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一种‘紫叶’狼尾草多倍体的培育方法

阅读：456发布：2020-05-13

专利汇可以提供一种‘紫叶’狼尾草多倍体的培育方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明提供一种‘紫叶’狼尾草多倍体的培育方法，其为：采用人工染色体加倍的方法将三倍体‘紫叶’狼尾草加倍为六倍体，其育性得到恢复，种植所得六倍体，选择植株表型优良的六倍体单株作为母本，与我国北方能安全越冬的乡土二倍体狼尾草品种进行有性杂交，从杂交F1中选择在自然条件下能安全越冬且具有紫叶性状的单株以培育四倍体‘紫叶’狼尾草。本发明的方法利用我国北方乡土狼尾草改良了‘紫叶’狼尾草的越冬性，为选育更多优良的耐寒‘紫叶’狼尾草新品种奠定基础。，下面是一种‘紫叶’狼尾草多倍体的培育方法专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种‘紫叶’狼尾草多倍体的培育方法，其特征在于，其为：采用人工染色体加倍的方法将三倍体‘紫叶’狼尾草加倍为六倍体，种植所得六倍体，选择优良单株为母本与我国北方能安全越冬的乡土二倍体狼尾草品种进行有性杂交，从杂交F1中选择在自然条件下能安全越冬且具有紫叶性状的单株培育四倍体‘紫叶’狼尾草。
2.如权利要求1所述的一种‘紫叶’狼尾草多倍体的培育方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)以‘紫叶’狼尾草具有腋芽的节间为外植体，消毒冲洗后接种至含有1.0mg/L 6-BA和
0.5mg/L IBA的MS培养基上诱导丛生芽，2-3周后，将所得丛生芽接种至含有1.5mg/L 6-BA、
0.1mg/L NAA和0.5mg/L IBA的MS培养基上进行丛生芽增殖；
2)将步骤1)所得的丛生芽转接到含有体积百分比2％DMSO和质量体积比0.08％-
0.16％秋水仙素的液体增殖培养基中，在25℃黑暗条件下，振荡诱导12h-24h小时；
3)将步骤2)诱导后的丛生芽接种至生根培养基诱导生成再生苗，取再生苗的嫩叶经流式细胞术初步鉴定，进一步取再生苗的根尖做染色体切片分析，获得六倍体‘紫叶’狼尾草，其育性得到恢复；
4)将六倍体‘紫叶’狼尾草移栽至大田，从中筛选出植株表型优良的六倍体单株作为母本，与我国北方能安全越冬的乡土二倍体狼尾草品种进行有性杂交，并获得杂交F1 种子；
5)露地种植杂交F1，于第二年筛选能安全越冬且具有紫叶性状的狼尾草植株，取其根尖做染色体切片分析，从而获得四倍体‘紫叶’狼尾草。
3.如权利要求1或2所述的一种‘紫叶’狼尾草多倍体的培育方法，其特征在于，所述诱导，为采用0.12％(m/v)秋水仙素溶液振荡处理丛生芽24h。
4.如权利要求1或2所述的一种‘紫叶’狼尾草多倍体的培育方法，其特征在于，所述振荡，摇床转速为120rmp/min。
5.如权利要求1或2所述的一种‘紫叶’狼尾草多倍体的培育方法，其特征在于，所述我国北方能安全越冬的乡土二倍体狼尾草品种为‘长穗’狼尾草、‘矮株’狼尾草中的一种。
6.权利要求1-5任一项所述一种‘紫叶’狼尾草多倍体的培育方法在狼尾草育种中的应用。

说明书全文

一种‘紫叶’狼尾草多倍体的培育方法

技术领域

[0001] 本发明涉及育种技术，具体是一种‘紫叶’狼尾草多倍体的培育方法。

背景技术

[0002] 狼尾草作为观赏植物在国内外应用很广，‘紫叶’狼尾草是狼尾草的一个三倍体(2n＝3x＝27)变种，具有高度不育的特性。此外，不仅具有很强的抗旱性、耐贫瘠，而且株型优美、叶色呈紫色，具有非常好的观赏性，在我国各大城市，尤其长江流域及以南地区作为观赏植物在公园和居民区中得到广泛应用；然而，我国具有紫叶性状的狼尾草品种短缺，不能满足市场需求，现有‘紫叶’狼尾草的耐寒性较差，在我国北方地区露天条件下不能安全越冬。

[0003] 另一发面，多倍体育种是植物种质创新和新品种培育的重要方法，在园林植物育种中应用广泛。我国狼尾草资源丰富，北方地区多年生的乡土狼尾草分布广泛。

发明内容

[0004] 本发明针对‘紫叶’狼尾草的耐寒性较差，在我国北方地区露天条件下不能安全越冬，提供一种‘紫叶’狼尾草多倍体的培育方法，其为：采用人工染色体加倍的方法将三倍体‘紫叶’狼尾草加倍为六倍体，种植所得六倍体，选择植株表型优良的六倍体单株作为母本，与我国北方能安全越冬的乡土二倍体狼尾草品种进行有性杂交，并从杂交F1中选择在自然条件下能安全越冬且具有紫叶性状的单株以培育四倍体‘紫叶’狼尾草。

[0005] 本发明所述‘紫叶’狼尾草多倍体的培育方法，具体包括如下步骤：

[0006] 1)以‘紫叶’狼尾草具有腋芽的节间为外植体，消毒冲洗后接种至含有1.0mg/L 6-BA和0.5mg/L IBA的MS培养基上诱导丛生芽，2-3周后，将所得丛生芽接种至含有1.5mg/L 6-BA、0.1mg/L NAA和0.5mg/L IBA的MS培养基上进行丛生芽增殖；

[0007] 2)将步骤1)所得的丛生芽转接到含有体积百分比2％(v/v)DMSO和质量体积比0.08％-0.16％(m/v)秋水仙素的液体增殖培养基中，在25℃黑暗条件下，振荡诱导12h-24h小时；

[0008] 3)将步骤2)诱导后的丛生芽接种至生根培养基诱导生成再生苗，取再生苗的嫩叶经流式细胞术初步鉴定，进一步取再生苗的根尖做染色体切片分析，获得六倍体‘紫叶’狼尾草，其育性得到恢复；

[0009] 4)将六倍体‘紫叶’狼尾草移栽至大田，从中筛选出植株表型优良的六倍体单株作为母本，与我国北方能安全越冬的乡土二倍体狼尾草品种进行有性杂交，并获得杂交F1 种子；

[0010] 5)露地种植杂交F1，于第二年筛选能安全越冬且具有紫叶性状的狼尾草植株，取其根尖做染色体切片分析，从而获得四倍体‘紫叶’狼尾草。

[0011] 其中，所述诱导优选为采用0.12％(m/v)秋水仙素溶液振荡处理丛生芽24h。

[0012] 其中，所述振荡，摇床转速为120rmp/min。

[0013] 其中，所述我国北方主要指华北地区，尤其是北京。

[0014] 其中，所述我国北方能安全越冬的乡土二倍体狼尾草品种有‘长穗’狼尾草、‘矮株’狼尾草等。

[0015] 本发明还提供所述一种‘紫叶’狼尾草多倍体的培育方法在狼尾草育种中的应用。

[0016] 本发明的具体有益效果是：利用我国北方乡土狼尾草品种改良了现有‘紫叶’狼尾草的越冬性，为选育更多优良的耐寒‘紫叶’狼尾草新品种奠定基础。附图说明

[0017] 图1为本发明实施例1中的选育过程图。

具体实施方式

[0018] 以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

[0019] 以下实施例涉及如下植物品种：‘紫叶’狼尾草，‘长穗’狼尾草。以上品种为公知品种，可市购，或者从育种单位或种质库引进。

[0020] 预实验1筛选秋水仙素浓度及诱导处理时间

[0021] 秋水仙素溶液由‘紫叶’狼尾草液体增殖培养基配制，含有2％DMSO(v/v)，具体设置的梯度(质量体积比)为：0、0.08％、0.12％、0.16％和0.2％，将丛生芽在黑暗条件下所述振荡，摇床转速为120rmp/min，分别诱导处理时间为12h和24h。然后，将诱导后的丛生芽接种至生根培养基诱导生成再生苗，分别采用流式细胞术和根尖做染色体切片鉴定再生植株的倍性，计算不同处理的加倍率。研究结果表明，‘紫叶’狼尾草丛生芽的成苗率随着秋水仙素溶液浓度的增加和处理时间的延长均呈低趋势，而其加倍率则呈先增加后降低趋势。其中采用0.12％秋水仙素溶液处理丛生芽24h时，其再生苗加倍率最高，为32％；而当采用0.2％秋水仙素溶液处理丛生芽24h时，其再生苗加倍率为0(表1)。因此，秋水仙素溶液适宜诱导浓度为0.08％-0.16％，处理12-24h均能有效诱导。其中，最佳诱导处理为采用0.12％秋水仙素溶液振荡处理丛生芽24h。

[0022] 表1不同浓度的秋水仙素和处理时间对诱导结果的影响

[0023]

[0024]

[0025] 实施例1选育四倍体‘紫叶’狼尾草新种质

[0026] 按照图1中的选育过程进行。具体如下：

[0027] 取三倍体‘紫叶’狼尾草具有腋芽的节间为外植体，在超净工作台上，用70％酒精浸泡消毒30s，再用20％次氯酸钠溶液消毒15min，无菌水冲洗3-5次；然后，将节间接种至含有1.0mg/L 6-BA和0.5mg/L IBA的MS培养基上进行诱导丛生芽，2周后，将上述丛生芽装接至含有1.5mg/L 6-BA、0.1mg/L NAA和0.5mg/L IBA的MS培养基上进行丛生芽增殖诱导；

[0028] 组培室条件：培养温度25±2℃，光照强度2500-3000Lux，光周期：14h光照，10h黑暗。

[0029] 将诱导的丛生芽转接到含有2％DMSO(v/v)和0.1％秋水仙素培养(m/v)的液体增殖培养基中，在黑暗条件下，于25℃振荡处理24h小时，摇床转速为120rmp/min；然后，将秋水仙素处理的丛生芽分别接种至生根培养基诱导生成再生苗。取再生苗的嫩叶，经流式细胞术进行初步鉴定；进一步取再生苗的根尖做染色体切片分析，从而获得六倍体‘紫叶’狼尾草。

[0030] 将得到的六倍体‘紫叶’狼尾草新种质移栽至大田，从中筛选出植株表型优良的六倍体‘紫叶’狼尾草植株；然后，利用该植株为母本与乡土的二倍体‘长穗’狼尾草进行有性杂交，收获杂交F1种子，露地种植，并于第二年在露天条件下从杂交F1中筛选能安全越冬且具有紫叶性状的狼尾草植株，取其根尖做染色体切片分析，从而获得耐寒的四倍体‘紫叶’狼尾草。

[0031] 虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

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