技术领域
[0001] 本
发明涉及蒙药提取物制备领域，具体涉及一种低温提取蒙药森登-4有效活性成分的方法。
背景技术
[0002] 蒙药森登-4汤为传统蒙医药方剂，被收载于中华人民共和国卫生部药品标准(1998版，蒙药分册)。目前蒙医药制剂的提取方法存在以下不足：
[0003] (1)加热会破坏有些物质，出现不可逆的反应，成为胶体物，很难溶解，用有机物才能溶解；
[0004] (2)现有工艺提取出的药材，
水解度低，活性低，用药量大，效果不明显，产量低，比如封闭式罐加热水煎法(
温度100～105度左右)，药材中的蛋白、多糖、多肽、维生素等物质都发生变化，失去活性，尤其是蛋白被
凝固，成为一个集团物等。
[0005] (3)蒙医药还有一种工艺就是用生药按照方剂比例配比好直接
粉碎制备成水丸或散剂，这种方法药效比加热药效强，用量也较大，大约每次服用10克左右；但存在着大量草本
纤维进入到体内难以吸收消化，一些污染物不宜去掉，直接进入体内，对身体有害。
发明内容
[0006] 为解决上述问题，本发明提供了一种低温提取蒙药森登-4有效活性成分的方法。
[0007] 为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：
[0008] 一种低温提取蒙药森登-4有效活性成分的方法，包括如下步骤：
[0009] S1、按照蒙医药材国家标准将文冠木、川楝子、诃子、栀子
质量比为5：3：1：1的比例混匀配制复方蒙药森登-4，粉碎，得粉末状的复方蒙药森登-4；
[0010] S2、一次低温水提：
[0011] 将粉末状的复方蒙药森登-4在4℃～20℃的温度条件下用纯水浸泡2～4小时后，在-30℃～-25℃下冷冻至冻实(冻成
冰块)，然后自然解冻，倒出浸液，过滤，得一次低温水提液；
[0012] S3、将一次低温水提液
冷冻干燥，即制得水提干粉。
[0013] 进一步地，还包括有如下步骤：二次低温水提：将经一次低温水提后所得药渣进行二次低温水提，即将步骤S2所得的药渣加纯水浸泡，使得药渣充分被纯水溶解后，在-30℃～-25℃冷冻至冻实，然后自然解冻，倒出浸液，过滤，得二次低温水提液，将二次低温水提液与一次低温水提液混和，得到低温水提混和液，冷冻干燥，制得水提干粉，即制得成品。
[0014] 进一步地，在二次低温水提中，药渣加纯水浸泡时间至少为2小时，温度4～16℃。
[0015] 进一步地，还包括有如下步骤：将二次低温水提液与一次低温水提液混和，得到低温水提混和液，经
超滤得滤清液和浓缩液，分别进行冷冻干燥制得两种水提干粉，即制得两种成品。
[0016] 进一步地，还包括有如下步骤：将经二次低温水提后所得药渣在60％(w/w)～70％(w/w)的
乙醇中醇提至少2小时，过滤，得一次醇提液；
[0017] 将一次醇提后所得药渣在60％(w/w)～70％(w/w)的乙醇中二次醇提至少2小时，过滤，得二次醇提液；
[0018] 将所得的一次醇提液和二次醇提液混和，脱醇，得一次醇提水解物；
[0019] 将所得一次醇提水解物至少加入一次醇提水解物重量的2倍的纯水继续脱醇，得二次醇提水解物，在0℃～6℃静置至少12小时，取静置上清液，与一次低温水提液、二次低温水提液混和，并冷冻干燥制得水提干粉，即制得成品。
[0020] 本发明具有以下有益效果：
[0021] (1)本发明的方法简便，成本低廉，环保，无毒，可有效的将复方蒙药森登4中溶于水的物质(大分子的水解蛋白、
植物多肽、植物
氨基酸、多糖及一些微量元素等)全部浸提出来，且不会破坏复方蒙药森登4中的
蛋白质、多糖等，该提取物的有效成份极易吸收，
稳定性好，
水溶性好，活性强，用药量少，效果好，产量大；
[0022] (2)工业生产易行，对原材料不造成浪费，一药可多用；
[0023] (3)单独存放稳定性也好，易贮藏，使用方便。
具体实施方式
[0024] 下面结合具体
实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干
变形和改进。这些都属于本发明的保护范围。
[0025] 实施例1
[0026] 一种低温提取蒙药森登-4有效活性成分的方法，包括如下步骤：
[0027] S1、按照蒙医药材国家标准将文冠木、川楝子、诃子、栀子质量比为5：3：1：1的比例混匀配制复方蒙药森登-4，粉碎，得粉末状的复方蒙药森登-4；
[0028] S2、一次低温水提：将粉碎后的复方蒙药森登-4进行一次低温水提，即将粉末状的复方蒙药森登-4在4℃～20℃温度下用纯水浸泡2～4小时后，在-30℃～-25℃下冷冻至冻实(冻成冰块)，然后在14～16℃条件解冻，倒出浸液，过滤，得一次低温水提液；
[0029] S3、将一次低温水提液冷冻干燥制得水提干粉，即制得成品。
[0030] 实施例2
[0031] 一种低温提取蒙药森登-4有效活性成分的方法，包括如下步骤：
[0032] S1、按照蒙医药材国家标准将文冠木、川楝子、诃子、栀子质量比为5：3：1：1的比例混匀配制复方蒙药森登-4，粉碎，得粉末状的复方蒙药森登-4；
[0033] S2、一次低温水提：将粉碎后的复方蒙药森登-4进行一次低温水提，即将粉末状的复方蒙药森登-4在4℃～20℃温度下用纯水浸泡2～4小时后，在-30℃～-25℃下冷冻至冻实(冻成冰块)，然后在18～20℃条件解冻，倒出浸液，过滤，得一次低温水提液；
[0034] S3、二次低温水提：
[0035] 将一次低温水提后所得药渣加纯水浸泡至少2小时，温度4～16℃，使得药渣充分被纯水溶解后，在-30℃～-25℃冷冻至冻实，然后自然解冻，倒出浸液，过滤，得二次低温水提液；
[0036] S4、将二次低温水提液与一次低温水提液混和，得到低温水提混和液，冷冻干燥，制得水提干粉，即制得成品。
[0037] 实施例3
[0038] 一种低温提取蒙药森登-4有效活性成分的方法，包括如下步骤：
[0039] S1、按照蒙医药材国家标准将文冠木、川楝子、诃子、栀子质量比为5：3：1：1的比例混匀配制复方蒙药森登-4，粉碎，得粉末状的复方蒙药森登-4；
[0040] S2、一次低温水提：将粉碎后的复方蒙药森登-4进行一次低温水提，即将粉末状的复方蒙药森登-4在4℃～20℃温度下用纯水浸泡2～4小时后，在-30℃～-25℃下冷冻至冻实(冻成冰块)，然后自然解冻，倒出浸液，过滤，得一次低温水提液；
[0041] S3、二次低温水提：
[0042] 将一次低温水提后所得药渣加纯水浸泡至少2小时，温度4～16℃，使得药渣充分被纯水溶解后，在-30℃～-25℃冷冻至冻实，然后在20～22℃条件下解冻，倒出浸液，过滤，得二次低温水提液；
[0043] S4、三次药渣一次醇提
[0044] 将经二次低温水提后所得药渣在60％(w/w)～70％(w/w)的乙醇中醇提至少2小时，过滤，得一次醇提液；
[0045] S5、四次药渣二次醇提
[0046] 将一次醇提后所得药渣在60％(w/w)～70％(w/w)的乙醇中二次醇提至少2小时，过滤，得二次醇提液；
[0047] S6、一次醇提水解物：
[0048] 将所得的一次醇提液和二次醇提液混和，脱醇，得一次醇提水解物；
[0049] S7、将所得一次醇提水解物至少加入一次醇提水解物重量的2倍的纯水继续脱醇，得二次醇提水解物，在0℃～6℃静置至少12小时，取静置上清液，与一次低温水提液、二次低温水提液混和，并冷冻干燥制得水提干粉，即制得成品。
[0050] 实施例4
[0051] 一种从复方蒙药森登4中提取有效成份的方法，将实施例2所得二次低温水提液与实施例1所得一次低温水提液混和，得到低温水提混和液，经超滤得滤清液和浓缩液，将所得滤清液和浓缩液进行冷冻干燥制得两种水提干粉，即制得两种成品。
[0052] 二、提取物的成分及其作用：
[0053] (1)有效成分：见表1
[0054] 表1高效液相检测结果
[0055]
[0056] (2)药物体外抗菌活性：
[0058] 将提取出来的森登4药物，用无菌的纯净水稀释在沙氏培养基中，实验设4个剂量组350mg/ml，175mg/ml、87.5mg/ml、43.85mg/ml分别制备成沙氏斜面培养基，将培养好的真菌白色念珠菌、糠皮孢子菌、犬小孢子菌、须癣孢子菌、红毛孢子菌分别接种到不同浓度的含药培养基上，根据不同真菌的生长特性，观察体外抑真菌的实验效果。实验设4个剂量组，实验结果见表2。
[0059] 表2真菌抑菌实验结果
[0060]
[0061] 注：—无细菌生长、+25％的细菌生长、++50％的细菌生长、+++75％的细菌生长、++++100％的细菌生长
[0062] 2、抗菌实验：
[0063] 体外普通细菌的抑菌实验
钢杯法：首先将大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、假单胞绿脓菌、沙
门氏菌、变形杆菌分别复苏，传代两次，取新鲜的细菌菌台，采用密集划线法接种到营养琼脂培养皿中，放入无菌小钢杯；将提取出来的森登4药物，实验设4个剂量组，用无菌的纯净水稀释为330mg/ml、165mg/ml、82.5mg/ml、41.25mg/ml、分别在每个钢杯中加入300ul的药液，培养24h，观察抑菌圈直径，用游标卡尺测量抑菌圈的直径。实验结果见表3。
[0064] 表3普通细菌的抑菌实验结果
[0065]
[0066] 注：300ul---99mg、300ul---49.5mg、300ul---24.75mg、300ul---12.375mg这是不同的含药量。
[0067] (3)体内急毒实验：
[0068] 小鼠体内急毒实验
[0069] 从北京动物中心购买实验动物昆明鼠60只体重18-20g雌雄各半，购回后，将动物适应环境养育3天，将动物分为3组，每组20只，雌雄各10只，药物分三个剂量组，360mg/ml、180mg/ml、90mg/ml，每只鼠
给药1ml，给药一次，观察72小时的变化，是否有死亡。
[0070] 表4森登4小鼠体内急毒实验结果
[0071]
[0072] 注：三个剂量组的小鼠全部存活，证明该药物未发现有毒性。
[0073] 以上对本发明的具体实施例进行了描述。需要理解的是，本发明并不局限于上述特定实施方式，本领域技术人员可以在
权利要求的范围内做出各种变化或
修改，这并不影响本发明的实质内容。在不冲突的情况下，本
申请的实施例和实施例中的特征可以任意相互组合。
