替考拉宁的提纯方法
阅读：1014发布：2020-09-17
专利汇可以提供替考拉宁的提纯方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及一种糖肽类抗生素替考拉宁的制备方法，替考拉宁 发酵 液经过滤、大孔 树脂 吸附 及 活性炭 脱色后，用纳滤或 超滤 的方式将脱色液浓缩和脱 溶剂 得到高浓度的替考拉宁 水 溶液，然后通过调pH、加盐或同时调pH和加盐将替考拉宁从溶液中沉淀出来，经过滤后得到替考拉宁，通过沉淀得到的替考拉宁有效组份得到提高，其它杂质降低，同时产品外观 颜色 得到明显改观。，下面是替考拉宁的提纯方法专利的具体信息内容。
1.一种替考拉宁的提纯方法，所述提纯方法包括：
(1)替考拉宁发酵液在碱性条件下用过滤器过滤，得到滤液；
(2)滤液通过大孔树脂进行柱层析，分别用水洗、丙酮的酸性水溶液进行洗脱，得到洗脱液；
(3)洗脱液通过活性炭脱色、过滤，得到脱色滤液；
(4)在pH＝7.0～11.0下通过分子量为200Da～1000Da纳滤膜浓缩，并加入去离子水，去除有机溶剂，制得2～20W/V％的替考拉宁水溶液；和
(5)将2～20W/V％的替考拉宁水溶液通过1μm的滤芯过滤，用盐酸溶液调节pH＝
2.5～6.0，在温度为5～25℃下，搅拌混合液30～90分钟，然后静置12～36小时，混合液经过过滤，过滤后采用pH＝2.5～6.0、温度为0～10℃的水顶洗，顶洗结束后得到替考拉宁湿粗品。
2.如权利要求1所述的提纯方法，其中，所述盐酸的浓度为1M。
3.一种替考拉宁的提纯方法，所述提纯方法包括：
(1)替考拉宁发酵液在碱性条件下用过滤器过滤，得到滤液；
(2)滤液通过大孔树脂进行柱层析，分别用水洗、丙酮的酸性水溶液进行洗脱，得到洗脱液；
(3)洗脱液通过活性炭脱色、过滤，得到脱色滤液；
(4)在pH＝7.0～11.0下通过分子量为200Da～1000Da纳滤膜浓缩，并不断加入去离子水，去除有机溶剂，制得2～20W/V％的替考拉宁水溶液；和
(5)向2～20W/V％的替考拉宁水溶液通过1μm的滤芯过滤，加入5～20W/V％氯化钠、氯化钾、氯化锂、溴化钠、溴化钾、溴化锂、碘化钠、碘化钾、氯化镁、氯化钙、氯化钡或氯化铵；待上述盐溶解后，用盐酸或氢氧化钠调至pH＝2.5～11，在温度为5～25℃下，搅拌混合液30～90分钟，然后静置20～40小时，混合液经过过滤，过滤后采用pH＝2.5～
6.0、温度为0～10℃的水顶洗，顶洗结束后得到替考拉宁湿粗品。
4.如权利要求3所述的提纯方法，其中，所述盐酸的浓度为1M。
5.如权利要求3所述的提纯方法，其中，所述氢氧化钠的浓度为1M。
替考拉宁的提纯方法
技术领域
背景技术
[0002] 现今存在的关于替考拉宁制备的工艺专利中，制备工艺主要为发酵液经碱化后过滤，滤液经树脂吸附后，用解吸剂将对树脂进行解吸，解吸液经过活性炭脱色，滤液加溶剂沉淀，过滤即得替考拉宁湿品。然后用树脂或层析剂进行进一步精制，其中的树脂主要为大孔吸附树脂，解吸剂为有机溶剂的水溶液，最后加大量的溶剂进行沉淀。
[0003] 以上的方法在具体的生产中已经得到充分的应用，证明效果也不错。但其中最大的问题就是最后的沉淀这一步需要用到大量的有机溶剂，这样会大大地加重环保的压力，同时因为去除杂质的工序较多，收率低。如果能将这种沉淀方法改变一下，不使用有机溶剂或减少有机溶剂的使用，能使产品收率和质量同时提高，那不但能降低产品的原料成本，也能减少环境污染，从而企业的经济效益和社会效益都会得到很大的提高。
[0004] 通常来说，物质能从溶液中结晶出来，根本原因就是其在溶液中的溶解度变小了。而要改变其溶解度，方法一般有改变温度、调节pH值、加盐、加有机溶剂等几种，其中加有机溶剂这种方法由于要使用到大量的有机溶剂，会加大对环保的压力，所以现不予考虑。另外替考拉宁的溶解度随着温度的变化而变化幅度不是很大，所以如果要通过改变温度使其结晶出来很难。而本发明选择了调节pH和加盐这两种方式。
发明内容
[0005] 因此，本发明提供了一种从2～20W/V％的替考拉宁水溶液中分离替考拉宁的提纯方法。
[0006] 根据本发明的一方面，一种分离替考拉宁的提纯方法，包括将2～20W/V％的替考拉宁水溶液用盐酸溶液调节pH＝2.5～6.0。
[0007] 其中，上述2～20W/V％的替考拉宁水溶液通过如下步骤制得：
[0008] (1)替考拉宁发酵液在碱性条件下用过滤器过滤，得到滤液；
[0009] (2)滤液通过大孔树脂进行柱层析，分别用水洗、甲醇或丙酮有机溶剂的酸性水溶液进行洗脱，得到洗脱液；
[0010] (3)洗脱液通过活性炭脱色、过滤，得到脱色滤液；
[0011] (4)在pH＝7.0～11.0下通过分子量为200Da～1000Da纳滤膜或5000Da～30000Da的超滤膜浓缩，并不断加入去离子水去除有机溶剂，制得2～20W/V％的替考拉宁水溶液。
[0012] 最好，2～20W/V％的替考拉宁水溶液通过1μm的滤芯过滤。
[0013] 最好，在温度为5～25℃下，搅拌混合液30～90分钟，然后静置12～36小时。
[0014] 最好，过滤后采用pH＝2.5～6.0、温度为0～10℃的水顶洗。
[0015] 最好，所述盐酸浓度为1M。
[0016] 根据本发明的另一方面，一种分离替考拉宁的方法包括向2～20W/V％的替考拉宁水溶液中加入5～20W/V％碱金属无机盐、或碱土金属无机盐或铵盐；待上述盐溶解后，用盐酸或氢氧化钠调至pH＝2.5～11。
[0017] 其中，2～20W/V％的替考拉宁水溶液通过如下步骤制得：
[0018] (1)替考拉宁发酵液在碱性条件下用过滤器过滤，得到滤液；
[0019] (2)滤液通过大孔树脂进行柱层析，分别用水洗、甲醇或丙酮有机溶剂的酸性水溶液进行洗脱，得到洗脱液；
[0020] (3)洗脱液通过活性炭脱色、过滤，得到脱色滤液；
[0021] (4)在pH＝7.0～11.0下通过分子量为200Da～1000Da纳滤膜或5000Da～30000Da的超滤膜浓缩，并不断加入去离子水去除有机溶剂，制得2～20W/V％的替考拉宁水溶液。
[0022] 最好，2～20W/V％的替考拉宁水溶液通过1μm的滤芯过滤。
[0023] 最好，在温度为5～25℃下，搅拌混合液30～90分钟，然后静置20～40小时。
[0024] 最好，过滤后采用pH＝2.5～6.0、温度为0～10℃的水顶洗。
[0025] 最好，所述碱金属无机盐包括碱金属无机卤化物；所述碱土金属无机盐包括碱土金属无机卤化物。
[0027] 其中，所述碱土金属无机卤化物包括氯化镁、氯化钙、氯化钡。
[0028] 其中，所述铵盐为氯化铵。
[0029] 最好，所述盐酸或氢氧化钠浓度为1M。
[0030] 本发明所提供的工艺流程具体描述如下。首先是替考拉宁浓缩水溶液的获得。替考拉宁发酵液在pH9.1～9.7的条件下用孔径为0.02μm～0.5μm的过滤器如陶瓷膜过滤，得到澄清的滤液，滤液回调pH，再将滤液通过大孔树脂进行吸附，替考拉宁被吸附到树脂上。树脂经过水洗后，用含有有机溶剂如甲醇或丙酮的酸性水溶液进行洗脱，将替考拉宁从树脂上洗脱下来。往含有替考拉宁的洗脱液中加入活性炭脱色，过滤后用分子量为200Da～1000Da的纳滤膜或5000Da～30000Da的超滤膜浓缩，并不断加入去离子水去除有机溶剂，控制过程pH值在7.0～11.0之间，最终得到含极少量溶剂的替考拉宁水溶液，溶液浓度为2～20W/V％。
[0031] 接下来沉淀分两种方法，一种是调节pH。将浓缩水溶液用1M的盐酸溶液调节pH至2.5～6.0，溶液中会有大量的浅色沉淀产生，搅拌30～90分钟，然后静置12～36小时，过程温度控制在5～25℃之内。然后经过固液分离，用pH＝2.5～6.0、温度在0～10℃的水顶洗，得替考拉宁湿品。
[0032] 另外一种方法是加盐。往浓缩液中加入5～20W/V％的无机盐，搅拌使其溶解。用1M的盐酸或氢氧化钠溶液调至pH＝2.5～11之间。持续搅拌30～90分钟后停止搅拌，静置20～40小时，全程控制温度5～25℃。然后固液分离，用pH＝2.5～6.0、温度在
0～10℃的水顶洗，得替考拉宁湿品。
0～10℃的水顶洗，得替考拉宁湿品。
[0033] 通过本发明得到的替考拉宁有效组份得到提高，其它杂质降低，同时产品外观颜色得到明显改观。
具体实施方式
[0034] 通过以下实例来对本发明作进一步具体说明，但并不仅限于以下实施例和实施例中的工艺参数范围。
[0035] 实施例1
[0036] 替考拉宁发酵液100L，效价1268μg/ml，含有替考拉宁126.8g，用1M的NaOH调pH至9.5，进陶瓷膜过滤，陶瓷膜的孔径为0.02μm。经过滤、水顶洗后，得混合滤液110L，效价为928μg/ml，含有替考拉宁102.08g。将滤液上大孔吸附树脂进行吸附，树脂体积为4L，流速为10L/hr。结束后用水洗树脂，待洗了6倍柱体积的水后，用含有60％丙酮、pH3.5的水溶液进行洗脱，流速为8L/hr，得到洗脱液3.8L，效价为14105μg/ml，pH6.9，含有替考拉宁53.599g。用1M的HCl调pH5.0后，往洗脱液中加入50g活性炭，搅拌30分钟，过滤得脱色液3.7L，效价为12680μg/ml，pH4.8，含有替考拉宁46.916g。将脱色液用1M的NaOH调至pH7.4，投入到纳滤膜系统中进行过滤，纳滤膜的透过分子量为800Da。先将脱色液浓缩至1/3体积，再用去离子水加到原来的体积，再浓缩至1/3体积，如此重复了4次后结束，浓缩液体积为1.1L，效价为42107μg/ml，含有替考拉宁46.318g，根据气相色谱测出其中丙酮含量为0.9％。
[0037] 实施例2
[0038] 根据实施例1方法所得的替考拉宁浓缩水溶液浓度为52000μg/ml，有效组份HPLC峰面积比例为75.8％，其它杂质HPLC峰面积比例为9.2％，体积200ml，pH＝8.2。通过1μm的滤芯过滤后边搅拌边加入1M的HCl溶液以调节溶液pH，直到pH稳定在2.5，替考拉宁从中析出，形成悬浊液。继续搅拌30分钟后停止搅拌，静置12小时，过程温度控制在5℃左右。混合液经过过滤，最后用pH＝2.5、温度为0℃的水顶洗50ml，顶洗结束后得到替考拉宁湿粗品18.6g。通过沉淀得到的替考拉宁有效组份HPLC峰面积比例为83.6％，其它杂质HPLC峰面积比例为4.2％，同时产品外观颜色得到明显改观。参见表1。
[0039] 实施例3
[0040] 根据实施例1方法所得的替考拉宁浓缩水溶液浓度为52000μg/ml，有效组份HPLC峰面积比例为75.8％(，其它杂质HPLC峰面积比例为9.2％，体积200ml，pH＝8.2。通过1μm的滤芯过滤后边搅拌边加入1M的HCl溶液以调节溶液pH，直到pH稳定在2.5，替考拉宁从中析出，形成悬浊液。继续搅拌60分钟后停止搅拌，静置24小时，过程温度控制在15℃左右。混合液经过过滤，最后用pH＝2.5、温度为10℃的水顶洗50ml，顶洗结束后得到替考拉宁湿粗品18.2g。通过沉淀得到的替考拉宁有效组份HPLC峰面积比例为84.7％，其它杂质HPLC峰面积比例为4.0％，同时产品外观颜色得到明显改观。参见表1。
[0041] 实施例4
[0042] 根据实施例1方法所得的替考拉宁浓缩水溶液浓度为52000μg/ml，有效组份HPLC峰面积比例为75.8％，其它杂质HPLC峰面积比例为9.2％，体积200ml，pH＝8.2。通过1μm的滤芯过滤后边搅拌边加入1M的HCl溶液以调节溶液pH，直到pH稳定在4.0，替考拉宁从中析出，形成悬浊液。继续搅拌30分钟后停止搅拌，静置24小时，过程温度控制在5℃左右。混合液经过过滤，最后用pH＝4.0、温度为5℃的水顶洗50ml，顶洗结束后得到替考拉宁湿粗品18.8g。通过沉淀得到的替考拉宁有效组份HPLC峰面积比例为84.1％，其它杂质HPLC峰面积比例为4.3％，同时产品外观颜色得到明显改观。参见表1。
[0043] 实施例5
[0044] 根据实施例1方法所得的替考拉宁浓缩水溶液浓度为52000μg/ml，有效组份HPLC峰面积比例为75.8％，其它杂质HPLC峰面积比例为9.2％，体积200ml，pH＝8.2。通过1μm的滤芯过滤后边搅拌边加入1M的HCl溶液以调节溶液pH，直到pH稳定在4.0，替考拉宁从中析出，形成悬浊液。继续搅拌90分钟后停止搅拌，静置36小时，过程温度控制在25℃左右。混合液经过过滤，最后用pH＝4.0、温度为10℃的水顶洗50ml，顶洗结束后得到替考拉宁湿粗品18.5g。通过沉淀得到的替考拉宁有效组份HPLC峰面积比例为83.8％，其它杂质HPLC峰面积比例为4.5％，同时产品外观颜色得到明显改观。参见表1。
[0045] 实施例6
[0046] 根据实施例1方法所得的替考拉宁浓缩水溶液浓度为52000μg/ml，有效组份HPLC峰面积比例为75.8％，其它杂质HPLC峰面积比例为9.2％，体积200ml，pH＝8.2。通过1μm的滤芯过滤后边搅拌边加入1M的HCl溶液以调节溶液pH，直到pH稳定在6.0，替考拉宁从中析出，形成悬浊液。继续搅拌60分钟后停止搅拌，静置12小时，过程温度控制在25℃左右。混合液经过过滤，最后用pH＝6.0、温度为0℃的水顶洗50ml，顶洗结束后得到替考拉宁湿粗品18.0g。通过沉淀得到的替考拉宁有效组份HPLC峰面积比例为84.6％，其它杂质HPLC峰面积比例为4.3％，同时产品外观颜色得到明显改观。参见表1。
[0047] 实施例7
[0048] 根据实施例1方法所得的替考拉宁浓缩水溶液浓度为52000μg/ml，有效组份HPLC峰面积比例为75.8％，其它杂质HPLC峰面积比例为9.2％，体积200ml，pH＝8.2。通过1μm的滤芯过滤后边搅拌边加入1M的HCl溶液以调节溶液pH，直到pH稳定在6.0，替考拉宁从中析出，形成悬浊液。继续搅拌90分钟后停止搅拌，静置36小时，过程温度控制在15℃左右。混合液经过过滤，最后用pH＝6.0、温度为5℃的水顶洗50ml，顶洗结束后得到替考拉宁湿粗品18.7g。通过沉淀得到的替考拉宁有效组份HPLC峰面积比例为84.1％，其它杂质HPLC峰面积比例为4.1％，同时产品外观颜色得到明显改观。参见表1。
[0049] 实施例8
[0050] 根据实施例1方法所得的替考拉宁浓缩水溶液浓度为51800μg/ml，有效组份HPLC峰面积比例为74.5％，其它杂质HPLC峰面积比例为10.5％，体积200ml，pH＝7.4。通过1μm的滤芯过滤后，边搅拌边加入10g NaCl，待NaCl全部溶解后，用1M的盐酸溶液调至pH＝2.5，已可见有替考拉宁从中析出了。继续搅拌60分钟，形成浆状物，静置30小时，过程温度控制在15℃左右。混合液通过过滤分离，最后用pH＝2.5、温度为10℃的水顶洗
50ml，顶洗结束后得到替考拉宁湿粗品17.8g。通过沉淀得到的替考拉宁有效组份HPLC峰面积比例为82.4％，其它杂质HPLC峰面积比例为6.9％，同时产品外观颜色得到明显改观。
参见表2。
50ml，顶洗结束后得到替考拉宁湿粗品17.8g。通过沉淀得到的替考拉宁有效组份HPLC峰面积比例为82.4％，其它杂质HPLC峰面积比例为6.9％，同时产品外观颜色得到明显改观。
参见表2。
[0051] 实施例9
[0052] 根据实施例1方法所得的替考拉宁浓缩水溶液浓度为51800μg/ml，有效组份HPLC峰面积比例为74.5％，其它杂质HPLC峰面积比例为10.5％，体积200ml，pH＝7.4。通过1μm的滤芯过滤后，边搅拌边加入10g NaCl，待NaCl全部溶解后，用1M的盐酸溶液调至pH＝2.5，已可见有替考拉宁从中析出了。继续搅拌90分钟，形成浆状物，静置40小时，过程温度控制在15℃左右。混合液通过过滤分离，最后用pH＝2.5、温度为5℃的水顶洗50ml，顶洗结束后得到替考拉宁湿粗品17.4g。通过沉淀得到的替考拉宁有效组份HPLC峰面积比例为81.6％，其它杂质HPLC峰面积比例为6.5％，同时产品外观颜色得到明显改观。参见表2。
[0053] 实施例10
[0054] 根据实施例1方法所得的替考拉宁浓缩水溶液浓度为51800μg/ml，有效组份HPLC峰面积比例为74.5％，其它杂质HPLC峰面积比例为10.5％，体积200ml，pH＝7.4。通过1μm的滤芯过滤后，边搅拌边加入20g NaCl，待NaCl全部溶解后，用1M的盐酸溶液调至pH＝7.0，已可见有替考拉宁从中析出了。继续搅拌30分钟，形成浆状物，静置40小时，过程温度控制在5℃左右。混合液通过过滤分离，最后用pH＝4.0、温度为5℃的水顶洗
50ml，顶洗结束后得到替考拉宁湿粗品17.5g。通过沉淀得到的替考拉宁有效组份HPLC峰面积比例为82.1％，其它杂质HPLC峰面积比例为7.1％，同时产品外观颜色得到明显改观。
参见表2。
50ml，顶洗结束后得到替考拉宁湿粗品17.5g。通过沉淀得到的替考拉宁有效组份HPLC峰面积比例为82.1％，其它杂质HPLC峰面积比例为7.1％，同时产品外观颜色得到明显改观。
参见表2。
[0055] 实施例11
[0056] 根据实施例1方法所得的替考拉宁浓缩水溶液浓度为51800μg/ml，有效组份HPLC峰面积比例为74.5％，其它杂质HPLC峰面积比例为10.5％，体积200ml，pH＝7.4。通过1μm的滤芯过滤后，边搅拌边加入20g NaCl，待NaCl全部溶解后，用1M的盐酸溶液调至pH＝7.0，已可见有替考拉宁从中析出了。继续搅拌90分钟，形成浆状物，静置20小时，过程温度控制在25℃左右。混合液通过过滤分离，最后用pH＝4.0、温度为0℃的水顶洗50ml，顶洗结束后得到替考拉宁湿粗品17.6g。通过沉淀得到的替考拉宁有效组份HPLC峰面积比例为82.2％，其它杂质HPLC峰面积比例为7.0％，同时产品外观颜色得到明显改观。参见表2。
[0057] 实施例12
[0058] 根据实施例1方法所得的替考拉宁浓缩水溶液浓度为51800μg/ml，有效组份HPLC峰面积比例为74.5％，其它杂质HPLC峰面积比例为10.5％，体积200ml，pH＝7.4。通过1μm的滤芯过滤后，边搅拌边加入40g NaCl，待NaCl全部溶解后，用1M的氢氧化钠溶液调至pH＝11.0，已可见有替考拉宁从中析出了。继续搅拌60分钟，形成浆状物，静置
30小时，过程温度控制在5℃左右。混合液通过过滤分离，最后用pH＝6.0、温度为10℃的水顶洗50ml，顶洗结束后得到替考拉宁湿粗品17.9g。通过沉淀得到的替考拉宁有效组份HPLC峰面积比例为82.1％，其它杂质HPLC峰面积比例为6.3％，同时产品外观颜色得到明显改观。参见表2。
30小时，过程温度控制在5℃左右。混合液通过过滤分离，最后用pH＝6.0、温度为10℃的水顶洗50ml，顶洗结束后得到替考拉宁湿粗品17.9g。通过沉淀得到的替考拉宁有效组份HPLC峰面积比例为82.1％，其它杂质HPLC峰面积比例为6.3％，同时产品外观颜色得到明显改观。参见表2。
[0059] 实施例13
[0060] 根据实施例1方法所得的替考拉宁浓缩水溶液浓度为51800μg/ml，有效组份HPLC峰面积比例为74.5％，其它杂质HPLC峰面积比例为10.5％，体积200ml，pH＝7.4。通过1μm的滤芯过滤后，边搅拌边加入40g NaCl，待NaCl全部溶解后，用1M的氢氧化钠溶液调至pH＝11.0，已可见有替考拉宁从中析出了。继续搅拌30分钟，形成浆状物，静置
20小时，过程温度控制在25℃左右。混合液通过过滤分离，最后用pH＝6.0、温度为0℃的水顶洗50ml，顶洗结束后得到替考拉宁湿粗品18.2g。通过沉淀得到的替考拉宁有效组份HPLC峰面积比例为81.7％，其它杂质HPLC峰面积比例为6.5％，同时产品外观颜色得到明显改观。参见表2。
20小时，过程温度控制在25℃左右。混合液通过过滤分离，最后用pH＝6.0、温度为0℃的水顶洗50ml，顶洗结束后得到替考拉宁湿粗品18.2g。通过沉淀得到的替考拉宁有效组份HPLC峰面积比例为81.7％，其它杂质HPLC峰面积比例为6.5％，同时产品外观颜色得到明显改观。参见表2。
[0061] 实施例14
[0062] 根据实施例1方法所得的替考拉宁浓缩水溶液浓度为51800μg/ml，有效组份HPLC峰面积比例为74.5％，其它杂质HPLC峰面积比例为10.5％，体积200ml，pH＝7.4。通过1μm的滤芯过滤后，边搅拌边加入40g KI，待KI全部溶解后，用1M的氢氧化钠溶液调至pH＝11.0，已可见有替考拉宁从中析出了。继续搅拌30分钟，形成浆状物，静置20小时，过程温度控制在25℃左右。混合液通过过滤分离，最后用pH＝6.0、温度为0℃的水顶洗50ml，顶洗结束后得到替考拉宁湿粗品17.6g。通过沉淀得到的替考拉宁有效组份HPLC峰面积比例为81.3％，其它杂质HPLC峰面积比例为7.2％，同时产品外观颜色得到明显改观。参见表3。
[0063] 实施例15
[0064] 根据实施例1方法所得的替考拉宁浓缩水溶液浓度为51800μg/ml，有效组份HPLC峰面积比例为74.5％，其它杂质HPLC峰面积比例为10.5％，体积200ml，pH＝7.4。通过1μm的滤芯过滤后，边搅拌边加入40g LiCl，待LiCl全部溶解后，用1M的氢氧化钠溶液调至pH＝11.0，已可见有替考拉宁从中析出了。继续搅拌30分钟，形成浆状物，静置
20小时，过程温度控制在25℃左右。混合液通过过滤分离，最后用pH＝6.0、温度为0℃的水顶洗50ml，顶洗结束后得到替考拉宁湿粗品17.4g。通过沉淀得到的替考拉宁有效组份HPLC峰面积比例为81.8％，其它杂质HPLC峰面积比例为6.9％，同时产品外观颜色得到明显改观。参见表3。
20小时，过程温度控制在25℃左右。混合液通过过滤分离，最后用pH＝6.0、温度为0℃的水顶洗50ml，顶洗结束后得到替考拉宁湿粗品17.4g。通过沉淀得到的替考拉宁有效组份HPLC峰面积比例为81.8％，其它杂质HPLC峰面积比例为6.9％，同时产品外观颜色得到明显改观。参见表3。
[0065] 实施例16
[0066] 根据实施例1方法所得的替考拉宁浓缩水溶液浓度为51800μg/ml，有效组份HPLC峰面积比例为74.5％，其它杂质HPLC峰面积比例为10.5％，体积200ml，pH＝7.4。通过1μm的滤芯过滤后，边搅拌边加入40g NaBr，待NaBr全部溶解后，用1M的氢氧化钠溶液调至pH＝11.0，已可见有替考拉宁从中析出了。继续搅拌30分钟，形成浆状物，静置
20小时，过程温度控制在25℃左右。混合液通过过滤分离，最后用pH＝6.0、温度为0℃的水顶洗50ml，顶洗结束后得到替考拉宁湿粗品18.0g。通过沉淀得到的替考拉宁有效组份HPLC峰面积比例为81.5％，其它杂质HPLC峰面积比例为7.0％，同时产品外观颜色得到明显改观。参见表3。
20小时，过程温度控制在25℃左右。混合液通过过滤分离，最后用pH＝6.0、温度为0℃的水顶洗50ml，顶洗结束后得到替考拉宁湿粗品18.0g。通过沉淀得到的替考拉宁有效组份HPLC峰面积比例为81.5％，其它杂质HPLC峰面积比例为7.0％，同时产品外观颜色得到明显改观。参见表3。
[0067] 实施例17
[0068] 根据实施例1方法所得的替考拉宁浓缩水溶液浓度为51800μg/ml，有效组份HPLC峰面积比例为74.5％，其它杂质HPLC峰面积比例为10.5％，体积200ml，pH＝7.4。通过1μm的滤芯过滤后，边搅拌边加入40g KBr，待KBr全部溶解后，用1M的氢氧化钠溶液调至pH＝11.0，已可见有替考拉宁从中析出了。继续搅拌30分钟，形成浆状物，静置20小时，过程温度控制在25℃左右。混合液通过过滤分离，最后用pH＝6.0、温度为0℃的水顶洗50ml，顶洗结束后得到替考拉宁湿粗品18.2g。通过沉淀得到的替考拉宁有效组份HPLC峰面积比例为82.0％，其它杂质HPLC峰面积比例为6.8％，同时产品外观颜色得到明显改观。参见表3。
[0069] 实施例18
[0070] 根据实施例1方法所得的替考拉宁浓缩水溶液浓度为51800μg/ml，有效组份HPLC峰面积比例为74.5％，其它杂质HPLC峰面积比例为10.5％，体积200ml，pH＝7.4。通过1μm的滤芯过滤后，边搅拌边加入40g LiBr，待LiBr全部溶解后，用1M的氢氧化钠溶液调至pH＝11.0，已可见有替考拉宁从中析出了。继续搅拌30分钟，形成浆状物，静置
20小时，过程温度控制在25℃左右。混合液通过过滤分离，最后用pH＝6.0、温度为0℃的水顶洗50ml，顶洗结束后得到替考拉宁湿粗品17.9g。通过沉淀得到的替考拉宁有效组份HPLC峰面积比例为82.3％，其它杂质HPLC峰面积比例为6.5％，同时产品外观颜色得到明显改观。参见表3。
20小时，过程温度控制在25℃左右。混合液通过过滤分离，最后用pH＝6.0、温度为0℃的水顶洗50ml，顶洗结束后得到替考拉宁湿粗品17.9g。通过沉淀得到的替考拉宁有效组份HPLC峰面积比例为82.3％，其它杂质HPLC峰面积比例为6.5％，同时产品外观颜色得到明显改观。参见表3。
[0071] 实施例19
[0072] 根据实施例1方法所得的替考拉宁浓缩水溶液浓度为51800μg/ml，有效组份HPLC峰面积比例为74.5％，其它杂质HPLC峰面积比例为10.5％，体积200ml，pH＝7.4。通过1μm的滤芯过滤后，边搅拌边加入40g NaI，待NaI全部溶解后，用1M的氢氧化钠溶液调至pH＝11.0，已可见有替考拉宁从中析出了。继续搅拌30分钟，形成浆状物，静置20小时，过程温度控制在25℃左右。混合液通过过滤分离，最后用pH＝6.0、温度为0℃的水顶洗50ml，顶洗结束后得到替考拉宁湿粗品17.5g。通过沉淀得到的替考拉宁有效组份HPLC峰面积比例为81.4％，其它杂质HPLC峰面积比例为7.1％，同时产品外观颜色得到明显改观。参见表3。
[0073] 实施例20
[0074] 根据实施例1方法所得的替考拉宁浓缩水溶液浓度为51800μg/ml，有效组份HPLC峰面积比例为74.5％，其它杂质HPLC峰面积比例为10.5％，体积200ml，pH＝7.4。通过1μm的滤芯过滤后，边搅拌边加入40g KI，待KI全部溶解后，用1M的氢氧化钠溶液调至pH＝11.0，已可见有替考拉宁从中析出了。继续搅拌30分钟，形成浆状物，静置20小时，过程温度控制在25℃左右。混合液通过过滤分离，最后用pH＝6.0、温度为0℃的水顶洗50ml，顶洗结束后得到替考拉宁湿粗品17.6g。通过沉淀得到的替考拉宁有效组份HPLC峰面积比例为81.9％，其它杂质HPLC峰面积比例为6.7％，同时产品外观颜色得到明显改观。参见表3。
[0075] 实施例21
[0076] 根据实施例1方法所得的替考拉宁浓缩水溶液浓度为51800μg/ml，有效组份HPLC峰面积比例为74.5％，其它杂质HPLC峰面积比例为10.5％，体积200ml，pH＝7.4。通过1μm的滤芯过滤后，边搅拌边加入40g MgCl2，待MgCl2全部溶解后，用1M的氢氧化钠溶液调至pH＝11.0，已可见有替考拉宁从中析出了。继续搅拌30分钟，形成浆状物，静置
20小时，过程温度控制在25℃左右。混合液通过过滤分离，最后用pH＝6.0、温度为0℃的水顶洗50ml，顶洗结束后得到替考拉宁湿粗品17.2g。通过沉淀得到的替考拉宁有效组份HPLC峰面积比例为81.1％，其它杂质HPLC峰面积比例为6.9％，同时产品外观颜色得到明显改观。参见表3。
20小时，过程温度控制在25℃左右。混合液通过过滤分离，最后用pH＝6.0、温度为0℃的水顶洗50ml，顶洗结束后得到替考拉宁湿粗品17.2g。通过沉淀得到的替考拉宁有效组份HPLC峰面积比例为81.1％，其它杂质HPLC峰面积比例为6.9％，同时产品外观颜色得到明显改观。参见表3。
[0077] 实施例22
[0078] 根据实施例1方法所得的替考拉宁浓缩水溶液浓度为51800μg/m1，有效组份HPLC峰面积比例为74.5％，其它杂质HPLC峰面积比例为10.5％，体积200ml，pH＝7.4。通过1μm的滤芯过滤后，边搅拌边加入40g CaCl2，待CaCl2全部溶解后，用1M的氢氧化钠溶液调至pH＝11.0，已可见有替考拉宁从中析出了。继续搅拌30分钟，形成浆状物，静置
20小时，过程温度控制在25℃左右。混合液通过过滤分离，最后用pH＝6.0、温度为0℃的水顶洗50ml，顶洗结束后得到替考拉宁湿粗品18.3g。通过沉淀得到的替考拉宁有效组份HPLC峰面积比例为82.1％，其它杂质HPLC峰面积比例为6.4％，同时产品外观颜色得到明显改观。参见表3。
20小时，过程温度控制在25℃左右。混合液通过过滤分离，最后用pH＝6.0、温度为0℃的水顶洗50ml，顶洗结束后得到替考拉宁湿粗品18.3g。通过沉淀得到的替考拉宁有效组份HPLC峰面积比例为82.1％，其它杂质HPLC峰面积比例为6.4％，同时产品外观颜色得到明显改观。参见表3。
[0079] 实施例23
[0080] 根据实施例1方法所得的替考拉宁浓缩水溶液浓度为51800μg/ml，有效组份HPLC峰面积比例为74.5％，其它杂质HPLC峰面积比例为10.5％，体积200ml，pH＝7.4。通过1μm的滤芯过滤后，边搅拌边加入40g BaCl2，待BaCl2全部溶解后，用1M的氢氧化钠溶液调至pH＝11.0，已可见有替考拉宁从中析出了。继续搅拌30分钟，形成浆状物，静置
20小时，过程温度控制在25℃左右。混合液通过过滤分离，最后用pH＝6.0、温度为0℃的水顶洗50ml，顶洗结束后得到替考拉宁湿粗品17.5g。通过沉淀得到的替考拉宁有效组份HPLC峰面积比例为81.7％，其它杂质HPLC峰面积比例为6.6％，同时产品外观颜色得到明显改观。参见表3。
20小时，过程温度控制在25℃左右。混合液通过过滤分离，最后用pH＝6.0、温度为0℃的水顶洗50ml，顶洗结束后得到替考拉宁湿粗品17.5g。通过沉淀得到的替考拉宁有效组份HPLC峰面积比例为81.7％，其它杂质HPLC峰面积比例为6.6％，同时产品外观颜色得到明显改观。参见表3。
[0081] 实施例24
[0082] 根据实施例1方法所得的替考拉宁浓缩水溶液浓度为51800μg/ml，有效组份HPLC峰面积比例为74.5％，其它杂质HPLC峰面积比例为10.5％，体积200ml，pH＝7.4。通过1μm的滤芯过滤后，边搅拌边加入40g NH4Cl，待NH4Cl全部溶解后，用1M的氢氧化钠溶液调至pH＝11.0，已可见有替考拉宁从中析出了。继续搅拌30分钟，形成浆状物，静置
20小时，过程温度控制在25℃左右。混合液通过过滤分离，最后用pH＝6.0、温度为0℃的水顶洗50ml，顶洗结束后得到替考拉宁湿粗品17.1g。通过沉淀得到的替考拉宁有效组份HPLC峰面积比例为81.6％，其它杂质HPLC峰面积比例为7.4％，同时产品外观颜色得到明显改观。参见表3。
20小时，过程温度控制在25℃左右。混合液通过过滤分离，最后用pH＝6.0、温度为0℃的水顶洗50ml，顶洗结束后得到替考拉宁湿粗品17.1g。通过沉淀得到的替考拉宁有效组份HPLC峰面积比例为81.6％，其它杂质HPLC峰面积比例为7.4％，同时产品外观颜色得到明显改观。参见表3。
[0083] 以上工艺可用于替考拉宁中间体的制备和用于替考拉宁成品的制备，也可用于经沉淀后的替考拉宁重新溶解再经冻干后得到替考拉宁成品DS，也可通过多次沉淀组合提纯替考拉宁。
[0084] 表1
[0085]
[0086] 表2
[0087]
[0088] 表3
[0089]
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