首页 / 专利库 / 农用化学品和农药 / 杀虫剂 / 链霉素 / 一种黄石斛种苗组织培养快速繁殖方法

一种黄石斛种苗组织培养快速繁殖方法

阅读:782发布:2020-10-24

专利汇可以提供一种黄石斛种苗组织培养快速繁殖方法专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且一种黄石斛种苗组织培养快速繁殖方法,包括材料选择和处理、外植体消毒、不定芽诱导和增殖、生根壮苗培养和步骤。在不定芽诱导和增殖步骤将丛生芽切割成单个芽,然后接种到生根壮苗培养基上进行培养,得到完整植株;不定芽诱导和增殖培养为在改良MS的 基础 上添加3.0-5.0毫克/升6-苄基腺嘌呤、3.0-5.0毫克/升激动素、1.0-2.0毫克/升 萘 乙酸和10-20%的椰子汁;生根壮苗培养基为改进MS培养基,在改进MS的基础上添加0.5-1.0毫克/升的萘乙酸、0.5-1.0毫克/升的吲哚丁酸、50-150克/升的香蕉汁、0.5-1.0克/升的 活性炭 ,改进MS培养基为1/2 MS。本 发明 采用一年生嫩芽进行组织培养繁殖,具有繁殖速度快、种苗品质优良、后代性状统一等特点,只需要简单的组织培养设备就可以完成。,下面是一种黄石斛种苗组织培养快速繁殖方法专利的具体信息内容。

1.一种黄石斛种苗组织培养快速繁殖方法,其特征在于:包括下列步骤:
第一步:在超净工作台上,将外植体切除叶片后用酒精浸泡,然后用升汞溶液消毒,再用无菌冲洗,接下来再用升汞溶液消毒,然后再用无菌水冲洗;然后接种到外植体培养基上;其中:所述外植体培养基为改良MS培养基,在改良MS培养基的基础上添加3.0-5.0毫克/升6-苄基腺嘌呤、3.0-5.0毫克/升激动素、1.0-2.0毫克/升乙酸以及改进MS培养基质量的10-20%的椰子汁,所述改良MS培养基为大量元素减半的MS培养基;
第二步:接种后每隔35-45天更换所述外植体培养基一次,至第5次时开始将所述外植体培养基中的6-苄基腺嘌呤和激动素浓度均降至1.5-2.5毫克/升,培养得到丛生芽;
第三步:将第二步培养得到的丛生芽切割成单个芽,然后接种到生根壮苗培养基上进行培养,得到完整植株;所述生根壮苗培养基为改进MS培养基,在改进MS培养基的基础上添加0.5-1.0毫克/升的萘乙酸、0.5-1.0毫克/升的吲哚丁酸、50-150克/升的香蕉汁、0.5-1.0克/升的活性炭,所述改进MS培养基为1/2 MS培养基;
第四步:将完整植株转移到具有自然光的温室中炼苗10-15 天,然后洗净根部的培养基,接下来用苔藓包裹所述完整植株的根系,然后以苔藓为基质种植进行培养。
2.根据权利要求1所述的黄石斛种苗组织培养快速繁殖方法,其特征在于:所述外植体为黄石斛当年生嫩芽。
3.根据权利要求2所述的黄石斛种苗组织培养快速繁殖方法,其特征在于:所述黄石斛当年生嫩芽在作为外植体之前,先用500-800倍的多菌灵浇灌一次黄石斛,并且用500-800倍的多菌灵喷施叶片;一星期之后再用72%的农用链霉素可溶性粉剂的3000-4000倍液浇灌一次黄石斛,并用72%的农用链霉素可溶性粉剂的3000-4000倍液喷施叶片,然后两周内重复一次。
4.根据权利要求1所述的黄石斛种苗组织培养快速繁殖方法,其特征在于:接种前用消过毒的解剖刀切取长度2-4厘米的黄石斛侧芽为外植体。
5.根据权利要求1所述的黄石斛种苗组织培养快速繁殖方法,其特征在于:将外植体用体积浓度为70-80%的酒精浸泡30-60秒。
6.根据权利要求1所述的黄石斛种苗组织培养快速繁殖方法,其特征在于:所述升汞溶液的质量百分比浓度为0.1%。
7.根据权利要求1所述的黄石斛种苗组织培养快速繁殖方法,其特征在于:所述苔藓使用之前用水浸泡24-48小时。

说明书全文

一种黄石斛种苗组织培养快速繁殖方法

技术领域

[0001] 本发明属于植物生物技术领域,特别涉及一种黄石斛种苗组织培养快速繁殖方法。

背景技术

[0002] 黄石斛(Dendrobiumtosaense Makino)属于兰科石斛属,仅产于我国江西、广东、台湾地区及日本等地,常被误认为皮石斛,在日本和我国台湾地区已被作为中药材广泛应用,产量比铁皮石斛产量高,具有抗肿瘤、抗衰老、增强人体免疫及扩张血管等作用;同时,黄石斛花朵黄绿色,具有较高的观赏价值,可应用于盆栽观赏,具有广阔的应用前景。但由于黄石斛种源稀缺,严重地制约了其产业的发展。
[0003] 目前世界上还没有黄石斛种苗繁殖专利和文献报道。

发明内容

[0004] 本发明的目的在于提供一种黄石斛种苗组织培养快速繁殖方法。
[0005] 为实现上述目的及其他相关目的,本发明提供的技术方案是:一种黄石斛种苗组织培养快速繁殖方法,包括下列步骤:第一步:在超净工作台上,将外植体切除叶片后用酒精浸泡,然后用升汞溶液消毒,再用无菌冲洗,接下来再用升汞溶液消毒,然后再用无菌水冲洗;然后接种到外植体培养基上;其中:所述外植体培养基为改良MS培养基,在改良MS培养基的基础上添加3.0-5.0毫克/升6-苄基腺嘌呤、3.0-5.0毫克/升激动素、1.0-2.0毫克/升乙酸以及改进MS培养基质量的10-20%的椰子汁,所述改良MS培养基为大量元素减半的MS培养基;
第二步:接种后每隔35-45天更换所述外植体培养基一次,至第5次时开始将所述外植体培养基中的6-苄基腺嘌呤和激动素浓度均降至1.5-2.5毫克/升,培养得到丛生芽;
第三步:将第二步培养得到的丛生芽切割成单个芽,然后接种到生根壮苗培养基上进行培养,得到完整植株;所述生根壮苗培养基为改进MS培养基,在改进MS培养基的基础上添加0.5-1.0毫克/升的萘乙酸、0.5-1.0毫克/升的吲哚丁酸、50-150克/升的香蕉汁、0.5-1.0克/升的活性炭,所述改进MS培养基为1/2 MS培养基;
第四步:将完整植株转移到具有自然光的温室中炼苗10-15 天,然后洗净根部的培养基,接下来用苔藓包裹所述完整植株的根系,然后以苔藓为基质种植进行培养。
[0006] 优选的技术方案为:所述外植体为黄石斛当年生嫩芽。
[0007] 优选的技术方案为:所述黄石斛当年生嫩芽在作为外植体之前,先用500-800倍的多菌灵浇灌一次黄石斛,并且用500-800倍的多菌灵喷施叶片;一星期之后再用72%的农用链霉素可溶性粉剂的3000-4000倍液浇灌一次黄石斛,并用72%的农用链霉素可溶性粉剂的3000-4000倍液喷施叶片,然后两周内重复一次。
[0008] 优选的技术方案为:接种前用消过毒的解剖刀切取长度2-4厘米的黄石斛侧芽为外植体。
[0009] 优选的技术方案为:将外植体用体积浓度为70-80%的酒精浸泡30-60秒。
[0010] 优选的技术方案为:所述升汞溶液的质量百分比浓度为0.1%。
[0011] 优选的技术方案为:所述苔藓使用之前用水浸泡24-48小时。
[0012] 上述技术方案中:所述MS培养基是Murashige和Skoog于1962年为烟草细胞培养设计的,其特点是无机盐和离子浓度较高,是较稳定的离子平衡溶液,它的硝酸盐含量高,其养分的数量和比例合适,能满足植物细胞的营养和生理需要,因而适用范围比较广,多数植物组织培养快速繁殖用它作为培养基的基本培养基。基于此,这种培养基就用他们的名字来命名了。大量元素是指:NH4NO3、KNO3、CaCl2·2H2O、MgSO4·7H2O、KH2PO4。
[0013] 由于上述技术方案运用,本发明与现有技术相比具有的优点是:本发明采用一年生嫩芽进行组织培养繁殖,具有繁殖速度快、种苗品质优良、后代性状统一等特点,只需要简单的组织培养设备就可以完成。

具体实施方式

[0014] 以下对本发明之实施方式做更详细的说明,使熟悉该项技艺者在阅读本说明书后能据以实施。
[0015] 本文中使用的术语的目的仅在于说明特别实施例,并不意图对本发明做限制。除非上下文明确显示,否则本文中使用的单数形式“一”、“一个”、“该”亦旨在包括复数形式。
[0016] 在说明较佳实施例时,可能基于清楚的目的而使用特别的术语;然而,本说明书所揭露者并不意图被限制在所选择的该特别术语;并且应当理解,每一个特定元件包括具有相同功能、以相似方式操作并达成相似效果的所有等效技术。
[0017] 实施例1:一种黄石斛种苗组织培养快速繁殖方法(1)材料选择和处理
选择植株生长健壮、生长势强的黄石斛当年生嫩芽为外植体。在切取外植体28天前,先用500倍的多菌灵浇灌一次并喷施叶片,一星期后再用72%农用链霉素可溶性粉剂4000倍浇灌一次并喷施叶片。然后两周内重复上述步骤。接种前用75%酒精消过毒的解剖刀切取长度
2厘米的侧芽为外植体。
[0018] (2)外植体消毒在超净工作台上将切下的外植体切除叶片,先用70%酒精中浸泡10秒后,用0.1%升汞溶液消毒5分钟,无菌水冲洗4次,再用0.1%升汞溶液消毒4分钟,无菌水冲洗4次。接种到外植体培养基,所述外植体培养基为改良MS培养基,在改良MS培养基的基础上添加3.0毫克/升
6-苄基腺嘌呤、3.0毫克/升激动素、1.0毫克/升萘乙酸(即每升改进MS培养基添加1毫克的萘乙酸)以及改进MS培养基质量的10%的椰子汁,所述改良MS培养基为大量元素减半的MS培养基;消毒成功率70%。
[0019] (3)不定芽诱导和增殖接种后培养30天外植体茎节上形成不定芽。以后每隔45天在和初代培养相同的培养基上继代一次,至第4代时,增殖系数可达到4.0倍。第5代开始可将培养基中的6-苄基腺嘌呤(6-BA)和激动素(KT)浓度均降至1.5毫克/升,继续增殖,增殖系数可维持在4.0倍。
[0020] (5)生根壮苗培养丛生芽增殖多代后,可将丛生芽切割成单个芽,接种到生根壮苗培养基上进行生根壮苗培养。40天左右能形成株高4厘米的带根的完整植株。所述生根壮苗培养基为改进MS培养基,在改进MS培养基的基础上添加0.5毫克/升的萘乙酸、0.5毫克/升的吲哚丁酸、50克/升的香蕉汁、0.5克/升的活性炭,所述改进MS培养基为1/2 MS培养基(MS培养基均减半)。
[0021] (6)试管苗移栽春季和秋季是试管苗出瓶的适宜时期,将具4厘米高完整植株将培养瓶转移到具自然光的温室中炼苗10 天,然后将其从玻璃瓶中取出,洗净根部的培养基,移入用水浸泡24小时的进口苔藓为基质,种植时将苔藓的水分拧干,包裹根系基地种植于穴盘中,保持适当通和足够的湿度,移栽的成活率均可达90%。
[0022] 基质含蔗糖含量20克/升,pH 5.6,琼脂7g/L,在实验中所采用的培养温度24℃,光照度1500 lx,光照12小时/天。
[0023] 实施例2: 一种黄石斛种苗组织培养快速繁殖方法(1)材料选择和处理
选择植株生长健壮、生长势强的黄石斛当年生嫩芽为外植体。在切取外植体28天前,先用600倍的多菌灵浇灌一次并喷施叶片,一星期后再用72%农用链霉素可溶性粉剂3500倍浇灌一次并喷施叶片。然后两周内重复上述步骤。接种前用75%酒精消过毒的解剖刀切取长度
3厘米的侧芽为外植体。
[0024] (2)外植体消毒在超净工作台上将切下的外植体切除叶片,先用75%酒精中浸泡20秒后,用0.1%升汞溶液消毒7.5 分钟,无菌水冲洗5次,再用0.1%升汞溶液消毒5 分钟,无菌水冲洗5次。接种到外植体培养基,所述外植体培养基为改良MS培养基,在改良MS培养基的基础上添加4.0毫克/升6-苄基腺嘌呤、4.0毫克/升激动素、1.5毫克/升萘乙酸(即每升改进MS培养基添加1.5毫克的萘乙酸)以及改进MS培养基质量的15%的椰子汁,所述改良MS培养基为大量元素减半的MS培养基;消毒成功率80%。
[0025] (3)不定芽诱导和增殖接种后培养28天外植体茎节上形成不定芽。以后每隔40天在和初代培养相同的培养基上继代一次,至第4代时,增殖系数可达到4.5倍。第5代开始可将培养基中的6-BA和KT浓度均降至2.0毫克/升,继续增殖,增殖系数可维持在4.5倍。
[0026] (5)生根壮苗培养丛生芽增殖多代后,可将丛生芽切割成单个芽,接种到生根壮苗培养基上进行生根壮苗培养。40天左右能形成株高5厘米的带根的完整植株。所述生根壮苗培养基为改进MS培养基,在改进MS培养基的基础上添加0.75毫克/升的萘乙酸、0.75毫克/升的吲哚丁酸、100克/升的香蕉汁、0.75克/升的活性炭,所述改进MS培养基为1/2 MS培养基(MS培养基均减半)。
[0027] (6)试管苗移栽春季和秋季是试管苗出瓶的适宜时期,将具5厘米高完整植株将培养瓶转移到具自然光的温室中炼苗13天,然后将其从玻璃瓶中取出,洗净根部的培养基,移入用水浸泡48小时的进口苔藓为基质,种植时将苔藓的水分拧干,包裹根系基地种植于穴盘中,保持适当通风和足够的湿度,移栽的成活率均可达95%。
[0028] 基质含蔗糖含量25克/升,pH 5.8,琼脂6.5g/L,在实验中所采用的培养温度26℃,光照度1800 lx,光照14小时/天。
[0029] 实施例3: 一种黄石斛种苗组织培养快速繁殖方法(1)材料选择和处理
选择植株生长健壮、生长势强的黄石斛当年生嫩芽为外植体。在切取外植体28天前,先用800倍的多菌灵浇灌一次并喷施叶片,一星期后再用72%农用链霉素可溶性粉剂4000倍浇灌一次并喷施叶片。然后两周内重复上述步骤。接种前用75%酒精消过毒的解剖刀切取长度
4厘米的侧芽为外植体。
[0030] (2)外植体消毒在超净工作台上将切下的外植体切除叶片,先用80%酒精中浸泡30秒后,用0.1%升汞溶液消毒10分钟,无菌水冲洗6次,再用0.1%升汞溶液消毒6分钟,无菌水冲洗6次。接种到外植体培养基,所述外植体培养基为改良MS培养基,在改良MS培养基的基础上添加5.0毫克/升
6-苄基腺嘌呤、5.0毫克/升激动素、2.0毫克/升萘乙酸(即每升改进MS培养基添加2毫克的萘乙酸)以及改进MS培养基质量的20%的椰子汁,所述改良MS培养基为大量元素减半的MS培养基;消毒成功率80%。
[0031] (3)不定芽诱导和增殖接种后培养25天外植体茎节上形成不定芽。以后每隔35天在和初代培养相同的培养基上继代一次,至第4代时,增殖系数可达到5.0倍。第5代开始可将培养基中的6-BA和KT浓度均降至2.5毫克/升,继续增殖,增殖系数可维持在5.0倍。
[0032] (5)生根壮苗培养丛生芽增殖多代后,可将丛生芽切割成单个芽,接种到生根壮苗培养基上进行生根壮苗培养。40天左右能形成株高6厘米的带根的完整植株。所述生根壮苗培养基为改进MS培养基,在改进MS培养基的基础上添加1毫克/升的萘乙酸、1毫克/升的吲哚丁酸、150克/升的香蕉汁、1克/升的活性炭,所述改进MS培养基为1/2 MS培养基(MS培养基均减半)。
[0033] (6)试管苗移栽春季和秋季是试管苗出瓶的适宜时期,将具6厘米高完整植株将培养瓶转移到具自然光的温室中炼苗15 天,然后将其从玻璃瓶中取出,洗净根部的培养基,移入用水浸泡72小时的进口苔藓为基质,种植时将苔藓的水分拧干,包裹根系基地种植于穴盘中,保持适当通风和足够的湿度,移栽的成活率均可达98%。
[0034] 基质含蔗糖含量30克/升,pH 6.0,琼脂6g/L,在实验中所采用的培养温度28℃,光照度2000 lx,光照16小时/天。
[0035] 实施例4: 一种黄石斛种苗组织培养快速繁殖方法一种黄石斛种苗组织培养快速繁殖方法,包括下列步骤:
第一步:在超净工作台上,将外植体切除叶片后用酒精浸泡,然后用升汞溶液消毒,再用无菌水冲洗,接下来再用升汞溶液消毒,然后再用无菌水冲洗;然后接种到外植体培养基上;其中:所述外植体培养基为改良MS培养基,在改良MS培养基的基础上添加4.2毫克/升6-苄基腺嘌呤、3.8毫克/升激动素、1.5毫克/升萘乙酸以及改进MS培养基质量的13%的椰子汁,所述改良MS培养基为大量元素减半的MS培养基;
第二步:接种后每隔35天更换所述外植体培养基一次,至第5次时开始将所述外植体培养基中的6-苄基腺嘌呤和激动素浓度均降至1.55毫克/升,培养得到丛生芽;
第三步:将第二步培养得到的丛生芽切割成单个芽,然后接种到生根壮苗培养基上进行培养,得到完整植株;所述生根壮苗培养基为改进MS培养基,在改进MS培养基的基础上添加0.7毫克/升的萘乙酸、0.6毫克/升的吲哚丁酸、98克/升的香蕉汁、0.7克/升的活性炭,所述改进MS培养基为1/2 MS培养基;
第四步:将完整植株转移到具有自然光的温室中炼苗10 天,然后洗净根部的培养基,接下来用苔藓包裹所述完整植株的根系,然后以苔藓为基质种植进行培养。
[0036] 优选的实施方式为:所述外植体为黄石斛当年生嫩芽。
[0037] 优选的实施方式为:所述黄石斛当年生嫩芽在作为外植体之前,先用600倍的多菌灵浇灌一次黄石斛,并且用500倍的多菌灵喷施叶片;一星期之后再用72%的农用链霉素可溶性粉剂的3000倍液浇灌一次黄石斛,并用72%的农用链霉素可溶性粉剂的3000倍液喷施叶片,然后两周内重复一次。
[0038] 优选的实施方式为:接种前用消过毒的解剖刀切取长度4厘米的黄石斛侧芽为外植体。
[0039] 优选的实施方式为:将外植体用体积浓度为72%的酒精浸泡38秒。
[0040] 优选的实施方式为:所述升汞溶液的质量百分比浓度为0.1%。
[0041] 优选的实施方式为:所述苔藓使用之前用水浸泡28小时。
[0042] 以上所述者仅为用以解释本发明之较佳实施例,并非企图具以对本发明做任何形式上之限制,是以,凡有在相同之发明精神下所作有关本发明之任何修饰或变更,皆仍应包括在本发明意图保护之范畴。
高效检索全球专利

专利汇是专利免费检索,专利查询,专利分析-国家发明专利查询检索分析平台,是提供专利分析,专利查询,专利检索等数据服务功能的知识产权数据服务商。

我们的产品包含105个国家的1.26亿组数据,免费查、免费专利分析。

申请试用

分析报告

专利汇分析报告产品可以对行业情报数据进行梳理分析,涉及维度包括行业专利基本状况分析、地域分析、技术分析、发明人分析、申请人分析、专利权人分析、失效分析、核心专利分析、法律分析、研发重点分析、企业专利处境分析、技术处境分析、专利寿命分析、企业定位分析、引证分析等超过60个分析角度,系统通过AI智能系统对图表进行解读,只需1分钟,一键生成行业专利分析报告。

申请试用

QQ群二维码
意见反馈