一种海马应激响应的评价体系及评价方法
专利汇可以提供一种海马应激响应的评价体系及评价方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种海 马 应激响应的评价体系，其特征在于，所述评价体系包括外部指标、免疫组化、抗菌肽基因、免疫因子、血细胞五个方面26个指标，所述26个指标的症状区间及对应的得分，总分以及评价结论。本发明的一种海马应激响应的评价体系及评价方法涵盖生长指标、生理指标以及免疫指标，能够从行为、解剖以及分子层面系统评估海马的应激反应，这些指标能够从不同方面、多个层次检测海马的应激响应，而且评价体系能够反映应激的触发时间、响应模式以及强度，帮助我们掌握海马对不同胁迫因子的应激响应特征。，下面是一种海马应激响应的评价体系及评价方法专利的具体信息内容。
1.一种海马应激响应的评价体系，其特征在于，所述评价体系包括外部指标、免疫组化、抗菌肽基因、免疫因子、血细胞五个方面26个指标，所述26个指标的症状区间及对应的得分，总分以及评价结论；
所述外部指标包括体重、体长、肛门炎症严重程度、摄食状态、腹水严重程度，共5个指标；免疫组化包括杯状细胞数量、炎症细胞数量，共2个指标；抗菌肽基因包括Hepcidin基因、Leap基因、Lysozyme基因、Piscidin基因，共4个指标；免疫因子包括IL-1β因子、IL-1βreceptor因子、IL-2因子、IL-10因子、IFN因子、TNF-α因子、TLR5因子，共7个指标；血细胞包括白细胞、中性粒细胞、淋巴细胞、红细胞压积、血小板数、血小板压积、中间细胞、中间细胞比率，共8个指标；
所述26个指标的症状区间及对应的得分情况分别为：所述体重>3.8g得0分，体重在
3.7-3.8g之间得1分，体重在3.6-3.7g之间得2分，体重＜3.6g得3分；所述体长正常得0分，体长中速得1分，体长低速得2分，体长停滞得3分；所述肛门炎症严重程度为程度正常得0分，程度轻微得1分，程度中等得2分，程度严重得3分；所述摄食状态为可以自主捕食漂浮的糠虾得0分，捕食能力稍弱但可以自主寻找食物得1分，捕食能力严重减弱只吃漂浮到嘴边的食物得2分，捕食能力丧失得4分；所述腹水严重程度为正常得0分，轻微得1分，中等得2分，严重得3分；所述杯状细胞数量为少量得0分，微量得1分，中等得2分，大量得3分；所述炎症细胞数量为少量得0分，微量得1分，中等得2分，大量得3分；所述Hepcidin抗菌肽基因为
0-1得1分，1-2得2分，2-4得3分，大于4得4分；所述Leap基因为0-1得1分，1-2得2分，2-4得3分，大于4得4分；所述Lysozyme基因为0-1得1分，1-2得2分，2-4得3分，大于4得4分；所述Piscidin基因为0-1得1分，1-2得2分，2-4得3分，大于4得4分；所述IL-1β因子为0-1得1分，
1-2得2分，2-4得3分，大于4得4分；所述IL-1β receptor因子为0-1得1分，1-2得2分，2-4得3分，大于4得4分；所述IL-2因子为0-1得1分，1-2得2分，2-4得3分，大于4得4分；所述IL-10因子为0-1得1分，1-2得2分，2-4得3分，大于4得4分；所述IFN因子为0-1得1分，1-2得2分，2-4得3分，大于4得4分；所述TNF-α因子为0-1得1分，1-2得2分，2-4得3分，大于4得4分；所述TLR5因子为0-1得1分，1-2得2分，2-4得3分，大于4得4分；所述白细胞为0-60得1分，60-120得2分，120-180得3分，大于180得4分；所述中性粒细胞为0-0.4得1分，0.4-0.8得2分，0.8-
1.2得3分，大于1.2得4分；所述淋巴细胞为0-50得1分，50-100得2分，100-150得3分，大于
150得4分；所述红细胞压积为0-10得1分，10-20得2分，20-30得3分，大于30得4分；所述血小板数为0-50得1分，50-70得2分，70-100得3分，大于100得4分；所述血小板压积为0-0.04得1分，0.04-0.08得2分，0.08-0.1得3分，大于0.1得4分；所述中间细胞为0-0.2得1分，0.2-0.8得2分，0.8-1.5得3分，大于1.5得4分；所述中间细胞比率为0-0.5得1分，0.5-1得2分，1-1.5得3分，大于1.5得4分；
所述总分是指所述26个指标得分的总和；
所述评价结论是指：当所述总分为30-45分，海马应激响应程度为正常（+）；当所述总分为45-60分，海马应激响应程度为轻微（++）；当所述总分为60-75分，海马应激响应程度为中度（+++）；当所述总分为75-90分，海马应激响应程度为较重（++++）；当所述总分为>90分，海马应激响应程度为重度（+++++）。
2.一种海马应激响应的评价方法，其特征在于，根据权利要求1所述的评价体系对海马应激响应进行评价，具体包括以下步骤：
分别对海马样本进行体重、体长、肛门炎症严重程度、摄食状态、腹水、白细胞、中性粒细胞、淋巴细胞、红细胞压积、血小板数、血小板压积、中间细胞、中间细胞比率、杯状细胞数量、炎症细胞数量，Hepcidin基因、Leap基因、Lysozyme基因、Piscidin基因、IL-1β因子、IL-
1βreceptor因子、IL-2因子、IL-10因子、IFN因子、TNF-α因子、TLR5因子，共26个指标的检测，并根据检测结果分别确定所述26个指标的症状区间；
根据所述26个指标的症状区间，分别确定所述症状区间对应的得分，之后将26个指标的得分相加，得到所述海马样本的总分，之后根据所述总分对所述海马样本的应激响应进行评价，确定海马应激响应程度为正常、轻微、中度、较重或重度。
3.根据权利要求2所述的一种海马应激响应的评价方法，其特征在于，所述Hepcidin基因的检测方法为荧光定量PCR分析法，使用的上游引物Hepcidin-F为5’-
TCGTGCTCGCCTTTATTTG-3’，下游引物Hepcidin-R为5’-GTTGCTTTGCCGCTTGTGT-3’；
所述Leap基因的检测方法为荧光定量PCR分析法，使用的上游引物Leap-F为5’-GCAGGCGGAAGGCAAAGTC-3’，下游引物Leap-R为5’-TGGCAAAAAGCACCAAAAG-3’；
所述Lysozyme基因的检测方法为荧光定量PCR分析法，使用的上游引物Lysozyme-F为
5’-TGGTAAAGAACAAGACGGAA-3’，下游引物Lysozyme-R为5’-GACGAAAACACGACTGGAGA-3’；
所述Piscidin基因的检测方法为荧光定量PCR分析法，使用的上游引物Piscidin-F为
5’-CTGGTCACGCTCTTCCTG-3’，下游引物Piscidin-R为5’-TGTCGGTTCTCCCAAGC-3’。
4.根据权利要求2所述的一种海马应激响应的评价方法，其特征在于，所述IL-1β因子的检测方法为荧光定量PCR分析法，使用的上游引物IL-1β-F为5’-CAAGCACAACCCTAACCACA-
3’，下游引物IL-1β-R为5’-GAGACCTCCAGGCTCAATCC-3’；
所述IL-1βreceptor因子的检测方法为荧光定量PCR分析法，使用上游引物IL-1βreceptor-F为5’-CACGTCAGGTTGCTTCAAGC-3’，
下游引物IL-1βreceptor-R为5’-GTCACGCCTACTGTGAGGAC-3’；
所述IL-2因子的检测方法为荧光定量PCR分析法，使用的上游引物IL-2-F为5’-ACTCGCTCCACTGGCTTCC-3’，下游引物IL-2-R为5’-CCCTGCTCTGTGCTCCTCA-3’；
所述IL-10因子的检测方法为荧光定量PCR分析法，使用的上游引物IL-10-F为5’-TCTCTTCCTCATAAACGACA-3’，下游引物IL-10-R为5’-CACCCAATAAAAACACACTG-3’；
所述IFN因子的检测方法为荧光定量PCR分析法，使用的上游引物IFN-F为5’-GAGTGACAGGTGTCTGTCTCTGC-3’，下游引物IFN-R为5’-TCCTCCTTCTGTCTGTGCATGAC-3’；
所述TNF-α因子的检测方法为荧光定量PCR分析法，使用的上游引物TNF-α-F为5’-TGCCAGCACAGCAGTTCG-3’，下游引物TNF-α-R为5’-TTGCCGCCGTCCGTTT-3’；
所述TLR5因子的检测方法为荧光定量PCR分析法，使用的上游引物TLR5-F为5’-CAGGAAGTTGGTGCTGGGTT-3’，下游引物TLR5-R为5’-ATTGAGTCGGTTTTGAGAGA-3’。
一种海马应激响应的评价体系及评价方法
技术领域
背景技术
发明内容
所述26个指标的症状区间及对应的得分情况分别为：所述体重>3.8g得0分，体重在
3.7-3.8g之间得1分，体重在3.6-3.7g之间得2分，体重＜3.6g得3分；所述体长正常得0分，体长中速得1分，体长低速得2分，体长停滞得3分；所述肛门炎症严重程度为程度正常得0分，程度轻微得1分，程度中等得2分，程度严重得3分；所述摄食状态为可以自主捕食漂浮的糠虾得0分，捕食能力稍弱但可以自主寻找食物得1分，捕食能力严重减弱只吃漂浮到嘴边的食物得2分，捕食能力丧失得4分；所述腹水严重程度为正常得0分，轻微得1分，中等得2分，严重得3分；所述杯状细胞数量为少量得0分，微量得1分，中等得2分，大量得3分；所述炎症细胞数量为少量得0分，微量得1分，中等得2分，大量得3分；所述Hepcidin抗菌肽基因为
0-1得1分，1-2得2分，2-4得3分，大于4得4分；所述Leap基因为0-1得1分，1-2得2分，2-4得3分，大于4得4分；所述Lysozyme基因为0-1得1分，1-2得2分，2-4得3分，大于4得4分；所述Piscidin基因为0-1得1分，1-2得2分，2-4得3分，大于4得4分；所述IL-1β因子为0-1得1分，
1-2得2分，2-4得3分，大于4得4分；所述IL-1β receptor因子为0-1得1分，1-2得2分，2-4得3分，大于4得4分；所述IL-2因子为0-1得1分，1-2得2分，2-4得3分，大于4得4分；所述IL-10因子为0-1得1分，1-2得2分，2-4得3分，大于4得4分；所述IFN因子为0-1得1分，1-2得2分，2-4得3分，大于4得4分；所述TNF-α因子为0-1得1分，1-2得2分，2-4得3分，大于4得4分；所述TLR5因子为0-1得1分，1-2得2分，2-4得3分，大于4得4分；所述白细胞为0-60得1分，60-120得2分，120-180得3分，大于180得4分；所述中性粒细胞为0-0.4得1分，0.4-0.8得2分，0.8-
1.2得3分，大于1.2得4分；所述淋巴细胞为0-50得1分，50-100得2分，100-150得3分，大于
150得4分；所述红细胞压积为0-10得1分，10-20得2分，20-30得3分，大于30得4分；所述血小板数为0-50得1分，50-70得2分，70-100得3分，大于100得4分；所述血小板压积为0-0.04得1分，0.04-0.08得2分，0.08-0.1得3分，大于0.1得4分；所述中间细胞为0-0.2得1分，0.2-0.8得2分，0.8-1.5得3分，大于1.5得4分；所述中间细胞比率为0-0.5得1分，0.5-1得2分，1-1.5得3分，大于1.5得4分；
所述总分是指所述26个指标得分的总和；
所述评价结论是指：当所述总分为30-45分，海马应激响应程度为正常（+）；当所述总分为45-60分，海马应激响应程度为轻微（++）；当所述总分为60-75分，海马应激响应程度为中度（+++）；当所述总分为75-90分，海马应激响应程度为较重（++++）；当所述总分为>90分，海马应激响应程度为重度（+++++）
一种海马应激响应的评价方法是根据前述的评价体系对海马应激响应进行评价，具体包括以下步骤：
（1） 分别对海马样本进行体重、体长、肛门炎症严重程度、摄食状态、腹水、白细胞、中性粒细胞、淋巴细胞、红细胞压积、血小板数、血小板压积、中间细胞、中间细胞比率、杯状细胞数量、炎症细胞数量，Hepcidin基因、Leap基因、Lysozyme基因、Piscidin基因、IL-1β因子、IL-1βreceptor因子、IL-2因子、IL-10因子、IFN因子、TNF-α因子、TLR5因子，共26个指标的检测，并根据检测结果分别确定所述26个指标的症状区间；
（2） 根据所述26个指标的症状区间，分别确定所述症状区间对应的得分，之后将26个指标的得分相加，得到所述海马样本的总分，之后根据所述总分对所述海马样本的应激响应进行评价，确定海马应激响应程度为正常、轻微、中度、较重或重度。
ACACGACTGGAGA-3’；所述Piscidin基因的检测方法为荧光定量PCR分析法，使用的上游引物Piscidin-F为5’-CTGGTCACGCTCTTCCTG-3’，下游引物Piscidin-R为5’-TGTCGGTTCTCCCAAGC-3’。
TCAAGC-3’，下游引物IL-1βreceptor-R为5’-GTCACGCCTACTGTGAGGAC-3’；
所述IL-2因子的检测方法为荧光定量PCR分析法，使用的上游引物IL-2-F为5’-ACTCGCTCCACTGGCTTCC-3’，下游引物IL-2-R为5’-CCCTGCTCTGTGC
TCCTCA-3’；所述IL-10因子的检测方法为荧光定量PCR分析法，使用的上游引物IL-10-F为5’-TCTCTTCCTCATAAACGACA-3’，下游引物IL-10-R为5’-CACCCAATAAAAACACACTG-3’；所述IFN因子的检测方法为荧光定量PCR分析法，使用的上游引物IFN-F为5’-
GAGTGACAGGTGTCTGTCTCTGC-3’，下游引物IFN-R为5’-TCCTCCTTCTGTCTGTGCATGAC-3’；所述TNF-α因子的检测方法为荧光定量PCR分析法，使用的上游引物TNF-α-F为5’-TGCCAGCACAGCAGTTCG-3’，下游引物TNF-α-R为5’-TTGCCGCCGTCC
GTTT-3’；所述TLR5因子的检测方法为荧光定量PCR分析法，使用的上游引物TLR5-F为
5’-CAGGAAGTTGGTGCTGGGTT-3’，下游引物TLR5-R为5’-ATTGAGTCGGTTTTGAGAGA-3’。
图3是本发明实施例1中不同取样时间应激响应后海马肠道免疫组化分析结果图；
图4是本发明实施例1中不同取样时间不同组别应激响应后海马血液免疫指标变化图；
图5是本发明实施例1中不同取样时间不同组别应激响应后海马肠道抗菌肽基因指标变化图；
图6是本发明实施例1中不同取样时间不同组别应激响应后海马肠道组织免疫因子指标变化图。
具体实施方式
0.037）cm。将其分为四组，且雌雄分开培养。以冷冻的糠虾作为食物，每天饲喂三次，每次饲喂两小时后将残留的食物残渣和粪便吸出。
肠道样品固定进行免疫组化检测和分析，结果结果见表2和如图3。结果显示：肠道组织中的杯状细胞数量在应激第1天处于下降状态，并在第14天达到最大值；炎症细胞数量在处理后第7天达到最大值，其后慢慢恢复，第21天数量与对照组数量一致。
对海马的血细胞指标进行检测，结果见表3和图4。结果显示，应激响应后，白细胞、红细胞压积、淋巴细胞、血小板数、血小板压积、中间细胞、中间细胞比率、中性粒细胞在处理第七天显著升高（p<0.05），随后恢复。
根据海马的基因组设计需要检测基因的荧光定量分析引物，具体见表4，并进行荧光定量PCR分析，结果见表5、图5和6。结果显示所有11个指标都对肠炎致病菌的产生了应激做出反应，且变化趋势较为一致。
3. 海马应激响应程度的确定
根据上述26个指标的症状区间，分别确定所述症状区间对应的得分，之后将26个指标的得分相加，得到所述海马样本的总分，之后根据所述总分对所述海马样本的应激响应进行评价，确定海马应激响应程度，具体结果见表6。
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