本发明领域

本发明涉及处理植物种籽的方法。更准确地说，本发明涉及这样一 种方法：用作用于微生物的细菌制品来处理植物(优选为谷类)，特别 是处理麦芽制造中所使用的谷类(如大麦或黑麦)，以改良种籽(谷粒) 的质量。本发明还涉及利用细菌制品喷洒在田间或田间条件下的且种籽 正发育着的植物，以改良其种籽的质量。另外，本发明还涉及用上述方 法处理过的植物产品，例如谷类产品特别是大麦或黑麦产品(如大麦芽 或黑麦芽)。

                      技术背景

常规地说，生产啤酒使用的谷类发芽以使其中所含的淀粉能转变为 发酵糖。未发芽的谷类有时也用于啤酒生产。麦芽制造中最常使用的谷 类是大麦。它广泛地应用麦芽制造和啤酒生产中，因为其谷粒外壳在脱 粒过程中并未脱落而且在麦芽发芽期间保护着谷粒。破壳的谷粒对霉菌 很易感。大麦的良好萌芽能力在麦芽制造中是重要的，因为尚未萌芽的 谷粒并不能制麦芽并且对霉菌也是易感的。发芽的大麦也被用作威士忌 的原材料。

其它谷类(如小麦，黑麦及稻)也可用于麦芽的制备中。

麦芽制造的目的在于引起谷类中的物理，化学及生化变化，从而产 生出能在啤酒生产中的所谓淀粉糖化阶段把谷类中的淀粉分解成可溶于 麦芽汁的形式的酶。麦芽制造包括多个步骤。首先，将所使用的谷类纯 化和筛选，然后将其浸泡在水中以达到适宜的湿度含量(近45％)。当 谷类湿度合适时，它们通常约在6天左右萌芽。萌芽之后，把麦芽干燥， 其湿度含量降至约4％。烘干之后去除细根。

麦芽制造过程中使用的谷类(如大麦)中，来源于田间及可能来自 贮藏中的微生物可在麦芽制备中影响微生物菌丛的发育及活动。大量的 微生物，特别是高含量的霉菌在谷类的麦芽制造中是有害的。霉菌含量 是麦芽制造中所用谷类的质量标准之一并且通常为这个含量制定一个最 大限度。影响麦芽质量的其它因素是作为原材料的谷类的其它质量特 征，比如其蛋白质含量、谷粒大小的分布、萌芽能量和水份敏感性。谷 类的类型、麦芽制造技术和条件也是十分重要的。

大麦的天然微生物菌丛包括诸如镰孢菌、交链孢菌、假头状孢子头 及长蠕孢菌的霉菌和根霉属及毛霉属的霉菌。霉菌的发生因生长期和生 长地(土壤)而有所不同。在大麦的麦穗形成或收获期间的潮湿及多雨 天气尤其会影响到镰孢菌霉菌的生长。在麦芽制造过程中，霉菌的组成 在萌芽期间变化相当大，特别是在浸泡期间镰孢菌霉菌量尤其增长。其 次根霉菌属及毛霉属霉菌在麦芽中十分普遍，因为它们在干燥开始时的 温度条件下能迅速繁殖。

谷类中最初的细菌及酵母菌丛也会影响到将进行麦芽制造处理的原 料的质量。在麦芽制造过程中谷类中的天然肠细菌、假单胞菌属菌株、 乳酸菌及酵母都能繁殖。

谷类及麦芽中微生物既具有积极作用也具有消极作用。微生物菌丛 的许多效应是有用处的。霉菌和细菌的葡聚糖及蛋白的水解效应是最常 报导的效应。描述麦芽改善的低含量的B-葡聚糖和抽提物的差异、麦 芽汁粘滞度的降低、麦芽汁滤过性的改善以及氮含量的提高都是因微生 物的酶活动而引起的积极的特性。谷类及麦芽的微生物菌丛的缺点为啤 酒的喷溢、可能的真菌毒素以及发芽的变质。

啤酒的喷溢是由用作制麦芽的材料中所含的霉菌，特别是镰孢菌属 所产生的成分引起的。在被霉菌严重污染的谷类中，活性霉菌菌丝体形 成了肽或含肽的化合物，这些化合物在啤酒生产的过程中存活下来并形 成啤酒喷溢。为了能避免这个有关质量的极为严重的问题，必须对麦芽 制造过程中所用的谷类样品做霉菌污染分析，并必须弃掉严重污染的批 样。

控制和防止啤酒喷溢常常是很麻烦的问题。在浸泡水中加入杀微生 物剂可降低霉菌的生长，但最好不使用化学防腐剂。因此用于麦芽制造 的材料的质量要尽可能的优良，这一点是很重要的。尤其需要减轻镰孢 菌霉菌的污染。

大麦对水的敏感性地影响到萌芽。大麦对水敏感性的一个可能原因 在于麦粒表面致密的微生物群体在浸泡期间与植物组织竞争所使用的氧 气。当芽孢不能得到其所需要的氧气时，芽孢萌芽就减慢或完全不能发 生。

麦芽汁的过滤及滤过性主要会受到麦芽质量的影响。所使用麦粒的 组成继而决定了麦芽中胶状蛋白质的浓度。胶状蛋白质在麦芽制备中部 分被降解，但其在麦芽汁的制备阶段会聚合。过滤速度受由这些蛋白质 及戊聚糖、β-葡聚糖、剩余淀粉及脂类所形成的复合体的影响。除此之 外，细菌量的增加会引起过滤上的问题。优良的过滤性因而是麦芽的质 量因素之一。改善过滤性也能加速酿造过程。

霉菌不仅在用于酿造工业的谷物中是有害的污染物，而且在用作食 品及动物饲料工业的原材料的谷物和其它植物中也是有害的污染物。在 谷物贮存方面对霉菌的控制是很重要的：温度及湿度的变化会引起霉菌 种群的迅速增长。例如在动物饲料工业中，诸如镰孢菌的霉菌会引起饲 料原料或成品的腐败。

已使用了乳酸菌以防止麦芽制造过程中微生物菌丛，特别是镰孢菌 霉菌的生长[Haikara,Mallasja Olut1(1994)5-15；Haikara等人，第24 届欧洲酿造会议汇刊，奥斯陆1993,163-172]。把在其培养基中的乳 酸菌，无细胞的培养基或分离自该培养基的细胞在麦芽制造之前加入干 燥的大麦粒中，加入麦粒的浸泡水中，或者是在萌芽的开始时加入。而 在麦芽制造两天前把乳酸菌加入其培养基中可得到最佳结果。通过这种 处理方式有可能影响到麦芽的特性，例如由麦芽得到的麦芽汁的滤过性 和粘滞性，以及麦芽中的微生物数量。该处理对啤酒喷溢的效用没有进 行试验。不过，仅在收获及干燥之后的大麦粒处理并不能防止已由田间 有害微生物引起的损害，例如喷溢因素的形成、回落值的减少以及水敏 感性的增长。

                      本发明概述

本发明提供了减少或避免上述问题及缺陷的一种新方法。我们意外 地发现，在田间或田间条件下的种籽萌发期间以乳酸菌制剂(它的确可 影响到种籽的质量性状)对植物进行处理，可以改善植物种籽的质量。 尤其奇怪的是由于在植物种籽田间发育时对植物进行处理就意味着干扰 诸如微生物菌丛不同成员之间的极为复杂的相互作用，也意味着干扰了 微生物菌丛与植物之间的极为复杂的相互作用，而结果却是十分出人意 料的。另外，也无法预测外界条件(如天气及生长条件)对处理成功的 影响。

本发明因而涉及了通过改变种籽中微生物菌丛以改善种籽质量的处 理植物的方法。该方法的特点是当种籽发育时在田间或田间条件下对植 物进行处理，方法是给其喷洒乳酸菌制剂。

                          附图

图1以图示表明：依据本发明所进行的乳酸菌处理对麦芽汁过滤作 用的影响。

                       本发明详述

根据本发明，对已在田间的种籽喷洒可改变种籽中微生物菌丛及其 质量性状的乳酸菌制剂有可能影响到植物(优选地是谷物)种籽的质量。 植物的质量性状指衡量植物质量的所有参数，例如谷物最常用的参数有 蛋白质含量、下落数(falling number)、谷粒的大小分布、萌发能量、水 份敏感性、微生物的总量以及霉菌含量，这些参数又继而影响到诸如由 谷物制成的面粉的烘烤性状，或者影响由该谷物所制备的麦芽、麦芽汁 及啤酒的分析结果。

本发明优选地应用于改善谷物(如大麦、黑麦、小麦或稻)的质量 以及适用于粉碎及烘烤业以及麦芽制造。所进行加工的谷物优选地为大 麦或黑麦，最优选地为期于麦芽制造的大麦。

依据本发明的方法尤其可适用于对用于麦芽制造的谷物进行处理， 由此霉菌量特别是由镰孢菌菌珠造成的污染得以减少，而且改善进行麦 芽制造的材料和制成的麦芽的其它质量性状。谷物种籽的有益变化是明 显的，例如衡量烘烤性状的下落数的改善以及涉及麦芽制造的对水份的 低敏感性。在成品麦芽中有利效应也显著表现于浸出物产量的增加，麦 芽改性的改善，以及麦芽汁可滤性或滤过性能的加快。该方法还降低了 由麦芽制造的啤酒的喷溢趋势。

用乳酸菌制剂喷洒正在生长的植物，该制剂可通过改变所处理的植 物种籽中微生物菌丛的总量和/或内部比例而改善种子的质量。例如这种 制剂可抑制或促进植物中含有的某些微生物的生长，而对一种微生物种 群内部比例和/或量的改变可引起对另一种微生物种群种籽性状的积极效 应。

依据本发明的方法可利用任何具有上述特性的并且不降少微生物有 益特性的乳酸菌制剂。

乳酸菌已作为促酵培养物而广泛应用于乳品、肉类及植物工业及饲 料贮藏上。乳酸菌能产生可降低发酵pH值的有机酸，一些乳酸菌种类还 可以分泌出低分子量且能抑制微生物生长的细菌素或剂物。

乳酸菌还由于其重要性而具有优点。乳酸菌在食品工业中的使用是 广泛认可的。另外，谷物的常见菌丛都含有乳酸菌。

本发明可利用具改善种籽质量特点的任何通用乳酸菌。例如在谷物 中天然发生的乳酸菌就适用于这个目的。适用的乳酸菌包括乳酸杆菌 属、足球菌属、明串珠菌属和链球菌属。优选地为隶属于乳酸杆菌属和 足球菌属的乳酸菌及其混合物。在依据本发明的方法中特别优选的乳酸 杆菌包括植物乳杆菌(Lactobacillus Plantarum)和戊糖片球菌 (pediococcus pentosaceus)。

本发明还涉及使用乳酸菌制剂在田间或田间条件下对种籽正在发育 的谷物进行喷洒以改变其种籽的质量。这种处理适于在谷穗形成期间(如 谷类将吐穗或正在吐穗)进行。本发明还进一步涉及谷类产品，特别是 大麦或黑麦产品(例如大麦或黑麦麦芽)，它们是用上述方法进行处理 的。

喷洒在田间的乳酸菌制剂可以是细菌培养物，即含细胞的培养基(原 样或浓缩)；含有从悬浮于水、培养基或某些合适的载体(如生理盐水) 中分离的及可能冷冻的细胞的细胞制剂；或者是已从中去除掉微生物细 胞的培养液(原样或浓缩)。乳酸菌制剂优选地含有活的乳酸菌。

喷洒于田间的制剂优选地包括原样或浓缩培养液中的植物乳杆菌 (Lactobacillus plantarum)或戊糖片球菌(pediococcus pentosaceus)菌 株。浓缩可以常现方式进行，如通过离心法、冷冻干燥法、过滤或蒸发 法。冷冻干燥的乳酸菌制剂(实际使用中把它加入适宜的培养基或稀释 剂中)对于简便实施本法也是有益处的。

用于处理谷类的乳酸菌制剂可根据常规微生物操作法即通过继代培 养及体积的梯度增加直到从培养液中得到适宜的微生物密度而从贮存制 剂中生产出。用于本发明中的制剂含有约1×108-1×1012CFU/l的 (菌落形成单位/升培养液)乳酸菌，优选地约为1×1010-1×1012 CFU/l的乳酸菌。具体而言，我们使用了含有1×1010-1×1011CFU/l 乳酸菌的制剂。

对于使用者来说，喷洒在田间的最适用的制剂可以是冷冻干燥性制 剂，该制剂在使用前以适当浓度(如1×109-1×1011CFU/l)与合 适的稀释剂(如水)相掺混。

在依据本发明的方法中，根据改良种籽质量所需的有效细菌的含量 而计算出喷洒中所使用的乳酸菌制剂量。为了实际应用的目的，使用量 约50-1000升/公顷(优选为100-500升/公顷)是适宜的。本领域的 熟练技术人员可很容易地估测出所需要的使用量。

依据本发明，当生长在田间或田间条件下的植物的种籽发育时对该 植物进行处理。表述语“田间条件”在这儿通常指所处理植物的生长地 或栽培地。例如，当对谷物进行处理时，可在谷稳形成开始之后或其后 一段时间(例如5-15天)后立即实施喷洒。例如，天气条件会影响到 选择适宜的喷洒时间。在下面的实施例中，将通过其优选的而并非局限 的实施例来对本发明进行描述。

实施例1乳酸菌培养物的制备

按下列方式来制备处理谷类中所使用的乳酸菌培养物。把分离自啤 酒的植物乳杆菌(lactobacillus plentarum)VTT-E-78076菌株和由大 麦破壳种子中得到的戊糖片球菌(pediococcus pentosaceus)VTT-E- 90390菌株〔得自芬兰技术研究中心生物技术及食品研究处的菌种收藏所 (VTT)〕从MRS琼脂(Oxoid)无菌接种到10ml的MRS培养液中， 在这里的30℃的厌氧条件下不混合地培养2天。然后把菌株无菌接种到 250ml锥形瓶中的120ml MRS培养液里，在30℃的有氧条件下不混合 地培养3天。然后把菌株接种到锥形瓶中的0.6lMRS培养液里。在30 ℃的有氧条件下不混合地继续培养3天。

所生成的培养液包含1×1010-1×1011CFU/l乳酸菌(菌落形成 单位/升培养液)。

用水把培养液按照约1∶10的比例稀释。将这些稀释培养液用作田 间喷洒的试验制剂。

实施例2用乳酸菌处理正在生长的大麦

在10m2的试验区(试验田701-704)中对芬兰大麦品种“Kustaa” 进行栽培。每个试验制剂都有三块试验区。将根据实施例1制备的培养 液(含植物乳杆菌(Lactobecillus plentarum)VTT-E-78076和戊糖片球菌 (Pediococcus pentosaceus)VTT-E-90390)立即喷洒在谷穗刚刚形成的 正在生长的大麦上，并在麦穗形成10天后把含戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)VTT-E-90390的培养液也喷洒在大麦上。用于喷洒的每种 试验制剂含有1×109-1×1010CFU/l乳酸菌，所用制剂量为200升/ 公顷。用A20丙烷喷洒器(具2m的延伸臂、喷嘴间隙为50cm)来实施 喷洒。对照田则完全不做处理。大麦成熟时进行脱粒，而后干燥。将麦 粒贮藏于凉爽干燥的地方直至发出麦芽。试验安排如表1所示。

                             表1

用乳酸菌处理正在生长的大麦的试验安排

试验田号      描述

  701         对照(未处理)

  702         麦穗形成后立即用植物乳杆菌VTT-E-78076

              制剂进行处理(200升/公顷)

  703         麦穗形成后立即用戊糖片球菌VTT-E-90390

              制剂进行处理(200升/公顷)

  704         麦穗形成10天后用戊糖片球菌VTT-E-90390

              制剂进行处理(200升/公顷)

实施例3乳酸菌处理对大麦萌芽能力的影响

通过确定干麦粒的萌芽能力(即以百分比来确定其萌芽能力(H2O2) 和3到5天后的萌芽能量及水份敏感性(百分比)来测定该乳酸菌制剂 处理正生长着的大麦对其萌芽力的影响，使用的方法是麦芽制造中熟知 的方法，如可见于EBC-Analytica，第4版，EBC(ed)分析委员会， Brauerei-und Getranke Rundschau，苏黎士，1987)。

简言之，在确定其萌芽能力方面，麦粒在0.75％的过氧化氢液中萌 芽，以便能终止大麦的休眠。其发芽能力代表着活麦粒的数目。可通过 在平皿中萌发麦粒(置于一张潮湿的吸水纸上)来确定可代表大麦发芽 能力的萌芽能量。以相同于萌芽能量的方式来确定水份敏感性，但要使 用大量的水。

结果如表2所示，使用了相同于表1中的缩写词。

                           表2

                喷洒乳酸菌对大麦发芽的影响  已发芽麦粒的百分比                            试验田/制剂

                    701        702        703        704

                    对照  发芽能力(H2O2)(％)   98         98         99         99  发芽能量3/5天(％)    96/98      90/93      90/94      94/97  水份敏感性3/5天(％)  26/36      28/35      42/51      35/47

在麦穗形成的不同阶段，用根据本发明的乳酸菌喷洒田间正在生长 中的谷类，对大麦麦粒的发芽能力并无实质上的影响。在702及703试 验田中，乳酸菌的使用略微降低了发芽能量，但明显降低了麦粒的水份 敏感性，尤其在703及704试验田更是如此。

实施例4乳酸菌处理对大麦中微生物数量的影响

用乳酸菌处理正在生长中的大麦对大麦麦粒中微生物数量的影响可 通过检测镰孢菌霉菌、细菌总数、乳酸菌及酵母来加以分析。

依据如Abildgren等人所述方法〔应用微生物学通迅(Lett.Appl. Microbiol)5(1987)83-86〕在对镰孢菌霉菌具特异性的Czapek Iprodion Dicloral琼脂(CZID-琼脂，Difco)上对受镰孢菌霉菌污染的谷 粒的比例进行检测。根据典型菌落和孢子形态来鉴定镰孢菌霉菌。

在平板计数琼脂(Difco)上检测总细菌含量，并且利用微生物学常现 方法在MRS琼脂(Oxoid)上检测乳酸菌。在Saborand琼脂(Oxoid)上检 测酵母。结果见表3，使用了和表1中相同的缩写词。

                          表3

            喷洒乳酸菌对大麦中微生物量的影响

   微生物检测                              试验田/制剂

                          701        702       703       704

                          对照 镰孢菌霉菌(污染麦粒的百分比)   57         43        66        46 细菌总量CFU/g ds*          4.7×107 3.5×107 3.8×107 4.1×107 乳酸菌CFU/g ds*            3.3×101 2.2×102 2.2×102 2.2×102 酵母CFU/g ds*              2.2×103 6.7×103 6.6×103 3.3×103 *菌落形成单位/干物质(克)

用依据本发明的乳酸菌处理正在生长中的谷类可稍微降低受镰孢菌 霉菌污染的麦粒数量以及细菌总量(除703试验田以外)。与对照田相 比较使用乳酸菌可略微增加酵母及乳酸菌的数量。

实施例5乳酸菌处理对大麦质量与产量的影响

可根据芬兰农业部有关确定谷类质量的决议中制定的说明(发布于 赫尔辛基，1991年6月1日)对依据本发明的处理对大麦麦粒产量及质 量的影响进行检测。通过称重来确定产量(公斤/公顷)、千粒麦粒重(克) 和百升重(公斤)。回落值及蛋白质含量作为描述谷类质量的已知因素， 并且其可通过本领域的常用方法来测定。结果见表4，其中使用了同表1 中的缩写词。

                             表4

              乳酸菌喷洒对大麦产量及质量的影响

   检测                                   试验田/制剂

                 701        702        703       704

                 对照 产量(公斤/公顷)      5670       5810       5540      5640 千粒麦粒重(克)       44.8       45.0       44.6      44.5 千升麦粒重(公斤)     72.3       72.2       72.4      72.9 下落数(s)            99         108        114       120 蛋白质(％)           11.4       11.2       11.6      11.5

用依据本发明的乳酸菌处理正在生长中的谷类，发现所有制剂对下 落数均有明显的积极效应。用戊糖片球菌(Pediococcus Pentosaceus)处理 所致的下落数增加最大(20％)。与对照田相比，这种处理对描述大麦 产量及质量的其它参数并无实质上的效应。

实施例6乳酸菌处理对大麦麦芽中微生物量的影响

依据本发明的大麦处理可用于生产麦芽，因此可分析乳酸菌处理对 大麦麦芽的影响。让来自每一个大麦培养物及对照培养物中的麦料以1 千克的批样用标准方法在试验麦芽制造设备(Seeger)中发芽。

将由大麦制备的麦芽用如实施例4中所述的方法进行细菌总量、乳 酸菌和酵母检测。结果见表5，其中使用了和实施例1中相同的缩写词。

                            表5

               乳酸菌处理对麦芽中微生物量的影响

  微生物检测                                试验田/制剂

                        701           702          703          704

                       对照 细菌总计数aCFU/g dsb     1.0×108    1.1×108   9.2×107   4.7×107 乳酸菌cCFU/g dsb         4.8×106    3.9×106   3.4×106   4.3×106 酵母d CFU/g dsb          1.3×105    5.0×104   5.4×104   7.3×104

a在平板计数琼脂(Difco)上检测

b菌落形成单位/干物质(克)

c在MRS琼脂(Oxoid)上检测

d在Saboraud琼脂(Oxoid)上检测

用依据本发明的乳酸菌处理正在生长中的谷类对由大麦制备的麦芽 中微生物量并无实质性的影响。

实施例7乳酸菌处理对麦芽质量及性质的影响

用麦芽制造中熟知的方法〔详见EBC-Analytica，第4版，EBC (ed.)分析委员会，Brauereiund Getranke Rundschau，苏黎士，1987〕 对依据本发明的在田间处理的大麦根据实施例6而制备的麦芽的生理化 学质量进行分析。也可以用如Sjoholm等人所述的(Monatsschrift fur  Brauwissenschaft5(1994)165-171)。改进的Brown等人方法〔第3届 Aviemore会议汇刊，麦芽酿造蒸馏法，Aviemore 1990，酿造研究所， 313-318(Proc.3rd Aviemore Conf.Walt.Brew.Distill.Aviemone 1990, Institute of Brening,313-318)〕，从由瓷平底漏斗过滤所制备的麦芽汁 中检测麦芽的质量。

                         表6

             乳酸菌处理对麦芽分析值的影响

  麦芽分析                               试验田/制剂

                    701        702        703        704

                    对照 湿度(％)                4.2        4.1        4.1        4.1 谷粉提取物(％/ds)       80.8       81.1       81.2       81.2 麦芽汁颜色°EBC         4.1        4.1        4.4        4.4 麦芽汁pH                6.02       6.01       5.99       5.98 谷粉/粗粒差异(％/ds)    2.3        1.8        1.5        1.7 面粉脆度(％)            80         81         83         81 脆度(％)(＞2.2mm)       4.4        3.8        2.2        3.2 麦芽改善(％)(氟化钙)    89         94         93         89 均匀性(％)(氟化钙)      69         77         66         68 麦芽汁粘滞性(mPas)      1.48       1.49       1.48       1.48 过滤时间谷粉/粗粒(分钟) 60/240     42/150     45/120     45/120 麦芽汁β-葡聚糖(mg/l)   222        189        184        194 可溶性氮(mg/100g)       812        822        820        826 蛋白质(％/ds)           11.5       11.4       11.5       11.1 蛋白质溶解度(％)        44         45         45         47 FAN(mg/l)               166        183        176        187 糖化时间(min)           ＜10       ＜10       ＜10       ＜10 α-淀粉酶(DU/g ds)      67         69         74         74 糖化率(WK/100g ds)      370        350        350        350

      乳酸菌处理对麦芽性质的影响(瓷平底漏斗过滤)

  性质                                 试验田/制剂

                  701        702        703       704

                  对照 麦芽汁的提取含量(％)  16.09      16.14      16.14     16.20 实际提取产量(％/ds)   21.6       32.5       34.3      34.6 麦芽汁pH              5.69       5.70       5.68      5.69

表6及表7的结果表明依据本发明的对正在生长中的大麦进行乳酸 菌处理对于由大麦制备的麦芽汁具下列益处：抽提物含量与产量以及 FAN和α-淀粉酶增加了，依据多种不同分析(麦芽变化％，谷粉/粗颗 粒差异，脆度和麦芽汁的β-葡聚糖含量)，麦芽的变化增加了，而麦芽 汁的过滤性大大加快。这其中最为重要的是实际中对过滤率的有利影响 (见图1)。依据本发明的方法对麦芽分析的其它值没有影响。

实施例8该处理对啤酒喷溢趋势的影响

利用Vaag等人所述的Carlsberg快速法〔其方法如Vaag等人所 述，欧洲酿造大会汇刊，第24届会议，奥斯陆(1993)155-1629(Eur. Brew.Co.Proc.24th Congr.,Oslo(1993)155-1629)〕来确定该依据本发 明的对正在生长着的大麦进行乳酸菌处理对啤酒喷溢趋势的影响。

按下述方式制备样品a-c。将依据本发明的乳酸菌处理过的大麦样 品用如实施例6所述的方法发芽。把100克所生成的每种麦芽样品与 400ml蒸馏水在实验室搅拌机中以最高速相混合。以5000rpm对悬浮液 离心处理，并将上清液经煮沸浓缩至原体积的约一半。经过滤去除生成 的沉淀物。将滤液冷却，用蒸馏水把其体积调为200ml。从3瓶冷却至 低温(4-10℃)的啤酒中倒出50ml并以50ml麦芽抽提物替代。小心 控荡啤酒瓶以便使得在瓶口处以泡沫代替空气，而后将瓶子加塞封闭并 在60℃巴氏灭菌20分钟。冷却后，在测试前把瓶子在水平位置振摇3 天以诱发喷溢。

将瓶称重，静置10分钟。然后瓶口反复颠倒3次，再静置30秒， 最后开启瓶塞。如果发生喷溢，就对酒瓶再次称重，对从瓶中喷走的啤 酒量进行计算。把含有早熟禾镰孢霉菌(Carlsberg，丹麦哥本哈根)的喷 溢性麦芽A用作喷溢的标准。

结果如表8所示，其中所使用的缩写词同实施例1。

                      表8

         乳酸菌处理对啤酒喷溢趋势的影响

                             喷溢量(克)

                               试验田

       701          702          703          704

       对照 样品a      43.1         14.0         31.0         0.1 样b        55.0         0.1          24.0         23.1 样c        38.9         14.7         11.9         21.6 平均       45.7         9.8          22.3         14.9 喷溢标准   54.2

根据本发明用乳酸菌处理过的大麦所制备的所有麦芽酒的喷溢趋势 都大量减弱了。而在由含植物乳杆菌(Lactobacillus plontorum)VTT-E- 78076的培养液喷洒的麦田中的大麦所制备的麦芽酒降低得最多：与由未 处理的大麦制备的麦芽酒相比，其喷溢趋势几乎降到了五分之一；而与 喷溢标准相比其几乎降到了六分之一。在麦穗形成后立刻或10天后用含 戊糖片球菌(pediococcus pentosaceus)VTT-E-90390(703)的培 养液喷洒的麦田中的大麦所制备的麦芽酒的喷溢值，与对照田相比分别 降低了51％和67％，而与喷溢标准相比则分别降低了59％和73％。