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一种利用复合杀 线虫 微 生物防治烟草线虫病害的方法

阅读：838发布：2020-05-13

专利汇可以提供一种利用复合杀线虫微生物防治烟草线虫病害的方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明涉及一种利用复合杀线虫微生物防治烟草线虫病害的方法，该方法所述的复合杀线虫微生物由粉红粘帚霉(Gliocladium roseum)、淡紫拟青霉(Paecilomyceslilacinus(Thom.)Samson)、阿伯氏伯克氏菌(Burkholderia arboris)、嗜虫沙雷氏菌(Sarratia entomophilus)四种微生物组成；所述的阿伯氏伯克氏菌为Burkholderia arboris J211；保藏编号为CCTCC NO：M 2019747。1)本发明的阿伯氏伯克氏菌为新研究所得菌种，且已发现该菌种对线虫具有较高地防治效果，新的功能在继续研究中；2)本发明在阿伯氏伯克氏菌防治线虫的基础上，混合其他三种菌种后，且控制其中的相关体积比，从而实现防治效果突出，防治率高的结果[见实施例 ]；3)本发明的复合杀线虫微生物具有明显的提高大田作物抗线虫病的能力；同时可以提高作物的商品质量、提高作物的产量。，下面是一种利用复合杀线虫微生物防治烟草线虫病害的方法专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种利用复合杀线虫微生物防治烟草线虫病害的方法，其特征在于，该方法所述的复合杀线虫微生物由粉红粘帚霉(Gliocladium roseum)、淡紫拟青霉
(Paecilomyceslilacinus(Thom.)Samson)、阿伯氏伯克氏菌(Burkholderia arboris)、嗜虫沙雷氏菌(Sarratia entomophilus)四种组成。
2.根据权利要求1所述的利用复合杀线虫微生物防治烟草线虫病害的方法，其特征在于，所述的阿伯氏伯克氏菌为Burkholderia arboris J211；保藏编号为CCTCC NO：M
2019747。
3.根据权利要求1所述的利用复合杀线虫微生物防治烟草线虫病害的方法，其特征在于，该方法的步骤为(1)四种菌液分别培养：配制牛肉膏蛋白胨液体培养基→灭菌→冷却→接种→摇床200rpm培养-72小时→收集菌液；(2)将四种菌液按比例混合；(3)施用：在作物栽培时，在土壤中挖与苗根大小相对应的栽培穴，放入小苗，将混合后的菌液浇在植物的根部，菌液用量根据根的大小为20ml-200ml/株；或，将菌液和任意比例的浇根用水混合后，在作物栽培时，浇入栽培穴中或者在覆土后进行浇灌。
4.根据权利要求1所述的利用复合杀线虫微生物防治烟草线虫病害的方法，其特征在于，所述的复合杀线虫微生物使用时的比例为，按体积比：粉红粘帚霉：淡紫拟青霉：阿伯氏伯克氏菌：嗜虫沙雷氏菌为1～2:1～2:3～5:1～2的比例混合。
5.根据权利要求4所述的利用复合杀线虫微生物防治烟草线虫病害的方法，其特征在于，所述的复合杀线虫微生物使用时的比例为，按体积比：粉红粘帚霉：淡紫拟青霉：阿伯氏伯克氏菌：嗜虫沙雷氏菌为1:1:4:1的比例混合。
6.根据权利要求4所述的利用复合杀线虫微生物防治烟草线虫病害的方法，其特征在于，所述的复合杀线虫微生物使用时的比例为，按体积比：粉红粘帚霉：淡紫拟青霉：阿伯氏伯克氏菌：嗜虫沙雷氏菌为1:2:4:2的比例混合。
7.根据权利要求4所述的利用复合杀线虫微生物防治烟草线虫病害的方法，其特征在于，所述的复合杀线虫微生物使用时的比例为，按体积比：粉红粘帚霉：淡紫拟青霉：阿伯氏伯克氏菌：嗜虫沙雷氏菌为1:2:5:1的比例混合。
8.根据权利要求4所述的利用复合杀线虫微生物防治烟草线虫病害的方法，其特征在于，所述的复合杀线虫微生物使用时的比例为，按体积比：粉红粘帚霉：淡紫拟青霉：阿伯氏伯克氏菌：嗜虫沙雷氏菌为2:1:4:1的比例混合。
9.根据权利要求3所述的利用复合杀线虫微生物防治烟草线虫病害的方法，其特征在于，该方法的步骤还包括(4)施用后后续管理的栽培管理方法：不可在根部施用杀细菌和杀真菌剂药物。
10.根据权利要求3所述的利用复合杀线虫微生物防治烟草线虫病害的方法，其特征在于，该方法的步骤包括a)将菌液培养好以后，将菌液加入灭菌后的麦麸，低温干燥后制成菌粉；在栽培植物时，将干燥的菌粉施用于田间；或将菌粉在营养液中活化后，在栽培时浇入植物的根部；
或，b)将混合后的菌液进行冷冻干燥后制成纯的菌粉，在栽培植物时，直接施用干燥的菌粉，或者将菌粉和其它物质混合后施用，或将菌粉活化后，将含有活化菌的菌液浇在植物的根部。

说明书全文

一种利用复合杀线虫 微 生物防治烟草线虫病害的方法

技术领域

[0001] 本发明属于生物防治技术领域；尤其是涉及利用复合杀线虫微生物防治烟草线虫病害的方法技术领域。

背景技术

[0002] 农作物在生长过程中，线虫是一种十分常见的植物虫害。一些植物寄生线虫会破坏植物的根组织，导致植物根系发育受阻，营养吸收出现障碍。有些线虫还会传播其它病害。线虫估计每年能给农作物造成相当于1000亿美元的损失。

[0003] 普通的线虫防治方法主要包括熏蒸和使用化学农药杀虫，比较绿色的方法是使用具有杀线虫功能的微生物菌剂。熏蒸由于对环境具有巨大的破坏作用，国家已明令禁止使用。化学合成农药因为残留、对人体有害、破坏环境和生态平衡，具有多种危害。虽然可以通过传统的轮作、土壤改良等途径加以控制某些植物的线虫病，但对于一些经济作物和林木而言，轮作防病难以实施，甚至根本上不可能进行。生物防治因具有除害增产﹑保护生态平衡﹑减轻环境污染等优势，越来越受到人们的关注。微生物具有天然、无残留等优点，成为最具有发展前景的方法。但现有的生物防治方法均集中在使用某一特定的单一菌株来防治线虫，单一菌剂杀线虫效果有限，影响了生物制剂的推广和使用效果。本发明通过将具有不同功能的杀线虫微生物进行复合，以提高微生物杀线虫的防治效果。

发明内容

[0004] 本发明要解决的技术问题是：现有大田作物线虫病的生防制剂防治效果不理想的问题。提供一种利用复合杀线虫微生物防治烟草线虫病害的方法。

[0005] 本发明采用如下技术方案实现。

[0006] 一种利用复合杀线虫微生物防治烟草线虫病害的方法，本发明所述的复合杀线虫微生物由粉红粘帚霉(Gliocladium roseum)、淡紫拟青霉(Paecilomyceslilacinus(Thom.)Samson)、阿伯氏伯克氏菌(Burkholderia arboris)、嗜虫沙雷氏菌(Sarratia entomophilus)四种微生物组成。

[0007] 进一步，本发明所述的阿伯氏伯克氏菌为Burkholderia arboris J211；保藏编号为CCTCC NO：M 2019747。现在保藏在国家知识产权局指定的保藏单位(保藏单位名称：中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2019年10月10日，保藏编号为CCTCC NO：M 2019747。保藏单位地址：武汉，珞珈山，武汉大学内，邮政编码430072)。

[0008] 进一步，本发明的方法包含的步骤为(1)四种菌液分别培养：配制牛肉膏蛋白胨液体培养基→灭菌→冷却→接种→摇床200rpm培养-72小时→收集菌液；(2)将四种菌液按比例混合；(3)施用：在作物栽培时，在土壤中挖与苗根大小相对应的栽培穴，放入小苗，将混合后的菌液浇在植物的根部，菌液用量根据根的大小为20ml-200ml/株；或，将菌液和任意比例的浇根用水混合后，在作物栽培时，浇入栽培穴中或者在覆土后进行浇灌。

[0009] 进一步，本发明所述的复合杀线虫微生物使用时的比例为，按体积比：粉红粘帚霉：淡紫拟青霉：阿伯氏伯克氏菌：嗜虫沙雷氏菌为1～2:1～2:3～5:1～2的比例混合。

[0010] 进一步，本发明的所述的复合杀线虫微生物使用时的比例为，按体积比：粉红粘帚霉：淡紫拟青霉：阿伯氏伯克氏菌：嗜虫沙雷氏菌为1:1:4:1的比例混合。

[0011] 进一步，本发明所述的复合杀线虫微生物使用时的比例为，按体积比：粉红粘帚霉：淡紫拟青霉：阿伯氏伯克氏菌：嗜虫沙雷氏菌为1:2:4:2的比例混合。

[0012] 进一步，本发明的所述的复合杀线虫微生物使用时的比例为，按体积比：粉红粘帚霉：淡紫拟青霉：阿伯氏伯克氏菌：嗜虫沙雷氏菌为1:2:5:1的比例混合。

[0013] 进一步，本发明所述的复合杀线虫微生物使用时的比例为，按体积比：粉红粘帚霉：淡紫拟青霉：阿伯氏伯克氏菌：嗜虫沙雷氏菌为2:1:4:1的比例混合。进一步，本发明的方法包含的步骤还包括(4)施用后的后续管理的栽培管理方法：不可在根部施用杀细菌和杀真菌剂药物。

[0014] 进一步，本发明的方法包含的步骤包括a)将菌液培养好以后，将菌液加入灭菌后的麦麸，低温干燥后制成菌粉；在栽培植物时，将干燥的菌粉施用于田间；或将菌粉在营养液中活化后，在栽培时浇入植物的根部；

[0015] 或，b)将混合后的菌液进行冷冻干燥后制成纯的菌粉，在栽培植物时，直接施用干燥的菌粉，或者将菌粉和其它物质混合后施用，或将菌粉活化后，将含有活化菌的菌液浇在植物的根部。

[0016] 本发明的有益效果为，1)本发明的阿伯氏伯克氏菌为新研究所得菌种，且已发现该菌种对线虫具有较高的防治效果，新的功能在继续研究中；2)本发明在阿伯氏伯克氏菌防治线虫的基础上，混合其他三种菌种后，且控制其中的相关体积比，从而实现防治效果突出、防治率高的结果[见实施例]；3)本发明的复合杀线虫微生物具有明显的提高大田作物的抗线虫病的能力；同时可以提高作物的商品质量和作物的产量。

[0017] 下面结合附图和具体实施方式本发明做进一步解释。

附图说明

[0018] 图1为本发明的盆栽实验--各单一菌株和混合菌液对烟草接种线虫后根损伤的预防情况图。

[0019] 图2为本发明烟草大田使用各单一菌剂及复合菌剂后烟草的农艺性状--株高统计图。

[0020] 图3为本发明烟草大田使用各单一菌剂及复合菌剂后烟草的农艺性状--茎围统计图。

[0021] 图4为本发明烟草大田使用各单一菌剂及复合菌剂后烟草的农艺性状--最大叶长统计图。

[0022] 图5为本发明烟草大田使用各单一菌剂及复合菌剂后烟草的农艺性状--最大叶宽统计图。

[0023] 图6为本发明烟草大田使用各单一菌剂及复合菌剂后烟草的农艺性状--最大叶面积统计图。

具体实施方式

[0024] 一种利用复合杀线虫微生物防治烟草线虫病害的方法，利用四株不同的具有杀线虫功能的微生物菌株，包括粉红粘帚霉(Gliocladium roseum)、淡紫拟青霉(Paecilomyces lilacinus(Thom.)Samson)、阿伯氏伯克氏菌(Burkholderia arboris)、嗜虫沙雷氏菌(Sarratia entomophilus)，制成复合菌剂，经大田试验，具有显著地防治植物线虫病的效果。

[0025] 本发明所述的利用复合菌剂防治植物线虫病的方法由以下步骤组成：

[0026] 一、分别培养4种菌液：配制牛肉膏蛋白胨液体培养基→灭菌→冷却→接种→摇床200rpm培养12-72小时→收集菌液。

[0027] 二、将4种菌液按混合按粉红粘帚霉(Gliocladium roseum)、淡紫拟青霉(Paecilomyces lilacinus(Thom.)Samson)、阿伯氏伯克氏菌(Burkholderia arboris)、嗜虫沙雷氏菌(Sarratia entomophilus)为1:1:4:1(v:v:v:v)的体积比例混合。

[0028] 三、菌液施用

[0029] 在作物栽培时，在土壤中挖与苗根大小相对应的栽培穴，放入小苗，将混合后的菌液浇在植物的根部，菌液用量根据根的大小为20ml-200ml/株，也可以将菌液和任意比例的浇根用水混合后，在作物栽培时，浇入栽培穴中，或者是覆土后进行浇灌。

[0030] 四、施用后的管理

[0031] 后续的栽培管理方法：按施用作物的常规栽培管理方式进行管理即可，但不可在根部施用杀细菌剂和杀真菌剂等药物。

[0032] 本发明可将菌液发酵好以后，将菌液加入灭菌后的麦麸，低温干燥后制成菌粉。在栽培植物时，将干燥的菌粉施用于田间。也可以将菌粉在营养液中活化后，在栽培时浇入植物的根部。

[0033] 本发明可以将混合后的菌液进行冷冻干燥后制成纯的菌粉，在栽培植物时，直接施用干燥的菌粉，或者将菌粉和其它物质混合后施用，或者将菌粉活化后，将含有活化菌的菌液浇在植物的根部。

[0034] 除了在栽培时施用本发明的菌剂，也可以在植物栽培后的生长期，在根部浇灌发酵好的菌液达到杀灭线虫的目的。

[0035] 本产品还可以和其它线虫生防菌剂进行复合使用，以进一步增强本菌剂的防治效果。

[0036] 具体实施例一

[0037] 按常规要求整理好烟田土壤。选取健壮、整齐、株高10cm左右的烟苗，株距50cm,窝深15cm。在每个烟苗栽培的穴内，先施入20ml混合菌液，然后将烟草按照烟苗栽培规范进行覆土、浇水等措施进行管理，可以见烟苗正常生长。可以烟株生长后，看到线虫防治的效果。

[0038] 具体实施例二

[0039] 选取正常生长的番茄苗，在根旁开挖小穴，深到侧根处。在每个穴内，施入50ml混合菌液然后覆土，然后按菜苗正常管理方法进行管理即可，可见菜苗正常生长。

[0040] 具体实施例三

[0041] 按常规要求整理好烟田土壤。选取健壮、整齐、株高10cm左右的烟苗，株距50cm,窝深15cm。在每个烟苗栽培的穴内，先施入100ml混合菌液，然后将烟草按照烟苗栽培规范进行覆土、浇水等措施进行管理，可以见烟苗正常生长。可以烟株生长后，看到线虫防治的效果。

[0042] 具体实施例四

[0043] 按常规要求整理好烟田土壤。选取健壮、整齐、株高10cm左右的烟苗，株距50cm,窝深15cm。在每个烟苗栽培的穴内，先将混合菌液冻干菌粉1克，溶解于浇根水1升中，然后将烟草按照烟苗栽培规范进行覆土、浇水等措施进行管理，可见烟苗正常生长。可在烟株生长后，看到线虫防治的效果。

[0044] 具体实施例五

[0045] 按常规要求整理好烟田土壤。选取健壮、整齐、株高10cm左右的烟苗，株距50cm,窝深15cm。然后将烟草按照烟苗栽培规范进行覆土、浇水等措施进行管理，可以见烟苗正常生长。在每个烟苗栽培的穴内，先施入20ml混合菌液，并在烟株定植后，在三个不同时期，每次将10ml菌液用90ml清水稀释后灌根，其余按烟株正常管理方法进行管理即可。

[0046] 图1中，Ck0为未接种线虫组，CK1为只接种线虫但未加任何杀线虫剂的实验组,SX1为施用粉红粘帚霉组，SX2为施用淡紫拟青霉组，SX3为施用洋葱伯克氏菌组，菌株SX4为施用嗜虫沙雷氏菌组，复合为施用粉红粘帚霉(Gliocladium roseum)、淡紫拟青霉(Paecilomyces lilacinus(Thom.)Samson)、阿伯氏伯克氏菌(Burkholderia arboris)、嗜虫沙雷氏菌(Sarratia entomophilus)为1:1:4:1(v:v:v:v)的体积比例混合而成的混合菌剂。

[0047] 图2至图6中，CK0：空白对照；CK1：常规对照，常规药剂防控根结线虫病；T1：每株烟5mL阿伯氏伯克氏菌；T2：每株烟25mL阿伯氏伯克氏菌；T3：每株烟50mL阿伯氏伯克氏菌；T4：
每株烟25mL嗜线虫沙雷氏菌；T5：每株烟20g淡紫拟青霉菌肥；T6：每株烟20g粉红粘帚霉菌肥；T7：每株烟淡紫拟青霉菌肥+粉红粘帚霉菌肥+阿伯氏伯克氏菌+嗜线虫沙雷氏菌；T8：路富达药剂；T9：噻唑磷化学药剂。T7即复合菌剂表现出了最好的效果。

[0048] 以上所述的仅是本发明的部分具体实施例(由于本发明的配方属于数值范围，故实施例不能穷举，本发明所记载的保护范围以本发明的数值范围和其他技术要点范围为准)，方案中公知的具体内容或常识在此未作过多描述。应当指出，上述实施例不以任何方式限制本发明，对于本领域的技术人员来说，凡是采用等同替换或等效变换的方式获得的技术方案均落在本发明的保护范围内。本申请要求的保护范围应当以其权利要求的内容为准，说明书中的具体实施方式等记载可以用于解释权利要求的内容。

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