一种水溶性珍珠粉在促进伤口愈合的应用
阅读：540发布：2024-01-01
专利汇可以提供一种水溶性珍珠粉在促进伤口愈合的应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 提供一种 水 溶性珍珠粉在促进 伤口愈合 的应用，所述 水溶性 珍珠粉具有修复 皮肤 创伤的新用途；所述水溶性珍珠粉的制备方法包括以下步骤：S1.预处理；S2.酸法改性；S3.酶法改性；将S2得到的液体进行酶解，酶解结束后，100℃灭酶10分钟，离心取上清液， 冷冻干燥 并 粉碎 至200目以上，得到水溶性珍珠粉。本发明提供了一种水溶性珍珠粉在修复皮肤烧伤、创伤、灼伤、烫伤等皮肤创伤药物的新用途，其效果明显优于 现有技术 的药物，伤口修复快，且不留疤痕，促创伤修复效果更明显。，下面是一种水溶性珍珠粉在促进伤口愈合的应用专利的具体信息内容。
1.一种水溶性珍珠粉在促进伤口愈合的应用，其特征在于，所述水溶性珍珠粉具有修复皮肤创伤的新用途；
所述水溶性珍珠粉的制备方法包括以下步骤：
S1.预处理；将珍珠或珍珠层清洗、烘干和初步粉碎成200目以上粉末；
S2.酸法改性；按重量份数计，取珍珠粉70-90份，25-50%乳酸溶液10-30份，两组分混合后，保持温度为40-90℃不断搅拌，至混合体系pH达到4.6-6.5，且静止后无明显不溶物沉淀时，停止加热冷却至室温；
S3.酶法改性；将S2得到的液体进行酶解，酶解结束后，100℃灭酶10分钟，离心取上清液，冷冻干燥并粉碎至200目以上，得到水溶性珍珠粉。
2.根据权利要求1所述的水溶性珍珠粉在促进伤口愈合的应用，其特征在于，所述S3中，酶解选用的酶为角质蛋白酶、中性蛋白酶、动物蛋白酶、风味蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶中的任两种复配，两种酶的添加量均为2200-4600U/g蛋白，pH值5.5-11.0，酶解温度
45-55℃，酶解时间3-6小时。
3.根据权利要求1所述的水溶性珍珠粉在促进伤口愈合的应用，其特征在于，包括以下步骤：
（1）建立小鼠全层皮损创伤模型；
（2）对创伤模型的小鼠进行给药；
（3）对创伤修复效果进行功效评价，所述功效评价包括一级功效评价和二级功效评价；
所述一级功效评价包括止血活性评价、抗菌活性评价的的任一种或两种；所述二级功效评价为皮肤创伤愈合评价，所述皮肤创伤愈合评价包括伤口愈合率测定、掉痂时间测定、表皮生长因子测定、炎症因子测定、胶原蛋白生成分析中的任一种或几种的组合。
4.根据权利要求3所述的水溶性珍珠粉在促进伤口愈合的应用，其特征在于，所述步骤（2）中，给药的方式为：取水溶性珍珠粉50-500mg涂抹伤口，涂满为止，每天涂抹给药一次，采用无菌生理盐水为阴性对照组，连续给药28天。
5.根据权利要求4所述的水溶性珍珠粉在促进伤口愈合的应用，其特征在于，所述止血活性评价采用小鼠断尾法测定，通过出血量和出血时间评价体表促凝血活性。
6.根据权利要求4所述的水溶性珍珠粉在促进伤口愈合的应用，其特征在于，所述抗菌活性评价的方法为：选用与感染相关的菌种，活化菌类并用灭完菌的生理盐水稀释，使菌落群数保持在108cfu/g，同时制作固体培养基并灭菌，将稀释后的菌类和灭完菌培养基混匀后快速倒入无菌培养皿中，待其冷却凝固，打孔注入浓度为2-15%的样品溶液并做空白平行试验，于37℃培养箱培养16h，观察抗菌效果，并测量抑菌圈大小。
7.根据权利要求4所述的水溶性珍珠粉在促进伤口愈合的应用，其特征在于，所述伤口愈合率测定和掉痂时间测定的方法为：所述步骤（1）中涂抹给药后，从第0天开始，每2天在同一固定高度拍照记录伤口创面情况，用软件计算伤口愈合率、记录掉痂时间；伤口愈合率测定的公式（1）为：
，
公式中n是造模后天数。
8.根据权利要求1所述的水溶性珍珠粉在促进伤口愈合的应用，其特征在于，所述水溶性珍珠粉可制成包括粉末状、溶液状、乳状、膏状、凝胶状、复合纤维膜状的任一种产品。
9.根据权利要求8所述的水溶性珍珠粉在促进伤口愈合的应用，其特征在于，所述复合纤维膜状产品为通过静电纺丝技术制得的静电纺丝复合纤维膜，所述的制备方法为：
a.将水溶性珍珠粉溶于超纯水中，使其完全溶解，以制得水溶性珍珠粉溶液；
b.将载体材料溶于溶剂中，以制得载体材料溶液；所述载体材料包括基料和辅料，所述基料与辅料的质量比为1:1-4:1；所述基料为聚乙烯醇或聚己内酯，所述辅料为海参胶原蛋白或壳聚糖；所述溶剂为六氟异丙醇、三氟乙酸、三氟乙醇中的任一种；所述载体材料溶液的浓度为5％-10％；
c.将步骤a和步骤b所得的溶液充分涡旋混合，使其充分溶解，制得纺丝溶液；纺丝溶液中水溶性珍珠粉的浓度为2-10％；
d.使用步骤c所获得纺丝溶液，采用静电纺丝的方法，制备获得生物活性敷料；静电纺丝所用溶剂为六氟异丙醇、三氟乙酸、三氟乙醇中的任一种。
10.根据权利要求9所述的水溶性珍珠粉在促进伤口愈合的应用，其特征在于，步骤d中静电纺丝电压为15-30kV，注射器针头与接收板之间的距离可为10-15cm，注射泵的推进速度可为0.01-0.50mL/min，纺丝环境温度可为35-39℃。
一种水溶性珍珠粉在促进伤口愈合的应用
技术领域
[0002]
背景技术
[0003] 在世界范围内，每年遭受皮肤创伤人数超过4000万。如果受损的皮肤不能及时修复，创面很容易受到感染，演变成慢性伤口，严重的创伤甚至危及生命。良好的重塑效果会使皮肤瘢痕减小，甚至达到无痕愈合。
[0004] 创伤愈合主要包含止血凝血期、炎症期、增殖期和组织重塑期四个时期。在机体遭受创伤后，血小板激活，分泌相关因子促使血液凝集成血栓，达到凝血作用，同时刺激机体产生炎症反应等。在炎症期，免疫吞噬组织碎片并杀灭入侵的细菌等环境中的污染物，同时分泌各种细胞因子，刺激成纤维细胞分裂、胶原合成和血管生成。增殖期时，成纤维细胞则产生胶原蛋白、纤连蛋白、透明质酸、蛋白多糖等各种细胞外基质成分，合成肉芽组织，同时分化成肌成纤维细胞，促进伤口收缩。重塑期为愈合后期胶原蛋白和纤连蛋白等在相关细胞因子和细胞的共同调节下，进行不断地合成和分解，达到一个平衡，进行不断地重塑，一直持续到1年或者更长时间。
[0005] 根据愈合机理开发的常用创伤修复药物主要有：细胞因子、抗菌药物、酶清创（enzymatic debridement）制剂、中药制剂，抗氧化剂和皮质类固醇等。其中，用于伤口消毒清创的药物主要有医用酒精、碘伏、抗生素等，其刺激性较大，清创效果不理想，伤口愈合缓慢，修复效果不明显，常见明显疤痕。因而，急需要开发出天然高效的组织创伤愈合的物质。
[0006] 珍珠由珍珠贝科动物马氏珍珠贝、蚌科动物三角帆蚌或褶纹冠蚌等双壳动物受到外界刺激而形成，分为淡水珍珠和海水珍珠两种种类，其结构由外而内分别为珍珠层、角质层、珠核，其中淡水珍珠分为有核珍珠和无核珍珠，产量较大。《本草纲目》记载珍珠粉具有多种功能活性，包括多种微量元素、氨基酸等其他活性物质，珍珠蛋白也为其活性成分之一，且国内外也有报道珍珠粉的活性物质及其功效。珍珠粉是由珍珠研磨而成的白色粉末状物，有特殊腥味，主要成分为碳酸钙。珍珠粉的主要成分为碳酸钙，且富含多种微量元素、蛋白质、氨基酸等功能物质，其多数为不溶性成分，难以直接利用。
[0007] 将海洋生物活性物质应用到天然高效的组织创伤愈合的物质的开发中，将会成为创伤领域关注的新焦点，具有很好的临床应用前景。
[0008]
发明内容
[0009] 有鉴于此，本发明提供一种水溶性珍珠粉在促进伤口愈合的应用。本发明提供了一种水溶性珍珠粉在修复皮肤烧伤、创伤、灼伤、烫伤等皮肤创伤药物的新用途，其效果明显优于现有技术的药物，伤口修复快，且不留疤痕，其主要治疗作用包括止血、抗菌、抗炎、调节细胞因子、促进伤口愈合和抑制瘢痕形成等活性，促创伤修复效果更明显。
[0010] 本发明的技术方案为：一种水溶性珍珠粉在促进伤口愈合的应用，其特征在于，所述水溶性珍珠粉具有修复皮肤创伤的新用途；
所述水溶性珍珠粉的制备方法包括以下步骤：
S1.预处理；将珍珠或珍珠层清洗、烘干和初步粉碎成200目以上粉末；
S2.酸法改性；按重量份数计，取珍珠粉70-90份，25-50%乳酸溶液10-30份，两组分混合后，保持温度为40-90℃不断搅拌，至混合体系pH达到4.6-6.5，且静止后无明显不溶物沉淀时，停止加热冷却至室温；
S3.酶法改性；将S2得到的液体进行酶解，酶解结束后，100℃灭酶10分钟，离心取上清液，冷冻干燥并粉碎至200目以上，得到水溶性珍珠粉（即为MPP，Modiffied pearl power）。
所述水溶性珍珠粉的制备方法包括以下步骤：
S1.预处理；将珍珠或珍珠层清洗、烘干和初步粉碎成200目以上粉末；
S2.酸法改性；按重量份数计，取珍珠粉70-90份，25-50%乳酸溶液10-30份，两组分混合后，保持温度为40-90℃不断搅拌，至混合体系pH达到4.6-6.5，且静止后无明显不溶物沉淀时，停止加热冷却至室温；
S3.酶法改性；将S2得到的液体进行酶解，酶解结束后，100℃灭酶10分钟，离心取上清液，冷冻干燥并粉碎至200目以上，得到水溶性珍珠粉（即为MPP，Modiffied pearl power）。
[0011] 进一步的，所述S3中，酶解选用的酶为角质蛋白酶、中性蛋白酶、动物蛋白酶、风味蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶中的任两种复配，两种酶的添加量均为2200-4600U/g蛋白，pH值5.5-11.0，酶解温度45-55℃，酶解时间3-6小时。
[0012] 进一步的，所述水溶性珍珠粉的平均分子量为2500Da-5000Da。
[0013] 本发明制备得到的水溶性珍珠粉，为白色粉末，水溶性好，总蛋白含量0.5-1.5 g/100g，其中水溶性多肽占总蛋白15-25%，小分子肽和氨基酸总量占75-95%，在常温下，测得
0.5%-15%的样液pH范围在3.8-5.0之间。
0.5%-15%的样液pH范围在3.8-5.0之间。
[0014] 进一步的，所述水溶性珍珠粉在促进伤口愈合的应用，包括以下步骤：（1）建立小鼠全层皮损创伤模型；
（2）对创伤模型的小鼠进行给药；
（3）对创伤修复效果进行功效评价，所述功效评价包括一级功效评价和二级功效评价；
所述一级功效评价包括止血活性评价、抗菌活性评价的的任一种或两种；所述二级功效评价为皮肤创伤愈合评价，所述皮肤创伤愈合评价包括伤口愈合率测定、掉痂时间测定、表皮生长因子测定、炎症因子测定、胶原蛋白生成分析中的任一种或几种的组合。
（2）对创伤模型的小鼠进行给药；
（3）对创伤修复效果进行功效评价，所述功效评价包括一级功效评价和二级功效评价；
所述一级功效评价包括止血活性评价、抗菌活性评价的的任一种或两种；所述二级功效评价为皮肤创伤愈合评价，所述皮肤创伤愈合评价包括伤口愈合率测定、掉痂时间测定、表皮生长因子测定、炎症因子测定、胶原蛋白生成分析中的任一种或几种的组合。
[0015] 进一步的，所述步骤（1）中，小鼠全层皮损创伤模型方法为：采用5-6周龄雄性小鼠按动物保健和处理程序进行饲养，腹腔注射350 mg/kg水合氯醛麻醉，背部皮肤脱毛消毒后，用直径8 mm打孔器在鼠背部打一个圆孔，切取全层皮肤，深至筋膜，每只动物分笼饲养。
[0016] 进一步的，所述步骤（2）中，给药的方式为：取水溶性珍珠粉50-500mg涂抹伤口，涂满为止，每天涂抹给药一次，采用无菌生理盐水为阴性对照组（即为NT），连续给药28天；阳性对照组（即为PC）采用同样方法。
[0017] 进一步的，所述止血活性评价采用小鼠断尾法测定，通过出血量和出血时间评价体表促凝血活性。具体为，取小鼠18只，体质量33-38 g，随机分为3组。分别为空白组、水溶性珍珠粉组和阳性对照组。将小鼠装进的特定容器中固定，露出尾巴，并使尾巴呈水平放置，在距尾端0.4 cm处用消毒手术剪截断，用消毒棉签轻轻蘸取药物包裹鼠尾断面，用消毒棉签蘸取1 g/kg剂量的方格星虫提取物或云南白药；空白组不予给药，开始计时,每隔约5 s用滤纸轻轻吸取血滴,不可挤压伤口, 滤纸不再粘有血迹为止，记下血液停止流出的时间。
[0018] 进一步的，所述抗菌活性评价的方法为：选用与感染相关的菌种，活化菌类并用灭完菌的生理盐水稀释，使菌落群数保持在108cfu/g，同时制作固体培养基，所述固体培养基可采用任一现有技术实现，比如固体培养基采用4.2%胰蛋白胨大豆琼脂（TSA），若检测弧菌，培养基中需另加3%NaCl，并灭菌，将稀释后的菌类和灭完菌培养基混匀后快速倒入无菌培养皿中，待其冷却凝固，打孔注入浓度为2-15%的样品溶液并做空白平行试验，于37℃培养箱培养16h，观察抗菌效果，并测量抑菌圈大小。
[0019] 进一步的，所述伤口愈合率测定和掉痂时间测定的方法为：所述步骤（2）中涂抹给药后，从第0天开始，每2天在同一固定高度拍照记录伤口创面情况，用软件计算伤口愈合率、记录掉痂时间；伤口愈合率测定的公式（1）为：，
公式中n是造模后天数。
公式中n是造模后天数。
[0020] 进一步的，所述步骤（3）中，所述步骤（3）中，所述表皮生长因子测定和炎症因子测定中涉及的因子包括TNF-a、IL-1β、TGF-β1、COL1A1(I型胶原蛋白) mRNA、TGF-β1、a-SMA、TGF-BRII、Smad7中的任两种或以上。
[0021] 进一步的，所述步骤（3）中，表皮生长因子测定、炎症因子测定采用实时荧光定量PCR分析(RT-PCR)。具体方法为：使用RNAIso Plus和匀浆器从伤口组织中提取总RNA。使用Prime ScriptTM RT reagent Kit with gDNA Eraser(Perfect Real Time)试剂盒进行逆转录合成cDNA，用TB GreenTM Premix Ex TaqTM II(Tli RNaseH Plus)(*2)试剂盒进行荧光定量。反应条件为：95℃30s，95℃5s，60℃30s，40个循环。每延伸一次，都进行实时荧光定量测量。用甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)作为内参基因，用于校正计算靶基因的表达水平，使用∆ ∆CT方法进行计算。第7天测定TNF-a、IL-1β和TGF-β1，第14、21和28天测定COL1A1(I型胶原蛋白)mRNA水平。
[0022] 进一步的，步骤（3）中，胶原蛋白生成分析采用胶原纤维透射电镜分析（TEM）。具体为：取造模后第21天的皮肤伤口组织放入2.5%戊二醛，于4℃固定过夜。将戊二醛固定后的组织，浸入PBS(0.1mol/L)中，漂洗3次，离心去上清，每次20 min，再用4℃预冷的1%锇酸，在4℃固定2-3 h，然后用PBS（0.1mol/L）浸洗3 次，每次20 min。按梯度30%、50%、70%、80%、
85%、90%、95%、100%乙醇脱水，每种浓度乙醇1次，每次15 min，再用100%乙醇彻底脱水2次，每次10 min。接着用丙酮：环氧树脂(2：1)、丙酮：环氧树脂(1：1)、环氧树脂，于37℃恒温箱依次进行渗透，每次12 h。接着包埋、固化和修块，用铅和铀双染色后，于200 KV加速电压和放大倍率5000观察拍照。使用ImageJ软件分析测量每个图像中每个胶原纤维的直径。
85%、90%、95%、100%乙醇脱水，每种浓度乙醇1次，每次15 min，再用100%乙醇彻底脱水2次，每次10 min。接着用丙酮：环氧树脂(2：1)、丙酮：环氧树脂(1：1)、环氧树脂，于37℃恒温箱依次进行渗透，每次12 h。接着包埋、固化和修块，用铅和铀双染色后，于200 KV加速电压和放大倍率5000观察拍照。使用ImageJ软件分析测量每个图像中每个胶原纤维的直径。
[0023] 本发明中，阳性对照组可选用现有技术中创伤修复功效明显的药物，比如云南白药、京万红软膏、银锌抑菌霜等。所述云南白药为现有技术由云南白药集团股份有限公司生产的云南白药粉剂，国药准字Z53020798；所述京万红软膏为现有技术天津达仁堂京万红药业有限公司生产的京万红软膏，国药准字Z12020440；所述银锌抑菌霜为现有技术河南汇博医疗股份有限公司生产的邦尔康银锌抑菌霜，注册证号（豫）卫消证字（2004）第0056号。
[0024] 进一步的，所述水溶性珍珠粉可制成包括粉末状、溶液状、乳状、膏状、凝胶状、复合纤维膜状的任一种产品。优选的，所述水溶性珍珠粉是通过预处理制得珍珠粉，依次通过酸法改性、酶法改性后，冷冻干燥制得的水溶性珍珠粉。
[0025] 珍珠粉具有安神定惊、明目消翳、解毒生肌、润肤祛斑之功效。珍珠粉与珍珠层粉都是由珍珠分泌细胞分泌而成，其成分具有一致性，都是由95%左右的碳酸钙和5%左右的有机质组成。其有机质主要是由不同种类的蛋白质组成，水解后可得到17种氨基酸，即7种人体必需氨基酸：赖氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、亮氨酸和缬氨酸；10种非必需氨基酸 ：天门冬氨酸、丝氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、半胱氨酸、丙氨酸、酪氨酸、组氨酸和精氨酸。氨基酸是珍珠发挥特定功效的重要物质基础，是小分子活性肽的组成单元。本发明的水溶性珍珠粉，依次通过酸法改性、酶法改性后，将珍珠的蛋白质进一步分解为小分子的活性肽类和氨基酸，这些小分子活性肽类和氨基酸协同增效，可发挥其促进伤口修复的功能活性。
[0026] 本发明制备的水溶性珍珠粉具有水溶性好、易吸收等优点，容易被皮肤吸收，迅速发挥促进伤口愈合的功效。
[0027] 水溶性珍珠粉经过实验进一步证实了具有促进伤口愈合和抑制瘢痕形成等活性，其作用机制与止血、抗菌、抗炎、促进生长因子分泌和胶原胶原纤维生长以及调节瘢痕相关因子表达有密切关联。因此，水溶性珍珠粉可作用于伤口的止血期、炎症期、增殖期和重塑期四个创伤愈合时期，可以作为抗异常瘢痕形成的再生愈合活性物质用于真皮损伤的治疗。
[0028] 本发明提供了一种水溶性珍珠粉在修复皮肤烧伤、创伤、灼伤、烫伤等皮肤创伤药物的新用途，其效果明显优于现有技术的药物，伤口修复快，且不留疤痕，其主要治疗作用包括止血、抗菌、抗炎、调节细胞因子、促进伤口愈合和抑制瘢痕形成等活性，促创伤修复效果更明显。
[0029] 进一步的，所述复合纤维膜状产品为通过静电纺丝技术制得的静电纺丝复合纤维膜，所述的制备方法为：a.将水溶性珍珠粉溶于超纯水中，采用超声等现有技术使其完全溶解，以制得水溶性珍珠粉溶液；
b.将载体材料溶于溶剂中，以制得载体材料溶液；所述载体材料包括基料和辅料，所述基料与辅料的质量比为1:1-4:1；所述基料为聚乙烯醇或聚己内酯，所述辅料为海参胶原蛋白或壳聚糖；所述溶剂为六氟异丙醇、三氟乙酸、三氟乙醇中的任一种；所述载体材料溶液的浓度为5％-10％；
c.将步骤a和步骤b所得的溶液充分涡旋混合，使其充分溶解，制得纺丝溶液；纺丝溶液中水溶性珍珠粉的浓度为2-10％；
d.使用步骤c所获得纺丝溶液，采用静电纺丝的方法，制备获得生物活性敷料；静电纺丝所用溶剂为六氟异丙醇、三氟乙酸、三氟乙醇中的任一种。
b.将载体材料溶于溶剂中，以制得载体材料溶液；所述载体材料包括基料和辅料，所述基料与辅料的质量比为1:1-4:1；所述基料为聚乙烯醇或聚己内酯，所述辅料为海参胶原蛋白或壳聚糖；所述溶剂为六氟异丙醇、三氟乙酸、三氟乙醇中的任一种；所述载体材料溶液的浓度为5％-10％；
c.将步骤a和步骤b所得的溶液充分涡旋混合，使其充分溶解，制得纺丝溶液；纺丝溶液中水溶性珍珠粉的浓度为2-10％；
d.使用步骤c所获得纺丝溶液，采用静电纺丝的方法，制备获得生物活性敷料；静电纺丝所用溶剂为六氟异丙醇、三氟乙酸、三氟乙醇中的任一种。
[0030] 本发明中，所述海参胶原蛋白可采用任一现有技术实现，例如中国专利“200710159245.9、海参胶原、胶原蛋白的提取方法”制备的海参胶原蛋白。海参胶原蛋白（PSC）所含氨基酸种类齐全，具有典型胶原蛋白的组成。氨基酸总量达PSC的33.07%。其中，必需氨基酸总量达PSC的5.29%，占氨基酸总量的16%；鲜味氨基酸总量达PSC的19．04%;药效氨基酸总量达PSC的17．69%，这些成分中，具有促进伤口修复的功能因子，可与水溶性珍珠粉协效复配，在复合纤维膜中增强其创口的快速愈合、预防瘢痕形成的功效。
[0031] 进一步的，所述水溶性珍珠粉溶液的浓度为25-55mg/ml。
[0033] 本发明将和静电纺丝技术联合起来，辅以载体材料制备一种可以调节免疫微环境，具有抗炎作用，有利于创口的快速愈合，预防瘢痕形成，可发挥持久作用的新型生物敷料。
[0034] 特别的，本发明提供一种水溶性珍珠粉复合纤维膜用于创伤修复药物中的用途。
[0035] 静电纺丝技术制备的纤维膜具有很高的孔隙率及良好的透气性，即可使伤口保持理想的湿润程度，又有利于细胞的呼吸作用。在静电纺丝过程中将药物成分加入纺丝液中，可以得到复合了一些药物成分的纳米纤维，当纳米纤维降解或者遇到水溶胀后，可以将药物成分缓慢释放出来，这种方式不仅可以提高药物的药效，降低了药物的毒副作用。而同轴静电纺丝技术可以在纤维表面进行功能化修饰，同时也可以将功能材料包裹于纤维内部，以起到持久发挥功效的作用。
[0036] 本发明通过添加水溶性珍珠粉，利用静电纺丝技术，制备获得生物活性敷料，作为创面敷料，具有较大的比表面积和孔隙结构，很好的黏附支持细胞生长，可以提供天然仿生的类细胞外基质，具有抗炎作用，保护其不被伤口微环境降解失活，促进胶原蛋白和细胞因子的合成、分泌，极大改善胶原蛋白沉积，形成有序的篮筐编织样式排列，使之具备正常真皮的特征。本发明提供的方法操作方便，可重复性强，在创伤修复药物中有巨大的应用前景。
[0037] 本发明的水溶性珍珠粉复合纤维膜，采用海参胶原蛋白或壳聚糖作为载体，由于海参胶原蛋白或壳聚糖本身具有良好的功能活性，能够协效放大水溶性珍珠粉复合纤维膜的抗炎作用以及促进创口快速愈合的效果，使得其在创伤修复中的功效优于单独使用水溶性珍珠粉直接对伤口进行涂抹的功效。所述静电纺丝原料均可通过任一现有技术实现。
[0038] 本发明敷料制备方法简单易行，所制得的生物敷料伤口黏附良好，安全无毒，应用方便。具有生物活性的水溶性珍珠粉敷料在隔绝创面，透气性好的同时又有止血、抗菌、保湿，同时具有抗炎作用，有利于创口的快速愈合，预防瘢痕形成。附图说明
[0039] 图1 本发明一实施例的MMP液相色谱分析图；图2 本发明一实施例的MMP对止血活性测试结果图。
[0040]
具体实施方式
[0041] 下面将结合本发明实施例对本发明技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0042] 实施例1一种水溶性珍珠粉在促进伤口愈合的应用，其特征在于，所述水溶性珍珠粉具有修复皮肤创伤的新用途；
所述水溶性珍珠粉的制备方法包括以下步骤：
S1.预处理；将珍珠或珍珠层清洗、烘干和初步粉碎成200目以上粉末；
S2.酸法改性；按重量份数计，取珍珠粉80份，37%乳酸溶液20份，两组分混合后，保持温度为70℃不断搅拌，至混合体系pH达到5.0，且静止后无明显不溶物沉淀时，停止加热冷却至室温；
S3.酶法改性；将S2得到的液体进行酶解，酶解结束后，100℃灭酶10分钟，离心取上清液，冷冻干燥并粉碎至200目以上，得到水溶性珍珠粉（即为MPP）。
所述水溶性珍珠粉的制备方法包括以下步骤：
S1.预处理；将珍珠或珍珠层清洗、烘干和初步粉碎成200目以上粉末；
S2.酸法改性；按重量份数计，取珍珠粉80份，37%乳酸溶液20份，两组分混合后，保持温度为70℃不断搅拌，至混合体系pH达到5.0，且静止后无明显不溶物沉淀时，停止加热冷却至室温；
S3.酶法改性；将S2得到的液体进行酶解，酶解结束后，100℃灭酶10分钟，离心取上清液，冷冻干燥并粉碎至200目以上，得到水溶性珍珠粉（即为MPP）。
[0043] 进一步的，所述S3中，酶解选用的酶为角质蛋白酶、碱性蛋白酶两种复配，两种酶的添加量均为3200U/g蛋白，pH值9.5，酶解温度50℃，酶解时间5小时。
[0044] 进一步的，所述水溶性珍珠粉的平均分子量为2500Da-5000Da。
[0045] 本发明制备得到的水溶性珍珠粉，为白色粉末，水溶性好，总蛋白含量0.5-1.5 g/100g，其中水溶性多肽占总蛋白15-25%，小分子肽和氨基酸总量占75-95%，在常温下，测得
0.5%-15%的样液pH范围在3.8-5.0之间。
0.5%-15%的样液pH范围在3.8-5.0之间。
[0046] 进一步的，所述水溶性珍珠粉在促进伤口愈合的应用，包括以下步骤：（1）建立小鼠全层皮损创伤模型；
（2）对创伤模型的小鼠进行给药；
（3）对创伤修复效果进行功效评价，所述功效评价包括一级功效评价和二级功效评价；
所述一级功效评价包括止血活性评价、抗菌活性评价的的任一种或两种；所述二级功效评价为皮肤创伤愈合评价，所述皮肤创伤愈合评价包括伤口愈合率测定、掉痂时间测定、表皮生长因子测定、炎症因子测定、胶原蛋白生成分析中的任一种或几种的组合。
（2）对创伤模型的小鼠进行给药；
（3）对创伤修复效果进行功效评价，所述功效评价包括一级功效评价和二级功效评价；
所述一级功效评价包括止血活性评价、抗菌活性评价的的任一种或两种；所述二级功效评价为皮肤创伤愈合评价，所述皮肤创伤愈合评价包括伤口愈合率测定、掉痂时间测定、表皮生长因子测定、炎症因子测定、胶原蛋白生成分析中的任一种或几种的组合。
[0047] 进一步的，所述步骤（1）中，小鼠全层皮损创伤模型方法为：采用5-6周龄雄性小鼠按动物保健和处理程序进行饲养，腹腔注射350 mg/kg水合氯醛麻醉，背部皮肤脱毛消毒后，用直径8 mm打孔器在鼠背部打一个圆孔，切取全层皮肤，深至筋膜，每只动物分笼饲养。
[0048] 进一步的，所述步骤（2）中，给药的方式为：取水溶性珍珠粉200mg涂抹伤口，涂满为止，每天涂抹给药一次，采用无菌生理盐水为阴性对照组（即为NT），连续给药28天；阳性对照组（即为PC）采用同样方法。
[0049] 进一步的，所述止血活性评价采用小鼠断尾法测定，通过出血量和出血时间评价体表促凝血活性。具体为，取小鼠18只，体质量33-38 g，随机分为3组。分别为空白组、水溶性珍珠粉组和阳性对照组。将小鼠装进的特定容器中固定，露出尾巴，并使尾巴呈水平放置，在距尾端0.4 cm处用消毒手术剪截断，用消毒棉签轻轻蘸取药物包裹鼠尾断面，用消毒棉签蘸取1 g/kg剂量的方格星虫提取物或云南白药；空白组不予给药，开始计时,每隔约5 s用滤纸轻轻吸取血滴,不可挤压伤口, 滤纸不再粘有血迹为止，记下血液停止流出的时间。
[0050] 进一步的，所述抗菌活性评价的方法为：选用与感染相关的菌种，活化菌类并用灭完菌的生理盐水稀释，使菌落群数保持在108cfu/g，同时制作固体培养基，所述固体培养基可采用任一现有技术实现，比如固体培养基采用4.2%胰蛋白胨大豆琼脂（TSA），若检测弧菌，培养基中需另加3%NaCl，并灭菌，将稀释后的菌类和灭完菌培养基混匀后快速倒入无菌培养皿中，待其冷却凝固，打孔注入浓度为6%的样品溶液并做空白平行试验，于37℃培养箱培养16h，观察抗菌效果，并测量抑菌圈大小。
[0051] 进一步的，所述伤口愈合率测定和掉痂时间测定的方法为：所述步骤（2）中涂抹给药后，从第0天开始，每2天在同一固定高度拍照记录伤口创面情况，用软件计算伤口愈合率、记录掉痂时间；伤口愈合率测定的公式（1）为：，
公式中n是造模后天数。
公式中n是造模后天数。
[0052] 公式中n是造模后天数，单位：天。
[0053] 进一步的，所述步骤（3）中，所述步骤（3）中，所述表皮生长因子测定和炎症因子测定中涉及的因子包括TNF-a、IL-1β、TGF-β1、COL1A1(I型胶原蛋白) mRNA、TGF-β1、a-SMA、TGF-BRII、Smad7中的任两种或以上。
[0054] 进一步的，所述步骤（3）中，表皮生长因子测定、炎症因子测定采用实时荧光定量PCR分析(RT-PCR)。具体方法为：使用RNAIso Plus和匀浆器从伤口组织中提取总RNA。使用Prime ScriptTM RT reagent Kit with gDNA Eraser(Perfect Real Time)试剂盒进行逆转录合成cDNA，用TB GreenTM Premix Ex TaqTM II(Tli RNaseH Plus)(*2)试剂盒进行荧光定量。反应条件为：95℃30s，95℃5s，60℃30s，40个循环。每延伸一次，都进行实时荧光定量测量。用甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)作为内参基因，用于校正计算靶基因的表达水平，使用∆ ∆CT方法进行计算。第7天测定TNF-a、IL-1β和TGF-β1，第14、21和28天测定COL1A1(I型胶原蛋白)mRNA水平。
[0055] 进一步的，步骤（3）中，胶原蛋白生成分析采用胶原纤维透射电镜分析（TEM）。具体为：取造模后第21天的皮肤伤口组织放入2.5%戊二醛，于4℃固定过夜。将戊二醛固定后的组织，浸入PBS(0.1mol/L)中，漂洗3次，离心去上清，每次20 min，再用4℃预冷的1%锇酸，在4℃固定2-3 h，然后用PBS（0.1mol/L）浸洗3 次，每次20 min。按梯度30%、50%、70%、80%、
85%、90%、95%、100%乙醇脱水，每种浓度乙醇1次，每次15 min，再用100%乙醇彻底脱水2次，每次10 min。接着用丙酮：环氧树脂(2：1)、丙酮：环氧树脂(1：1)、环氧树脂，于37℃恒温箱依次进行渗透，每次12 h。接着包埋、固化和修块，用铅和铀双染色后，于200 KV加速电压和放大倍率5000观察拍照。使用ImageJ软件分析测量每个图像中每个胶原纤维的直径。
85%、90%、95%、100%乙醇脱水，每种浓度乙醇1次，每次15 min，再用100%乙醇彻底脱水2次，每次10 min。接着用丙酮：环氧树脂(2：1)、丙酮：环氧树脂(1：1)、环氧树脂，于37℃恒温箱依次进行渗透，每次12 h。接着包埋、固化和修块，用铅和铀双染色后，于200 KV加速电压和放大倍率5000观察拍照。使用ImageJ软件分析测量每个图像中每个胶原纤维的直径。
[0056] 本发明中，阳性对照组选用现有技术中的云南白药。所述云南白药为现有技术由云南白药集团股份有限公司生产的云南白药粉剂，国药准字Z53020798。
[0057] 进一步的，所述水溶性珍珠粉可制成包括粉末状、溶液状、乳状、膏状、凝胶状、复合纤维膜状的任一种产品。优选的，所述水溶性珍珠粉是通过预处理制得珍珠粉，依次通过酸法改性、酶法改性后，冷冻干燥制得的水溶性珍珠粉。
[0058] 本发明提供了一种水溶性珍珠粉在修复皮肤烧伤、创伤、灼伤、烫伤等皮肤创伤药物的新用途，其效果明显优于现有技术的药物，伤口修复快，且不留疤痕，其主要治疗作用包括止血、抗菌、抗炎、调节细胞因子、促进伤口愈合和抑制瘢痕形成等活性，促创伤修复效果更明显。
[0059] 实施例2一种水溶性珍珠粉在促进伤口愈合的应用，其特征在于，所述水溶性珍珠粉具有修复皮肤创伤的新用途；
所述水溶性珍珠粉的制备方法包括以下步骤：
S1.预处理；将珍珠或珍珠层清洗、烘干和初步粉碎成200目以上粉末；
S2.酸法改性；按重量份数计，取珍珠粉75份，32%乳酸溶液16份，两组分混合后，保持温度为55℃不断搅拌，至混合体系pH达到4.8，且静止后无明显不溶物沉淀时，停止加热冷却至室温；
S3.酶法改性；将S2得到的液体进行酶解，酶解结束后，100℃灭酶10分钟，离心取上清液，冷冻干燥并粉碎至200目以上，得到水溶性珍珠粉（即为MPP）。
所述水溶性珍珠粉的制备方法包括以下步骤：
S1.预处理；将珍珠或珍珠层清洗、烘干和初步粉碎成200目以上粉末；
S2.酸法改性；按重量份数计，取珍珠粉75份，32%乳酸溶液16份，两组分混合后，保持温度为55℃不断搅拌，至混合体系pH达到4.8，且静止后无明显不溶物沉淀时，停止加热冷却至室温；
S3.酶法改性；将S2得到的液体进行酶解，酶解结束后，100℃灭酶10分钟，离心取上清液，冷冻干燥并粉碎至200目以上，得到水溶性珍珠粉（即为MPP）。
[0060] 进一步的，所述S3中，酶解选用的酶为角质蛋白酶、中性蛋白酶两种复配，两种酶的添加量均为2200U/g蛋白，pH值8.0，酶解温度48℃，酶解时间3.5小时。
[0061] 进一步的，所述水溶性珍珠粉的平均分子量为2500Da-5000Da。
[0062] 进一步的，所述水溶性珍珠粉在促进伤口愈合的应用，包括以下步骤：（1）建立小鼠全层皮损创伤模型；
（2）对创伤模型的小鼠进行给药；
（3）对创伤修复效果进行功效评价，所述功效评价包括一级功效评价和二级功效评价；
所述一级功效评价包括止血活性评价、抗菌活性评价的的任一种或两种；所述二级功效评价为皮肤创伤愈合评价，所述皮肤创伤愈合评价包括伤口愈合率测定、掉痂时间测定、表皮生长因子测定、炎症因子测定、胶原蛋白生成分析中的任一种或几种的组合。
（2）对创伤模型的小鼠进行给药；
（3）对创伤修复效果进行功效评价，所述功效评价包括一级功效评价和二级功效评价；
所述一级功效评价包括止血活性评价、抗菌活性评价的的任一种或两种；所述二级功效评价为皮肤创伤愈合评价，所述皮肤创伤愈合评价包括伤口愈合率测定、掉痂时间测定、表皮生长因子测定、炎症因子测定、胶原蛋白生成分析中的任一种或几种的组合。
[0063] 进一步的，所述步骤（1）中，小鼠全层皮损创伤模型方法为：采用5-6周龄雄性小鼠按动物保健和处理程序进行饲养，腹腔注射350 mg/kg水合氯醛麻醉，背部皮肤脱毛消毒后，用直径8 mm打孔器在鼠背部打一个圆孔，切取全层皮肤，深至筋膜，每只动物分笼饲养。
[0064] 进一步的，所述步骤（2）中，给药的方式为：取水溶性珍珠粉55mg涂抹伤口，涂满为止，每天涂抹给药一次，采用无菌生理盐水为阴性对照组（即为NT），连续给药28天；阳性对照组（即为PC）采用同样方法。
[0065] 进一步的，所述止血活性评价采用与实施例1一致的小鼠断尾法测定。
[0066] 进一步的，所述抗菌活性评价的方法与实施例1一致。
[0067] 进一步的，所述伤口愈合率测定和掉痂时间测定的方法与实施例1一致。
[0068] 进一步的，所述步骤（3）中，所述步骤（3）中，所述表皮生长因子测定和炎症因子测定中涉及的因子包括TNF-a、IL-1β、TGF-β1、COL1A1(I型胶原蛋白) mRNA、TGF-β1、a-SMA、TGF-BRII、Smad7中的任两种或以上。
[0069] 进一步的，所述步骤（3）中，表皮生长因子测定、炎症因子测定采用实时荧光定量PCR分析(RT-PCR)，具体的测定方法与实施例1一致。
[0070] 进一步的，步骤（3）中，胶原蛋白生成分析采用胶原纤维透射电镜分析（TEM），具体的测定方法与实施例1一致。
[0071] 本发明中，阳性对照组选用现有技术中的云南白药。所述云南白药为现有技术由云南白药集团股份有限公司生产的云南白药粉剂，国药准字Z53020798。
[0072] 进一步的，所述水溶性珍珠粉可制成包括粉末状、溶液状、乳状、膏状、凝胶状、复合纤维膜状的任一种产品。优选的，所述水溶性珍珠粉是通过预处理制得珍珠粉，依次通过酸法改性、酶法改性后，冷冻干燥制得的水溶性珍珠粉。
[0073] 本发明提供了一种水溶性珍珠粉在修复皮肤烧伤、创伤、灼伤、烫伤等皮肤创伤药物的新用途，其效果明显优于现有技术的药物，伤口修复快，且不留疤痕，其主要治疗作用包括止血、抗菌、抗炎、调节细胞因子、促进伤口愈合和抑制瘢痕形成等活性，促创伤修复效果更明显。
[0074] 实施例3一种水溶性珍珠粉在促进伤口愈合的应用，其特征在于，所述水溶性珍珠粉具有修复皮肤创伤的新用途；
所述水溶性珍珠粉的制备方法包括以下步骤：
S1.预处理；将珍珠或珍珠层清洗、烘干和初步粉碎成200目以上粉末；
S2.酸法改性；按重量份数计，取珍珠粉85份，45%乳酸溶液24份，两组分混合后，保持温度为80℃不断搅拌，至混合体系pH达到5.4，且静止后无明显不溶物沉淀时，停止加热冷却至室温；
S3.酶法改性；将S2得到的液体进行酶解，酶解结束后，100℃灭酶10分钟，离心取上清液，冷冻干燥并粉碎至200目以上，得到水溶性珍珠粉（即为MPP）。
所述水溶性珍珠粉的制备方法包括以下步骤：
S1.预处理；将珍珠或珍珠层清洗、烘干和初步粉碎成200目以上粉末；
S2.酸法改性；按重量份数计，取珍珠粉85份，45%乳酸溶液24份，两组分混合后，保持温度为80℃不断搅拌，至混合体系pH达到5.4，且静止后无明显不溶物沉淀时，停止加热冷却至室温；
S3.酶法改性；将S2得到的液体进行酶解，酶解结束后，100℃灭酶10分钟，离心取上清液，冷冻干燥并粉碎至200目以上，得到水溶性珍珠粉（即为MPP）。
[0075] 进一步的，所述S3中，酶解选用的酶为角质蛋白酶、动物蛋白酶两种复配，两种酶的添加量均为2600U/g蛋白，pH值7.5，酶解温度53℃，酶解时间4.5小时。
[0076] 进一步的，所述水溶性珍珠粉的平均分子量为2500Da-5000Da。
[0077] 进一步的，所述水溶性珍珠粉在促进伤口愈合的应用，包括以下步骤：（1）建立小鼠全层皮损创伤模型；
（2）对创伤模型的小鼠进行给药；
（3）对创伤修复效果进行功效评价，所述功效评价包括一级功效评价和二级功效评价；
所述一级功效评价包括止血活性评价、抗菌活性评价的的任一种或两种；所述二级功效评价为皮肤创伤愈合评价，所述皮肤创伤愈合评价包括伤口愈合率测定、掉痂时间测定、表皮生长因子测定、炎症因子测定、胶原蛋白生成分析中的任一种或几种的组合。
（2）对创伤模型的小鼠进行给药；
（3）对创伤修复效果进行功效评价，所述功效评价包括一级功效评价和二级功效评价；
所述一级功效评价包括止血活性评价、抗菌活性评价的的任一种或两种；所述二级功效评价为皮肤创伤愈合评价，所述皮肤创伤愈合评价包括伤口愈合率测定、掉痂时间测定、表皮生长因子测定、炎症因子测定、胶原蛋白生成分析中的任一种或几种的组合。
[0078] 进一步的，所述步骤（1）中，小鼠全层皮损创伤模型方法为：采用5-6周龄雄性小鼠按动物保健和处理程序进行饲养，腹腔注射350 mg/kg水合氯醛麻醉，背部皮肤脱毛消毒后，用直径8 mm打孔器在鼠背部打一个圆孔，切取全层皮肤，深至筋膜，每只动物分笼饲养。
[0079] 进一步的，所述步骤（2）中，给药的方式为：取水溶性珍珠粉100mg涂抹伤口，涂满为止，每天涂抹给药一次，采用无菌生理盐水为阴性对照组（即为NT），连续给药28天；阳性对照组（即为PC）采用同样方法。
[0080] 进一步的，所述止血活性评价采用与实施例1一致的小鼠断尾法测定。
[0081] 进一步的，所述抗菌活性评价的方法与实施例1一致。
[0082] 进一步的，所述伤口愈合率测定和掉痂时间测定的方法与实施例1一致。
[0083] 进一步的，所述步骤（3）中，所述步骤（3）中，所述表皮生长因子测定和炎症因子测定中涉及的因子包括TNF-a、IL-1β、TGF-β1、COL1A1(I型胶原蛋白) mRNA、TGF-β1、a-SMA、TGF-BRII、Smad7中的任两种或以上。
[0084] 进一步的，所述步骤（3）中，表皮生长因子测定、炎症因子测定采用实时荧光定量PCR分析(RT-PCR)，具体的测定方法与实施例1一致。
[0085] 进一步的，步骤（3）中，胶原蛋白生成分析采用胶原纤维透射电镜分析（TEM），具体的测定方法与实施例1一致。
[0086] 本发明中，阳性对照组选用现有技术中的云南白药。所述云南白药为现有技术由云南白药集团股份有限公司生产的云南白药粉剂，国药准字Z53020798。
[0087] 进一步的，所述水溶性珍珠粉可制成包括粉末状、溶液状、乳状、膏状、凝胶状、复合纤维膜状的任一种产品。优选的，所述水溶性珍珠粉是通过预处理制得珍珠粉，依次通过酸法改性、酶法改性后，冷冻干燥制得的水溶性珍珠粉。
[0088] 本发明提供了一种水溶性珍珠粉在修复皮肤烧伤、创伤、灼伤、烫伤等皮肤创伤药物的新用途，其效果明显优于现有技术的药物，伤口修复快，且不留疤痕，其主要治疗作用包括止血、抗菌、抗炎、调节细胞因子、促进伤口愈合和抑制瘢痕形成等活性，促创伤修复效果更明显。
[0089] 实施例4一种水溶性珍珠粉在促进伤口愈合的应用，其特征在于，所述水溶性珍珠粉具有修复皮肤创伤的新用途；
所述水溶性珍珠粉的制备方法包括以下步骤：
S1.预处理；将珍珠或珍珠层清洗、烘干和初步粉碎成200目以上粉末；
S2.酸法改性；按重量份数计，取珍珠粉78份，43%乳酸溶液14份，两组分混合后，保持温度为65℃不断搅拌，至混合体系pH达到5.8，且静止后无明显不溶物沉淀时，停止加热冷却至室温；
S3.酶法改性；将S2得到的液体进行酶解，酶解结束后，100℃灭酶10分钟，离心取上清液，冷冻干燥并粉碎至200目以上，得到水溶性珍珠粉（即为MPP）。
所述水溶性珍珠粉的制备方法包括以下步骤：
S1.预处理；将珍珠或珍珠层清洗、烘干和初步粉碎成200目以上粉末；
S2.酸法改性；按重量份数计，取珍珠粉78份，43%乳酸溶液14份，两组分混合后，保持温度为65℃不断搅拌，至混合体系pH达到5.8，且静止后无明显不溶物沉淀时，停止加热冷却至室温；
S3.酶法改性；将S2得到的液体进行酶解，酶解结束后，100℃灭酶10分钟，离心取上清液，冷冻干燥并粉碎至200目以上，得到水溶性珍珠粉（即为MPP）。
[0090] 进一步的，所述S3中，酶解选用的酶为中性蛋白酶、风味蛋白酶两种复配，两种酶的添加量均为3000U/g蛋白，pH值7.0，酶解温度50℃，酶解时间5小时。
[0091] 进一步的，所述水溶性珍珠粉的平均分子量为2500Da-5000Da。
[0092] 进一步的，所述水溶性珍珠粉在促进伤口愈合的应用，包括以下步骤：（1）建立小鼠全层皮损创伤模型；
（2）对创伤模型的小鼠进行给药；
（3）对创伤修复效果进行功效评价，所述功效评价包括一级功效评价和二级功效评价；
所述一级功效评价包括止血活性评价、抗菌活性评价的的任一种或两种；所述二级功效评价为皮肤创伤愈合评价，所述皮肤创伤愈合评价包括伤口愈合率测定、掉痂时间测定、表皮生长因子测定、炎症因子测定、胶原蛋白生成分析中的任一种或几种的组合。
（2）对创伤模型的小鼠进行给药；
（3）对创伤修复效果进行功效评价，所述功效评价包括一级功效评价和二级功效评价；
所述一级功效评价包括止血活性评价、抗菌活性评价的的任一种或两种；所述二级功效评价为皮肤创伤愈合评价，所述皮肤创伤愈合评价包括伤口愈合率测定、掉痂时间测定、表皮生长因子测定、炎症因子测定、胶原蛋白生成分析中的任一种或几种的组合。
[0093] 进一步的，所述步骤（1）中，小鼠全层皮损创伤模型方法为：采用5-6周龄雄性小鼠按动物保健和处理程序进行饲养，腹腔注射350 mg/kg水合氯醛麻醉，背部皮肤脱毛消毒后，用直径8 mm打孔器在鼠背部打一个圆孔，切取全层皮肤，深至筋膜，每只动物分笼饲养。
[0094] 进一步的，所述步骤（2）中，给药的方式为：取水溶性珍珠粉150mg涂抹伤口，涂满为止，每天涂抹给药一次，采用无菌生理盐水为阴性对照组（即为NT），连续给药28天；阳性对照组（即为PC）采用同样方法。
[0095] 进一步的，所述止血活性评价采用与实施例1一致的小鼠断尾法测定。
[0096] 进一步的，所述抗菌活性评价的方法与实施例1一致。
[0097] 进一步的，所述伤口愈合率测定和掉痂时间测定的方法与实施例1一致。
[0098] 进一步的，所述步骤（3）中，所述步骤（3）中，所述表皮生长因子测定和炎症因子测定中涉及的因子包括TNF-a、IL-1β、TGF-β1、COL1A1(I型胶原蛋白) mRNA、TGF-β1、a-SMA、TGF-BRII、Smad7中的任两种或以上。
[0099] 进一步的，所述步骤（3）中，表皮生长因子测定、炎症因子测定采用实时荧光定量PCR分析(RT-PCR)，具体的测定方法与实施例1一致。
[0100] 进一步的，步骤（3）中，胶原蛋白生成分析采用胶原纤维透射电镜分析（TEM），具体的测定方法与实施例1一致。
[0101] 本发明中，阳性对照组可选用现有技术中京万红软膏。所述京万红软膏为现有技术天津达仁堂京万红药业有限公司生产的京万红软膏，国药准字Z12020440。
[0102] 进一步的，所述水溶性珍珠粉可制成包括粉末状、溶液状、乳状、膏状、凝胶状、复合纤维膜状的任一种产品。优选的，所述水溶性珍珠粉是通过预处理制得珍珠粉，依次通过酸法改性、酶法改性后，冷冻干燥制得的水溶性珍珠粉。
[0103] 本发明提供了一种水溶性珍珠粉在修复皮肤烧伤、创伤、灼伤、烫伤等皮肤创伤药物的新用途，其效果明显优于现有技术的药物，伤口修复快，且不留疤痕，其主要治疗作用包括止血、抗菌、抗炎、调节细胞因子、促进伤口愈合和抑制瘢痕形成等活性，促创伤修复效果更明显。
[0104] 实施例5一种水溶性珍珠粉在促进伤口愈合的应用，其特征在于，所述水溶性珍珠粉具有修复皮肤创伤的新用途；
所述水溶性珍珠粉的制备方法包括以下步骤：
S1.预处理；将珍珠或珍珠层清洗、烘干和初步粉碎成200目以上粉末；
S2.酸法改性；按重量份数计，取珍珠粉70份，25%乳酸溶液10份，两组分混合后，保持温度为40℃不断搅拌，至混合体系pH达到4.6，且静止后无明显不溶物沉淀时，停止加热冷却至室温；
S3.酶法改性；将S2得到的液体进行酶解，酶解结束后，100℃灭酶10分钟，离心取上清液，冷冻干燥并粉碎至200目以上，得到水溶性珍珠粉（即为MPP）。
所述水溶性珍珠粉的制备方法包括以下步骤：
S1.预处理；将珍珠或珍珠层清洗、烘干和初步粉碎成200目以上粉末；
S2.酸法改性；按重量份数计，取珍珠粉70份，25%乳酸溶液10份，两组分混合后，保持温度为40℃不断搅拌，至混合体系pH达到4.6，且静止后无明显不溶物沉淀时，停止加热冷却至室温；
S3.酶法改性；将S2得到的液体进行酶解，酶解结束后，100℃灭酶10分钟，离心取上清液，冷冻干燥并粉碎至200目以上，得到水溶性珍珠粉（即为MPP）。
[0105] 进一步的，所述S3中，酶解选用的酶为动物蛋白酶、碱性蛋白酶两种复配，两种酶的添加量均为3400U/g蛋白，pH值9.0，酶解温度52℃，酶解时间5.5小时。
[0106] 进一步的，所述水溶性珍珠粉的平均分子量为2500Da-5000Da。
[0107] 进一步的，所述水溶性珍珠粉在促进伤口愈合的应用，包括以下步骤：（1）建立小鼠全层皮损创伤模型；
（2）对创伤模型的小鼠进行给药；
（3）对创伤修复效果进行功效评价，所述功效评价包括一级功效评价和二级功效评价；
所述一级功效评价包括止血活性评价、抗菌活性评价的的任一种或两种；所述二级功效评价为皮肤创伤愈合评价，所述皮肤创伤愈合评价包括伤口愈合率测定、掉痂时间测定、表皮生长因子测定、炎症因子测定、胶原蛋白生成分析中的任一种或几种的组合。
（2）对创伤模型的小鼠进行给药；
（3）对创伤修复效果进行功效评价，所述功效评价包括一级功效评价和二级功效评价；
所述一级功效评价包括止血活性评价、抗菌活性评价的的任一种或两种；所述二级功效评价为皮肤创伤愈合评价，所述皮肤创伤愈合评价包括伤口愈合率测定、掉痂时间测定、表皮生长因子测定、炎症因子测定、胶原蛋白生成分析中的任一种或几种的组合。
[0108] 进一步的，所述步骤（1）中，小鼠全层皮损创伤模型方法为：采用5-6周龄雄性小鼠按动物保健和处理程序进行饲养，腹腔注射350 mg/kg水合氯醛麻醉，背部皮肤脱毛消毒后，用直径8 mm打孔器在鼠背部打一个圆孔，切取全层皮肤，深至筋膜，每只动物分笼饲养。
[0109] 进一步的，所述步骤（2）中，给药的方式为：取水溶性珍珠粉250mg涂抹伤口，涂满为止，每天涂抹给药一次，采用无菌生理盐水为阴性对照组（即为NT），连续给药28天；阳性对照组（即为PC）采用同样方法。
[0110] 进一步的，所述止血活性评价采用与实施例1一致的小鼠断尾法测定。
[0111] 进一步的，所述抗菌活性评价的方法与实施例1一致。
[0112] 进一步的，所述伤口愈合率测定和掉痂时间测定的方法与实施例1一致。
[0113] 进一步的，所述步骤（3）中，所述步骤（3）中，所述表皮生长因子测定和炎症因子测定中涉及的因子包括TNF-a、IL-1β、TGF-β1、COL1A1(I型胶原蛋白) mRNA、TGF-β1、a-SMA、TGF-BRII、Smad7中的任两种或以上。
[0114] 进一步的，所述步骤（3）中，表皮生长因子测定、炎症因子测定采用实时荧光定量PCR分析(RT-PCR)，具体的测定方法与实施例1一致。
[0115] 进一步的，步骤（3）中，胶原蛋白生成分析采用胶原纤维透射电镜分析（TEM），具体的测定方法与实施例1一致。
[0116] 本发明中，阳性对照组可选用现有技术中京万红软膏。所述京万红软膏为现有技术天津达仁堂京万红药业有限公司生产的京万红软膏，国药准字Z12020440。
[0117] 进一步的，所述水溶性珍珠粉可制成包括粉末状、溶液状、乳状、膏状、凝胶状、复合纤维膜状的任一种产品。优选的，所述水溶性珍珠粉是通过预处理制得珍珠粉，依次通过酸法改性、酶法改性后，冷冻干燥制得的水溶性珍珠粉。
[0118] 本发明提供了一种水溶性珍珠粉在修复皮肤烧伤、创伤、灼伤、烫伤等皮肤创伤药物的新用途，其效果明显优于现有技术的药物，伤口修复快，且不留疤痕，其主要治疗作用包括止血、抗菌、抗炎、调节细胞因子、促进伤口愈合和抑制瘢痕形成等活性，促创伤修复效果更明显。
[0119] 实施例6一种水溶性珍珠粉在促进伤口愈合的应用，其特征在于，所述水溶性珍珠粉具有修复皮肤创伤的新用途；
所述水溶性珍珠粉的制备方法包括以下步骤：
S1.预处理；将珍珠或珍珠层清洗、烘干和初步粉碎成200目以上粉末；
S2.酸法改性；按重量份数计，取珍珠粉90份，50%乳酸溶液30份，两组分混合后，保持温度为90℃不断搅拌，至混合体系pH达到6.5，且静止后无明显不溶物沉淀时，停止加热冷却至室温；
S3.酶法改性；将S2得到的液体进行酶解，酶解结束后，100℃灭酶10分钟，离心取上清液，冷冻干燥并粉碎至200目以上，得到水溶性珍珠粉（即为MPP）。
所述水溶性珍珠粉的制备方法包括以下步骤：
S1.预处理；将珍珠或珍珠层清洗、烘干和初步粉碎成200目以上粉末；
S2.酸法改性；按重量份数计，取珍珠粉90份，50%乳酸溶液30份，两组分混合后，保持温度为90℃不断搅拌，至混合体系pH达到6.5，且静止后无明显不溶物沉淀时，停止加热冷却至室温；
S3.酶法改性；将S2得到的液体进行酶解，酶解结束后，100℃灭酶10分钟，离心取上清液，冷冻干燥并粉碎至200目以上，得到水溶性珍珠粉（即为MPP）。
[0120] 进一步的，所述S3中，酶解选用的酶为中性蛋白酶、木瓜蛋白酶两种复配，两种酶的添加量均为3800U/g蛋白，pH值6.5，酶解温度55℃，酶解时间4.8小时。
[0121] 进一步的，所述水溶性珍珠粉的平均分子量为2500Da-5000Da。
[0122] 进一步的，所述水溶性珍珠粉在促进伤口愈合的应用，包括以下步骤：（1）建立小鼠全层皮损创伤模型；
（2）对创伤模型的小鼠进行给药；
（3）对创伤修复效果进行功效评价，所述功效评价包括一级功效评价和二级功效评价；
所述一级功效评价包括止血活性评价、抗菌活性评价的的任一种或两种；所述二级功效评价为皮肤创伤愈合评价，所述皮肤创伤愈合评价包括伤口愈合率测定、掉痂时间测定、表皮生长因子测定、炎症因子测定、胶原蛋白生成分析中的任一种或几种的组合。
（2）对创伤模型的小鼠进行给药；
（3）对创伤修复效果进行功效评价，所述功效评价包括一级功效评价和二级功效评价；
所述一级功效评价包括止血活性评价、抗菌活性评价的的任一种或两种；所述二级功效评价为皮肤创伤愈合评价，所述皮肤创伤愈合评价包括伤口愈合率测定、掉痂时间测定、表皮生长因子测定、炎症因子测定、胶原蛋白生成分析中的任一种或几种的组合。
[0123] 进一步的，所述步骤（1）中，小鼠全层皮损创伤模型方法为：采用5-6周龄雄性小鼠按动物保健和处理程序进行饲养，腹腔注射350 mg/kg水合氯醛麻醉，背部皮肤脱毛消毒后，用直径8 mm打孔器在鼠背部打一个圆孔，切取全层皮肤，深至筋膜，每只动物分笼饲养。
[0124] 进一步的，所述步骤（2）中，给药的方式为：取水溶性珍珠粉300mg涂抹伤口，涂满为止，每天涂抹给药一次，采用无菌生理盐水为阴性对照组（即为NT），连续给药28天；阳性对照组（即为PC）采用同样方法。
[0125] 进一步的，所述止血活性评价采用与实施例1一致的小鼠断尾法测定。
[0126] 进一步的，所述抗菌活性评价的方法与实施例1一致。
[0127] 进一步的，所述伤口愈合率测定和掉痂时间测定的方法与实施例1一致。
[0128] 进一步的，所述步骤（3）中，所述步骤（3）中，所述表皮生长因子测定和炎症因子测定中涉及的因子包括TNF-a、IL-1β、TGF-β1、COL1A1(I型胶原蛋白) mRNA、TGF-β1、a-SMA、TGF-BRII、Smad7中的任两种或以上。
[0129] 进一步的，所述步骤（3）中，表皮生长因子测定、炎症因子测定采用实时荧光定量PCR分析(RT-PCR)，具体的测定方法与实施例1一致。
[0130] 进一步的，步骤（3）中，胶原蛋白生成分析采用胶原纤维透射电镜分析（TEM），具体的测定方法与实施例1一致。
[0131] 本发明中，阳性对照组可选用现有技术中银锌抑菌霜，所述银锌抑菌霜为现有技术河南汇博医疗股份有限公司生产的邦尔康银锌抑菌霜，注册证号（豫）卫消证字（2004）第0056号。
[0132] 进一步的，所述水溶性珍珠粉可制成包括粉末状、溶液状、乳状、膏状、凝胶状、复合纤维膜状的任一种产品。优选的，所述水溶性珍珠粉是通过预处理制得珍珠粉，依次通过酸法改性、酶法改性后，冷冻干燥制得的水溶性珍珠粉。
[0133] 本发明提供了一种水溶性珍珠粉在修复皮肤烧伤、创伤、灼伤、烫伤等皮肤创伤药物的新用途，其效果明显优于现有技术的药物，伤口修复快，且不留疤痕，其主要治疗作用包括止血、抗菌、抗炎、调节细胞因子、促进伤口愈合和抑制瘢痕形成等活性，促创伤修复效果更明显。
[0134] 实施例7一种水溶性珍珠粉在促进伤口愈合的应用，其特征在于，所述水溶性珍珠粉具有修复皮肤创伤的新用途；
所述水溶性珍珠粉的制备方法包括以下步骤：
S1.预处理；将珍珠或珍珠层清洗、烘干和初步粉碎成200目以上粉末；
S2.酸法改性；按重量份数计，取珍珠粉82份，28%乳酸溶液19份，两组分混合后，保持温度为75℃不断搅拌，至混合体系pH达到6.0，且静止后无明显不溶物沉淀时，停止加热冷却至室温；
S3.酶法改性；将S2得到的液体进行酶解，酶解结束后，100℃灭酶10分钟，离心取上清液，冷冻干燥并粉碎至200目以上，得到水溶性珍珠粉（即为MPP）。
所述水溶性珍珠粉的制备方法包括以下步骤：
S1.预处理；将珍珠或珍珠层清洗、烘干和初步粉碎成200目以上粉末；
S2.酸法改性；按重量份数计，取珍珠粉82份，28%乳酸溶液19份，两组分混合后，保持温度为75℃不断搅拌，至混合体系pH达到6.0，且静止后无明显不溶物沉淀时，停止加热冷却至室温；
S3.酶法改性；将S2得到的液体进行酶解，酶解结束后，100℃灭酶10分钟，离心取上清液，冷冻干燥并粉碎至200目以上，得到水溶性珍珠粉（即为MPP）。
[0135] 进一步的，所述S3中，酶解选用的酶为动物蛋白酶、风味蛋白酶两种复配，两种酶的添加量均为4200U/g蛋白，pH值6.0，酶解温度47℃，酶解时间5小时。
[0136] 进一步的，所述水溶性珍珠粉的平均分子量为2500Da-5000Da。
[0137] 进一步的，所述水溶性珍珠粉在促进伤口愈合的应用，包括以下步骤：（1）建立小鼠全层皮损创伤模型；
（2）对创伤模型的小鼠进行给药；
（3）对创伤修复效果进行功效评价，所述功效评价包括一级功效评价和二级功效评价；
所述一级功效评价包括止血活性评价、抗菌活性评价的的任一种或两种；所述二级功效评价为皮肤创伤愈合评价，所述皮肤创伤愈合评价包括伤口愈合率测定、掉痂时间测定、表皮生长因子测定、炎症因子测定、胶原蛋白生成分析中的任一种或几种的组合。
（2）对创伤模型的小鼠进行给药；
（3）对创伤修复效果进行功效评价，所述功效评价包括一级功效评价和二级功效评价；
所述一级功效评价包括止血活性评价、抗菌活性评价的的任一种或两种；所述二级功效评价为皮肤创伤愈合评价，所述皮肤创伤愈合评价包括伤口愈合率测定、掉痂时间测定、表皮生长因子测定、炎症因子测定、胶原蛋白生成分析中的任一种或几种的组合。
[0138] 进一步的，所述步骤（1）中，小鼠全层皮损创伤模型方法为：采用5-6周龄雄性小鼠按动物保健和处理程序进行饲养，腹腔注射350 mg/kg水合氯醛麻醉，背部皮肤脱毛消毒后，用直径8 mm打孔器在鼠背部打一个圆孔，切取全层皮肤，深至筋膜，每只动物分笼饲养。
[0139] 进一步的，所述步骤（2）中，给药的方式为：取水溶性珍珠粉50-500mg涂抹伤口，涂满为止，每天涂抹给药一次，采用无菌生理盐水为阴性对照组（即为NT），连续给药28天；阳性对照组（即为PC）采用同样方法。
[0140] 进一步的，所述止血活性评价采用与实施例1一致的小鼠断尾法测定。
[0141] 进一步的，所述抗菌活性评价的方法与实施例1一致。
[0142] 进一步的，所述伤口愈合率测定和掉痂时间测定的方法与实施例1一致。
[0143] 进一步的，所述步骤（3）中，所述步骤（3）中，所述表皮生长因子测定和炎症因子测定中涉及的因子包括TNF-a、IL-1β、TGF-β1、COL1A1(I型胶原蛋白) mRNA、TGF-β1、a-SMA、TGF-BRII、Smad7中的任两种或以上。
[0144] 进一步的，所述步骤（3）中，表皮生长因子测定、炎症因子测定采用实时荧光定量PCR分析(RT-PCR)，具体的测定方法与实施例1一致。
[0145] 进一步的，步骤（3）中，胶原蛋白生成分析采用胶原纤维透射电镜分析（TEM），具体的测定方法与实施例1一致。
[0146] 本发明中，阳性对照组可选用现有技术中银锌抑菌霜，所述银锌抑菌霜为现有技术河南汇博医疗股份有限公司生产的邦尔康银锌抑菌霜，注册证号（豫）卫消证字（2004）第0056号。
[0147] 进一步的，所述水溶性珍珠粉可制成包括粉末状、溶液状、乳状、膏状、凝胶状、复合纤维膜状的任一种产品。优选的，所述水溶性珍珠粉是通过预处理制得珍珠粉，依次通过酸法改性、酶法改性后，冷冻干燥制得的水溶性珍珠粉。
[0148] 本发明提供了一种水溶性珍珠粉在修复皮肤烧伤、创伤、灼伤、烫伤等皮肤创伤药物的新用途，其效果明显优于现有技术的药物，伤口修复快，且不留疤痕，其主要治疗作用包括止血、抗菌、抗炎、调节细胞因子、促进伤口愈合和抑制瘢痕形成等活性，促创伤修复效果更明显。
[0149] 实施例8本实施例中，将实施例1-7任一制备的水溶性珍珠粉可制成复合纤维膜状产品。优选的，所述水溶性珍珠粉是通过预处理制得珍珠粉，依次通过酸法改性、酶法改性后，冷冻干燥制得的水溶性珍珠粉。
[0150] 进一步的，所述复合纤维膜状产品为通过静电纺丝技术制得的静电纺丝复合纤维膜，所述的制备方法为：a.将水溶性珍珠粉溶于超纯水中，采用超声等现有技术使其完全溶解，以制得水溶性珍珠粉溶液；
b.将载体材料溶于溶剂中，以制得载体材料溶液；所述载体材料包括基料和辅料，所述基料与辅料的质量比为3:2；所述基料为聚乙烯醇，所述辅料为海参胶原蛋白；所述溶剂为三氟乙醇；所述载体材料溶液的浓度为8％；
c.将步骤a和步骤b所得的溶液充分涡旋混合，使其充分溶解，制得纺丝溶液；纺丝溶液中水溶性珍珠粉的浓度为7％；
d.使用步骤c所获得纺丝溶液，采用静电纺丝的方法，制备获得生物活性敷料；静电纺丝所用溶剂为六氟异丙醇。
b.将载体材料溶于溶剂中，以制得载体材料溶液；所述载体材料包括基料和辅料，所述基料与辅料的质量比为3:2；所述基料为聚乙烯醇，所述辅料为海参胶原蛋白；所述溶剂为三氟乙醇；所述载体材料溶液的浓度为8％；
c.将步骤a和步骤b所得的溶液充分涡旋混合，使其充分溶解，制得纺丝溶液；纺丝溶液中水溶性珍珠粉的浓度为7％；
d.使用步骤c所获得纺丝溶液，采用静电纺丝的方法，制备获得生物活性敷料；静电纺丝所用溶剂为六氟异丙醇。
[0151] 本发明中，所述海参胶原蛋白可采用任一现有技术实现，例如中国专利“200710159245.9、海参胶原、胶原蛋白的提取方法”制备的海参胶原蛋白。海参胶原蛋白（PSC）所含氨基酸种类齐全，具有典型胶原蛋白的组成。氨基酸总量达PSC的33.07%。其中，必需氨基酸总量达PSC的5.29%，占氨基酸总量的16%；鲜味氨基酸总量达PSC的19．04%;药效氨基酸总量达PSC的17．69%，这些成分中，具有促进伤口修复的功能因子，可与水溶性珍珠粉协效复配，在复合纤维膜中增强其创口的快速愈合、预防瘢痕形成的功效。
[0152] 进一步的，所述水溶性珍珠粉溶液的浓度为45mg/ml。
[0153] 进一步的，步骤d中静电纺丝电压为22kV，注射器针头与接收板之间的距离可为12cm，注射泵的推进速度可为0.1mL/min，纺丝环境温度可为37℃。
[0154] 本发明将和静电纺丝技术联合起来，辅以载体材料制备一种可以调节免疫微环境，具有抗炎作用，有利于创口的快速愈合，预防瘢痕形成，可发挥持久作用的新型生物敷料。
[0155] 特别的，本发明提供一种水溶性珍珠粉复合纤维膜用于创伤修复药物中的用途。
[0156] 本发明敷料制备方法简单易行，所制得的生物敷料伤口黏附良好，安全无毒，应用方便。具有生物活性的水溶性珍珠粉敷料在隔绝创面，透气性好的同时又有止血、抗菌、保湿，同时具有抗炎作用，有利于创口的快速愈合，预防瘢痕形成。
[0157] 实施例9本实施例中，将实施例1-7任一制备的水溶性珍珠粉可制成复合纤维膜状产品。优选的，所述水溶性珍珠粉是通过预处理制得珍珠粉，依次通过酸法改性、酶法改性后，冷冻干燥制得的水溶性珍珠粉。
[0158] 进一步的，所述复合纤维膜状产品为通过静电纺丝技术制得的静电纺丝复合纤维膜，所述的制备方法为：a.将水溶性珍珠粉溶于超纯水中，采用超声等现有技术使其完全溶解，以制得水溶性珍珠粉溶液；
b.将载体材料溶于溶剂中，以制得载体材料溶液；所述载体材料包括基料和辅料，所述基料与辅料的质量比为1:1；所述基料为聚乙烯醇，所述辅料为壳聚糖；所述溶剂为六氟异丙醇；所述载体材料溶液的浓度为5％；
c.将步骤a和步骤b所得的溶液充分涡旋混合，使其充分溶解，制得纺丝溶液；纺丝溶液中水溶性珍珠粉的浓度为2%；
d.使用步骤c所获得纺丝溶液，采用静电纺丝的方法，制备获得生物活性敷料；静电纺丝所用溶剂为六氟异丙醇。
b.将载体材料溶于溶剂中，以制得载体材料溶液；所述载体材料包括基料和辅料，所述基料与辅料的质量比为1:1；所述基料为聚乙烯醇，所述辅料为壳聚糖；所述溶剂为六氟异丙醇；所述载体材料溶液的浓度为5％；
c.将步骤a和步骤b所得的溶液充分涡旋混合，使其充分溶解，制得纺丝溶液；纺丝溶液中水溶性珍珠粉的浓度为2%；
d.使用步骤c所获得纺丝溶液，采用静电纺丝的方法，制备获得生物活性敷料；静电纺丝所用溶剂为六氟异丙醇。
[0159] 进一步的，所述水溶性珍珠粉溶液的浓度为25mg/ml。
[0160] 进一步的，步骤d中静电纺丝电压为15kV，注射器针头与接收板之间的距离可为10cm，注射泵的推进速度可为0.05mL/min，纺丝环境温度可为35℃。
[0161] 本发明将和静电纺丝技术联合起来，辅以载体材料制备一种可以调节免疫微环境，具有抗炎作用，有利于创口的快速愈合，预防瘢痕形成，可发挥持久作用的新型生物敷料。
[0162] 特别的，本发明提供一种水溶性珍珠粉复合纤维膜用于创伤修复药物中的用途。
[0163] 本发明敷料制备方法简单易行，所制得的生物敷料伤口黏附良好，安全无毒，应用方便。具有生物活性的水溶性珍珠粉敷料在隔绝创面，透气性好的同时又有止血、抗菌、保湿，同时具有抗炎作用，有利于创口的快速愈合，预防瘢痕形成。
[0164] 实施例10本实施例中，将实施例1-7任一制备的水溶性珍珠粉可制成复合纤维膜状产品。优选的，所述水溶性珍珠粉是通过预处理制得珍珠粉，依次通过酸法改性、酶法改性后，冷冻干燥制得的水溶性珍珠粉。
[0165] 进一步的，所述复合纤维膜状产品为通过静电纺丝技术制得的静电纺丝复合纤维膜，所述的制备方法为：a.将水溶性珍珠粉溶于超纯水中，采用超声等现有技术使其完全溶解，以制得水溶性珍珠粉溶液；
b.将载体材料溶于溶剂中，以制得载体材料溶液；所述载体材料包括基料和辅料，所述基料与辅料的质量比为4:1；所述基料为聚己内酯，所述辅料为海参胶原蛋白；所述溶剂为三氟乙醇；所述载体材料溶液的浓度为10％；
c.将步骤a和步骤b所得的溶液充分涡旋混合，使其充分溶解，制得纺丝溶液；纺丝溶液中水溶性珍珠粉的浓度为10％；
d.使用步骤c所获得纺丝溶液，采用静电纺丝的方法，制备获得生物活性敷料；静电纺丝所用溶剂为六氟异丙醇。
b.将载体材料溶于溶剂中，以制得载体材料溶液；所述载体材料包括基料和辅料，所述基料与辅料的质量比为4:1；所述基料为聚己内酯，所述辅料为海参胶原蛋白；所述溶剂为三氟乙醇；所述载体材料溶液的浓度为10％；
c.将步骤a和步骤b所得的溶液充分涡旋混合，使其充分溶解，制得纺丝溶液；纺丝溶液中水溶性珍珠粉的浓度为10％；
d.使用步骤c所获得纺丝溶液，采用静电纺丝的方法，制备获得生物活性敷料；静电纺丝所用溶剂为六氟异丙醇。
[0166] 进一步的，所述水溶性珍珠粉溶液的浓度为55mg/ml。
[0167] 进一步的，步骤d中静电纺丝电压为30kV，注射器针头与接收板之间的距离可为15cm，注射泵的推进速度可为0.50mL/min，纺丝环境温度可为39℃。
[0168] 本发明将和静电纺丝技术联合起来，辅以载体材料制备一种可以调节免疫微环境，具有抗炎作用，有利于创口的快速愈合，预防瘢痕形成，可发挥持久作用的新型生物敷料。
[0169] 特别的，本发明提供一种水溶性珍珠粉复合纤维膜用于创伤修复药物中的用途。
[0170] 本发明敷料制备方法简单易行，所制得的生物敷料伤口黏附良好，安全无毒，应用方便。具有生物活性的水溶性珍珠粉敷料在隔绝创面，透气性好的同时又有止血、抗菌、保湿，同时具有抗炎作用，有利于创口的快速愈合，预防瘢痕形成。
[0171] 实施例11本实施例中，将实施例1-7任一制备的水溶性珍珠粉可制成复合纤维膜状产品。优选的，所述水溶性珍珠粉是通过预处理制得珍珠粉，依次通过酸法改性、酶法改性后，冷冻干燥制得的水溶性珍珠粉。
[0172] 进一步的，所述复合纤维膜状产品为通过静电纺丝技术制得的静电纺丝复合纤维膜，所述的制备方法为：a.将水溶性珍珠粉溶于超纯水中，采用超声等现有技术使其完全溶解，以制得水溶性珍珠粉溶液；
b.将载体材料溶于溶剂中，以制得载体材料溶液；所述载体材料包括基料和辅料，所述基料与辅料的质量比为1:1-4:1；所述基料为聚己内酯，所述辅料为壳聚糖；所述溶剂为三氟乙酸；所述载体材料溶液的浓度为7％；
c.将步骤a和步骤b所得的溶液充分涡旋混合，使其充分溶解，制得纺丝溶液；纺丝溶液中水溶性珍珠粉的浓度为5％；
d.使用步骤c所获得纺丝溶液，采用静电纺丝的方法，制备获得生物活性敷料；静电纺丝所用溶剂为三氟乙酸。
b.将载体材料溶于溶剂中，以制得载体材料溶液；所述载体材料包括基料和辅料，所述基料与辅料的质量比为1:1-4:1；所述基料为聚己内酯，所述辅料为壳聚糖；所述溶剂为三氟乙酸；所述载体材料溶液的浓度为7％；
c.将步骤a和步骤b所得的溶液充分涡旋混合，使其充分溶解，制得纺丝溶液；纺丝溶液中水溶性珍珠粉的浓度为5％；
d.使用步骤c所获得纺丝溶液，采用静电纺丝的方法，制备获得生物活性敷料；静电纺丝所用溶剂为三氟乙酸。
[0173] 进一步的，所述水溶性珍珠粉溶液的浓度为35mg/ml。
[0174] 进一步的，步骤d中静电纺丝电压为25kV，注射器针头与接收板之间的距离可为14cm，注射泵的推进速度可为0.3mL/min，纺丝环境温度可为38℃。
[0175] 本发明将和静电纺丝技术联合起来，辅以载体材料制备一种可以调节免疫微环境，具有抗炎作用，有利于创口的快速愈合，预防瘢痕形成，可发挥持久作用的新型生物敷料。
[0176] 特别的，本发明提供一种水溶性珍珠粉复合纤维膜用于创伤修复药物中的用途。
[0177] 本发明敷料制备方法简单易行，所制得的生物敷料伤口黏附良好，安全无毒，应用方便。具有生物活性的水溶性珍珠粉敷料在隔绝创面，透气性好的同时又有止血、抗菌、保湿，同时具有抗炎作用，有利于创口的快速愈合，预防瘢痕形成。
[0178] 功能评价结果1.1 实施例1制备的水溶性珍珠粉基本成分、蛋白和肽及氨基酸含量组成分析表1 水溶性珍珠粉的基本成分
表2 实施例1制备的水溶性珍珠粉蛋白、肽和氨基酸含量组成
1.2 实施例1制备的水溶性珍珠粉的分子量分布
采用高效体积排阻色谱法（HPSEC），将所用的试剂以及盛放样品的容器进行超声波清洗，样品需过膜预处理，再于高效液相色谱系统上进行分子量分析。色谱条件：waters protein—pak 60A（WAT085250）；流动相为浓度0.05mol/L，pH8.3的Tris-HCl缓冲液，洗脱速度为0.7mL/min；柱温为25℃；进样体积为10μL；检测波长为214nm。
表2 实施例1制备的水溶性珍珠粉蛋白、肽和氨基酸含量组成
1.2 实施例1制备的水溶性珍珠粉的分子量分布
采用高效体积排阻色谱法（HPSEC），将所用的试剂以及盛放样品的容器进行超声波清洗，样品需过膜预处理，再于高效液相色谱系统上进行分子量分析。色谱条件：waters protein—pak 60A（WAT085250）；流动相为浓度0.05mol/L，pH8.3的Tris-HCl缓冲液，洗脱速度为0.7mL/min；柱温为25℃；进样体积为10μL；检测波长为214nm。
[0179] 采用牛胰岛素（5733Da）、血管紧张素Ⅱ（1046Da）、马尿酰-组氨酸-亮氨酸（429Da）、L-酪氨酸（181Da）作为标准品制备液相色谱图标准曲线，获得保留时间t与分子量的对数LgMW有良好的线性关系的方程。同样条件下，获得本发明实施例1水溶性珍珠粉的液相色谱图，如图1所示，样液主要有五个分离峰，由表3看出在214nm处峰面积占比最大的达到73.03%，在此处的分子量范围在2500Da-5000Da,由此看出水溶性珍珠粉最大峰面积的成分为肽。
[0180] 表3 水溶性珍珠粉分子量分布1.3 止血活性评价结果
如图2所示，在实施例1的止血活性评价中，MMP组和NT相比，出血时间极显著降低(P<
0.01)。
如图2所示，在实施例1的止血活性评价中，MMP组和NT相比，出血时间极显著降低(P<
0.01)。
[0181] 1.4 抗菌活性评价结果如表4所示，在实施例1的抗菌活性评价中，MMP对金黄色葡萄球菌、海藻希瓦氏菌、李斯特氏菌等与创伤相关的细菌均有一定的抑制作用。
[0182] 表4 水溶性珍珠粉溶液最小抑菌浓度 1.5 皮肤创伤愈合评价
在实施例1的皮肤创伤愈合评价中，表5为各实验组对结痂与退痂的影响，水溶性珍珠粉结痂时间最短，云南白药退痂时间最短；本实施例制备的水溶性珍珠粉的效果与云南白药的效果相近。
在实施例1的皮肤创伤愈合评价中，表5为各实验组对结痂与退痂的影响，水溶性珍珠粉结痂时间最短，云南白药退痂时间最短；本实施例制备的水溶性珍珠粉的效果与云南白药的效果相近。
[0183] 表5 各实验组对结痂与退痂的影响 表6 水溶性珍珠粉对小鼠皮肤创伤愈合率的影响
从表6可知，随着伤后时间延长，各组愈合率都呈现出升高趋势，第5、 9天，各组动物皮肤创伤愈合率没有显著差异(P>0.01)。而第13天、15天，相比于NT组，MPP组和PC组均可以显著促进伤口快速愈合(P<0.01)。
从表6可知，随着伤后时间延长，各组愈合率都呈现出升高趋势，第5、 9天，各组动物皮肤创伤愈合率没有显著差异(P>0.01)。而第13天、15天，相比于NT组，MPP组和PC组均可以显著促进伤口快速愈合(P<0.01)。
[0184] 综上所述，MMP具有促进伤口愈合和抑制瘢痕形成功能，其作用机制与其止血、抗菌、抗炎、促胶原蛋白沉积、重塑和胶原纤维生长等有密切关联。
[0185] 将实施例8-11制备的复合纤维膜生物敷料，取少量目标纤维，在其表面喷金，于扫描电镜下观察纤维形貌。结果显示，携载水溶性珍珠粉的复合纤维膜材料，电纺纤维较为光滑，排列不规则，也没有明显的液滴形成，最后形成的纤维膜类物质是呈现多孔状。
[0186] 值得注意的是，本发明的实施例2-7，在止血活性评价、抗菌活性评价、皮肤创伤愈合评价中可达到与实施例1相当的水平，其促进伤口愈合和抑制瘢痕形成的水平相当；本发明的实施例8–11制备的复合纤维膜生物敷料，在止血活性评价、抗菌活性评价、皮肤创伤愈合评价中优于实施例1的水平，其促进伤口愈合和抑制瘢痕形成的效果更佳。
[0187] 对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
[0188] 此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。需注意的是，本发明中所未详细描述的技术特征，均可以通过任一现有技术实现。
| 标题 | 发布/更新时间 | 阅读量 |
|---|---|---|
| 通过引物组合物进行质谱法判别缬沙坦个体化用药的方法 | 2020-05-11 | 710 |
| 硅/无定形碳/石墨烯锂离子电池负极材料的制备方法 | 2020-05-08 | 387 |
| 一种对多金属尾矿的减量化及利用的方法 | 2020-05-08 | 896 |
| 用于判别缬沙坦的个体化用药型的引物组合物 | 2020-05-11 | 105 |
| 具有很低苯胺含量的靛白盐溶液及其制备方法 | 2020-05-08 | 503 |
| 具有刚性链段的阳离子膜在碱性锌基液流电池中的应用 | 2020-05-08 | 522 |
| 硅烷处理液的制备方法及其使用工艺 | 2020-05-08 | 390 |
| 含酸基（甲基）丙烯酸酯树脂、固化性树脂组合物、阻焊剂用树脂材料及抗蚀剂构件 | 2020-05-08 | 1049 |
| 用于治疗干眼症的含有瑞巴派特的新型滴眼剂组合物及其增溶和稳定化方法 | 2020-05-08 | 720 |
| 一种有机无机杂化钙钛矿太阳能电池及其制备方法 | 2020-05-08 | 536 |
高效检索全球专利专利汇是专利免费检索,专利查询,专利分析-国家发明专利查询检索分析平台，是提供专利分析，专利查询，专利检索等数据服务功能的知识产权数据服务商。
我们的产品包含105个国家的1.26亿组数据，免费查、免费专利分析。
分析报告
专利汇分析报告产品可以对行业情报数据进行梳理分析，涉及维度包括行业专利基本状况分析、地域分析、技术分析、发明人分析、申请人分析、专利权人分析、失效分析、核心专利分析、法律分析、研发重点分析、企业专利处境分析、技术处境分析、专利寿命分析、企业定位分析、引证分析等超过60个分析角度，系统通过AI智能系统对图表进行解读，只需1分钟，一键生成行业专利分析报告。
QQ群二维码
意见反馈
意见反馈