价连接的有机酸的残基。

在此处，术语“有机酸的残基”和“精神药物的残基”分别与术语“有 机酸残基”和“精神药物残基”是相等的，这些术语如上文所确定的。 对于熟练的技工，很明显，通过有机酸和精神药物发生反应于其间形 成共价连接，生成包括有机酸和精神药物残基的终产物。

因此，根据本发明的这一方面的该方法反应的有机酸包括符合上 文所述有机酸残基的任意一个化合物，并且因此能包括所有来自上文 所述有机酸残基的有机酸。

例如，本发明这一方面的上下文中可用的有机酸包括符合上文所 述的优选的GABA激动剂残基的GABA激动剂。相似地，有机酸可 能包括抗增殖剂，如丁酸和4-苯基丁酸，上述化合物都符合上文所述 的抗增殖剂残基。

在同样的方法中，根据本发明的这一方面的方法中发生反应的精 神药物符合上文所述的任意一个精神药物残基。

为与使用的有机酸类型和/或有机酸残基和精神药物残基之间共价 键的类型一致，上文所述的合成本发明的化学共轭体的方法可被进一 步地处理。

如上文所详细讨论的那样，根据本发明的优选的有机酸包括，例 如，抗增殖剂如丁酸和其衍生物，含通式R-C(＝O)-OH的有机酸(符 合有机酸残基R-(C＝O)-O)和其它。这些优选的有机酸多数不包括游 离氨基基团且因此能用于本发明的合成中而无需进一步处理。

如上文所进一步讨论的那样，本发明的化学共轭体中，有机酸残 基和精神药物残基通过可能是羧酸酯键、烷氧基羧酸酯键、硫酯键、 亚胺键或酰胺键的一个键共价连接，这些术语如上文所确定的。

如果残基通过羧酸酯键共价连接，合成本发明的化学共轭体的方 法优选通过首先将有机酸转化为其相应的酰基氯衍生物，或任意一个 其它的酰卤衍生物来完成，以便活化有机酸。此后，在众所周知的亲 核加成反应中，酰基氯衍生物与通常包括游离羟基基团的精神药物反 应，以便获得预期的含通过羧酸酯键与精神药物共价连接的有机酸残 基的化学共轭体。该反应优选在碱性条件下进行，以便活化精神药物 和/或中和以其盐酸盐存在的化合物。然而，有机酸和/或精神药物可 能通过任何其它的已知的方法被活化。

如果残基通过硫酯键共价连接，合成本发明的化学共轭体的方法 优选通过将精神药物转化为其相应的巯基衍生物并将有机酸转化为其 相应的酰基氯衍生物，或转化为其任何其它的活化衍生物来完成。此 后，巯基衍生物通过众所周知的方法与活化的有机酸反应，以便获得 预期的含通过硫酯键与精神药物残基共价连接的有机酸残基的化学共 轭体。应该指出，目前已知的一些精神药物包括游离的巯基基团，并 且因此这些药物能直接与有机酸的酰基氯衍生物发生反应。为获得其 巯基衍生物，通过本领域众所周知的方法，不包含游离巯基基团的精 神药物很容易发生反应。

如果残基通过酰胺键共价连接，合成本发明的化学共轭体的方法 优选首先通过将有机酸转化为其相应的酰基氯化合物，以便活化有机 酸，并进一步通过将精神药物转化为其胺类衍生物来完成。此后，在 众所周知的亲核加成反应中或通过任何其它已知的生产酰胺键的方 法，酰基氯衍生物与精神药物的氨基基团反应，以便获得预期的含通 过酰胺键与精神药物残基共价连接的有机酸残基的化学共轭体。应该 指出，目前已知的一些精神药物包括游离的酰胺基团，并且因此这些 化合物可能与有机酸的酰基氯衍生物直接反应。为获得其酰胺衍生 物，通过本领域众所周知的方法，不包含游离酰胺基团的精神药物很 容易发生反应。

如果残基通过亚胺键共价连接，合成本发明的化学共轭体的方法 优选首先通过将有机酸转化为其相应的醛类衍生物，以便活化有机 酸，并进一步通过将精神药物转化为其胺类衍生物来完成。此后，在 众所周知的亲核加成反应中或通过任何其它已知的生产亚胺键的方 法，醛衍生物与精神药物的氨基基团反应，以便获得预期的含通过亚 胺键与精神药物残基共价连接的有机酸残基的化学共轭体。应该指 出，目前已知的一些精神药物包括游离的酰胺基团，并且因此这些化 合物可能与有机酸的醛衍生物直接反应。为获得其酰胺衍生物，通过 本领域众所周知的方法，不包含游离酰胺基团的精神药物很容易发生 反应。

如果残基通过烷氧基羧酸酯键共价连接，合成本发明的化学共轭 体的方法优选通过将精神药物转化为其氯代烷基酯类衍生物来完成， 优选其氯甲基酯衍生物。此后，在众所周知的亲核加成反应中或通过 任何其它已知的生产烷氧基羧酸酯键的方法，氯甲基酯衍生物与有机 酸反应，以便获得预期的含通过烷氧基羧酸酯键与精神药物残基共价 连接的有机酸残基的化学共轭体。应该指出，如果精神药物包括游离 羧酸基团，有机酸和精神药物通过烷氧基羧酸酯键的共价连接为特别 优选，因为这样避免了通常不稳定的酐类共轭体的形式。

当有机酸不含游离氨基基团时，上述方法通常是有效的。然而， 如果有机酸包含游离氨基基团，例如，以GABA激动剂为例，在所述 的与精神药物反应的过程中氨基基团应被保护。保护游离氨基基团是 必需的，因为它是相对的化学活性基团，所以在反应中不希望加入此 基团。

因此，合成包括含有游离氨基基团的GABA激动剂残基的化学共 轭体的优选方法优选首先通过保护游离氨基基团来完成。保护该氨基 基团通过有机酸和已知的保护基团进行，保护基团如，但不限于，叔 丁氧基羰基(Boc)和苄氧羰基(Cbz)。然后，氨基被保护的有机酸 与抗精神病药物反应，以便获得与精神药物共价连接的氨基被保护的 有机酸残基。然后除去保护基团。进一步优选地，将氨基被保护的有 机酸转化为其酰基咪唑衍生物，以便在与精神药物反应之前活化有机 酸。

进一步地，根据本发明，有提供的药物组合物，包括作为活性成 分的本发明的化学共轭体。

如此处使用的，“药物组合物”指的是用其它的化学组分如药学上 适宜的载体和赋形剂制备在此处描述的的一个或多个化学共轭体。药 物组合物的目的是为了使化合物容易给予受试者。

在下文中，术语“可药用载体”指的是对受试者不引起明显明显刺 激作用的载体或稀释剂，以及不取消给予的化合物的生物活性和性质 的载体或稀释剂。载体的实例是，不限于，丙二醇、盐水、乳状液和 有机酸与水的混合物。

在此处的术语“赋形剂”指的是加入药物组合中以进一步方便给予 化合物的惰性物质。赋形剂的实例包括，不限于碳酸钙、磷酸钙、各 种糖和各种类型的淀粉、纤维素衍生物、明胶、植物油和聚乙二醇。

根据本发明优选的实施方案，药学载体是乳酸水溶液。

在这方面，应该指出根据优选的实施方案，本发明的一些化学共 轭体很容易溶于水性介质中，因此很容易制备。这种方便的制剂提供 了根据本发明的化学共轭体附加的优于已知的抗精神药物的酯类共轭 体的优点，该精神药物通常包括长链脂肪酸，因此在水性介质中不溶 并以油性制剂给药。

制剂技术和药物给予可以在最新一版的“Remington′s Pharmaceutical Sciences”Mack Publishing Co.，Easton，PA中找到， 上述刊物在此引入作为参考。

适宜的给药途径包括，例如口服、直肠、经粘膜、经皮肤、肠内 或胃肠外给予，胃肠外给予包括肌内、皮下和髓内注射以及鞘内、直 接心室内、静脉、腹膜内、鼻内或眼内注射。本发明的药物组合物可 以通过本领域内众所周知的方法制备，例如通过常规的混合、溶解、 制粒、压片、研磨、乳化、装胶囊、陷入或冻干的方法。

因此，与本发明一致，使用的药物组合物可以在常规的方法中使 用一种或多种可药用载体制备，此载体包含赋形剂和辅助剂，这便于 将活性成分制成可药用的制剂。适宜的制剂取决于所选择的给药途 径。

对于注射，本发明的化学共轭体可以在水溶液中制备，优选在生 理学的可配伍的缓冲液中，如汉克斯氏液、林格氏溶液或含或不含有 机溶剂如丙二醇、聚乙二醇的生理盐水缓冲液。对于经粘膜给药，在 制剂中使用渗透剂。这些渗透剂通常是本领域内众所周知的。

对于口服给药，化学共轭体通过活性成分和本领域内众所周知的 可药用载体结合很容易制备。这些载体使本发明的共轭体形成片剂、 丸剂、锭剂、胶囊剂、液体剂、凝胶剂、糖浆剂、膏剂、混悬液等用 于患者口服法。口服的药理学制剂可通过固体赋形剂制备，任选将得 到的混合物研碎，并加工细粒混合物，必要时加入适宜的辅助剂后， 以获得片剂或锭剂核。适宜的赋形剂尤其是填充剂，如糖类包括乳糖、 蔗糖、甘露醇或山梨醇；纤维素制品如玉米淀粉、小麦淀粉、米淀粉、 马铃薯淀粉、明胶、西黄蓍胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧 甲基纤维素钠和/或生理学上可接受的聚合物如聚乙烯吡咯烷酮 (PVP)。如果需要，可以加入崩解剂，如交联聚乙烯吡咯烷酮、琼 脂或海藻酸或其盐如海藻酸钠。

锭剂核用适宜的包衣处理。为了这一目的，可以使用浓缩的糖溶 液，此溶液任选包含阿拉伯胶、滑石粉、聚乙烯吡咯烷酮、聚羧乙酸 凝胶、聚乙二醇、二氧化钛、漆溶液和适宜的有机溶剂或溶剂混合物。 为识别或表现不同的活性化合物剂量组合的特征，染料或色素可被加 入片剂或锭剂核包衣剂中。

可用于口服的药物组合物包括由明胶制成的推入配合(push-fit)胶 囊，以及由明胶和增塑剂如甘油、山梨醇制成的柔软、密封胶囊。推 入配合胶囊可以含有与下列赋形剂一起混合的活性成分：填充剂如乳 糖、粘合剂如淀粉、润滑剂如滑石粉或硬脂酸镁，以及，任选的稳定 剂。在软胶囊中，活性化合物可以溶解于或悬浮于适宜的液体中，如 脂肪油、液体石蜡或液状聚乙二醇。另外，可以加入稳定剂。口服给 药的所有剂型在剂量上应适于选择的给药途径。

对于口腔含化给药，组合物可以采用由常规方法制备的片剂或锭 剂形式。

对于通过吸入给药，根据本发明使用的化学共轭体在喷雾剂中方 便释放，加压包装或使用适宜推进剂的喷雾器，例如氟利昂、三氯氟 甲烷、二氯-四氟乙烷或二氧化碳。就加压气溶胶而言，剂量单位可以 由提供的阀确定以按计量释放药物。胶囊和药筒，例如在吸入剂或吹 入剂使用的明胶，可以通过含有化合物的粉末混合物和适宜的粉末基 质如乳糖或淀粉来制造。

此处所述的化学共轭体可以配制成用于胃肠外给药，例如通过推 注注射或连续输注。用于注射的剂型可以单位剂量形式存在，例如在 安瓿中或在任选的加入防腐剂的多剂量容器中。组合物可以是混悬 液、溶液或在油性或水性载体中的乳状液，且可以含有配方剂如混悬 剂、稳定剂和/或分散剂。

胃肠外给药的药物组合物包括在水溶液形式中的活性化合物的水 性溶液。另外，活性化合物的混悬液可被制成适宜的油性注射混悬液。 适宜的亲脂溶剂或赋形剂包括脂肪油如麻油，或合成的脂肪酸酯如油 酸乙酯、甘油三酯或脂质体。水性注射混悬液含有增加混悬液粘性的 物质，如羧甲基纤维素钠、山梨醇或葡聚糖。任选地，混悬液也可以 含有适宜的稳定剂或增加共轭体溶解性的因子以允许制备高浓度的溶 液。

另外，活性成分可以在粉末剂中，使用前与适宜的赋形剂形成， 如无菌无热源的水。

使用例如常规的栓剂基质如可可脂或其它的甘油酯，本发明的化 学共轭体也可以制成在直肠的组合物中，如栓剂或保留灌肠剂。

此处所述的药物组合物也可以包含适宜的凝胶相载体或赋形剂的 固体。这些载体或赋形剂的实例包括，但不限于，碳酸钙、磷酸钙、 各种糖、淀粉、纤维素衍生物、明胶和聚合物如聚乙二醇。

在本发明的上下文中适于使用的药物组合物包括其中活性组分以 有效量被包含的组合物，以获得预期的目的。更具体地，治疗有效量 意味着有效预防、减轻或改善疾病症状或延长被治疗的受试者的存活 期的化学共轭体的量。

治疗有效量的测定在本领域的技术人员的能力之内，尤其是按照 在此处提供的详细公开内容。

对于在本发明的方法中使用的任何一个化学共轭体，在细胞培养 和/或动物中通过活性测定，治疗有效量或剂量可能被初步评估。例如， 在动物模型中通过活性测定方法(例如，待测化合物的浓度，得到增 殖活性抑制作用最大值的一半)，剂量可能被测定以得到包括IC50的 循环浓度范围。这些信息可用于更精确地测定在人类中的有用剂量。

此处所述的化学共轭体的毒性作用和治疗效果可能通过标准药学 方法在实验动物中测定，例如通过测定待测化合物的IC50和LD50(在 50％受试动物中引起死亡的致死剂量)。得自这些活性测定方法和动 物研究中的数据可能被用于形成在人类中使用剂量的范围。

剂量可以依赖使用的剂型和采用的给药途径而变化。确切的剂 型、给药途径和剂量可由个人的医生视患者情况选择。(见举例， Fingl，et al.，1975，in″The Pharma cological Basis of Therapeutics″， Ch.1p.l)。

剂量和间隔可以个别的调整以提供足以维持促精神和/或抗增殖作 用的活性部分的血浆水平，达到最低有效浓度(MEC)。对于每一个 制剂MEC会变化，但可能从体外和体内的数据评估，例如必需达到 50-90％抑制某些细胞的增殖的浓度可以使用在此所述的测定方法确 定。必需达到MEC的剂量依赖个体特征和给药途径。HPLC测试或 生物检定可用于测定血浆浓度。

剂量间隔也能使用MEC值测定。使用一种服用方法给予药剂， 使在10-90％的时间内维持血药浓度高于MEC，优选为30-90％，且 最优选50-90％。

根据被治疗状况的严重性和应答性，剂量也可以一次给予此前所 述的缓释组合物，疗程持续数天至数周或直至治愈或达到减轻疾病状 态。

当然，给予的组合物的量依赖于被治疗的受试者、病痛的严重程 度、给药方法、处方医生的判断，等等。

如果需要，本发明的组合物可以存在于包装或分配装置中，如FDA 批准的试剂盒，其可以包含一个或多个含有活性组分的单位剂量剂 型。例如，包装可以包含金属或塑料箔，如泡罩包装。包装或分配装 置可以带有给药的说明。包装或分配装置也可以带有与容器相关的通 告，以处方的形式由政府机构规定制剂的制造、使用或销售，该通告 由组合物剂型或人用药或兽用药的机构批准反应。例如，这些通告可 以是由美国食品药品管理局批准用于处方药的加签，或是批准的产品 单页。也可以制成包括本发明所述的化学共轭体与适宜的药用载体的 组合物，装入合适的容器中，并标明用于治疗所指病情。标记于标签 上的适宜病情可以包括，例如，精神疾病或障碍如精神分裂症、妄想 症、儿童精神病、杭延顿氏舞蹈病、吉累斯·德拉图雷特氏综合征、抑 郁、躁狂性抑郁、焦虑、帕金森氏症、阿耳茨海默氏症和癫痫；脑增 殖紊乱和MDR癌症，以及化学致敏作用，这些术语如上文所确定的。

因此，根据本发明优选的实施方案，该药物组合物被包装在包装 材料中，并通过包装材料上或内的印刷辨别，一个或多个下列用途： 用于治疗CNS紊乱或疾病，用于治疗脑或外周增殖紊乱或疾病，用 于治疗癌症如MDR癌症以及用于化学致敏作用，与化疗药物联用和/ 或在化学致敏作用是有益的医疗条件中。

进一步地根据本发明，提供了一种在受试者(例如，人类)中治 疗或预防CNS紊乱或疾病的方法。该方法通过给予被治疗者治疗有 效量的一个或多个本发明的化学共轭体来起作用。

如此处使用的，术语“方法”指的是为完成给予的任务的方式、手 段、技术和操作，包括，但不限于，那些已知的方式、手段、技术和 操作，或由化学的、药理学的、生物学的、生物化学的和医学领域内 的实验者很容易从已知的方式、手段、技术和操作发展而来的方式、 手段、技术和操作。

在此处，术语“治疗”包括消除、基本上抑制、延缓或逆转疾病的 进程，基本上改善疾病的临床症状或基本上阻止疾病的临床症状的出 现。

如此处使用的，短语“CNS紊乱或疾病”指的是以中枢神经系统 (CNS)中的损伤(例如神经学上的)为特征的紊乱或疾病。使用本 发明的化学共轭体可治疗的CNS紊乱或疾病的实例包括，不限于， 精神障碍或疾病、焦虑症、分离性障碍、人格障碍、心境障碍、情感 障碍、神经变性疾病或紊乱、惊厥性疾患、boarder line障碍和精神 疾病或障碍。

这些CNS紊乱或疾病的有代表性的实例包括，不限于，精神分 裂症、妄想症、儿童精神病、杭延顿氏舞蹈病、吉累斯·德拉图雷特氏 综合征、抑郁、躁狂性抑郁、焦虑、帕金森氏症、阿耳茨海默氏症和 癫痫。

如此处使用的，术语“给药”指的是一种将本发明的化学共轭体带 到受累于精神紊乱或疾病的脑内的一个区域或面积的方法。

本发明的化学共轭体可能经腹膜内给药。更优选地，是经口服给 药。

术语“受试者”指的是动物，通常是有血脑屏障的哺乳动物，包括 人类。

术语“治疗有效量”指的是被给予的将在某种程度上缓解一种或多 种被治疗的CNS紊乱或疾病症状的化学共轭体的量，

根据本发明的所述方法，治疗有效量优选范围为0.5mg/kg体重- 50mg/kg体重，更优选0.5mg/kg体重-30mg/kg体重，更优选0.5mg/kg 体重-20mg/kg体重，以及最优选1mg/kg体重-10mg/kg体重。

因此，本发明是指向发挥促精神活性的化学共轭体。本发明的化 学共轭体是非常有益的因为它们发挥提高的治疗活性且进一步地以将 引起的不良副作用降到最低为特征。

如此处使用的，短语“副作用”指的是作为给予受试者某一药物且 尤其是精神药物的结果而发生的有害的症状。

此处使用的短语“增强治疗活性”指本发明共轭体的促精神活性或 抗增殖活性，如这些短语在此所确定的，上述活性高于来自共轭体的 精神药物和/或有机酸本身给药时的活性。如在下面的实施例部分中证 明的一样，通常这种增强的治疗活性特征为与非共轭的精神药物和/或 有机酸的有效浓度相比，减少要求的药物的有效浓度以达到某种治疗 活性。

此处使用的短语“增强治疗活性”进一步描述了由本发明的共轭体 发挥的促精神活性和/或抗增殖活性，上述活性伴发了另外的治疗活性 以及额外的治疗值如，例如，增加GABA活性、缓解疼痛等。没有必 然的任何详细的理论，假设本发明的化学共轭体的增强治疗活性，至 少部分地，导致改善脑内的神经递质平衡。

此处使用的短语“促精神活性”描述了在CNS中发挥的药理学活 性，该活性的目标在于治疗CNS相关的损伤。这一药理学活性通常 包括调节神经信号传导。

根据本发明进一步地提供了一种在受试者(例如，人类)中治疗 或预防增殖紊乱或疾病的方法。该方法通过给予被治疗的受试者治疗 有效量的一个或多个本发明的化学共轭体来起作用。

如此处使用的，术语“增殖紊乱或疾病”指的是以细胞增殖为特征 的紊乱或疾病。通过本发明可以预防和治疗的细胞增殖状态包括，例 如恶性肿瘤如癌症和良性肿瘤。

如此处使用的，术语“癌症”指的是各种类型的恶性肿瘤，多数恶 性肿瘤可能侵入周围组织，且可以转移至不同的位置，如Stedman′s medical Dictionary第25版(Hensyl ed.，1990)所确定的。可以通过本 发明的化学共轭体治疗的癌症的实例包括，但不限于，脑和皮肤癌症。 这些癌症可能被进一步破坏。例如，脑部癌症包括多形性恶性胶质瘤、 多形性成胶质细胞瘤、星形细胞瘤、ependyoma、间胶质瘤、成神经 管细胞瘤、硬脑脊膜肉瘤、肉瘤、成血管细胞瘤和松果状的实质。同 样地，皮肤癌症包括黑色素瘤和卡波西氏肉瘤。使用本发明的化学共 轭体可治疗的其它癌性疾病包括绒毛状瘤、胚神经胶质瘤、卵巢癌、 前列腺癌、鳞状上皮细胞癌、星形细胞瘤、头部癌症、颈癌、膀胱癌、 乳腺癌、肺癌、结肠直肠癌、甲状腺癌、胰腺癌、胃癌、肝细胞癌、 白血病、淋巴瘤、何杰金氏淋巴瘤和伯基特氏瘤。

其它的，非癌性增殖紊乱使用本发明的化学共轭体也是可以治疗 的。这些非癌性增殖紊乱包括，例如，狭窄、再狭窄、支架内狭窄、 血管移植再狭窄、关节炎、类风湿性关节炎、糖尿病性视网膜病、血 管发生、肺纤维化、肝硬化、动脉粥样硬化、肾小球肾炎、糖尿病性 肾病变、血栓形成性微血管病综合症和移植排斥。

如在下面的实施例部分中证明的一样，本发明的化学共轭体在各 种癌细胞包括MDR癌细胞中发挥高的和有效的抗增殖活性。

如在下面的实施例部分中进一步证明的一样，本发明的化学共轭 体当与各种化疗药物联用时进一步发挥化学致敏活性。

因此，进一步地根据本发明，提供了一种化学致敏作用的方法， 该术语如上文所确定的。所述的方法通过给予受试者治疗有效量的一 个或多和化疗药物和化学致敏的有效量的本发明的化学共轭体来起作 用。

如此处使用的，短语“化学致敏的有效量”描述了在治疗量的化疗 药物存在下足以测定的化学致敏作用的量。

在受试者患有MDR癌症时所述的方法特别有用，例如，但不限 于，白血病、淋巴瘤、癌瘤或肉瘤。根据本发明，化学药物可以是， 例如，如下的一个：烷化剂如氮芥、次乙亚胺、甲基蜜胺、烷基磺酸 盐、亚硝基脲和三氮烯；抗代谢药如叶酸类似物、嘧啶类似物和嘌呤 类似物；天然产物如长春花生物碱、鬼臼乙叉甙、抗菌素、酶、紫杉 烷和生物学应答调节物；复杂药物如铂配位络合物、蒽二酮、蒽环类 抗生素、取代的尿素、甲肼衍生物或肾上腺皮质抑制剂；或激素或拮 抗剂如肾上腺皮质类固醇、黄体激素、雌激素、抗雌激素物质、雄激 素、抗雄激素物质或绒促性素释放激素类似物。优选地，化疗药物是 氮芥、鬼臼乙叉甙、抗菌素或铂配位络合物。更优选化疗药物是顺铂 或长春新碱。

因此，本发明提供了精神药物的新型化学共轭体，该共轭体发挥 比对应的非共轭精神药物高的促精神活性，基本上低的副作用和低的 毒性。这些新型的共轭体进一步发挥抗增殖活性和化学致敏作用活 性，且因此可能有利地作为前体药物用于治疗增殖紊乱或作为化学致 敏剂与化疗药物联合使用。前体药物的特征为减少副作用、低毒性和 对脑细胞的高亲和力。

对于本领域内普通的技术人员，通过以下实施例的实验，本发明 另外的目的、优点和新特征将变得明显。实施例的目的不在于限制。 另外，本发明的如上文所述的和在下文权利要求部分中所要求的每一 个不同的实施方案和方面都在下面的实施例中找到实验支持。

实施例

参考下面的实施例，实施例和上面的说明一起以非限制的方式举 例说明本发明。

化学合成和分析

本发明的范例化学共轭体通过精神药物奋乃静、氟奋乃静和丙戊 酸与短链脂肪酸丙酸、丁酸和戊酸和/或与4-苯基丁酸和γ-氨基丁酸 (GABA)反应来合成。制备高产率化合物，并以结晶固体分离化合 物，溶于1％乳酸水溶液中。

由奋乃静或氟奋乃静和有机酸制备的化学共轭体的合成——一般 方法：精神抑制剂奋乃静或氟奋乃静(1当量)、短链脂肪酸的酰基氯 衍生物(1.1当量)和任选Et3N(2当量)(常用其盐酸盐作为自由起 始原料)在5-10ml二甲基甲酰胺(DMF)中的混合物在氮气下于室 温搅拌24小时。然后将混合物在乙酸乙酯和水中分配。此后用5％ NaHCO3和盐水洗有机层，用MgSO4干燥，过滤并蒸发以得到预期的 产物。

奋乃静4-苯基丁酯(AN130)的合成：奋乃静和4-苯基丁酰氯(4- 苯基丁酸的酰基氯化物)如上所述反应。得到的粗制残余物用硅胶色 谱法纯化，使用1∶10甲醇∶乙酸乙酯混合物作为洗脱液。得到的产物 为黄色油状物(产率78％)。

1H-NMR(CDCl3)：δ＝1.94(quint，J＝6Hz，4H，CO2CH2CH2， ArNCH2CH2)，2.32(t，J＝6Hz，2H，CO2CH2)，2.64(m，12H，6 个NCH2)，3.93(t，J＝5.6Hz，2H，ArNCH2)，4.17(t，J＝5.3Hz，2H， NCH2CH2O)，6.82-7.30(m，12H，Ar，Ph)ppm。

13C-NMR(CDCl3)：δ＝23.25(CH2CH2CO2)，26.46(ArNCH2CH2)， 33.56(CH2Ph)，35.06(CH2CO2)，45.10(ArNCH2)，52.23(2个NCH2)， 52.72(2个NCH2)，55.25(ArNCH2CH2CH2)，57.04(NCH2CH2O)，61.32 (NCH2CH2O)，116.00(C1，C10)，122.51(C3)，123.15(C8)，123.86 (CH2C(CH)2)，125.13(C2)，126.02(p-Ph)，127.56(C9)，127.63(C7)， 128.01(o-Ph)，128.41(m-Ph)，128.49(C4)，173.33(CO2)ppm。

MS(CI，i-Bu)：m/z(％)＝550(MH+，1.7)。

奋乃静丁酯(AN167)的合成：奋乃静和丁酰氯(丁酸的酰基氯 化物)如上所述反应。得到的产物为黄色油状物(产率74％)且不经 进一步纯化即使用。

1H-NMR(CDCl3)：δ＝0.93(t，J＝7.36Hz，3H，Me)，1.63(sext， J＝7.44Hz，2H，CH2Me)，1.95(quint，J＝6.7Hz，2H，ArNCH2CH2)， 2.27(t，J＝7.46Hz，2H，CO2CH2)，2.43(m，10H，5个NCH2)，2.57 (t，J＝5.96Hz，2H，NCH2CH2O)，3.66(t，J＝5.96Hz，2H，ArNCH2)， 4.18(t，J＝5.9Hz，2H，NCH2CH2O)，6.66(m，7H，Ar)ppm。

13C-NMR(CDCl3)：δ＝13.54(CH3CH2)，18.29(MeCH2)，24.06 (ArNCH2CH2)，36.03(CH2CO2)，45.15(ArNCH2)，53.09(2个NCH2)， 53.23(2个NCH2)，55.30(ArNCH2CH2CH2)，56.51(NCH2CH2O)，61.48 (NCH2CH2O)，115.64(C1，C10)，122.02(C3)，122.69(C8)，123.27(C5)， 124.52(C6)，127.23(C7)，127.29(C9)，127.68(C4)，133.00(C2)，144.32 (C12)，146.29(C11)，173.37(CO2)ppm。

MS(CI，NH3)：m/z(％)＝473(M+，100)，474(MH+，82.64)。

奋乃静丙酯(AN177 )的合成：奋乃静和丙酰氯(丙酸的酰基氯 化物)如上所述反应。得到的产物为黄色油状物(产率85％)且不经 进一步纯化即使用。

1H-NMR(CDCl3)：δ＝1.12(t，J＝7.53Hz，3H，Me)，1.95(quint， J＝6.8Hz，2H，ArNCH2CH2)，2.32(q，J＝7.57Hz，2H，CO2CH2)， 2.51(m，10H，5个NCH2)，2.61(t，J＝5.95Hz，2H，NCH2CH2O)， 3.89(t，J＝6.8Hz，2H，ArNCH2)，4.16(t，J＝9.92Hz，2H，NCH2CH2O)， 6.98(m，7H，Ar)ppm。

13C-NMR(CDCl3)：δ＝9.01(CH3)，24.08(ArNCH2CH2)，27.44 (CH2CO2)，45.18(ArNCH2)，53.09(2个NCH2)，53.26(2个NCH2)， 55.32(ArNCH2CH2CH2)，56.50(NCH2CH2O)，61.63(NCH2CH2O)， 115.67(C1，C10)，122.05(C3)，122.72(C8)，123.30(C5)，124.56(C6)， 127.26(C7)，127.33(C9)，127.71(C4)，133.03(C2)，144.35(C12)，146.32 (C11)，174.24(CO2)ppm。

MS(CI，NH3)：m/z(％)＝459(MH+，100)，458(M，47.63)。

奋乃静戊酯(AN178)的合成：奋乃静和戊酰氯(戊酸的酰基氯 化物)如上所述反应。得到的粗制残余物用硅胶色谱法纯化，使用7∶4 乙酸乙酯∶己烷混合物作为洗脱液。得到的产物为淡黄色油状物(产率 75％)。

1H-NMR(CDCl3)：δ＝0.86(t，J＝7.23Hz，3H，Me)，1.29(sext， J＝6.97Hz，2H，CH2Me)，1.56(quint，J＝7.09Hz，2H，CH2CH2CO2)， 1.87(quint，J＝6.79Hz，2H，ArNCH2CH2)，2.26(t，J-7.64Hz，2H， CH2CO2)，2.37(m，10H，5个NCH2)，2.54(t，J＝5.93Hz，2H， ArNCH2)，4.14(t，J＝5.95Hz，2H，NCH2CH2O)，6.53-7.14(m，7H， Ar)ppm。

13C-NMR(CDCl3)：δ＝13.51(CH3CH2)，22.02(CH2Me)，23.89 (CH2CH2Me)，26.82(ArNCH2CH2)，33.80(CH2CO2)，45.07(ArNCH2)， 53.00(2个NCH2)，53.16(2个NCH2)，55.09(ArNCH2CH2CH2)，56.46 (NCH2CH2O)，61.42(NCH2CH2O)，111.68(q，J＝3.77Hz，C1)，115.73 (C10)，118.74(q，J＝3.77Hz，C3)，122.85(C8)，123.77(C6)，124.02(q， J＝272Hz，CF3)，127.20(C7)，127.29(C9)，127.42(C4)，129.34(q，J＝32 Hz，C2)，129.69(C5)，144.08(C11)，145.51(C12)，173.45(CO2)ppm。

MS(CI/NH3)：m/z(％)＝522(MH+，100)。

氟奋乃静丙酯(AN179)的合成：氟奋乃静和丙酰氯(丙酸的酰 基氯化物)如上所述反应。得到的产物为淡黄色油状物(产率95％) 且不经进一步纯化即使用。

1H-NMR(CDCl3)：δ＝1.12 (t， J＝ 7.55Hz，3H，Me)，1.91(quint， J＝7.18Hz，2H，ArNCH2CH2)，2.32(q，J＝7.56Hz，2H，CO2CH2)， 2.45(m，10H，5个NCH2)，2.59(t，J＝5.92Hz，2H，NCH2CH2O)， 3.93(t，J＝7.12Hz，2H，ArNCH2)，4.17(t，J＝5.95Hz，2H， NCH2CH2O)，6.67-7.14(m，7H，Ar)。

13C-NMR(CDCl3)：δ＝8.91(Me)，23.87(ArNCH2CH2)，27.33 (CH2CO2)，45.05(ArNCH2)，52.98(2个NCH2)，53.17(2个NCH2)， 55.07(ArNCH2CH2CH2)，56.42(NCH2CH2O)，61.54(NCH2CH2O)， 111.65(q，J＝3Hz，C1)，115.71(C10)，118.73(q，J＝3.77Hz，C3)， 122.84(C8)，123.73(C6)，123.99(q，J＝272Hz，CF3)，127.18(C7)， 127.27(C9)，127.41(C4)，129.30(q，J＝32Hz，C2)，129.65(C5)，144.05 (C11)，145.48 (C12)，174.10(CO2)。

MS(CI/NH3)：m/z(％)＝494(MH+，100)。

氟奋乃静丁酯(AN180)的合成：氟奋乃静和丁酰氯如上所述反 应。得到的产物为淡黄色油状物(产率97％)且不经进一步纯化即使 用。

1H-NMR(CDCl3)：δ＝0.93(t，J＝7.4Hz，3H，Me)，1.32(sext， J＝7.4Hz，2H，CH2Me)，1.92(quint，J＝7.18Hz，2H，ArNCH2CH2)， 2.27(t，J＝7.4Hz，2H，CO2CH2)，2.45(m，10H，5个NCH2)，2.58 (t，J＝5.9Hz，2H，NCH2CH2O)，3.93(t，J＝7.2Hz，2H，ArNCH2)， 4.17(t，J＝5.98Hz，2H，NCH2CH2O)，6.67-7.13(m，7H，Ar)ppm。

13C-NMR(CDCl3)：δ＝13.42(CH3CH2)，18.20(MeCH2)，23.85 (ArNCH2CH2)，35.92(CH2CO2)，45.02(ArNCH2)，52.97(2个NCH2)， 53.14(2个NCH2)，55.04(ArNCH2CH2CH2)，56.43(NCH2CH2O)，61.39 (NCH2CH2O)，111.62(q，J＝3Hz，C1)，115.68(C10)，118.68(q，J＝3.77 Hz，C3)，122.80(C8)，123.70(C6)，123.98(q，J＝272Hz，CF3)，127.15 (C7)，127.24(C9)，127.38 (C4)，129.27(q，J＝32Hz，C2)129.62(C5)， 144.03(C11)，145.46(C12)，173.23(CO2)ppm。

MS(CI/CH4)：m/z(％)＝507.18(M+，75.3)，508.18(MH+，57.57)， 419.13(M-C4H8O2，82)。

氟奋乃静戊酯(AN181)的合成：氟奋乃静和戊酰氯(戊酸的酰 基氯化物)如上所述反应。得到的粗制残余物用硅胶色谱法纯化，使 用7∶4乙酸乙酯∶己烷混合物作为洗脱液。得到的产物为淡黄色油状物 (产率75％)。

1H-NMR(CDCl3)：δ＝0.86(t，J＝7.23Hz，3H，Me)，1.29(sext， J＝6.97Hz，2H，CH2Me)，1.56(quint，J＝7.09Hz，2H，CH2CH2CO2)， 1.87(quint，J＝6.79Hz，2H，ArNCH2CH2)，2.26(t，J-7.64Hz，2H， CH2CO2)，2.37(m，10H，5个NCH2)，2.54(t，J＝5.93Hz，2H， ArNCH2)，4.14(t，J＝5.95Hz，2H，NCH2CH2O)，6.53-7.14(m，7H， Ar)。

13C-NMR(CDCl3)：δ＝13.51(Me)，22.02(CH2Me)，23.89 (CH2CH2Me)，26.82(ArNCH2CH2)，33.80(CH2CO2)，45.07(ArNCH2)， 53.00(2个NCH2)，53.16(2个NCH2)，55.09(ArNCH2CH2CH2)，56.46 (NCH2CH2O)，61.42(NCH2CH2O)，111.68(q，J＝3.77Hz，C1)，115.73 (C10)，118.74(q，J＝3.77Hz，C3)，122.85(C8)，123.77(C6)，124.02(q， J＝272Hz，CF3)，127.20(C7)，127.29(C9)，127.42(C4)，129.34(q， J＝32Hz，C2)，129.69(C5)，144.08(C11)，145.51(C12)，173.45(CO2).

MS(CI/NH3)：m/z(％)＝522(MH+，100)。

由奋乃静或氟奋乃静和氨基有机酸制备的化学共轭体的合成—— 一般方法：将N-被保护的氨基酸(1当量)和羰基二咪唑(CDI)(1.1 当量)在5-10ml DMF中的混合物在氮气下搅拌1小时。此后，加入 奋乃静或氟奋乃静(1当量)，且混合物在氮气下于90℃搅拌24小时。 将得到的淤浆蒸发并在乙酸乙酯和水中分配。用乙酸乙酯提取水相两 次，并且合并的有机层用NaHCO3洗三次，用盐水洗两次，用MgSO4 干燥，过滤并蒸发。得到的N-被保护的产物为淡黄色油状物。

N-被保护的基团按照下述方法从产物中除去：将4N HCl乙酸乙 酯溶液逐滴加至N-被保护产物乙酸乙酯溶液中。混合物于室温下搅拌 2小时。此后，将溶剂蒸发，残余物在高真空下进一步干燥。从甲醇/ 醚的混合物中重结晶、过滤并干燥，获到三盐酸盐产物。

奋乃静N-丁氧基羰基-4-氨基丁酯的合成：奋乃静和N-叔丁氧基 羰基-GABA(N-被叔丁氧基羰基保护的4-氨基丁酸)如上所述反应。 粗品产物用硅胶色谱法纯化，使用20∶1乙酸乙酯∶乙醇混合物作为洗 脱液。得到的产物为淡黄色油状物(产率63％)。

1H-NMR(CDCl3)：δ＝1.43(s，9H，t-Bu)，1.82(quint，J＝7.18Hz， 2H，CH2CH2NHBoc)，1.90(quint，J＝7.18Hz，2H，ArNCH2CH2)， 2.35(t，J＝8.97Hz，2H，CO2CH2)，2.42(m，10H，5个NCH2)，2.60 (t，J＝5.98Hz，2H，NCH2CH2O)，3.16(q，J＝6.85Hz，2H，CH2NHBoc)， 3.84(t，J＝7.2Hz，2H，ArNCH2)，4.18(t，J＝5.98Hz，2H，NCH2CH2O)， 5.10(bs，1H，NH)，6.83(m，7H，Ar)ppm。

13C-NMR(CDCl3)：δ＝23.92(CH2CH2NHBoc)，24.98 (ArNCH2CH2)，28.21(t-Bu)，39.50(CH2CO2)，45.05(ArNCH2)，52.89 (2个NCH2)，53.03(2个NCH2)，55.15(ArNCH2CH2CH2)，56.34 (NCH2CH2O)，60.13(CH2NHBoc)，61.29(NCH2CH2O)，78.80(CMe3)， 115.60(C1，C10)，121.96(C3)，122.65(C8)，123.22(C5)，124.45(C6)， 127.21(C7，C4)，127.62(C9)，132.93(C2)，144.23(C12)，146.23(C11)， 155.79(NCO2)，172.92(CO2)ppm。

氟奋乃静N-叔丁氧基羰基-4-氨基丁酯的合成：氟奋乃静和N-叔 丁氧基羰基-GABA(N-被叔丁氧基羰基保护的4-氨基丁酸)如上所述 反应。粗品产物用硅胶色谱法纯化，使用20∶1乙酸乙酯∶乙醇混合物 作为洗脱液。得到的产物为淡黄色油状物(产率75％)。

1H-NMR(CDCl3)：δ＝1.49(s，9H，t-Bu)，1.77(quint，J＝6.38Hz， 2H，CH2CH2NHBoc)，1.90(quint，J＝6.96Hz，2H，ArNCH2CH2)， 2.35(t，J＝6.38Hz，2H，CO2CH2)，2.45(m，10H，5个NCH2)，2.58 (t，J＝5.8Hz，2H，NCH2CH2O)，3.14(q，J＝5.8Hz，2H，CH2NHBoc)， 3.94(t，J＝6.38Hz，2H，ArNCH2)，4.2(t，J＝5.8Hz，2H，NCH2CH2O)， 4.92(bs，1H，NH)，6.8-7.2(m，7H，Ar)ppm。

13C-NMR(CDCl3)：δ＝23.88(CH2CH2NHBoc)，25.07 (ArNCH2CH2)，28.28(t-Bu)，39.60(CH2CO2)，45.13(ArNCH2)，52.94 (2个NCH2)，53.04(2个NCH2)，55.13(ArNCH2CH2CH2)，56.43 (NCH2CH2O)，60.22(CH2NHBoc)，61.36 (NCH2CH2O)，78.92(CMe3)， 111.77(q，J＝3Hz，C1)，115.82(C10)，118.85(q，J＝3.77Hz，C3)， 122.97(C8)，123.91(C6)，124.05(q，J＝272Hz，CF3)，127.30(C7)， 127.39(C9)，127.52(C4)，129.42(q，J＝32Hz，C2)，129.82(C5)，144.12 (C11)，145.58(C12)，155.82(NCO2)，173.01(CO2)ppm。

奋乃静4-氨基丁酯三盐酸盐(AN168 )的合成：如上所述制备的 奋乃静N-叔丁氧基羰基-4-氨基丁酯与HCl如上所述反应。得到三盐 酸盐产物，粘稠的半固体油状物(定量的产率)。

1H-NMR(CDCl3)：δ＝1.93(quint，J＝7.14Hz，2H，CH2CH2NH2)， 2.23(m，2H，ArNCH2CH2)，2.61(t，J＝7.14Hz，2H，CO2CH2)，3.01 (m，2H，CH2NH2)，3.33(m，2H，ArNCH2CH2CH2)，3.48-3.87(m， 10H，5个NCH2)，4.10(t，J＝6.4Hz，2H，NCH2CH2O)，4.48(m， 2H， ArNCH2)，7-7.31(m，7H，Ar)ppm。

13C-NMR(CDCl3)：δ＝22.34(CH2CH2NH2)，22.93(ArNCH2CH2)， 31.11(CH2CO2)，39.56(CH2NH2)，44.76(ArNCH2)，49.42(2个NCH2)， 49.61(2个NCH2)，55.29(ArCH2CH2CH2)，56.08(NCH2CH2O)，58.64 (NCH2CH2O)，116.69(C10)，117.20(C1)，123.49(C3)，124.19(C8)，125.44 (C5)，126.42(C6)，128.20(C7)，128.56(C9)，128.80(C4)，134.23(C2)， 144.97(C12)，147.37(C11)，173.04(CO2)ppm。

MS(CI/CH4)：m/z(％)＝403.09(MH+-C4H7NO，100)，489.18 (MH+，1.7)。

氟奋乃静4-氨基丁酯三盐酸盐(AN187)的合成：氟奋乃静N- 叔丁氧基羰基-4-氨基丁酯与HCl如上所述反应。得到的产物为白色 固体(产率75％)。

1H-NMR(CDCl3)：δ＝1.93(quint，J＝7.25Hz，2H，CH2CH2NH2)， 2.29(quint，J＝5.42Hz，2H，ArNCH2CH2)，2.49(t，J＝7.14Hz，2H， CO2CH2)，2.99(t，J＝7.54Hz，2H，CH2NH2)，3.39(t，J＝4.87Hz， 2H，ArNCH2CH2CH2)，3.40(t，J＝5.42Hz，2H，NCH2CH2N)，3.4- 4.0(m，8H，4个NCH2)，3.91(m，2H，NCH2CH2O)，4.18(t，J＝6.12 Hz，2H，ArNCH2)，7.02-7.33(m，7H，Ar)ppm。

13C-NMR(CDCl3)：δ＝22.76(ArNCH2CH2)，23.36(CH2CH2NH2)， 31.49(CH2CO2)，39.96(CH2NH2)，45.21(ArNCH2)，49.57(2个NCH2)， 50.02(2个NCH2)，55.72(ArNCH2CH2CH2)，56.48(NCH2CH2O)，58.99 (NCH2CH2O)，113.41(q，J＝3.77Hz，C1)，117.80(C10)，120.70(q， J＝3.77Hz，C3)，124.89(C8)，126.24(C6)，125.59(q，J＝272Hz，CF3)， 128.75(C7)，128.97(C9)，129.25(C4)，130.96(q，J＝32Hz，C2)，132.51 (C5)，145.12(C11)，147.25(C12)，173.48(CO2)ppm。

MS(CI/CH4)：m/z(％)＝523(MH+，0.5)，280(M-C14H9NF3S， 100)。

由丙戊酸和有机酸或氨基有机酸制备的化学共轭体的合成——一 般方法：

在NaHCO3、Bu4N+HSO4-、水和CH2Cl2存在下，丙戊酸和氯硫 酸氯甲酯(1.2当量)于室温下发生反应。此后分离水相，并用CH2Cl2 洗。有机相用饱和的NaHCO3水溶液、盐水洗，干燥(MgSO4)并蒸 发以产生丙戊酸的氯甲酯，残余油状物，上述产物通过蒸馏纯化。然 后，同样地如上所述的一般方法，丙戊酸氯甲酯与有机酸或N-被保护 的氨基有机酸发生反应以生成预期的产物。

2-丙基戊酸(丙戊酸)氯甲酯(AN-215)的合成：将氯硫酸氯甲 酯(3.79克，23mmol，1.2当量)加至丙戊酸(2.76克，19mmol)、 NaHCO3(5.75克，68.4mmol)、Bu4N+HSO4-(0.5克)、水(25ml)和CH2Cl2 (25ml)的混合物中。混合物于室温下搅拌过夜。此后，将水层分离并 用CH2Cl2洗。有机层用饱和的NaHCO3水溶液和盐水连续洗，干燥 (MgSO4)并蒸发，以生成残余油状物，用蒸馏法(b.p.70℃/4mmHg) 纯化，生成2.05克AN-215(产率56％)。

1H-NMR(CDCl3)：δ＝0.92(t，J＝7.3Hz，6H，2个CH3)，1.26- 1.66(m，8H，2个CH2CH2)，2.36-2.48(m，1H，CH)，5.71(s，2H， OCH2Cl)。

13C-NMR(CDCl3)：δ＝13.9(2个CH3)，20.4(MeCH2CH2)，34.3(2 个CH2CH)，45.0(CH)，68.5(OCH2Cl)，174.4(CO2)。

MS(EI)：m/z(％)＝193(MH+，100)，150(MH+-C3H7)。

2-丙基戊酸(丙戊酸)N-丁氧基羰基-4-氨基丁酰氧基甲酯(AN- 217)的合成：N-叔丁氧基羰基-GABA(N-被叔丁氧基羰基保护的4- 氨基丁酸)(1.78克，8.8mmol)和2-丙基-戊酸氯甲酯(1.8克，8.27 mmol)在无水甲乙酮中的混合物在氮气下搅拌。逐滴加入Et3N(1 克，9.5mmol)，且反应混合物加热60小时。将得到的白色沉淀物过 滤，蒸发滤液。残余物溶于乙酸乙酯中，用饱和的NaHCO3水溶液和 盐水连续洗，干燥(MgSO4)，过滤，蒸发并在高真空下进一步干燥， 生成的产物为油状物(1.7克，产率57％)，随后无需进一步纯化即可 使用。

1H-NMR(CDCl3)：δ＝0.80(t，J＝7.1Hz，6H，2个CH3)，1.19- 1.72(s+m，17H，2个CH2CH2Me+t-Bu)，1.82(q，J＝7.1Hz，2H， CH2CH2CH2)，2.36-2.43(m，3H，CH2CO+CHCO)，3.16(t，J＝6.8Hz， 2H，NHCH2)，4.74(bs，1H，NH)，5.75(s，2H，OCH2O)。

13C-NMR(CDCl3)：δ＝18.(2个CH3)，23(2个MeCH2)，25 (CH2CH2CH2)，28.2(Me3C)，31.1(COCH2)，34.1(2个CH2CH)，39.6 (NHCH2)，44.81(CH)，79(OCH2O)，155.8(NHCO2)，171.7(CH2CO)， 175(CHCO2)。

MS(ES+)：m/z(％)＝382(M+Na+，65)，360(MH+，100)，304 (MH+-C4H8，98)。

2-丙基戊酸(丙戊酸)4-氨基丁酰氧基甲酯盐酸盐(AN-216)的 合成：将4N HCl的在乙酸乙酯中的溶液加入2-丙基戊酸N-叔丁氧基 羰基-4-氨基-丁酰氧基甲酯(AN-217，如上文所述制备)(1.7克，4.7 mmol)在乙酸乙酯中的溶液中。得到的混合物于室温下搅拌4小时， 此后蒸发溶剂并将残余物在高真空下进一步干燥。残余物溶于醚中， 加入己烷导致预期产物AN-216(0.75克，62％)沉淀，产物是非晶 形固体，熔点为35-37℃。

1H-NMR(CD3OD)：δ＝0.9(t，J＝7.1Hz，6H，2个CH3)，1.2-1.64 (m，8H，2个CH2CH2Me)，1.95(q，J＝7.5Hz，2H，CH2CH2CH2)， 2.4-2.5(m，1H，CHCO)，2.53(t，J＝7.2Hz，2H，CH2CO)，2.99(t， J＝7.2Hz，2H，CH2N)，5.77(s，2H，OCH2O)。

13C-NMR(CD3OD)：δ＝14.2(2个CH3)，21.5(2个MeCH2)，23.5 (CH2CH2CH2)，31.3(COCH2)，35.5(2个CH2CH)，39.9(NCH2)，46.2 (CH)，80.6(OCH2O)，172.5(CH2CO)，176.4(CHCO2)。

MS(CI/NH3)：m/z(％)＝260(MH+，100)。

由抗抑郁药(例如氟西汀或去甲替林)和有机酸或氨基有机酸制 备的化学共轭体的合成——一般方法：

在二氯甲烷(CH2Cl2)中的三乙胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基 碳二亚胺盐酸盐(EDC)存在下，有游离氨基的抗抑郁药与有机酸或 N-被保护的氨基有机酸(1.2-1.3mol当量)发生反应。然后蒸发溶液， 残余物溶于CH2Cl2中，用HCl 1N、饱和的NaHCO3和盐水洗，并将 有机相干燥(MgSO4)蒸发以得到产物，如果需要可任选柱色谱法纯 化。如果使用N-被保护的有机酸，在EtOAc溶液中的HCl存在下， 定量进行脱保护。

叔丁基3-(N-(3-(4-(三氟甲基)苯氧基)-3-苯基丙基)-N-甲基氨甲酰 基)丙基氨基甲酸酯(AN-229)的合成：

将4-叔丁氧基羰基氨基-丁酸(N-Boc-GABA)(1.2mmol)加入 氟西汀(0.9mmol)、三乙胺(1mmol)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙 基碳二亚胺盐酸盐(EDC)(1.2mmol)的无水混合物在CH2Cl2(5ml) 中。得到的混合物搅拌24小时，此后蒸发溶剂。剩余物溶于CH2Cl2 中，得到的溶液用HCl 1N、饱和的NaHCO3和盐水提取，且有机相 用MgSO4干燥。然后过滤溶液，蒸发溶剂且剩余物通过硅胶中的快 速色谱法纯化，使用EtOAc∶己烷(4∶1)混合物作为洗脱液，以得到 两种形式的旋转异构体产物(一个少部分和一个大部分minor、 major)，无色油状物，产率34％。

1H-NMR(300MHz，CDCl3)：δ＝1.35(s，9H，t-Bu)，1.71(quint， J＝6.88Hz，2H)，2.07-2.18(m，2H)，2.86(s，3H，NMe minor)，2.89 (s，3H，NMe，major)，2.98(t，J＝6.77Hz，2H，CH2N，minor)， 3.07 (t，J＝6.52Hz，2H，CH2N，major)，3.45-3.57(m，2H，CH2NH)， 5.08(dd，J＝8.12，4.03Hz，1H，OCH，minor)，5.14(dd，J＝4.34， 1Hz，1H，OCH，major)，5.82(d，J＝8.5Hz，2H，2个CH)，7.2- 7.38(m，7H，C6H5，2个CH)ppm。

13C-NMR(200MHz，CDCl3)：δ＝25.2，28.3，30.7，33.4，2个 35.7，36.3，40.37，45.3，46.2，77.3，78.3，115.7，121.6，125.7，126.7， 127.9，128.7，139.9，140.6，156.1，159.9，160.4，172.5ppm。

MS(EI)：m/z＝5517(MNa+，40)，495(MH+，56)，395(MH+- C5H7O2，100)。

N-(3-(4-(三氟甲基)苯氧基)-3-苯基丙基)-4-氨基-N-甲基丁酰胺盐 酸盐(AN-227)的合成：

将AN-229(0.5mmol)加入HCl在EtOAc(35ml)中的溶液中， 得到的混合物搅拌3小时。此后，蒸发溶剂，得到定量产率的产物 AN-227。

1H-NMR(300MHz，CDCl3)：δ＝1.9(quint，J＝7.25Hz，2H)， 2.52(t，J＝6.9Hz，2H)，2.87(m，tJ＝7.38Hz，2H，minor)，2.93(s， 3H，NMe minor)，2.97(t，J＝7.13Hz，3H，NMe，major)，3.03(s， 3H，major)，3.59-3.67(m，2H)，5.37(dd，J＝8.6，4.18Hz，1H， major)，5.42(dd，J＝8.57，4.12Hz，1H，minor)，6.99-7.05(m，2H)， 7.24-7.49(m，7H)ppm。

13C-NMR(300MHz，CDCl3)：δ＝23.7(major)，23.9(minor)，30.9 (minor)，31.5(major)，33.8(minor)，36.1(major)，37.1(major)，37.9 (minor)，40.42，46.3(major)，47.5(minor)，78.5(minor)，79.4(major)， 117.2，124.1，127.3，127.8，129.0(major)，129.2(minor)，129.7，129.9 ppm。

叔丁基3-(10，11-二氢-5H-联苯并[a，d]环庚烷-5-亚基-N-甲基-1-丙 胺-3-(甲基氨甲酰基)丙基氨基甲酸酯(AN-230)的合成：

将4-叔丁氧基羰基氨基-丁酸(N-Boc-GABA)(1.3mmol)加入 去甲替林(1mmol)、三乙胺(1.2mmol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3- 乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)(1.3mmol)的无水混合物在CH2Cl2(15 ml)中。得到的混合物于室温下搅拌48小时，此后蒸发溶剂。残余 物溶于CH2Cl2中，得到的溶液用HCl 1N、饱和的NaHCO3和盐水提 取。有机相用MgSO4干燥，将溶液过滤，蒸发并分离产物，固体， 产率34％。

1H-NMR(300MHz，CDCl3)：δ＝1.34(s，9H，t-Bu)，1.61(quint， J＝6.95Hz，2H)，1.69(quint，J＝6.91Hz，2H)，2.2-2.26(m，4H)， 2.69(s，3H)，2.71(s，3H)，2.96(t，J＝6.62Hz，2H)，3.03(t，J＝6.63 Hz，2H)，3.03-3.2(m，6H)，5.71(t，J＝7.88Hz，1H)，5.74(t，J＝7.52 Hz，1H)，6.92-7.17(m，8H)ppm。

13C-NMR(300MHz，CDCl3)：δ＝25.2，28.3，30.7，33.4，2个 35.7，36.3，40.37，45.3，46.2，77.3，78.3，115.7，121.6，125.7，126.7， 127.9，128.7，139.9，140.6，156.1，159.9，160.4，172.5ppm。

MS(EI)：m/z＝5517(MNa+，40)，495(MH+，56)，395(MH+- C5H7O2，100)。

10，11-二氢-5-(3-甲基氨基亚丙基)-5H-联苯并[a，d][1，4]环庚烯4-氨 基-N-丁酰胺盐酸盐(AN-228)的合成：

将AN-230(0.5mmol)加入HCl在EtOAc(35ml)中的溶液中， 得到的混合物搅拌3小时。此后，蒸发溶剂，得到定量产率的两种旋 转异构体形式的产物。

1H-NMR(300MHz，CDCl3)：δ＝1.67(t，J＝6.9Hz，1H)，1.8(t， J＝7.07Hz，1H)，2.1-2.35(m，2H)，2.4(q，J＝6.7Hz，2H)，2.6-2.9 (m，5H)，3.3-3.4(m，2H)，5.76(dt，J＝7.86，7.76Hz，1H)，6.7-7.3 (m，8H)ppm。

下表1列出了通过上文所述的方法合成的化学共轭体。

表1

(表1，cont.)

活性测定

材料和实验方法

细胞系：在本研究中使用如下细胞系：人前列腺癌(PC-3)、人 结肠癌(HT-29)、鼠黑色素瘤(B-16)和其耐药的亚克隆(B-16MDR)、 小鼠成纤维细胞(3T3)、髓细胞性白血病(HL60)和其耐药的亚克 隆(HL 60MX2)、子宫内膜细胞系(MES SA)和其耐药的亚克隆(MES DX5)、jurkat T淋巴瘤、单核细胞白血病(U-937)和神经胶质瘤细 胞系U87 MG和U251 MG。

大鼠成纤维细胞的初级培养物使用已知的方法从新生大鼠获得 [7]。

神经元细胞和神经胶质细胞从妊娠(14-15天)ICR小鼠的胚胎 脑部制备。将脑切细，并在Leibowitch L-15介质(Beth Aemek)、 75μg/ml庆大霉素和0.2mM谷氨酰胺的混合物中将其均质化。细胞， 300-500K/孔，接种于用聚-D-赖氨酸处理的96孔微板中。通过将5-氟 尿嘧啶脱氧核苷(FUDR)和尿核甙加入半数板中后48小时来获得选 择性的神经元培养物。未处理的培养物包括神经元核神经胶质细胞的 混合物。细胞在添加了10％FCS(胎牛血清)和2mM谷氨酰胺的RPMI 或DMEM中生长，并在增湿的5％CO2保温箱中于37℃孵化。

大鼠肌细胞培养物由1-2天龄Wistar新生大鼠(Harlan)制备。 为获得约25-30百万个细胞使用了30只新生大鼠。为此，将心脏切开 并用RDBTM(从无花果树提取物中分离的蛋白酶)于室温下对其进行 酶的组织分离。此方案重复5次，直至细胞被完全分散。为减少非肌 细胞，分散的细胞在组织培养瓶中，3×106/ml在DMEM介质中预培 养45分钟，然后转移至明胶包衣的微量滴定板中24小时。此后，将 细胞毒素剂加入培养物中，以便在培养物中消除分裂细胞仅留下未分 裂的肌细胞。将细胞孵化4天并在此后进行显微镜下检查。

神经胶质瘤细胞系U87 MG、U251 MG在增湿的保温箱中于37℃ 及在添加了10％胎牛血清(Beth Aemek)和青霉素(100单位/ml)- 链霉素(100μg/ml)的8％CO2 Dubleco氏改进的Eagle培养基 (DMEM)中生长。

癌症和正常细胞的增殖：通过中性红测定法[8]或通过荧光测定法 定量DNA内容物[9]来测定增殖。在中性红测定法中，中性红被溶酶 体吸收，因此引起红细胞的着色。定量分析通过比色测定法(在550nm ELISA仪)进行。在荧光测定中，使用alamar蓝作为氧化还原指示 剂。alamar蓝荧光在激发波长544nm和发射波长590nm处检测 (FLUOstar BMG Lab Technologies，Offenburg，Germany)。

编程性细胞死亡和DNA断裂：细胞核断裂通过碘化丙啶染色细 胞的流式细胞检测分析来研究。该分析使用配有节激发波长480nm的 氩离子激光器和双联体辨别模式(DDM)的FACScan(Becton Dickinson，Mountain View，CA)来进行。使用Lysis II(Becton Dickinson) 软件获取数据。细胞凋亡的核变化根据Nicolletti等的标准来评估[13]。

化学致敏作用：奋乃静和其化学共轭体AN168的化学致敏作用 在体外测定。各种浓度的奋乃静或AN168与化疗药物一起一并给予 C6大鼠神经胶质细胞或Jurkat T淋巴瘤细胞。使用化疗药物、奋乃 静、AN168、化疗药物和奋乃静联用或化疗药物和AN168联用治疗 后的细胞成活力和/或DNA断裂如上所述测定。

动物：年轻成年雄性大鼠(150-230克)购自Harlan(Israel)。实 验之前将动物分为2-5只/笼，并在控制条件下在动物室中生活一周。 在双盲法下采用首次接受实验的动物进行实验。在各实验中，检测各 种治疗组(每组约5-10只动物)。

年轻成年雄性和雌性小鼠购自Harlan，以色列。实验前动物在控 制条件下生活4-7天。实验在双盲法下进行。在各实验中，检测各种 治疗组(每组约10只动物)。

大鼠僵住症：由典型安定药引起的锥体束外的不良反应的表现通 过大鼠使用安定药处理后的刻板型的木僵行为表现来评估。僵住症通 过两种方法测定：(i)通过测定动物从紧握笼壁不放至移动其后足并 达到一个平面的时间来测定(“壁”试验法)；和(ii)大鼠和其靠于水平 杆(高5.5cm)上的前肢位于一个水平面上，类似于弹奏钢琴的位置 (“钢琴”试验法)。追踪观察的最长时间为2分钟，且对于每只动物 每小时个别进行测量。这些实验提供了中枢多巴胺(DA)组织活性 的评估并是由抗精神药物引起的锥体外系症状的可接受的标准[10]。 对于奋乃静、氟奋乃静和化合物AN167、AN168、AN177、AN178、 AN180和AN187(见上文的表1)测定总的引起的僵住症和其时间 过程，与不同的化合物组合和不同的条件相比较。通常，溶于1％乳 酸中的5mg/kg母体化合物奋乃静和7.5mg/kg氟奋乃静和其等摩尔 剂量的相关的本发明的化学共轭体，给动物腹膜内注射。在不同的测 定方法中，AN168和奋乃静，溶于1％乳酸中，口服给予动物。

小鼠僵住症：在小鼠中使用安定药处理后的刻板型的木僵行为的 表现在两个不同的实验方案中测定。

第一个方案中，成年雄性被分组且每组用奋乃静(1.5mg/kg，9 只小鼠)、奋乃静和等摩尔剂量的GABA的混合物(7只小鼠)、等摩 尔剂量的AN-168(8只小鼠)处理或不处理(对照组，6只)。僵住 症使用两个笼子和其间的一根棒组成的一个装置来测定。小鼠吊挂在 棒的中间，监测治疗后1小时、2小时和3小时在2分钟内达到目标 的动物百分数。

第二个方案中，年轻雌性被分组且每组用2.5mg/kg奋乃静(6 只小鼠)、奋乃静和等摩尔剂量的GABA的混合物(6只小鼠)、等摩 尔剂量的AN-168(7只小鼠)处理或不处理(对照组，7只小鼠)。 僵住症使用上文所述的装置测定。小鼠吊挂在棒的中间并测定动物达 到目标花费的时间。

催乳素分泌：典型的安定药诱发高乳素血症，这通常与溢乳和受 损的性腺及性功能有关[11]。因此，循环血浆催乳素水平的测定被用 作腹膜内或口服给予已知的安定药和本发明的化学共轭体后的促精神 活性的敏感的生化标志。因此，在乙醚麻醉下，从穿刺大鼠眼眶采血， 并用Millennia，大鼠催乳素酶免疫测定试剂盒(DPC，USA)进行测 定。

行为标准：观察用本发明的化学共轭体治疗的动物的镇静作用， 并用下述的方法评分(表2)。在各种治疗组中使用0-3分评估动物镇 静作用的程度和活动度，而0分代表活跃且活动的动物，1分代表平 静且活动的动物，2分代表平静且不可活动的动物以及3分代表完全 共济失调且无警戒的动物。被处理的动物的行为提供了评估待测已知 安定药和化学共轭体的抑制精神的作用，以及由此引起的锥体外系症 状症状的严重性。

毒性：在体外通过待测化合物(已知的安定药或本发明的化学共 轭体)对来自新生小鼠脑部的神经元初级培养物和全脑神经元和神经 胶质细胞的作用来测定毒性。在体外，奋乃静和其化学共轭体AN168 也用大鼠肌细胞测定。在体内，对于一次性腹膜内给予单剂量药物后 在2个月龄ICR小鼠中通过测定LD50评估急性毒性。

在大鼠中D-苯丙胺-诱发的过兴奋：本发明的化学共轭体的效应 使用D-苯丙胺-诱发的过兴奋和活力模型来研究，该模型被认为是最 确定的动物精神分裂症模型之一[14]。

首次接受实验的Wistar雄性大鼠放在单独的盒子中。在各实验 中用4只大鼠来研究。在腹膜内给予苯丙胺(2.5mg/kg)之前30分 钟或口服给予苯丙胺(2.5mg/kg)之前90分钟，腹膜内(ip)给予 大鼠奋乃静或等摩尔剂量的其化学共轭体AN-168。使用两个参数评 估动物的自发活动：在桶壁上动物的攀援尝试(作为大运动)和动物 的头部运动(作为小运动)。2小时中每15分钟记录评估。每一只动 物120秒内在各时间点测定。

在神经胶质瘤细胞中的抗增殖活性：根据本发明的丙戊酸的各种 共轭体(AN-138、AN-148、AN-216和AN-223)的抗增殖活性使用 稍微变更的Hoechst测定法通过测定细胞生长来研究，如下：密度为 1.5×104细胞/ml的细胞接种于组织培养物96-孔板中24小时，然后暴 露于不同浓度的待测化合物和共轭体中72小时。然后，处理的细胞 用PBS冲洗并用乙醇(70％)固定30分钟。然后，弃去乙醇，并加 入20ml溶于PBS中的10mg/ml荧光探针联苯酰亚胺(Hoechst reagent，B2261 Sigma，USA)。用FluoStar荧光计在390-460nm处 测定荧光。每一个实验操作至少3遍且每一个剂量一式四份进行测定。 化合物滴定后的IC50值通过存活百分率的线性回归测定。

实验结果

奋乃静和包含相同成分的化学共轭体诱发的僵住症和促精神活 性：5mg/kg奋乃静和等摩尔浓度的其化学共轭体AN130、AN167 和AN168(见上文的表1)诱发的僵住症和促精神活性通过对年轻成 年Wistar雄性大鼠(重150-200克)，每笼分5只，腹膜内注射溶于 1％乳酸中的化合物来测定，并用上文所述的“壁”测定法测定。对照 动物组仅用赋形剂(乳酸)处理。对僵住症和催乳素分泌的治疗作用 在2小时期间跟踪，其结果在图1a和1b中表示。

图1a显示了得自诱发的僵住症的数据，在治疗后0、60和120 分钟重复进行的3个测定的总和的数据。各柱描述了5只动物的平均 值。对于奋乃静总时间是标准化的(例如100％)。获得的数据表明僵 住症是由奋乃静和AN130的治疗诱发的，而AN130和AN138根本 不诱发僵住症。

图1b表明在治疗后0、60和120分钟测定的催乳素的血浆水平， 并代表在每一个参考时间的三个测定值的总和。催乳素血浆水平可用 作化合物的促精神活性的生化指标。得到的数据表明当用奋乃静、AN 130、AN167或AN168治疗时，动物中的催乳素血浆水平相似，在60 分钟时达峰且在此后降低。在各时间点，在用化学共轭体AN130、AN 167和AN168治疗的动物中，催乳素血浆水平与奋乃静治疗的相似， 这表明化学共轭体的促精神活性与母体药物相似。在对照动物中，仅 用赋形剂(1％乳酸)处理，催乳素的水平未改变。

SAR(构效关系)研究：SAR研究用奋乃静和包括相同成分的化 学共轭体来进行。诱发的僵住症如上文所述测定，并通过“壁“实验测 定。结果列于图2中。奋乃静和GABA、AN168的共轭体被证明是 最有效的，引起诱发的僵住症几乎最大程度的降低，然后为包含共轭 的AN178的戊酸酯，包含共轭的AN177的丙酸酯，包含共轭的AN167 的丁酸酯。该实验表明与用奋乃静本身治疗诱发的僵住症相比，用化 学共轭体治疗后明显减少诱发的僵住症。

由奋乃静、氟奋乃静和包含同样成分的化学共轭体诱发的僵住症 和动物行为：奋乃静、氟奋乃静及其包含丁酸-和GABA-的化学共轭 体(AN167、AN168、AN180和AN187，见表1)被测定在给予其 后诱发的总的僵住症、诱发的僵住症的时间和动物行为。腹膜内注射 5mg/Kg奋乃静、等摩尔浓度的AN167和AN168、7.5mg/Kg氟奋 乃静和等摩尔浓度的AN180和AN187进行测定。僵住症通过“壁”测 试法测定。

图3a表明了由待测化合物诱发的总的僵住症。获得的数据是在 给药后0、30、60、90、120、180、240和420分钟测定的总和，总 的时间对奋乃静和氟奋乃静(＝100％)标准化。包含化学共轭的丁酸， AN167和AN180，明显降低僵住症。包含奋乃静的GABA共轭体， AN168，消除了僵住症，而氟奋乃静的GABA共轭体，AN187，极 大地减少了僵住症。

图3b表明用奋乃静、其GABA共轭体AN168、氟奋乃静和其 GABA共轭体AN187治疗后0、60和120分钟测定的催乳素血浆水 平。得到的数据显示当用奋乃静、氟奋乃静或其GABA化学共轭体处 理时在动物体内催乳素血浆水平相似，在60分钟达到高峰并在此后 降低。在用AN168和AN187治疗的动物中，在每一个时间点，催乳 素血浆水平分别与奋乃静和氟奋乃静相似。

图4a证明了由奋乃静和包含相同成分的化学共轭体诱发的僵住 症在7个小时中的时间过程。由奋乃静诱发的僵住症在2个小时后达 峰且此后降低。含有丁酸的共轭体AN167与奋乃静相比诱发减少的 僵住症，而用包含GABA的共轭体AN168治疗的动物在研究的整个 7小时中没有僵住症。

图4b证明了由氟奋乃静和包含相同成分的化学共轭体诱发的僵 住症在7个小时中的时间过程。用氟奋乃静治疗的动物在测定的7个 小时期间显示了僵住症，而那些用AN180和AN187治疗的动物显示 较低的僵住症。由AN180诱发的僵住症在测定时间期间波动而由AN 187诱发的僵住症在7个小时的期间结束时消除。在本研究中没有一 只动物在24小时后出现僵住症。

给予待测的化合物对动物行为的影响使用0-3分，通过评估给予 上文所述的治疗后动物镇静作用和活动的程度来测定。0分代表活跃 且活动的动物，1分代表平静且活动的动物，2分代表平静且不可活 动的动物以及3分代表完全共济失调且无警戒的动物。得分概括于下 表2中，并证明了与那些已知的药物相比，对于动物行为，化学共轭 体的降低作用。

表2

  30min   60min   90min  120min  180min  240min   奋乃静     1     2     2     3     2     2   AN-167     0     1     1     2     2     2   AN-168     0     0     1     1     1     1   氟奋乃静     1     2     3     3     2     2   AN-180     1     2     3     2     1     1   AN-187     1     2     2     2     1     1

在大鼠中由AN168及奋乃静和GABA的混合物诱发的僵住症： AN168，奋乃静的GABA共轭体在大鼠中对诱发的僵住症的影响与 由其母体化合物-非共轭体的奋乃静和GABA诱发的僵住症相比较。 腹膜内注射共轭体或所述的混合物后60、90和120分钟测定僵住症 并用“壁”实验法测定。

图5a显示从各种治疗诱发的总的僵住症所获得的数据。在用AN 168治疗的组中，动物出现非常低的僵住症而在用奋乃静和GABA混 合物治疗的组中僵住症高。

图5b显示在两种治疗后僵住症的时间过程，且证明了在用AN168 治疗的动物中减少的僵住症，此在120分钟后消除。

在大鼠中由AN167和AN168诱发的僵住症：在四个独立的实验 中，测定了由AN167和AN168诱发的总的僵住症，并在相同的实验 条件下与奋乃静诱发的僵住症相比较。

等摩尔剂量的AN167和AN168后总的僵住症的平均值，以由奋 乃静诱发的僵住症的百分数，显示在图6中。尽管与奋乃静相比，AN 167诱发较低的僵住症，但是AN168将诱发的僵住症减少至几乎为 零值。

在小鼠中由奋乃静、奋乃静和GABA混合物及由AN168诱发的 僵住症：在小鼠中AN168，奋乃静的GABA共轭体对诱发的僵住症 的影响与由奋乃静单独和由母体药物混合物-非共轭的奋乃静和GABA 诱发的僵住症相比较。腹膜内注射治疗后60、90和120分钟测定僵 住症，且如上文所述测定。

图7a显示，就在2分钟内达到目标的动物而言，得自各种治疗 诱发的僵住症的数据。用AN168治疗的组中动物出现基本上较低的 无力而在单独用奋乃静和用奋乃静和GABA混合物治疗的组中动物出 现较高的僵住症。

图7b显示，就动物达到目标花费的时间而言，得自在以上治疗 后2和3小时由各种治疗诱发的僵住症数据。在用AN168治疗的组 中较单独使用奋乃静和使用奋乃静和GABA混合物治疗的动物快得 多。

口服给予奋乃静和其GABA的共轭体AN168诱发的僵住症、诱 发的动物行为和促精神活性：当腹膜内给予时，作为AN168，奋乃 静和GABA的化学共轭体目前被证明是最有效的化学共轭体，与奋乃 静相比，进行的另外的对照实验为了测定该化学共轭体的口服效应。 为此，如上文所述测定口服给予大鼠AN168或单独给予奋乃静后诱 发的僵住症、催乳素血浆水平和动物行为。动物每笼分5只，通过口 服给予溶于1％乳酸的奋乃静或AN-168。对照组动物仅接受赋形剂(乳 酸)。

口服给予各种浓度的AN168和奋乃静诱发的僵住症通过上文所 述的“壁”实验法和“钢琴”实验法测定。测定口服给予2.5、5、10和20 mg/kg奋乃静和分别的等摩尔剂量的3.5、7、14和28mg/kg AN-168 后4-24小时测定僵住症的时间过程。总的僵住症代表在追踪观察4-24 小时期间每一治疗组平均僵住症的总和。

图8a显示在各种治疗后，4-6个小时期间通过“钢琴”实验法测定 僵住症的时间过程，并证明了各种浓度的AN168在木僵行为中的一 致性减少。统计分析指出与其分别的等摩尔剂量的奋乃静相比，在低 剂量和中间剂量的AN168(7和14mg/kg)中减少更明显(p＜0.05)。 在化学共轭体的高剂量(14和28mg/kg)下，检测出的木僵症状始 终低于高剂量的奋乃静，尽管差异不是实质性的。可是假设来自评估 方法的在高剂量下药物和化学共轭体诱发的僵住症之间的这些较小的 差异。由于实际原因，最大的木僵信号被限于120秒。然而，实际上， 评估了由奋乃静诱发的木僵信号的最大值较由化学共轭体引出的木僵 信号最大值高。这一估算被观察到的高剂量下的AN168和奋乃静之 间的较大的和实际上的差异证明，都是由“壁”实验法和在下文所述的 镇静评分测定的僵住症。并且，进行的实验显示仅在中间剂量和高剂 量奋乃静(10和20mg/kg)治疗的动物中观察到肌强直和呼吸急促， 而在用分别等摩尔剂量的化学共轭体治疗的动物中没有观察到。

图8b显示，在各种治疗后，由“钢琴”实验法4-6小时期间测定的 僵住症的时间过程，在实验后3个月分别进行的实验表示在图8a中。 获得的数据显示AN168在高剂量下(14和28mg/kg)与进程实验相 比诱发较高的僵住症。NMR光谱学揭示可能由于水解作用，发生了 低的分解作用，因此影响了化学共轭体的独特性质。这些发现提示此 化合物应贮藏于密闭的管形瓶中，且仅在使用之前暴露。在这些方面 应该指出氟奋乃静类似的化学共轭体，AN187未显示引湿性，因此 在延长贮存下没有分解的倾向。

图9a和9b显示了由口服给予5、10和20mg/kg奋乃静和分别 的等摩尔剂量的7、14和28mg/kg AN168诱发的在4-6小时期间观 察到的总的僵住症。图9b表示在图9a表示的实验后3个月进行的实 验中获得的数据。与奋乃静相比，尽管由AN168诱发的木僵行为的 减少在图9b中表示的数据不明显，但是很清楚地表明由AN168诱发 的僵住症始终低于由奋乃静诱发的僵住症。

图10a和10b显示在各种治疗后24小时期间通过“钢琴”实验法 测定的僵住症时间进展(图10a)和总的僵住症(图10b)。得到的数 据证明奋乃静和AN-168的最大的木僵作用在治疗后5-6小时达到， 并证明了治疗后24小时在所有治疗组中僵住症减少。这些数据与给 予患者奋乃静(一日一次)观察到的临床时间过程成线性

图11显示在各种治疗后，通过“壁”实验法测定的总的僵住症， 且清楚地证明木僵症状在使用所有测试剂量的AN168治疗后几乎消 除。

口服给予化学共轭体AN168对动物行为的影响使用如上文所述 的的0-3级评分，通过评估用各种浓度的AN168和奋乃静口服治疗 后4-6小时，动物的镇静和活动程度。得到的分数在下表中概括，并 证明了与奋乃静相比，化学共轭体对动物行为的减少的作用。

表3

    治疗     剂量(mg/kg)     镇静分值     奋乃静     奋乃静     奋乃静     奋乃静     AN168     AN168     AN168     AN168     对照     20     10     5     2.5     28     14     7     3.5     3     2     1     0     2     1     0     0     0

作为口服给予化合物的多巴胺能活性的标志，在上文所述的各种 治疗后0、90和180分钟测定催乳素血浆水平。得到的数据概括于图 12中，且证明了在用奋乃静和AN168治疗的动物中的催乳素血浆水 平相似。在每一个时间点，在用AN168治疗的动物中，在低和中间 剂量，催乳素的血浆水平与用奋乃静治疗的相似，而在较高浓度在用 AN168治疗的动物中，催乳素血浆水平较用奋乃静治疗的动物高得 多。

这些结果证明AN168是非常有效的，因此关于临床使用，当口 服给药时，在低剂量下(例如3.5和7mg/Kg)。在此进一步地表明在 这些低剂量，AN168引起最少的锥体外系症状，因此在黑质纹状体 通路几乎避免了拮抗活性。

抗增殖活性：奋乃静、其化学共轭体AN167、AN168和AN177、 氟奋乃静、其化学共轭体AN179、AN180、AN181和AN187及丁 酸(BA)、4-苯基丁酸(PBA)和GABA的抗增殖活性通过用正常和 变异细胞进行(通常在不止一个独立的实验中)的增殖实验法来测定。 亚培养细胞，并以渐增的浓度往那加入待测的化合物。IC50值通过细 胞存活百分率的线性回归来测定。得自用各种待测的细胞系的待测化 合物的IC50值概括于下表4和表5中。

表4

  细胞   药物   B16   MDR   B16     HT-29     PC-3     3T3     正常鼠成     纤维细胞   奋乃静   18.45±5.4   n＝3*   12.5±1.29   n＝4     8.85±2.7     n＝4     23.1±2.3     n＝2     26.6   BA   8000±546   n＝3   1300±113   n＝3     7170±2034     n＝4     5540   GABA   ＞20000   n＝3   ＞20000   n＝3     ＞20000     n＝3     ＞20000   AN-167   41.5±1.8   n＝3   17.3±4.5   n＝5     13.3±2.4     n＝4     49.1     21.7     31.64   AN-168   23±16   n＝3   26.8±1.8   n＝3     23.1±9     n＝3     45.5     25     45.8   AN-180   58   36.5±8.1   n＝5     17.27±3.07     n＝5     52.9±28.7     n＝3     41.9±16.8     n＝2   AN-177     25.8     24.6   AN-187     11.5     18.6

*独立实验的数目。

表5

细胞 药物   HL60     60MX2     (MDR)     MES SA     MES SA     DX5(MDR)     JURKAT   U-937 奋乃静   19.76     22.55     15.31     16.24     11.34   21.30 AN167   17.29     19.86     17.23     20.90     11.40   23.28 AN168   15.14     18.36     18.20     17.16     11.35   14.23 AN177   15.13     17.59 氟奋乃静   20.94     21.77     14.79     13.74     14.30   21.51 AN179   18.25     21.42 AN180   19.00     18.76     11.96     12.74     10.43   12.25 AN181   14.79     16.69 AN187   18.57     17.10     14.37     9.47     10.31   18.86

这些结果表明尽管GABA本身没有证明有明显的抗增殖活性 (IC50＞20mM)，且BA(IC50为1-8mM)和PBA(IC50为2-12mM， 数据未显示)显示了明显的仍相对低的抗增殖活性，但是它们分别的 奋乃静和氟奋乃静共轭体有明显的较高的活性(IC50为8-60μM)。

这些结果进一步地证明本发明的化学共轭体在各种细胞系中的多 方面的抗增殖活性，包括多重耐药(MDR)的细胞，如HL60 MX2、 B16 MDR亚克隆和MES SA DX5。

图13显示在有代表性实验中得到的结果，在上述实验中测定了 奋乃静和其化学共轭体对B16鼠类黑色素瘤细胞增殖的影响。研究 证明AN167和AN168作为抗增殖剂是比较有效的。

测定了奋乃静、GABA和其化学共轭体AN168对C6大鼠神经 胶质瘤细胞的细胞毒性效应，并与已知的化疗药物顺铂和长春新碱的 细胞毒性效应比较。细胞被亚培养，并在其中加入浓度渐增的待测化 合物，直至100μM。通过上文所述的中性红方法测定治疗后(24小 时)的细胞活性，结果列于图14中。如上所述的方法测定奋乃静和 AN168的IC50值，研究证明分别为19.2μM和24.2μM。

如图14所示，获得的数据证明与有代表性的已知的化疗药物相 比，本发明的化学共轭体有优秀的抗增殖活性。C6神经胶质细胞细 胞被认为是MDR细胞，实际上，研究证明已知的化疗药物的抗增殖 活性基本上是低的。相反，研究证明AN168发挥高的抗增殖活性， 在相对低的浓度下(约20μM)引起实质细胞死亡。

图15表明用渐增浓度的奋乃静、AN168和地塞米松治疗Jurkat T 淋巴瘤细胞后获得的数据。就细胞成活力而言，显示并通过alamar 蓝方法测定结果，且证明了与地塞米松相比AN168和奋乃静的较高 的细胞毒性效应。奋乃静和AN168的IC50值分别为16μM和19μM。

应该进一步指出，尽管奋乃静、氟奋乃静和其化学共轭体发挥约 相同程度的抗增殖活性，本发明的化学共轭体的临床用途高度优于精 神抑制药物的临床用途，因为给予化学共轭体几乎完全避免了不良副 作用。

由一同给予奋乃静或AN168和化疗药物产生的化学致敏效应： 奋乃静5、10和15μM及其等摩尔剂量的化学共轭体AN168的化学 致敏作用通过一同给予不同浓度的已知的化疗药物测定，如长春新 碱、顺铂和地塞米松。如上文在方法部分中所述测定，在所述联合治 疗后的细胞成活力和/或DNA断裂与单用地塞米松治疗后获得的结果 比较。

图16表示大鼠C6神经胶质瘤细胞系(MDR细胞)用长春新碱 (30μM)、奋乃静、AN168和其联用治疗后24小时得到的数据。结 果很明显地证明与单独给药时的细胞毒活性相比，当与化疗药物一同 给药时，AN168的化学致敏效应基本上提高了其细胞毒活性，甚至 在低浓度的化学共轭体(例如5μM)时。

图17表示用5μM-50μM范围内的各种浓度的顺铂及顺铂与10和 15μM的AN168联用治疗大鼠C6神经胶质瘤细胞(MDR细胞)后 获得的数据。结果表示了细胞的成活力，通过中性红方法测定，且很 清楚地证明当细胞在所有测试浓度都对顺铂完全耐受时，顺铂和AN 168联合治疗使细胞对化疗药物敏感。

图18表示与未处理的细胞相比，用顺铂(30μM)、奋乃静(25 和50μM)、AN168(25、50μM)、顺铂(30μM)与AN168(50μM) 联用治疗后获得的DNA断裂的数据。DNA断裂通过上文所述的碘化 丙啶流细胞计数方法测定。结果证明了奋乃静和AN168都引起DNA 断裂的显著增加，而顺铂单用没有DNA断裂效应。结果显示本发明 的化学共轭体的化学致敏作用起因于其上述活性。

毒性：奋乃静、AN167和AN168在体外的毒性在神经元细胞的 初级培养物和神经元与神经胶质瘤细胞中测定，从新生小鼠脑获得。 细胞培养物用待测化合物处理24小时，且此后其成活力通过中性红 比色法测定。在这些实验中获得的IC50值证明奋乃静和AN168有相 似的毒性，而相对于正常脑细胞AN168显示明显较低的毒性，如图 19所示。奋乃静和AN168的在体外的毒性在培养的肌细胞中进一步 测定。图20表示用各种浓度奋乃静或AN168治疗后，如上文所述测 定的细胞成活力。得到的数据显示AN168在所有浓度不引起细胞成 活力的任何降低，而奋乃静在高浓度下引起细胞成活力20％的降低。

奋乃静和AN167在体内的毒性在腹膜内给予小鼠其单剂量后评 估。在治疗2周后测定的LD50值，奋乃静是109mg/kg和AN167是 120mg/kg。除与奋乃静(per)相比AN167的较低的毒性外，由共 轭化合物引起的死亡率是延缓的，如图21所示。

在大鼠中D-苯丙胺诱发的过兴奋：使用D-苯丙胺诱发的过兴奋 和活动模型研究本发明的化学共轭体的效应。对于在苯丙胺相关的疾 病如精神分裂症中有抗精神病活性的化合物的选择，该模型是有利于 预言性和重现性的模型[14]。使用该模型，研究奋乃静和GABA化学 共轭体AN168的疗效，并与单独给予母体化合物奋乃静和GABA的 疗效进行比较。

因此，首次接受实验的Wistar雄性大鼠被分为几组，每组在腹 膜内给予苯丙胺2.5mg/kg之前90分钟用腹膜内给予一定浓度的奋乃 静(0.5、1.5或3mg/kg)、一定浓度的AN-168(0.5或1.5mg/kg)、 GABA5mg/kg或奋乃静1.5mg/kg和GABA5mg/kg处理。各组中 大鼠的攀援行为如上文所述测定。

如图22和23所示，AN-168即使在低浓度完全拮抗由苯丙胺诱 发的攀援行为，因此证明了与其母体药物奋乃静和GABA相比，其高 度的和优良的促精神活性。

然而，如图24和25所示，AN-168在减少头部运动和其它小的 躯体运动方面的作用次于奋乃静。研究相信这种劣势起因于由共轭体 AN-168诱发的减少的锥体外系副作用，即木僵症状和镇静，与母体 奋乃静相比。如图22-25进一步显示，单独给予GABA不改变苯丙胺 的作用，也不改变奋乃静的作用，因此表明提高的效应和减少的不良 副作用是由给予共轭体AN-168引起的。

如图26-28所示，当在腹膜内给予苯丙胺之前90分钟，口服给予 大鼠奋乃静2.5mg/kg单独或与GABA5mg/kg联合及AN-168 3.5 mg/kg时的获得了相似的结果，证明了各种给药途径中共轭体的优秀 效应。

AN-168的效应进一步与奥氮平，已知的非典型的抗精神病药物 比较。在腹膜内给予苯丙胺后，口服给予大鼠各种浓度的奥氮平(2.5、 5或10mg/kg)。如图29-31所示，对于头部运动其几乎未观察到有作 用，而仅在高剂量(10mg/kg)奥氮平能基本上拮抗由苯丙胺诱发的 攀援行为。

这些结果与先前报道的在苯丙胺模型中奥氮平的低效应抑制保持 一致[15]。然而，在这些研究中得到的数据进一步表明与精神抑制药 物相比，本发明的化学共轭体发挥较低的抗多巴胺能活性，因此可以 与非典型药物显示某些相似性。

在该模型中获得的数据进一步支持本发明的共轭体在发挥促精神 活性中的高效应，同时减少了母体精神药物诱发的不良副作用。

上文所述的所有实验结果证明本发明的新型化学共轭体在发挥促 精神活性、抗增殖活性和化学致敏活性中的高的和有益的作用，对正 常细胞将毒性降到最低且将不良副作用降到最低。

在神经胶质细胞中的抗增殖活性：根据本发明的丙戊酸的各种共 轭体对神经胶质瘤细胞系(U87和U251)增殖的作用使用Hoechst增 殖测定法测定，如上文所述。

起初，测定各种浓度的丙戊酸-GABA共轭体AN-216对恶性胶质 瘤细胞(U251)成活力的影响，并与其母体化合物GABA和丙戊酸 和其1∶1等摩尔混合物。得到的结果列于图32a-b和33中。

图32a表示从AN-216获得的数据，并清楚地显示其对神经胶质 瘤细胞的有效的抗增殖活性。图32b表示从AN-216获得的数据与从 其母体化合物获得的数据比较，并清楚地证明其较高的效应。由图32b 清楚地可见，丙戊酸和GABA及丙戊酸的等摩尔混合物对细胞的成活 力有作用，而GABA单用对神经胶质瘤细胞的成活力没有作用。然而， 由图32a进一步可见，与丙戊酸和其与GABA的混合物相比，AN-216 的有效浓度低约100倍，因此证明了其对神经胶质瘤细胞的高抗增殖 活性。

图33表明，在本研究中得到的IC50值与加入根据本发明的丙戊 酸共轭体AN-138和AN-223获得的值一致，并清楚地进一步证明与 丙戊酸、存在或缺乏GABA相比，本发明共轭体的较高的的效应。

为评估和比较丙戊酸各种共轭体的抗增殖活性，在构效关系中进 行了研究，测定了丙戊酸-GABA共轭体AN-216对两种神经胶质瘤细 胞系U-87和U-251成活力的影响，并与丙戊酸-羧酸共轭体AN-138、 AN-148和AN-223(见上表1)的作用比较。

得到的数据概括和列于图34-36中，并令人惊讶地显示AN-216 是非常最有效的化合物。没有必然的任何特殊理论，研究表明此丙戊 酸-GABA共轭体对神经胶质瘤细胞的优秀的抗增殖活性是归因于 GABA部分，此部分提高化合物有效进入细胞。

应理解，本发明的某些特征，在各实施方案的上下文中进行了清 楚地描述，也可以在单个实施方案中提供联合。相反地，本发明的各 种特征，在单个实施方案的上下文中进行了简要描述，也可以独立或 在任何适宜的亚联合中提供。

尽管在和其特定的实施方案关联中已经叙述了本发明，但是很明 显，许多选择、修饰和变更对于本领域的技术人员是显而易见的。相 应地，可以预期包含所有在添加的权利要求的精神和广阔的范围之内 的这些选择、修饰和变更。在本说明书中提到的所有出版物、专利和 专利申请在此整体引入说明书作为参考，同样似乎每一出版物、专利 或专利申请特别地和各自地指出在此引入作为参考。另外，在本申请 中任意一项参考的引用或标识不应被解释为承认对于本发明该参考作 为现有技术是可用的。

数字词表引用的参考文献

(附件参考文献在正文中引用)

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