一种啤酒酵母中敲除芳香氨基酸转氨酶IIAro9基因的构建方法
专利汇可以提供一种啤酒酵母中敲除芳香氨基酸转氨酶IIAro9基因的构建方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种 啤酒 酵母 中敲除芳香 氨 基酸转氨酶II Aro9基因的构建方法，首次用十二 烷基磺酸 钠(SDS)溶液处理酵母细胞获得大量酵母基因组，特定引物克隆目的基因获取基因的同源臂及筛选基因，再结合同源重组和Cre/loxP系统敲除 多倍体 酵母中Aro9特定基因并消除筛选基因。该方法快速简便，能针对性且有效地敲除酵母组中特定的基因。，下面是一种啤酒酵母中敲除芳香氨基酸转氨酶IIAro9基因的构建方法专利的具体信息内容。
1.一种啤酒酵母中敲除芳香氨基酸转氨酶IIAro9基因的构建方法，包括以下步骤：
(1)啤酒酵母基因组的获得：将啤酒酵母用平板划三区培养，直至出单克隆，然后平涂在平板上获得菌体，用十二烷基磺酸钠(SDS)溶液处理获得啤酒酵母基因组；
(2)目的基因的克隆：利用合理引物、条件，PCR分别扩增出Aro9的上下游同源臂。以pUG6质粒为载体，PCR扩增出两端带有loxP序列的KanMX基因；
(3)构建敲除重组盒：以pUC18质粒为载体，将Aro9的上下游同源臂和KanMX基因插入到pUC18质粒的BamH1位点，构建pUC18-Aro9敲除载体，分别将其用限制性BamH1酶酶切获得Aro9敲除重组盒；
(4)获得重组菌株：将Aro9敲除重组盒通过醋酸锂转化法转入酵母中，得到带有KanMX筛选基因Aro9敲除菌株；
(5)Cre/loxP系统消除筛选基因，得到无抗的敲除菌株。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，采用重组盒敲除目的基因的方法，较整合至基因组的方法更为简便快速，大大缩短构建周期。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，能针对性敲除基因组上特定位点的基因序列。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，采用固体培养基大量培养菌体，用十二烷基磺酸钠处理酵母细胞，方法简单，并且试剂单一易配制，能快速简便的提取酵母组。
一种啤酒酵母中敲除芳香氨基酸转氨酶II Aro9基因的构建
方法
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具体实施方式
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