本发明涉及某种新化合物。具体来说，本发明涉及活化α亚型人 过氧化物酶体增殖物活化受体(“hPPARα”)的化合物。本发明还涉及 制备所述化合物的方法以及预防或治疗PPARα介导性疾病或病症的 方法。

几种相互独立的危险因素与心血管疾病有关。这样的危险因素 包括高血压、纤维蛋白原水平升高、高甘油三酯、高LDL胆固醇、 总胆固醇升高和低HDL胆固醇。HMG CoA还原酶抑制剂(“他汀类 药物”)可用于治疗以高LDL-c水平为特征的病症。已经证实降低 LDL-c在部分患者、尤其是HDL-c水平正常患者不足以降低心血管 疾病风险。这种人群用低LDL-c独立危险因素鉴定。低HDL-c水平 相关心血管疾病的高风险仍然没有药物疗法来成功解决(即目前市场 上没有药物用于提高HDL-c至40％以上)。(Bisgaier，C.L.；Pape，M.E. Curr.Pharm.Des.1998，4，53-70)。

X综合征(包括代谢综合征)不精确地定义为多种异常，包括高胰 岛素血症、肥胖、高甘油三酯、尿酸、纤维蛋白原、低密度LDL-c 颗粒、纤溶酶原激活剂抑制剂1(PAI-1)、HDL-c水平降低。

NIDDM称为胰岛素抵抗，胰岛素抵抗再引起异常葡萄糖产生和 葡萄糖在骨骼肌摄取降低。这些因素最终导致葡萄糖耐量降低(IGT) 和高胰岛素血症。

过氧化物酶体增殖物活化受体(PPAR)为孤儿受体，属于类固醇/ 类维生素A受体超家族的配体活化转录因子。参见例如Willson，T.M. 和Wahli，W.， Cuur.Opin.Chem.Biol.，(1997)，Vol.1，pp 235-241。

已经分离出3种哺乳动物过氧化物酶体增殖物活化受体，称为 PPAR-α、PPAR-γ、PPAR-δ(也称为NUC1或PPAR-β)。这些PPAR 通过结合称为PPAR效应元件(PPRE)的DNA序列元件调节目标基因 的表达。迄今，已经在编码调节脂质代谢的蛋白的许多基因的增强 子中鉴定了PPRE，提示PPAR在脂肪形成的信号转导级联和脂质动 态平衡中起关键作用(H.Keller和W.Wahli，Trends Endocrin.Met 291- 296，4(1993))。

某些激活或作用于一种或多种PPAR的化合物在动物模型中参 与调节甘油三酯和胆固醇水平。参见例如美国专利号5,847,008 (Doebber等)和5,859,051(Adams等)、PCT公布号WO 97/28149 (Leibowitz等)和WO 99/04815(Shimokawa等)。

贝特类为一类药物，它们可以降低血清甘油三酯20-50％、降低 LDL-c 10-15％、使LDL颗粒大小由致动脉粥样化的低密度转化为正 常密度的LDL-c以及升高HDL-c 10-15％。实验证据表明，贝特类对 血清脂质的作用通过激活PPARα而介导。参见例如B.Staels等，Curr. Pharm.Des.，1-14，3(1)，(1997)。激活PPARα导致增加脂肪酸代谢而降 低肝脏脂肪酸从头合成减少的酶发生转录，使得降低甘油三酯合成 和VLDL-c产生/分泌。此外，PPARα活化降低产生apoC-III。apoC-III 为LPL作用抑制剂，apoC-III降低增加VLDL-c清除。参见例如J. Auwerx等，Atherosclerosis，(Shannon，Irel.)，S29-S37，124(Suppl)， (1996)。PPARα配体可以用于治疗异常脂血症和心血管疾病，参见 Fruchart，J.C.，Duriez，P.和Staels，B.， Curr.Opin.Lipidol.(1999)，Vol 10， pp 245-257。

本发明的第一方面提供式(I)化合物和其药学上可接受的盐、溶 剂化物和可水解酯：

其中

X1为O或S；

R1和R2独立为H或C1-3烷基，或者连接到同一碳原子的R1和 R2可以与它们所连接的碳原子一起构成3-5元环烷基环；

R3和R4独立为H、卤素、-CH3和-OCH3；

R5为H或C1-6烷基；

X2为NH、NCH3或O；

Y和Z其中之一为N，另一个则为O或S；

R6为苯基或吡啶基(其中N在2位或3位)，并且任选被一个或 多个卤素、CF3、C1-6直链或支链烷基(任选被卤素取代)取代，条件是 R6为吡啶基时，则其N不被取代。

另一方面，本发明公开了一种预防或治疗人PPARα、γ或 δ(“hPPAR”)介导性疾病或病症的方法，包括给予治疗有效量的本发 明化合物。hPPAR介导性疾病或病症包括异常脂血症(包括相关糖尿 病性异常脂血症和混合型异常脂血症)、X综合征(见本申请定义，包 括代谢综合征)、心力衰竭、高胆固醇血症、心血管疾病(包括动脉粥 样硬化、动脉硬化和高甘油三酯)、II型糖尿病、I型糖尿病、胰岛素 抵抗、高脂质血症、炎症、上皮高增殖性疾病(包括湿疹和银屑病)、 肠道上皮以及肠道相关性疾病、以及调节肥胖、贪食症和神经性厌 食症等病症患者的食欲和食物摄取。具体来说，本发明化合物可用 于治疗或预防心血管疾病和病症，包括动脉粥样硬化、动脉硬化、 高甘油三酯血症和混合型异常脂血症。

另一方面，本发明提供包含本发明化合物以及优选包含药学上 可接受的稀释剂或载体的药用组合物。

另一方面，本发明提供本发明化合物在治疗、尤其在人类医学 中的用途。

另一方面，本发明提供本发明化合物在制备用于治疗hPPAR介 导性疾病或病症的药物中的用途。

另一方面，本发明提供一种治疗患有hPPAR介导性疾病或病症 的患者的方法，该方法包括给予治疗有效量的本发明化合物。

本文使用的“本发明化合物”是指式(I)化合物或其药学上可接 受的盐、溶剂化物或可水解酯。

虽然可水解酯包括在本发明范围内，但是优选酸，因为实验数 据显示虽然酯为有用的化合物，但实际上可能是其水解得到的酸为 活性化合物。容易水解的酯能够在测试条件或体内产生羧酸。通常， 在结合及瞬时转染分析中活性物质都为羧酸，而酯通常结合差，但 是在瞬时转染分析中有活性，推测可能是由于水解的原因。优选的 可水解酯为C1-6烷基酯，其中烷基可以为直链或支链。更优选甲基酯 或乙基酯。

X1优选O。

R1和R2优选甲基。

优选R3和R4之一为H，更优选R3和R4都为H。

R5优选H。

X2优选NH。

Z优选N。

Y优选S。

优选R6为任选取代的苯基。优选R6为单或双取代的。R6为吡 啶基时，优选其N在2位。R6优选在对位单取代，更优选为苯基。 优选的取代基为F、CF3、乙基或甲基。

虽然每个变量的优选基团已经全部单独各自列出，但是优选的 本发明化合物包括式(I)中几个或全部变量选自各变量的优选、更优 选或最优选的基团的化合物。因此，本发明包括优选、更优选以及 最优选基团的所有组合。

优选式(I)化合物为hPPAR激动剂。式(I)的hPPAR激动剂可以 为仅一种类型的激动剂(“选择性激动剂”)、两种PPAR亚型的激动 剂(“双重激动剂”)或所有三种亚型的激动剂(“全(pan)激动剂”)。 本文使用的“激动剂”、“活化化合物”或“活化剂”等是指这样 的化合物：在下述结合分析中对有关的PPAR(例如hPPARα)的pKi 至少为6.0，优选至少7.0，并且在下述转染分析中，浓度为10-5M 或10-5M以下时，相对于指定的适当阳性对照实现至少50％活化相 关PPAR。更优选，在相关转染分析中，浓度为10-6M或10-6M以 下时，本发明化合物实现50％活化至少一种人PPAR。更优选，在相 关转染分析中，浓度为10-7M或10-7M以下时，本发明化合物实现 50％活化至少一种人PPAR。

优选本发明化合物为hPPARα激动剂。

最优选式(I)化合物为选择性hPPARα激动剂。本文使用的“选 择性hPPARα激动剂”是一种hPPARα激动剂，其对PPARα的EC50 比对PPARγ和PPARδ的EC50低至少10倍。这样的化合物可以称为 “10倍选择性”。EC50在以下介绍的转染分析中定义，是某种化合 物达到其最大活性50％的浓度。最优选的化合物为100-倍以上的选 择性hPPARα激动剂。

本发明优选的化合物包括：

2-甲基-2-[4-{[(4-甲基-5-[4-乙基苯基]噻唑-2-基羰基)氨基]甲基} 苯氧基]丙酸乙酯。

2-甲基-2-[4-{[(4-甲基-5-[4-氟苯基]噻唑-2-基羰基)氨基]甲基}苯 氧基]丙酸乙酯。

本发明的更优选化合物包括：2-甲基-2-[4-{[(4-甲基-4-[4-氟苯基] 噻唑-2-基羰基)氨基]甲基}苯氧基]丙酸。

本发明特别优选的化合物是2-甲基-2-[4-{[(4-甲基-5-[4-乙基苯基] 噻唑-2-基羰基)氨基]甲基}苯氧基]丙酸。

本领域熟练技术人员可理解式(I)化合物存在立构中心。因此， 本发明包括式(I)的所有可能立体异构体和几何异构体，并且不仅包 括外消旋化合物，而且本发明同样包括这些异构体的每一种外消旋、 富集或纯净形式。当需要式(I)化合物为单一的对映异构体时，可以 通过以下方法获得：拆分最终产物；使用旋光性催化剂或旋光性配 体的催化体系或纯净的异构初始原料或任何适当的中间体进行立体 专一合成。拆分最终产物、中间体或初始原料可以通过本领域已知 的任何合适方法完成。参见例如，Stereochemistry of Carbon Compounds，E.L.Eliel(Mcgraw Hill，1962)和Tables of Resolving Agents，S.H.Wilen。另外，在式(I)化合物可能有互变异构体时，本 发明包括化合物的所有互变异构体形式。具体地讲，在许多本发明 优选化合物中，R1和R5连接的碳原子为手性的。在这些手性化合物 中，部分化合物对不同的PPAR受体的活性在S和R异构体之间有 差别。优选哪一种异构体取决于所需的化合物的具体用途。换句话 说，甚至使用同一种化合物，也可以在某些用途中优选S异构体， 而在某些用途中优选R异构体。

本领域熟练技术人员能够理解的是本发明化合物也可使用其药 学上可接受的盐或溶剂化物的形式。式(I)化合物的生理上可接受的 盐包括用药学上可接受的无机酸或有机酸或碱生成的常规盐以及季 铵酸加成盐。合适的酸盐的具体实例包括盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸 盐、磷酸盐、硝酸盐、高氯酸盐、富马酸盐、乙酸盐、丙酸盐、琥 珀酸盐、乙醇酸盐、甲酸盐、乳酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、柠檬 酸盐、扑酸盐(palmoic)、丙二酸盐、羟基马来酸盐、苯乙酸盐、谷氨 酸盐、苯甲酸盐、水杨酸盐、富马酸盐、甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、 萘-2-磺酸盐、苯磺酸盐、羟基萘甲酸盐、氢碘酸盐、苹果酸盐、steroic、 丹宁酸盐等。其它酸例如草酸，虽然本身不是药学上可接受的，但 是可以用于制备用于获取本发明化合物及其药学上可接受的盐的中 间体。合适的碱盐的具体实例包括钠盐、锂盐、钾盐、镁盐、铝盐、 钙盐、锌盐、N，N′-二苄基乙二胺盐、氯代普鲁卡因盐、胆碱盐、二 乙醇胺盐、乙二胺盐、N-甲基葡糖胺盐和普鲁卡因盐。在下文中提 及本发明化合物时，包括式(I)化合物及其药学上可接受的盐和溶剂 化物。

本发明化合物及其药学上可接受的衍生物适合以药用组合物的 形式给药。按照常规方法与一种或多种生理学上可接受的载体或赋 型剂混合可以方便地制备这样的组合物。

虽然可以治疗性给予本发明化合物的未加工化学品，但是优选 本发明活性成分以药用制剂给予。载体必须为“可接受的”是指载 体与制剂的其它成分相容并且不对其接受者产生有害作用。

因此，本发明还提供药用制剂，该制剂包含式(I)化合物或其药 学上可接受的盐或溶剂化物和一种或多种药学上可接受的载体，并 任选包含其它治疗性和/或预防性成分。

所述制剂包括适合口服、胃肠外(包括皮下(例如通过注射或贮库 型片剂(depot tablet)、真皮内、鞘内、肌内(例如通过贮库)和静脉内)、 直肠和局部(包括皮肤、含服和舌下)给药的制剂，但是最合适的途径 可以根据例如患者的身体状况和疾病选择。所述制剂可以为单位剂 型，并可以通过药学领域的任何众所周知的方法制备。所有方法包 括使化合物(“活性成分”)与由一种或多种辅助成分构成的载体结合 的步骤。一般来讲，制剂可以如下制备：使活性成分与液体载体或 微细固体载体或以上两种载体均匀并紧密地结合，如果需要，再将 产品成型为所需的制剂。

适合口服的制剂可以为分散单元例如胶囊剂、扁囊剂或片剂(例 如特别用于儿科给药的可咀嚼片剂)，每一单元包含预先确定数量的 活性成分；散剂或颗粒剂；在水性液体或非水性液体中的溶液剂或 混悬剂；或水包油的液体乳剂或油包水的液体乳剂。活性成分也可 以制成大丸药、干药糖剂或糊剂。

片剂可以通过任选与一种或多种辅助成分压制或模塑制备。压 制片剂可以如下制备：在合适的机器上将自由流动形式(例如粉末或 颗粒)的活性成分压制，活性成分任选与其它常规赋形剂混合，例如 粘合剂(例如糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨糖醇、西黄蓍胶、淀粉粘 浆或聚乙烯吡咯烷酮)、充填剂(例如乳糖、糖、微晶纤维素、玉米淀 粉、磷酸钙或山梨糖醇)、润滑剂(例如硬脂酸镁、硬脂酸、滑石粉、 聚乙二醇或二氧化硅)、崩解剂(例如马铃薯淀粉或淀粉乙醇酸钠)或 润湿剂(例如十二烷基硫酸钠)。模塑片剂可以如下制备：在合适的机 器上模塑用惰性液体稀释剂润湿的粉状化合物。片剂可以任选包衣 或或刻痕，并可以配制为提供缓释或控释活性成分的制剂。片剂可 以按照本领域众所周知的方法包衣。

或者，本发明化合物可以掺混到口服液体制剂中，例如水性或 油性混悬剂、溶液剂、乳剂、糖浆剂或酏剂。此外，包含上述化合 物的制剂可以为干燥产品，在临用前用水或其它合适的溶媒还原。 这样的液体制剂可以包含常规添加剂例如悬浮剂，例如山梨糖醇糖 浆、甲基纤维素、葡萄糖/糖的糖浆、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基 纤维素、硬脂酸铝凝胶或氢化可食用脂肪；乳化剂，例如卵磷脂、 脱水山梨糖醇单油酸酯或阿拉伯胶；非水性溶媒(可包括可食用油)， 例如杏仁油、分馏的椰子油、油性酯、丙二醇或乙醇；防腐剂，例 如对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸。这样的制剂还 可以配制为栓剂，例如包含常规栓剂的基底例如椰子油或其它甘油 酯。

胃肠外给药制剂包括水性和非水性无菌注射溶液，所述溶液中 可以包含抗氧剂、缓冲剂、制菌剂以及使制剂与预期接受者的血液 等渗的溶质；水性和非水性无菌悬浮液，所述悬浮液可以包括悬浮 剂和增稠剂。

制剂可以置于单位剂量容器或多剂量容器中，例如密封的安瓿 和小瓶，并且可以在冷冻干燥条件下贮存，只需要在临用前加入无 菌液体载体，例如注射用水。临时注射溶液和悬浮液可以用无菌粉 末、颗粒和前述类型的片剂制备。

直肠给药制剂可以为含有常用载体(例如椰子油、固体脂肪或聚 乙二醇)的栓剂。

在口腔局部给药(例如含服或舌下)的制剂包括锭剂，其中包含活 性成分和调味基例如蔗糖和阿拉伯胶或西黄蓍胶；软锭剂，其中包 括活性成分和基底例如明胶和甘油或蔗糖和阿拉伯胶。

本发明化合物还可以配制为贮库制剂。这样的长效制剂可以通 过埋入法(例如皮下或肌内)或肌内注射给药。由此举例来讲，化合物 可以与适当的聚合材料或疏水材料(例如为在可接受的油中的乳剂)或 离子交换树脂配制，或配制为低溶解性衍生物，例如低溶解性盐。

除了以上特别提到的成分外，制剂还可以包括本领域中配制所 考虑类型的其它常规试剂，例如适合口服的制剂中可包含调味剂。

本领域熟练技术人员能够理解本文提到治疗时包括预防以及治 疗确定的疾病或病症。此外，应当理解本发明化合物在治疗中的用 量将根据所治疗疾病的性质、患者的年龄和身体状况变化，并且最 终由主治医师或兽医决定。然而一般来讲，用于成人治疗的剂量通 常为0.02-5000mg/天，优选1-1500mg/天。所需剂量可以方便地以 单剂量或以合适间隔(例如每天2、3、4或更多次)的分剂量给药。本 发明制剂可以含有0.1-99％的活性成分，片剂和胶囊剂适合含有30- 95％，液体制剂适宜含有3-50％。

本发明使用的式(I)化合物可以与其它治疗药物联合使用，例如 他汀和/或其它降脂药例如MTP抑制剂和LDLR上调剂。本发明化合 物还可与抗糖尿病药联合应用，例如甲福明、磺酰脲类和/或PPARγ 激动剂(例如噻唑烷二酮如吡格列酮和罗西格列酮)。化合物还可以与 抗高血压药联合应用，例如钙通道拮抗剂和ACE抑制剂。由此，本 发明另一方面提供包含式(I)化合物和进一步的治疗药物的组合在治 疗hPPARα介导性疾病中的用途。

当式(I)化合物与其它治疗药物联合应用时，所述化合物可以通 过任何常规途径序贯或同时给药。

以上提到的组合在使用中可以药用制剂形式出现，因此，包含 以上定义的组合并最好包含药学上可接受的载体或赋形剂的药用制 剂构成本发明的另一方面。这样的组合中各独立组分可以单独或混 合的药用制剂形式序贯或同时给药。

当混合在同一制剂时，应当理解的是两种化合物必须稳定、相 互兼容并与制剂中其它组分相容，并且可以配制用于给药。当单独 配制时，它们可以以本领域所述各化合物已知的方式方便地提供为 任何合适的制剂。

当式(I)化合物与第二种对相同hPPAR介导性疾病有活性的治疗 药物联合应用时，每种化合物的剂量可能与单独使用各化合物时的 剂量不同。本领域熟练技术人员很容易确定合适的剂量。

本发明化合物可以方便地通过常规步骤制备：其中采用肽偶合 反应使如(A)的部分与酸(B)偶合，或者用酯(C)酰化(A)。式(C)中R优 选C1-6烷基。注意此合成优选在A部分的酸基团被R保护下完成。 因此虽然R可以为H，但是优选R为C1-6烷基，它可以通过水解脱 去得到式(I)酸，或者如果容易水解，可以直接给予得到的酯。化合 物(A)、(B)和(C)可以按照例如以下的实施例演示合成。此类型的中 间体可以由市售获得，或者其制备对于本领域熟练技术人员是显而 易见的，例如通过下述类似方法。

当X1为O，X2为NH(R1、R2为甲基，R3、R4、R5为H)时，(A) 的优选合成法为：

注意在此合成中可以使用羧酸B(方法A)或酯C(方法B)。例如， 当X1为O，X2为NH，Y为S，Z为N，R1＝R2＝甲基，R3＝R4＝R5＝H， R6为4-Et-苯基时：

当X1和X2为0时，式(1)化合物可以采用DIC/DMAP/NEt3使式 (B)化合物与式(A)化合物反应。

本发明进一步通过以下中间体和实施例进行说明，但不应解释 为对本发明的限制。

中间体1：

在35min内，向冷却至15℃的212.8g(1.79mol)对羟基苯甲腈 的1.7LDMF(8vol.)溶液中分批加入121g(3.04mol.，1.7eq.)分散于 石蜡中的NaH(60％)。在返至室温后，将混合物搅拌30min，在1小 时内缓慢加入393mL(2.68mol.，1.5eq.)溴代异丁酸乙酯。在加料期 间，通过冷却使惰性温度保持在25℃以下，因为发生了轻微的放热 反应。将混合物在室温下搅拌过夜，在80℃加热2h。在冷却至20 ℃以下后，加入600ml 1N氢氧化钠溶液破坏过量的氢化钠。水溶液 用1L乙醚萃取3次。合并的有机层用200ml 1N氢氧化钠溶液(消 除痕量对羟基苯甲腈)和500ml盐水洗涤两次。用硫酸镁干燥后，过 滤并浓缩至干，倾析油状残余物，除去33.5g石蜡油(上层)。估计189.9 g油状残余物与14.9g残余石蜡油混合。粗制中间体1直接使用无需 再提纯。估计产率约为42％(约175g)。

中间体2：

在1L氢化器中，59.3g中间体1(0.254mol(最多)、43.6ml(0.762 mol.，3eq.)冰醋酸和6g(10％w/w)Pd/C 10％在250ml乙醇中的混合 物在室温、2bar下氢化。在8h吸收8.7L氢(理论体积：11.4L)后反 应停止。过滤出催化剂后，将溶液蒸发至干获得中间体2的醋酸盐(油 状残余物)。将残余物倾入300ml水(pH＝5)中，水层用200ml环己 烷萃取两次。在此操作期间，出现树胶状固体，将其留在水层中(可 能是部分醋酸盐)。加入400ml乙酸乙酯后，两相混合物冷却至15℃， 用500ml 1N NaOH溶液处理(至pH＝12)。在倾析后，水层用400ml 乙酸乙酯萃取两次。合并的有机层用200ml盐水洗涤。有机层用硫 酸镁干燥，过滤并真空蒸发获得35.5g粗制中间体2(黄色油状物， 58.9％收率)，将其直接用于下一步无需再提纯(LC-MS纯度＝约 90％)。

中间体3：

在10-12℃，向200g(1.23mol，Avocado)4-乙基苯基丙酮的800ml 乙酸溶液中滴加61.8ml(1eq.)溴的600ml乙酸溶液2h。在加入最后 阶段，将混合物搅拌5min，然后用水(2L)处理。冷却后，加入100g Na2SO3，将所得混合物在室温下搅拌1h。倾析两相混合物，水层用 1L CH2Cl2萃取两次。全部有机层用1L水洗涤，用硫酸钠干燥。在 过滤并浓缩至干后，获得288g褐色油状物(97％收率)。

中间体4：

288g(1.19mol)中间体3的2.9L乙醇溶液中加入158.8g(1eq.， Acros)硫代草氨酸乙酯。将溶液在室温下搅拌1h，然后回流1h。在 蒸发乙醇后，黑色残余物用1L水稀释，用3×500ml CH2Cl2萃取。 有机层用500ml水洗涤两次。用硫酸钠干燥后，减压蒸发得到32.6g 粗制油状物。用色谱法提纯(98∶2石油醚/乙酸乙酯)得到30.9g灰色 油状中间体4(60.6％收率)。

中间体5：

0.6g中间体4(22mmol)的10ml乙醇溶液中加入6.5ml(13eq.) NaOH 1N。将混合物在回流下搅拌30min，然后减压浓缩。残余物 用水稀释，用乙醚萃取。水层用HCl 1N酸化，用CH2Cl2萃取。有 机层用硫酸钠干燥，过滤并真空蒸发获得0.4g黄色固体中间体 5(73.6％收率)。

MS m/z 248(M+1)

中间体6：

在10℃，向10g(65.8mmol，Aldrich)4-氟苯基丙酮的100ml 苯溶液中滴加10.5g(1eq.)溴。将反应混合物在室温下搅拌1h。在 反应末期，将氮通入反应混合物中。真空浓缩混合物，蒸馏所得油 状物获得9g油状物(收率＝59％)。Eb＝130-135℃，20mm Hg。

中间体7：

1g(4.33mmol)中间体6的30ml乙醇溶液中加入0.54g(1eq.， Acros)硫代草氨酸乙酯。将溶液在回流下搅拌过夜。真空浓缩溶液， 油状残余物用水稀释，用CH2Cl2萃取。有机层用盐水洗涤，用硫酸 钠干燥，减压蒸发。所得粗制油状物用色谱法处理(99∶1二氯甲烷/甲 醇)获得0.26g褐色固体中间体7(收率＝22.6％)。m.p：69-70℃。

中间体8：

1.5中间体7(5.66mmol)的50ml乙醇溶液中加入20ml NaOH1N。将混合物在回流下搅拌30min，然后减压浓缩。残余物用水稀 释，用乙醚萃取。水层用HCl 1N酸化，用CH2Cl2萃取。有机层用 硫酸钠干燥，过滤并蒸发至干获得乳白色固体中间体7(0.81g，60％ 收率)。m.p：140℃。

实施例1：

2-甲基-2-[4-{[(4-甲基-5-[4-乙基苯基]噻唑-2-基羰基)氨基]甲基}苯氧 基]丙酸乙酯

方法A

250mg中间体2(1mmol)的10ml二氯甲烷溶液中加入174mg HOBT(1.3eq.)、284mg EDC(1.3eq.)、260mg中间体5(1eq.)和130 mg三乙胺(1.3eq.)。将反应混合物在室温下搅拌2天。将混合物用稀 NaOH处理，用CH2Cl2萃取。有机层用稀HCl、水洗涤，用硫酸钠 干燥。真空蒸发后，所得粗制油状物用色谱法提纯(99∶1二氯甲烷/甲 醇)获得100mg油状实施例1(21.5％收率)。

方法B

26.93g(97.9mmol)中间体4和46.5g(2eq.)中间体2的300ml 乙醇溶液中加入85.3ml(5eq.)二异丙基乙胺。将反应混合物在回流 下搅拌2天。为了完全反应，加入23.5g(1eq.)中间体2的50mol乙 醇。将反应混合物在回流下搅拌7h，再加入1当量中间体2(23.5g)。 将混合物保持回流24h。真空浓缩反应物，残余物用水稀释，用NaOH1N碱化。水层用乙酸乙酯(3×300ml)萃取，有机层用HCl 1N、NaHCO3饱和溶液和盐水洗涤。整个有机层用硫酸镁干燥，过滤，蒸发至干。 所得粗制油状物用色谱法处理(80∶20石油醚/乙酸乙酯)获得无色油状 实施例1(40.9g，收率＝89.6％)。

1H NMR(CDCl3)：δ7.57(m，1H)，7.29(d，2H)，7.15-7.21(m， 4H)，6.75(d，2H)，4.50(d，2H)，4.16(q，2H)，2.62(q，2H)，2.40(s， 3H)，1.52(s，6H)，1.20(s，3H)，1.10(s，3H)。

实施例2：

2-甲基-2-[4-{[(4-甲基-5-[4-乙基苯基]噻唑-2-基羰基)氨基]甲基}苯氧 基]丙酸

100mg(0.21mmol.)实施例1的5ml乙醇溶液中加入0.63ml(3 eq.)NaOH(1N)。将溶液在回流下搅拌30min。减压除去溶剂后，残 余物用水稀释，用HCl 1N酸化至PH＝1。水层用CH2Cl2萃取，用硫 酸钠干燥。在过滤并浓缩至干后，将油状残余物与CH2Cl2和戊烷的 混合物合并。过滤固体，真空烘箱中干燥获得白色固体实施例2(50 mg，收率＝53.2％)，mp＝159-162℃。MS m/z 467(M+1)。

1H NMR(CDCl3)：δ7.57(m，1H)，7.18(d，2H)，7.10(d，2H)， 6.74(d，2H)，4.41(d，2H)，2.52(q，2H)，2.30(s，3H)，1.43(s，6H)， 1.10(s，3H)。

实施例3：

2-甲基-2-[4-{[(4-甲基-5-[4-氟苯基]噻唑-2-基羰基)氨基]甲基}苯氧基] 丙酸乙酯

320mg中间体2(1.35mmol)的30ml二甲基甲酰胺溶液中加入 240mg HOBT(1.3eq.)、340mg EDC(1.3eq.)、320mg中间体7(1eq.) 和0.25ml三乙胺(1.3eq.)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。减压蒸 发混合物，用水稀释，用CH2Cl2萃取。有机层用水和盐水洗涤，用 硫酸钠干燥，真空蒸发。所得粗制油状物用色谱法提纯(99∶1二氯甲 烷/甲醇)获得330mg白色固体实施例1(收率＝53.5％)。m.p：97℃。MS m/z 457(M+1)。

实施例4：

2-甲基-2-[4-{[(4-甲基-5-[4-氟苯基]噻唑-2-基羰基)氨基]甲基}苯氧基] 丙酸

310mg(0.68mmol.)实施例3的25ml四氢呋喃溶液中加入2ml(5 eq.)LiOH 1N。将溶液在50℃搅拌30min。为了完全反应，加入2ml NaOH 1N，将溶液在50℃搅拌1h。减压除去溶剂后，残余物用水稀 释，水层用乙醚萃取。水层用5.4ml HCl N处理，用乙醚萃取。有机 层用硫酸钠干燥，过滤并真空蒸发得到固体，将其用二异丙基醚重 结晶获得230mg白色固体实施例4(72％收率)，mp＝122℃。MS m/z 429(M+1)。

结合测定

使用闪烁近似测定(SPA)检测化合物结合hPPARγ、hPPARα或 PPARδ的能力。PPAR配体结合结构域(LBD)在大肠杆菌表达polyHis 标记的融合蛋白，对其进行纯化。然后用生物素标记LBD，将其固 定在链霉抗生物素蛋白修饰的闪烁近似珠上。之后将珠与恒定量合 适放射性配体(PPARγ为3H-BRL 49653，hPPARα为放射性标记的2- (4-(2-(2，3-二氚-1-庚基-3-(2，4-二氟苯基)脲基)乙基)苯氧基)-2-甲基丁 酸(参见WO 00/08002)，PPARδ为标记GW 2433(关于该配体的结构 和合成参见Brown，P.J等，Chem.Biol.1997，4，909-918)和不同浓度 的受试化合物温育，平衡后用闪烁计数仪检测结合在珠子上放射性。 每个数据减去非特异性结合量，非特异性结合量为含有50μM相应 未标记配体的对照孔的测定值。对于每种所测试的化合物，对配体 浓度与结合的放射性配体CPM作图，假定为单纯竟争性结合的前提 下，根据非线性最小二乘方拟合数据估算表观K1值。另见有关该测 定细节的报道(参见Blanchard，S.G.等，Development of a Scintillation Proximity Assay for Peroxisome Proliferator-Activated Receptor gamma Ligand Binding Domain.Anal.Biochem.1998，257，112-119)。

转染测定：

制备以下配体用于下述转染测定。

(i)2-{2-甲基-4-[({4-甲基-2-[4-(三氟甲基)苯基]-1，3-噻唑-5-基}甲 基)硫基]苯氧基}乙酸

该化合物用作下述转染测定中的PPARδ对照，根据 WO200100603-A1报道的方法制备。

(ii)2-甲基-2-[4-{[(4-甲基-2-[4-三氟甲基苯基]-噻唑5-基-羰基)氨 基]甲基}-苯氧基]丙酸

该化合物用作下述转染测定中的PPARα对照，根据 WO200140207-A1报道的方法制备(如下所述重新制备)。

中间体(a)：

按照Stout，D.M.J.Med.Chem.1983，26(6)，808-13的相同步 骤制备。向4-甲氧基苄基胺(25g，0.18mol；Aldrich)加入46％HBr 的H2O(106ml，0.9mol；Aldrich)溶液。将反应物回流过夜，然后将 反应物冷却至0℃，用氢氧化钾缓慢中和至pH7。搅拌反应物～30 min，然后滤出固体并干燥。将固体重新溶于热MeOH，过滤，将溶 液冷却得到19g(85％)中间体1。1H NMR(DMSO-d6)：δ8.0(bs，1H)， 7.2(d，2H)，6.75(d，2H)，3.85(s，2H)，3.50(bs，2H)。

中间体(b)：

将2-氯乙酰乙酸乙酯(35.3g，29.7mL，0.21mol)和4-(三氟甲基) 硫代苯甲酰胺(44g，0.21mol)的EtOH(300mL)溶液回流过夜。冷却至 室温后，真空除去溶剂。最终产物(中间体(b))用最少量MeOH重结 晶得到40g(59％)白色固体终产物；1H NMR(CDCl3)：δ8.10(d，2H)， 7.70(d，2H)，4.40(q，2H)，2.80(s，3H)，1.4(t，3H)。

中间体(c)：

中间体(b)(1.84g，5.8mmol)的THF溶液中加入1N LiOH(6mL， 6mmol)，将反应物在室温下搅拌。在～3h后，将反应物用1N HCl中和，用3×100mL EtOAc萃取，用硫酸钠干燥，过滤，真空除去 溶剂后得到1.5g(89％)白色固体中间体(b)。1H NMR(DMSO-d6)：δ 13.55(bs，1H)，8.25(d，2H)，7.95(d，2H)，2.75(s，3H)。

中间体(d)：

中间体(c)(1g，7mmol)的CH2Cl2/DMF(1∶1)溶液中加入HOBT (565mg，4.2mmol；Aldrich)、EDC(800mg，4.2mmol；Aldrich)和中 间体1(860mg，7mmol)。将反应物在室温下搅拌18h。真空除去溶 剂，用H2O处理，用3×100ml CH2Cl2萃取。合并有机相，用1N HCl洗涤，用硫酸钠干燥，过滤，蒸发获得混合物(N-取代的和N，O-取代 的)。将混合物溶于甲醇，用1N NaOH处理。将反应物在50℃搅拌18h。 真空除去溶剂，溶于CH2Cl2，用H2O洗涤，用硫酸钠干燥。蒸发溶 剂，残余物用色谱法处理(CH2Cl2/MeOH：99/1)得到610mg(47％)白 色固体中间体6。1H NMR(DMSO-d6)：9.30(s，1H)，8.80(t，1H)，8.20 (d，2H)，6.70(d，2H)，4.35(d，2H)，2.6(s，3H)。

中间体(e)：

2-甲基-2-[4-{[(4-甲基-2-[4-三氟甲基苯基]噻唑-5-基羰基)氨基]甲 基}苯氧基]丙酸乙酯

中间体(d)(710mg，1.81mmol)的DMF(50mL)溶液中加入K2CO3(275mg，1.99mmol)，然后加入2-溴-2-甲基丙酸乙酯(280μL，1.91 mmol；Aldrich)，将反应物加热至80℃。在18h后，将反应物冷却 至室温，真空除去溶剂。残余物用水(200mL)处理，用3×50mL CH2Cl2萃取，用硫酸钠干燥，过滤，真空除去溶剂。残余物用色谱法处理 (CH2Cl2/MeOH：99/1)。得到680mg(77％)澄清油状实施例1。1H NMR (CDCl3)：δ7.95(d，2H)，7.60(d，2H)，7.15(d，2H)，6.75(d，2H)， 6.05(t，1H)，4.45(d，2H)，4.15(q，2H)，2.65(s，3H)，1.50(s，6H)， 1.20(t，3H)。

2-甲基-2-[4-{[(4-甲基-2-[4-三氟甲基苯基]-噻唑-5-基羰基)氨基] 甲基}苯氧基]丙酸

中间体(e)(680mg，1.39mmol)的MeOH溶液中加入1N NaOH(1.6 mL，1.6mmol)，将反应物在60℃搅拌。在18h后，将反应物冷却 至室温，蒸发溶剂。残余物用1N HCl处理，用3×20mL THF萃取， 真空除去溶剂。从最小量的二氯甲烷和戊烷中沉淀出500mg(75％)白 色固体标题化合物。mp：在60-70℃改变形态；LC/MS(m/z)：477.22 (100％，AP-)，479.12(100％，AP+)；C23H21F3N2O4S计算值：C5.71 (57.73)，H4.56(4.42)，N5.77(5.85)，S6.15(6.70)。

(iii)5-{4-[2-(甲基-吡啶-2-基-氨基)-乙氧基]-苄基}-噻唑烷-2，4-二 酮

此化合物在下述转染测定中用作PPARγ对照，根据J.Med.Chem. 1994，37(23)，3977中介绍的方法制备。

用瞬时转染测定法筛选化合物的功能潜能，确定在CV-1细胞中 激活PPAR亚型的能力。应用以前建立的嵌合受体系统比较多种受 体亚型对相同靶基因的相对转录活性，防止内源性受体激活以免对 结果的解释复杂化。参见例如Lehmann，J.M.；Moore，L.B.；Smith- Oliver，T.A.；Wilkison，W.O.；Willson，T.M.；Kliewer，S.A.，An antidiabetic thiazolidinedione is a high affinity ligand for peroxisome proliferator-activated receptor gamma(PPARgamma)，J.Biol.Chem.， 1995，270，12953-6。分别使小鼠和人PPARα、PPARγ和PPARδ的配 体结合结构域与酵母转录因子GAL4 DNA结合结构域融合。用相应 PPAR嵌合体和含5拷贝GAL4 DNA结合位点的报道构建物的表达 载体瞬时转染CV-1细胞，其中GAL4 DNA结合位点驱动表达分泌 型胎盘碱性磷酸酶(SPAP)和β-半乳糖苷酶。16小时后，培养基更换 为加有10％去脂胎牛血清和适当浓度受试化合物的DME培养基。24 小时后，制备细胞提取物，分析碱性磷酸酶和β-半乳糖苷酶活性。使 用β-半乳糖苷酶活性作为内标校正碱性磷酸酶活性的转染效率(参见 例如Kliewer，S.A.等，Cell 83，813-819(1995))。罗格列酮(BRL 49653) 用作hPPARγ测定的阳性对照。hPPARα测定的阳性对照为2-(2-甲基- 3-[3-{3-(4-环己基氨基)-[6-(4-氟苯基哌嗪-1-基)][1，3，5]三嗪-2-基氨基} 丙基]苯硫基)-2-甲基丙酸。PPARδ测定的阳性对照为2-{2-甲基-4-[({4- 甲基-2-{三氟甲基}苯基]-1，3-噻唑-5-基}甲基)硫基]苯氧基}乙酸。

下表报告了最优选化合物在3个hPPAR亚型测定中的活性，用 纳摩尔表示。     实施例     EC50nM     HPPARα     EC50nM     HPPARδ     EC50nM     HPPARγ     2     5     8740     700     4     61     10000     5882