雏鸡新城疫、鸡痘鹌鹑化弱毒二联活疫苗的制造方法
专利汇可以提供雏鸡新城疫、鸡痘鹌鹑化弱毒二联活疫苗的制造方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及雏鸡新城疫、鸡痘弱毒 疫苗 的二联苗制造方法，属于鸡病 预防 领域。本发明以鸡新城疫II系、鸡痘鹌鹑化弱毒毒种两者等量混合，同时同步接种在同一鸡胚上孵育， 收获 全胚进行制苗。本苗可以一针预防鸡的两种流行病鸡新城疫和鸡痘。简化了操作工序，减轻了劳动强度，节省了制苗材料。，下面是雏鸡新城疫、鸡痘鹌鹑化弱毒二联活疫苗的制造方法专利的具体信息内容。
1、一种用于预防雏鸡新城疫(ND)和鸡痘(AP)的弱毒疫苗制造方法，所用毒种为鸡新城疫Ⅱ系、鸡痘鹌鹑化弱毒毒种，其特征在于：将鸡新城疫Ⅱ系弱毒力毒株与鸡痘鹌鹑化弱毒毒种同时接种于孵育发育良好的鸡胚上，经孵化后，收获全胚制苗。
2、根据权利要求1所述的疫苗制造方法，其特征在于：接种时，将鸡新城疫Ⅱ系弱毒作200倍稀释（对非免疫受精卵）或作150倍稀释（对免疫受精卵），鸡痘鹌鹑化弱毒作100倍稀释，进行等量混合。
3、根据权利要求1所述的疫苗制造方法，其特征在于接种鸡胚为11日龄发育良好的鸡胚，接种处为鸡胚尿囊腔，最佳接种量为每胚接种0.4毫升。
4、根据权利要求1所述的疫苗制造方法，其特征在于对接种后120小时不死的鸡胚，可以延长至144小时收胚。
5、根据权利要求1所述的疫苗制造方法，其特征在于收获的全胚包括接种孵化后96-144小时的死胚和接种后144小时的全部活胚，分别收获其鸡胚液和绒毛尿膜。
本发明涉及预防家禽传染病的疫苗，特别是雏鸡新城疫（简称ND）、鸡痘（AP）的弱毒二联活疫苗的制造方法。
鸡新城疫（ND）和鸡痘（AP）是鸡的病毒性、急性和常发性传染病，世界各地都广泛流行，其中亚洲地区流行最广泛。这两种病传播快，死亡率高，尤其易感雏鸡，对养鸡业危害极大。
目前对这两种鸡病无特效药物治疗，最好的方法是用接种疫苗预防。而疫苗的制造，目前国内外均为单价或二联弱毒的混合冻干活疫苗。鸡新城疫的单价苗主要有鸡新城疫Ⅰ系、Ⅱ系、F系和Lasota系弱毒疫苗。我国鸡痘疫苗主要是鸡痘鹌鹑化弱毒疫苗。国外还有鸽痘用于防鸡痘的疫苗和鸡痘弱毒疫苗。二联弱毒的混合冻干活疫苗主要是鸡新城疫和鸡传染性支气管炎的混合冻干活疫苗以及鸡新城疫和鸽痘的用于预防鸡新城疫和鸡痘的二联弱毒混合冻干活疫苗。
上述单价疫苗的基本制造方法是将毒种接种于10-11日龄的发育良好的鸡胚绒毛尿囊膜或尿囊上，在37℃孵化箱孵育一定时间（如鸡新城疫Ⅱ系弱毒疫苗需96-120小时，鸡痘鹌鹑化弱毒疫苗为5天）后收获鸡胚液或绒毛尿囊膜制苗。二联弱毒混合冻干活疫苗则是将单价苗按一定比例充分混匀后制成。单价苗和二联混合苗的主要优点是制造工艺相对简单，但不足之处是单价苗的收获量较低，平均为8-10毫升/蛋，同时作为单价苗使用时，给包装、运输和预防注射带来不便。
本发明的目的在于找出毒力相当且无干扰的毒株，使鸡新城疫和鸡痘两种病毒被同时接种于一个鸡胚内，并使其同步繁育，从而制造出二联弱毒活疫苗，达到大幅度节约制苗材料和一针就能预防鸡新城疫和鸡痘的效果。
本发明的技术特征是：用鸡新城疫Ⅱ系弱毒毒株与鸡痘鹌鹑化弱毒毒种稀释后等量混合，接种于发育良好的鸡胚尿囊腔，继续孵化，收获死、活全胚进行制苗。
下面结合实施例具体说明制造二联弱毒疫苗的操作步骤及其检验方法：
一、毒种及毒种继代：
毒种为鸡新城疫Ⅱ系、鸡痘鹌鹑化弱毒，均由中国兽药监察所鉴定、保管和供给，复壮后的毒力标准必须符合中华人民共和国农牧渔业部部颁标准NY33-84及NY34-84方可使用。
二、疫苗制造及冻干：
1、鸡蛋的选择和孵化：鸡蛋采用受精率较高，确为健康鸡群所产的新鲜鸡蛋，清洗蛋壳外污物，并用4%碘酒消毒，然后置38.5-39℃孵化箱内孵化，其相对湿度最好保持在60-70%。
2、毒种接种：以鸡新城疫Ⅱ系弱毒力株作200倍稀释（对非免疫受精卵）或作150倍稀释（对免疫受精卵）与鸡痘鹌鹑化弱毒毒种100倍稀释，两者等量混合的毒种0.4毫升，接种于孵育11日龄发育良好的鸡胚尿囊腔，接种后，封死针孔，置37℃继续孵化。
3、收获：鸡胚接种后96小时以前死亡者弃去不用，96小时后4-8小时照蛋一次，取出死胚放4℃冷冻（96-144小时死胚，经培养无菌，绒毛尿膜鸡痘病变明显者亦可用于制苗），接种后144小时将全部活胚收获，放4℃冷却4-24小时致死。用无菌手术取有水肿增厚或有痘斑的整个绒毛尿膜，置灭菌容器内结冻保存。同时吸出全部鸡胚尿液（勿使卵黄破裂），将胚液、胚膜分组置于灭菌瓶中，分组时凡死胚液为一组，活胚液为一组，活胚组HA价应达640倍以上才用。将以上收获合格的胚液、尿膜分别按每毫升加入庆大、卡那及双抗各1000微克（单位），置4℃处理，作无菌检查，合格后备用。吸取鸡胚液和绒毛尿膜时，应逐个检查鸡胚，如胎儿腐败弃去不用，胚液常呈乳白色者，亦可收获，尿膜应收有典型病变者使用。
4、制配疫苗：
将绒毛尿膜称重后，加鸡胚液倍量（即每1克膜加胚液2毫升）与庆大、卡那及双抗各1000微克单位，进行磨制，用120目尼龙丝布滤过，除去陈渣，并按陈渣量补足胚液，作无菌检查，放4℃冷藏备用。
5、分装及冻干：
将以上收获的绒毛尿膜滤液及胚液等量混匀，加适当比例灭菌5%蔗糖牛奶保护剂，为了避免在配苗、分装、冻干对毒价的损失，可加微量鸡胚液（微量指不超过配苗量的1/5），立即分装冻干。
三、疫苗检验：
1、安全检验：将疫苗用生理盐水按原量还原，并作5倍稀释后，点眼并翅膜皮肤划痕，接种10只1-7日龄健康敏感雏鸡，每只约0.1毫升，观察14天，观察期间有2只以上的雏鸡由于非特异性死亡应重作安检，接种后雏鸡应无任何反应，或仅有1只雏鸡出现非特异性死亡时可判合格。
2、效力检验：
（1）用雏鸡检：将疫苗用生理盐水还原，并作100倍0.1毫升点眼并作翅膜皮肤划痕接种免疫14-20日龄非特异性健康敏感雏鸡10只，10-14天后连同对照雏鸡3只，同时攻击APV系强毒（102株，复壮新鲜鸡胚绒毛尿膜）1000倍稀释液1毫升肌肉注射观察10天，免疫组不应发全身痘及其他反应，并全活，对照组3只同龄雏鸡，应发局部痘肿乃至全身痘或部分死亡，疫苗判为合格，否则另选14-20日龄非特异健康雏鸡10只，对照3只重检1次。
再将AP效检耐过的雏鸡选5只（若不足5只时应重新免疫，剂量方法同上），与另外3只同龄无ND免疫力的对照雏鸡，同时肌肉注射1-5万倍NDV系强毒1毫升，观察10-14天免疫组全部健活，对照组全部发病或部分死亡，疫苗判为合格，否则，重检1次。
2、用鸡胚检：将疫苗用无菌生理盐水还原后，作10-3稀释分别放入2个试管中，每管1毫升，第1管加入等量抗ND高免血清。第2管加入等量抗AP高免血清。
放24-30℃中和1小时后，中间摇2次。测NDV系HA为0倍。
第1管继续稀释至10-5，用11-12日龄非特异鸡胚5个，分别接种0.2ml（其中实含AP弱毒0.1ml），于绒毛尿囊膜上，接种后96-144小时判定，全部鸡胚绒毛尿膜绒毛尿膜有水肿、增厚，疫苗的AP成份判为合格，否则可重检1次。
第2管：再继续作10-6、10-7、10-8三组，每组接种非特异鸡胚5个，每个胚接种0.2ml（其中实含NDⅡ系弱毒0.1ml），48小时前死亡的鸡胚不计，随时取出48-120小时死亡的鸡胚，收获鸡胚液，同组等量混合，至120小时取出活胚逐个收获鸡胚，分别测HA价，1∶160以上判为感染，计算EID50应≥10-7/0.1ml，ND成份判为合格，不合格可重检1次。
四、疫苗的保存和使用：
1、疫苗保存：25℃不超过15天，4℃不超过1年，-16℃不超过1年半。
2、疫苗使用：疫苗适用于7日龄以上健雏，（在疫区亦可用于1日龄雏将疫苗作100倍稀释，在翅膜皮内侧无血管处注射0.1ml，亦可每雏点眼两点，并同时在翅膀内侧无血管处刺种两针。若用于喷雾免疫，可用10%甘油水将苗稀释100倍，每只雏按喷足0.5ml剂量使用。为了加强免疫力，第一次注苗后，隔20天按以上使用方法补种一次。
本发明制造的疫苗，将两种不同的疫苗成分联合在一起，不仅相互无干扰，而且还具有以下的积极效果：
1、用本发明方法制造二联弱毒疫苗，尽管制造工艺稍微复杂一些，但用料比单价苗节省得多，即一个鸡蛋经接种弱毒后，除卵黄外，都可利用，比单价苗节省材料一倍以上。而且收获量较高，平均为12-15毫升/蛋，提高了使用率，降低了制苗成本，其经济效益十分显著。
2、用本发明方法制造二联弱毒疫苗，经中试对各种纯系品鸡蛋注射21万只以上均安全，无干扰现象，故安全有效。
3、用本发明方法制造的二联弱毒疫苗，可以使用1日龄以上的雏鸡，对雏鸡很安全，保护面宽。
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