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一种锦绣杜鹃愈伤组织诱导方法

阅读：442发布：2024-01-19

专利汇可以提供一种锦绣杜鹃愈伤组织诱导方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明公开了一种锦绣杜鹃愈伤组织诱导方法，包括以下步骤：(1)将锦绣杜鹃无菌苗叶片剪断形成伤口后作为外植体；(2)将外植体接种于培养基中进行愈伤组织的初代培养，初代培养时光强2000Lux，光周期14h，温度 25℃，初代培养时间为三周。本发明通过培养基的优化、培养条件的选择，提供了用于锦绣杜鹃愈伤组织诱导的培养基，该组合能显著提高愈伤组织的诱导率。本发明提供了一种诱导率高的锦绣杜鹃愈伤组织诱导方法，为锦绣杜鹃组织培养体系以及遗传转化体系的建立奠定了基础。，下面是一种锦绣杜鹃愈伤组织诱导方法专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种锦绣杜鹃愈伤组织诱导方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将锦绣杜鹃无菌苗叶片剪断形成伤口后作为外植体；
(2)将外植体接种于培养基中进行愈伤组织的初代培养，初代培养时光强2000Lux，光周期14h，温度25℃，初代培养时间为三周。
2.如权利要求1所述的锦绣杜鹃愈伤组织诱导方法，其特征在于，初代培养后，将叶片伤口处产生的愈伤组织剥离并接种于新鲜的培养基中进行继代培养，继代培养三周。
3.如权利要求1所述的锦绣杜鹃愈伤组织诱导方法，其特征在于，步骤(1)中将叶片剪成2～3段。
4.如权利要求1所述的锦绣杜鹃愈伤组织诱导方法，其特征在于，所述培养基为添加有Zeatin和NAA的Anderson培养基。
5.如权利要求4所述的锦绣杜鹃愈伤组织诱导方法，其特征在于，所述Zeatin的终浓度为1mg/L。
6.如权利要求4所述的锦绣杜鹃愈伤组织诱导方法，其特征在于，所述NAA的终浓度为
0.5mg/L。
7.如权利要求4所述的锦绣杜鹃愈伤组织诱导方法，其特征在于，所述培养基中还添加有终浓度为30g/L的蔗糖，终浓度为3.5g/L的植物凝胶，培养基的pH为5.5。

说明书全文

一种锦绣杜鹃愈伤组织诱导方法

技术领域

[0001] 本发明涉及植物组织培养技术领域，特别是涉及一种锦绣杜鹃愈伤组织诱导方法。

背景技术

[0002] 锦绣杜鹃(Rhododendron pulchrum)，为杜鹃花科(Ericaceae)杜鹃花属植物，全国各地均有栽培，是杜鹃花园艺分类中毛鹃的代表。其枝叶清秀，四季常青，开花繁茂，可盆栽，也可丛植、群植于公园或庭院中,或作花篱植于路边。因其观赏价值高，耐修剪，适应力强，锦绣杜鹃已成为常见的园林绿化植物。

[0003] 锦绣杜鹃除了具有极高的观赏价值外，还具有较高的医药价值。药理研究表明锦绣杜鹃的根、茎、叶均可入药，可治疗风湿、痛疮、妇科、咳嗽等症。锦绣杜鹃的干燥叶经提取加工制备而成的粉末状固体，主要成分为黄酮类物质，具有祛痰、止咳及平喘作用，此外还因其能改善卷烟品质，已被作为一种植物特色烟用原料应用到卷烟生产中。

[0004] 愈伤组织是组织培养最常见的一种培养形式，愈伤组织是原指植物体的局部受到创伤刺激后，在伤口表面新生的组织。它由活的薄壁细胞组成，可起源于植物体任何器官内各种组织的活细胞。愈伤组织培养具有多种用途，一方面可研究植物生长发育及分化的机制进行基因遗传转化，对植物遗传育种具有特殊意义；另一方面可用于大规模工厂化生产有用化合物，或用于细胞培养筛选工业、农业、医药生产上有用的无性系，或用于原生质体培养中的原生质体来源等。实践证明，愈伤组织培养不仅是一种植物快繁的新手段，同时也是植物改良、种质保存和有用化合物生产的理想途径。

[0005] 锦绣杜鹃的愈伤组织诱导对于再生植株是一个重要的阶段，较高的愈伤组织诱导率对于后期愈伤组织的分化奠定良好的基础，如何获得较高的愈伤组织诱导率与培养基类型、激素的种类和浓度以及培养条件有密切的关系。目前关于锦绣杜鹃的研究主要集中在生理变化、杂交培育、嫁接繁殖、景观利用等，未见锦绣杜鹃组织培养体系建立的报道。因此，建立起锦绣杜鹃的组织培养体系，能够为后续建立锦绣杜鹃遗传转化体系、培育新品种奠定基础，也能为实现锦绣杜鹃广泛的园林生产和药理研究提供条件，具有十分重要的意义。

发明内容

[0006] 本发明提供了一种愈伤组织诱导率高的锦绣杜鹃愈伤组织诱导方法。

[0007] 一种锦绣杜鹃愈伤组织诱导方法，包括以下步骤：

[0008] (1)将锦绣杜鹃无菌苗叶片剪断形成伤口后作为外植体；

[0009] (2)将外植体接种于培养基中进行愈伤组织的初代培养，初代培养时光强2000Lux，光周期14h，温度25℃，初代培养时间为三周。

[0010] 初代培养后，将叶片伤口处产生的愈伤组织剥离并接种于新鲜的培养基中进行继代培养，继代培养三周。

[0011] 步骤(1)中将叶片剪成2～3段。

[0012] 所述培养基为添加有Zeatin(玉米素)和NAA(萘乙酸)的Anderson培养基。所述Zeatin的终浓度为1mg/L。所述NAA的终浓度为0.5mg/L。

[0013] 所述培养基中还添加有终浓度为30g/L的蔗糖，终浓度为3.5g/L的植物凝胶，培养基的pH为5.5。

[0014] 本发明利用锦绣杜鹃无菌苗叶片为外植体，对影响愈伤组织发生的因素进行研究，经过培养基种类的筛选以及在光照培养和黑暗培养条件下的对比，最终确立了一种锦绣杜鹃愈伤组织的诱导方法，利用该方法诱导锦绣杜鹃的愈伤组织，外植体的愈伤诱导率可超过90％。本发明通过培养基的优化、培养条件的选择，提供了用于锦绣杜鹃愈伤组织诱导的培养基，该组合能显著提高愈伤组织的诱导率。本发明提供了一种诱导率高的锦绣杜鹃愈伤组织诱导方法，为锦绣杜鹃组织培养体系以及遗传转化体系的建立奠定了基础。附图说明

[0015] 图1为光培养条件下叶片愈伤组织生长情况图。

[0016] 图2为暗培养条件下叶片愈伤组织生长情况图。

具体实施方式

[0017] Anderson培养基：购自Phyto Technology公司，货号A267。

[0018] 实施例1

[0019] 1.1实验材料

[0020] 以锦绣杜鹃无菌苗的叶作为外植体，将叶片剪成2-3段以形成伤口。

[0021] 1.2接种

[0022] 将实验材料接种在培养基组成为Anderson培养基+0.5mg/L NAA+1mg/L Zeatin+30g/L蔗糖+3.5g/L植物凝胶的培养瓶中，培养基pH值为5.5，让叶片伤口与培养基接触。接种时，要穿好工作衣，戴好工作帽、手套和口罩，不准说话或对着植物材料或培养容器口呼吸。用酒精灯外焰灼烧镊子和剪刀，冷却后备用。培养瓶在开盖前于酒精灯外焰处灼烧灭菌。手不能接触接种器械的前半部分(即直接切割、触碰植物材料的部分)，手和手臂应避免在培养基、植物材料、接种器械上方经过。接种过程中，植物材料若不慎掉在超净台上，不宜再用。接种期间如遇停电等事件使超净工作台停止运转，重新启动时应对接种器械重新消毒。

[0023] 1.3培养

[0024] 实验组放置在2000Lux光照，14h光周期，25℃的光照条件下培养，对照组放置在25℃黑暗条件下培养。

[0025] 将外植体接种于培养基中进行愈伤组织的初代培养，初代培养时间为三周。

[0026] 初代培养后，将叶片伤口处产生的愈伤组织剥离并接种于新鲜的培养基中进行继代培养，继代培养三周。

[0027] 1.4实验结果与分析

[0028] 接种3周后统计愈伤组织诱导情况，具体结果见表1。

[0029] 表1锦绣杜鹃愈伤组织诱导结果统计表

[0030]组别接种叶片数愈伤组织诱导数愈伤组织诱导率
实验组(光培养) 70片 64片 91.4％
对照组(暗培养) 64片 40片 62.5％

[0031] 通过表1的数据得知，在培养基成分相同情况下，光培养条件下锦绣杜鹃愈伤组织诱导率高于暗培养条件下愈伤组织的诱导率，在光照培养条件下的愈伤组织诱导率超过90％。实验组(图1)的愈伤组织长势较好，为黄绿色的疏松组织，诱导出的愈伤组织体积较大、数量较多，对照组(图2)的愈伤组织为黄褐色，水渍化严重，长势较差，诱导出的愈伤组织数量较少、体积较小。

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