用补体抑制剂治疗慢性障碍的方法
阅读：198发布：2021-01-16
专利汇可以提供用补体抑制剂治疗慢性障碍的方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且在某些方面，本 发明 提供了 治疗 需要治疗补体介导的慢性障碍的受试者的方法。在某些方面，本发明提供了治疗需要治疗Th17-相关的障碍的受试者的方法。在某些方面，本发明提供了治疗需要治疗慢性呼吸系统障碍的受试者的方法。在某些方面，本发明提供了将补体 抑制剂 施用给受试者的方法。在某些实施方案中，一种治疗受试者的方法包括：根据 给药 方案给所述受试者施用多次剂量的补体抑制剂，所述给药方案在慢性呼吸障碍中实现延长的补体抑制作用。在某些实施方案中，受试者具有慢性阻塞性 肺 疾病 。在某些实施方案中，受试者患有哮喘。，下面是用补体抑制剂治疗慢性障碍的方法专利的具体信息内容。
1.一种治疗需要治疗慢性呼吸障碍或补体介导的其它慢性障碍的受试者的方法，所述方法包括：根据给药方案给所述受试者施用多次剂量的补体抑制剂，在所述给药方案中，如下平均施用连续给药：(i)在所述补体抑制剂的血浆浓度降低至不超过前一次给药后达到的最大血浆浓度的20％以后至少2周；(ii)在血浆补体激活能力已经恢复至前一次给药后的基线的至少50％以后至少2周；(iii)以等于所述补体抑制剂的终末血浆半衰期的至少
2倍的间隔；或(iv)以隔开至少3周的间隔。
2.根据权利要求1所述的方法，其中如下平均施用所述补体抑制剂的连续给药：(i)在所述补体抑制剂的血浆浓度降低至不超过前一次给药后达到的最大血浆浓度的20％以后
2周至6周；(ii)在血浆补体激活能力已经恢复至前一次给药后的基线的至少50％以后2周至6周；(iii)以等于所述补体抑制剂的终末血浆半衰期的2-5倍的间隔；或(iv)以隔开3周至6周的间隔。
3.根据权利要求1所述的方法，其中隔开至少4周平均施用所述补体抑制剂的连续给药。
4.根据权利要求1所述的方法，其中在血浆补体激活能力已经恢复至前一次给药后的正常范围内以后至少2周，平均施用所述补体抑制剂的连续给药。
5.根据权利要求1所述的方法，其中在所述补体抑制剂的血浆浓度降低至不超过前一次给药后达到的最大血浆浓度的10％以后至少2周，平均施用所述补体抑制剂的连续给药。
6.根据权利要求1所述的方法，其中在所述补体抑制剂的血浆浓度降低至不超过前一次给药后达到的最大血浆浓度的5％以后至少2周，平均施用所述补体抑制剂的连续给药。
7.根据权利要求1所述的方法，其中至少部分地基于在受试者群体中测得的补体抑制剂血浆浓度、补体抑制剂血浆半衰期和/或血浆补体激活能力的值，确定所述给药方案。
8.根据权利要求1所述的方法，其中至少部分地基于被治疗的受试者的补体抑制剂血浆浓度、补体抑制剂血浆半衰期和/或血浆补体激活能力的值，确定所述给药方案。
9.根据权利要求1-8中的任一项所述的方法，其中施用至少5次给药。
10.根据权利要求1-9中的任一项所述的方法，其中所述受试者需要治疗哮喘、慢性阻塞性肺疾病(COPD)或二者。
11.根据权利要求1-9中的任一项所述的方法，其中所述受试者需要治疗严重哮喘。
12.根据权利要求1-11中的任一项所述的方法，其中通过呼吸途径施用所述补体抑制剂。
13.根据权利要求1-11中的任一项所述的方法，其中使用喷雾器、计量剂量吸入器或干粉吸入器，施用所述补体抑制剂。
14.根据权利要求1-11中的任一项所述的方法，其中使用振动网喷雾器，施用所述补体抑制剂。
15.根据权利要求1-11中的任一项所述的方法，其中通过静脉内途径施用所述补体抑制剂。
16.根据权利要求1-15中的任一项所述的方法，其中所述补体抑制剂作用于C3或补体级联中的C3的上游。
17.根据权利要求1-15中的任一项所述的方法，其中所述补体抑制剂会抑制C3、C5或因子B的裂解。
18.根据权利要求1-15中的任一项所述的方法，其中所述补体抑制剂包含抗体、适体、肽、多肽或小分子。
19.根据权利要求1-15中的任一项所述的方法，其中所述补体抑制剂包含结合C3、C5、因子B或因子D的抗体、适体、肽、多肽或小分子。
20.根据权利要求1-15中的任一项所述的方法，其中所述补体抑制剂包含坎普他汀类似物。
21.根据权利要求1-15中的任一项所述的方法，其中所述补体抑制剂包含坎普他汀类似物，其序列包含SEQ ID NO：14、21、28、29、32、33、34或36。
22.根据权利要求1-15中的任一项所述的方法，其中所述补体抑制剂包含坎普他汀类似物，其序列包含SEQ ID NO：3-41中的任一个。
23.根据前述权利要求中的任一项所述的方法，其中所述补体介导的障碍是Th17-相关的障碍。
24.根据前述权利要求中的任一项所述的方法，所述方法包括：检测所述受试者中或得自所述受试者的样品中的Th17生物标志物。
25.根据权利要求24所述的方法，其中在包含体液的样品中检测所述Th17生物标志物，其中所述体液任选地选自血液、BAL流体、痰、鼻分泌物或尿或它们的组合。
26.根据权利要求24所述的方法，其中所述生物标志物包含至少一种由Th17细胞产生的细胞因子或促进Th17细胞的形成、存活或活性的细胞因子。
27.根据权利要求24所述的方法，其中所述Th17生物标志物的水平相对于参照的增加指示，所述受试者需要一剂所述补体抑制剂。
28.根据权利要求27所述的方法，其中所述参照是在没有遭受所述障碍的人的正常范围内，或者是当所述障碍得到良好控制时所述受试者的基线值。
29.根据权利要求24所述的方法，其中所述Th17生物标志物在施用一剂所述补体抑制剂之前进行检测，并充当所述受试者需要一剂所述补体抑制剂的指标。
30.根据权利要求24所述的方法，其中所述生物标志物在施用一剂所述补体抑制剂之前进行检测，并充当所述受试者需要一剂所述补体抑制剂的指标，且所述方法包括：在检测所述生物标志物以后的预定时间段内施用所述补体抑制剂。
31.根据权利要求30所述的方法，其中所述预定时间段是1、2、3、4、5、6或7天或2、3或4周。
32.一种治疗需要治疗补体介导的慢性障碍的受试者的方法，所述方法包括：(a)给所述受试者施用至少一剂补体抑制剂；和(b)针对所述受试者中或得自所述受试者的样品中的Th17生物标志物，监测所述受试者。
33.根据权利要求32所述的方法，所述方法进一步包括：(c)给所述受试者施用至少一剂额外的所述补体抑制剂。
34.根据权利要求32所述的方法，其中步骤(b)包括：检测所述受试者中或得自所述受试者的样品中的Th17生物标志物。
35.根据权利要求32所述的方法，其中步骤(b)包括：检测所述生物标志物的水平相对于参照的增加，其中增加的水平指示，所述受试者需要一剂所述补体抑制剂。
36.根据权利要求32所述的方法，其中步骤(b)包括：检测所述生物标志物的水平相对于参照的增加，其中增加的水平指示，所述受试者需要一剂所述补体抑制剂，且所述方法进一步包括：(c)给所述受试者施用至少一剂额外的所述补体抑制剂。
37.根据权利要求32所述的方法，其中步骤(b)包括：检测所述生物标志物的水平相对于参照的增加，其中增加的水平指示，所述受试者需要一剂所述补体抑制剂，且所述方法进一步包括：(c)在检测所述生物标志物的预定时间内，给所述受试者施用至少一剂额外的所述补体抑制剂。
38.根据权利要求37所述的方法，其中所述预定时间段是1、2、3、4、5、6或7天或2、3或4周。
39.根据前述权利要求中的任一项所述的方法，所述方法进一步包括：给所述受试者施用抗-Th17试剂。
40.根据权利要求39所述的方法，其中所述抗-Th17试剂包含抑制Th17细胞的形成或活性的试剂。
41.根据权利要求39所述的方法，其中所述抗-Th17试剂包含这样的药剂：所述药剂抑制由Th17细胞产生的细胞因子的产生或活性，或者所述药剂促进Th17细胞的形成或活性。
42.根据权利要求39所述的方法，其中所述抗-Th17试剂包含这样的药剂：所述药剂抑制IL-1β、IL-6、IL-21、IL-22、IL-17或IL-23的产生或活性。
43.根据权利要求39所述的方法，其中所述抗-Th17试剂包含抗体、小分子、适体、多肽或RNAi试剂。
44.根据权利要求39所述的方法，其中所述抗-Th17试剂包含抗体、小分子、适体或多肽，其结合IL-1β、IL-6、IL-21、IL-22、IL-17或IL-23或结合前述任一种的受体。
45.一种药物组合物，其包含补体抑制剂和抗-Th17试剂。
46.根据权利要求45所述的药物组合物，其中所述补体抑制剂会抑制C3活性或C3激活。
47.根据权利要求45所述的药物组合物，其中所述补体抑制剂包含坎普他汀类似物。
48.根据权利要求45-47中的任一项所述的药物组合物，其中所述抗-Th17试剂包含抗体、小分子、适体或多肽，其结合IL-1β、IL-6、IL-21、IL-22、IL-17或IL-23或结合前述任一种的受体。
49.一种治疗补体介导的障碍的方法，所述方法包括：给有此需要的受试者施用根据权利要求45-48中的任一项所述的组合物。
50.一种治疗Th17-相关的障碍的方法，所述方法包括：给有此需要的受试者施用根据权利要求45-48中的任一项所述的组合物。
51.一种破坏DC-Th17-B-Ab-C-DC循环的方法，所述方法包括：给有此需要的受试者施用根据权利要求45-48中的任一项所述的组合物。
52.根据权利要求49-51中的任一项所述的方法，所述方法包括：针对
DC-Th17-B-Ab-C-DC循环的证据，监测所述受试者。
53.根据权利要求49-51中的任一项所述的方法，所述方法包括：针对DC-Th17-B-Ab-C循环的证据，监测所述受试者，和至少部分地基于所述监测的结果，给所述受试者施用所述组合物。
54.根据权利要求49-51中的任一项所述的方法，所述方法包括：针对Th17生物标志物，监测所述受试者。
55.根据权利要求49-51中的任一项所述的方法，所述方法包括：针对Th17生物标志物，监测所述受试者，和至少部分地基于所述监测的结果，给所述受试者施用所述组合物。
56.一种治疗患有补体介导的障碍或处于所述障碍风险中的受试者的方法，所述方法包括：针对DC-Th17-B-Ab-C-DC循环的证据，监测所述受试者，和至少部分地基于所述监测的结果，给所述受试者施用补体抑制剂。
57.根据权利要求56所述的方法，所述方法进一步包括：给所述受试者施用抗-Th17试剂。
58.一种治疗患有补体介导的障碍或处于所述障碍风险中的受试者的方法，所述方法包括：针对DC-Th17-B-Ab-C-DC循环的证据，监测所述受试者，和至少部分地基于所述监测的结果，给所述受试者施用补体抑制剂和抗-Th17试剂。
59.一种治疗患有Th17-相关的障碍或处于所述障碍风险中的受试者的方法，所述方法包括：针对DC-Th17-B-Ab-C-DC循环的证据，监测所述受试者，和至少部分地基于所述监测的结果，给所述受试者施用补体抑制剂。
60.根据权利要求59所述的方法，所述方法进一步包括：给所述受试者施用抗-Th17试剂。
61.一种治疗患有Th17-相关的障碍或处于所述障碍风险中的受试者的方法，所述方法包括：针对DC-Th17-B-Ab-C-DC循环的证据，监测所述受试者，和至少部分地基于所述监测的结果，给所述受试者施用补体抑制剂和抗-Th17试剂。
62.根据权利要求56-61中的任一项所述的方法，其中所述补体抑制剂会抑制C3活性或C3激活。
63.根据权利要求56-61中的任一项所述的方法，其中所述补体抑制剂包含坎普他汀类似物。
64.根据权利要求56-63中的任一项所述的方法，其中所述抗-Th17试剂包含抗体、小分子、适体或多肽，其结合IL-1β、IL-6、IL-21、IL-22、IL-17或IL-23或结合前述任一种的受体。
65.根据权利要求56-64中的任一项所述的方法，其中针对DC-Th17-B-Ab-C-DC循环的证据，监测所述受试者包括：评估所述受试者中或得自所述受试者的样品中的Th17-相关的生物标志物。
66.根据权利要求56-65中的任一项所述的方法，其中大约每1-2周、2-4周或大约每
1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月进行监测。
67.根据权利要求56-65中的任一项所述的方法，所述方法包括：在已经检测到DC-Th17-B-Ab-C-DC循环的证据或增加的Th17-相关的生物标志物水平的不超过1、2、3、4、
5、6或7天或2、3或4周内，施用补体抑制剂、抗-Th17试剂或二者。
68.一种治疗需要治疗AMD的受试者的方法，所述方法包括：给所述受试者施用抗-IL-23试剂。
69.根据权利要求68所述的方法，其中将所述试剂局部地施用至眼。
70.根据权利要求68所述的方法，其中所述受试者具有干性AMD。
用补体抑制剂治疗慢性障碍的方法
[0001] 相关申请的交叉引用
背景技术
[0003] 呼吸系统的慢性障碍是其发生率在全世界逐渐增加的发病率和死亡率的主要原因。根据世界卫生组织估测，约8000万人患有中等至严重慢性阻塞性肺病(COPD)，超过300万人在2005年死于COPD(全球所有死亡的约5％)。在2002年，COPD是第五大死亡原因，并且估测提示，在2030年，COPD将是全世界第三大死亡原因，除非可以成功地抑制主要危险因素，特别是烟草应用。哮喘也是一个重大的全球健康问题，据估测影响全世界的3亿个体。哮喘和COPD都可以对患者的日常功能和生活质量具有虚弱性影响，特别当严重时。这些疾病也代表健康护理成本和丧失生产力的方式的重大负担。
[0004] 药理学疗法(诸如支气管扩张剂和皮质类固醇)被广泛用于治疗哮喘和COPD。但是，尽管进行这样的干预，大部分患者经历持久的征状。此外，这些药剂可以与显著的副作用相关。需要用于治疗影响呼吸系统的障碍的额外药理学疗法。发明内容
[0005] 除了别的以外，本发明提供了治疗补体介导的慢性障碍的方法，所述方法包括：给需要治疗所述障碍的受试者施用补体抑制剂。在某些方面，本发明提供了治疗呼吸系统的慢性障碍的方法，所述方法包括：给需要治疗所述障碍的受试者施用补体抑制剂。在某些实施方案中，所述障碍是哮喘。在某些实施方案中，所述障碍是COPD。本发明的某些方面至少部分地基于下述认识：补体抑制剂在补体介导的慢性障碍(例如，补体介导的呼吸系统的慢性障碍，诸如哮喘或COPD)的治疗中表现出长效作用。例如，在某些实施方案中，补体抑制剂的显著减轻补体介导的慢性障碍(例如，慢性呼吸障碍)的一种或多种表现的作用持续时间大于补体抑制剂在静脉内施用时基本上抑制血浆补体激活能力的作用持续时间。
[0006] 在某些方面，本发明提供了一种治疗需要治疗慢性呼吸障碍或补体介导的其它慢性障碍的受试者的方法，所述方法包括：根据给药方案给所述受试者施用多次剂量的补体抑制剂，在所述给药方案中，如下平均施用连续给药：(i)在补体抑制剂的血浆浓度降低至不超过前一次给药后达到的最大血浆浓度的20％以后至少2周；(ii)在血浆补体激活能力已经恢复至前一次给药后的基线的至少50％以后至少2周；(iii)以等于补体抑制剂的终末血浆半衰期的至少2倍的间隔；或(iv)以隔开至少3周的间隔。在某些实施方案中，如下平均施用补体抑制剂的连续给药：(i)在补体抑制剂的血浆浓度降低至不超过前一次给药后达到的最大血浆浓度的20％以后2周至6周；(ii)在血浆补体激活能力已经恢复至前一次给药后的基线的至少50％以后2周至6周；(iii)以等于补体抑制剂的终末血浆半衰期的2-5倍的间隔；或(iv)以隔开3周至6周的间隔。在某些实施方案中，隔开至少4周平均施用补体抑制剂的连续给药。在某些实施方案中，在血浆补体激活能力已经恢复至前一次给药后的正常范围内以后至少2周，平均施用补体抑制剂的连续给药。在某些实施方案中，在补体抑制剂的血浆浓度降低至不超过前一次给药后达到的最大血浆浓度的10％以后至少2周，平均施用补体抑制剂的连续给药。在某些实施方案中，在补体抑制剂的血浆浓度降低至不超过前一次给药后达到的最大血浆浓度的5％以后至少2周，平均施用补体抑制剂的连续给药。在某些实施方案中，其中至少部分地基于在受试者群体中测得的补体抑制剂血浆浓度、补体抑制剂血浆半衰期和/或血浆补体激活能力的值，确定给药方案。在某些实施方案中，至少部分地基于被治疗的受试者的补体抑制剂血浆浓度、补体抑制剂血浆半衰期和/或血浆补体激活能力的值，确定给药方案。
[0007] 在包含给药的任何方法的某些实施方案中，施用至少5次给药。
[0008] 在某些实施方案中，受试者需要治疗哮喘、慢性阻塞性肺疾病(COPD)或二者。在某些实施方案中，受试者需要治疗严重哮喘。
[0010] 在某些实施方案中，通过静脉内途径施用补体抑制剂。
[0011] 在某些实施方案中，补体抑制剂作用于C3或补体级联中的C3的上游。在某些实施方案中，所述补体抑制剂会抑制C3、C5或因子B的裂解。
[0012] 在某些实施方案中，补体抑制剂包含抗体、适体、肽、多肽或小分子。
[0013] 在某些实施方案中，补体抑制剂包含结合C3、C5、因子B或因子D的抗体、适体、肽、多肽或小分子。
[0014] 在某些实施方案中，补体抑制剂包含坎普他汀(compstatin)类似物。
[0015] 在某些实施方案中，补体抑制剂包含坎普他汀类似物，其序列包含SEQID NO：14、21、28、29、32、33、34或36。
[0016] 在某些实施方案中，补体抑制剂包含坎普他汀类似物，其序列包含SEQID NO：3-41中的任一个。
[0017] 在某些实施方案中，补体介导的障碍是Th17-相关的障碍。
[0018] 在某些实施方案中，任何治疗方法包括：检测受试者中或得自受试者的样品中的Th17生物标志物。在某些实施方案中，在包含体液的样品中检测Th17生物标志物，其中所述体液任选地选自血液、BAL流体、痰、鼻分泌物或尿或它们的组合。在某些实施方案中，所述生物标志物包含至少一种由Th17细胞产生的细胞因子或促进Th17细胞的形成、存活或活性的细胞因子。在某些实施方案中，Th17生物标志物的水平相对于参照的增加指示，所述受试者需要一剂补体抑制剂。在某些实施方案中，所述参照是在没有遭受所述障碍的人的正常范围内，或者是当所述障碍得到良好控制时所述受试者的基线值。在某些实施方案中，所述Th17生物标志物在施用一剂补体抑制剂之前进行检测，并充当所述受试者需要一剂补体抑制剂的指标。在某些实施方案中，所述生物标志物在施用一剂补体抑制剂之前进行检测，并充当所述受试者需要一剂补体抑制剂的指标，且所述方法包括：在检测所述生物标志物以后的预定时间段内施用补体抑制剂。在某些实施方案中，预定时间段是1、2、3、4、5、6或7天或2、3或4周。
[0019] 在某些方面，一种治疗需要治疗补体介导的慢性障碍的受试者的方法包括：(a)给所述受试者施用至少一剂补体抑制剂；和(b)针对受试者中或得自受试者的样品中的Th17生物标志物，监测所述受试者。在某些实施方案中，所述方法进一步包括：(c)给所述受试者施用至少一剂额外的补体抑制剂。在某些实施方案中，步骤(b)包括：检测受试者中或得自受试者的样品中的Th17生物标志物。在某些实施方案中，步骤(b)包括：检测所述生物标志物的水平相对于参照的增加，其中增加的水平指示，所述受试者需要一剂补体抑制剂。在某些实施方案中，步骤(b)包括：检测所述生物标志物的水平相对于参照的增加，其中增加的水平指示，所述受试者需要一剂补体抑制剂，且所述方法进一步包括：(c)给所述受试者施用至少一剂额外的补体抑制剂。在某些实施方案中，步骤(b)包括：检测所述生物标志物的水平相对于参照的增加，其中增加的水平指示，所述受试者需要一剂补体抑制剂，且所述方法进一步包括：(c)在检测生物标志物的预定时间内，给所述受试者施用至少一剂额外的补体抑制剂。在某些实施方案中，预定时间段是1、2、3、4、5、6或7天或2、3或4周。在某些实施方案中，方法进一步包括：给所述受试者施用抗-Th17试剂。
[0020] 在某些实施方案中，抗-Th17试剂包含抑制Th17细胞的形成或活性的试剂。在某些实施方案中，抗-Th17试剂包含这样的药剂：其抑制由Th17细胞产生的细胞因子的产生或活性，或者其促进Th17细胞的形成或活性。在某些实施方案中，抗-Th17试剂包含这样的药剂：其抑制IL-1β、IL-6、IL-21、IL-22、IL-17或IL-23的产生或活性。在某些实施方案中，抗-Th17试剂包含抗体、小分子、适体、多肽或RNAi剂。在某些实施方案中，抗-Th17试剂包含抗体、小分子、适体或多肽，其结合IL-1β、IL-6、IL-21、IL-22、IL-17或IL-23或结合前述任一种的受体。
[0021] 在某些方面，提供了一种药物组合物，其包含补体抑制剂和抗-Th17试剂。在某些实施方案中，其中所述补体抑制剂会抑制C3活性或C3激活。在某些实施方案中，所述补体抑制剂包含坎普他汀类似物。在某些实施方案中，其中所述抗-Th17试剂包含抗体、小分子、适体或多肽，其结合IL-1β、IL-6、IL-21、IL-22、IL-17或IL-23或结合前述任一种的受体。
[0022] 在某些方面，一种治疗补体介导的障碍的方法包括：给有此需要的受试者施用包含补体抑制剂和抗-Th17试剂的组合物。
[0023] 在某些方面，一种治疗Th17-相关的障碍的方法包括：给有此需要的受试者施用补体抑制剂和抗-Th17试剂。
[0024] 在某些方面，提供了一种破坏DC-Th17-B-Ab-C-DC循环的方法，所述方法包括：给有此需要的受试者施用包含补体抑制剂和抗-Th17试剂的组合物。
[0025] 在某些方面，一种治疗的方法Th17-相关的障碍包括：给有此需要的受试者施用补体抑制剂和抗-Th17试剂。
[0026] 在某些方面，一种治疗的方法Th17-相关的障碍包括：给有此需要的受试者施用包含补体抑制剂和抗-Th17试剂的组合物。
[0027] 在某些方面，提供了一种破坏DC-Th17-B-Ab-C-DC循环的方法，所述方法包括：给有此需要的受试者施用包含补体抑制剂和抗-Th17试剂的组合物。
[0028] 在某些实施方案中，任一种方法包括：针对DC-Th17-B-Ab-C-DC循环的证据，监测所述受试者。
[0029] 在某些实施方案中，任一种方法包括：针对DC-Th17-B-Ab-C循环的证据，监测所述受试者，和至少部分地基于所述监测的结果，给所述受试者施用补体抑制剂、抗-Th17试剂、或包含补体抑制剂、抗-Th17试剂的组合物。
[0030] 在某些实施方案中，任一种方法包括：针对Th17生物标志物，监测所述受试者。
[0031] 在某些实施方案中，任一种方法包括：针对Th17生物标志物，监测所述受试者，和至少部分地基于所述监测的结果，给所述受试者施用补体抑制剂、抗-Th17试剂、或包含补体抑制剂、抗-Th17试剂的组合物。
[0032] 在某些方面，一种治疗患有补体介导的障碍或处于该障碍风险中的受试者的方法，所述方法包括：针对DC-Th17-B-Ab-C-DC循环的证据，监测所述受试者，和至少部分地基于所述监测的结果，给所述受试者施用补体抑制剂。在某些实施方案中，所述方法进一步包括：给所述受试者施用抗-Th17试剂。
[0033] 在某些方面，一种治疗患有补体介导的障碍或处于该障碍风险中的受试者的方法，所述方法包括：针对DC-Th17-B-Ab-C-DC循环的证据，监测所述受试者，和至少部分地基于所述监测的结果，给所述受试者施用补体抑制剂和抗-Th17试剂。
[0034] 在某些方面，一种治疗患有Th17-相关的障碍或处于该障碍风险中的受试者的方法，所述方法包括：针对DC-Th17-B-Ab-C-DC循环的证据，监测所述受试者，和至少部分地基于所述监测的结果，给所述受试者施用补体抑制剂。
[0035] 在某些实施方案中，所述方法进一步包括：给所述受试者施用抗-Th17试剂。
[0036] 在某些方面，提供了一种治疗患有Th17-相关的障碍或处于该障碍风险中的受试者的方法，所述方法包括：针对DC-Th17-B-Ab-C-DC循环的证据，监测所述受试者，和至少部分地基于所述监测的结果，给所述受试者施用补体抑制剂和抗-Th17试剂。在某些实施方案中，所述补体抑制剂会抑制C3活性或C3激活。在某些实施方案中，所述补体抑制剂包含坎普他汀类似物。
[0037] 在至少部分地涉及抗-Th17试剂的组合物或方法的某些实施方案中，所述抗-Th17试剂包含抗体、小分子、适体或多肽，其结合IL-1β、IL-6、IL-21、IL-22、IL-17或IL-23或结合前述任一种的受体。
[0038] 在包括针对DC-Th17-B-Ab-C-DC循环的证据监测受试者的任一种方法的某些实施方案中，这样的监测包括：评估受试者中或得自受试者的样品中的Th17-相关的生物标志物。
[0039] 在包括监测受试者的任一种方法的某些实施方案中，大约每1-2周、2-4周或大约每1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月进行所述监测。
[0040] 在任一种方法的某些实施方案中，所述方法包括：施用补体抑制剂、抗-Th17试剂或二者，在已经检测到DC-Th17-B-Ab-C-DC循环的证据或增加的Th17-相关的生物标志物水平的不超过1、2、3、4、5、6或7天或2、3或4周内进行施用。
[0041] 在某些方面，提供了一种治疗需要治疗AMD的受试者的方法，所述方法包括：给所述受试者施用抗-IL-23试剂。在某些实施方案中，将所述试剂局部地施用至眼，例如，通过玻璃体内注射。在某些实施方案中，所述受试者患有干性AMD。
[0042] 在本申请中提及的所有文章、书籍、专利申请、专利、其它出版物、网站和数据库通过引用并入本文。在说明书和任意并入的参考文献之间中突的情况下，以说明书(包括对其做出的任何修改)为准。除非另有说明，在本文中使用本领域接受的术语和缩写的含义。附图说明
[0043] 图1-11的图显示了支气管肺泡灌洗(BAL)流体中的指定细胞因子的浓度，在猪蛔虫(Ascaris suum)攻击0、1和2之前或之后的指定时间点在得自各个食蟹猴的样品中测量。对照动物(蓝色；三角形)；布地奈德治疗的动物(红色；+)；CA-28治疗的动物(绿色；圆圈)。将在每个时间点的平均细胞因子浓度的图叠加，并显示为连续线以更清楚地描绘在24小时时间段内的变化。
具体实施方式
[0044] I.定义
[0045] 本文中使用的术语“抗体”包括含有抗原结合位点的抗体和抗体片段。在本发明的某些实施方案中有用的抗体可以源自或衍生自不同的物种，例如，人、非人灵长类动物、啮齿动物(例如，小鼠、大鼠、兔)、山羊、鸡，和/或可以属于不同的抗体类别，例如，人类别：IgG(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)、IgM、IgA、IgD和IgE。抗体片段(Fab)可以是，例如，Fab′、F(ab′)2、scFv(单链可变片段)或保留或含有抗原结合位点的其它片段。参见，例如，Allen，T.，Nature Reviews Cancer，第2卷，750-765，2002，和其中的参考文献。在本领域中被称作双体、微体或纳米抗体(nanobodies)的抗体可以用在不同的实施方案中。双特异性的或多特异性的抗体可以用在不同的实施方案中。IgG免疫球蛋白(例如，啮齿动物或人IgG)的重链和轻链含有4个框架区(FR1至FR4)，所述框架区分别被3个互补性决定区(CDR1至CDR3)隔开。CDR，特别是CDR3区域，尤其是重链CDR3，主要负责抗体特异性。抗体可以是：嵌合抗体，其中，例如，将啮齿动物起源或非人灵长类动物起源的可变结构域与人起源的恒定结构域融合；或“人源化的”抗体，其中将一些或全部构成抗原结合位点的互补性决定区(CDR)氨基酸(有时与一个或多个框架氨基酸或区域一起)从啮齿动物抗体(例如，鼠抗体)或噬菌体展示抗体“移植”至人抗体，从而保留啮齿动物或噬菌体展示抗体的特异性。因而，人源化抗体可以是重组蛋白，其中仅抗体互补性决定区具有非人起源。应当理解，对在人源化过程中涉及的抗体序列的改变，通常通过在核酸水平的技术(例如，标准重组核酸技术)来实现。在某些实施方案中，仅移植决定特异性的残基(SDR)，即在抗体-配体相互作用中最关键的CDR残基。例如，通过使用具有已知结构的抗原-抗体复合物的三维结构的数据库，或者通过抗体-结合位点的突变分析，可以鉴别SDR。在某些实施方案中，使用这样的方案，其包括保留更多的CDR残基，即移植所谓的“缩减的”CDR，即包括所有SDR的CDR残基段。关于SDR移植的进一步讨论，参见，例如，Kashmiri，SV，Methods.36(1)：
25-34(2005)。关于得到人源化抗体的不同方法的综述，参见，例如，Almagro JC，Fransson J.Humanization of antibodies.Front Biosci.13：1619-33(2008)。应该理解，“源自或衍生自”表示指定抗体序列或其部分的遗传信息的原始来源，其可以不同于最初在其中合成抗体的物种。例如，可以在其基因组整合了人免疫球蛋白基因的啮齿类动物中制备“人”结构域。参见，例如，Vaughan，等人，(1998)，Nature Biotechnology，16：535-539，例如，以制备全人抗体。抗体可以是多克隆的或单克隆的，尽管就本发明的目的而言，单克隆抗体作为治疗剂通常是优选的。用于制备特异性地结合基本上任意目标分子的抗体的方法是本领域已知的。例如，单克隆或多克隆抗体可以从天然来源(例如，从生产抗体的动物(例如，在免疫接种所述分子或其抗原片段以后)的血液或腹水液)纯化，或者可以在细胞培养物中重组地生产并例如从培养基纯化。可以使用亲和纯化，例如，蛋白A/G亲和纯化和/或使用抗原作为亲和试剂的亲和纯化。使用噬菌体展示和有关的技术，可以鉴别合适的抗体。关于其它信息，参见，例如，Kaser，M.和Howard，G.，“Making and Using Antibodies：A Practical Handbook”和Sidhu，S.，“Phage Display in Biotechno1ogy and Drug Discovery”，CRC Press，Taylor and Francis Group，2005。用于制备抗体片段的方法是众所周知的。例如，可以制备F(ab′)2片段，例如，通过使用Immunopure F(ab′)2Preparation Kit(Pierce)，其中使用固定化的胃蛋白酶消化抗体，并在固定化的蛋白A柱上纯化。本领域普通技术人员可以优化消化条件(诸如温度和持续时间)，以得到良好F(ab′)2产率。通过标准蛋白凝胶电泳，可以监测由消化得到的F(ab′)2的产率。通过抗体的木瓜蛋白酶消化，或通过还原F(ab′)2中的S-S键，可以得到F(ab′)。本文中使用的“单链Fv”或“scFv”抗体片段包含抗体的VH和VL结构域，其中这些结构域存在于单个多肽链中。通常，scFv抗体进一步包含在VH和VL结构域之间的多肽接头，尽管在某些实施方案中，可以使用其它接头连接所述结构域。
25-34(2005)。关于得到人源化抗体的不同方法的综述，参见，例如，Almagro JC，Fransson J.Humanization of antibodies.Front Biosci.13：1619-33(2008)。应该理解，“源自或衍生自”表示指定抗体序列或其部分的遗传信息的原始来源，其可以不同于最初在其中合成抗体的物种。例如，可以在其基因组整合了人免疫球蛋白基因的啮齿类动物中制备“人”结构域。参见，例如，Vaughan，等人，(1998)，Nature Biotechnology，16：535-539，例如，以制备全人抗体。抗体可以是多克隆的或单克隆的，尽管就本发明的目的而言，单克隆抗体作为治疗剂通常是优选的。用于制备特异性地结合基本上任意目标分子的抗体的方法是本领域已知的。例如，单克隆或多克隆抗体可以从天然来源(例如，从生产抗体的动物(例如，在免疫接种所述分子或其抗原片段以后)的血液或腹水液)纯化，或者可以在细胞培养物中重组地生产并例如从培养基纯化。可以使用亲和纯化，例如，蛋白A/G亲和纯化和/或使用抗原作为亲和试剂的亲和纯化。使用噬菌体展示和有关的技术，可以鉴别合适的抗体。关于其它信息，参见，例如，Kaser，M.和Howard，G.，“Making and Using Antibodies：A Practical Handbook”和Sidhu，S.，“Phage Display in Biotechno1ogy and Drug Discovery”，CRC Press，Taylor and Francis Group，2005。用于制备抗体片段的方法是众所周知的。例如，可以制备F(ab′)2片段，例如，通过使用Immunopure F(ab′)2Preparation Kit(Pierce)，其中使用固定化的胃蛋白酶消化抗体，并在固定化的蛋白A柱上纯化。本领域普通技术人员可以优化消化条件(诸如温度和持续时间)，以得到良好F(ab′)2产率。通过标准蛋白凝胶电泳，可以监测由消化得到的F(ab′)2的产率。通过抗体的木瓜蛋白酶消化，或通过还原F(ab′)2中的S-S键，可以得到F(ab′)。本文中使用的“单链Fv”或“scFv”抗体片段包含抗体的VH和VL结构域，其中这些结构域存在于单个多肽链中。通常，scFv抗体进一步包含在VH和VL结构域之间的多肽接头，尽管在某些实施方案中，可以使用其它接头连接所述结构域。
[0046] 提及数字的术语“大约”或“约”通常包括落入该数字的±10％(在某些实施方案中，±5％，在某些实施方案中，±1％，在某些实施方案中，±0.5％)内的数字，除非另有说明或另外从上下文中显而易见(这样的数字不允许地超过可能值的100％的情况除外)。
[0047] “补体激活能力”表示补体激活水平，其源自向造成最大补体激活的刺激的暴露。通常，使用得自受试者的样品(例如，血液、血浆、血清或其它流体样品，其可以适当地稀释)评估补体激活能力，所述样品样品可以在体外暴露于补体激活刺激。可以将热灭活的样品用作对照。应该理解，为了提供补体激活能力的测量，所述刺激不需要足以造成最大补体激活。例如，在确定的时间段内发生的补体激活程度可以提供补体激活能力的指示。
可以测量补体激活，例如，使用合适的测定，诸如基于溶血(例如，绵羊或鸡红血细胞的裂解)、补体激活产物(例如，C3a、C3b、iC3b、C5a、MAC)的沉积或捕获等的功能测定。可以评估途径特异性的补体激活能力，例如，使用适当的刺激和测定条件(例如，钙离子在测定组合物中的存在或缺失)来激活一种或超过一种途径。例如，抗体(例如，IgM或免疫复合物)可以用于激活经典途径；脂多糖(LPS)可以用于激活旁路途径，甘露聚糖可以用于激活凝集素途径的结合甘露糖的凝集素部分等。在某些实施方案中，使用CH50试验，使用抗体敏化的绵羊或鸡红细胞作为经典补体途径的激活剂和试验样品的不同稀释液，测量样品中的总的经典补体活性，以确定产生50％裂解所需的量。通过分光光度计法可以确定溶血百分比。仍然可以实现50％裂解的样品的稀释度越高(即，样品的稀释倍数越大)，补体激活能力越大。在某些实施方案中，使用基于ELISA的测定。在某些实施方案中，基于iC3b水平来评估补体激活，例如，基本上如在PCT/US2010/035871(WO2010135717)(参见实施例)中所述。在某些实施方案中，基于C3b水平来评估补体激活，基本上如在PCT/US2008/001483(WO/2008/097525)实施例1和2中分别所述。在某些实施方案中，使用MicroVue CH50Eq EIA Kit(经典途径)、MicroVue Bb Plus EIA Kit(旁路途径)、MicroVue iC3b EIA Kit或MicroVue C3a Plus EIA Kit(都得自Quidel Corp.)，评估经由经典途径的补体激活。在某些实施方案中，将补体激活产物的量标准化为在暴露于补体激活刺激之前存在于样品中的完整C3的量。
可以测量补体激活，例如，使用合适的测定，诸如基于溶血(例如，绵羊或鸡红血细胞的裂解)、补体激活产物(例如，C3a、C3b、iC3b、C5a、MAC)的沉积或捕获等的功能测定。可以评估途径特异性的补体激活能力，例如，使用适当的刺激和测定条件(例如，钙离子在测定组合物中的存在或缺失)来激活一种或超过一种途径。例如，抗体(例如，IgM或免疫复合物)可以用于激活经典途径；脂多糖(LPS)可以用于激活旁路途径，甘露聚糖可以用于激活凝集素途径的结合甘露糖的凝集素部分等。在某些实施方案中，使用CH50试验，使用抗体敏化的绵羊或鸡红细胞作为经典补体途径的激活剂和试验样品的不同稀释液，测量样品中的总的经典补体活性，以确定产生50％裂解所需的量。通过分光光度计法可以确定溶血百分比。仍然可以实现50％裂解的样品的稀释度越高(即，样品的稀释倍数越大)，补体激活能力越大。在某些实施方案中，使用基于ELISA的测定。在某些实施方案中，基于iC3b水平来评估补体激活，例如，基本上如在PCT/US2010/035871(WO2010135717)(参见实施例)中所述。在某些实施方案中，基于C3b水平来评估补体激活，基本上如在PCT/US2008/001483(WO/2008/097525)实施例1和2中分别所述。在某些实施方案中，使用MicroVue CH50Eq EIA Kit(经典途径)、MicroVue Bb Plus EIA Kit(旁路途径)、MicroVue iC3b EIA Kit或MicroVue C3a Plus EIA Kit(都得自Quidel Corp.)，评估经由经典途径的补体激活。在某些实施方案中，将补体激活产物的量标准化为在暴露于补体激活刺激之前存在于样品中的完整C3的量。
[0048] “补体组分”或“补体蛋白”是补体系统激活所涉及的蛋白或参与一种或多种补体介导的活性的蛋白。经典补体途径的组分包括例C1q、C1r、C1s、C2、C3、C4、C5、C6、C7、C8、C9和C5b-9复合物(也被称作膜攻击复合物(MAC))，和任何上述的活性片段或酶切割产物(例如，C3a、C3b、C4a、C4b、C5a等)。旁路途径的组分包括例如因子B、因子D和备解素。凝集素途径的组分包括例如MBL2、MASP-1和MASP-2。补体组分还包括可溶性补体组分的细胞结合受体，其中这样的受体在可溶性补体组分结合以后介导这样的可溶性补体组分的一种或多种生物活性。这样的受体包括例如C5a受体(C5aR)、C3a受体(C3aR)、补体受体
1(CR1)、补体受体2(CR2)、补体受体3(CR3、也被称作CD45)等。应当理解，术语“补体组分”无意包括充当补体激活的“触发剂”的那些分子和分子结构，例如抗原-抗体复合物、存在于微生物或人工表面上的外来结构等。
1(CR1)、补体受体2(CR2)、补体受体3(CR3、也被称作CD45)等。应当理解，术语“补体组分”无意包括充当补体激活的“触发剂”的那些分子和分子结构，例如抗原-抗体复合物、存在于微生物或人工表面上的外来结构等。
[0049] “补体调节蛋白”是参与调节补体活性的蛋白。补体调节蛋白可以减量调节补体活性，例如，通过抑制补体激活或通过灭活一种或多种被激活的补体蛋白或加速一种或多种被激活的补体蛋白的衰变。补体调节蛋白的例子包括C1抑制剂、C4结合蛋白、簇连蛋白、玻璃体结合蛋白、CFH、因子I、以及细胞结合蛋白CD46、CD55、CD59、CR1、CR2和CR3。
[0050] 本文中关于两个或更多个部分使用的“连接的”是指，所述部分彼此以物理方式结合或连接以形成足够稳定的分子结构，以致所述部分在形成连接的条件下(并且优选在使用新分子结构的条件下，例如在生理条件下)保持结合。在本发明的某些优选实施方案中，所述连接是共价连接。在其它实施方案中，所述连接是非共价的。各部分可直接或间接连接。当两个部分直接连接时，它们彼此共价键合，或者足够紧邻以致两个部分之间的分子间力保持其结合。当两个部分间接连接时，它们各自共价地或非共价地连接至第三部分，所述第三部分保持所述两个部分之间的结合。一般而言，当将两个部分说成通过“连接基团”或“连接部分”连接时，所述两个被连接的部分之间的连接是间接的，并且通常所述被连接的部分各自共价地键合至连接部分。使用“接头”可以连接2个部分。接头可以是与要连接的实体在合理时间段内在符合所述实体(其部分可以根据条件经过适当保护)的稳定性的条件下足量反应以产生合理产率的任何合适部分。通常，所述接头含有至少2个官能团，其中之一与第一实体反应，另一个官能团与第二实体反应。应当理解，在接头已经与要连接的实体反应以后，术语“接头”可以表示得到的结构的源自所述接头的部分，或者至少表示不包括反应过的官能团的部分。连接部分可以包含这样的部分：其不参与与要连接的实体的键，且其主要目的可以是使所述实体在空间上彼此分离。这样的部分可以被称作“隔离物”。
[0051] 本文中使用的“多肽”表示氨基酸的聚合物，任选包括一个或多个氨基酸类似物。蛋白是由一个或多个多肽组成的分子。肽是相对较短的多肽，长度通常介于约2个与60个氨基酸之间，例如长度介于8个与40个氨基酸之间。术语“蛋白”、“多肽”和“肽”可互换使用。本文中使用的多肽可以含有氨基酸，例如蛋白质中天然存在的氨基酸、蛋白质中非天然存在的氨基酸和/或不为氨基酸的氨基酸类似物。本文中使用的氨基酸的“类似物”可以是在结构上类似于氨基酸的不同氨基酸，或在结构上类似于氨基酸的除氨基酸外的化合物。
已知大量本领域公知的在蛋白质中常见的20种氨基酸(“标准”氨基酸)的类似物。可以修饰多肽中的一个或多个氨基酸，例如，通过添加化学实体，如糖基、磷酸酯基、法呢基、异法呢基、脂肪酸基团、用于连接、官能化或其它修饰的接头等。某些非限制性的合适的类似物和修饰描述于WO2004026328和/或下面。多肽可以例如在N末端被乙酰化和/或例如在C末端被酰胺化。
已知大量本领域公知的在蛋白质中常见的20种氨基酸(“标准”氨基酸)的类似物。可以修饰多肽中的一个或多个氨基酸，例如，通过添加化学实体，如糖基、磷酸酯基、法呢基、异法呢基、脂肪酸基团、用于连接、官能化或其它修饰的接头等。某些非限制性的合适的类似物和修饰描述于WO2004026328和/或下面。多肽可以例如在N末端被乙酰化和/或例如在C末端被酰胺化。
[0052] 一般而言，使用本领域已知的任意合适的方法，可以得到或生产多肽。例如，多肽可以分离自天然来源，使用重组DNA技术在合适的表达系统(例如，通过重组宿主细胞或转基因的非人动物或植物)中体外或体内生产，通过化学方式诸如固相肽合成和/或使用包括合成肽的化学连接的方法进行合成(参见，例如，Kent，S.，J Pept Sci.，9(9)：574-93，2003和美国公开号20040115774)，或这些方法的组合。本领域普通技术人员可以容易地选择适当的方法。多肽可以包含标签，例如，表位标签，所述标签可以便利多肽的纯化和/或检测。示例性的标签包括，例如，6XHis、HA、Myc、SNUT、FLAG、TAP等。在某些实施方案中，标签是可切割的，例如，所述标签包含蛋白酶的切割识别位点，或者与多肽的补体抑制部分被连接部分隔开，所述连接部分包含蛋白酶的切割识别位点。例如，可以使用TEV蛋白酶切割位点。
[0053] “痘病毒”表示构成痘病毒科的复杂双链DNA病毒科。该科包括正痘病毒属(痘病毒科、脊椎动物痘病毒(Chordopoxyirinae)亚科的一个属)，其包含许多感染哺乳动物(包括人类)的种。痘病毒描述在Fields，B N，等人，Fields Virology，第3版，Lippincott Williams&Wilkins，2001。正痘病毒属包括、但不限于：痘苗病毒、重型天花病毒、轻型天花病毒、牛痘病毒、猴痘病毒、骆驼痘病毒、猪痘病毒和鼠痘病毒。
[0054] “痘病毒补体调控蛋白”表示由许多不同痘病毒编码的同源蛋白家族的成员，其结合一种或多种补体途径蛋白，并抑制补体激活的经典途径、补体激活的旁路途径、凝集素途径或这些的任意组合。痘病毒补体调控蛋白是补体调控蛋白(CCP)(也称为补体激活调节剂(RCA)超家族)的成员(Reid，K B M和Day，A J，Immunol Today，10：177-80，1989)。
[0055] “重组宿主细胞”、“宿主细胞”和其它这样的术语表示，含有外源性核酸(通常是DNA，诸如包含编码目标多肽的核酸的表达载体)的原核或真核细胞或细胞系。应该理解，这样的术语包括其中已经引入载体或其它核酸的原始细胞的后代。适当的宿主细胞包括在本领域中常规地用于表达多核苷酸(例如，为了生产由这样的多核苷酸编码的多肽的目的)的那些细胞中的任一种，包括、例如，原核生物，诸如大肠杆菌；和真核生物，包括例如，真菌，诸如酵母(例如，巴斯德毕赤酵母)；昆虫细胞(例如，Sf9)、植物细胞和动物细胞，例如，哺乳动物细胞诸如CHO、R1.1、B-W、L-M、非洲绿猴肾细胞(例如COS-1、COS-7、BSC-1、BSC-40和BMT-10)和培养的人细胞。外源性核酸可以作为附加体(诸如质粒)稳定地维持，或者可以至少部分地整合进宿主细胞的基因组中，任选地在被拷贝或逆转录以后。诸如“宿主细胞”等术语也用于表示，在引入核酸之前，可以用作外源性核酸的受体的细胞或细胞系。“重组多核苷酸”是这样的多核苷酸：其含有在自然界中未发现彼此直接连接的核酸序列。例如，核酸序列可以存在于不同的基因或不同的物种中，或者一个或多个序列可以是天然存在的序列的变体，或者可以至少部分地是不与天然存在的序列同源的人工序列。“重组多肽”是这样的多肽：其由重组宿主细胞对外源性核酸的转录和翻译产生，或由无细胞的体外表达系统产生，和/或其含有在自然界中未发现彼此直接连接的氨基酸序列。在后一种情况下，重组多肽可以被称作“嵌合多肽”。嵌合多肽中的氨基酸序列可以例如存在于不同的基因或不同的物种中，或者一个或多个序列可以是天然存在的序列的变体，或者可以至少部分地是不与天然存在的序列同源的人工序列。应该理解，嵌合多肽可以包含2个或更多个多肽。例如，嵌合多肽的第一个和第二个多肽A和B可以直接连接(A-B或B-A)，或者可以被第三个多肽部分C隔开(A-C-B或B-C-A)。在某些实施方案中，部分C代表多肽接头，所述多肽接头可以例如包含多个甘氨酸和/或丝氨酸残基。在某些实施方案中，2个或更多个多肽可以通过非多肽接头连接。
[0056] 本文中使用的“反应性官能团”表示包括、但不限于以下的基团：烯烃、炔烃、醇、酚、醚、氧化物、卤化物、醛、酮、羧酸、酯、酰胺、氰酸酯、异氰酸酯、硫氰酸酯、异硫氰酸酯、胺、肼、腙、酰肼、重氮基、重氮鎓、硝基、腈、硫醇、硫化物、二硫化物、亚砜、砜、磺酸、亚磺酸、缩醛、缩酮、酸酐、硫酸酯、次磺酸异腈、脒、酰亚胺、亚氨酯(imidate)、硝酮(nitrone)、羟胺、肟、异羟肟酸硫代异羟肟酸、联烯(allene)、原酸酯、亚硫酸酯、烯胺、炔胺、脲、假脲、氨基脲、碳化二亚胺、氨基甲酸酯、亚胺、叠氮化物、偶氮化合物、氧化偶氮基化合物和亚硝基化合物、N-羟基琥珀酰亚胺酯、马来酰亚胺、巯基等。制备这些官能团中的每一种的方法是本领域众所周知的，并且它们对于特定目的的应用或修饰都在本领域技术人员的能力范围内(参见，例如，Sandier和Karo，编.ORGANIC FUNCTIONAL GROUP PREPARATIONS，Academic Press，San Diego，1989，和Hermanson，G.，Bioconjugate Techniques，第2版，Academic Press，San Diego，2008)。
[0057] “特异性结合”通常表示靶多肽(或更一般而言，靶分子)与结合分子(例如抗体或配体)之间的物理结合。所述结合通常依赖于可被结合分子识别的靶标的特定结构特征(例如抗原决定簇、表位、结合槽或裂隙)的存在。例如，如果抗体对表位A具特异性，则含有表位A的多肽的存在，或游离的未标记的A在含有游离的经标记的A和与其结合的结合分子的反应物中的存在，将降低与结合分子结合的经标记的A的量。应当理解，特异性不需要是绝对的，而通常表示在其中发生结合的情形。例如，本领域众所周知，众多抗体除与靶分子中存在的表位反应外，还与其它表位交叉反应。取决于欲使用抗体的应用，所述交叉反应性可以是可接受的。本领域普通技术人员将能够选择特异性程度足以适合在任何给定应用(例如用于检测靶分子、用于治疗目的等)中进行的抗体或配体。还应当理解，可以在额外因素的情形中评价特异性，例如结合分子对靶标的亲和力相对于结合分子对其它靶标(例如竞争剂)的亲和力。如果结合分子对需要检测的靶分子表现出高亲和力并且对非靶分子表现出低亲和力，则所述抗体可能成为可接受的试剂。在从一个或多个情形中确立结合分子的特异性后，即可将其用于其它、优选类似的情形，而无需再评价其特异性。在某些实施方案中，在所测试的条件下，例如在生理条件下(例如，诸如盐浓度、pH和/或温度等条件适当地接近在体内的对应条件)或其它测定条件下，2个分子(例如，表现出特异性结-3 -4合的2个分子)的亲和力(如通过平衡解离常数Kd所测得)是10 M或更小，例如，10 M-5 -6 -7 -8 -9
或更小，例如，10 M或更小，例如，10 M或更小，10 M或更小，10 M或更小，或10 M或更小。
使用本领域已知的多种方法中的任一种，可以测量结合亲和力。例如，在某些实施方案中，可以使用基于等温滴定量热法或表面等离子体共振的测定(例如， 测定)。
或更小，例如，10 M或更小，例如，10 M或更小，10 M或更小，10 M或更小，或10 M或更小。
使用本领域已知的多种方法中的任一种，可以测量结合亲和力。例如，在某些实施方案中，可以使用基于等温滴定量热法或表面等离子体共振的测定(例如， 测定)。
[0058] 根据本发明治疗的“受试者”通常是人、非人灵长类动物或另一种哺乳动物(例如，小鼠或大鼠)。应当理解，至少在其中施用补体抑制剂的实施方案中，所述受试者将表达至少一种可以被使用的特定补体抑制剂会抑制的补体组分。例如，通常将对灵长类动物补体特异性的补体抑制剂施用给人或非人灵长类动物或已经遗传工程改造成表达人补体组分的动物模型。在某些实施方案中，所述受试者是雄性。在某些实施方案中，所述受试者是雌性。在某些实施方案中，人受试者是至少12岁。在某些实施方案中，受试者是成年人，例如，至少18岁(例如，18-100岁)的人。在某些实施方案中，受试者是至少40、45、50、55、60、65、70、75或80岁。在某些实施方案中，所述受试者是儿童，例如，0-4岁或5-11岁的人。
[0059] 本文中关于治疗受试者使用的“治疗”表示，提供治疗，即，提供受试者的任何类型的医学或外科手术处置。可以提供治疗以便逆转、缓解疾病，抑制所述疾病的进展，预防或降低所述疾病的可能性，或者以便逆转、缓解疾病的一种或多种征状或表现，抑制或防止所述征状或表现的进展，预防或降低止所述征状或表现的可能性。“预防”表示，使至少一些个体(例如，处于发展所述疾病、征状或表现的风险中的个体)在至少一段时间内不会出现疾病或者疾病的征状或表现。治疗可以包括：在发展出指示疾病的一种或多种征状或表现后，给受试者施用化合物或组合物，例如以便逆转、缓解、降低所述疾病的严重程度，和/或抑制或防止所述疾病的进展，和/或逆转、缓解、降低所述疾病的一种或多种征状或表现的严重程度，和/或抑制或防止所述疾病的一种或多种征状或表现。可以将化合物或组合物施用给已经发展疾病的受试者或相对于一般群体的成员(任选地，以年龄、性别和/或其它人口统计变量的方式与所述受试者匹配的成员)而言具有增加的发展所述疾病的风险的受试者。
[0060] 特定多肽或多核苷酸的“变体”具有一个或多个相对于所述多肽或核酸(其可以分别被称作“原始多肽”或“原始多核苷酸”)的改变(例如，添加、置换、和/或缺失，它们可以共同地称作“突变”)。因此，变体可以比所述变体的母体多肽或多核苷酸更短或更长。术语“变体”包括“片段”。“片段”是比原始多肽更短的多肽的连续部分。在本发明的某些实施方案中，变体多肽在所述变体的连续部分上与原始多肽具有显著序列同一性，所述连续部分占变体长度或多肽长度(以较短者为准)的至少50％、优选至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或更多。在本发明的某些实施方案中，变体多肽在所述变体的连续部分上与原始多肽具有实质序列同一性，所述连续部分占变体长度或多肽长度(以较短者为准)的至少50％、优选至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或或更多。在一个非限制性的实施方案中，变体在所述变体的占变体的90％至100％的连续部分上(例如，在100％的变体长度或多肽长度(以较短者为准)上)与原始序列具有至少
80％同一性。在另一个非限制性的实施方案中，变体在所述变体的占变体的90％至100％的连续部分上(例如，在100％的变体长度或多肽长度(以较短者为准)上)与原始序列具有至少80％同一性。在具体实施方案中，变体多肽的序列相对于原始序列具有N个氨基酸差异，其中N是1-10的任意整数。在其它具体实施方案中，变体多肽的序列相对于原始序列具有N个氨基酸差异，其中N是1-20的任意整数。氨基酸“差异”表示氨基酸的置换、插入或缺失。
80％同一性。在另一个非限制性的实施方案中，变体在所述变体的占变体的90％至100％的连续部分上(例如，在100％的变体长度或多肽长度(以较短者为准)上)与原始序列具有至少80％同一性。在具体实施方案中，变体多肽的序列相对于原始序列具有N个氨基酸差异，其中N是1-10的任意整数。在其它具体实施方案中，变体多肽的序列相对于原始序列具有N个氨基酸差异，其中N是1-20的任意整数。氨基酸“差异”表示氨基酸的置换、插入或缺失。
[0061] 在本发明的某些实施方案中，片段或变体与原始多肽具有足够的结构相似性，使得当将它的3维结构(实际的或预测的结构)叠加在原始多肽的结构上时，重叠体积是原始多肽的结构的总体积的至少70％、优选至少80％、更优选至少90％。通过使蛋白结晶，可以确定片段或变体的部分或完全3维结构，所述结晶可以使用标准方法来实现。可替代地，也使用标准方法，可以产生NMR溶液结构。可以使用模型化程序诸如MODELER(Sali，A.和Blundell，TL，J.Mol.Biol.，234，779-815，1993)或任意其它模型化程序来产生预测的结构。如果可得到相关多肽的结构或预测的结构，所述模型可以基于该结构。可以使用PROSPECT-PSPP程序包(Guo，JT，等人，Nucleic Acids Res.32(万维网服务器发行物)：W522-5，2004年7月1日)。
[0062] 在许多实施方案中，变体或片段的一种、超过一种或所有生物学功能或活性与原始分子的对应生物学功能或活性基本上类似。在某些实施方案中，变体或片段的活性可以是原始分子的活性的至少20％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％或至少90％，直到原始分子的活性的大约100％、大约125％或大约150％。在某些实施方案中，变体或片段的活性使得，产生效应所需的变体的量或浓度是在产生该效应所需的原始分子的量或浓度的0.5-5倍内。本发明预见到本文中公开的任一种补体抑制多肽的变体的用途，其中所述变体会抑制补体，其程度足以用于本文描述的方法中。在某些实施方案中，变体缺乏可能不希望的性质(诸如免疫原性)或具有大幅减少的该性质。
[0063] 本文中使用的“烷基”表示，具有约1至约22个碳原子(以及其中碳原子范围和具体个数的所有组合和子组合)的饱和直链、支链或环状烃，其中在本发明的某些实施方案中，约1至约12个碳原子、或约1至约7个碳原子是优选的。烷基包括、但不限于：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、环戊基、异戊基、新戊基、正己基、异己基、环己基、环辛基、金刚烷基、3-甲基戊基、2,2-二甲基丁基和2，3-二甲基丁基。
[0064] 本文中使用的“卤素”表示F、Cl、Br或I。
[0065] 本文中使用的“烷酰基”表示其中具有约1-10个碳原子(以及碳原子范围和具体个数的所有组合和子组合)、例如约1-7个碳原子的任选地被取代的直链或支链脂族无环残基，如将理解的，所述残基用单键连接至末端C＝O基团(且也可以被称作“酰基”)。烷酰基包括、但不限于：甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基、异丁酰基、戊酰基、异戊酰基、2-甲基-丁酰基、2，2-二甲氧基丙酰基、己酰基、庚酰基、辛酰基等，并且就本发明的目的而言，甲酰基被视作烷酰基。“低级烷酰基”表示具有约1至约5个碳原子(以及碳原子范围和具体个数的所有组合和子组合)的任选地被取代的直链或支链脂族无环残基。这样的基团包括、但不限于：甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基、异丁酰基、戊酰基、异戊酰基等。
[0066] 本文中使用的“芳基”表示具有约5至约14个碳原子(以及其中碳原子范围和具体个数的所有组合和子组合)的任选地被取代的、单环或二环芳族环系，其中约6至约10个碳是优选的。非限制性例子包括，例如，苯基和萘基。
[0067] 本文中使用的“芳烷基”表示这样的烷基残基：其带有芳基取代基，并且具有约6至约22个碳原子(以及其中碳原子范围和具体个数的所有组合和子组合)，其中在某些实施方案中，约6至约12个碳原子是优选的。芳烷基可以任选地被取代。非限制性例子包括，例如，苄基、萘基甲基、二苯基甲基、三苯基甲基、苯基乙基和二苯基乙基。
[0068] 本文中使用的术语“烷氧基”表示任选地被取代的烷基-O-基团，其中烷基如先前所定义。示例性烷氧基包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基和庚氧基。
[0069] 本文中使用的“羧基”表示-C(＝O)OH基团。
[0070] 本文中使用的“烷氧基羰基”表示-C(＝O)O-烷基，其中烷基如先前所定义。
[0071] 本文中使用的“芳酰基”表示-C(＝O)-芳基，其中芳基如先前所定义。示例性芳酰基包括苯甲酰基和萘甲酰基。
[0072] 术语“环系”表示芳族或非芳族、部分不饱和的或完全饱和的、3-10元环系，其包括3-8个原子大小的单环和可包括与非芳族环稠合的芳族5或6元芳基或芳族杂环基团的二环系和三环系。这些杂环包括具有1-3个杂原子的那些杂环，所述杂原子独立地选自氧、硫和氮。在某些实施方案中，术语杂环表示非芳族5-、6-、或7-元环或多环基团，其中至少一个环原子是选自O、S和N的杂原子，包括、但不限于，二环或三环基团，其包含具有1-3个独立地选自氧、硫和氮的杂原子的稠合6元环。在某些实施方案中，“环系”表示环烷基，其在本文中用于表示具有3-10个(例如，4-7个)碳原子的基团。环烷基包括、但不限于任选地被取代的环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基等。在某些实施方案中，“环系”表示任选地被取代的环烯基或环炔基部分。
[0073] 通常，被取代的化学部分包括一个或多个替代氢的取代基。示例性取代基包括例如卤代、烷基、环烷基、芳烷基、芳基、巯基、羟基(-OH)、烷氧基、氰基(-CN)、羧基(-COOH)、-C(＝O)O-烷基、氨基羰基(-C(＝O)NH2)、-N-取代的氨基羰基(-C(＝O)NHR”)、CF3、CF2CF3等。关于上文所述的取代基，每个部分R”可独立地为例如H、烷基、环烷基、芳基或芳烷基中任一个。
[0074] 本文中使用的“L-氨基酸”表示通常存在于蛋白质中的任何天然存在的左旋α-氨基酸，或那些α-氨基酸的烷基酯。术语“D-氨基酸”表示右旋α-氨基酸。除非另有说明，否则本文中提及的所有氨基酸都是L-氨基酸。
[0075] 本文中使用的“芳族氨基酸”是包含至少一个芳族环的氨基酸，例如其包含一个芳基。
[0076] 本文中使用的“芳族氨基酸类似物”是包含至少一个芳族环的氨基酸类似物，例如其包含一个芳基。
[0077] II.使用补体抑制剂治疗障碍的方法
[0078] 除了别的以外，本发明提供了使用补体抑制剂治疗补体介导的慢性障碍的方法。例如，本发明提供了使用补体抑制剂治疗慢性呼吸系统障碍的方法。在某些方面，本发明的方法至少部分地基于下述认识：补体抑制剂在治疗多种障碍(例如，慢性呼吸障碍)中具有延长的作用持续时间，例如，与用于抑制血浆补体激活能力时它们的血浆半衰期和/或它们的作用持续时间相比。在某些方面，本发明提供了通过施用多次剂量的补体抑制剂而治疗补体介导的慢性障碍的方法，其中根据利用延长的补体抑制作用的给药方案施用所述补体抑制剂。
[0079] 本文中使用的“慢性障碍”是这样的障碍：其持续至少3个月和/或在本领域中被接受为慢性障碍。在许多实施方案中，慢性障碍持续至少6个月，例如，至少1年或更久，例如，无限长。本领域普通技术人员会明白，不同慢性障碍的至少一些表现可以是间断的，和/或其严重程度可以随时间盛衰。慢性障碍可以是进行性的，例如，具有随时间变得更严重或影响更大区域的趋势。在本文中讨论了许多补体介导的慢性障碍。在本文中最详细地讨论了本发明的涉及补体介导的慢性呼吸障碍、尤其是哮喘和COPD的不同实施方案，但是应当理解，本发明的不同方面包括涉及任何补体介导的慢性障碍的实施方案，包括、但不限于，本文中公开的具体障碍。因此，在本文中的一个实施方案提及慢性呼吸障碍的情况下，本发明提供了涉及补体介导的其它障碍的类似实施方案，例如，这样的慢性障碍：其中涉及补体激活(例如，过度的或不适当的补体激活)，例如，作为促成性的和/或至少部分地原因性的因素。为了方便，有时通过参考在遭受障碍的受试者中特别经常受影响的器官或系统来将障碍分组。应当理解，许多障碍可以影响多个器官或系统，本文中的分类绝不是限制性的。此外，许多表现(例如，征状)可以发生在遭受许多不同障碍中的任一种的受试者中。在某些方面，本发明提供了治疗需要治疗这样的表现的受试者的方法，例如，用于减轻这样的表现的方法，所述方法包括：根据发明的给药方案(例如，采用发明的给药间隔的给药方案)，给所述受试者施用补体抑制剂。在某些实施方案中，受试者遭受多种补体介导的障碍。本文中关于目标障碍的非限制性信息可以参见例如内科学的标准教科书，诸如Cecil Textbook of Medicine(例如，第23版)，Harrison’s Principles of Internal Medicine(例如，第
17版)，和/或聚焦于特定医学区域(特别是身体系统或器官)和/或特定障碍的标准教科书。
17版)，和/或聚焦于特定医学区域(特别是身体系统或器官)和/或特定障碍的标准教科书。
[0080] 在某些实施方案中，补体介导的慢性障碍是Th2-相关的障碍。本文中使用的Th2-相关的障碍是这样的障碍：其特征在于Th2亚型的CD4+辅助性T细胞(“Th2细胞”)在身体或其部分中(例如，在至少一个组织、器官或结构中)的过多数目和/或过度的或不适当的活性。例如，Th2细胞相对于Th1亚型的CD4+辅助性T细胞(“Th1细胞”)可能存在优势，例如，在至少一个受障碍影响的组织、器官或结构中。如本领域已知的，Th2细胞通常分泌特有的细胞因子诸如白介素-4(IL-4)、白介素-5(IL-5)和白介素-13(IL-13)，而Th1细胞通常分泌干扰素-γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子β(TNFβ)。在某些实施方案中，Th2-相关的障碍的特征在于IL-4、IL-5和/或IL-13的过度产生和/或量，例如，相对于IFN-γ和/或TNFβ，例如，在至少一些至少一个组织、器官或结构中。
[0081] 在某些实施方案中，补体介导的慢性障碍是Th17-相关的障碍。本文中使用的Th17-相关的障碍是这样的障碍：其特征在于Th17亚型的CD4+辅助性T细胞(“Th17细胞”)在身体或其部分中(例如，在至少一个组织、器官或结构中)的过多数目和/或过度的或不适当的活性。例如，Th17细胞相对于Th1和/或Th2细胞可能存在优势，例如，在至少一个受障碍影响的组织、器官或结构中。在某些实施方案中，Th17细胞的优势是相对优势，例如，Th17细胞与Th1细胞之比和/或Th17细胞与Th2细胞之比相对于正常值增加。在某些实施方案中，Th17细胞与T调节细胞(CD4+CD25+调节性T细胞，也被称作“Treg细胞”)之比相对于正常值增加。Th17细胞的形成和/或Th17细胞的激活由不同的细胞因子促进，例如，白介素6(IL-6)、白介素21(IL-21)、白介素23(IL-23)和/或白介素1β(IL-1β)。Th17细胞的形成包括前体T细胞(例如，原初CD4+T细胞)向Th17表型的分化和它们向功能性Th17细胞的成熟。在某些实施方案中，Th17细胞的形成包括Th17细胞的发育、增殖(繁殖)、存活和/或成熟的任一个方面。在某些实施方案中，Th17-相关的障碍的特征在于IL-6、IL-21、IL-23和/或IL-1β的过度产生和/或量。Th17细胞通常分泌特有的细胞因子诸如白介素-17A(IL-17A)、白介素-17F(IL-17F)、白介素-21(IL-21)和白介素-22(IL-22)。在某些实施方案中，Th17-相关的障碍的特征在于Th17效应细胞因子(例如，IL-17A、IL-17F、IL-21和/或IL-22)的过度产生和/或量。在某些实施方案中，细胞因子的过度产生或量可在血液中检测。在某些实施方案中，细胞因子的过度产生或量可局部地检测，例如，在至少一个组织、器官或结构中。在某些实施方案中，Th17-相关的障碍与减少的Tregs数目和/或减少的Treg-相关的细胞因子的量有关。在某些实施方案中，Th17障碍是任意慢性炎性疾病，该术语包括多种疾病，所述疾病以多种组织的自身延续性免疫损伤为特征，且似乎与造成所述疾病的初始损伤(其可能是未知的)分离。在某些实施方案中，Th17-相关的障碍是任意自身免疫病。许多或大多数“慢性炎性疾病”实际上可以是自身免疫疾病。Th17-相关的障碍的例子包括：炎症性皮肤疾病诸如银屑病和异位性皮炎；全身性硬皮病和硬化；炎性肠病(IBD)(诸如克罗恩氏病和渍疡性结肠炎)；贝切特氏病；皮肌炎；多肌炎；多发性硬化(MS)；皮炎；脑膜炎；脑炎；葡萄膜炎；骨关节炎；狼疮肾炎；类风湿性关节炎(RA)、合格伦综合征、多发性硬化、脉管炎；中枢神经系统(CNS)炎症性障碍、慢性肝炎；慢性胰腺炎、肾小球肾炎；结节病；甲状腺炎、对组织/器官移植的病理性免疫应答(例如，移植排斥)；COPD、哮喘、细支气管炎、过敏性肺炎、特发性肺纤维化(IPF)、牙周炎和牙龈炎。在某些实施方案中，Th17疾病是经典地已知的自身免疫疾病诸如I型糖尿病或银屑病。在某些实施方案中，Th17-相关的障碍是年龄相关的黄斑变性。
[0082] 在某些方面，本公开内容提供了下述发现：补体激活和Th17细胞参与特定循环，所述循环涉及树突细胞和抗体，且所述循环促进作为多种障碍的基础的病理性免疫学微环境的维持。不希望受任何理论约束，病理性免疫学微环境一旦建立就是自持续的，并促进细胞和组织损伤。树突细胞(DC)是存在于身体的大部分组织(特别是暴露于外部环境的那些组织，诸如皮肤和粘膜表面)中和血液(其中它们可能以未成熟状态存在)中的白血细胞类型。未成熟的DC样品，病原体的周围环境，例如，通过模式识别受体诸如toll-样受体(TLR)。响应于不同的刺激(例如，病原体-相关的物质或其它危险信号、炎症性细胞因子和/或抗原-激活的T细胞)，DC成熟并迁移至淋巴组织，在此处它们起抗原呈递细胞的作用并如下激活其它免疫系统细胞(诸如T细胞和B细胞)：将它们与抗原片段以及非-抗原特异性的共刺激的分子一起呈递。DC刺激会促进Th细胞增殖、激活和分化成效应物Th细胞。效应物Th细胞“帮助”细胞毒性的T细胞、B细胞和巨噬细胞，例如，通过分泌具有不同刺激效应的细胞因子。所述帮助可以例如增强细胞毒性的T细胞的增殖和激活，刺激B细胞增殖和成熟和抗体产生。特别重要的是，根据本公开内容的某些方面，成熟的DC能够造成CD4+辅助性T细胞分化成Th17细胞，后者又会刺激B细胞的成熟和激活，从而导致抗体的产生。
[0083] 抗体应答通常似乎多克隆的，大多数抗体具有低亲和力。但是，这些抗体中的某些可能与自体蛋白(诸如已经通过多种方式中的任一种在身体中进行翻译后酶法或非酶法化学修饰的自体蛋白)具有交叉反应性。这样的自体蛋白可以例如暴露于细胞的表面、存在于间质间隙中和/或在血液中循环。自体蛋白的修饰可以包括，例如，酰化和/或糖化(蛋白或脂质和糖之间的共价键的非酶法形成)。例如，可以以众多方式氧化蛋白，所述方式可以分类为至少3类。第一种机制涉及在蛋白主链或氨基酸侧链(例如，Pro、Arg、Lys、Thr、Glu或Asp残基的侧链)中的氧化性裂解，这可以通过活性氧(ROS)的直接氧化而发生。某些ROS在正常细胞代谢过程中产生，且存在对抗这样的化合物的潜在破坏作用的不同防御机制。ROS的例子包括，例如，超氧化物阴离子、过氧化氢和过氧亚硝酸盐。过度的活性氧(ROS)水平可以源自环境和/或细胞过程或抗氧化机制中的缺陷，从而导致高水平的氧化性应激。第二种蛋白氧化机制是通过向蛋白添加脂质氧化产物，诸如4-羟基-2-壬烯醛、2-丙烯醛或丙二醛。在第三种机制中，通过氧化高等糖化最终(AGE)产物，在蛋白中产生羰基。AGE可以作为初始糖化反应以后的一系列化学反应的结果而形成。AGE修饰的位点的例子是羧甲基赖氨酸(CML)和羧基乙基赖氨酸(CEL)。ROS可以降解多不饱和的脂质，从而形成丙二醛，即一种反应性的醛，其形成被称作高等脂氧化最终产物(ALE)的共价蛋白加合物。羧基乙基吡咯(CEP)蛋白修饰源自含有二十二碳六烯酸酯的脂质的氧化。
[0084] 修饰的自体蛋白(例如，丙二醛修饰的蛋白、CEP修饰的蛋白)可能含有被免疫系统(例如，被抗体)识别为非自身的表位。抗体与自体蛋白的结合会导致补体激活，例如，经由经典途径。一旦被启动，经典途径介导的补体激活会被旁路途径放大。根据本公开内容的某些方面，激活的补体会极化DC以维持Th17表型。例如，可以使DC极化朝向细胞因子(诸如IL-23)的分泌，所述细胞因子促进Th17形成和/或激活。补体裂解产物诸如过敏毒素(例如，C3a、C4a和/或C5a)和/或C3裂解和降解产物(诸如iC3b或C3d)可以结合DC细胞表面受体，并促进极化DC以维持Th17表型。补体可以极化DC的一个例子是氧化铝对树突细胞的激活。氧化铝被广泛用作疫苗佐剂。氧化铝会激活补体，并且这会刺激DC成为促进性的和维持性的Th2和Th17表型。补体也可以极化其它类型的抗原呈递细胞。单核细胞和巨噬细胞可以起抗原呈递细胞的作用，且可以类似地通过补体激活来极化。在某些方面，所述循环可以总结如下：(1)在高补体激活环境中的成熟树突细胞会刺激Th17细胞表型分化；(2)Th17T细胞会刺激多克隆B-细胞繁殖，从而导致多克隆的、自体反应性的抗体(例如，针对修饰的自体蛋白，诸如羰基修饰的自体蛋白)的产生；(3)羰基修饰的自体蛋白可以作为氧化性应激的结果而产生，所述氧化性应激可以源自例如污染物质、香烟烟气或变应原；(4)针对羰基修饰的自体蛋白的自体反应性抗体有助于促进或维持高补体激活环境；(5)高补体激活会驱动抗原呈递细胞进入维持Th17微环境。
[0085] 导致该循环引起组织损伤的效应物途径可以变化，但是不希望受任何理论约束，据信，一个基本途径是经由巨噬细胞。在某些方面，由Th17细胞分泌的IL-17单独地或者与一种或多种其它细胞因子(诸如干扰素γ(IFN-γ))组合地促进巨噬细胞激活和/或向M1表型的极化。M1-极化的巨噬细胞是这样的免疫效应细胞：其特征在于高水平的促炎性细胞因子表达、反应性的氮和氧中间体的高产生，且其可能表现出对靶标(诸如微生物和肿瘤细胞)的强细胞毒性活性。巨噬细胞(例如，M1-极化的巨噬细胞)和它们产生的产物可以导致组织损伤，并且是免疫病理学的重要介质。反应性的氮和氧物质对自体蛋白和其它细胞组分的修饰可以使得它们具有功能障碍，由此干扰正常细胞过程。功能障碍性的修饰蛋白可以积累至毒性水平，这可以导致细胞死亡。巨噬细胞也能够直接杀死改变的自体细胞，例如，具有暴露于它们的细胞表面处的氧化修饰的蛋白或脂质的自体细胞。由巨噬细胞产生的反应性的氮和氧物质可以放大氧化性应激，从而通过某些机制(诸如上述的那些)导致自体蛋白的进一步修饰，这会产生自体反应性的抗体和巨噬细胞的新靶标。所述抗体进一步激活补体，所述补体维持DC极化朝向促进Th17的表型。因而，有缺陷的循环得以持续，其中Th17细胞激活B细胞，从而导致多克隆抗体产生和后续的补体激活，这又会促进DC极化朝向促进Th17的表型，该表型驱动B细胞的继续刺激和抗体产生。为了关于这点的目的，该循环(也在上面总结过)可以被称作“树突细胞-Th17细胞-B细胞-抗体-补体-树突细胞”循环，缩写为DC-Th17-B-Ab-C-DC循环。巨噬细胞向M1表型的极化和可以直接损伤细胞组分的ROS的产生可以作为该反馈回路的“输出”而产生。源自DC-Th17-B-Ab-C-DC循环和它的输出的病理性后果可以在不同的组织或器官中变化。例如，在呼吸系统中，它们可以至少部分地成为慢性呼吸性疾病(诸如哮喘和COPD)的根源。在眼睛中，它们可以至少部分地成为慢性障碍(诸如年龄相关的黄斑变性)的根源。在皮肤中，它们可以至少部分地成为银屑病的根源。在胰腺中，它们可以至少部分地成为I型糖尿病的根源。
[0086] 在某些实施方案中，补体介导的慢性障碍是IgE-相关的障碍。本文中使用的“IgE-相关的障碍”是这样的障碍：其特征在于IgE的过度的和/或不适当的产生和/或量，IgE产生细胞(例如，产生IgE的B细胞或浆细胞)的过度的或不适当的活性，和/或IgE响应细胞(诸如嗜酸性粒细胞或肥大细胞)的过度的和/或不适当的活性。在某些实施方案中，IgE-相关的障碍的特征在于升高的总IgE水平，和/或在某些实施方案中，在受试者血浆中和/或局部地升高的变应原-特异性的IgE水平。
[0087] 在某些实施方案中，补体介导的慢性障碍的特征在于补体介导的溶血，例如，可归因于一种或多种内源补体调节蛋白的缺乏或突变的补体介导的溶血。在某些实施方案中，补体介导的慢性障碍不以可归因于例如一种或多种内源补体调节蛋白的缺乏或突变的溶血为特征。
[0088] 在某些实施方案中，补体介导的慢性障碍的特征在于自身抗体和/或免疫复合物(其可以经由例如经典途径激活补体)在身体中的存在。自身抗体可以例如结合自身抗原，例如，在体内的细胞或组织上的自身抗原。在某些实施方案中，自身抗体会结合血管、皮肤、神经、肌肉、结缔组织、心脏、肾、甲状腺等中的抗原。在某些实施方案中，补体介导的慢性障碍不以自身抗体和/或免疫复合物为特征。
[0089] 在某些实施方案中，本发明提供了通过施用多次剂量的补体抑制剂来治疗补体介导的慢性障碍的方法，其中根据利用延长的补体抑制作用的给药方案，施用补体抑制剂。“给药方案”表示施用化合物(或含有化合物的组合物)的时机。在某些实施方案中，发明的方法利用增加的给药间隔，例如，与目的在于在基本上整个治疗期中在体内维持显著补体抑制剂水平和/或显著补体抑制水平的给药间隔相比。在某些实施方案中，发明的方法利用增加的给药间隔，例如，与目的在于将受补体介导的障碍影响的组织或器官暴露于显著补体抑制剂水平和/或在基本上整个治疗期中在这样的组织或器官中(和/或在体液中，所述体液接触这样的组织或器官或者在这样的组织或器官内)维持显著补体抑制水平的给药间隔相比。本文中使用的“给药间隔”表示施用化合物(或包含化合物的组合物)的连续给药之间的时间间隔。
[0090] 在某些实施方案中，补体介导的慢性障碍是呼吸障碍。在某些实施方案中，慢性呼吸障碍是哮喘或慢性阻塞性肺疾病(COPD)。在某些实施方案中，慢性呼吸障碍是肺纤维化(例如，特发性肺纤维化)、辐射诱导的肺损伤、变应性支气管肺曲霉菌病、过敏性肺炎(也被称作变应性肺泡炎)、嗜酸性粒细胞性肺炎、间质性肺炎、类肉瘤、韦格纳氏肉芽肿病或闭塞性细支气管炎。
[0091] 在某些实施方案中，补体介导的慢性障碍是变应性鼻炎、鼻及鼻窦炎或鼻息肉病。在某些实施方案中，本发明提供了一种治疗需要治疗变应性鼻炎、鼻及鼻窦炎或鼻息肉病受试者的方法，所述方法包括：根据本文描述的给药方案，将补体抑制剂施用给需要治疗所述障碍的受试者。
[0092] 在某些实施方案中，补体介导的慢性障碍是影响肌肉骨骼系统的障碍。这样的障碍的例子包括：炎症性关节病症(例如，关节炎诸如类风湿性关节炎或银屑病关节炎、青少年慢性关节炎、脊椎关节病莱特尔氏综合征、痛风)。在某些实施方案中，肌肉骨骼系统障碍导致诸如受影响的身体部位的疼痛、僵直和/或活动受限等征状。炎症性肌病包括皮肌炎、多肌炎和作为导致肌无力的未知病原学的慢性肌肉炎症障碍的多种其它肌病。在某些实施方案中，补体介导的慢性障碍是重症肌无力。在某些实施方案中，本发明提供了一种治疗影响肌肉骨骼系统的前述障碍中的任一种的方法，所述方法包括：根据本文描述的给药方案，将补体抑制剂施用给需要治疗所述障碍的受试者。
[0093] 在某些实施方案中，补体介导的慢性障碍是影响皮肤系统的障碍。这样的障碍的例子包括：例如，异位性皮炎、银屑病、天疱疮、系统性红斑狼疮、皮肌炎、硬皮病、硬化性皮肌炎、合格伦综合征和慢性荨麻疹。在某些方面，本发明提供了一种治疗影响皮肤系统的前述障碍中的任一种的方法，所述方法包括：根据本文描述的给药方案，将补体抑制剂施用给需要治疗所述障碍的受试者。
[0094] 在某些实施方案中，补体介导的慢性障碍影响神经系统，例如，中枢神经系统(CNS)和/或周围神经系统(PNS)。这样的障碍的例子包括：例如，多发性硬化、其它慢性脱髓鞘疾病、肌萎缩性侧索硬化、慢性疼痛、中风、变应性神经炎、亨廷顿病、阿尔茨海默氏病和帕金森病。在某些实施方案中，本发明提供了一种治疗影响神经系统的前述障碍中的任一种的方法，所述方法包括：根据本文描述的给药方案，将补体抑制剂施用给需要治疗所述障碍的受试者。
[0095] 在某些实施方案中，补体介导的慢性障碍影响循环系统。例如，在某些实施方案中，所述障碍是脉管炎或与血管炎症有关的其它障碍，例如，血管和/或淋巴管炎症。在某些实施方案中，脉管炎是结节性多动脉炎、韦格纳氏肉芽肿病、巨细胞动脉炎、丘斯综合征、显微镜下多血管炎、亨诺-许兰氏紫癜、高安动脉炎、川崎病或贝切特氏病。在某些实施方案中，受试者(例如，需要治疗脉管炎的受试者)是抗中性白细胞胞质抗体(ANCA)阳性的。
[0096] 在某些实施方案中，补体介导的慢性障碍影响胃肠系统。例如，所述障碍可以是炎性肠病，例如，克罗恩氏病或渍疡性结肠炎。在某些实施方案中，本发明提供了一种治疗影响胃肠系统的补体介导的慢性障碍的方法，所述方法包括：根据本文描述的给药方案，将补体抑制剂施用给需要治疗所述障碍的受试者。
[0097] 在某些实施方案中，补体介导的慢性障碍是甲状腺炎(例如，桥本甲状腺炎、格雷夫斯病、产后甲状腺炎)、心肌炎、肝炎(例如，丙型肝炎)、胰腺炎、肾小球肾炎(例如，膜性增生性肾小球肾炎或膜性肾小球肾炎)或脂膜炎。
[0098] 在某些实施方案中，本发明提供了治疗遭受慢性疼痛的受试者的方法，所述方法包括：根据本发明的给药方案，给受试者施用补体抑制剂。在某些实施方案中，受试者遭受神经性疼痛。神经性疼痛已经被定义为由神经系统中的原发病灶或功能障碍引起或造成的疼痛，具体地，作为影响躯体感觉系统的病变或疾病的直接后果而产生的疼痛。例如，神经性疼痛可以源自涉及躯体感觉途径的病变，所述躯体感觉途径具有对周围神经中的小纤维和/或对CNS中的脊髓-丘脑皮质系统的损伤。在某些实施方案中，神经性疼痛源自自身免疫病(例如，多发性硬化)、代谢疾病(例如，糖尿病)、感染(例如，病毒性疾病诸如带状疱疹或HIV)、血管疾病(例如，中风)、创伤(例如，损伤、外科手术)或癌症。例如，神经性疼痛可以是在损伤愈合以后或周围神经末梢的刺激停止以后持续的疼痛，或者由于神经损伤而产生的疼痛。神经性疼痛的或者与神经性疼痛有关的示例性病症包括：疼痛性糖尿病性神经病、疱疹后神经痛(例如，在急性发作以后3个月或更多个月在急性带状疱疹部位持续或复发的疼痛)、三叉神经痛、癌症相关的神经性疼痛、化学疗法-相关的神经性疼痛、HIV相关的神经性疼痛(例如，源自HIV神经病)、中枢/中风后神经性疼痛、与背痛例如腰痛(例如，源自神经根病诸如脊髓根受压，例如，腰根受压，该受压可以由于椎间盘突出而产生)有关的神经病、椎管狭窄、周围神经损伤疼痛、幻肢痛、多神经病、脊髓损伤相关的疼痛、脊髓病和多发性硬化。在本发明的某些实施方案中，根据发明的给药方案施用补体抑制剂以治疗具有一种或多种前述病症的受试者中的神经性疼痛。
[0099] 在某些实施方案中，补体介导的慢性障碍是慢性眼障碍。在某些实施方案中，所述慢性眼障碍的特征在于黄斑变性、脉络膜新生血管形成(CNV)、视网膜新生血管形成(RNV)、眼炎症或前述的任意组合。黄斑变性、CNV、RNV和/或眼炎症可以是障碍的定义和/或诊断特征。以这些特征中的一种或多种为特征的示例性障碍包括、但不限于：黄斑变性相关的病症、糖尿病视网膜病变、早产儿视网膜病变、增生性玻璃体视网膜病变、葡萄膜炎、角膜炎、结膜炎和巩膜炎。黄斑变性相关的病症包括，例如，年龄相关的黄斑变性(AMD)。在某些实施方案中，受试者需要治疗湿性AMD。在某些实施方案中，受试者需要治疗干性AMD。在某些实施方案中，受试者需要治疗地图样萎缩(GA)。在某些实施方案中，受试者需要治疗眼炎症。眼炎症可以影响大多数眼结构，诸如结膜(结膜炎)、角膜(角膜炎)、巩膜外层、巩膜(巩膜炎)、葡萄膜、视网膜、脉管系统和/或视神经。眼炎症的证据可以包括：炎症相关的细胞诸如白血细胞(例如，嗜中性粒细胞、巨噬细胞)在眼睛中的存在，内源性炎症介质的存在，一种或多种征状诸如眼痛、发红、光敏感性、视力模糊和漂浮物等。葡萄膜炎是表示眼睛的葡萄膜中(例如，在葡萄膜的任一种结构中，包括虹膜、睫状体或脉络膜)的炎症的一般术语。葡萄膜炎的具体类型包括虹膜炎、虹膜睫状体炎、睫状体炎、睫状体扁平部炎和脉络膜炎。在某些实施方案中，受试者需要治疗地图样萎缩(GA)。在某些实施方案中，所述慢性眼障碍是以视神经损伤(例如，视神经变性)为特征的眼障碍，诸如青光眼。
[0100] 在某些实施方案中，补体介导的慢性障碍是移植的器官、组织、细胞或细胞群体(共同称作“移植物”)的慢性排斥。移植物的例子包括，例如，实体器官诸如肾、肝、肺、胰腺、心脏；组织诸如软骨、肌腱、角膜、皮肤、心脏瓣膜和血管；胰岛或胰岛细胞。移植排斥是与相同物种的遗传上不同的个体之间(同种异体移植)或不同物种的个体之间(异种移植)的移植有关的重大风险之一，且可以导致移植失效和从受体取出移植物的需求。本文中使用的“慢性排斥”表示移植后至少6个月发生的排斥，例如，移植后6个月至1、2、3、4、5年或更久，经常是在数个月至数年的良好移植物功能以后。为了关于这点的目的，慢性排斥可以包括慢性移植物血管病变，该术语用于表示移植的组织的内部血管的纤维化。在某些实施方案中，本发明提供了一种治疗需要治疗以抑制移植物的慢性排斥的受试者的方法，所述方法包括：根据本文描述的给药方案，给所述受试者施用补体抑制剂。在某些实施方案中，本发明提供了一种治疗已经经历移植或计划在以后12周内接受移植的受试者的方法。在某些实施方案中，在移植以后不迟于1、2、3、6或12个月开始治疗。
[0101] 在某些方面，本发明提供了一种治疗需要治疗补体介导的慢性障碍(例如，慢性呼吸障碍)的受试者的方法，所述方法包括：根据给药方案给所述受试者施用多次剂量的补体抑制剂，在所述给药方案中，如下平均施用连续给药：(i)在补体抑制剂的血浆浓度降低至不超过前一次给药后达到的最大血浆浓度的20％以后至少2周；(ii)血浆补体激活能力已经恢复至基线的至少50％或恢复至前一次给药后的正常范围内以后至少2周；(iii)以等于补体抑制剂的终末血浆半衰期的至少2倍的间隔；或(iv)以隔开至少3周的间隔。在某些实施方案中，发明的方法包括：以至少3周的平均给药间隔，例如，3-15周之间，例如，3-12周之间，例如，3-10周之间，例如，4-8周之间，例如，大约每4、5、6、7或8周，施用补体抑制剂。在某些实施方案中，满足前述条件中的至少2种。在某些实施方案中，满足前述条件中的至少3种。在某些实施方案中，满足所有前述条件。
[0102] 在本发明的某些实施方案中，根据特定给药方案施用补体抑制剂，所述给药方案至少部分地基于局部补体激活能力和/或补体抑制剂的局部浓度来选择。就本发明的目的而言，“局部补体激活能力”表示，受补体介导的障碍影响的组织或器官中的补体激活能力，其可以例如使用得自这样的组织或器官的有关样品来确定。就本发明的目的而言，“局部浓度”，例如，补体抑制剂或Th17生物标志物(诸如Th17-相关的细胞因子)的局部浓度，表示在组织或器官(例如，受补体介导的障碍影响的组织或器官)中的浓度，其可以例如使用得自这样的组织或器官的有关样品来确定。在某些实施方案中，样品包含得自受补体介导的障碍影响的组织或器官(或其部分)的体液。在某些实施方案中，流体是BAL流体、痰(例如，诱导的痰)、胸膜液、滑液、玻璃体液或房水或脑脊液。本发明提供了本文所述的任一种方法的变体，其中作为血浆补体激活能力的替代或者额外地使用局部补体激活能力。例如，在本发明的某些实施方案中，在局部补体激活能力已经恢复至基线的至少50％或恢复至前一次给药后的正常范围内以后至少2周，施用补体抑制剂。在本发明的某些实施方案中，在局部补体激活能力已经恢复至基线的至少50％或恢复至前一次给药后的正常范围内以后2-15周之间，施用补体抑制剂。在某些实施方案中，根据给药方案施用补体抑制剂，在所述给药方案中，如下平均施用连续给药：(i)在补体抑制剂的局部浓度降低至不超过前一次给药后达到的最大局部浓度的20％以后至少2周。在任一种前述方法的某些实施方案中，局部地施用补体抑制剂。
[0103] 在某些实施方案中，发明的方法包括：以至少3周的平均给药间隔，例如，3-15周之间，例如，3-12周之间，例如，3-10周之间，例如，4-8周之间，例如，大约每4、5、6、7或8周，施用补体抑制剂。在某些实施方案中，发明的方法包括：以4-6周之间的平均给药间隔，施用补体抑制剂。在某些实施方案中，施用足以基本上抑制血浆补体激活能力的剂量。在某些实施方案中，施用足以基本上抑制受补体介导的障碍影响的组织或器官中的局部补体激活能力的剂量。在某些实施方案中，如果降低至不超过2倍背景水平，例如，降低至大约背景水平，则认为“基本上抑制”补体激活能力(例如，血浆补体激活能力或局部补体激活能力)。背景水平(例如，对于本发明的任意方面或实施方案)可以是使用多种合适的方案确定的水平。例如，可以使用对照样品(例如，对照血浆样品或其它体液样品)，其中补体已经被灭活(例如，通过热灭活)，或其已经被除去一种或多种补体组分诸如C3，和/或可以进行其中省掉了基本测定组分的对照测定。在某些实施方案中，施用足以减少和/或维持血浆补体在正常范围内的剂量。在某些实施方案中，施用足以将受补体介导的障碍影响的组织或器官中的局部补体激活减少和/或维持在正常范围内的剂量。
[0104] 在发明的方法的某些实施方案中，要素(i)包括：根据给药方案给所述受试者施用多次剂量的补体抑制剂，在所述给药方案中，在补体抑制剂的血浆浓度降低至不超过前一次给药后达到的最大血浆浓度的10％(或在某些实施方案中，不超过5％，或在某些实施方案中，不超过1％)以后至少2周，平均施用连续给药。在发明的方法的某些实施方案中，要素(i)包括：根据给药方案给所述受试者施用多次剂量的补体抑制剂，在所述给药方案中，在补体抑制剂的血浆浓度降低至不超过前一次给药后达到的最大血浆浓度的20％以后至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15周，或在某些实施方案中，在补体抑制剂的血浆浓度降低至不超过前一次给药后达到的最大血浆浓度的10％(或在某些实施方案中，不超过5％，或在某些实施方案中，不超过1％)以后至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15周，平均施用连续给药。
[0105] 在某些实施方案中，发明的方法包括：以给药之间平均至少2周的间隔施用补体抑制剂，使得受试者的血浆补体激活能力是基线的至少50％或正常范围内。在某些实施方案中，发明的方法包括：以给药之间平均至少2周间隔施用补体抑制剂，使得受试者的血浆补体激活能力是基线的至少50％。“基线”在该背景下表示下述情况下的受试者的典型补体激活能力：当不受药剂施用或向刺激(其显著影响补体系统)的暴露影响时；且在先前6周内没有经历哮喘或COPD的恶化(或在本发明的某些方面，另一种补体介导的障碍，在适用时)。在某些实施方案中，发明的给药方案包括：以给药之间平均至少2周的间隔施用补体抑制剂，使得受试者的血浆补体激活能力是在正常范围内。“正常范围”在该背景下通常表示，在受试者群体的平均值(例如，算术平均值)±2个标准差的范围内。本领域普通技术人员会明白，“正常范围”的具体值可以至少部分地取决于用于评估补体激活能力的特定测定和/或诸如使用的具体试剂等因素。在某些实施方案中，可以使用公开的数据确定正常范围。在某些实施方案中，正常范围可以由实验室、试验中心、普通技术人员等适当地定义。
[0106] 在某些实施方案中，以给药之间平均至少3周(例如，3-15周之间，例如，3-12周之间，例如，3-10周之间，例如，4-8周之间，例如，约4、5、6、7或8周)的给药间隔施用补体抑制剂，使得受试者的补体激活能力是基线的至少50％或在正常范围内。就本发明的目的而言，应当假定，血浆和血清补体激活能力没有显著差异，且可以互换使用，除非有相反证据。如果确定存在差异，本发明提供了在其中使用血浆补体激活能力的实施方案，在其中使用血清补体激活能力的实施方案，和在其中使用平均值的实施方案。
[0107] 在某些实施方案中，发明的方法包括：以平均至少等于在静脉内施用时补体抑制剂的血浆半衰期的2倍(2X)的间隔，施用补体。在某些实施方案中，发明的给药方案包括：以平均至少等于在静脉内施用时补体抑制剂的血浆半衰期的3X、4X、5X、6X、7X、8X、9X或
10X的间隔，施用补体抑制剂。在某些实施方案中，发明的方法包括：以平均至少等于当通过相同途径施用时补体抑制剂的血浆半衰期的2倍(2X)的间隔，通过选定的施用途径施用补体抑制剂。在某些实施方案中，发明的方法包括：以平均至少等于当通过相同途径施用时补体抑制剂的血浆半衰期的3X、4X、5X、6X、7X、8X、9X或10X的间隔，施用补体抑制剂。在某些实施方案中，施用途径是呼吸途径。在某些实施方案中，补体抑制剂具有1-5天之间的平均血浆半衰期。在某些实施方案中，补体抑制剂具有5-10天之间的平均血浆半衰期。在某些实施方案中，补体抑制剂具有10-20天之间的平均血浆半衰期。在某些实施方案中，补体抑制剂具有20-30天之间的平均血浆半衰期。
10X的间隔，施用补体抑制剂。在某些实施方案中，发明的方法包括：以平均至少等于当通过相同途径施用时补体抑制剂的血浆半衰期的2倍(2X)的间隔，通过选定的施用途径施用补体抑制剂。在某些实施方案中，发明的方法包括：以平均至少等于当通过相同途径施用时补体抑制剂的血浆半衰期的3X、4X、5X、6X、7X、8X、9X或10X的间隔，施用补体抑制剂。在某些实施方案中，施用途径是呼吸途径。在某些实施方案中，补体抑制剂具有1-5天之间的平均血浆半衰期。在某些实施方案中，补体抑制剂具有5-10天之间的平均血浆半衰期。在某些实施方案中，补体抑制剂具有10-20天之间的平均血浆半衰期。在某些实施方案中，补体抑制剂具有20-30天之间的平均血浆半衰期。
[0108] 应当理解，可以使用多种确定药代动力学(PK)参数(诸如半衰期)的方案。本领域普通技术人员可以选择一种适当的方法。一般而言，通过包括下述步骤的方法，可以确定半衰期：将一剂或多剂化合物施用给受试者，在施用以后的不同时间从所述受试者获得血液样品，测量所述样品中的化合物的浓度，和至少部分地基于所述测量计算半衰期。例如，在某些实施方案中，可以在时间0(给药前)、给药后5min、15min、30min、1小时、4小时、8小时、24小时(1天)、48小时(2天)、96小时(4天)、192小时(8天)、14天、21天、28天，得到样品。应当理解，这些时间点是示例性的。在不同的实施方案中可以使用不同的时间点和/或更多或更少的时间点。本领域普通技术人员可以选择适当的时间点。在进行测量之前，通常处理血液样品以得到血浆或血清。就本发明的目的而言，应当假定，血浆和血清浓度(和药代动力学参数诸如半衰期)没有显著差异且可以互换使用，除非有相反证据。如果确定存在差异，本发明提供了在其中使用血浆浓度(和/或血浆半衰期)的实施方案，在其中使用血清浓度(和/或其中的血清半衰期)的实施方案，和在其中使用平均值的实施方案。
[0109] 本领域普通技术人员可以选择适当的测量化合物的方法。例如，在某些实施方案中，使用免疫测定。在某些实施方案中，使用基于色谱法的方法(例如，液相色谱法(LC)、液相色谱法-质谱法(LC-MS)或液相色谱法-串联质谱法(LC-MS-MS)。在某些实施方案中，使用生物测定。在许多实施方案中，所述半衰期是终末(消除)半衰期。在某些实施方案中，在施用单次剂量以后计算终末半衰期。在某些实施方案中，在施用多次剂量并允许浓度达到稳态以后，计算终末半衰期。在某些实施方案中，使用针对初始(分布)阶段确定的半衰期。例如，如果在分布阶段中从循环中除去了大部分化合物，在某些实施方案中可以使用初始半衰期。
[0110] 在某些实施方案中，使用在得自一组受试者的多次剂量PK数据上的无房室分析，通过进行PK分析来确定半衰期。在某些实施方案中，使用在得自一组受试者的多次剂量PK数据上的标准1-房室模型，通过进行PK分析来确定半衰期。在某些实施方案中，使用在遭受慢性呼吸障碍(例如，哮喘或COPD)的受试者中确定的半衰期。在某些实施方案中，使用在健康的且未知遭受障碍的受试者中确定的半衰期。在某些实施方案中，使用在遭受除了慢性呼吸障碍以外的补体介导的障碍的受试者中确定的半衰期。在某些实施方案中，使用在成年人(至少18岁的人)中确定的半衰期。
[0111] 在某些实施方案中，使用适合用于治疗补体介导的慢性障碍(例如，慢性呼吸障碍，例如，哮喘或COPD)的剂量，确定半衰期。在某些实施方案中，剂量足以将血浆补体激活能力降低至不超过正常范围的下限的50％。在某些实施方案中，剂量足以将血浆补体激活能力降低至不超过2倍背景水平，例如，降低至大约背景水平。在某些实施方案中，使用包含补体抑制剂的组合物确定半衰期，其中所述组合物与要用于治疗补体介导的慢性障碍的组合物相同或基本上类似。
[0112] 在某些实施方案中，通过缀合多肽或非多肽组分来修饰补体抑制剂，所述多肽或非多肽组分用于稳定化所述化合物、降低它的免疫原性、增加它在体内的寿命、增加或降低它的可溶性、和/或增加它对降解的抗性。例如，可以使用聚合物诸如聚乙二醇(PEG)、白蛋白或结合白蛋白的肽。在这样的实施方案中，“半衰期”通常表示如此修饰的补体抑制剂的半衰期。
[0113] 多种软件工具可用于便利PK参数的计算。例如，可以使用Phoenix NMLE或 Phoenix WinNonlin 软 件 (PharSight Corp，St.Louis，MO) 或 Kinetica(Thermo Scientific)。应当理解，可以使用基于模型的半衰期的合理估测。在某些实施方案中，在确定发明的给药间隔时，使用在特定化合物的I期、II期或III期临床试验中确定的和/或在递交给管理机构诸如FDA(例如，IND或NDA)的半衰期作为半衰期。
[0114] 在某些实施方案中，方法包括：根据发明的给药方案(即，使用根据本发明的给药间隔)，给受试者施用至少5、10、15、20或25次给药。在某些实施方案中，治疗持续至少3、6、9、12个月或更久的时段，例如，1-2年、2-5年、5-10年或更久，例如，无限长。
[0115] 应当理解，微小偏差，诸如与在本文中指定的给药间隔或范围相比更短或更长的给药间隔(例如，多达约5％、10％或20％的给药，例如，在诸如6个月、1年等时间跨度内)的偶然使用将落入本发明范围内。在某些实施方案中，受试者的给药间隔可以随时间变化，和/或可以至少部分地基于补体激活能力的测量结果和/或给药之间的疾病活动性(或其生物标志物)的评估来选择。
[0116] 在任一种本发明方法的某些实施方案中，静脉内地施用补体抑制剂。在任一种本发明方法的某些实施方案中，通过呼吸途径施用补体抑制剂。在任一种本发明方法的某些实施方案中，皮下地施用补体抑制剂。在任一种本发明方法的某些实施方案中，肌肉内地施用补体抑制剂。在任一种本发明方法的某些实施方案中，口服地施用补体抑制剂。
[0117] 在某些实施方案中，在提供补体抑制剂的持续释放(也被称作“延时释放”或“控释”)的制剂中，施用补体抑制剂。在使用持续释放制剂的某些实施方案中，至少部分地基于持续释放制剂释放补体抑制剂的时间长度，计算给药之间的时间间隔。例如，如果持续释放制剂在变得耗尽之前释放补体抑制剂至给药后N周，本发明提供了一种治疗受试者的方法，所述方法包括：根据给药方案施用多次剂量的所述持续释放制剂，在所述给药方案中，以至少N+3周(例如，N+3至N+15周，例如，N+3至N+12周，例如，N+3至N+10周，例如，N+4至N+8周，例如，大约每N+4、N+5、N+6、N+7或N+8周)的平均给药间隔，施用连续给药。在某些实施方案中，在下述情况下，认为持续释放制剂被耗尽：它不再释放足够的补体抑制剂以维持受试者的血浆补体激活能力和/或局部补体激活能力(例如，在受补体介导的障碍影响的组织或器官中)在正常范围以下或使其降低基线的至少50％。在某些实施方案中，在下述情况下，认为持续释放制剂被耗尽：它不再释放足够的补体抑制剂以维持受试者的血浆补体激活和/或局部补体激活(例如，在受补体介导的障碍影响的组织或器官中)在正常范围以下或使其降低基线的至少50％。在某些实施方案中，在下述情况下，认为持续释放制剂被耗尽：在施用时在制剂中含有的至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的补体抑制剂已经被释放，或者所述制剂已经基本上停止释放补体抑制剂。
[0118] 在本发明的不同实施方案中，预见到不同的补体抑制剂、补体抑制剂特征(例如，化合物类别、分子量、半衰期、分子靶标等)和给药参数(例如，给药间隔、给药途径等)和障碍(例如，本文中公开的呼吸障碍)的所有组合。例如，在某些实施方案中，发明的方法包括：以至少3周的平均给药间隔(例如，3-15周之间，例如，3-12周之间，例如，3-10周之间，例如，4-8周之间，例如，大约每4、5、6、7或8周)，静脉内施用补体抑制剂。在某些实施方案中，发明的方法包括：以至少3周的平均给药间隔(例如，3-15周之间，例如，3-12周之间，例如，3-10周之间，例如，大约每4、5、6、7或8周)，经肺施用补体抑制剂。
[0119] 进一步提供了为施用补体抑制剂而选择给药间隔的方法。在某些实施方案中，为施用补体抑制剂而选择给药间隔的方法包括：(a)得到补体抑制剂的半衰期；和(b)选择比半衰期长至少2-10周的给药间隔。在某些实施方案中，为施用补体抑制剂而选择给药间隔的方法包括：(a)得到补体抑制剂的半衰期；和(b)选择是半衰期的至少3倍的给药间隔。在某些实施方案中，为补体抑制剂选择给药间隔的方法包括：(a)确定补体抑制剂使血浆补体激活能力降低基线的至少50％所需的时间长度和/或补体抑制剂将血浆补体激活能力降低至正常范围以下所需的时间长度；和(b)基于所述测量的时间长度，选择上述的本发明的给药间隔中的任一种。在某些实施方案中，选择给药间隔的方法可以进一步包括：试验根据发明的给药方案施用给动物的补体抑制剂，所述动物充当补体介导的慢性障碍(例如，慢性补体介导的呼吸障碍)的模型。
[0120] 在某些实施方案中，发明的治疗方法包括诱导阶段和维持阶段。在许多实施方案中，当受试者开始治疗时，发生诱导阶段(如果使用的话)。所述诱导阶段可以由这样的时间段组成：在该时间段中，与在维持阶段中相比，以更高的剂量和/或以更频繁的间隔和/或使用不同的给药途径施用补体抑制剂。在维持阶段中，可以使用上述的任一种本发明的给药方案和/或给药间隔施用补体抑制剂。例如，可以如下施用补体抑制剂：在诱导阶段中每周，且在维持阶段中，平均每4-15周，例如，每4-8周。在某些实施方案中，在诱导阶段中，每天施用补体抑制剂1次或多次。在某些实施方案中，在诱导阶段中，每周施用补体抑制剂至少1、2、3、4、5、6或7次。在某些实施方案中，诱导阶段持续多达1、2、3、4、5、6、7或8周。在某些实施方案中，在诱导阶段中调节剂量或给药间隔。例如，在某些实施方案中，在诱导阶段中，可以随时间增加给药间隔，和/或可以随时间减小或增加剂量。
[0121] 如上面所指出的，在某些实施方案中，所述慢性呼吸性疾病是哮喘。关于哮喘的危险因素、流行病学、发病机制、诊断、当前处理等的信息，可以参见，例如，“Expert Panel Report3：Guidelines for the Diagnosis and Management of Asthma”.National Heart Lung and Blood Institute.2007.http://www.nhlbi.nih.gov/guidelines/asthma/asthgdln.pdf.(“NHLBI Guidelines”；www.nhlbi.nih.gov/guidelines/asthma/asthgdln.htm)，Global Initiative for Asthma，Global Strategy for Asthma Management and Prevention2010“GINA Report”)，和/或内科学的标准教科书诸如Cecil Textbook of Medicine(第20版)，Harrison’s Principles of Internal Medicine(第17版)，和/或聚焦于肺医学的标准教科书。哮喘是一种慢性炎症性气道障碍，许多细胞和细胞组件在其中起作用，例如，肥大细胞、嗜酸性粒细胞、T淋巴细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞和上皮细胞。哮喘个体会经历与诸如哮鸣、气绝(也被称作呼吸困难或呼吸短促)、胸部紧迫感和咳嗽等征状有关的复发性发作。这些发作通常与泛发的、但是可变的气流阻塞(其经常是可逆的，无论是自发地还是经过治疗)有关。所述炎症也会造成对多种刺激的现有支气管高反应性的伴随增加。气道高反应性(对刺激的夸大支气管收缩应答)是哮喘的一个典型特征。一般而言，气流限制源自支气管收缩和气道水肿。在某些具有哮喘的患者中，气流限制的可逆性可以是不完全的。例如，气道重塑可以导致固定的气道缩窄。结构变化可以包括：基膜下增厚，上皮下纤维化、气道平滑肌肥大和增生、血管增殖和膨胀、和粘液腺增生和分泌过多。
[0122] 患有哮喘的个体可能经历恶化，所述恶化被鉴别为以从该个体的先前状态的变化为特征的事件。严重哮喘恶化可以定义为这样的事件：其需要就个体和他/她的医师而言的紧迫行动来防止严重结果，诸如住院治疗或死于哮喘。例如，严重哮喘恶化可能需要在其哮喘经常在没有OCS的情况下得到良好控制的受试者中使用全身性皮质类固醇(例如，口服皮质类固醇)，或者可能需要增加稳定的维持剂量。中等哮喘恶化可以定义为这样的事件：其对于受试者而言是讨厌的，且其提示需要改变治疗，但是其不是严重的。这些事件在临床上被鉴别为在受试者的天与天之间哮喘变异的常见范围之外。
[0123] 哮喘的当前药物通常分成2大类：长期控制药物(“控制器药物”)诸如吸入的皮质类固醇(ICS)、口服的皮质类固醇(OCS)、长效支气管扩张剂(LABA)、白三烯修饰剂(例如，白三烯受体拮抗剂或白三烯合成抑制剂、抗-IgE抗体(奥马珠单抗( ))、色甘酸和奈多罗米(它们被用于实现和维持持久性哮喘的控制)和快速缓解药物诸如短效支气管扩张剂(SABA)(它们被用于治疗急性征状和恶化)。就本发明的目的而言，这些治疗可以被称作“常规疗法”。恶化的治疗还可以包括：增加控制器药物疗法的剂量和/或强度。例如，可以使用OCS疗程来恢复哮喘控制。当前的指南要求每天施用控制器药物，或者在许多情况下，对于患有持久性哮喘的受试者而言，每天施用多次剂量的控制器药物(除了Xolair之外，其每2或4周施用)。
[0124] 如果受试者遭受平均每周超过2次的征状和/或通常每周使用快速缓解药物(例如，SABA)超过2次进行征状控制，通常认为该受试者患有持久性哮喘。基于在已经治疗有关的并存病且已经优化吸入器技术和附着以后控制受试者的哮喘所需的治疗强度，可以将“哮喘严重程度”分类(参见，例如，GINA Report；Taylor，DR，Eur Respir J2008；32：545-554)。治疗强度的描述可以基于在指南(诸如NHLBI Guidelines2007，GINA Report和它们的先前版本)中和/或在标准医学教科书中发现的阶梯式治疗算法所推荐的药物和剂量。例如，可以将哮喘分类为间歇的、轻度、中度或重度，如表1所示，其中“治疗”表示足以实现受试者的最佳哮喘控制水平的治疗(应该理解，轻度、中度和重度哮喘的分类通常暗示持久性的而不是间歇的哮喘)。本领域普通技术人员会明白，表1是示例性的，并且并非所有这些药物都可在所有健康护理系统中得到，它们在某些情况下可能影响哮喘严重程度的评估。还应当理解，其它新出现的或新的方案可能影响轻度/中度哮喘的分类。但是，仍然可以应用相同的原则，其中轻度哮喘通过使用非常低强度治疗实现良好控制的能力来定义，且严重哮喘通过对高强度治疗的需求来定义。还可以或者可替代地基于在没有治疗存在下疾病的固有强度来对哮喘严重程度分类(参见，例如，NHBLI Guidelines2007)。可以基于当前的肺量测定法和在先前2-4周中患者的征状的恢复做出评估。可以评估当前的病损和将来的风险的参数，并在确定哮喘严重程度水平时包括在内。在某些实施方案中，如图
3所示，定义哮喘严重程度。NHBLI Guidelines的4(a)、3.4(b)、3.4(c)分别用于0-4岁、
5-11岁或≥12岁的个体。
3所示，定义哮喘严重程度。NHBLI Guidelines的4(a)、3.4(b)、3.4(c)分别用于0-4岁、
5-11岁或≥12岁的个体。
[0125] 表1：基干治疗的哮喘分类
[0126]哮喘分类 治疗
间歇的 SABA，在需要时(通常不超过每周2次)
轻度 低剂量ICS或其它低强度治疗(例如，LTRA、色甘酸、奈多罗米、茶碱)
中度 低至中剂量ICS和LABA或其它额外治疗
重度 高强度治疗(高剂量ICS和LABA±口服皮质类固醇和/或其它额外治疗)
间歇的 SABA，在需要时(通常不超过每周2次)
轻度 低剂量ICS或其它低强度治疗(例如，LTRA、色甘酸、奈多罗米、茶碱)
中度 低至中剂量ICS和LABA或其它额外治疗
重度 高强度治疗(高剂量ICS和LABA±口服皮质类固醇和/或其它额外治疗)
[0127] “哮喘控制”表示，通过治疗(无论药理学的还是非药理学的)已经减轻或除去哮喘表现的程度。基于诸如征状频率、夜间征状、肺功能的客观量度(诸如肺量测定法参数，例如，预测的FEV1变异性的％FEV1)、征状控制对SABA应用的需求等因素，可以评估哮喘控制。可以评估当前的病损和将来的风险的参数，并在确定哮喘控制水平时包括在内。在某些实施方案中，如图4所示，定义哮喘控制。NHBLI Guidelines的3(a)、4.3(b)或4.3(c)分别用于0-4岁、5-11岁或≥12岁的个体。
[0128] 一般而言，本领域普通技术人员可以选择确定哮喘严重程度水平和/或控制程度的适当方式，并且可以使用本领域普通技术人员认为合理的任何分类法。
[0129] 在本发明的某些实施方案中，使用发明的给药方案，用补体抑制剂治疗遭受持久性哮喘的受试者。在某些实施方案中，所述受试者遭受轻度或中度哮喘。在某些实施方案中，所述受试者遭受严重哮喘。在某些实施方案中，受试者患有使用常规疗法不能良好控制的哮喘。在某些实施方案中，受试者患有这样的哮喘：当使用常规疗法治疗时，其需要使用ICS才能得到良好控制。在某些实施方案中，受试者患有尽管使用ICS也不能得到良好控制的哮喘。在某些实施方案中，受试者患有这样的哮喘：当使用常规疗法治疗时，其需要使用OCS才能得到良好控制。在某些实施方案中，受试者患有尽管使用高强度常规疗法(包括OCS)也不能得到良好控制的哮喘。在本发明的某些实施方案中，发明的给药方案包括：施用补体抑制剂作为控制器药物，其中与标准控制器药物相比，以降低的频率和/或基于更低的规律性施用补体抑制剂，同时维持至少等效的哮喘控制。在某些实施方案中，与常规控制器药物的标准方案相比，发明的给药方案会提供提高的患者可接受性、顺应性和/或方便，同时维持至少等效的哮喘控制。在某些实施方案中，用补体抑制剂治疗受试者(例如，根据发明的给药方案)可以显著降低剂量(例如，降低至少50％)或基本上避免使用ICS、Xolair和/或OCS作为控制器药物。
[0130] 在某些实施方案中，所述受试者遭受变应性哮喘，这是大多数哮喘个体的情况。在某些实施方案中，在下述情况下，认为哮喘受试者具有变应性哮喘：哮喘的非变应性触发因素(例如，冷、锻炼)是未知的和/或在标准诊断评价中未鉴别出。在某些实施方案中，在下述情况下，认为哮喘受试者具有变应性哮喘：受试者(i)在暴露于所述受试者敏感的一种或多种变应原以后，重现性地发展哮喘征状(或哮喘征状的恶化)；(ii)表现出所述受试者敏感的一种或多种变应原的特异性IgE；(iii)表现出对所述受试者敏感的一种或多种变应原的阳性皮肤-单刺试验；和/或(iv)表现出与特应性诸如变应性鼻炎、湿疹或升高的总血清IgE一致的特征的其它征状。应当理解，可以未鉴别出特定的变应性触发因素，但是如果例如受试者在特定环境中经历恶化征状，可以进行怀疑或推断。
[0131] 通过吸入进行的变应原攻击是一种被广泛用于评价变应性气道疾病的技术。变应原的吸入会导致与IgE受体(其在例如肥大细胞和嗜碱性粒细胞上)结合的变应原-特异性的IgE的交联。接着发生分泌途径的激活，从而导致支气管收缩和血管渗透性的介质的释放。患有变应性哮喘的个体在变应原攻击以后可能发展不同的表现，例如，早期哮喘应答(EAR)、晚期哮喘应答(LAR)、气道高反应性(AHR)和气道嗜酸性粒细胞增多症，它们中的每一种可以通过本领域已知的方法来检测和定量。例如，可以将气道嗜酸性粒细胞增多症检测为痰和/或BAL流体中的嗜酸性粒细胞的增加。EAR有时被称作立即哮喘应答(IAR)，是对通过吸入进行的变应原攻击的应答，其在吸入后不久(通常在吸入的10分钟(min)内)变成可检测的，例如，可检测为FEV1的降低。EAR通常在攻击后30min内达到最大值，并在攻击后2-3小时(h)内消退。例如，在下述情况下，可以认为受试者表现出“阳性”EAR：与基线FEV1相比，他/她的FEV1在该时间窗内下降了至少15％，例如，至少20％(其中“基线”在该背景下表示攻击之前的状况，例如，与受试者在没有经历哮喘恶化且未暴露于受试者敏感的变应性刺激时与所述受试者的通常状况相当的状况)。晚期哮喘应答(LAR)通常在攻击后3h至8h之间开始，且特征在于气道细胞炎症、增加的支气管血管渗透性和粘液分泌。它通常被检测为FEV1的降低，其可能在量级上大于与EAR有关的降低，且可能在临床上更重要。例如，在下述情况下，可以认为受试者表现出“阳性”LAR：与基线FEV1相比，他/她的FEV1在有关的时间段内相对于基线FEV1下降了至少15％，例如，至少20％。延迟的气道应答(DAR)可以如下发生：开始于攻击后约26-32h时间，在约32-48h之间达到最大值，且在约56h内消退(Pelikan，Z.Ann Allergy Asthma Immunol.2010，104(5)：394-404)。
[0132] 在某些实施方案中，所述慢性呼吸障碍是慢性阻塞性肺疾病(COPD)。COPD包括以气流限制为特征的一系列病症，所述气流限制即使在治疗下也不是完全可逆的，且经常是进行性的。COPD的征状包括：呼吸困难(气绝)、降低的锻炼耐受性、咳嗽、痰产生、哮鸣和胸部紧迫感。患有COPD的人可以经历急性发作(例如，发展经历小于1周的病程，且经常经历24小时或更短的病程)、征状恶化(称作COPD恶化，其在频率和持续时间方面可以变化)，且与显著发病率有关。它们可以被诸如呼吸感染、暴露于有害颗粒等事件触发，或者可以具有未知的病原学。吸烟是最常遇到的COPD危险因子，且其它吸入暴露也可以促成该疾病的发展和进展。遗传因素在COPD中的作用是一个活跃的研究领域。小百分比的COPD患者具有α-1抗胰蛋白酶(丝氨酸蛋白酶的一种主要循环抑制剂)的遗传性缺乏，且该缺乏可以导致该疾病快速进行性形式。
[0133] COPD的特有病理生理学特征包括小气道的缩窄和结构变化以及肺实质(尤其是在肺泡周围)的破坏，最常见的原因是慢性炎症。在COPD中观察到的慢性气流限制通常涉及这些因素的混合物，并且它们在促成气流限制和征状中的相关重要性因人而异。术语“肺气肿”表示在终末细支气管远端的空气空间(肺泡)的膨大，并破坏它们的壁。应当指出，术语“肺气肿”在临床上经常用于表示与这样的病理学变化有关的医学病症。一些患有COPD的个体具有慢性支气管炎，后者以临床术语的方式定义为，在1年的3个月的大多数天中咳嗽并有痰产生，持续连续2年。关于COPD的危险因素、流行病学、发病机制、诊断和当前处理的其它信息，可以参见，例如，“Global Strategy for the Diagnosis，Management，and Prevention of Chronic Obstructive Pulmonary Disease”(2009年更新)，可在Global Initiative on Chronic Obstructive Pulmonary Disease，Inc.(GOLD)网站(www.goldcopd.org)上得到，在本文中也被称作“GOLD Report”；American Thoracic Society/European Respiratory Society Guidelines(2004)，可在ATS网站上在www.thoracic.org/clinical/copd-guidelines/resources/copddoc.pdf得到，在本文中被称作“ATC/ERS COPD Guidelines”；和内科学的标准教科书，诸如Cecil Textbook of Medicine(第20版)，Harrison’s Principles of Internal Medicine(第17版)；和/或聚焦于肺医学的标准教科书。
[0134] 在某些实施方案中，本文中公开的方法会抑制(干扰、破坏)上面讨论的DC-Th17-B-Ab-C-DC循环。例如，补体抑制剂的施用可以中断该循环，补体通过该循环刺激DC细胞以促进Th17表型。所以，Th17细胞的数目和/或活性减少，这又会减少Th17介导的B细胞的刺激和多克隆抗体产生的量。在某些实施方案中，这些效应会导致免疫学微环境“复位”至更正常的、更少病理学的状态。如在实施例1中所述，在哮喘的动物模型中得到了这样的证据：其支持补体抑制对Th17-相关的细胞因子产生具有延长的抑制作用的能力。
[0135] 在某些实施方案中，抑制DC-Th17-B-Ab-C-DC循环具有疾病调节效应。不希望受任何理论约束，不是仅仅治疗障碍的征状，抑制DC-Th17-B-Ab-C-DC循环可能干扰基础发病机制，所述基础发病机制可以促进进行中的组织损伤(即使当征状受到良好控制时)和/或可以促进疾病的恶化。在某些实施方案中，抑制DC-Th17-B-Ab-C-DC循环会造成慢性障碍变得减轻。在某些实施方案中，减轻表示疾病活动性在具有慢性障碍的受试者中缺失或基本上缺失的状态，具有疾病恢复的可能性。在某些实施方案中，在没有连续治疗存在下或以减小的剂量或增加的给药间隔，减轻可以持续延长的时间段(例如，至少6个月，例如，6-12个月、12-24个月或更久)。在某些方面，补体的抑制可以改变在Th17细胞中富含的组织的免疫学微环境，并将它调节成在调节性T细胞(Tregs)中富含的微环境。这样做可以是免疫系统将它自身“复位”并变成减轻状态。在某些实施方案中，例如，减轻可以持续至触发事件发生。触发事件可以是，例如，感染(其可能导致与传染性病原体和自体蛋白二者反应的多克隆抗体的产生)、暴露于特定环境条件(例如，高水平的空气污染物质诸如臭氧或颗粒物或诸如香烟烟气等烟气的组分、变应原)等。遗传因素可能起作用。例如，具有编码补体组分的基因的特定等位基因的个体可能具有更高的补体活性基线水平、更高反应性的补体系统和/或更低的内源性补体调节蛋白活性的基线水平。在某些实施方案中，个体具有与增加的AMD风险有关的基因型。例如，受试者可能具有编码补体蛋白或补体调节蛋白(例如，CFH、C3、因子B)的基因的多态性，其中所述多态性与增加的AMD风险有关。
[0136] 在某些实施方案中，免疫学微环境可能随时间变得逐渐更偏向病理学状态，例如，在尚未发展慢性障碍征状的受试者中或在已经发展所述障碍且已经如本文中所述进行治疗的受试者中。这样的转变可以随机地发生(例如，至少部分地由于抗体水平和/或亲和力的表明上随机的波动)和/或由于累积的“亚阈值”触发事件而发生，所述“亚阈值”触发事件的强度不足以触发障碍的有征状爆发。
[0137] 在某些方面，本文中公开的方法包括：针对DC-Th17-B-Ab-C-DC循环的证据，监测受试者。如果检测到这样的证据，可以用补体抑制剂和/或破坏DC-Th17-B-Ab-C-DC循环的其它药剂治疗受试者。在某些实施方案中，针对Th17细胞(例如，Th17细胞数目或相对数目)和/或针对一种或多种与Th17细胞和/或Th17活性有关的生物标志物(“Th17生物标志物”)，试验受试者。在某些实施方案中，至少部分地基于用Th17生物标志物对Th17细胞的评估，用补体抑制剂治疗受试者。“Th17生物标志物”包括与Th17细胞存在(例如，Th17细胞的数目或浓度)相关和/或与至少一种Th17细胞活性相关的任何分子或可检测的指标。在某些实施方案中，Th17生物标志物包含一定水平的Th17-相关的细胞因子。在某些实施方案中，Th17-相关的细胞因子是促进Th17细胞的形成和/或激活的细胞因子，例如，IL-6、IL-21、IL-23和/或IL-1β。在某些实施方案中，Th17-相关的细胞因子是由Th17细胞产生的细胞因子，例如，IL-17(例如，IL-17A和/或IL-17F)、IL-21和/或IL-22。在某些实施方案中，Th17-相关的活性的量的增加或相对量的增加指示增加的Th17细胞和/或增加的Th17-相关的活性。在某些实施方案中，相对量是与不同的细胞因子相比的量。
在某些实施方案中，所述不同的细胞因子与Treg细胞有关。在某些实施方案中，所述不同的细胞因子是IL-10。在某些实施方案中，测量2、3、4、5种或更多种Th17-相关的细胞因子的水平。可以得到指示Th17-相关的活性水平的集合指标或评分，并用作Th17生物标志物。
在某些实施方案中，评估Th17细胞本身的存在或水平，用于可以评估Th17生物标志物的任意目的。在某些实施方案中，评估Tregs的存在或水平。在某些实施方案中，基于FOXP3的表达来鉴别Tregs。
在某些实施方案中，所述不同的细胞因子与Treg细胞有关。在某些实施方案中，所述不同的细胞因子是IL-10。在某些实施方案中，测量2、3、4、5种或更多种Th17-相关的细胞因子的水平。可以得到指示Th17-相关的活性水平的集合指标或评分，并用作Th17生物标志物。
在某些实施方案中，评估Th17细胞本身的存在或水平，用于可以评估Th17生物标志物的任意目的。在某些实施方案中，评估Tregs的存在或水平。在某些实施方案中，基于FOXP3的表达来鉴别Tregs。
[0138] 在某些实施方案中，在得自受试者的样品中测量Th17生物标志物水平。在某些实施方案中，样品包含体液，例如，血液、BAL流体、痰、鼻分泌物、尿等。在某些实施方案中，样品包含组织样品，其可以得自受补体介导的障碍影响的组织或器官。在某些实施方案中，评估不同体液或一种体液的2个或更多个样品和一种组织样品。在某些实施方案中，将水平与参考值进行对比。在某些实施方案中，参考值可以是正常值(例如，在正常范围内的值，例如，正常范围的上限)。在某些实施方案中，参考值可以是在以前的时间(例如，当受试者的障碍受到良好控制时，或在所述障碍发展之前)针对受试者建立的值。在某些实施方案中，如果测量值显著偏离参考值或者显示出增加的偏离参考值的偏差的趋势，可以用补体抑制剂治疗受试者。在某些实施方案中，可以用补体抑制剂和破坏DC-Th17-B-Ab-C-DC循环的第二种试剂治疗受试者。“正常范围”可以是包括至少95％的健康个体的范围。在某些实施方案中，参考值可以是与疾病有关的值，例如，在处于未治疗状态的患病受试者中通常发现的值。在某些实施方案中，正常的或疾病相关的范围可以至少部分地取决于人口统计因素诸如年龄、性别等，且可以相应地进行调节。可以根据经验为不同的障碍和/或不同的Th17生物标志物和/或在某些实施方案中为单个受试者建立适当的参考值或范围。
[0139] 在某些实施方案中，预见到Th17细胞和/或Th17生物标志物的体内评估。例如，在某些实施方案中，给受试者施用可检测地标记的试剂，所述试剂结合Th17细胞(例如，结合Th17细胞适当地特有的细胞表面标志物或它们的组合)或结合Th17-相关的细胞因子。使用合适的成像方法使所述试剂在体内显影。在某些实施方案中，例如，得到肺、皮肤或可能受补体介导的障碍影响的其它位置的图像。在某些实施方案中，体内检测允许评估目标组织或器官中的免疫学微环境。在某些实施方案中，可检测标记物包含荧光的、放射性的、超声的或磁性地可检测的部分。在某些实施方案中，成像方法包括磁共振成像、超声成像、光学成像(例如，荧光成像或生物发光成像)或核成像。在某些实施方案中，荧光部分包含近红外或红外荧光部分(在光谱的近红外或红外区域中发射)。在某些实施方案中，成像方法包括正电子发射断层摄影术(PET)和单光子发射计算机体层摄影术(SPECT)。在一些实施方案中，将可检测标记物连接至与待测靶标直接结合的试剂。在某些实施方案中，可检测标记物与颗粒结合或掺入颗粒中或包含颗粒，在某些实施方案中，所述颗粒在它们的表面处具有与待测靶标直接结合的试剂。
[0140] 在某些实施方案中，将得自Th17生物标志物评估的信息与其它信息(例如基因型信息、环境暴露信息和/或受试者历史信息)一起使用，以确定是否或何时施用补体抑制剂和/或抗-Th17试剂，和/或为受试者选择剂量或给药方案。在某些实施方案中，生物标志物评估和/或治疗决策方法中的任一种可以至少部分地由一台或多台计算机执行。在某些实施方案中，生物标志物评估和/或治疗决策方法中的任一种可以至少部分地体现或储存在计算机可读介质上，所述介质在其上面具有计算机可执行的指令。在某些实施方案中，计算机可读介质包含任何非暂时的和/或实体的计算机可读介质。
[0141] 在某些实施方案中，可以在固定的时间表进行再治疗。
[0142] 每当关于补体介导的障碍描述本文中的方面或实施方案时，提供了与Th17-相关的障碍有关的类似方面和实施方案。每当关于补体介导的障碍描述本文中的方面或实施方案时，提供了与Th17-相关的障碍有关的类似方面和实施方案。在不同的实施方案中，预见到不同补体抑制剂、补体抑制剂特征(例如，化合物类别、分子量、半衰期、分子靶标等)、抗-Th17试剂和给药参数(例如，给药间隔、给药途径等)和本文中公开的障碍的所有组合。在不同的实施方案中，预见到不同补体抑制剂、补体抑制剂特征(例如，化合物类别、分子量、半衰期、分子靶标等)、抗-Th17试剂、抗-Th17试剂特征(例如，化合物类别、分子量、半衰期、分子靶标等)和给药参数(例如，给药间隔、给药途径等)和本文中公开的障碍的所有组合。
[0143] 在某些方面，本发明提供了治疗补体介导的慢性障碍或Th17-相关的障碍的方法，所述方法包括：给有此需要的受试者施用补体抑制剂和抗-Th17试剂。在某些实施方案中，根据任何合适的给药方案，施用补体抑制剂和/或抗-Th17试剂。在某些实施方案中，根据本文描述的给药方案，施用补体抑制剂和抗-Th17试剂。在某些实施方案中，所述慢性障碍是任意补体介导的慢性障碍或任意Th17-相关的障碍。在某些方面，本发明提供了治疗补体介导的慢性障碍的方法，所述方法包括：给有此需要的受试者施用抗-Th17试剂。在某些实施方案中，根据任何合适的给药方案，施用抗-Th17试剂。在某些实施方案中，根据本文描述的给药方案，施用抗-Th17试剂。在某些实施方案中，提供了包含补体抑制剂和抗-Th17试剂的组合物，例如，药物组合物。在部分V中讨论了示例性的抗-Th17试剂。
[0144] III.补体系统
[0145] 为了促进本发明的理解，且无意以任何方式限制本发明，本部分提供了补体和它的激活途径的概述。其它细节参见，例如，Kuby Immunology，2006年第6版；Paul，W.E.，Fundamental Immunology，Lippincott Williams&Wilkins；2008年第6版；和Walport MJ.，Complement.2个部分的第一部分.N Engl J Med.，344(14)：1058-66，2001。
[0146] 补体是先天性免疫系统的一个分支，其在对抗传染性病原体的身体防御中起重要作用。补体系统包含30多种血清蛋白和细胞蛋白，所述蛋白涉入三个主要途径：称为经典途径、旁路途径和凝集素途径。经典途径通常通过抗原与IgM或IgG抗体的复合物与C1的结合而触发(但某些其它激活剂也可以启动此途径)。激活的C1裂解C4和C2，除了产生C2a和C2b之外，还产生C4a和C4b。C4b与C2a组合以形成C3转化酶，其裂解C3以形成C3a和C3b。C3b与C3转化酶的结合会产生C5转化酶，其将C5裂解成C5a和C5b。C3a、C4a和C5a是过敏毒素，并且介导急性炎症应答中的多种反应。C3a和C5a还是趋化因子，其吸引免疫系统细胞诸如嗜中性粒细胞。
[0147] 旁路途径是由例如微生物表面和各种复合多糖启动和放大。在此途径中，C3向C3(H2O)的水解(其以低水平自发发生)会导致因子B(其被因子D裂解)的结合，从而产生流体相C3转化酶，所述C3转化酶通过将C3裂解成C3a和C3b而激活补体。C3b结合靶标诸如细胞表面，并与因子B(其以后被因子D裂解)形成复合物，从而产生C3转化酶。表面结合的C3转化酶会裂解和激活其它C3分子，导致在激活部位紧密靠近处的快速C3b沉积，并导致其它C3转化酶的形成，这又会产生其它C3b。该过程会导致C3裂解和C3转化酶形成的循环，这会显著扩大应答。C3的裂解以及另一分子C3b与C3转化酶的结合会产生C5转化酶。此途径的C3和C5转化酶受宿主细胞分子CR1、DAF、MCP、CD59和fH调节。这些蛋白质的作用模式涉及衰变加速活性(即，解离转化酶的能力)、在因子I对C3b或C4b的降解中充当辅因子的能力，或二者。通常，补体调节蛋白在宿主细胞表面上的存在会阻止在其上面发生显著的补体激活。
[0148] 两种途径中产生的C5转化酶裂解C5以产生C5a和C5b。C5b然后结合至C6、C7和C8以形成C5b-8，其催化C9的聚合以形成C5b-9膜攻击复合物(MAC)。MAC本身插入靶细胞膜中，并引起细胞裂解。细胞膜上的少量MAC可能具有除细胞死亡以外的多种后果。
[0149] 凝集素补体途径是由甘露糖结合凝集素(MBL)和MBL相关丝氨酸蛋白酶(MASP)与碳水化合物的结合而启动。MBl-1基因(在人类中，称为LMAN-1)编码位于内质网与高尔基体(Golgi)之间的中间区域中的I型嵌膜蛋白。MBL-2基因编码存在于血清中的可溶性甘露糖结合蛋白。在人凝集素途径中，MASP-1和MASP-2涉入C4和C2的蛋白酶解，产生上文所述的C3转化酶。
[0150] 补体活性受称作补体调节蛋白(CCP)或补体激活(RCA)蛋白调节剂(RCA)的各种哺乳动物蛋白调节(美国专利号6,897,290)。这些蛋白质在配体特异性和补体抑制机制方面存在差异。它们可加速转化酶的正常衰变和/或充当因子I的辅因子，以将C3b和/或C4b酶促裂解成更小的片段。CCP的特征是存在多个(通常4-56个)同源基序，所述同源基序被称为短共有重复序列(SCR)、补体调节蛋白(CCP)模块或SUSHI结构域，其长度为约50-70个氨基酸，含有包括四个二硫键键合的半胱氨酸(两个二硫键)、脯氨酸、色氨酸和许多疏水残基的保守基序。CCP家族包括补体受体1型(CR1；C3b：C4b受体)、补体受体2型(CR2)、膜辅因子蛋白(MCP；CD46)、衰变加速因子(DAF)、补体因子H(fH)和C4b结合蛋白(C4bp)。CD59是一种在结构上与CCP无关的膜结合的补体调节蛋白。补体调节蛋白通常用于限制否则可能在哺乳动物(例如，人宿主)的细胞和组织上发生的补体激活。
[0151] IV.补体抑制剂
[0152] 概要
[0153] 在本发明的不同的实施方案中，可以使用多种不同的补体抑制剂。一般而言，补体抑制剂可以属于许多化合物类别中的任一种，诸如肽、多肽、抗体、小分子和核酸(例如，适体、RNAi试剂诸如短干扰RNA)。在某些实施方案中，补体抑制剂会抑制补体蛋白的酶活性。所述酶活性可以是蛋白水解活性，诸如裂解另一种补体蛋白的能力。在某些实施方案中，补体抑制剂会抑制C3、C5或因子B的裂解。在某些实施方案中，补体抑制剂作用于C3。在某些实施方案中，补体抑制剂作用于在补体激活级联中位于C3的上游的补体组分。在某些实施方案中，补体抑制剂会抑制在呼吸系统中产生的至少一种可溶性补体蛋白的激活或活性。在某些实施方案中，使用至少抑制补体激活的经典途径的补体抑制剂。在某些实施方案中，使用抑制经典途径和旁路途径的补体抑制剂。在某些实施方案中，使用抑制C3激活或活性的补体抑制剂。在某些实施方案中，补体抑制剂会抑制在呼吸系统中表达的至少一种补体受体蛋白的激活。在某些实施方案中，所述补体受体蛋白是C3a的受体。在某些实施方案中，所述补体受体蛋白是C5a的受体。
[0154] 在某些实施方案中，补体抑制剂包含基本上缺乏激活补体的能力的抗体。例如，与全长人IgG1相比，所述抗体可以具有小于10％、小于5％或小于1％的补体刺激活性。在某些实施方案中，所述抗体包含与人IgG1 CH2结构域相比具有降低的结合C1q的能力的CH2结构域。在某些实施方案中，所述抗体含有得自人IgG4的CH1、CH2和/或CH3结构域，和/或不含有得自人IgG1的CH1、CH2和/或CH3结构域。
[0155] 在某些实施方案中，在例如发明的给药方案中使用的补体抑制剂具有1kD或更低的分子量。在某些实施方案中，补体抑制剂具有1kD至2kD、2kD至5kD、5kD至10kD、10kD至20kD、20kD至30kD、30kD至50kD、50kD至100kD、或100kD至200kD的分子量。
[0156] 补体抑制剂可以与天然存在的补体抑制剂或其变体或片段至少部分地相同。病毒(例如，痘病毒、疱疹病毒)、细菌(例如，葡萄球菌属)和其它微生物产生多种不同的补体抑制性多肽。不同的寄生虫(例如，外寄生虫，诸如蜱)产生补体抑制蛋白。补体抑制剂可以包含哺乳动物补体控制或补体调节蛋白或受体的至少一部分。关于正处于或已经处于不同障碍的临床前或临床开发中且可以用在本发明方法的不同实施方案中的补体抑制剂的讨论，参见Ricklin，D.，等人.“Complement-targeted Therapeutics”，Nature Biotechnology，25(11)：1265-75，2007。
[0157] 在某些实施方案中，补体抑制剂包含adnectin、亲和体(affibody)、anticalin或有时在本领域中用于替代抗体的其它类型的多肽，其中所述多肽结合补体组分。
[0158] 以下部分讨论了用在本发明的实施方案中的非限制性的示例性补体抑制剂。为了方便目的，已经将补体抑制剂分类在不同的组中。应该理解，某些补体抑制剂落入多个类别中。
[0159] 在某些实施方案中，使用结合基本上相同的结合位点(例如，在诸如C3、C5、因子B、因子D或活性补体裂解产物等补体组分上的结合位点)的补体抑制剂作为本文描述的补体抑制剂。一般而言，使用本领域已知的方法，诸如竞争测定、分子建模等(参见，例如，坎普他汀类似物和模拟物的讨论)，可以评估第一种试剂和第二种试剂的结合靶分子(诸如补体组分或受体)上的基本上相同位点的能力。任选地，可以用可检测标记物(例如，放射性标记、荧光标记等)标记所述第一种试剂和/或第二种试剂。任选地，将靶分子、第一种试剂或第二种试剂固定化在支持物(例如，载玻片、滤器、芯片、珠子等)上。在某些实施方案中，结合与第一抗体基本上相同的结合位点的第二抗体包含一个或多个CDR，所述CDR与第一抗体的CDR具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性。
[0160] 抑制C3激活或活性的化合物
[0161] 坎普他汀类似物和模拟物
[0162] 坎普他汀是一种环状肽，其结合至C3并抑制补体激活，例如通过抑制转化酶将C3裂解为C3a和C3b。美国专利号6,319,897描述了一种具有序列Ile-[Cys-Val-Val-Gln-Asp-Trp-Gly-His-His-Arg-Cys]-Thr(SEQ ID NO：1)的肽，其中两个半胱氨酸之间的二硫键由括号表示。应当理解，在美国专利号6,319,897中未使用名称“坎普他汀”，但随后在科技文献和专利文献(参见，例如，Morikis，等人，Protein Sci.，7(3)：619-27，1998))中用它来表示具有与美国专利号6，319，897中所公开的SEQ ID NO：2相同的序列、但是如表2中所示在C末端处被酰胺化的肽(SEQ ID NO：8)。术语“坎普他汀”在本文中与所述用法一致地使用(即，表示SEQ ID NO：8)。已经开发出具有比坎普他汀更高的补体抑制活性的坎普他汀类似物。参见，例如，WO2004/026328(PCT/US2003/029653)，Morikis，D.，等人，Biochem Soc Trans.32(第1部分)：28-32，2004，Mallik，B.，等人，J.Med.Chem.，274-286，
2005；Katragadda，M.， 等 人 .J.Med.Chem.，49：4616-4622，2006；WO2007062249(PCT/US2006/045539)；WO2007044668(PCT/US2006/039397)，WO/2009/046198(PCT/
US2008/078593)；WO/2010/127336(PCT/US2010/033345)和下面的讨论。
2005；Katragadda，M.， 等 人 .J.Med.Chem.，49：4616-4622，2006；WO2007062249(PCT/US2006/045539)；WO2007044668(PCT/US2006/039397)，WO/2009/046198(PCT/
US2008/078593)；WO/2010/127336(PCT/US2010/033345)和下面的讨论。
[0163] 坎普他汀类似物可以在例如N末端和/或C末端被乙酰化或酰胺化。例如，坎普他汀类似物可以在N末端被乙酰化和在C末端被酰胺化。与本领域的用法一致，本文中使用的“坎普他汀”以及本文中相对于坎普他汀的活性描述的坎普他汀类似物的活性表示在C末端被酰胺化的坎普他汀(Mallik，2005，出处同上)。
[0164] 坎普他汀或其补体抑制类似物的多联体或多聚体也可用于本发明中。
[0165] 本文中使用的术语“坎普他汀类似物”包括坎普他汀及其任何补体抑制类似物。术语“坎普他汀类似物”包括坎普他汀以及这样的其它化合物：所述化合物基于坎普他汀设计或鉴别，并且当使用例如本领域认可的任何补体激活测定或基本上类似或相当的测定测量时，其补体抑制活性是坎普他汀的补体抑制活性的至少50％。某些合适的测定描述于：美国专利号6，319，897，WO2004/026328，Morikis，出处同上，Mallik，出处同上，Katragadda2006，出处同上，WO2007062249(PCT/US2006/045539)；WO2007044668(PCT/US2006/039397)，WO/2009/046198(PCT/US2008/078593)；和 / 或WO/2010/127336(PCT/US2010/033345)。所述测定可例如测量旁路途径或经典途径介导的红细胞裂解，或者是ELISA测定。在某些实施方案中，使用在WO/2010/135717(PCT/US2010/035871)中描述的测定。
[0166] 坎普他汀类似物的活性可以以其IC50(使补体激活抑制50％的化合物浓度)的方式来表示，如本领域所公认的，较低IC50值指示较高活性。用于本发明中的优选坎普他汀类似物的活性至少与坎普他汀的活性相同。应当指出，已知某些修饰会降低或消除补体抑制活性，并且其可以明确地排除在本发明任何实施方案之外。使用旁路途径介导的红细胞裂解测定(WO2004/026328)，已经将坎普他汀的IC50测量为12μM。应当理解，所测量的给定坎普他汀类似物的准确IC50值将随实验条件(例如，在测定中使用的血清浓度)而变化。例如从在基本上相同的条件下确定多种不同化合物的IC50值的实验所获得的比较值是有用的。在一个实施方案中，坎普他汀类似物的IC50值不超过坎普他汀的IC50值。在本发明的某些实施方案中，坎普他汀类似物的活性是坎普他汀的2到99倍(即，所述类似物的IC50是坎普他汀IC50的1/2至1/99)。例如，所述活性可以是坎普他汀10-50倍，或是坎普他汀的50-99倍。在本发明的某些实施方案中，坎普他汀类似物的活性是坎普他汀的活性的99-264倍。例如，所述活性可以是坎普他汀的活性的100、110、120、130、140、150、160、170、
180、190、200、210、220、230、240、250、260或264倍。在某些实施方案中，所述活性是坎普他汀的活性的250-300、300和350、350和400、或400和500倍。本发明另外涵盖这样的坎普他汀类似物：其活性是坎普他汀的活性的500-1000倍或更多，例如，坎普他汀的活性的
1000-2000倍或更多。在某些实施方案中，所述坎普他汀类似物的IC50是在约0.2μM至约
0.5μM之间。在某些实施方案中，所述坎普他汀类似物的IC50是在约0.1μM至约0.2μM之间。在某些实施方案中，所述坎普他汀类似物的IC50是在约0.05μM至约0.1μM之间。
在某些实施方案中，所述坎普他汀类似物的IC50是在约0.001μM至约0.05μM之间。
180、190、200、210、220、230、240、250、260或264倍。在某些实施方案中，所述活性是坎普他汀的活性的250-300、300和350、350和400、或400和500倍。本发明另外涵盖这样的坎普他汀类似物：其活性是坎普他汀的活性的500-1000倍或更多，例如，坎普他汀的活性的
1000-2000倍或更多。在某些实施方案中，所述坎普他汀类似物的IC50是在约0.2μM至约
0.5μM之间。在某些实施方案中，所述坎普他汀类似物的IC50是在约0.1μM至约0.2μM之间。在某些实施方案中，所述坎普他汀类似物的IC50是在约0.05μM至约0.1μM之间。
在某些实施方案中，所述坎普他汀类似物的IC50是在约0.001μM至约0.05μM之间。
[0167] 使用等温滴定量热法，可以测量坎普他汀结合C3的Kd值(Katragadda，等人，J.Biol.Chem.，279(53)，54987-54995，2004)。已经将多种坎普他汀类似物与C3的结合亲和力与它们的活性相关联，如本领域所公认的，较低的Kd指示较高的结合亲和力。证实了某些试验的类似物的结合亲和力与活性之间的线性关系(Katragadda，2004，出处同上；Katragadda2006，出处同上)。在本发明的某些实施方案中，坎普他汀类似物结合C3的Kd介于0.1μM与1.0μM之间、介于0.05μM与0.1μM之间、介于0.025μM与0.05μM之间、介于0.015μM与0.025μM之间、介于0.01μM与0.015μM之间、或介于0.001μM与
0.01μM之间。
0.01μM之间。
[0168] “基于坎普他汀设计或鉴别的”化合物包括、但不限于包含通过以下方式获得其序列的氨基酸链的化合物：(i)修饰坎普他汀的序列(例如，用不同的氨基酸或氨基酸类似物替换坎普他汀序列的一个或多个氨基酸，将一个或多个氨基酸或氨基酸类似物插入坎普他汀的序列中，或从坎普他汀序列删除一个或多个氨基酸)；(ii)从其中将坎普他汀的一个或多个氨基酸随机化的噬菌体展示肽文库选择，并任选进一步根据方法(i)进行修饰；或(iii)通过筛选与坎普他汀或利用方法(i)或(ii)获得的其任何类似物竞争结合C3或其片段的化合物来鉴别。许多有用的坎普他汀类似物包含疏水簇、β转角和二硫键。
[0169] 在本发明的某些实施方案中，坎普他汀类似物的序列包含通过在坎普他汀序列中进行1、2、3或4个置换(即，由不同标准氨基酸或非标准氨基酸替代坎普他汀序列中的1、2、3或4个氨基酸)而获得的序列，或基本上由所述序列组成。在本发明的某些实施方案中，4位的氨基酸被改变。在本发明的某些实施方案中，9位的氨基酸被改变。在本发明的某些实施方案中，4位和9位的氨基酸被改变。在本发明的某些实施方案中，仅4位和9位的氨基酸被改变。在本发明的某些实施方案中，4位或9位的氨基酸被改变，或在某些实施方案中，4位和9位的氨基酸都被改变，而且另外位于选自1、7、10、11和13位的多达两个氨基酸也被改变。在本发明的某些实施方案中，4位、7位和9位的氨基酸被改变。在本发明的某些实施方案中，2位、12位或两个位置的氨基酸都被改变，前提条件是，所述改变保留欲环化的化合物的能力。在2位和/或12位的这种改变可以是除1、4、7、9、10、11和/或
13位改变之外还有的改变。其序列是通过替换坎普他汀序列的一个或多个氨基酸而获得的任何坎普他汀类似物的序列任选地在C末端进一步包括多达1、2或3个额外氨基酸。在一个实施方案中，所述额外氨基酸是Gly。其序列是通过替换坎普他汀序列的一个或多个氨基酸而获得的任何坎普他汀类似物的序列任选地在C末端进一步包括多达5个或多达10个额外氨基酸。应当理解，除非另有说明或从上下文显而易见，否则坎普他汀类似物可以具有本文所述各种实施方案的任何一个或多个特性或特征，并且任意实施方案的特性或特征可另外表征本文所述的任何其它实施方案。在本发明的某些实施方案中，坎普他汀类似物的序列包含除对应于坎普他汀序列4位和9位的位置以外都与坎普他汀一致的序列，或基本上由所述序列组成。
13位改变之外还有的改变。其序列是通过替换坎普他汀序列的一个或多个氨基酸而获得的任何坎普他汀类似物的序列任选地在C末端进一步包括多达1、2或3个额外氨基酸。在一个实施方案中，所述额外氨基酸是Gly。其序列是通过替换坎普他汀序列的一个或多个氨基酸而获得的任何坎普他汀类似物的序列任选地在C末端进一步包括多达5个或多达10个额外氨基酸。应当理解，除非另有说明或从上下文显而易见，否则坎普他汀类似物可以具有本文所述各种实施方案的任何一个或多个特性或特征，并且任意实施方案的特性或特征可另外表征本文所述的任何其它实施方案。在本发明的某些实施方案中，坎普他汀类似物的序列包含除对应于坎普他汀序列4位和9位的位置以外都与坎普他汀一致的序列，或基本上由所述序列组成。
[0170] 坎普他汀和活性略高于坎普他汀的某些坎普他汀类似物仅含有标准氨基酸(“标准氨基酸”为甘氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸、谷氨酰胺、半胱氨酸、蛋氨酸、精氨酸、赖氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸和组氨酸)。具有提高的活性的某些坎普他汀类似物包含一个或多个非标准氨基酸。有用的非标准氨基酸包括单卤代和多卤代(例如氟代)氨基酸、D-氨基酸、高氨基酸、N-烷基氨基酸、脱氢氨基酸、芳族氨基酸(除苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸外)、邻氨基苯甲酸、间氨基苯甲酸或对氨基苯甲酸、磷酸-氨基酸、甲氧基化氨基酸和α，α-二取代的氨基酸。在本发明的某些实施方案中，通过用相应的D-氨基酸替换本文别处所述的坎普他汀类似物中的一个或多个L-氨基酸，设计坎普他汀类似物。这样的化合物及其使用方法是本发明的一个方面。适用的示例性非标准氨基酸包括：2-萘基丙氨酸(2-NaI)、1-萘基丙氨酸(1-NaI)、2-茚满基甘氨酸甲酸(2Ig1)、二氢色氨酸(Dht)、4-苯甲酰基-L-苯丙氨酸(Bpa)、2-α-氨基丁酸(2-Abu)、3-α-氨基丁酸(3-Abu)、4-α-氨基丁酸(4-Abu)、环己基丙氨酸(Cha)、同素环己基丙氨酸(hCha)、4-氟-L-色氨酸(4fW)、5-氟-L-色氨酸(5fW)、6-氟-L-色氨酸(6fw)、4-羟基-L-色氨酸(4OH-W)、5-羟基-L-色氨酸(5OH-W)、6-羟基-L-色氨酸(6OH-W)、1-甲基-L-色氨酸(1MeW)、4-甲基-L-色氨酸(4MeW)、5-甲基-L-色氨酸(5MeW)、
7-氮杂-L-色氨酸(7aW)、α-甲基-L-色氨酸(αMeW)、β-甲基-L-色氨酸(βMeW)、N-甲基-L-色氨酸(NMeW)、鸟氨酸(orn)、瓜氨酸、正亮氨酸、γ-谷氨酸等。
7-氮杂-L-色氨酸(7aW)、α-甲基-L-色氨酸(αMeW)、β-甲基-L-色氨酸(βMeW)、N-甲基-L-色氨酸(NMeW)、鸟氨酸(orn)、瓜氨酸、正亮氨酸、γ-谷氨酸等。
[0171] 在本发明的某些实施方案中，所述坎普他汀类似物包含一种或多种Trp类似物(例如相对于坎普他汀序列，在4位和/或7位)。示例性的Trp类似物如上所述。也参见Beene，等人.Biochemistry41：10262-10269，2002(特别描述单卤代的和多卤代的Trp类似物)；Babitzke和Yanofsky，J.Biol.Chem.270：12452-12456，1995(特别描述甲基化的和卤代的Trp以及其它Trp和吲哚类似物)；以及美国专利6,214,790、6,169,057、5,776,970、4,870,097、4,576,750和4,299,838。其它Trp类似物包括在α或β碳处以及任选在吲哚环的一个或多个位置被取代(例如被甲基取代)的变体。包含两个或更多个芳族环(包括其被取代、未被取代或可替换地被取代的变体)的氨基酸作为Trp类似物是值得关注的。在本发明的某些实施方案中，在例如4位的Trp类似物是5-甲氧基、5-甲基-、1-甲基-或1-甲酰基-色氨酸。在本发明的某些实施方案中，使用包含1-烷基取代基(例如低级烷基(例如C1-C5)取代基)的Trp类似物(例如在4位)。在某些实施方案中，使用N(α)甲基色氨酸或5-甲基色氨酸。在某些实施方案中，使用包含1-烷酰基取代基(例如低级烷酰基(例如C1-C5))的类似物。例子包括1-乙酰基-L-色氨酸和L-β-色氨酸。
[0172] 在某些实施方案中，Trp类似物的疏水性相对于Trp有所增加。例如，吲哚环可以被一个或多个烷基(例如甲基)取代。在某些实施方案中，Trp类似物参加与C3的疏水相互作用。这样的Trp类似物可以位于例如相对于坎普他汀序列的4位。在某些实施方案中，Trp类似物包含被取代的或未被取代的二环芳族环组分，或者包含两个或更多个被取代的或未被取代的单环芳族环组分。
[0173] 在某些实施方案中，Trp类似物与C3形成氢键的倾向相对于Trp增加，但疏水性相对于Trp没有增加。Trp类似物的极性比Trp强，和/或参加与C3上氢键供体的静电相互作用的能力有所增加。具有增加的氢键形成性质的某些示例性Trp类似物在吲哚环上包含带负电荷的取代基。这样的Trp类似物可以位于例如相对于坎普他汀序列的7位。
[0174] 在本发明的某些实施方案中，坎普他汀类似物包含一种或多种Ala类似物(例如在相对于坎普他汀序列的9位)，例如除在侧链包含一个或多个CH2基团外都与Ala一致的Ala类似物。在某些实施方案中，Ala类似物是无支链的单甲基氨基酸，例如2-Abu。在本发明的某些实施方案中，坎普他汀类似物包含一种或多种Trp类似物(例如，在相对于坎普他汀序列的4位和/或7位)和一种Ala类似物(例如，在相对于坎普他汀序列的9位)。
[0175] 在本发明的某些实施方案中，坎普他汀类似物是包含序列为(X’aa)n-Gln-Asp-Xaa-Gly-(X”aa)m(SEQ ID NO：2)的肽的化合物，其中各X’aa和各X”aa是独立选择的氨基酸或氨基酸类似物，其中Xaa是Trp或Trp类似物，并且其中n＞1和m＞1，而且n+m是5-21。所述肽具有Gln-Asp-Xaa-Gly的核心序列，其中Xaa是Trp或Trp类似物，例如，与氢键供体形成氢键的倾向相对于Trp有所增加、但在某些实施方案中疏水性相对于Trp没有增加的Trp类似物。例如，所述类似物可以是其中Trp的吲哚环被带负电部分(例如卤素诸如氟)取代的类似物。在一个实施方案中，Xaa是5-氟色氨酸。在没有相反证据的情况下，本领域技术人员会认识到，其序列包含此核心序列并且抑制补体激活和/或结合C3的任何非天然存在的肽都能基于坎普他汀序列而设计。在一个替代实施方案中，Xaa是除Trp类似物外允许Gln-Asp-Xaa-Gly肽形成β转角的氨基酸或氨基酸类似物。
[0176] 在本发明的某些实施方案中，所述肽具有X’aa-Gln-Asp-Xaa-Gly(SEQ ID NO：3)的核心序列，其中X’aa和Xaa选自Trp和Trp类似物。在本发明的某些实施方案中，所述肽具有X’aa-Gln-Asp-Xaa-Gly(SEQ IDNO：3)的核心序列，其中X’aa和Xaa选自Trp、Trp类似物以及包含至少一个芳族环的其它氨基酸或氨基酸类似物。在本发明的某些实施方案中，在肽的情况下，所述核心序列形成β转角。β转角可以是柔性的，以致当例如使用核磁共振(NMR)评估时，所述肽可呈现两种或更多种构象。在某些实施方案中，X’aa是包含被取代的或未被取代的二环芳族环组分、或者包含两个或更多个被取代的或未被取代的单环芳族环组分的Trp类似物。在本发明的某些实施方案中，X’aa选自：2-萘基丙氨酸、1-萘基丙氨酸、2-茚满基甘氨酸甲酸、二氢色氨酸和苯甲酰基苯丙氨酸。在本发明的某些实施方案中，X’aa是疏水性比Trp强的Trp类似物。例如，X’aa可以是1-甲基色氨酸。在本发明的某些实施方案中，Xaa是形成氢键的倾向相对于Trp有所增加、但是在某些实施方案中疏水性相对于Trp没有增加的Trp类似物。在本发明的某些实施方案中，形成氢键的倾向相对于Trp有所增加的Trp类似物在Trp的吲哚环上(例如在5位)包含修饰，例如卤素原子对5位的氢原子的替代。例如，Xaa可以是5-氟色氨酸。
[0177] 在本发明的某些实施方案中，所述肽具有X’aa-Gln-Asp-Xaa-Gly-X”aa(SEQ ID NO：4)的核心序列，其中X’aa和Xaa各独立地选自Trp和Trp类似物，并且X”aa选自His、Ala、Ala类似物、Phe和Trp。在本发明的某些实施方案中，X’aa是疏水性比Trp强的Trp类似物，例如1-甲基色氨酸，或在吲哚环上(例如1、4、5或6位)具有烷基取代基的其它Trp类似物。在某些实施方案中，X’aa是包含被取代的或未被取代的二环芳族环组分、或者包含两个或更多个被取代的或未被取代的单环芳族环组分的Trp类似物。在本发明的某些实施方案中，X’aa选自：选自：2-萘基丙氨酸、1-萘基丙氨酸、2-茚满基甘氨酸甲酸、二氢色氨酸和苯甲酰基苯丙氨酸。在本发明的某些实施方案中，Xaa是与C3形成氢键的倾向相对于Trp有所增加、但是在某些实施方案中疏水性相对于Trp没有增加的Trp类似物。在本发明的某些实施方案中，形成氢键的倾向相对于Trp有所增加的Trp类似物在Trp的吲哚环上(例如在5位)包含修饰，例如卤素原子对5位的氢原子的替代。例如，Xaa可以是5-氟色氨酸。在某些实施方案中，X”aa是Ala或Ala类似物(例如Abu)或另一无支链单甲基氨基酸。在本发明的某些实施方案中，所述肽具有X’aa-Gln-Asp-Xaa-Gly-X”aa(SEQID NO：4)的核心序列，其中X’aa和Xaa各独立地选自Trp、Trp类似物以及包含至少一个芳族侧链的氨基酸或氨基酸类似物，并且X”aa选自His、Ala、Ala类似物、Phe和Trp。在某些实施方案中，X”aa选自Trp类似物、芳族氨基酸和芳族氨基酸类似物。
[0178] 在本发明的某些优选实施方案中，所述肽是环状的。所述肽可通过任何两个氨基酸之间的键环化，其中一个氨基酸是(X’aa)n，而另一个位于(X”aa)m内。在某些实施方案中，肽的环状部分是9到15个氨基酸长，例如10到12个氨基酸长。在某些实施方案中，肽的环状部分是11个氨基酸长，并且在2位与12位氨基酸之间具有键(例如二硫键)。例如，肽可以是13个氨基酸长，并且在2位与12位氨基酸之间具有键，由此产生11个氨基酸长的环状部分。
[0179] 在某些实施方案中，所述肽包含序列X’aa1-X’aa2-X’aa3-X’aa4-Gln-Asp-Xaa-Gly-X”aa1-X”aa2-X”aa3-X”aa4-X”aa5(SEQ ID NO：5)或由所述序列组成。在某些实施方案中，X’aa4和Xaa选自Trp和Trp类似物，并且X’aa1、X’aa2、X’aa3、X”aa1、X”aa2、X”aa3、X”aa4和X”aa5独立地选自氨基酸和氨基酸类似物。在某些实施方案中，X’aa4和Xaa选自芳族氨基酸和芳族氨基酸类似物。X’aa1、X’aa2、X’aa3、X”aa1、X”aa2、X”aa3、X”aa4和X”aa5中的任意一个或多个可以与坎普他汀中的相应位置的氨基酸相同。在一个实施方案中，X”aa1是Ala或无支链单甲基氨基酸。肽可以通过(i)X’aa1、X’aa2或X’aa3与(ii)X”aa2、X”aa3、X”aa4或X”aa5之间的共价键环化。在一个实施方案中，肽通过X’aa2与X”aa4之间的共价键环化。在一个实施方案中，共价结合的氨基酸各自是Cys，而且共价键是二硫(S-S)键。在其它实施方案中，共价键是C-C、C-O、C-S或C-N键。在某些实施方案中，共价结合的残基之一是其侧链包含伯胺或仲胺的氨基酸或氨基酸类似物，另一共价结合的残基是其侧链包含羧酸基团的氨基酸或氨基酸类似物，并且共价键是酰胺键。其侧链包含伯胺或仲胺的氨基酸或氨基酸类似物包括赖氨酸，和通式结构NH2(CH2)nCH(NH2)COOH的二氨基甲酸，诸如2，3-二氨基丙酸(dapa)、2,4-二氨基丁酸(daba)和鸟氨酸(orn)，其中n分别为1(dapa)、2(daba)和3(orn)。其侧链包含羧酸基团的氨基酸的例子包括二羧基氨基酸，例如谷氨酸和天冬氨酸。还可以使用类似物，例如β-羟基-L-谷氨酸。在某些实施方案中，肽用硫醚键环化，例如，如在PCT/US2011/052442(WO/2012/040259)中所述。例如，在某些实施方案中，任意肽中的二硫键被硫醚键替代。在某些实施方案中，形成胱硫醚。在某些实施方案中，所述胱硫醚是δ-胱硫醚或γ-胱硫醚。在某些实施方案中，修饰包括：
用CH2的添加来替代SEQ ID NO：5中的X’aa2和X”aa4处的半胱氨酸之间的Cys-Cys二硫键(或其它序列中的对应位置)以形成在X’aa2或X”aa4处的高半胱氨酸，和引入硫醚键以形成胱硫醚。在一个实施方案中，所述胱硫醚是γ-胱硫醚。在另一个实施方案中，所述胱硫醚是δ-胱硫醚。在某些实施方案中使用的另一种修饰包括，在不添加CH2的情况下用硫醚键替代二硫键，由此形成羊毛硫氨酸。在某些实施方案中，至少在某些条件下，与含有二硫键的坎普他汀类似物相比，含有替代硫醚的二硫键的坎普他汀类似物具有增加的稳定性。
用CH2的添加来替代SEQ ID NO：5中的X’aa2和X”aa4处的半胱氨酸之间的Cys-Cys二硫键(或其它序列中的对应位置)以形成在X’aa2或X”aa4处的高半胱氨酸，和引入硫醚键以形成胱硫醚。在一个实施方案中，所述胱硫醚是γ-胱硫醚。在另一个实施方案中，所述胱硫醚是δ-胱硫醚。在某些实施方案中使用的另一种修饰包括，在不添加CH2的情况下用硫醚键替代二硫键，由此形成羊毛硫氨酸。在某些实施方案中，至少在某些条件下，与含有二硫键的坎普他汀类似物相比，含有替代硫醚的二硫键的坎普他汀类似物具有增加的稳定性。
[0180] 在某些实施方案中，所述坎普他汀类似物是包含具有以下序列的肽的化合物：
[0181] Xaa1-Cys-Val-Xaa2-Gln-Asp-Xaa2*-Gly-Xaa3-His-Arg-Cys-Xaa4(SEQ ID NO：6)；其中：
[0182] Xaa1是Ile、Val、Leu、B1-Ile、B1-Val、B1-Leu或包含Gly-Ile或B1-Gly-Ile的二1
肽，且B 代表第一封端部分；
肽，且B 代表第一封端部分；
[0183] Xaa2和Xaa2*独立地选自Trp和Trp类似物；
[0184] Xaa3是His、Ala或Ala类似物、Phe、Trp或Trp类似物；
[0185] Xaa4是L-Thr、D-Thr、Ile、Val、Gly、选自Thr-Ala和Thr-Asn的二肽、或包含Thr-Ala-Asn的三肽，其中L-Thr、D-Thr、Ile、Val、Gly、Ala或Asn中任一个的羧基末端-OH2
任选地被第二封端部分B 替换；并且
任选地被第二封端部分B 替换；并且
[0186] 两个Cys残基通过二硫键连接。在某些实施方案中，Xaa4是Leu、Nle、His或Phe、或选自Xaa5-Ala和Xaa5-Asn的二肽、或三肽Xaa5-Ala-Asn，其中Xaa5选自Leu、Nle、His或Phe，且其中L-Thr、D-Thr、Ile、Val、Gly、Leu、Nle、His、Phe、Ala或Asn中的中任一个2
的羧基末端-OH任选地被第二封端部分B 替换；并且两个Cys残基通过二硫键连接。
的羧基末端-OH任选地被第二封端部分B 替换；并且两个Cys残基通过二硫键连接。
[0187] 在其它实施方案中，Xaa1不存在，或为任何氨基酸或氨基酸类似物，并且Xaa2、Xaa2*、Xaa3和Xaa4如上面所定义。如果Xaa1不存在，则N末端Cys残基可以具有与其连1
接的封端部分B。
接的封端部分B。
[0188] 在另一个实施方案中，Xaa4为任何氨基酸或氨基酸类似物，并且Xaa1、Xaa2、Xaa2*和Xaa3如上面所定义。在另一个实施方案中，Xaa4是选自Thr-Ala和Thr-Asn的二2
肽，其中羧基末端-OH或者Ala或Asn任选地被第二封端部分B 替换。
肽，其中羧基末端-OH或者Ala或Asn任选地被第二封端部分B 替换。
[0189] 在SEQ ID NO：6的坎普他汀类似物的任意实施方案中，Xaa2可以是Trp。
[0190] 在SEQ ID NO：6的坎普他汀类似物的任意实施方案中，Xaa2可以是包含被取代的或未被取代的二环芳族环组分、或者包含两个或更多个被取代的或未被取代的单环芳族环组分的Trp类似物。例如，Trp类似物可以选自2-萘基丙氨酸(2-NaI)、1-萘基丙氨酸(1-NaI)、2-茚满基甘氨酸甲酸(Ig1)、二氢色氨酸(Dht)和4-苯甲酰基-L-苯丙氨酸。
[0191] 在SEQ ID NO：6的坎普他汀类似物的任意实施方案中，Xaa2可以是疏水性比Trp强的Trp类似物。例如，所述Trp类似物可以选自1-甲基色氨酸、4-甲基色氨酸、5-甲基色氨酸和6-甲基色氨酸。在一个实施方案中，Trp类似物是1-甲基色氨酸。在一个实施方案中，Xaa2是1-甲基色氨酸，Xaa2*是Trp，Xaa3是Ala，并且其它氨基酸与坎普他汀的那些相同。
[0192] 在SEQ ID NO：6的坎普他汀类似物的任意实施方案中，Xaa2*可以是Trp类似物，例如与C3形成氢键的倾向相对于Trp有所增加并且在某些实施方案中疏水性相对于Trp没有增加的Trp类似物。在某些实施方案中，Trp类似物在吲哚环上包含带负电取代基。例如，Trp类似物可以选自5-氟色氨酸和6-氟色氨酸。
[0193] 在本发明的某些实施方案中，Xaa2是Trp，并且Xaa2*是与C3形成氢键的倾向相对于Trp有所增加并且在某些实施方案中疏水性相对于Trp没有增加的Trp类似物。在SEQ ID NO：6的坎普他汀类似物的某些实施方案中，Xaa2是疏水性比Trp强的Trp类似物，例如选自1-甲基色氨酸、4-甲基色氨酸、5-甲基色氨酸和6-甲基色氨酸的Trp类似物，并且Xaa2*是与C3形成氢键的倾向相对于Trp有所增加并且在某些实施方案中疏水性相对于Trp没有增加的Trp类似物。例如，在一个实施方案中，Xaa2是甲基色氨酸，并且Xaa2*是5-氟色氨酸。
[0194] 在某些上述实施方案中，Xaa3是Ala。在某些上述实施方案中，Xaa3是无支链的单甲基氨基酸，例如Abu。
[0195] 本发明另外提供了如上文所述的SEQ ID NO：6的坎普他汀类似物，其中Xaa2和Xaa2*独立地选自Trp、Trp类似物，以及包含至少一个芳族环的其它氨基酸或氨基酸类似物，并且Xaa3是His、Ala或Ala类似物、Phe、Trp、Trp类似物、或另一芳族氨基酸或芳族氨基酸类似物。
[0196] 在本发明的某些实施方案中，存在于本文所述的任意坎普他汀类似物的N末端或C末端处的封端部分是使肽稳定以防降解(否则其将在哺乳动物(例如人类或非人灵长类1
动物)血液或间隙液中发生)的任何部分。例如，封端部分B 可以是改变肽的N末端结构
2
从而抑制肽的N末端氨基酸与相邻氨基酸之间的肽键裂解的任何部分。封端部分B 可以是改变肽的C末端结构从而抑制肽的C末端氨基酸与相邻氨基酸之间的肽键裂解的任何部分。可以使用本领域已知的任何合适的封端部分。在本发明的某些实施方案中，封端部分
1
B 包含酰基(即，羧酸在去除-OH基团后剩余的部分)。酰基通常包含1-12个碳，例如1-6
1
个碳。例如，在本发明的某些实施方案中，封端部分B 选自：甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰
1
基、异丁酰基、戊酰基、异戊酰基等。在一个实施方案中，封端部分B 是乙酰基，即，Xaa1是Ac-Ile、Ac-Val、Ac-Leu或Ac-Gly-Ile。
动物)血液或间隙液中发生)的任何部分。例如，封端部分B 可以是改变肽的N末端结构
2
从而抑制肽的N末端氨基酸与相邻氨基酸之间的肽键裂解的任何部分。封端部分B 可以是改变肽的C末端结构从而抑制肽的C末端氨基酸与相邻氨基酸之间的肽键裂解的任何部分。可以使用本领域已知的任何合适的封端部分。在本发明的某些实施方案中，封端部分
1
B 包含酰基(即，羧酸在去除-OH基团后剩余的部分)。酰基通常包含1-12个碳，例如1-6
1
个碳。例如，在本发明的某些实施方案中，封端部分B 选自：甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰
1
基、异丁酰基、戊酰基、异戊酰基等。在一个实施方案中，封端部分B 是乙酰基，即，Xaa1是Ac-Ile、Ac-Val、Ac-Leu或Ac-Gly-Ile。
[0197] 在本发明的某些实施方案中，封端部分B2是伯胺或仲胺(-NH2或-NHR1，其中R是有机部分，例如烷基)。
[0198] 在本发明的某些实施方案中，封端部分B1是中和/或降低正电荷(否则其可以在2
生理pH存在于N末端)的任何部分。在本发明的某些实施方案中，封端部分B 是中和/或降低负电荷(否则其可以在生理pH存在于C末端)的任何部分。
生理pH存在于N末端)的任何部分。在本发明的某些实施方案中，封端部分B 是中和/或降低负电荷(否则其可以在生理pH存在于C末端)的任何部分。
[0199] 在本发明的某些实施方案中，坎普他汀类似物分别在N末端和/或C末端被乙酰化或酰胺化。坎普他汀类似物可以在N末端被乙酰化、在C末端被酰胺化，和/或在N末端被乙酰化和在C末端被酰胺化。在本发明的某些实施方案中，坎普他汀类似物在N末端包含烷基或芳基，而非乙酰基。
[0200] 在某些实施方案中，所述坎普他汀类似物是包含具有以下序列的肽的化合物：
[0201] Xaa1-Cys-Val-Xaa2-Gln-Asp-Xaa2*-Gly-Xaa3-His-Arg-Cys-Xaa4(SEQ ID NO：7)；其中：
[0202] Xaa1是Ile、Val、Leu、Ac-Ile、Ac-Val、Ac-Leu或包含Gly-Ile或Ac-Gly-Ile的二肽；
[0203] Xaa2和Xaa2*独立地选自Trp和Trp类似物；
[0204] Xaa3是His、Ala或Ala类似物、Phe、Trp或Trp类似物；
[0205] Xaa4是L-Thr、D-Thr、Ile、Val、Gly、选自Thr-Ala和Thr-Asn的二肽、或包含Thr-Ala-Asn的三肽，其中L-Thr、D-Thr、Ile、Val、Gly、Ala或Asn中任一个的羧基末端-OH任选地被-NH2替换；并且两个Cys残基通过二硫键连接。在某些实施方案中，Xaa4是Leu、Nle、His、或Phe、或选自Xaa5-Ala和Xaa5-Asn的二肽、或三肽Xaa5-Ala-Asn，其中Xaa5选自Leu、Nle、His或Phe，且其中L-Thr、D-Thr、Ile、Val、Gly、Leu、Nle、His、Phe、Ala或Asn中任一个的羧基末端-OH任选地被第二封端部分B2替换；并且两个Cys残基通过二硫键连接。
[0206] 在某些实施方案中，Xaa1、Xaa2、Xaa2*、Xaa3和Xaa4如上文关于SEQ ID NO：6的各个实施方案所述。例如，在某些实施方案中，Xaa2*是Trp。在某些实施方案中，Xaa2是疏水性比Trp强的Trp类似物，例如1-甲基色氨酸。在某些实施方案中，Xaa3是Ala。在某些实施方案中，Xaa3是无支链的单甲基氨基酸。
[0207] 在本发明的某些实施方案中，Xaa1是Ile，且Xaa4是L-Thr。
[0208] 在本发明的某些实施方案中，Xaa1是Ile，Xaa2*是Trp，且Xaa4是L-Thr。
[0209] 本发明另外提供了如上文所述的SEQ ID NO：7的坎普他汀类似物，其中Xaa2和Xaa2*独立地选自Trp、Trp类似物、其它氨基酸或芳族氨基酸类似物，并且Xaa3是His、Ala或Ala类似物、Phe、Trp、Trp类似物、或另一芳族氨基酸或芳族氨基酸类似物。
[0210] 在本文所述任意坎普他汀类似物的某些实施方案中，使用Phe类似物而不是Phe。
[0211] 表2提供了可用于本发明中的坎普他汀类似物的非限制性列表。所述类似物在左边一栏中以缩写形式提及，其中指示了在指定位置(1-13)与亲本肽坎普他汀相比较的特定修饰。与本领域的用法一致，本文中使用的“坎普他汀”和本文中相对于坎普他汀的活性描述的坎普他汀类似物的活性，表示在C末端被酰胺化的坎普他汀肽。除非另有说明，否则表2中的肽在C末端被酰胺化。粗体字用于指示某些修饰。与坎普他汀有关的活性是基于公开的数据和其中所述的测定(WO2004/026328，WO2007044668，Mallik，2005；Katragadda，2006)。当参考多个报导活性的出版物时，使用最新公开的值，并且应认识到，在各测定之间存在差异的情况下，可以对值进行调整。还应当理解，在本发明的某些实施方案中，在表
2中列出的肽当用于本发明的治疗组合物和方法中时，通过两个Cys残基之间的二硫键环化。用于环化肽的替代方式也在本发明范围内。如上面所指出的，在本发明的不同实施方案中，坎普他汀类似物(例如，本文中公开的任意坎普他汀类似物)的一个或多个氨基酸可以是N-烷基氨基酸(例如，N-甲基氨基酸)。例如，但不限于，在所述肽的环状部分内的至少一个氨基酸、在环状部分的N末端的至少一个氨基酸和/或在环状部分的C末端的至少一个氨基酸可以是N-烷基氨基酸，例如，N-甲基氨基酸。在本发明的某些实施方案中，例如，坎普他汀类似物包含N-甲基甘氨酸，例如，在与坎普他汀的8位对应的位置处和/或在与坎普他汀的13位对应的位置处。在某些实施方案中，表2中的一种或多种坎普他汀类似物含有至少一个N-甲基甘氨酸，例如，在与坎普他汀的8位对应的位置处和/或在与坎普他汀的13位对应的位置处。在某些实施方案中，一种或多种坎普他汀类似物含有至少一个N-甲基异亮氨酸，例如，在与坎普他汀的13位对应的位置处。例如，在肽(其序列列出在表2中)的C-端末端处或附近的Thr可以被N-甲基Ile替代。如将理解的，在某些实施方案中，N-甲基化的氨基酸包含在8位处的N-甲基Gly和在13位处的N-甲基Ile。在某些实施方案中，N-甲基化的氨基酸包含在诸如SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4等核心序列中的N-甲基Gly。
2中列出的肽当用于本发明的治疗组合物和方法中时，通过两个Cys残基之间的二硫键环化。用于环化肽的替代方式也在本发明范围内。如上面所指出的，在本发明的不同实施方案中，坎普他汀类似物(例如，本文中公开的任意坎普他汀类似物)的一个或多个氨基酸可以是N-烷基氨基酸(例如，N-甲基氨基酸)。例如，但不限于，在所述肽的环状部分内的至少一个氨基酸、在环状部分的N末端的至少一个氨基酸和/或在环状部分的C末端的至少一个氨基酸可以是N-烷基氨基酸，例如，N-甲基氨基酸。在本发明的某些实施方案中，例如，坎普他汀类似物包含N-甲基甘氨酸，例如，在与坎普他汀的8位对应的位置处和/或在与坎普他汀的13位对应的位置处。在某些实施方案中，表2中的一种或多种坎普他汀类似物含有至少一个N-甲基甘氨酸，例如，在与坎普他汀的8位对应的位置处和/或在与坎普他汀的13位对应的位置处。在某些实施方案中，一种或多种坎普他汀类似物含有至少一个N-甲基异亮氨酸，例如，在与坎普他汀的13位对应的位置处。例如，在肽(其序列列出在表2中)的C-端末端处或附近的Thr可以被N-甲基Ile替代。如将理解的，在某些实施方案中，N-甲基化的氨基酸包含在8位处的N-甲基Gly和在13位处的N-甲基Ile。在某些实施方案中，N-甲基化的氨基酸包含在诸如SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4等核心序列中的N-甲基Gly。
[0212] 表2
[0213]
[0214]
[0215] NA＝不可得到
[0216] 在本发明的组合物和方法的某些实施方案中，所述坎普他汀类似物具有选自序列9-36的序列。在本发明的组合物和方法的某些实施方案中，所述坎普他汀类似物具有选自SEQ ID NO：14、21、28、29、32、33、34和36的序列。在本发明的组合物和/或方法的某些实施方案中，所述坎普他汀类似物具有选自SEQ ID NO：30和31的序列。在本发明的组合物和方法的一个实施方案中，所述坎普他汀类似物具有SEQ ID NO：28的序列。在本发明的组合物和方法的一个实施方案中，所述坎普他汀类似物具有SEQ IDNO：32的序列。在本发明的组合物和方法的一个实施方案中，所述坎普他汀类似物具有SEQ ID NO：34的序列。在本发明的组合物和方法的一个实施方案中，所述坎普他汀类似物具有SEQ ID NO：36的序列。
[0217] 在某些实施方案中，封端部分B1包含可以表示为Xaa0的氨基酸。在某些实施方2 1
案中，封端部分B 包含可以表示为XaaN的氨基酸。在某些实施方案中，封端部分B 和/或
2
B 包含非标准的氨基酸，诸如D-氨基酸、N-烷基氨基酸(例如，N-甲基氨基酸)。在某些
1 2
实施方案中，封端部分B 和/或B 包含非标准的氨基酸，其是标准氨基酸的类似物。在某些实施方案中，与类似物的原始标准氨基酸相比，氨基酸类似物包含低级烷基、低级烷氧基或卤素取代基。在某些实施方案中，取代基是在侧链上。在某些实施方案中，取代基是在α
1
碳原子上。在某些实施方案中，封端部分B 包含氨基酸，例如，非标准的氨基酸，进一步包
1a 1 1a 1a
含部分B 。例如，封端部分B 可以表示为B -Xaa0。在某些实施方案中，B 会中和或减少
1a
否则在生理pH下可能存在于N-端处的正电荷。在某些实施方案中，B 包含例如酰基或由例如酰基组成，所述酰基包含例如1-12个碳，例如，1-6个碳。在某些实施方案中，封端部
1a
分B 选自：甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基、异丁酰基、戊酰基、异戊酰基等。在某些实施
2 2a
方案中，封端部分B 包含氨基酸，例如，非标准的氨基酸，可以进一步包含部分B 。例如，封
2 2a
端部分B 可以表示为XaaN-B ，其中N代表氨基酸的适当数目(其取决于在肽的剩余部分
2a
中使用的编号)。在某些实施方案中，B 会中和或减少否则在生理pH下可能存在于C-端
2a
处的负电荷。在某些实施方案中，B 包含伯胺或仲胺(例如，NH2)或由其组成。应该理解，
1a 2a
在不同的实施方案中，部分B -Xaa0和/或XaaN-B 的封端活性可以由所述部分中的任一种或两种组分提供。在某些实施方案中，封端部分或其部分(例如，氨基酸残基)可以促进增加化合物对C3或C3b的亲和力和/或提高化合物的活性。在某些实施方案中，对氨基酸残基的亲和力或活性的促进可以至少象对封端活性的促进一样重要。例如，在某些实施方
1a 2a
案中，在B -Xaa0和/或XaaN-B 中的Xaa0和/或XaaN可以主要起增加化合物的亲和力
1a 2a
或活性的作用，而B 和/或B 可以抑制肽的消化和/或中和肽的电荷。在某些实施方案中，坎普他汀类似物包含SEQ ID NO：5-36中的任一个的氨基酸序列，其中SEQID NO：5-36
1a
在N-和/或C-端处进一步延伸。在某些实施方案中，所述序列可以表示为B -Xaa0-序
2a 1a 2a
列-XaaN-B ，其中序列代表SEQ ID NO：5-36中的任一个，其中B 和B 可以独立地存在
1a
或缺失。例如，在某些实施方案中，坎普他汀类似物包含B -Xaa0-X’aa1-X’aa2-X’aa3-X
2a
’aa4-Gln-Asp-Xaa-Gly-X”aa1-X”aa2-X”aa3-X”aa4-X”aa5-XaaN-B (SEQID NO：37)，其中X’aa1-X’aa2-X’aa3-X’aa4、Xaa、X”aa1、X”aa2、X”aa3、X”aa4和X”aa5如上面关于SEQ ID NO：5所述。
案中，封端部分B 包含可以表示为XaaN的氨基酸。在某些实施方案中，封端部分B 和/或
2
B 包含非标准的氨基酸，诸如D-氨基酸、N-烷基氨基酸(例如，N-甲基氨基酸)。在某些
1 2
实施方案中，封端部分B 和/或B 包含非标准的氨基酸，其是标准氨基酸的类似物。在某些实施方案中，与类似物的原始标准氨基酸相比，氨基酸类似物包含低级烷基、低级烷氧基或卤素取代基。在某些实施方案中，取代基是在侧链上。在某些实施方案中，取代基是在α
1
碳原子上。在某些实施方案中，封端部分B 包含氨基酸，例如，非标准的氨基酸，进一步包
1a 1 1a 1a
含部分B 。例如，封端部分B 可以表示为B -Xaa0。在某些实施方案中，B 会中和或减少
1a
否则在生理pH下可能存在于N-端处的正电荷。在某些实施方案中，B 包含例如酰基或由例如酰基组成，所述酰基包含例如1-12个碳，例如，1-6个碳。在某些实施方案中，封端部
1a
分B 选自：甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基、异丁酰基、戊酰基、异戊酰基等。在某些实施
2 2a
方案中，封端部分B 包含氨基酸，例如，非标准的氨基酸，可以进一步包含部分B 。例如，封
2 2a
端部分B 可以表示为XaaN-B ，其中N代表氨基酸的适当数目(其取决于在肽的剩余部分
2a
中使用的编号)。在某些实施方案中，B 会中和或减少否则在生理pH下可能存在于C-端
2a
处的负电荷。在某些实施方案中，B 包含伯胺或仲胺(例如，NH2)或由其组成。应该理解，
1a 2a
在不同的实施方案中，部分B -Xaa0和/或XaaN-B 的封端活性可以由所述部分中的任一种或两种组分提供。在某些实施方案中，封端部分或其部分(例如，氨基酸残基)可以促进增加化合物对C3或C3b的亲和力和/或提高化合物的活性。在某些实施方案中，对氨基酸残基的亲和力或活性的促进可以至少象对封端活性的促进一样重要。例如，在某些实施方
1a 2a
案中，在B -Xaa0和/或XaaN-B 中的Xaa0和/或XaaN可以主要起增加化合物的亲和力
1a 2a
或活性的作用，而B 和/或B 可以抑制肽的消化和/或中和肽的电荷。在某些实施方案中，坎普他汀类似物包含SEQ ID NO：5-36中的任一个的氨基酸序列，其中SEQID NO：5-36
1a
在N-和/或C-端处进一步延伸。在某些实施方案中，所述序列可以表示为B -Xaa0-序
2a 1a 2a
列-XaaN-B ，其中序列代表SEQ ID NO：5-36中的任一个，其中B 和B 可以独立地存在
1a
或缺失。例如，在某些实施方案中，坎普他汀类似物包含B -Xaa0-X’aa1-X’aa2-X’aa3-X
2a
’aa4-Gln-Asp-Xaa-Gly-X”aa1-X”aa2-X”aa3-X”aa4-X”aa5-XaaN-B (SEQID NO：37)，其中X’aa1-X’aa2-X’aa3-X’aa4、Xaa、X”aa1、X”aa2、X”aa3、X”aa4和X”aa5如上面关于SEQ ID NO：5所述。
[0218] 在某些实施方案中，坎普他汀类似物包含B1a-Xaa0-Xaa1-Cys-Val-Xaa2-Gln-Asp-2a
Xaa2*-Gly-Xaa3-His-Arg-Cys-Xaa4-XaaN-B (SEQID NO：38)，其中Xaa1、Xaa2、Xaa2*、Xaa3和Xaa4如上面关于SEQ IDNO：6所述，或其中Xaa1、Xaa2、Xaa2*、Xaa3和Xaa4如关于SEQ IDNO：6或SEQ ID NO：7所述。
Xaa2*-Gly-Xaa3-His-Arg-Cys-Xaa4-XaaN-B (SEQID NO：38)，其中Xaa1、Xaa2、Xaa2*、Xaa3和Xaa4如上面关于SEQ IDNO：6所述，或其中Xaa1、Xaa2、Xaa2*、Xaa3和Xaa4如关于SEQ IDNO：6或SEQ ID NO：7所述。
[0219] 在某些实施方案中，坎普他汀类似物包含B1a-Xaa0-Xaa1-Xaa2-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Xaa7-Xaa8-Xaa9-Xaa10-Xaa11-Xaa12-Xaa13-XaaN-B2a(SEQ ID NO：39)，其中Xaa1、Xaa2、Xaa3、Xaa4、Xaa5、Xaa6、Xaa7、Xaa8、Xaa9、Xaa10、Xaa11、Xaa12和Xaa13与在SEQ ID NO：9-36中的任一个的位置1-13处的氨基酸相同。
[0220] 在某些实施方案中，在任意坎普他汀类似物序列中的Xaa0和/或XaaN包含含有芳族环的氨基酸，所述芳族环具有在一个或多个位置处的烷基取代基。在某些实施方案中，烷基取代基是低级烷基取代基。例如，在某些实施方案中，烷基取代基是甲基或乙基。在某些实施方案中，取代基位于不会破坏化合物的芳族特性的任意位置。在某些实施方案中，取代基位于不会破坏所述取代基所连接的环的芳族特性的任意位置。在某些实施方案中，取代基位于1、2、3、4或5位。在某些实施方案中，Xaa0包含酪氨酸、2-羟基苯丙氨酸或3-羟基苯丙氨酸的O-甲基类似物。为了本公开内容的目的，在三字母氨基酸缩写之后的小写字体“m”可以用于特别地指示，该氨基酸是N-甲基氨基酸。例如，在缩写“mGly”出现于本文中时，它表示N-甲基甘氨酸(有时也被称作肌氨酸或Sar)。在某些实施方案中，Xaa0是或包含mGly、Tyr、Phe、Arg、Trp、Thr、Tyr(Me)、Cha、mPhe、mVal、mIle、mAla、DTyr、DPhe、DArg、DTrp、DThr、DTyr(Me)、mPhe、mVal、mIle、DAla或DCha。例如，在某些实施方案中，坎普1
他汀类似物包含具有序列B-Ile-[Cys-Val-Trp(Me)-Gln-Asp-Trp-mGly-Ala-His-Arg-Cy
2 1
s]-mIle-B(SEQID NO：40)或B-Ile-[Cys-Val-Trp(Me)-Gln-Asp-Trp-mGly-Ala-His-Arg
2
-Cys]-mIle-B(SEQID NO：41)的肽。2个Cys残基通过活性化合物中的二硫键连接。在某些实施方案中，所述肽在N-端处被乙酰化和/或在C-端处被酰胺化。在某些实施方案中，
1 1a 2 2a 1
B 包含B -Xaa0和/或B 包含XaaN-B ，如上所述。例如，在某些实施方案中，B 包含Gly、mGly、Tyr、Phe、Arg、Trp、Thr、Tyr(Me)、mPhe、mVal、mIle、mAla、DTyr、DPhe、DTrp、DCha、
2
DAla或由其组成，且B 包含NH2，例如，mIle的羧基端-OH被NH2替代。在某些实施方案中，
1 2
B 包含mGly、Tyr、DTyr或Tyr(Me)或由其组成，且B 包含NH2，例如，mIle的羧基端-OH被NH2替代。在某些实施方案中，在位置Xaa1处的Ile被Gly替代。选择的坎普他汀类似物的补体抑制效能和/或C3b结合参数描述在WO/2010/127336(PCT/US2010/033345)和/或Qu，等人，Immunobiology(2012)，doi：10.1016/j.imbio.2012.06.003。
他汀类似物包含具有序列B-Ile-[Cys-Val-Trp(Me)-Gln-Asp-Trp-mGly-Ala-His-Arg-Cy
2 1
s]-mIle-B(SEQID NO：40)或B-Ile-[Cys-Val-Trp(Me)-Gln-Asp-Trp-mGly-Ala-His-Arg
2
-Cys]-mIle-B(SEQID NO：41)的肽。2个Cys残基通过活性化合物中的二硫键连接。在某些实施方案中，所述肽在N-端处被乙酰化和/或在C-端处被酰胺化。在某些实施方案中，
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B 包含B -Xaa0和/或B 包含XaaN-B ，如上所述。例如，在某些实施方案中，B 包含Gly、mGly、Tyr、Phe、Arg、Trp、Thr、Tyr(Me)、mPhe、mVal、mIle、mAla、DTyr、DPhe、DTrp、DCha、
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DAla或由其组成，且B 包含NH2，例如，mIle的羧基端-OH被NH2替代。在某些实施方案中，
1 2
B 包含mGly、Tyr、DTyr或Tyr(Me)或由其组成，且B 包含NH2，例如，mIle的羧基端-OH被NH2替代。在某些实施方案中，在位置Xaa1处的Ile被Gly替代。选择的坎普他汀类似物的补体抑制效能和/或C3b结合参数描述在WO/2010/127336(PCT/US2010/033345)和/或Qu，等人，Immunobiology(2012)，doi：10.1016/j.imbio.2012.06.003。
[0221] 在某些实施方案中，封端部分或其部分(例如，氨基酸残基)可以促进增加化合物对C3或C3b的亲和力和/或提高化合物的活性。在某些实施方案中，对氨基酸或氨基酸类似物的亲和力或活性的促进可以比封端活性更显著。
[0222] 在本发明的组合物和方法的某些实施方案中，所述坎普他汀类似物具有表2中描1
绘的序列，但是其中Ac-基团被如本文所述的替代封端部分B 替换。在某些实施方案中，
2
所述-NH2基团被如本文所述的替代封端部分B 替换。
绘的序列，但是其中Ac-基团被如本文所述的替代封端部分B 替换。在某些实施方案中，
2
所述-NH2基团被如本文所述的替代封端部分B 替换。
[0223] 在一个实施方案中，所述坎普他汀类似物结合与坎普他汀基本上相同的人类C3的β链的区域。在一个实施方案中，坎普他汀类似物是这样的化合物：其结合至坎普他汀所结合的人类C3的β链的C末端部分的分子量为约40kDa的片段(Soulika，A.M.，等人，Mol.Immunol.，35：160，1998；Soulika，A.M.，等人，Mol.Immunol.43(12)：2023-9，2006)。在某些实施方案中，所述坎普他汀类似物是这样的化合物：其结合至如在坎普他汀-C3结构(例如，晶体结构或NMR衍生的3D结构)中确定的坎普他汀结合位点。在某些实施方案中，所述坎普他汀类似物是这样的化合物：其可以置换坎普他汀-C3结构中的坎普他汀，并与C3形成与坎普他汀基本上相同的分子间接触。在某些实施方案中，所述坎普他汀类似物是这样的化合物：其结合至肽-C3结构(例如晶体结构)中具有表2所述序列(例如，SEQ ID NO：14、21、28、29、32、33、34或36)或本文中公开的另一种坎普他汀类似物序列的肽的结合位点。在某些实施方案中，所述坎普他汀类似物是这样的化合物：其结合至肽-C3结构(例如晶体结构)中具有SEQ ID NO：30或31的肽的结合位点。在某些实施方案中，所述坎普他汀类似物是可以置换SEQID NO：9-36的肽的化合物，例如，这样的化合物：其可以置换肽-C3结构中的具有SEQ ID NO：14、21、28、29、32、33、34或36或本文中公开的另一种坎普他汀类似物序列的肽，并且能与C3形成与所述肽基本上相同的分子间接触。在某些实施方案中，所述坎普他汀类似物是这样的化合物：其可以置换肽-C3结构中SEQ ID NO：30或
31的肽，并且能与C3形成与所述肽基本上相同的分子间接触。
31的肽，并且能与C3形成与所述肽基本上相同的分子间接触。
[0224] 本领域普通技术人员使用常规实验方法能够容易地确定坎普他汀类似物是否结合C3的β链的C末端部分的片段。例如，本领域技术人员可以如下合成可光交联形式的坎普他汀类似物：在所述化合物中，例如在序列的C末端，包括光交联氨基酸，例如对苯甲酰基-L-苯丙氨酸(Bpa)(Soulika，A.M.，等人，出处同上)。可以任选地包括额外氨基酸，例如表位标签，如FLAG标签或HA标签，以便利化合物的检测，例如，通过蛋白质印迹法。将坎普他汀类似物与所述片段一起温育，并开始交联。坎普他汀类似物与C3片段的共定位指示结合。也可以使用表面等离子体共振来确定坎普他汀类似物是否结合C3或其片段上的坎普他汀结合位点。本领域技术人员能够使用分子建模软件程序来预测一种化合物是否能与C3形成与坎普他汀或具有表2中任意肽的序列(例如，SEQ ID NO：14、21、28、29、32、33、34或36，或在某些实施方案中，SEQ ID NO：30或31)或本文中公开的另一种坎普他汀类似物序列的肽基本上相同的分子间接触。
[0225] 坎普他汀类似物可以通过本领域已知的多种肽合成方法经由氨基酸残基的缩合来制备，例如，根据常规肽合成方法，可以使用本领域已知的方法，通过在体外或在活细胞中从编码它们的合适核酸序列表达来制备。例如，可以使用如下述文献中所述的标准固相方法来合成肽：Malik，出处同上，Katragadda，出处同上，WO2004026328，和/或WO2007062249。使用本领域已知的各种保护基和方法，可以对潜在反应性部分诸如氨基和羧基、反应性官能团等进行保护和随后去保护。参见，例如，“Protective Groups in Organic Synthesis”，第3版Greene，T.W.和Wuts，P.G.，编，John Wiley&Sons，New York：1999。使用标准方案诸如反相HPLC，可以纯化肽。如果需要的话，使用已知方法诸如反相HPLC，可以进行非对映异构肽的分离。如果需要的话，可以将制剂低压冻干，随后溶解于合适溶剂(例如，水)中。使用碱(例如NaOH)，可以调整所得溶液的pH，例如调到生理pH。
如果需要的话，可以通过质谱法来表征肽制剂，例如以确认质量和/或二硫键形成。参见，例如，Mallik，2005，和Katragadda，2006。
如果需要的话，可以通过质谱法来表征肽制剂，例如以确认质量和/或二硫键形成。参见，例如，Mallik，2005，和Katragadda，2006。
[0226] 通过添加分子(诸如聚乙二醇(PEG)或类似分子)，可以修饰坎普他汀类似物，以稳定化合物、降低其免疫原性、延长其在体内的寿命、增强或减弱其可溶性和/或增强其对降解的抗性。聚乙二醇化方法是本领域众所周知的(Veronese，F.M.和Harris，AdV.Drug Deliv.Rev.54，453-456，2002；Davis，F.F.，AdV.Drug Deliv.Rev.54，457-458，2002)；Hinds，K.D.和Kim，S.W.Adv.Drug Deliv.Rev.54，505-530(2002；Roberts，M.J.，Bentley，M.D.和Harris，J.M.Adv.Drug Deliv.Rev.54，459-476；2002)；Wang，Y.S.等人.Adv.Drug Deliv.Rev.54，547-570，2002)。多种聚合物诸如PEG和经修饰的PEG(包括可与多肽方便地连接的衍生化的PEG)描述于Nektar Advanced Pegylation2005-2006Product Catalog，Nektar Therapeutics，San Carlos，CA中，其也提供了适当的缀合操作的细节。在另一个实施方案中，将坎普他汀类似物融合至免疫球蛋白或其部分的Fc结构域。在一些其它的实施方案中，将坎普他汀类似物缀合至白蛋白部分或白蛋白结合肽。因而，在某些实施方案中，用一种或多种多肽或非多肽组分修饰坎普他汀类似物，例如，将坎普他汀类似物聚乙二醇化或缀合至另一个部分。在某些实施方案中，所述组分不是免疫球蛋白或其部分的Fc结构域。可以将坎普他汀类似物提供为多聚体或超分子复合物的一部分，所述超分子复合物可以包括单一分子物质或多种不同物质(例如，多种不同的类似物)。
[0227] 在某些实施方案中，在本文描述的方法中使用的坎普他汀类似物是长效坎普他汀类似物，其具有至少3、4、5、6或7天的终末半衰期。在某些实施方案中，长效坎普他汀类似物是聚乙二醇化的坎普他汀类似物。示例性的长效坎普他汀类似物描述在下面和/或2012年5月11日提交的标题为“CELL-REACTIVE，LONG-ACTING，OR TARGETED COMPSTATIN ANALOGS AND USES THEREOF”的PCT/US12/37648中。在与坎普他汀类似物有关的任一种方法或组合物的某些实施方案中，所述坎普他汀类似物包含其序列含有SEQ ID NO：3-41中的任一个的坎普他汀类似物，其中所述坎普他汀类似物是长效坎普他汀类似物。
[0228] 在某些实施方案中，坎普他汀类似物是多价化合物，其包含与聚合主链或支架共价地或非共价地连接的多个坎普他汀类似物部分。所述坎普他汀类似物部分可以是相同的或不同的。在本发明的某些实施方案中，所述多价化合物包含单一坎普他汀类似物部分的多个实例或拷贝。在本发明的其它实施方案中，所述多价化合物包含两种或更多种不同坎普他汀类似物部分(例如3、4、5或更多种不同的坎普他汀类似物部分)中的每一种的一个或多个实例。在本发明的某些实施方案中，所述坎普他汀类似物部分的数目(“n”)是2-6。在本发明的其它实施方案中，n是7-20。在本发明的其它实施方案中，n是20-100。在其它实施方案中，n是100-1,000。在本发明的其它实施方案中，n是1,000至10,000。在其它实施方案中，n是10,000至50,000。在其它实施方案中，n是50,000至100,000。在其它实施方案中，n是100,000至1,000,000。
[0229] 坎普他汀类似物部分可以与聚合支架直接连接，或可以通过连接部分连接，所述连接部分将坎普他汀类似物部分连接至聚合支架。所述连接部分可以连接至单一坎普他汀类似物部分和连接至聚合支架。可替代地，连接部分可以具有多个与其连接的坎普他汀类似物部分，以使所述连接部分将多个坎普他汀类似物部分连接至聚合支架。
[0230] 在某些实施方案中，所述坎普他汀类似物包含具有含伯胺或仲胺的侧链的氨基酸，例如Lys残基。例如，通过添加接头可以延伸或修饰本文中公开的任意坎普他汀类似物序列，所述接头包含一个或多个氨基酸，例如，一个或多个包含伯胺或仲胺(例如，在其侧链中)的氨基酸。例如，使Lys残基或包含Lys残基的序列附加至坎普他汀类似物的N末端和/或C末端。在某些实施方案中，所述Lys残基与坎普他汀类似物的环状部分被刚性或柔性隔离物分开。接头或隔离物可以例如包含被取代的或未被取代的、饱和的或不饱和的烷基链、寡(乙二醇)链和/或其它部分。所述链的长度可以是例如2-20个碳原子。在其它实施方案中，所述隔离物是或包含肽。所述肽隔离物的长度可以是例如1-20个氨基酸，例如长度为4-20个氨基酸。例如，合适的隔离物可以包含多个Gly残基、Ser残基或二者，或由其组成。任选地，具有含伯胺或仲胺的侧链的氨基酸和/或隔离物中的至少一个氨基酸是D-氨基酸。PEG部分或类似的分子或聚合支架可以任选地经由接头连接至伯胺或仲胺。在某些实施方案中，使用双功能的接头。在不同的实施方案中，双功能的接头可以包含2个相同的或不同的反应性官能团。在不同的实施方案中，使用一个或多个接头、隔离物和/或在Hermanson(出处同上)中描述的缀合技术。
[0231] 可以使用多种聚合主链或支架中的任一种。例如，聚合主链或支架可以为聚酰胺、多糖、聚酸酐、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酸酯、多肽、聚氧化乙烯或树枝状聚合物。合适的方法和聚合主链描述于例如WO98/46270(PCT/US98/07171)或WO98/47002(PCT/US98/06963)中。在一个实施方案中，所述聚合主链或支架包含多种反应性官能团，诸如羧酸、酸酐或琥珀酰亚胺基团。所述聚合主链或支架与坎普他汀类似物反应。在一个实施方案中，所述坎普他汀类似物包含多种不同反应性官能团(诸如羧酸、酸酐或琥珀酰亚胺基团)中的任一种，其与聚合主链上的适当基团反应。可替代地，可以彼此结合形成聚合主链或支架的单体单元首先与坎普他汀类似物反应，并且得到的单体发生聚合。在另一个实施方案中，将短链预聚合、官能化，然后使不同组成的短链的混合物装配成较长聚合物。
[0232] 在某些方面，诸如聚乙二醇(PEG)链或其它聚合物(其例如稳定化合物、延长其在体内的寿命、增强其可溶性、降低其免疫原性和/或增强其对降解的抗性)等部分在本文中可以被称作“清除率降低部分”(CRM)，且包含这样的部分的坎普他汀类似物可以被称作长效坎普他汀类似物。
[0233] 在某些方面，长效坎普他汀类似物包含式M-L-A的化合物，其中A是包含CRM的部分，L是任选地存在的连接部分，且M包含坎普他汀类似物部分。在不同的实施方案中，所述坎普他汀类似物部分可以包含任意坎普他汀类似物，例如，上述的任意坎普他汀类似物。式M-L-A包括：其中L-A存在于坎普他汀类似物部分的N末端的实施方案，其中L-A存在于坎普他汀类似物部分的C末端的实施方案，其中L-A连接至坎普他汀类似物部分的氨基酸的侧链的实施方案，和其中相同的或不同的L-A存在于M的两端的实施方案。应当理解，当某些坎普他汀类似物作为坎普他汀类似物部分存在于式M-L-A的化合物中时，坎普他汀类似物的官能团将与L的官能团反应以形成与A或L的共价键。例如，长效坎普他汀类似物(其中坎普他汀类似物部分包含含有氨基酸的坎普他汀类似物，所述氨基酸具有含伯胺
1 1
(NH2)基团的侧链(所述坎普他汀类似物可以由式R-(NH2)表示))可以具有式R-NH-L-A，其中已经形成与L的新共价键(例如，N-C)，且丢失氢。因而，术语“坎普他汀类似物部分”包括这样的分子结构：其中坎普他汀类似物的至少一个原子参加与第二部分的共价键，所述第二部分可以是例如侧链的修饰。类似的考虑适用于在多价化合物中存在的坎普他汀类似物部分。在某些实施方案中，在坎普他汀类似物的N-端或C-端处的封端部分被长效坎普他汀类似物的结构中的L-A替代。
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(NH2)基团的侧链(所述坎普他汀类似物可以由式R-(NH2)表示))可以具有式R-NH-L-A，其中已经形成与L的新共价键(例如，N-C)，且丢失氢。因而，术语“坎普他汀类似物部分”包括这样的分子结构：其中坎普他汀类似物的至少一个原子参加与第二部分的共价键，所述第二部分可以是例如侧链的修饰。类似的考虑适用于在多价化合物中存在的坎普他汀类似物部分。在某些实施方案中，在坎普他汀类似物的N-端或C-端处的封端部分被长效坎普他汀类似物的结构中的L-A替代。
[0234] 在某些实施方案中，L包含：不饱和的部分诸如-CH＝CH-或-CH2-CH＝CH-；包含非芳族环系的部分(例如，环己基部分)、芳族部分(例如，芳族环系诸如苯基部分)；醚部分(-C-O-C-)；酰胺部分(-C(＝O)-N-)；酯部分(-CO-O-)；羰基部分(-C(＝O)-)；
亚胺部分(-C＝N-)；硫醚部分(-C-S-C-)；氨基酸残基；和/或通过2个相容的反应性官能团的反应可以形成的任意部分。在某些实施方案中，连接部分的一个或多个部分被包括、但不限于以下的一个或多个部分对其上的一个或多个氢(或其它)原子的独立替换所取代：脂族；芳族、芳基；烷基、芳烷基、烷酰基、芳酰基、烷氧基；硫代；F；Cl；Br；I；-NO2；-CN；-CF3；-CH2CF3；-CHCl2；-CH2OH；-CH2CH2OH；-CH2NH2；-CH2SO2CH3；-或-GRG1，其中G是-O-、-S-、-NRG2-、-C(＝O)-、-S(＝O)-、-SO2-、-C(＝O)O-、-C(＝O)NRG2-、-OC(＝O)-、-NRG2C( ＝O)-、-OC( ＝ O)O-、-OC( ＝O)NRG2-、-NRG2C( ＝ O)O-、-NRG2C( ＝ O)NRG2-、-C(＝S)-、-C(＝S)S-、-SC(＝S)-、-SC(＝S)S-、-C(＝NRG2)-、-C(＝NRG2)O-、-C(＝NRG2)NRG3-、-OC(＝NRG2)-、-NRG2C(＝NRG3)-、-NRG2SO2-、-NRG2SO2NRG3-或-SO2NRG2-，其中RG1、RG2和RG3的每次出现独立地包括、但不限于：氢、卤素或任选地被取代的脂族、芳族或芳基部分。应当理解，环系当作为取代基存在时，可以任选地经由直链部分连接。本发明预见到的取代基和变量的组合优选地是导致稳定化合物形成的那些，所述化合物可用于本文所述的方法的任意一种或多种中，例如，可用于治疗一种或多种障碍和/或用于接触细胞、组织或器官(如本文中所述)，和/或可在一种或多种这样的化合物的制备中用作中间体。
亚胺部分(-C＝N-)；硫醚部分(-C-S-C-)；氨基酸残基；和/或通过2个相容的反应性官能团的反应可以形成的任意部分。在某些实施方案中，连接部分的一个或多个部分被包括、但不限于以下的一个或多个部分对其上的一个或多个氢(或其它)原子的独立替换所取代：脂族；芳族、芳基；烷基、芳烷基、烷酰基、芳酰基、烷氧基；硫代；F；Cl；Br；I；-NO2；-CN；-CF3；-CH2CF3；-CHCl2；-CH2OH；-CH2CH2OH；-CH2NH2；-CH2SO2CH3；-或-GRG1，其中G是-O-、-S-、-NRG2-、-C(＝O)-、-S(＝O)-、-SO2-、-C(＝O)O-、-C(＝O)NRG2-、-OC(＝O)-、-NRG2C( ＝O)-、-OC( ＝ O)O-、-OC( ＝O)NRG2-、-NRG2C( ＝ O)O-、-NRG2C( ＝ O)NRG2-、-C(＝S)-、-C(＝S)S-、-SC(＝S)-、-SC(＝S)S-、-C(＝NRG2)-、-C(＝NRG2)O-、-C(＝NRG2)NRG3-、-OC(＝NRG2)-、-NRG2C(＝NRG3)-、-NRG2SO2-、-NRG2SO2NRG3-或-SO2NRG2-，其中RG1、RG2和RG3的每次出现独立地包括、但不限于：氢、卤素或任选地被取代的脂族、芳族或芳基部分。应当理解，环系当作为取代基存在时，可以任选地经由直链部分连接。本发明预见到的取代基和变量的组合优选地是导致稳定化合物形成的那些，所述化合物可用于本文所述的方法的任意一种或多种中，例如，可用于治疗一种或多种障碍和/或用于接触细胞、组织或器官(如本文中所述)，和/或可在一种或多种这样的化合物的制备中用作中间体。
[0235] 在不同的实施方案中，L可以包含一个或多个在上述段落中描述的任意部分。在某些实施方案中，L包含2个或更多个不同的部分，所述部分彼此连接以形成通常具有1至约60个原子、1至约50个原子(例如，1-40个、1-30个、1-20个、1-10个或1-6个原子)的长度的结构，其中长度表示主(最长)链中的原子的数目。在某些实施方案中，L包含2个或更多个不同的部分，所述部分彼此连接以形成在主(最长)链中通常具有1至约40个(例如，1-30个，例如，1-20个、1-10个或1-6个)碳原子的结构。
[0236] 在某些实施方案中，当以10mg/kg的剂量静脉内施用给人类或非人灵长类动物时，长效坎普他汀类似物具有至少1天(例如，1-3天、3-7天、7-14天或14-28天)的平均血浆半衰期。在某些实施方案中，在以10mg/kg的剂量静脉内施用给人类或非人灵长类动物以后，与具有相同氨基酸序列(和，如果适用的话，一个或多个封端部分)、但是不包含CRM的对应坎普他汀类似物的平均血浆半衰期相比，长效坎普他汀类似物的平均血浆半衰期增加了至少2倍，例如，增加了2-5、5-10、10-50或50-100倍。
[0237] 在某些实施方案中，血浆半衰期是单次静脉内施用以后的终末半衰期。在某些实施方案中，血浆半衰期是在多次静脉内施用以后已经达到稳态后的终末半衰期。在某些实施方案中，在单次静脉内施用给灵长类动物以后，或者在多次静脉内施用以后，长效坎普他汀类似物在血浆中达到的Cmax是不包含CRM的对应坎普他汀类似物的Cmax的至少5倍，例如，5-50倍。在某些实施方案中，在单次静脉内施用给灵长类动物以后，或者在多次静脉内施用以后，长效坎普他汀类似物在血浆中达到的Cmax是不包含CRM的对应坎普他汀类似物的Cmax的10-20倍。在某些实施方案中，灵长类动物是人。在某些实施方案中，灵长类动物是非人灵长类动物，例如，猴，诸如食蟹猴或恒河猴。在某些实施方案中，在以10mg/kg剂量静脉内施用给人类或非人灵长类动物以后的前24小时中，与对应坎普他汀类似物的肾清除率相比，长效坎普他汀类似物的肾清除率下降了至少2倍，例如，2-5、5-10、10-50或50-100倍。使用例如UV、HPLC、质谱法(MS)、或针对CRM的抗体、或这样的方法的组合(诸如LC/MS或LC/MS/MS)，可以测量血液和/或尿样品中的坎普他汀类似物的浓度。使用本领域普通技术人员已知的方法，可以确定药代动力学参数诸如半衰期和清除率。用例如WinNonlin软件v5.2(Pharsight Corporation，St.Louis，MO)，可以执行药代动力学分析。
[0238] 在某些实施方案中，长效坎普他汀类似物的摩尔活性为具有相同氨基酸序列(和，如果适用的话，一个或多个封端部分)、但是不包含CRM的对应坎普他汀类似物的活性的至少约10％、20％、30％，例如，30％至40％、30％至50％、30％至60％、30％至70％、30％至80％、30％至90％或更多。在某些其中长效坎普他汀类似物包含多个坎普他汀类似物部分的实施方案中，长效坎普他汀类似物的摩尔活性是所述坎普他汀类似物部分的活性总和的至少约10％、20％或30％，例如，30％至40％、30％至50％、30％至60％、30％至70％、30％至80％、30％至90％或更多。在某些实施方案中，聚乙二醇(PEG)包含具有至少500道尔顿的分子量的(CH2CH2O)n部分。在某些实施方案中，接头包含具有约500、1,000、1,500、
2,000、5,000、10,000、20,000、30,000、40,000、50,000、60,000、70,000、80,000、90,000 至
100,000道尔顿的平均分子量的(CH2CH2O)n部分。“平均分子量”表示数量平均分子量。在某些实施方案中，(CH2CH2O)n部分的多分散性D是1.0005至1.50，例如，1.005至1.10、1.15、
1.20、1.25、1.30、1.40或1.50，或1.0005和1.50之间的任意值。
2,000、5,000、10,000、20,000、30,000、40,000、50,000、60,000、70,000、80,000、90,000 至
100,000道尔顿的平均分子量的(CH2CH2O)n部分。“平均分子量”表示数量平均分子量。在某些实施方案中，(CH2CH2O)n部分的多分散性D是1.0005至1.50，例如，1.005至1.10、1.15、
1.20、1.25、1.30、1.40或1.50，或1.0005和1.50之间的任意值。
[0239] 在某些实施方案中，(CH2CH2O)n部分是单分散的，且(CH2CH2O)n部分的多分散性是1.0。这样的单分散的(CH2CH2O)n部分是本领域已知的，且可商购得自Quanta BioDesign(Powell，OH)，并且包括(通过非限制性例子)其中n为2、4、6、8、12、16、20或24的单分散部分。
[0240] 在某些实施方案中，化合物包含多个(CH2CH2O)n部分，其中所述(CH2CH2O)n部分的总分子量是约1,000、5,000、10,000、20,000、30,000、40,000、50,000、60,000、70,000、80,000、90,000至100,000道尔顿。在某些实施方案中，所述化合物包含多个具有确定长度的(CH2CH2O)n部分，例如，n＝4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28或30或更大。在某些实施方案中，所述化合物包含足够数目的具有确定长度的(CH2CH2O)n部分，以产生在约 1,000、5,000、10,000、20,000、30,000、40,000、50,000、60,000、70,000、80,000、90,000至100,000道尔顿之间的所述(CH2CH2O)n部分的总分子量。在某些实施方案中，n是约30至约3000。在某些实施方案中，将坎普他汀类似物部分连接在直链PEG的每个末端。可以使用在链的每个末端处具有反应性官能团的双功能PEG，例如，如上所述。在某些实施方案中，所述反应性官能团是相同的，而在某些实施方案中，不同反应性官能团存在于每个末端处。在某些实施方案中，提供多个(CH2CH2O)n部分作为支链结构。所述支链可以连接至线性聚合物主链(例如，作为梳状结构)，或者可以从一个或多个中心基团发散，例如，作为星形结构。在某些实施方案中，支链分子具有3-10个(CH2CH2O)n链。在某些实施方案中，支链分子具有4-8个(CH2CH2O)n链。在某些实施方案中，支链分子具有10、9、8、7、6、5、4或3个(CH2CH2O)n链。在某些实施方案中，星形分子具有10-100个、10-50个、10-30个或10-20个从中心基团发散的(CH2CH2O)n链。在某些实施方案中，长效坎普他汀类似物因而可以包含，例如，3-10个坎普他汀类似物部分，例如，4-8个坎普他汀类似物部分，每个部分经由在链末端处的官能团连接至(CH2CH2O)n链。在某些实施方案中，长效坎普他汀类似物可以包含，例如，10-100个坎普他汀类似物部分，每个部分经由在链末端处的官能团连接至(CH2CH2O)n链。在某些实施方案中，支链或星形PEG的分支(有时被称作“臂”)含有大约相同数目的(CH2CH2O)部分。在某些实施方案中，至少一些分支长度可以不同。应该理解，在某些实施方案中，一个或多个(CH2CH2O)n链不具有与其连接的坎普他汀类似物部分。在某些实施方案中，所述链的至少约30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或100％具有与其连接的坎普他汀类似物部分。
[0241] 在本文描述的类和化合物中，如下描绘聚乙二醇部分：将氧原子置于重复单元的右侧或重复单元的左侧。在仅描绘一种取向的情况下，本发明包括给定化合物或类的聚乙二醇部分的两种取向(即，(CH2CH2O)n和(OCH2CH2)n)，或者在化合物或类含有多个聚乙二醇部分的情况下，本公开内容包括所有取向组合。
[0242] 下面解释了一些示例性的包含反应性官能团的单功能PEG的通式。为了解释目的，描绘了其中反应性官能团包含NHS酯的通式，但是可以使用其它反应性官能团，例如，如上所述。在某些实施方案中，将(CH2CH2O)n描述为在左末端处以甲氧基(OCH3)终止，但是应该理解，在下面和在本文别处描绘的链可以以不同的OR部分(例如，脂族基团、烷基、低级烷基或任意其它合适的PEG末端基团)或OH基团终止。还应当理解，在不同的实施方案中，除了描述的那些以外的部分可以连接(CH2CH2O)n部分和NHS基团。
[0243] 在某些实施方案中，单功能PEG具有式A：
[0244]
[0245] 其中“反应性官能团”和n如上面所定义，并描述在本文中的类和亚类中；
[0246] R1是氢、脂族或任意合适的末端基团；且
[0247] T是共价键或C1-12直链或支链烃链，其中T的一个或多个碳单元任选地x x
和 独 立 地 被 -O-、-S-、-N(R)-、-C(O)-、-C(O)O-、-OC(O)-、-N(R)C(O)-、-C(O)x x x
N(R)-、-S(O)-、-S(O)2-、-N(R)SO2-或-SO2N(R)-替代；且
和 独 立 地 被 -O-、-S-、-N(R)-、-C(O)-、-C(O)O-、-OC(O)-、-N(R)C(O)-、-C(O)x x x
N(R)-、-S(O)-、-S(O)2-、-N(R)SO2-或-SO2N(R)-替代；且
[0248] 每个Rx独立地是氢或C1-6脂族。
[0249] 示例性的式A的单功能PEG包括：
[0250]
[0251] 在式I中，包含反应性官能团的部分具有通式结构-CO-(CH2)m-COO-NHS，其中m＝2。在某些实施方案中，单功能PEG具有式I的结构，其中m是1-10，例如，1-5。例如，在某些实施方案中，m是3，如下所示：
[0252]
[0253]
[0254] 在式II中，包含反应性官能团的部分具有通式结构-(CH2)m-COO-NHS，其中m＝1。在某些实施方案中，单功能PEG具有式II的结构，其中m是1-10(例如，其中m是5，如下面式III所示)，或其中m是0(如下面式IIIa所示)。
[0255]
[0256] 在某些实施方案中，双功能的直链PEG包含在它的每个末端处具有反应性官能团的部分。所述反应性官能团可以是相同的(同双功能的)或不同的(异双功能的)。在某些实施方案中，双功能PEG的结构可以是对称的，其中使用相同部分将反应性官能团连接至在-(CH2CH2O)n链的每个末端处的氧原子。在某些实施方案中，使用不同部分将2个反应性官能团连接至分子的PEG部分。下面描绘了示例性的双功能PEG的结构。为了解释目的，描绘了其中反应性官能团包含NHS酯的通式，但是可以使用其它反应性官能团。
[0257] 在某些实施方案中，双功能的直链PEG具有式B：
[0258]
[0259] 其中每个T和“反应性官能团”独立地如上定义，并描述在本文中的类和亚类中，且n如上面所定义，并描述在本文中的类和亚类中。
[0260] 示例性的式B的双功能PEG包括：
[0261]
[0262] 在式IV中，包含反应性官能团的部分具有通式结构-(CH2)m-COO-NHS，其中m＝1。在某些实施方案中，双功能PEG具有式IV的结构，其中m是1-10，例如，1-5。
[0263]
[0264] 在式V中，包含反应性官能团的部分具有通式结构-CO-(CH2)m-COO-NHS，其中m＝2。在某些实施方案中，双功能PEG具有式V的结构，其中m是1-10，例如，1-5。
[0265] 在某些实施方案中，有分支的梳形或星形PEG包含这样的部分：其含有在多个-(CH2CH2O)n链的每一个的末端处的反应性官能团。所述反应性官能团可以是相同的，或者可以存在至少2种不同的基团。在某些实施方案中，有分支的梳形或星形PEG具有下式：
[0266]
[0267]
[0268] 其中每个R2独立地是“反应性官能团”或R1，且每个T、n和“反应性官能团”独立地如上定义，并描述在本文中的类和亚类中。下面描述了包含NHS部分作为反应性官能团的示例性支链PEG(具有8个臂或分支)的结构：
[0269]
[0270]
[0271] 下面描述了包含NHS部分作为反应性官能团的示例性支链PEG(具有4个臂或分支)的结构：
[0272]
[0273] 从主链发散的分支的数目可以变化。例如，在不同的实施方案中，在上面式VI和VII中的数目4可以变为0-10之间的任意其它整数。在某些实施方案中，一个或多个分支不含有反应性官能团，且所述分支以-CH2CH2OH或-CH2CH2OR基团终止，如上所述。
[0274] 在某些实施方案中，支链PEG具有式VII、VIII或IX(或其具有不同数目的分支的变体)的结构，前提条件是，x是
[0275]
[0276] 在某些实施方案中，支链PEG具有式VII、VIII或IX(或其具有不同数目的分支的变体)的结构，前提条件是，x是
[0277]
[0278] 当然，在上面的x部分中的亚甲基(CH2)基团可以替代性地包含较长的烷基链(CH2)m，其中m是至多2、3、4、5、6、8、10、20或30，或者可以包含一个或多个本文中描述的其它部分。
[0279] 在某些实施方案中，下面描述了具有NHS或马来酰亚胺反应基团的示例性支链PEG：
[0280]
[0281]
[0282] 在某些实施方案中，使用式X或XI的变体，其中所述4个分支中的3个或每个包含反应性官能团。
[0283] 可以如下表示PEG的其它例子：
[0284]
[0285] 如上面所指出的，应当理解，如本文中所述的，在不同的实施方案中，可以将多种部分中的任一种掺入长效坎普他汀类似物的肽组分和(CH2CH2O)n-R部分之间，诸如直链烷基、酯、酰胺、芳族环(例如，被取代的或未被取代的苯基)、被取代的或未被取代的环烷基结构、或它们的组合。在某些实施方案中，这样的部分可以使得化合物对水解更敏感，所述水解可以从CRM释放出化合物的肽部分。在某些实施方案中，这样的释放可以增强化合物的体内组织穿透和/或活性。在某些实施方案中，水解是一般(例如，酸-碱)水解。在某些实施方案中，水解是酶催化的，例如，酯酶催化的。当然，可能发生两类水解。包含一个或多个这样的部分和作为反应性官能团的NHS酯的PEG的例子如下：
[0286]
[0287] 在某些实施方案中，支链(多臂)PEG或星形PEG包含季戊四醇核心、六甘油核心或三季戊四醇核心。应该理解，在某些实施方案中，所述分支可以不都从单个点发散。
[0288] 包含一个或多个反应性官能团的单功能的、双功能的、支链和其它PEG可以得自，例如，NOF America Corp.White Plains，NY或BOCSciences45-16Ramsey Road Shirley，NY11967，USA，以及其它。
[0289] 在某些实施方案中，坎普他汀类似物(例如，属于SEQ ID NO：3-41中的任一个)在N末端、C末端或二者处延长一个或多个氨基酸，其中至少一个氨基酸具有包含反应性官能团的侧链，所述反应性官能团是例如：伯胺或仲胺、巯基、羧基(其可以作为羧酸酯基团存在)、胍基、酚基团、吲哚环、硫醚或咪唑环，其中所述反应性官能团可以用于例如连接至CRM或包含CRM的部分。在某些实施方案中，所述氨基酸是L-氨基酸。在某些实施方案中，任意一个或多个氨基酸是D-氨基酸。如果添加多个氨基酸，所述氨基酸可以独立地进行选择。在某些实施方案中，使用所述反应性官能团(例如，伯胺或仲胺)作为用于添加包含CRM的部分的靶标。具有包含伯胺或仲胺的侧链的氨基酸包括赖氨酸(Lys)和通式结构NH2(CH2)nCH(NH2)COOH的二氨基甲酸，诸如2，3-二氨基丙酸(dapa)、2，4-二氨基丁酸(daba)和鸟氨酸(orn)，其中n分别为1(dapa)、2(daba)和3(orn)。在某些实施方案中，至少一个氨基酸是半胱氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、精氨酸、酪氨酸、色氨酸、蛋氨酸或组氨酸。半胱氨酸具有包含巯基的侧链。天冬氨酸和谷氨酸具有包含羧基(可离子化为羧酸酯基团)的侧链。精氨酸具有包含胍基的侧链。酪氨酸具有包含酚基团(可离子化为酚盐基团)的侧链。色氨酸具有包含吲哚环的侧链，包括例如色氨酸。蛋氨酸具有包含硫醚基的侧链，包括例如蛋氨酸。组氨酸具有包含咪唑环的侧链。可以得到多种包含侧链(其包含一个或多个这样的反应性官能团)的非标准氨基酸，包括天然存在的氨基酸和在自然界中不存在的氨基酸。参见，例如，Hughes，B.(编)，Amino Acids，Peptides and Proteins in Organic Chemistry，第1-4卷，Wiley-VCH(2009-2011)；Blaskovich，M.，Handbook on Syntheses of Amino Acids General Routes to Amino Acids，Oxford University Press，2010。包括这样的实施方案，其中使用一个或多个非标准氨基酸来提供用于添加包含CRM的部分的靶标。在化合物合成过程中，可以适当地保护任意一个或多个氨基酸。例如，在涉及靶氨基酸侧链的反应过程中，可以保护一个或多个氨基酸。在某些其中使用含巯基的氨基酸作为用于添加包含CRM的部分的靶标的实施方案中，当通过在其它氨基酸(诸如半胱氨酸)之间形成分子内二硫键而环化化合物时，保护巯基。
[0290] 在本文的某些讨论中，使用具有含胺基的侧链的氨基酸作为一个例子。包括类似的实施方案，其中使用具有含不同反应性官能团的侧链的氨基酸。在某些实施方案中，具有含伯胺或仲胺的侧链的氨基酸经由肽键直接连接至SEQ ID NO：3-41中的任一个的N末端或C末端。在某些实施方案中，具有含伯胺或仲胺的侧链的氨基酸经由连接部分连接至SEQ ID NO：3-41中的任一个的N末端或C末端，所述连接部分可以含有任意一种或多种上述的连接部分。在某些实施方案中，至少2个氨基酸连接至任一端或两端。所述2个或更多个连接的氨基酸可以通过肽键彼此连接，或者至少一些连接的氨基酸可以通过连接部分彼此连接，所述连接部分可以含有任意一种或多种本文中描述的连接部分。
[0291] 应该理解，不包含CRM的对应坎普他汀类似物也可以缺少一个或多个这样的氨基酸，所述氨基酸存在于它所对应的长效坎普他汀类似物中。因而，包含SEQ ID NO：3-41中的任一个且缺少CRM的对应坎普他汀类似物将被理解为分别具有与SEQ ID NO：3-41“相同的氨基酸序列”。例如，包含SEQ ID NO：14、21、28、29、32、33、34或36的氨基酸序列且缺少CRM的对应坎普他汀类似物将被理解为分别具有与SEQ ID NO：14、21、28、29、32、33、34或36“相同的氨基酸序列”。
[0292] 为了描述目的，使用具有氨基酸序列Ile-Cys*-Val-(1Me)Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys*-Thr(SEQ ID NO：42)(对应于SEQ ID NO：28的坎普他汀类似物，其中在SEQ ID NO：42中的星号代表活性化合物中通过二硫键连接的半胱氨酸，且(1Me)Trp代表2-甲基-色氨酸))的肽作为一个示例性的坎普他汀类似物部分；使用(CH2)n和(O-CH2-CH2)n作为连接部分的例子；使用赖氨酸作为包含反应性官能团的氨基酸的一个例子(在某些化合物中)，和分别使用N和C末端的乙酰化和酰胺化作为在某些化合物中任选地存在的示例性封端部分，且可以分别用斜体字表示，即，作为Ac和NH2。在某些实施方案中，延伸SEQ ID NO：42以在肽的N-或C-末端包含Lys残基，例如，如下面关于C-端连接所例证的：
[0293] Ac-Ile-Cys*-Val-(1Me)Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys*-Thr-Lys-NH2(SEQ ID NO：43)。
[0294] 在某些实施方案中，Lys残基经由肽接头连接至SEQ ID NO：42的N-或C-末端，例如，如下面关于C-端连接所例证的：
[0295] Ac-Ile-Cys*-Val-(1Me)Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys*-Thr-(Gly)5-Lys-NH2(SEQ ID NO：44)。
[0296] 在某些实施方案中，将包含伯胺或仲胺的接头添加至坎普他汀类似物的N或C末端。在某些实施方案中，所述接头包含烷基链和/或寡(乙二醇)部分。例如，可以使用NH2(CH2CH2O)nCH2C(＝O)OH(例如，8-氨基-3，6-二氧杂辛酸(AEEAc)或11-氨基-3，6，9-三氧杂十一烷酸)或其NHS酯(例如，8-氨基-3，6-二氧杂辛酸或11-氨基-3，6，9-三氧杂十一烷酸的NHS酯)。在某些实施方案中，得到的化合物如下(其中由接头贡献的部分以粗体显示)：
[0297] NH2(CH2)5C(＝O)-Ile-Cys-Val-(1Me)Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys-Thr-NH2(SEQ ID NO：45)。
[0298] NH2(CH2CH2O)2CH2C(＝O)-Ile-Cys-Val-(1Me)Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys-Thr-NH2(SEQ ID NO：46)
[0299] 在某些实施方案中，将Lys残基经由包含非肽部分的肽接头连接至SEQ ID NO：42的N或C末端。例如，所述接头可以包含烷基链、寡(乙二醇)链和/或环系。在某些实施方案中，使用8-AEEAc或其NHS酯，从而产生(在C末端处连接Lys的情况下)下述化合物(其中由8-AEEAc贡献的部分以粗体显示)：
[0300] Ac-Ile-Cys*-Val-(1Me)Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys*-Thr-NH-CH2CH2OCH2CH2OCH2-C(＝O)-Lys-NH2(SEQ ID NO：47)
[0301] 应当理解，在SEQ ID NO：45和46中，将-C(＝O)部分经由C-N键连接至邻近的Ile残基，其中所述N是氨基酸的一部分，且未显示。类似地，在SEQ ID NO：47中，将-C(＝O)部分经由C-N键连接至邻近的Lys残基，其中所述N是氨基酸的一部分，且未显示。还应当理解，在SEQ ID NO：47中，将NH部分经由C-N键连接至邻近的N末端氨基酸(Thr)，其中所述C是氨基酸的羰基碳，且未显示。
[0302] 可以在伯胺基处修饰SEQ ID NO：43-47的化合物，以产生长效坎普他汀类似物。
[0303] 示例性的长效坎普他汀类似物如下所述，其中n足以提供约500、1,000、1,500、2,000、5,000、10,000、20,000、30,000、40,000、50,000、60,000、70,000、80,000、90,000 至
100,000道尔顿的平均分子量。
100,000道尔顿的平均分子量。
[0304] (CH2CH2O)nC(＝O)-Ile-Cys-Val-(1Me)Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys-Thr-NH2)(SEQ ID NO：48)
[0305] Ac-Ile-Cys*-Val-(1Me)Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys*-Thr-NH-CH2CH2OCH2CH2OCH2-C(＝O)-Lys-C(＝O)-(CH2CH2O)n-NH2(SEQ IDNO：49)
[0306] Ac-Ile-Cys*-Val-(1Me)Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys*-Thr-Lys-C(＝O)-(CH2CH2O)n-NH2(SEQ ID NO：50)。
[0307] Ac-Ile-Cys*-Val-(1Me)Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys*-Thr-(Gly)5-Lys-C(＝O)-(CH2CH2O)n-NH2(SEQ ID NO：51)
[0308] Ac-(CH2CH2O)nC(＝O)Lys-(Gly)5-Ile-Cys*-Val-(1Me)Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys*-Thr-NH2)(SEQ IDNO：52)
[0309] Ac-(CH2CH2O)nC(＝O)Lys-Ile-Cys*-Val-(1Me)Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys*-Thr-NH2)(SEQ IDNO：53)
[0310] 在SEQ ID NO：48中，(CH2CH2O)n经由酰胺键偶联至N末端氨基酸。在SEQ ID NO：49-53中，(CH2CH2O)n部分经由酰胺键偶联至Lys侧链；因而，应该理解，在SEQ ID NO：49、
50和51的C末端处的NH2代表肽的C末端的酰胺化，且应该理解，在SEQ ID NO：52和53中，在N末端处的Ac代表肽的N末端的乙酰化，如上所述。本领域普通技术人员还理解，(CH2CH2O)n部分的游离末端通常用(OR)终止，其中带有下划线的O代表末端(CH2CH2O)基团中的O原子。(OR)经常是诸如羟基(OH)或甲氧基(-OCH3)基团等部分，尽管可以使用其它基团(例如，其它烷氧基)。因而，例如，在直链PEG的情况下，SEQ ID NO：49可以表示为Ac-Ile-Cys*-Val-(1Me)Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys*-Thr-NH-CH2CH2OCH2CH2OCH2-C(＝O)-Lys-(C(＝O)-(CH2CH2O)n-R)-NH2(SEQ ID NO：54)，其中R是例如H或CH3。在双功能的、支链或星形PEG的情况下，R代表分子的其它部分。此外，应该理解，包含反应性官能团的部分可以变化，如本文中所述(例如，根据本文中所述的任意通式)。例如，可以如下表示包含与SEQ ID NO：54相同的肽序列的长效坎普他汀类似物，其中包含反应性官能团的部分含有酯和/或烷基链：
50和51的C末端处的NH2代表肽的C末端的酰胺化，且应该理解，在SEQ ID NO：52和53中，在N末端处的Ac代表肽的N末端的乙酰化，如上所述。本领域普通技术人员还理解，(CH2CH2O)n部分的游离末端通常用(OR)终止，其中带有下划线的O代表末端(CH2CH2O)基团中的O原子。(OR)经常是诸如羟基(OH)或甲氧基(-OCH3)基团等部分，尽管可以使用其它基团(例如，其它烷氧基)。因而，例如，在直链PEG的情况下，SEQ ID NO：49可以表示为Ac-Ile-Cys*-Val-(1Me)Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys*-Thr-NH-CH2CH2OCH2CH2OCH2-C(＝O)-Lys-(C(＝O)-(CH2CH2O)n-R)-NH2(SEQ ID NO：54)，其中R是例如H或CH3。在双功能的、支链或星形PEG的情况下，R代表分子的其它部分。此外，应该理解，包含反应性官能团的部分可以变化，如本文中所述(例如，根据本文中所述的任意通式)。例如，可以如下表示包含与SEQ ID NO：54相同的肽序列的长效坎普他汀类似物，其中包含反应性官能团的部分含有酯和/或烷基链：
[0311] Ac-Ile-Cys*-Val-(1Me)Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys*-Thr-NH-CH2CH2OCH2CH2OCH2-C(＝O)-Lys-(C(＝O)-(CH2)m-(CH2CH2O)n-R)-NH2(SEQ ID NO：55)；
[0312] Ac-Ile-Cys*-Val-(1Me)Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys*-Thr-NH-CH2CH2OCH2CH2OCH2-C(＝O)-Lys-(C(＝O)-(CH2)m-C(＝O)-(CH2CH2O)n-R)-NH2(SEQ ID NO：56)[0313] Ac-Ile-Cys*-Val-(1Me)Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys*-Thr-NH-CH2CH2OCH2CH2OCH2-C(＝O)-Lys-(C(＝O)-(CH2)m-C(＝O)-(CH2)j(CH2CH2O)n-R)-NH2(SEQ ID NO：57)
[0314] 在不同的实施方案中，在SEQ ID NO：55-57中，m的范围可以是1至约2、3、4、5、6、7、8、10、15、20或30。在不同的实施方案中，在SEQ ID NO：57中，j的范围可以是1至约
2、3、4、5、6、7、8、10、15、20或30。还应当理解，如本文中所述的，在不同的实施方案中，可以将其它部分掺入Lys-(C(＝O)-和(CH2CH2O)n-R之间，诸如酰胺、芳族环(例如，被取代的或未被取代的苯基)、或被取代的或未被取代的环烷基结构。
2、3、4、5、6、7、8、10、15、20或30。还应当理解，如本文中所述的，在不同的实施方案中，可以将其它部分掺入Lys-(C(＝O)-和(CH2CH2O)n-R之间，诸如酰胺、芳族环(例如，被取代的或未被取代的苯基)、或被取代的或未被取代的环烷基结构。
[0315] 在某些实施方案中，长效坎普他汀类似物包含SEQ ID NO：48-57的变体，其中-Ile-Cys*-Val-(1Me)Trp-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys*-Thr-被包含任意其它坎普他汀类似物的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO3-27或29-41中的任一个)的氨基酸序列替代，前提条件是，存在于坎普他汀类似物的N末端和/或C末端处的封端部分可以缺失，被接头(其可以包含封端部分)替代，或连接至存在于对应变体中的不同的N或C末端氨基酸。
[0316] 在不同的实施方案中，任意坎普他汀类似物(例如，包含SEQ ID NO：3-41中的任一个的任意化合物)可以经由它的N-端或C-端直接地或间接地连接至包含反应性官能团的任意部分，例如，式I-XVI中的任一种或化合物I-III。
[0317] 在某些实施方案中，CRM包含存在于人血清中的多肽或其片段、或所述多肽或其片段的基本上类似的变体。在某些实施方案中，所述多肽、片段或变体具有5kD至150kD的分子量，例如，至少5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100kd或更多，例如，100-120kD、或120kD和150kD。在某些实施方案中，生产长效坎普他汀类似物包括：使包含反应性官能团的坎普他汀类似物与多肽的一个或多个氨基酸侧链反应，其中所述侧链包含相容的官能团。在某些实施方案中，生产长效坎普他汀类似物包括：使包含反应性官能团的坎普他汀类似物与多肽的N末端胺和/或C末端羧基反应。在某些实施方案中，生产长效坎普他汀类似物包括：使包含胺-反应性官能团的坎普他汀类似物与具有含伯胺的侧链的氨基酸(例如，赖氨酸)和/或与多肽的N末端胺反应。在某些实施方案中，生产长效坎普他汀类似物包括：使包含羧基-反应性官能团的坎普他汀类似物与多肽的C末端羧基反应。在某些实施方案中，将坎普他汀类似物部分连接在多肽的每个末端处，且任选地，连接至一个或多个内部氨基酸的侧链。在某些实施方案中，生产长效坎普他汀类似物包括：使包含巯基-反应性官能团的坎普他汀类似物与多肽的一个或多个巯基反应。
[0318] 在某些实施方案中，将至少一个反应性官能团引入多肽中。例如，在某些实施方案中，在与坎普他汀类似物反应之前，修饰多肽的至少一个侧链，以将第一种反应性官能团转化成不同的反应性官能团。在某些实施方案中，引入硫醇。几种方法可用于将硫醇引入生物分子中，包括还原固有的二硫键、以及将胺、醛或羧酸基团转化成硫醇基团。蛋白中的胱氨酸的二硫键交联可以被二硫苏糖醇(DTT)、三-(2-羧基乙基)膦(TCEP)或三-(2-氰基乙基)膦还原为半胱氨酸残基。通过与3-(2-吡啶基二硫基)丙酸琥珀酰亚胺基酯(SPDP)反应，随后用DTT或TCEP还原3-(2-吡啶基二硫基)丙酰基缀合物，可以间接地使胺硫醇盐化。通过与乙酰基硫代乙酸琥珀酰亚胺基酯反应，随后用50mM羟胺或肼在接近中性pH除去乙酰基，可以间接地使胺硫醇盐化。通过与2-亚氨基四氢噻吩(硫杂环戊烷)反应，可以直接地使胺硫醇盐化，所述反应会保留分子的总电荷并引入游离的硫醇。可以将不含硫醇的蛋白中的色氨酸残基氧化成巯基色氨酸残基，后者然后可以用碘乙酰胺或马来酰亚胺进行修饰。包含一个或多个硫醇的多肽可以与包含马来酰亚胺基团的坎普他汀类似物诸如 Ac-Ile-Cys*-Val-Trp(1-Me)-Gln-Asp-Trp-Gly-Ala-His-Arg-Cys*-Thr-AEEAc-Lys-(C(＝O)-(CH2)5-Mal)-NH2(SEQ ID NO：58)反应，以产生长效坎普他汀类似物。
[0319] 在某些实施方案中，重组地生产多肽。在某些实施方案中，至少部分地重组生产多肽(例如，在细菌中，或在真核宿主细胞诸如真菌、昆虫、植物或脊椎动物中)，和/或至少部分地使用化学合成来生产多肽。在某些实施方案中，所述多肽是纯化的。在某些实施方案中，所述多肽是糖基化的。在某些实施方案中，所述多肽是未糖基化的。在某些实施方案中，所述多肽是人血清白蛋白(HSA)。在某些实施方案中，多肽的基本上类似的变体与所述变体的母本多肽充分类似，从而不会被受试者(例如，人受试者)的正常免疫系统识别为外来物。在某些实施方案中，选择基本上类似的变体的序列中相对于所述变体的母本多肽的改变，从而避免产生MHC I类表位。多种本领域已知的方法可以用于预测序列是否包含MHC I类表位。
[0320] 坎普他汀的结构是本领域已知的，并且许多具有比坎普他汀更高活性的坎普他汀类似物的NMR结构也是已知的(Malik，出处同上)。结构信息可以用于设计坎普他汀模拟物。在某些实施方案中，所述坎普他汀模拟物是这样的任意化合物：其与坎普他汀或任意坎普他汀类似物(例如其序列列于表2中的坎普他汀类似物)竞争结合C3或其片段(例如坎普他汀所结合的β链的40kD片段)。在某些实施方案中，所述坎普他汀模拟物具有等于或大于坎普他汀活性的活性。在某些实施方案中，所述坎普他汀模拟物与坎普他汀相比更稳定、更易于口服得到或具有更好的生物利用度。所述坎普他汀模拟物可以为肽、核酸、或小分子。在某些实施方案中，所述坎普他汀模拟物是与在坎普他汀-C3结构(例如晶体结构或得自NMR实验的3-D结构)中所确定的坎普他汀的结合位点结合的化合物。在某些实施方案中，所述坎普他汀模拟物是这样的化合物：其在坎普他汀-C3结构中可以置换坎普他汀，并且可以与C3形成与坎普他汀基本上相同的分子间接触。在某些实施方案中，所述坎普他汀模拟物是这样的化合物：其与肽-C3结构中具有表2所列序列(例如，SEQ ID NO：14、21、28、29、32、33、34或36或其它坎普他汀类似物序列，或在某些实施方案中，SEQ ID NO：30或
31)的肽的结合位点结合。在某些实施方案中，所述坎普他汀模拟物是这样的化合物：其可以置换肽-C3结构中具有表2所列序列(例如，SEQ ID NO：14、21、28、29、32、33、34或36或其它坎普他汀类似物序列，或在某些实施方案中，SEQ ID NO：30或31)的肽，并且可以与C3形成与所述肽基本上相同的分子间接触。在某些实施方案中，所述坎普他汀模拟物具有非肽主链，但具有以基于坎普他汀序列而设计的序列排列的侧链。
31)的肽的结合位点结合。在某些实施方案中，所述坎普他汀模拟物是这样的化合物：其可以置换肽-C3结构中具有表2所列序列(例如，SEQ ID NO：14、21、28、29、32、33、34或36或其它坎普他汀类似物序列，或在某些实施方案中，SEQ ID NO：30或31)的肽，并且可以与C3形成与所述肽基本上相同的分子间接触。在某些实施方案中，所述坎普他汀模拟物具有非肽主链，但具有以基于坎普他汀序列而设计的序列排列的侧链。
[0321] 本领域技术人员会明白，在确定短肽的特定所需构象后，设计肽或肽模拟物以配合所述构象的方法是众所周知的。参见，例如，G.R.Marshall(1993)，Tetrahedron，49：3547-3558；Hruby 和 Nikiforovich(1991)，Molecular Conformation and Biological Interactions，P.Balaram 和 S.Ramasehan， 编，Indian Acad.of Sci.，Bangalore，PP.429-455)，Eguchi M，Kahn M.，Mini Rev Med Chem.，2(5)：447-62，2002。与本发明特别相关的是，通过考虑氨基酸残基的各种侧链的贡献(例如对于官能团的作用或空间考虑)，可以进一步精化肽类似物的设计，如本领域关于坎普他汀及其类似物以及其它所述。
[0322] 本领域普通技术人员应当理解，就提供结合C3和抑制补体激活所需的特定主链构象和侧链官能团的目的而言，肽模拟物可以起与肽相同的作用。因此，本发明的范围涵盖，通过使用能连接形成合适主链构象的天然存在的氨基酸、氨基酸衍生物、类似物或非氨基酸分子来制备结合C3的、抑制补体的化合物，并利用所述化合物。非肽类似物或包含肽和非肽组分的类似物在本文中有时称为“肽模拟物”或“电子等排模拟物”，用于指具有大致相同的主链构象特征和/或其它官能团的肽的置换或衍生化，以致其与示例性说明的肽足够类似以抑制补体激活。更一般来说，坎普他汀模拟物是其中药效团的位置类似于它们在坎普他汀中的定位(即使主链不同)的任何化合物。
[0323] 肽模拟物用于开发高亲和力肽类似物的用途是本领域众所周知的。假定旋转约束与肽内的氨基酸残基的旋转约束类似，借助于拉马钱德兰图(Hruby和Nikiforovich1991)和其它已知技术，可以分析包含非氨基酸部分的类似物，并验证它们的构象基序。
[0324] 本领域普通技术人员将能够容易地确立合适的筛选测定，以鉴别额外坎普他汀模拟物并选择具有所需抑制活性的那些模拟物。例如，可以标记(例如，用放射性标记或荧光标记)坎普他汀或其类似物，并在不同浓度试验化合物存在下与C3接触。评价试验化合物的减少坎普他汀类似物与C3结合的能力。使坎普他汀类似物与C3的结合明显减少的试验化合物是候选坎普他汀模拟物。例如，使坎普他汀类似物-C3复合物的稳态浓度减少、或使坎普他汀类似物-C3复合物的形成速率降低至少25％或至少50％的试验化合物是候选坎普他汀模拟物。本领域普通技术人员将认识到，可以使用所述筛选测定的多种变化形式。欲筛选的化合物包括天然产物、适体文库、噬菌体展示文库、使用组合化学合成的化合物文库等。本发明包括：基于上述核心序列来合成化合物的组合文库，和筛选所述文库以鉴别坎普他汀模拟物。还可以使用这些方法中的任一种来鉴别新坎普他汀类似物，其具有比迄今所试验的坎普他汀类似物更高的抑制活性。
[0325] 抑制C3激活或活性的其它化合物
[0326] 在本发明的某些实施方案中使用结合C3或C3a受体(C3aR)的其它化合物，例如，多肽、小分子、单克隆抗体、适体等。在某些实施方案中，所述补体抑制剂包含得自金黄色葡萄球菌的Efb蛋白或其变体或衍生物或模拟物，它们可以结合C3并抑制它的激活和/或结合并抑制C3b。示例性的试剂描述在PCT申请公开WO/2004/094600中。在某些实施方案中，所述补体抑制剂包含得自金黄色葡萄球菌的葡萄球菌属补体抑制剂(SCIN)蛋白或这样的蛋白的变体或衍生物或模拟物，它们可以结合C3转化酶并抑制它的激活和/或结合并抑制C3b。使用诸如SELEX等方法，可以鉴别结合并抑制C3的适体。美国专利公开号20030191084公开了结合C1q、C3和C5的适体。
[0327] 在某些实施方案中，降解C3的蛋白酶可以用作补体抑制剂。例如，美国专利号6,676,943公开了得自肺炎链球菌的人补体C3降解蛋白。这样的蛋白或其变体可以用在本发明的某些实施方案中。
[0328] 美国专利号5,942,405、PCT/IB2006/002557(WO/2007/034277-ARYLSUBSTITUTED IMIDAZO[4，5-C]PYRIDINE COMPOUNDS AS C3ARECEPTOR ANTAGONISTS)、PCT/IB2006/002568(WO/2007/034282-DIARYL-IMIDAZOLE COMPOUNDS CONDENSED WITH AHETEROCYCLE AS C3A RECEPTOR ANTAGONISTS)、PCT/IB2006/002561(WO2007034278-FUSED IMIDAZOLE DERIVATIVES AS C3A RECEPIOR ANIAGONISIS)、PCT/US2007/026237(WO2008079371-MODULATORS OF C3ARECEPTOR AND METHODS OF USE THEREOF)公开了示例性的C3aR拮抗剂。在某些实施方案中，可以使用抑制C3或C3aR的表达的RNAi试剂。
[0329] 抑制因子B激活或活性的化合物
[0330] 在某些实施方案中，补体抑制剂会抑制因子B的激活或活性。例如，补体抑制剂可以结合因子B并例如抑制因子B的激活。抑制因子B的激活或活性的示例性试剂包括，例如，抗体、抗体片段、肽、小分子和适体。抑制因子B的示例性抗体描述在美国专利公开号20050260198。在某些实施方案中，抗体或抗原结合片段选择性地结合第三个短共有重复序列(SCR)结构域内的因子B。在某些实施方案中，所述抗体阻止C3bBb复合物的形成。在某些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段阻止或抑制因子D对因子B的裂解。在某些实施方案中，抗体结合因子B的Bb部分。PCT/US2008/074489(WO/2009/029669)公开了示例性抗体，例如，由保藏在ATCC登录号PTA-8543下的杂交瘤克隆产生的抗体。在某些实施方案中，使用所述抗体的人源化形式，其可以是抗体片段。在某些实施方案中，补体抑制剂(例如，抗体、小分子、适体、多肽或肽)结合与在美国专利公开号20050260198或WO/2009/029669中描述的抗体基本上相同的在因子B上的结合位点。在某些实施方案中，所述补体抑制剂包含被称作TA106的单克隆抗体片段(以前由Taligen Therapeutics开发)，或者使用这样的抗体、小分子、适体、多肽或肽：其结合与TA106基本上相同的在因子B上的结合位点。
在某些实施方案中，例如，使用诸如噬菌体展示等方法，鉴别结合和抑制因子B的肽。在某些实施方案中，补体抑制剂包含结合和抑制因子B的适体。在某些实施方案中，可以使用抑制因子B的表达的RNAi试剂。
在某些实施方案中，例如，使用诸如噬菌体展示等方法，鉴别结合和抑制因子B的肽。在某些实施方案中，补体抑制剂包含结合和抑制因子B的适体。在某些实施方案中，可以使用抑制因子B的表达的RNAi试剂。
[0331] 抑制因子D活性的化合物
[0332] 在某些实施方案中，所述补体抑制剂会抑制因子D。例如，所述补体抑制剂可以结合因子D。示例性的试剂包括抗体、抗体片段、肽、小分子和适体。在美国专利号7,112,327中描述了抑制因子D的示例性抗体。在某些实施方案中，所述补体抑制剂是这样的抗体、小分子、适体或多肽：其结合与在美国专利号7,112,327中描述的抗体基本上相同的在因子D上的结合位点。FCFD4514S(以前由Tanox开发为TNX-234)是一种结合因子D的人源化的单克隆抗体片段。在某些实施方案中，所述补体抑制剂包含FCFD4514S或结合与FCFD4514S基本上相同的在因子D上的结合位点的抗体、小分子、适体或多肽。在美国公开号20040038869中公开了抑制旁路途径激活且被认为会抑制因子D的示例性多肽。结合并抑制因子D的肽(其可以使用诸如噬菌体展示等方法鉴别)的应用是在本发明范围内。结合并抑制因子D的适体(其可以使用诸如SELEX等方法鉴别)的应用是在本发明范围内。在某些实施方案中，可以使用抑制因子D的表达的RNAi试剂。
[0333] 哺乳动物补体调节蛋白和补体受体
[0334] 在某些实施方案中，所述补体抑制剂包含哺乳动物(例如，人)补体调节蛋白或补体受体的至少一部分。补体调节蛋白的例子包括，例如，CFH、CFH相关蛋白(诸如CFHR1)、CFI、CR1、DAF、MCP、CD59、C4bp和补体受体2抑制剂三跨(trispanning)(CRIT；Inal，J.，等人，J Immunol.，174(1)：356-66，2005)。在某些实施方案中，所述补体调节多肽是在它的天然存在状态时通常膜结合的多肽。在本发明的某些实施方案中，使用这样的多肽的片段，其缺少一些或全部跨膜和/或细胞内结构域。例如，在某些实施方案中使用补体受体1的可溶形式(sCR1)或其它补体受体的可溶部分。例如，可以使用被称作TP10或TP20(Avant Therapeutics)的化合物。在某些实施方案中，使用可溶性的补体调控蛋白，例如，CFH或CFH相关蛋白。在某些实施方案中，所述补体抑制剂是C3b/C4b补体受体-样分子，诸如在美国专利公开号20020192758中描述的那些。在某些实施方案中，可以使用哺乳动物补体调节蛋白或受体的保留补体抑制活性的变体和片段。
[0335] 嵌合的补体抑制剂
[0336] 在本发明的某些实施方案中，所述补体抑制剂包含嵌合多肽，所述嵌合多肽包含与第二多肽连接(例如，共价连接)的第一多肽，所述第一多肽抑制补体激活，所述第二多肽抑制补体激活和/或结合补体组分或补体激活产物。在某些实施方案中，所述多肽中的至少一种包含哺乳动物补体调节蛋白的至少一部分。所述嵌合多肽可以含有一个或多个额外结构域，所述额外结构域位于例如第一多肽和第二多肽之间或位于末端。例如，所述第一多肽和第二多肽可以被隔离物多肽隔开。
[0337] 在某些实施方案中，所述第一多肽和第二多肽各自包含哺乳动物补体调节蛋白的至少一部分。在某些实施方案中，补体抑制剂包含DAF的至少一部分和MCP的至少一部分。示例性的嵌合多肽公开在例如美国专利号5,679,546中，例如，CAB-2(也被称作MLN-2222)。在某些实施方案中，所述多肽包含至少一种哺乳动物补体调节蛋白或补体受体的至少4个SCR结构域。在某些实施方案中，所述多肽包含第一种和第二种不同哺乳动物补体调节蛋白各自的至少4个SCR结构域。
[0338] 在某些实施方案中，嵌合多肽包含补体受体1(CR1)、补体受体2(CR2)、补体受体3(CR3)、补体受体4(CR4)的至少一部分，或CR1、CR2、CR3或CR4的变体或片段，其结合一种或多种补体组分或补体激活产物诸如C3b、iC3b、C3d和/或C3dg。在某些实施方案中，所述多肽包含至少4个SCR，例如，CR1或CR2的至少4个SCR。例如，所述多肽可以包含CR2的4个N-端SCR(例如，成熟蛋白的残基1-250)。在某些实施方案中，所述嵌合多肽包含哺乳动物补体调节蛋白的至少4个SCR结构域和哺乳动物补体受体的至少4个SCR结构域。
[0339] 抑制备解素的化合物
[0340] 在本发明的某些实施方案中，使用抗备解素抗体、抗体片段或其它抗备解素试剂。参见，例如，美国专利公开号20030198636或PCT/US2008/068530(WO/2009/110918-抗-备解素抗体)。
[0341] 抑制凝集素途径的组分的化合物
[0342] 在某些实施方案中，所述化合物抑制凝集素途径的一种或多种组分。参见，例如，WO/2007/117996-METHODS FOR TREATING CONDITIONS ASSOCIATED WITH MASP-2DEPENDENT COMPLEMENT ACTIVATION。
[0343] 抑制C5激活或活性的化合物
[0344] 在某些实施方案中，所述补体抑制剂会抑制C5的激活。例如，所述补体抑制剂可以结合C5并抑制它的裂解。在某些实施方案中，所述补体抑制剂会抑制C5与C5转化酶的物理相互作用，例如，通过在通常参与这样的物理相互作用的位置处结合C5或C5转化酶或结合C5。抑制C5激活的示例性试剂包括抗体、抗体片段、多肽、小分子和适体。结合C5的示例性化合物(例如，抗体)描述在：例如，美国专利号6,534,058；PCT/US95/05688(WO1995/029697)、PCT/EP2010/007197(WO2011063980)；美国专利公 开号20050090448；和美国专利公开号20060115476。美国专利公开号20060105980公开了结合并抑制C5的适体。在某些实施方案中，人源化的抗-C5单克隆抗体，例如，依库珠单抗(也被称作h5G1.1-mAb； )(Alexion)，或其片段或衍生物，结合C5。在某些实施方案中，使用这样的抗体：其包含至少一些与依库珠单抗的重链和/或轻链互补性决定区相同的互补性决定区(CDR1、CDR2和/或CDR3)，例如，所有的CDR1、CDR2和CDR3。在某些实施方案中，所述抗体包含至少一些与依库珠单抗相同的框架区。在某些实施方案中，使用这样的抗体：其结合与依库珠单抗基本上相同的在C5上的结合位点。在某些实施方案中，使用培克珠单抗(也被称作h5G1.1-scFv)、源自h5G1.1-mAb的人源化的、重组的、单链的抗体。
在某些实施方案中，所述补体抑制剂包含得自金黄色葡萄球菌的葡萄球菌属SSL7蛋白或这样的蛋白的可以结合C5并抑制它的裂解的变体或衍生物或模拟物。
在某些实施方案中，所述补体抑制剂包含得自金黄色葡萄球菌的葡萄球菌属SSL7蛋白或这样的蛋白的可以结合C5并抑制它的裂解的变体或衍生物或模拟物。
[0345] 如上面所指出的，可以使用双特异性的或多特异性的抗体。例如，PCT/US2010/039448(WO/2010/151526)公开了被描述为结合2种或更多种不同蛋白的双特异性抗体，其中至少2种蛋白选自C5a、C5b、C5a的细胞受体(例如，C5aR1或C5L2)、C5b-9复合物以及诸如C5b-6、C5b-7或C5b-8等终末补体的组分或中间体。在某些实施方案中，可以使用抑制C5或C5aR的表达的RNAi试剂。
[0346] 在某些实施方案中，使用被称作OmCI的补体抑制剂或其变体、衍生物或模拟物。OmCI会结合C5并抑制它的激活，最可能是通过抑制与转化酶的相互作用。OmCI由蜱非洲钝缘蜱(Ornithodoros moubata)天然地产生。关于OmCI及其某些变体的描述，参见，例如，PCT/GB2004/002341(WO/2004/106369)和PCT/GB2010/000213(WO/2010/100396)。已经证实，OmCI会结合类花生酸类，尤其是白三烯(LK)，例如，LTB4。在某些实施方案中，使用保留结合LK(例如，LTB4)的能力的OmCI多肽(或其变体、衍生物或片段)。在某些实施方案中，使用具有降低的结合LK(例如，LTB4)的能力或大幅降低的该能力的OmCI多肽(或其变体、衍生物或片段)。
[0347] 在某些实施方案中，所述试剂是C5a受体(C5aR)的拮抗剂。在某些实施方案中，所述C5aR拮抗剂包含肽。示例性的C5a受体拮抗剂包括多种小环状或无环肽，诸如在下述文献中描述的那些：March，D R，等人，Mol.Pharmacol.，65(4)，2004，和Woodruff，T M，等人，J Pharmacol Exp Ther.，314(2)：811-7，2005，美国专利号6,821,950；USSN11/375,587；和/或PCT/US06/08960(WO2006/099330)，或其模拟物。在某些实施方案中，所述补体抑制剂会结合C5aR并抑制C5a与其结合。在某些实施方案中，使用包含序列[OPdChaWR](SEQ ID NO：59)的环状肽。在某些实施方案中，使用包含序列[KPdChaWR](SEQ ID NO：60)的环状肽。
在某些实施方案中，使用包含序列(Xaa)n[OPdChaWR](SEQ ID NO：61)的肽，其中Xaa是氨基酸残基，且n是在1-5之间。在某些实施方案中，使用包含序列(Xaa)n[KPdChaWR](SEQ ID NO：62)的肽，其中Xaa是氨基酸残基，且n是在1-5之间。在某些实施方案中，n是1。在某些实施方案中，n是1，且Xaa是标准的或非标准的芳族氨基酸。例如，在某些实施方案中，使用肽F-[OPdChaWR](SEQ ID NO：63)、F-[KPdChaWR](SEQ ID NO：64)、Cin-[OPdChaWR](SEQ ID NO：65)和HCin-[OPdChaWR](SEQ ID NO：66)。任选地，将包含封端部分(例如，末端氨基酸)的游离末端乙酰化。例如，在某些实施方案中，所述C5aR拮抗剂是AcF-[OPdChaWR](SEQ IDNO：67)(也被称作PMX-53)。(缩写：O：鸟氨酸；Cha：环己基丙氨酸；Cin：肉桂酰基；Hcin：氢化肉桂酰基；方括号表示内部肽键)。在某些实施方案中，C5aR拮抗剂包含在美国专利公开号20060183883(USSN10/564788)中公开的化合物，例如，肽，例如，由其中的式I、式II、式IV、式V或式VI表示的化合物。一种示例性的C5aR拮抗剂is the肽known as JPE-1375(Jerini AG，德国)。
在某些实施方案中，使用包含序列(Xaa)n[OPdChaWR](SEQ ID NO：61)的肽，其中Xaa是氨基酸残基，且n是在1-5之间。在某些实施方案中，使用包含序列(Xaa)n[KPdChaWR](SEQ ID NO：62)的肽，其中Xaa是氨基酸残基，且n是在1-5之间。在某些实施方案中，n是1。在某些实施方案中，n是1，且Xaa是标准的或非标准的芳族氨基酸。例如，在某些实施方案中，使用肽F-[OPdChaWR](SEQ ID NO：63)、F-[KPdChaWR](SEQ ID NO：64)、Cin-[OPdChaWR](SEQ ID NO：65)和HCin-[OPdChaWR](SEQ ID NO：66)。任选地，将包含封端部分(例如，末端氨基酸)的游离末端乙酰化。例如，在某些实施方案中，所述C5aR拮抗剂是AcF-[OPdChaWR](SEQ IDNO：67)(也被称作PMX-53)。(缩写：O：鸟氨酸；Cha：环己基丙氨酸；Cin：肉桂酰基；Hcin：氢化肉桂酰基；方括号表示内部肽键)。在某些实施方案中，C5aR拮抗剂包含在美国专利公开号20060183883(USSN10/564788)中公开的化合物，例如，肽，例如，由其中的式I、式II、式IV、式V或式VI表示的化合物。一种示例性的C5aR拮抗剂is the肽known as JPE-1375(Jerini AG，德国)。
[0348] 在某些实施方案中，C5aR拮抗剂是小分子。多种小分子C5aR拮抗剂在下述参考文献中有所公开：PCT/US2005/015897(WO/2005/110416；4，5-二取代的-2-芳基嘧啶S)；PCT/EP2006/005141(WO2006128670)；PCT/US2008/072902(WO/2009/023669；取代的5，6，
7，8-四氢喹啉衍生物)；PCT/US2009/068941(WO/2010/075257；C5AR拮抗剂)。一种示例性的小分子C5aR拮抗剂是CCX168(ChemoCentryx，Mountain View，CA)。
7，8-四氢喹啉衍生物)；PCT/US2009/068941(WO/2010/075257；C5AR拮抗剂)。一种示例性的小分子C5aR拮抗剂是CCX168(ChemoCentryx，Mountain View，CA)。
[0349] 在某些实施方案中，所述补体抑制剂是这样的试剂，例如，抗体、小分子、适体或多肽：其结合与在任一篇前述参考文献(其公开了结合C5或C5aR的试剂)中描述的化合物基本上相同的在C5或C5aR上的结合位点。在某些实施方案中，所述补体抑制剂不是C5a受体的拮抗剂。
[0350] 多模态补体抑制剂
[0351] 在本发明的某些实施方案中，所述补体抑制剂会结合超过一种补体蛋白和/或抑制补体激活途径中的超过一个步骤。这样的补体抑制剂在本文中被称作“多模态”。在本发明的某些实施方案中，所述补体抑制剂包含病毒补体调控蛋白(VCCP)。本发明预见到在U.S.S.N.11/247,886和PCT/US2005/36547中描述的任意试剂的应用。痘病毒和疱疹病毒是具有线性双链DNA基因组的大复杂病毒家族。这些病毒中的某些编码免疫调节蛋白，认为所述免疫调节蛋白通过破坏正常免疫应答的一个或多个方面和/或帮助更有利环境在宿主生物体中的发展而在发病机制中起作用(Kotwal，GJ，Immunology Today，21(5)，242-248，2000)。这些包括VCCP。痘病毒补体调控蛋白是补体调控蛋白(CCP)超家族的成员，并且通常含有4个SCR模块。在某些实施方案中，所述VCCP是痘病毒补体调控蛋白(PVCCP)。所述PVCCP可以包含由例如痘苗病毒、重型天花病毒、轻型天花病毒、牛痘病毒、猴痘病毒、鼠痘病毒、兔痘病毒、粘液瘤病毒、Yaba-样疾病病毒或猪痘病毒编码的序列。在其它实施方案中，所述VCCP是疱疹病毒补体调控蛋白(HVCCP)。所述HVCCP可以包含由日本猕猴(Macaca fuscata)棒状病毒、猕猴疱疹病毒17或人疱疹病毒8编码的序列。在其它实施方案中，所述HVCCP包含由单纯疱疹病毒saimiri ORF4或ORF15编码的序列(Albrecht，JC.&Fleckenstein，B.，J.Virol.，66，3937-3940，1992；Albrecht，J.，等人，Virology，190，
527-530，1992)。
527-530，1992)。
[0352] 所述VCCP可以抑制经典补体途径、旁路补体途径、凝集素途径或这些中的任意2种或多种。在本发明的某些实施方案中，所述VCCP(例如，PVCCP)结合C3b、C4b或二者。在本发明的某些实施方案中，所述PVCCP包含一个或多个假定的肝素结合位点(K/R-X-K/R)和/或具有总正电荷。在某些实施方案中，所述PVCCP包含至少3个SCR模块(例如，模块1-3)，例如，4个SCR模块。所述PVCCP蛋白可以是成熟的PVCCP的前体(即，可以包括信号序列，当所述蛋白在病毒感染的细胞中表达时，所述信号序列通常被切掉)，或者可以是成熟形式(即，缺少信号序列)。
[0353] 牛痘补体调控蛋白(VCP)是一种从牛痘感染的细胞分泌出的、病毒编码的蛋白。VCP具有244个氨基酸的长度，含有4个SCR，且通过263个氨基酸前体的细胞内裂解而天然地产生。VCP在还原条件下在12％SDS/聚丙烯酰胺凝胶中作为约35kD蛋白泳动，且具有约
28.6kD的预测分子质量。VCP描述在：美国专利号5,157,110和6,140,472，和Kotwal，GK，等人，Nature，355，176-178，1988。USSN11/247,886和PCT/US2005/36547(WO2006042252)的图3A和3B分别显示了前体和成熟的VCP蛋白的序列。已经证实，通过它的结合C3和C4并充当因子I介导的这些组分的裂解的辅因子以及促进既存转化酶的衰变的能力，VCP会抑制补体激活的经典途径(Kotwal，GK，等人，Science，250，827-830，1990；McKenzie等人，J.Infect.Dis.，1566，1245-1250，1992)。还已经证实如下抑制旁路途径：造成C3b裂解为iC3b，并由此阻止旁路途径C3转化酶的形成(Sahu，A，等人，J.Immunol.，160，5596-5604，
1998)。VCP因而在多个步骤处阻断补体激活，并降低促炎趋化因子C3a、C4a和C5a的水平。
28.6kD的预测分子质量。VCP描述在：美国专利号5,157,110和6,140,472，和Kotwal，GK，等人，Nature，355，176-178，1988。USSN11/247,886和PCT/US2005/36547(WO2006042252)的图3A和3B分别显示了前体和成熟的VCP蛋白的序列。已经证实，通过它的结合C3和C4并充当因子I介导的这些组分的裂解的辅因子以及促进既存转化酶的衰变的能力，VCP会抑制补体激活的经典途径(Kotwal，GK，等人，Science，250，827-830，1990；McKenzie等人，J.Infect.Dis.，1566，1245-1250，1992)。还已经证实如下抑制旁路途径：造成C3b裂解为iC3b，并由此阻止旁路途径C3转化酶的形成(Sahu，A，等人，J.Immunol.，160，5596-5604，
1998)。VCP因而在多个步骤处阻断补体激活，并降低促炎趋化因子C3a、C4a和C5a的水平。
[0354] 除了结合硫酸类肝素蛋白聚糖以外，VCP还具有强烈结合肝素的能力。VCP含有2个位于模块1和4中的假定肝素结合位点(Jha，P和Kotwal，GJ，和其中的参考文献)。VCP能够结合内皮细胞的表面，可能是经由在细胞表面处与肝素和/或硫酸类肝素的相互作用，从而导致减少的抗体结合(Smith，SA，等人，J.Virol.，74(12)，5659-5666，2000)。VCP可以被肥大细胞吸收，且可能在组织中持续延长的时间段，由此潜在地延长它的活性(Kotwal，thGJ，等人，In GP.Talwat，等人(编)，10 International Congress of Immunology.，Monduzzi Editore，Bologna，Italy，1998)。另外，VCP可以通过阻断趋化因子结合来减少白细胞的趋化性迁移(Reynolds，D，等人，S.Jameel和L.Villareal(ed.，Advances in animal virology.Oxford and IBN Publishing，New Delhi，India，1999)。与哺乳动物CCP相比，VCP和其它PVCCP具有相对较小的尺寸，这对于在本发明中的递送而言是有利的。
[0355] 重型天花病毒和轻型天花病毒编码与VCP高度同源的蛋白，且被称作补体酶的天花抑制剂(SPICE)(Rosengard，AM，等人，Proc.Natl.Acad.Sci.，99(13)，8803-8813.美国专利号6,551,595)。迄今为止测序的得自不同天花株的SPICE与VCP相差约5％(例如，约11个氨基酸差异)。类似于VCP，SPICE结合C3b和C4b并造成它们的降解，从而充当因子I的辅因子。但是，SPICE降解C3b的速度是VCP的大约100倍，且降解C4b的速度是VCP的大约6倍。SPICE的氨基酸序列显示在USSN11/247,886和
PCT/US2005/36547(WO2006042252)的图6(SEQ ID NO：12)中，且可以如下描述。参考USSN11/247,886和PCT/US2005/36547(WO2006042252)的图6，信号序列从氨基酸1延伸至大约氨基酸19。4个SCR从大约氨基酸20延伸至氨基酸263。每个SCR的特征在于4个半胱氨酸残基。所述4个半胱氨酸残基在表达的蛋白中形成2个二硫键。每个SCR的边界由形成SCR的二硫键的序列中的第一个和第四个半胱氨酸残基最佳地定义。一个不变的色氨酸残基存在于每个SCR的半胱氨酸3和半胱氨酸4之间。SCR1从氨基酸20或21延伸至氨基酸81。两个残基都是可能参与二硫键合的半胱氨酸。SCR2从氨基酸86延伸至氨基酸
143。SCR3从氨基酸148延伸至氨基酸201。SCR4从氨基酸206延伸至氨基酸261。所述SCR包括SPICE的补体结合位置。在本发明中可以使用SPICE或其抑制补体激活的任意部分，例如，SPICE和含有4个SCR的SPICE相关多肽，诸如在美国专利号6,551,595中描述的那些。
PCT/US2005/36547(WO2006042252)的图6(SEQ ID NO：12)中，且可以如下描述。参考USSN11/247,886和PCT/US2005/36547(WO2006042252)的图6，信号序列从氨基酸1延伸至大约氨基酸19。4个SCR从大约氨基酸20延伸至氨基酸263。每个SCR的特征在于4个半胱氨酸残基。所述4个半胱氨酸残基在表达的蛋白中形成2个二硫键。每个SCR的边界由形成SCR的二硫键的序列中的第一个和第四个半胱氨酸残基最佳地定义。一个不变的色氨酸残基存在于每个SCR的半胱氨酸3和半胱氨酸4之间。SCR1从氨基酸20或21延伸至氨基酸81。两个残基都是可能参与二硫键合的半胱氨酸。SCR2从氨基酸86延伸至氨基酸
143。SCR3从氨基酸148延伸至氨基酸201。SCR4从氨基酸206延伸至氨基酸261。所述SCR包括SPICE的补体结合位置。在本发明中可以使用SPICE或其抑制补体激活的任意部分，例如，SPICE和含有4个SCR的SPICE相关多肽，诸如在美国专利号6,551,595中描述的那些。
[0356] 已经对得自牛痘病毒(被称作炎症调节蛋白，IMP)和猴痘病毒(在本文中被称作猴痘病毒补体调控蛋白，MCP)的补体调控蛋白进行了鉴别和测序(Miller，CG，等人，Virology，229，126-133，1997，和Uvarova，EA和Shchelkunov，SN，Virus Res.，81(1-2)，39-45，2001)。MCP与本文描述的其它PVCCP的差别在于，它含有第四个SCR的C-端部分的截短。
[0357] 应当理解，在不同病毒分离物中鉴别出的补体调控蛋白的确切序列可能稍微不同。这样的蛋白落入本发明范围内。可以使用得自任意这样的分离物的补体调控蛋白，前提条件是，所述蛋白尚未经历基本上消除它的活性的突变。因而，VCCP(诸如SPICE或VCP)的序列可能不同于在本文中或在表3所列的登录号下呈现的确切序列。还应当理解，可以在诸如VCCP等典型多肽中做出许多氨基酸改变，例如，添加、缺失或置换，诸如保守氨基酸置换，而不显著影响它的活性，使得得到的蛋白被认为与原始多肽相当。通过下面表3的登录号鉴别出的病毒多肽可以用在本发明的不同实施方案中。
[0358] 表3：代表性的病毒补体调控蛋白
[0359]
[0360] 除了上述的VCCP以外，存在许多感染补体途径中的一个或多个步骤的其它病毒蛋白。这些蛋白也可用在本发明的某些实施方案中。这些蛋白中的某些不一定表现出与迄今为止已知的细胞补体调节剂的明显同源性。例如，HSV-1、HSV-2、VZV、PRV、BHV-1、EHV-1和EHV-4都编码被称作gC的保守糖蛋白的形式(Schreurs，等人，J Virol.，62，2251-2257，1988；Mettenleiter，等 人，J.Virol.，64，278-286；1990；Herold，等 人，J Virol.，65，
1090-1098；1991)。除了VZV以外，由这些病毒编码的gC蛋白会结合C3b(Friedman，等人，Nature，309，633-634，1984；Huemer，等人，Virus Res.，23，271-280，1993)，gC1(得自HSV-1)会加速经典途径C3转化酶的衰变和抑制备解素和C5与C3的结合。纯化的EBV病毒粒子具有这样的活性：加速旁路途径C3转化酶的衰变，并充当补体调节蛋白因子1的辅因子(Mold等人，JExp Med，168，949-969，1988)。前述蛋白被共同地称作病毒补体干扰蛋白(VCIP)。通过多种方式(诸如干扰补体激活的一个或多个步骤、加速补体组分的衰变、和/或增强补体调节蛋白的活性)中的任一种，据称这些VCIP会抑制补体。这些蛋白中的任一种或其衍生物(例如，其片段或变体)可以用作本发明中的治疗剂。如在VCCP的情况下，应当理解，在不同病毒分离物中鉴别出的VCIP的确切序列可能稍微不同。这样的蛋白落入本发明范围内。
1090-1098；1991)。除了VZV以外，由这些病毒编码的gC蛋白会结合C3b(Friedman，等人，Nature，309，633-634，1984；Huemer，等人，Virus Res.，23，271-280，1993)，gC1(得自HSV-1)会加速经典途径C3转化酶的衰变和抑制备解素和C5与C3的结合。纯化的EBV病毒粒子具有这样的活性：加速旁路途径C3转化酶的衰变，并充当补体调节蛋白因子1的辅因子(Mold等人，JExp Med，168，949-969，1988)。前述蛋白被共同地称作病毒补体干扰蛋白(VCIP)。通过多种方式(诸如干扰补体激活的一个或多个步骤、加速补体组分的衰变、和/或增强补体调节蛋白的活性)中的任一种，据称这些VCIP会抑制补体。这些蛋白中的任一种或其衍生物(例如，其片段或变体)可以用作本发明中的治疗剂。如在VCCP的情况下，应当理解，在不同病毒分离物中鉴别出的VCIP的确切序列可能稍微不同。这样的蛋白落入本发明范围内。
[0361] 在本发明的某些实施方案中，将VCCP或VCIP的片段或变体局部地施用给受试者。PVCCP的优选片段和变体具有下述活性中的至少一种：(i)结合C3、C3b或二者的能力；(ii)充当C3的因子I裂解的辅因子的能力；(iii)结合C4、C4b或二者的能力；(iv)充当C4的因子I裂解的辅因子的能力；(v)加速经典途径、旁路途径或二者的既存C3转化酶的衰变的能力；(vi)结合肝素的能力；(vii)结合硫酸类肝素蛋白聚糖的能力；(viii)减少白细胞的趋化性迁移的能力；(ix)阻断趋化因子(例如，MIP-1α)结合例如细胞表面(例如，白细胞或内皮细胞表面)的能力；(x)抑制抗体结合I类MHC分子的能力；(xi)抑制经典补体途径的能力；(xii)抑制旁路补体途径的能力；和(xiii)抑制补体介导的细胞裂解的能力。优选的PVCCP片段和变体表现出补体结合活性，这是指可检测地结合一种或多种补体组分的能力，所述补体组分优选地(在VCCP的情况下)选自C3、C3b、C4和C4b。优选的HVCCP片段或变体也表现出可检测地结合一种或多种补体组分的能力。优选地，VCCP与补体组分的结合是特异性的。应该理解，VCCP可以能够结合仅单一补体组分，或可以能够结合超过一种不同的补体组分。
[0362] 在本发明的某些实施方案中，所述PVCCP片段或变体包含至少3个SCR模块(例如，模块1-3)，优选4个SCR模块。优选地，每个SCR模块表现出与在天然存在的PVCCP(例如，VCP或SPICE)中发现的SCR模块的显著序列同一性。优选地，所述多个SCR模块以N至C方式排列，从而使与天然存在的PVCCP的总同一性最大化。如果PVCCP片段或变体的序列在一个或多个位置处含有不同于SCR共有序列的SCR结构域，在本发明的某些实施方案中，在所述一个或多个不同位置处的氨基酸与在天然存在的PVCCP中发现的最密切相关的SCR中的对应位置处的氨基酸相同。在某些实施方案中，所述PVCCP变体包含至少一个得自第一PVCPP的SCR模块和至少一个得自第二PVCPP的SCR模块。在某些实施方案中，所述PVCCP变体包含至少一个得自PVCCP的SCR模块和至少一个得自哺乳动物补体调控蛋白(RCA蛋白)的SCR。在本发明的不同的实施方案中，任意数目的(例如，1、2、3、4个或更多个)SCR模块可以得自任何特定PVCCP或RCA蛋白。即使在本文中没有明确地阐明，预见到所有这样的组合和排列。
[0363] 一般而言，天然存在的VCCP或VCIP的片段或变体与它的天然存在的相应物具有足够的结构相似性，使得它会被识别天然存在的相应物的多克隆抗体识别。在本发明的某些实施方案中，VCCP的片段或变体与VCP或SPICE具有足够的结构相似性，使得当将它的3维结构(实际的或预测的结构)叠加在VCP或SPICE的结构上时，重叠体积为VCP结构的总体积的至少70％、优选至少80％、更优选至少90％。通过如关于VCP所述使蛋白结晶，可以确定片段或变体的部分或完全3维结构(Murthy，2001)。可替代地，如关于不同的VCP片段所执行的(Wiles，AP，等人，J.Mol.Biol.272，253-265，1997)，可以产生NMR溶液结构。可以使用模型化程序诸如MODELER(Sali，A.和Blundell，TL，J.Mol.Biol.，234，779-815，1993)或任意其它模型化程序来产生预测的结构。所述模型可以基于VCP结构和/或任意已知的SCR结构。可以使用PROSPECT-PSPP程序包(Guo，JT，等人，NucleicAcids Res.32(万维网服务器版本)：W522-5，2004年7月1日)。可以使用类似的方法来产生SPICE的结构。
[0364] 通过任何可利用的方式，可以产生VCCP或VCIP的片段或变体，所述方式中的大部分是本领域已知的。例如，使用如下所述的重组DNA技术，可以生产VCCP、VCIP和它们的片段或变体。可以如下得到VCCP或VCIP片段：化学合成，使用从克隆的VCCP或VCIP序列开始的PCR扩增来生产，通过限制酶切消化来制备，等。通过VCCP序列的随机诱变(例如，使用X-射线、化学试剂或基于PCR的诱变)、定位诱变(例如，使用PCR或寡核苷酸-指导的诱变)等，可以制备VCCP变体的序列。可以改变或添加选择的氨基酸。
[0365] 尽管不希望受任何理论约束，天然存在的PVCCP之间的氨基酸差异可能发生在这样的位置：其与赋予特定性能(诸如结合肝素的能力、活性水平等)的差异有关。例如，VCP和SPICE的差别仅在于11个氨基酸，但是SPICE作为C3b的裂解的辅因子具有高得多的活性(例如，使用SPICE时的裂解速率比使用VCP时快得多)。氨基酸差异可能引起2种蛋白的差别活性。在这些位置处的氨基酸是有吸引力的改变候选物以鉴别具有甚至更大活性的变体。
[0366] 其它补体抑制剂
[0367] 在某些实施方案中，补体抑制剂是天然存在的哺乳动物补体调节蛋白或其片段或衍生物。例如，补体调节蛋白可以是CR1、DAF、MCP、CFH或CFI。在本发明的某些实施方案中，所述补体调节多肽是在它的天然存在状态时通常膜结合的多肽。在本发明的某些实施方案中，使用这样的多肽的片段，其缺少一些或全部跨膜和/或细胞内结构域。例如，在本发明中使用补体受体1的可溶形式(sCR1)。例如，可以使用被称作TP10或TP20(Avant Therapeutics)的化合物。也使用C1抑制剂(C1-INH)。在某些实施方案中，使用可溶性的补体调控蛋白，例如，CFH。在本发明的某些实施方案中，修饰所述多肽以增加它的可溶性。
[0368] 在某些实施方案中，补体抑制剂是C1s抑制剂。例如，美国专利号6,515,002描述了抑制C1s的化合物(呋喃基和噻吩基脒、杂环脒和胍)。美国专利号6,515,002和7,138,530描述了抑制C1s的杂环脒。美国专利号7,049,282描述了抑制经典途径激活的肽。某些肽包含WESNGQPENN(SEQID NO：68)或KTISKAKGQPREPQVYT(SEQ ID NO：69)或与其具有显著的序列同一性和/或三维结构相似性的肽，或者由它们组成。在某些实施方案中，这些肽与IgG或IgM分子的一部分相同或基本上相同。美国专利号7,041,796公开了C3b/C4b补体受体-样分子及其用于抑制补体激活的用途。美国专利号6,998,468公开了补体激活的抗-C2/C2a抑制剂。美国专利号6,676,943公开了得自肺炎链球菌的人补体C3-降解蛋白。
[0369] V.抗-Th17试剂
[0370] 抗-Th17试剂是抑制Th17细胞的形成、存活和/或活性或者抑制Th17细胞效应分子(诸如IL-17)的产生或生物活性的任意试剂。在某些实施方案中，抗-Th17试剂会抑制Th17细胞的发育、增殖、存活和/或成熟。在某些实施方案中，抗-Th17试剂会抑制IL-6、IL-21、IL-23和/或IL-1β的产生和/或生物活性。在某些实施方案中，抗-Th17试剂会抑制Th17效应细胞因子(例如，IL-17A、IL-17F、IL-21和/或IL-22)的产生和/或活性。示例性的抗-Th17试剂包括，例如，结合Th17-相关的细胞因子的试剂，或这样的试剂：其结合Th17-相关的细胞因子的受体，并例如阻断所述受体与内源细胞因子的相互作用，但是其本身不会显著激活所述受体。示例性的抗-Th17试剂包括，例如，抗体、适体、可溶性的受体片段(例如，有关的细胞因子受体的可溶性细胞外结构域)或其它多肽、肽、小分子等。在某些实施方案中，抗-Th17试剂包含基本上没有激活补体的能力的抗体。例如，与全长人IgG1相比，所述抗体可以具有小于10％、小于5％或小于1％的补体刺激活性。在某些实施方案中，所述抗体包含这样的CH2结构域：与人IgG1CH2结构域相比，其具有降低的结合C1q的能力。在某些实施方案中，所述抗体含有得自人IgG4的CH1、CH2和/或CH3结构域，和/或不含有得自人IgG1的CH1、CH2和/或CH3结构域。
[0371] 在某些实施方案中，抗-Th17试剂具有1kD或更低的分子量。在某些实施方案中，抗-Th17试剂具有1kD至2kD、2kD至5kD、5kD至10kD、10kD至20kD、20kD至30kD、30kD至50kD、50kD至100kD或100kD至200kD的分子量。
[0372] 在某些实施方案中，抗-Th17试剂包含包含adnectin、亲和体(affibody)、anticalin或有时在本领域中用于替代抗体的其它类型的多肽，其中所述多肽结合Th17-相关的细胞因子或细胞因子受体。
[0373] 多种抗-Th17试剂(例如、抑制一种或多种Th17-相关的细胞因子的试剂)是本领域已知的，且可以用在不同的实施方案中。
[0374] 本文中的目标多肽(例如，Th17-相关的细胞因子和它们的受体)的序列是本领域众所周知的，且可在公开数据库中得到，诸如可通过国家生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information，www.ncbi.nih.gov)的Entrez或通用蛋白资源(Universal Protein Resource，www.uniprot.org)得到的那些。示例性的数据库包括，例如，GenBank、RefSeq、Gene、Protein、Nucleotide、UniProtKB/SwissProt、UniProtKB/Tremb1等。一般而言，在NCBI Reference Sequence数据库中的序列(例如，mRNA和多肽序列)可以用作目标基因的基因产物序列。这样的序列可以用于例如产生多肽，所述多肽可用作抗原或试剂，所述试剂用于生产、分离或表征结合基因产物的试剂。应当理解，基因的多个等位基因可能存在于相同物种的多个个体中。例如，编码特定蛋白的核酸的一个或多个核苷酸(例如，多达约1％、2％、3-5％的核苷酸)的差异可以存在于给定物种的多个个体中。由于遗传密码的简并性，这样的变异经常不会改变编码的氨基酸序列，尽管可以存在导致编码的蛋白的序列的变化的DNA多态性。多态变体的例子可以参见，例如，单核苷酸多态性数据库(Single Nucleotide Polymorphism Database，dbSNP)，其可在NCBI网站在www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/SNP/得到(Sherry ST，等人(2001).“dbSNP：the NCBI database of genetic variation”.Nucleic Acids Res.29(1)：308-311；Kitts A，and Sherry S，(2009).The single nucleotide polymorphism database (dbSNP)of nucleotide sequence variation in The NCBI Handbook[因特网].McEntyre J，Ostell J，编.Bethesda(MD)：National Center for Biotechnology Information(US)；2002(www.ncbi.nlm.nih.gov/bookshelf/br.fcgi？book＝handbook&part＝ch5)。可能存在某些蛋白的多种异形体，例如，作为交替RNA剪接或编辑的结果。一般而言，在本公开内容的方面涉及基因或基因产物的情况下，包括关于等位基因变体或异形体的实施方案，除非另外指出。某些实施方案可能涉及特定序列，例如，特定等位基因或异形体。
[0375] 表4列出了某些人Th17-相关的细胞因子和它们的受体的基因ID和NCBI RefSeq登录号。应当理解，某些蛋白序列是前体序列。所述蛋白的成熟形式将缺少存在于前体中的分泌信号序列。应当理解，在表4中列出的细胞因子和细胞因子受体的各个登录号下描述的序列是示例性的，并且在不同的实施方案中包括天然存在的变体(例如，等位基因变体)。此外，应当理解，为了制备用作检测试剂或治疗试剂的有用结合剂(例如，抗体)的目的，在某些实施方案中可以使用变体序列、短肽区段等。
[0376] 表4：某些Th17-相关的细胞因子和它们的受体蛋白和mRNA的基因ID和登录号[0377]
[0378] 在某些实施方案中，抗-Th17试剂是抗-IL-23试剂。IL-23试剂是部分地或完全地阻断、抑制、中和、阻止或干扰IL-23的生物活性的试剂(例如，分子或复合物)。在某些实施方案中，IL-23的生物活性是诱导激活的T细胞产生IL-17的能力。IL-23是由2个亚基组成的异源二聚体细胞因子。IL-23β亚基(也称为p40)与另一种细胞因子白介素-12(IL-12)共有。IL-23α亚基也称为p19。所述IL-23亚基通过二硫键连接。IL-23通过结合异源二聚体受体而发信号，所述受体由IL-12Rβ1(IL12RB1)(其被IL-12受体共享)和IL-23R组成(Parham C，等人(2002)J.Immunol.168(11)：5699-708)。IL-23R组成性地结合Janus激酶2(JAK2)，且也以配体依赖性的方式结合转录激活剂STAT3。IL-23信号转导级联与各种其它细胞因子的信号转导级联平行，因为配体结合导致JAK的激活。JAK然后将IL-23R在关键部位处磷酸化，从而形成STAT的停泊位点。随后，JAK将STAT磷酸化，所述STAT二聚化并转移至细胞核，它们在此处激活靶基因。在某些实施方案中，抗-IL-23试剂包含结合IL-23的p19或p40亚基的抗体。在某些实施方案中，抗-IL-23试剂(例如，抗-IL-23抗体)结合p40亚基并抑制IL-23和IL-12。
[0379] 某些抗-IL-23试剂和鉴别和/或制备这样的试剂的方法公开在USSN10/697,599中。例如，公开了筛选方法和测定，它们可以被普通技术人员容易地用于鉴别和/或生产多种抗-IL-23试剂(在USSN10/697,599中有时被称作“IL-23拮抗剂”)。
[0380] 在某些实施方案中，结合IL-23的p40亚基的抗-IL-23抗体是乌司奴单抗或其片段。乌司奴单抗(实验名称CNTO1275，专有商品名 ，Centocor；CAS编号：815610-63-0)是一种IgG1亚类的人单克隆抗体。在USSN11/617,503中描述了示例性的结合人IL-23的p19亚基的抗-IL-23抗体，和分离的编码至少一种抗-IL-23p19抗体的核酸、载体、宿主细胞和制备方法。在USSN11/762,738中描述了结合p19亚基的其它抗-IL-23抗体。
[0381] 在某些实施方案中，抗-IL-23试剂包含IL-23p40特异性的免疫球蛋白衍生出的蛋白(参见，例如，USSN11/768,582)。
[0382] 在某些实施方案中，IL-23抑制剂包含在溶液中的这样的多肽：所述多肽包含可溶性的IL-23R或其能够结合IL-23的变体或片段。在某些实施方案中，可溶性的IL-23R缺少由IL-23Rα基因的外显子9编码的IL-23R部分。参见，例如，Yu，RY，J Immunol.(2010)15；185(12)：7302-8。在某些实施方案中，可溶性的IL-23R缺少由IL-23Rα基因的外显子9和外显子8的至少一部分编码的IL-23部分。
[0383] 在某些实施方案中，通过干扰IL-23信号转导，例如，通过抑制在IL-23信号转导途径中涉及的一个或多个过程或蛋白，抑制IL-23活性。例如，在某些实施方案中，使用JAK抑制剂或STAT抑制剂，抑制IL-23信号传递。在某些实施方案中，JAK抑制剂会抑制JAK表达。在某些实施方案中，抑制JAK表达的方法包括使用RNAi试剂(例如，siRNA)或反义寡核苷酸。在某些实施方案中，JAK抑制剂会抑制JAK与IL-23受体的结合。在某些实施方案中，JAK抑制剂会抑制JAK二聚化。在某些实施方案中，JAK抑制剂会抑制JAK激酶活性。例如，在某些实施方案中，JAK抑制剂会结合JAK激酶结构域，例如，结合ATP结合位点。众多JAK抑制剂是本领域已知的。例如，INCB028050是口服可生物利用的JAK1/JAK2抑制剂，据报道其对JAK1(5.9nM)和JAK2(5.7nM)具有纳摩尔效能(Fridman，JS，等人，J Immunol.2010；184(9)：5298-307)。据报道，INCB028050在＜50nM的浓度会抑制多种促炎性细胞因子(包括IL-6和IL-23)的细胞内信号传递。小分子JAK2抑制剂包括例如AZD1480和AZ960。
[0384] 在某些实施方案中，STAT抑制剂会抑制STAT表达。在某些实施方案中，用于抑制STAT表达的方法包括使用RNAi试剂(例如，siRNA)或反义寡核苷酸。在某些实施方案中，STAT抑制剂会抑制STAT与JAK的结合。在某些实施方案中，STAT抑制剂会抑制STAT二聚化或核转运。在某些实施方案中，STAT抑制剂包含磷酸肽，所述磷酸肽例如与STAT竞争对磷酸化的JAK的结合。WO/2008/151037公开了在某些实施方案中使用的某些基于肽的STAT抑制剂。在某些实施方案中，STAT抑制剂会抑制STAT与DNA的结合。例如，诱饵寡核苷酸可以结合STAT并阻止它结合它的内源结合位点，所述诱饵寡核苷酸包含与内源DNA序列(在人细胞中STAT与其天然结合)基本上相同的序列。小分子STAT3抑制剂包括，例如，STA-21、IS3295和S3I-M2001。关于与某些STAT抑制剂有关的其它信息，参见Huang，S.，Clin Cancer Res2007；13：1362-1366和其中的参考文献，它们通过引用并入本文。
[0385] 在某些实施方案中，抗-Th17试剂是抗-IL-17试剂。IL-17试剂是部分地或完全地阻断、抑制、中和、阻止或干扰IL-17的生物活性的试剂(例如，分子或复合物)。示例性的抗-IL-17多肽(例如，抗-IL-17抗体)描述在，例如，USSN11/658,344。其它抗-IL-17抗体描述在USSN11/762,738。在某些实施方案中，抗-IL-17试剂包含IL-17受体的至少一部分，其中所述部分结合IL-17。示例性的IL-17受体多肽公开在，例如，USSN09/022,260。
[0386] 应该理解，在某些实施方案中，可以将包含本文描述的多种抗-Th17抗体或其它多肽中的任一种的结合结构域的多肽转移进其它多肽主链中或用作分离的试剂。进一步应该理解，可以使用变体。例如，变体可以与受体的结合结构域具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的同一性。在某些实施方案中，可以使用这样的抗体：其与本领域已知的特定抗体竞争对目标细胞因子的结合。在某些实施方案中，修饰IgG类的抗体，使得它缺少可以激活补体的Fc结构域。例如，可以将IgG1抗体的可变结构域移植至IgG4抗体的恒定区。
[0387] VI.药物组合物和施用方案
[0388] 可以将合适的制品(例如，基本上纯的补体抑制剂制品)与药学上可接受的载体或媒介物等相组合，以生产适当的药物组合物。术语“药学上可接受的载体或媒介物”表示不会破坏与其一起配制的化合物的药理学活性的无毒载体或媒介物。本领域技术人员会理解，如果载体或媒介物与以适合递送化合物的量施用给受试者相容，而不造成不适当的毒性，那么它是“无毒的”。可以使用的药学上可接受的载体或媒介物包括、但不限于：水、生理盐水、林格氏溶液、醋酸钠或乙酸钾溶液、5％葡萄糖等。所述组合物可以包括适合用于期望的制剂(例如，本文中讨论的)的其它组分。还可以将补充活性化合物(例如，可独立地用于治疗遭受呼吸障碍的受试者的化合物)掺入组合物中。本发明提供了这样的药物组合物，其包含补体抑制剂和任选的第二活性剂，所述第二活性剂可用于治疗遭受呼吸障碍的受试者。
[0389] 在某些实施方案中，本发明提供了药学上可接受的补体抑制剂或包含补体抑制剂的药学上可接受的组合物，其与包装说明书(标签)一起包装，所述包装说明书被负责管理药学试剂的政府机构(例如，美国食品和药品管理局)批准。在某些实施方案中，本发明提供了一种药物包，其包含：(a)浓缩或固体形式(例如，作为低压冻干粉末)的药学上可接受的补体抑制剂；(b)药学上可接受的载体、稀释剂或媒介物。在某些实施方案中，载体、稀释剂或媒介物适合用于使用喷雾器来递送组合物。在某些实施方案中，合适的载体、稀释剂或媒介物可以分开提供或者由保健提供者从适当来源获取。任选地，包含有关于将补体抑制剂溶解或稀释在载体、稀释剂或媒介物中以产生用于施用的组合物的说明书。在某些实施方案中，包装说明书描述了一种或多种适应症，包括一种或多种补体介导的慢性障碍，例如，一种或多种慢性呼吸障碍，例如，哮喘或COPD。在某些实施方案中，所述包装说明书描述了已经批准所述组合物用于治疗的特定患者和/或疾病特征或定义患者群体或疾病种类的标准。在某些实施方案中，所述包装说明书表明，所述组合物可以或应当根据本发明的方法(例如，根据给药方案和/或使用本文描述的给药间隔)来施用。
[0390] 一般而言，通过任意合适的给药途径，包括、但不限于，静脉内、肌肉内、皮下、通过呼吸途径等，可以将药物组合物施用给受试者。在某些实施方案中，局部施用给受补体介导的障碍影响的组织或器官。应该理解，“施用”包括：给受试者直接施用化合物或组合物，指示第三方给受试者施用化合物或组合物，给受试者开处方或建议化合物或组合物(例如，用于自身施用)，自身施用，和适当的使受试者可得到化合物或组合物的其它方式。如果使用植入式蓄池完成施用，施用可以表示，造成组合物或化合物从蓄池释放。
[0391] 适合用于注射使用(例如，静脉内施用、皮下或肌肉内施用)的药物组合物通常包括无菌水溶液(其中水溶性的)或分散体以及用于即时制备无菌可注射溶液或分散体的无菌粉剂。可以如下制备无菌溶液：任选地与一种成分或成分组合一起，将需要量的化合物掺入适当的溶剂中，所述成分是例如，缓中剂诸如乙酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐或磷酸盐；用于调节张度的试剂诸如氯化钠或葡萄糖；抗细菌剂诸如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂诸如抗坏血酸、谷胱甘肽或亚硫酸氢钠；螯合剂诸如乙二胺四乙酸；和其它合适的成分等，在需要时，随后进行基于过滤的灭菌。本领域技术人员知晓众多可以被包括在药物组合物中的生理上可接受的化合物。其它有用的化合物包括，例如，碳水化合物，诸如葡萄糖、蔗糖、乳糖；葡聚糖；氨基酸诸如甘氨酸；多元醇诸如甘露醇。这些化合物可以例如充当填充剂和/或稳定剂，例如，以粉末形式，和/或当制备或贮存过程的一部分包含低压冻干法时。可以在组合物中包括表面活性剂诸如吐温-80、普流尼克-F108/F68、脱氧胆酸、磷脂酰胆碱等，例如，为了增加可溶性或为了提供微乳剂以递送疏水药物。如果需要的话，可以用酸或碱(诸如盐酸或氢氧化钠)调节pH。可以将胃肠外制剂包封在由玻璃或塑料制成的安瓿、一次用弃的注射器或输注袋或多次剂量管形瓶中。优选地，注射用溶液是无菌的，且可接受地不含内毒素。
[0392] 通常，通过将活性化合物掺入无菌媒介物中来制备分散体，所述媒介物含有基本分散介质和来自上文所述的那些的适当其它成分。就用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末而言，制备方法可以包括真空干燥和冷冻干燥，其产生活性成分和任何额外所需成分的粉末，例如，得自其先前无菌过滤的溶液。
[0393] 对于通过呼吸途径(吸入)施用，可以以来自加压容器或分配器(其含有合适的推进剂)的气溶胶喷雾的形式递送补体抑制剂。可以使用计量剂量吸入器(MDI)、干粉吸入器或喷雾器。所述气溶胶可以包含液体和/或干燥颗粒(例如，干粉、大多孔颗粒等)。在不同的实施方案中有用的合适的水性媒介物包括水或盐水，任选地包括醇。在某些实施方案中，所述组合物包含适合引入肺中的表面活性剂。可以使用适合用于肺施用的其它赋形剂。
[0394] 多种不同的装置可用于呼吸施用。喷雾器是将药物的溶液或混悬液转化成气溶胶的装置，所述气溶胶适合沉积在下气道中。喷雾器类型包括喷射式喷雾器、超声波喷雾器和振动网喷雾器。可利用的振动网喷雾器的部分列表包括eFlow(Pari)、i-Neb(Respironics)、MicroAir(Omron)、IH50喷雾器(Beurer)和 (Aerogen)。TM
可以使用 Soft Mist 吸入器(Boeringer Ingelheim)。计量剂量吸入器(MDI)
是使用推进剂来递送治疗剂的手持式气雾剂装置。MDI包括增压的金属罐，其含有在混悬液或溶液中的药理学试剂、推进剂、表面活性剂(常见)和计量阀。氯氟烃(CFC)已经被广泛地用作推进剂，但是已经在很大程度上被诸如HFC-134a和HFC-227ea等氢氟烃(HFC，也被称作氢氟烷烃(HFA))替代。二氧化碳和氮是其它替代物。干粉吸入器(DPI)是呼吸致动装置，其递送被包含在胶囊或泡罩(其在使用前刺穿)中的颗粒形式的药物，且通常不采用推进剂。目前用于递送治疗哮喘和/或COPD所用的药物的DPI的例子包括，例如，Diskus、Aerolizer、HandiHaler、Twisthaler、Flexhaler。在本发明的不同的实施方案中，这样的装置可以用于递送补体抑制剂。可以用在不同实施方案中的其它示例性DPI装置包TM TM TM
括3M Taper和3M Conix 、 (AKELA Pharma)、Acu-Breathe (Respirics)。
可以使用 Soft Mist 吸入器(Boeringer Ingelheim)。计量剂量吸入器(MDI)
是使用推进剂来递送治疗剂的手持式气雾剂装置。MDI包括增压的金属罐，其含有在混悬液或溶液中的药理学试剂、推进剂、表面活性剂(常见)和计量阀。氯氟烃(CFC)已经被广泛地用作推进剂，但是已经在很大程度上被诸如HFC-134a和HFC-227ea等氢氟烃(HFC，也被称作氢氟烷烃(HFA))替代。二氧化碳和氮是其它替代物。干粉吸入器(DPI)是呼吸致动装置，其递送被包含在胶囊或泡罩(其在使用前刺穿)中的颗粒形式的药物，且通常不采用推进剂。目前用于递送治疗哮喘和/或COPD所用的药物的DPI的例子包括，例如，Diskus、Aerolizer、HandiHaler、Twisthaler、Flexhaler。在本发明的不同的实施方案中，这样的装置可以用于递送补体抑制剂。可以用在不同实施方案中的其它示例性DPI装置包TM TM TM
括3M Taper和3M Conix 、 (AKELA Pharma)、Acu-Breathe (Respirics)。
[0395] 吸入辅助装置(IAD)通常分成2类：隔离物和保持室。隔离物和保持室延伸吸入器的口罩，并将药物雾导向嘴，从而减少损失进空气中的药物。与MDI一起使用隔离物可以帮助减少粘在喉咙后部上的药物的量，从而改善通过MDI递送的药物的方向和沉积。带有阀的保持室(VHC)允许药物细云停留在隔离物中，直到患者穿过单向阀将它吸入，从而将该剂药物吸入肺中。例子包括Aerochamber和Optichamber。
[0396] 基于不同的参数诸如细颗粒级分(FPF)、发射剂量、平均颗粒密度和总气体动力学中位数直径(MMAD)，可以表征微粒组合物。合适的方法是本领域已知的，其中的一些描述于美国专利号6,942,868和7,048,908和美国公开号20020146373、20030012742和20040092470中。在某些实施方案中，气溶胶颗粒是在大约0.5μm至10μm(MMAD)之间，例如，用于呼吸递送的约5μm，尽管也可以使用更小或更大的颗粒。在某些实施方案中，使用具有1μm至25μm(例如，1μm至10μm)的总气体动力学中位数直径的颗粒。
[0397] 含有小于约1mm直径的颗粒的干燥颗粒组合物在本文中也被称作干粉。“干燥”组合物具有相对较低的液体含量，使得颗粒可容易地分散在例如干粉吸入装置中以形成气溶胶或喷雾。“粉末”在很大程度上或基本上完全由相对自由流动的细微分散的固体颗粒组成，且能够容易地分散在吸入装置中并随后由受试者吸入，优选地使得大部分颗粒可以到达期望的呼吸道部分。在某些实施方案中，使用具有在3-15μm范围内的几何平均直径3
和在0.04-0.6g/cm 之间的振实密度的大多孔颗粒。参见，例如，美国专利号7,048,908；
Edwards，D.等人，Science276：1868-1871，1997；和Vanbever，R.，等人，Pharmaceutical Res.16：1735-1742，1999)。
和在0.04-0.6g/cm 之间的振实密度的大多孔颗粒。参见，例如，美国专利号7,048,908；
Edwards，D.等人，Science276：1868-1871，1997；和Vanbever，R.，等人，Pharmaceutical Res.16：1735-1742，1999)。
[0398] 在Bisgaard，H.，等人，(编)，Drug Delivery to the Lung，第26卷，“Lung Biology in Health and Disease”，Marcel Dekker，New York，2002中，讨论了在本发明的实施方案中可能有用的呼吸递送的不同考虑。在例如Dolovich MB，Dhand R。Lancet.(2011)377(9770)：1032-45中讨论了气雾剂装置。
[0399] 在某些实施方案中，可以使用口服施用。口服组合物一般包括惰性稀释剂或可食用的载体。为了口服治疗性施用的目的，可以将活性化合物与赋形剂一起掺入并以片剂、糖锭或胶囊剂(例如，明胶胶囊剂)的形式使用。可以包括药学上适合的结合剂和/或辅料，作为组合物的一部分。片剂、丸剂、胶囊剂、锭剂等可以含有任意下述成分或相似性质的化合物：结合剂诸如微晶纤维素、黄蓍树胶或明胶；赋形剂诸如淀粉或乳糖；崩解剂诸如海藻酸、Primogel或玉米淀粉；润滑剂诸如硬脂酸镁或或Sterotes；助流剂诸如胶体二氧化硅；甜味剂诸如蔗糖或糖精；或矫味剂诸如薄荷、水杨酸甲酯或橙味矫味剂。也可以口服施用液体组合物。用于口服递送的制剂可以掺入改善在胃肠道内的稳定性和/或增强吸收的试剂。
[0400] 对于局部施用，可以将补体抑制剂配制在含有悬浮或溶解于一种或多种载体中的活性组分的适当软膏中。用于局部施用的载体包括、但不限于：矿物油、液体矿脂、白矿脂、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化蜡和水。可替换地，可以将药学上可接受的组合物配制为合适的洗剂或乳膏剂，其含有悬浮或溶解于一种或多种药学上可接受的载体中的坎普他汀类似物。合适的载体包括、但不限于：矿物油、脱水山梨糖醇单硬脂酸酯、聚山梨酯60、十六烷基酯蜡、鲸腊硬脂醇、2-辛基十二烷醇、苯甲醇和水。
[0401] 也可以通过透粘膜或透皮方式全身施用。对于透粘膜或透皮施用，在制剂中可以使用适于要透过的屏障的穿透剂。该穿透剂是本领域中普遍已知的，并且对于透粘膜给药而言，包括例如去污剂、胆汁盐和夫西地酸衍生物。可以例如通过使用鼻腔喷雾剂或栓剂来完成透粘膜施用。在某些实施方案中，使用鼻内施用，例如，将补体抑制剂施用给需要治疗鼻息肉病、慢性鼻及鼻窦炎或变应性鼻炎的受试者。对于透皮施用，通常将活性化合物配制成本领域通常已知的软膏剂、油膏剂、凝胶或乳膏剂。
[0402] 也可以以用于直肠递送的栓剂(例如具有常规栓剂基质，如可可脂和其它甘油酯)或保留灌肠剂的形式，配制所述化合物。
[0403] 局部施用给眼的方法包括，例如眼内施用，例如眼内注射，例如玻璃体内注射。在某些实施方案中，施用是通过脉络膜注射、经巩膜注射、滴眼剂或眼软膏剂、经视网膜注射、结膜下球注射、玻璃体内注射、脉络膜上注射、眼球筋膜下注射、巩膜袋或巩膜切开注射。
[0404] 在本发明的某些实施方案中，用载体制备补体抑制剂，所述载体会保护化合物免于从身体中快速消除，诸如控释制剂，包括植入剂和微囊化的递送系统。例如，可以将化合物掺入或包囊在微粒或纳米颗粒制剂中。可以使用可生物降解的、生物相容的聚合物，诸如乙烯醋酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯、聚醚、聚乳酸、PLGA等。可以使用脂质体或其它基于脂质的颗粒作为药学上可接受的载体。根据本领域技术人员已知的方法，例如，如在美国专利号4,522,811和/或本文中列出的其它参考文献中所述，可以制备这些物质。可以使用含有补体抑制剂的贮库制剂。补体抑制剂随着时间从贮库释放。本领域普通技术人员会明白，为控释制剂、植入物等的制备而选择的材料和方法应当会例如保留化合物的活性。在某些实施方案中，组合物不含有或基本上不含有一种或多种这样的载体：其主要的或唯一预期的目的或作用是导致活性剂(例如，补体抑制剂)的持续或受控释放。
[0405] 在某些实施方案中，将补体抑制剂与一种或多种其它活性剂联合使用，所述其它活性剂可用于治疗本文中的目标障碍(关于这样的试剂的例子，参见，例如，Brunton，LL，等人(编)，Goodman and Gilman′s The Pharmacological Basis of Therapeutics，(例如，第11版或第12版)，McGraw-Hill)。在某些实施方案中，在与补体抑制剂相同的组合物中施用一种或多种其它活性剂。在某些实施方案中，在单独组合物中施用一种或多种其它活性剂，可以在施用补体抑制剂之前、大致同时或之后施用所述单独组合物。在某些实施方案中，补体抑制剂的应用允许降低其它活性剂的施用剂量和/或频率，同时维持至少等效的疾病控制和/或对受试者的益处。应该理解，包含其它活性剂的药物组合物可以使用本文描述的或本领域已知的药学上可接受的载体和/或制备方法来制备，并使用本文描述的或本领域已知的施用途径来施用。
[0406] 在某些实施方案中，第二活性剂是这样的试剂：其通过不同于直接抑制补体组分或补体激活的机制而干扰DC-Th17-B-Ab-C-DC循环。在某些实施方案中，第二活性剂可以是抗-IL-23试剂或抗-IL-17试剂。在某些实施方案中，药物组合物或药物包包含干扰DC-Th17-B-Ab-C-DC循环的第二活性剂。在某些实施方案中，包装说明书表明，两种试剂应当联合施用。在某些实施方案中，可以将补体抑制剂(例如，坎普他汀类似物)加入包含抗-Th17试剂的任意治疗方案中。在某些实施方案中，这样的添加允许使用抗-Th17试剂的更低剂量或增加的给药间隔，而没有效力的降低。在某些实施方案中，这样的添加会导致增加的效力。
[0407] 在本发明的不同的实施方案中，当将两种或多种疗法(例如，化合物或组合物)彼此“联合”使用或施用时，可以同时地、在重叠的时间段内或顺序地(例如，在时间上间隔多达2-4周)施用它们。在不同的实施方案中，可以经由相同的途径或不同的途径施用它们。在不同的实施方案中，可以以任一种次序施用它们。在某些实施方案中，在彼此间隔4、8、12、24、48、72或96小时内施用化合物或组合物。在某些实施方案中，在施用第二种试剂之前或之后施用第一种试剂，例如，在时间上足够接近，使得2种试剂以有用的水平在体内存在至少一次。在某些实施方案中，在时间上足够接近地施用所述试剂，使得在施用第二种化合物或组合物时，不超过90％的先施用的组合物已经代谢代谢为无活性的代谢物或从身体消除(例如，排泄)。在某些实施方案中，在时间上足够接近地施用所述试剂，使得在施用第二种试剂时，从先施用的试剂已经代谢代谢为无活性的代谢物或从身体消除(例如，排泄)以来已经经历不超过2周。在某些实施方案中，2种试剂(例如，补体抑制剂和干扰DC-Th17-B-Ab-C-DC循环的第二种试剂)的施用会累加地起作用，从而产生通过任一种单独试剂不会实现的作用。在某些实施方案中，2种试剂(例如，补体抑制剂和干扰DC-Th17-B-Ab-C-DC循环的第二种试剂)的施用会协同地起作用，从而产生这样的效应：其以临床上和/或统计上显著的方式大于累加效应和/或在性质上不同于累加效应。
[0408] 应当理解，可以将补体抑制剂和/或其它活性剂提供为药学上可接受的盐。药学上可接受的盐包括源自药学上可接受的无机和有机酸和碱的那些。合适的酸盐的例子包括乙酸盐、己二酸盐、海藻酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡萄糖庚酸盐、甘油磷酸盐、乙醇酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、棕榈酸盐(palmoate)、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐和十一烷酸盐。并且，如果合适的话，根据活性剂的特性，可以将药学上可接受的盐制备为碱金属或碱土金属盐，诸如钠盐、钾盐或钙盐。
[0409] 应该理解，本文中提及的药学上可接受的载体、化合物和制备方法是示例性的和非限制性的。关于药学上可接受的化合物和制备不同类型的药物组合物的方法的其它讨论，参见，例如，Remington：The Science and Practice of Pharmacy.第21版.Philadelphia，PA.Lippincott Williams&Wilkins，2005。
[0410] 可以将有效量的化合物或组合物(例如，药物组合物)使用或施用给受试者。在某些实施方案中，活性剂例如补体抑制剂(或含有活性剂的组合物)的“有效量”表示，足以在例如施用活性剂(或组合物)的受试者中引起一种或多种目标生物应答的活性剂(或组合物)的量。本领域普通技术人员会理解，有效的特定试剂的绝对量可以随诸如生物端点、特定活性剂、靶组织等因素而变化。本领域普通技术人员进一步理解，“有效量”可以在单次剂量中施用，或者可以通过施用多次剂量来实现。例如，在某些实施方案中，有效量可以是足以实现以下一项或多项的量：(i)减轻慢性呼吸障碍的一种或多种表现(例如，一种或多种征状或征象)的严重程度；(ii)造成恶化的频率和/或严重程度的下降(所述下降可以导致，例如，学校或工作缺勤天数减少、医师和/或急诊室就诊减少、住院治疗事件减少和/或死亡率降低)；(iii)允许减少使用该障碍的标准药物，同时维持至少等效的疾病控制；和/或(iv)抑制或阻止与障碍有关的长期病理学变化；和/或(v)改善日常功能。在许多实施方案中，治疗上有关的有效量会至少部分地减少慢性障碍的一种或多种表现(例如，征状)和/或将一种或多种生理或生化参数或指标(其与慢性障碍有关或为慢性障碍的原因)至少部分地恢复至正常。例如，在某些实施方案中，有效量可以是足以实现以下一项或多项的量：(i)减轻慢性呼吸障碍的一种或多种表现(例如，一种或多种征状或征象)的严重程度；(ii)减轻EAR、LAR和/或DAR的量级(例如，通过在变应原攻击以后在有关时间段内测量的FEV1的最大下降和/或PEF的最大下降来评估)；(iii)减小发展EAR、LAR和/或DAR的可能性；(iv)造成恶化的频率和/或严重程度的下降(所述下降可以导致，例如，学校或工作缺勤天数减少、医师和/或急诊室就诊减少、住院治疗事件减少和/或死亡率降低)；(v)允许减少使用ICS、OCS、白三烯修饰剂和/或Xolair，同时维持至少等效的疾病控制；(vi)抑制或阻止气道重塑；(vii)改善日常功能和/或锻炼耐受性；和/或(viii)减少气道炎症的一种或多种指标。在许多将试剂施用给需要治疗慢性呼吸障碍的受试者的实施方案中，治疗上有关的有效量会至少部分地减少慢性呼吸障碍的一种或多种表现(例如，征状)和/或将一种或多种生理或生化参数或指标(其与慢性障碍有关或为慢性障碍的原因)至少部分地恢复至正常。
[0411] 气道炎症的指标包括，例如，与合适的参照水平(例如，正常水平)相比，在气道中存在增加数目的炎症相关的细胞，诸如白血细胞(例如，嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞和/或嗜中性粒细胞)和/或炎症介质(例如，趋化因子(例如，嗜酸性粒细胞趋化因子(eotaxin)、胸腺和激活调节趋化因子(TARC)、巨噬细胞衍生的趋化因子(MDC))、细胞因子(例如，TNFα、IL-1β、IL-4、IL-5、IL-13、IL-25)、组胺、半胱氨酰基白三烯、一氧化氮)。例如，细胞和/或介质的数目和/或浓度可以高于没有遭受障碍的受试者中的正常范围的上限(其中“正常范围”通常表示在受试者群体的平均值的±2标准差的范围内)，或可以大于当受试者的障碍受到良好控制时在受试者中测量的值(或平均值)。在医师或其它医学从业人员的合理判断内，征状严重程度和/或频率的下降可以是统计上显著的和/或临床上有意义的。确定障碍是否得到良好控制，是在医师或其它医学从业人员的合理判断内。
可以使用本领域接受的指南。
可以使用本领域接受的指南。
[0412] 在某些实施方案中，有效量会导致至少一种与Th17细胞和/或Th17活性有关的参数的下降。在某些实施方案中，有效量会降低与至少一种与Th17细胞和/或Th17活性有关的细胞因子(例如，促进Th17细胞形成和/或活性的细胞因子或由Th17细胞产生的细胞因子)的水平。在某些实施方案中，细胞因子是IL-17、IL21、IL-22或IL-23。在某些实施方案中，有效量会导致从Th17向Treg细胞的转变。在某些实施方案中，在相对富含IL-10且相对缺少IL-17和IL-23的免疫微环境中反映出从Th17细胞向Treg细胞的转变。
[0413] 对于AMD的治疗，有效量可以是足以实现以下一项或多项的量：(i)抑制或阻止玻璃疣形成；(ii)造成玻璃疣数目和/或尺寸的减小(玻璃疣消退)；(iii)造成脂褐素沉着物的减少或预防脂褐素沉着物；(iv)抑制或阻止视力丧失或减慢视力丧失的速率；(v)抑制脉络膜新生血管形成或减慢脉络膜新生血管形成的速率；(vi)造成以脉络膜新生血管形成为特征的病变的尺寸和/或数目的减小；(vii)抑制脉络膜新生血管形成或减慢视网膜新生血管形成的速率；(viii)造成以视网膜新生血管形成为特征的病变的尺寸和/或数目的减小；(ix)提高视敏度和/或对比敏感度；(x)抑制或阻止光感受器或RPE细胞萎缩或细胞凋亡，或降低光感受器或RPE细胞萎缩或细胞凋亡的速率；(xi)抑制或阻止非渗出性的黄斑变性向渗出性的黄斑变性的进展；(xii)减轻炎症的一种或多种指标，例如，炎症相关的细胞诸如白血细胞(例如，嗜中性粒细胞、巨噬细胞)在眼睛中的存在，内源炎症介质的存在，一种或多种征状诸如眼痛、发红、光敏感性、视力模糊和漂浮物等。
[0414] 本领域技术人员会知道用于评估前述生物学效应和其它目标生物学效应的适当方法。使用本领域已知的标准化的文件(例如，问卷调查)，可以评估征状。可以使用多种不同的健康相关的生活质量(HRQOL)文件中的任一种，所述文件可以一般地或具体地与呼吸系统有关(例如，哮喘和/或COPD-特异性的)。肺功能试验，特别是肺量测定法，可以用于测量在患有慢性呼吸障碍的受试者中经常变化的肺功能的参数，诸如FEV1、FVC、FEV1/FVC、PEF等。可以执行变应原攻击，例如，如在以下文献中所述：Kelly MM.J Allergy Clin Immunol.125(2)：349-356，2010，或Cockcroft，DW，等人.Can Respir J.14(7)：414-418，2007描述的研究。肌成纤维细胞会合成胶原，且被认为在以慢性气道炎症(诸如哮喘和COPD)为特征的障碍的气道重塑中起重要作用。在变应原攻击后24h，这些细胞在哮喘个体的气道中增加。气道壁肌成纤维细胞的增加(其否则在变应原攻击后发生)的抑制可以指示降低的气道重塑潜力。可替代地或另外，可以评估与气道重塑有关的特征，诸如平滑肌增生、杯形细胞增生和/或上皮下胶原沉积。
[0415] 例如，“直接”和“间接”攻击试验(其表示用平滑肌收缩有关的试剂作用模式)，可以评估支气管高反应性。氯醋甲胆碱和二磷酸组胺最常用作直接平滑肌刺激物。最常用的间接刺激物是高渗盐水、腺苷单磷酸(AMP)和甘露醇。攻击试验可以例如根据ERS(Sterk PJ，等人.Airway responsiveness.Standardized challenge testing with pharmacological.physical and sensitizing stimuli in adults.Report Working Party Standardization of Lung Function Tests，European Community for Steel and Coal.Official Statement of the European Respiratory Society.Eur Respir J Suppl1993；16：53-83) 和 ATS(Crapo，RO， 等 人，Guidelines for methacholine and exercise challenge testing-1999.Am J Respir Crit Care Med2000；161：309-329)公开的指南来执行。可以使用的2种合适的吸入药理学刺激物水溶液的方法是2-分钟潮式呼吸方法和剂量计方法。支气管收缩会造成增加的气道阻力。PC(X)(其中X是数字，通常在10-100之间)表示造成气道阻力下降X％所需的刺激物的量。一般而言，具有支气管高反应性的人表现出比正常个体降低的PC(X)。例如具有支气管高反应性的个体可能具有＜4mg/ml的醋甲胆碱PC(20)，而具有支气管活动过度的个体可能具有＞4mg/ml的PC(20)。在某些实施方案中，与对照受试者相比，有效量的治疗剂会增加遭受以支气管高反应性为特征的慢性呼吸障碍的受试者的PC(X)。
[0416] 可以评估炎症相关的细胞和/或介质，例如，在合适的样品诸如诱导的痰、BAL流体和/或气道组织样品(例如，得自活组织检查诸如支气管内的活组织检查)中。可以检测细胞(例如，炎症相关的细胞)并任选地进行定量，例如，使用电子显微术、光学显微术(任选地使用针对特定标志物的合适化学染色剂或抗体(免疫组织化学)、流式细胞计量术或其它合适的方法。可以测量介质(例如，细胞因子)水平，例如，使用基于抗体的测定诸如ELISA测定、珠子阵列测定(诸如得自BD Biosciences的Luminex xMAP技术或Cytometric Bead Array(CBA)系统)、抗体阵列测定或适当的生物测定。可替代地或额外地，可以如下评估介质的表达：测量编码这样的介质的mRNA的水平(例如，使用任意合适的测量RNA水平的方法，诸如反转录PCR、与寡核苷酸或cDNA阵列的杂交、RNA-Seq(例如，利用高通量测序技术对cDNA测序以得到关于样品中的RNA的信息的方法)等)。
[0417] 可以评估锻炼耐受性，例如，通过在6分钟行走试验中检验表现(例如，其中受试者在6分钟中能够行走的距离的增加会证实提高的锻炼耐受性)、穿梭行走试验和/或心肺锻炼试验。关于6分钟行走试验的讨论，参见，例如，ATS Statement：Guidelines for the Six-Minute行走试验(2002)。
[0418] 一般而言，对照受试者可以是，例如，未治疗的受试者或用安慰剂治疗的受试者。“未治疗的受试者”可以是在先前6个月内尚未接受补体抑制剂治疗的受试者。在某些实施方案中，未治疗的受试者在至少先前4周内尚未接受使用ICS、OCS、LTRA和/或LABA的治疗。在某些实施方案中，未治疗的受试者在至少先前12周内尚未接受使用抗IgE剂的治疗。可以使用历史对照信息。在某些实施方案中，受试者可以充当他或她自身的对照。例如，可以在治疗之前测量一项或多项参数一次或多次，并在治疗过程中和/或在治疗以后测量一次或多次。在某些实施方案中，使用“主动对照”(或“主动比较物”)，其中将补体抑制剂的生物学效应与已知会影响要评估的参数的化合物的生物学效应进行对比。例如，可以使用被批准用作哮喘的控制器药物的化合物。应当理解，如果使用主动比较物作为对照，在不同的实施方案中，有效量的补体抑制剂可能在一个或多个时间点具有比主动比较物更少、更多或大致相同的效应。
[0419] 在某些实施方案中，当在本发明的给药间隔中在多个时间点试验时，观察到补体抑制剂的一种或多种生物学效应，其中所述时间点包括至少75％的给药间隔，例如，至少80％、85％、90％、95％或更多的给药间隔。在某些实施方案中，当在给药间隔的末端处或附近试验时，观察到补体抑制剂的一种或多种生物学效应，其中“在给药间隔的末端附近”是指，在给药间隔末端之前至多2天，例如，在给药间隔末端之前当天。
[0420] 在某些实施方案中，使用动物模型，例如，以帮助引导用于在人类中试验的剂量、剂量范围或制剂的选择，以评估一种或多种生物学效应等。常用的气道炎症和/或哮喘的动物模型包括猪蛔虫抗原的吸入。例如，变应性猴(例如，食蟹猴；成束猴)对猪蛔虫抗原的吸入会造成早期支气管收缩和延迟的变态反应，包括肺炎症性浸润。参见，例如，Mellado，M.，等人，J Pharmacol Exp Ther.(2008)324(2)：769-75；Zou，J.，等人.Genome Biol.2002；3(5)：research0020.2002年4月11日电子出版物。类似的模型存在于小鼠、绵羊、豚鼠等中。在某些实施方案中，与未治疗的动物相比，在治疗的动物中变应原诱导的EAR、LAR和/或AHR的显著减少(例如，使用醋甲胆碱攻击来评估)和/或PC(X)的显著增加会指示有效性。在某些实施方案中，在根据本发明选择的给药间隔的末端(例如，在即将进行下一次给药之前)，EAR、LAR和/或AHR的减少保持明显。
[0421] 一般而言，补体抑制剂或其它活性剂的适当剂量至少部分地取决于补体抑制剂或其它活性剂的效能、给药途径等。一般而言，本领域普通技术人员可以选择有效的且被良好耐受的剂量范围。这样的剂量可以使用本领域已知的临床试验来确定。任选地，可以为特定受体定制剂量，例如，通过施用逐渐增加的剂量，直到实现预选的期望的应答，诸如响应于变应原攻击的预选的期望的补体抑制程度和/或预选的期望的减少、支气管高反应性的减轻和/或障碍的一种或多种征状的减轻。如果需要的话，可以至少部分地基于多种因素来选择任何特定受试者的具体剂量水平，所述因素包括采用的具体化合物的活性、被治疗的特定病症和/或它的严重程度、年龄、体重、一般健康、给药途径、任何并用药物和/或在得自受试者的一个或多个样品中测得的补体蛋白表达或活性程度。在某些实施方案中，有效量或剂量的范围为约0.001-500mg/kg体重，例如，约0.01-100mg/kg体重，例如，约0.1-50mg/kg体重、约0.1-20mg/kg体重，例如，约1-10mg/kg。
[0422] 实施例1：有效坎普他汀类似物在哮喘的猪蛔虫动物模型中的作用
[0423] 使用标准方法，合成了有效坎普他汀类似物，其具有SEQ ID NO：28的坎普他汀类似物的氨基酸序列。简而言之，得到氨基酸作为Fmoc-保护的氨基酸，其中每个氨基酸的α-氨基用Fmoc保护。侧链官能团也用不同的适当保护基封端。按照Merrifield(J.Amer.Chem.Soc.85，2149(1963))描述的固相方法完成合成。在固相上进行链装配，在其结束时，将N末端乙酰化；然后从固相切离肽，并同时使用TFA经由酸解而去保护，并酰胺化。然后将直链肽氧化和纯化。进行一项研究，其被设计成评价在哮喘的非人灵长类动物模型中施用14天以后CA-28的效力。在该研究中，使用气动喷雾器(Pari LC Plus，Pari USA，Midlothian，VA)，经由气管内喷雾，将15mg/kg剂量的在2.0％甘油溶液中的CA-28施用给麻醉的动物(食蟹猴)，每天1次，连续14天。使用布地奈德(10mg/kg，每天施用1次持续
9天，作为粉末，使用吹入器)作为阳性对照，所述布地奈德是一种用于治疗哮喘的糖皮质激素。主要端点包括对支气管肺泡灌洗(BAL)细胞计数、细胞因子水平和急性肺功能变化的影响，通过用猪蛔虫(A.suum)攻击以后的气道阻力(RL)和动态顺应性(CDYN)来评估。
9天，作为粉末，使用吹入器)作为阳性对照，所述布地奈德是一种用于治疗哮喘的糖皮质激素。主要端点包括对支气管肺泡灌洗(BAL)细胞计数、细胞因子水平和急性肺功能变化的影响，通过用猪蛔虫(A.suum)攻击以后的气道阻力(RL)和动态顺应性(CDYN)来评估。
[0424] 在3个时间点(在初始剂量-攻击之前)、在第14天(攻击1，即，给药的最后一天)和在第30天(攻击2)，对动物进行猪蛔虫攻击。在将每只动物麻醉的同时，使用呼吸机和线内喷雾器经由间歇正压呼吸施用单次剂量的猪蛔虫抗原，经历15次呼吸。给每只动物施用最适应答剂量(ORD)，其为在历史上引起大于40％的肺阻力(RL)增加和大于35％的动态顺应性下降(CDYN)的抗原(稀释物)剂量。通过静脉穿刺术收集血液，并针对常规临床化学和血液学参数进行分析。通过引导儿科光导纤维支气管镜经过峰板至主支气管的楔(wedge)，进行支气管肺泡灌洗(BAL)。尝试在每个时间点灌洗不同的肺区域。滴注无菌盐水的3次洗液(各20mL)，并立即抽吸用于收集进试管中。将第一次收集洗液放入1个50mL锥形管中，而将第二次和第三次收集洗液组合进第二个50mL锥形管中。在运输之前，将样品放在湿冰上或设定成维持4℃的冰箱中。合并得自不同洗液组合(第1次/第2次/第3次洗液)的细胞沉淀物，并针对总细胞计数和差别细胞计数进行分析。如果可得到的话，如果可得到少于200个有核细胞(这记载在研究记录和结果中)，通过计数最少200个得自所有洗液的有核细胞(从所有洗液组合细胞沉淀物)，从染色的载玻片确定BAL细胞形态学和差别。针对巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、嗜中性粒细胞、淋巴细胞和肥大细胞，确定相对和绝对计数。不计数红细胞、具纤毛的呼吸细胞和鳞状上皮细胞。使用合格的方法，针对嗜酸性粒细胞趋化因子、RANTES、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IL-13、IL-17a、IL-23和INF-γ来分析BAL样品。
[0425] 结果
[0426] 在攻击0(给药前的对照攻击)过程中在气溶胶猪蛔虫抗原攻击以后，所有动物表现出严重的支气管收缩应答(这与肺阻力(RL)的增加和动态顺应性(CDYN)的下降有关)和随后的肺嗜酸性粒细胞增多症。
[0427] CA-28没有影响在攻击2(在CA-28施用的最后一天)或攻击2(停止施用以后28天)时由猪蛔虫攻击引起的急性期支气管收缩。
[0428] CA-28导致攻击1和2以后嗜酸性粒细胞增多症的轻微改善(减少)。但是，在给药后立即收集的和在第一次猪蛔虫攻击之前收集的基线样品中，嗜酸性粒细胞计数更高。
[0429] 与在治疗期中用媒介物对照治疗的动物相比，使用15mg/kg的吸入的CA-28(在包含2.0％甘油水溶液的媒介物中)的治疗导致更低水平的大多数增量调节的细胞因子和趋化因子，其程度在许多情况下与布地奈德相当，最突出的是嗜酸性粒细胞趋化因子、IFN-y、IL-4、IL-13和IL-23，尽管在大多数情况下，由于数据的固有高变异性和动物的低数量，所述抑制没有达到统计显著性。最突出的数据是在攻击1和2以后在所有时间点观察到的CA-28治疗的动物中的IL-23的完全抑制。在CA-28治疗组中，甚至在攻击2以后，大多数其它细胞因子的抑制似乎存在。CA-28会增量调节攻击1和2以后的IL-10(一种关键的调节性细胞因子)的基线水平。数据以图形形式呈现在图1-11中。
[0430] 所述数据与以下结论相一致：当该药物存在于肺中时(攻击1)和在药物清除以后27天时(攻击2)(假定CA-28和布地奈德的1天清除)，CA-28会建立保护性免疫微环境(高IL-10，低IFNγ/IL-4/IL-13/IL-17/IL-23)。具体地，在攻击2以后24小时，CA-28治疗的动物中的IL-17和Il-23水平低于对照动物中的那些，这提示持续的有益效果。在布地奈德的情况下，在攻击2以后24小时，IL-17/IL-23轴似乎受到增量调节。
[0431] *****
[0432] 本领域技术人员会认识到或仅仅使用例行实验就能够确定许多与本文所述的本发明的具体实施方案等效的方案。本发明的范围无意限于上面的描述，而是如所附权利要求所述。应当理解，本发明绝不依赖于任何具体实施例中或利用任何具体实施方案实现的特定结果。除非指示相反情形或以其它方式从上下文显而易见，否则诸如”一个”、“一种”和”所述”等词可以指一个/种或超过一个/种。如果群体成员中的一个、超过一个或所有成员存在于指定的产品或过程中、在指定的产品或过程中使用、或以其它方式与指定的产品或过程相关，那么认为满足在一组的一个或多个成员之间包括“或”的权利要求或描述，除非指示相反情形或以其它方式从上下文显而易见。本发明包括这样的实施方案，其中所述组的刚好一个成员存在于给定产品或方法中、用于给定产品或方法中或者以其它方式与给定产品或方法相关。例如，但不限于，应当理解，在权利要求或描述指示特定位置的残基可以选自特定氨基酸或氨基酸类似物组的情况下，本发明包括其中所述位置的残基是任何所列氨基酸或氨基酸类似物的个别实施方案。本发明还包括这样的实施方案，其中所述组成员中的超过一个或全部都存在于给定产品或方法中、用于给定产品或方法中或者以其它方式与给定产品或方法相关。此外，应当理解，本发明包括其中将一个或多个限定、要素、条款、说明性术语等从一个或多个所列权利要求或从上述描述引入另一权利要求中的所有变体、组合和排列。例如，可以对从属于另一权利要求的任何权利要求进行修改，以包括从属于相同基本权利要求的任何其它权利要求中所见的一个或多个要素、限定、条款或说明性术语等。此外，当权利要求叙述一种组合物时，应当理解，根据本文中公开的任意方法施用所述组合物的方法，和为了本文中公开的任何目的而使用所述组合物的方法，都被包括在本发明的范围内，并且根据本文中公开的任意制备方法来制备所述组合物的方法也被包括在本发明的范围内，除非另外指出或者除非本领域普通技术人员显而易见会引起抵触或矛盾。治疗受试者的方法可以包括：提供需要这种治疗的受试者(例如，已经具有疾病或者处于增加的具有疾病的风险中的受试者)的步骤，将受试者诊断为具有疾病的步骤，和/或选择受试者进行补体抑制剂和/或抗-Th17试剂治疗的步骤。在某些实施方案中，治疗方法包括：针对Th17生物标志物，监测受试者。在某些实施方案中，治疗方法包括：针对Th17生物标志物，监测受试者，和至少部分地基于这样的监测的结果，重新治疗所述受试者，例如，如果所述生物标志物指示Th17细胞和/或Th17-相关的活性的再现，则给所述受试者施用补体抑制剂。
[0433] 在将要素呈现为列表的情况下，应当理解，也公开了所述要素的每个亚组，并且可以从所述组中除去任何要素。为了简洁的目的，本文中仅明确地叙述这些实施方案中的一些，但本发明包括所有这样的实施方案。还应当理解，一般而言，在本发明或本发明的方面或实施方案被称作包含特定要素、特征等的情况下，本发明的某些实施方案或本发明的方面由这样的要素、特征等组成，或基本上由其组成。
[0434] 在给出范围的情况下，包括端点。此外，应当理解，除非另外指示或以其它方式从上下文和本领域普通技术人员的理解显而易见，否则以范围表述的数值在本发明的不同实施方案中可呈现处于所述范围内的任何具体数值或子范围，其精确至该范围的下限单位的十分之一，除非上下文另外清楚地指明。可以从权利要求中明确地排除本发明的任何实施方案、方面、要素、特征等。例如，可以明确地排除任意补体抑制剂、抗-Th117试剂、载体、制剂、制剂组分、障碍、受试者群体或特征、给药间隔、施用途径或它们的组合。
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