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一种酶促化学发光底物液配制方法以及加注装置

阅读:662发布:2020-05-08

专利汇可以提供一种酶促化学发光底物液配制方法以及加注装置专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且本 发明 涉及 化学发光 免疫分析技术领域,尤其涉及一种酶促化学发光底物液配制方法以及加注装置,所述酶促化学发光底物液包含如下组分:发光底物、发光增强剂、本底 抑制剂 、 表面活性剂 、酶稳定剂、 防腐剂 以及缓冲基质,所述发光底物为(4-氯苯巯基)(10-甲基-9,10-二氢化吖啶亚甲基) 磷酸 二钠盐,浓度为50-500 mg/L。所述加注装置包括固定底座、加注 固定板 、升降装置以及设置于固定底座上的反应容器放置槽、固定于加注固定板上的加注装置。本发明具有如下有益效果:底物液既拥有高检测灵敏度,又拥有高 稳定性 。加注装置可同时进行多项加注工作,使用更为方便,对多个反应进行比较观察,且可适用于多种不同反应容器的加注工作。,下面是一种酶促化学发光底物液配制方法以及加注装置专利的具体信息内容。

1.一种酶促化学发光底物液配制方法,其特征在于:所述酶促化学发光底物液包含如下组分:发光底物、发光增强剂、本底抑制剂表面活性剂、酶稳定剂、防腐剂以及缓冲基质;
所述发光底物为(4-氯苯巯基)(10-甲基-9,10-二氢化吖啶亚甲基)磷酸二钠盐,浓度为50-500 mg/L;
所述发光增强剂为N,N-二甲基-9,9'-二吖啶硝酸盐,浓度为0.2-10 mg/L;
所述本底抑制剂为二丁基羟基甲苯(BHT)、特丁基对苯二酚(TBHQ)、β-巯基乙醇、亚硫酸钠、二硫苏糖醇(DTT)的一种或若干种,浓度为20-2000 mg/L;
所述防腐剂为叠氮钠、ProClin300中的一种,浓度为0.01-2 g/L;
所述缓冲基质为tris缓冲液,浓度为20-600 mmol/L;
具体配制方法如下:
量取800 mL纯化于烧杯中,开启磁搅拌,加入tris 20-600 mmol,调节pH至8-11;
向上一步溶液中加入(4-氯苯巯基)(10-甲基-9,10-二氢化吖啶亚甲基)磷酸二钠盐
50-500 mg,搅拌溶解;
向上一步溶液中加入N,N-二甲基-9,9'-二吖啶硝酸盐0.1-10 mg,搅拌溶解;
向上一步溶液中加入酶稳定剂0.1-5 mmol,搅拌溶解;
向上一步溶液中加入本底抑制剂20-2000 mg,搅拌溶解;
向上一步溶液中加入防腐剂0.01-2 g,搅拌溶解;
向上一步溶液中加入表面活性剂0.01-20 g,搅拌溶解;
向上一步溶液中加入盐酸或氢化钠调节pH,最后加入纯化水定容至1L,得到酶促化学发光底物液。
2.根据权利要求1所述的一种酶促化学发光底物液配制方法,其特征在于:
所述表面活性剂为阴离子表面活性剂、非离子表面活性剂中的一种或两种,阴离子表面活性剂为十二烷基硫酸钠(SDS),非离子表面活性剂为Triton X-100,浓度为0.01-20 g/L。
3.根据权利要求1所述的一种酶促化学发光底物液配制方法,其特征在于:
所述酶稳定剂为氯化锌和氯化镁中的一种或两种,浓度为0.1-5 mmol/L。
4.根据权利要求1所述的一种酶促化学发光底物液配制方法,其特征在于:
所述防腐剂为叠氮钠、ProClin300中的一种,浓度为0.01-2 g/L;
所述酶促化学发光底物液还包括消泡剂,消泡剂为矿物油类消泡剂、有机类消泡剂及聚醚类消泡剂中的一种。
5.一种酶促化学发光底物液加注装置,其特征在于:包括固定底座(1)、加注固定板(2)、升降装置(3)以及设置于固定底座(1)上的反应容器放置槽(4)、固定于加注固定板(2)上的加注装置(5);所述加注固定板(2)与固定底座(1)通过导向轨道连接;所述升降装置(3)为丝杆升降机构,升降装置(3)带动加注固定板(2)的升降,从而调整加注装置(5)的高度;加注装置(5)为反应容器注入如权利要求1所述酶促化学发光底物液。
6.根据权利要求5所述的一种酶促化学发光底物液加注装置,其特征在于:
所述加注固定板(2)两侧设有可伸缩的挡板(21),包括固定板(211)和移动板(212),固定板(211)与移动板(212)之间通过移动轨道连接,固定底座(1)设有供挡板(21)伸出移动的轨道凹槽(11)。
7.根据权利要求5所述的一种酶促化学发光底物液加注装置,其特征在于:
所述加注固定板(2)设有固定梁(22),固定梁(22)设有用于安装加注装置(5)的固定孔,加注装置(5)包括若干组相同高度设置的加注管,加注管为透明材质,加注管上设有刻度。
8.根据权利要求7所述的一种酶促化学发光底物液加注装置,其特征在于:
所述反应容器放置槽(4)内设有软质缓冲材料,为橡胶材料,可放置固定与加注管数量相同的反应容器。
9.根据权利要求8所述的一种酶促化学发光底物液加注装置,其特征在于:
所述反应容器放置槽(4)固定设有与加注管数量相同的试管架(41),可用于固定试管,试管架为可旋转,且支架为可伸缩。
10.根据权利要求5-9任一项所述的一种酶促化学发光底物液加注装置,其特征在于:
所述反应容器放置槽(4)底部设有微振动器。

说明书全文

一种酶促化学发光底物液配制方法以及加注装置

技术领域

[0001] 本发明涉及化学发光免疫分析技术领域,尤其涉及一种酶促化学发光底物液配制方法以及加注装置。

背景技术

[0002] 化学发光免疫分析技术(Chemiluminescence Immunoassay,CLIA)是高特异性免疫反应与化学发光系统相结合,利用产生的光子进行定量或定性的分析技术。该技术兼具放射性免疫技术高灵敏度以及酶联免疫技术操作简单和无污染的特点,并且拥有更宽的检测线性范围,是现今医疗机构在体外诊断方面最主流的检测手段,已逐步开始取代酶联免疫检测技术。但是目前这项技术费用较高,许多配套试剂被进口厂商垄断。
[0003] CLIA系统主要由标记系统和固相载体反应体系两部分组成。根据免疫系统的固相载体进行分类,可将化学发光分为板式化学发光免疫分析系统和管式化学发光免疫分析系统。板式化学发光免疫分析系统固相载体为微孔板,需要反应时间较长,并且灵敏度较低,稳定性相对较差;管式化学发光免疫分析系统固相载体为磁微粒,其抗干扰能更强,灵敏度高。在管式化学发光标记系统中,辣根过化物酶(酶促化学发光)、磷酸酶(酶促化学发光)、吖啶酯(直接化学发光)、三联吡啶钌(电化学发光)标记应用比较广泛。其中碱性磷酸酶系统利用底物的酶促反应产生光子获取光信号,主要的化学发光底物有3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1,2-二氧环乙烷二钠盐(AMPPD)、(4-氯苯巯基)(10-甲基-9,10-二氢化吖啶亚甲基)磷酸二钠盐(APS-5)等相关衍生物
[0004] APS-5作为碱性磷酸酶检测底物时,储存稳定性不如AMPPD,使用条件较苛刻,成本较高,被进口厂商垄断,限制了APS-5的大范围应用和推广;而且现有的化学发光底物液加注装置都存在结构复杂,无法适用于多种类型的反应容器、且无法对多个反应同时观察等缺点。

发明内容

[0005] 本发明的主要目的在于克服现有技术中的不足,提供一种酶促化学发光底物液配制方法以及加注装置。该酶促化学发光底物液具有灵敏度高、进入平台期时间短、发光信号强、开瓶稳定性好、可降低临床免疫检测成本,同时加注装置具有可多个反应容器同时反应进行观察比较、适用于多种类型的反应容器等优点。
[0006] 本发明为实现其技术目的所采用的技术方案是:一种酶促化学发光底物液配制方法,所述酶促化学发光底物液包含如下组分:发光底物、发光增强剂、本底抑制剂表面活性剂、酶稳定剂、防腐剂和缓冲基质;所述发光底物为(4-氯苯巯基)(10-甲基-9,10-二氢化吖啶亚甲基)磷酸二钠盐,浓度
为50-500 mg/L,作为更优选,浓度为100-300 mg/L。
[0007] 所述发光增强剂为N,N-二甲基- 9,9' -二吖啶硝酸盐,浓度为0.2-10 mg/L,作为更优选,浓度为2-5 mg/L。
[0008] 所述本底抑制剂为二丁基羟基甲苯(BHT)、特丁基对苯二酚(TBHQ)、β-巯基乙醇、亚硫酸钠、二硫苏糖醇(DTT)的一种或若干种,浓度为20-2000mg/ L,作为更优选,浓度为20-500 mg/L。
[0009] 所述防腐剂为叠氮钠、ProClin300中的一种,浓度为0.01-2 g/L,作为更优选,浓度为0.5-1 g/L。
[0010] 所述缓冲基质为tris缓冲液,浓度为20-600 mmol/L,作为更优选,浓度为90-300 mmol/L。
[0011] 具体配制方法如下:量取800 mL纯化于烧杯中,开启磁力搅拌,加入tris 20-600 mmol,调节pH至8-11;
向上一步溶液中加入(4-氯苯巯基)(10-甲基-9,10-二氢化吖啶亚甲基)磷酸二钠盐
50-500 mg,搅拌溶解;
向上一步溶液中加入N,N-二甲基-9,9'-二吖啶硝酸盐0.1-10 mg,搅拌溶解;
向上一步溶液中加入酶稳定剂0.1-5 mmol,搅拌溶解;
向上一步溶液中加入本底抑制剂20-2000 mg,搅拌溶解;
向上一步溶液中加入防腐剂0.01-2 g,搅拌溶解;
向上一步溶液中加入表面活性剂0.01-20 g,搅拌溶解;
向上一步溶液中加入盐酸或氢氧化钠调节pH,调节pH值为8-11,最后加入纯化水定容
至1L,得到酶促化学发光底物液。
[0012] 具体地,得到的酶促化学发光底物液灵敏度高,进入平台期时间短,发光信号强,开瓶稳定性好,可降低临床免疫检测成本,减少进口试剂的束缚。
[0013] 优选地,所述表面活性剂为阴离子表面活性剂、非离子表面活性剂中的一种或两种,阴离子表面活性剂为十二烷基硫酸钠(SDS),非离子表面活性剂为Triton X-100,浓度为0.01-20 g/L,作为更优选浓度为0.1-5 g/L。
[0014] 优选地,所述酶稳定剂为氯化锌和氯化镁中的一种或两种,浓度为0.1-5 mmol/L,作为更优选,浓度为0.5-2 mmol/L。
[0015] 优选地,所述防腐剂为叠氮钠、ProClin300中的一种,浓度为0.01-2 g/L,作为更优选,浓度为0.5-1 g/L。所述消泡剂为矿物油类消泡剂、有机类消泡剂及聚醚类消泡剂中的一种。
[0016] 一种酶促化学发光底物液加注装置,其结构特点为,包括固定底座、加注固定板、升降装置以及设置于固定底座上的反应容器放置槽、固定于加注固定板上的加注装置;所述加注固定板与固定底座通过导向轨道连接;所述升降装置为丝杆升降机构,升降装置带动加注固定板的升降,从而调整加注装置的高度;加注装置为反应容器注入酶促化学发光底物液。
[0017] 具体地,加注装置结构简单,操作便利,成本较低,符合普通使用者的使用需求,便于大范围的推广使用。
[0018] 优选地,所述加注固定板两侧设有可伸缩的挡板,包括固定板和移动板,固定板与移动板之间通过移动轨道连接,固定底座设有供挡板伸出移动的轨道凹槽。
[0019] 优选地,加注固定板设有固定梁,固定梁设有用于安装加注装置的固定孔,加注装置包括若干组相同高度设置的加注管,加注管为透明材质,加注管上设有刻度。
[0020] 具体地,多组加注管的设置可同时进行多项加注工作,对同时进行的反应进行比较观察、检测、测量。
[0021] 优选地,所述反应容器放置槽内设有软质缓冲材料,为橡胶材料,可放置与加注管数量相同的反应容器。
[0022] 具体地,反应容器放置槽可以放置烧杯、矩形反应皿等多种反应容器。
[0023] 优选地,所述反应容器放置槽固定设有与加注管数量相同的试管架,可用于固定试管,试管架为可旋转,且支架为可伸缩。
[0024] 具体地,通过试管架可固定试管,同时放置其他反应容器时可收于反应容器放置槽前部,不会阻碍其他反应容器的放置。
[0025] 优选地,所述反应容器放置槽底部设有微振动器。
[0026] 具体地,在加注过程中进行微振动,使反应更为充分、快捷。
[0027] 本发明的有益效果是:本发明采用各种助剂改善APS-5各方面的性能,使APS-5既拥有很高的检测灵敏度,又拥有较高的稳定性,同时又能降低成本,摆脱进口试剂束缚。同时加注装置可同时进行多项加注工作,使用更为方便、操作简单,对多个反应进行比较观察,减少环境光的变化对反应结果的影响,且可适用于多种不同反应容器的加注工作,适用范围更广,便于市场的推广使用。附图说明
[0028] 图1是本发明一种酶促化学发光底物液配制方法的不同TSH标准品浓度下相应发光值示意图。
[0029] 图2是本发明一种酶促化学发光底物液配制方法不同TSH标准品浓度下相应发光值标准曲线图。
[0030] 图3是本发明一种酶促化学发光底物液加注装置的整体示意图。
[0031] 图4是本发明一种酶促化学发光底物液加注装置的细节示意图。
[0032] 其中:1、固定底座;11、轨道凹槽;2、加注固定板;21、挡板;211、固定板;212、移动板;22、固定梁;3、升降装置;4、反应容器放置槽;41、试管架;5、加注装置。

具体实施方式

[0033] 在本发明的描述中,需要说明的是,术语“中心”、“上”、“下”、“左”、“右”、“竖直”、“水平”、“内”、“外”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系,或者是该发明产品使用时惯常摆放的方位或位置关系,仅是为了便于描述本发明和简化描述,而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位,以特定的方位构造和操作,因此不能理解为对本发明的限制。此外,术语“第一”、“第二”、“第三”等仅用于区分描述,而不能理解为指示或暗示相对重要性。
[0034] 在本发明的描述中,还需要说明的是,除非另有明确的规定和限定,术语“设置”、“安装”、“相连”、“连接”应做广义理解,例如,可以是固定连接,也可以是可拆卸连接,或一体地连接;可以是机械连接,也可以是电连接;可以是直接相连,也可以通过中间媒介间接相连,可以是两个元件内部的连通。对于本领域的普通技术人员而言,可以具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。
[0035] 为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明了,下面通过附图及实施例,对本发明进行进一步详细说明。但是应该理解,此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明,并不用于限制本发明的范围。此外,在以下说明中,省略了对公知结构和技术的描述,以避免不必要地混淆本发明的概念。
[0036] 一种酶促化学发光底物液配制方法,酶促化学发光底物液包含如下组分:发光底物、发光增强剂、本底抑制剂、表面活性剂、酶稳定剂、防腐剂、缓冲基质和消泡剂。
[0037] 发光底物为(4-氯苯巯基)(10-甲基-9,10-二氢化吖啶亚甲基)磷酸二钠盐,浓度为50-500 mg/L,更优选的浓度为100-300 mg/L。
[0038] 发光增强剂为N,N-二甲基-9,9'-二吖啶硝酸盐,浓度为0.2-10 mg/L,更优选的浓度为2-5 mg/L。
[0039] 本底抑制剂为二丁基羟基甲苯(BHT)、特丁基对苯二酚(TBHQ)、β-巯基乙醇、亚硫酸钠、二硫苏糖醇(DTT)的一种或若干种,浓度为20-2000mg/ L,更优选的浓度为20-500 mg/L。
[0040] 防腐剂为叠氮钠、ProClin300中的一种,浓度为0.01-2 g/L,更优选的浓度为0.5-1 g/L。
[0041] 缓冲基质为tris缓冲液,浓度为20-600 mmol/L,更优选的浓度为90-300 mmol/L。
[0042] 表面活性剂为阴离子表面活性剂、非离子表面活性剂中的一种或两种,阴离子表面活性剂为十二烷基硫酸钠(SDS),非离子表面活性剂为Triton X-100,浓度为0.01-20 g/L,更优选的浓度为0.1-5 g/L。
[0043] 酶稳定剂为氯化锌和氯化镁中的一种或两种,浓度为0.1-5 mmol/L,更优选的浓度为0.5-2 mmol/L。
[0044] 防腐剂为叠氮钠、ProClin300中的一种,浓度为0.01-2 g/L,更优选的浓度为0.5-1 g/L。消泡剂为矿物油类消泡剂、有机硅类消泡剂及聚醚类消泡剂中的一种。
[0045] 具体配置过程如下:实施例1:
量取800 mL纯化水于烧杯中,开启搅拌,加入tris 100 mmol,盐酸调节pH至8-11;
向上一步溶液中加入(4-氯苯巯基)(10-甲基-9,10-二氢化吖啶亚甲基)磷酸二钠盐
300 mg,搅拌溶解;
向上一步溶液中加入N,N-二甲基-9,9'-二吖啶硝酸盐3.1 mg,搅拌溶解;
向上一步溶液中加入氯化锌1 mmol,搅拌溶解;
向上一步溶液中加入本底抑制剂β-巯基乙醇700 mg,搅拌溶解;
向上一步溶液中加入防腐剂叠氮钠1000 mg,搅拌溶解;
向上一步溶液中加入表面活性剂SDS 0.5 g,搅拌溶解;
盐酸或氢氧化钠调节pH至9.1,继续加入纯化水定容至1L,得到酶促化学发光底物液。
[0046] 实施例2:量取800 mL纯化水于烧杯中,开启搅拌,加入tris 300 mmol,盐酸调节pH至8-11;
向上一步溶液中加入(4-氯苯巯基)(10-甲基-9,10-二氢化吖啶亚甲基)磷酸二钠盐
120 mg,搅拌溶解;
向上一步溶液中加入N,N-二甲基-9,9'-二吖啶硝酸盐2.5 mg,搅拌溶解;
向上一步溶液中加入氯化镁1 mmol,搅拌溶解;
向上一步溶液中加入本底抑制剂β-巯基乙醇500 mg,搅拌溶解;
向上一步溶液中加入防腐剂叠氮钠500 mg,搅拌溶解;
向上一步溶液中加入表面活性剂SDS 1.0 g,搅拌溶解;
盐酸或氢氧化钠调节pH至9.2,继续加入纯化水定容至1L,得到酶促化学发光底物液。
[0047] 实施例3:量取800 mL纯化水于烧杯中,开启搅拌,加入tris 250 mmol,盐酸调节pH至8-11;
向上一步溶液中加入(4-氯苯巯基)(10-甲基-9,10-二氢化吖啶亚甲基)磷酸二钠盐
150 mg,搅拌溶解;
向上一步溶液中加入N,N-二甲基-9,9'-二吖啶硝酸盐3.4 mg,搅拌溶解;
向上一步溶液中加入氯化镁1 mmol,搅拌溶解;
向上一步溶液中加入本底抑制剂β-巯基乙醇500 mg,搅拌溶解;
向上一步溶液中加入防腐剂叠氮钠500 mg,搅拌溶解;
向上一步溶液中加入表面活性剂SDS 0.5 g,Triton X-100 1.0 g,搅拌溶解;
盐酸或氢氧化钠调节pH至9.0,继续加入纯化水定容至1L,得到酶促化学发光底物液。
[0048] 实施例4:酶促化学发光底物液用于促甲状腺激素(TSH)定量测定试剂盒(磁微粒化学发光法)标准品定标:
吸取60 μL不同浓度的标准品于反应杯中;
加入生物素标记的TSH抗体40 μL;
加入ALP酶标记的TSH抗体40 μL;
机器混匀,37℃条件下反应20 min;
加入300μL清洗液清洗3次;
加入链霉亲和素标记的磁微粒试剂40 μL;
机器混匀,37℃条件下反应10 min;
加入300 μL清洗液清洗3次;
加入实施例1中配置的酶促化学发光底物液,参阅图1,如图所示,仪器检测发光强度
RLU值,不同TSH标准品浓度下相应发光值;参阅图2,如图所示,不同TSH标准品浓度下相应发光值的标准曲线图。
[0049] 参阅图3,如图所示,一种酶促化学发光底物液加注装置,包括固定底座1、加注固定板2、升降装置3以及设置于固定底座1上的反应容器放置槽4、固定于加注固定板2上的加注装置5,加注装置5与反应容器放置槽4对应设置,加注装置可为反应容器放置槽中的反应容器注入酶促化学发光底物液。
[0050] 加注固定板2与固定底座1通过设置于固定底座上的导向轨道连接,在升降装置的带动下加注固定板可进行上下移动。
[0051] 升降装置3为丝杆升降机构,丝杆升降机构固定于加注固定板的底部,升降装置3带动加注固定板2的升降,从而调整加注装置5的高度,从而使加注装置能够适用于不同高度、不同规格的反应容器,加注装置5为反应容器注入酶促化学发光底物液,丝杆升降机构由控制器控制,且在固定底座上设有控制按钮。
[0052] 具体地,加注装置结构简单,操作便利,成本较低,符合普通使用者的使用需求,便于大范围的推广使用。
[0053] 参阅图4,如图所示,加注固定板2两侧设有可伸缩的挡板21,包括固定板211和移动板212,固定板211与移动板212之间通过移动轨道连接,固定板固定于加注固定板上,移动板可沿移动轨道进行移动伸缩,在注入完成后移动板可移动。固定底座1设有供挡板21伸出移动的轨道凹槽11。
[0054] 加注固定板2设有固定梁22,固定梁22设有用于安装加注装置5的固定孔,加注装置5包括若干组相同高度设置的加注管,加注管分为上部储液区和下部加注区,上部储液区直径大于固定孔直径,下部加注区直径小于固定孔直径,在本实施例中为三支加注管,加注管为透明材质,加注管上设有刻度且内部存有酶促化学发光底物液。
[0055] 具体地,多组加注管的设置可同时进行多项加注工作,对同时进行的反应进行比较观察、检测、测量。
[0056] 反应容器放置槽4内设有软质缓冲材料,为橡胶材料,可放置与加注管数量相同的反应容器。
[0057] 具体地,反应容器放置槽可以放置烧杯、矩形反应皿等多种类型的反应容器,具体为,可放置三个反应容器,橡胶材料可增加其缓冲能力和放置的摩擦力,三支加注管可为反应容器加入酶促化学发光底物液。
[0058] 反应容器放置槽4固定设有与加注管数量相同的试管架41,可用于固定试管,试管架为可旋转,且支架为可伸缩。
[0059] 具体地,通过试管架可固定试管,加注装置可适用于不同反应容器的加注工作,同时放置其他反应容器时可收于反应容器放置槽前部,不会阻碍其他反应容器的放置。
[0060] 反应容器放置槽4底部设有微振动器。
[0061] 具体地,在加注过程中进行微振动,使反应更为充分、快捷。
[0062] 具体使用过程如下:将标准品吸入反应容器中,反应容器放置于反应容器放置槽中,若反应容器为试管则
使用试管架将其固定放置,丝杆升降机构带动加注固定板进行升降,调整至合适高度后,加注管对反应容器加注酶促化学发光底物液,加注完成后,加注固定板上升,将挡板移出进行遮光,即可进行观察、检测。
[0063] 需要说明的是,尽管在本文中已经对上述各实施例进行了描述,但并非因此限制本发明的专利保护范围。因此,基于本发明的创新理念,对本文所述实施例进行的变更和修改,或利用本发明说明书及附图内容所作的等效结构或等效流程变换,直接或间接地将以上技术方案运用在其他相关的技术领域,均包括在本发明专利的保护范围之内。
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