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一种一步式胚胎培养液

阅读：903发布：2023-12-31

专利汇可以提供一种一步式胚胎培养液专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明公开了一种一步式胚胎培养液，本发明中一步式胚胎培养液，包含对胚胎培养和发育起着重要作用的物质：(±)-α-硫辛酸、乙酰L-肉碱或乙酰L-肉碱盐酸盐以及胰岛素、转铁蛋白、硒、Fetuin-A、血小板源生长因子PDGF(Platelet derived growth factor，PDGF)。利用该组物质制备的一步式胚胎培养液既保留了胚胎培养发育过程中分泌入培养液中的有利成分，起到保护促进细胞生长发育并抑制细胞分解利用有害产物的作用，又避免了胚胎在移植过程中可能受到的机械损伤和培养环境变化造成的应激反应而导致的囊胚形成率不高的问题。，下面是一种一步式胚胎培养液专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种一步式胚胎培养液，其特征在于，包含：
a、对胚胎培养和发育起着重要作用的组合物
b、基本培养液
所述组合物，包括(±)-α-硫辛酸、乙酰L-肉碱或乙酰L-肉碱盐酸盐、胰岛素、转铁蛋白、硒、Fetuin-A、血小板源生长因子PDGF。
2.根据权利要求1所述的一步式胚胎培养液，其特征在于，所述组合物与基本培养液的体积比为0.1％-1％。
3.根据权利要求1所述的一步式胚胎培养液，其特征在于，所述组合物中(±)-α-硫辛酸、乙酰L-肉碱或乙酰L-肉碱盐酸盐、胰岛素、转铁蛋白、硒、Fetuin-A、血小板源生长因子PDGF的摩尔质量比为550.0-980.0：440.0-780.0：0.0138-0.0197：0.0006-0.0008：0.0003-
0.0005：0.0002-0.0004：0.0000002-0.0000005。
4.根据权利要求1所述的一步式胚胎培养液，其特征在于，所述基本培养液包括无机盐缓冲液、氨基酸、乙二胺四乙酸、丙酮酸钠、丙氨酰谷氨酰胺、牛磺酸、葡萄糖、D-山梨醇、N-乙酰-L-半胱氨酸、N-(2-羟乙基)哌嗪-N'-2-乙烷磺酸/4-羟乙基哌嗪乙磺酸、3-(N-吗啉基)丙磺酸钠盐、人血清白蛋白和杀菌剂。
5.根据权利要求4所述的一步式胚胎培养液，其特征在于，所述无机盐缓冲液、氨基酸、乙二胺四乙酸、丙酮酸钠、丙氨酰谷氨酰胺、牛磺酸、葡萄糖、D-山梨醇、N-乙酰-L-半胱氨酸、N-(2-羟乙基)哌嗪-N'-2-乙烷磺酸/4-羟乙基哌嗪乙磺酸、3-(N-吗啉基)丙磺酸钠盐的摩尔比为98.303-120.12：1.2-3.8：0.009-0.012：9.459-11.561：24.741-30.239：0.432-
0.528：0.9-1.1：0.207-0.254：0.702-0.858:8.125-10.239:8.125-10.239。
6.根据权利要求4所述的一步式胚胎培养液，其特征在于，所述人血清白蛋白的含量为
0.45-0.55g/L，杀菌剂的含量为5.0-20.0mg/L。
7.根据权利要求4所述的一步式胚胎培养液，其特征在于，所述杀菌剂为庆大霉素。
8.如权利要求1-7任一项权利所述的一步式胚胎培养液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)在百级条件下配制，按上述比例依次将氯化钠、氯化钾、硫酸镁、氯化钙、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、碳酸氢钠、N-(2-羟乙基)哌嗪-N'-2-乙烷磺酸/4-羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES、3-(N-吗啉基)丙磺酸钠盐MOPS-Na、乙二胺四乙酸、丙酮酸钠、丙氨酰谷氨酰胺、牛磺酸、葡萄糖、D-山梨醇、(±)-α-硫辛酸、乙酰L-肉碱或乙酰L-肉碱盐酸盐、氨基酸加到超纯水中，混合后得溶液I；
2)在溶液I中冲CO2保护气；
3)在冲CO2保护气后加入人血白蛋白、胰岛素、转铁蛋白、硒、Fetuin-A、血小板源生长因子PDGF，混合后得溶液Ⅱ；
4)将步骤3)配置好的溶液Ⅱ用0.22μm的滤膜过滤除菌后在CO2培养箱中平衡5-10小时；
5)将步骤4)平衡好的溶液Ⅱ在CO2保护气无菌分装，得一步式胚胎培养液。
9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中冲的为体积百分数为6-7％的CO2；步骤5)中CO2保护气为体积百分数为6-7％的CO2。
10.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，步骤4)中培养箱中平衡的条件为：37℃、6％的CO2培养箱中平衡5-10小时，调节PH在7.20-7.40。

说明书全文

一种一步式胚胎培养液

技术领域

[0001] 本发明属于胚胎细胞培养领域，具体涉及一种一步式胚胎培养液。

背景技术

[0002] IVF，in vitro fertilization(体外受精)：又称试管婴儿，是指分别将卵子与精子取出后，置于试管内使其受精，再将胚胎前体——受精卵移植回母体子宫内发育成胎儿。

[0003] IVF培养通常分为两种流程即两种培养液系列：全程(单/一步式培养液系列)和分程(双培养液系列)。利用双培养液系列流程对胚胎早期和后期阶段提供不同的培养液成份，但也丢失了由胚胎分泌入培养液中的重要的有效成份，如胚胎营养因子。全程培养液系列流程保留了这些重要的有效成份，但也保留了培养液中有害的分解产物。

发明内容

[0004] 针对上述问题，本发明的目的在于提供一种用于体外胚胎培养发育的一步式胚胎培养液制备所需的重要物质。本发明的一步式胚胎培养液保留了胚胎分泌入培养液中的有效成分，能起到保护细胞促进胚胎高效率生长发育并抑制细胞分解利用有害产物的作用。

[0005] 为实现上述目的，本发明的技术方案为：

[0006] 用于制备一步式胚胎培养液的重要组合物，所述组合物由(±)-α-硫辛酸、乙酰L-肉碱或乙酰L-肉碱盐酸盐以及胰岛素、转铁蛋白、硒、Fetuin-A、血小板源生长因子PDGF(Platelet derived growth factor，PDGF)组成。

[0007] 关键物料为血清替代物，由胰岛素、转铁蛋白、硒、Fetuin-A、人血小板源生长因子PDGF组成：

[0008] 胰岛素是由胰脏内的胰岛β细胞受内源性或外源性物质如葡萄糖、乳糖、核糖、精氨酸、胰高血糖素等的刺激而分泌的一种蛋白质激素，能够促进细胞对培养液中葡萄糖的代谢利用，促进细胞中的脂肪、蛋白质合成，促进外周培养液中 K+、Mg2+穿过细胞膜进入细胞内，促进脱氧核糖核酸(DNA)、核糖核酸(RNA)及三磷酸腺苷(ATP)的合成，对胚胎细胞体外发育具有重要的促进作用。

[0009] 转铁蛋白是血浆中主要的铁传递蛋白，负责运载由消化管吸收的铁和由红细胞降解释放的铁，为细胞内化和细胞代谢提供所需的铁。所有的细胞生长都离不开转铁蛋白。不但维持正常的细胞代谢依赖于以生物活性形态存在的铁，铁还是一些酶的辅助因子，比如RNA聚合酶，DNA合成酶，同时也是血红蛋白的重要组成部分。

[0010] 硒是动物和人体中一些抗氧化酶(谷胱甘肽过氧化物酶)和硒-P蛋白的重要组成部分，在体内起着平衡氧化还原氛围、提高人体免疫力的作用。硒在人体组织内含量为千万分之一，但它却决定了生命的存在，其对人类健康的巨大作用是其他物质无法替代的，缺硒会直接导致人体免疫能力下降，已被作为人体必需的微量元素。

[0011] Fetuin-A是一种由肝脏合成的59kD的糖蛋白，属于cystatin蛋白超家族 (半胱氨酸蛋白酶抑制剂家族)中的一员，也是血清中最主要的蛋白之一，具有多种生物学功能，包括骨骼形成、胎儿大脑及组织发育、体外促进细胞增殖等。

[0012] PDGF是一种重要的促有丝分裂因子，具有刺激特定细胞群分裂增殖的能力。

[0013] 所述(±)-α-硫辛酸、乙酰L-肉碱或乙酰L-肉碱盐酸盐、胰岛素、转铁蛋白、硒、Fetuin-A、血小板源生长因子PDGF的摩尔质量比为550.0-980.0： 440.0-780.0：0.0138-0.0197：0.0006-0.0008：0.0003-0.0005：0.0002-0.0004： 0.0000002-0.0000005。

[0014] 本发明的目的之二在于提供一种一步式胚胎培养液，由对胚胎培养和发育起着重要作用的组合物和基本培养液组成，组合物与基本培养液的重量比为 0.1％-1％。

[0015] 优选的，所述基本培养液包括无机盐缓冲液、氨基酸、乙二胺四乙酸、丙酮酸钠、丙氨酰谷氨酰胺、牛磺酸、葡萄糖、D-山梨醇、人血清白蛋白和杀菌剂。

[0016] 优选的，所述无机盐缓冲液、氨基酸、乙二胺四乙酸、丙酮酸钠、丙氨酰谷氨酰胺、牛磺酸、葡萄糖、D-山梨醇、N-乙酰-L-半胱氨酸、N-(2-羟乙基)哌嗪-N'-2-乙烷磺酸/4-羟乙基哌嗪乙磺酸、3-(N-吗啉基)丙磺酸钠盐的摩尔比为 98.303-120.12：1.2-3.8：0.009-0.012：9.459-11.561：24.741-30.239： 0.432-0.528：0.9-1.1：0.207-0.254：0.702-
0.858:8.125-10.239: 8.125-10.239。。

[0017] 所述无机盐缓冲液包括氯化钠、氯化钾、硫酸镁、氯化钙、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾和碳酸氢钠组成的溶液；氯化钠、氯化钾、硫酸镁、氯化钙、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾和碳酸氢钠的摩尔比为89.937-109.923:5-6.083: 0.9-1.1:1.62-1.98:0.135-0.165:0.135-0.165:0.576-0.704。

[0018] 优选的，所述人血清白蛋白的含量为0.45-0.55g/L，杀菌剂的含量为 5.0-20.0mg/L。

[0019] 优选的，所述杀菌剂为庆大霉素。

[0020] 本发明的目的之三在于提供一种一步式胚胎培养液的制备方法，包括以下步骤：

[0021] 1)在百级条件下配制，按上述比例依次将氯化钠、氯化钾、硫酸镁、氯化钙、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、碳酸氢钠、N-(2-羟乙基)哌嗪-N'-2-乙烷磺酸/4-羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES、3-(N-吗啉基)丙磺酸钠盐MOPS-Na、乙二胺四乙酸、丙酮酸钠、丙氨酰谷氨酰胺、牛磺酸、葡萄糖、D-山梨醇、(±)-α-硫辛酸、乙酰 L-肉碱或乙酰L-肉碱盐酸盐、氨基酸加到超纯水中，混合后得溶液I；所述氨基酸包括a.必需氨基酸:L-缬氨酸、L-亮氨酸、L-异亮氨酸、L-苯丙氨酸、L-色氨酸、L-蛋氨酸、L-赖氨酸、L-苏氨酸中的一种或者几种或者其盐的形式；b.非必需氨基酸包含:甘氨酸、L-丙氨酸、L-脯氨酸、L-丝氨酸、L-酪氨酸、L-半胱氨酸、L-天冬酰胺、L-谷氨酰胺、L-天冬氨酸、L-谷氨酸、L-精氨酸、L-组氨酸中的一种或者几种或者其盐的形式。

[0022] 2)在溶液I中冲CO2保护气；

[0023] 3)在冲CO2保护气后加入人血白蛋白、胰岛素、转铁蛋白、硒、Fetuin-A、血小板源生长因子PDGF，混合后得溶液Ⅱ；

[0024] 4)将步骤3)配置好的溶液Ⅱ用0.2um的滤膜过滤除菌后在CO2培养箱中平衡5-10小时；

[0025] 5)将步骤4)平衡好的溶液Ⅱ在CO2保护气无菌分装，得一步式胚胎培养液。

[0026] 优选的，步骤2)中冲的为体积百分数为6-7％的CO2；步骤5)中CO2保护气为体积百分数为6-7％的CO2。

[0027] 优选的，步骤4)中培养箱中平衡的条件为：37℃、6％的CO2培养箱中平衡5-10小时，调节PH在7.20-7.40。

[0028] 本发明的有益效果：

[0029] 1)本发明提供的一步式胚胎培养液保留了胚胎分泌入培养液中的有效成分，能起到保护细胞并抑制分解利用有害产物的作用，避免胚胎移植过程中可能受到的机械损伤和培养环境不同造成的应激反应而导致的囊胚形成率不高的问题。本发明的一步式胚胎培养液培养的胚胎囊胚形成率可以高达95％；

[0030] 2)本发明提供的一步式胚胎培养液添加了血清替代物：胰岛素、转铁蛋白、硒、Fetuin-A、人血小板源生长因子PDGF，模拟人体血清成分和体内妊娠环境，采用重组物质，最大程度保护并促进体外胚胎的安全、正常、快速生长发育。

具体实施方式

[0031] 为了进一步说明本发明的技术效果，下面通过实施例对本发明进行具体描述。

[0032] 实施例1

[0033] 一步式胚胎培养液

[0034]物料名称配方含量
氯化钠 99.937mmol/L
氯化钾 5.531mmol/L
硫酸镁 1.0mmol/L
葡萄糖 1.0mmol/L
庆大霉素 9.5mg/L
乙二胺四乙酸 0.01mmol/L
丙酮酸钠 10.51mmol/L
丙氨酰谷氨酰胺 27.49mmol/L
牛磺酸 0.48mmol/L
D-山梨醇 0.23mmol/L
氯化钙 1.8mmol/L
磷酸二氢钠 0.15mmol/L
磷酸二氢钾 0.15mmol/L
碳酸氢钠 0.64mmol/L
(±)-α-硫辛酸 0.078mmol/L
乙酰L-肉碱盐酸盐或乙酰L-肉碱 0.078mmol/L
N-乙酰-L-半胱氨酸 0.785mmol/L
4-羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES 9.225mmol/L
3-(N-吗啉基)丙磺酸钠盐MOPS-Na 9.165mmol/L
必需氨基酸 1.6mmol/L
非必需氨基酸 0.9mmol/L
血清白蛋白 0.5g/L
血清替代物溶液 0.95％，v/v

[0035] 实施例2

[0036] 一步式胚胎培养液

[0037]物料名称配方含量
氯化钠 89.937mmol/L
氯化钾 5.013mmol/L
硫酸镁 0.898mmol/L
葡萄糖 0.899mmol/L
庆大霉素 5.0mg/L
乙二胺四乙酸 0.009mmol/L
丙酮酸钠 9.459mmol/L
丙氨酰谷氨酰胺 24.741mmol/L
牛磺酸 0.432mmol/L
D-山梨醇 0.207mmol/L
氯化钙 1.621mmol/L
磷酸二氢钠 0.135mmol/L
磷酸二氢钾 0.135mmol/L
碳酸氢钠 0.576mmol/L
(±)-α-硫辛酸 0.055mmol/L
乙酰L-肉碱盐酸盐或乙酰L-肉碱 0.044mmol/L
N-乙酰-L-半胱氨酸 0.702mmol/L
4-羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES 8.125mmol/L
3-(N-吗啉基)丙磺酸钠盐MOPS-Na 8.125mmol/L
必需氨基酸 0.7mmol/L
非必需氨基酸 0.5mmol/L
血清白蛋白 0.45g/L
血清替代物溶液 0.85％，v/v

[0038] 实施例3

[0039] 一步式胚胎培养液

[0040]

[0041]

[0042] 对比例1

[0043]物料名称配方含量
氯化钠 99.937mmol/L
氯化钾 5.531mmol/L
硫酸镁 1.0mmol/L
葡萄糖 1.0mmol/L
庆大霉素 9.5mg/L
乙二胺四乙酸 0.01mmol/L
丙酮酸钠 10.51mmol/L
丙氨酰谷氨酰胺 27.49mmol/L
牛磺酸 0.48mmol/L
D-山梨醇 0.23mmol/L
氯化钙 1.8mmol/L
磷酸二氢钠 0.15mmol/L
磷酸二氢钾 0.15mmol/L
碳酸氢钠 0.64mmol/L
(±)-α-硫辛酸 0.048mmol/L
乙酰L-肉碱盐酸盐或乙酰L-肉碱 0.081mmol/L
N-乙酰-L-半胱氨酸 0.785mmol/L
4-羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES 9.225mmol/L
3-(N-吗啉基)丙磺酸钠盐MOPS-Na 9.165mmol/L
必需氨基酸 1.6mmol/L
非必需氨基酸 0.9mmol/L
血清白蛋白 0.5g/L
血清替代物溶液 0.95％，v/v

[0044] 对比例2

[0045]

[0046]

[0047] 对比例3

[0048]

[0049]

[0050] 对比例4

[0051]物料名称配方含量
氯化钠 99.937mmol/L
氯化钾 5.531mmol/L
硫酸镁 1.0mmol/L
葡萄糖 1.0mmol/L
庆大霉素 9.5mg/L
乙二胺四乙酸 0.01mmol/L
丙酮酸钠 10.51mmol/L
丙氨酰谷氨酰胺 27.49mmol/L
牛磺酸 0.48mmol/L
D-山梨醇 0.23mmol/L
氯化钙 1.8mmol/L
磷酸二氢钠 0.15mmol/L
磷酸二氢钾 0.15mmol/L
碳酸氢钠 0.64mmol/L
(±)-α-硫辛酸 0
乙酰L-肉碱盐酸盐或乙酰L-肉碱 0.078mmol/L
N-乙酰-L-半胱氨酸 0.785mmol/L
4-羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES 9.225mmol/L
3-(N-吗啉基)丙磺酸钠盐MOPS-Na 9.165mmol/L
必需氨基酸 1.6mmol/L
非必需氨基酸 0.9mmol/L
血清白蛋白 0.5g/L
血清替代物溶液 0.95％，v/v

[0052] 一、一步式胚胎培养液的制备方法实施例1-3和对比例1-4的一步式胚胎培养液制备方法，包括以下步骤：

[0053] 1)将配置器皿经过250℃，30min干热除热源。

[0054] 2)在百级条件下配制，按上述各自比例依次物料准确称量添加到超纯水中，混合后得溶液I；

[0055] 3)在溶液I中冲6-7％CO2保护气；

[0056] 4)在冲6-7％CO2保护气后加入各自分量的人血白蛋白和血清替代物，混合后得溶液II；

[0057] 5)将步骤3)配置好的溶液II用0.2μm的滤膜过滤除菌后在放置37℃、6％的CO2培养箱中平衡5-10小时，此步骤用来调节PH在7.20-7.40范围内；

[0058] 6)将步骤4)平衡好的溶液II在6-7％CO2保护气无菌分装，得一步式胚胎培养液。

[0059] 二、一步式胚胎培养液指标检测

[0060] 1、对本发明的一步式胚胎培养液进行检测取分装好的一步式培养液进行检测，检测项目是pH值、渗透压、细胞毒性、皮内刺激、致敏、无菌、热原、细菌内毒素、体外鼠胚试验来判断卵裂培养液是否合格。

[0061] 2、一步式培养液检测方法及结果

[0062] (一)pH值检测取一定量成品用血气分析仪进行检测，记录三次的检测值并取平均值作为一步式胚胎培养液的最终pH值，在7.20-7.40范围内为合格。

[0063] (二)渗透压

[0064] 取25μL液体滴入0.5mlEP管放入渗透压仪(冰点渗透压仪)探头等待检测值稳定，读出数值，同样方法检测三遍取平均值即为该一步式胚胎培养液的渗透压，在范围内为合格。

[0065] (三)细胞毒性按GB/T 16886.5的规定进行，细胞毒性计分应不超过1分。

[0066] (四)皮内刺激按GB/T 16886.10的规定进行，无皮内刺激反应。

[0067] (五)致敏

[0068] 按GB/T 16886.10的规定进行，应无致敏反应。

[0069] (六)无菌检测采用中国药典的无菌检测的薄膜过滤法进行，过滤后的滤膜在细菌和真菌的培养基内培养应无菌生长为无菌合格。

[0070] (七)热原

[0071] 按照中华人民共和国药典2010年版二部附录ⅪD规定方法，体外受精液应无热原。

[0072] (八)细菌内毒素检测采用中国药典内毒素的检测方法中的鲎试剂凝胶法进行，判定为小于1EU/mL合格；

[0073] (九)体外鼠胚试验

[0074] 1)超数排卵

[0075] 选择6～8周龄雌鼠，经腹腔注射PMSG 10IU/只；48h后经腹腔注射hCG 10IU/ 只，注射hCG当日雌鼠与同品系雄鼠合笼过夜。

[0076] 2)准备培养皿培养胚胎前在细胞培养皿中制备一定数量30～50μL大小的液体微滴，表面覆盖培养用油，在CO2培养箱内预平衡4～18小时。

[0077] 3)鼠胚采集

[0078] 合笼第二天早上检查交配情况，选择见栓小鼠备用。

[0079] 1-细胞胚胎收集：注射hCG后18至22小时后处死见栓雌鼠，在输卵管壶腹部收集 1-细胞胚胎。将收集到的絮状受精卵团放置到37℃提前预热好的透明质酸酶中，当胚胎周围的卵丘和颗粒细胞被消化分离后立即转移、清洗后，挑选出正常形态的受精胚胎，转移到供试品卵裂培养液微滴中，用于1-细胞鼠胚检测试验。

[0080] 4)体外培养

[0081] 采用微滴法培养，将收集到的鼠胚随机分成一个阳性对照组、一个阴性对照组和一个供试品组，置于已平衡的培养液中，于37℃，6％CO2，5％O2，饱和湿度的培养箱中培养；每组鼠胚数不少于50个。

[0082] 5)试验结果

[0083] 1-细胞胚胎体外分别培养96小时后记录囊胚数量。

[0084] 观察指标：囊胚形态观察。

[0085] 可接受准则：阳性对照组的囊胚形成率经统计学分析显著低于阴性对照组；阴性对照组的囊胚形成率≥80％。

[0086]

[0087]

[0088] 三、培养液培养受精卵囊胚形成实验利用实施例1-3和对比例1-4的培养液培养100个受精卵记录囊胚形成结果：

[0089] 1.实施例1配制的培养液培养受精卵，观察结果，以下为三组重复实验数据：

[0090]受精卵数囊胚形成数
100 93
100 95
100 91

[0091] 2.实施例2配制的培养液培养受精卵，观察结果，以下为三组重复实验数据：

[0092]受精卵数囊胚形成数
100 90
100 89
100 89

[0093] 3.实施例3配制的培养液培养受精卵，观察结果，以下为三组重复实验数据：

[0094]受精卵数囊胚形成数
100 88
100 89
100 89

[0095] 4.对比例1配制的培养液培养受精卵，观察结果，以下为三组重复实验数据：

[0096]受精卵数囊胚形成数
100 75
100 72
100 73

[0097] 5.对比例2配制的培养液培养受精卵，观察结果，以下为三组重复实验数据：

[0098]受精卵数囊胚形成数
100 60
100 63
100 61

[0099] 6.对比例3只添加(±)-α-硫辛酸，且添加量依次递增，见下表数据及结果：

[0100]

[0101] 7.对比例4只添加乙酰L-肉碱或乙酰L-肉碱盐酸盐，且添加量依次递增，见下表数据及结果：

[0102]

[0103] 根据以上实验结果可见，本发明的培养液在培养过程中物料(±)-α-硫辛酸、乙酰L-肉碱或乙酰L-肉碱盐酸盐与血清替代物：胰岛素、转铁蛋白、硒、 Fetuin-A、人血小板源生长因子PDGF之间是相辅相成的，尤其是物料(±)-α- 硫辛酸的含量直接关系囊胚形成率，且每个物料在一定范围内呈线性相关；不含物料(±)-α-硫辛酸、乙酰L-肉碱或乙酰L-肉碱盐酸盐的培养液囊胚形成率低， <63％，可见物料(±)-α-硫辛酸、乙酰L-肉碱或乙酰L-肉碱盐酸盐对囊胚形成都有明显的生理作用。本发明的一步式胚胎培养液培养的囊胚形成率高，囊胚形成率可达95％。

[0104] 最后需要说明的是，以上实施例仅用于说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明的技术方案进行了详细说明，本领域技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的保护范围当中。

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一种一步式胚胎培养液

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