四氢吡啶并噻吩并嘧啶化合物及其使用方法
阅读：900发布：2023-03-09
专利汇可以提供四氢吡啶并噻吩并嘧啶化合物及其使用方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及式(I)化合物，其中的变量如 说明书 中所述，涉及包含这些化合物的药用组合物，涉及制备所述化合物和药用组合物的方法，还涉及使用所述化合物和药用组合物 治疗 或 预防 病症，特别是癌症的方法。，下面是四氢吡啶并噻吩并嘧啶化合物及其使用方法专利的具体信息内容。
1.式(I)化合物或其药学上可接受的盐
其中
m为0，1，或2；
n为0，1，2，或3；
q为0或1；
1
R 表示H、(C1-C4)烷基或卤素；
2
R 选自H、-CN、卤素、(C1-C4)烷基、-O(C1-C4)烷基、(C2-C4)烯基，和(C2-C4)炔基；
3
R 选自H、卤素、-CN、(C1-C4)烷基、乙炔基、炔丙基，和*-O(CH2)pAr，其中p为0，1，或2，且Ar表示苯基、吡啶基、噻唑基、苯硫基，或吡嗪基，且其中Ar任选具有1或2个选自(C1-C4)烷基和卤素的取代基；或
2 3
R 和R 可以结合，并且与它们连着的碳原子一起，形成稠合的五元或六元的饱和或不
2 3
饱和的碳环，或者形成稠合的杂环，其中结合的R 和R 基团用式
表示，其中Ar’和Ar”各自表示苯基、吡啶基、噻唑基、噻吩基，或吡嗪基，且其中Ar’和Ar”各自任选具有1或2个选自(C1-C4)烷基和卤素的取代基；
4
R 选自H、-CN、(C1-C4)烷基、-O(C1-C4)烷基、卤素、(C2-C4)烯基，和(C2-C4)炔基；
5
R 表示H或卤素；
7
当n为0时，R 为H；
7
当n为1、2，或3时，R 表示：
H；
羟基；
12 13
-NR R ，其中
12
R 表示H或(C1-C6)烷基，其任选具有1或2个羟基或者单-或二-((C1-C4)烷基)氨基基团；且
13
R 表示H、(C1-C6)烷基，或(C3-C6)环烷基，所述烷基和环烷基任选具有1或2个羟基或者单-或二-((C1-C4)烷基)氨基基团；
14
其中R 为羟基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基，或者单-或二-((C1-C4)
烷基)氨基，而每个烷基取代基任选具有羟基取代基；
其任选具有1或2个羟基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基，或者单-或
二-((C1-C4)烷基)氨基取代基，而每个烷基取代基任选具有羟基取代基，且其中r为0、1，或2；
其任选具有1或2个(C1-C4)烷基取代基，而每个烷基取代基任选具有羟
基取代基，且其中
15
X表示O、S(O)s，或NR ，其中s为0、1，或2；且
15
R 表示(C1-C4)烷基；
或者
7 9
当n＝2时，R 和R 可以结合，并且与它们连着的碳原子和介于其间的碳原子一起，形
16
成结构 的环，其中R 表示(C1-C4)烷基；
8
R 表示卤素、羟基，或(C1-C4)烷基；
9
R 表示H或-CH2-Y，其中Y为单-或二-((C1-C4)烷基)氨基，或
10
R 表示H；
或者
9 10
R 和R 可以连在一起形成键，从而形成了炔键。
2.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中m为0。
3.权利要求2的化合物或其药学上可接受的盐，其中n为1。
4.权利要求3的化合物或其药学上可接受的盐，其中q为0。
5.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中
1
R 为氢或氟；
2
R 选自H、-CN、卤素、(C1-C4)烷基，和(C2-C4)炔基；
3
R 选自H、卤素，和*-O(CH2)pAr，其中Ar为苯基、吡啶基，或吡嗪基，且其中Ar可任选被
1或2个卤素取代，且其中p为0或1；
4
R 选自H、-CN和卤素；
5
R 为氢；
7 12 13
R 为-NR R 其中
12
R 表示H或(C1-C6)烷基；且
13
R 表示H或(C1-C6)烷基。
6.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中
1
R 为氢；
2
R 选自H、卤素，和乙炔基；
3
R 选自H、卤素、-CN、甲基，和*-O(CH2)pAr，其中Ar为苯基、吡啶基，或吡嗪基，且其中Ar可任选被0、1或2个卤素取代，且其中p为0或1；
4
R 选自H、卤素，和(C1-C4)烷基；
5
R 为氢；且
7
R 为单-或二-((C1-C4)烷基)氨基基团。
7.权利要求6的化合物或其药学上可接受的盐，其中
2
R 为乙炔基；
3
R 选自H、卤素，和*-O(CH2)pAr，其中Ar为苯基、吡啶基，或吡嗪基，且其中Ar可任选被
0、1或2个卤素取代，且其中p为0或1；且
4
R 为氢。
8.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中
2
R 为卤素；且
3
R 选自H、卤素，和*-O(CH2)pAr，其中Ar为苯基、吡啶基，或吡嗪基，且其中Ar可任选被
0、1或2个卤素取代，且其中p为0或1。
3
9.权利要求8的化合物或其药学上可接受的盐，其中R 为卤素。
10.选自以下的化合物：
N-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)苯基]-7-[(2E)-4-(二乙基氨基)丁-2-烯酰
基]-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′：4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺；
N-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)苯基]-7-[(2E)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰
基]-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′：4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺；
N-(3-氯-4-氟苯基)-7-[(2E)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰基]-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′：4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺；
N-(3-氯-4-氟苯基)-7-[(2E)-4-(二乙基氨基)丁-2-烯酰基]-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′：4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺；
7-[(2E)-4-(二乙基氨基)丁-2-烯酰基]-N-(3-乙炔基苯基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′：4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺；
7-[(2E)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰基]-N-(3-乙炔基苯基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′：4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺；
N-(3-氯-4-氟苯基)-7-{(2E)-4-[异丙基(甲基)氨基]丁-2-烯酰基}-5，6，7，
8-四氢吡啶并[4′，3′：4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺；
N-(3-氯-4-氟苯基)-7-{(2E)-4-[乙基(异丙基)氨基]丁-2-烯酰基}-5，6，7，
8-四氢吡啶并[4′，3′：4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺；
N-(3，4-二氯苯基)-7-[(2E)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰基]-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′：4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺；和
N-(3，4-二氯苯基)-7-{(2E)-4-[异丙基(甲基)氨基]丁-2-烯酰基}-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′：4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺。
11.制备权利要求1中所述化合物的方法，其包括在制备权利要求1所述化合物的条件下，
(i)式(7)化合物
1 5 8
其中R 至R、R、m和q具有权利要求1中所述的含义，
与式(10)化合物反应
7 9 10
其中R、R 和R 和n具有权利要求1中所述的含义，且X为羟基、氯或溴，或者(ii)式(9)化合物
1 5 8 10
其中R 至R、R 至R 、m、n和q具有权利要求1中所述的含义，且LG为离去基团，与
7 7
式R-H的化合物反应，其中R 具有权利要求1中所述的含义；或者
(iii)式(14)化合物
其中R7至R10、m和n具有权利要求1中所述的含义，且LG为离去基团，
与式(15)化合物进行反应
1 5
其中R 至R 和q具有权利要求1中所述的含义，且LG为离去基团。
12.一种药用组合物，其包含权利要求1所述的化合物和药学上可接受的载体。
13.权利要求12的药用组合物，其形式适于静脉内给药。
14.制备药用组合物的方法，该方法包括将至少一种权利要求1所述的化合物和至少一种药学上可接受的载体组合，并将所得组合物制成适当给药形式。
15.权利要求1所述化合物的用途，用于生产治疗或预防细胞增殖病症的药用组合物。
16.权利要求15的用途，其中所述细胞增殖病症是癌症。
17.式(7)化合物
其中
m为0，1，或2；
q为0或1；
R1表示H、(C1-C4)烷基、或卤素；
R2选自H、-CN、卤素、(C1-C4)烷基、-O(C1-C4)烷基、(C2-C4)烯基，和(C2-C4)炔基；
R3选自H、卤素、-CN、(C1-C4)烷基、乙炔基、炔丙基，和*-O(CH2)pAr，其中p为0，1，或2，且Ar表示苯基、吡啶基、噻唑基、苯硫基，或吡嗪基，且其中Ar任选具有1或2个选自(C1-C4)烷基和卤素的取代基；或者
R2和R3可以结合，并且与它们连着的碳原子一起，形成稠合的五元或六元的饱和或不饱和的碳环，或者形成稠合的杂环，其中结合的R2和R3基团用式
表示，其中Ar’和Ar”各自表示苯基、吡啶基、噻唑基、噻吩基，或吡嗪基，且其中Ar’和Ar”各自任选具有1或2个选自(C1-C4)烷基和卤素的取代基；
4
R 选自H、-CN、(C1-C4)烷基、-O(C1-C4)烷基、卤素、(C2-C4)烯基，和(C2-C4)炔基；
5
R 表示H或卤素；且
8
R 表示卤素、羟基，或(C1-C4)烷基。
18.式(9)化合物
其中
m为0，1，或2；
n为0，1，2，或3；
q为0或1；
R1表示H、(C1-C4)烷基、或卤素；
R2选自H、-CN、卤素、(C1-C4)烷基、-O(C1-C4)烷基、(C2-C4)烯基，和(C2-C4)炔基；
R3选自H、卤素、-CN、(C1-C4)烷基、乙炔基、炔丙基，和*-O(CH2)pAr，其中p为0，1，或2，且Ar表示苯基、吡啶基、噻唑基、苯硫基，或吡嗪基，且其中Ar任选具有1或2个选自(C1-C4)烷基和卤素的取代基；或者
R2和R3可以结合，并且与它们连着的碳原子一起，形成稠合的五元或六元的饱和或不
2 3
饱和的碳环，或者形成稠合的杂环，其中结合的R 和R 基团用式
表示，其中Ar’和Ar”各自表示苯基、吡啶基、噻唑基、噻吩基，或吡嗪基，且其中Ar’和Ar”各自任选具有1或2个选自(C1-C4)烷基和卤素的取代基；
R4选自H、-CN、(C1-C4)烷基、-O(C1-C4)烷基、卤素、(C2-C4)烯基，和(C2-C4)炔基；
R5表示H或卤素；
R8表示卤素、羟基，或(C1-C4)烷基；
R9表示H或-CH2-Y，其中Y为单-或二-((C1-C4)烷基)氨基，或
R10表示H；
或者
R9和R10可以连在一起形成键，从而形成了炔键；且
LG为离去基团。
19.式(14)化合物：
其中
m为0，1，或2；
n为0，1，2，或3；
7
当n为0时，R 为H；
7
当n为1、2，或3时，R 表示：
H；
羟基；
12 13
-NR R ，其中
12
R 表示H或(C1-C6)烷基，其任选具有1或2个羟基或者单-或二-((C1-C4)烷基)氨基基团；且
13
R 表示H、(C1-C6)烷基，或(C3-C6)环烷基，所述烷基和环烷基任选具有1或2个羟基或者单-或二-((C1-C4)烷基)氨基基团；
14
其中R 为羟基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基，或者单-或二-((C1-C4)
烷基)氨基，而每个烷基取代基任选具有羟基取代基；
其任选具有1或2个羟基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基，或者单-或
二-((C1-C4)烷基)氨基取代基，而每个烷基取代基任选具有羟基取代基，且其中r为0、1，或2；
其任选具有1或2个(C1-C4)烷基取代基，而每个烷基取代基任选具有羟
基取代基，且其中
15
X表示O、S(O)s，或NR ，其中s为0、1，或2；且
15
R 表示(C1-C4)烷基；
或者
7 9
当n＝2时，R 和R 可以结合，并且与它们连着的碳原子和介于其间的碳原子一起，形成结构 的环，其中R16表示(C1-C4)烷基；
R8表示卤素、羟基，或(C1-C4)烷基；
R9表示H或-CH2-Y，其中Y为单-或二-((C1-C4)烷基)氨基，或
10
R 表示H；
或者
9 10
R 和R 可以连在一起形成键，从而形成了炔键；
且
LG为离去基团。
20.有效量的权利要求1所述化合物在制备用于治疗需要这种治疗的患者的细胞增殖病症的药物中的用途。
21.权利要求20的用途，其中所述细胞增殖病症是癌症。
四氢吡啶并噻吩并嘧啶化合物及其使用方法
[0001] 相关申请
[0003] 发明领域
[0005] 发明背景
[0006] 癌症是由于组织异常生长而导致的疾病。某些癌症可能会侵入局部组织，并且可能会转移至远处器官。这种疾病可以在多个不同的器官、组织和细胞类型中出现。因此，术语“癌症”指逾千种不同疾病的集合。
[0007] 在2002年，全球有超过440万人被诊断患有乳癌、结肠癌、卵巢癌、肺癌或前列腺癌，超过250万人死于这些毁灭性的疾病(Globocan 2002年报道)。仅在美国，预计在2005年有超过125万个新病例和超过500,000个病例死于癌症。这些新病例中的大多数会是结肠癌(～100,000)、肺癌(～170,000)、乳癌(～210,000)和前列腺癌(～230,000)。预测在未来10年中，癌症的发病率和流行性将增长约15％，反映平均生长率为1.4％(American Cancer Society美国癌症协会，Cancer Facts and Figures癌症准确情报，2005)。
[0008] 癌症的治疗主要有两类，根治性或缓解性。癌症的主要根治疗法是手术和放射治疗。只有在早期局部阶段发现癌症时，这些方法通常才会成功。一旦疾病已发展为局部晚期癌症或转移性癌症，这些疗法就不那么有效了，而治疗的目的在于缓解症状和维持良好的生活质量。在任何一种治疗方式中最普遍的治疗方案是联合手术、放射疗法和/或化学疗法。
[0009] 细胞毒性药物(也称细胞减数剂)用于治疗癌症，或者作为根治疗法或者目的在于延长生命或缓解症状。细胞毒素剂可以联合放射疗法和/或手术，作为新-辅助疗法(初始的化学疗法旨在收缩肿瘤，从而使如手术和放射的局部治疗更加有效)或者作为辅助化学疗法(用于联合治疗或术后治疗和/或局部治疗)。不同药物的联合通常比单一药物更加有效：它们可以有利地增强某些肿瘤的反应、减少耐药性的发生和/或增大存活率。正是由于这些原因，联合细胞毒素方案在许多癌症治疗中的使用非常普遍。
[0010] 当前使用中的细胞毒素剂采用不同的机制以阻断增殖并促使细胞死亡。基于其作用机制，它们通常可分为以下几类：微管调节剂，其干扰微管的聚合或解聚(如，多西紫杉醇、紫杉醇、长春碱、长春瑞滨)；抗代谢药，包括核苷类似物和关键细胞代谢途径的其它抑制剂(例如，卡培他滨、吉西他滨、甲氨蝶呤)；直接与DNA相互作用的药物(例如，卡铂、环磷酰胺)；蒽环DNA相互螯合剂(interchalators)，其干扰DNA聚合酶和拓扑异构酶II(例如，阿霉素、表柔比星)；以及拓扑异构酶II和I酶活性的非蒽环抑制剂(例如，托泊替康、依立替康和依托泊苷)。尽管不同的细胞毒素药物通过不同的作用机制发挥作用，但通常都会使肿瘤发生至少短暂的收缩。
[0011] 细胞毒素剂仍将是肿瘤学家对抗癌症用的武器军械库中的重要组成。目前进行新近临床试验I期和II期的大多数药物，集中于已知的作用机制(微管蛋白结合剂、抗代谢药、DNA处理)，和已知的药物品种(例如，紫杉醇类或喜树碱类)的不断改进。最近出现了少数基于新机制的细胞毒素药物。这些细胞毒素剂的作用方式包括抑制涉及DNA修饰的酶(例如，组蛋白去乙酰化酶(HDAC))、抑制涉及微管运动和细胞周期进程的蛋白质(例如，运动蛋白、aurora激酶)，和细胞凋亡途径的新诱导剂(例如，bcl-2抑制剂)。
[0012] 尽管细胞毒素剂仍处于治疗晚期实体瘤患者的方法前沿，但是其有限的功效和狭窄的治疗指数导致了显著的副作用。此外，对癌症的基础研究已指向基于肿瘤进程中心特殊机制的较低毒性疗法的研究。这种研究可能会产生有效的治疗，改善癌症患者的生活质量。因此，出现了新的一类治疗药物，称作细胞抑制剂。细胞抑制剂直接作用于肿瘤稳定性，通常伴随更有限且较不加重的副作用情况。这些药物的开发源于对涉及癌症进程的特殊遗传改变的确认，和对肿瘤中已激活蛋白(例如，酪氨酸激酶和丝氨酸/苏氨酸激酶)的理解。
[0013] 除直接抑制肿瘤靶细胞之外，细胞抑制药物正被开发为阻断肿瘤血管生成的过程。该过程供给肿瘤现有的和新的血管，以支持持续的营养，从而帮助促进肿瘤生长。包括血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)、成纤维生长因子1(FGFR1)和Tie2的关键酪氨酸激酶受体已显示可调节血管生成，且已作为极具吸引力的药物目标。
[0014] 在过去5年中，已批准了几种作用于不同靶分子的新药。伊马替尼(Imatinib)是Ab1酪氨酸激酶的抑制剂，并且是被批准用于治疗慢性骨髓性白血病(CML)的第一个小分子酪氨酸激酶抑制剂。基于伊马替尼对抗在胃肠道基质瘤(GIST)中激活的受体酪氨酸激酶c-KIT的额外活性，后来批准其用于治疗晚期GIST。Erlotinib，一种小分子的EGFR抑制剂，在2004年末被批准用于治疗非小细胞肺癌(NSCLC)。Sorafenib，一种多激酶(包括c-Raf和VEGFR2)抑制剂，在2005年12月被批准用于治疗晚期肾细胞癌(RCC)。最近在2006年1月，Sunitinib，一种多激酶抑制剂被批准用于治疗难控性或耐药性GIST和晚期RCC。这些小分子抑制剂表明靶向方法可成功用于治疗不同类型的癌症。
[0015] 发明概述
[0016] 在一个方面，本发明提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐
[0017]
[0018] 其中
[0019] m为0，1，或2；
[0020] n为0，1，2，或3；
[0021] q为0或1；
[0022] R1表示H、(C1-C4)烷基、或卤素；
[0023] R2选自H、-CN、卤素、(C1-C4)烷基、-O(C1-C4)烷基、(C2-C4)烯基，和(C2-C4)炔基；
[0024] R3选自H、卤素、-CN、(C1-C4)烷基、乙炔基、炔丙基，和*-O(CH2)pAr，其中p为0，1，或2，Ar表示苯基、吡啶基、噻唑基、苯硫基(thiophenyl)，或吡嗪基，且其中Ar任选具有1或2个选自(C1-C4)烷基和卤素的取代基；或
[0025] R2和R3可以结合，并且与它们连着的碳原子一起，形成稠合的五元或六元的饱和或不饱和的碳环，或者形成稠合的杂环，其中结合的R2和R3基团用式 或表示，其中Ar’和Ar”各自表示苯基、吡啶基、噻唑基、噻吩基(thienyl)，或吡
嗪基，且其中Ar’和Ar”各自任选具有1或2个选自(C1-C4)烷基和卤素的取代基；
嗪基，且其中Ar’和Ar”各自任选具有1或2个选自(C1-C4)烷基和卤素的取代基；
[0026] R4选自H、-CN、(C1-C4)烷基、-O(C1-C4)烷基、卤素、(C2-C4)烯基，和(C2-C4)炔基；
[0027] R5表示H或卤素；
[0028] 当n为0时，R7为H；
[0029] 当n为1、2，或3时，R7表示：
[0030] H；
[0031] 羟基；
[0032] -NR12R13，其中
[0033] R12表示H或(C1-C6)烷基，其任选具有1或2个羟基或者单-或二-((C1-C4)烷基)氨基基团；且
[0034] R13表示H、(C1-C6)烷基，或(C3-C6)环烷基，所述烷基和环烷基任选具有1或2个羟基或者单-或二-((C1-C4)烷基)氨基基团；
[0036] 其任选具有1或2个羟基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基，或者单-或二-((C1-C4)烷基)氨基取代基，而每个烷基取代基任选具有羟基取代基，且其中r为0、1，或2；
[0037] 其任选具有1或2个(C1-C4)烷基取代基，而每个烷基取代基任选具有羟基取代基，且其中
[0038] X表示O、S(O)s，或NR15，其中s为0、1，或2；且
[0039] R15表示(C1-C4)烷基；
[0040]
[0041] 或者
[0042] 当n＝2时，R7和R9可以结合，并且与它们连着的碳原子和介于其间的碳原子一16
起，形成结构 的环，其中R 表示(C1-C4)烷基；
起，形成结构 的环，其中R 表示(C1-C4)烷基；
[0043] R8表示卤素、羟基，或(C1-C4)烷基；
[0044] R9表示H或-CH2-Y，其中Y为单-或二-((C1-C4)烷基)氨基，或
[0045] R10表示H；
[0046] 或者
[0047] R9和R10可以连在一起形成键，形成炔键(acetylenic linkage)。
[0048] 在某些实施方式中，m为0。在某些实施方式中，n为1。在某些实施方式中，q为0。
[0049] 在某些实施方式中，R1为氢或氟；R2选自H、-CN、卤素、(C1-C4)烷基，和(C2-C4)炔3 *
基；R 选自H、卤素，和 -O(CH2)pAr，其中Ar为苯基、吡啶基，或吡嗪基，且其中Ar可任选被
4 5 7 12 13 12
1或2个卤素取代，且其中p为0或1；R 选自H、-CN和卤素；R 为氢；R 为-NR R 其中R
13
表示H或(C1-C6)烷基；且R 表示H或(C1-C6)烷基。
基；R 选自H、卤素，和 -O(CH2)pAr，其中Ar为苯基、吡啶基，或吡嗪基，且其中Ar可任选被
4 5 7 12 13 12
1或2个卤素取代，且其中p为0或1；R 选自H、-CN和卤素；R 为氢；R 为-NR R 其中R
13
表示H或(C1-C6)烷基；且R 表示H或(C1-C6)烷基。
[0050] 在某些实施方式中，R1为氢；R2选自H、卤素，和乙炔基；R3选自H、卤素、-CN、甲基，*和 -O(CH2)pAr，其中Ar为苯基、吡啶基，或吡嗪基，且其中Ar可任选被0、1或2个卤素取
4 5 7
代，且其中p为0或1；R 选自H、卤素，和(C1-C4)烷基；R 为氢；且R 为单-或二-((C1-C4)
2 3 *
烷基)氨基基团。在某些实施方式中，R 为乙炔基；R 选自H、卤素，和 -O(CH2)pAr，其中Ar为苯基、吡啶基，或吡嗪基，且其中Ar可任选被0、1或2个卤素取代，且其中p为0或1；且
4
R 为氢。
4 5 7
代，且其中p为0或1；R 选自H、卤素，和(C1-C4)烷基；R 为氢；且R 为单-或二-((C1-C4)
2 3 *
烷基)氨基基团。在某些实施方式中，R 为乙炔基；R 选自H、卤素，和 -O(CH2)pAr，其中Ar为苯基、吡啶基，或吡嗪基，且其中Ar可任选被0、1或2个卤素取代，且其中p为0或1；且
4
R 为氢。
[0051] 在某些实施方式中，R2为卤素；R3选自H、卤素，和*-O(CH2)pAr，其中Ar为苯基、吡啶基，或吡嗪基，且其中Ar可任选被0、1或2个卤素取代，且其中p为0或1。在某些实施3
方式中，R 为卤素。
方式中，R 为卤素。
[0052] 在另一方面，本发明提供了选自以下的化合物：N-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)苯基]-7-[(2E)-4-(二乙基氨基)丁-2-烯酰基]-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺；N-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)苯基]-7-[(2E)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰基]-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺；N-(3-氯-4-氟苯基)-7-[(2E)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰基]-5，6，7，8-四氢吡啶
并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺；N-(3-氯-4-氟苯基)-7-[(2E)-4-(二乙基氨基)丁-2-烯酰基]-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺；7-[(2E)-4-(二乙基氨基)丁-2-烯酰基]-N-(3-乙炔基苯基)-5，6，7，
8-四氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺；7-[(2E)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰基]-N-(3-乙炔基苯基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，
3-d]嘧啶-4-胺；N-(3-氯-4-氟苯基)-7-{(2E)-4-[异丙基(甲基)氨基]丁-2-烯酰
基}-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺；N-(3-氯-4-氟苯基)-7-{(2E)-4-[乙基(异丙基)氨基]丁-2-烯酰基}-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，
3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺；N-(3，4-二氯苯基)-7-[(2E)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰基]-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺；和N-(3，
4-二氯苯基)-7-{(2E)-4-[异丙基(甲基)氨基]丁-2-烯酰基}-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺；
并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺；N-(3-氯-4-氟苯基)-7-[(2E)-4-(二乙基氨基)丁-2-烯酰基]-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺；7-[(2E)-4-(二乙基氨基)丁-2-烯酰基]-N-(3-乙炔基苯基)-5，6，7，
8-四氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺；7-[(2E)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰基]-N-(3-乙炔基苯基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，
3-d]嘧啶-4-胺；N-(3-氯-4-氟苯基)-7-{(2E)-4-[异丙基(甲基)氨基]丁-2-烯酰
基}-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺；N-(3-氯-4-氟苯基)-7-{(2E)-4-[乙基(异丙基)氨基]丁-2-烯酰基}-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，
3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺；N-(3，4-二氯苯基)-7-[(2E)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰基]-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺；和N-(3，
4-二氯苯基)-7-{(2E)-4-[异丙基(甲基)氨基]丁-2-烯酰基}-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺；
[0053] 在另一方面，本发明提供了制备式(1)化合物的方法，其包括在制备式(1)化合物的条件下，
[0054] (i)式(7)化合物
[0055]1 5 8
[0056] 其中R 至R、R、m和q的意义如上所述，与式(10)化合物反应
[0057]7 9 10
[0058] 其中R、R 和R 和n的意义如上所述，且X为羟基、氯或溴，或者
[0059] (ii)式(9)化合物
[0060]
[0061] 其中R1至R5、R8至R10、m、n和q的意义如上所述，且LG为离去基团，与式R7-H的7
化合物反应，其中R 的意义如上所述；或者
化合物反应，其中R 的意义如上所述；或者
[0062] (iii)式(14)化合物
[0063]
[0064] 其中R7至R10、m和n的意义如上所述，且LG为离去基团，与式(15)化合物进行反应
[0065]
[0066] 其中R1至R5、n和q的意义如上所述，且LG为离去基团。
[0067] 在另一方面，本发明提供了包含上述化合物和药学上可接受载体的药用组合物。在某些实施方式中，所述药用组合物以适于静脉内给药的方式提供。
[0068] 在另一方面，本发明提供了制备药用组合物的方法。所述方法包括以下步骤：将至少一种如上所述的化合物和至少一种药学上可接受载体组合，并将所得组合物制成适当的给药形式。
[0069] 在另一方面，本发明提供了如上所述化合物的用途，用于生产治疗或预防细胞增殖病症的药用组合物。在某些实施方式中，所述细胞增殖病症为癌症。
[0070] 在另一方面，本发明提供了式(7)化合物，
[0071]
[0072] 其中
[0073] m为0，1，或2；
[0074] q为0或1；1
[0075] R 表示H、(C1-C4)烷基、或卤素；2
[0076] R 选自H、-CN、卤素、(C1-C4)烷基、-O(C1-C4)烷基、(C2-C4)烯基，和(C2-C4)炔基；3 *
[0077] R 选自H、卤素、-CN、(C1-C4)烷基、乙炔基、炔丙基，和 -O(CH2)pAr，其中p为0，1，或2，Ar表示苯基、吡啶基、噻唑基、苯硫基，或吡嗪基，且其中Ar任选具有1或2个选自(C1-C4)烷基和卤素的取代基；或者
2 3
2 3
[0078] R 和R 可以结合，并且与它们连着的碳原子一起，形成稠合的五元或六元的饱和或不饱和的碳环，或者形成稠合的杂环，其中结合的R2和R3基团用式 或表示，其中Ar’和Ar”各自表示苯基、吡啶基、噻唑基、噻吩基，或吡嗪基，且其中Ar’和Ar”各自任选具有1或2个选自(C1-C4)烷基和卤素的取代基；
[0079] R4选自H、-CN、(C1-C4)烷基、-O(C1-C4)烷基、卤素、(C2-C4)烯基，和(C2-C4)炔基；
[0080] R5表示H或卤素；和
[0081] R8表示卤素、羟基，或(C1-C4)烷基。
[0082] 在另一方面，本发明提供了式(9)化合物，
[0083]
[0084] 其中
[0085] m为0，1，或2；
[0086] n为0，1，2，或3；
[0087] q为0或1；
[0088] R1表示H、(C1-C4)烷基、或卤素；
[0089] R2选自H、-CN、卤素、(C1-C4)烷基、-O(C1-C4)烷基、(C2-C4)烯基，和(C2-C4)炔基；
[0090] R3选自H、卤素、-CN、(C1-C4)烷基、乙炔基、炔丙基，和*-O(CH2)pAr，其中p为0，1，或2，Ar表示苯基、吡啶基、噻唑基、苯硫基，或吡嗪基，且其中Ar任选具有1或2个选自(C1-C4)烷基和卤素的取代基；或者
[0091] R2和R3可以结合，并且与它们连着的碳原子一起，形成稠合的五元或六元的饱2 3
和或不饱和的碳环，或者形成稠合的杂环，其中结合的R 和R 基团用式 或
表示，其中Ar’和Ar”各自表示苯基、吡啶基、噻唑基、噻吩基，或吡嗪基，且其中Ar’和Ar”各自任选具有1或2个选自(C1-C4)烷基和卤素的取代基；
和或不饱和的碳环，或者形成稠合的杂环，其中结合的R 和R 基团用式 或
表示，其中Ar’和Ar”各自表示苯基、吡啶基、噻唑基、噻吩基，或吡嗪基，且其中Ar’和Ar”各自任选具有1或2个选自(C1-C4)烷基和卤素的取代基；
[0092] R4选自H、-CN、(C1-C4)烷基、-O(C1-C4)烷基、卤素、(C2-C4)烯基，和(C2-C4)炔基；
[0093] R5表示H或卤素；
[0094] R8表示卤素、羟基，或(C1-C4)烷基；
[0095] R9表示H或-CH2-Y，其中Y为单-或二-((C1-C4)烷基)氨基，或
[0096] R10表示H；
[0097] 或者
[0098] R9和R10可以连在一起形成键，形成炔键(acetylenic linkage)；
[0099] 和
[0100] LG为离去基团。
[0101] 在另一方面，本发明提供了式(14)化合物，
[0102]
[0103] 其中
[0104] m为0，1，或2；
[0105] n为0，1，2，或3；q为0或1；
[0106] 当n为0时，R7为H；
[0107] 当n为1、2，或3时，R7表示：
[0108] H；
[0109] 羟基；
[0110] -NR12R13，其中
[0111] R12表示H或(C1-C6)烷基，其任选具有1或2个羟基或者单-或二-((C1-C4)烷基)氨基基团；和
[0112] R13表示H、(C1-C6)烷基，或(C3-C6)环烷基，所述烷基和环烷基任选具有1或2个羟基或者单-或二-((C1-C4)烷基)氨基基团；
[0113] 其中R14为羟基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基，或者单-或二-((C1-C4)烷基)氨基，而每个烷基取代基任选具有羟基取代基；
[0114] 其任选具有1或2个羟基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基，或者单-或二-((C1-C4)烷基)氨基取代基，而每个烷基取代基任选具有羟基取代基，且其中r为0、1，或2；
[0115] 其任选具有1或2个(C1-C4)烷基取代基，而每个烷基取代基任选具有羟基取代基，且其中
[0116] X表示O、S(O)s，或NR15，其中s为0、1，或2；和
[0117] R15表示(C1-C4)烷基；
[0118]
[0119] 或者7 9
[0120] 当n＝2时，R 和R 可以结合，并且与它们连着的碳原子和介于其间的碳原子一起，形成结构 的环，其中R16表示(C1-C4)烷基；
[0121] R8表示卤素、羟基，或(C1-C4)烷基；9
[0122] R 表示H或-CH2-Y，其中Y为单-或二-((C1-C4)烷基)氨基，或
[0123] R10表示H；
[0124] 或者
[0125] R9和R10可以连在一起形成键，形成炔键(acetylenic linkage)；
[0126] 和
[0127] LG为离去基团。
[0128] 在另一个实施方式中，本发明提供了治疗需要这种治疗的患者细胞增殖病症的方法，其包括给予患者有效量的上述化合物。在某些实施方式中，所述细胞增殖病症为癌症。
[0129] 发明详述
[0131] 适于本发明目的的盐，优选为本发明化合物的药学上可接受的盐。例如，见S.M.Berge等，“Pharmaceutical salts(药用盐)”，J.PharmSci.1977，66，1-19。
[0132] 药学上可接受的盐包括矿酸、羧酸和磺酸的酸加成盐，例如，盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐、甲烷磺酸盐、乙烷磺酸盐、甲苯磺酸盐、苯磺酸盐、萘二磺酸盐、乙酸盐、丙酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、苹果酸盐、柠檬酸盐、富马酸盐、马来酸盐和苯甲酸盐。
[0133] 药学上可接受的盐还包括常用碱的盐，例如且优选碱金属盐(例如钠盐和钾盐)、碱土金属盐(例如钙盐和镁盐)和铵盐(来自氨或具有1至16个碳原子的有机胺，例如且优选乙基胺、二乙基胺、三乙基胺、乙基二异丙基胺、单乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二环己基胺、二甲基氨基乙醇、普鲁卡因、二苄胺、N-甲基吗啉、二氢松香胺、精氨酸、赖氨酸、乙二胺和甲基哌啶)。
[0134] 烷基表示通常具有1至6、1至4或1至3个碳原子的直链或支链的烷基，例证性表示甲基、乙基、正-丙基、异丙基、叔-丁基、正-戊基和正-己基。
[0135] 烷基氨基表示具有1或2个(独立选择)烷基取代基的烷基氨基，例证性表示甲基氨基、乙基氨基、正-丙基氨基、异丙基氨基、叔-丁基氨基、正-戊基氨基、正-己基氨基、N，N-二甲基氨基、N，N-二乙基氨基、N-乙基-N-甲基氨基、N-甲基-N-正-丙基氨基、N-异丙基N-正-丙基氨基、N-叔-丁基-N-甲基氨基、N-乙基-N-正-戊基氨基和N-正-己基-N-甲基氨基。用语“单-或二-((C1-C4)烷基)氨基”指具有1或2个(独立选择)C1-C4烷基取代基的烷基氨基。
[0136] 卤素表示氟、氯、溴或碘。
[0137] 化学键旁边的星号*表示分子中的连接点。
[0138] 术语“细胞增殖病症”包括涉及细胞不想要或不可控的增殖的病症。可以使用化合物来抑制、阻断、降低、减少等细胞增殖和/或细胞分裂，和/或产生细胞凋亡。这种方法包括给予需要这种治疗的患者(包括哺乳动物，包括人类)一定量的可有效治疗病症的本发明化合物或其药学上可接受的盐、异构体、多晶型、代谢物、水合物、溶剂化物或酯等。细胞增殖或过度增殖性病症包括但不限于，例如，牛皮癣、瘢痕疙瘩及其它影响皮肤的增生、良性前列腺增生(BPH)、实体瘤，例如乳癌、呼吸道癌、脑癌、生殖器癌、消化道癌、尿道癌、眼癌、肝癌、皮肤癌、头颈癌、甲状腺癌、副甲状腺癌及其远处转移癌。那些病症还包括淋巴瘤、肉瘤和白血病。
[0139] 乳癌的例子包括，但不限于浸润性导管癌、浸润性小叶癌、导管原位癌和小叶原位癌。
[0140] 呼吸道癌的例子包括，但不限于小细胞和非小细胞肺癌，以及支气管腺癌和胸膜肺母细胞瘤。
[0141] 脑癌的例子包括，但不限于脑干和下丘脑(hypophtalmic)神经胶质瘤、小脑和大脑星细胞瘤、成神经管细胞瘤、室鼓膜瘤，以及神经外胚层和松果体瘤。
[0142] 男性生殖器官癌包括，但不限于前列腺癌和睾丸癌。女性生殖器官癌包括，但不限于子宫内膜癌、宫颈癌、卵巢癌、阴道癌和外阴癌，以及子宫肉瘤。消化道癌包括，但不限于肛门癌、结肠癌、结肠直肠癌、食道癌、胆囊癌、胃癌、胰腺癌、直肠癌、小肠癌和唾腺癌。
[0143] 尿道癌包括，但不限于膀胱癌、阴茎癌、肾癌、肾盂癌、输尿管癌、尿道癌和人乳头状肾癌。
[0144] 眼癌包括，但不限于眼内黑色素瘤和视网膜母细胞瘤。
[0145] 肝癌的例子包括，但不限于肝细胞癌(具有或没有纤维板层变异(fibrolamellar variant)的肝细胞癌)、胆管癌(肝内胆管癌)，和混合型肝细胞胆管癌。
[0146] 皮肤癌包括，但不限于鳞状细胞癌、Kaposi′s肉瘤、恶性黑色素瘤、Merkel细胞皮肤癌，和非黑色素皮肤癌。
[0147] 头颈癌包括，但不限于喉癌、下咽癌、鼻咽癌、口咽癌、唇和口腔癌和鳞状细胞癌。淋巴瘤包括，但不限于ADDS-相关的淋巴瘤、非-何杰金(Hodgkin’s)淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、伯基特(Burkitt)淋巴瘤、何杰金(Hodgkin’s)病病和中枢神经系统淋巴瘤。
[0148] 肉瘤包括，但不限于软组织肉瘤、骨肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、淋巴肉瘤和横纹肌肉瘤。
[0149] 白血病包括，但不限于急性骨髓性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性骨髓性白血病和毛细胞白血病。
[0150] 这些病症在人类已有充分表征，但其它动物(包括哺乳动物)也存在相似的病因学，而且可以通过给予本发明的药用组合物来治疗。
[0151] 本文全篇所述的术语“治疗”，是按照惯例使用的，例如，处理或护理受治者，目的在于抵抗、减轻、降低、缓解、改善疾病或病症(例如癌症)的状况。
[0152] 术语“受治者”或“患者”包括能患细胞增殖病症或者能受益于本发明化合物给予的有机体，例如人类和非人类动物。优选人类包括患有或易于患有本文所述细胞增殖病症或相关症状的人类患者。术语“非人类动物”包括脊椎动物，例如哺乳动物(如啮齿动物，例如老鼠)，和非哺乳动物，例如非人类灵长类，例如羊、狗、牛、鸡、两栖动物、爬行动物等。
[0153] 本文全篇，为了简便起见，优选使用单数语言而不是复数语言，但是如果没有另有说明，通常意指包括复数语言。例如，表述“治疗患者疾病的方法，包括给予患者有效量的权利要求1的化合物”指包括同时治疗多于一种的疾病和给予多于一种的权利要求1的化合物。
[0154] 根据其结构，本发明化合物可以立体异构体(对映异构体或非对映异构体)的形式存在。因此，本发明涉及对映异构体或非对映异构体及其各自的混合物。对映异构体或非对映异构体的这些混合物，可用已知方法分离为立体异构单一的组分。此外，某些本发明化合物具有一个或多个双键，或者一个或多个不对称中心。这些化合物的存在方式可以是外消旋体、外消旋体混合物、单一对映体、单个非对映异构体、非对映异构体混合物，以及顺-或反-或者E-或Z-双异构体。这些化合物的所有这些异构体形式，都清楚明白地包含于本发明中。
[0155] 在一个方面，本发明提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐
[0156]
[0157] 其中
[0158] m为0，1，或2；
[0159] n为0，1，2，或3；
[0160] q为0或1；1
[0161] R 表示H、(C1-C4)烷基、或卤素；2
[0162] R 选自H、-CN、卤素、(C1-C4)烷基、-O(C1-C4)烷基、(C2-C4)烯基，和(C2-C4)炔基；3 *
[0163] R 选自H、卤素、-CN、(C1-C4)烷基、乙炔基、炔丙基，和 -O(CH2)pAr，其中p为0，1，或2，Ar表示苯基、吡啶基、噻唑基、苯硫基，或吡嗪基，且其中Ar任选具有1或2个选自(C1-C4)烷基和卤素的取代基；或
2 3
2 3
[0164] R 和R 可以结合，并且与它们连着的碳原子一起，形成稠合的五元或六元的饱2 3
和或不饱和的碳环，或者形成稠合的杂环，其中结合的R 和R 基团用式 或
表示，其中Ar’和Ar”各自表示苯基、吡啶基、噻唑基、噻吩基，或吡嗪基，且其中Ar’和Ar”各自任选具有1或2个选自(C1-C4)烷基和卤素的取代基；
4
和或不饱和的碳环，或者形成稠合的杂环，其中结合的R 和R 基团用式 或
表示，其中Ar’和Ar”各自表示苯基、吡啶基、噻唑基、噻吩基，或吡嗪基，且其中Ar’和Ar”各自任选具有1或2个选自(C1-C4)烷基和卤素的取代基；
4
[0165] R 选自H、-CN、(C1-C4)烷基、-O(C1-C4)烷基、卤素、(C2-C4)烯基，和(C2-C4)炔基；5
[0166] R 表示H或卤素；7
[0167] 当n为0时，R 为H；7
[0168] 当n为1、2，或3时，R 表示：
[0169] H；
[0170] 羟基；12 13
[0171] -NR R ，其中12
[0172] R 表示H或(C1-C6)烷基，其任选具有1或2个羟基或者单-或二-((C1-C4)烷基)氨基基团；且
13
13
[0173] R 表示H、(C1-C6)烷基，或(C3-C6)环烷基，所述烷基和环烷基任选具有1或2个羟基或者单-或二-((C1-C4)烷基)氨基基团；14
[0174] 其中R 为羟基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基，或者单-或二-((C1-C4)烷基)氨基，而每个烷基取代基任选具有羟基取代基；
[0175] 其任选具有1或2个羟基、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基，或者单-或二-((C1-C4)烷基)氨基取代基，而每个烷基取代基任选具有羟基取代基，且其中r为0、1，或2；
[0176] 其任选具有1或2个(C1-C4)烷基取代基，而每个烷基取代基任选具有羟基取代基，且其中
[0177] X表示O、S(O)s，或NR15，其中s为0、1，或2；且
[0178] R15表示(C1-C4)烷基；
[0179]
[0180] 或者7 9
[0181] 当n＝2时，R 和R 可以结合，并且与它们连着的碳原子和介于其间的碳原子一16
起，形成结构 的环，其中R 表示(C1-C4)烷基；
起，形成结构 的环，其中R 表示(C1-C4)烷基；
[0182] R8表示卤素、羟基，或(C1-C4)烷基；
[0183] R9表示H或-CH2-Y，其中Y为单-或二-((C1-C4)烷基)氨基，或
[0184] R10表示H；
[0185] 或者
[0186] R9和R10可以连在一起形成键，形成炔键(acetylenic linkage)。
[0187] 在式(I)的某些实施方式中，m为0。在某些实施方式中，n为1。在某些实施方式中，q为0。
[0188] 在式(I)的某些实施方式中，R1为氢或氟；R2选自H、-CN、卤素、(C1-C4)烷基，和3 *
(C2-C4)炔基；R 选自H、卤素，和 -O(CH2)pAr，其中Ar为苯基、吡啶基，或吡嗪基，且其中Ar
4 5 7 12 13
可任选被1或2个卤素取代，且其中p为0或1；R 选自H、-CN和卤素；R 为氢；R 为-NR R
12 13
其中R 表示H或(C1-C6)烷基；且R 表示H或(C1-C6)烷基。
(C2-C4)炔基；R 选自H、卤素，和 -O(CH2)pAr，其中Ar为苯基、吡啶基，或吡嗪基，且其中Ar
4 5 7 12 13
可任选被1或2个卤素取代，且其中p为0或1；R 选自H、-CN和卤素；R 为氢；R 为-NR R
12 13
其中R 表示H或(C1-C6)烷基；且R 表示H或(C1-C6)烷基。
[0189] 在式(I)的某些实施方式中，R1为氢；R2选自H、卤素，和乙炔基；R3选自H、卤*素、-CN、甲基，和 -O(CH2)pAr，其中Ar为苯基、吡啶基，或吡嗪基，且其中Ar可任选被0、1或
4 5 7
2个卤素取代，且其中p为0或1；R 选自H、卤素，和(C1-C4)烷基；R 为氢；且R 为单-或
2 3 *
二-((C1-C4)烷基)氨基基团。在某些实施方式中，R 为乙炔基；R 选自H、卤素，和 -O(CH2)pAr，其中Ar为苯基、吡啶基，或吡嗪基，且其中Ar可任选被0、1或2个卤素取代，且其中p
4
为0或1；且R 为氢。
4 5 7
2个卤素取代，且其中p为0或1；R 选自H、卤素，和(C1-C4)烷基；R 为氢；且R 为单-或
2 3 *
二-((C1-C4)烷基)氨基基团。在某些实施方式中，R 为乙炔基；R 选自H、卤素，和 -O(CH2)pAr，其中Ar为苯基、吡啶基，或吡嗪基，且其中Ar可任选被0、1或2个卤素取代，且其中p
4
为0或1；且R 为氢。
[0190] 在式(I)的某些实施方式中，R2为卤素；R3选自H、卤素，和*-O(CH2)pAr，其中Ar为苯基、吡啶基，或吡嗪基，且其中Ar可任选被0、1或2个卤素取代，且其中p为0或1。在某3
些实施方式中，R 为卤素。
些实施方式中，R 为卤素。
[0191] 在某些实施方式中，R9和R10没有连接在一起形成炔键(acetyleniclinkage)；相9 10
反，R 表示H或-CH2-Y，其中Y为单-或二-((C1-C4)烷基)氨基，或 且R 表示
H。
反，R 表示H或-CH2-Y，其中Y为单-或二-((C1-C4)烷基)氨基，或 且R 表示
H。
[0192] 在某些实施方式中，R9和R10连在一起形成键，形成炔键(acetylenic linkage)。在这些实施方式中，本发明的化合物可用式(Ia)表示：
[0193]
[0194] 其中，m、n、q和R1至R5，以及R7至R8，如上面式(I)所述，除了R7不能与R9结合9 10
(在这些实施方式中，式(I)的R 和R 已结合，形成碳碳三键，如式(Ia)所示)。
(在这些实施方式中，式(I)的R 和R 已结合，形成碳碳三键，如式(Ia)所示)。
[0195] 在另一方面，本发明提供了选自以下的化合物：N-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)苯基]-7-[(2E)-4-(二乙基氨基)丁-2-烯酰基]-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺；N-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)苯基]-7-[(2E)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰基]-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺；N-(3-氯-4-氟苯基)-7-[(2E)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰基]-5，6，7，8-四氢吡啶
并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺；N-(3-氯-4-氟苯基)-7-[(2E)-4-(二乙基氨基)丁-2-烯酰基]-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺；7-[(2E)-4-(二乙基氨基)丁-2-烯酰基]-N-(3-乙炔基苯基)-5，6，7，
8-四氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺；7-[(2E)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰基]-N-(3-乙炔基苯基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，
3-d]嘧啶-4-胺；N-(3-氯-4-氟苯基)-7-{(2E)-4-[异丙基(甲基)氨基]丁-2-烯酰
基}-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺；N-(3-氯-4-氟苯基)-7-{(2E)-4-[乙基(异丙基)氨基]丁-2-烯酰基}-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，
3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺；N-(3，4-二氯苯基)-7-[(2E)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰基]-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺；和N-(3，
4-二氯苯基)-7-{(2E)-4-[异丙基(甲基)氨基]丁-2-烯酰基}-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺。
并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺；N-(3-氯-4-氟苯基)-7-[(2E)-4-(二乙基氨基)丁-2-烯酰基]-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺；7-[(2E)-4-(二乙基氨基)丁-2-烯酰基]-N-(3-乙炔基苯基)-5，6，7，
8-四氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺；7-[(2E)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰基]-N-(3-乙炔基苯基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，
3-d]嘧啶-4-胺；N-(3-氯-4-氟苯基)-7-{(2E)-4-[异丙基(甲基)氨基]丁-2-烯酰
基}-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺；N-(3-氯-4-氟苯基)-7-{(2E)-4-[乙基(异丙基)氨基]丁-2-烯酰基}-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，
3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺；N-(3，4-二氯苯基)-7-[(2E)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰基]-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺；和N-(3，
4-二氯苯基)-7-{(2E)-4-[异丙基(甲基)氨基]丁-2-烯酰基}-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺。
[0196] 在另一方面，本发明提供了制备式(1)化合物的方法，其包括在制备式(I)化合物的条件下，
[0197] (i)式(7)化合物
[0198]
[0199] 其中R1至R5、R8、m和q的意义如上所述，与式(10)化合物反应
[0200]
[0201] 其中R7、R9和R10和n的意义如上所述，且X为羟基、氯或溴，或者
[0202] (ii)式(9)化合物
[0203]1 5 8 10 7
[0204] 其中R 至R、R 至R 、m、n和q的意义如上所述，且LG为离去基团，与式R-H的7
化合物反应，其中R 的意义如上所述；或者
化合物反应，其中R 的意义如上所述；或者
[0205] (iii)式(14)化合物
[0206]7 10
[0207] 其中R 至R 、m和n的意义如上所述，且LG为离去基团，与式(15)化合物进行反应
[0208]1 5
[0209] 其中R 至R、n和q的意义如上所述，且LG为离去基团。
[0210] 如上所述的化合物(7)、(9)和(14)，是制备式(I)化合物的有用中间体。鉴于此原因，它们也是本发明的一部分。
[0211] 也应理解，起始原料可商业采购或者用本领域周知的标准方法容易地制备。这些方法包括，但不限于本文所列的变化。
[0212] 若非另有提及，反应通常在在反应条件下不起变化的惰性有机溶剂中进行。这些溶剂包括醚，例如二乙醚、1，4-二氧杂环己烷或四氢呋喃；卤代烃，例如二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳、1，2-二氯乙烷、三氯乙烷或四氯乙烷；烃类，例如苯、甲苯、二甲苯、己烷、环己烷或矿物油馏分；醇类，例如甲醇、乙醇或异丙醇、硝基甲烷、二甲基甲酰胺或乙腈。也可能使用混合溶剂。
[0214] 本发明化合物的制备，可以使用已知的化学反应和方法。然而，提出以下通用制备方法，用以下描述实施例的试验部分所提出的更加详细的具体实施例来帮助读者合成所述化合物。可用以下合成流程(I)来说明本发明化合物的制备：
[0215] 流程(I)和(II)描述了某些式(I)化合物的合成。
[0216] 合成流程(I)
[0217]
[0218] 如流程I所示，哌啶酮(1)与适当的氰基乙酸酯(ii)在元素硫和碱(例如吗啉)的存在下结合，优选在室温下，得到式(2)的氨基噻吩酯，依据方法为Gewald，J.Heterocyclic Chem.1999，36，333-345。然后，通过与包含甲酰胺的试剂(例如纯(neat)甲酰胺或乙酸甲脒(formamidine acetate))在例如DMF的极性溶剂中加热(优选达到
100℃或以上)反应，将氨基噻吩酯(2)转化为式(3)化合物。加热式(3)化合物和例如氧氯化磷的试剂，得到化合物(4)，其可以与多种取代苯胺(5)(这些取代苯胺都可容易获得或者用本领域周知的方法合成)，在催化量浓酸(例如HCl)和质子溶剂(例如乙醇、异丙醇)的存在下反应，得到化合物(6)。在酸性条件下去除保护基的保护，得到式(7)化合
7
物，其与试剂(10)在经典明确的条件下反应，得到式(I)化合物，其中R 如上所述。或者，式(7)化合物可以与包含离去基(LG)或可转化为LG的官能基的试剂(8)反应，得到化合
7
物(9)。然后用R-H置换式(9)中的离去基团，得到式(I)化合物。
100℃或以上)反应，将氨基噻吩酯(2)转化为式(3)化合物。加热式(3)化合物和例如氧氯化磷的试剂，得到化合物(4)，其可以与多种取代苯胺(5)(这些取代苯胺都可容易获得或者用本领域周知的方法合成)，在催化量浓酸(例如HCl)和质子溶剂(例如乙醇、异丙醇)的存在下反应，得到化合物(6)。在酸性条件下去除保护基的保护，得到式(7)化合
7
物，其与试剂(10)在经典明确的条件下反应，得到式(I)化合物，其中R 如上所述。或者，式(7)化合物可以与包含离去基(LG)或可转化为LG的官能基的试剂(8)反应，得到化合
7
物(9)。然后用R-H置换式(9)中的离去基团，得到式(I)化合物。
[0219] 合成流程(II)
[0220]
[0221] 如流程II所示，用酸性条件处理化合物(4)，以去除Boc基团的保护，所得中间体(11)与氨基酸(12)(依照WO 2004066919制备)结合，得到化合物(13)，其可以与多种取代苯胺(5)(这些取代苯胺都可容易获得或者用本技术领域周知的方法合成)，在催化量浓酸(例如HCl)和质子溶剂(例如乙醇、异丙醇)的存在下反应，得到式(I)化合物。
[0222] 药用组合物和治疗方法
[0223] 在另一方面，本发明提供了包含如上所述式(I)化合物和药学上可接受载体的药用组合物。在某些实施方式中，所述药用组合物以适于静脉内给药的方式提供。
[0224] 在另一方面，本发明提供了制备药用组合物的方法。所述方法包括以下步骤：将至少一种如上所述的式(I)化合物和至少一种药学上可接受载体组合，并将所得组合物制成适当的给药形式。
[0225] 在另一实施方式中，本发明提供了治疗需要这种治疗的患者细胞增殖病症的方法，其包括给予患者有效量的上述式(I)化合物。在某些实施方式中，所述细胞增殖病症是癌症。
[0226] 在另一实施方式中，本发明提供了如上所述式(I)化合物的用途，用于生产治疗或预防细胞增殖病症的药用组合物。在某些实施方式中，所述细胞增殖病症是癌症。
[0227] 当本发明化合物作为药品给予人类和动物时，其本身即可给予或者作为包含例如0.1至99.5％(更优选，0.5至90％)活性成分和药学上可接受载体的药用组合物给予。
[0228] 不论选择何种给药途径，本发明化合物可以适当的水合物形式被使用，和/或本发明的药用组合物，用本领域技术人员周知的常规方法被配制成药学上可接受的剂型。
[0229] 本发明药用组合物中活性成分的实际剂量水平和给药时间过程可以改变，以获得一定量的活性成分，其可有效实现特定患者、组合物和给药方式所需的治疗反应，而对患者不产生毒性。例证性的剂量为0.1至10mg/kg每天或0.1至15mg/kg每天。
[0230] 在某些实施方式中，本发明化合物可与常规癌症化学疗法联合使用治疗。白血病及其它肿瘤的常规治疗方案包括放射治疗、药物治疗，或二者联合。
[0231] 本发明化合物的抗增殖治疗有效量或抗增殖预防有效量，可由本领域技术人员，如内科医生或兽医(“主治临床医生”)，通过使用已知技术或观察类似情况下得到的结果而容易地确定。剂量可根据主治临床医生判断下的患者需要、受治病情的严重度和所用的特定化合物而有所不同；在确定抗增殖治疗有效量或剂量，和抗增殖预防有效量或剂量时，主治临床医生要考虑很多因素，包括但不限于：涉及的具体细胞增殖病症；特定药物的药效学特征及其给药方式和途径；所需的治疗时间过程；哺乳动物的种类；其大小、年龄和总体健康状态；涉及的具体病症；病症的严重程度或累及程度；个体患者的反应；给予的特定化合物；给药方式；给予制剂的生物利用度特征；所选的剂量方案；同步治疗的类型(即，本发明化合物与其它共同给予疗法的相互作用)；及其他相关情况。
[0232] 治疗开始可以使用较小剂量，该剂量小于化合物的最佳剂量。随后可以小幅度增加剂量，直至达到这种情况下的最佳效果。为方便起见，如需要，可将每日总剂量分成几份并在当日分次给予。本发明化合物的抗增殖治疗有效量和抗增殖预防有效量，预期可以为约0.1毫克/公斤体重每天(mg/kg/天)至约100mg/kg/天不等。
[0233] 本发明化合物的优选剂量，是患者可以忍受但不会产生严重副作用的最大值。举例来说，本发明化合物的给予浓度为约0.001mg/kg至约100mg/kg体重，约0.01至约10mg/kg或者约0.1mg/kg至约10mg/kg体重。上述值中间的范围也确定为本发明的一部分。
[0234] A.实施例
[0235] 缩写词和首字母缩写词
[0236] 当下列缩写词用于本文时，它们的意义如下：
[0237]
[0238]
[0239] 通用分析方法
[0240] 本发明代表性化合物的结构用以下方法确认。
[0241] 使用三种分析LC-MS系统(BRLCQ 1、2和5)的其中一种，获得高压液相色谱法-电喷雾质谱(LC-MS)，条件如下所述：
[0242] (A)BRLCQ 1&2：Hewlett-Packard 1100 HPLC，配有四元泵、可变波长检测器(设置在254nm)、Waters Sunfire C18柱(2.1×30mm，3.5μM)、Gilson自动进样器和具有电喷雾离子化的Finnigan LCQ离子阱质谱仪。使用根据源离子数量的可变离子时间，扫描120至1200amu的光谱。洗脱液为A：含0.02％TFA的2％乙腈/水和B：含0.018％TFA的2％水/乙腈。使用梯度洗脱，在3.5分钟内从10％B至95％，流速为1.0 mL/min，起始保持0.5分钟，最后以95％B保持0.5分钟。总运行时间为6.5分钟。
[0243] 或者
[0244] (B)BRLCQ5：使用Agilent 1100 HPLC系统，获得HPLC-电喷雾质谱(HPLC ES-MS)。Agilent 1100 HPLC系统配有Agilent 1100自动进样器、四元泵、可变波长检测器(设置在
254nm)。所用HPLC柱为Waters Sunfire C18(2.1×30mm，3.5μM)。直接连接HPLC洗脱液(不分裂(splitting))至具有电喷雾离子化的Finnigan LCQ DECA离子阱质谱仪。使用根据源离子数量的可变离子时间，扫描140至1200amu的光谱。洗脱液为A：含0.02％TFA的2％乙腈/水和B：含0.02％TFA的2％水/乙腈。使用梯度洗脱，在3.0分钟内从10％B至90％B，流速为1.0mL/min，起始保持1.0分钟，最后以95％B保持1.0分钟。总运行时间为7.0分钟。
254nm)。所用HPLC柱为Waters Sunfire C18(2.1×30mm，3.5μM)。直接连接HPLC洗脱液(不分裂(splitting))至具有电喷雾离子化的Finnigan LCQ DECA离子阱质谱仪。使用根据源离子数量的可变离子时间，扫描140至1200amu的光谱。洗脱液为A：含0.02％TFA的2％乙腈/水和B：含0.02％TFA的2％水/乙腈。使用梯度洗脱，在3.0分钟内从10％B至90％B，流速为1.0mL/min，起始保持1.0分钟，最后以95％B保持1.0分钟。总运行时间为7.0分钟。
[0245] 常规一维NMR波谱在300MHz Mercury-plus或400 MHzMercury-plus波谱仪上操作。将样品溶于购自CambridgeIsotope 的氘化溶剂中，并转移至5mm内径的 NMR管中。在293K获得波谱。化学位移以ppm标度记录，并
1
参照适当的溶剂信号，例如对于 H波谱，DMSO-d6为2.49ppm，CD3CN-d3为1.93ppm，CD3OD-d4为3.30ppm，CD2Cl2-d4为5.32ppm，和CDCl3-d为7.26ppm。NMR波谱与所示化学结构相一致。
1
参照适当的溶剂信号，例如对于 H波谱，DMSO-d6为2.49ppm，CD3CN-d3为1.93ppm，CD3OD-d4为3.30ppm，CD2Cl2-d4为5.32ppm，和CDCl3-d为7.26ppm。NMR波谱与所示化学结构相一致。
[0246] 有时使用以下条件的HLPC来纯化最终产品：
[0247] HPLC系统，配有两个Gilson 333/334泵、Gilson 215自动进样器、 UV 155型二极管阵列检测器(双波长)、phenomenexGemini 75×30mm 5微米柱。洗脱液为A：含0.1％NH4OH的水和B：乙腈。梯度洗脱，在14分钟内从10％B至90％B，流速为100mL/min。
在220nm处进行UV触发采集(triggered collection)，灵敏度为0.5。
在220nm处进行UV触发采集(triggered collection)，灵敏度为0.5。
[0248] 起始物料的制备
[0249] 4-溴-丁-2-烯酰基溴化物的制备
[0250]
[0251] 向4-溴-巴豆酸(700毫克，4.24毫摩尔)的DCM(10毫升)/DMF(1滴)溶液中，加入草酰溴(2M/DCM，2.33毫升，4.67毫摩尔，1.1当量)。将反应混合物在40℃加热6小时。使反应冷却至室温，然后真空浓缩。粗品直接用于下一步反应中，无需进一步纯化。
[0252] 1H NMR(CD2Cl2-d2)δ 7.22(m，1H)，6.28(d，J＝14.6Hz，1H)，4.10(dd，J＝1.3，7.2Hz，2H).
[0253] 3-氯-4-(3-氟-苯甲氧基)-苯胺的制备
[0254]
[0255] 向90毫升CH3CN中加入2-氯-4-硝基苯酚(15克，86.4毫摩尔)，再加入碳酸钾(17.9克，129.6毫摩尔)。向搅拌下的悬浮液中，用滴液漏斗加入10毫升3-氟-苯
甲基溴(16.3克，86.4毫摩尔)的CH3CN溶液。搅拌内容物，并在70℃下加热18小时，之后，使亮黄色混合物冷却至室温。将黄色内容物倒入水中(200毫升)并搅拌，此时有固体形成。过滤固体，滤饼再用水(50ml)洗涤。收集的固体在真空下干燥，得到白色固体的
2-氯-1-(3-氟-苯甲酰氧基)-4-硝基-苯(23克，94％)。
甲基溴(16.3克，86.4毫摩尔)的CH3CN溶液。搅拌内容物，并在70℃下加热18小时，之后，使亮黄色混合物冷却至室温。将黄色内容物倒入水中(200毫升)并搅拌，此时有固体形成。过滤固体，滤饼再用水(50ml)洗涤。收集的固体在真空下干燥，得到白色固体的
2-氯-1-(3-氟-苯甲酰氧基)-4-硝基-苯(23克，94％)。
[0256] 将2-氯-1-(3-氟-苯甲酰氧基)-4-硝基-苯(10克，35.5毫摩尔)悬浮于装有50毫升乙酸和150毫升乙酸乙酯的500毫升烧瓶中。向该悬浮液中加入铁(9.9克，
177.5毫摩尔)，在室温下搅拌该混合物过夜。反应混合物经 薄垫过滤。真空浓缩
滤出液，并用饱和Na2CO3水溶液中和，然后用乙酸乙酯萃取。有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并真空浓缩。所得粗品经闪色谱法纯化，用15％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到棕色固体的3-氯-4-(3-氟-苯甲氧基)-苯基胺[8.5g，95％，TLC Rf＝0.4，30％乙酸乙酯/己烷(3:7)]。
177.5毫摩尔)，在室温下搅拌该混合物过夜。反应混合物经 薄垫过滤。真空浓缩
滤出液，并用饱和Na2CO3水溶液中和，然后用乙酸乙酯萃取。有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并真空浓缩。所得粗品经闪色谱法纯化，用15％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到棕色固体的3-氯-4-(3-氟-苯甲氧基)-苯基胺[8.5g，95％，TLC Rf＝0.4，30％乙酸乙酯/己烷(3:7)]。
[0257] 1H-NMR(DMSO-d6)δ4.94(s，2H)，5.00(s，2H)，6.40(dd，1H)，6.60(s，1H)，6.87(d，1H)，7.10-7.18(m，1H)，7.20-7.28(m，
2H)，7.37-7.44(m，IH).
2H)，7.37-7.44(m，IH).
[0258] 3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯基胺的制备
[0259]
[0260] 将2-氯-4-硝基苯酚(10克，57.6毫摩尔，1当量)、盐酸2-甲基吡啶氯(2-pycolyl chloride hydrogen chloride)(9.45克，57.6毫摩尔，1当量)、碳酸铯
41.3(126.8毫摩尔，2.2当量)和碘化钠(8.64克，57.6毫摩尔，1当量)悬浮于200毫升乙腈中。在60℃下搅拌反应混合物5小时。过滤所得的悬浮液，并用水洗涤(400毫升)，得到红色固体的2-(2-氯-4-硝基-苯氧基甲基)-吡啶(8克，52％)。
41.3(126.8毫摩尔，2.2当量)和碘化钠(8.64克，57.6毫摩尔，1当量)悬浮于200毫升乙腈中。在60℃下搅拌反应混合物5小时。过滤所得的悬浮液，并用水洗涤(400毫升)，得到红色固体的2-(2-氯-4-硝基-苯氧基甲基)-吡啶(8克，52％)。
[0261] 将2-(2-氯-4-硝基-苯氧基甲基)-吡啶(8克，30.2毫摩尔，1当量)和铁(8.44克，151.1毫摩尔，5当量)混合在乙酸(100毫升)和乙酸乙酯(50毫升)中，并在室温下搅拌过夜。反应混合物经 薄垫过滤。真空浓缩滤出液，并用饱和Na2CO3溶液中和。溶液用乙酸乙酯萃取，有机层用盐水洗涤，并真空浓缩。所得粗品经闪色谱法纯化，用乙酸乙酯/己烷(3:7)洗脱，得到白色固体的3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯胺(3.2克，52％)。
[0262] 1H-NMR(CDCl3-d)δ 5.18(s，2H)，6.50(dd，1H)，6.76(d，1H)，.6.80(d，1H)，7.22(m，1H)，7.64(d，1H)，7.73(td，1H)，8.55(m，1H)；
[0263] 1LCMS保留时间＝0.89分钟，[M+H]+＝235.1。
[0264] 5-氨基-1-N-(3-氟苯甲基)吲唑的制备
[0265]
[0266] 将5-硝基吲唑(15克，92毫摩尔，1当量)、3-氟苯甲基溴(14.7毫升，119.5毫摩尔，1.3当量)和碳酸钾25.4克(184毫摩尔，2当量)悬浮于150毫升乙腈中。在70℃下搅拌反应混合物12小时，然后使冷却至室温。过滤所得固体并用CH2Cl2洗涤，真空浓缩滤出液。用柱色谱法(5:1至4:1己烷/乙酸乙酯)纯化区域异构产物的粗混合物，得到黄色固体的5-硝基1-N-(3-氟苯甲基)吲唑(7.9克，32％)和5-硝基2-N-(3-氟苯甲基)吲唑(9.2克，37％)。
[0267] 将5-硝基-1-N-(3-氟苯甲基)吲唑(7.9克，29.1毫摩尔，1当量)和铁(8.13克，145.6毫摩尔，5当量)混合于200毫升乙酸和50毫升乙酸乙酯中，在室温下搅拌36小时。反应混合物经 薄垫过滤。真空浓缩滤出液至10毫升体积。内容物用水(10毫升)稀释并用饱和Na2CO3溶液中和。溶液用乙酸乙酯萃取(3×500毫升)，合并的有机层经MgSO4干燥，过滤，并真空浓缩。所得粗品经柱色谱法纯化，用己烷/乙酸乙酯(4:1至3:1)洗脱，得到浅棕色固体的5-氨基-1-N-(3-氟苯甲基)吲唑(5.32克，76％)。
1
1
[0268] H-NMR(DMSO-d6)δ 7.72(s，1H)，7.22-7.36(m，2H)，6.87-7.05(m，3H)，6.70-6.77(m，2H)，5.48(s，2H)，4.78(br s，2H)；
1 +
1 +
[0269] LCMS保留时间＝1.66分钟；[M+H] ＝242.2。
[0270] 使用上述相同的方法和适当的试剂，制备1-吡啶-2-基甲基-1H-吲唑-5-基胺；+
LC/MS保留时间＝1.03分钟；[M+H] ＝225.2。
LC/MS保留时间＝1.03分钟；[M+H] ＝225.2。
[0271] 3-氯-4-[(6-甲基吡啶-2-基)甲氧基]苯胺的制备
[0272]
[0273] 向35毫升CH3CN中加入(6-甲基-吡啶-2-基)-甲醇(3.5克，28.4毫摩尔)，再加入碳酸钾(17.9克，129.6毫摩尔)和2-氯-1-氟-4-硝基苯(6.48克，36.9毫摩尔)。搅拌悬浮液，并在70℃下加热30小时，之后使亮黄色混合物冷却至室温。使内容物冷却至室温，过滤，并用CH2Cl2洗涤。真空浓缩滤出液得到浅黄色固体，用己烷/乙酸乙酯(5:1)研磨(triturated)，得到白色固体的2-[(2-氯-4-硝基苯氧基)甲基]-6-甲基吡啶(4.87克，61％)。
[0274] 将2-[(2-氯-4-硝基苯氧基)甲基]-6-甲基吡啶(4.87克，17.5毫摩尔)和铁粉(4.87克，874毫摩尔)混合于150毫升乙酸中，并在室温下搅拌过夜。反应混合物经垫过滤，并用乙酸乙酯洗涤。真空浓缩滤出液，并用饱和Na2CO3溶液中和。内容物用乙酸乙酯萃取(5×300毫升)。合并的有机层用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤，并真空浓缩。所得粗品用己烷/乙酸乙酯(2:1)研磨(triturated)，得到白色固体的3-氯-4-[(6-甲基吡啶-2-基)甲氧基]苯胺(3.84克，88％)。
[0275]1H-NMR(DMSO)δ7.70(dd，1H)，7.31(d，1H)，7.17(d，1H)，6.88(d，1H)，6.65(d，1H)，6.44(dd，1H)，5.01(s，
2H)，4.93(s，2H)，2.46(s，3H)；
2H)，4.93(s，2H)，2.46(s，3H)；
[0276] LCMS保留时间＝0.25分钟；[M+H]＝249.2。
[0277] 实施例1
[0278] 1-{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯基氨基]-5，8-二氢-6H-9-硫杂-1，3，7三氮杂-芴-7-基}-4-吗啉-4-基-丁-2-烯-1-酮的制备
[0279]
[0280] 步骤1.2-氨基-4，7-二氢-5H-噻吩并[2，3-c]吡啶-3，6-二羧酸6-叔丁基酯3-乙基酯的制备
[0281]
[0282] 向1-Boc-4-哌啶酮(25.0克，123毫摩尔)的乙醇(100毫升)溶液中，加入氰基乙酸乙酯(14.2克，123毫摩尔，1当量)、二乙基胺(12.72毫升，123毫摩尔，1当量)和硫(4.14克，129毫摩尔，1.05当量)。反应在室温下搅拌16小时，然后过滤，并用乙醇(25毫升)洗涤，得到白色固体(33.11克，102毫摩尔，83％)。1
[0283] H NMR(DMSO-d6)δ7.31(宽s，2H)，4.22(s，2H)，4.13(q，2H)，3.49(t，2H)，2.63(t，2H)，1.39(s，9H)，1.23(t，3H)；
+
+
[0284] LCMS保留时间＝3.49分钟，[M+H] ＝326.7。
[0285] 步骤2.4-氧代-3，5，6，8-四氢-4H-9-硫杂-1，3，7-三氮杂-芴-7-羧酸叔丁基酯的制备
[0286]
[0287] 向2-氨基4，7-二氢-5H-噻吩并[2，3-c]吡啶-3，6-二羧酸6-叔丁基酯3-乙基酯(5.0克，15毫摩尔)的DMF(50毫升)溶液中，加入乙酸甲脒(2.39克，23毫摩尔，1.5当量)。混合物在100℃油浴中加热过夜。使反应混合物冷却至室温，然后真空浓缩。向反应固体混合物中加入乙酸乙酯(50毫升)，并在室温下搅拌2小时。然后过滤混合物，用乙酸乙酯(25毫升)清洗。将固体放置在真空干燥箱中干燥过夜，得到白色固体(4.17克，90.6％)。
[0288] 1HNMR(CD3OD-d4)δ 8.05(s，1H)，4.57(s，2H)，3.61(t，2H)，2.92(t，2H)，1.42(s，9H)；
[0289] LCMS保留时间＝2.78分钟，[M+H]+＝308.0。
[0290] 步骤3.4-氯-5，8-二氢-6H-9-硫杂-1，3，7-三氮杂-芴-7-羧酸叔丁基酯的制备
[0291]
[0292] 于0℃氩气下用15分钟，向氧氯化磷(30毫升)溶液中，加入三乙基胺(30毫升)。然后向烧瓶中加入4-氧代-3，5，6，8-四氢-4H-9-硫杂-1，3，7-三氮杂-芴-7-羧酸叔丁基酯(4.20克，14毫摩尔)。在0℃下搅拌反应混合物30分钟，然后在65℃加热2小时。
真空浓缩前使反应混合物冷却至室温。残余物与甲苯(2×200毫升)共蒸发。向固体残余物中加入DCM(50毫升)，用冰/饱和NaHCO3水溶液使反应混合物猝灭。所得混合物用DCM(3×100毫升)萃取。合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩得到4.08克(12.5毫摩尔，89％)的浅黄色固体。
真空浓缩前使反应混合物冷却至室温。残余物与甲苯(2×200毫升)共蒸发。向固体残余物中加入DCM(50毫升)，用冰/饱和NaHCO3水溶液使反应混合物猝灭。所得混合物用DCM(3×100毫升)萃取。合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩得到4.08克(12.5毫摩尔，89％)的浅黄色固体。
[0293] 1H-NMR(CD2Cl2-d2)δ 8.74(s，1H)，4.74(s，2H)，3.78(t，2H)，3.19(t，2H)，+1.49(s，9H)；LCMS保留时间＝3.53分钟，[M+H] ＝326.0。
[0294] 步骤4.4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯基氨基]-5，8-二氢-6H-9-硫杂-1，3，7-三氮杂-芴-7-羧酸叔丁基酯的制备
[0295]
[0296] 室温下，向4-氯-5，8-二氢-6H-9-硫杂-1，3，7-三氮杂-芴-7-羧酸叔丁基酯(3.08克，9.40毫摩尔，1.05当量)的40毫升异丙醇溶液中，加入3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)苯基胺(2.10克，9.0毫摩尔，1当量)。向反应混合物中加入4N HCl/二氧杂环己烷(0.1毫升)以加速反应。在80℃加热反应混合物16小时。使混合物冷却至室温，然后过滤，并用IPA(50毫升)洗涤。将DCM(100毫升)和饱和碳酸氢钠(100毫升)加入到固体中。分离层之前在室温下搅拌混合物1小时。有机层经硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩，得到4.50克粗品。粗品用闪色谱法纯化(50％THF/DCM)，得到浅黄色的产品(3.60克，6.87毫摩尔，76％)。
[0297]1H-NMR(DMSO-d6)δ9.32( 宽 s，1H)，8.67(d，J ＝ 4.0Hz，1H)，8.40(s，1H)，8.27(s，1H)，
8.05(t，1H)，7.79(d，J ＝ 2.7Hz，1H)，7.70(d，J ＝ 8.0Hz，1H)，7.53(t，1H)，7.24(d，J＝
8.9Hz，1H)，5.35(s，2H)，4.66(s，2H)，3.66(t，2H)，3.19(t，2H)，1.43(s，9H)；
8.05(t，1H)，7.79(d，J ＝ 2.7Hz，1H)，7.70(d，J ＝ 8.0Hz，1H)，7.53(t，1H)，7.24(d，J＝
8.9Hz，1H)，5.35(s，2H)，4.66(s，2H)，3.66(t，2H)，3.19(t，2H)，1.43(s，9H)；
[0298] LCMS保留时间＝3.39分钟，[M+H]+＝524.0。
[0299] 步骤5.[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯基]-(5，6，7，8-四氢-9-硫杂-1，3，7-三氮杂-芴-4-基)-胺的制备
[0300]
[0301] 向4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯基氨基]-5，8-二氢-6H-9-硫杂-1，3，7-三氮杂-芴-7-羧酸叔丁基酯(3.6克，6.87毫摩尔)的DCM(45毫升)溶液中，加入TFA(5.2毫升，68.7毫摩尔，10当量)。在室温下搅拌反应混合物8小时。真空浓缩溶液混合物。向残余物中加入饱和NaHCO3溶液，并在室温下搅拌1.5小时。然后过滤混合物，并用水洗涤。将湿的固体置于真空干燥箱中干燥过夜，得到黄色固体(2.0克，67％)。
[0302] 1H NMR(DMSO-d6)δ9.41(宽s，2H)，8.71(d，J＝5.0Hz，1H)，8.40(s，1H)，8.11(t，1H)，7.75(m，2H)，7.57(m，1H)，7.53(dd，J ＝ 2.7，9.0Hz，
1H)，7.25(d，J＝9.4Hz，1H)，5.35(s，2H)，4.48(m，2H)，3.49(m，2H)，3.41(m，2H)；
1H)，7.25(d，J＝9.4Hz，1H)，5.35(s，2H)，4.48(m，2H)，3.49(m，2H)，3.41(m，2H)；
[0303] LCMS保留时间＝2.11分钟，[M+Na]+＝446.1。
[0304] 步骤6.3-溴-1-{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯基氨基]-5，8-二氢-6H-9-硫杂-1，3，7-三氮杂-芴-7-基}-丙烯酮的制备
[0305]
[0306] 向[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯基]-(5，6，7，8-四氢-9-硫杂-1，3，7-三氮杂-芴-4-基)-胺(266毫克，0.63毫摩尔)的THF(4毫升)/NMP(0.8毫升)溶液中，加入DIPEA(0.13毫升，0.75毫摩尔，1.2当量)，使溶液冷却至0℃。向反应混合物中逐滴加入4-溴-丁-2-烯酰基溴(217毫克，0.75毫摩尔，1.2当量)的THF(2毫升)溶液。在
0℃搅拌混合物2小时。将反应混合物在饱和NaHCO3(25毫升)和乙酸乙酯(50毫升)之间分配。有机层用水(25毫升)和盐水(25毫升)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩。粗+
品用于下一步反应，而无需进一步的纯化。LCMS保留时间＝2.89分钟，[M+H] ＝571.8。
0℃搅拌混合物2小时。将反应混合物在饱和NaHCO3(25毫升)和乙酸乙酯(50毫升)之间分配。有机层用水(25毫升)和盐水(25毫升)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩。粗+
品用于下一步反应，而无需进一步的纯化。LCMS保留时间＝2.89分钟，[M+H] ＝571.8。
[0307] 步骤7.1-{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯基氨基]-5，8-二氢-6H-9-硫杂-1，3，7-三氮杂-芴-7-基}-4-吗啉-4-基-丁-2-烯-1-酮的制备
[0308]
[0309] 向3-溴-1-{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯基氨基]-5，8-二氢-6H-9-硫杂-1，3，7-三氮杂-芴-7-基}-丙烯酮(50毫克，0.09毫摩尔，1当量)的DMF(0.5毫升)溶液中，加入碘化钠(14毫克，0.09毫摩尔，1当量)、吗啉(76毫克，0.9毫摩尔，10当量)。在室温下搅拌所得混合物3天。真空浓缩反应混合物，然后再次悬浮于DCM(10毫升)中，并用饱和NaHCO3(10毫升)处理，得到澄清的两相。水层用DCM(2×10毫升)萃取。合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩。所得粗品用制备-TLC(10％甲醇/DCM)纯化，得到黄色固体(12.4毫克，0.02毫摩尔，24％)。
[0310] 1H-NMR(CD2Cl2-d2)δ8.50(d，J ＝ 4.8Hz，1H)，8.35(s，1H)，7.74(m，1H)，7.69(t，1H)，7.54(d，J ＝ 8.1Hz，1H)，
7.32( 宽 s，1H)，7.18(m，1H)，6.95(d，J ＝ 9.0Hz，1H)，6.78(m，2H)，6.43(m，1H)，5.18(s，
2H)，4.78(m，2H)，3.90(m，2H)，3.60(m，4H)，3.08(m，4H)，2.37(m，4H)；
7.32( 宽 s，1H)，7.18(m，1H)，6.95(d，J ＝ 9.0Hz，1H)，6.78(m，2H)，6.43(m，1H)，5.18(s，
2H)，4.78(m，2H)，3.90(m，2H)，3.60(m，4H)，3.08(m，4H)，2.37(m，4H)；
[0311] LCMS保留时间＝2.18分钟，[M+H]+＝577.2。
[0312] 实施例7
[0313] N-(3-氯-4-氟苯基)-7-[(2E)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰基]-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺的制备
[0314]
[0315] 步 骤 1.(3-氯 -4- 氟 -苯 基)-(5，6，7，8- 四 氢 -9- 硫 杂 -1，3，7-三 氮杂-芴-4-基)-胺的制备
[0316]
[0317] 向4-氯-5，8-二氢-6H-9-硫杂-1，3，7-三氮杂-芴-7-羧酸叔丁基酯(6.86克，0.021摩尔)和3-氯-4-氟苯胺(3.2克，0.022摩尔)的2-丙醇(96毫升)混合物中，加
入4N HCl/二氧杂环己烷(0.27毫升)，将混合物加热至80至85℃过夜。LCMS和TLC(5％甲醇/DCM)表明不存在起始原料(Boc-保护的起始原料)。加入4N HCl/二氧杂环己烷
(10.5毫升，0.042摩尔)，继续加热直至LCMS表明不存在Boc-保护的产品。冷却至室温并浓缩至干。然后将混合物悬浮于二氯甲烷(200毫升)中，并与1N NaOH(200毫升)搅拌
30分钟。获得澄清的两相层。分离层，水层用二氯甲烷(100毫升)洗涤。合并的有机层用水(2×100毫升)洗涤，然后用盐水(100毫升)洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩至干。真空下干燥得到6.61克(94％)产品，如LCMS和HNMR所示。
入4N HCl/二氧杂环己烷(0.27毫升)，将混合物加热至80至85℃过夜。LCMS和TLC(5％甲醇/DCM)表明不存在起始原料(Boc-保护的起始原料)。加入4N HCl/二氧杂环己烷
(10.5毫升，0.042摩尔)，继续加热直至LCMS表明不存在Boc-保护的产品。冷却至室温并浓缩至干。然后将混合物悬浮于二氯甲烷(200毫升)中，并与1N NaOH(200毫升)搅拌
30分钟。获得澄清的两相层。分离层，水层用二氯甲烷(100毫升)洗涤。合并的有机层用水(2×100毫升)洗涤，然后用盐水(100毫升)洗涤。有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩至干。真空下干燥得到6.61克(94％)产品，如LCMS和HNMR所示。
[0318] 1H NMR(DMSO-d6)δ 8.41(s，1H)，8.24(s，1H)，7.92(m，1H)，7.64(m，1H)，7.39(t，J＝9.4Hz，1H)，3.94(宽s，1H)，3.32(m，2H)，3.05(m，2H)，3.01(m，2H)；
[0319] LCMS保留时间＝2.13分钟，[M+H]+＝335。
[0320] 步骤2.4-溴-1-[4-(3-氯-4-氟-苯基氨基)-5，8-二氢-6H-9-硫杂-1，3，7-三氮杂-芴-7-基]-丁-2-烯-1-酮的制备
[0321]
[0322] 在0至5℃下，向4-溴巴豆酸(2.07克，0.012摩尔)的二氯甲烷(48毫升)溶液中，加入氯甲酸异丁酯(1.70毫升，0.013摩尔)，再在氮气下加入4-甲基吗啉(1.40毫升，0.013摩尔)。在这个温度下搅拌该混合物1小时。用10分钟时间，将所得悬浮液加入到冷却的(3-氯-4-氟-苯基)-(5，6，7，8-四氢-9-硫杂-1，3，7-三氮杂-芴-4-基)-胺(4.0克，0.012摩尔)的二氯甲烷(200毫升)溶液中。室温下搅拌该混合物1.5小时。TLC(10％甲醇/DCM)表明不存在起始原料。混合物直接用于进一步反应。LCMS保留时间＝3.55分钟，[M+H]+＝483.04。
[0323] 步骤3.N-(3-氯-4-氟苯基)-7-[(2E)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰基]-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺
[0324]
[0325] 用1至2分钟，向冰浴冷却的4-溴-1-[4-(3-氯-4-氟-苯基氨基)-5，8-二氢-6H-9-硫杂-1，3，7-三氮杂-芴-7-基]-丁-2-烯-1-酮(0.125克，0.00026摩尔)
的二氯甲烷(1.25毫升)溶液中，加入二甲基胺(2.0M/THF溶液)(0.65毫升，0.001摩尔)。
在室温下搅拌所得混合物2小时。TLC(10％甲醇/二氯甲烷)表明不存在起始原料，出现新的极性点。在30℃真空下浓缩反应混合物至干。经硅胶色谱法(ISCO系统)纯化，使用二氯甲烷至30％甲醇/二氯甲烷的梯度。合并馏分，浓缩至干，残余物溶于10％甲醇/DCM，用滤纸过滤。将滤出液浓缩至干，并在室温O/N下真空干燥，得到0.03克(23％)的所需产物。
的二氯甲烷(1.25毫升)溶液中，加入二甲基胺(2.0M/THF溶液)(0.65毫升，0.001摩尔)。
在室温下搅拌所得混合物2小时。TLC(10％甲醇/二氯甲烷)表明不存在起始原料，出现新的极性点。在30℃真空下浓缩反应混合物至干。经硅胶色谱法(ISCO系统)纯化，使用二氯甲烷至30％甲醇/二氯甲烷的梯度。合并馏分，浓缩至干，残余物溶于10％甲醇/DCM，用滤纸过滤。将滤出液浓缩至干，并在室温O/N下真空干燥，得到0.03克(23％)的所需产物。
[0326] 1H-NMR(CD3OD-d3)δ8.46(m，1H)，8.39(s，1H)，7.88(m，1H)，7.62(m，1H)，7.42(t，1H)，6.67(m，1H)，3.94(m，2H)，3.87(m，4H)，
2.75(m，2H)，2.56(s，6H)；
2.75(m，2H)，2.56(s，6H)；
[0327] LCMS保留时间＝2.38分钟，M+H]+＝446.0。
[0328] 实施例36
[0329] N-(3-氯-4-氟苯基)-7-{(2E)-4-[异丙基(甲基)氨基]丁-2-烯酰基}-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺的制备
[0330]
[0331] 向冰浴冷却的4-溴-1-[4-(3-氯-4-氟-苯基氨基)-5，8-二氢-6H-9-硫杂-1，3，7-三氮杂-芴-7-基]-丁-2-烯-1-酮(0.14克，0.291毫摩尔)的二氯甲烷(4.0毫
升)溶液中，加入异丙基甲基胺(0.121毫升，1.16毫摩尔)，再加入DIEA(0.056毫升，0.32毫摩尔)。室温下搅拌所得混合物过夜。TLC(10％甲醇/二氯甲烷)表明不存在起始原料。
将粗品旋转蒸发至干，溶于DMF中并经HPLC条件[H2O(含0.1％NH4OH)-MeCN]，得到所需产物(26毫克，19％)。
1
升)溶液中，加入异丙基甲基胺(0.121毫升，1.16毫摩尔)，再加入DIEA(0.056毫升，0.32毫摩尔)。室温下搅拌所得混合物过夜。TLC(10％甲醇/二氯甲烷)表明不存在起始原料。
将粗品旋转蒸发至干，溶于DMF中并经HPLC条件[H2O(含0.1％NH4OH)-MeCN]，得到所需产物(26毫克，19％)。
1
[0332] H-NMR(DMSO-d6)δ 8.46(m，1H)，8.39(s，1H)，7.88(m，1H)，7.62(m，1H)，7.42(t，1H)，6.67(m，1H)，3.94(m，2H)，3.87(m，4H)，2.75(m，2H)，2.11(s，3H)，0.96(d，
6H)；
+
6H)；
+
[0333] LCMS保留时间＝2.53分钟，[M+H] ＝474.1。
[0334] 使用上述方法和适当的起始原料，实施例2至131、186和188至210的制备类似并连同其分析数据和IUPAC名称列于表1中。
[0335] 实施例132
[0336] N-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)苯基]-7-(5-哌啶-1-基戊-2-炔酰基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺的制备
[0337]
[0338] 向[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯基]-(5，6，7，8-四氢-9-硫杂-1，3，7-三氮杂-芴-4-基)胺(0.051克，0.00028摩尔)、5-哌啶-1-基-戊-2-炔酸(0.100克，0.00023摩尔)、O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲四氟硼酸盐(0.091克，
0.00028摩尔)在二氯甲烷/四氢呋喃(1.2/1.2毫升)混合物中的悬浮液中，在15分钟内缓慢加入二异丙基乙基胺(0.123毫升，0.001摩尔)。室温下搅拌混合物3小时。用TLC(洗脱液：10％甲醇/DCM)判断反应是否完全。真空下浓缩反应混合物至干，溶于甲醇(1.5毫升)中，过滤，并经反相HPLC纯化，得到所需产物(0.087克，62.81％)。
0.00028摩尔)在二氯甲烷/四氢呋喃(1.2/1.2毫升)混合物中的悬浮液中，在15分钟内缓慢加入二异丙基乙基胺(0.123毫升，0.001摩尔)。室温下搅拌混合物3小时。用TLC(洗脱液：10％甲醇/DCM)判断反应是否完全。真空下浓缩反应混合物至干，溶于甲醇(1.5毫升)中，过滤，并经反相HPLC纯化，得到所需产物(0.087克，62.81％)。
[0339]1
H-NMR(CD2Cl2)δ8.60(d，1H)，8.45(s，1H)，7.80(m，2H)，7.63(d，1H)，7.41(m，1H)，7.28(m，
1H)，7.04(m，2H)，5.25(s，2H)，4.98(d，2H)，4.05(dd，2H)，3.10(d，2H)，2.60(m，4H)，
2.40(m，4H)，1.62(m，4H)，1.45(m，2H)；
H-NMR(CD2Cl2)δ8.60(d，1H)，8.45(s，1H)，7.80(m，2H)，7.63(d，1H)，7.41(m，1H)，7.28(m，
1H)，7.04(m，2H)，5.25(s，2H)，4.98(d，2H)，4.05(dd，2H)，3.10(d，2H)，2.60(m，4H)，
2.40(m，4H)，1.62(m，4H)，1.45(m，2H)；
[0340] LCMS保留时间＝2.37分钟；[M+H]+＝587.1。
[0341] HPLC分离条件：
[0342] 柱-Phenomenex gemini 75×30mm，5微米
[0343] 样品溶于1.5毫升甲醇中
[0344] 洗脱液-水/乙腈/0.1％氢氧化铵@30毫升/分钟；梯度：在20分钟内从10至90
[0345] 灵敏度0.25
[0346] 使用上述方法和适当的起始原料，实施例133至142的制备类似并连同其分析数据和IUPAC名称列于表1中。
[0347] 实施例143
[0348] N-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)苯基]-7-{2-[(二乙基氨基)甲基]丙烯酰基}-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺的制备
[0349]
[0350] 向[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯基]-(5，6，7，8-四氢-9-硫杂-1，3，7-三氮杂-芴-4-基)胺(0.053克，0.00034摩尔)、2-二乙基氨基甲基-丙烯酸(0.12克，0.00028摩尔)、O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲四氟硼酸盐(0.109克，
0.00033摩尔)在二氯甲烷/四氢呋喃(1.2/1.2毫升)混合物中的悬浮液中，在15分钟
内缓慢加入二异丙基乙基胺(0.148毫升，0.001摩尔)。室温下搅拌混合物16至18小时。
用TLC(洗脱液：10％甲醇/DCM)判断反应是否完全。真空下浓缩反应混合物至干，溶于甲醇(1.5毫升)中，过滤，并经反相HPLC纯化，得到所需产物(0.0173克，11.0％)。
0.00033摩尔)在二氯甲烷/四氢呋喃(1.2/1.2毫升)混合物中的悬浮液中，在15分钟
内缓慢加入二异丙基乙基胺(0.148毫升，0.001摩尔)。室温下搅拌混合物16至18小时。
用TLC(洗脱液：10％甲醇/DCM)判断反应是否完全。真空下浓缩反应混合物至干，溶于甲醇(1.5毫升)中，过滤，并经反相HPLC纯化，得到所需产物(0.0173克，11.0％)。
[0351]1H-NMR(CD2Cl2)δ8.60(d，1H)，8.45(s，1H)，7.80(m，2H)，7.63(d，1H)，7.41(m，1H)，7.28(m，
1H)，7.04(m，2H)，5.38(d，2H)，5.25(s，2H)，4.85(s，2H)，4.05(m，2H)，3.20(m，4H)，
2.52(br，d，4H)，0.98(br，d，6H)；
1H)，7.04(m，2H)，5.38(d，2H)，5.25(s，2H)，4.85(s，2H)，4.05(m，2H)，3.20(m，4H)，
2.52(br，d，4H)，0.98(br，d，6H)；
[0352] LCMS保留时间＝2.32分钟；[M+H]+＝563.1。
[0353] HPLC分离条件：柱-Phenomenex gemini 75×30mm，5微米。样品溶于1.5毫升甲醇中。洗脱液-水/乙腈/0.1％氢氧化铵@30毫升/分钟；梯度：在20分钟内从10至90。灵敏度0.1。
[0354] 使用上述方法和适当的起始原料，实施例144至149的制备类似并连同其分析数据和IUPAC名称列于表1中。
[0355] 实施例150
[0356] 1-{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯基氨基]-5，8-二氢-6H-9-硫杂-1，3，7-三氮杂-芴-7-基}-4-吗啉-4-基-丁-2-烯-1-酮的制备
[0357]
[0358] 步骤1：2-丁-3-烯氧基-四氢-吡喃的合成
[0359]
[0360] 在1000毫升圆底烧瓶中，放入含3-丁烯-1-醇(7.21克，100.00毫摩尔)、3，4-二氢-2H-吡喃(12.62克，150.00毫摩尔)和p-甲苯磺酸吡啶鎓盐(2.51克，10.00毫摩尔)的350毫升无水二氯甲烷。室温下搅拌反应混合物4小时。然后浓缩反应混合物，残余物经色谱柱，以己烷/乙酸乙酯＝100/5纯化，得到13.90克油状的所需产物(89.0％)。1
[0361] H-NMR(DMSO-d6)δ 5.851-5.742(m，1H)，5.103-5.011(d，1H)，4.997-4.985(d，1H)，4.555-4.537(t，1H)，3.745-3.611(m，2H)，3.433-3.347(m，2H)，
2.290-2.236(m，2H)，1.698-1.675(m，2H)，1.611-1.566(m，4H).
2.290-2.236(m，2H)，1.698-1.675(m，2H)，1.611-1.566(m，4H).
[0362] 步骤2.5-(四氢-吡喃-2-基氧基)-戊-2-烯酸合成
[0363]
[0364] 在500毫升圆底烧瓶中，放入含丙烯酸(2.85克，39.6毫摩尔)和Grubbs催化剂(1.68克，1.98毫摩尔)的无水二氯甲烷(200毫升)。向该溶液加入2-丁-3-烯基氧基-四氢-吡喃(7.73克，49.50毫摩尔)，并回流加热12小时。除去溶剂，残余物经色谱柱，以己烷/乙酸乙酯＝100/5纯化，以除去未改变的2-丁-3-烯基氧基-四氢-吡喃。然后柱子用乙酸乙酯/甲醇＝100/1洗脱，得到6.66克黑色的油(84％)。
[0365]1H-NMR(DMSO-d6)δ12.190(s，1H)，6.845-6.771(m，1H)，5.846-5.800(d，1H)，
4.565-4.548(t，1H)，3.739-3.674(m，2H)，3.468-3.398(m，2H)，2.481-2.395(m，2H)，
1.689-1.609(m，2H)，1.501-1.259(m，4H).
4.565-4.548(t，1H)，3.739-3.674(m，2H)，3.468-3.398(m，2H)，2.481-2.395(m，2H)，
1.689-1.609(m，2H)，1.501-1.259(m，4H).
[0366] 步骤3.1-{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯基氨基]-5，8-二氢-6H-9-硫杂-1，3，7-三氮杂-芴-7-基}-5-(四氢-吡喃-2-基氧基)-戊-2-烯-1-酮的合成
[0367]
[0368] 在100毫升圆底烧瓶中，放入含[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯基]-(5，6，7，8-四氢-9-硫杂-1，3，7-三氮杂-芴-4-基)-胺(2.0克，4.71毫摩尔)、5-(四氢-吡喃-2-基氧基)-戊-2-烯酸(0.94克，4.71毫摩尔)和O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四氟硼酸酯(1.81克，5.66毫摩尔)的无水二氯甲烷/THF(15毫升/15毫升)，并在
0℃冷却。向该冷却的悬浮液中，用15分钟缓慢加入二异丙基乙基胺(1.83克，14.15毫摩尔)(2.5毫升)。然后将反应混合物加热至室温，并在室温下搅拌12小时。室温下(不加热)浓缩反应混合物以除去二氯甲烷。向残余物中加入水，过滤沉淀出的灰白色固体，并用水洗涤。将该灰白色固体进一步悬浮于甲醇中，超声、过滤并干燥，得到2.26克灰白色固体(80.0％)。其将被用于下一步反应而无需任何纯化。
0℃冷却。向该冷却的悬浮液中，用15分钟缓慢加入二异丙基乙基胺(1.83克，14.15毫摩尔)(2.5毫升)。然后将反应混合物加热至室温，并在室温下搅拌12小时。室温下(不加热)浓缩反应混合物以除去二氯甲烷。向残余物中加入水，过滤沉淀出的灰白色固体，并用水洗涤。将该灰白色固体进一步悬浮于甲醇中，超声、过滤并干燥，得到2.26克灰白色固体(80.0％)。其将被用于下一步反应而无需任何纯化。
[0369] 1H-NMR(DMSO-d6)δ 8.593-8.575(m，1H)，8.391(s，1H)，8.191(s，1H)，7.872-7.868(m，1H)，7,769(s，1H)7.571-7.498(m，2H)，7.369-7.329(m，1H)，
7.236-7.214(d，1H)，6.779-6.607(m，2H)，5.274(s，2H)，4.946-4.835(d，2H)，4.572(s，
1H)，3.928-3.730(m，2H)，3.504-3.402(m，2H)，3.313-3.204(m，4H)，1.673-1.434(m，8H).[0370] MS m/e605.9(M+H)，保留时间＝3.02分钟。
7.236-7.214(d，1H)，6.779-6.607(m，2H)，5.274(s，2H)，4.946-4.835(d，2H)，4.572(s，
1H)，3.928-3.730(m，2H)，3.504-3.402(m，2H)，3.313-3.204(m，4H)，1.673-1.434(m，8H).[0370] MS m/e605.9(M+H)，保留时间＝3.02分钟。
[0371] 步骤4：1-{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯基氨基]-5，8-二氢-6H-9-硫杂-1，3，7-三氮杂-芴-7-基}-5-羟基-戊-2-烯-1-酮的合成
[0372]
[0373] 在250毫升圆底烧瓶中，放入含1-{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯基氨基]-5，8-二氢-6H-9-硫杂-1，3，7-三氮杂-芴-7-基}-5-(四氢-吡喃-2-基氧
基)-戊-2-烯-1-酮(2.26克，3.73毫摩尔)和p-甲苯磺酸吡啶鎓盐(0.18克，0.74毫
摩尔)的乙醇(100毫升)。在80℃加热反应混合物12小时。蒸发除去乙醇，向残余物加入甲醇，超声，过滤类白色固体，并用甲醇洗涤，干燥后得到1.72克类白色固体(88.40％)。
基)-戊-2-烯-1-酮(2.26克，3.73毫摩尔)和p-甲苯磺酸吡啶鎓盐(0.18克，0.74毫
摩尔)的乙醇(100毫升)。在80℃加热反应混合物12小时。蒸发除去乙醇，向残余物加入甲醇，超声，过滤类白色固体，并用甲醇洗涤，干燥后得到1.72克类白色固体(88.40％)。
[0374] 1H-NMR(DMSO-d6)δ 8.587-8.578(m，1H)，8.396(s，1H)，8.182(s，1H)，7.887-7.849(t，1H)，7.769(s，1H)，7.570-7.501(m，2H)，7.368-7.356(t，
1H)，7.231-7.209(d，1H)，6.779-6.607(m，2H)，5.271(s，2H)，4.944(s，1H)，4.834(s，1H)，
4.661(s，1H)，3.925-3.848(d，2H)，3.519(m，2H)，3.245-3.206(m，2H)，2.360(m，2H).[0375] MS m/e522.0(M+H)，保留时间＝2.54分钟。
1H)，7.231-7.209(d，1H)，6.779-6.607(m，2H)，5.271(s，2H)，4.944(s，1H)，4.834(s，1H)，
4.661(s，1H)，3.925-3.848(d，2H)，3.519(m，2H)，3.245-3.206(m，2H)，2.360(m，2H).[0375] MS m/e522.0(M+H)，保留时间＝2.54分钟。
[0376] 步骤5.甲烷磺酸5-{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯基氨基]-5，8-二氢-6H-9-硫杂-1，3，7-三氮杂-芴-7-基}-5-氧代-戊-3-烯基酯的合成
[0377]
[0378] 在250毫升圆底烧瓶中，放入含1-{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯基氨基]-5，8-二氢-6H-9-硫杂-1，3，7-三氮杂-芴-7-基}-5-羟基-戊-2-烯-1-酮(1.00
克，1.91毫摩尔)的THF(80毫升)，在0℃下向该溶液中加入三乙基胺(0.58克，5.74毫摩尔)(0.80毫升)，再加入甲烷磺酰氯(0.54克，4.79毫摩尔)。室温下搅拌反应混合物过夜。蒸发除去THF，向残余物加入水和少量甲醇，超声。过滤沉出的类白色固体，用甲醇洗涤，干燥后得到0.63克类白色固体(55％)。
1
克，1.91毫摩尔)的THF(80毫升)，在0℃下向该溶液中加入三乙基胺(0.58克，5.74毫摩尔)(0.80毫升)，再加入甲烷磺酰氯(0.54克，4.79毫摩尔)。室温下搅拌反应混合物过夜。蒸发除去THF，向残余物加入水和少量甲醇，超声。过滤沉出的类白色固体，用甲醇洗涤，干燥后得到0.63克类白色固体(55％)。
1
[0379] H-NMR(DMSO-d6)δ8.601-8.585(m，1H)，8.394(s，1H)，8.196(s，1H)，7.906-7.864(m，1H)，7.769(s，1H)，7.584-7.564(d，1H)，7.523-7.501(d，1H)，
7.388-7.357(m，1H)，7.239-7.216(d，1H)，6.765-6.703(m，2H)，5.280(s，2H)，4.957(s，
1H)，4.843(s，1H)，4.366-4.337(m，2H)，3.940-3.860(m，2H)，3.255-3.189(m，6H)，
2.655-2.626(m，2H).
7.388-7.357(m，1H)，7.239-7.216(d，1H)，6.765-6.703(m，2H)，5.280(s，2H)，4.957(s，
1H)，4.843(s，1H)，4.366-4.337(m，2H)，3.940-3.860(m，2H)，3.255-3.189(m，6H)，
2.655-2.626(m，2H).
[0380] MS m/e600.0(M+H)，保留时间＝2.78分钟。
[0381] 步骤6.1-{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯基氨基]-5，8-二氢-6H-9-硫杂-1，3，7-三氮杂-芴-7-基]-5-二甲基氨基-戊-2-烯-1-酮的合成
[0382]
[0383] 在25毫升圆底烧瓶中，放入含甲烷磺酸5-{4-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)-苯基氨基]-5，8-二氢-6H-9-硫杂-1，3，7-三氮杂-芴-7-基}-5-氧代-戊-3-烯基酯(0.15克，0.25毫摩尔)的DMF(5.0毫升)，向该溶液中加入碳酸铯(0.16克，0.5毫摩尔)，再加入二甲基胺(0.5毫升的2M/THF溶液)，并在50℃加热过夜。黄色溶液经HPLC纯化两次，得到27.5毫克的浅棕色固体(20.0％)。
[0384] 1H-NMR(DMSO-d6)δ 8.592-8.574(m，1H)，8.378(s，1H)，8.181(s，1H)，7.890-7.847(m，1H)，7.781-7.752(m，1H)，
7.572-7.552(d，1H)，7.514-7.492(m，1H)，7.372-7.341(m，1H)，7.237-7.207(m，1H)，
5.271(s，2H)，4.942-4.761(m，2H)，3.922-3.781(m，2H)，3.282-3.169(m，4H)，2.343(m，
2H)，2.127-1.977(m，8H).
7.572-7.552(d，1H)，7.514-7.492(m，1H)，7.372-7.341(m，1H)，7.237-7.207(m，1H)，
5.271(s，2H)，4.942-4.761(m，2H)，3.922-3.781(m，2H)，3.282-3.169(m，4H)，2.343(m，
2H)，2.127-1.977(m，8H).
[0385] MS m/e549.1(M+H)，保留时间＝2.26分钟。
[0386] 使用上述方法和适当的起始原料，实施例151至159的制备类似并连同其分析数据和IUPAC名称列于表1中。
[0387] 实施例165
[0388] N-(3，4-二氯苯基)-7-{(2E)-4-[异丙基(甲基)氨基]丁-2-烯酰基}-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺的制备
[0389]
[0390] 步骤1：4-氯-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶的制备[0391]
[0392] 向含4-氯-5，8-二氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-7(6H)-羧酸叔丁基酯(3500毫克，10.7毫摩尔)的THF(100毫升)溶液中，加入4NHCl/1，4-二氧杂环己烷(4N，6毫升)。室温下搅拌反应混合物24小时。收集白色沉淀，减压干燥后得到2000+毫克(82％)的所需产物。LCMS保留时间＝0.21分钟，[M+1] ＝226。
[0393] 步骤2.(2E)-4-(4-氯-5，8-二氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-7(6H)-基)-N，N-二甲基-4-氧代丁-2-烯-1-胺的制备
[0394]
[0395] 向含4-氯-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶(1000毫克，4.0毫摩尔，90％纯)的THF(20毫升)溶液中，加入(2E)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酸氢氯化物(730毫克，4.4毫摩尔)、EDCI(840毫克，4.4毫摩尔)、DMAP(97毫克，0.8毫摩尔)和二异丙基乙基胺(120毫克，8.0毫摩尔)。室温下搅拌反应混合物16小时。然后减压浓缩混合物至干。残余物经ISCO使用20％乙酸乙酯/甲醇纯化，得到1100毫克(82％)+的所需产物。LCMS保留时间＝1.51分钟，[M+1] ＝337。
[0396] 步骤3：N-(3，4-二氯苯基)-7-{(2E)-4-[异丙基(甲基)氨基]丁-2-烯酰基}-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺的制备
[0397]
[0398] 向(2E)-4-(4-氯-5，8-二 氢 吡啶 并[4 ′，3 ′:4，5]噻 吩并[2，3-d] 嘧啶-7(6H)-基)-N，N-二甲基-4-氧代丁-2-烯-1-胺(50毫克，0.15毫摩尔)的乙醇(2毫升)溶液中，加入HCl/1，4-二氧杂环己烷(4N，0.02毫升)和3-溴苯胺(26毫克，0.16毫摩尔)。加热(80℃)反应物4小时，然后冷却至室温。混合物用乙酸乙酯(2毫升)萃取，减压浓缩萃取物至干。将残余物溶于甲醇和乙腈的混合物中，并经HPLC使用70％乙腈/水纯化，得到9毫克(13％)的所需产物。
[0399] 1H-NMR(CD3OD-d3)δ 8.42(s，1H)，7.99(m，1H)，7.57(m，1H)，7.46(m，1H)，6.80(m，1H)，4.93(m，2H)，4.04(t，2H)，3.20(m，4H)，2.31(s，3H)，2.29(s，3H)；
[0400] LCMS保留时间＝2.60分钟，[M+1]+＝462.3。
[0401] 使用上述方法和适当的起始原料，实施例161至164和166至185的制备类似并连同其分析数据和IUPAC名称列于表1中。
[0402] 实施例187
[0403] N-(3，4-二氯苯基)-7-{(2E)-4-[异丙基(甲基)氨基]丁-2-烯酰基}-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺的制备
[0404]
[0405] 步 骤 1.(3，4- 二 氯 - 苯 基 )-(5，6，7，8- 四 氢 -9- 硫 杂 -1，3，7- 三 氮杂-芴-4-基)-胺的制备
[0406]
[0407] 依照实施例7，步骤1中所述的相同方法使用4-氯-5，8-二氢-6H-9-硫杂-1，3，7-三氮杂-芴-7-羧酸叔丁基酯(3.5克，0.011摩尔)、3，4-二氯苯胺(1.9克，0.012摩尔)、4N HCl/二氧杂环己烷(1.3毫升)/2-丙醇(72毫升)，得到所需产物(3.0克，72％)。
+
LCMS保留时间＝2.77分钟，[M+H] ＝351.8。
+
LCMS保留时间＝2.77分钟，[M+H] ＝351.8。
[0408] 步骤2.N-(3，4-二氯苯基)-7-{(2E)-4-[异丙基(甲基)氨基]丁-2-烯酰基}-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺的制备
[0409]
[0410] 向含4-溴-丁-2-烯酸(638毫克，3.87毫摩尔)的CH2Cl2中，加入异丙基甲基胺(1.1毫升，10.3毫摩尔)，搅拌混合物2小时，然后加入(3，4-二氯-苯基)-(5，6，7，8-四氢-9-硫杂-1，3，7-三氮杂-芴-4-基)-胺(1.0克，2.57毫摩尔)、EDCI(493毫克，2.58毫摩尔)、DIPEA(1.8毫升，10.3毫摩尔)。室温下搅拌所得混合物过夜。除去溶剂，残余物经HPLC纯化，得到所需化合物(500毫克，13％)。
[0411] 1H-NMR(DMSO-d6)δ8.46(m，1H)，8.39(s，1H)，7.88(m，1H)，7.62(m，1H)，7.42(t，1H)，6.67(m，1H)，3.94(m，2H)，
3.87(m，4H)，2.75(m，2H)，2.11(s，3H)，0.96(d，6H)；
3.87(m，4H)，2.75(m，2H)，2.11(s，3H)，0.96(d，6H)；
[0412] LCMS保留时间＝2.72分钟，[M+1]+＝490.3。
[0414] 以下为实施例的分析数据：
[0415] 实施例2：N-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)苯基]-7-[(2E)-4-(二乙基氨基)丁-2-烯酰基]-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺
[0416] 1H-NMR(CD2Cl2-d2)δ 8.50(d，J ＝ 4.50Hz，1H)，8.36(s，1H)，7.74(s，1H)，7.68(td，J＝ 7.63，1.37Hz，1H)，7.54(d，J＝ 7.83Hz，1H)，7.33(宽 s，1H)，7.19(m，1H)，
6.95(d，J ＝ 9.0Hz，1H)，6.79(m，2H)，6.42(m，1H)，5.18(s，2H)，4.81(m，2H)，3.88(m，2H)，
3.19(m，2H)，3.12(m，2H)，2.49(m，4H)，0.97(m，6H)；
6.95(d，J ＝ 9.0Hz，1H)，6.79(m，2H)，6.42(m，1H)，5.18(s，2H)，4.81(m，2H)，3.88(m，2H)，
3.19(m，2H)，3.12(m，2H)，2.49(m，4H)，0.97(m，6H)；
[0417] LCMS保留时间＝2.37分钟，[M+H]+＝563.2。
[0418] 实施例3：N-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)苯基]-7-[(2E)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰基]-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺
[0419] 1H-NMR(CD2Cl2-d2)δ 8.50(d，J ＝ 4.70Hz，1H)，8.36(s，1H)，7.75(s，1H)，7.69(td，J ＝ 7.68，1.27Hz，1H)，7.54(d，J ＝ 7.83Hz，1H)，7.32(s，1H)，7.18(m，1H)，
6.96(d，J ＝ 8.80Hz，1H)，6.79(m2H)，6.43(m，1H)，5.19(s，2H)，4.82(m，2H)，3.90(m，2H)，
3.10(m，4H)，2.24(s，3H)，2.17(s，3H)；
6.96(d，J ＝ 8.80Hz，1H)，6.79(m2H)，6.43(m，1H)，5.19(s，2H)，4.82(m，2H)，3.90(m，2H)，
3.10(m，4H)，2.24(s，3H)，2.17(s，3H)；
[0420] LCMS保留时间＝2.31分钟，[M+H]+＝536.2。
[0421] 实施例4：N-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)苯基]-7-[(2E)-4-哌啶-1-基丁-2-烯酰基]-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺
[0422] 1H-NMR(CD2Cl2-d2)δ 8.50(d，J＝4.70Hz，1H)，8.36(s，1H)，7.75(d，J＝1.76Hz，1H)，7.69(td，J＝7.68，1.66Hz，1H)，7.54(d，J＝7.83Hz，1H)，7.35(s，1H)，7.18(m，1H)，
6.96(d，J＝8.80Hz，1H)，6.82(s，1H)，6.75(s，1H)，6.42(m，1H)，5.19(s，2H)，4.81(m，2H)，
3.91(m，2H)，3.11(m，4H)，2.39(m，4H)，1.56(m，4H)，1.37(m，2H)；
6.96(d，J＝8.80Hz，1H)，6.82(s，1H)，6.75(s，1H)，6.42(m，1H)，5.19(s，2H)，4.81(m，2H)，
3.91(m，2H)，3.11(m，4H)，2.39(m，4H)，1.56(m，4H)，1.37(m，2H)；
[0423] LCMS保留时间＝2.39分钟，[M+H]+＝575.2。
[0424] 实施例5：N-[3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)苯基]-7-[(2E)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)丁-2-烯酰基]-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺
[0425] 1H-NMR(CD3OD-d3)δ8.55(d，J ＝ 4.50Hz，1H)，8.32(s，1H)，7.91(t，1H)，7.78(m，1H)，7.70(d，J＝7.83Hz，1H)，7.41(m，2H)，7.10(d，J＝9.00Hz，1H)，6.82(m，1H)，6.43(m，
1H)，5.23(s，2H)，5.00(m，4H)，4.02(t，2H)，3.24(m，4H)，2.75(m，2H)，2.29(m，4H)，2.04(s，
3H)；
1H)，5.23(s，2H)，5.00(m，4H)，4.02(t，2H)，3.24(m，4H)，2.75(m，2H)，2.29(m，4H)，2.04(s，
3H)；
[0426] LCMS保留时间＝2.32分钟，[M+H]+＝590.2。
[0427] 实施例6：N-(3-氯-4-氟苯基)-7-[(2E)-4-吗啉-4-基丁-2-烯酰基]-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺
[0428] 1H-NMR(CD2Cl2-d2)δ 8.49(s，1H)，7.93(m，1H)，7.46(m，1H)，7.18(t，1H)，6.84(m，1H)，6.65(m，2H)，4.89(m，2H)，4.00(m，2H)，3.68(m，4H)，3.17(m，4H)，2.46(m，4H)；
[0429] LCMS保留时间＝2.40分钟，[M+H]+＝488.1。
[0430] 实施例8：N-(3-氯-4-氟苯基)-7-[(2E)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)丁-2-烯酰基]-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺
[0431] 1H-NMR(CD3OD-d3)δ8.36(s，1H)，7.87(m，1H)，7.54(m，1H)，7.22(t，1H)，6.82(s，1H)，6.78(m，1H)，4.02(t，2H)，3.27(m，4H)，3.22(m，2H)，2.75(m，4H)，2.64(m，4H)，2.47(s，
3H)；
3H)；
[0432] LCMS保留时间＝2.32分钟，[M+H]+＝501.1。
[0433] 实施例9：N-(3-氯-4-氟苯基)-7-[(2E)-4-(二乙基氨基)丁-2-烯酰基]-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，31:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺
[0434] 1H-NMR(CD3OD-d3)δ 8.39(s，1H)，7.87(m，1H)，7.54(m，1H)，7.24(t，1H)，7.13(dd，J ＝ 15.0，37.0Hz，1H)，6.80(m，1H)，4.06(t，2H)，3.93(t，2H)，3.30(m，4H)，
3.16(m，4H)，1.31(t，6H)；
3.16(m，4H)，1.31(t，6H)；
[0435] LCMS保留时间＝2.52分钟，[M+H]+＝474.1。
[0436] 实施例10：N-{3-氯-4-[(3-氟苯甲基)氧基]苯基}-7-[(2E)-4-吗啉-4-基丁-2-烯酰基]-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺
[0437] 1H-NMR(CD2Cl2-d2)δ8.45(s，1H)，7.81(m，1H)，7.40(m，2H)，7.26(m，2H)，7.06(td，J ＝ 8.48，2.34Hz，1H)，7.00(d，J ＝ 8.77Hz，1H)，6.84(m，2H)，6.55(m，1H)，5.17(s，2H)，4.88(m，2H)，4.03(m，2H)，3.69(m，4H)，3.17(m，4H)，2.46(m，4H)；
[0438] LCMS保留时间＝2.86分钟，[M+H]+＝594.3。
[0439] 实施例11：N-{3-氯-4-[(3-氟苯甲基)氧基]苯基}-7-[(2E)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰基]-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺
[0440] 1H-NMR(DMSO-d6)δ8.38(s，1H)，8.19(m，1H)，7.76(d，J ＝ 7.60Hz，1H)，7.51(d，J ＝ 8.96Hz，1H)，7.45(m，1H)，7.32-7.15(m，5H)，6.77(m，1H)，5.23(s，2H)，3.90(m，2H)，3.57(m，2H)，3.32(m，4H)，2.51(s，6H)；
[0441] LCMS保留时间＝2.83分钟，[M+H]+＝552.2。
[0442] 实施例12：N-(3-氯-4-氟苯基)-7-[(2E)-4-哌啶-1-基丁-2-烯酰基]-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺
[0443] 1H-NMR(DMSO-d6)δ 8.42(s，1H)，8.34(m，1H)，7.86(m，1H)，7.60(m，1H)，7.39(t，1H)，6.69(m，2H)，4.94(s，1H)，4.83(s，1H)，3.87(m，2H)，3.23(m，2H)，3.06(m，2H)，2.31(m，
4H)，1.47(m，4H)，1.36(m，2H)；
4H)，1.47(m，4H)，1.36(m，2H)；
[0444] LCMS保留时间＝2.55分钟，[M+H]+＝486.2。
[0445] 实施例13：N-{3-氯-4-[(3-氟苯甲基)氧基]苯基}-7-[(2E)-4-(二乙基氨基)丁-2-烯酰基]-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺
[0446] 1H-NMR(DMSO-d6)δ 8.40(s，1H)，8.20(m，1H)，7.74(m，1H)，7.46(d，J＝ 7.83Hz，1H)，7.43(m，1H)，7.30(m，2H)，7.21(d，J ＝ 9.2Hz，1H)，7.16(t，1H)，6.72(m，2H)，5.24(s，
2H)，4.96(s，1H)，4.86(s，1H)，3.88(m，2H)，3.28(m，8H)，0.97(m，6H)；
2H)，4.96(s，1H)，4.86(s，1H)，3.88(m，2H)，3.28(m，8H)，0.97(m，6H)；
[0447] LCMS保留时间＝2.89分钟，[M+H]+＝580.2。
[0448] 实施例14：N-{3-氯-4-[(3-氟苯甲基)氧基]苯基}-7-[(2E)-4-(4-甲基哌嗪-1-基)丁-2-烯酰基]-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺
[0449] 1H-NMR(DMSO-d6)δ 8.40(s，1H)，8.22(s，1H)，7.78(m，1H)，7.54(d，J＝ 8.61Hz，IH)，7.49(m，1H)，7.34(m，2H)，7.24(d，J ＝ 9.2Hz，1H)，7.20(t，1H)，6.73(m，2H)，5.27(s，2H)，4.97(s，1H)，4.87(s，1H)，3.94(m，2H)，3.38(s，3H)，3.26(m，2H)，3.14(m，2H)，2.37(m，
8H)；
8H)；
[0450] LCMS保留时间＝3.00分钟，[M+H]+＝607.3。
[0451] 实施例15：N-(3-乙炔基苯基)-7-[(2E)-4-吗啉-4-基丁-2-烯酰基]-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺
[0452] 1H-NMR(CD2Cl2-d2)δ 8.50(s，1H)，7.87(m，1H)，7.69(m，1H)，7.36(t，1H)，7.27(d，J＝ 7.6Hz，1H)，7.05(d，J＝ 38.9Hz，1H)，6.86(m，1H)，6.55(m，1H)，4.89(m，2H)，4.00(m，2H)，3.70(m，4H)，3.21(s，1H)，3.18(m，4H)，2.47(m，4H)；
[0453] LCMS保留时间＝2.29分钟，[M+H]+＝460.2。
[0454] 实施例16：7-[(2E)-4-(二乙基氨基)丁-2-烯酰基]-N-(3-乙炔基苯基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺
[0455] 1H-NMR(CD2Cl2-d2)δ 8.49(s，1H)，7.87(m，1H)，7.69(m，1H)，7.36(t，1H)，7.27(d，J＝ 7.6Hz，1H)，7.05(d，J＝ 38.9Hz，1H)，6.90(m，1H)，6.56(m，1H)，4.89(m，2H)，4.00(m，2H)，3.23(m，4H)，3.21(s，1H)，2.55(m，4H)，1.05(m，6H)；
[0456] LCMS保留时间＝2.32分钟，[M+H]+＝446.1。
[0457] 实施例17：7-[(2E)-4-(二甲基氨基)丁-2-烯酰基]-N-(3-乙炔基苯基)-5，6，7，8-四氢吡啶并[4′，3′:4，5]噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-胺
[0458] 1H-NMR(CD3OD-d3)δ 8.37(s，1H)，7.81(m，1H)，7.62(m，1H)，7.32(t，1H)，7.22(d，J ＝ 7.6Hz，1H)，6.89-6.70(m，2H)，4.02(t，2H)，3.52(s，1H)，3.27(m，2H)，3.20(m，4H)，2.29(s，6H)；
[0459] LCMS保留时间＝2.27分钟，[M+H]+＝418.1。
[0460] 表1
[0461]
[0462]
[0463]
[0464]
[0465]
[0466]
[0467]
[0468]
[0469]
[0470]
[0471]
[0472]
[0473]
[0474]
[0475]
[0476]
[0477]
[0478]
[0479]
[0480]
[0481]
[0482]
[0483]
[0484]
[0485]
[0486]
[0487]
[0488]
[0489]
[0490]
[0491]
[0492]
[0493]
[0494]
[0495]
[0496]
[0497]
[0498]
[0499]
[0500]
[0501]
[0502]
[0503]
[0504]
[0505]
[0506]
[0507]
[0508]
[0509]
[0510]
[0511]
[0512]
[0513]
[0514]
[0515]
[0516]
[0517]
[0518]
[0519]
[0520]
[0521]
[0522]
[0523]
[0524]
[0525]
[0526]
[0527]
[0528]
[0529]
[0530]
[0531] B.生理活性
[0532] 本发明化合物的用途，例如，可以通过其在下述体外肿瘤细胞增殖试验中的体外活性来说明。本技术领域已明确建立了体外肿瘤细胞增殖试验中的活性与临床背景下的抗肿瘤活性之间的联系。例如，使用体外肿瘤增殖试验论证了紫杉醇(Silvestrini等，Stem Cells(干细胞)1993，11(6)，528-35)、多烯紫杉醇(Bissery等，Anti Cancer Drugs(抗癌药物)1995，6(3)，339)，和拓扑异构酶抑制剂(Edelman等，CancerChemother.Pharmacol.(癌症化疗药理)1996，37(5)，385-93)的治疗用途。
[0533] 本文所述的许多化合物和组合物在下列任一指定细胞系中具有抗增殖活性，IC50≤50μM，因此可用于预防或治疗与增殖过度相关的病症。以下试验是用来确定与治疗本文指定病症相关的化合物活性的方法之一。
[0534] 用于检测本发明化合物的肿瘤细胞增殖试验，包括由 开发的称作CellLuminescent Cell Viability Assay(细胞发光滴 发光细胞活力试验)的读出(readout)(Cunningham，BA“AGrowing Issue:Cell Proliferation Assays，Modern kits ease quantificationof cell growth(生长问题：细胞增殖试验，现代试剂盒易于定量细胞生长)”The Scientist(科学家)2001，15(13)，26，和Crouch，SP等，“The useof ATP bioluminescence as a measure of cell proliferation andcytotoxicity(ATP生物发光体测量细胞增殖和细胞毒性的用途)”Journal of Immunological Methods(免疫学方法杂质)1993，160，81-88)，用其测量细胞增殖的抑制。发光信号的产生对应于ATP存在的量，其与代谢活性(增殖)细胞的数量成正比。
[0535] 在A431和BT474细胞系中的体外肿瘤细胞增殖试验
[0536] 以2.5×103细胞/孔的密度，将A431细胞[人表皮样癌，ATCC #HTB-20，过度表达HER1(EGFR，ErbB1)]和N87[人胃癌，ATCC #CRL-1555，过度表达HER2(ErbB2)和HER1(EGFR，ErbB1)]放在96孔黑-透明底(black-clear bottom)的组织培养板中，置于含10％胎牛血清的RPMI培养基中，在37℃下培养。24小时之后，加入供试化合物，使终浓度为100μm高至64pM低，取决于供试化合物在最终DMSO浓度为0.1％的系列稀释液中的活性。在加入供试化合物之后，细胞在全生长培养基中37℃下培养72小时。药品暴露72小时之后，使培养板平衡至室温大约30分钟。然后，使用Promega Cell Titer Glo 试验试剂盒，将包含100微升荧光素酶及其底物荧光素混合物的溶解缓冲液加至每个孔中。使培养板在定轨振荡器上混合2分钟，以确保细胞溶解，并在室温下培养10分钟以稳定发光信号。使用发光记录(Luminescence protocol)在VICTOR 2上读取样品信号，并用Analyze5软件进行分析，得出IC50数值。本试验中的本发明代表性化合物表现出对肿瘤细胞增殖的抑制。
[0537] A431细胞系中的活性：实施例1-7，9-22，26，59，92，105-108，110，114，115，118，123，124，126，150，157-158，160，194-199，205和206的IC50低于200nM；实施例8，24，
25，36，40，41，46，47，49，51，54，56，60-69，85，87，93-95，97-104，109，111-113，116，117，
119-122，125 和 125-129，132-135，138-143，147，149，159，161-165，170，172，176，180，
182-192，200-204，以及207-209的IC50为200至1000nM；实施例23，27-39，42-45，48，50，
52，53，57，58，70，72-84，86，88，89，90，91，96，136，137，144-146，148，151-155，166-169，
171，173-175，177-179，181和193的IC50为1μM至10μM。
25，36，40，41，46，47，49，51，54，56，60-69，85，87，93-95，97-104，109，111-113，116，117，
119-122，125 和 125-129，132-135，138-143，147，149，159，161-165，170，172，176，180，
182-192，200-204，以及207-209的IC50为200至1000nM；实施例23，27-39，42-45，48，50，
52，53，57，58，70，72-84，86，88，89，90，91，96，136，137，144-146，148，151-155，166-169，
171，173-175，177-179，181和193的IC50为1μM至10μM。
[0538] N87细胞系中的活性：实施例1-22，24-28，32，33，36，37，39-51，53-70，72-129，131-144，146-150，152-165和167-210的IC50低于200nM；实施例23，29，30，31，35，38，52，
145，151和166的IC50为200至5000nM。
145，151和166的IC50为200至5000nM。
[0539] 在H1975细胞中的体外肿瘤细胞增殖试验
[0540] 以3×103细胞/孔的密度，将H1975细胞[人类非小细胞肺癌，ATCC#CRL-5908，
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