专利汇可以提供阻止软骨细胞去分化的培育方法专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种阻止软骨细胞去分化的培育方法,包括以下步骤:S1.将人关节软骨组织用胶原酶消化;S2.将细胞用PBS稀释后,离心收集细胞;S3.用PBS离心洗涤,获取原代人软骨细胞;S4.将原代人软骨细胞在培养基中培养5-7代,所述培养基包括以下组分:10-15%的血清、 氨 基酸、生长因子。本发明的阻止软骨细胞去分化的培育方法能够有效的将去分化软骨细胞进行逆转,进而很好的保持了正常软骨细胞的能 力 ,从而为将其运用于自体软骨细胞移植奠定了实验 基础 。,下面是阻止软骨细胞去分化的培育方法专利的具体信息内容。
1.一种阻止软骨细胞去分化的培育方法,其特征在于:包括以下步骤:
S1.将人关节软骨组织用胶原酶消化;
S2.将细胞用PBS稀释后,离心收集细胞 ;
S3.用PBS离心洗涤,获取原代人软骨细胞;
S4.将原代人软骨细胞在培养基中培养5-7代,所述培养基包括以下组分:10-15%的血清、氨基酸、生长因子。
2.根据权利要求1所述的一种阻止软骨细胞去分化的培育方法,其特征在于:所述培养基包括以下组分和配比:10-15%的血清;所述氨基酸包括L-精氨酸150.0-200.0mg/L、L-门冬氨酸8.0-10.0mg/L、L-谷氨酸6.0-12.0mg/L、甘氨酸15.0-18.0mg/L、L-组氨酸18.0-
20.0mg/L、L-羟脯氨酸12.0-16.0mg/L、L-异亮氨酸20.0-30.0mg/L、L-亮氨酸25.0-35.0mg/L、L-甲硫氨酸20.0-25.0mg/L、L-苯丙氨酸6.0-10.0mg/L、L-脯氨酸16.0-20.0mg/L、L-丝氨酸35.0-40.0mg/L、L-苏氨酸7.0-15.0mg/L、L-色氨酸8.0-10.0mg/L、L-酪氨酸15.0-
20.0mg/L、L-缬氨酸10.0-16.0mg/L;所述生长因子包括:碱性成纤维生长因子25-45ug/L、表皮生长因子5-25ug/L、骨形成蛋白10-25ug/L、血小板衍生生长因子15-35ug/L、白介素-6
0.5-2.5ug/L;余量为F12基础培养基。
3.根据权利要求1所述的一种阻止软骨细胞去分化的培育方法,其特征在于:所述培养基包括以下组分和配比:12-15%的血清;所述氨基酸包括L-精氨酸160.0-180.0mg/L、L-门冬氨酸8.0-10.0mg/L、L-谷氨酸8.0-10.0mg/L、甘氨酸15.0-17.0mg/L、L-组氨酸18.0-
20.0mg/L、L-羟脯氨酸14.0-16.0mg/L、L-异亮氨酸22.0-28.0mg/L、L-亮氨酸28.0-32.0mg/L、L-甲硫氨酸22.0-24.0mg/L、L-苯丙氨酸7.0-9.0mg/L、L-脯氨酸17.0-19.0mg/L、L-丝氨酸37.0-39.0mg/L、L-苏氨酸10.0-15.0mg/L、L-色氨酸8.0-10.0mg/L、L-酪氨酸16.0-
18.0mg/L、L-缬氨酸12.0-16.0mg/L;所述生长因子包括:碱性成纤维生长因子30-40ug/L、表皮生长因子10-20ug/L、骨形成蛋白15-20ug/L、血小板衍生生长因子20-30ug/L、白介素-
6 1.0-2.0ug/L;余量为F12基础培养基。
4.根据权利要求1所述的一种阻止软骨细胞去分化的培育方法,其特征在于:所述培养基包括以下组分和配比:15%的血清;所述氨基酸包括L-精氨酸170.0mg/L、L-门冬氨酸
9.0mg/L、L-谷氨酸9.0mg/L、甘氨酸16.0mg/L、L-组氨酸19.0mg/L、L-羟脯氨酸15.0mg/L、L-异亮氨酸25.0mg/L、L-亮氨酸30.0mg/L、L-甲硫氨酸23.0mg/L、L-苯丙氨酸8.0mg/L、L-脯氨酸18.0mg/L、L-丝氨酸38.0mg/L、L-苏氨酸12.0mg/L、L-色氨酸9.0mg/L、L-酪氨酸17.0mg/L、L-缬氨酸14.0mg/L;所述生长因子包括:碱性成纤维生长因子35ug/L、表皮生长因子
15ug/L、骨形成蛋白18ug/L、血小板衍生生长因子25ug/L、白介素-6 1.5ug/L;余量为F12基础培养基。
5.根据权利要求1所述的一种阻止软骨细胞去分化的培育方法,其特征在于:步骤S1中胶原酶为0.5-2% II型胶原酶。
6.根据权利要求1所述的一种阻止软骨细胞去分化的培育方法,其特征在于:步骤S1中胶原酶为1.5% II型胶原酶。
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