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천연 살선충 조성물 및 살선충 활성을 갖는 은사시나무 추출물의 제조방법

阅读:1044发布:2020-08-08

专利汇可以提供천연 살선충 조성물 및 살선충 활성을 갖는 은사시나무 추출물의 제조방법专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且본발명은천연살선충조성물및 살선충활성을갖는은사시나무추출물의제조방법에관한것으로, 보다상세하게는각종시설원예작물, 식용작물, 소나무류를포함한침엽수등에큰 피해를입히는선충을방제하기위한천연살선충조성물및 살선충활성을갖는은사시나무추출물의제조방법에관한것이다.,下面是천연 살선충 조성물 및 살선충 활성을 갖는 은사시나무 추출물의 제조방법专利的具体信息内容。

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  • 은사시나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 것을 특징으로 하는 소나무재선충( Bursaphelenchus xylophilus )에 대한 천연 살선충 조성물.
  • 제8항에 있어서,
    상기 은사시나무 추출물은 은사시나무를 열수 추출한 은사시나무 열수 추출물인 것을 특징으로 하는 천연 살선충 조성물.
  • 제8항에 있어서,
    상기 은사시나무 추출물은 은사시나무를 알코올 용매로 추출한 알코올 추출물을 열수 추출한 은사시나무 열수 추출물인 것을 특징으로 하는 천연 살선충 조성물.
  • 제8항에 있어서,
    상기 은사시나무 추출물은 은사시나무를 열수 추출한 은사시나무 열수 추출물을 클로로포름(Chloroform : CHCl 3 )을 포함하는 추출용매로 분획한 분획물인 것을 특징으로 하는 천연 살선충 조성물.
  • 제8항에 있어서,
    상기 은사시나무 추출물은 은사시나무를 알코올 용매로 추출한 알코올 추출물을 열수 추출한 은사시나무 열수 추출물을 클로로포름(Chloroform : CHCl 3 )을 포함하는 추출용매로 분획한 분획물인 것을 특징으로 하는 천연 살선충 조성물.
  • 제8항에 있어서,
    상기 은사시나무는 은사시나무의 형성층을 포함하고,
    은사시나무의 수피 및 목질부 중 적어도 하나를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 천연 살선충 조성물.
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  • 제8항에 있어서,
    상기 천연 살선충 조성물은 하기 수학식 1에 의거할 때, 처리 48시간 이후 80 ~ 100% 살선충율을 보이는 것을 특징으로 하는 천연 살선충 조성물.
    [수학식 1]
  • 제8항 내지 제13항 및 제15항 중 어느 한 항의 살선충 조성물을 포함하는 소나무재선충( Bursaphelenchus xylophilus )에 대한 천연 살선충제.
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  • 说明书全文

    천연 살선충 조성물 및 살선충 활성을 갖는 은사시나무 추출물의 제조방법{composition for natural nematicidal and extraction method of hyun poplar showing nematicidal activity}

    본 발명은 천연 살선충 조성물 및 살선충 활성을 갖는 은사시나무 추출물의 제조방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 각종시설 원예작물, 식용작물, 소나무류를 포함한 침엽수 등에 큰 피해를 입히는 선충을 방제하기 위한 천연 살선충 조성물 및 살선충 활성을 갖는 은사시나무 추출물의 제조방법에 관한 것이다.

    현재 우리나라에는 소나무재선충( Bursaphelenchus xylophilus )에 의해 발생하는 소나무재선충병에 의해 소나무와 잣나무가 심각한 피해를 입고 있다. '소나무에이즈'라고도 불리 우는 이 식물병은 한번 감염되면 치료가 되지 않고 거의 모든 소나무가 고사된다. 우리나라의 경우 남부지방에서는 주로 소나무가 피해를 입고 있고, 중부지방에서는 잣나무가 주로 피해를 입고 있다.

    소나무재선충( Bursaphelenchus xylophilus )은 분류학상으로 후생동물아계(Metazoa), 진정후생동물(Eumetazoa), 좌우대칭동물(Bilateria), 의체강동물(Pseudocoelomata), 선충문(Nematoda, Nemata)에 속하는 동물로서 실모양을 하고 있다. 길이는 1 mm도 안되지만 번식력은 놀라워 한 쌍이 20일 만에 20만 마리로 늘어날 정도이다. 재선충은 스스로 나무에 침입하거나 나무 사이를 이동할 수 없고 반드시 매개충을 통해야만 가능하다. 매개충인 솔수염하늘소( Monochamus alternatus ) 또는 북방솔수염하늘소( M. saltuarius )는 주로 병든 소나무나 잣나무를 선택해 알을 낳는데, 바로 재선충에 감염된 나무에 낳은 매개충의 알이 봄에 번데기로 될 때 재선충이 주위에 모이게 되고, 매개충이 5월 중순 ~ 7월 하순 동안 우화(羽化)할 때 몸에 붙어 있는 재선충도 함께 이동한다. 목질부를 탈출한 매개충은 건전한 나무의 새로 자란 가지(1 ~ 2년생 가지)를 주로 갉아먹으며, 이 때 생긴 상처를 통하여 소나무재선충을 감염시킨다. 병든 소나무의 경우 잎 전체가 갈색으로 변하면서 보통 1년 안에 말라 죽고 만다.

    1905년 일본에서 처음으로 발병한 소나무재선충병의 원인은 오랜 세월 규명이 되지 않다가 1970년에 이르러 비로소 원인이 밝혀졌다. 일본의 경우 이 병에 의해 역사적 가치가 높은 조경수를 제외하고는 대부분의 소나무 자생림이 사라졌다. 우리나라의 경우에는 1988년 부산 금정산에서 처음으로 발생하였는데, 초기에는 항공 살포에 의한 매개충 박멸, 감염목의 조기 발견 및 제거, 감염목 주변나무들의 적극적인 수간 주입 등으로 부산 일대에서만 발병할 뿐 잠잠했다. 하지만 살충제의 항공 살포에 의한 꿀벌 등의 유익충에 대한 피해, 환경오염 등의 이유로 인한 환경단체 중심의 항의 시위 및 국민들의 피해목 이동 등으로 효과적인 방제가 진행되지 못하였고, 결국에는 전국에 걸쳐서 소나무재선충병이 발병하게 되었다.

    소나무재선충은 소나무속( Pinus ) 뿐만 아니라 전나무속( Abies ), 가문비나무속( Picea ), 잎갈나무속( Larix )의 일부 수종 등도 가해하는 것으로 알려져 있다. 우리나라의 경우 경상도, 전라도 및 강릉 지역은 주로 소나무에서 발병된 반면에 강원도 서부 지역과 경기도에서는 주로 잣나무에서 발병이 되었다. 남부지방과 중부지방의 수목 피해종의 이러한 차이는 소나무재선충을 매개하는 매개충의 차이에 의한 것으로 알려져 있다. 남부지방의 경우 솔수염하늘소의 밀도가 높고, 중부지방의 경우 북방솔수염하늘소의 밀도가 높은데, 이들 매개충이 선호하는 식물체가 서로 다르기 때문인 것으로 추정되고 있다.

    이 식물병을 방제하기 위한 방법으로는, 1) 건전한 나무에 살선충약제의 예방적인 수간 주입, 2) 매개충 방제를 위한 합성 살충제 또는 길항 미생물의 항공 살포, 3) 감염목으로부터 재선충과 매개충을 방제하기 위한 감염목의 파쇄, 연소 및 훈증 등의 방법이 있다. 하지만 수간 주입법과 감염목 방제 방법은 비용이 많이 들고 높은 산악지대에 있는 소나무림에 대한 방제의 어려움 등으로 인하여 효과적인 방법이 되지 못한다. 합성 살충제의 경우 매개충이 주로 활동하는 5월 내지 7월에 약제를 항공 살포할 경우 가장 효과적인 방법이기는 하나, 합성 살충제의 부작용으로 인하여 도시 및 인근 지역에 살포할 수 없다는 문제점이 있다. 길항 미생물의 살포에 의한 친환경적인 매개충 방제 방법도 있지만, 아직 합성살충제에 비하여 효과가 떨어져 그다지 효과적이지 못한 실정이다. 유기합성농약의 효과는 우수하지만 지속적인 사용과 남용으로 인한 유익충의 감소, 저항성 발달 및 인축에 대한 독성 등의 문제점이 발생하고 있다.

    이에 따라 새로우면서도 효과적인 친환경 방제방법의 개발이 필요한 상황이다.

    한국공개특허 제2009-0057503호(명칭 : 봄베이 육두구 과육 유래 살선충물질과 추출물을 이용한 소나무재선충병 방제용 조성물 및 그의 방제방법)

    본 발명은 상기와 같은 문제점을 해결하기 위하여 안출된 것으로, 본 발명이 해결하려는 과제는 각종시설 원예작물, 식용작물, 소나무류를 포함한 침엽수 등에 큰 피해를 입히는 선충을 방제하기 위한 천연 살선충 조성물 및 살선충 활성을 갖는 은사시나무 추출물의 제조방법을 제공하는 것이다.

    특히, 소나무, 잣나무 등에 기생해 나무를 가해하는 선충인 소나무재선충에 대한 살선충 활성을 갖는 천연 살선충 조성물 및 살선충 활성을 갖는 은사시나무 추출물의 제조방법을 제공하는 것이다.

    상술한 과제를 해결하기 위해 본 발명은, 은사시나무를 열수 추출하여 은사시나무 열수 추출물을 제조하는 단계를 포함하는 살선충 활성을 갖는 은사시나무 추출물의 제조방법을 제공한다.

    또한, 본 발명은 은사시나무를 알코올 용매로 추출하여 알코올 추출물을 수득하는 단계 및 상기 알코올 추출물을 열수 추출하여 은사시나무 열수 추출물을 제조하는 단계를 포함하는 살선충 활성을 갖는 은사시나무 추출물의 제조방법을 제공한다.

    본 발명의 바람직한 일실시예에 따르면, 본 발명의 살선충 활성을 갖는 은사시나무 추출물의 제조방법의 상기 은사시나무 추출물은 소나무재선충( Bursaphelenchus xylophilus )에 대한 살선충 활성을 가질 수 있다.

    본 발명의 바람직한 다른 일실시예에 따르면, 본 발명의 살선충 활성을 갖는 은사시나무 추출물의 제조방법의 상기 은사시나무 추출물은 상기 은사시나무 추출물은 하기 수학식 1에 의거할 때, 처리 48시간 이후 80 ~ 100% 살선충율을 보일 수 있다.

    [수학식 1]

    본 발명의 바람직한 또 다른 일실시예에 따르면, 본 발명의 살선충 활성을 갖는 은사시나무 추출물의 제조방법의 상기 열수추출은 90 ~ 130℃의 온도에서 증류수 용매로 추출할 수 있다.

    본 발명의 바람직한 다른 일실시예에 따르면, 본 발명의 살선충 활성을 갖는 은사시나무 추출물의 제조방법의 상기 은사시나무는 은사시나무의 형성층을 포함하고, 은사시나무의 수피 및 목질부 중 적어도 하나를 더 포함할 수 있다.

    본 발명의 바람직한 또 다른 일실시예에 따르면, 본 발명의 살선충 활성을 갖는 은사시나무 추출물의 제조방법은 상기 은사시나무 열수 추출물을 클로로포름(Chloroform : CHCl 3 )을 포함하는 추출용매로 분획하여 분획물을 제조하는 단계를 더 포함할 수 있다.

    한편, 본 발명은 은사시나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 천연 살선충 조성물을 제공한다.

    본 발명의 바람직한 일실시예에 따르면, 본 발명의 천연 살선충 조성물의 상기 은사시나무 추출물은 은사시나무를 열수 추출한 은사시나무 열수 추출물일 수 있다.

    본 발명의 바람직한 다른 일실시예에 따르면, 본 발명의 천연 살선충 조성물의 상기 은사시나무 추출물은 은사시나무를 알코올 용매로 추출한 알코올 추출물을 열수 추출한 은사시나무 열수 추출물일 수 있다.

    본 발명의 바람직한 또 다른 일실시예에 따르면, 본 발명의 천연 살선충 조성물의 상기 은사시나무 추출물은 은사시나무를 열수 추출한 은사시나무 열수 추출물을 클로로포름(Chloroform : CHCl 3 )을 포함하는 추출용매로 분획한 분획물일 수 있다.

    본 발명의 바람직한 다른 일실시예에 따르면, 본 발명의 천연 살선충 조성물의 상기 은사시나무 추출물은 은사시나무를 알코올 용매로 추출한 알코올 추출물을 열수 추출한 은사시나무 열수 추출물을 클로로포름(Chloroform : CHCl 3 )을 포함하는 추출용매로 분획한 분획물일 수 있다.

    본 발명의 바람직한 또 다른 일실시예에 따르면, 본 발명의 천연 살선충 조성물의 상기 은사시나무는 은사시나무의 형성층을 포함하고, 은사시나무의 수피 및 목질부 중 적어도 하나를 더 포함할 수 있다.

    본 발명의 바람직한 다른 일실시예에 따르면, 본 발명의 천연 살선충 조성물은 소나무재선충( Bursaphelenchus xylophilus )에 대한 살선충 활성을 가질 수 있다.

    본 발명의 바람직한 또 다른 일실시예에 따르면, 본 발명의 천연 살선충 조성물은 하기 수학식 1에 의거할 때, 처리 48시간 이후 80 ~ 100% 살선충율을 보일 수 있다.

    [수학식 1]

    나아가. 본 발명은 앞서 언급한 천연 살선충 조성물을 포함하는 천연 살선충제를 제공한다.

    이 때, 상기 천연 살선충제는 소나무재선충( Bursaphelenchus xylophilus )에 대한 살선충 활성을 가질 수 있다.

    한편, 은사시나무 추출물은 은사시나무를 이용하여 본 기술분야에서 속하는 통상의 지식을 가진 자에게 알려진 식물 추출방법을 적용하여 추출된 추출물을 포괄하는 개념으로, 본 발명의 은사시나무 추출물은 은사시나무 열수 추출물 또는 상기 은사시나무 열수 추출물을 클로로포름(Chloroform : CHCl 3 )을 포함하는 추출용매로 분획한 분획물일 수 있다.

    본 발명의 천연 살선충 조성물 및 살선충 활성을 갖는 은사시나무 추출물의 제조방법은 각종시설 원예작물, 식용작물, 소나무류를 포함한 침엽수 등에 큰 피해를 입히는 선충을 방제할 수 있다.

    특히, 소나무, 잣나무 등에 기생해 나무를 가해하는 선충인 소나무재선충에 대한 살선충 활성을 가질 수 있다.

    이하, 본 발명을 보다 상세하게 설명한다.

    상술한 바와 같이 현재 우리나라에는 소나무재선충( Bursaphelenchus xylophilus )에 의해 발생하는 소나무재선충병에 의해 소나무와 잣나무가 심각한 피해를 입고 있다. '소나무에이즈'라고도 불리 우는 이 식물병은 한번 감염되면 치료가 되지 않고 거의 모든 소나무가 고사된다. 우리나라의 경우 남부지방에서는 주로 소나무가 피해를 입고 있고, 중부지방에서는 잣나무가 주로 피해를 입고 있다.

    이 식물병을 방제하기 위한 방법으로는, 1) 건전한 나무에 살선충약제의 예방적인 수간 주입, 2) 매개충 방제를 위한 합성 살충제 또는 길항 미생물의 항공 살포, 3) 감염목으로부터 재선충과 매개충을 방제하기 위한 감염목의 파쇄, 연소 및 훈증 등의 방법이 있다. 하지만 수간 주입법과 감염목 방제 방법은 비용이 많이 들고 높은 산악지대에 있는 소나무림에 대한 방제의 어려움 등으로 인하여 효과적인 방법이 되지 못한다. 합성 살충제의 경우 매개충이 주로 활동하는 5월내지 7월에 약제를 항공 살포할 경우 가장 효과적인 방법이기는 하나, 합성 살충제의 부작용으로 인하여 도시 및 인근 지역에 살포할 수 없다는 문제점이 있다. 길항 미생물의 살포에 의한 친환경적인 매개충 방제 방법도 있지만, 아직 합성살충제에 비하여 효과가 떨어져 그다지 효과적이지 못한 실정이다. 유기합성농약의 효과는 우수하지만 지속적인 사용과 남용으로 인한 유익충의 감소, 저항성 발달 및 인축에 대한 독성 등의 문제점이 발생하고 있다.

    이에 따라 새로우면서도 효과적인 친환경 방제방법의 개발이 필요한 상황이다.

    이에 본 발명은 은사시나무를 열수 추출하여 은사시나무 열수 추출물을 제조하는 단계를 포함하는 은사시나무 추출물의 제조방법을 제공함으로써 상술한 문제의 해결을 모색하였으며, 이를 통해 각종시설 원예작물, 식용작물, 소나무류를 포함한 침엽수 등에 큰 피해를 입히는 선충을 방제할 수 있다.

    특히, 소나무, 잣나무 등에 기생해 나무를 가해하는 선충인 소나무재선충에 대한 살선충 활성을 가질 수 있다.

    본 발명은 은사시나무를 열수 추출하여 은사시나무 열수 추출물을 제조하는 단계를 통해 은사시나무 추출물을 제조할 수 있다.

    상기 은사시나무 추출물은 통해 각종시설 원예작물, 식용작물, 소나무류를 포함한 침엽수 등에 큰 피해를 입히는 선충에 대한 살선충 활성을 가지는 물질로서, 바람직하게는 소나무, 잣나무 등에 기생해 나무를 가해하는 선충인 소나무재선충( Bursaphelenchus xylophilus )에 대한 살선충 활성을 가질 수 있다.

    한편, 본 발명의 은사시나무(학명 : Populus tomentiglandulosa )는 사시나무( P. davidiana )와 은백양( P. alba ) 사이에서 생긴 자연잡종이다. 생물학적 분류로 식물계(Plantae) 피자식물문(Angiospermae) 쌍떡잎식물강(Dicotyledoneae) 버드나무목(Salicales) 버드나뭇과(Salicaceae)에 속화는 식물체로서, 수피가 은색이며 군식하면 특히 낙엽이 진 후의 겨울철 수간이 아름다워 가로수 식재나 유도식재, 완충식재로 이용될 수 있다.

    한편, 은사시나무는 다른 명칭으로 현사시나무로 불리기도 하는데, 구체적으로, 현사시나무는 사시나무( P. davidiana )와 은백양( P. alba ) 사이에서 생긴 인공잡종으로서 은사시나무와 동일한 학명을 사용한다. 따라서, 본 발명의 은사시나무는 인공잡종인 현사시나무를 포함하는 개념일 수 있다.

    나무의 구조를 살펴보면, 수간의 안쪽에서부터 바깥쪽으로 심재부와 변재부를 포함하는 목질부, 형성층 및 수피로 구성될 수 있다.

    달리 말하면, 나무의 형성층을 중심으로 형성층의 바깥쪽에는 수피가 형성될 수 있고, 형성층의 안쪽에는 목질부가 형성될 수 있으며, 본 발명에 사용되는 은사시나무는 은사시나무의 형성층을 포함할 수 있으며, 바람직하게는 은사시나무의 형성층을 포함하고, 은사시나무의 수피 및 목질부 중 적어도 하나를 더 포함할 수 있다.

    상기 은사시나무는 일반적인 용매 추출법을 적용하여 추출할 수 있는데, 용매로서 증류수를 사용하고 열을 가하는 열수 추출을 통해 은사시나무 열수 추출물을 제조할 수 있다.

    바람직하게는 상기 은사시나무는 90 ~ 130℃, 바람직하게는 100 ~ 125℃의 온도에서 증류수를 용매로 추출하여 은사시나무 열수 추출물을 제조할 수 있으며, 상기 범위를 만족할 때, 소나무재선충( Bursaphelenchus xylophilus )에 대한 살선충 활성을 가지는 추출물을 수득하기 우수할 수 있다.

    이와 같이, 은사시나무를 열수 추출을 통해 은사시나무의 추출물을 제조하는 이유는 소나무재선충( Bursaphelenchus xylophilus )에 대한 살선충 활성을 가지는 추출물을 수득하기 위한 것이며, 만일 열수 추출이 아닌 메탄올, 에탈올 등의 알코올 용매를 사용하여 은사시나무 추출물을 수득한다면 소나무재선충( Bursaphelenchus xylophilus )에 대한 살선충 활성을 가지는 추출물이 수득되지 않을 수 있다.

    한편, 상기 은사시나무를 열수 추출하는데 있어서, 추출시간은 추출시간은 10분 ~ 100분, 바람직하게는 10 ~ 40분, 추출 횟수는 1 ~ 4 번, 바람직하게는 2 ~ 3번일 수 있다.

    한편, 본 발명은 은사시나무를 알코올 용매로 추출하여 알코올 추출물을 수득하는 단계 및 상기 알코올 추출물을 열수 추출하여 은사시나무 열수 추출물을 제조하는 단계를 통해서 은사시나무 추출물을 제조할 수 있다.

    구체적으로, 먼저 은사시나무를 알코올 용매로 추출하여 알코올 추출물을 수득한다. 상기 알코올은 C 1 ~ C 4 알코올로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 알코올을 사용할 수 있으나, 바람직하게 에탄올을 사용할 수 있다.

    본 발명의 알코올 용매는 알코올을 포함하는 것을 의미하며 100% 알코올로 이루어져 있거나 다른 용매에 혼합된 형태일 수 있다. 이 경우 다른 용매로서 바람직하게 물, 에틸아세테이트, 클로로포름 및 헥산 등을 사용할 수 있으며, 알코올 용매에 물을 혼합 용매로 사용하는 경우 50 ~ 95 중량%, 바람직하게는 60 ~ 80 중량%의 농도를 갖는 알코올 수용액을 사용하는 것이 추출효율을 극대화하는데 매우 유리할 수 있다.

    은사시나무를 C 1 ~ C 4 알코올 용매로 추출하는데 있어서, 추출온도는 18 ~ 70℃, 바람직하게는 20 ~ 25℃ 추출시간은 20 ~ 72 시간, 바람직하게는 22 ~ 26시간, 추출 횟수는 1 ~ 4 번, 바람직하게는 2 ~ 3번일 수 있다.

    다음으로, 상기 알코올 추출물을 열수 추출하여 은사시나무 열수 추출물을 제조한다.

    이 때, 상기 알코올 추출물은 감압 농축되고, 감압 농축된 알코올 추출물을 열수 추출하여 은사시나무 열수추출물을 제조할 수 있다.

    이와 같이, 은사시나무를 알코올 용매로 추출하여 알코올 추출물을 수득하고, 수득된 알코올 추출물을 열수 추출하여 제조된 은사시나무 열수 추출물은 살선충 활성을 가질 수 있다.

    나아가, 본 발명의 은사시나무 추출물의 제조방법은 상기 은사시나무 열수 추출물을 클로로포름(Chloroform : CHCl 3 )을 포함하는 추출용매로 분획하여 분획물을 제조하는 단계를 더 포함할 수 있다.

    이는 은사시나무 추출물의 살선충 활성를 더 증대시기 위한 단계로서, 상기 분획물은 은사시나무 열수 추출물보다 더욱 증대된 살선충 활성을 가질 수 있다.

    구체적으로, 본 발명은 은사시나무를 열수 추출하여 은사시나무 열수 추출물을 제조하는 하는 단계 및 상기 은사시나무 열수 추출물을 클로로포름(Chloroform : CHCl 3 )을 포함하는 추출용매로 분획하여 분획물을 제조하는 단계를 통해 은사시나무 추출물을 제조할 수 있다.

    또한, 본 발명은 은사시나무를 알코올 용매로 추출하여 알코올 추출물을 수득하는 단계, 상기 알코올 추출물을 열수 추출하여 은사시나무 열수 추출물을 제조하는 단계 및 상기 은사시나무 열수 추출물을 클로로포름(Chloroform : CHCl 3 )을 포함하는 추출용매로 분획하여 분획물을 제조하는 단계를 통해 은사시나무 추출물을 제조할 수 있다.

    이와 같이, 은사시나무 열수 추출물에 추출용매로 클로로포름을 사용하는 이유는 클로로포름 용매를 사용하여 은사시나무 열수 추출물을 추출해야 그 분획물에 소나무재선충( Bursaphelenchus xylophilus )에 대한 살선충 활성을 가지는 추출물이 수득될 수 있기 때문이다. 달리 말하면, 클로로포름 용매 외에 헥세인(hexane) 또는 에틸 아세테이트(ethyl acetate) 용매를 사용하여 은사시나무 열수 추출물을 추출한다면 그 분획물에 소나무재선충( Bursaphelenchus xylophilus )에 대한 살선충 활성을 가지는 추출물이 수득되지 않을 수 있다.

    한편, 앞서 언급했듯이 상기 은사시나무 추출물은 소나무재선충( Bursaphelenchus xylophilus )에 대한 살선충 활성을 가질 수 있는데, 바람직하게는 하기 수학식 1에 의거할 때, 처리 48시간 이후 80 ~ 100% 살선충율을 가질 수 있다.

    [수학식 1]


    나아가, 본 발명은 은사시나무 추출물을 유효성분으로 포함하는 천연 살선충 조성물을 제공한다.

    이 때, 상기 은사시나무 추출물은 앞서 언급한 은사시나무 추출물의 제조방법으로 제조된 추출물일 수 있다.

    구체적으로, 상기 은사시나무 추출물은 은사시나무를 열수 추출한 은사시나무 열수 추출물일 수 있고, 은사시나무를 알코올 용매로 추출한 알코올 추출물을 열수 추출한 은사시나무 열수 추출물일 수 있다.

    상기 알코올은 C 1 ~ C 4 알코올로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 알코올을 사용할 수 있으나, 바람직하게 에탄올을 사용할 수 있다.

    또한, 상기 은사시나무 추출물은 은사시나무를 알코올 용매로 추출한 알코올 추출물을 열수 추출한 은사시나무 열수 추출물을 클로로포름을 포함하는 추출용매로 분획한 분획물일 수 있고, 은사시나무를 알코올에 침지시킨 후, 열수 추출한 은사시나무 열수 추출물을 클로로포름을 포함하는 추출용매로 분획한 분획물일 수 있다.

    상기 알코올은 C 1 ~ C 4 알코올로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 알코올을 사용할 수 있으나, 바람직하게 에탄올을 사용할 수 있다.

    또한, 본 발명의 살선충 조성물의 은사시나무는 은사시나무의 형성층을 포함할 수 있으며, 바람직하게는 은사시나무의 형성층을 포함하고, 은사시나무의 수피 및 목질부 중 적어도 하나를 더 포함할 수 있다.

    또한, 본 발명의 천연 살선충 조성물은 소나무재선충( Bursaphelenchus xylophilus )에 대한 살선충 활성을 가질 수 있으며, 바람직하게는 하기 수학식 1에 의거할 때, 처리 48시간 이후 80 ~ 100% 살선충율을 보일 수 있다.

    [수학식 1]


    한편, 본 발명은 앞서 언급한 천연 살선충 조성물을 포함하는 천연 살선충제를 제공하며, 상기 천연 살선충제는 소나무재선충( Bursaphelenchus xylophilus )에 대한 살선충 활성을 가질 수 있다.

    하기의 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 구체적으로 설명하기로 하지만, 하기 실시예가 본 발명의 범위를 제한하는 것은 아니며, 이는 본 발명의 이해를 돕기 위한 것으로 해석되어야 할 것이다.

    실시예

    준비예 1 : 은사시나무의 수피, 형성층을 포함한 수피, 형성층을 포함한 목질부 및 목질부 제조

    수원 소재의 국립산림과학원 산림유전자원부의 은사시나무 수간을 채취한 후, 수피, 형성층을 포함한 수피, 형성층을 포함한 목질부 및 목질부로 분리하였다.

    준비예 2 : 소나무재선충의 분리 및 동정

    소나무재선충 감염목의 목재를 버크만깔대기법을 이용하여 선충을 분리하였으며, 분리된 선충 중에서 소나무재선충의 형태 및 유전적 특성을 이용하여 소나무재선충을 순수 분리하였다.

    순수 분리된 소나무재선충은 균핵이 형성되지 않은 잿빛곰팡이병균( Botrytis cineria )을 미리 순수 배양한 후에 그 배지에 계대배양하여 생육시켰다.

    실시예 1

    적당한 크기로 분쇄된 준비예 1의 은사시나무의 수간에서 분리된 형성층을 포함한 수피 60g에 증류수 500ml를 가하고, 121℃에서 20분씩 3회 반복 추출하였고, 여과지로 여과하였으며, 이를 감압 농축하여 은사시나무 열수 추출물을 제조하였다.

    실시예 2

    실시예 1과 동일한 방법으로 은사시나무 열수 추출물을 제조하였다.

    다만, 준비예 1의 은사시나무의 수간에서 분리된 형성층을 포함한 수피 대신 준비예 1의 은사시나무의 수간에서 분리된 형성층을 포함한 목질부를 사용하였다.

    실시예 3

    실시예 1과 동일한 방법으로 은사시나무 열수 추출물을 제조하였다.

    다만, 준비예 1의 은사시나무의 수간에서 분리된 형성층을 포함한 수피 대신 준비예 1의 은사시나무의 수간에서 분리된 수피 10g을 사용하였다.

    실시예 4

    실시예 1과 동일한 방법으로 은사시나무 열수 추출물을 제조하였다.

    다만, 준비예 1의 은사시나무의 수간에서 분리된 형성층을 포함한 수피 대신 준비예 1의 은사시나무의 수간에서 분리된 목질부 50g을 사용하였다.

    비교예 1

    적당한 크기로 분쇄된 준비예 1의 은사시나무의 수간에서 분리된 형성층을 포함한 수피 60g에 에탄올 500ml를 가하고, 상온인 20℃에서 48시간씩 3회 반복 추출하였고, 여과지로 여과하였으며, 이를 감압 농축하여 은사시나무 에탄올 추출물을 제조하였다.

    실험예 1

    준비예 2의 소나무재선충을 멸균 증류수에 현탁하고, 상기 소나무재선충 약 100마리가 포함되어 있는 현탁액 0.5mL씩 멸균된 용기에 옮긴다.

    상기 용기에 각각 실시예 1 ~ 4 및 비교예에서 제조된 추출물 0.5mL을 첨가하여 살선충 활성 검정을 실시하였다.

    살선충 활성 검정은 상기 용기를 현미경으로 관찰하면서 죽은 소나무재선충 수를 확인하였으며, 핀셋을 이용하여 생사 여부를 확인하면서 24시간 마다 총 3회 측정하였다.

    살선충율(%)은 하기 수학식 1을 통해 측정하여, 그 결과를 표 1에 기재하였다.

    [수학식 1]

    선충
    살선충율(%)
    실시예 1 실시예 2 실시예 3 실시예 4 비교예 1
    소나무
    재선충
    24시간 후 91 90 0 0 0
    48시간 후 95 94 0 0 0
    72시간 후 99 100 0 0 0

    표 1과 같이 준비예 1의 은사시나무의 수간에서 분리된 형성층을 포함한 수피를 사용하여 은사시나무 열수 추출물을 제조한 실시예 1 및 준비예 1의 은사시나무의 수간에서 분리된 형성층을 포함한 목질부를 사용하여 은사시나무 열수 추출물을 제조한 실시예 2는 처리 48시간 후에는 90% 이상의 설선충율을 보이고, 처리 72시간 후에는 99% 이상의 살선충율을 보임을 확인할 수 있었다.

    또한, 준비예 1의 은사시나무의 수간에서 분리된 수피를 사용하여 은사시나무 열수 추출물을 제조한 실시예 3, 준비예 1의 은사시나무의 수간에서 분리된 목질부를 사용하여 은사시나무 열수 추출물을 제조한 실시예 4 및 준비예 1의 은사시나무의 수간에서 분리된 형성층을 포함한 수피를 에탄올로 추출한 비교예 1은 소나무재선충에 대한 살선충 활성을 보이지 않음을 확인할 수 있었다.

    실시예 5

    적당한 크기로 분쇄된 준비예 1의 은사시나무의 수간에서 분리된 형성층을 포함한 수피 60g에 에탄올 500ml를 가하고, 상온인 20℃에서 48시간씩 3회 반복 추출하였고, 여과지로 여과하였으며, 이를 감압 농축하여 은사시나무 에탄올 추출물을 제조하였다.

    상기 에탄올 추출물에 증류수 500ml를 가하고, 121℃에서 20분씩 3회 반복 추출하였고, 여과지로 여과하였으며, 이를 감압 농축하여 은사시나무 열수 추출물을 제조하였다.

    실시예 6

    실시예 5와 동일한 방법으로 은사시나무 열수 추출물을 제조하였다.

    다만, 준비예 1의 은사시나무의 수간에서 분리된 형성층을 포함한 수피 대신 준비예 1의 은사시나무의 수간에서 분리된 형성층을 포함한 목질부를 사용하였다.

    실시예 7

    실시예 5와 동일한 방법으로 은사시나무 열수 추출물을 제조하였다.

    다만, 준비예 1의 은사시나무의 수간에서 분리된 형성층을 포함한 수피 대신 준비예 1의 은사시나무의 수간에서 분리된 수피 10g을 사용하였다.

    실시예 8

    실시예 5와 동일한 방법으로 은사시나무 열수 추출물을 제조하였다.

    다만, 준비예 1의 은사시나무의 수간에서 분리된 형성층을 포함한 수피 대신 준비예 1의 은사시나무의 수간에서 분리된 목질부 50g을 사용하였다.

    실험예 2

    준비예 2의 소나무재선충을 멸균 증류수에 현탁하고, 상기 소나무재선충 약 100마리가 포함되어 있는 현탁액 0.5mL씩 멸균된 용기에 옮긴다.

    상기 용기에 각각 실시예 5 ~ 8에서 제조된 추출물 0.5mL을 첨가하여 살선충 활성 검정을 실시하였다.

    살선충 활성 검정은 상기 용기를 현미경으로 관찰하면서 죽은 소나무재선충 수를 확인하였으며, 핀셋을 이용하여 생사 여부를 확인하면서 24시간 마다 총 3회 측정하였다.

    살선충율(%)은 하기 수학식 1을 통해 측정하여, 그 결과를 표 2에 기재하였다.

    [수학식 1]


    선충
    살선충율(%)
    실시예 5 실시예 6 실시예 7 실시예 8

    소나무재선충
    24시간 후 90 87 0 0
    48시간 후 96 92 0 0
    72시간 후 100 98 0 0

    표 2와 같이 준비예 1의 은사시나무의 수간에서 분리된 형성층을 포함한 수피를 에탄올 용매로 추출하고 다시 열수 추출하여 제조된 은사시나무 열수 추출물인 실시예 5 및 준비예 1의 은사시나무의 수간에서 분리된 형성층을 포함한 목질부를 에탄올 용매로 추출하고 다시 열수 추출하여 제조된 은사시나무 열수 추출물인 실시예 6은 처리 48시간 후에는 85% 이상의 설선충율을 보이고, 처리 72시간 후에는 98% 이상의 살선충율을 보임을 확인할 수 있었다.

    달리 말하면, 실시예 5 및 실시예 6에서 제조된 은사시나무 열수 추출물은 실시예 1 및 실시예 2에서 제조된 은사시나무 열수추출물과 유사한 소나무재선충에 대한 살선충 활성을 보임을 확인할 수 있었다.

    실시예 9

    9-1. 은사시나무 열수 추출물 제조

    적당한 크기로 분쇄된 준비예 1의 은사시나무의 수간에서 분리된 형성층을 포함한 수피 60g에 에탄올 500ml를 가하고, 상온인 20℃에서 48시간씩 3회 반복 추출하였고, 여과지로 여과하였으며, 이를 감압 농축하여 은사시나무 에탄올 추출물을 제조하였다.

    상기 에탄올 추출물에 증류수 500ml를 가하고, 121℃에서 20분씩 3회 반복 추출하였고, 여과지로 여과하였으며, 이를 감압 농축하여 은사시나무 열수 추출물을 제조하였다.

    9-2. 은사시나무 열수 추출물의 분획물 제조

    실시예 9-1에서 제조된 은사시나무 열수 추출물을 클로로포름 유기용매로 용매분획하고, 이를 3회 반복 추출하였고, 여과지로 여과하였으며, 이를 감압 농축하여 은사시나무 분획물을 제조하였다.

    실시예 10

    실시예 9와 동일한 방법으로 은사시나무 분획물을 제조하였다.

    다만, 준비예 1의 은사시나무의 수간에서 분리된 형성층을 포함한 수피 대신 준비예 1의 은사시나무의 수간에서 분리된 형성층을 포함한 목질부를 사용하였다.

    실시예 11

    11-1. 은사시나무 열수 추출물 제조

    적당한 크기로 분쇄된 준비예 1의 은사시나무의 수간에서 분리된 형성층을 포함한 수피 60g에 에탄올 500ml를 가하고, 상온인 20℃에서 48시간씩 3회 반복 추출하였고, 여과지로 여과하였으며, 이를 감압 농축하여 은사시나무 에탄올 추출물을 제조하였다.

    상기 에탄올 추출물에 증류수 500ml를 가하고, 121℃에서 20분씩 3회 반복 추출하였고, 여과지로 여과하였으며, 이를 감압 농축하여 은사시나무 열수 추출물을 제조하였다.

    11-2. 은사시나무 열수 추출물의 분획물 제조

    실시예 11-1에서 제조된 은사시나무 열수 추출물을 헥세인(Hexane) 유기용매로 용매분획하고, 이를 3회 반복 추출하였고, 여과지로 여과하였으며, 이를 감압 농축하여 은사시나무 분획물을 제조하였다.

    실시예 12

    12-1. 은사시나무 열수 추출물 제조

    적당한 크기로 분쇄된 준비예 1의 은사시나무의 수간에서 분리된 형성층을 포함한 수피 60g에 에탄올 500ml를 가하고, 상온인 20℃에서 48시간씩 3회 반복 추출하였고, 여과지로 여과하였으며, 이를 감압 농축하여 은사시나무 에탄올 추출물을 제조하였다.

    상기 에탄올 추출물에 증류수 500ml를 가하고, 121℃에서 20분씩 3회 반복 추출하였고, 여과지로 여과하였으며, 이를 감압 농축하여 은사시나무 열수 추출물을 제조하였다.

    12-2. 은사시나무 열수 추출물의 분획물 제조

    실시예 12-1에서 제조된 은사시나무 열수 추출물을 에틸 아세테이트(Ethyl acetate) 유기용매로 용매분획하고, 이를 3회 반복 추출하였고, 여과지로 여과하였으며, 이를 감압 농축하여 은사시나무 분획물을 제조하였다.

    실험예 3

    준비예 2의 소나무재선충을 멸균 증류수에 현탁하고, 상기 소나무재선충 약 100마리가 포함되어 있는 현탁액 0.5mL씩 멸균된 용기에 옮긴다.

    상기 용기에 각각 실시예 9 ~ 12에서 제조된 추출물 0.5mL을 첨가하여 살선충 활성 검정을 실시하였다.

    살선충 활성 검정은 상기 용기를 현미경으로 관찰하면서 죽은 소나무재선충 수를 확인하였으며, 핀셋을 이용하여 생사 여부를 확인하면서 24시간 마다 총 3회 측정하였다.

    살선충율(%)은 하기 수학식 1을 통해 측정하여, 그 결과를 표 3에 기재하였다.

    [수학식 1]


    선충
    살선충율(%)
    실시예 9 실시예 10 실시예 11 실시예 12

    소나무재선충
    24시간 후 99 98 0 0
    48시간 후 100 100 0 0
    72시간 후 100 100 0 0

    표 3과 같이 클로로포름 분획물인 실시예 9 및 실시예 10은 처리 48시간 후에는 100% 의 살선충율을 보임을 확인할 수 있었으며, 이는 은사시나무 열수 추출물인 실시예 1, 2, 5, 6 보다 소나무재선충( Bursaphelenchus xylophilus )에 대한 살선충 활성이 더 좋음을 확인할 수 있었다.

    또한, 헥세인(Hexane) 분획물인 실시예 11 및 에틸 아세테이트(Ethyl acetate) 분획물인 실시예 12는 소나무재선충( Bursaphelenchus xylophilus )에 대한 살선충 활성을 보이지 않음을 확인할 수 있었다.

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