由于生物技术的改进，生物活性肽进入医药工业的可行性已大大增加。 但是，在开发肽类药物中的一个限制性因素是口服给药时的相对无效性。 几乎所有的肽类药物都是经肠胃外给药，但是胃肠外给药肽类药物通常与 患者低依从性相联。
胰岛素是一种用于治疗患有糖尿病的患者的药物，是胰岛素依赖型糖 尿病的唯一治疗。糖尿病的特征是绝对或相对胰岛素缺乏的病理状态，导 致高血糖，是21世纪人类健康的主要威胁之一。全球糖尿病人口数预计在 2010年达到2.2亿，2025年达到3亿。I型糖尿病主要是由于胰腺不能产 生胰岛素引起。II型糖尿病涉及机体对胰岛素的作用不产生反应。
所有糖尿病人中约20％-30％每日使用胰岛素注射剂以维持血糖水平。 所有糖尿病人中估计10％完全依赖胰岛素注射剂。
目前，胰岛素的唯一给药途径是注射。每日注射胰岛素引起患者相当 痛苦。已知发生副作用，例如注射部位的脂肪营养不良、皮下脂肪萎缩 (lipatrophy)、皮下脂肪过度增生(lilpohypertrophy)以及偶发性低血糖。此外， 皮下给药胰岛素通常不提供由从胰腺分泌的经肝门静脉直接进入肝脏的胰 岛素通常所提供的精细、连续的代谢调节。
本发明解决用于胰岛素给药的替代方案的需要。

本发明提供包含蛋白质和ω-3脂肪酸的组合物以及用于治疗糖尿病的 方法，其包括给药所述组合物，本发明还提供用于口服给药具有酶活性的 蛋白质的方法，其包括口服给药所述具有酶活性的蛋白质。
在一个实施方案中，本发明提供包含胰岛素蛋白质和ω-3脂肪酸的组 合物。
在另一个实施方案中，本发明提供用于向个体口服给药具有酶活性的 蛋白质的方法，其中大部分(substantial fraction)蛋白质在通过个体的肠道粘 膜屏障吸收后仍保持酶活性，所述方法包括向所述个体口服给药包含所述 所述蛋白质和ω-3脂肪酸的药物组合物，从而将具有酶活性的蛋白质给药 于个体。
在另一个实施方案中，本发明提供用于治疗个体中糖尿病的方法，其 包括向所述个体口服给药包含胰岛素和ω-3脂肪酸的药物组合物，从而治 疗糖尿病。

本发明提供包含蛋白质和ω-3脂肪酸的组合物和方法。在一个实施方 案中，所述蛋白质的分子量为至多200000道尔顿。在优选的实施方案中， 所述蛋白质的分子量为至多100000道尔顿。在一个实施方案中，本发明提 供增强肠道吸收的增强剂。
在一个实施方案中，所述蛋白质是酶，在一些实施方案中，所述蛋白 质是受体配体、转运蛋白或贮存蛋白。在一个实施方案中，所述蛋白质是 结构蛋白。
在一些实施方案中，所述酶是氧化还原酶、转移酶、水解酶、裂解酶、 异构酶或连接酶。在一些实施方案中，氧化还原酶作用于供体的醛或氧代 基团，作用于供体的CH-CH基团，作用于供体的CH-NH(2)基团，作用于 供体的CH-NH基团，作用于NADH或NADPH，作用于供体的CH-OH基 团，作用于作为供体的含氮化合物，作用于供体的硫基团，作用于供体的 血红素基团，作用于作为供体的二元酚及相关物质，作用于作为受体的过 氧化物，作用于作为供体的氢，作用于引入分子氧的单一供体，作用于配 对的供体，作用于作为受体的超氧化物，氧化金属离子，作用于CH或CH(2) 基团，作用于作为供体的铁硫蛋白，作用于作为供体的还原的黄素氧还蛋 白，作用于供体中的磷或砷，或者作用于x-H和y-H以形成x-y键。
在一些实施方案中，转移酶是酰基转移酶或糖基转移酶。在一些实施 方案中，转移酶转移醛或酮残基。在一些实施方案中，转移酶转移除甲基 之外的烷基或芳基。在一些实施方案中，转移酶转移含氮、磷、硫或硒的 基团。
在一些实施方案中，水解酶或转葡糖基酶作用于醚键、肽键、除肽键 之外的碳氮键、酸酐、碳碳键、卤素键(halide bond)、磷氮键、硫氮键、碳 磷键、硫硫键或碳硫键。
在一些实施方案中，裂解酶是碳碳裂解酶、碳氧裂解酶、碳氮裂解酶、 碳硫裂解酶、碳卤素裂解酶、磷氧裂解酶或其它裂解酶。
在一些实施方案中，异构酶是消旋酶或差向异构酶、顺反异构酶、分 子内氧化还原酶、分子内转移酶、分子内裂解酶或其它异构酶。
在一些实施方案中，连接酶形成碳硫键、碳氮键、碳碳键、磷酯键或 氮金属键。
在一些实施方案中，转运蛋白是膜联蛋白、ATP结合盒转运蛋白、血 红蛋白、ATP酶、钙通道、钾通道、钠通道或溶质载体。
在一些实施方案中，贮存蛋白包括白蛋白、乳球蛋白、酪蛋白、卵粘 蛋白、铁蛋白、卵黄高磷蛋白、乳铁蛋白或卵黄原蛋白。在一个实施方案 中，白蛋白包括抗生物素蛋白、卵清蛋白、血清白蛋白、小清蛋白、C反 应蛋白、前白蛋白、伴白蛋白、蓖麻蛋白、乳白蛋白、变性清蛋白或转甲 状腺素蛋白。
在一些实施方案中，结构蛋白包括淀粉样蛋白、胶原弹性蛋白或微纤 维蛋白。
在一些实施方案中，所述蛋白质是病毒蛋白、细菌蛋白、无脊椎动物 蛋白或脊椎动物蛋白。在一些实施方案中，所述蛋白质是重组蛋白。在一 个实施方案中，所述蛋白质是重组蛋白。在一个实施方案中，所述重组蛋 白是重组人蛋白。
在一个实施方案中，本发明提供包含胰岛素蛋白质和ω-3脂肪酸的组 合物。如本文所提供的(实施例)，这些组合物用于口服给药胰岛素，其中胰 岛素通过肠道吸收以活性形式进入血流。
在另一个实施方案中，本发明提供包含具有酶活性的蛋白质和ω-3脂 肪酸的组合物。
在一个实施方案中，本发明的方法和组合物中的胰岛素是人胰岛素。 在另一个实施方案中，所述胰岛素是重组胰岛素。在另一个实施方案中， 所述胰岛素是重组人胰岛素。在另一个实施方案中，所述胰岛素是牛胰岛 素。在另一个实施方案中，所述胰岛素是猪胰岛素。在另一个实施方案中， 所述胰岛素是鲸胰岛素。在另一个实施方案中，所述胰岛素是胰岛素金属 复合物(例如胰岛素锌复合物、鱼精蛋白锌胰岛素或球蛋白锌)。
在另一个实施方案中，所述胰岛素是常规胰岛素。在另一个实施方案 中，所述胰岛素是速效胰岛素。在另一个实施方案中，所述胰岛素是慢胰 岛素。在另一个实施方案中，所述胰岛素是半慢胰岛素。在另一个实施方 案中，所述胰岛素是特慢胰岛素。在另一个实施方案中，所述胰岛素是NPH 胰岛素。在另一个实施方案中，所述胰岛素是甘精胰岛素。在另一个实施 方案中，所述胰岛素是赖脯胰岛素。在另一个实施方案中，所述胰岛素是 门冬胰岛素。在另一个实施方案中，所述胰岛素是上述类型胰岛素任何的 两种或多种的组合。在另一个实施方案中，所述胰岛素是本领域已知的任 何其它类型的胰岛素。每种可能都代表本发明的单独实施方案。
在一个实施方案中，本发明的方法和组合物中使用的胰岛素的量在人 中是0.5-3单位(u)/kg。在一个实施方案中，用于度量本发明的方法和组合 物中的胰岛素的单位是USP胰岛素单位。在一个实施方案中，用于度量胰 岛素的单位是毫克。在另一个实施方案中，一个USP胰岛素单位相当于45.5
mg胰岛素。
在另一个实施方案中，胰岛素的量为0.1-1u/kg。在另一个实施方案中， 其量为0.2-1u/kg。在另一个实施方案中，其量为0.3-1u/kg。在另一个实施 方案中，其量为0.5-1u/kg。在另一个实施方案中，其量为0.1-2u/kg。在另 一个实施方案中，其量为0.2-2u/kg。在另一个实施方案中，其量为0.3-2 u/kg。在另一个实施方案中，其量为0.5-2u/kg。在另一个实施方案中，其 量为0.7-2u/kg。在另一个实施方案中，其量为1-2u/kg。在另一个实施方 案中，其量为1.2-2u/kg。在另一个实施方案中，其量为1-1.2u/kg。在另一 个实施方案中，其量为1-1.5u/kg。在另一个实施方案中，其量为1-2.5u/kg。 在另一个实施方案中，其量为1-3u/kg。在另一个实施方案中，其量为2-3 u/kg。在另一个实施方案中，其量为1-5u/kg。在另一个实施方案中，其量 为2-5u/kg。在另一个实施方案中，其量为3-5u/kg。
在另一个实施方案中，胰岛素的量为0.1u/kg。在另一个实施方案中， 其量为0.2u/kg。在另一个实施方案中，其量为0.3u/kg。在另一个实施方 案中，其量为0.4u/kg。在另一个实施方案中，其量为0.5u/kg。在另一个 实施方案中，其量为0.6u/kg。在另一个实施方案中，其量为0.8u/kg。在 另一个实施方案中，其量为1u/kg。在另一个实施方案中，其量为1.2u/kg。 在另一个实施方案中，其量为1.4u/kg。在另一个实施方案中，其量为1.6 u/kg。在另一个实施方案中，其量为1.8u/kg。在另一个实施方案中，其量 为2u/kg。在另一个实施方案中，其量为2.2u/kg。在另一个实施方案中， 其量为2.5u/kg。在另一个实施方案中，其量为3u/kg。
在另一个实施方案中，胰岛素的量为1-10u。在另一个实施方案中， 其量为2-10u。在另一个实施方案中，其量为3-10u。在另一个实施方案中， 其量为5-10u。在另一个实施方案中，其量为1-20u。在另一个实施方案中， 其量为2-20u。在另一个实施方案中，其量为3-20u。在另一个实施方案中， 其量为5-20u。在另一实施方案中，其量为7-20u。在另一个实施方案中， 其量为10-20u。在另一个实施方案中，其量为12-20u。在另一个实施方案 中，其量为10-12u。在另一个实施方案中，其量为10-15u。在另一个实施 方案中，其量为10-25u。在另一个实施方案中，其量为10-30u。在另一个 实施方案中，其量为20-30u。在另一个实施方案中，其量为10-50u。在另 一个实施方案中，其量为20-50u。在另一个实施方案中，其量为30-50u。 在另一个实施方案中，其量为20-100u。在另一个实施方案中，其量为30-100 u。在另一个实施方案中，其量为100-150u。在另一个实施方案中，其量 为100-250u。在另一个实施方案中，其量为100-300u。在另一个实施方案 中，其量为200-300u。在另一个实施方案中，其量为100-500u。在另一个 实施方案中，其量为200-500u。在另一个实施方案中，其量为300-500u。 在另一个实施方案中，其量为200-1000u。在另一个实施方案中，其量为 300-1000u。
在另一个实施方案中，胰岛素的量为1u。在另一个实施方案中，其量 为2u。在另一个实施方案中，其量为3u。在另一个实施方案中，其量为4 u。在另一个实施方案中，其量为5u。在另一个实施方案中，其量为6u。 在另一个实施方案中，其量为8u。在另一个实施方案中，其量为10u。在 另一个实施方案中，其量为12u。在另一个实施方案中，其量为14u。在 另一个实施方案中，其量为16u。在另一个实施方案中，其量为18u。在 另一个实施方案中，其量为20u。在另一个实施方案中，其量为22u。在 另一个实施方案中，其量为25u。在另一个实施方案中，其量为30u。在 另一个实施方案中，其量为50u。在另一个实施方案中，其量为80u。在 另一个实施方案中，其量为100u。在另一个实施方案中，其量为120u。 在另一个实施方案中，其量为140u。在另一个实施方案中，其量为160u。 在另一个实施方案中，其量为180u。在另一个实施方案中，其量为200u。 在另一个实施方案中，其量为300u。在另一个实施方案中，其量为500u。
在另一个实施方案中，使用缓释剂型(例如缓释微囊)使治疗频率减少至 每日一次或两次。在另一个实施方案中，胰岛素剂量随给药频率的减少而 相应地增加。
胰岛素的每种量都代表本发明的单独实施方案。
测量胰岛素水平的方法在本领域是熟知的。在一个实施方案中，使用 人胰岛素放射免疫测定(RIA)试剂盒，例如Linco Research Inc，(圣查理，密 苏里州(St.Charles，Missouri))生产的试剂盒测量重组胰岛素的水平。在另一 个实施方案中，还测量C肽水平以确定内源性胰岛素和外源性胰岛素对观 察到的胰岛素水平的升高的相对贡献。在另一个实施方案中，使用胰岛素 ELISA试剂盒。在另一个实施方案中，使用本领域已知的任何其它方法测 量胰岛素水平。每种可能都代表本发明的单独实施方案。
在一些实施方案中，ω-3脂肪酸可在植物源例如野鼠尾草、紫苏、亚麻、 胡桃、马齿苋、越橘、沙棘和大麻的种子中找到。在一些实施方案中，ω-3 脂肪酸还可在爱莎伊(acai)棕榈果中找到。在另一个实施方案中，ω-3脂肪 酸以合成ω-3脂肪酸的形式提供。在一个实施方案中，本发明的方法和组 合物中的ω-3脂肪酸以鱼油的形式提供在组合物中。在另一个实施方案中， ω-3脂肪酸以低芥酸菜子油(canola oil)的形式提供。在另一个实施方案中， ω-3脂肪酸以亚麻油的形式提供。在另一个实施方案中，ω-3脂肪酸以本领 域已知的任何其它富含ω-3脂肪酸的来源的形式提供。在另一个实施方案 中，ω-3脂肪酸以合成ω-3脂肪酸的形式提供。每种ω-3脂肪酸形式都代表 本发明的单独实施方案。
在另一个实施方案中，本发明的方法和组合物中的ω-3脂肪酸是ω-3 多不饱和脂肪酸。在另一个实施方案中，ω-3脂肪酸是DHA，为ω-3多不 饱和22碳脂肪酸，也称为4，7，10，13，16，19-二十二碳六烯酸。在另一个实 施方案中，ω-3脂肪酸是α-亚麻酸(9，12，15-十八碳三烯酸)。在另一个实施 方案中，ω-3脂肪酸是硬脂艾杜糖酸(stearidonic acid)(6，9，12，15-十八碳四 烯酸)。在另一个实施方案中，ω-3脂肪酸是二十碳三烯酸(ETA；11，14，17- 二十碳三烯酸)。在另一个实施方案中，ω-3脂肪酸是二十碳四烯酸(8，11，14， 17-二十碳四烯酸)。在一个实施方案中，ω-3脂肪酸是二十碳五烯酸(EPA；5， 8，11，14，17-二十碳五烯酸)。在另一个实施方案中，ω-3脂肪酸是二十碳六 烯酸(也称为＂EPA＂；5，7，9，11，14，17-二十碳六烯酸)。在另一个实施方案中， ω-3脂肪酸是二十二碳五烯酸(DPA；7，10，13，16，19-二十二碳五烯酸)。在另 一个实施方案中，ω-3脂肪酸是二十四碳六烯酸(6，9，12，15，18，21-二十四 碳六烯酸)。在另一个实施方案中，ω-3脂肪酸是本领域已知的任何其它ω-3 脂肪酸。每种ω-3脂肪酸都代表本发明的单独实施方案。
在另一个实施方案中，本发明的组合物进一步包含蛋白酶抑制剂。如 本文所提供，蛋白酶抑制剂增强ω-3脂肪酸保护胰岛素的能力并促进其在 肠道中的吸收。
在一些实施方案中，蛋白酶抑制剂抑制肽酶功能。在一个实施方案中， 蛋白酶抑制剂增强ω-3脂肪酸保护本发明的蛋白质的能力并促进其在肠道 中的吸收。在一些实施方案中，本发明的蛋白酶抑制剂是蛋白质。在一些 实施方案中，蛋白酶抑制剂包含半胱氨酸蛋白酶抑制剂、丝氨酸蛋白酶抑 制剂(Serpins)、胰蛋白酶抑制剂、苏氨酸蛋白酶抑制剂、天冬氨酸蛋白酶抑 制剂、金属蛋白酶抑制剂。在一些实施方案中，蛋白酶抑制剂包含自杀抑 制剂、过渡态抑制剂或螯合剂。
在一个实施方案中，蛋白酶抑制剂是大豆胰蛋白酶抑制剂(SBTI)。在 另一个实施方案中，蛋白酶抑制剂是AEBSF-HCl。在另一个实施方案中， 抑制剂是(ε)-氨基己酸。在另一个实施方案中，抑制剂是(α)1-抗胰凝乳蛋白 酶((alpha)1-antichymotypsin)。在另一个实施方案中，抑制剂是抗蛋白酶。 在另一个实施方案中，抑制剂是抗凝血酶III。在另一个实施方案中，抑制 剂是(α)1-抗胰蛋白酶([α]1-蛋白酶抑制剂)。在另一个实施方案中，抑制剂 是APMSF-HCl(4-脒基苯基-甲磺酰氟)。在另一个实施方案中，抑制剂是 sprotinin。在另一个实施方案中，抑制剂是苯甲脒-HCl。在另一个实施方案 中，抑制剂是胰凝乳蛋白酶抑制剂。在另一个实施方案中，抑制剂是DFP(氟 磷酸二异丙酯)。在另一个实施方案中，抑制剂是亮抑蛋白酶肽。在另一个 实施方案中，抑制剂是 SC(4-(2-氨基乙基)-苯磺酰氟盐酸盐)。 在另一个实施方案中，抑制剂是PMSF(苯基甲磺酰氟)。在另一个实施方案 中，抑制剂是TLCK(1-氯-3-甲苯磺酰氨基-7-氨基-2-庚酮HCl)。在另一个 实施方案中，抑制剂是TPCK(1-氯-3-甲苯磺酰氨基-4-苯基-2-丁酮)。在另 一个实施方案中，抑制剂是来自卵清的胰蛋白酶抑制剂(卵类粘蛋白)。在另 一个实施方案中，抑制剂是来自大豆的胰蛋白酶抑制剂。在另一个实施方 案中，抑制剂是抑酶肽。在另一个实施方案中，抑制剂是羟乙磺酸喷他脒。 在另一个实施方案中，抑制剂是胃蛋白酶抑制剂。在另一个实施方案中， 抑制剂是胍鎓(guanidium)。在另一个实施方案中，抑制剂是α2-巨球蛋白。 在另一个实施方案中，抑制剂是锌螯合剂。在另一个实施方案中，抑制剂 是碘乙酸盐(iodoacetate)。在另一个实施方案中，抑制剂是锌。每种可能都 代表本发明的单独实施方案。
在另一个实施方案中，本发明的方法和组合物中使用的蛋白酶抑制剂 的量为0.1mg/剂量单位。在另一个实施方案中，蛋白酶抑制剂的量为0.2 mg/剂量单位。在另一个实施方案中，其量为0.3mg/剂量单位。在另一个 实施方案中，其量为0.4mg/剂量单位。在另一个实施方案中，其量为0.6mg/ 剂量单位。在另一个实施方案中，其量为0.8mg/剂量单位。在另一个实施 方案中，其量为1mg/剂量单位。在另一个实施方案中，其量为1.5mg/剂 量单位。在另一个实施方案中，其量为2mg/剂量单位。在另一个实施方案 中，其量为2.5mg/剂量单位。在另一个实施方案中，其量为3mg/剂量单 位。在另一个实施方案中，其量为5mg/剂量单位。在另一个实施方案中， 其量为7mg/剂量单位。在另一个实施方案中，其量为10mg/剂量单位。在 另一个实施方案中，其量为12mg/剂量单位。在另一个实施方案中，其量 为15mg/剂量单位。在另一个实施方案中，其量为20mg/剂量单位。在另 一个实施方案中，其量为30mg/剂量单位。在另一个实施方案中，其量为 50mg/剂量单位。在另一个实施方案中，其量为70mg/剂量单位。在另一 个实施方案中，其量为100mg/剂量单位。
在另一个实施方案中，蛋白酶抑制剂的量为0.1-1mg/剂量单位。在另 一个实施方案中，蛋白酶抑制剂的量为0.2-1mg/剂量单位。在另一个实施 方案中，其量为0.3-1mg/剂量单位。在另一个实施方案中，其量为0.5-1mg/ 剂量单位。在另一个实施方案中，其量为0.1-2mg/剂量单位。在另一个实 施方案中，其量为0.2-2mg/剂量单位。在另一个实施方案中，其量为0.3-2 mg/剂量单位。在另一个实施方案中，其量为0.5-2mg/剂量单位。在另一个 实施方案中，其量为1-2mg/剂量单位。在另一个实施方案中，其量为1-10 mg/剂量单位。在另一个实施方案中，其量为2-10mg/剂量单位。在另一个 实施方案中，其量为3-10mg/剂量单位。在另一个实施方案中，其量为5-10 mg/剂量单位。在另一个实施方案中，其量为1-20mg/剂量单位。在另一个 实施方案中，其量为2-20mg/剂量单位。在另一个实施方案中，其量为3-20 mg/剂量单位。在另一个实施方案中，其量为5-20mg/剂量单位。在另一个 实施方案中，其量为10-20mg/剂量单位。在另一个实施方案中，其量为 10-100mg/剂量单位。在另一个实施方案中，其量为20-100mg/剂量单位。 在另一个实施方案中，其量为30-100mg/剂量单位，在另一个实施方案中， 其量为50-100mg/剂量单位。在另一个实施方案中，其量为10-200mg/剂 量单位。在另一个实施方案中，其量为20-200mg/剂量单位，在另一个实 施方案中，其量为30-200mg/剂量单位。在另一个实施方案中，其量为50-200 mg/剂量单位。在另一个实施方案中，其量为100-200mg/剂量单位。
在另一个实施方案中，本发明的方法和组合物中使用的蛋白酶抑制剂 的量是1000k.i.u.(激肽释放酶灭活单位)/丸。在另一个实施方案中，其量为 10k.i.u./剂量单位，在另一个实施方案中，其量为12k.i.u./剂量单位，在另 一个实施方案中，其量为15k.i.u./剂量单位。在另一个实施方案中，其量 为20k.i.u./剂量单位。在另一个实施方案中，其量为30k.i.u./剂量单位，在 另一个实施方案中，其量为40k.i.u./剂量单位。在另一个实施方案中，其 量为50k.i.u./剂量单位。在另一个实施方案中，其量为70k.i.u./剂量单位。 在另一个实施方案中，其量为100k.i.u./剂量单位。在另一个实施方案中， 其量为150k.i.u./剂量单位。在另一个实施方案中，其量为200k.i.u./剂量单 位。在另一个实施方案中，其量为300k.i.u./剂量单位。在另一个实施方案 中，其量为500k.i.u./剂量单位，在另一个实施方案中，其量为700k.i.u./ 剂量单位，在另一个实施方案中，其量为1500k.i.u./剂量单位。在另一个 实施方案中，其量为3000k.i.u/剂量单位。在另一个实施方案中，其量为 4000k.i.u/剂量单位。在另一个实施方案中，其量为5000k.i.u./剂量单位。
蛋白酶抑制剂的每种量都代表本发明的单独实施方案。
在另一个实施方案中，本发明的方法和组合物中的蛋白酶抑制剂的靶 向蛋白酶是丝氨酸蛋白酶。在另一个实施方案中，所述蛋白酶是胰蛋白酶。 在另一个实施方案中，所述蛋白酶是胰凝乳蛋白酶。在另一个实施方案中， 所述蛋白酶是羧肽酶。在另一个实施方案中，所述蛋白酶是氨基肽酶。在 另一个实施方案中，所述蛋白酶是在十二指肠或小肠中发挥功能的任何其 它蛋白酶。每种可能都代表本发明的单独实施方案。
在另一个实施方案中，本发明的组合物进一步包含增强胰岛素通过肠 粘膜屏障吸收的物质。该物质在本文被称作“增强剂”。如本文所提供，当 增强剂与ω-3脂肪酸一起使用时增强胰岛素在肠道中吸收的能力。
在一个实施方案中，所述增强剂是十二酰磷脂酰胆碱(DDPC)。在一个 实施方案中，所述增强剂是螯合剂例如乙二胺四乙酸(EDTA)或依他酸 EGTA。在优选的实施方案中，EDTA是EDTA钠。在一些实施方案中，所 述增强剂是NO供体。在一些实施方案中，所述增强剂是胆汁酸、胆汁酸 的甘氨酸结合形式或碱金属盐。在一个实施方案中，通过使用α-半乳糖苷 酶和β-甘露聚糖酶来实现吸收增强。在一些实施方案中，所述增强剂是脂 肪酸例如癸酸钠。在一个实施方案中，所述增强剂是甘氨胆酸钠。在一个 实施方案中，所述增强剂是水杨酸钠。在一个实施方案中，所述增强剂是 正十二烷基-β-D-麦芽糖吡喃糖苷。在一些实施方案中，表面活性剂作为吸 收增强剂。在一个实施方案中，所述增强剂是壳聚糖(chitisan)例如N，N，N- 三甲基壳聚糖盐酸盐(TMC)。
在一个实施方案中，本发明的NO供体包含3-(2-羟基-1-(1-甲基乙基)-2- 亚硝基肼基)-1-丙胺、N-乙基-2-(1-乙基-羟基-2-亚硝基肼基)-乙胺或S-亚硝 基-N-乙酰青霉胺。
在另一个实施方案中，所述胆汁酸是胆酸，在另一个实施方案中，所 述胆汁酸是鹅脱氧胆酸，在另一个实施方案中，所述胆汁酸是牛磺胆酸。 在另一个实施方案中，所述胆汁酸是牛磺鹅脱氧胆酸。在另一个实施方案 中，所述胆汁酸是甘氨胆酸，在另一个实施方案中，所述胆汁酸是甘氨鹅 胆酸(glycochenocholic acid)。在另一个实施方案中，所述胆汁酸是3β-一羟 基胆酸(3.beta.-monohydroxychloric acid)。在另一个实施方案中，所述胆汁 酸是石胆酸。在另一个实施方案中，所述胆汁酸是5β-胆烷酸。在另一个实 施方案中，所述胆汁酸是3，12-二醇-7-酮-5β-胆烷酸。在另一个实施方案中， 所述胆汁酸是3α-羟基-12-酮胆酸。在另一个实施方案中，所述胆汁酸是3β- 羟基-12-酮胆酸。在另一个实施方案中，所述胆汁酸是12α-3β-二氢胆酸。 在另一个实施方案中，所述胆汁酸是熊脱氧胆酸。
在一个实施方案中，所述增强剂是非离子型表面活性剂。在一个实施 方案中，所述增强剂是非离子型聚氧乙烯醚表面活性剂(例如HLB值为6 至19的表面活性剂，其中聚氧乙烯单元的平均数目是4至30)。在另一个 实施方案中，所述增强剂是阴离子型表面活性剂。在另一个实施方案中， 所述增强剂是阳离子型表面活性剂。在另一个实施方案中，所述增强剂是 两性表面活性剂。在一个实施方案中，两性离子型表面活性剂例如酰基肉 碱作为吸收增强剂。
在另一个实施方案中，本发明的方法和组合物中使用的增强剂的量为 0.1mg/剂量单位。在另一个实施方案中，增强剂的量为0.2mg/剂量单位， 在另一个实施方案中，其量为0.3mg/剂量单位，在另一个实施方案中，其 量为0.4mg/剂量单位，在另一个实施方案中，其量为0.6mg/剂量单位。在 另一个实施方案中，其量为0.8mg/剂量单位，在另一个实施方案中，其量 为1mg/剂量单位。在另一个实施方案中，其量为1.5mg/剂量单位，在另 一个实施方案中，其量为2mg/剂量单位，在另一个实施方案中，其量为 2.5mg/剂量单位。在另一个实施方案中，其量为3mg/剂量单位，在另一个 实施方案中，其量为5mg/剂量单位。在另一个实施方案中，其量为7mg/ 剂量单位，在另一个实施方案中，其量为10mg/剂量单位，在另一个实施 方案中，其量为12mg/剂量单位。在另一个实施方案中，其量为15mg/剂 量单位。在另一个实施方案中，其量为20mg/剂量单位，在另一个实施方 案中，其量为30mg/剂量单位。在另一个实施方案中，其量为50mg/剂量 单位。在另一个实施方案中，其量为70mg/剂量单位，在另一个实施方案 中，其量为100mg/剂量单位。
在另一个实施方案中，增强剂的量为0.1-1mg/剂量单位。在另一个实 施方案中，增强剂的量为0.2-1mg/剂量单位，在另一个实施方案中，其量 为0.3-1mg/剂量单位。在另一个实施方案中，其量为0.5-1mg/剂量单位。 在另一个实施方案中，其量为0.1-2mg/剂量单位。在另一个实施方案中， 其量为0.2-2mg/剂量单位。在另一个实施方案中，其量为0.3-2mg/剂量单 位。在另一个实施方案中，其量为0.5-2mg/剂量单位，在另一个实施方案 中，其量为1-2mg/剂量单位。在另一个实施方案中，其量为1-10mg/剂量 单位，在另一个实施方案中，其量为2-10mg/剂量单位。在另一个实施方 案中，其量为3-10mg/剂量单位。在另一个实施方案中，其量为5-10mg/ 剂量单位。在另一个实施方案中，其量为1-20mg/剂量单位。在另一个实 施方案中，其量为2-20mg/剂量单位。在另一个实施方案中，其量为3-20mg/ 剂量单位。在另一个实施方案中，其量为5-20mg/剂量单位。在另一个实 施方案中，其量为10-20mg/剂量单位。在另一个实施方案中，其量为10-100 mg/剂量单位。在另一个实施方案中，其量为20-100mg/剂量单位。在另一 个实施方案中，其量为30-100mg/剂量单位。在另一个实施方案中，其量 为50-100mg/剂量单位。在另一个实施方案中，其量为10-200mg/剂量单 位。在另一个实施方案中，其量为20-200mg/剂量单位。在另一个实施方 案中，其量为30-200mg/剂量单位。在另一个实施方案中，其量为50-200mg/ 剂量单位。在另一个实施方案中，其量为100-200mg/剂量单位。
增强剂的每种类型和量都代表本发明的单独实施方案。
在另一个实施方案中，本发明的组合物进一步包含抑制所述组合物在 个体的胃中消化的包衣。
在一个实施方案中，包衣抑制所述组合物在个体的胃中消化。在一个 实施方案中，本发明的包衣剂型在pH移向碱性范围时释放药物。在一个实 施方案中，包衣是单层包衣，其中在其它实施方案中，是多层施用的包衣。 在一个实施方案中，包衣是与肠粘膜选择性结合并因此能够在附着部位释 放药物的生物粘附性聚合物。在一个实施方案中，肠溶衣是肠溶薄膜包衣。 在一些实施方案中，包衣包含可生物降解的多糖、壳聚糖、含水肠溶衣 (aquateric aqueous)、乙基纤维素水分散体(aquacoat ECD)、偶氮聚合物、醋 酸邻苯二甲酸纤维素、醋酸偏苯三酸纤维素、羟丙基甲基邻苯二甲酸纤维 素、明胶、聚醋酸乙烯邻苯二甲酸酯、水凝胶、脉冲塞胶囊(pulsincap)或它 们的组合。在一个实施方案中，如本领域技术人员已知，将根据期望的释 放部位和/或特征来使用pH敏感性包衣。
在一个实施方案中，所述包衣是肠溶衣。关于肠溶衣的方法是本领域 熟知的，例如在Siepmann F，Siepmann J等，Blends of aqueous polymer dispersions used for pellet coating：importance of the particle size.J Control Release 2005；105(3)：226-39；和Huyghebaert N，Vermeire A，Remon JP.In vitro evaluation of coating polymers for enteric coating and human ileal targeting.Int J Pharm 2005；298(1)：26-37中已描述。每种方法都代表本发明 的单独实施方案。
在另一个实施方案中，使用丙烯酸聚合物作为肠溶衣。使用 丙烯酸聚合物用于药物制剂的包衣是本领域中熟知的。已表明Eudragit丙 烯酸聚合物安全，既不被机体吸收，也不被机体代谢，而是被清除。
在另一个实施方案中，所述包衣是明胶包衣。在另一个实施方案中， 使用微囊保护胰岛素不在胃中分解。施用明胶包衣以及用于微囊包囊的方 法在本领域是已知的。每种方法都代表本发明的单独实施方案。
在另一个实施方案中，所述包衣是薄膜包衣。在另一个实施方案中， 所述包衣是乙基纤维素。在另一个实施方案中，所述包衣是乙基纤维素的 水系分散体，例如羟丙基甲基纤维素(HPMC)E15。在另一个实施方案中， 所述包衣是在胃耐性包衣，例如包含羧酸基团作为官能团的聚合物。在另 一个实施方案中，包衣是整体基质(monolithic matrix)。在另一个实施方案 中，所述包衣是纤维素醚(例如羟丙甲纤维素(HPMC)。每种类型的包衣都 代表本发明的单独实施方案。
在另一个实施方案中，使用多颗粒剂型抑制组合物在胃中的消化。
抑制组合物在胃中消化的每种类型的包衣、剂型等都代表本发明的单 独实施方案。
在另一个实施方案中，本发明提供将具有酶活性的蛋白质口服给药于 个体的方法，由此所述蛋白质的大部分在通过所述个体的肠道粘膜屏障吸 收后仍保持所述酶活性，所述方法包括向所述个体口服给药包含蛋白质和 ω-3脂肪酸的药物组合物，从而将具有酶活性的蛋白质口服给药于个体。
在一个实施方案中，所述蛋白质是重组蛋白。在一个实施方案中，所 述蛋白质是胰岛素。在另一个实施方案中，所述蛋白质是胰高血糖素，在 另一个实施方案中，所述蛋白质是干扰素γ。在另一个实施方案中，所述蛋 白质是胰岛素α。在另一个实施方案中，所述蛋白质是生长激素。在另一 个实施方案中，所述蛋白质是促红细胞生成素。在另一个实施方案中，所 述蛋白质是粒细胞集落刺激因子(G-CSF)。在另一个实施方案中，所述蛋白 质是本领域已知的任何其它蛋白质。
在另一个实施方案中，所述蛋白质是生长激素。在一个实施方案中， 所述生长激素是生长素。在另一个实施方案中，所述生长激素是胰岛素生 长因子-I(IGF-I)。在另一个实施方案中，所述生长激素是本领域已知的任 何其它生长激素。
在另一个实施方案中，所述蛋白质的分子量(MW)为1-50千道尔顿 (kDa)。在另一个实施方案中，MW是1-45kDa。在另一个实施方案中， MW是1-40kDa。在另一个实施方案中，MW是1-35kDa。在另一个实施 方案中，MW是1-30kDa。在另一个实施方案中，MW是1-25kDa。在另 一个实施方案中，MW是1-20kDa。在另一个实施方案中，MW是10-50kDa。 在另一个实施方案中，MW是15-50kDa。在另一个实施方案中，MW是 20-50kDa。在另一个实施方案中，MW是25-50kDa。在另一个实施方案 中，MW是30-50kDa。在另一个实施方案中，MW是35-50kDa。在另一 个实施方案中，MW是1-100kDa。在另一个实施方案中，MW是1-90kDa。 在另一个实施方案中，MW是1-80kDa。在另一个实施方案中，MW是1-70 kDa。在另一个实施方案中，MW是1-60kDa。在另一个实施方案中，MW 是10-100kDa。在另一个实施方案中，MW是15-100kDa。在另一个实施 方案中，MW是20-100kDa。在另一个实施方案中，MW是25-100kDa。 在另一个实施方案中，MW是30-100kDa。在另一个实施方案中，MW是 10-80kDa。在另一个实施方案中，MW是15-80kDa。在另一个实施方案 中，MW是20-80kDa。在另一个实施方案中，MW是25-80kDa。在另一 个实施方案中，MW是30-80kDa。每种可能都代表本发明的单独实施方案。
在另一个实施方案中，MW小于20kDa。在另一个实施方案中，MW 小于25kDa。在另一个实施方案中，MW小于30kDa。在另一个实施方案 中，MW小于35kDa。在另一个实施方案中，MW小于40kDa。在另一个 实施方案中，MW小于45kDa。在另一个实施方案中，MW小于50kDa。 在另一个实施方案中，MW小于55kDa。在另一个实施方案中，MW小于 60kDa。在另一个实施方案中，MW小于65kDa。在另一个实施方案中， MW小于70kDa。在另一个实施方案中，MW小于75kDa。在另一个实施 方案中，MW小于80kDa。在另一个实施方案中，MW小于85kDa。在另 一个实施方案中，MW小于90kDa。在另一个实施方案中，MW小于95kDa。 在另一个实施方案中，MW小于100kDa。
上述蛋白质中的一些的分子量如下：胰岛素-6千道尔顿(kDa)；胰高血 糖素-3.5kDa；干扰素-28kDa；生长激素-21.5-47kDa；人血清白蛋白-69 kDa；促红细胞生成素-34kDa；G-CSF-30-34kDa。因此，在一个实施方案 中，这些蛋白质的分子量适合于通过本发明的方法给药。
在另一个实施方案中，本发明的方法和组合物用于给药人血清白蛋白。 在一个实施方案中，人血清白蛋白不被认为是药学活性组分；但是，在本 发明中它可以用作用于活性组分的治疗有益的载体。
每种类型的蛋白质都代表本发明的单独实施方案。
在另一个实施方案中，本发明提供治疗个体中糖尿病的方法，其包括 向所述个体给药包含胰岛素和ω-3脂肪酸的药物组合物，从而治疗糖尿病。
在一个实施方案中，所述糖尿病是I型糖尿病，在另一个实施方案中， 所述糖尿病是II型糖尿病。在另一个实施方案中，所述糖尿病是胰岛素依 赖型糖尿病。在另一个实施方案中，所述糖尿病是非胰岛素依赖型糖尿病。 在另一个实施方案中，所述糖尿病是本领域已知的任何类型的糖尿病。每 种可能都代表本发明的单独实施方案。
在一个实施方案中，每日给药胰岛素组合物三次。在另一个实施方案 中，每日给药两次。在另一个实施方案中，每日给药四次。在另一个实施 方案中，每日给药一次。在另一个实施方案中，每日给药多于四次。每种 可能都代表本发明的单独实施方案。
本发明的任何方法都可以在各种实施方案中使用本发明的任何组合 物。
在另一个实施方案中，本发明提供用于口服给药胰岛素的组合物，其 包含胰岛素蛋白质和ω-3脂肪酸，由此所述胰岛素的大部分在通过所述个 体肠道粘膜屏障吸收后仍保持所述酶活性。
在一个实施方案中，本发明提供用于口服给药蛋白质的组合物，其包 含蛋白质和ω-3脂肪酸，由此所述蛋白质的大部分在通过所述个体肠道粘 膜屏障吸收后仍保持所述酶活性。
在一个实施方案中，本发明提供蛋白质和ω-3脂肪酸在生产用于向个 体口服给药具有酶活性的蛋白质的药物中的应用，由此所述蛋白质的大部 分在通过所述个体的肠道粘膜屏障吸收后仍保持所述酶活性。
在一个实施方案中，本发明提供胰岛素蛋白质和ω-3脂肪酸在制备用 于治疗个体中糖尿病的药物中的应用。
在一个实施方案中，本发明的方法和组合物具有更近似地模拟胰腺对 胰岛素的生理分泌作用。当胰岛素被分泌入门静脉时，肝脏比外周组织接 触更高浓度的胰岛素。与此相似，根据本发明给药的胰岛素到达肠道，被 机体通过肠道吸收，并通过门静脉系统进入肝脏。因此该吸收路线与胰腺 对胰岛素的生理分泌相似，在该实施方案中，能够精细地控制血糖水平以 及由胰岛素控制的肝脏和外周器官的代谢活动。与此相反，当胰岛素通过 外周静脉系统给药于缺乏胰岛素的糖尿病患者时，门静脉中胰岛素的浓度 与外周循环中的浓度相似，导致门静脉和肝脏中低血胰岛素血症和外周静 脉系统中高胰岛素血症。在一个实施方案中，这导致异常的葡萄糖处置模 式。
在另一个实施方案中，本发明的组合物的不同组分以不同的速率从肠 腔被吸收入血流。在一个实施方案中，胆汁酸的吸收显著快于胰岛素的吸 收。
因此，在另一个实施方案中，给药方案包括间隔一段时间摄入一对丸 剂，例如，第一丸剂后在确定的时间间隔(例如30分钟)摄入含有较高浓度 增强剂的第二丸剂。在另一个实施方案中，将某些组分微囊化以增强胰岛 素吸收入系统。
在一个实施方案中，本发明的处理方案是治疗性的。在另一个实施方 案中，所述方案是预防性的。每种可能都代表本发明的单独实施方案。
在另一个实施方案中，本发明的方法和组合物中使用的固体载体/稀释 剂包括但不限于树胶、淀粉(例如玉米淀粉、预胶化淀粉)、糖(例如乳糖、 甘露糖醇、蔗糖、葡萄糖)、纤维素材料(例如微晶纤维素)、丙烯酸酯(例如 聚甲基丙烯酸酯)、碳酸钙、氧化镁、滑石或它们的混合。
在另一个实施方案中，所述组合物进一步包含粘合剂(例如阿拉伯胶、 玉米淀粉、明胶、卡波姆、乙基纤维素、瓜耳胶、羟丙基纤维素、羟丙基 甲基纤维素、聚维酮)、崩解剂(例如玉米淀粉、马铃薯淀粉、褐藻酸、二氧 化硅、交联甲羧纤维素钠、交聚维酮、瓜耳胶、羟基乙酸淀粉钠)、各种pH 和离子强度的缓冲剂(例如Tris-HCL、醋酸盐、磷酸盐)、防止表面吸附的 添加剂例如白蛋白或明胶、洗涤剂(例如吐温20、吐温80、Pluronic F68、 胆汁酸盐)、蛋白酶抑制剂、表面活性剂(例如月桂基硫酸钠)、渗透增强剂、 助溶剂(例如甘油、聚乙二醇)、抗氧化剂(例如抗坏血酸、焦亚硫酸钠、丁 基化羟基苯甲醚)、稳定剂(例如羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素)、增粘 剂(例如卡波姆、胶态二氧化硅、乙基纤维素、瓜耳胶)、甜味剂(例如阿司 帕坦、柠檬酸)、防腐剂(例如乙基汞硫代水杨酸钠、苄醇、对羟基苯甲酸酯 类)、润滑剂(例如硬脂酸、硬脂酸镁、聚乙二醇、月桂基硫酸钠)、助流剂(例 如胶态二氧化硅)、增塑剂(例如邻苯二甲酸二乙酯、柠檬酸三乙酯)、乳化 剂(例如卡波姆、羟丙基纤维素、月桂基硫酸钠)、聚合物包衣剂(例如泊洛 沙姆或泊洛沙胺)、包衣剂或成膜剂(例如乙基纤维素、丙烯酸酯、聚甲基丙 烯酸酯)和/或辅剂。以上每种辅剂都代表本发明的单独实施方案。
在一些实施方案中，配制本发明的剂型以获得速释特征、缓释特征或 延时释放特征。在一些实施方案中，通过使用特定的赋形剂来决定组合物 的释放特征，所述赋形剂例如作为粘合剂、崩解剂、填充剂或包衣材料。 在一个实施方案中，将配制所述组合物以获得本领域技术人员已知的特定 释放特征。
在一个实施方案中，配制所述组合物为口服剂型。在一个实施方案中， 所述组合物为固体口服剂型，包括片剂、咀嚼片剂或胶囊剂。在一个实施 方案中，所述胶囊剂是软明胶胶囊。
在其它实施方案中，本发明的方法和组合物中使用的控释包衣或缓释 包衣包括在亲脂性贮存单元(例如脂肪酸、蜡、油)中的制剂。
在另一个实施方案中，所述组合物还包含将活性物质引入或引至聚合 物例如聚乳酸、聚乙醇酸、水凝胶等的颗粒制剂中或其上，或者引至脂质 体、微乳、微囊、单层或多层囊泡、红细胞影或球形体上。这些组合物将 影响物理状态、溶解度、稳定性、体内释放速率和体内清除速率。在另一 个实施方案中，活性成分的颗粒组合物用聚合物(例如泊洛沙姆或泊洛沙胺) 包衣。
在另一个实施方案中，包含胰岛素和ω-3脂肪酸的组合物在囊泡例如 脂质体中递送(参见Langer，Science 249：1527-1533(1990)；Treat等， Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Cancer，Lopez-Berestein and Fidler(eds.)，Liss，New York，pp.353-365(1989)；Lopez-Berestein，ibid.， pp.317-327；一般内容参见同前)。
例如通过混合、制粒或压片方法对含有活性组分的药物组合物的制备 是本领域中熟知的。通常将治疗活性成分与药学可接受的、与活性成分相 容的赋形剂混合。对于口服给药，本发明的组合物的活性成分与通常用于 该目的的添加剂例如载体、稳定剂或惰性稀释剂混合，并通过常规方法转 化为合适的给药形式，例如片剂、包衣片剂、硬或软明胶胶囊、水溶液、 醇或油溶液。
上述每种添加剂、赋形剂、制剂和给药方法都代表本发明的单独实施 方案。
在一个实施方案中，术语“治疗”是指治愈疾病。在另一个实施方案中， “治疗”是指预防疾病。在另一个实施方案中，“治疗”是指降低疾病的发病 率。在另一个实施方案中，“治疗”是指改善疾病的症状。在另一个实施方 案中，“治疗”指包括缓解。在另一个实施方案中，“治疗”是指减缓疾病的 进展。
实验详述部分
实施例1
在狗中保护胰岛素不被蛋白酶降解并经十二指肠成功给药 材料和实验方法
制剂
给药当日，制备含有100毫克(mg)EDTA(Sigma-Aldrich，St.Louis， MO)、100mg大豆胰蛋白酶抑制剂(SBTI；Sigma)、溶于2毫升(ml)鱼油中 的5mg胰岛素(重组结晶胰岛素)的制剂并装入透明的明胶胶囊中。
结果
为测试是否胰岛素能被保护不被蛋白酶降解并经十二指肠吸收，将包 含胰岛素、SBTI、EDTA和鱼油的组合物直接给药于8.8kg比格犬的十二 指肠。给药后每10分钟测量血葡萄糖水平。如以下表1中所述，对胰岛素 反应血葡萄糖水平显著下降。
因此，包含ω-3脂肪酸的组合物能够保护胰岛素在小肠中不被蛋白酶 降解并能够使口服给药的胰岛素直接吸收。
表1  实验#1中向十二指肠给药胰岛素后血中葡萄糖浓度
  时间(分钟) 葡萄糖(毫克/分升，mg/dL) -5 67 0 71 10 77 20 62 30 42 40 26 50 41 60 36 75 35 90 51 105 64 120 75
实施例2
材料和实验方法
制剂
给药前4日，制备包含125mg EDTA、100mg SBTI、溶于2ml鱼油 中的5mg胰岛素的于明胶胶囊中的制剂。将该制剂储存于冰箱(4℃)中直至 给药。
结果
在下一个实验中，给药前4天，制备SBTI、EDTA和鱼油的制剂，并 将其直接给药于9.0kg比格犬的十二指肠。如以下表2所述，对胰岛素反 应血葡萄糖水平显著下降。
这些结果证实了实施例1的结果，表明含有ω-3脂肪酸的组合物可保 护胰岛素在小肠中不被蛋白酶降解，并能够使口服给药的胰岛素直接吸收。 此外，这些结果表明本发明的组合物可在复制(constitution)后储存而不丧失 效力。
表2  实验2中向十二指肠给药胰岛素后血葡萄糖浓度
  时间(分钟) 葡萄糖(毫克/分升，mg/dL) -5 69 0 68 10 64 20 38 30 19 40 31 50 39 60 55 75 66 90 75 105 75 120 73
实施例3
口服给药包含胰岛素和ω-3脂肪酸的丸剂
片芯的制备
使用本领域熟知的方法制备包含胰岛素和ω-3脂肪酸的片芯。例如， 片芯可以如实施例1所述制备。
包衣
包衣剂可以是本领域已知的任何延时释放的包衣剂。例如，包衣剂可 以是包含以下成分的聚合物：
-4mg Eudragit L-100(丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯聚合物)
-4mg Talc NF
-0.4mg聚乙二醇6000NF。
在一个实施方案中，通过将聚合物溶于二氯甲烷+异丙醇混合物中来 制备肠溶衣聚合物的溶液。在持续搅拌下，在微温的广口瓶中喷雾溶液将 片剂包衣。不断地吸入溶剂蒸汽。
测量个体血浆中重组胰岛素的水平和活性
使用人胰岛素放射性免疫测定(RIA)试剂盒(Linco Research Inc，St. Charles，Missouri)测量重组胰岛素的水平。也测量了C肽水平以确定内源性 和外源性胰岛素对观察到的胰岛素水平升高的相对贡献。
结果
将EDTA、SBTI和溶于鱼油中的胰岛素制备为片芯或胶囊芯，包以肠 溶衣或明胶包衣，并给药于人个体。如之前实施例所述，定期测量个体血 葡萄糖水平。此外，还测量个体血浆重组胰岛素水平及其活性。显示包衣 丸剂将功能性胰岛素递送至个体，并且该胰岛素显著降低个体血葡萄糖水 平，表明活性胰岛素可以通过口服给药递送至血流中。测试了不同类型的 可商购获得的延时释放包衣剂，以确定哪种包衣剂提供胰岛素最好地递送， 并在之后的实施例中使用该包衣剂。
实施例4
ω-3脂肪酸源的最优化
比较各种ω-3脂肪酸或ω-3脂肪酸源(例如说明书中以上列出的那些) 在本发明的方法和组合物中口服给药后保护胰岛素的能力。如以上实施例 所述配制胰岛素片剂或胶囊剂，只是将胰岛素溶解于替代的ω-3脂肪酸源 而不是鱼油中。在之后的实施例中使用最有效的ω-3脂肪酸源。
实施例5
蛋白酶抑制剂的最优化
比较各种蛋白酶抑制剂(无毒或具有可接受的毒性特征；例如说明书中 以上列出的那些蛋白酶抑制剂)在本发明的方法和组合物中口服给药后保 护胰岛素的能力。如以上实施例所述配制胰岛素片剂或胶囊剂，只是使用 替代的蛋白酶抑制剂代替SBTI。还改变蛋白酶抑制剂的量以确定最适用 量。在之后的实施例中使用最有效的蛋白酶抑制剂/量。
实施例6
增强剂的最优化
比较各种增强剂(例如说明书中以上列出的增强剂)在本发明的方法和 组合物中口服给药后促进胰岛素吸收的能力。如以上实施例所述配制胰岛 素片剂或胶囊剂，只是使用替代的增强剂代替EDTA。还改变增强剂的量 以确定最适用量。在之后的实施例中使用最有效的增强剂/量。
实施例7
胰岛素类型和量的最优化
比较各种类型和量的胰岛素(例如说明书中以上列出的胰岛素)在本发 明的方法和组合物中调节血糖的能力。如以上实施例所述配制胰岛素片剂 或胶囊剂，只是改变胰岛素的类型和量。在临床实验中使用最有效的类型/ 量的胰岛素。