一种可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球及其制备方法和应用
阅读：1030发布：2020-08-11
专利汇可以提供一种可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球及其制备方法和应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开的一种可排阻 蛋白质 磁性 分子印迹纳米球及其制备方法和应用，属于 纳米材料 制备及食品分析应用技术领域。技术方案：首先，采用 水 热法一步合成了 氨 基磁性纳米球；然后，将氨基磁性纳米球与 四环素 加入到Tris-HCl缓冲溶液中，在室温下充分搅拌后，再加入 牛 血清蛋白和多巴胺进行聚合反应；最后，通过外加磁 铁 将生成的 聚合物 分离出来，洗脱、干燥后，即得到目标产物。本发明制备出的磁性分子印迹纳米球粒径均一、 稳定性 好、可重复利用性强、亲水性好，且对四环素类药物的选择性 吸附 能 力 强、吸附量大、回收率高，是一种简便、高效、快速地从牛奶中直接选择性分离和检测四环素类药物的方法。，下面是一种可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球及其制备方法和应用专利的具体信息内容。
1.一种可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球的制备方法，其特征在于，包括：首先，采用水热法合成氨基磁性纳米球；然后，将氨基磁性纳米球、四环素加入到Tris-HCl缓冲液中，得到模板-载体的复合物；再加入牛血清蛋白、多巴胺进行聚合，得到固态聚合物；最后，通过外加磁场将固态聚合物分离出来，将该聚合物洗脱、干燥后，制得可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球。
2.根据权利要求1所述的可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一、将Ag氯化铁、B g乙酸钠、C g己二胺和D mL乙二醇置于反应釜中，在180～210℃下反应7～9h，反应结束后，将反应产物洗涤、真空干燥，制得氨基磁性纳米球；
其中，A:B:C:D＝(0.7～1.2):(3.0～4.1):(5.0～7.5):(25～35)；
步骤二、将E mg氨基磁性纳米球、F mg四环素、G mL Tris-HCl缓冲液置于反应容器中，室温下搅拌反应0.5～1.5h，再加入H mg多巴胺、I mg牛血清蛋白，在室温下聚合反应6～
8h；
其中，E:F:G:H:I＝(100～500):(20～40):(20～40):(40～70):(40～70)；
步骤三、通过外加磁场将步骤二反应结束后反应液中生成的固态聚合物分离出来，再对分离出的固态聚合物进行洗脱、干燥，制得可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球。
3.根据权利要求2所述的可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球的制备方法，其特征在于，步骤一中，采用超纯水将反应产物洗涤至中性，然后在40～50℃、0.05～0.09MPa的条件下，真空干燥4～7h。
4.根据权利要求2所述的可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球的制备方法，其特征在于，步骤二中，所用Tris-HCl缓冲液的pH值为7～8.5。
5.根据权利要求2所述的可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球的制备方法，其特征在于，步骤三中，对分离出的固态聚合物进行洗脱的洗脱液是体积比为(92～99):(8～1)的无水乙醇与乙酸的混合溶液。
6.根据权利要求2所述的可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球的制备方法，其特征在于，步骤三中，干燥温度为40～50℃，干燥时间为4～7h。
7.采用权利要求1～6中任意一项所述的制备方法制得的可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球，其特征在于，该可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球的粒径为20～60nm。
8.根据权利要求7所述的可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球，其特征在于，该可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球为能够排阻四环素类药物的磁性分子印迹纳米球，其对四环素、金霉素、强力霉素和土霉素的吸附量分别为37.70～38.65mg/g、25.30～26.30mg/g、22.50～23.70mg/g和27.85～29.00mg/g。
9.权利要求7或8所述的可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球作为四环素类药物吸附剂的应用。
10.权利要求7或8所述的可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球在检测与分离牛奶中四环素类药物中的应用。
一种可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球及其制备方法和应用
技术领域
背景技术
[0002] 随着我国畜牧业和渔业的发展，四环素类药物(teytacyclines,TCs)作为一种革兰氏阴性和革兰氏阳性细菌都敏感的广谱抗生素，得到了越来越广泛的应用。四环素类药物包括金霉素(chlorotetracycline,CTC)、土霉素(oxytetracycline,OTC)、强力霉素(doxycycline,DC)和四环素(teytacyclines,TC)等，可作为预防和治疗畜禽疾病的药物，或作为促进畜禽生长的饲料添加剂而应用于可食性动物中，在水产养殖业中用于治疗多种鱼类疾病；在乳业中用于提高奶牛产奶量；在养蜂业中用于预防蜜蜂的感染性疾病。但是，由于滥用药、不遵守休药期和动物个体代谢差异等，导致了动物性食品中存在药物残留，进而危害人类健康。不仅可能会在某些过敏个体中引起过敏反应，更重要的是可能会导致人体产生耐药性，甚至产生多种急慢性中毒，导致人体多种器官的病变。为了控制四环素族抗生素在动物源性食品中的残留，美国食品和药物管理局、欧盟及中国农业部都已经确定了牛奶中四环素族抗生素的最大残留限量为0.1mg/kg；我国在无公害畜禽肉安全要求中也作了明确的规定，肉类食品中四环素族抗生素的最高限量也为0.1mg/kg。
[0003] 目前，我国对于出口食品中四环素和土霉素残留量检测的国家标准方法仍采用微生物法，其周期长、灵敏度低、缺乏专一性，在实际工作中较难推广。各种先进的检测四环素类药物的分析方法逐渐被开发出来，例如，高效液相色谱法(HPLC)，液相色谱-质谱连用法(LC-MS)，酶联适体测定法和比色分析法等。通常，HPLC/LC-MS技术对目标分析物具有高的灵敏度和良好的鉴定能力，但复杂的样品前处理步骤、熟练的操作技能、以及昂贵的仪器费用限制了其在常规分析中的应用。酶联适体测定法和比色分析法也由于其高成本和潜在的交叉反应性等缺点，应用受到限制。
[0004] 分子印迹技术是指为获得在空间结构和结合位点上与模板分子相匹配的聚合物制备技术。由于分子印迹聚合物(Molecularly Imprinted Polymers，MIPs)具有预定的分子识别性，独特的物理化学稳定性，制备简单和可重复使用等优点，使其在分离技术中展示了美好的应用前景。其中，MIPs作为固相萃取吸附剂，从各种复杂基质中对目标分析物选择性吸附，己经成为一个热门研究方向。已有报道将MIPs作为固相萃取吸附剂，与HPLC联用，选择性富集和检测牛奶中的四环素类药物。然而，由于牛奶样品富含蛋白质，复杂性高，在MIPs进行固相萃取前，要通过有机溶剂沉淀去除蛋白质，这会导致牛奶中的部分TCs与沉淀物一起去除，影响检测的准确度。且之前报道的MIPs大都是在有机介质中制备的，可能导致聚合物在水基质中识别能力差、非特异性吸附高。因此，发展简便和有效的制备亲水性TCs分子印迹聚合物的方法，对实现牛奶中四环素类药物的直接选择性吸附和富集具有重要的研究意义。
[0005] 磁性分离技术是依据物质的磁性差异，在磁场作用力的驱动下，把磁性组分从非磁性组分混合物中分离出来的一种分离技术。由于磁性分离的简单方便，将这一技术与分子印迹技术结合，用于固相萃取，不需要将材料装于柱子中，直接借助一个外加磁铁，几秒钟内就可以完成吸附材料与溶液的分离，克服了传统固相萃取过程复杂、费时，且通常提取效率较低的缺点。Fe3O4磁性纳米粒子具有生物相容性良好、磁化率高、毒性低等特点，通过接枝官能基团，可将其表面改性。以改性后的Fe3O4磁性纳米粒子作为“核”制备出的分子印迹聚合物，可直接在溶液中选择性富集目标物，利用磁场快速分离后即可完成萃取。
[0006] 目前，还没有关于可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球的制备及其在牛奶样品中四环素类药物的直接分离与检测中应用的相关报道。
发明内容
[0007] 本发明的目的在于提供一种可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球及其制备方法和应用，该方法制得的磁性分子印迹纳米球能直接、快速、高选择性地分离牛奶中的四环素类药物。
[0008] 本发明是通过以下技术方案来实现：
[0009] 本发明公开了一种可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球的制备方法，包括：首先，采用水热法合成氨基磁性纳米球；然后，将氨基磁性纳米球、四环素加入到Tris-HCl缓冲液中，得到模板-载体的复合物；再加入牛血清蛋白、多巴胺进行聚合，得到固态聚合物；最后，通过外加磁场将固态聚合物分离出来，将该聚合物洗脱、干燥后，制得可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球。
[0010] 优选地，所述的可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球的制备方法，包括以下步骤：
[0011] 步骤一、将A g氯化铁、B g乙酸钠、C g己二胺和D mL乙二醇置于反应釜中，在180～210℃下反应7～9h，反应结束后，将反应产物洗涤、真空干燥，制得氨基磁性纳米球；
[0012] 其中，A:B:C:D＝(0.7～1.2):(3.0～4.1):(5.0～7.5):(25～35)；
[0013] 步骤二、将E mg氨基磁性纳米球、F mg四环素、G mL Tris-HCl缓冲液置于反应容器中，室温下搅拌反应0.5～1.5h，再加入H mg多巴胺、I mg牛血清蛋白，在室温下聚合反应6～8h；
[0014] 其中，E:F:G:H:I＝(100～500):(20～40):(20～40):(40～70):(40～70)；
[0015] 步骤三、通过外加磁场将步骤二反应结束后反应液中生成的固态聚合物分离出来，再对分离出的固态聚合物进行洗脱、干燥，制得可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球。
[0016] 优选地，步骤一中，采用超纯水将反应产物洗涤至中性，然后在40～50℃、0.05～0.09MPa的条件下，真空干燥4～7h。
[0017] 优选地，步骤二中，所用Tris-HCl缓冲液的pH值为7～8.5。
[0018] 优选地，步骤三中，对分离出的固态聚合物进行洗脱的洗脱液是体积比为(92～99):(8～1)的无水乙醇与乙酸的混合溶液。
[0019] 优选地，步骤三中，干燥温度为40～50℃，干燥时间为4～7h。
[0020] 本发明还公开了采用上述的制备方法制得的可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球，该可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球的粒径为20～60nm。
[0021] 优选地，该可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球为能够排阻四环素类药物的磁性分子印迹纳米球，其对四环素、金霉素、强力霉素和土霉素的吸附量分别为37.70～38.65mg/g、25.30～26.30mg/g、22.50～23.70mg/g和27.85～29.00mg/g。
[0022] 本发明还公开了上述的可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球作为四环素类药物吸附剂的应用。
[0023] 本发明还公开了上述的可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球在检测与分离牛奶中四环素类药物中的应用。
[0024] 与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果：
[0025] 本发明公开的可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球的制备方法，首先，采用水热法一步合成了氨基磁性纳米球；然后，将氨基磁性纳米球与四环素加入到Tris-HCl缓冲溶液中，在室温下充分搅拌后，再加入牛血清蛋白和多巴胺进行聚合反应；最后，通过外加磁铁将生成的聚合物分离出来，洗脱、干燥后，即得到目标产物。本发明制备方法简单、条件温和，采用氨基磁性纳米球作为载体，以牛血清蛋白为辅助功能单体，所得磁性分子印迹纳米球与牛奶样品(主要成分为酪蛋白，与牛血清蛋白具有相同的等电点)之间存在静电相互排斥，使牛奶中的蛋白质远离印迹空穴从而避免被吸附。本发明中，首次使用牛血清蛋白和多巴胺作为共同单体制备新的磁性分子印迹纳米球。
[0026] 经本发明方法制得的可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球，其粒径均一、稳定性好、可重复利用性强、亲水性好，且对四环素类药物的选择性吸附能力强、吸附量大、回收率高，是一种简便、高效、快速地从牛奶中直接选择性分离和检测四环素类药物的方法，在对蛋白质含量较大的溶液中四环素类药物的选择性分离、富集、检测等方面显示出广阔的应用前景。
[0027] 经本发明方法制得的磁性分子印迹纳米球首次实现了可直接选择性吸附牛奶样品中的四环素类药物，样品无需任何预处理，可以避免蛋白质沉淀过程中四环素类药物的损失。且吸附溶液为牛奶样品，可降低有机溶剂消耗。获得的磁性分子印迹纳米球对四环素类药物显示出高的结合量，快的吸附速率，良好的再生能力和高的选择性。附图说明
[0028] 图1为本发明实施例1步骤一合成的氨基磁性纳米球的透射电镜图。
[0029] 图2为本发明实施例1制得的可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球的透射电镜图。
具体实施方式
[0030] 下面结合具体的实施例对本发明做进一步的详细说明，所述是对本发明的解释而不是限定。
[0031] 实施例1
[0032] 一种可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球的制备方法，包括以下步骤：
[0033] 步骤一、将0.95g氯化铁、3.40g乙酸钠、6.08g己二胺和30mL乙二醇置于反应釜中，200℃反应8.5h，反应结束后，将反应产物用超纯水洗至中性。然后，将所得产物在45℃、
0.06MPa下真空干燥4.5h，即得到氨基磁性纳米球。如图1所示，制得的氨基磁性纳米球的粒径约为25nm。
0.06MPa下真空干燥4.5h，即得到氨基磁性纳米球。如图1所示，制得的氨基磁性纳米球的粒径约为25nm。
[0034] 步骤二、取200mg步骤一制得的氨基磁性纳米球，再将25mg四环素、26mL pH值为8.0的Tris-HCl缓冲液置于三口瓶中，室温下搅拌反应0.7h，再加入50mg多巴胺、50mg牛血清蛋白，室温下聚合反应6.5h，生成固态聚合物；
[0035] 步骤三、聚合反应结束后，通过外加磁场将步骤二反应液中生成的固态聚合物分离出来；
[0036] 步骤四、用体积比为95:5的无水乙醇与乙酸的混合液洗脱步骤三中分离出的固态聚合物。洗脱后的固态聚合物再在45℃下干燥5h，即得可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球。如图2所示，制得的可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球的粒径约为35nm。
[0037] 将实施例1制得的可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球进行吸附性能检测，具体如下：
[0038] (1)将可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球10mg加入到5mL浓度为0.5mg/mL的TCs的水溶液中，室温下振荡30min后，通过外加磁场将上清液分离出来；
[0039] (2)用HPLC测定(1)中所得上清液中TCs的浓度，再计算出可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球对TCs的吸附量；
[0040] 所测得的上清液中TC、CTC、DC、OTC的浓度分别为0.4231mg/mL、0.4482mg/mL、0.4543mg/mL、0.4426mg/mL。
[0041] 所述的可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球对四环素类药物的吸附量的计算公式为：
[0042]
[0043] 式中Ce为上述上清液中TC、CTC、DC、OTC的浓度；
[0044] 通过计算，可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球对TC、CTC、DC、OTC的吸附量分别为：38.43mg/g、25.9mg/g、22.85mg/g、28.70mg/g。
[0045] 实施例2
[0046] 一种可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球的制备方法，包括以下步骤：
[0047] 步骤一、将0.7g氯化铁、3.0g乙酸钠、5.0g己二胺和25mL乙二醇置于反应釜中，180℃反应7h，反应结束后，将反应产物用超纯水洗至中性。然后，将所得产物在40℃、0.05MPa下真空干燥4h，即得氨基磁性纳米球。
[0048] 步骤二、取100mg步骤一制得的氨基磁性纳米球，将20mg四环素、20mL pH值为7的Tris-HCl缓冲液置于三口瓶中，室温下搅拌反应0.5h，再加入40mg多巴胺、40mg牛血清蛋白，室温下聚合反应6h，生成固态聚合物；
[0049] 步骤三、聚合反应结束后，通过外加磁场将步骤二反应液中生成的固态聚合物分离出来；
[0050] 步骤四、用体积比为92:8的无水乙醇与乙酸的混合液洗脱步骤三中分离出的固态聚合物。洗脱后的固态聚合物再在40℃下干燥4h，即得可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球。
[0051] 将实施例2制得的可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球进行吸附性能检测，具体如下：
[0052] (1)将可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球10mg加入到5mL浓度为0.5mg/mL的TCs的水溶液中，室温下振荡30min后，通过外加磁场将上清液分离出来；
[0053] (2)用HPLC测定(1)中所得上清液中TCs的浓度，再计算出可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球对TCs的吸附量；
[0054] 所测得的上清液中TC、CTC、DC、OTC的浓度分别为0.4246mg/mL、0.4494mg/mL、0.4550mg/mL、0.4443mg/mL。
[0055] 所述的可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球对四环素类药物的吸附量的计算公式为：
[0056]
[0057] 式中Ce为上述上清液中TC、CTC、DC、OTC的浓度；
[0058] 通过计算，可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球对TC、CTC、DC、OTC的吸附量分别为：37.70mg/g、25.30mg/g、22.50mg/g、27.85mg/g。
[0059] 实施例3
[0060] 一种可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球的制备方法，包括以下步骤：
[0061] 步骤一、将1.15g氯化铁、4.00g乙酸钠、5.29g己二胺和28mL乙二醇置于反应釜中，190℃反应8h，反应结束后，将反应产物用超纯水洗至中性。然后，将所得产物在48℃、
0.06MPa下真空干燥6h，即得氨基磁性纳米球。
0.06MPa下真空干燥6h，即得氨基磁性纳米球。
[0062] 步骤二、取250mg步骤一制得的氨基磁性纳米球，将33mg四环素、30mL pH值为7.5的Tris-HCl缓冲液置于三口瓶中，室温下搅拌反应1h，再加入60mg多巴胺、60mg牛血清蛋白，室温下聚合反应7.5h，生成固态聚合物；
[0063] 步骤三、聚合反应结束后，通过外加磁场将步骤二反应液中生成的固态聚合物分离出来；
[0064] 步骤四、用体积比为94:6的无水乙醇与乙酸的混合液洗脱步骤三中分离出的固态聚合物。洗脱后的固态聚合物再在43℃下干燥4.5h，即得可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球。
[0065] 将实施例3制得的可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球进行吸附性能检测，具体如下：
[0066] (1)将可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球10mg加入到5mL浓度为0.5mg/mL的TCs的水溶液中，室温下振荡30min后，通过外加磁场将上清液分离出来；
[0067] (2)用HPLC测定(1)中所得上清液中TCs的浓度，再计算出可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球对TCs的吸附量；
[0068] 所测得的上清液中TC、CTC、DC、OTC的浓度分别为0.4237mg/mL、0.4486mg/mL、0.4533mg/mL、0.4433mg/mL。
[0069] 所述的可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球对四环素类药物的吸附量的计算公式为：
[0070]
[0071] 式中Ce为上述上清液中TC、CTC、DC、OTC的浓度；
[0072] 通过计算，可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球对TC、CTC、DC、OTC的吸附量分别为：38.15mg/g、25.70mg/g、23.36mg/g、28.35mg/g。
[0073] 实施例4
[0074] 一种可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球的制备方法，包括以下步骤：
[0075] 步骤一、将0.85g氯化铁、4.02g乙酸钠、5.76g己二胺和29.5mL乙二醇置于反应釜中，195℃反应7.8h，反应结束后，将反应产物用超纯水洗至中性。然后，将所得产物在46℃、0.08MPa下真空干燥5h，即得氨基磁性纳米球。
[0076] 步骤二、取350mg步骤一制得的氨基磁性纳米球，再将35mg四环素、35mL pH值为8.2的Tris-HCl缓冲液置于三口瓶中，室温下搅拌反应1.2h，再加入65mg多巴胺、65mg牛血清蛋白，室温下聚合反应7.2h，生成固态聚合物；
[0077] 步骤三、聚合反应结束后，通过外加磁场将步骤二反应液中生成的固态聚合物分离出来；
[0078] 步骤四、用体积比为96:4的无水乙醇与乙酸的混合液洗脱步骤三中分离出的固态聚合物。洗脱后的固态聚合物再在42℃下干燥6h，即得可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球。
[0079] 将实施例4制得的可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球进行吸附性能检测，具体如下：
[0080] (1)将可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球10mg加入到5mL浓度为0.5mg/mL的TCs的水溶液中，室温下振荡30min后，通过外加磁场将上清液分离出来；
[0081] (2)用HPLC测定(1)中所得上清液中TCs的浓度，再计算出可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球对TCs的吸附量；
[0082] 所测得的上清液中TC、CTC、DC、OTC的浓度分别为0.4230mg/mL、0.4480mg/mL、0.4535mg/mL、0.4428mg/mL。
[0083] 所述的可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球对四环素类药物的吸附量的计算公式为：
[0084]
[0085] 式中Ce为上述上清液中TC、CTC、DC、OTC的浓度；
[0086] 通过计算，可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球对TC、CTC、DC、OTC的吸附量分别为：38.50mg/g、26.00mg/g、23.25mg/g、28.60mg/g。
[0087] 实施例5
[0088] 一种可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球的制备方法，包括以下步骤：
[0089] 步骤一、将0.8g氯化铁、3.4g乙酸钠、6.5g己二胺和30mL乙二醇置于反应釜中，205℃反应7.5h，反应结束后，将反应产物用超纯水洗至中性。然后，将所得产物在42℃、0.07MPa下真空干燥6h，即得氨基磁性纳米球。
[0090] 步骤二、取400mg步骤一制得的氨基磁性纳米球，再将37mg四环素、37mLpH值为7.6的Tris-HCl缓冲液置于三口瓶中，室温下搅拌反应0.8h，再加入43mg多巴胺、43mg牛血清蛋白，室温下聚合反应6.9h，生成固态聚合物；
[0091] 步骤三、聚合反应结束后，通过外加磁场将步骤二反应液中生成的固态聚合物分离出来；
[0092] 步骤四、用体积比为97:3的无水乙醇与乙酸的混合液洗脱步骤三中分离出的固态聚合物。洗脱后的固态聚合物再在47℃下干燥5.5h，即得可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球。
[0093] 将实施例5制得的可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球进行吸附性能检测，具体如下：
[0094] (1)将可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球10mg加入到5mL浓度为0.5mg/mL的TCs的水溶液中，室温下振荡30min后，通过外加磁场将上清液分离出来；
[0095] (2)用HPLC测定(1)中所得上清液中TCs的浓度，再计算出可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球对TCs的吸附量；
[0096] 所测得的上清液中TC、CTC、DC、OTC的浓度分别为0.4233mg/mL、0.4478mg/mL、0.4537mg/mL、0.4440mg/mL。
[0097] 所述的可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球对四环素类药物的吸附量的计算公式为：
[0098]
[0099] 式中Ce为上述上清液中TC、CTC、DC、OTC的浓度；
[0100] 通过计算，可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球对TC、CTC、DC、OTC的吸附量分别为：38.35mg/g、26.10mg/g、23.15mg/g、28.00mg/g。
[0101] 实施例6
[0102] 一种可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球的制备方法，包括以下步骤：
[0103] 步骤一、将1.2g氯化铁、4.1g乙酸钠、7.5g己二胺和35mL乙二醇置于反应釜中，210℃反应9h，反应结束后，将反应产物用超纯水洗至中性。然后，将所得产物在50℃、0.09MPa下真空干燥7h，即得氨基磁性纳米球。
[0104] 步骤二、取500mg步骤一制得的氨基磁性纳米球，再将40mg四环素、40mL pH值为8.5的Tris-HCl缓冲液置于三口瓶中，室温下搅拌反应1.5h，再加入70mg多巴胺、70mg牛血清蛋白，室温下聚合反应8h，生成固态聚合物；
[0105] 步骤三、聚合反应结束后，通过外加磁场将步骤二反应液中生成的固态聚合物分离出来；
[0106] 步骤四、用体积比为99:1的无水乙醇与乙酸的混合液洗脱步骤三中分离出的固态聚合物。洗脱后的固态聚合物再在50℃下干燥7h，即得可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球。
[0107] 将实施例6制得的可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球进行吸附性能检测，具体如下：
[0108] (1)将可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球10mg加入到5mL浓度为0.5mg/mL的TCs的水溶液中，室温下振荡30min后，通过外加磁场将上清液分离出来；
[0109] (2)用HPLC测定(1)中所得上清液中TCs的浓度，再计算出可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球对TCs的吸附量；
[0110] 所测得的上清液中TC、CTC、DC、OTC的浓度分别为0.4227mg/mL、0.4474mg/mL、0.4526mg/mL、0.4420mg/mL。
[0111] 所述的可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球对四环素类药物的吸附量的计算公式为：
[0112]
[0113] 式中Ce为上述上清液中TC、CTC、DC、OTC的浓度；
[0114] 通过计算，可排阻蛋白质磁性分子印迹纳米球对TC、CTC、DC、OTC的吸附量分别为：38.65mg/g、26.30mg/g、23.70mg/g、29.00mg/g。
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