技术领域
[0001] 本
发明涉及
毒力测定的方法，更具体地来说，特别涉及对骏枣黑斑病菌室内毒力测定的方法。
背景技术
[0002] 枣树(Zizyphus jujube Mill.)，为鼠李科(Rhamnaceae)枣属
植物，是中国特有的果树资源和独具特色的优势果树树种。枣树以其适应性强、果实成熟早、产量高、易管理以及生态效益和经济效益等显著优点，在中国农业生产中占有重要地位。近年来随着新疆生产建设兵团农业产业结构的调整，红枣被大面积推广种植。由于单一品种骏枣在南疆大面积种植，出现了越来越多的新病害，其中骏枣黑斑病是红枣产区主要的常见病害，危害最严重。
[0003] 经形态学鉴定，南疆骏枣黑斑病主要是由链格孢菌(Alternaria alternate)侵染所致。链格孢菌种类繁多，近年来发表的新种、新组合、新名称和种下分类单位有47个。链格孢菌不同种之间致病性有很大差异，在南疆链格孢菌仅危害枣果，还未见危害枣叶、枣花及枝条的情况，而在山东、山西枣产区该菌对上述枣组织器官均能造成危害。对于链格孢菌所引起的病害，采用的防治方法是以
化学防治为主的综合防治方法。虽然
生物防治及
微生物抗菌活性物质的利用是抑制病害的一个重要途径，但实际应用较少。山东省曾经在2000年就做过冬枣黑斑病防治技术的研究，通过室内毒力测定筛选出了有效的化学药剂，这些药剂在生产上也起到了很好的防治效果。
[0004] 目前，对南疆骏枣黑斑病的防治采用的是以化学防治为主的综合防治策略。然而国内
农药商品种类繁多，大多数人无法识别从而滥用农药，不仅造成环境污染而且防治效果差。为了减少果农在枣园用药的盲目性，笔者在室内采用孢子萌发法，测定了目前市场上常见10种
杀菌剂及其混配剂的毒力，以期筛选出对骏枣黑斑病菌毒力大，抑菌效果好的杀菌剂，为生产上科学合理用药提供参考。
[0005] 供试菌种是从新疆阿瓦提县采集骏枣病果，按照柯赫氏法则对病原菌进行分离、鉴定并进行了致病性测定，病原菌经形态学鉴定为链格孢属(Alternaria)
真菌，菌种及标本保存于塔里木大学植物科学学院植物病理实验室。
[0006] 供试杀菌剂是吡唑醚菌酯(25％
乳油，巴斯夫有限公司)、苯醚甲环唑(10％
水分散性粒剂，瑞士先正达作物保护有限公司)、多菌灵(80％
可湿性粉剂，郑州汉翔化工产品有限公司)、
荧光假单孢杆菌粉剂(3千亿/g，建瓯市旺达农化有限公司)、三联120(4％水剂，浙江三联一化生物科技有限公司)、氟
硅-嘧菌酯(50％水剂，旭日农业科技开发有限公司)、乙嘧酚(50％乳油，旭日化工(山东)有限公司)、氟环-苯醚唑(65％水剂，旭日农业科技开发有限公司)、戊唑-咪(50％水剂，旭日农业科技开发有限公司)、
硫酸链霉素(72％可溶性粉剂，北京中农弘露科技发展有限公司)。
发明内容
[0007] 本发明的目的是对骏枣黑斑病菌室内毒力测定的方法，通过研究
滴灌条件下红枣的耗水特性，分析红枣不同生育阶段的耗水量及其对产量的影响，探讨适合枣树生长的
土壤水分条件及果园水分生产力，确定各生育阶段的适宜土壤水分指标，制定以节水、优质、高效为目标的滴灌枣园
灌溉制度，创建滴灌条件下枣园水分高效利用技术体系，为南疆特色林果业持续发展提供理论依据和技术
支撑。
[0008] 前面所述的对骏枣黑斑病菌室内毒力测定的方法，其特征在于：长期、大量使用单一药剂容易使病菌产生抗药性，将2种药剂科学混用能有效延缓抗药性的产生并提高防治效果。
[0009] 前面所述的对骏枣黑斑病菌室内毒力测定的方法，其特征在于：多菌灵与吡唑醚菌酯的不同配比均能较好的抑制骏枣黑斑病菌孢子的萌发。
[0010] 前面所述的对骏枣黑斑病菌室内毒力测定的方法，其特征在于：在供试的10种药剂中，吡唑醚菌酯对骏枣黑斑病的毒力最高，其EC50值为0.0373mg/L；其次为氟硅-嘧菌酯、多菌与灵苯醚甲环唑，其EC50值分别为16.0752、43.8137、63.198mg/L；其余药剂毒力均较低，氟环-苯醚唑EC50值为165.9195mg/L、荧光假单孢杆菌EC50值为237.0493mg/L、乙蜜酚EC50值为524.4414mg/L、三联120EC50值为736.4497mg/L、硫酸链霉素EC50值为1032.048mg/L，其中戊唑-咪的毒力最差，其EC50值为7007.383mg/L。
[0011] 本发明的有益效果是，由于本试验是在室内离体条件下进行研究的，而药剂在田间的防治效果受到很多因素的影响，因此，在室内毒力较高的药剂在生产上防治效果表现如何，还需要进一步研究。化学防治只是病害综合治理中的一种方法，为提高病害管理水平，实现农业
可持续性发展，应对病害进行综合治理。然而，很多枣农对骏枣黑斑病的发病原因及发病规律缺乏认识，导致该病危害加重。今后应从品种布局、果园管理、病害监测方面加强研究并结合化学防治，从而避免骏枣黑斑病在南疆地区扩张与流行。
[0012] 实施方式
[0013] 本发明涉及对骏枣黑斑病菌室内毒力测定的方法，具体实施方式如下：
[0014] 病菌孢子培养与孢子悬浮液的配制
[0015] 在PDA培养基上将供试菌株置于25℃恒温黑暗
培养箱中培养，镜检有大量分生孢子产生时，用5mL蒸馏水洗脱菌落孢子，并使孢子充分悬浮并稀释，在10×10倍
显微镜下每
视野80～100个分生孢子。
[0016] 室内毒力测定
[0017] 在预试验的
基础上将各药剂分别设置为5个浓度梯度，吸取各农药稀释液50μL与等量的孢子悬浮液，混合滴于洁净的凹玻片，置于湿
滤纸的保湿培养皿内，25℃恒温黑暗培养箱中进行保温保湿培养。吡唑醚菌酯和氟硅-嘧菌酯的浓度梯度设为0.5、5、12.5、25、100mg/L；苯醚甲环唑、多菌灵、戊唑-咪、三联120、氟环-苯醚唑、硫酸链霉素浓度梯度均为
5、12.5、25、100、300mg/L；乙嘧酚、荧光假单胞杆菌浓度梯度均为1、5、10、50、200mg/L；将稀释同样倍数的多菌灵和吡唑醚菌酯按A(6∶1)、B(3∶1)、C(1∶1)、D(1∶3)、E(1∶6)体积比进行混配，浓度梯度均设为0.005、0.05、0.5、5、50、500mg/L，以上各处理重复3次，以不含农药的蒸馏水为空白对照。当对照组孢子萌发率达到80％以上时，统计各处理孢子萌发率。
[0018] 杀菌剂混配剂效果评价
[0019] 混配剂作用效果评价根据共毒系数(CTC)，各药剂毒力指数(TI)、复配剂实际毒力指数(ATI)、理论毒力指数(TTI)和共毒系数(CTC)计算方法参照SUN。
[0020] TI＝(标准药剂的EC50/供试药剂的EC50)×100
[0021] ATI＝(标准药剂单用的EC50/复配剂药剂的EC50)×100
[0022] TTI＝TI(A)×A在混剂中所占百分比+TI(B)×B在复配剂中所占百分比
[0023] CTC＝[混剂实际毒力指数(ATI)/混剂理论毒力指数(TTI)]×100
[0024] 若CTC≥170明显增效，120≤CTC＜170，略有增效，70≤CTC＜120相加作用，CTC＜70为拮抗作用。
[0025] 数据的统计与分析
[0026] 各处理检查孢子总数要达到100个，统计数据取3次重复的平均值，按下式计算各处理的孢子校正萌发率、校正抑菌率。
[0027] 校正萌发率＝(处理组萌发率/对照组萌发率)×100％
[0028] 校正抑菌率＝1-校正萌发率
[0029] 以校正抑菌率对应的几率值为纵坐标，试验设置的系列浓度的对数值为横坐标，作回归直线，求出毒力回归方程及EC50值。
[0030] 对结果的分析
[0031] 混配剂杀菌效果评价
[0032] 因为多菌灵与吡唑醚菌酯对骏枣黑斑病菌毒力相对较高，并且两者杀菌作用机理不同，所以选择两者进行混配试验，其不同混配组合对骏枣黑斑病菌的毒力测定结果。配比组合A、B、C、E的EC50值均较小，说明了这4种混配方法均有较好的抑菌效果；混配组合D其EC50值较高，为60.032mg/L，表明其抑菌效果较差。组合A、B与E的共毒系数分别为698.3147、5131.721、322.2999，其CTC＞170，表现为明显增效作用；组合C共毒系数为
154.32，70≤CTC＜120，表现为略有增效；而组合D共毒系数小于70，表现为拮抗作用。
[0033] 10种供试药剂对骏枣黑斑病菌孢子萌发的抑制效果
[0034] 在25℃恒温黑暗培养箱中进行保温保湿培养12h后，对照组病菌孢子萌发率都达到80％以上，统计各处理孢子萌发率。供试的10种药剂对骏枣黑斑病菌孢子的萌发均有一定的抑制作用，每种药剂随着浓度梯度的降低，病菌孢子萌发率逐渐升高，但总体来看，25％吡唑醚菌酯EC抑菌效果最好，从高浓度到低浓度的范围内，孢子平均萌发率控制在
11.33％～30.67％，而其对照组孢子平均萌发率为88.33％；而50％戊唑-咪AS抑菌效果最差，最高药剂浓度时其孢子萌发率达69.33％，在其余供试药剂浓度下孢子萌发率达77％以上。
[0035] 药剂混配组合对骏枣黑斑病菌孢子萌发的抑制效果
[0036] 多菌灵与吡唑醚菌酯的不同配比均能较好的抑制骏枣黑斑病菌孢子的萌发，尤其是组合B，药剂最高浓度为500mg/L时，孢子萌发率仅为2％，当药剂最低浓度为0.005mg/L时，孢子萌发率也只有30.67％，而对照组孢子萌发率达到80.00％；而组合D抑菌效果表现相对较差，除在药剂高浓度下其孢子萌发率相对较低外，其余浓度下孢子萌发率均达到66％以上。
[0037] 对结果的总结
[0038] 采用孢子萌发法测定了10种杀菌剂对骏枣黑斑病菌的毒力，室内试验结果表明10种药剂对病菌孢子均有一定的抑菌效果，且随着药剂浓度的升高其抑菌作用逐步增强。根据EC50值计算结果表明：吡唑醚菌酯毒力最强，其次是氟硅-嘧菌酯、苯醚甲环唑和多菌灵，其余药剂毒力均较低。因此建议吡唑醚菌酯、氟硅-嘧菌酯、苯醚甲环唑和多菌灵在生产上进一步进行药效验证试验。
[0039] 长期、大量使用单一药剂容易使病菌产生抗药性，将2种药剂科学混用能有效延缓抗药性的产生并提高防治效果。为缓解靶标生物的抗性、扩大防治谱和提高药效，本试验选用了多菌灵和吡唑醚菌酯2种毒力相对较高，且作用机理不同的药剂进行混配，试验表明多菌灵和吡唑醚菌酯按A、B和E进行混配，共毒系数均大于170，不仅明显提高了杀菌效果，也有利于阻止或延缓病菌抗药性的产生，为开发防治骏枣黑斑病混配制剂提供了重要的理论依据。
[0040] 链格孢菌属于半知菌亚
门真菌，
无性繁殖能产生大量分生孢子，因此链格孢主要是靠分生孢子进行传播、侵染和危害。本研究从链格孢分生孢子的
角度进行了研究，筛选出了对链格孢分生孢子毒性较强的化学药剂，从而为生产上大面积开展化学防治提供了理论指导。
