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氨基茚满化合物及其治疗疼痛的用途

阅读：5发布：2024-01-12

专利汇可以提供氨基茚满化合物及其治疗疼痛的用途专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 申请 提供了新的 氨 基茚满化合物以及制备和使用这些化合物的方法。这些化合物适用于通过给患者施用所述化合物的一种或多种而 治疗 疼痛 和/或痒。所述方法包括施用式(I)或(II)的化合物和TRPV1受体激活剂。在一个实施方案中，TRPV1受体激活剂是利多卡因。，下面是氨基茚满化合物及其治疗疼痛的用途专利的具体信息内容。

1.一种式(I)或(II)的化合物：
其中：
A是苯基或杂芳基；
1 4
R 和R 独立为C1至C6烷基或CH2CH2OH；或
1 4
R 和R 结合形成4或6元碳环或杂环；
2
R 独立选自由以下组成的组：氢、卤素、NO2、OH和C1至C6烷氧基；
3
R 独立选自由以下组成的组：氢、卤素、CN、NO2、NH2、任选取代的C1至C6烷基、C2至C6烯基、C2至C6炔基、OH、CF3、OCF3、SCF3、任选取代的C1至C6烷氧基、C2至C6炔氧基、杂环基氧基、杂芳基氧基、任选取代的C1至C6烷基硫代、杂芳基硫代、C(O)O(C1至C6烷基)、C(O)(C1至C6烷基)、C(O)(芳基)、C(O)(杂环)、C(O)NH2、C(O)NH(C1至C6烷基)、C(O)NH(芳基)、C(O)NH(杂环)、C(O)NH(杂芳基)、C(O)N(C1至C6烷基)(C1至C6烷基)、C(O)N(芳基)(C1至C6烷基)、C(S)NH2、任选取代的芳基、杂芳基、杂环、NHC(O)(C1至C6烷基)、NHC(O)(芳基)、NHC(O)(杂芳基)、NHC(O)O(C1至C6烷基)、N(C1至C6烷基)C(O)(C1至C6烷基)、N(C1至C6烷基)C(O)O(C1至C6烷基)、NHC(O)NH2、NHC(O)NH(C1至C6烷基)、NHC(O)NH(杂芳基)、NHSO2(C1至C6烷基)、SO2(C1至C6烷基)、SO2NH2、SO2NH(C1至C6烷基)、SO2NH(C2至C6炔基)、SO2N(C1至C6烷基)(C1至C6烷基)、SO2NH(杂芳基)、NH(C1至C6烷基)、N(C1至C6烷基)(C1至C6烷基)、N(C1至C6烷基)(C2至C6烯基)和N(C1至C6烷基)(杂环)；或
3
q是2，并且两个R 基团结合形成任选取代的6元芳基、任选取代的5或6元碳环、或含有1至3个氧、氮或硫原子和4或5个碳原子的任选取代的5或6元杂环或杂芳基；
m是1至5；
n是1至3；
p是0至2；
q是0至4；并且
-
X 是卤素离子、三氟乙酸根、硫酸根、磷酸根、乙酸根、富马酸根、马来酸根、柠檬酸根、丙酮酸根、琥珀酸根、草酸根、硫酸氢根、丙二酸根、昔奈酸根、抗坏血酸根、油酸根、烟酸根、糖精根、己二酸根、甲酸根、羟乙酸根、L-乳酸根、D-乳酸根、天冬氨酸根、苹果酸根、L-酒石酸根、D-酒石酸根、硬脂酸根、2-糠酸根、3-糠酸根、萘二磺酸根、乙二磺酸根、羟乙磺酸根、D-扁桃酸根、L-扁桃酸根、丙酸根、酒石酸根、邻苯二甲酸根、盐酸根、氢溴酸根、硝酸根、甲磺酸根、乙磺酸根、萘磺酸根、苯磺酸根、甲苯磺酸根、均三甲苯磺酸根、樟脑磺酸根或三氟甲磺酸根。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中与碳原子连接的两个氢原子被至氧原子的双键替代以形成羰基。
3.根据权利要求1所述的化合物，所述化合物含有至少1个手性中心。
4.根据权利要求1所述的化合物，所述化合物是对映体的混合物。
5.根据权利要求1所述的化合物，所述化合物是R对映体。
6.根据权利要求1所述的化合物，所述化合物是S对映体。
7.根据权利要求1所述的化合物，其中p是0。
8.根据权利要求1所述的化合物，其中q是0。
9.根据权利要求1所述的化合物，其中n是1。
10.根据权利要求1所述的化合物，其中n是2。
11.根据权利要求1所述的化合物，其中n是3。
12.根据权利要求1所述的化合物，其中m是3。
13.根据权利要求1所述的化合物，其中m是2。
14.根据权利要求1所述的化合物，所述化合物具有以下结构：
15.根据权利要求1所述的化合物，所述化合物具有以下结构：
16.根据权利要求1所述的化合物，所述化合物具有以下结构：
17.根据权利要求16所述的化合物，所述化合物具有以下结构：
18.根据权利要求1所述的化合物，所述化合物是：
19.根据权利要求1所述的化合物，所述化合物是：
20.根据权利要求19所述的化合物，所述化合物是：
21.根据权利要求1所述的化合物，所述化合物是：
22.根据权利要求1所述的化合物，所述化合物是：
的外消旋混合物。
23.根据权利要求1所述的化合物，所述化合物选自由以下组成的组：
(S)-1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(苯基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物、
(R)-1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(苯基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物、
(S)-1,1-二乙基-2-[2-((茚满-2-基)(苯基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物、
(R)-1,1-二乙基-2-[2-((茚满-2-基)(苯基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物、
(S)-1,1-二丙基-2-[2-((茚满-2-基)(苯基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物、
(R)-1,1-二丙基-2-[2-((茚满-2-基)(苯基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物、
(S)-1,1-二甲基-2-[((茚满-2-基)(苯基)氨基)甲基]哌啶鎓碘化物、
(R)-1,1-二甲基-2-[((茚满-2-基)(苯基)氨基)甲基]哌啶鎓碘化物、
(S)-1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(2-甲基苯基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物、(R)-1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(2-甲基苯基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物、
1,1-二甲基-2-[((茚满-2-基)(苯基)氨基)甲基]哌啶鎓碘化物、
1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(苯基)氨基)乙基]吡咯烷鎓碘化物、
1,1-二乙基-2-[((茚满-2-基)(苯基)氨基)甲基]哌啶鎓碘化物、
1,1-二甲基-2-[2-((2-氟苯基)(茚满-2-基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物、
1,1-二甲基-2-[2-((3-氟苯基)(茚满-2-基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物、
1,1-二甲基-2-[2-((4-氟苯基)(茚满-2-基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物、
1,1-二乙基-2-[2-((2-氟苯基)(茚满-2-基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物、
1,1-二乙基-2-[2-((3-氟苯基)(茚满-2-基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物、
1,1-二乙基-2-[2-((4-氟苯基)(茚满-2-基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物、
1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(3-甲基苯基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物、
1,1-二乙基-2-[2-((茚满-2-基)(3-甲基苯基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物、
1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(4-甲基苯基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物、
1,1-二乙基-2-[2-((茚满-2-基)(4-甲基苯基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物、
1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(2-甲基苯基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物、
1,1-二乙基-2-[2-((茚满-2-基)(2-甲基苯基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物、
6-[2-((茚满-2-基)(苯基)氨基)乙基]-5-氮鎓螺[4.5]溴化癸烷、
1,1-二甲基-2-[3-((茚满-2-基)(苯基)氨基)丙基]哌啶鎓碘化物、
1,1-二乙基-2-[3-((茚满-2-基)(苯基)氨基)丙基]哌啶鎓碘化物、
1,1-二甲基-2-[((茚满-2-基)(4-甲基苯基)氨基)甲基]哌啶鎓碘化物、
1,1-二甲基-2-[((4-氟苯基)(茚满-2-基)氨基)甲基]哌啶鎓碘化物、
1,1-二甲基-2-[((茚满-2-基)(3-甲基苯基)氨基)甲基]哌啶鎓碘化物、
1,1-二乙基-2-[((茚满-2-基)(4-甲基苯基)氨基)甲基]哌啶鎓碘化物、
1,1-二甲基-2-[((3-氟苯基)(茚满-2-基)氨基)甲基]哌啶鎓碘化物、
1,1-二甲基-2-[((茚满-2-基)(苯基)氨基)甲基]吡咯烷鎓碘化物、
1,1-二乙基-2-[2-((茚满-2-基)(苯基)氨基)乙基]吡咯烷鎓碘化物、
1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(吡啶-2-基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物、
1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(嘧啶-2-基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物、
1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(噻唑-2-基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物、
1,1-二甲基-4-[2-((茚满-2-基)(2-甲基苯基)氨基)乙基]哌啶鎓溴化物、
7-[2-((茚满-2-基)(2-甲基苯基)氨基)乙基]-3-氧杂-6-氮杂螺[5.5]十一
烷-6-鎓氯化物、
1,1-二甲基-2-[2-((2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)(茚满-2-基)氨基)
乙基]哌啶鎓碘化物、
(R)-1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(2-甲基苯基)氨基)乙基]哌啶鎓溴化物、(S)-1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(2-甲基苯基)氨基)乙基]哌啶鎓氯化物、
1,1-二甲基-4-[2-((茚满-2-基)(2-甲基苯基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物、
1,1-双(2-羟基乙基)-2-[2-((茚满-2-基)(2-甲基苯基)氨基)乙基]哌啶鎓溴
化物、
1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(6-甲基吡啶-2-基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化
物、
1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(6-甲基吡啶-2-基)氨基)乙基]哌啶鎓溴化
物、
(S)-1,1-二乙基-2-[2-((茚满-2-基)(苯基)氨基)乙基]哌啶鎓溴化物、
1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(2-甲基苯基)氨基)乙基]哌啶鎓氯化物、
(R)-1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(2-甲基苯基)氨基)乙基]哌啶鎓氯化物，和
1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(2-甲基苯基)氨基)乙基]哌啶鎓溴化物。
24.一种制剂，包含：
(i)TRPV1受体激活剂；和
(ii)权利要求1至23任一项所述的式(I)或式(II)的化合物或其组合。
25.根据权利要求24所述的制剂，其中所述TRPV1受体激活剂选自由以下组成的组：
辣椒素、二氢辣椒素、降二氢辣椒素、利多卡因、阿替卡因、普鲁卡因、丁卡因、甲哌卡因、布比卡因、丁香酚、樟脑、克霉唑、N-花生四烯酰香兰素胺、大麻素、2-氨基乙氧基二苯基硼酸酯、AM404、超强辣素、佛波醇12-苯基乙酸13-乙酸20-高香兰酸酯、奥伐尼、N-油酰多巴胺、N-花生四烯酰多巴胺、6'-碘代超强辣素、C18N-酰基乙醇胺、脂肪氧合酶衍生物、正壬酸香草酰胺、四氢异喹啉抑制剂半胱氨酸结肽的脂肪酰基酰胺、pipeline、N-[2-(3,4-二甲基苄基)-3-(新戊酰氧基)丙基]-2-[4-(2-氨基乙氧基)-3-甲氧基苯基]乙酰胺、N-[2-(3,4-二甲基苄基)-3-(新戊酰氧基)丙基]-N'-(4-羟基-3-甲氧基苄基)硫脲、羟基-α-山椒醇、2-氨基乙氧基二苯基硼酸酯、10-生姜酚、油烯基姜醇、油烯基生姜酚、N-(4-叔丁基苄基)-N'-(4-羟基-3-甲氧基苄基)硫脲、安搏律定、苯佐卡因、布他卡因、可卡因、狄步卡因、恩卡尼、美西律、奥昔卡因、丙胺卡因、丙美卡因、普鲁卡因胺、n-乙酰基普鲁卡因胺、氯普鲁卡因、达克罗宁、依替卡因、左布比卡因、罗哌卡因、环美卡因、二甲卡因、丙氧卡因、三甲卡因和氨丁卡因。
26.根据权利要求24所述的制剂，其中所述TRPV1受体激活剂是利多卡因。
27.根据权利要求24所述的制剂，所述制剂被配制用于口服、肌肉内、直肠、皮肤、皮下、局部、透皮、舌下、鼻、阴道、硬膜外、鞘内、膀胱内或眼部施用给受试者。
28.根据权利要求24所述的制剂，包含约2%的所述TRPV1受体激活剂。
29.根据权利要求24所述的制剂，包含约0.5%的所述式(I)化合物、式(II)化合物或其组合。
30.一种组合物，包含权利要求1至23任一项所述的式(I)或式(II)化合物或其组合和载体。
31.一种用于制备权利要求1所述的化合物(I)的方法，其中A是苯基，所述方法包括：
(i)转化 至
(ii)转化所述化合物2a至
(iii)还原所述化合物4a至
(iv)氯化所述化合物5a以形成
(v) 偶 联 所 述 化 合 物 6a 和 以 形 成
(vi)通过氢化去除化合物8a的苄基以形成
1
(vii)R 取代化合物9a以形成 和
4
(viii)R 取代化合物11a。
32.根据权利要求31所述的方法，其中所述化合物1a是 化合物
2a是 化合物4a是 化合物5a是 化
合物6a是 化 合物8a是 化 合物9a 是
并且化合物11a是
33.一种制备权利要求1所述化合物的方法，其中A是苯基，所述方法包括：
1 4
(vii)R 和R 取代化合物9c：
34.根据权利要求33所述的方法，其中所述化合物9c是
35.一种制备权利要求1所述化合物的方法，其中A是苯基，所述方法包括：
(i)保护 的氮原子以形成
(ii)氯化所述化合物13a以形成
(iii) 偶 联 所 述 化 合 物 14a 和 以 形 成
(iv)脱保护化合物15a以形成
(v)R1取代所述化合物16a以形成 和
4
(vi)R 取代化合物17a。
36.根据权利要求35所述的方法，其中所述化合物12a是哌啶-2-甲醇，化合物13a是化合物14a是 化合物15a是
化合物16a是 并且化合物17a是
3
37.一种制备权利要求1所述化合物的方法，其中A是苯基，R 是2-F，m是2，并且q是
1，所述方法包括：
1 4
(vi)R 和R 取代化合物9d：
38.根据权利要求37所述的方法，其中化合物9d具有以下结构：
39.一种制备权利要求1所述化合物的方法，其中A是苯基，所述方法包括：
(i)偶联 和 以形成 和
4
(ii)R 取代化合物17a。
40.根据权利要求39所述的方法，其中所述化合物18a是 并且化合物
17a是
41.一种制备权利要求1所述化合物的方法，其中m是3，所述方法包括：
(i)使用酸还原 以形成
(ii)用苄基保护化合物21a以提供
(iii)氧化化合物22a以提供
(iv)偶联化合物23a和 以提供
3
(v)用R 取代的苯基取代所述化合物24a的氮原子以形成
(vi)脱保护所述化合物25a以提供 和
1 4
(v)R 和R 取代所述化合物26a。
42.根据权利要求41所述的方法，其中所述化合物20a是 化合物21a
是 化合物22a是 化合物23a是 化
合物24a是 化合物25a是 并且化合
物26a是
43.一种制备权利要求1所述化合物的方法，其中A是苯基，所述方法包括：
(i)转化 至
(ii)转化所述化合物2a至
(iii)还原所述化合物4a至
(iv)氧化化合物5a以提供
(v) 偶 联 所 述 化 合 物 23a 和 以 提 供
(v)用R3取代的苯基取代化合物24c的氮原子以提供
和
(vi)脱保护化合物8c以形成 和
1 4
(vii)R 和R 取代所述氮环。
44.根据权利要求43所述的方法，其中所述化合物1a是 化合
物2c是 化合 物4c 是 化 合 物5c是 化
合 物31是 化 合 物24c 是 化 合 物8c 是
并且化合物9f是
45.一种制备权利要求1所述化合物的方法，所述方法包括：
(i)转化 至
(ii)还原化合物2b至
(iii)氧化化合物37a至
(iv)偶联化合物38a和 以形成
3
(v)偶联化合物39a和A-(R)q基团以形成
(vi)脱保护化合物40a以形成 和
1 4
(vii)R 和R 取代化合物41a。
46.根据权利要求45所述的方法，其中：
化合物1a是 化合物2b是 化合物37a是
化合物38a是 化合物39a是 化合物40a是
并且化合物41a是
47.一种制备权利要求1所述化合物的方法，所述方法包括：
(i)BOC保护 以形成
(ii)氧化化合物37a以形成
(iii)偶联化合物38a和 以形成
3
(iv)用A-(R)q取代化合物39a以形成
(v)脱保护化合物40a以形成 和
(vi)R1和R4取代化合物41a。
48.根据权利要求47所述的方法，其中：
化合物12b是 化合物37a是 化合物38a是 化
合物39a是 化合物40a是 并且化合物
41a是
49.一种制备权利要求1所述化合物的方法，其中n是2，所述方法包括：
( i) 用 A - ( R3)q 取 代 以 形 成
(ii)脱保护化合物40a以形成 和
1 4
(iii)R 和R 取代化合物41a。
50.根据权利要求49所述的方法，其中：
化 合 物 39a 是 化 合 物 40a 是
并且化合物41a是
51.一种制备权利要求1所述化合物的方法，所述方法包括：
(i)保护 以形成
(ii)氧化化合物5a以形成
(iii)偶联化合物23a和 以形成
3
(iv)用A-(R)q取代化合物24f以形成
(v)脱保护化合物8e以形成
1
(vi)R 取代化合物41a以形成 和
(vii)R4取代化合物61c。
52.根据权利要求51所述的方法，其中：
化合物12b是 化合物5a是 化合物23c是 化
合物24f是 化合物8e是 化合物
41a是 并且化合物61c是
53.一 种 制 备 权 利 要 求1 所 述 化 合 物 的 方 法，所 述 方 法 包 括 使与X"-(CH2)r-Y-(CH2)s-X"反应，其中：
r是1至4；
s是1至4；
Y是CH2、O或S；并且
X"是离去基团。
54.根据权利要求53所述的方法，其中化合物41a是
并且X"-(CH2)r-Y-(CH2)s-X"是ＣlＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２ＣＨ２Ｃl。
55.一种制备权利要求1所述化合物的方法，所述方法包括：
3
(i)使 与H2N-A-(R)q反应形成
(ii)偶联化合物7c和 以形成
(iii)脱保护化合物8f以形成
1
(iv)R 取代化合物9h以形成 和
4
(v)R 取代化合物61a。
3
56.根据权利要求55所述的方法，其中H2N-A-(R)q是 化合
物7c 是 化 合 物58a 是 化 合 物 8f 是
化合物9h是 并且化合物61a是
4
57.一种制备权利要求1所述化合物的方法，其中R 是CH3，所述方法包括：
(i)氧化 以形成
(ii)偶联化合物38a和 以形成
(iii)还原化合物40a以形成 和
(iv)R1取代化合物41c。
58.根据权利要求57所述的方法，其中化合物40a通过向包含化合物7c和温和还原剂的溶液添加化合物38a而制备。
59.根据权利要求58所述的方法，其中所述温和还原剂是Na(OAc)3BH。
60.根据权利要求57至59任一项所述的方法，其中化合物40a的%ee是至少约97%ee。
61.权利要求1至23任一项的式(I)或式(II)的化合物或其组合用于治疗受试者疼痛或痒。
62.权利要求24至29任一项所述的制剂用于治疗受试者疼痛或痒。
63.权利要求61所述化合物或权利要求62所述制剂，其中所述TRPV1受体存在于痛觉受器、痒觉受器或其组合上。
64.权利要求61所述化合物或权利要求62所述制剂，其中所述疼痛是神经性疼痛。
65.权利要求61所述化合物或权利要求62所述制剂，其中所述疼痛是炎性疼痛。
66.权利要求61所述化合物或权利要求62所述制剂，其中所述疼痛是伤害性疼痛。
67.权利要求61所述化合物或权利要求62所述制剂，其中所述疼痛是操作性疼痛。
68.权利要求61所述化合物或权利要求62所述制剂，其中所述疼痛由食道癌、肠易激综合征或特发性神经病引起。
69.权利要求62所述制剂，其中所述TRPV1受体激活剂与所述式(I)化合物、式(II)化合物或其组合之比是约4:1。
70.权利要求62所述制剂，其中所述TRPV1受体激活剂与所述式(I)化合物、式(II)化合物或其组合之比是约10:1。
71.权利要求1至23任一项的化合物在制备药剂中的用途。

说明书全文

氨基茚满化合物及其治疗疼痛的用途

[0001] 背景
[0002] 局部麻醉剂、例如利多卡因在许多应用中适用于疼痛减轻，但缺点是不希望的运动功能阻断。它们是未能区分正常持续感觉所需钠通道活性和痛觉受器信号传导中涉及的相似活性的非选择性钠通道阻断剂。当在辣椒素存在下施用时，阳离子钠通道阻断剂QX-314选择性阻断痛觉受器神经元中的钠通道活性，辣椒素是瞬时受体电位阳离子通道亚家族V成员1(TRPV1)的激动剂。TRPV1优先在小直径初级传入痛觉受器中外围表达，并在慢性疼痛状态下上调。然而，TRPV1不存在于传达触觉的大直径传入神经元，TRPV1也不存在于运动神经元传出纤维。
[0003] QX-314是利多卡因的N-乙基化类似物，并且携带永久的正电荷。当外部应用时它不能跨越神经细胞膜并且对神经元钠通道活性没有作用，除非通过开放TRPV1通道提供对细胞质的访问，这种情况下它引起钠通道活性的延长阻断。电压钳单细胞电生理学实验示例说明QX-314透过辣椒素激活的TRPV1通道并阻断钠通道活性。在体内，QX-314/辣椒素组合的坐骨神经周围施用产生了明显且持久的痛觉受器选择性神经阻断。
[0004]
[0005] QX-314阻断DRG神经元中钠电流(当与1μM辣椒素共同施用并使用全细胞电压钳方法测量时)的体外表观亲和力(IC50)最适合在30μM。
[0006] 本领域依然需要用于管理长期或慢性疼痛的化合物和用于最小化运动功能损伤的疼痛管理化合物。发明概要
1 4
[0007] 一方面，本发明提供了式(I)或(II)的化合物，其中R-R、X、A、m、n、p和q如本文定义。
[0008]
[0009] 另一方面，提供了式(I-A)至(I-D)的化合物，其中R1-R4、X、m、n、p和q如本文定义。
[0010]
[0011] 另一方面，本发明提供了包含式(I)至(I-NN)任何一个的化合物和药学可接受的载体的药物组合物。在一个实施方案中，所述药物组合物还包含TRPV1受体激活剂。在另一实施方案中，TRPV1受体激活剂是利多卡因。
[0012] 另一方面，提供了含有利多卡因和以下化合物的药物组合物，其中X在本文定义。
[0013]
[0014] 另一方面，本发明提供了包含任选利多卡因组合的药物组合物，其中X在本文定义：
[0015]
[0016] 另一方面，提供了治疗疼痛或痒的方法，该方法包括给有相应需要的患者施用式(I)和/或(II)的化合物。在一个实施方案中，该方法还包括施用TRPV1受体激活剂。
[0017] 另一方面，提供了评估化合物对钠通道响应抑制的方法。
[0018] 另一方面，提供了稳定表达人TRPV1的成神经细胞瘤细胞系N1E115。
[0019] 本发明的其他方面和优点将通过以下发明详述显而易见。
[0020] 附图简述
[0021] 图1-11提供了示例说明已知的抗痛觉剂QX-314和式(I)化合物涵盖的本文描述的三(3)种化合物的抗痛觉效应的对比数据。这些图是有关捏痛数据的缩爪发声力(g)对时间(小时)的曲线图或在皮肤躯干肌肉反射模型数据情况下的%最大可能效应。显示时，三星(***)指小于0.001的概率。两星(**)指小于0.01的概率。一星(*)指小于0.05的概率。包含在图中的条棒( )如果存在，代表有和没有利多卡因的抗痛觉持续时间的差异(如果有)。最后，y轴上的箭头(→)代表施加的最大力。这些数据和实施例中的数据示例说明新的和新颖的阳离子钠通道阻断剂的测试化合物，具有比QX-314更有效的体外活性，并且当与适当TRPV1刺激共施用和在至少一种情况下甚至没有与TRPV1刺激共施用时具有更长的作用时间(参见本文表7)。
[0022] 图1示例说明了使用大鼠捏模型的QX-314的抗痛觉效应。在固定量(2%)的利多卡因存在和不存在下使用两剂0.5%QX-314溶液，药物组合直接注射在一只后腿的坐骨神经周围(即，坐骨神经周围的)。黑色菱形(◆)代表组合的QX-314和利多卡因溶液的200μL注射的结果。黑色方块(■)代表组合的QX-314和利多卡因溶液的100μL注射的结果。倒置三角形(▼)代表仅QX-314溶液的200μL注射的结果。三角形(▲)代表仅QX-314溶液的100μL注射的结果。黑色圆环(●)代表仅2%利多卡因的200μL注射的结果。
[0023] 图2使用大鼠捏模型示例说明了实施例2的化合物，即(S)-1,1-二乙基-2-[2-((茚满-2-基)(苯基)氨基)-乙基]哌啶鎓碘化物的抗痛觉效应。在固定
量(2%)的利多卡因存在和不存在下使用两剂(S)-1,1-二乙基-2-[2-((茚满-2-基)
(苯基)氨基)-乙基]哌啶鎓碘化物的0.5%溶液。黑色菱形(◆)代表(S)-1,1-二乙
基-2-[2-((茚满-2-基)(苯基)氨基)-乙基]哌啶鎓碘化物(200μL)和利多卡因的组合溶液的200μL注射的结果。黑色圆环(●)代表(S)-1,1-二乙基-2-[2-((茚满-2-基)(苯基)氨基)-乙基]哌啶鎓碘化物和利多卡因的组合溶液的100μL注射的结果。倒置三角形(▼)代表仅(S)-1,1-二乙基-2-[2-((茚满-2-基)(苯基)氨基)-乙基]哌啶
鎓碘化物溶液的200μL注射的结果。三角形(▲)代表仅(S)-1,1-二乙基-2-[2-((茚满-2-基)(苯基)氨基)-乙基]哌啶鎓碘化物溶液的100μL注射的结果。
[0024] 图3使用大鼠捏模型示例说明了实施例3的化合物，即1,1-二甲基-2-[((茚满-2-基)(苯基)氨基)甲基]哌啶鎓碘化物的抗痛觉效应。在固定量(2%)的利多卡因存在和不存在下使用两剂1,1-二甲基-2-[((茚满-2-基)(苯基)氨基)甲基]哌啶鎓碘化物的0.5%溶液。黑色圆环(●)代表1,1-二甲基-2-[((茚满-2-基)(苯基)氨基)甲基]哌啶鎓碘化物和利多卡因的组合溶液的200μL注射的结果。黑色方块(■)代表
1,1-二甲基-2-[((茚满-2-基)(苯基)氨基)甲基]哌啶鎓碘化物和利多卡因的组合溶液的100μL注射的结果。三角形(▲)代表仅1,1-二甲基-2-[((茚满-2-基)(苯基)
氨基)甲基]哌啶鎓碘化物溶液的200μL注射的结果。倒置三角形(▼)代表仅1,1-二甲基-2-[((茚满-2-基)(苯基)氨基)甲基]哌啶鎓碘化物溶液的100μL注射的结果。
[0025] 图4使用大鼠捏模型示例说明了1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(2-甲基苯基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物(实施例24)的抗痛觉效应。在固定量(1和2%)的利多卡因存在和不存在下使用1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(2-甲基苯基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物的0.25%和0.5%溶液的剂。倒置三角形(▼)代表1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(2-甲基苯基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物(0.5%)和利多卡因(2%)的组合溶液的200μL注射的结果。三角形(▲)代表1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(2-甲基苯基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物(0.5%)和利多卡因(2%)的组合溶液的100μL注射的结果。
菱形(◆)代表1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(2-甲基苯基)氨基)乙基]哌啶鎓
碘化物(0.25%)和利多卡因(1%)的组合溶液的200μL注射的结果。实心圆环(●)代表仅1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(2-甲基苯基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物(0.5%)
溶液的200μL注射的结果。实心方块(■)代表仅1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)
(2-甲基苯基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物(0.25%)溶液的200μL注射的结果。
[0026] 图5使用大鼠捏模型对比了实施例4、16、23和24的化合物的抗痛觉效应。使用了在固定量(2%)利多卡因存在下所示化合物(0.5%)每一个的组合溶液的100μL独立注射。倒置三角形(▼)代表实施例4的化合物的结果。方块(■)代表实施例16的化合物的结果。圆环(●)代表实施例23的化合物的结果。三角形(▲)代表实施例24的化合物的结果。
[0027] 图6-7示例说明了包含实施例24的化合物和利多卡因的溶液的抗痛觉效应的注射体积的效应，并且是缩爪发声力(g)与时间(小时)的曲线。y轴上的箭头(→)代表施加的最大力。
[0028] 图6包含在固定量(2%)利多卡因存在下实施例24的化合物的组合的0.5%溶液的100μL注射的数据。每个圆环(●)代表6只大鼠的总队列作为时间函数的个体动物疼痛反应。
[0029] 图7包含在固定量的(1%)利多卡因存在下实施例24的化合物的组合的0.25%溶液的200μL注射的数据。每个圆环(●)代表6只大鼠的总队列作为时间函数的个体动物疼痛反应。
[0030] 图8提供了式(I)化合物涵盖的实施例24化合物，即1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(2-甲基苯基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物的抗痛觉效应的数据，使用了坐骨神经功能指数和大鼠足印模型。该图是足印评分与时间(小时)的曲线。足印评分0指示对注射的爪没有产生重量，该爪被跖面朝上牵引或扭转。足印评分1-3反映负重主要在膝盖上，踝和趾被节约使用，趾被卷曲，和或爪的跖面以凹的方式上升。足印评分4-6反映负重主要在膝盖和踝上，很少负重在趾上。足印评分6-10反映负重分布在膝盖、踝和趾上，并且偶尔多余在膝盖关节。足印评分11指示重量分布是正常的，并且存在爪的跖面的完美放置。在固定量(1和2%)利多卡因存在和不存在下使用1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(2-甲基苯基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物的0.25%和0.5%溶液的剂。方块(■)代表1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(2-甲基苯基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物(0.5%)和
利多卡因(2%)组合溶液的200μL注射的结果。圆环(●)代表1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(2-甲基苯基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物(0.25%)和利多卡因(1%)的组合溶液的200μL注射的结果。直立三角形(▲)代表仅1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)
(2-甲基苯基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物(0.25%)溶液的200μL注射的结果。倒置三角形(▼)代表仅利多卡因(2%)溶液的200μL注射的结果。三星(***)指小于0.001的概率；两星(**)指小于0.01的概率；并且一星(*)指小于0.05的概率。
[0031] 图9对比了实施例43的化合物，即((R)-2-[2-(茚满-2-基-邻-甲苯基-氨基)-乙基]-1,1-二甲基-哌啶鎓溴化物)作为仅0.2%溶液的单侧200μL注射(■)或
与利多卡因组合(2%，●)直接注射在坐骨神经周围时的抗痛觉效应。
[0032] 图10显示了实施例43的化合物，即((R)-2-[2-(茚满-2-基-邻-甲苯基-氨基)-乙基]-1,1-二甲基-哌啶鎓溴化物(0.2%)和利多卡因(2%)的组合溶液在坐骨神经周围200μL单侧注射对运动功能的效应，如使用本文描述的步态评分系统评估的。以与图9使用的相同比例尺绘制数据曲线，以利于比较实施例43化合物诱导的镇痛和运动损伤的时程。
[0033] 图11显示了在皮肤躯干肌肉反射疼痛模型中，单独(●)或与利多卡因组合(2%，■)的实施例43的化合物，即((R)-2-[2-(茚满-2-基-邻-甲苯基-氨基)-乙基]-1,1-二甲基-哌啶鎓溴化物，0.2%)的100μL皮下注射的抗痛觉效应。该组合溶液导致与单独的实施例43化合物产生的相比延长的镇痛持续时间。没有实施例43的100μL利多卡因(2%)的相似注射产生了短暂镇痛，其在注射后约0.5小时达到100%，并且在约2小时返回基线(数据未显示)。
[0034] 发明详述
[0035] 本发明提供了新化合物，当任选与TRPV1激动剂组合使用时能够减少或消除由组织伤害、损伤或病理引起的疼痛或痒。这些新化合物由于含氮环中含有的季氮原子的存在而永久带电，使它们高度可溶。这些化合物是季铵盐，其中抗衡阴离子是卤素阴离子，即，氯离子、溴离子或碘离子；或三氟乙酸根、硫酸根、磷酸根、乙酸根、富马酸根、马来酸根、柠檬酸根、丙酮酸根、琥珀酸根、草酸根、磺酸根例如甲磺酸根、三氟甲磺酸根、甲苯磺酸根例如对甲苯磺酸根、苯磺酸根、乙磺酸根、樟脑磺酸根、2-均三甲苯磺酸根或萘磺酸根例如2-萘磺酸根、硫酸氢根、丙二酸根、昔奈酸根(xinafoate)、抗坏血酸根、油酸根、烟酸根、糖精根、己二酸根、甲酸根、羟乙酸根、L-乳酸根、D-乳酸根、天冬氨酸根、苹果酸根、L-酒石酸根、D-酒石酸根、硬脂酸根、2-糠酸根、3-糠酸根、萘二磺酸根(萘-1,5-二磺酸根或萘-1-(磺酸)-5-磺酸根)、乙二磺酸根(乙烷-1,2-二磺酸根或乙烷-1-(磺酸)-2-磺酸根)、羟乙磺酸根(2-羟基乙基磺酸根)、D-扁桃酸根、L-扁桃酸根、丙酸根、邻苯二甲酸根、盐酸根、氢溴酸根或硝酸根。
[0036] 本文公开的新的带电化合物能够穿过细胞膜。然而，当通过开放的TRPV1通道提供访问时，认为它们将以治疗有效量透入细胞。这是本发明带电化合物与认为自由穿过所有细胞膜的其相应的中性分子相比的一个优点。
[0037] 一方面，本发明提供了式(I)或(II)的化合物。
[0038]
[0039] 在这些化合物中，n是1至3；m是1至4；p是0至2；并且q是0至4。在一个实施方案中，n是1。在另一实施方案中，n是2。在另一实施方案中，n是3。在另一实施方案中，p是0。在另一实施方案中，p是1。在另一实施方案中，p是2。在另一实施方案中，q是0。在另一实施方案中，q是1。在另一实施方案中，q是2。在另一实施方案中，q是3。在另一实施方案中，q是4。在另一实施方案中，m是2并且n是1。在另一实施方案中，m是2并且n是2。在另一实施方案中，m是3并且n是2。在另一实施方案中，m是3并且n是1。在另一实施方案中，m是4并且n是2。在另一实施方案中，m是4并且n是3。在另一实施方案中，m是2。在另一实施方案中，m是3。
[0040] A是苯基或杂芳基。
[0041] R1和R4独立地是C1至C6烷基或CH2CH2OH。可选地，R1和R4结合在一起形成4至1 4
6元碳环或杂环。在一个实施方案中，R 和R 结合形成任选取代的碳环，例如环丁烷、环戊
1 4
烷、环己烷、环庚烷和环辛烷。在另一实施方案中，R 和R 结合形成任选取代的杂环，例如
1 4
环醚、胺或硫化物。在另一实施方案中，R 和R 结合形成环醚。
[0042] R2是H、卤素、NO2、OH或C1至C6烷氧基。在一个实施方案中，R1和R4是相同的。1 4 1 4
在另一实施方案中，R 和R 不同。在另一实施方案中，R 和/或R 是甲基、乙基、丙基(正丙基或异丙基)、丁基、戊基、己基等。
[0043] R3是氢、卤素、CN、NO2、NH2、任选取代的C1至C6烷基、C2至C6烯基、C2至C6炔基、OH、CF3、OCF3、SCF3、任选取代的C1至C6烷氧基、C2至C6炔氧基、杂环基氧基、杂芳基氧基、任选取代的C1至C6烷基硫代、杂芳基硫代、C(O)O(C1至C6烷基)、C(O)(C1至C6烷基)、C(O)(芳基)、C(O)(杂环)、C(O)NH2、C(O)NH(C1至C6烷基)、C(O)NH(芳基)、C(O)NH(杂环)、C(O)NH(杂芳基)、C(O)N(C1至C6烷基)(C1至C6烷基)、C(O)N(芳基)(C1至C6烷基)、C(S)NH2、任选取代的芳基、杂芳基、杂环、NHC(O)(C1至C6烷基)、NHC(O)(芳基)、NHC(O)(杂芳基)、NHC(O)O(C1至C6烷基)、N(C1至C6烷基)C(O)(C1至C6烷基)、N(C1至C6烷基)C(O)O(C1至C6烷基)、NHC(O)NH2、NHC(O)NH(C1至C6烷基)、NHC(O)NH(杂芳基)、NHSO2(C1至C6烷基)、SO2(C1至C6烷基)、SO2NH2、SO2NH(C1至C6烷基)、SO2NH(C2至C6炔基)、SO2N(C1至C6烷基)(C1至C6烷基)、SO2NH(杂芳基)、NH(C1至C6烷基)、N(C1至C6烷基)(C1至C6烷3
基)、N(C1至C6烷基)(C2至C6烯基)或N(C1至C6烷基)(杂环)。可选地，两个R 基团结合形成任选取代的6元芳基、任选取代的5或6元碳环、或含有1至3个氧、氮或硫原子和
3
4或5碳原子的任选取代的5或6元杂环或杂芳基。在一个实施方案中，R 是卤素。在另
3 3 3
一实施方案中，R 是氯或氟。在另一实施方案中，R 是CN。在另一实施方案中，R 是C(O)
3 3
OCH3。在另一实施方案中，R 是C(O)NH2。在另一实施方案中，R 是SO2CH3。在另一实施方
3
案中，R 是CH3。
[0044] X-是卤素阴离子、三氟乙酸根、硫酸根、磷酸根、乙酸根、富马酸根、马来酸根、柠檬酸根、丙酮酸根、琥珀酸根、草酸根、磺酸根例如甲磺酸根、三氟甲磺酸根、甲苯磺酸根例如对甲苯磺酸根、苯磺酸根、乙磺酸根、樟脑磺酸根、2-均三甲苯磺酸根或萘磺酸根例如2-萘磺酸根、硫酸氢根、丙二酸根、昔奈酸根、抗坏血酸根、油酸根、烟酸根、糖精根、己二酸根、甲酸根、羟乙酸根、L-乳酸根、D-乳酸根、天冬氨酸根、苹果酸根、L-酒石酸根、D-酒石酸根、硬脂酸根、2-糠酸根、3-糠酸根、萘二磺酸根(萘-1,5-二磺酸根或萘-1-(磺酸)-5-磺酸根)、乙二磺酸根(乙烷-1,2-二磺酸根或乙烷-1-(磺酸)-2-磺酸根)、羟乙磺酸根(2-羟基乙基磺酸根)、D-扁桃酸根、L-扁桃酸根、丙酸根、酒石酸根、邻苯二甲酸根、盐酸根、氢溴酸根和硝酸根。在一个实施方案中，X是卤素。在另一实施方案中，X是氯、溴或碘。在另一实施方案中，X是碘。
[0045] 本发明还涵盖如下的一个实施方案：与碳原子连接的两个氢原子，即CH2，可以被至氧原子或硫原子的双键替代以分别形成羰基，即，C(O)或硫代羰基，即C(S)。
[0046] 在另一实施方案中，化合物具有式(I-A)、(I-AA)或(II-A)，其中R1、R3、R4、A、X、m、n和q在本文定义。在一个实例中，m是2或3。
[0047]
[0048] 在另一实施方案中，化合物具有式(I-B)、(I-BB)或(II-B)，其中R1、R2、R4、A、X、m、n和p在本文定义。在一个实例中，m是2或3。
[0049]
[0050] 在另一实施方案中，化合物具有式(I-C)、(I-CC)或(II-C)，其中R1、R4、A和X在本文定义。
[0051]1 4
[0052] 在另一实施方案中，化合物具有式(I-D)或(I-DD)，其中R、R 和X在本文定义。
[0053]
[0054] 在另一实施方案中，化合物具有式(I-E)，其中R1、R4和X在本文定义。
[0055]
[0056]
[0057] 在另一实施方案中，化合物具有式(I-F)-(I-FFFF)或(II-F)-(II-FFFF)，其中1 4
R、R 和X在本文定义。
[0058]1 4
[0059] 在另一实施方案中，化合物具有式(I-G)、(I-GG)或(II-G)，其中R、R、A、X、m和n在本文定义。在一个实例中，m是2或3。
[0060]1 4
[0061] 在另一实施方案中，化合物具有式(I-H)，其中R、R、X、m和n在本文定义。在一个实例中，m是2或3。
[0062]
[0063] 在另一实施方案中，化合物具有式(I-J)，其中R1、R4、X、m和n在本文定义。在一个实例中，m是2或3。
[0064]
[0065] 在另一实施方案中，化合物具有式(I-K)，其中R1、R4、X、m和n在本文定义。在一个实例中，m是2或3。
[0066]
[0067] 在另一实施方案中，化合物具有式(I-L)或(II-L)，其中R1、R4、X、m和n在本文定义。在一个实例中，m是2或3。
[0068]1 4
[0069] 在另一实施方案中，化合物具有式(I-M)或(II-M)，其中R、R、X、m和n在本文定义。在一个实例中，m是2或3。
[0070]
[0071] 在另一实施方案中，化合物具有式(I-N)或(II-N)，其中R1、R4、X、m和n在本文定义。在一个实例中，m是2或3。
[0072]
[0073] 在另一实施方案中，化合物具有式(I-O)、(I-OO)、(II-O)或(II-OO)，其中R1、R4、X、m和n在本文定义。在一个实例中，m是2或3。
[0074]1 4
[0075] 在另一实施方案中，化合物具有式(I-P)或(II-P)，其中R、R、X、m和n在本文定义。在一个实例中，m是2或3。
[0076]
[0077] 在另一实施方案中，化合物具有式(I-Q)或(II-Q)，其中R1、R4、X、m和n在本文定义。在一个实例中，m是2或3。
[0078]
[0079] 在另一实施方案中，化合物具有式(I-R)或(II-R)，其中R1、R4、X、m和n在本文定义。在一个实例中，m是2或3。
[0080]
[0081] 在另一实施方案中，化合物具有式(I-S)或(II-S)，其中R1、R4、X、m和n在本文定义。在一个实例中，m是2或3。
[0082]
[0083] 在另一实施方案中，化合物具有式(I-T)或(II-T)，其中R1、R4、X、m和n在本文定义。在一个实例中，m是2或3。
[0084]
[0085] 本发明内一些化合物具有一个或多个手性中心，并且本发明包括这种化合物的每个单独的对映体以及对映体的混合物。当本发明化合物中存在多个手性中心时，本发明包括化合物内手性中心的每个可能的组合及其所有可能的对映体和非对映体混合物。除非特别指出特定的立体化学或异构体形式，预期一个结构的所有手性、非对映体和外消旋形式。本领域公知如何制备旋光形式，例如通过外消旋形式的拆分或者通过从旋光起始原料合成。
[0086] 以下定义用于本文描述的化合物。一般而言，给定基团中存在的碳原子数目被指定为“Cx至Cy”，其中x和y分别是下限值和上限值。本文定义中使用的碳数目指碳骨架和碳分支，但是不包括取代基例如烷氧基取代等的碳原子。除非另外指明，在本文没有明确定义的取代基的命名通过从左到右命名官能团的末端部分、随后向连接点的相邻官能团来确定。如本文使用的，“任选取代的”表示任选取代的基团的至少1个氢原子已经被替代。
[0087] “烷基”指可以是直链或支链的烃链。在一个实施方案中，烷基含有1至6个(包含)碳原子。在另一实施方案中，烷基含有1至5个(包含)碳原子。在另一实施方案中，烷基含有1至4个(包含)碳原子。在另一实施方案中，烷基含有1至3个(包含)碳原子。在另一实施方案中，烷基含有1或2个碳原子。作为烃链的烷基的实例包括但不限于甲基、乙基、丙基、丁基、戊基和己基，其中涵盖这些实例的所有异构体。
[0088] 烷基还可以由环烷基自由基组成或者含有环烷基自由基，所述环烷基自由基即“碳环”。碳环的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基等。在一个实施方案中，碳环是3至6元的。在另一实施方案中，碳环是3至5元的。在另一实施方案中，碳环是4至6元的。在另一实施方案中，碳环是3或4元的，即，环丙基或环丁基。除非明确指出，烷基是未取代的，即，它们仅含有碳和氢原子。然而，当烷基或碳环经取代时，其之前加上术语“任选取代的”或“取代的”。烷基或碳环的任选取代基包括但不限于卤素、CN、NO2、C1至C6烷基、OH、C1至C6烷氧基、C1至C6烷氧基-C1至C6烷氧基、C1至C6烷氧基-C1至C6烷基-C1至C6烷氧基、杂环基氧基、C1至C6烷基硫代、芳基、杂环、杂芳基、C(O)(C1至C6烷基)、C(O)(杂环)、C(O)O(C1至C6烷基)、C(O)NH2、C(O)NH(C1至C6烷基)、C(O)N(C1至C6烷基)(C1至C6烷基)、SO2(C1至C6烷基)、SO2(C2至C6炔基)、SO2NH(C1至C6烷基)、SO2(杂环)、NHC(O)(C1至C6烷基)、NHSO2(C1至C6烷基)、N(C1至C6烷基)SO2(C1至C6烷基)、NH2、NH(芳基)、N(C1至C6烷基)(C1至C6烷基)或NHC(O)NH2。
[0089] “烯基”指直链或支链并且含有至少一个不饱和度(即，具有一个或多个碳-碳双键)的烃链，或者指由环烯基自由基组成或含有环烯基自由基的烃基。每个烯基双键可以E或Z构象存在。在一个实施方案中，烯基含有2至约6个(包含)碳原子或介于其间的整数或范围。在另一实施方案中，烯基含有2至5个(包含)碳原子。在另一实施方案中，烯基含有2至4个(包含)碳原子。在另一实施方案中，烯基含有2或3个碳原子。烯基含有至少1个双键。在一个实施方案中，烯基可以含有1至3个双键或介于其间的整数。烯基烃链的实例包括但不限于乙烯、丙烯、丁烯、戊烯和己烯。由环烯基自由基组成或含有环烯基自由基的烯基的实例包括但不限于环戊烯和环己烯。烯基可以是未取代的或者经一个或多个基团取代，所述基团包括但不限于卤素、CN、NO2、C1至C6烷基、OH、C1至C6烷氧基、C1至C6烷氧基-C1至C6烷氧基、C1至C6烷氧基-C1至C6烷氧基-C1至C6烷氧基、杂环基氧基、C1至C6烷基硫代、芳基、杂环、杂芳基、C(O)(C1至C6烷基)、C(O)(杂环)、C(O)O(C1至C6烷基)、C(O)NH2、C(O)NH(C1至C6烷基)、C(O)N(C1至C6烷基)(C1至C6烷基)、SO2(C1至C6烷基)、SO2(C2至C6炔基)、SO2NH(C1至C6烷基)、SO2(杂环)、NHC(O)(C1至C6烷基)、NHSO2(C1至C6烷基)、N(C1至C6烷基)SO2(C1至C6烷基)、NH2、NH(芳基)、N(C1至C6烷基)(C1至C6烷基)或NHC(O)NH2。
[0090] “炔基”指直链或支链并且含有至少一个不饱和度(即，具有一个或多个碳-碳三键)的烃链。在一个实施方案中，炔基含有2至约6个(包含)碳原子或介于其间的整数或范围。在另一实施方案中，炔基含有2至5个(包含)碳原子。在另一实施方案中，炔基含有2至4个(包含)碳原子。在另一实施方案中，炔基含有2或3个碳原子。炔基含有至少1个三键。在一个实施方案中，炔基可以含有1至3个三键或介于其间的整数。炔基的实例包括但不限于乙炔、丙炔、丁炔、戊炔和己炔。炔基可以是未取代的或者经一个或多个基团取代，所述基团包括但不限于卤素、CN、NO2、C1至C6烷基、OH、C1至C6烷氧基、C1至C6烷氧基-C1至C6烷氧基、C1至C6烷氧基-C1至C6烷氧基-C1至C6烷氧基、杂环基氧基、C1至C6烷基硫代、芳基、杂环、杂芳基、C(O)(C1至C6烷基)、C(O)(杂环)、C(O)O(C1至C6烷基)、C(O)NH2、C(O)NH(C1至C6烷基)、C(O)N(C1至C6烷基)(C1至C6烷基)、SO2(C1至C6烷基)、SO2(C2至C6炔基)、SO2NH(C1至C6烷基)、SO2(杂环)、NHC(O)(C1至C6烷基)、NHSO2(C1至C6烷基)、N(C1至C6烷基)SO2(C1至C6烷基)、NH2、NH(芳基)、N(C1至C6烷基)(C1至C6烷基)或NHC(O)NH2。
[0091] “烷氧基”指 O(烷基)，其中烷基是任选取代的并且是上文定义的。在一个实施方案中，烷氧基含有1至6个(包含)碳原子或介于其间的整数或范围。在另一实施方案中，烷氧基含有1至5个(包含)碳原子或介于其间的范围。在另一实施方案中，烷氧基含有1至4个(包含)碳原子。在另一实施方案中，烷氧基含有1至3个(包含)碳原子。在另一实施方案中，烷氧基含有1或2个碳原子。烷氧基的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基和丁氧基。烷氧基的烷基自由基可以是未取代的或者如上对“烷基”所定义的取代。
[0092] “炔氧基”指 O(炔基)，其中炔基是任选取代的并且是上文定义的。炔氧基的实例包括但不限于丙炔氧基、丁炔氧基、戊炔氧基和己炔氧基。
[0093] “杂环基氧基”指 O(杂环)，其中杂环是任选取代的并且是下文定义的。
[0094] “杂芳基氧基”指 O(杂芳基)，其中杂芳基是任选取代的并且是下文定义的。
[0095] “芳基”指含有碳原子的芳族烃基。在一个实施方案中，芳基含有6至10个碳原子，即6、7、8、9或10元的。在另一实施方案中，芳基是芳族或部分芳族的双环基团。在另一实施方案中，芳基是苯基。在另一实施方案中，芳基是萘基(例如α-萘基或β-萘基)、1,2,3,4-四氢萘基或茚满基。芳基可以是未取代的或者经一个或多个基团取代，所述基团包括但不限于卤素、CN、NO2、C1至C6烷基、OH、C1至C6烷氧基、C1至C6烷氧基-C1至C6烷氧基、C1至C6烷氧基-C1至C6烷氧基-C1至C6烷氧基、杂环基氧基、C1至C6烷基硫代、芳基、杂环、杂芳基、C(O)(C1至C6烷基)、C(O)(杂环)、C(O)O(C1至C6烷基)、C(O)NH2、C(O)NH(C1至C6烷基)、C(O)N(C1至C6烷基)(C1至C6烷基)、SO2(C1至C6烷基)、SO2(C2至C6炔基)、SO2NH(C1至C6烷基)、SO2(杂环)、NHC(O)(C1至C6烷基)、NHSO2(C1至C6烷基)、N(C1至C6烷基)SO2(C1至C6烷基)、NH2、NH(芳基)、N(C1至C6烷基)(C1至C6烷基)或NHC(O)NH2。
[0096] “卤素”指F、Cl、Br和I。
[0097] 术语“杂原子”指硫、氮或氧原子。
[0098] “杂芳基”指含有至少一个环杂原子的单环芳族5或6元环。在一个实施方案中，杂芳基含有1至5个碳原子(包含)或介于其间的整数或范围。在另一实施方案中，杂芳基含有2至5个碳原子(包含)。在另一实施方案中，杂芳基含有3至5个碳原子(包含)。在另一实施方案中，杂芳基含有4或5个碳原子。“杂芳基”还指双环芳族环系统，其中杂芳基如刚刚描述的与至少一个其他环部分稠合。在一个实施方案中，苯基自由基与5或6元单环杂芳基稠合以形成双环杂芳基。在另一实施方案中，环烷基与单环杂芳基稠合以形成双环杂芳基。在另一实施方案中，双环杂芳基是与5或6元单环杂芳基稠合的吡啶。在另一实施方案中，杂芳基环在环中具有1或2个氮原子。在另一实施方案中，杂芳基环具有1个氮原子和1个氧原子。在另一实施方案中，杂芳基环具有1个氮原子和1个硫原子。杂芳基的实例包括但不限于呋喃、噻吩、吲哚、氮杂吲哚、噁唑、噻唑、异噁唑、异噻唑、咪唑、吡啶、嘧啶、吡嗪、哒嗪、吡咯、吡唑、1,3,4-噁二唑、1,2,4-三唑、四唑、苯并噁唑、苯并噻唑、苯并呋喃、苯并异噁唑、苯并咪唑、氮杂苯并咪唑、吲唑、喹唑啉、喹啉和异喹啉。杂芳基可以是未取代的或者经一个或多个基团取代，所述基团包括但不限于卤素、CN、NO2、C1至C6烷基、OH、C1至C6烷氧基、C1至C6烷氧基-C1至C6烷氧基、C1至C6烷氧基-C1至C6烷氧基-C1至C6烷氧基、杂环基氧基、C1至C6烷基硫代、芳基、杂环、杂芳基、C(O)(C1至C6烷基)、C(O)(杂环)、C(O)O(C1至C6烷基)、C(O)NH2、C(O)NH(C1至C6烷基)、C(O)N(C1至C6烷基)(C1至C6烷基)、SO2(C1至C6烷基)、SO2(C2至C6炔基)、SO2NH(C1至C6烷基)、SO2(杂环)、NHC(O)(C1至C6烷基)、NHSO2(C1至C6烷基)、N(C1至C6烷基)SO2(C1至C6烷基)、NH2、NH(芳基)、N(C1至C6烷基)(C1至C6烷基)或NHC(O)NH2。
[0099] “杂环”指其中至少1个环原子是杂原子的单环或双环基团。杂环可以是饱和的或部分饱和的。在一个实施方案中，杂环含有3至7个碳原子(包含)或介于其间的整数或范围。在另一实施方案中，杂环含有4至7个碳原子(包含)。在另一实施方案中，杂环含有4至6个碳原子(包含)。在另一实施方案中，杂环含有5或6个碳原子(包含)。杂环的实例包括但不限于氮丙啶、环氧乙烷、硫杂丙环、吗啉、硫代吗啉、吡咯啉、吡咯烷、氮杂环庚烷、二氢呋喃、四氢呋喃、二氢噻吩、四氢噻吩、二硫戊环、哌啶、1,2,3,6-四氢吡啶-1-基、四氢吡喃、吡喃、硫化环戊烷、thiine、哌嗪、高哌嗪、噁嗪、azecane、四氢喹啉、全氢异喹啉、
5,6-二氢-4H-1,3-噁嗪-2-基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷、2,5-二氮杂双环[2.2.2]辛烷、3,6-二氮杂双环[3.1.1]庚烷、3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷、6-氧杂-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷、7-氧杂-2,5-二氮杂双环[2.2.2]辛烷、2,7-二氧杂-5-氮杂双环[2.2.2]辛烷、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.2]辛烷、3,6-二氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷、3-氧杂-6-氮杂双环[3.1.1]庚烷、3-氧杂-8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基、5,7-二氧杂-2-氮杂双环[2.2.2]辛烷、6,8-二氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷、6-氧杂-3-氮杂双环[3.1.1]庚烷、8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-5-基、6-氮杂双环[3.2.1]辛-6-基、8-氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基、3-氧杂-7,9-二氮杂双环[3.3.1]壬-9-基、
9-氧杂-3-氮杂双环[3.3.1]壬-3-基、3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基、3,7-二氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬-9-基、3,4-二氢-2H-1,4-苯并噁嗪-7-基、噻嗪、二硫化环戊烷和二噁烷。在另一实施方案中，杂环含有1或2个氮原子。在另一实施方案中，杂环含有1或2个氮原子和3至6个碳原子。在另一实施方案中，杂环含有1或2个氮原子、3至6个碳原子和1个氧原子。在另一实施方案中，杂环是5至8元的。在另一实施方案中，杂环是5元的。在另一实施方案中，杂环是6元的。在另一实施方案中，杂环是8元的。杂环可以是未取代的或者经一个或多个基团取代，所述基团包括但不限于卤素、CN、NO2、C1至C6烷基、OH、C1至C6烷氧基、C1至C6烷氧基-C1至C6烷氧基、C1至C6烷氧基-C1至C6烷氧基-C1至C6烷氧基、杂环基氧基、C1至C6烷基硫代、芳基、杂环、杂芳基、C(O)(C1至C6烷基)、C(O)(杂环)、C(O)O(C1至C6烷基)、C(O)NH2、C(O)NH(C1至C6烷基)、C(O)N(C1至C6烷基)(C1至C6烷基)、SO2(C1至C6烷基)、SO2(C2至C6炔基)、SO2NH(C1至C6烷基)、SO2(杂环)、NHC(O)(C1至C6烷基)、NHSO2(C1至C6烷基)、N(C1至C6烷基)SO2(C1至C6烷基)、NH2、NH(芳基)、N(C1至C6烷基)(C1至C6烷基)或NHC(O)NH2。
[0100] “烷基硫代”指 S(烷基)，其中烷基是任选取代的并且在本文定义。在一个实施方案中，烷基硫代含有1至6个(包含)碳原子或介于其间的整数或范围。烷基硫代的实例包括但不限于SCH2CH2、SCH2CH2CH3、SCH2CH2CH3、SCH2CH2CH2CH3、SCH2CH2CH2CH3和SCH2CH2CH2CH3。
[0101] “杂芳基硫代”指 S(杂芳基)，其中杂芳基是任选取代的并且是下文定义的。
[0102] “烷基磺酰基”指 SO2(烷基)，其中烷基是任选取代的并且在上文定义。烷基磺酰基的实例包括但不限于CH3SO2、CH3CH2CH2SO2、CH3CH(CH3)SO2、CH3CH2CH2CH2SO2、CH3CH(CH3)CH2SO2、(CH3)3CSO2等。
[0103] “炔基磺酰基”指 SO2(炔基)，其中炔基是任选取代的并且在上文定义。炔基磺酰基的实例包括但不限于CH≡CSO2、CH≡CHCH2SO2等。
[0104] “杂环磺酰基”指 SO2(杂环)，其中杂环是任选取代的并且在上文定义。
[0105] “烷基氨基”指NH或N基团，该基团的氮原子分别连接至1或2个烷基取代基，其中烷基是任选取代的并且在上文定义。烷基氨基通过基团的氮原子结合。在一个实施方案中，烷基氨基指 NH(烷基)。在另一实施方案中，烷基氨基指 N(烷基)(烷基)，即，“二烷基氨基”。在另一实施方案中，烷基氨基指 N(C1至C6烷基)(C1至C6烷基)。在另一实施方案中，烷基氨基指 N(烷基)(杂环)。在另一实施方案中，烷基氨基指 N(烷基)(芳基)。在另一实施方案中，烷基氨基指 N(烷基)(杂芳基)。在另一实施方案中，烷基氨基指 N(烷基)(烯基)。当氮原子结合至两个烷基时，每个烷基可以独立地选择。在另一实施方案中，氮原子上的两个烷基可以与它们连接的氮一起形成3至4元含氮杂环，其中杂环的至多两个碳原子可以被N(H)、N(C1至C6烷基)、N(芳基)、N(杂芳基)、O、S(O)或S(O)2替代。烷基氨基的实例包括但不限于N(CH3)2、N(CH2CH3)(CH3)、N(CH2CH3)2、N(CH2CH2CH3)2、N(CH2CH2CH2CH3)2、N(CH(CH3)2)(CH3)等。
[0106] “芳基氨基”指NH或N基团，该基团的氮原子分别连接至1或2个芳基取代基，其中芳基是任选取代的并且在上文定义。芳基氨基通过基团的氮原子结合。在一个实施方案中，芳基氨基指 NH(芳基)。在另一实施方案中，芳基氨基指 N(芳基)(芳基)，即“二芳基氨基”。当氮原子结合至两个芳基时，每个芳基可以独立地选择。
[0107] “烷基羰基氨基”指 NHC(O)(烷基)或 N(烷基)C(O)(烷基)，其中烷基是如上所述独立定义并且独立任选取代的。烷基羰基氨基的实例包括但不限于CH3CONH、CH3CH2CONH、CH3CH2CH2CONH、CH3CH(CH3)CONH等。
[0108] “芳基羰基氨基”指 NHC(O)(芳基)，其中芳基是如上所述定义并且任选取代的。
[0109] “杂芳基羰基氨基”指 NHC(O)(杂芳基)，其中杂芳基是如上所述定义并且任选取代的。
[0110] “烷基磺酰基氨基”指 NHSO2(烷基)，其中烷基是如上所述定义并且任选取代的。烷基磺酰基氨基的实例包括但不限于CH3SO2NH、CH3CH2SO2NH、CH3CH2CH2SO2NH、CH3CH(CH3)SO2NH等。
[0111] “酯”指 C(O)O(烷基)，其通过碳原子结合。烷基是如上所述定义并且任选取代的。酯的实例包括但不限于C(O)OCH3、C(O)O(CH2CH3)、C(O)O(CH2CH2CH3)、C(O)(O)(CH2CH2CH2CH3)等。
[0112] “氨基甲酸酯”指 NHC(O)O(烷基)或 N(烷基)C(O)O(烷基)，其中烷基是如上所述独立定义并且独立任选取代的。氨基甲酸酯的实例包括但不限于NHC(O)OCH3、NHC(O)OCH2CH3、NHC(O)OCH2CH2CH3、NHC(O)OCH2CH2CH2CH3等。
[0113] “脲”指具有 NHC(O)NH 的基团，其中氮原子之一结合至烷基或杂芳基。烷基或杂芳基是如上所述定义并且任选取代的。脲的实例包括但不限于NHC(O)NHCH3、NHC(O)NHCH2CH3、NHC(O)NHCH2CH2CH3、NHC(O)NHCH2CH2CH2CH3等。
[0114] “烷基氨基羰基”指 C(O)NH(烷基)或 C(O)N(烷基)(烷基)，其中烷基是如上所述独立定义并且独立任选取代的。烷基氨基羰基的实例包括但不限于CH3NHCO、CH3CH2NHCO、CH3CH2CH2NHCO、CH3CH(CH3)NHCO等。
[0115] “芳基氨基羰基”指 C(O)NH(芳基)或 C(O)N(芳基)(芳基)，其中芳基是如上所述独立定义并且独立任选取代的。
[0116] “杂芳基氨基羰基”指 C(O)NH(杂芳基)或 C(O)N(杂芳基)(杂芳基)，其中杂芳基是如上所述独立定义并且独立任选取代的。
[0117] “杂环氨基羰基”指 C(O)NH(杂环)或 C(O)N(杂环)(杂环)，其中杂环基是如上所述独立定义并且独立任选取代的。
[0118] “烷基氨基磺酰基”指 SO2NH(烷基)或 SO2N(烷基)2，其中烷基是如上所述独立定义并且独立任选取代的。烷基氨基磺酰基的实例包括但不限于SO2NHCH3、SO2NHCH2CH3、SO2NHCH2CH3CH3、SONHC(CH3)CH3、SO2N(CH3)2、SO2NH(CH3)(CH2CH3)等。
[0119] “炔基氨基磺酰基”指 SO2NH(炔基)，其中炔基是如上所述定义并且任选取代的。炔基氨基磺酰基的实例包括但不限于CH≡CNHSO2、CH≡CCH2NHSO2等。
[0120] “杂芳基氨基磺酰基”指 SO2NH(杂芳基)或 SO2N(杂芳基)2，其中杂芳基是如上所述独立定义并且独立任选取代的。
[0121] “患者”或“受试者”是哺乳动物，例如人或兽患者或受试者，例如小鼠、大鼠、荷兰猪、狗、猫、马、牛、猪或非人灵长类动物，例如猴、黑猩猩、狒狒或大猩猩。
[0122] 本领域技术人员理解如本文使用的术语%对映体过量(%ee)指样品的对映体纯度，即，样品中一种对映体超过另一种对映体的百分比。在一个实施方案中，可以获得至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或100%的“高”%ee。
[0123] 术语“包含”(comprise,comprises,comprising)被包含性而非排除性地解释。术语“由…组成”(consist,consisting)及其变体被排除性而非包含性地解释。
[0124] 如本文使用的，除非另外指定，术语“约”表示与给定参考10%的变化。
[0125] 用于制备式(I)和(II)化合物的方法在以下实例中给出并总结于方案1-27。本领域技术人员理解，方案1-27可以适于产生其他的根据本发明的式(I)和(II)化合物。
[0126] 以下方法概述了式(I)和(II)化合物的合成。提出以下实例以示例说明本发明的某些实施方案，但是不应解释为限制本发明的范围。
[0127] 方案1
[0128]
[0129] 一方面，使用方案1提供的合成步骤制备式(I-OO)化合物，其中R1-R4、X、m、q和p在本文定义。在该方案中，携带保护基例如丁氧基羰基(BOC)的酸1a被转化成相应的酯2a。在一个实施方案中，使用氯甲酸异丁酯、重氮甲烷和苯甲酸银或氧化银形成酯2a。在另一实施方案中，受保护的酸1a是N-Boc-氮杂环丁烷-2-羧酸(BOC Sciences，Shirley，NY)、Boc-吡咯烷-2-羧酸、Boc-L-哌啶酸或N-Boc-氮杂环庚烷-2-羧酸(AstaTech，Inc.，Bristol，PA)。酯2a然后被转化成苄胺4a。在一个实施方案中，使用三氟乙酸随后苄基溴进行转化。化合物4a然后被还原成相应的醇5a。在一个实施方案中，使用二异丁基氢化铝(DIBAL-H)或氢化铝锂(LAH)进行还原。然后使用适当的氯化剂将醇5a转化成相应的氯化物6a。在一个实施方案中，氯化剂是亚硫酰氯、磷酰氯、五氯化磷或四氯化碳和三苯基膦的组合。氯化物6a然后与取代的氨基茚满7a偶联以提供化合物8a。在一个实施方案中，氯化物6a在NaNH2、叔丁醇钾、叔丁醇钠或丁基锂等存在下与氨基茚满7a偶联。化合物8a的苄基然后通过氢化去除以提供化合物9a。在一个实施方案中，使用甲酸铵、氢气和Pd/C或Pd(OH)2进行氢化。化合物9a的杂环的N原子然后被取代以提供化合物11a。在一个实施方案中，化合物9a的杂环的N原子经R1基团取代。在另一实施方案中，取代是烷基化。在另一实施方案中，使用醛例如丙醛、乙醛或甲醛和NaCNBH3进行烷基化。相同的N原子用R4基团进一步取代以提供式(I-OO)化合物。在一个实施方案中，进一步取代是烷基化。在另一实施方案中，使用烷基卤、三氟甲磺酸烷基酯或苯磺酸烷基酯进行进一步取代。在另一实施方案中，使用1-碘代丙烷、乙基碘、甲基碘、三氟甲磺酸甲酯、三氟甲磺酸乙酯、三氟甲磺酸丙酯或苯磺酸甲酯等进行进一步取代。
[0130] 方案2
[0131]
[0132] 方案2，其中R1-R4、X、q和p在本文定义，描述了式(I-P)化合物的合成。在该方案中，Boc-L-哌啶酸1被转化成相应的酯化合物2，即，(S)-2-(甲氧基羰基甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。在一个实施方案中，使用氯甲酸异丁酯、重氮甲烷和苯甲酸银形成(S)-2-(甲氧基羰基甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。(S)-2-(甲氧基羰基甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯然后被转化成苄胺4，即，(S)-2-(1-苄基-哌啶-2-基)乙酸甲酯。在一个实施方案中，使用三氟乙酸进行转化，随后苄基溴处理。化合物4然后被还原成相应的醇5，即，(S)-2-(1-苄基-哌啶-2-基)-乙醇。在一个实施方案中，使用二异丁基氢化铝(DIBAL-H)进行还原。然后使用亚硫酰氯将醇5转化成相应的氯化物6，即，(S)-1-苄基-2-(2-氯乙基)-哌啶。
氯化物6然后与氨基茚满7a偶联以提供化合物8b。在一个实施方案中，氯化物6a在NaNH2存在下与氨基茚满7a偶联。化合物8b的苄基然后通过氢化去除以提供化合物9b。在一个实施方案中，使用甲酸铵和Pd/C进行氢化。化合物9b的杂环的N原子然后被取代以提供化合物11b。在一个实施方案中，化合物9b的杂环的N原子经R1基团取代。在另一实施方案中，取代是烷基化。在另一实施方案中，使用丙醛和NaCNBH3进行烷基化。化合物11b的相同N原子用R4基团进一步取代以提供式(I-P)化合物。在一个实施方案中，进一步取代是烷基化。在另一实施方案中，使用烷基卤进行进一步取代。在另一实施方案中，使用1-碘代丙烷进行进一步取代。
[0133] 方案3
[0134]
[0135] 方案3描述了化合物9c直接转化成式(I)化合物，其中R1和R4相同，并且R1-R4、m、n、p、q和X在本文定义。通过这么做，可以防止中间体化合物11a或11b的产生。使用至少2当量R1X或R4X进行该转化，其中X是碘、溴或氯。在一个实施方案中，使用至少5当量、至少10当量、至少20当量、至少30当量、至少40当量、至少50当量、至少60当量、至少70当量、至少80当量、至少90当量和至少100当量的R1X或R4X。在另一实施方案中，使用烷化剂进行转化。在另一实施方案中，使用甲基碘、乙基碘、丙基碘、苄基碘、三氟甲磺酸甲酯、三氟甲磺酸乙酯、三氟甲磺酸丙酯或苯磺酸甲酯进行转化。
[0136] 方案4
[0137]
[0138] 相似地，方案4描述了化合物9b直接转化成式(I-Q)化合物，其中R1和R4相同，1 4 1 4
并且R-R、p、q和X在本文定义。使用至少2当量RX或RX进行该转化，其中X是碘、溴或氯。在一个实施方案中，使用烷化剂进行转化。在另一实施方案中，使用甲基碘，乙基碘或丙基碘进行转化。
[0139] 方案5
[0140]1 4
[0141] 式(I)化合物，其中R-R、m、n、p、q和X在本文定义，也可以根据方案5中指出的转化来制备。该方案的初始步骤要求保护化合物12a的N原子以形成保护的化合物13a。在一个实施方案中，使用任选取代的苄基或氨基甲酸酯基团保护化合物12a的N原子。在另一实施方案中，使用苄基、对甲氧基苄基或BOC保护化合物12a的N原子。在另一实施方案中，使用苄基卤例如苄基溴、对甲氧基苄基溴或boc-酐保护化合物12a的N原子。然后使用本领域已知的试剂和技术将化合物13a转化成氯化物14a。在一个实施方案中，使用亚硫酰氯、磷酰氯、五氯化磷或四氯化碳和三苯基膦的组合氯化化合物13a。化合物14a然后与氨基茚满偶联形成化合物15a。在一个实施方案中，化合物14a与氨基茚满化合物7a偶联以提供化合物15a。然后使用本领域标准的试剂和技术脱保护化合物15a的N原子。在一个实施方案中，在催化剂例如Pd-C、Pd(OH)2、三氟乙酸或二噁烷-HCl存在下使用甲酸铵、氢气脱保护N原子。希望地，在升高的温度下进行脱保护以提供化合物16a。然后可以使用
1
本领域技术人员已知的试剂和技术用R 取代化合物16a的N原子以提供化合物17a。在一
1
个实施方案中，使用适当取代的醛或烷基卤进行R 取代化合物16a的N原子以提供化合物
1
17a。在一个实施方案中，可以使用甲醛和NaCNBH3进行R 取代化合物16a的N原子。然后
4
可以在N原子处用R 进一步取代化合物17a以提供式(I)化合物。在一个实施方案中，进一步的取代是烷基化。在另一实施方案中，使用烷基卤、三氟甲磺酸烷基酯或苯磺酸烷基酯
4
例如RX进行进一步取代，其中X是卤素，例如碘、氯或溴、三氟甲磺酸酯或苯磺酸酯。在另一实施方案中，使用1-碘代丙烷、乙基碘、甲基碘、三氟甲磺酸甲酯、三氟甲磺酸乙酯、三氟甲磺酸丙酯或苯磺酸甲酯进行进一步取代。
[0142] 方案6
[0143]
[0144] 以相似的方式，可以根据方案6中指出的转化制备式(I-P)化合物，其中R1-R4、p、q和X在本文定义。初始步骤包括保护哌啶-2-甲醇(12)的N原子以形成保护的(1-苄基哌啶-2-基)-甲醇(13)。在一个实施方案中，使用任选取代的苄基保护哌啶-2-甲醇的N原子。在另一实施方案中，使用苄基保护哌啶-2-甲醇的N原子。在另一实施方案中，使用苄基卤例如苄基溴保护哌啶-2-甲醇的N原子。然后使用本领域已知的试剂和技术将(1-苄基哌啶-2-基)-甲醇转化成1-苄基-2-(氯甲基)哌啶(14)。在一个实施方案中，使用亚硫酰氯氯化(1-苄基哌啶-2-基)-甲醇。化合物14然后与氨基茚满偶联形成化合物15b。在一个实施方案中，化合物14与氨基茚满7a偶联以提供化合物15b。然后使用本领域标准的试剂和技术脱保护化合物15b的N原子。在一个实施方案中，在催化剂例如Pd-C存在下使用甲酸铵脱保护N原子。希望地，在升高的温度下进行脱保护以提供化合物16b。然后可以使用本领域技术人员已知的试剂和技术用R1取代化合物16b的N原子以提供化合物17b。在一个实施方案中，使用适当取代的醛进行R1取代化合物16b的N原子以提供化合物17b。在一个实施方案中，可以使用甲醛进行R1取代化合物16b的N原子。然后可以在N原子处用R4进一步取代化合物17b以提供式(I-P)化合物。在一个实施方案中，进一步的取代是烷基化。在另一实施方案中，使用烷基卤例如R4X进行进一步取代，其中X是碘、氯或溴。在另一实施方案中，使用1-碘代丙烷进行进一步取代。
[0145] 方案7
[0146]
[0147] 方案7示例说明了从化合物9d形成式(I-R)化合物的实施方案，化合物9d即当3 1 4 1 2 4
R 是F，p是1，并且R 和R 相同，并且R、R、R、n、p和X在本文定义的式(I)化合物。在
1 4 1 4
该方案中，化合物9d在N原子处经R 或R 取代。在一个实施方案中，至少2当量RX或RX与化合物9d反应，其中X是离去基团例如碘、氯、溴、三氟甲磺酸酯或苯磺酸酯。在另一实施方案中，至少2当量烷基卤与化合物9d反应。在另一实施方案中，至少2当量甲基碘、乙基碘、丙基碘、三氟甲磺酸甲酯、三氟甲磺酸乙酯或三氟甲磺酸丙酯与化合物9d反应。
[0148] 方案8
[0149]1 2 4
[0150] 方案8提供了从化合物9e制备式(I-S)化合物的概述，其中R、R、R、p和X在1 4
本文定义。在该方案中，化合物9e在N原子处经R 或R 取代。在一个实施方案中，至少2
1 4
当量RX或RX与化合物9e反应，其中X是离去基团例如碘、氯或溴。在另一实施方案中，至少2当量烷基卤与化合物9e反应。在另一实施方案中，至少2当量甲基碘、乙基碘或丙基碘与化合物9e反应。
[0151] 方案9
[0152]1 4
[0153] 方案9提供了通过使用试剂18a的式(I)化合物的可选路线，其中R 和R 相同或1 4
不同，并且R-R、m、n、p、q和X在本文定义。具体地，化合物7a与化合物18a反应以提供化合物17a。在一个实施方案中，在氨基钠、叔丁醇钾、叔丁醇钠或丁基锂存在下进行化合
4
物7a和18a之间的反应。然后可以进行N原子的R 取代以提供式(I)化合物。在一个实
4 4 4
施方案中，R 取代是在N原子处的烷基化。在另一实施方案中，使用RX进行R 取代，其中X是离去基团，例如碘、氯或溴。在另一实施方案中，使用烷基卤例如甲基碘、乙基碘或丙基
4
碘进行R 取代。这样做提供了式(I)化合物。
[0154] 方案10
[0155]
[0156] 方案10提供了通过使用试剂18b的式(I-T)化合物的可选路线，其中R1和R4相1 4
同或不同，并且R-R、p、q和X在本文定义。具体地，化合物7a与化合物18b反应以提供化合物17c。在一个实施方案中，在氨基钠存在下进行化合物7a和18b之间的反应。然后
4 4
可以进行N原子的R 取代，以提供式(I-T)化合物。在一个实施方案中，R 取代是在N原
4 4
子处的烷基化。在另一实施方案中，使用RX进行R 取代，其中X是离去基团，例如碘、溴或
4
氯。在另一实施方案中，使用烷基卤例如甲基碘、乙基碘或丙基碘进行R 取代。这么做提供式(I-T)化合物。
[0157] 方案11
[0158]
[0159] 方案11提供了通过使用试剂20a制备式(I-U)化合物，其中R1和相同，并且R2、3
R、X、n、p和q在本文定义。具体地，化合物20a在酸存在下还原形成化合物21a。在一个实施方案中，在催化剂存在下使用标准试剂和条件例如氢气进行还原。在一个实施方案中，催化剂是PtO2。然后使用适合的保护基保护化合物20a以提供化合物22a。在一个实施方案中，保护基是苄基。在另一实施方案中，使用苄基卤例如苄基溴或对甲氧基苄基溴制备化合物22a。然后化合物22a被氧化形成相应的醛23a。使用本领域技术人员已知的试剂和条件进行该氧化。在一个实施方案中，使用草酰氯、二甲亚砜(DMSO)和三乙胺进行氧化。化合物23a然后与氨基茚满7b偶联以提供化合物24a。该反应通常在三乙酰氧基硼氢化钠
3
存在下进行。然后用R 取代的苯基取代氨基茚满的氮原子。在一个实施方案中，使用溴苯进行取代。在另一实施方案中，在催化试剂存在下进行取代，所述催化试剂例如叔丁醇盐例如叔丁醇钾、叔丁醇钠或叔丁醇锂，磷化剂例如2-二环己基膦基-2'-(N,N-二甲基氨基)联苯(DavePhos)，和钯试剂例如Pd2(dba)3。然后使用标准脱保护试剂去除化合物25a的苄基。在一个实施方案中，使用甲酸铵和钯催化剂例如Pd/C或Pd(OH)2转化化合物25a至化
1 4
合物26a。然后使用烷化剂进行R/R 取代化合物26a以提供化合物(I-U)。在一个实施方案中，烷化剂是烷基卤、三氟甲磺酸烷基酯或苯磺酸烷基酯。在另一实施方案中，烷化剂是
1-碘代丙烷、乙基碘、甲基碘、三氟甲磺酸甲酯、三氟甲磺酸乙酯、三氟甲磺酸丙酯或苯磺酸甲酯等。
[0160] 方案12
[0161]1 4
[0162] 方案12提供了从吡啶-2-丙醇(20)开始合成化合物(I-UU)，其中R-R、X、p和q在本文定义。具体地，在PtO2和盐酸存在下使用氢气还原化合物20以提供盐酸3-环己基-丙-1-醇(21)。然后使用苄基溴用苄基保护化合物21以提供3-(1-苄基-哌啶-2-基)-丙-1-醇(22)。从而使用草酰氯、DMSO和三乙胺氧化化合物22以形成相应的3-(1-苄基-哌啶-2-基)-丙醛(23)。化合物23然后与氨基茚满7b偶联以提供化
合物24b，该反应在三乙酰氧基硼氢化钠存在下进行。然后使用溴苯、叔丁醇钾、DavePhos和Pd2(dba)3用苯基取代氨基茚满的氮原子，以提供化合物25b。然后使用标准脱保护试剂例如甲酸铵去除化合物25a的苄基，以提供化合物26a。烷基化化合物26a以提供化合物(I-UU)。在一个实施方案中，烷化剂是烷基卤、三氟甲磺酸烷基酯或苯磺酸烷基酯，例如
1-碘代丙烷、乙基碘、甲基碘、三氟甲磺酸甲酯、三氟甲磺酸乙酯、三氟甲磺酸丙酯或苯磺酸甲酯等。
[0163] 方案13
[0164]
[0165] 方案13描绘了式(I-V)化合物的制备，其中R1和R4相同并且R1-R4、X、p和q在本文定义。在该方案中，通过酸部分的甲基化将Boc保护的酸1a转化成相应的酯2a。在一个实施方案中，化合物1a与甲基化剂反应以提供化合物2a。在另一实施方案中，化合物1a与甲基碘、三氟甲磺酸甲酯或苯磺酸甲酯等反应。酯2a然后被转化成苄胺4a。在一个实施方案中，使用三氟乙酸随后苄基溴进行转化。化合物4a然后被还原成相应的醇5a。在一个实施方案中，使用DIBAL-H或LAH进行还原。然后使用氧化剂将醇5a转化成相应的醛
23a。在一个实施方案中，氧化剂是草酰氯、DMSO和三乙胺。化合物23a然后与取代的氨基茚满7b偶联以提供化合物24c。在一个实施方案中，化合物23a在三乙酰氧基硼氢化钠存在下与氨基茚满7b偶联。然后用任选取代的苯基取代化合物24c的N原子以提供化合物
8c。在一个实施方案中，化合物8c的N原子被溴苯取代。然后通过氢化去除化合物8c的苄基以提供化合物9f。在一个实施方案中，使用甲酸铵、氢气和Pd/C或Pd(OH)2进行氢化。
然后化合物9f的杂环的N原子被取代以提供化合物(I-V)。在一个实施方案中，使用烷化剂进行取代。在另一实施方案中，使用烷基卤、三氟甲磺酸烷基酯或苯磺酸烷基酯进行取代。在另一实施方案中，使用1-碘代丙烷、乙基碘、甲基碘、三氟甲磺酸甲酯、三氟甲磺酸乙酯、三氟甲磺酸丙酯或苯磺酸甲酯等进行取代。在另一实施方案中，使用至少2当量烷化剂进行取代。
[0166] 方案14
[0167]
[0168] 方案14提供了式(I-VV)化合物的合成，其中R1-R4、X、p和q在本文定义。在该方案中，使用甲基碘、三氟甲磺酸甲酯或苯磺酸甲酯等通过酸部分的甲基化将Boc-吡咯烷-2-羧酸(1c)转化成吡咯烷-1,2-二羧酸1-叔丁酯2-甲基酯(2d)。然后使用三氟乙酸随后苄基溴将酯2d转化成1-苄基-吡咯烷-2-羧酸甲基酯(4c)。然后使用DIBAL-H或LAH将化合物4c还原成相应的(1-苄基-吡咯烷-2-基)-甲醇(5c)。然后使用氧化剂将醇5c转化成相应的1-苄基-吡咯烷-2-甲醛(23b)。在一个实施方案中，氧化剂是草酰氯、DMSO和三乙胺。化合物23b然后与取代氨基茚满7b的偶联以提供化合物24d。在一个实施方案中，化合物23b在三乙酰氧基硼氢化钠存在下与氨基茚满7b偶联。化合物24d的N原子然后用苯基取代以提供化合物8d。在一个实施方案中，使用溴苯完成化合物24d的N原子的取代。然后通过氢化去除化合物8d的苄基以提供化合物9g。在一个实施方案中，使用甲酸铵、氢气和Pd/C或Pd(OH)2进行氢化。然后使用烷基卤、三氟甲磺酸烷基酯或苯磺酸烷基酯烷基化化合物9g的杂环的N原子以提供式(I-VV)的化合物。在一个实施方案中，使用1-碘代丙烷、乙基碘、甲基碘，三氟甲磺酸甲酯、三氟甲磺酸乙酯、三氟甲磺酸丙酯或苯磺酸甲酯等进行取代。在另一实施方案中，使用至少2当量的烷化剂进行取代。
[0169] 方案15
[0170]
[0171] 另一方面，制备式(I-W)化合物，其中R1-R4、A、X、m、q和p在本文定义。在该方案中，如方案1所述将酸1a转化成相应的酯2b。使用适当的还原剂将酯2b还原成相应的醇37a。在一个实施方案中，还原剂是氢化物剂例如氢化铝锂或DIBAL-H。然后醇37a被氧化以形成醛38a。可以使用本领域技术人员已知的试剂和条件进行该氧化。在一个实施方案中，使用草酰氯、DMSO和三乙胺进行氧化。化合物38a然后与氨基茚满7b偶联以提供化合物39a。可以在温和还原剂例如三乙酰氧基硼氢化钠存在下进行该反应。化合物39a的氮原子然后用A-(R3)q基团取代以提供化合物40a。在一个实施方案中，用任选取代的苯基取代化合物39a。在另一实施方案中，用任选取代的杂芳基取代化合物39a。在另一实施方案中，使用溴苯进行取代。在另一实施方案中，在催化试剂存在下进行取代，所述催化试剂例如叔丁醇盐例如叔丁醇钾、叔丁醇钠或叔丁醇锂，磷化剂例如DavePhos，和钯试剂例如Pd2(dba)3。然后使用标准脱保护试剂去除化合物40a的叔丁氧基羰基。在一个实施方案中，使用酸性介质例如二噁烷-HCl或三氟乙酸将化合物40a转化成化合物41a。然后使用烷化剂将化合物41a进行R1/R4取代，其中R1和R4相同，以提供方案1所述的化合物(I-W)。
[0172] 方案16
[0173]
[0174] 方案16提供了式(I-WW)化合物的制备，其中R1-R4、A、p、q和X在本文定义。在该方案中，吡咯烷-1,2-二羧酸1-叔丁酯(1c)被转化成相应的2-甲氧基羰基甲基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(2e)。在一个实施方案中，使用氯甲酸异丁酯、重氮甲烷和苯甲酸银形成2-甲氧基羰基甲基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯。然后使用还原剂将2-甲氧基羰基甲基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(2e)还原成2-(2-羟基乙基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(37)。在一个实施方案中，还原剂是氢化物剂，例如氢化铝锂。化合物37然后被氧化形成2-(2-氧代乙基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(38)。使用草酰氯、DMSO和三乙胺进行该氧化。化合物38然后与氨基茚满7b偶联以提供化合物39b。该反应可在三乙酰氧基硼氢化钠存在下进行。化合物3
39b的氮原子然后用A-(R)q基团取代以提供化合物40b。在一个实施方案中，任选在催化试剂存在下使用溴苯进行取代，所述催化试剂例如叔丁醇盐例如叔丁醇钾、叔丁醇钠或叔丁醇锂，磷化剂例如DavePhos，和钯试剂例如Pd2(dba)3。然后使用二噁烷-HCl或三氟乙酸
1 4
去除化合物40b的叔丁氧基羰基以提供化合物41b。然后使用烷化剂例如烷基卤进行R/R取代化合物41b，以提供化合物(I-WW)。
[0175] 方案17
[0176]
[0177] 方案17提供了制备制备式(I-W)化合物的第二路线，其中R1和R4相同并且R1-R4、A、m、p、q和X在本文定义。具体地，化合物12b的氮原子被保护以提供化合物37a。在一个实施方案中，用保护基例如叔丁氧基羰基保护氮原子。化合物37a然后被氧化以形成相应的醛38a。使用本领域技术人员已知的试剂和条件进行该氧化。在一个实施方案中，使用草酰氯、DMSO和三乙胺进行氧化。化合物38a然后与氨基茚满7b偶联以提供化合物39a。通常可以在温和还原剂例如三乙酰氧基硼氢化钠存在下进行该反应。然后用A-(R3)q基团取代化合物39a的氮原子以提供化合物40a。在一个实施方案中，化合物39a用任选取代的苯基取代。在另一实施方案中，化合物39a用任选取代的杂芳基取代。在另一实施方案中，使用溴苯或溴吡啶例如2-溴-吡啶、3-溴-吡啶或4-溴-吡啶进行取代。在另一实施方案中，在催化试剂存在下进行取代，所述催化试剂例如叔丁醇盐例如叔丁醇钾、叔丁醇钠或叔丁醇锂，膦催化剂例如P(i-BuNCH2CH2)3N，和钯试剂例如Pd2(dba)3。然后使用标准脱保护试剂去除化合物40a的保护基，即叔丁氧基羰基，以提供化合物41a。在一个实施方案中，使用酸性介质例如二噁烷-HCl或三氟乙酸进行脱保护。然后使用烷化剂进行R1/R4取代化合物26a，其中R1和R4相同，以提供化合物(I-W)。在一个实施方案中，烷化剂是烷基卤、三氟甲磺酸烷基酯或苯磺酸烷基酯。在另一实施方案中，烷化剂是1-碘代丙烷、乙基碘、甲基碘、三氟甲磺酸甲酯、三氟甲磺酸乙酯、三氟甲磺酸丙酯或苯磺酸甲酯等。
[0178] 方案18
[0179]
[0180] 方案18提供了式(I-WWW)化合物的制备，其中R1和R4相同并且R1-R4、A、p、q和X在本文定义。具体地，哌啶-2-乙醇(12c)的氮原子被叔丁氧基羰基保护以提供2-(2-羟基乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(37b)。化合物37b然后被氧化以形成2-(2-氧代乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(38b)。在一个实施方案中，使用草酰氯、DMSO和三乙胺进行氧化。化合物38b然后与氨基茚满7b偶联以提供化合物39c。通常在三乙酰氧基硼氢化钠存在下进行3
该反应。然后用A-(R)q基团取代化合物39c的氮原子以提供化合物40c。在一个实施方案中，使用任选取代的苯基进行取代。在另一实施方案中，使用任选取代的杂芳基进行取代。
在另一实施方案中，使用溴苯或溴代吡啶例如2-溴-吡啶、3-溴-吡啶或4-溴-吡啶进行取代。在另一实施方案中，在催化试剂存在下进行取代，所述催化试剂例如叔丁醇盐例如叔丁醇钾、叔丁醇钠或叔丁醇锂，膦催化剂例如P(i-BuNCH2CH2)3N，和钯试剂例如Pd2(dba)3。然后使用标准脱保护试剂去除化合物40c的保护基，即叔丁氧基羰基，以提供化合物41c。在一个实施方案中，使用酸性介质例如二噁烷-HCl或三氟乙酸进行脱保护。然后使用烷化剂
1 4 1 4
进行R/R 取代化合物41c，其中R 和R 相同，以提供化合物(I-WWW)。在一个实施方案中，烷化剂是烷基卤、三氟甲磺酸烷基酯或苯磺酸烷基酯。在另一实施方案中，烷化剂是1-碘代丙烷、乙基碘、甲基碘、三氟甲磺酸甲酯、三氟甲磺酸乙酯、三氟甲磺酸丙酯或苯磺酸甲酯等。
[0181] 方案19
[0182]
[0183] 方案19提供了通过可以如本文所述制备的化合物39a制备化合物(I-W)的第三1 4 3
路线，其中R-R、A、m、p、q和X在本文定义。化合物39a的氮原子被A-(R)q取代以提供化合物40a。在一个实施方案中，化合物39a被任选取代的苯基取代。在另一实施方案中，化合物39a被任选取代的杂芳基取代。在另一实施方案中，使用溴苯、溴代吡啶或溴代嘧啶进行取代。在另一实施方案中，在催化试剂存在下进行取代，所述催化试剂例如叔丁醇盐例如叔丁醇钾、叔丁醇钠或叔丁醇锂，膦催化剂例如P(i-BuNCH2CH2)3N，或强碱例如Verkade超级碱，和钯试剂例如Pd2(dba)3。然后使用标准脱保护试剂去除化合物40a的保护基，即叔丁氧基羰基，以提供化合物41a。在一个实施方案中，使用酸性介质例如二噁烷-HCl或三氟乙
1 4 1 4
酸进行脱保护。然后使用烷化剂进行R/R 取代化合物41a，其中R 和R 相同，以提供化合物(I-W)。在一个实施方案中，烷化剂是烷基卤、三氟甲磺酸烷基酯或苯磺酸烷基酯。在另一实施方案中，烷化剂是1-碘代丙烷、乙基碘、甲基碘、三氟甲磺酸甲酯、三氟甲磺酸乙酯、三氟甲磺酸丙酯或苯磺酸甲酯等。
[0184] 方案20
[0185]1 4
[0186] 方案20提供了通过化合物39c的化合物(I-WWW)的另一种制备，其中R-R、A、3
p、q和X在本文定义，其中化合物39c的氮原子被A-(R)q取代以提供化合物40c。在一个实施方案中，使用溴苯、溴代吡啶或溴代嘧啶进行取代。在另一实施方案中，在叔丁醇钠、P(i-BuNCH2CH2)3N和Pd2(dba)3存在下进行取代。然后使用标准脱保护试剂去除化合物40c的保护基，即叔丁氧基羰基，以提供化合物48a。在一个实施方案中，使用二噁烷-HCl或三
1 4 1 4
氟乙酸进行脱保护。然后使用烷化剂进行R/R 取代化合物48a，其中R 和R 相同，以提供化合物(I-WWW)。在一个实施方案中，烷化剂是烷基卤，例如1-碘代丙烷、乙基碘、甲基碘、三氟甲磺酸甲酯、三氟甲磺酸乙酯、三氟甲磺酸丙酯或苯磺酸甲酯等。
[0187] 方案21
[0188]
[0189] 方案21提供了化合物(I-WWW)的另外制备，其中R1-R4、A、m、p、q和X在本文定义。具体地，化合物12b的氮原子被脱保护以提供化合物5a。在一个实施方案中，使用试剂例如苄基溴的保护基例如苄基保护氮原子。化合物5a然后被氧化形成相应的醛23c。使用本领域技术人员已知的试剂和条件进行该氧化。在一个实施方案中，使用氧化剂例如草酰氯/DMSO和强碱例如三乙胺进行氧化。化合物23c然后与氨基茚满7b偶联以提供化合物3
24f。通常在温和还原剂例如三乙酰氧基硼氢化钠存在下进行该反应。然后，用A-(R)q基团取代化合物24f的氮原子以提供化合物8e。在一个实施方案中，用任选取代的苯基取代化合物24f。在另一实施方案中，用任选取代的杂芳基取代化合物24f。在另一实施方案中，使用溴-芳基或溴-杂环基团进行取代。在另一实施方案中，使用溴苯，溴代吡啶或溴代噻唑进行取代。在另一实施方案中，在催化试剂存在下进行取代，所述催化试剂例如叔丁醇盐例如叔丁醇钾、叔丁醇钠或叔丁醇锂，碱例如Verkade超级碱，和钯试剂例如Pd2(dba)3。然后使用标准脱保护试剂去除化合物8e的保护基，即苄基，以提供化合物41a。在一个实施方
1
案中，使用氯甲酸异丁酯进行脱保护。然后进行R 取代化合物41a以提供化合物61c。在
1
一个实施方案中，R 取代是烷基化。在另一实施方案中，使用醛例如丙醛、乙醛或甲醛进行
4
烷基化。然后使用烷化剂进行R 取代化合物61c。在一个实施方案中，烷化剂是烷基卤、三氟甲磺酸烷基酯或苯磺酸烷基酯。在另一实施方案中，烷化剂是1-碘代丙烷、乙基碘、甲基碘、三氟甲磺酸甲酯、三氟甲磺酸乙酯、三氟甲磺酸丙酯或苯磺酸甲酯等。
[0190] 方案22
[0191]
[0192] 方案22提供了化合物(I-WWW)的另一种制备，其中R1-R4、A、X、p和q在本文定义。具体地，保护哌啶-2-乙醇(12c)的氮原子以提供2-(1-苄基哌啶-2-基)乙醇(5)。在一个实施方案中，使用苄基溴的苄基保护氮原子。然后氧化2-(1-苄基哌啶-2-基)乙醇以形成(1-苄基哌啶-2-基)乙醛(23c)。在一个实施方案中，使用草酰氯、DMSO和三乙胺进行氧化。(1-苄基哌啶-2-基)乙醛然后与氨基茚满7b偶联以提供化合物24e。在一个实
3
施方案中，在三乙酰氧基硼氢化钠存在下进行反应。化合物24e的氮原子然后用A-(R)q基团取代以提供化合物8f。在一个实施方案中，使用溴苯，溴代吡啶或溴代噻唑、催化试剂进行取代，所述催化试剂例如叔丁醇盐例如叔丁醇钾、叔丁醇钠或叔丁醇锂，碱例如Verkade超级碱，和钯试剂例如Pd2(dba)3。然后使用氯甲酸异丁酯去除化合物8f的保护基，即苄基。
1
化合物41c然后进行R 取代以提供化合物61d。在一个实施方案中，使用醛例如丙醛、乙醛
1
或甲醛进行R 取代。然后使用烷化剂例如烷基卤、三氟甲磺酸烷基酯或苯磺酸烷基酯进行
4
R 取代化合物61d以提供化合物(I-WWW)。
[0193] 方案23
[0194]
[0195] 方案23提供了R1和R4结合并且R2、R3、A、m、p、q、Y和X在本文定义的化合物，即化合物(I-Y)的合成。具体地，化合物41a的氮原子可以被任选取代的-CH2YCH2-基团取代1 4
以形成式(I-Y)化合物。在一个实施方案中，R 和R 结合形成碳环，即，其中Y是碳原子。
1 4 1 4
在另一实施方案中，R 和R 结合形成杂环。在另一实施方案中，R 和R 结合形成环醚。在另一实施方案中，使用1-卤代-2-(2-氯-烷氧基)-烷例如1-氯-2-(2-氯-乙氧基)-乙烷进行氮原子的取代。
[0196] 方案24
[0197]
[0198] 方案24提供了化合物即化合物(I-YY)的合成，其中R1和R4结合形成杂环并且2 3 1 4
R、R、A、p、q和X在本文定义。在一个实施方案中，R 和R 结合形成环醚。在另一实施方案中，使用1-卤代-2-(2-氯-烷氧基)-烷例如1-氯-2-(2-氯-乙氧基)-乙烷进行氮
原子的烷基化。
[0199] 方案25
[0200]
[0201] 方案25提供了式(I)化合物的制备，其中R1-R4、A、m、n、p、q和X在本文定义。通过首先氨化酮70a以提供化合物7c来制备这些化合物。在一个实施方案中，使用伯胺氨化酮70a。在另一实施方案中，使用H2N-A-(R3)q氨化酮70a。在温和还原剂例如Na(OAc)3BH存在下进行该转化。化合物7c然后与胺58a偶联以提供化合物8f。胺58a的离去基团可以被本领域技术人员选择。在一个实施方案中，离去基团是卤素、甲磺酸酯、甲苯磺酸酯或三氟甲磺酸酯。在另一实施方案中，使用醇盐例如上文描述的那些进行化合物7c和58a的偶联。然后使用本领域已知的技术和试剂去除苄基来脱保护化合物8f以提供化合物9h。在一个实施方案中，通过氢化进行脱保护。在另一实施方案中，使用甲酸铵、氢气和Pd/C或Pd(OH)2进行氢化。然后使用上述试剂和条件，例如针对方案1-24的描述，连续地进行R1、然后R4取代氮环原子以分别提供化合物61a和(I)。
[0202] 方案26
[0203]
[0204] 方案26提供了式(I-WWWW)化合物的制备，其中R1-R4、p、q和X在本文定义。通过氨化酮70a以提供化合物7d来制备这些化合物。在一个实施方案中，在温和还原剂例如Na(OAc)3BH存在下使用伯胺71a氨化酮70a。化合物7d然后在醇盐存在下与胺58偶联以提供化合物8e。然后通过氢化脱保护化合物8e以提供化合物9i。然后使用上述试剂和条1 4
件，连续地进行R、然后R 取代化合物9i的氮环原子以分别提供化合物61b和(I-WWWW)。
[0205] 方案27
[0206]
[0207] 方案27提供了通过化合物40a的化合物(I-Z)的可选路线，其中R1-R3、A、m、p、q和X在本文定义。化合物37a可以如在此通过引用并入的Tetrahedran，2007，63:3000-3005中所讨论的制备，然后氧化形成化合物38a。可以使用氧化剂例如次氯酸钠和2,2,6,6-四甲基哌啶-1-基)氧烷基(TEMPO)催化剂进行氧化。然后通过向化合物7c和Na(OAc)3BH的溶液添加化合物38a来制备化合物40a。本发明人发现该添加顺序提供了化合物40a以高对映体过量(ee)的生成。然后使用标准还原剂还原BOC基团来脱保护化合物40a以形成二胺41c。在一个实施方案中，使用氢化铝锂将BOC基团还原成甲基。然后如上针对其他1 4 1
R/R 取代讨论的，进行R 取代化合物41c的氮原子以提供式(I-Z)的化合物。在一个实施方案中，在溶剂例如二氯乙烷或甲基叔丁基醚中使用烷基卤例如甲基溴或甲基碘进行烷基化。该路线还可以用于制备化合物(I-Z)的(S)-对映体。
[0208] 在一个实施方案中，提供了制备式(I)化合物的方法，其中A是苯基，所述方法包括(i)转化 至 (ii)转化化合物2a至 (iii)还原化合物4a至 (iv)氯化化合物5a以形成 (v)偶
联化合物6a和 以形成 (vi)通过氢
化去除化合物8a的苄基以形成 (vii)R1取代化合物9a以形成
4
和(viii)R 取代化合物11a。
[0209] 在另一实施方案中，提供了制备本发明化合物的方法，其中A是苯基，所述方法包括(i)转化 至 (ii)转化化合物2a至 (iii)还原化合物4a至 (iv)氯化化合物5a以形成 (v)偶
联化合物6a和 以形成 (vi)通过氢化
1
去除化合物8a的苄基以形成 (vii)R 取代化合物9a以形成
4
和(viii)R 取代化合物11a。
[0210] 在另一实施方案中，提供了制备本发明化合物的方法，其中A是苯基，并且所述方1 4
法包括R 和R 取代 一方面，化合物9c是
[0211] 在另一实施方案中，提供了制备本发明化合物的方法，其中A是苯基，并且所述方法包括(i)保护 的氮原子以形成 ii)氯化化合物13a以形成(iii)偶联化合物14a和 以形成
1
(iv)脱保护化合物15a以形成 (v)R 取代化合物16a以形成
和(vi)R4取代化合物17a。
[0212] 在另一实施方案中，提供了制备本发明化合物的方法，其中A是苯基，并且所述方法包括(i)保护哌啶-2-甲醇的氮原子以形成 (ii)氯化化合物13a以形成 (iii)偶联化合物14a和 以形成
1
(iv)脱保护化合物15a以形成 (v)R 取代化合物16a以形成
和(vi)R4取代化合物17a。
[0213] 在另一实施方案中，提供了制备本发明化合物的方法，其中A是苯基，R3是2-F，m1 4
是2，并且q是1，并且所述方法包括R 和R 取代 一方面，化合物9d
是
[0214] 在另一实施方案中，提供了制备本发明化合物的方法，其中A是苯基，并且所述方4
法包括(i)偶联 和 以形成 和(ii)R 取代
化合物17a。
[0215] 在另一实施方案中，提供了制备本发明化合物的方法，其中A是苯基，并且所述方4
法包括(i)偶联 和 以形成 和(ii)R
取代化合物17a。
[0216] 在另一实施方案中，提供了制备本发明化合物的方法，其中m是3，并且所述方法包括(i)使用酸还原 以形成 (ii)用苄基保护化合物21a以提供 (iii)氧化化合物22a以提供 (iv)偶联化合
3
物23a和 以提供 (v)用R 取代的苯基取代化
合物24a的氮原子以形成 (vi)脱保护化合物25a以提供
1 4
和(v)R 和R 取代化合物26a。
[0217] 在另一实施方案中，提供了制备本发明化合物的方法，其中m是3，并且所述方法包括(i)使用酸还原 以形成 (ii)用苄基保护化合物21a以提供 (iii)氧化化合物22a以提供 (iv)偶联化
3
合物23a和 以提供 (v)用R 取代的苯基
取代化合物24a的氮原子以形成 (vi)脱保护化合物25a以提供
1 4
和(v)R 和R 取代化合物26a。
[0218] 在另一实施方案中，提供了制备本发明化合物的方法，其中A是苯基，并且所述方法包括(i)转化 至 (ii)转化化合物2a至 (iii)还原化合物4a至 (iv)氧化化合物5a以提供 (v)偶联化
3
合物23a和 以提供 (v)用R 取代的苯基取代
化合物24c的氮原子以提供 (vi)脱保护化合物8c以形成
1 4
和(vii)R 和R 取代氮环。
[0219] 在另一实施方案中，提供了制备本发明化合物的方法，其中A是苯基，并且所述方法包括(i)转化 至 (ii)转化化合物2c至 (iii)还原化合物4c至 (iv)氧化化合物5c以提供 (v)偶联化合物23a
3
和 以提供 (v)用R 取代的苯基取代化合物24c的氮
原子以提供 (vi)脱保护化合物8c以形成 和
(vii)R1和R4取代氮环。
[0220] 在另一实施方案中，提供了制备本发明化合物的方法并且所述方法包括(i)转化至 (ii)还原化合物2b至 (iii)氧化化合物37a至(iv)偶联化合物38a和 以形成 (v)
偶联化合物39a和A-(R3)q基团以形成 (vi)脱保护化合物40a
1 4
以形成 和(vii)R 和R 取代化合物41a。
[0221] 在另一实施方案中，提供了制备本发明化合物的方法并且所述方法包括(i)转化至 (ii)还原化合物2b至 (iii)氧化化合物37a至(iv)偶联化合物38a和 以形成 (v)
3
偶联化合物39a和A-(R)q基团以形成 (vi)脱保护化合物40a以形
1 4
成 和(vii)R 和R 取代化合物41a。
[0222] 在另一实施方案中，提供了制备本发明化合物的方法并且所述方法包括(i)BOC保护 以形成 (ii)氧化化合物37a以形成 (iii)偶联3
化合物38a和 以形成 (iv)用A-(R)q取代化合物
39a以形成 (v)脱保护化合物40a以形成 和
(vi)R1和R4取代化合物41a。
[0223] 在另一实施方案中，提供了制备本发明化合物的方法，其中n是2，并且所述方法3
包括(i)用A-(R)q取代 以形成
1 4
(ii)脱保护化合物40a以形成 和(iii)R 和R 取代化合物41a。
[0224] 在另一实施方案中，提供了制备本发明化合物的方法，其中n是2，并且所述方法3
包括(i)用A-(R)q取代 以形成 (ii)
1 4
脱保护化合物40a以形成 和(iii)R 和R 取代化合物41a。
[0225] 在另一实施方案中，提供了制备本发明化合物的方法并且所述方法包括(i)保护以形成 (ii)氧化化合物5a以形成 (iii)偶联化合3
物23a和 以形成 (iv)用A-(R)q取代化合物24f以
形成 (v)脱保护化合物8e以形成
1 4
(vi)R 取代化合物41a以形成 和(vii)R 取代化合物61c。
[0226] 在另一实施方案中，提供了制备本发明化合物的方法，其中n是2，并且所述方法包括(i)用A-(R3)q取代 以形成 (ii)1 4
脱保护化合物40a以形成 和(iii)R 和R 取代化合物41a。
[0227] 在另一实施方案中，提供了制备本发明化合物的方法并且所述方法包括(i)保护以形成 (ii)氧化化合物5a以形成 (iii)偶联化合3
物23a和 以形成 (iv)用A-(R)q取代化合物
24f以形成 (v)脱保护化合物8e以形成
1 4
(vi)R 取代化合物41a以形成 和(vii)R 取代化合物61c。
[0228] 在另一实施方案中，提供了制备本发明化合物的方法并且所述方法包括使与X"-(CH2)r-Y-(CH2)s-X"反应，其中r是1至4；s是1至4；Y是CH2、O或S；和X"是离去基团。
[0229] 在另一实施方案中，提供了制备本发明化合物的方法并且所述方法包括使与ClCH2CH2OCH2CH2Cl反应。
[0230] 在另一实施方案中，提供了制备本发明化合物的方法并且所述方法包括(i)使3
与H2N-A-(R)q反应以形成
[0231] (ii)偶联化合物7c和 以形成1
(iii)脱保护化合物8f以形成 (iv)R 取代化合物9h以形成
4
和(v)R 取代化合物61a。
[0232] 在另一实施方案中，提供了制备本发明化合物的方法并且所述方法包括(i)使 与 反应形成 (ii)偶联化合物7c和 以形成 (iii)脱保护化合物8f以形成
(iv)R1取代化合物9h以形成 和(v)R4取代化
合物61a。
[0233] 在另一实施方案中，提供了制备本发明化合物的方法，其中R4是CH3，并且所述方法包括(i)氧化 至 (ii)偶联化合物38a和 以形成 (iii)还原化合物40a至 和(iv)
1
R 取代化合物41c。一方面，通过向含有化合物7c和温和还原剂的溶液添加化合物38a来制备化合物40a。另一方面，温和还原剂是Na(OAc)3BH。另一方面，化合物40a的%ee是至少约97%ee。
[0234] 本发明的药物组合物/制剂包含式(I)和/或(II)的化合物和任选其他药学惰性或非活性成分。在一个实施方案中，药学惰性或非活性成分是一种或多种药学可接受的载体或赋形剂。本发明还涵盖组合式(I)和/或(II)的化合物和一种或多种治疗剂，即如下描述的活性成分。在另一实施方案中，式(I)和/或(II)的化合物与一种或多种惰性/非活性成分和一种或多种治疗剂组合。
[0235] 本发明的药物组合物包含有效治疗受试者疼痛或痒的量的式(I)和/或(II)化合物。具体地，达到治疗效果的式(I)和/或(II)化合物的剂量取决于诸如以下因素：配方、药物的药理学效力、患者的年龄、体重和性别、待治疗的病症、患者症状的严重度、具体的式(I)和/或(II)化合物、递送途径和患者的响应模式。还考虑式(I)和/或(II)化合物的治疗和剂量可以单位剂量形式施用，并且本领域技术人员会相应地调整单位剂量形式以反映相对活性水平。关于要使用的特定剂量(和每天施用的次数)的决策在普通技术医师的判断内，并且可以通过针对特定环境的剂量滴定而改变，以产生希望的治疗效果。
[0236] 在一个实施方案中，治疗有效量是约0.0001%至约25%w/w。在另一实施方案中，治疗有效量小于约20%w/w、15%w/w、约10%w/w、约5%w/w或约1%w/w。在另一实施方案中，治疗有效量是约0.0001%至约10%w/w。在另一实施方案中，治疗有效量是约0.005至约5%w/w。在另一实施方案中，治疗有效量是约0.01至约5%w/w。在另一实施方案中，治疗有效量是约0.01%w/w、约0.05%w/w、约0.1%w/w、约0.2%w/w、约0.3%w/w、约0.4%w/w、约0.5%w/w、约0.6%w/w、约0.7%w/w、约0.8%w/w、约0.8%w/w、约0.9%w/w、约1%w/w、约2%w/w、约3%w/w、约4%w/w或约5%w/w。
[0237] 可以规律的时间表，即以每天、每周、每月或每年的基础，或者以变化的施用天、周、月等不规律的时间表，提供治疗有效量。可选地，待施用的治疗有效量可以改变。在一个实施方案中，第一剂的治疗有效量高于随后剂的一个或多个的治疗有效量。在另一实施方案中，第一剂的治疗有效量低于随后剂的一个或多个的治疗有效量。可以经不同时段施用等效剂量，包括但不限于约每2小时、约每6小时、约每8小时、约每12小时、约每24小时、约每36小时、约每48小时、约每72小时、约每周、约每2周、约每3周、约每月、约每2月、约每3月和约每6月。将根据护理从业者的判断来确定对应于完整的疗程的剂量的数目和频率。本文描述的治疗有效量指给定时段施用的总量；即，如果施用超过一种式(I)和/或(II)的化合物，治疗有效量对应于施用的总量。
[0238] 式(I)和/或(II)化合物可以通过任何途径施用，考虑已经选择的特定病症。式(I)和/或(II)化合物可以口服、通过注射、吸入(包括口服、鼻内和气管内)、眼部、透皮(通过简单的被动扩散制剂或通过使用例如离子电渗、微针头的微穿孔、射频消融等)、血管内、皮下、肌肉内、舍下、颅内、硬膜外、鞘内、直肠、膀胱内和阴道等递送。希望地，式(I)和/或(II)化合物可以通过注射、透皮或局部施用。在一个实施方案中，根据施用途径，式(I)和/或(II)化合物的量是制剂的约0.05%w/w至约10%w/w。当眼部使用时，式(I)和/或(II)化合物的量可以是约0.05%w/w至约2.5%w/w。
[0239] 当用于皮肤麻醉时，式(I)和/或(II)化合物的量是约0.1%w/w至约10%w/w。当用于非眼部、局部(例如，口服、鼻、直肠、尿道、阴道)施用时，式(I)和/或(II)化合物的量是约0.5%w/w至约5%w/w。当用作注射时，式(I)和/或(II)化合物的量是注射剂的约0.25%w/w至约3%w/w。当用于输注(例如，硬膜外、脊柱或区域麻醉)时，式(I)和/或(II)化合物的量是约0.1%w/w至约3%w/w。
[0240] 在一个实施方案中，式(I)和/或(II)化合物可以局部施用至眼睛，例如作为溶液、悬液或软膏。可以使用的眼部相容性载体的实例包括但不限于含有眼部相容性防腐剂、表面活性剂、缓冲剂和粘度调节剂的水溶液，例如盐水溶液、油溶液或软膏。这些组合物还包含稳定剂、抗菌剂，并且可以适合眼部施用的不同的剂量单位生产。还可以使用可溶或不可溶的药物插入物。
[0241] 在另一实施方案中，式(I)和/或(II)化合物可以通过注射施用。可以制备作为水溶液的注射或输注溶液。希望地，式(I)和/或(II)化合物以约0.1%w/w至约3%w/w的浓度存在。这些溶液还可以包含稳定剂、抗菌剂、缓冲剂，并且可以不同的剂量单位安瓿或瓶生产。
[0242] 在另一实施方案中，式(I)和/或(II)化合物可以直肠施用。直肠施用的剂量单位可以软膏或栓剂形式制备，其包含与中性脂肪基底混合的式(I)和/或(II)化合物，或者它们可以明胶直肠胶囊的形式制备，其包含与例如植物油或石蜡油混合的式(I)和/或(II)化合物。包含至少一种式(I)和/或(II)化合物的软膏、栓剂或乳霜用于治疗痔疮。
[0243] 在另一实施方案中，式(I)和/或(II)化合物可以透皮施用。许多透皮递送系统是已知的。为了用于这些系统，式(I)和/或(II)化合物可以与许多赋形剂混合，其可以包括例如pH调节剂、防腐剂和/或穿透增强剂以形成溶液、软膏、乳霜、洗剂或凝胶。这种组合物可以形成透皮递送系统(“贴片”等)的组成部分。
[0244] 可以选择允许或帮助本发明化合物穿过皮肤层并到达靶区域、例如肌肉组织或神经周围空间的透皮递送系统。这种系统可以包括含有皮肤穿透增强剂的制剂。皮肤穿透增强剂的实例包括物理增强剂(超声、离子电渗、电穿孔、磁泳、微针头)、囊泡、微粒系统(脂质体、非离子表面活性剂泡囊、传递体、微乳液、固体脂质纳米粒子)和化学增强剂(亚砜、氮酮、乙二醇、链烷醇、萜等)。化学增强剂的其他实例包括例如丙二醇、聚乙二醇、异丙醇、乙醇、油酸、N-甲基吡咯烷酮，其增加了皮肤对化合物的通透性，并且允许化合物穿过皮肤到达更深组织。化学增强剂的其他实例参见，Sagie & Kohane，"Prolonged Sensory-Selective Nerve Blockade"，PNAS，2010(8)：3740-3745，2010，其在此通过引用并入。
[0245] 可以单独或者与一种或多种用于施用的药物载体一起配制含有式(I)和/或(II)化合物的药物组合物。药物载体的量由式(I)和/或(II)化合物的溶解度和化学性质、选择施用途径和标准的药理学实践确定。药物载体可以是固体或液体，并且可以加入固体和液体载体。许多适合的液体载体是已知的，并且可以由本领域技术人员容易地选择。这种载体可以包括例如二甲亚砜(DMSO)、盐水、缓冲盐水、环糊精、羟基丙基环糊精(HPβCD)、正十二烷基-β-D-麦芽糖苷(DDM)及其混合物。相似地，许多固体载体和赋形剂是本领域技术人员已知的。
[0246] 式(I)和/或(II)化合物还可以与其他膜稳定剂(局部麻醉剂)一起施用，例如以形成低共熔混合物。
[0247] 尽管式(I)和/或(II)化合物可以单独施用，它还可以在生理相容的一种或多种药物载体存在下施用。载体可以是干燥或液体形式，并且必须是药学上可接受的。液体药物组合物通常是无菌溶液或悬液。当使用液体载体进行胃肠外施用时，它们是希望无菌的液体。液体载体通常用于制备溶液、悬液、乳液、浆体和酏剂。在一个实施方案中，式(I)和/或(II)化合物溶解于液体载体。在另一实施方案中，式(I)和/或(II)化合物悬浮于液体载体。制剂领域技术人员能够选择适合的液体载体，取决于施用途径。可选地，式(I)和/或(II)化合物可以在固体载体中配制。在一个实施方案中，可以将组合物压成单位剂型，即，片剂或小片。在另一实施方案中，组合物可以添加至单位剂量形式，即，胶囊。在另一实施方案中，组合物可以被配制作为粉末施用。固体载体可以发挥多种功能，即，可以发挥下述赋形剂的一种或多种的功能。例如，固体载体还可以用作调味剂、润滑剂、增溶剂、悬浮剂、填料、助流剂，压缩助剂、粘合剂、崩解剂或包封材料。
[0248] 组合物还可以被细分以含有适当量的式(I)和/或(II)化合物。例如，单位剂量可以是包装的组合物，例如包装的粉末、管形瓶、安瓿、预填充注射器或含有液体的香囊。
[0249] 可以与一种或多种式(I)和/或(II)化合物组合的赋形剂的实例包括但不限于佐剂、抗氧化剂、粘合剂、缓冲剂、包衣、着色剂、压缩助剂、稀释剂、崩解剂、乳化剂(例如，聚氧乙烯脂肪酸酯)、软化剂、包封材料、填料、调味剂、助流剂、粒化剂、润滑剂、金属螯合剂、渗透压调节剂、pH调节剂(例如，氢氧化钠)、防腐剂、增溶剂、吸收剂、稳定剂、增甜剂(例如糖精)、表面活性剂、悬浮剂、浆体、增稠剂(例如，羧基聚亚甲基或羟基丙基甲基纤维素)、穿透增强剂(例如，羟基聚乙氧基十二烷、DMSO、DMAC、DDM等)或粘度调节剂(例如，增加粘度的聚合物)。参见例如在此通过引用并入的"Handbook of Pharmaceutical Excipients"，第5版，编辑：Rowe，Sheskey和Owen，APhA Publications(Washington、DC)，2005年12月14日中描述的赋形剂。
[0250] 在一个实施方案中，组合物可以用作吸入剂。对于该施用途径，可以使用式(I)和/或(II)化合物和用于通过雾化喷雾泵递送或者通过干燥粉末吸入的介质制备作为流体单位剂的组合物。
[0251] 在另一实施方案中，组合物可以作为气溶胶使用，即，口服或鼻内。对于该施用途径，组合物被配制用于与气体或液化推进剂一起在加压气溶胶容器中使用，所述推进剂例如二氯二氟甲烷、二氧化碳、氮、丙烷等。还提供了以一个或多个驱动的计量剂的递送。
[0252] 在另一实施方案中，组合物可以通过修饰释放递送装置施用。如本文使用的，“修饰释放”指例如在至少约8小时(例如延长的递送)到至少约12小时(例如，持续递送)的时段被控制的式(I)和/或(II)化合物的递送。这种装置还可以允许立即释放(例如，在低于约1小时或小于约2小时内达到治疗水平)。本领域技术人员已知适合的修饰释放递送装置。为了在这种修饰释放递送装置中使用，如本文所述配制式(I)和/或(II)化合物。
[0253] 在另一实施方案中，可以透皮施用组合物，即，通过使用药物洗脱贴片。在一个实施方案中，贴片是“离子泳”透皮贴片，其中使用简单或更复杂的(例如微处理器控制的)电流，例如使用车载电池，递送一种或多种药物。在另一实施方案中，贴片是“微针头”透皮贴片，其包含用本发明药物组合物涂覆或者含有(以可溶或不可溶的形式)本发明药物组合物的微针头。参见例如美国专利号7,798,987和7,537,795，其公开内容在此通过引用并入。微针头可以自身是可溶或不可溶的；参见例如Sullivan等人，"Dissolving Polymer Microneedle Patches for Influenza Vaccination"，Nature Medicine，16：915-920(2010年7月18日在线出版)和Lee等人，"Dissolving Microneedle Patch for Transdermal Delivery of Human Growth Hormone"，Small，2011年1月4日在线出版中描述的“微针头”技术，其在此通过引用并入。其他适当的透皮递送系统包括Sintov等人，"Radiofrequency-Driven Skin Microchanneling as a New Way for Electrically Assisted Transdermal Delivery of Hydrophilic Drugs”，Controlled Release89：
311-320(2003)和美国专利号7,558,625中描述的射频消融系统，其公开内容在此通过引用并入。
[0254] 用于施用式(I)和/或(II)化合物的透皮贴片的其他实例包括美国专利号5,411,738和5,827,528和Prausnitz和Langer，"Transdermal drug delivery"，Nature Biotechnology，26(11)：1261-1268，2006年11月中描述的那些，其在此通过引用并入。希望地，通过皮肤上适当粘合剂应用贴片，其中它保持就位至少一小时。在一个实施方案中，贴片保持就位约1小时，并且每周更换，持续总计约2或约3小时的佩戴时间。在另一实施方案中，贴片保持就位约2小时。在另一实施方案中，贴片保持就位约3小时。在另一实施方案中，贴片保持就位约4小时。在另一实施方案中，贴片保持就位更长或更短的时段。
[0255] 还考虑施用式(I)和/或(II)化合物与其他药物或治疗剂。在一个实施方案中，式(I)和/或(II)化合物与其他药剂或治疗剂组合在单一组合物中。然而，本发明不受如此限制。在其他实施方案中，式(I)和/或(II)化合物可以与其他式(I)和/或(II)化合物或下文描述的其他药物或治疗剂分开的一种或多种制剂施用。
[0256] 在一个实施方案中，当组合TRPV1受体激活剂时，本发明化合物可以用于治疗疼痛或痒。如本文使用的，术语“TRPV1受体激活剂”指激活痛觉受器上的TRPVl受体并允许电压门控离子(例如，钠或钙)通道的至少一种抑制剂进入的任何物质或刺激。在一个实施方案中，TRPVl受体激活剂包括但不限于辣椒素、二氢辣椒素和降二氢辣椒素、利多卡因、阿替卡因、普鲁卡因、丁卡因、甲哌卡因、布比卡因、丁香酚、樟脑、克霉唑、arvanil(N-花生四烯酰香兰素胺)、大麻素、2-氨基乙氧基二苯基硼酸酯(2APB)、AM404、超强辣素(resiniferatoxin)、佛波醇12-苯基乙酸13-乙酸20-高香兰酸酯(PPAHV)、奥伐尼(NE19550)、OLDA(N-油酰多巴胺)、N-花生四烯酰多巴胺(NADA)、6'-碘代超强辣素(6'-IRTX)、Cl8N-酰基乙醇胺、脂肪氧合酶衍生物(例如12-羟过氧化二十碳四烯酸)、抑制剂半胱氨酸结(ICK)肽(vanillotoxins)、pipeline、MSKl95(N-[2-(3,4-二甲基苄基)-3-(新戊酰氧基)丙基]-2-[4-(2-氨基乙氧基)-3-甲氧基苯基]乙酰胺)、
JYL79(N-[2-(3,4-二甲基苄基)-3-(新戊酰氧基)丙基]-N'-(4-羟基-3-甲氧基苄基)硫脲)、羟基-α-山椒醇、2-氨基乙氧基二苯基硼酸酯、10-生姜酚、油烯基姜醇、油烯基生姜酚、SU200(N-(4-叔丁基苄基)-N'-(4-羟基-3-甲氧基苄基)硫脲)正壬酸香草酰胺和四氢异喹啉的脂肪酰基酰胺。在另一实施方案中，TRPVl受体激活剂是利多卡因、安搏律定、苯佐卡因、布他卡因、可卡因、狄步卡因、恩卡尼、美西律、奥昔卡因(oxetacaine,oxethazaine)、丙胺卡因、丙美卡因、普鲁卡因胺、n-乙酰基普鲁卡因胺、氯普鲁卡因(nesacaine，nescaine)、达克罗宁、依替卡因、左布比卡因、罗哌卡因、环美卡因、二甲卡因(larocaine)、丙氧卡因、三甲卡因和氨丁卡因。在另一实施方案中，TRPVl受体激活剂是利多卡因。在另一实施方案中，TRPV1激活剂可以是去污剂或表面活性剂，其实例可以存在于常用的卫生保健产品，例如肥皂和香波(例如，月桂基硫酸钠)。参见Lilja等人"Surfactant-Induced TRPV1activity–A Novel Mechanism for Eye Irritation？"Technological Sciences，
99(1)：174-180，2007，其在此通过引用并入。在另一实施方案中，TRPV1受体激活剂是加热或炎症。
[0257] 当如本文描述的使用时，TRPV1受体激活剂可以大于或小于式(I)或(II)化合物或其组合的量使用。在一个实施方案中，TRPV1受体激活剂与式(I)化合物、式(II)化合物或其组合之比是至少约0.5:1。在另一实施方案中，TRPV1受体激活剂与式(I)化合物、式(II)化合物或其组合之比是至少约1:1。在另一实施方案中，TRPV1受体激活剂与式(I)化合物、式(II)化合物或其组合之比是25:1或更低。在另一实施方案中，TRPV1受体激活剂与式(I)化合物、式(II)化合物或其组合之比是约0.5:1至约25:1。在另一实施方案中，TRPV1受体激活剂与式(I)化合物、式(II)化合物或其组合之比小于约1:1。在另一实施方案中，TRPV1受体激活剂与式(I)化合物、式(II)化合物或其组合之比是至少约2:1。在另一实施方案中，TRPV1受体激活剂与式(I)化合物、式(II)化合物或其组合之比是至少约3:1。在另一实施方案中，TRPV1受体激活剂与式(I)化合物、式(II)化合物或其组合之比是至少约4:1。在另一实施方案中，TRPV1受体激活剂与式(I)化合物、式(II)化合物或其组合之比是约10:1。在另一实施方案中，TRPV1受体激活剂与式(I)化合物、式(II)化合物或其组合之比是约0.5至约1到约25至约1。
[0258] 还考虑用于下述药物组合物和方法的是电压门控离子通道抑制剂。在一个实施方案中，电压门控离子通道是钠或钙离子通道。在另一实施方案中，电压门控钠通道抑制剂包括但不限于QX-314、N-甲基-普鲁卡因(QX-222)、N-辛基-胍、9-氨基吖啶和巴夫龙(pancuronium)。在另一实施方案中，电压门控钙通道抑制剂包括但不限于D-890(季甲氧基维拉帕米)和CERM11888(季苄普地尔)。在另一实施方案中，电压门控离子通道抑制剂可以与式(I)和/或(II)化合物组合，所述电压门控离子通道抑制剂例如利鲁唑、美西律(mexilitine)、苯妥英、卡马西平、普鲁卡因、妥卡尼、丙胺卡因、双异丙吡胺、苄环烷、奎尼定、溴苄胺、利法利嗪、拉莫三嗪、氟桂利嗪、阿替卡因、布比卡因、甲哌卡因、氟司必林、奥芬那君、安妥根、苄普地尔、呱咪清、五氟利多、氟司必林、丙哌维林、丙吡胺、美沙酮、托特罗定、曲地铵盐、苄吡二胺、吡拉明、溴苯那敏、氯苯那敏、右氯苯那敏、卡比沙明、醋酸左旋乙酰美沙酮、戈洛帕米、维拉帕米、地伐帕米、噻帕米、依莫帕米、达克罗宁、普莫卡因、拉莫三嗪、米贝地尔、加巴喷丁、氨氯吡嗪脒、地尔硫、硝苯地平、尼莫地平、尼群地平、可卡因、美西律、普罗帕酮、奎尼定、奥昔卡因、阿替卡因、利鲁唑、苄环烷、利法利嗪和马钱子碱。
[0259] 电压门控离子通道的膜通透抑制剂还可以与式(I)和/或(II)化合物组合用于本文描述的组合物、组合或方法。在一个实施方案中，电压门控离子通道的膜通透抑制剂包括但不限于可卡因、卡马西平、丙吡胺、拉莫三嗪、普鲁卡因胺、苯妥英、奥卡西平、托吡酯、唑尼沙胺、丁卡因、氨基苯甲酸乙酯、丙胺卡因、磷酸丙吡胺、乙酸哌氟酰胺、美西律、普罗帕酮、葡糖酸奎尼定、聚半乳糖醛酸奎尼定、氯普鲁卡因、狄步卡因、达克罗宁、甲哌卡因、普莫卡因、普鲁卡因、丁卡因、奥昔卡因、丙胺卡因、左布比卡因、布比卡因、利多卡因、吗拉西嗪、妥卡尼、丙美卡因、罗哌卡因、硫酸奎尼定、恩卡尼、罗哌卡因、依替卡因、吗拉西嗪、奎尼定、恩卡尼、氟卡尼、妥卡尼、磷苯妥英、氯普鲁卡因、达克罗宁、L-(-)-l-丁基-2',6'-哌啶甲酰胺和普莫卡因。
[0260] 此外，常用于治疗疼痛的一种或多种剂，即镇痛剂，可以与本发明组合结合用于本文描述的方法、组合物和药盒。这种剂包括但不限于非甾体抗炎药(NSAID)、阿片样物质、三环类抗抑郁剂、胺转运蛋白抑制剂和抗惊厥剂(加巴喷丁类)。
[0261] 当以注射溶液使用时，式(I)和/或(II)化合物可以与血管收缩剂(例如肾上腺素或加压素)一起施用。
[0262] 当用于输注或作为区域镇痛剂或抗痒剂使用时，式(I)和/或(II)化合物可以与葡萄糖或右旋糖组合。
[0263] 而且，式(I)和/或(II)化合物可以与增稠剂组合以形成胶状物，或者还可以含有穿透增强剂，用于局部或皮肤应用，例如泌尿生殖系统局部程序。
[0264] 用于口和咽局部麻醉的喷雾剂可以含有式(I)和/或(II)化合物、糖精和/或醇。
[0265] 最后，式(I)和/或(II)化合物可以被配制为软膏，用于施用至可及的粘膜。
[0266] 常用于治疗痒的一种或多种其他剂可以与本发明组合结合用于本文描述的方法、组合物和药物。这种剂包括局部或口服类固醇和抗组胺剂。
[0267] 在一个实施方案中，所述组合包含以下化合物：
[0268]
[0269] 在另一实施方案中，所述组合包含以下化合物：
[0270] 和利多卡因。
[0271] 在另一实施方案中，所述组合包含利多卡因和以下化合物。
[0272]
[0273] 本文还提供了含有本文描述的式(I)和/或(II)化合物或组合物的药剂的制剂、药盒或包装。药盒可以被组织以指示在每个希望时间服用的单制剂或制剂组合。
[0274] 适当地，药盒包含配制用于希望递送途径的式(I)和/或(II)化合物的包装或容器。适当地，药盒包含给药说明书和有关式(I)和/或(II)化合物的插页。任选地，药盒还可以包含监测产品局部或循环水平的说明书和进行这种测定的材料，包括例如试剂、孔板、容器、标志物或标签等。这种药盒容易以适合治疗预期适应症的方式包装。例如，药盒还可以包含贴片、喷雾泵或其他递送装置的使用说明书。考虑预期适应症和递送途径，这种药盒中包括的其他适当组成部分对于本领域技术人员是显而易见的。
[0275] 本文描述的式(I)和/或(II)化合物或组合物可以是单剂或用于连续或周期不连续施用。对于连续施用，包装或药盒可以包括每个剂量单位(例如，溶液、洗剂、片剂、丸剂、药物洗脱贴片或上述或药物递送中使用的其他单位)的式(I)和/或(II)化合物和任选用于少于每天、每天、每周或每月施用剂，持续预定时长或按照处方的说明书。当式(I)和/或(II)化合物以不连续方式周期递送时，包装或药盒可以包括在不递送式(I)和/或(II)化合物的时期的安慰剂。当需要随时间改变组合物浓度、组合物组分或组合物内式(I)和/或(II)化合物或剂的相对比率时，包装或药盒可以包含提供所需变化性的一系列剂量单位。
[0276] 许多包装或药盒在本领域已知用于分配药剂以周期口服使用。在一个实施方案中，包装具有每个时期的指示器。在另一实施方案中，包装是箔或泡罩包装、标记的安瓿、管形瓶或瓶。
[0277] 药盒的包装器件本身可以是适合施用的，例如吸入器、注射器、吸液管、滴管或其他这种设备，制剂可以从中应用至身体的受累区域，例如肺、注射入受试者或者甚至应用至药盒的其他组分并与之混合。
[0278] 这些药盒的一种或多种组分还可以干燥或冻干形式提供。当试剂或组分以干燥形式提供时，一般通过添加适当溶剂来重构。设想溶剂还可以提供于另一包装。
[0279] 本发明药盒还通常包括用于商业销售的密封包含管形瓶或其他适当包装器件的器件，例如其中保持所需管形瓶的注射或吹塑成型的塑料容器。不论包装的数目和类型和如上讨论的，药盒还可以包括单独仪器或与单独仪器一起包装，所述单独仪器用于辅助注射/施用或组合物在动物身体内的定位。这种仪器可以是吸入器、注射器、吸液管、钳、量勺、滴管或任何这种医疗批准的递送器件。
[0280] 在一个实施方案中，药盒被提供并包含式(I)和/或(II)化合物。式(I)和/或(II)化合物可以存在或不存在上述载体或赋形剂的一种或多种。药盒可以任选包含用于给具有疼痛或痒的受试者施用式(I)和/或(II)化合物的说明书。
[0281] 在另一实施方案中，药盒被提供并包含第二剂量单位的式(I)和/或(II)化合物和第三剂量单位的上述载体或赋形剂的一种或多种。药盒可以任选包含用于给具有疼痛或痒的受试者施用式(I)和/或(II)化合物的说明书。
[0282] 如上讨论的，本发明的方法、组合物和药盒可用于治疗许多病症导致的疼痛或痒。如本文使用的术语“疼痛”包括所有类型的疼痛。在一个实施方案中，疼痛可以是急性的或慢性的。在另一实施方案中，疼痛可以感受伤害性、功能障碍性、特发性、神经性、躯体性、内脏性、炎性和/或程序性的。例如，疼痛可以来自偏头痛、背痛、颈痛、妇科疼痛、产前疼痛或产痛、骨痛、中风后疼痛、手术后疼痛或操作性疼痛、疱疹后神经痛、镰状细胞危机、间质性膀胱炎、泌尿疼痛(例如尿道炎)、牙痛、头痛、来自创伤或医疗程序的疼痛，所述医疗程序例如手术(例如囊肿切除术或者髋、膝盖或其他关节置换)、缝合、处置骨折、活检等。疼痛还可以在癌症患者中发生，其可能是由于多种原因，例如炎症、神经压迫和由于肿瘤侵入和肿瘤转移入骨或其他组织导致的组织膨胀引起的机械力。
[0283] 在一个实施方案中，疼痛是神经性疼痛，例如疱疹后神经痛。在另一实施方案中，疼痛是炎性疼痛。在另一实施方案中，疼痛是伤害性疼痛。在另一实施方案中，疼痛是操作性疼痛。在另一实施方案中，疼痛由食道癌、结肠炎、膀胱炎、肠易激综合征、结肠炎或特发性神经病引起。
[0284] “躯体性疼痛”包括来自骨、关节、肌肉、皮肤或结缔组织的疼痛。
[0285] “中枢性疼痛”包括由于脑创伤、中风或脊柱损伤引起的疼痛。
[0286] “内脏性疼痛”包括来自内脏器官的疼痛，所述内脏器官例如呼吸道或胃肠道和胰腺、尿道和生殖器。在一个实施方案中，内脏性疼痛源自器官囊的肿瘤累及。在另一实施方案中，内脏性疼痛源自中空内脏的阻塞。在另一实施方案中，内脏性疼痛源自膀胱炎或反流性食管炎的炎症。
[0287] “特发性疼痛”指没有潜在原因的疼痛，或者指由未确诊的病症引起的疼痛。
[0288] “功能障碍性疼痛”指在不存在有害刺激、组织损伤或神经系统损伤下出现的疼痛。在一个实施方案中，功能障碍性疼痛源自风湿性病症，例如关节炎和纤维肌痛综合症、紧张型头痛、肠易激症和红斑性肢痛病。
[0289] “伤害性疼痛”包括由威胁或实际损伤身体组织的伤害性刺激引起的疼痛。在一个实施方案中，伤害性疼痛源自切伤、撞伤、骨折、挤压伤、烧伤、外伤、手术、分娩、扭伤、撞击、注射、牙科手术、皮肤活检或阻塞。在另一实施方案中，伤害性疼痛位于皮肤、肌肉骨骼系统或内部器官。
[0290] “神经性疼痛”是起因于这些系统损伤的外周或中枢神经系统的感觉输入的异常加工的疼痛。在一个实施方案中，神经性疼痛是慢性和非恶性的。在一个实施方案中，神经性疼痛是由于外伤、手术、椎间盘突出、脊髓损伤、糖尿病、带状疱疹(带状疱疹)感染、HIV/AIDS、晚期癌症、截肢(例如乳房切除术)、腕管综合征、慢性酒精使用、暴露于放射和神经毒性治疗剂例如某些抗HIV和化疗药物的“烧灼”、“电的”、“麻刺感”或“射中”。
[0291] 短语“炎性疼痛”包括源自由任何数目的因素引起的炎症的疼痛。在一个实施方案中，炎性疼痛由于组织损伤或炎症而发生。在另一实施方案中，炎性疼痛是由于损伤(包括关节、肌肉和腱损伤)、外科手术、感染和/或关节炎。
[0292] “操作性疼痛”包括指源自医疗操作的疼痛。医疗操作可以包括任何类型的医疗、牙科或手术操作。在一个实施方案中，操作性疼痛是手术后的。在另一实施方案中，疼痛与以下有关：注射、引流脓疮、手术、皮肤病、牙科操作、眼科操作、关节镜和其他医疗仪器的使用、和/或整容手术。
[0293] “偏头痛”是归因于神经支配脑膜的感觉纤维的激活的头痛。
[0294] 术语“痒”指所有类型的发痒和麻刺感觉，其可以是局部的或全身的，并且可以是急性的、断续的或持久的。痒可以是特发的、变应性的、代谢的、感染的、药物诱导的或者由于肝病或肾病或癌症的特定疾病状态。“瘙痒”是严重发痒，但是如本文使用的，可以包括如上定义的“痒”。在一个实施方案中，瘙痒可以源自应激、焦虑、太阳的UV辐射、代谢和内分泌疾患(例如，肝或肾病、甲状腺机能亢进)、癌症、药物反应、食物反应、寄生虫感染、真菌感染、变态反应、血液疾病(例如，真性红细胞增多)、昆虫叮咬、怀孕、代谢疾患、肝或肾衰竭、湿疹和皮肤病症，例如皮肤炎、湿疹或银屑病。
[0295] 术语“治疗”(treat,treating)或其任何变化表示包括用于修复患者或受试者的健康问题或病症的疗法。在一个实施方案中，可以永久或在一段时间内消除健康问题或病症。在另一实施方案中，健康问题或病症的严重度，或者健康问题或病症的一种或多种症状特征的严重度可以被永久或在一段时间内减轻。疼痛或痒的治疗的效力可以使用任何标准的疼痛或痒指数、例如本文描述的那些来确定，或者可以基于患者主观疼痛或痒评价来确定。如果有报道的疼痛或痒的减轻，或者对应该引起疼痛或痒的刺激的反应减少，则认为患者被“治疗”。
[0296] 为了测量本文描述的方法、组合物或药盒的任何一个的效力，可以使用测量指数。适用于测量与肌肉骨骼、免疫炎性和神经疾患相关的疼痛的指数包括视觉模拟量表(VAS)、Likert量表、分类疼痛量表、描述符、Lequesne指数、WOMAC指数和AUSCAN指数，其每一个是本领域公知的。这种指数可用于测量疼痛、痒、功能、僵硬或其他变量。
[0297] 视觉模拟量表(VAS)提供了单向量的量度。VAS一般利用距离表示，例如以规律距离间隔例如十个1cm间隔画出的虚线标记的线图。例如，可以要求患者通过选择最佳对应于疼痛或痒的感觉的线上的点来对疼痛或痒的感觉分级，其中线的一端对应于“无疼痛”(0cm的刻度)或“无痒”，而线的另一端对应于“无法忍受的疼痛”或“无法忍受的痒”(10cm的刻度)。该程序提供了获得关于患者如何经历疼痛或痒的定量信息的简单且快速的方法。VAS量表及其用途描述于例如美国专利号6,709,406和6,432,937，其相关公开内容在此通过引用并入。
[0298] 相似地，Likert量表提供了单向量的量度。一般而言，Likert量表具有范围从低值(例如，0，表示无疼痛)至高值(例如，7，表示极度疼痛)的分立整数值。要求经历疼痛的患者选择低值和高值之间的数字来代表经历的疼痛程度。Likert量表及其用途描述于美国专利号6,623,040和6,766,319，其相关公开内容在此通过引用并入。
[0299] Lequesne指数和Western Ontario and McMaster Universities(WOMAC)骨关节炎(OA)指数使用自填问卷评价OA患者的膝盖和髋部的疼痛、功能和僵硬。WOMAC涵盖膝盖和髋部两者，而针对膝盖有一个Lequesne问卷，并且针对髋部有一个独立问卷。这些问卷是有用的，因为它们包含与VAS或Likert量表对比的更多信息内容。已经在OA中，包括在手术环境中(例如，膝盖和髋关节形成术)广泛验证了WOMAC指数和Lequesne指数问卷。它们的量度特征没有显著差异。
[0300] AUSCAN(澳大利亚-加拿大手关节炎)指数采用有效的、可靠的且响应性的患者自报告的问卷。在一个情况下，该问卷包含三个方向内的15个问题(疼痛，5个问题；僵硬，1个问题；和身体功能，9个问题)。AUSCAN指数可以利用例如Likert或VAS值。
[0301] 适合用于测量疼痛的其他指数包括疼痛描述量表(PDS)、语言描述量表(VDS)、数字疼痛强度量表(NPIS)、神经性疼痛量表(NPS)、神经性疼痛症状目录(NPSI)、目前疼痛目录(PPI)、老年疼痛量度(GPM)、McGill疼痛问卷(MPQ)、平均疼痛强度(描述差异量表)、数字疼痛量表(NPS)总体评价评分(GES)短期McGill疼痛问卷、Minnesota多相个人目录、疼痛谱和多维疼痛目录、儿童健康问卷和儿童评估问卷。
[0302] 还可以通过本领域技术人员已知的主观量度(VAS、Likert、描述符等)测量痒。另一方法是使用振动换能器或运动感知计量器测量痒的客观关联的抓痕。
[0303] 在一个实施方案中，本文描述的治疗方法包括给患者施用式(I)和/或(II)化合物。组合使用的其他任选剂、例如上述那些可以在式(I)和/或(II)化合物之前、同时或之后施用给患者。
[0304] 在另一实施方案中，本文描述的方法因此包括给患者施用式(I)和/或(II)化合物和TRPV1受体激活剂。在一个实施方案中，在TRPV1受体激活剂之前给患者施用式(I)和/或(II)化合物。在另一实施方案中，在式(I)和/或(II)化合物之前给患者施用TRPV1受体激活剂。在另一实施方案中，给患者同时施用式(I)和/或(II)化合物和TRPV1受体激活剂。
[0305] 本发明还涵盖在激活TRPV1受体之后施用式(I)和/或(II)化合物。具体地，该方法在TRPV1受体被激活之后进行。这种激活可以源自施用外源性激活化合物或刺激，或者可以源自病理生理状态诱导的内源性激活，例如激活TRPV1的炎症。
[0306] 许多体内测定和动物模型适用于评估化合物通过内部钠通道抑制来抑制疼痛的能力。这些模型可以或可以不涉及通过物理、机械或化学(例如，辣椒素)方式诱导疼痛来开放(激活)TRPV1通道。适合的模型的实例包括例如描述于以下的那些：Khan等人，Anesthesiology，2002年1月，96(1)：109-116；AM Binshtok等人，Anesthesiology，2009年7月，111(1)：127-137；CR Reis等人，Anesthesiology，2009年7月，111(1)：122-126；P Gerner等人，Anesthesiology，2008年11月，109(5)：872-878；和AM Binshtok等人，Nature，2007年10月，449：607-610，其在此通过引用并入。然而，出于对本领域普通技术人员显而易见的许多原因，希望提供允许鉴定具有希望性质的化合物的体外测定。本文描述了两种这样的体外测定。
[0307] 在一个实施方案中，开发了能够识别非特异性与hTRPV1介导的测试化合物进入的基于改良的 (荧光成像读板器)的测定系统。有利地，测定系统利用hTRPV1通道的热激活的开放，随后评估内部钠通道阻断。该测定允许永久带电的化合物通过开放的hTRPV1通道选择性进入，并且化合物抑制相同细胞的细胞质侧的钠通道的效价可以被评估和定量。
[0308] 改良的 测定利用了功能性表达hTRPV1的细胞。
[0309] 如本文使用的，术语“功能表达”包括表达人类TRPV1蛋白并响应于天然开放该通道的刺激的那些细胞，所述刺激包括例如本文描述的热(例如，加热)或化学(例如，辣椒素、利多卡因)方式。适合的测定包括本文描述的钙或膜电位测定(参见例如实施例36)。然而，其他功能测定是本领域已知的(例如，电压钳电生理，例如Binshtok等人，Nature449(4)607-610，2007使用的)。
[0310] 适合的细胞可以被选择用于表达顺式或反式TRPV1，并且使用已知技术构建。在一个实施方案中，选择成神经细胞瘤细胞系例如N1E115[CRL-2263]或ND7/23[ECACC目录代码：92090903]来表达hTRPV1。然而，可以选择另一成神经细胞瘤细胞系，例如 IMR-32[CRL-127]；Neuro-2a[CRL-131]；NB41A3[CRL-147]；B104-1-1[CRL-1887]；
SK-N-AS[CRL-2137]；SK-N-F1[CRL-2142]；SK-N-DZ[CRL-2149]；SH-SY5Y[CRL-2266]；
BE(2)-M17[CRL-2267]；BE(2)-C[CRL-2268]；MC-IXC[CRL-2270]；SK-N-BE(2)(CRL-2271)；
CHP-212(CRL-2273]；B35[CRL-2754]，其可从美国典型培养物保藏中心Manassas，Virginia(US)获得。还可以选择其他细胞系。
[0311] 对于如何产生细胞的产生描述，大体参见例如Sambrook等人，Molecular Cloning：A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Press，Cold Spring Harbor，NY(US)2001。在一个实施方案中，可以使用Sambrook等人中的技术制备稳定细胞系，使用野生型(wt)或重组hTRPV1编码序列。例如，这种细胞系的制备在本文详细描述(参见实施例32)。另一细胞系的制备描述于WO2007/0066068； 方法可以用于根据生产商方案(Gibco)将TRPV1和hTRPV1转染入人类胚胎肾细胞(HEK293)。为了产生永久表达细胞系，可以在含有遗传霉素(0.6mg/mL)的培养基(含有10%FCS、100U/mL青霉素、
100μg/mL链霉素和250ng/mL两性霉素B的DMEM)中亚克隆wt-TRPV1转染的HEK细胞，并繁殖两周以允许选择。为了获得TRPV1永久表达单细胞系，转染的细胞可以铺板于96孔板(1细胞每孔)，并且随后通过测量细胞内钙的增加来测试单细胞生长的集落的辣椒素响应。通过三轮进一步的单细胞克隆选取选择的最终克隆，以确保细胞系衍生自单细胞。该方法的变化对于本领域技术人员是显而易见的。在另一实施方案中，可以从稳定细胞系选择细胞来表达反式hTRPV1，例如从病毒载体或另一适当的遗传元件。
[0312] 在一个实施方案中，选择具有SEQ ID NO:1[NCBI访问号NM_080706.3]序列的hTRPV1蛋白。
[0313]
[0314] 然而，本领域技术人员可以对该序列做出小修饰，同时保持蛋白的希望功能性。可选地，可以选择另一TRPV1蛋白(例如，来自荷兰猪、小鼠或其他物种)并修饰该序列以用于本发明。这种修饰可以因许多原因做出，包括例如以提高产率或纯化。
[0315] 为了制备hTRPV1表达细胞，选择含有上述hTRVP1序列的编码序列的构建体。在一个实施方案中，编码序列是编码上述蛋白的任何序列。在另一实施方案中，编码序列选自针对人类TRPV1(hTRPV1)的NCBI中报道的四个转录物变体(NM_018727.5、NM_080704.3、NM_080705.3和NM_080706.3)之一。所有四种转录物的功能性蛋白编码序列(ORF-开放阅读框)是相同的。在以下实例中，构建体仅包含功能蛋白编码序列。然而，在另一实施方案中，还可以使用另一变体，包括最长的变体(变体3，NCBI访问号：NM_080706.3)。在另一实施方案中，选择另一ORF，或者含有ORF的另一序列。在一个实施方案中，从如以下实施例描述的现有构建体克隆序列。在另一实施方案中，使用重组序列。
[0316] 虽然使用被感染或转染以使它们表达反式hTRPV1的细胞是可能的，但是希望使用稳定表达hTRPV1通道的细胞系。可以利用本文可用和本领域已知的信息由本领域技术人员产生这种细胞系。
[0317] 在一个实施方案中，为了制备细胞系，通过PCR从IMR322cDNA(成神经细胞瘤细胞系)扩增hTRPV1。获得的含有hTRPV1的蛋白编码序列的PCR产物被克隆入处于强启动子控制下的生产载体。如下示例说明的，使用了人类巨细胞病毒启动子。然而，还可以使用哺乳动物宿主细胞系中强组成型表达的另一启动子。任选地，可以通过PCR证实序列。如本文所述，使用Lipofectamine2000(Invitrogen，目录号11668-019)制备待转导的细胞(例如，N1E115细胞)。应用时，使用常规方法和标准转染技术传代经转导的细胞。第二周末，转染的稳定集落出现，其然后被功能扩增和测试。基于功能测定数据选择该研究的最终克隆候选物。这些测定评估了细胞以功能方式表达hTRPV1的能力，即，使得在与wt hTRPV1响应的刺激的至少一种接触时，hTRPV1通道开放。例如，表达功能性hTRPV1的细胞可以响应于hTRPV1在其天然环境中的辣椒素或加热，或者其他化学、机械或物理刺激特征。适当测定的实例描述于以下实施例36，并且包括膜电位和钙测定。其他适当的测定包括标准单细胞电压钳电生理方法，例如Binshtok等人，Nature449(4)607-610，2007使用的。使用以膜电位测定模式操作的 -384荧光测量平台(Molecular Devices，Inc.)或者另一适当系统，使用本文描述的hTRPV1表达细胞进行TRPV1测定。 膜电位测定试
剂盒(蓝色和红色)可获自Molecular Devices Corp(Sunnyvale，CA，USA)，其提供了许多用于以下测定的染料和材料。然而，如需要或希望的，相似材料可以获自其他来源。
[0318] 本文描述的测定使用了不同于文献和现有技术通常描述的(即，辣椒素)激活TRPV1通道的方法。使用辣椒素开放细胞中的hTRPV1通道被证明是不适当的，因为它侵蚀测定的随后钠通道响应组分在hTRPV1-N1E115细胞系中信噪窗口。可选地，预期如本文描述制备的另一细胞系可以取代该细胞系。因此，必须开发开放通道的另一方法。已经发现本文使用的加热激活方法产生强大且可再现的性能。
[0319] 该测定多孔测定板中容易地进行，将生长培养基中的细胞添加至该板并在允许在测定开始之前数小时时段内形成汇合单层的条件下孵育。可以使用常规培养基和条件。针对每个实验制备一式两份细胞测定板。
[0320] 在测定当天从细胞接种板取出废弃培养基并用膜电位染料-蓝(Molecular Devices)替换。根据生产商说明书在测定缓冲液中制备染料。在室温(约25℃)下孵育染料加载板约30分钟，以用染料预先加载细胞。任选地，可以在添加测试化合物的同时用染料加载细胞。
[0321] 根据表1使用纯化的去离子水制备示例性测定缓冲液。虽然精确组分可以变化，但是测定缓冲液的离子性质是用于测定所需要的。使用氢氧化钾调节pH至7.4，并且用Milli-Q水(Millipore)补足体积至500mL。除非另外提到，所有稀释在测定缓冲液中进行。
[0322] 表1
[0323]盐 浓度(mM)
NaCl 150
KCl 3.25
CaCl22H2O 2
MgCl26H2O 3
HEPES 10
葡萄糖 11(198mg/100mL)
[0324] 将测试化合物稀释于测定缓冲液并添加至特定384孔‘化合物板’的每个孔，其用作使用 平台添加化合物的来源板。当添加至‘细胞板’中的细胞时，调节化合物板中化合物的浓度以达到希望的终浓度。完成染料孵育期之后，根据生产商说明书，将染TM料加载的细胞板和化合物来源板插入具有384 尖头盒的 Tetra 装置
(Molecular Devices，Inc.)。使用构成 TetraTM仪器组成部分的软件将化合物机器添加至染料加载的细胞板。
[0325] 在添加化合物之后立即，通过加热激活一式两份细胞板之一中的hTRPV1。具体地，含有化合物-细胞混合物的整个多孔板在47℃下孵育10分钟，之后使它们返回室温(约25℃)持续另外30分钟。从复制的细胞板省略hTRPV1的热激活，所述复制的细胞板简单地维持在室温持续整个40分钟。
[0326] 通过添加已知的钠通道‘激动剂’藜芦定，在染料和化合物加载的细胞中引发膜电位响应。如本文一个实例中示例说明的，事先制备含有藜芦定(Sigma)的激动剂板，并插入适当装置，例如 装置，以根据生产商说明进行“第二次添加”。当添加至细胞板中的细胞时，调节‘激动剂板’中藜芦定的浓度以达到100μM的终浓度。还可以使用大于或小于100μM的藜芦定的终浓度，但是通过 装置或另一适当装置
测量的信号可以相应地变化。
[0327] 细胞板中的细胞暴露于藜芦定诱导细胞中的钠通道开放，得到的离子流产生膜电位去极化，其作为荧光信号被 装置检测。通过其减弱藜芦定诱导的荧光信号的能力测定测试化合物的活性，最有前景的化合物是在加热激活的细胞板中显示出比非加热激活细胞板增强的活性的那些。这种差异活性反映出通过加热激活的和开放hTRPV1通道的增强的化合物摄取，并且基于以下事实：钠通道阻断要求测试化合物从细胞膜的细胞质侧发挥作用。
[0328] 一经使用筛选测定评估，可以选择用于动物模型研究的化合物。使用啮齿类动物捏痛测试装置(Bioseb(France))进行化合物的镇痛效果的常规评价。捏皮肤提供了机械刺激，其可以被定级并且特别适合评估急性机械(如AM Binshtok等人，Anesthesiology，2009年7月，111(1)：127-137所述，其在此通过引用并入)。通常使用的另一种啮齿类动物疼痛模型是Hargreaves拓面测试装置(IITC(USA))，其特别适合评估热痛觉。而另一模型使用针刺激发的皮肤躯干肌肉反射反应(所谓的CTMR模型)来评价麻醉剂对局部皮下感染之后的皮肤镇痛(Khan等人，Anesthesiology，2002年1月，96(1)：109-116，其在此通过引用并入)。
[0329] 以下实例仅是示例说明性的，并且不是要限制本发明。实施例
[0330] 除非另外表明，所有原材料商业途径购自普通供应商。使用三甲基硅烷(TMS)作1
为CDCl3溶解的化合物的内部参考记录 H-NMR谱。针对DMSO-d6、MeOD和D2O溶解的化合物，分别在δ2.5、3.3和4.82ppm校准仪器。以δ(百万分率)引述化学位移值。
[0331] 针对LCMS分析，使用了LCMS/MS API2000(Applied Biosystem)仪器。柱包括：
[0332] 柱V： C18柱，4.6×50mm，5μ
[0333] 柱W： Extend C18柱，4.6×50mm，5μ
[0334] 柱X： NX C18柱，4.6×50mm，5μ
[0335] 柱Y： C18柱，4.6×50mm，5μ
[0336] 柱Z： 柱，4.6×50mm，5μ
[0337] 洗脱液(溶剂)通常包括(作为水相的酸性或碱性缓冲液)：
[0338] A通道：(i)0.05%甲酸水溶液；
[0339] (ii)10mM乙酸铵水溶液；或
[0340] (iii)0.05%TFA水溶液。
[0341] B通道：乙腈(有机相)。
[0342] 检测器在以下双波长UV测量：220和260nm。
[0343] LCMS梯度是以下之一：
[0344] 1.LCMS反应监测和最终化合物分析方法(对于一般极性化合物)
[0345] 梯度条件：5分钟运行时间
[0346] 时间程序：P1：10mM乙酸铵水溶液/乙腈
[0347] Q1：0.05%TFA水溶液/乙腈，
[0348] R1：0.05%甲酸水溶液/乙腈。
[0349] 梯度变化的乙腈从10%至90%至10%。
[0350] 流速：1.2mL/分钟
[0351] 2.12分钟运行中的LCMS反应监测和最终化合物分析方法(对于密切洗脱的化合物)：
[0352] 梯度条件：12分钟运行时间
[0353] 时间程序：P2：10mM乙酸铵水溶液/乙腈
[0354] Q2：0.05%TFA水溶液/乙腈
[0355] R2：0.05%甲酸水溶液/乙腈。
[0356] 梯度变化的乙腈从5%至90%至5%
[0357] 流速：1.0mL/分钟
[0358] 3.HPLC方法发展之后LCMS–梯度条件根据HPLC。
[0359] 使用以下获得质谱数据：
[0360] 离子化技术：使用API(大气压离子化)源的ESI(电喷雾离子化)
[0361]
[0362] 使用 LC-2010、 1200系列和 HT仪器进行HPLC分析。柱包括：
[0363] (i) SB C18柱(50×4.6mm)1.8μ
[0364] (ii) dC18柱(150×4.6mm)5μ
[0365] (iii) NX C18柱(50×4.6mm)3μ
[0366] (iv) C18柱(50×4.6mm)3μ
[0367] (v) C18柱(50×4.6mm)5μ
[0368] (vi) C18柱(250×4.6mm)5μ
[0369] (vii) C18柱(50×4.6mm)5μ
[0370] (viii) SB-C18柱(4.6×50mm)5μ
[0371] (ix) 柱(150×4.6mm)5μ。
[0372] 流动相包括以下，并且流动相梯度变化从A.90%至10%至90%。流速是1mL/分钟。
[0373] A.0.05%TFA水溶液、0.05%HCOOH水溶液、0.05%乙酸水溶液、10mM乙酸铵水溶液(酸性或碱性缓冲液)；和
[0374] B.乙腈或甲醇(有机相)。
[0375] 使用 1100系列和1200系列仪器进行超高效液相色谱(UPLC)分析。柱包括：
[0376] (i) SB C18柱(50×4.6mm)1.8μ
[0377] (ii) XDB C18柱(50×4.6mm)1.8μ
[0378] (iii) NX C18柱(50×4.6mm)3μ
[0379] (iv) C18柱(50×4.6mm)3μ
[0380] 在环境温度下操作。流动相包括以下，并且流动相梯度变化从A.95%至5%至95%。流速变化从0.8至1mL/分钟。
[0381] A.0.05%TFA水溶液，0.05%HCOOH水溶液
[0382] B.乙腈
[0383] 实施例1：一般程序A1-(S)-1,1,-二丙基-2-[2-((茚满-2-基)(苯基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物的制备
[0384]
[0385] A.(S)-2-(甲氧基羰基甲基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(化合物2)
[0386] 在-30℃下向boc-L-哌啶酸(1；15g，68.10mmol)的四氢呋喃(THF；175mL)搅拌溶液添加N-甲基吗啉(9.4mL，85.12mmol)，随后在-30℃下滴加氯甲酸异丁酯(9.8mL，74.90mmol)。在该温度下搅拌得到的混合物1小时。然后向反应混合物添加重氮甲烷的二乙醚溶液，在室温(rt)搅拌混合物16小时。通过添加冰乙酸(10mL)猝灭反应混合物，然后浓缩。残余物溶解于二乙醚(500mL)，用水(100mL)和盐水(25mL)洗涤。干燥合并的有机层，过滤并浓缩。
[0387] 粗料溶解于甲醇(130mL)，在冰冷条件下分批添加苯甲酸银(4g)，并在室温搅拌混合物16小时。向反应混合物添加盐水溶液(50mL)，通过 试剂过滤并用甲醇洗涤。真空蒸发有机层，用乙酸乙酯(EtOAc，470mL)稀释残余物并用水(50mL)和盐水(20mL)洗涤。干燥有机层，过滤并浓缩。粗料通过色谱纯化，使用230-400目硅胶，用3%EtOAc的己烷溶液洗脱，以提供作为液体的化合物2。
[0388] 产量：10.2g(58.28%)；
[0389] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ4.51(s，1H)，3.81(d，J=11Hz，1H)，3.57(s，3H)，2.77-2.74(m，1H)，2.55(d，J=7Hz，2H)，1.58-1.52(m，6H)，1.37(s，9H)；
[0390] LCMS：[M+H]=258.2，RT=3.55分钟，(程序R1，柱X)。
[0391] B.(S)-2-(1-苄基-哌啶-2-基)乙酸甲酯(化合物4)
[0392] 在冰冷条件下向化合物2(10g，38.91mmol)的二氯甲烷(DCM；70mL)搅拌溶液滴加三氟乙酸(TFA；20mL)，并在室温下搅拌反应混合物4小时。真空蒸发反应混合物的溶剂。将粗料溶解于乙腈(130mL)，在冰冷条件下分批添加K2CO3(27g，194.55mmol)，并搅拌反应混合物15分钟。然后滴加苄基溴(3；7mL，58.37mmol)，得到的混合物在100℃下加热16小时。过滤混合物并用EtOAc洗涤。用水(75mL)和盐水(30mL)洗涤有机层。干燥合并的有机层，过滤并浓缩。通过 色谱纯化粗料，用4.5%EtOAc-己烷洗脱以提供作为
液体的化合物4。
[0393] 产量：6.1g(63.47%)；1
[0394] H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.32-7.21(m，5H)，3.75(d，J=14Hz，1H)，3.58(s，3H)，3.30(d，J=14Hz，1H)，2.87-2.84(m，1H)，2.69(dd，J=15，5Hz，1H)，2.56-2.52(m，1H)，
2.47-2.41(m，1H)，2.15-2.10(m，1H)，1.64-1.52(m，2H)，1.44-1.32(m，4H)；
[0395] LCMS：[M+H]=248.0，RT=3.61分钟(程序P1，柱Y)。
[0396] C.(S)-2-(1-苄基-哌啶-2-基)乙醇(化合物5)
[0397] 在-30℃下向化合物4(6g，24.29mmol)的无水THF(200mL)搅拌溶液滴加二异丁基氢化铝(DIBAL-H；1.2M甲苯溶液，81mL，97.16mmol)。然后在0-5℃下搅拌反应混合物4小时。通过在-50℃下添加饱和NH4Cl溶液(15mL)猝灭反应混合物。浓缩反应混合物并用EtOAc稀释。用水和盐水洗涤有机层，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩以提供化合物5。
[0398] 产量：5.1g(95.87%)；1
[0399] H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.30-7.18(m，5H)，4.40(s，1H)，3.87(d，J=14Hz，1H)，3.51-3.44(m，2H)，3.23(d，J=14Hz，1H)，2.62-2.58(m，1H)，2.44-2.42(m，1H)，
2.05-2.00(m，1H)，1.82-1.77(m，1H)，1.66-1.59(m，3H)，1.40-1.23(m，5H)；
[0400] LCMS：[M+H]=220.5，RT=1.78分钟(程序P1，柱Y)。
[0401] D.(S)-1-苄基-2-(2-氯乙基)哌啶(化合物6)
[0402] 在75℃下加热化合物5(3.5g，15.98mmol)、亚硫酰氯(6mL)和四滴浓HCl的氯仿(40mL)溶液达16小时。浓缩反应混合物，添加饱和碳酸氢钠溶液(50mL)并用EtOAc萃取产物。分离有机层，并用水和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过 色谱纯化粗料，用3.5%EtOAc的己烷溶液洗脱，以提供作为液体的化合物6。
[0403] 产量：3.1g(81.85%)；
[0404] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.30-7.22(m，5H)，3.82(d，J=14Hz，1H)，3.72-3.62(m，2H)，3.32-3.30(m，1H)，2.63-2.55(m，2H)，2.12-2.04(m，2H)，1.99-1.89(m，
1H)，1.66-1.59(m，2H)，1.42-1.32(m，4H)；
[0405] LCMS：[M+H]=237.8，RT=3.78分钟(程序P1，柱Y)。
[0406] E.(S)-N-[2-(1-苄基-哌啶-2-基)乙基]-N-苯基茚满-2-基-胺(化合物8)
[0407] 在冰冷条件下向NaNH2(0.74g，18.99mmol)的甲苯(80mL)搅拌溶液滴加化合物7(2.91g，13.92mmol)的甲苯(10mL)溶液，并在室温下搅拌反应混合物3小时。然后在冰冷条件下向反应混合物滴加化合物6(3g，12.66mmol)的甲苯(10mL)溶液，并在110℃下搅拌混合物16小时。用EtOAc(70mL)稀释该反应混合物，并用水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过 色谱纯化粗料，用11.2%EtOAc的己烷溶液洗脱，以
提供化合物8，其作为粘性固体被分离。
[0408] 产量：1.5g(28.90%)；
[0409] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.30-7.10(m，11H)，6.79(d，J=8Hz，2H)，6.64(t，J=7Hz，1H)，4.64-4.61(m，1H)，3.67(d，J=14Hz，1H)，3.23-3.15(m，5H)，2.95-2.90(m，2H)，2.53-2.50(m，1H)，2.31(brs，1H)，2.02-1.98(m，1H)，1.67-1.60(m，2H)，1.51-1.49(m，2H)，
1.35-1.17(m，4H)；
[0410] LCMS：[M+H]=411.0，RT=3.20分钟(程序P1，柱Y)。
[0411] F.(S)-2-N-苯基-N-[2-(哌啶-2-基)乙基]茚满-2-基-胺(化合物9)
[0412] 用N2对化合物8(0.55g，1.34mmol)和甲酸铵(0.85g，13.41mmol)的甲醇(30mL)搅拌溶液吹扫30分钟。添加10%Pd-C(0.07g)，并继续吹扫另外5分钟。得到的混合物在100℃下加热3小时。通过 试剂过滤反应混合物并用甲醇洗涤。浓缩滤液并将粗
料溶解于50%乙腈-水混合物，并冻干以提供化合物9。
[0413] 产量：0.4g(93.14%)；
[0414] 1H-NMR(DMSO-d6)：δ7.24-7.10(m，6H)，6.81(d，J=8Hz，2H)，6.63(t，J=7Hz，1H)，4.68-4.60(m，1H)，3.38-3.36(m，1H)，3.24-3.11(m，3H)，2.96(dd，J=16，8Hz，2H)，
2.93-2.88(m，1H)，2.45-2.35(m，2H)，1.66-1.65(m，1H)，1.47-1.45(m，4H)，1.27-1.23(m，
2H)，0.96-0.93(m，1H)；
[0415] LCMS：[M+H]=320.8，RT=3.03分钟(程序P1，柱Y)。
[0416] G.(S)-N-苯基-N-[2-(1-丙基-哌啶-2-基)乙基]茚满-2-基-胺(化合物11)
[0417] 在冰冷条件下向化合物9(0.35g，1.09mmol)的甲醇(15mL)搅拌溶液添加NaCNBH3(0.082g，1.2mmol)，并在室温下搅拌混合物30分钟。在冰冷条件下向反应混合物滴加丙醛(10；0.1mL，1.37mmol)，并在室温下搅拌混合物16小时。使用旋转蒸发浓缩反应混合物。通过 色谱纯化粗料，用4.6%MeOH的DCM溶液洗脱以提供化合物11。
[0418] 产量：0.37g(93.59%)；
[0419] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.22-7.15(m，6H)，6.89-6.87(m，2H)，6.73-6.70(m，1H)，4.63-4.61(m，1H)，3.33-3.31(m，1H)，3.23-3.16(m，6H)，2.99-2.94(m，4H)，
1.99-1.97(m，1H)，1.72-1.53(m，10H)，0.85-0.82(m，6H)；
[0420] LCMS：[M+H]=363.0，RT=3.44分钟(程序P1，柱Y)。
[0421] H.(S)-1,1-二丙基-2-[2-((茚满-2-基)(苯基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物
[0422] 在密封管中向化合物11(0.25g，0.69mmol)的二氯乙烷(DCE，5mL)搅拌溶液添加K2CO3(1.15g，8.29mmol)和1-碘代丙烷(3mL)，在65℃下加热混合物16小时。过滤反应混合物并用DCM洗涤。使用旋转蒸发浓缩有机层。通过 色谱纯化粗料，用5.3%甲醇(MeOH)的DCM溶液洗脱以提供(S)-1,1-二丙基-2-[2-((茚满-2-基)(苯基)氨
基)乙基]哌啶鎓碘化物。
[0423] 产量：0.12g(31.32%)；
[0424] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.25-7.16(m，6H)，6.87(d，J=8Hz，2H)，6.73(t，J=7Hz，1H)，4.67-4.64(m，1H)，3.40-3.35(m，2H)，3.27-3.13(m，8H)，3.01-2.95(m，3H)，1.95-1.82(m，2H)，1.70-1.50(m，10H)，0.87(t，J=7Hz，3H)，0.80(t，J=7Hz，3H)；
[0425] LCMS：[M+]=405.4，RT=3.49分钟；
[0426] UPLC：98.00%，RT=4.03分钟，λ200nm，流动相(i)0.05%TFA水溶液，(ii)乙腈；柱：SB1.8μ。
[0427] 可选地，可以通过方案27描述的方法制备实施例1的化合物。
[0428] 实施例2：一般程序A2-(S)-1,1-二乙基-2-[2-((茚满-2-基)(苯基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物的制备
[0429]
[0430] 向化合物9(0.15g，0.47mmol)和K2CO3(0.78g，5.63mmol)的DCE(2mL)搅拌混合物添加乙基碘(2mL)，并在密封管中在65℃下加热16小时。过滤反应混合物，用MeOH-DCM洗涤，并使用旋转蒸发浓缩。使用230-400目硅胶柱色谱纯化棕色固体粗料，用4%MeOH的DCM溶液洗脱。用乙醚-己烷研磨固体材料以提供(S)-1,1-二乙基-2-[2-((茚满-2-基)(苯基)氨基)-乙基]哌啶鎓碘化物。
[0431] 产量：0.17g(71.62%)；
[0432] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.26-7.16(m，6H)，6.87(d，J=8Hz，2H)，6.72(t，J=7Hz，1H)，4.68-4.61(m，1H)，3.52-3.47(m，1H)，3.39-3.16(m，9H)，3.04-2.92(m，3H)，1.88-1.85(m，2H)，1.66-1.47(m，6H)，1.19-1.08(m，6H)；
[0433] LCMS：[M+]=377.8，RT=3.33分钟；
[0434] HPLC：97.43%，RT=2.73分钟，λ200nm，流动相(i)0.05%HCOOH水溶液，(ii)乙腈；柱：SB-C18(4.6x50mm)1.8μ。
[0435] 可选地，可以通过方案27描述的方法制备实施例2的化合物。
[0436] 实施例3：程序B1-1,1-二甲基-2-[((茚满-2-基)(苯基)氨基)甲基]哌啶鎓碘化物的制备
[0437]
[0438] A.(1-苄基哌啶-2-基)甲醇(化合物13)
[0439] 在0℃下向哌啶-2-甲醇(12；6g，52.09mmol)的二甲基甲酰胺(DMF，50mL)搅拌溶液连续添加K2CO3(10.78g，78.14mmol)和苄基溴(6.85mL，57.30mmol)，并在室温下搅拌混合物16小时。然后过滤反应混合物，并浓缩滤液。残余物溶解于EtOAc并用水和盐水溶液洗涤有机层。有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过230-400目硅胶色谱纯化粗料，用30%EtOAc-己烷洗脱以提供化合物13。
[0440] 产量：6.0g(56.6%)；1
[0441] H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.37-7.21(m，5H)，4.05(d，J=13Hz，1H)，3.85(dd，J=11，4Hz，1H)，3.50(dd，J=11，4Hz，1H)，3.30(d，J=13Hz，1H)，2.88-2.83(m，1H)，2.69(brs，1H)，
2.47-2.43(m，1H)，2.17-2.11(m，1H)，1.70-1.54(m，4H)，1.40-1.33(m，2H)。
[0442] B.1-苄基-2-(氯甲基)哌啶(化合物14)
[0443] 在0℃下向化合物13(3.6g，15.00mmol)的氯仿(50mL)搅拌溶液添加亚硫酰氯(1.34mL)。回流加热反应混合物2小时，然后浓缩。残余物溶解于EtOAc并用饱和碳酸氢钠溶液、水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过230-400目硅胶色谱纯化粗料，用10%EtOAc-己烷洗脱以提供作为油的化合物14。
[0444] 产量：3.2g(82.0%)；1
[0445] H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.37-7.28(m，4H)，7.23-7.21(m，1H)，4.01-3.96(m，1H)，3.79-3.66(m，2H)，3.32(d，J=13Hz，1H)，2.76-2.72(m，1H)，2.61(brs，1H)，
2.13-2.11(m，1H)，1.73-1.50(m，5H)，1.42-1.33(m，1H)；
[0446] LCMS：[M+H]=224.2，RT=3.77分钟(程序P1，柱Y)。
[0447] C.N-[(1-苄基-哌啶-2-基)甲基]-N-苯基茚满-2-基-胺(化合物15)
[0448] 在0℃下向氨基钠(706mg，18.1mmol)的甲苯(10mL)搅拌悬液添加化合物7(2.76g，13.2mmol)的甲苯(10mL)溶液。在室温下搅拌反应混合物3小时。向反应混合物添加化合物14(2.69g，12.1mmol)的甲苯溶液，并回流加热得到的混合物16小时。用EtOAc稀释该反应混合物，并用水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过230-400目硅胶色谱纯化粗料，用15%EtOAc-己烷洗脱以提供化合物15。
[0449] 产量：1.5g(31.9%)；
[0450] 1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.32-7.27(m，4H)，7.23-7.13(m，7H)，6.89(d，J=8Hz，2H)，6.80(d，J=7Hz，1H)，4.54-4.50(m，1H)，4.11(d，J=14Hz，1H)，3.57(dd，J=14，4Hz，1H)，
3.32(d，J=14Hz，1H)3.24-3.04(m，5H)，2.76-2.71(m，1H)，2.64-2.62(m，1H)，2.16-2.10(m，
1H)，1.82-1.76(m，1H)，1.63-1.61(m，1H)，1.48-1.31(m，4H)。
[0451] D.N-苯基-N-(哌啶-2-基甲基)茚满-2-基-胺(化合物16)
[0452] 用氩对化合物15(1.5g，3.79mmol)的甲醇(50mL)溶液吹扫20分钟。然后添加甲酸铵(2.33g，37.87mmol)，吹扫溶液另外10分钟。添加Pd-C(10%；216mg)并回流加热反应混合物3小时。通过 试剂过滤反应混合物并用甲醇洗涤。浓缩滤液并通过230-400目硅胶色谱纯化粗料，用2%甲醇-DCM洗脱以提供化合物16。
[0453] 产量：1.06g(92.1%)；
[0454] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.21-7.13(m，6H)，6.95(d，J=8Hz，2H)，6.73(t，J=7Hz，1H)，4.67-4.63(m，1H)，3.15-2.93(m，7H)，2.68-2.66(m，1H)，2.45-2.42(m，1H)，1.70-1.60(m，2H)，1.51-1.48(m，1H)，1.33-1.19(m，2H)，1.06-1.00(m，1H)。
[0455] E.N-[(1-甲基-哌啶-2-基)甲基]-N-苯基茚满-2-基-胺(化合物17)
[0456] 在冰冷条件下向化合物16(0.2g，0.65mmol)的DCE(10mL)搅拌溶液连续添加甲醛(35%水溶液，0.08mL，0.98mmol)、Na(OAc)3BH(0.415g，1.95mmol)和乙酸(AcOH，0.1mL)。允许得到的混合物在室温下搅拌16小时。用DCM稀释反应混合物，并用NaOH(1N)碱化。分离有机层，并用水和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过230-400目硅胶色谱纯化粗料，用5%甲醇-DCM洗脱以提供化合物17。
[0457] 产量：0.12g(57.4%)；
[0458] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.22-7.13(m，6H)，6.88(d，J=8Hz，2H)，6.70(t，J=7Hz，1H)，4.61-4.56(m，1H)，3.54(dd，J=14，4Hz，1H)，3.15-2.96(m，5H)，2.71-2.66(m，1H)，2.21(s，3H)，2.11-2.03(m，1H)，2.00-1.91(m，1H)，1.70-1.59(m，2H)，1.47-1.35(m，
2H)，1.13-1.06(m，2H)；
[0459] LCMS：[M+H]=321.0，RT=3.32分钟(程序P1，柱Y)。
[0460] F.1,1-二甲基-2-[((茚满-2-基)(苯基)氨基)甲基]哌啶鎓碘化物
[0461] 向化合物17(0.1g，0.31mmol)的DCE(5mL)搅拌溶液添加甲基碘(0.058mL，0.94mmol)，并在室温下搅拌得到的混合物16小时。在减压下浓缩反应混合物，并通过从甲醇-乙醚结晶纯化粗料，以提供1,1-二甲基-2-[((茚满-2-基)(苯基)氨基)甲基]哌啶鎓碘化物。
[0462] 产量：0.06g(41.62%)。
[0463] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.27(t，J=7.76Hz，2H)，7.22-7.19(m，2H)，7.15-7.13(m，2H)，7.04(d，J=7.96Hz，2H)，6.90(t，J=7Hz，1H)，4.50-4.46(m，1H)，3.83(d，J=12Hz，1H)，3.41-3.35(m，4H)，3.19(s，3H)，3.06(d，J=8Hz，2H)，3.00-2.98(m，5H)，
1.95-1.92(m，1H)，1.79-1.64(m，4H)，1.33-1.30(m，1H)；
[0464] LCMS：[M+]=335.0，RT=3.26分钟；
[0465] UPLC：99.72%，RT=3.92分钟，λ200nm，流动相(i)0.05%TFA水溶液，(i)乙腈；柱：SB-C18(4.6x50mm)1.8μ。
[0466] 实施例4：一般程序B2-1,1-二甲基-2-[2-((2-氟苯基)(茚满-2-基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物的制备
[0467]
[0468] 在密封管中向(2-氟-苯基)-茚满-2-基-(2-哌啶-2-基-乙基)-胺(100mg，0.30mmol)的CHCl3(3mL)搅拌溶液添加甲基碘(97μL，1.48mmol)和碳酸钾(204mg，
1.48mmol)，并在50℃下搅拌混合物16小时。然后通过烧结漏斗过滤反应混合物。真空浓缩滤液并通过230-400硅胶柱色谱纯化，使用MeOH-DCM(1-5%)作为洗脱剂。冻干固体以提供1,1-二甲基-2-[2-((2-氟苯基)(茚满-2-基)氨基)-乙基]哌啶鎓碘化物。
[0469] 产量：84mg(57.47%)；
[0470] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.33(t，J=15Hz，1H)，7.22-7.11(m，7H)，4.23-4.19(m，1H)，3.42(d，J=13Hz，1H)，3.31-3.22(m，2H)，3.10-3.07(m，1H)，
3.05-3.03(m，1H)，3.01-2.99(m，1H)，2.91(s，3H)，2.88-2.85(m，2H)，2.80(s，3H)，
2.01-1.97(m，1H)，1.86-1.76(m，2H)，1.69-1.66(m，2H)，1.56-1.53(m，2H)，1.41-1.34(m，
3H)；
[0471] LC-MS：[M+]=367，RT=2.64分钟；
[0472] UPLC：98.63%，RT=3.96分钟，λ200nm，流动相：(i)0.05%TFA水溶液，(ii)乙腈；柱：SB C18(50x4.6mm)1.8μ)
[0473] 实施例5：一般程序C-1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(苯基)氨基)乙基]吡咯烷鎓碘化物的制备
[0474]
[0475] A.茚满-2-基-[2-(1-甲基-吡咯烷-2-基)-乙基]苯胺(化合物19)
[0476] 在0℃下向氨基钠(256mg，6.58mmol)的甲苯(10mL)搅拌悬液添加茚满-2-基-苯基-胺(7；1.0g，4.78mmol)的甲苯(5mL)溶液。在室温下搅拌反应混合物3小时。向反应混合物添加盐酸2-(2-氯乙基)-1-甲基-吡咯烷(18；0.808g，4.39mmol)的甲苯(5mL)溶液，得到的混合物被回流16小时。用EtOAc稀释反应混合物，并用水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过中性氧化铝柱色谱纯化粗料，用0.8%甲醇-DCM洗脱以提供化合物19。
[0477] 产量：0.1g(7.1%)；
[0478] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.26-7.14(m，6H)，6.81(d，J=8Hz，2H)，6.65(t，J=7Hz，1H)，4.65-4.62(m，1H)，3.22-3.14(m，4H)，2.97-2.88(m，3H)，2.10(s，3H)，1.94-1.91(m，2H)，1.77-1.68(m，2H)，1.57-1.53(m，2H)，1.29-1.23(m，2H)；
[0479] LCMS：[M+H]=321.0，RT=3.22分钟(程序P1，柱Y)。
[0480] B.1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(苯基)氨基)乙基]吡咯烷鎓碘化物
[0481] 向化合物19(0.1g，0.31mmol)的DCE(3mL)搅拌溶液添加甲基碘(0.058mL，0.94mmol)，得到的混合物在室温搅拌16小时。减压浓缩反应混合物，并通过中性氧化铝柱色谱纯化粗料，用1%甲醇-DCM洗脱，以提供1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(苯基)氨基)乙基]吡咯烷鎓碘化物。
[0482] 产量：0.06g(41.8%)；
[0483] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.24-7.15(m，6H)，6.90(d，J=8Hz，2H)，6.74(t，J=7Hz，1H)，4.65-4.61(m，1H)，3.59-3.55(m，1H)，3.45-3.39(m，6H)，3.24-3.13(m，4H)，2.98-2.94(m，5H)，2.74(s，3H)，2.30-2.21(m，1H)，2.02-1.94(m，3H)，1.67-1.62(m，1H)，
1.54-1.50(m，1H)；
[0484] LCMS：[M+]=335.4，RT=3.65分钟；
[0485] UPLC：97.93%，RT=3.37分钟，λ200nm，流动相(i)0.05%TFA水溶液，(ii)乙腈；柱：SB-C18(4.6x50mm)1.8μ。
[0486] 实施例6：用于制备N-(茚满-2-基)苯胺(化合物7)的一般程序
[0487]
[0488] 在冰冷条件下向2-茚酮(5g，37.83mmol)的DCM(135mL)搅拌溶液分批添加苯胺(3.4mL，37.83mmol)、AcOH(2.16mL，37.83mmol)和Na(OAc)3BH(11.22g，52.96mmol)。室温搅拌反应混合物16小时。然后用EtOAc(450mL)稀释反应混合物，并用水(150mL)和盐水(50mL)洗涤。有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过 色谱纯化粗料，并用1.7%EtOAc的己烷溶液洗脱以获得化合物7。
[0489] 产量：7.1g(89.80%)；
[0490] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.24-7.21(m，2H)，7.15-7.13(m，2H)，7.08(t，J=8Hz，2H)，6.61(d，J=8Hz，2H)，6.53(t，J=7Hz，1H)，5.83(d，J=7Hz，1H)，4.24-4.16(m，1H)，
3.28(dd，J=16，7Hz，2H)，2.79(dd，J=16，7Hz，2H)；
[0491] LCMS：[M+H]=210.2，RT=3.72分钟(程序P1，柱Y)。
[0492] 实施例7：一般程序D-1,1-二甲基-2-[3-((茚满-2-基)苯基)氨基)丙基]哌啶鎓碘化物的制备
[0493]
[0494] A：盐酸3-(哌啶-2-基)丙-1-醇(化合物21)
[0495] 向化合物20(5g，36.4mmol)的乙醇(32mL)搅拌溶液添加浓HCl(3.2mL)，并且用N2吹扫反应混合物15分钟。然后添加氧化铂(PtO2；1g)并脱气5分钟。最后，在室温下Parr装置中45psi H2压力下氢化反应混合物。通过 试剂过滤反应混合物，并用乙醇洗涤。浓缩滤液以产生粗产物21，其原样用于下一步。
[0496] 产量：6.2g(94.8%)；
[0497] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ8.88(brs，1H)，8.71(brs，1H)，4.57(s，1H)，3.40(d，J=4Hz，2H)，3.17(d，J=12Hz，1H)，2.96(brs，1H)，2.81-2.79(m，1H)，1.84(d，J=13Hz，1H)，1.71-1.65(m，3H)，1.62-1.58(m，1H)，1.56-1.43(m，3H)，1.40-1.38(m，1H)。
[0498] B：3-(1-苄基-哌啶-2-基)丙-1-醇(化合物22)
[0499] 在冰冷条件下向化合物21(3g，16.71mmol)的乙醇(23mL)搅拌溶液分批添加K2CO3(11.5g，83.55mmol)。然后添加苄基溴(2mL，16.71mmol)，并且回流加热反应混合物2小时。过滤反应混合物，并用EtOAc洗涤。浓缩滤液，残余物溶解于EtOAc，用饱和NaHCO3溶液和盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过230-400硅胶柱色谱纯化粗料，使用1-3%MeOH-DCM作为洗脱剂，以产生化合物22。
[0500] 产量：2.6g(66.7%)；
[0501] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.30-7.29(m，4H)，7.23-7.21(m，1H)，4.40(s，1H)，3.91(d，J=14Hz，1H)，3.37(s，2H)，3.16(d，J=14Hz，1H)，2.62(d，J=12Hz，1H)，2.28(s，1H)，
1.99-1.94(m，1H)，1.60-1.48(m，4H)，1.43-1.24(m，4H)；
[0502] LCMS[M+H]：234.2，RT=2.07分钟，(程序P1，柱Y)。
[0503] C：3-(1-苄基-哌啶-2-基)丙醛(化合物23)
[0504] 在-78℃下向DMSO(0.92mL，12.87mmol)的无水DCM(40mL)搅拌溶液滴加草酰氯(0.55mL，6.44mmol)，并且搅拌反应混合物15分钟。滴加溶解于DCM(15mL)的化合物22(1g，4.29mmol)，并且在-78℃下搅拌反应混合物1小时。然后通过滴加Et3N(2.9mL，21.45mmol)而猝灭反应混合物，并且在室温搅拌溶液15分钟。然后向溶液添加水，并且用DCM萃取反应混合物。有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩以产生粗化合物23，其原样用于下一步。
[0505] 产量：820mg(83%)；
[0506] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ9.68(s，1H)，7.52-7.31(m，5H)，3.88-3.84(m，1H)，3.55-3.47(m，1H)，3.20-3.16(m，1H)，2.67(brs，1H)，2.33(brs，1H)，2.10-2.01(m，1H)，
1.88-1.76(m，2H)，1.72-1.61(m，3H)，1.45-1.21(m，4H)。
[0507] D：[3-(1-苄基-哌啶-2-基)-丙基]茚满-2-基-胺(化合物24)
[0508] 在冰冷条件下向化合物23(820mg，3.55mmol)的DCM(15mL)搅拌溶液滴加2-氨基-茚满(472mg，3.55mmol)。向反应混合物添加乙酸(0.2mL)，随后在冰冷条件下分批添加三乙酰氧基硼氢化钠(2.2g，10.65mmol)。在室温搅拌反应混合物16小时。用DCM稀释反应混合物，用饱和NaHCO3溶液和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过230-400硅胶柱色谱纯化粗料，使用1-3%MeOH-DCM作为洗脱剂，以产生化合物24。
[0509] 产量：500mg(40.5%)；
[0510] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.29(d，J=4Hz，4H)，7.22-7.17(m，3H)，7.12-7.11(m，2H)，3.91(d，J=14Hz，1H)，3.59(t，J=7Hz，1H)，3.18(d，J=13Hz，1H)，3.11-3.05(dd，J=7，
16Hz，2H)，2.75-2.70(dd，J=6，16Hz，2H)，2.63(brs，3H)，2.29(brs，1H)，2.04-1.97(m，1H)，
1.58(brs，4H)，1.45-1.28(m，5H)，1.23(s，1H)；
[0511] LCMS[M+H]=349.2，RT=2.89分钟，(程序P1，柱Y)
[0512] E：[3-(1-苄基-哌啶-2-基)-丙基]茚满-2-基-苯胺(化合物25)
[0513] 向化合物24(400mg，1.15mmol)的无水甲苯(12mL)搅拌溶液滴加溴苯(0.12mL，1.15mmol)和叔丁醇钾(322mg，2.87mmol)。用氮对反应混合物吹扫30分钟。最后，添加DavePhos(90mg，0.23mmol)和Pd2(dba)3(136mg，0.15mmol)，加热反应混合物至110℃持续16小时。薄层色谱(TLC)显示反应完全。然后用乙酸乙酯稀释反应混合物，用水和盐水洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。通过230-400硅胶柱色谱纯化粗反应混合物，使用
5-20%EtOAc-己烷作为洗脱剂，产生化合物25。
[0514] 产量：290mg(59.5%)；
[0515] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.29-7.21(m，6H)，7.16-7.12(m，5H)，6.79(d，J=8Hz，2H)，6.63(t，J=7Hz，1H)，3.86(d，J=14Hz，1H)，3.17-3.07(m，5H)，2.96-2.90(dd，J=6，16Hz，
2H)，2.60-2.58(m，1H)，2.20(brs，1H)，1.98-1.89(m，1H)，1.56(brs，2H)，1.48-1.40(m，
5H)，1.30-1.23(m，3H)；
[0516] LCMS[M+H]=424.8，RT=3.14分钟，(程序P1，柱Y)。
[0517] F：茚满-2-基-苯基-(3-哌啶-2-基-丙基)胺(化合物26)
[0518] 用N2对化合物25(340mg，0.80mmol)和甲酸铵(506mg，8.02mmol)的甲醇(20mL)溶液吹扫15分钟，添加10%Pd-C催化剂(68mg)，吹扫持续另外5分钟，并使混合物在110℃加热6小时。通过 试剂过滤反应混合物，并用甲醇洗涤。旋转蒸发浓缩合并的有机层。向残余物添加少量水，并且用EtOAc萃取产物。干燥有机层，过滤并浓缩以产生化合物26。
[0519] 产量：248mg(92.6%)；
[0520] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.24-7.23(m，2H)，7.19-7.15(m，4H)，6.81(d，J=8Hz，2H)，6.66(t，J=7Hz，1H)，4.64(t，J=7Hz，1H)，3.16-3.13(m，4H)，3.06(d，J=13Hz，1H)，
2.99-2.93(dd，J=7，16Hz，2H)，2.67-2.61(m，2H)，1.70-1.58(m，3H)，1.51-1.45(m，2H)，
1.42-1.27(m，4H)，1.14-1.09(m，1H)；
[0521] LCMS[M+H]=335.2，RT=3.73分钟，(程序P1，柱Z)。
[0522] G：1,1-二甲基-2-[3-(茚满-2-基)苯基)氨基)丙基]哌啶鎓碘化物
[0523] 在密封管中向化合物26(100mg，0.30mmol)的CHCl3(3mL)搅拌溶液添加甲基碘(97μL，1.50mmol)和碳酸钾(207mg，1.50mmol)，在50℃下搅拌反应混合物16小时。通过烧结漏斗过滤反应混合物。旋转蒸发浓缩滤液，并通过230-400硅胶柱色谱纯化，使用MeOH-DCM(1-3%)作为洗脱剂，以产生2-[3-(茚满-2-基-苯基-氨基)-丙基]-1,1-二甲基-哌啶鎓碘化物。
[0524] 产量：51mg(46.9%)；
[0525] 1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.28(s，1H)，7.25(s，3H)，7.16(t，J=3Hz，2H)，6.89-6.82(m，3H)，4.52(t，J=7Hz，1H)，3.99(d，J=13Hz，1H)，3.66-3.50(m，1H)，
3.38-3.33(m，4H)，3.27-3.13(m，4H)，3.04-2.97(m，5H)，1.87-1.81(m，5H)，1.68-1.61(m，
1H)，1.48-1.42(m，2H)，1.29-1.23(m，2H)；
[0526] LCMS[M+]=363，RT=3.32分钟。
[0527] UPLC：98.11%，RT=3.11分钟，λ200nm，流动相：(i)0.05%TFA水溶液，(ii)乙腈；柱：SB C18(50x4.6mm)1.8μ。
[0528] 实施例8：一般程序E–1,1-二甲基-2-[((茚满-2-基)苯基)氨基)甲基]吡咯烷鎓碘化物的制备
[0529]
[0530] A：吡咯烷-1,2-二羧酸1-叔丁酯2-甲酯
[0531] 在0℃下向吡咯烷-1,2-二羧酸1-叔丁酯(5.0g，23.25mmol)和甲基碘(6.0mL，93.02mmol)的DMF(25mL)搅拌溶液分批添加NaH(60%w/w，2.3g，57.09mmol)。允许得到的混合物在室温搅拌24小时。将反应混合物倾入冷水并用乙酸乙酯萃取。用水和盐水洗涤有机层。经Na2SO4干燥、过滤和浓缩提供了粗化合物2d。
[0532] 产量：5.0g(93.91%)；
[0533] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ4.18-4.13(m，1H)，3.65(s，3H)，3.38-3.32(m，2H)，2.22-2.18(m，1H)，1.87-1.78(m，3H)，1.32(s，9H)；
[0534] LCMS[M+H]=230.2，RT=3.28分钟(程序P1，柱Z)。
[0535] B：1-苄基-吡咯烷-2-羧酸甲基酯
[0536] 在冰冷条件下向化合物2d(6.8g，29.69mmol)的DCM(55mL)搅拌溶液滴加TFA(15.2mL，203.94mmol)。允许得到的混合物在室温搅拌4小时。减压下浓缩反应混合物，将粗料溶解于乙腈(100mL)，并将混合物冷却至0℃。然后添加K2CO3(20.48g，148.47mmol)(调节pH至碱性)并在0℃下搅拌混合物15分钟。添加苄基溴(5.2mL，44.54mmol)，并回流加热得到的混合物16小时。过滤反应混合物并浓缩滤液。残余物溶解于乙酸乙酯，并用水和盐水洗涤有机层。经Na2SO4干燥、过滤和浓缩提供了粗化合物4d。
[0537] 产量：3.0g(46.11%)；
[0538] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.32-7.21(m，5H)，3.85(d，J=13Hz，1H)，3.58(s，3H)，3.50(d，J=13Hz，1H)，3.28-3.24(m，1H)，2.86-2.81(m，1H)，2.38-2.32(m，1H)，
2.08-2.03(m，1H)，1.84-1.69(m，3H)；
[0539] LCMS[M+H]=219.6，RT=3.35分钟(程序P1，柱X)。
[0540] C：(1-苄基-吡咯烷-2-基)甲醇
[0541] 在冰冷条件下向LAH(1.03g，27.39mmol)的THF(120mL)搅拌悬液添加化合物4d(3.0g，13.69mmol)的THF(30mL)溶液。允许得到的混合物在室温搅拌4小时。通过添加盐水溶液猝灭反应混合物并通过 垫过滤。滤液经Na2SO4干燥，过滤并浓缩以获得粗化合物5d。
[0542] 产量：2.5g(95.54%)；
[0543] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.30-7.19(m，5H)，4.37(t，J=5Hz，1H)，4.04(d，J=13Hz，1H)，3.47-3.41(m，1H)，3.32(d，J=13Hz，1H)，3.27-3.24(m，1H)，2.76-2.74(m，1H)，2.58-2.55(m，1H)，2.16-2.10(m，1H)，1.86-1.80(m，1H)，1.60-1.55(m，3H)；
[0544] LCMS：[M+H]=192.0，RT=1.67分钟(程序P1，柱Y)。
[0545] D：1-苄基吡咯烷-2-甲醛
[0546] 在-78℃下向DMSO(2.79mL，39.27mmol)的DCM(120mL)搅拌溶液滴加草酰氯(1.69mL，19.63mmol)，并搅拌混合物15分钟。然后缓慢添加化合物5d(2.5g，13.08mmol)的DCM(30mL)溶液，并在-78℃搅拌1小时。向反应混合物添加三乙胺(TEA；9.1mL，65.44mmol)并用DCM稀释反应混合物。用水和盐水洗涤有机层。经Na2SO4干燥、过滤和浓缩提供了粗化合物31a。
[0547] 产量：2.59g；
[0548] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ9.26(d，J=4Hz，1H)，7.32-7.23(m，5H)，3.73(d，J=13Hz，1H)，3.63(d，J=13Hz，1H)，2.98-2.94(m，2H)，2.39-2.32(m，1H)，1.97-1.90(m，1H)，1.83-1.72(m，3H)。
[0549] E：(1-苄基-吡咯烷-2-基甲基)茚满-2-基-胺
[0550] 在0℃下向化合物31a(1.6g，8.46mmol)的DCM(30mL)搅拌溶液连续添加2-氨基茚满(1.12g，8.46mmol)、Na(OAc)3BH(5.38g，25.40mmol)和乙酸(0.5mL)。允许得到的混合物在室温搅拌16小时。用DCM稀释反应混合物，并用饱和NaHCO3溶液、水和盐水洗涤有机层，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，通过 纯化粗料，用8%乙酸乙酯-己烷洗脱，以提供粘性化合物24d。
[0551] 产量：1.5g(57.94%)；
[0552] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.30-7.09(m，9H)，3.96(d，J=13Hz，1H)，3.46-3.42(m，1H)，3.25(d，J=13Hz，1H)，3.07-2.99(m，2H)，2.78-2.74(m，1H)，
2.68-2.55(m，5H)，2.15-2.08(m，1H)，1.87-1.82(m，1H)，1.67-1.55(m，3H)；
[0553] LCMS[M+H]=307.0，RT=3.23分钟(程序P1，柱X)。
[0554] F：(1-苄基吡咯烷-2-基甲基)茚满-2-基-苯胺(化合物33)
[0555] 用氮对化合物24d(1.0g，3.26mmol)、溴苯(0.6mL，6.53mmol)、KOtBu(0.92g，8.16mmol)和DavePhos(0.26g，0.65mmol)的1,4-二噁烷(30mL)搅拌混合物吹扫15分钟。
然后添加Pd2(dba)3(0.3g，0.33mmol)，并且在微波条件下在100℃下加热得到的混合物1小时。用乙酸乙酯稀释反应混合物，并用水和盐水洗涤有机层。经Na2SO4干燥、过滤、浓缩和使用6%乙酸乙酯-己烷洗脱的 色谱提供了粘性化合物8d。
[0556] 产量：0.24g(9.62%)；
[0557] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.30-7.27(m，2H)，7.23-7.13(m，9H)，6.88-6.86(m，2H)，6.76-6.68(m，1H)，4.64-4.60(m，1H)，4.00(d，J=13Hz，1H)，3.26-3.22(m，2H)，
3.15-3.09(m，4H)，3.04-2.98(m，1H)，2.80-2.77(m，2H)，2.15-2.09(m，1H)，1.82-1.77(m，
1H)，1.62-1.57(m，2H)，1.51-1.48(m，1H)；
[0558] LCMS[M+H]=383.2，RT=2.69分钟(程序P1，柱Y)。
[0559] G：茚满-2-基-苯基吡咯烷-2-基-甲胺(化合物34)
[0560] 用氮对化合物8d(0.7g，1.83mmol)和HCOONH4(2.32g，36.79mmol)的MeOH(30mL)搅拌混合物吹扫15分钟。添加10%Pd-C(0.28g)，并使得到的混合物回流加热6小时。通过垫过滤反应混合物，并用甲醇洗涤。浓缩滤液，并使残余物吸收入乙酸乙酯。用水和盐水洗涤有机层。经Na2SO4干燥、过滤、浓缩和使用10%甲醇-DCM洗脱的色谱提供了化合物9g。
[0561] 产量：0.35g(65.50%)；
[0562] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.23-7.20(m，4H)，7.15-7.13(m，2H)，6.97(d，J=8Hz，2H)，6.78(t，J=7Hz，1H)，4.61-4.57(m，1H)，3.33-3.30(m，1H)，3.16-3.06(m，4H)，3.01-2.89(m，4H)，1.86-1.67(m，3H)，1.44-1.38(m，1H)；
[0563] LCMS[M+H]=293.0，RT=2.90分钟(程序P1，柱Y)。
[0564] H：1,1-二甲基-2-[((茚满-2-基)苯基)氨基)甲基]吡咯烷鎓碘化物
[0565] 向化合物9g(0.12g，0.41mmol)的CHCl3(4mL)搅拌溶液连续添加K2CO3(0.57g，4.1mmol)和甲基碘(0.3mL，4.1mmol)。在密封管中在50℃下加热得到的混合物40小时。过滤反应混合物，并用甲醇洗涤。浓缩滤液，并通过用2.5%甲醇-DCM洗脱的
色谱纯化粗料，以获得黄色固体，其用戊烷和乙醚研磨以提供2-[(茚满-2-基-苯基-氨基)-甲基]-1,1-二甲基-吡咯烷鎓碘化物。
[0566] 产量：0.056g(30.48%)；
[0567] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.32-7.28(m，2H)，7.20-7.10(m，6H)，6.96(t，J=7Hz，1H)，4.43-4.38(m，1H)，3.79-3.74(m，1H)，3.60-3.54(m，2H)，3.52-3.46(m，2H)，3.16(s，
3H)，3.09-2.99(m，4H)，2.92(s，3H)，2.18-2.15(m，1H)，1.97-1.90(m，3H)；
[0568] LCMS[M+]=321.2，RT=2.99分钟；
[0569] UPLC：97.43%，RT=4.44分钟，λ200nm，流动相(i)0.05%HCOOH水溶液，(ii)乙腈；柱：NX C18(50x4.6mm)，3μ。
[0570] 实施例9-35
[0571] 使用针对实施例1至8和方案1至27中描述的方法，以相似方式制备表2所列的1
其他化合物。紧接表2提供了实施例9至35的产量和 H-NMR、LCMS和HPLC表征数据。
[0572] 实施例36：一般程序F–1,1-二乙基-2-[2-((茚满-2-基)(苯基)氨基)乙基]吡咯烷鎓碘化物的制备
[0573]
[0574] A：2-甲氧基羰基甲基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(化合物36)
[0575] 在-30℃下向吡咯烷-1,2-二羧酸1-叔丁酯35(10g，46.46mmol)的无水THF搅拌溶液滴加N-甲基吗啉(6.4mL，58.1mmol)和氯甲酸异丁酯(6.7mL，65.1mmol)。在相同温度下搅拌反应混合物一小时，并在-30℃下添加重氮甲烷溶液(原位制备)。允许得到的混合物在室温搅拌过夜。用乙酸(15mL)猝灭过量重氮甲烷，并在减压下蒸发。残余物溶解于乙醚，并用水和盐水洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并蒸发。残余物溶解于甲醇(100mL)并在冰冷条件下分批添加Ag2O(5.5g)，然后允许在室温搅拌2小时。添加氯仿，通过 试剂过滤，并用甲醇洗涤。浓缩滤液，并通过硅胶(230-400目)色谱纯化粗料，使用1-5%乙酸乙酯-己烷洗脱，以获得淡黄色液体化合物36。
[0576] 产量：4.0g(45%)；
[0577] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ3.99-3.95(m，1H)，3.59(s，3H)，3.23-3.21(m，2H)，2.72-2.65(m，1H)，2.38-2.34(m，1H)，1.98-1.95(m，1H)，1.81-1.72(m，2H)，1.65-1.63(m，
1H)，1.39(s，9H)。
[0578] B：2-(2-羟基乙基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(化合物37)
[0579] 在0℃下向LAH(0.94g，24.69mmol)的无水THF(100mL)搅拌溶液添加化合物36(3.0g12.34mmol)的THF(40mL)溶液，并在室温搅拌16小时。用盐水溶液猝灭反应混合物，并通过 床过滤。有机层经无水Na2SO4干燥并蒸发。通过 色谱纯
化粗品，使用2-3%甲醇-DCM洗脱，以提供液体化合物37。
[0580] 产量：1.4g(52.8%)；
[0581] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ4.37(t，J=5Hz，1H)，3.73-3.71(m，1H)，3.42-3.37(m，2H)，3.22-3.19(m，2H)，1.83-1.64(m，5H)，1.43-1.41(m，1H)，1.39(s，9H)；
[0582] LCMS[M+H]=216.0，RT=2.83分钟，(程序P1，柱Y)
[0583] C：2-(2-氧代乙基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(化合物38)
[0584] 在-78℃下向DMSO(2.08mL，29.30mmol)的DCM(60mL)搅拌溶液添加草酰氯(1.26mL，14.65mmol)，并搅拌15分钟。然后，在-78℃下下添加化合物37(2.1g，9.76mmol)的DCM(30mL)溶液，并在相同温度下搅拌1小时。添加TEA(4.9mL，48.83mmol)，并允许反应混合物温至室温。用DCM洗脱反应混合物，并用水和盐水洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，并蒸发，以提供粗化合物38。
[0585] 产量：2.3g(粗品)
[0586] D：2-[2-((茚满-2-基)氨基)乙基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(化合物39)
[0587] 在0℃下向化合物38(2.3g，10.80mmol)的DCM(90mL)搅拌溶液连续添加2-氨基茚满(1.4mL，10.80mmol)、Na(OAC)3BH(6.86g，32.39mmol)和乙酸(2mL)。允许得到的混合物在室温搅拌16小时。反应混合物在DCM中稀释，并用1N NaOH、水和盐水溶液洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并蒸发。通过用3-4%甲醇-DCM洗脱的 色谱纯化粗料以提供化合物39。
[0588] 产量：3.0g(84.26%)。
[0589] E：2-[2-(((茚满-2-基)苯基)氨基)-乙基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(化合物40)
[0590] 向化合物39(1.5g，4.54mmol)的二噁烷(22mL)搅拌溶液添加溴苯(1mL，t
9.09mmol)、DavePhos(0.36g，0.91mmol)和KOBu(1.28g，11.36mmol)，并用氩吹扫15分钟。
然后添加Pd2(dba)3(0.42g，0.45mmol)，再次吹扫溶液15分钟。在100℃微波中加热反应混合物1小时。反应混合物在乙酸乙酯中稀释，并用水和盐水洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥，过滤并蒸发。通过用5-6%乙酸乙酯-己烷洗脱的 色谱纯化粗产物以提
供化合物40。
[0591] 产量：1.7g(94.44%)；
[0592] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.24-7.22(m，2H)，7.18-7.14(m，4H)，6.81(d，J=8Hz，2H)，6.65(t，J=7Hz，1H)，4.66-4.64(m，1H)，3.62-3.60(m，1H)，3.21-3.14(m，6H)，2.97-2.90(m，2H)，1.82-1.77(m，2H)，1.67-1.65(m，2H)，1.40-1.35(m，11H)；
[0593] LCMS[M+H]=407.0，RT=2.53分钟，(程序P1，柱Y)。
[0594] F：2-[2-(((茚满-2-基)苯基)氨基)乙基]吡咯烷(化合物41)
[0595] 在0℃下向化合物40(1g，2.46mmol)添加二噁烷-HCl(25mL)，并允许在室温搅拌4小时。蒸发反应混合物，在乙酸乙酯中稀释，并用碳酸氢钠溶液、水和盐水洗涤。有机层经无水Na2SO4干燥并蒸发，以提供粗化合物41。
[0596] 产量：0.6g(粗品)。
[0597] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.25-7.22(m，2H)，7.18-7.14(m，4H)，6.83(d，J=8Hz，2H)，6.63(t，J=7Hz，1H)，4.67-4.63(m，1H)，3.21-3.13(m，3H)，3.00-2.95(m，2H)，2.83-2.75(m，2H)，2.66-2.64(m，1H)，1.74-1.71(m，1H)，1.57-1.50(m，4H)，1.08-1.07(m，
1H)；
[0598] LCMS[M+H]=307.0，RT=3.01分钟，(程序P1，柱Y)。
[0599] G：1,1-二乙基-2-[2-((茚满-2-基)(苯基)氨基)乙基]吡咯烷鎓碘化物
[0600] 向化合物41(0.3g，0.98mmol)的氯仿(6mL)搅拌溶液添加K2CO3(0.68g，4.90mmol)和乙基碘(0.75mL，9.8mmol)。在密封管中50℃下加热反应混合物16小时。过滤并蒸发反应混合物。通过用1-2%甲醇-DCM洗脱的快速柱色谱纯化粗产物以提供粘性化合物。真空下冷冻并干燥化合物以获得想要的化合物。
[0601] 产量：0.12g(24.99%)；
[0602] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.25-7.16(m，6H)，6.89(d，J=8Hz，2H)，6.73(t，J=7Hz，1H)，4.65-4.61(m，1H)，3.59-3.55(m，1H)，3.45-3.36(m，2H)，3.25-3.05(m，8H)，3.02-2.94(m，2H)，2.22-2.20(m，1H)，1.92-1.90(m，3H)，1.69-1.64(m，2H)，1.18-1.08(m，
6H)；
[0603] LCMS[M+]=363.0，RT=3.07分钟，(程序P1，柱Y)；
[0604] UPLC：98.00%(RT=4.97分钟，λ200nm，流动相A.0.05%TFA水溶液，B.乙腈；柱：SB-C18(50x4.6mm)1.8μ)。
[0605] 实施例37：一般程序G–1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(吡啶-2-基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物的制备
[0606]
[0607] A.2-(2-羟基乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(化合物42)
[0608] 在0℃下向哌啶-2-乙醇(5g，38.69mmol)的DCM(80m：)搅拌溶液滴加TEA(6.5mL，46.43mmol)，随后是BOC酸酐(9.8mL，42.56mmol)，并在室温搅拌反应混合物16小时。用乙酸乙酯稀释反应混合物，并用水和盐水溶液洗涤有机层，然后经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩以获得粗化合物42。
[0609] 产量：10g(粗品)；
[0610] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ4.33(t，J=5Hz，1H)，4.20-4.18(m，1H)，3.82-3.79(m，2H)，3.37-3.34(m，1H)，2.73(t，J=13Hz，1H)，1.79-1.72(m，1H)，1.61-1.47(m，7H)，1.38(s，
9H)，1.26-1.22(m，1H)；
[0611] LCMS[M+H]=230.2，RT=2.95分钟，(程序P1，柱Y)。
[0612] B.2-(2-氧代乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(化合物43)
[0613] 在 -78 ℃ 下 向 DMSO(1.86mL，26.2mmol) 的 DCM(60mL) 搅 拌 溶 液 添 加(COCl)2(1.13mL，13.1mmol)，并在-78℃搅拌反应混合物15分钟。然后在-78℃滴加化合物42(2g，8.733mmol)的DCM(20mL)溶液，然后在相同温度下搅拌溶液1小时。然后添加TEA(6.06mL，43.66mmol)，并在室温搅拌反应混合物。用DCM稀释反应混合物，并用水和盐水溶液洗涤有机层，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩以提供粘性粗化合物43。
[0614] 产量：2.4g(粗品)。
[0615] C.2-[2-((茚满-2-基)氨基)乙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(化合物44)
[0616] 在0℃下向化合物43(2.4g，10.57mmol)的DCM(50mL)搅拌溶液连续添加2-氨基茚满(1.37mL，10.57mmol)、三乙氧基硼氢化钠(6.72g，31.72mmol)和乙酸(2滴)。在室温搅拌反应混合物16小时。用DCM稀释反应混合物并用1N NaOH碱化。用水和盐水洗涤有机层，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过用4-5%甲醇-DCM洗脱的柱色谱(使用230-400二氧化硅目)纯化粗化合物以提供想要的化合物44。
[0617] 产量：1.6g(44.4%)；
[0618] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.18-7.13(m，2H)，7.11-7.08(m，2H)，4.19(brs，1H)，3.84-3.81(m，1H)，3.52-3.49(m，1H)，3.07-3.02(m，2H)，2.76-2.60(m，5H)，1.86-1.83(m，
1H)，1.57-1.50(m，7H)，1.39(s，9H)，1.25-1.23(m，1H)；
[0619] LCMS[M+H]=345.0，RT=3.04分钟，(程序P1，柱Y)。
[0620] D：2-[2-((茚满-2-基)(吡啶-2-基)氨基)乙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(化合物45)
[0621] 用 氩 对 化 合 物44(0.6g，1.74mmol)，2- 溴 -吡 啶 (0.17mL，1.74mmol) 和tNaOBu(0.23g，2.44mmol)在甲苯(20mL)中的搅拌混合物吹扫15分钟。然后添加
Pd2(dba)3(0.08g，0.09mmol)和P(i-BuNCH2CH2)3N(0.12mL，0.35mmol)。再用氩对得到的混合物脱气15分钟，并在110℃加热16小时。用乙酸乙酯洗涤反应混合物并用水和盐水洗涤。
有机层经无水硫酸钠干燥并减压浓缩。通过用1-2%乙酸乙酯-己烷洗脱的柱色谱(使用
230-400二氧化硅目)纯化粗化合物以提供想要的化合物45。
[0622] 产量：0.32g(43.6%)；
[0623] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ8.10-8.08(m，1H)，7.51-7.47(m，1H)，7.25-7.23(m，2H)，7.17-7.15(m，2H)，6.62(d，J=9Hz，1H)，6.57-6.54(m，1H)，5.29-5.26(m，1H)，
4.10-4.08(m，1H)，3.78-3.75(m，1H)，3.36-3.34(m，1H)，3.22-3.13(m，3H)，2.98-2.91(m，
2H)，2.65-2.59(m，1H)，1.83-1.80(m，1H)，1.67-1.61(m，1H)，1.54-1.50(m，1H)，
1.45-1.42(m，4H)，1.32(s，9H)，1.26-1.17(m，1H)；
[0624] LCMS[M+H]=422.6，RT=3.18分钟，(程序R1，柱X)。
[0625] E.2-[2-((茚满-2-基)(吡啶-2-基)氨基)乙基]哌啶(化合物46)
[0626] 在0℃下向化合物45(0.35g，0.83mmol)添加二噁烷-HCl(10mL)。在室温搅拌反应混合物3小时。减压干燥反应混合物。将粗化合物溶解于乙酸乙酯，并用饱和碳酸氢钠、水和盐水洗涤。有机层经无水硫酸钠干燥并浓缩以提供想要的化合物46。
[0627] 产量：0.23g(87%)；
[0628] LCMS[M+H]=322.4，RT=2.25分钟，(程序R1，柱Z)。
[0629] F.1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(吡啶-2-基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物[0630] 向化合物46(0.12g，0.37mmol)的氯仿(5mL)搅拌溶液添加K2CO3(0.257g，1.87mmol)和甲基碘(0.12mL，1.87mmol)。在密封管中50℃下加热得到的混合物16小时。
过滤反应混合物，并浓缩滤液。通过用2-3%甲醇-DCM洗脱的柱色谱(使用230-400目二氧化硅)纯化粗料以提供想要的化合物。
[0631] 产量：0.08g(44.96%)；
[0632] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ8.11(d，J=3Hz，1H)，7.52(t，J=7Hz，1H)，7.27-7.25(m，2H)，7.19-7.17(m，2H)，6.74(d，J=10Hz，1H)，6.63-6.60(m，1H)，
5.17-5.10(m，1H)，3.46-3.43(m，3H)，3.28-3.25(m，2H)，3.20-3.13(m，2H)，3.07-2.99(m，
5H)，2.85(s，3H)，2.12-2.09(m，1H)，1.92-1.89(m，1H)，1.82-1.76(m，1H)，1.70-1.67(m，
2H)，1.60-1.50(m，2H)，1.40-1.37(m，1H)；
[0633] LCMS[M+]=350.4，RT=1.72分钟(程序R1，柱Z)
[0634] UPLC：99.57%(RT=2.70分钟，λ200nm，流动相A.0.05%TFA水溶液，B.乙腈；柱：XDB-C18(4.6x50mm)，1.8μ)。
[0635] 实施例38：一般程序H-1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(嘧啶-2-基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物的制备
[0636]
[0637] A.2-[2-((茚满-2-基)(嘧啶-2-基)氨基)乙基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(化合物47)
[0638] 向化合物44(1.2g，3.48mmol)的无水甲苯(35mL)搅拌溶液添加2-溴-嘧t
啶(0.55g，3.48mmol)和NaOBu(0.47g，4.88mmol)，并用氩吹扫溶液30分钟。然后添加Pd2(dba)3(0.159g，0.17mmol)和Verkade超级碱(0.24g，0.70mmol)，并回流溶液过夜。通过 试剂过滤反应混合物，并用乙酸乙酯洗涤。用水和盐水溶液洗涤滤液，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过 色谱纯化粗料，用14-15%乙酸乙酯-己烷洗
脱，以获得化合物47。
[0639] 产量：0.303g(20.6%)；
[0640] 1H-NMR(DMSO-d6)：δ8.35(d，J=5Hz，2H)，7.22(s，2H)，7.16-7.14(m，2H)，6.61(t，J=5Hz，1H)，5.47-5.43(m，1H)，4.07(s，1H)，3.77-3.74(m，1H)，3.42-3.39(m，
1H)，3.18-3.11(m，2H)，3.03-2.97(m，2H)，2.65(t，J=12Hz，1H)，1.89-1.87(m，1H)，
1.66-1.63(m，1H)，1.55-1.37(m，6H)，1.31(s，9H)，1.26-1.17(m，1H)；
[0641] LCMS[M+H]=423.2，RT=2.62分钟，(程序P1，柱Y)。
[0642] B.2-[2-((茚满-2-基)(嘧啶-2-基)氨基)乙基]哌啶(化合物48)
[0643] 在冰冷条件下向化合物47(0.303g，0.72mmol)添加二噁烷-HCl(20mL)，并在室温搅拌溶液4小时。然后减压浓缩溶液，并溶解于乙酸乙酯。用饱和NaHCO3溶液、水和盐水洗涤有机层，经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩，以提供粘性化合物48。
[0644] 产量：0.21g(90.83%)；
[0645] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ8.34(d，J=5Hz，2H)，7.22-7.21(m，2H)，7.16-7.14(m，2H)，6.59(t，J=9Hz，1H)，5.37-5.34(m，1H)，4.07(s，1H)，3.77-3.74(m，1H)，3.55-3.53(m，
2H)，3.16-3.01(m，4H)，2.9-2.88(m，1H)，1.53-1.45(m，5H)，1.35-1.23(m，3H)；
[0646] LCMS[M+H]=322.8，RT=3.08分钟，(程序P1，柱Y)。
[0647] C.1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(嘧啶-2-基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物[0648] 向化合物48(0.21g，0.65mmol)的CHCl3(5mL)搅拌溶液 添加K2CO3(0.45g，3.26mmol)，随后添加甲基碘(0.2mL，3.26mmol。在密封管中在50℃下搅拌溶液16小时。通过烧结漏斗过滤反应混合物，并浓缩。通过用1-1.5%甲醇-DCM洗脱的中性氧化铝柱色谱纯化粗料，以获得想要的化合物。
[0649] 产量：0.16g(51.34%)；
[0650] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ8.39(d，J=5Hz，2H)，7.25-7.24(m，2H)，7.18-7.16(m，2H)，6.68-6.66(m，1H)，5.45-5.41(m，1H)，3.55-3.51(m，2H)，3.46-3.42(m，1H)，
3.26-3.23(m，2H)，3.12-3.05(m，7H)，2.86(s，3H)，2.20-2.17(m，1H)，1.93-1.36(m，7H)；
[0651] LCMS[M+]=351，RT=2.90分钟，(程序P1，柱Y)；
[0652] UPLC：99.9%(RT=4.70分钟，λ220nm，流动相；A.0.05%TFA水溶液，B.乙腈；柱：SB-C18(50x4.6mm)1.8μ)。
[0653] 实施例39：一般程序I–1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(噻唑-2-基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物的制备
[0654]
[0655] A.2-(1-苄基哌啶-2-基)乙醇(化合物49)
[0656] 在0℃下向哌啶-2-乙醇(20g，155mmol)的乙醇(240mL)搅拌溶液添加K2CO3(106g，775.1mmol)，随后添加苄基溴(18.4mL，155.04mmol)。反应混合物在室温搅拌过夜，通过烧结漏斗过滤并浓缩。将粗料溶解于乙酸乙酯，用水和盐水洗涤有机层，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩以获得液体化合物49。
[0657] 产量：25g(73.65%)；
[0658] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.31(d，J=13Hz，4H)，7.24-7.19(m，1H)，4.41(s，1H)，3.88(d，J=14Hz，1H)，3.54-3.41(m，2H)，3.31-3.23(m，1H)，2.62-2.58(m，1H)，2.45(s，1H)，
2.06-2.01(m，1H)，1.83-1.76(m，1H)，1.66-1.57(m，3H)，1.42-1.26(m，4H)；
[0659] LCMS[M+H]=220.4，RT=2.35分钟，(程序P1，柱Y)。
[0660] B.(1-苄基哌啶-2-基)乙醛(化合物50)
[0661] 在-78℃下向DMSO(5.84mL，82.2mmol)的无水DCM(220mL)搅拌溶液添加(COCl)2(3.55mL，41.1mmol)，并在相同温度下搅拌混合物20分钟。然后缓慢添加化合物
49(6g，27.4mmol)的DCM(30mL)溶液，在-78℃下搅拌反应混合物1小时。在-78℃添加TEA(13.8mL，137mmol)，搅拌反应混合物，并允许回到室温。用DCM稀释反应混合物，用水和盐水洗涤有机层，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩以提供粘性化合物50。
[0662] 产量：7.0g(粗品)；
[0663] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ9.76(s，1H)，7.43-7.21(m，5H)，3.81(d，J=13Hz，1H)，3.24(d，J=8Hz，1H)，3.06(d，J=6Hz，1H)，2.92(s，1H)，2.71-2.62(m，2H)，2.58-2.49(m，3H)，
2.13-2.03(m，1H)，1.79-1.59(m，3H)，1.44-1.35(m，4H)，1.23-1.16(m，1H)。
[0664] C.2-[1-苄基-2-((茚满-2-基)氨基)乙基]哌啶(化合物51)
[0665] 在0℃下向化合物50(7g，32.2mmol)的DCM(120mL)搅拌溶液连续添加2-氨基茚满(4.29mL，32.2mmol)、Na(OAc)3BH(20.5g，96.7mmol)和乙酸(3mL)。允许得到的混合物在室温搅拌16小时。用DCM稀释反应混合物，并通过1N NaOH溶液碱化。分离有机层，并用水和盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过用洗脱的1-2%甲醇-DCM洗脱的色谱纯化粗料以提供化合物51。
[0666] 产量：6.6g(61.37%)；
[0667] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.29-7.0(m，9H)，3.91(d，J=14Hz，1H)，3.48-3.46(m，1H)，3.21(s，1H)，3.18-3.12(m，1H)，3.05-2.99(m，2H)，2.64(d，J=8Hz，1H)，2.62-2.55(m，
5H)，2.38(s，1H)，2.01-1.95，(m，1H)，1.78(s，1H)，1.74-1.70(m，1H)，1.67-1.60(m，3H)，
1.41-1.27(m，6H)；
[0668] LCMS[M+H]=334.8，RT=3.0分钟，(程序P1，柱Y)。
[0669] D.2-[1-苄基-2-((茚满-2-基)(噻唑-2-基)氨基)乙基]哌啶(化合物52)
[0670] 向化合物51(2g，5.98mmol)的无水甲苯(35mL)搅拌溶液添加2-溴-噻唑t
(0.53mL，5.98mmol)和NaOBu(0.805g，8.38mmol)，并用氩对溶液脱气30分钟。然后添加Pd2dba3(0.274g，0.30mmol)和Verkade超级碱(0.42mL，1.19mmol)，并回流得到的混合物16小时。通过 垫过滤反应混合物并用乙酸乙酯洗涤。用水和盐水洗涤有机层，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过 色谱纯化粗料，用20-22%乙酸乙酯-己烷
洗脱，以提供化合物52。
[0671] 产量：0.688g(27.42%)；
[0672] 1H-NMR(DMSO-d6)：δ7.29-7.20(m，9H)，7.12(m，1H)，6.73(d，J=4Hz，1H)，4.79-4.75(m，1H)，3.82(d，J=14Hz，1H)，3.40-3.37(m，1H)，3.35-3.25(m，2H)，
3.23-3.07(m，3H)，2.67-2.61(m，1H)，2.5-2.49(m，1H)，2.32-2.26(m，1H)，2.22-1.98(m，
1H)，1.97-1.95(m，1H)，1.93-1.82(m，3H)，1.73-1.51(m，4H)；
[0673] LCMS[M+H]=418.1，RT=3.95分钟，(程序P1，柱Y)。
[0674] E.2-[2-((茚满-2-基)(噻唑-2-基)氨基)乙基]哌啶(化合物53)
[0675] 在0℃下向化合物52(0.688g，1.64mmol)的DCE(15mL)搅拌溶液添加氯甲酸异丁酯(0.53mL，4.94mmol)，并回流溶液9.5小时。添加甲醇(30mL)，并允许混合物在室温搅拌16小时。减压浓缩反应混合物以提供化合物53。
[0676] 产量：0.53g(98.78%)；
[0677] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.4-7.18(m，4H)，7.0(d，J=4Hz，1H)，6.52-6.48(m，1H)，4.75(s，1H)，4.70-4.67(m，1H)，3.78(s，3H)，3.73-3.59(m，1H)，3.28-3.10(m，3H)，
3.08-2.98(m，1H)，2.78-2.75(m，1H)，1.99-1.97(m，1H)，1.86-1.82(m，1H)，1.78-1.75(m，
2H)，1.7-1.68(m，2H)，1.58-1.55(m，1H)，1.39-1.34(m，2H)；
[0678] LCMS[M+H]=328，RT=3.08分钟，(程序P1，柱X)。
[0679] F.2-[2-((茚满-2-基)(噻唑-2-基)氨基)乙基]-1-甲基哌啶(化合物54)
[0680] 在0℃下向化合物53(0.53g，1.62mmol)的DCE(25mL)搅拌溶液连续添加甲醛(35%水溶液，0.2mL，2.43mmol)、Na(OAc)3BH(1.03g，4.86mmol)和乙酸(0.2mL)，并允许溶液在室温搅拌16小时。用乙酸乙酯稀释反应混合物，并用1N NaOH溶液碱化。分离有机层，并用水和盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过用1%甲醇-DCM洗脱的中性氧化铝色谱纯化粗料以获得化合物54。
[0681] 产量：0.25g(45.25%)；
[0682] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.26-7.24(m，2H)，7.18-7.15(m，2H)，7.13(d，J=4Hz，1H)，6.74(d，J=4Hz，1H)，4.80-4.76(m，1H)，3.35-3.31(m，1H)，3.31-3.20(m，3H)，3.12-3.06(m，2H)，2.67-2.64(m，1H)，2.03(s，3H)，1.87-1.84(m，1H)，1.75-1.69(m，2H)，
1.61-1.55(m，2H)，1.45-1.38(m，1H)，1.35-1.32(m，2H)，1.23-1.11(m，3H)；
[0683] LCMS[M+H]=342，RT=2.91分钟，(程序P1，柱Y)。
[0684] G.1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(噻唑-2-基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物[0685] 向化合物54(0.25g，0.733mmol)的DCE(5mL)搅拌溶液添加甲基碘(0.2mL，2.93mmol)，在密封管中室温下搅拌反应混合物16小时。浓缩反应混合物，并通过用1%甲醇-DCM洗脱的中性氧化铝柱色谱纯化粗料以提供固体化合物。从甲醇-乙醚结晶固体材料以提供作为灰白色固体的想要的化合物。
[0686] 产量：0.146g(41.24%)；
[0687] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.28-7.22(m，2H)，7.19-7.16(m，3H)，6.83(d，J=4Hz，1H)，3.39-3.32(m，3H)，3.2-3.08(m，6H)，3.01(s，3H)，2.84(s，3H)，2.32-2.21(m，1H)，
1.86-1.78(m，2H)，1.67(d，J=12Hz，2H)，1.52-1.49(m，2H)，1.38-1.35(m，1H)；
[0688] LCMS[M+]=356.2，RT=2.44分钟，(程序R1，柱Z)；
[0689] UPLC：99.28%(RT=4.56分钟，λ260nm，流动相A.0.05%TFA水溶液，B.乙腈；柱：SB-C18(4.6x50mm)1.8μ)。
[0690] 实施例40：一般程序J-1,1-二甲基-4-[2-((茚满-2-基)(2-甲基苯基)氨基)乙基]哌啶鎓溴化物的制备
[0691]
[0692] 向根据用于制备化合物8的一般程序A1(除了用化合物7e替代化合物7并用4-(2-羟基乙基)-1-甲基哌啶替代化合物5(1.2g，3.45mmol)制备的化合物55的
DCE(20mL)搅拌溶液添加甲基溴(25%甲苯溶液，5.23mL，13.79mmol)，反应混合物在密封管中室温搅拌16小时。浓缩反应混合物，通过用10%甲醇-DCM洗脱的硅胶(230-400目)色谱纯化粗料，然后从甲醇-乙醚结晶，以提供想要的化合物。
[0693] 产量：1.5g(98.15%)；
[0694] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.28(d，J=8Hz，1H)，7.21(t，J=8Hz，2H)，7.17-7.14(m，2H)，7.11-7.09(m，2H)，7.03(t，J=7Hz，1H)，3.98-3.94(m，1H)，3.37-3.33(m，
2H)，3.24-3.18(m，2H)，3.06(s，3H)，3.02-2.92(m，7H)，2.79(dd，J=15，8Hz，2H)，2.28(s，
3H)，1.69-1.66(m，2H)，1.51-1.46(m，3H)，1.27-1.25(m，2H)；
[0695] LCMS：[M+]=363.2，RT=3.30分钟，(程序P1，柱Y)；
[0696] UPLC：99.54%(RT=3.21分钟，λ200nm，流动相：A0.05%TFA水溶液，B乙腈；柱：SB C18(4.6x50mm)1.8μ)。
[0697] 实施例41：一般程序K-7-[2-((茚满-2-基)(2-甲基苯基)氨基)乙基]-3-氧杂-6-氮杂螺[5.5]氯化十一烷-6-鎓的制备
[0698]
[0699] 向NaOH(78mg，1.95mmol)的水(16mL)搅拌溶液添加1-氯-2-(2-氯-乙氧基)乙烷(0.3mL，2.6mmol)，回流溶液1小时。然后，添加化合物56(435mg，1.3mmol)的甲醇(4-5滴)和水(4mL)溶液，回流得到的溶液16小时。在冰盐条件下向反应混合物添加40%NaOH，并用氯仿萃取。然后溶液经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过用2-3%甲醇-DCM洗脱的中性氧化铝柱色谱纯化粗料，以提供固体。用无水乙醚研磨固体材料，并真空下干燥以获得作为白色固体的想要的化合物。
[0700] 产量：88mg(15.35%)；1
[0701] H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.33-7.31(m，1H)，7.26-7.21(m，4H)，7.19-7.10(m，2H)，7.07-7.03(m，1H)，4.06-4.02(m，1H)，3.96-3.90(m，1H)，3.84-3.73(m，3H)，
3.59-3.49(m，5H)，3.12-3.10(m，2H)，3.02-2.95(m，3H)，2.92-2.81(m，3H)，2.30(s，3H)，
1.97(brs，1H)，1.88(brs，1H)，1.71(brs，2H)，1.58-1.48(m，4H)；
[0702] LCMS[M+]=405，RT=3.32分钟，(程序P1，柱Y)；
[0703] UPLC：98.59%(RT=5.47分钟，λ220nm，流动相A.0.05%TFA水溶液，B.乙腈；柱：XDB-C18(4.6x50mm)1.8μ)。
[0704] 实施例42：一般程序L-1,1-二甲基-2-[2-((2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)(茚满-2-基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物的制备
[0705]
[0706] A.N-2,3-二氢-苯并[1,4]二噁英-6-基-N-茚满-2-基胺(化合物57)
[0707] 在0℃下向2-茚酮(2g，15.1mmol)的DCE(50mL)搅拌溶液连续添加2,3-二氢-苯并[1,4]二噁英-6-基胺(2.28g，15.1mmol)、Na(OAc)3BH(4.81g，22.6mmol)、AcOH(1.8mL)，并在室温搅拌混合物过夜。将反应混合物溶解于乙酸乙酯，并用1N NaOH、水和盐水洗涤。溶液经Na2SO4干燥、过滤并浓缩。通过用9-10%乙酸乙酯-己烷洗脱的 色谱
纯化粗料，以获得化合物57。
[0708] 产量：3.9g(96.5%)；1
[0709] H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.21-7.11(m，4H)，6.60-6.56(m，1H)，6.14-6.11(m，2H)，5.41(d，J=7Hz，1H)，4.16-4.02(m，6H)，3.32-3.21(m，2H)，2.77-2.71(m，2H)；
[0710] LCMS[M+H]=268.2，RT=3.54分钟，(程序P1，柱Y)。
[0711] B.2-[1-苄基-2-((2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)(茚满-2-基)氨基)乙基]哌啶(化合物59)
[0712] 在0℃下向化合物57(1g，3.74mmol)的无水甲苯(25mL)搅拌溶液添加t
KOBu(0.63g，5.61mmol)，并且在50℃下加热溶液5小时。然后在0℃下添加三氟甲磺酸
2-(1-苄基-哌啶-2-基)-乙酯(58)(1.4g，4.11mmol)的无水甲苯(5mL)溶液，并回流16小时。TLC显示起始材料的完全转化，因此，添加另外0.5当量的化合物58，并回流16小时。
用乙酸乙酯稀释反应混合物，并用水和盐水洗涤有机层。溶液经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过用7-8%甲醇-DCM洗脱的 色谱纯化粗料，以获得化合物59。
[0713] 产量：1.8g(68.46%)；1
[0714] H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.28-7.10(m，9H)，6.69-6.67(m，1H)，6.38(m，2H)，4.35-4.34(m，1H)，4.17-4.14(m，4H)，3.67-3.63(m，1H)，3.14-3.07(m，4H)，2.87-2.81(m，
3H)，2.49-2.5(m，1H)，2.32-2.28(m，1H)，2.00-1.95(m，2H)，1.61-1.23(m，8H)；
[0715] LCMS[M+H]=468.8，RT=4.37分钟，(程序P1，柱Y)。
[0716] C.2-[2-((2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)(茚满-2-基)氨基)乙基]哌啶(化合物60)
[0717] 向化合物59(1.55g，331mmol)的甲醇(30mL)搅拌溶液添加HCOONH4(2.08g，33.11mmol)，并用氮对溶液吹扫30分钟。然后添加10%Pd-C(0.4g)，溶液被回流6小时。通过 试剂过滤反应混合物并浓缩滤液。残余物溶解于乙酸乙酯并用水和盐水洗涤。
溶液经无水Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩以提供化合物60。
[0718] 产量：0.98g(78.2%)；
[0719] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.20-7.11(m，4H)，6.74-6.71(m，1H)，6.47-6.46(m，2H)，4.33-4.29(m，1H)，4.20-4.15(m，4H)，3.16-3.11(m，3H)，3.07-3.01(m，2H)，
2.88-2.81(m，3H)，2.78-2.71(m，1H)，1.75-1.67(m，4H)，1.48-1.37(m，2H)，1.37-1.34(m，
1H)，1.23-1.17(m，1H)；
[0720] LCMS[M+H]=469.2，RT=3.05分钟，(程序P1，柱Y)。
[0721] D.2-[2-((2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)(茚满-2-基)氨基)乙基]-1-甲基哌啶(化合物61)
[0722] 在0℃下向化合物60(0.5g，1.32mmol)的DCE(25mL)搅拌溶液连续添加甲醛(35%水溶液，0.17mL，1.98mmol)、Na(OAc)3BH(0.84g，3.96mmol)和AcOH(0.2mL)，并在室温下搅拌混合物16小时。反应混合物溶解于乙酸乙酯，并用1N NaOH碱化。分离有机层并用水和盐水洗涤。溶液经无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过用5-5.2%甲醇-DCM洗脱的色谱纯化粗料以提供化合物61。
[0723] 产量：0.25g(48.2%)；1
[0724] H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.21-7.19(m，2H)，7.13-7.11(m，2H)，6.71-6.69(m，1H)，6.41-6.37(m，2H)，4.36-4.33(m，1H)，4.19-4.14(m，4H)，3.14-3.01(m，4H)，
2.84(dd，J=16，8Hz，2H)，2.67-2.64(m，1H)，1.97(s，3H)，1.91-1.86(m，1H)，1.78(s，1H)，
1.58-1.55(m，1H)，1.50-1.33(m，5H)，1.20-1.11(m，2H)；
[0725] LCMS[M+H]=393.2，RT=3.02分钟，(程序P1，柱Y)
[0726] E.1,1-二甲基-2-[2-((2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英-6-基)(茚满-2-基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物
[0727] 向化合物61(0.25g，0.64mmol)的DCE(3mL)搅拌溶液添加甲基碘(0.15mL，2.55mmol)，并在密封管中室温下搅拌混合物40小时。浓缩反应混合物，并通过用6-7%甲醇-DCM洗脱的 色谱纯化粗料以提供固体。用乙醚研磨固体材料，并通过烧
结漏斗过滤，并高真空下干燥以获得想要的化合物。
[0728] 产量：0.185g(54.39%)；1
[0729] H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.20-7.19(m，2H)，7.14-7.12(m，2H)，6.75-6.73(m，1H)，6.50-6.49(m，2H)，4.34-4.30(m，1H)，4.19-4.17(m，4H)，3.43-3.40(m，1H)，
3.15-3.05(m，6H)，3.03-2.8(m，8H)，1.96-1.94(m，1H)，1.85-1.76(m，2H)，1.69-1.65(m，
2H)，1.54-1.51(m，1H)，1.39-1.34(m，2H)；
+
[0730] LCMS[M]=407，RT=2.90分钟，(程序P1，柱Y)；
[0731] HPLC：99.78%(RT=3.01分钟，λ220nm，流动相A.10mM乙酸铵水溶液，B.乙腈；柱：NX-C18(4.6x50mm)3μ)。
[0732] 实施例43：一般程序M-(R)-1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(2-甲基苯基)氨基)乙基]哌啶鎓溴化物的制备
[0733]
[0734] 如前所述合成醇37b(Tetrahedron2007，63，3000-3005)。
[0735]
[0736] 向250mL圆底烧瓶装载2-(2-羟基乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯37b(5.0g，21.80mmol)、二氯甲烷(7.50mL)、KBr(0.52g，4.36mmol)的2.0mL水溶液和TEMPO(0.1g，
0.64mmol)。冷却混合物至约-5℃。经20分钟缓慢添加NaOCl(31.1mL，5.25%，24.1mmol)溶液，同时保持温度在0℃。在0℃进一步搅拌混合物20分钟。分离有机层，用二氯甲烷萃取水层。用水(50mL)、随后盐水洗涤合并的二氯甲烷萃取液。经MgSO4干燥之后，过滤混合物并浓缩。用硅胶柱色谱纯化粗品以提供作为无色油的产物38b(4.1g，83%)。
[0737]
[0738] 向干净且干燥的250mL圆底烧瓶装载三乙酰氧基硼氢化钠(5.59g，26.40mmol)、分子筛(10.0g)、胺7e(7.37g，33.00mmol)和二氯甲烷(20.0mL)。搅拌混合物并冷却至约0℃，添加醛38b(5.0g，22.00mmol)的40mL二氯甲烷溶液。然后在0℃进一步搅拌混合物约1小时，并且在室温搅拌另外40分钟。用饱和NaHCO3水溶液(100mL)猝灭反应混合物。分离有机层之后，用二氯甲烷萃取混合物。在经MgSO4干燥之后，浓缩有机层。通过硅胶柱色谱纯化粗产物以产生作为无色油的产物40f(7.2g，75.3%)。
[0739]
[0740] 向干净且干燥的250mL圆底烧瓶装载氢化铝锂(1.53g，40.27mmol)和THF(30.0mL)。加热混合物至回流。经5分钟滴加氨基甲酸酯40f(7.0g，16.11mmol)的THF(40.0mL)溶液。在回流15h之后，冷却反应混合物至0℃，并缓慢且小心添加水(1.55mL)，随后THF(100mL)和15%NaOH(1.55mL)。在室温搅拌混合物1.0h之后，添加MgSO4，并进一步搅拌混合物15分钟。过滤并浓缩混合物以获得粗产物，其通过硅胶柱色谱纯化以提供作为淡黄色油的产物11e(4.7g，84%)。通过手性HPLC的光学纯度：99.3%ee。
[0741]
[0742] 向干净且干燥的250mL圆底烧瓶装载二胺11e(4.70g，13.49mmol)和1.07M溴代甲烷的MTBE(126.0mL，134.8mmol)溶液。在室温搅拌20h之后，过滤反应混合物。用MTBE洗涤固体饼以产生作为白色粉末的产物(4.40g，73%)。通过手性HPLC的光学纯度：99.3%ee。
[0743] 实施例44：一般程序N-(S)-1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(2-甲基苯基)氨基)乙基]哌啶鎓氯化物的制备
[0744]
[0745] 将实施例35的化合物(0.185g，0.50mmol)溶解于甲醇:水(1:9，20mL)，并用Amberlite IRA-400氯化物形式树脂处理2小时。过滤溶液并用甲醇洗涤。浓缩滤液并用0.5N HCl(10mL)处理残余物30分钟。浓缩反应混合物，残余物与甲苯共沸两次。通过用15%甲醇-DCM洗脱的 色谱纯化粗料(两次)，以提供显示4和5之间pH的粘性化
合物。然后经16小时冻干化合物。冻干之后，通过用15%甲醇-DCM洗脱的
色谱再次纯化固体材料以提供无色粘性化合物，其显示6的pH。经16小时冻干粘性化合物以提供作为白色固体的想要的化合物。
[0746] 产量：0.075g(49.84%)；
[0747] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.30(d，J=8Hz，1H)，7.25-7.15(m，4H)，7.13-7.09(m，2H)，7.04(t，J=7Hz，1H)，4.04-4.0(m，1H)，3.43(d，J=12Hz，1H)；3.32-3.26(m，1H)，
3.23-3.11(m，2H)，3.01-2.81(m，8H)，2.79(s，3H)，2.31(s，3H)，1.96-1.93(m，1H)，
1.79-1.65(m，4H)，1.54-1.49(m，1H)，1.40-1.38(m，1H)，1.28-1.26(m，1H)；
[0748] LCMS：[M+]=363.2，RT=3.14分钟，(程序P1，柱Y)；
[0749] UPLC：98.07%(RT=5.66分钟，λ200nm，流动相：A0.05%TFA水溶液，B乙腈；柱：SB-C18(50x4.6mm)1.8μ)。
[0750] 实施例45-52
[0751] 以相似方式制备表2所列的其他化合物，使用针对实施例36至44和方案1至271
描述的方法。紧接表2提供了实施例45-52的产量和 H-NMR、LCMS和HPLC表征数据。
[0752] 表2
[0753]
[0754]
[0755]
[0756]
[0757]
[0758]
[0759]
[0760]
[0761] 实施例9：(S)-1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(苯基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物
[0762] 产量：0.25g(66.48%)；
[0763] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.25-7.16(m，6H)，6.87(d，J=8Hz，2H)，6.72(t，J=7Hz，1H)，4.67-4.64(m，1H)，3.44-3.41(m，1H)，3.27-3.15(m，6H)，3.02-2.92(m，5H)，2.82(s，3H)，2.02-1.98(m，1H)，1.85-1.77(m，2H)，1.69-1.65(m，2H)，1.55-1.52(m，1H)，
1.42-1.33(m，2H)；
[0764] LCMS：m/z=349.6[M+]，RT=3.18分钟；
[0765] HPLC：98.41%，RT=2.73分钟，λ200nm，流动相(i)0.05%TFA水溶液(ii)乙腈；柱：SB-C18(4.6x50mm)1.8μ。
[0766] 实施例10：(R)-1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(苯基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物
[0767] 产量：0.1g(33.35%)；
[0768] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.25-7.16(m，6H)，6.87(d，J=8Hz，2H)，6.72(t，J=7Hz，1H)，4.67-4.64(m，1H)，3.45-3.42(m，1H)，3.28-3.15(m，6H)，3.02-2.93(m，5H)，2.82(s，3H)，2.02-1.99(m，1H)，1.85-1.77(m，2H)，1.69-1.66(m，2H)，1.55-1.52(m，1H)，
1.42-1.36(m，2H)；
[0769] LCMS：m/z=349.2[M+]，RT=8.98分钟；
[0770] HPLC：96.78%，RT=2.73分钟，λ200nm，流动相(i)0.05%TFA水溶液，(ii)乙腈；柱：SB-C18(4.6x50mm)1.8μ。
[0771] 实施例11：(R)-1,1-二乙基-2-[2-((茚满-2-基)(苯基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物
[0772] 产量：0.23g(72.29%)；1
[0773] H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.26-7.16(m，6H)，6.87(d，J=8Hz，2H)，6.72(t，J=7Hz，1H)，4.68-4.63(m，1H)，3.50-3.47(m，1H)，3.39-3.16(m，9H)，3.02-2.92(m，3H)，1.89-1.85(m，2H)，1.66-1.47(m，6H)，1.10(t，J=7Hz，6H)；
+
[0774] LCMS：m/z=377.0[M]，RT=3.35分钟；
[0775] UPLC：96.63%，RT=3.66分钟，λ200nm，流动相(i)0.05%TFA水溶液，(ii)乙腈；柱：SB-C18(4.6x50mm)1.8μ。
[0776] 实施例12：(R)-1,1-二丙基-2-[2-((茚满-2-基)(苯基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物
[0777] 产量：0.12g(32.69%)；
[0778] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.25-7.16(m，6H)，6.87(d，J=8Hz，2H)，6.73(t，J=7Hz，1H)，4.68-4.64(m，1H)，3.41-3.37(m，3H)，3.27-3.13(m，8H)，3.01-2.85(m，3H)，1.95-1.82(m，2H)，1.70-1.50(m，9H)，0.87(t，J=7Hz，3H)，0.80(t，J=7Hz，3H)；
[0779] LCMS：m/z=405.0[M+]，RT=3.54分钟；
[0780] UPLC：97.82%，RT=4.00分钟，λ200nm，流动相(i)0.05%TFA水溶液，(ii)乙腈；柱：SB-C18(4.6x50mm)1.8μ。
[0781] 实施例13：1,1-二乙基-2-[((茚满-2-基)(苯基)氨基)甲基]哌啶鎓碘化物[0782] 产量：0.06g(21.15%)；
[0783] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.33(t，J=8Hz，2H)，7.18-7.11(m，6H)，7.05(t，J=7Hz，1H)，4.25(t，J=8Hz，1H)，3.69-3.64(m，2H)，3.51-3.47(m，1H)，3.43-3.39(m，1H)，3.22-3.16(m，4H)，3.09-3.03(m，2H)，2.96-2.78(m，3H)，2.10-2.07(m，1H)，1.94-1.82(m，
1H)，1.71-1.62(m，3H)，1.51-1.39(m，1H)，1.16(t，J=7Hz，3H)，0.99(t，J=7Hz，3H)；
[0784] LCMS：m/z=363.1[M+]，RT=3.37分钟；
[0785] HPLC：95.74%，RT=11.27分钟，λ200nm，流动相(i)乙腈，(ii)0.05%TFA水溶液；柱：dC18(150x4.6mm)5μ。
[0786] 实施例14：1,1-二甲基-2-[2-((3-氟苯基)(茚满-2-基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物
[0787] 产量：63mg(44.9%)；1
[0788] H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.27-7.17(m，5H)，1.63(t，J=8Hz，2H)，6.46(t，J=8Hz，1H)，4.73-4.66(m，1H)，3.45-3.39(m，2H)，3.26-3.17(m，6H)，3.03-2.93(m，5H)，2.81(s，3H)，2.00-1.98(m，1H)，1.80(t，J=15Hz，2H)，1.67(d，J=13Hz，2H)，1.54-1.51(m，
1H)，1.45-1.34(m，2H)；
+
[0789] LCMS：m/z=367.2[M]，RT=2.66分钟；
[0790] UPLC：97.81%，RT=3.97分钟，λ200nm，流动相：(i)0.05%TFA水溶液，(ii)乙腈；柱：SB C18(50x4.6mm)1.8μ。
[0791] 实施例15：1,1-二甲基-2-[2-((4-氟苯基)(茚满-2-基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物
[0792] 产量：0.065g(46%)；1
[0793] H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.24-7.22(m，2H)，7.16-7.14(m，2H)，7.07(t，J=9Hz，2H)，6.97-6.93(m，2H)，4.51-4.47(m，1H)，3.42(d，J=13Hz，1H)，3.32-3.26(m，2H)，3.17-3.09(m，4H)，2.96-2.87(m，5H)，2.80(s，3H)，1.97(brs，1H)，1.81(t，J=16Hz，2H)，
1.67(d，J=12Hz，2H)，1.55-1.51(m，1H)，1.39-1.37(m，2H)；
+
[0794] LCMS：m/z=367.2[M]，RT=2.59分钟；
[0795] HPLC：98.57%，RT=4.01分钟，λ204nm，流动相：(i)10mM NH4OAc水溶液，(ii)乙腈；TM
柱：Xbridge C18(50x4.6mm)5μ。
[0796] 实施例16：1,1-二乙基-2-[2-((2-氟苯基)(茚满-2-基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物
[0797] 产量：119mg(38.53%)；1
[0798] H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.30(t，J=16Hz，1H)，7.19-7.09(m，7H)，4.25-4.21(m，1H)，3.54-3.49(m，1H)，3.30(s，1H)，3.28-3.19(m，4H)，3.11-2.97(m，4H)，
2.89-2.84(m，2H)，1.87-1.84(m，2H)，1.65(brs，4H)，1.49-1.47(brs，2H)，1.09-1.02(m，
6H)；
+
[0799] LCMS：m/z=395.4[M]，RT=3.25分钟；
[0800] HPLC：98.74%，RT=3.77分钟，λ200nm，流动相：(i)10mMNH4OAc水溶液，(ii)乙腈；TM
柱：Xbridge C18(50x4.6mm)3μ。
[0801] 实施例17：1,1-二乙基-2-[2-((3-氟-苯基)(茚满-2-基)氨基)乙基)哌啶鎓碘化物
[0802] 产量：0.060g(35.32%)；1
[0803] H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.27-7.17(m，5H)，6.65-6.59(m，2H)，6.47(t，J=9Hz，1H)，4.71-4.68(m，1H)，3.48-3.46(m，1H)，3.40-3.34(m，2H)，3.30-3.19(m，5H)，3.03-2.93(m，4H)，1.85(m，2H)，1.66-1.44(m，7H)，1.11(t，J=6Hz，6H)；
+
[0804] LCMS：m/z=395.4[M]，RT=3.25分钟；
[0805] HPLC：97.91%，RT=4.28分钟，λ200nm，流动相：(i)10mM NH4OAc水溶液，(ii)乙腈；TM
柱：Xbridge C18(50x4.6mm)5μ。
[0806] 实施例18：1,1-二乙基-2-[2-((4-氟苯基)(茚满-2-基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物
[0807] 产量：0.101g(32%)；1
[0808] H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.23(brs，2H)，7.17-7.14(m，2H)，7.07(t，J=9Hz，2H)，6.95-6.92(m，2H)，4.51(m，1H)，3.55-3.45(m，1H)，3.31(s，1H)，3.29-3.23(m，2H)，
3.19-3.11(m，5H)，3.01-2.91(m，4H)，1.85(brs，2H)，1.66-1.62(m，4H)，1.46(brs，2H)，
1.11-1.06(m，6H)；
+
[0809] LCMS：m/z=395.4[M]，RT=3.21分钟；
[0810] HPLC：99.51%，RT=3.71分钟，λ200nm，流动相：(i)10mMNH4OAc水溶液，(ii)乙腈；TM
柱：Xbridge C18(50x4.6mm)3μ。
[0811] 实施例19：1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(3-甲基苯基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物
[0812] 产量：0.053g(40.47%)；
[0813] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.24(brs，2H)，7.16(t，J=3Hz，2H)，7.09(t，J=8Hz，1H)，6.69-6.66(m，2H)，6.55(d，J=7Hz，1H)，4.65-4.61(m，1H)，3.43(d，J=12Hz，1H)，3.28-3.22(m，2H)，3.19-3.13(dd，J=7，16Hz，3H)，3.00-2.91(m，5H)，2.81(s，3H)，
2.25(s，3H)，2.00(brs，1H)，1.81(t，J=14Hz，2H)，1.67(d，J=13Hz，2H)，1.54-1.51(m，2H)，
1.39-1.36(m，2H)；
[0814] LCMS：m/z=363.4[M+]，RT=1.21分钟；
[0815] HPLC：95.71%，RT=3.79分钟，λ200nm，流动相：(i)10mM NH4OAc水溶液，(ii)乙腈；TM
柱：Xbridge C18(50x4.6mm)3μ。
[0816] 实施例20：6-[2-((茚满-2-基)(苯基)氨基)乙基]-5-氮鎓螺[4.5]溴化癸烷
[0817] 产量：0.020g(11.72%)；
[0818] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.25-7.16(m，6H)，6.88(d，J=8Hz，2H)，6.72(t，J=7Hz，1H)，4.67-4.64(m，1H)，3.59-3.57(m，1H)，3.50-3.39(m，1H)，3.31(s，1H)，3.26-3.17(m，7H)，3.00-2.96(m，2H)，1.99-1.72(m，10H)，1.49-1.44(m，3H)；
[0819] LCMS：m/z=375[M+]，RT=3.63分钟；
[0820] UPLC：99.64%，RT=3.62分钟，λ200nm，流动相：(i)0.05%TFA水溶液，(ii)乙腈；柱：SB C18(50x4.6mm)1.8μ。
[0821] 实施例21：1,1-二乙基-2-[2-((茚满-2-基)(3-甲基苯基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物
[0822] 产量：0.194g(47.38%)；
[0823] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.25(brs，2H)，7.17(t，J=3Hz，2H)，7.09(t，J=8Hz，1H)，6.67(d，J=8Hz，2H)，6.55(d，J=7Hz，1H)，4.65-4.62(m，1H)，3.49-3.46(m，1H)，
3.36-3.31(m，2H)，3.25-3.15(m，6H)，3.03-2.90(m，4H)，2.24(s，3H)，1.84(brs，2H)，
1.66-1.58(m，4H)，1.46(brs，2H)，1.11-1.10(m，6H)；
[0824] LCMS：m/z=391.2[M+]，RT=3.95分钟；
[0825] UPLC：97.75%，RT=3.73分钟，λ200nm，流动相：(i)0.05%TFA水溶液，(ii)乙腈；柱：SB C18(50x4.6mm)1.8μ。
[0826] 实施例22：1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(4-甲基苯基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物
[0827] 产量：0.202g(73.56%)；1
[0828] H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.23-7.22(m，2H)，7.16-7.14(m，2H)，7.04(d，J=8Hz，2H)，6.83(d，J=8Hz，2H)，4.54-4.50(m，1H)，3.42(d，J=13Hz，1H)，3.29-3.23(m，3H)，3.16-3.09(m，3H)，2.96-2.88(m，5H)，2.80(s，3H)，2.21(s，3H)，1.98(brs，1H)，
1.84-1.73(m，2H)，1.67(d，J=12Hz，2H)，1.53-1.47(m，1H)，1.39-1.36(m，2H)；
+
[0829] LCMS：m/z=363.2[M]，RT=3.33分钟；
[0830] UPLC：99.25%，RT=3.38分钟，λ200nm，流动相：(i)0.05%TFA水溶液，(ii)乙腈；柱：SB C18(50x4.6mm)1.8μ。
[0831] 实施例23：1,1-二乙基-2-[2-((茚满-2-基)(4-甲基苯基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物
[0832] 产量：0.318mg(51.26%)；1
[0833] H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.24-7.22(m，2H)，7.17-7.15(m，2H)，7.04(d，J=8Hz，2H)，6.81(d，J=8Hz，2H)，4.54-4.52(m，1H)，3.52-3.48(m，1H)，3.30-3.23(m，3H)，3.21-3.11(m，6H)，3.00-2.90(m，3H)，2.20(s，3H)，1.84(brs，2H)，1.65-1.59(m，4H)，
1.45(brs，2H)，1.11-1.07(m，6H)；
+
[0834] LCMS：m/z=391.2[M]，RT=3.28分钟；
[0835] HPLC：98.10%，RT=3.95分钟，λ200nm，流动相：(i)10mM NH4OAc水溶液，(ii)MeOH；TM
柱：Xbridge C18(50x4.6mm)5μ。
[0836] 实施例24：1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(2-甲基苯基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物
[0837] 产量：0.092g(31.35%)；1
[0838] H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.30(d，J=8Hz，1H)，7.25-7.17(m，4H)，7.12-7.10(m，2H)，7.05(t，J=7Hz，1H)，4.04-4.01(m，1H)，3.41(d，J=13Hz，1H)，3.32-3.22(m，2H)，
3.19-3.10(m，2H)，3.02-2.96(m，2H)，2.93-2.84(m，2H)，2.79(s，6H)，2.31(s，3H)，
2.05-1.93(m，1H)，1.77(d，J=14Hz，2H)，1.67(d，J=10Hz，2H)，1.53-1.50(m，1H)，
1.43-1.37(m，1H)，1.29-1.23(m，1H)；
+
[0839] LCMS：m/z=363.1[M]，RT=2.85分钟；
[0840] HPLC：98.66%，RT=4.20分钟，λ210nm，流动相：(i)10mM NH4OAc水溶液，(ii)乙腈；TM
柱：Xbridge C18(50x4.6mm)5μ。
[0841] 实施例25：1,1-二乙基-2-[2-((茚满-2-基)(2-甲基苯基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物
[0842] 产量：0.140g(30.15%)；1
[0843] H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.31(d，J=8Hz，1H)，7.25-7.23(m，1H)，7.20-7.17(m，3H)，7.12-7.10(m，2H)，7.05(t，J=7Hz，1H)，4.02-3.98(m，1H)，3.50-3.47(m，1H)，
3.25-3.17(m，6H)，3.02-2.93(m，3H)，2.87(d，J=8Hz，2H)，2.84-2.80(m，1H)，2.30(s，3H)，
1.84-1.79(m，2H)，1.69-1.62(m，4H)，1.49-1.43(m，2H)，1.04(t，J=6Hz，3H)，0.89(t，J=7Hz，3H)；
+
[0844] LCMS：m/z=391.2[M]，RT=3.49分钟；
[0845] HPLC：99.51%，RT=8.11分钟，λ210nm，流动相：(i)10mM NH4OAc水溶液，(ii)乙腈；柱： C18(250x4.6mm)5μ。
[0846] 实施例26：1,1-二乙基-2-[3-((茚满-2-基)(苯基)氨基)丙基]哌啶鎓碘化物
[0847] 产量：58mg(33%)；
[0848] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.24-7.15(m，6H)，6.85(d，J=8Hz，2H)，6.69(t，J=7Hz，1H)，4.63(t，J=7Hz，1H)，3.59-3.52(m，1H)，3.48-3.42(m，1H)，3.36-3.34(m，1H)，3.19-3.13(m，6H)，3.04-2.93(m，4H)，1.76-1.62(m，6H)，1.46-1.35(m，4H)，1.16(t，J=7Hz，
6H)；
[0849] LCMS：m/z=391.2[M+]，RT=3.29分钟；
[0850] UPLC：99.47%，RT=3.27分钟，λ200nm，流动相：(i)0.05%TFA水溶液(ii)乙腈；柱：SB C18(50x4.6mm)1.8μ。
[0851] 实施例27：1,1-二甲基-2-[((茚满-2-基)(4-甲基苯基)氨基)甲基]哌啶鎓碘化物
[0852] 产量：193mg(32%)；
[0853] 1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.18(t，J=4Hz，2H)，7.14-7.10(m，4H)，7.02(d，J=3Hz，2H)，7.01(d，J=8Hz，2H)，4.33-4.29(m，1H)，3.77(d，J=12Hz，1H)，3.38(d，J=7Hz，2H)，3.20(s，1H)，3.16(s，3H)，2.99-2.92(m，8H)，2.24(s，3H)，1.97(d，J=13Hz，1H)，
1.72-1.63(m，4H)，1.39-1.23(m，1H)；
[0854] LCMS：m/z=349[M+]，RT=1.40分钟；
[0855] UPLC：99.42%，RT=4.40分钟，λ200nm，流动相：(i)0.05%TFA水溶液，(ii)乙腈；柱：SB C18(50x4.6mm)1.8μ。
[0856] 实施例28：1,1-二甲基-2-[((4-氟苯基)(茚满-2-基)氨基)甲基]哌啶鎓碘化物
[0857] 产量：164mg(30%)；
[0858] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.19-7.11(m，8H)，4.29-4.25(m，1H)，3.77(d，J=11Hz，1H)，3.39-3.35(m，2H)，3.25-3.15(m，5H)，3.01-2.87(m，7H)，1.98(d，J=14Hz，1H)，1.78-1.64(m，4H)，1.33-1.30(m，1H)；
[0859] LCMS：m/z=353.2[M+]，RT=3.17分钟；
[0860] UPLC：99.87%，RT=3.19分钟，λ200nm，流动相：(i)0.05%乙酸水溶液，(ii)乙腈；柱：NX C18(50x4.6mm)3μ。
[0861] 实施例29：1,1-二甲基-2-[((茚满-2-基)(3-甲基苯基)氨基)甲基]哌啶鎓碘化物
[0862] 产量：193mg(42%)；1
[0863] H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.23-7.13(m，5H)，6.86(t，J=8Hz，2H)，6.72(d，J=7Hz，1H)，4.46(t，J=8Hz，1H)，3.82(d，J=11Hz，1H)，3.42-3.37(m，2H)，3.25(s，1H)，3.19(s，3H)，3.03(t，J=9Hz，2H)，2.98-2.95(m，5H)，2.26(s，3H)，1.95(d，J=13Hz，1H)，
1.76-1.65(m，4H)，1.35-1.31(m，1H)；
[0864] LCMS：m/z=348.8[M+]，RT=3.34分钟，(流动相：乙酸铵水溶液/乙腈；柱：X-Bridge)；
[0865] UPLC：99.85%，RT=3.19分钟，λ200nm，流动相：(i)0.05%乙酸水溶液，(ii)乙腈；柱：NX C18(50x4.6mm)3μ。
[0866] 实施例30：1,1-二乙基-2-[((茚满-2-基)(4-甲基苯基)氨基)甲基]哌啶鎓碘化物
[0867] 产量：90mg(29%)；
[0868] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.17-7.10(m，8H)，4.14-4.08(m，1H)，3.66-3.60(m，2H)，3.52-3.47(m，1H)，3.39-3.34(m，1H)，3.25-3.15(m，5H)，3.07-3.01(m，1H)，
2.91-2.82(m，3H)，2.27(s，3H)，2.12(d，J=14Hz，1H)，1.89-1.86(m，1H)，1.66(brs，3H)，
1.43(brs，1H)，1.16(t，J=8Hz，3H)，0.95(t，J=7Hz，3H)；
[0869] LCMS：m/z=377[M+]，RT=3.40分钟；
[0870] HPLC：95.06%，RT=6.08分钟，λ210nm，流动相：(i)10mM NH4OAc水溶液，(ii)乙腈；柱： C18(50x4.6mm)5μ。
[0871] 实施例31：1,1-二甲基-2-[((3-氟苯基)(茚满-2-基)氨基)甲基]哌啶鎓碘化物
[0872] 产量：75mg(25%)；
[0873] 1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ7.28-7.16(m，5H)，6.79(t，J=4Hz，2H)，6.64-6.60(q，J=6Hz，1H)，4.58(q，J=9Hz，1H)，3.86(d，J=11Hz，1H)，3.47-3.41(m，4H)，3.21(s，3H)，3.13-3.02(m，4H)，3.00(s，3H)，1.88-1.70(m，5H)，1.35-1.32(m，1H)；
[0874] LCMS：m/z=353[M+]，RT=3.09分钟；
[0875] UPLC：99.58%，RT=3.15分钟，λ200nm，流动相：(i)0.05%乙酸水溶液，(ii)乙腈；柱：NX C18(50x4.6mm)3μ。
[0876] 实施例32：(S)-1,1-二甲基-2-[((茚满-2-基)(苯基)氨基)甲基]哌啶鎓碘化物
[0877] 产量：1g(69.2%)；
[0878] 1H-NMR(DMSO-d6)：δ7.27(t，J=8Hz，2H)，7.22-7.20(m，2H)，7.16-7.14(m，2H)，7.05(d，J=8Hz，2H)，6.90(t，J=7Hz，1H)，4.52-4.44(m，1H)，3.85(d，J=12Hz，1H)，
3.43-3.36(m，4H)，3.21(s，3H)，3.06(d，J=8Hz，2H)，3.01-2.99(m，5H)，1.96-1.92(m，1H)，
1.76-1.69(m，4H)，1.34-1.31(m，1H)；
[0879] LCMS：m/z=335.4[M+]，RT=2.97分钟；
[0880] UPLC：98.93%(RT=3.13分钟；λ200nm，流动相A.0.05%HCOOH水溶液，B.乙腈；柱：Gemini NX C18(50x4.6mm)3μ)；
[0881] 比旋：在≈25℃下[-9.3°](0.60%MeOH溶液)；
[0882] 手 性 HPLC：100%ee(RT=5.47 分 钟；λ254nm， 流 动 相 . 己 烷 ：EtOH:DEA:TFA=60:40:0.1:0.1；柱： -IC(4.6x250mm)5μ)。
[0883] 实施例33：(R)-1，1-二甲基-2-[((茚满-2-基)(苯基)氨基)甲基]哌啶鎓碘化物
[0884] 产量：0.62g(78%)；1
[0885] H-NMR(DMSO-d6)：δ7.27(t，J=8Hz，2H)，7.22-7.20(m，2H)，7.16-7.14(m，2H)，7.05(d，J=8Hz，2H)，6.90(t，J=7Hz，1H)，4.52-4.44(m，1H)，3.84(d，J=12Hz，1H)，
3.43-3.35(m，4H)，3.19(s，3H)，3.06(d，J=8Hz，2H)，3.01-2.99(m，5H)，1.96-1.92(m，1H)，
1.76-1.69(m，4H)，1.34-1.31(m，1H)；
+
[0886] LCMS：m/z=335.0[M]，RT=3.07分钟；
[0887] UPLC：99.83%(RT=3.13分钟；λ200nm，流动相A.0.05%HCOOH水溶液，B.乙腈；柱：Gemini NX C18(50x4.6mm)3μ)；
[0888] 比旋：在≈25℃下[+9.3°](0.60%MeOH溶液)；
[0889] 手 性 HPLC ：99.3%ee(RT=5.97 分 钟 ；λ254nm， 流 动 相 . 己烷:EtOH:DEA:TFA=60:40:0.1:0.1；柱： (4.6x250mm)5μ)。
[0890] 实施例34：(S)-1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(2-甲基苯基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物
[0891] 产量：0.193g(39.9%)；
[0892] 1H-NMR(DMSO-d6)：δ7.31(d，J=8Hz，1H)，7.25-7.17(m，4H)，7.13-7.10(m，2H)，7.05(t，J=7Hz，1H)，4.05-4.00(m，1H)，3.43-3.40(m，1H)，3.26-3.12(m，3H)，3.02-2.93(m，
2H)，2.90-2.82(m，5H)，2.79(s，3H)，2.31(s，3H)，1.99-1.95(m，1H)，1.79-1.66(m，4H)，
1.53-1.50(m，1H)，1.40-1.37(m，1H)，1.29-1.23(m，1H)；
[0893] LCMS：m/z=363.0[M+]，RT=3.23分钟；
[0894] HPLC：99.11%(RT=4.28分钟；λ212nm，流动相A.10mM NH4OAc水溶液，B.乙腈；柱：Xbridge-C18(50x4.6mm)5μ)；
[0895] 比旋：在≈25℃下[+13.5°](0.599%MeOH溶液)；
[0896] 手 性 HPLC ：100%ee(RT=8.66 分 钟 ；λ212nm， 流 动 相 . 己烷:EtOH:DEA:TFA=70:30:0.1:0.1；柱： -IC(4.6x250mm)5μ)。
[0897] 实施例35：(R)-1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(2-甲基苯基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物
[0898] 产量：0.4g(41.9%)；
[0899] 1H-NMR(DMSO-d6)：δ7.31(d，J=8Hz，1H)，7.25-7.17(m，4H)，7.13-7.10(m，2H)，7.05(t，J=7Hz，1H)，4.05-4.00(m，1H)，3.43-3.40(m，1H)，3.26-3.12(m，3H)，3.02-2.96(m，
2H)，2.91-2.84(m，5H)，2.79(s，3H)，2.31(s，3H)，1.99-1.95(m，1H)，1.79-1.66(m，4H)，
1.53-1.50(m，1H)，1.40-1.37(m，1H)，1.29-1.24(m，1H)；
[0900] LCMS：m/z=362.8[M+]，RT=3.20分钟；
[0901] UPLC：98.82%(RT=4.86分钟；λ200nm，流动相A.0.05%TFA水溶液，B.乙腈；柱：Zorbax SB C18(50x4.6mm)1.8μ)；
[0902] 比旋：在≈25℃下[-14.5°](0.60%MeOH溶液)；
[0903] 手 性 HPLC ：98.5%ee(RT=12.79 分 钟；λ212nm， 流 动 相 . 己烷:EtOH:DEA:TFA=70:30:0.1:0.1；柱： -IC(4.6x250mm)5μ)。
[0904] 实施例45：1,1-二甲基-4-[2-((茚满-2-基)(2-甲基苯基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物
[0905] 产量：0.081g(13.9%)；
[0906] 1H-NMR(DMSO-d6)：δ7.29-7.27(m，1H)，7.23-7.19(m，2H)，7.16-7.14(m，2H)，7.10-7.08(m，2H)，7.04-7.01(m，1H)，3.98-3.94(m，1H)，3.36-3.31(m，2H)，3.23-3.17(m，
2H)，3.05(s，3H)，3.01-2.90(m，7H)，2.82-2.76(m，2H)，2.28(s，3H)，1.69-1.66(m，2H)，
1.50-1.45(m，3H)，1.26(brs，2H)；
[0907] LCMS[M+]=363，RT=3.38分钟，(程序P1，柱Y)；
[0908] UPLC：99.47%(RT=5.02分钟，λ220nm，流动相A.0.05%TFA，B.乙腈；柱：XDB-C18(4.6x50mm)1.8μ)。
[0909] 实施例46：1,1-双(2-羟基乙基)-2-[2-((茚满-2-基)(2-甲基苯基)氨基)乙基]哌啶鎓溴化物
[0910] 产量：0.033g(10%)；
[0911] 1H-NMR(DMSO-d6)：δ7.30-7.28(m，1H)，7.24-7.09(m，6H)，7.04(t，J=7Hz，1H)，5.35-5.34(m，1H)，5.27-5.24(m，1H)，4.04-4.02(m，1H)，3.73-3.55(m，6H)，3.50(s，3H)，
3.41-3.32(m，1H)，3.07-2.95(m，5H)，2.88-2.77(m，2H)，2.29(s，3H)，1.95(brs，1H)，
1.86-1.83(m，2H)，1.64-1.61(m，3H)，1.46-1.36(m，2H)；
[0912] LCMS[M+]=423，RT=3.19分钟，(程序P1，柱Y)；
[0913] UPLC：99.71%(RT=4.89分钟，λ220nm，流动相：A0.05%TFA水溶液，B乙腈；柱：SB-C18(50x4.6mm)1.8μ)。
[0914] 实施例47：1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(6-甲基吡啶-2-基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物
[0915] 产量：0.15g(36.20%)；1
[0916] H-NMR(DMSO-d6)：δ7.40(t，J=8Hz，1H)，7.26-7.25(m，2H)，7.18-7.16(m，2H)，6.54(d，J=8Hz，1H)，6.48(d，J=7Hz，1H)，5.12-5.05(m，1H)，3.46-3.41(m，3H)，
3.28-3.22(m，2H)，3.19-3.13(m，2H)，3.05(s，3H)，3.02-2.98(m，2H)，2.86(s，3H)，
2.29(s，3H)，2.17-2.13(m，1H)，1.97-1.93(m，1H)，1.83-1.77(m，1H)，1.70-1.67(m，2H)，
1.61-1.55(m，1H)，1.51-1.37(m，2H)；
+
[0917] LCMS[M]=364.2，RT=3.19分钟，(程序P1，柱Y)；
[0918] UPLC：99.39%(RT=4.04分钟，λ220nm，流动相A.0.05%TFA水溶液，B.乙腈；柱：XDB-C18(4.6x50mm)1.8μ)。
[0919] 实施例48：1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(6-甲基吡啶-2-基)氨基)乙基]哌啶鎓溴化物
[0920] 产量：0.057g(18.8%)；
[0921] 1H-NMR(DMSO-d6)：δ7.40(t，J=8Hz，1H)，7.26-7.25(m，2H)，7.19-7.16(m，2H)，6.54(d，J=8Hz，1H)，6.48(d，J=7Hz，1H)，5.10-5.06(m，1H)，3.46-3.42(m，3H)，
3.26-3.22(m，2H)，3.19-3.13(m，2H)，3.05-2.98(m，5H)，2.86(s，3H)，2.29(s，3H)，
2.17-2.13(m，1H)，1.97-1.93(m，1H)，1.83-1.77(m，1H)，1.70-1.57(m，3H)，1.47-1.37(m，
2H)；
[0922] LCMS：[M+]=364.2，RT=3.04分钟，(程序P1，柱V)；
[0923] UPLC：99.87%(RT=4.02分钟，λ200nm，流动相A.0.05%TFA水溶液，B.乙腈；柱：SB-C18(4.6x50mm)1.8μ)。
[0924] 实施例49：(S)-1,1-二乙基-2-[2-((茚满-2-基)(苯基)氨基)乙基]哌啶鎓溴化物
[0925] 产量：2.9g(25%)；
[0926] 1H-NMR(DMSO-d6)：δ7.25-7.16(m，6H)，6.87(d，J=8Hz，2H)，6.72(t，J=7Hz，1H)，4.67-4.63(m，1H)，3.52-3.47(m，1H)，3.40-3.34(m，1H)，3.28-3.16(m，8H)，3.04-2.92(m，
3H)，1.88-1.86(m，2H)，1.67-1.47(m，6H)，1.10(t，J=6Hz，6H)；
[0927] LCMS[M+]=377.0，RT=3.11分钟，(程序P1，柱Y)；
[0928] UPLC：99.77%(RT=5.08分钟，λ200nm，流动相A.0.05%TFA水溶液，B.乙腈；柱：SB-C18(50x4.6mm)1.8μ)；
[0929] 手性HPLC：100%ee(RT=6.47分钟，λ257nm，流动相.MeOH:DEA:TFA=100:0.1:0.1，柱： -IA(4.6x250mm)5μ
[0930] 比旋光度：在 25℃下[-10.8°](0.39%CHCl3溶液)
[0931] 实施例50：1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(2-甲基苯基)氨基)乙基]哌啶鎓氯化物
[0932] 产量：0.14g(43%)；
[0933] 1H-NMR(DMSO-d6)：δ7.31(d，J=8Hz，1H)，7.25-7.17(m，4H)，7.12-7.11(m，2H)，7.05(t，J=7Hz，1H)，4.05-4.01(m，1H)，3.43(d，J=12Hz，1H)，3.28-3.12(m，4H)，
3.00-2.96(m，2H)，2.92-2.80(m，8H)，2.31(s，3H)，1.99-1.96(m，1H)，1.79-1.65(m，4H)，
1.57-1.47(m，1H)，1.41-1.36(m，1H)，1.28-1.26(m，1H)；
[0934] LCMS：[M+]=363.2，RT=2.85分钟，(程序P1，柱W)；
[0935] UPLC：99.29%(RT=5.80分钟，λ200nm，流动相：A0.05%TFA水溶液，B乙腈；柱：SB-C18(50x4.6mm)1.8μ)。
[0936] 实施例51：(R)-1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(2-甲基苯基)氨基)乙基]哌啶鎓氯化物
[0937] 产量：0.033g(20%)；1
[0938] H-NMR(DMSO-d6)：δ7.31(d，J=8Hz，1H)，7.25-7.17(m，4H)，7.13-7.10(m，2H)，7.05(t，J=7Hz，1H)，4.05-4.01(m，1H)，3.43(d，J=12Hz，1H)，3.26-3.10(m，3H)，
3.02-2.96(m，2H)，2.93-2.80(m，9H)，2.31(s，3H)，1.99-1.95(m，1H)，1.79-1.65(m，4H)，
1.55-1.47(m，1H)，1.40-1.36(m，1H)，1.29-1.26(m，1H)；
+
[0939] LCMS[M]=363，RT=3.53分钟，(程序P1，柱V)；
[0940] UPLC：98.46%(RT=4.94分钟，λ200nm，流动相：A0.05%HCOOH水溶液，B乙腈；柱：NX C18(50x4.6mm)3μ)。
[0941] 实施例52：1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(2-甲基苯基)氨基)乙基]哌啶鎓溴化物
[0942] 产量：0.215g(42%)；
[0943] 1H-NMR(DMSO-d6)：δ7.31(d，J=8Hz，1H)，7.25-7.17(m，4H)，7.12-7.10(m，2H)，7.05(t，J=7Hz，1H)，4.05-4.01(m，1H)，3.42(d，J=12Hz，1H)，3.26-3.12(m，3H)，
3.02-2.96(m，2H)，2.91-2.79(m，9H)，2.31(s，3H)，1.99-1.95(m，1H)，1.79-1.65(m，4H)，
1.57-1.47(m，1H)，1.43-1.36(m，1H)，1.29-1.26(m，1H)；
[0944] LCMS：[M+]=363.4，RT=1.83分钟，(程序P1，柱V)；
[0945] UPLC：99.74%(RT=5.80分钟，λ200nm，流动相A.0.05%TFA水溶液，B.乙腈；柱：SB-C18(50x4.6mm)1.8μ)。
[0946] 实施例53：hTRVI1表达细胞和体外测定
[0947] 开发了用于评估表达hTRPV1的细胞中热(47℃)刺激之后化合物对钠通道响应抑制的体外测定。
[0948] A.表达hTRPV1的细胞的产生
[0949] 开发了以下细胞作为初步筛选以帮助选择将进入体内测定中进一步评估的化合物。
[0950] (i)用于递送hTRPV1至细胞的质粒
[0951] 为了制备细胞系，通过PCR从基于人类成神经细胞瘤细胞系IMR322[NCBI dbEST ID:18353]的cDNA文库扩增编码hTRPV1的开放阅读框，使用以下引物：
[0952] (a)TRPV1_KpnIF(正向引物)[SEQ ID NO:2]
[0953] 5’-ATAAACGGTACC ATGAAGAAATGGAGCAGCAC-3’
[0954] (b)TRPV1_PmeIR(反向引物)[SEQ ID NO:3]
[0955] 5’-ATCGGTTTAAACTCACTTCTCTCCGGAAGCGGC-3’
[0956] 正向引物包含KpnI位点[GGTACC(以上(a)中加下划线]和Kozak序列[GCCGCCACC((a)中加双下划线]。反向引物包含PmeI位点[GTTTAAAC，(b)中加下划线]。
[0957] hTRPV1的开放阅读框(对应于NCBI NM_080706.3)是：SEQ ID NO:4：
[0958] ATGAAGAAATGGAGCAGCACAGACTTGGGGGCAGCTGCGGACCCACTCCAAAAGGACACC
[0959] TGCCCAGACCCCCTGGATGGAGACCCTAACTCCAGGCCACCTCCAGCCAAGCCCCAGCTC
[0960] TCCACGGCCAAGAGCCGCACCCGGCTCTTTGGGAAGGGTGACTCGGAGGAGGCTTTCCCG
[0961] GTGGATTGCCCTCACGAGGAAGGTGAGCTGGACTCCTGCCCGACCATCACAGTCAGCCCT
[0962] GTTATCACCATCCAGAGGCCAGGAGACGGCCCCACCGGTGCCAGGCTGCTGTCCCAGGAC
[0963] TCTGTCGCCGCCAGCACCGAGAAGACCCTCAGGCTCTATGATCGCAGGAGTATCTTTGAA
[0964] GCCGTTGCTCAGAATAACTGCCAGGATCTGGAGAGCCTGCTGCTCTTCCTGCAGAAGAGC
[0965] AAGAAGCACCTCACAGACAACGAGTTCAAAGACCCTGAGACAGGGAAGACCTGTCTGCTG
[0966] AAAGCCATGCTCAACCTGCACGACGGACAGAACACCACCATCCCCCTGCTCCTGGAGATC
[0967] GCGCGGCAAACGGACAGCCTGAAGGAGCTTGTCAACGCCAGCTACACGGACAGCTACTAC
[0968] AAGGGCCAGACAGCACTGCACATCGCCATCGAGAGACGCAACATGGCCCTGGTGACCCTC
[0969] CTGGTGGAGAACGGAGCAGACGTCCAGGCTGCGGCCCATGGGGACTTCTTTAAGAAAACC
[0970] AAAGGGCGGCCTGGATTCTACTTCGGTGAACTGCCCCTGTCCCTGGCCGCGTGCACCAAC
[0971] CAGCTGGGCATCGTGAAGTTCCTGCTGCAGAACTCCTGGCAGACGGCCGACATCAGCGCC
[0972] AGGGACTCGGTGGGCAACACGGTGCTGCACGCCCTGGTGGAGGTGGCCGACAACACGGCC
[0973] GACAACACGAAGTTTGTGACGAGCATGTACAATGAGATTCTGATCCTGGGGGCCAAACTG
[0974] CACCCGACGCTGAAGCTGGAGGAGCTCACCAACAAGAAGGGAATGACGCCGCTGGCTCTG
[0975] GCAGCTGGGACCGGGAAGATCGGGGTCTTGGCCTATATTCTCCAGCGGGAGATCCAGGAG
[0976] CCCGAGTGCAGGCACCTGTCCAGGAAGTTCACCGAGTGGGCCTACGGGCCCGTGCACTCC
[0977] TCGCTGTACGACCTGTCCTGCATCGACACCTGCGAGAAGAACTCGGTGCTGGAGGTGATC
[0978] GCCTACAGCAGCAGCGAGACCCCTAATCGCCACGACATGCTCTTGGTGGAGCCGCTGAAC
[0979] CGACTCCTGCAGGACAAGTGGGACAGATTCGTCAAGCGCATCTTCTACTTCAACTTCCTG
[0980] GTCTACTGCCTGTACATGATCATCTTCACCATGGCTGCCTACTACAGGCCCGTGGATGGC
[0981] TTGCCTCCCTTTAAGATGGAAAAAACTGGAGACTATTTCCGAGTTACTGGAGAGATCCTG
[0982] TCTGTGTTAGGAGGAGTCTACTTCTTTTTCCGAGGGATTCAGTATTTCCTGCAGAGGCGG
[0983] CCGTCGATGAAGACCCTGTTTGTGGACAGCTACAGTGAGATGCTTTTCTTTCTGCAGTCA
[0984] CTGTTCATGCTGGCCACCGTGGTGCTGTACTTCAGCCACCTCAAGGAGTATGTGGCTTCC
[0985] ATGGTATTCTCCCTGGCCTTGGGCTGGACCAACATGCTCTACTACACCCGCGGTTTCCAG
[0986] CAGATGGGCATCTATGCCGTCATGATAGAGAAGATGATCCTGAGAGACCTGTGCCGTTTC
[0987] ATGTTTGTCTACATCGTCTTCTTGTTCGGGTTTTCCACAGCGGTGGTGACGCTGATTGAA
[0988] GACGGGAAGAATGACTCCCTGCCGTCTGAGTCCACGTCGCACAGGTGGCGGGGGCCTGCC
[0989] TGCAGGCCCCCCGATAGCTCCTACAACAGCCTGTACTCCACCTGCCTGGAGCTGTTCAAG
[0990] TTCACCATCGGCATGGGCGACCTGGAGTTCACTGAGAACTATGACTTCAAGGCTGTCTTC
[0991] ATCATCCTGCTGCTGGCCTATGTAATTCTCACCTACATCCTCCTGCTCAACATGCTCATC
[0992] GCCCTCATGGGTGAGACTGTCAACAAGATCGCACAGGAGAGCAAGAACATCTGGAAGCTG
[0993] CAGAGAGCCATCACCATCCTGGACACGGAGAAGAGCTTCCTTAAGTGCATGAGGAAGGCC
[0994] TTCCGCTCAGGCAAGCTGCTGCAGGTGGGGTACACACCTGATGGCAAGGACGACTACCGG
[0995] TGGTGCTTCAGGGTGGACGAGGTGAACTGGACCACCTGGAACACCAACGTGGGCATCATC
[0996] AACGAAGACCCGGGCAACTGTGAGGGCGTCAAGCGCACCCTGAGCTTCTCCCTGCGGTCA
[0997] AGCAGAGTTTCAGGCAGACACTGGAAGAACTTTGCCCTGGTCCCCCTTTTAAGAGAGGCA
[0998] AGTGCTCGAGATAGGCAGTCTGCTCAGCCCGAGGAAGTTTATCTGCGACAGTTTTCAGGG
[0999] TCTCTGAAGCCAGAGGACGCTGAGGTCTTCAAGAGTCCTGCCGCTTCCGGAGAGAAGTGA
[1000] ATG：基因的起始密码子(ORF的起始)
[1001] TGA：基因的终止密码子(ORF的结束)
[1002] GGG→GGA：反向引物中完成的摆动(甘氨酸至甘氨酸)
[1003] ATG→ATC：Genecard中报道的单核苷酸多态性(SNP)，Met--->Ile，SNP ID：rs222747。
[1004] 从如下两个可商业途径获得的载体产生杂交表达载体。用HindIII和Aval消化载体pTK-Hygro(Clonetech目录号631750)以释放含有TK启动子、潮霉素基因和HSV-TK polyA信号的潮霉素盒。使用AvrII位点将该潮霉素盒克隆入pcDNA4myc-HisB(Invitrogen目录号V863-20)。在Kpnl(5')和Pmel(3')位点将hTRPV1编码序列插入得到的pcDNA Hygro载体，并由此在上游侧翼引入巨细胞病毒启动子和在下游侧翼引入牛生长激素聚腺苷酸化信号。通过序列分析证实完整ORF正确插入重组表达载体DNA(此后称为DNA)。完整质粒骨架包含pUC起点(ori)、氨苄青霉素抗性基因、pCMV启动子、含有KpnI和PmeI位点的多克隆位点、大肠杆菌EM-7启动子和潮霉素抗性基因以及hTRPV1ORF。
[1005] (ii)表达hTRPV1的重组N1E115的开发
[1006] 以下材料用于该过程：
[1007] Lipofectamine2000(Invitrogen,目录号11668-019)、聚乙烯亚胺(Aldrich，目录号J40872)、潮霉素B(Invitrogen，目录号10687-010)。超纯试剂盒制备了超螺旋DNA，同时转染在无抗生素无血清DMEM中进行。
[1008] 对于细胞传代，将N1E115细胞[美国典型培养物保藏中心，Manassas，2
Virginia(US)，保 藏 号 CRL2263] 培 养 于 175cm 烧 瓶 (Nunc) 中 含 有 1x DMEM(Sigma)+10%FBS(Gibco)+1%青霉素-链霉素(Gibco)的生长培养基。铺板当天，从烧瓶吸出废弃培养基并用手掌从侧面轻拍烧瓶以从烧瓶底部移动细胞。添加10mL生长培养基以悬浮细胞，并在含有35mL生长培养基的新T-175烧瓶中接种1mL悬浮的细胞。
[1009] 用于转染的细胞铺板方案如下：在空气层流内向有盖的6孔板的每个孔添加2mL6
生长培养基中的0.2x10 细胞。在CO2孵育箱(Thermo)中37℃和5%CO2下孵育板24小时。
[1010] 在Lipofectamine介导的转染当天，以如下方式在层流罩稀释DNA和Lipofectamine：在250μL DMEM中稀释4μg DNA。接下来，在250μL DMEM中稀释10μg Lipofectamine。允许溶液在室温(RT)静置7分钟，之后混合它们并允许在室温静置另外
20分钟。一经制备了转染混合物，用500μL DMEM洗涤铺板的细胞。洗涤之后，向孔中添加
500μL Lipofectamine-DNA混合物。在对照孔中，添加Lipofectamine-DMEM，并在37℃和
5%CO2下孵育板4.5小时。孵育之后，小心倾倒掉来自转染细胞的培养基而不扰乱细胞。然后用1mLDMEM洗涤细胞一次。洗涤之后向细胞添加生长培养基(DMEM+10%FBS)，并在37℃和5%CO2下孵育细胞24小时。
[1011] 孵育后二十四小时，目视检查转染的细胞的存活力和粘附。从孔去除废弃的培养基，并且每孔添加含有300μg/mL潮霉素的1.2mL新鲜生长培养基。通过上下吹打移动细胞。来自每孔的细胞以1：4分割，并转移至新的6孔板(300μL细胞/孔)。开始，每天观察转染的细胞和对照，每隔一天更换废弃的培养基。第二周结束之前，转染的稳定集落出现，其然后被扩增并在如下进行的钙测定和钠测定中进行功能测试。
[1012] (iii)细胞传代和细胞的克隆分离
[1013] 根据上述细胞传代方案如前传代细胞。如下所述进行通过限制稀释方法的克隆分离。
[1014] 饲养细胞的制备：收获健康N1E115(野生型细胞)。1x106细胞/mL的N1E115细6
胞用浓度为10μg/L x10 细胞的丝裂霉素C在37℃下在CO2孵育箱中处理20分钟。20分
2
钟之后，用DMEM洗涤细胞5-6次。然后将细胞转移至含有15mL生长培养基的75cm 烧瓶，并在CO2孵育箱中37℃下孵育4小时。孵育之后，用DMEM洗涤饲养细胞，细胞变得容易铺板。
[1015] 稳定细胞的制备：hTRPV1-N1E115的健康细胞被沉淀并以如下浓度在培养基中重悬：如果在96孔板中铺板，分布将是0.3细胞/孔/100μL培养基。向其添加选择性抗生素潮霉素b(300μg/mL)。
[1016] 以1000细胞/100μL/孔的浓度在96孔板中铺板饲养细胞。细胞不铺板于边缘孔。取而代之的是添加200μL无菌磷酸盐缓冲盐水(PBS)。向饲养细胞层添加含有0.3细胞/孔/100μL的100μL稳定细胞悬液。在37℃和5%CO2孵育板。板在CO2孵育箱中静置10天。从第10天开始，非常小心地观察所有细胞板的单个集落(假设从一个单细胞产生)。小心检查每一个孔。标记仅有单个集落的孔。
[1017] 对标记的孔进行培养基更换，弃掉废弃的培养基并添加含有300μg/mL潮霉素B的新鲜生长培养基。具有单个集落的标记孔从96孔板扩增至48孔板，随后6孔板。最后，2
将细胞转移至25cm 烧瓶(5mL生长培养基+300μg/mL潮霉素B)。从培养的烧瓶计数细胞并铺板以在钠和钙测定平台中功能筛选。基于证实hTRPV1强表达的测定数据选择用于研究的最终克隆候选物，钙测定中使用辣椒素激发的钙响应，并且如膜电位测定中强大藜芦定响应所判断的组成型钠通道活性没有损失。
[1018] (iv)评估hTRPV1表达细胞功能的钙测定
[1019] 对于钙测定，以5000每50μL DMEM+10%FBS+300μg/mL潮霉素每孔在384透明底聚-D-赖氨酸涂布板中铺板细胞，并且在37℃和5%CO2孵育48小时。在测定当天，轻轻弃掉培养基并用改良的Tyrodes缓冲液洗涤(20μL/孔)]，其然后被轻轻弃掉。
[1020] 用于钙通道测定的改良Tyrodes缓冲液的组成
[1021]盐 浓度(mM)
NaCl 145
KCl 2.5
CaCl22H2O 5.4
MgCl26H2O 1.2
HEPES 10
葡萄糖 10(180mg/100mL)
丙磺舒 2.943
[1022] ●使用 水试剂补足体积至500mL。
[1023] ●使用KOH调节pH至7.4。
[1024] 以0.025%的浓度向 钙4染料(Molecular Devices)添加聚醚酸(250μL的1%储液用于10mL染料)。接下来，每孔添加在改良的Tyrodes缓冲液(在pH调节之前向50mL改良的Tyrodes缓冲液添加丙磺舒(42mg，于60μL5N NaOH中))中制备的
20μL 钙4染料(Molecular Devices)，并在添加辣椒素(辣椒素储液是在DMSO
中20mM，工作储液1mM(于缓冲液中)并且在测定板中最终浓度是10μM，并且根据生产商说明书用于钙测定)之前在25℃孵育板30分钟。向 (Molecular Devices，Inc.)
中的细胞添加20μL2x(20μM)辣椒素，并且读数15分钟。
[1025] (v)用于评估hTRPV1表达细胞中钠通道功能的膜电位测定
[1026] 将细胞以5000每50μL[DMEM+10%FBS+300μg/mL潮霉素]每孔铺板于384透明底聚-D-赖氨酸涂布板，并在37℃和5%CO2孵育48小时。在测定当天，轻轻弃掉培养基并每孔添加30μL染料(在测定缓冲液中制备FMP蓝染料)，并且允许染料加载在室温下进行20分钟。根据生产商说明书准备 仪器的‘激动剂’药物添加板；该板含有藜芦定(Sigma-Aldrich，目录号V5754)和来自沟迎风海葵(Anemonia sulcata)的毒素-II(ATX-II，Sigma-Aldrich目录号T3268)。药物添加板中藜芦定和ATX-II的浓度分别是400μM和12μM，以在使用 仪器将10μL组合溶液分配进细胞板时实现100μM
和3μM的最终测定浓度。针对 仪器程序化激动剂添加以符合荧光信号读数的起
始，并且这种读数以规律间隔进行10分钟持续时间。
[1027] B.开发用于评估在表达hTRPV1的细胞中热(47℃)刺激之后化合物对钠通道响应抑制的体外测定
[1028] 通 过 在 175mL 烧 瓶 (Nunc) 中 生 长 培 养 基 ( 含 有1xDMEM(Sigma)+10%FBS(Gibco)+1% 青 霉 素 - 链 霉 素 (Gibco)+300μg/mL 潮 霉 素B(Invitrogen，作为选择标记))中培养来传代hTRPV1-N1E115细胞。细胞以1:10分裂。
从烧瓶抽吸废弃培养基，并用手掌从侧面轻拍烧瓶以从烧瓶底部移动细胞。添加生长培养基(10mL)以悬浮细胞，并在含有生长培养基(35mL)的新T-175烧瓶中接种悬浮的细胞(1mL)。为了铺板细胞用于测定，在空气层流内向有盖的384孔透明底无菌聚D-赖氨酸涂布板(Greiner-bio one)的每个孔添加50μL生长培养基中5000个细胞。在CO2孵育箱(Thermo)中37℃和5%CO2下孵育板。48小时之后，在测定当天，显微镜观察细胞接种的板以检查测定之前单层的健康、粘附和汇合。
[1029] 从细胞接种的板轻轻倾倒废弃培养基并向每个板孔添加 膜电位染料-蓝(可商业途径获自Molecular Devices Inc.，US，原样“FLIPR膜电位测定试剂盒蓝”)。根据生产商说明书在测定中制备染料。添加染料的板在板孵育器(Thermo)中25°下孵育30分钟。根据表3制备测定缓冲液。使用KOH(Sigma)将pH调节至7.4，并且用水(Millipore)补足体积至500mL。除非另外提及，所有稀释在测定缓冲液中进
行。
[1030] 表3
[1031]盐 浓度(mM)
NaCl 150
KCl 3.25
CaCl22H2O 2
MgCl26H2O 3
HEPES 10
葡萄糖 11(198mg/100mL)
[1032] 在测定缓冲液中稀释化合物，并添加至384孔聚丙烯圆底孔板(Costar)以用作化合物添加的来源板。在染料孵育期结束之后，加载染料的板和化合物来源板被插入具有Tetra384 吸头盒(Molecular Devices，Inc.)的 (Molecular Devices，
Tetra
Inc.)。通过 系统向加载染料的板添加化合物(第一次添加)。添加化合物
之后，立即将板转移至47℃板孵育器(Thermo)并孵育10分钟以激活hTRPV1。然后立即将板转移至25℃板孵育器(Thermo)并孵育30分钟。未被激活的细胞接种板被转移至25℃板孵育器(Thermo)并孵育30分钟。在第二次添加之前，如上所述制备了含有藜芦定(Sigma)和ATX-II的激动剂板。使用 软件实现了激动剂添加，并且时机符合荧光读数，荧光读数以规律间隔进行总共12分钟的持续时间。
[1033] 在 测定中，参考化合物QX-314具有733mM的hTRPV1-N1E115，47℃IC50值。IC50≤100μM指示比QX-314好10倍的活性。
[1034] C.用于评估hNav1.5-HEK293细胞中化合物对钠通道响应抑制程度的方法
[1035] 使用以下测定评估测试化合物阻断主要心脏钠通道亚型的趋势。已知Nav1.5钠通道可透过季钠通道阻断剂例如QX-314，并且因此在不存在化学TRPV1激动剂下进行该测定。
[1036] 在 75mL 细 胞 结 合 烧 瓶 (Corning) 中 生 长 培 养 基 ( 含 有1XDMEM(Gibco)+10%FBS(PAA Gold)+2%谷 氨 酰 胺 100mM(Gibco)+1%青 霉 素 10,000U/mL链霉素10,000μg/mL(Invitrogen)+1.2mg/mL遗传霉素G418(Invitrogen))中培养hNav1.5-HEK-293细胞(CreaCell，France，表达人类Nav1.5钠通道的人类胚胎肾细胞系)。
如所述一样进行随后步骤。弃掉废弃培养基并用PBS-1X洗涤细胞一次。添加
(1-2mL；PAA)溶液。板在37℃加热孵育器上放置3-5分钟。一经分离细胞，即添加37℃完全培养基(9mL)。将细胞悬液吸入无菌移液器，并轻轻匀化细胞以分解细胞聚集物。使用台盼蓝用血细胞计计数细胞，然后在400g离心5分钟。可以通过在T75烧瓶中接种2,105细胞/mL(终体积：15mL)来扩增或维持细胞。在空气层流内向有盖的384孔透明底无菌聚-D-赖氨酸涂布板(Greiner-bio one)的每个孔添加50μL生长培养基中的8000个细胞。在CO2孵育器(Thermo)中37℃和5%CO2下孵育板48小时。
[1037] 在测定当天，用测定缓冲液洗涤细胞，测定缓冲液使用表4的组分和量制备。使用NaOH调节pH至7.4，用 水补足体积至500mL。
[1038] 表4
[1039]盐 浓度(mM)
NaCl 165
KCl 4.5
CaCl22H2O 2
MgCl26H2O 1
HEPES 10
葡萄糖 10(180mg/100mL)
[1040] 向细胞添加测定缓冲液并在室温(25℃)孵育10分钟。在测定缓冲液中稀释化合物。添加化合物并在室温(25℃)孵育10分钟。向细胞添加Red FMP染料(MDC)并在室温(25℃)孵育板30分钟。在DMSO中制备藜芦定储液(20mM；Sigma)；向 系统中细胞接种板的每个孔添加测定缓冲液中的藜芦定(最终浓度为30μM)，并读数10分钟。表5提供了示例说明测试化合物响应于表达hTRPV1的细胞中热刺激存在或不存在的钠通道活性的数据。测试化合物在25℃和47℃下和两个测试浓度下的差异活性。显示最有前景的特征的化合物在47℃测定中进一步评价IC50，实例示于表5。
[1041] 表5
[1042]
[1043]
[1044] A'：IC50=1-<10μM
[1045] B'：IC50=10-100μM
[1046] NT：未测试
[1047] 相似地，表6提供了示例说明显示在47℃下突出的响应抑制和在25℃下最小抑制的测试化合物的钠通道活性的数据，评估了其在表达Nav1.5的细胞中阻断心脏钠通道的能力。几种这类化合物的数据显示于表6，显示阻断NaV1.5所需的这些化合物的浓度高于阻断TRPV1-N1E115细胞系中钠通道响应所需的浓度。
[1048] 表6
[1049]
[1050] 实施例54：机械伤痛的体内测定
[1051] 进行该测定以监测化合物被单独或与利多卡因组合直接注射入坐骨神经附近时的镇痛时程。
[1052] 雄性Sprague Dawley(SD)大鼠具有180-220克体重范围。使动物适应实验室技术人员和实验环境三天。在第1天，所有动物被进行三部分实验室驯化(30-45分钟)并用毛巾包裹(1分钟每只动物)。在第2天，进行相同的驯化安排，在第3部分连同镊子触摸(无力应用)。在第3天，进行类似于第2天的驯化安排，并且记录第一基线。在第4天，在施用药物/测试化合物注射之前记录第二基线。考虑第二基线以评价治疗效果。
[1053] 在实验日早上记录所有动物的同侧(右后)爪的回缩/发声力阈值(PWF)。在最后趾骨基底、第5和第4中骨的中间位置应用镊子，500克截止。镊子的镊子臂保持如下方式：计量端面对爪背，并且平端面对拓面。以缓慢且稳定增加的方式完成镊子臂的力应用。实践优化力应用速度以在大约6-7秒钟内达到截止值(500g)。
[1054] 为了注射，短期用异氟烷(获自Baxter Pharma，US)麻醉大鼠，并保持俯卧式，四肢张开。通过摸来定位大转子和坐骨结节，并且在两者之间画虚线，并且根据该线在大转子尾部约三分之一距离估计点。使用从背侧方向前进的注射针头以45°角度注射各个测试化合物/媒介物溶液(约100μL或200μL，单独实验)，并且针尖触碰坐骨。与结核菌素注射器连接的27号针头用于注射。轻推注射体积。注射之后，动物保持在恢复室内，并且只有在从麻醉完全恢复之后它们返回笼子。注意，进行温和麻醉以使动物保持很短时间的麻醉。
[1055] 在改良媒介物( 试剂的0-15%水溶液)中以所需浓度配制不溶于正常盐水溶液的测试化合物，以提供溶液制剂。如果可能，所有化合物以简单的正常盐水制剂施用。 试剂被用作最后方案。然后将盐酸利多卡因粉末(Sigma，USA)溶
解于相同溶液以提供测试化合物和利多卡因的组合溶液制剂。使用超声减少所需情况中的粒度。在施用之前使用注射器顶部滤器(0.22μm)过滤除菌最终制剂。
[1056] 在第4天，化合物/媒介物注射之后，在注射后0.5和2小时进行PWL的两次读数，随后以1小时或2小时的间隔读数，取决于响应是否维持在截止或显示重获敏感性的迹象。继续记录，直到克力响应下降到与给药前基线无显著差异的水平。否则，继续记录至14小时，随后是第5天在注射后24小时的下一次读数。当在24小时依然观察到显著的抗痛觉效果时，还继续进行如在第4天的记录。
[1057] Prism5统计学软件用于分析。柱分析之下，对每组进行单向方差分析(ANOVA)，随后Dunnett检验以检查基线值和不同时间点读数之间差异的显著性。
[1058] A：化合物与现有技术QX-314的对比
[1059] 使用上文提供的概述和测定，制备并测试了表7的制剂。这些测定的结果提供于图1-7并概述于表7。具体地，图1-7是缩爪发声力(g)对时间(小时)的曲线。
[1060] 表7
[1061] 机械伤痛的镇痛持续时间
[1062]
[1063] 这些数据示例说明，实施例2、3、11、24和43的化合物提供了大于QX-314的至少7小时的镇痛效果。重要的是，实施例3的化合物提供了在不存在利多卡因下显著持续的镇痛效果。
[1064] B：式(I)化合物的对比
[1065] 使用上文提供的概述和测定，制备并测试了表8的制剂。这些测定的结果提供于图5并概述于表8。具体地，图5是缩爪发声力(g)对时间(小时)的曲线。
[1066] 表8
[1067]
[1068] 这些数据示例说明，实施例24的化合物在100μL注射体积时表现出达32小时的抗痛觉效果。而且，实施例16的化合物在100μL注射体积时表现出达6小时的抗痛觉效果。
[1069] C：注射体积和浓度的影响
[1070] 根据以上提供的说明制备注射剂，并且包括(i)包含0.5%实施例24化合物和2%利多卡因的100μL溶液和(ii)包含0.25%实施例24化合物和1%利多卡因的200μL溶液。如上所述施用这些注射剂，从而允许分析100μL对200μL体积制剂的效果。
[1071] 这些测定的结果提供于图6和7。具体地，图6和7是缩爪发声力(g)对时间(小时)的曲线。要注意，在0.5%测试化合物量下，对于100μL注射体积，抗痛觉的总持续时间减少。还要注意，注射体积从100μL至200μL的增加没有影响响应分布达约12小时，并且利多卡因组合除了先天作用之外发挥作用，对于该测试化合物在20小时保持不变。
[1072] 实施例55：坐骨神经功能测定
[1073] 坐骨神经功能测试是简单的观察步态分析，其提供了根据基于动物在平面行走时的足印的目视检查的预定评分量表的后肢运动功能的基本评估(该测试的基本原理提供于Lowdon(Journal of Neuroscience Methods24(3)，1988，279-281))。在注射测试物质之后，动物后爪被染墨，然后将它放在平纸面上并允许自由行走。检查染墨的足垫在纸上留下的足印图案，并基于主观评估分配‘足印评分’。评分系统根据以下方案分级受损严重度：0的足印评分指示对注射爪没有产生重量，该爪被跖面朝上牵引或扭转。1-3的足印评分反映负重主要在膝盖上，踝和趾被节约使用，趾被卷曲，和或爪的跖面以凹的方式上升。4-6的足印评分反映负重主要在膝盖和踝上，很少负重在趾上。6-10的足印评分反映负重分布在膝盖、踝和趾上，并且偶尔节约膝盖关节。11的足印评分指示重量分布是正常的，并且存在爪的跖面的完美放置。
[1074] 图8中的数据显示一组存在和不存在固定量(1和2%)利多卡因下通过坐骨神经周围注射施用1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(2-甲基苯基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物的0.25%和0.5%溶液剂的大鼠的平均足印评分对时间。方块(■)代表1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(2-甲基苯基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物(0.5%)和利多卡因
(2%)组合溶液的200μL注射的结果。圆环(●)代表1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(2-甲基苯基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物(0.25%)和利多卡因(1%)的组合溶液的200μL注射的结果。直立三角形(▲)代表仅1,1-二甲基-2-[2-((茚满-2-基)(2-甲基苯基)氨基)乙基]哌啶鎓碘化物(0.25%)溶液的200μL注射的结果。倒置三角形(▼)代表仅利多卡因(2%)溶液的200μL注射的结果。
[1075] 图10中的数据显示通过坐骨神经周围注射施用与2%利多卡因组合的0.2%实施例43的化合物，即((R)-2-[2-(茚满-2-基-邻-甲苯基-氨基)-乙基]-1,1-二甲基-哌啶鎓溴化物的200μL剂的大鼠的平均足印评分对时间。注射在注射后2小时产生了显著的运动缺陷，其经随后4小时改善至中度损伤(评分5至8)，并且之后经评估的剩余20小时左右逐渐恢复至‘正常’。
[1076] 实施例56：局部麻醉活性
[1077] 将测试溶液等分试样(0.25mL)应用入有意识的兔子(任一性别；2-4kg)的结膜囊，并且眼睑保持闭合约20秒。在应用测试溶液之前和之后每5分钟检查角膜反射。为了测试角膜反射，用短杆弹性硬毛触碰角膜六次。麻醉持续时间被计算为从动物不感觉硬毛的六次触碰的任何一次的时间点至动物对六次触碰的三次再次反应的时间点。为了证实局部麻醉效果的可逆性，继续测试直至动物对硬毛的所有六次触碰反应至少15分钟。
[1078] 实施例57：皮肤麻醉活性
[1079] 使大鼠在进入研究之前适应环境和考察者数日。在每次试验之前约24小时，使用电子剪剃掉雄性大鼠背部皮肤。在皮下注射之后，使用Khan(Khan等人，Anesthesiology，2002年1月，96(1)：109-116)描述的“针刺”方法确定测试剂的麻醉作用。注射体积标准化为100μL，每次注射引起小水泡产生-其边界用墨水标记。皮肤躯干肌肉反射(CTMR)是由背部皮肤区域的伤害性刺激引起的横向胸脊肌肉抽搐的皮肤反射运动。使用18号针头作为伤害性刺激；向‘正常’皮肤区域产生六个刺激以确定基线灵敏度，并且然后在水泡区域重复。基于未能引起响应的刺激产生的数目来估计局部麻醉。数据以%最大可能效应(MPE)提出，其中100%指示对注射区域内六次针头产生的每一次的响应完全缺乏。以规律间隔评估局部麻醉程度以产生效力-持续时间曲线。
[1080] 实施例58：C.局部(侵润)麻醉活性
[1081] 每次试验之前约18-24小时，根据实施例36准备皮肤。在皮内注射之后，使用类似于实施例36中描述的“针刺”方法确定每个剂的麻醉作用。在治疗之前和治疗之后不同间隔，使用尖锐金属“痛觉计”以预定的20克最大力测试皮肤区域存在或不存在响应于六个标准化皮肤探测的皮肤抽搐。没有产生皮肤抽搐响应的探测平均数目被指定为“麻醉评分”。在该系统中，对六个刺激的六个响应代表“无麻醉活性”，并且对六个刺激无响应代表“最大麻醉活性”。在皮内注射剂的实验中，使用标记笔将荷兰猪的背部分成四个部分，并且进行0.1mL0.25%、0.5%和1.0%测试化合物的生理盐水溶液、媒介物(生理盐水)和至少一种参考化合物的注射，一个注射进入四个确定区域的每一个。
[1082] 实施例59：小鼠中的急性静脉内毒性
[1083] 称重20至22g的NMRI品系小鼠(雄性)在测试场至少十天和在实验室至少一小时的稳定期之后使用。在测试之前16小时不给所有动物提供食物，但提供水。在药物施用后两小时开始使动物自由获取食物，这通常发生在大约9.00AM。给药后7天，每天观察所有动物。
[1084] 本说明书中引用的所有出版物在此通过引用并入。当参考特定实施方案描述本发明后，要理解，可以做出调整而不背离本发明精神。这种调整预期落入所附权利要求的范围。
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