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一种解 淀粉芽孢杆菌和淡紫紫孢菌有益微 生物复合菌剂的制备和应用

阅读：562发布：2020-05-14

专利汇可以提供一种解淀粉芽孢杆菌和淡紫紫孢菌有益微生物复合菌剂的制备和应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本发明涉及一种解淀粉芽孢杆菌和淡紫紫孢菌有益微生物复合菌剂的制备和应用，该有益微生物复合菌剂由解淀粉芽孢杆菌的发酵产物和淡紫紫孢菌发酵产物按体积比1:1-4混合而成。本发明所述的解淀粉芽孢杆菌保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.6462；所述的淡紫紫孢菌保藏于中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.13690。本发明利用有益微生物复合菌剂中主效有益微生物在土壤中的繁殖，有效抑制或杀灭根结线虫，通过有益微生物代谢产物的形成促进根系的生长，本发明菌剂中所述解淀粉芽孢杆菌的发酵产物中解淀粉芽孢杆菌的活孢子数≥100亿/ml；所述的淡紫紫孢菌的发酵产物中淡紫紫孢菌的活孢子数≥9亿/ml。，下面是一种解淀粉芽孢杆菌和淡紫紫孢菌有益微生物复合菌剂的制备和应用专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种解淀粉芽孢杆菌和淡紫紫孢菌有益微生物复合菌剂的制备和应用，其特征是：
所述有益微生物复合菌剂由解淀粉芽孢杆菌的发酵产物和淡紫紫孢菌发酵产物按体积比
1:1-4混合而成；所述的解淀粉芽孢杆菌保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.6462；所述的淡紫紫孢菌保藏于中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.13690。
2.根据权利要求1所述的一种解淀粉芽孢杆菌和淡紫紫孢菌有益微生物复合菌剂的制备和应用，其特征是：所述解淀粉芽孢杆菌的发酵产物中解淀粉芽孢杆菌的活孢子数≥100亿/ml；；所述的淡紫紫孢菌的发酵产物中淡紫紫孢菌的活孢子数≥9亿/ml 。
3.根据权利要求1所述的一种解淀粉芽孢杆菌和淡紫紫孢菌有益微生物复合菌剂的制备和应用，其特征是：所述防治根结线虫并促进根系生长的有益微生物有益微生物复合菌剂为液体菌剂。
4.根据权利要求1-3任一所述的防治根结线虫并促进根系生长的有益微生物有益微生物复合菌剂的制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
(一)解淀粉芽孢杆菌发酵产物的制备：
①菌种活化扩增培养：在500mL锥形瓶中装入100mL无菌水，挑取解淀粉芽孢杆菌斜面菌种于锥形瓶中，摇匀，取5-10mL液体至500mL克氏瓶中，克氏瓶中事先装入100mL牛肉膏蛋白胨培养基，110℃-124℃湿热灭菌40-55min，将克氏瓶置于27℃-32℃条件下培养36-48h，得活化菌群；
②一级种子液的制备：将上述制得的活化菌群的克氏瓶取出，倒入10-150mL无菌水，刮取菌胎制成菌悬液，将其全部倒入装有100-300mL且温度为6℃的无菌水的种子瓶中，得一级种子液；
③二级种子液的制备：在300L 发酵罐中装有150L二级种子培养基，将100-300mL一级种子液接种于二级种子培养基中；在28℃-36℃培养24-36h，得到二级种子培养液；
④发酵罐发酵：在3000L发酵罐中装入发酵罐容积50％-60％的解淀粉芽孢杆菌发酵培养基，110℃-124℃湿热灭菌30-50min，将150L或200L二级种子液全部接种于解淀粉芽孢杆菌活菌发酵培养基中，控制罐压0.03MPa-0.06MPa，在29℃-37℃培养48-72h后，当解淀粉芽孢杆菌的发酵产物中解淀粉芽孢杆菌的活孢子数可达100亿/ml以上，即可停止发酵出料得到解淀粉芽孢杆菌发酵产物；
(二)淡紫紫孢菌发酵产物的制备：
①摇瓶扩增培养：将经斜面活化的菌株接种于摇瓶培养基中进行种子摇瓶培养，培养条件为：转速170-210r/min，温度28℃-31℃，培养12-24h，制得摇瓶培养液；
②一级种子培养：500mL茄子瓶中装有100mL一级种子培养基，110℃-124℃湿热灭菌
40-55min，将上述淡紫紫孢菌摇瓶培养液全部接种于一级种子培养基中，在28℃-31℃培养
24-48h，得一级种子液；
③二级种子培养：在300L发酵罐中装有150L二级种子培养基，110℃-124℃湿热灭菌
40-55min，将100-300mL一级种子液接种于二级种子培养基中；在28℃-31℃培养24-48h，得二级种子液；
④发酵：在3000L发酵罐中装入发酵罐容积50％-60％的淡紫紫孢菌发酵培养基，110℃-124℃湿热灭菌40-55min，将150L或200L的二级种子液接种于淡紫紫孢菌活菌发酵培养基中，控制罐压0.03MPa-0.06MPa，在28℃-31℃培养48-72h后，当淡紫紫孢菌的发酵产物中淡紫紫孢菌的活孢子数可达90亿/ml以上，即可结束发酵出料得到淡紫紫孢菌发酵产物；
(四)将解淀粉芽孢杆菌的发酵产物和淡紫紫孢菌的发酵产物按体积比1:1-4混合，得到所述防治根结线虫及根系促生的有益微生物有益微生物复合菌剂。
5.根据权利要求4所述的防治根结线虫及根系促生的有益微生物有益微生物复合菌剂的制备方法，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌所采用的牛肉膏蛋白胨培养基的成分具体为，按重量百分比计为：牛肉膏0.3％-2.7％，蛋白胨1.0％-3.5％，氯化钠0.4-1.0％，营养琼脂1.3％-2.3％，余量为水，培养基pH为6.7-7.5。
6.根据权利要求4所述的防治根结线虫及根系促生的有益微生物复合菌剂的制备方法，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌所采用的二级种子培养基的成分具体为，按重量百分比计为：葡萄糖0.6％-2.2％，玉米粉1.3％-5.0％，豆粕粉1.0％-5.0％，磷酸氢二钠0.3‰-
0.6‰，磷酸二氢钠0.4‰-4.0‰，消泡剂0.3‰-1.9‰，余量为水，培养基pH调为6.7-7.5，并在110℃-124℃湿热灭菌25-45min备用。
7.根据权利要求4所述的防治根结线虫及根系促生的有益微生物复合菌剂的制备方法，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌所采用的发酵培养基的成分具体为，按重量百分比计为：葡萄糖0.6％-2.0％，玉米粉1.5％-5.0％，豆粕粉1.0％-5.0％，磷酸氢二钠0.3‰-
0.6‰，磷酸二氢钠0.4‰-4.0‰，消泡剂0.1‰-1.5‰，余量为水，培养基的pH调为6.7-7.5，并在110℃-124℃湿热灭菌25-45min。
8.根据权利要求4所述的防治根结线虫及根系促生的有益微生物复合菌剂的制备方法，其特征在于，所述淡紫紫孢菌培养时的摇瓶培养基的成分具体为，按重量百分比计为：
玉米淀粉0.7％-2.0％，豆粕粉0.5％-1.0％，白糖0.8％-3.2％，麸皮粉1.0％-3.0％，磷酸二氢钾0.4‰-1.8‰，三氯化铁0.3％-1.5％，硫酸镁0.8‰-2.3‰，余量为水，110℃-124℃湿热灭菌25-45min备用；
所述淡紫紫孢菌培养时的一级种子培养基的具体成分，按重量百分比计为：玉米淀粉
0.8％-2.2％，豆粕粉0.1％-1.5％，白糖1.0％-3.0％，麸皮粉1.0％-3.0％，磷酸二氢钾
0.3‰-1.5‰，三氯化铁0.3％-1.5％，硫酸镁0.8‰-2.2‰，余量为水；
所述淡紫紫孢菌培养时的二级种子培养基的具体成分，按重量百分比计为：玉米淀粉
0.8％-2.2％，豆粕粉0.1％-1.5％，白糖1.0％-3.0％，麸皮粉1.5％-3.0％，磷酸二氢钾
0.3‰-1.5‰，三氯化铁0.3％-1.5％，硫酸镁0.3‰-1.8‰，消泡剂0.1‰-1.5‰，余量为水；
所述淡紫紫孢菌培养时的发酵培养基，按重量百分比计为：玉米淀粉0.8％-2.2％，豆粕粉0.1％-1.5％，白糖1.0％-3.0％，麸皮粉1.5％-3.0％，磷酸二氢钾0.3‰-1.5‰，三氯化铁0.3％-1.5％，硫酸镁0.5‰-2‰，余量为水。
9.根据权利要求1所述的防治根结线虫及根系促生的有益微生物复合菌剂的应用，其特征在于，将所述有益微生物复合菌剂用水稀释后，结合现代滴灌技术用于防治根结线虫及根系促生中的应用。

说明书全文

一种解 淀粉芽孢杆菌和淡紫紫孢菌有益微 生物复合菌剂的制

备和应用

技术领域

[0001] 本发明属于微生物技术领域或者生物防治技术领域，涉及一种解淀粉芽孢杆菌和淡紫紫孢菌有益微生物复合菌剂的制备和应用。

背景技术

[0002] 根结线虫(Meloidogyne spp.)是一类在土壤中存活并且在植物内寄生的有害线虫，寄主范围广泛，能侵染多种农作物，造成严重的发生、流行和危害。每年造成全球农作物数千亿美元的损失。根结线虫除直接危害外，还能传播细菌和真菌病害，造成许多经济作物的更大损失。在我国，土壤传播的根结线虫病危害日趋严重，已经造成农业丰产丰收的主要障碍。

[0003] 目前，国内外防治根结线虫病多采用化学防治、轮作及抗病品种，但效果均不太理想，且存在诸多弊端。如目前使用的化学杀线虫剂多为剧毒或高毒、高残留农药，对土壤微生物、作物、水源和大气层带来严重污染或破坏，同时病菌和根结线虫抗药性问题也日益突出，而且药物在植物体内残留会间接对人类造成危害。

[0004] 解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)是一种重要的有益菌和生防菌株，其生防机制主要包括竞争作用、拮抗作用、促生作用和活性产物的杀菌及诱导植物产生系统抗性。淡紫紫孢菌(Purpureocillium lilacinum)能够有效防治根结线虫，是一种极具推广潜力的防治根结线虫的习居菌和功能菌。淡紫紫孢菌能破坏根结线虫的虫卵结构，同化虫卵物质，使线虫不能正常孵化。

[0005] 针对目前上述问题以及绿色农业的发展需要，本发明一种解淀粉芽孢杆菌和淡紫紫孢菌有益微生物的复合菌剂，利用有益微生物复合菌剂中主效有益微生物在土壤中的大面积繁殖，有效抑制或杀灭根结线虫，通过有益微生物代谢产物的不断形成促进根系的生长，可有效的解决上述问题，并且可以避免化学防治、轮作及抗病品种等所带来的更达问题。如化学防治所带来的化学农药残留、环境污染、病菌和线虫抗药性、人体伤害。本发明是一种高效绿色无污染的环保型有益微生物复合菌剂。

发明内容

[0006] 本发明的目的是针对现有技术中的根结线虫防治的不足，提供一种解淀粉芽孢杆菌和淡紫紫孢菌有益微生物复合菌剂的制备和应用，本发明方法操作简单，防治根结线虫及根系促生效果明显，显著提高作物产量和品质。本发明利用有益微生物复合菌剂中主要有益微生物在土壤中的大面积繁殖，有效抑制或杀灭根结线虫，为有益微生物的繁殖和发育提供有力环境，通过有益微生物代谢产物的不断形成有效防治根结线虫及根系促生的发生。

[0007] 为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

[0008] 一种解淀粉芽孢杆菌和淡紫紫孢菌有益微生物复合菌剂的制备和应用，所述有益微生物复合菌剂由解淀粉芽孢杆菌的发酵产物和淡紫紫孢菌的发酵产物按体积比1:1-4混合而成；

[0009] 所述的解淀粉芽孢杆菌保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.6462；

[0010] 所述的淡紫紫孢菌保藏于中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.13690。

[0011] 优选的，所述解淀粉芽孢杆菌的发酵产物中解淀粉芽孢杆菌的活孢子数≥100亿/ml；

[0012] 优选的，所述淡紫紫孢菌的发酵产物中淡紫紫孢菌的活孢子数≥90亿/ml；

[0013] 优选的，所述防治根结线虫及根系促生的有益微生物复合菌剂为液体菌剂。

[0014] 作为优选的技术方案：

[0015] 本发明还提供了上述的防治根结线虫及根系促生的有益微生物复合菌剂的制备方法，具体包括以下步骤：

[0016] 1、解淀粉芽孢杆菌发酵产物的制备：

[0017] ①菌种活化扩增培养：在500mL锥形瓶中装入100mL无菌水，挑取解淀粉芽孢杆菌斜面菌种于锥形瓶中，摇匀，取5-10mL液体至500mL克氏瓶中，克氏瓶中事先装入100mL牛肉膏蛋白胨培养基，110℃-124℃湿热灭菌40-55min，将克氏瓶置于27℃-32℃条件下培养36-48h，得活化菌群；

[0018] ②一级种子液的制备：将上述制得的活化菌群的克氏瓶取出，倒入10-150mL无菌水，刮取菌胎制成菌悬液，将其全部倒入装有100-300mL且温度为6℃的无菌水的种子瓶中，得一级种子液；

[0019] ③二级种子液的制备：在300L 发酵罐中装有150L二级种子培养基，将100-300mL一级种子液接种于二级种子培养基中；在28℃-36℃培养24-36h，得到二级种子培养液；

[0020] ④发酵罐发酵：在3000L发酵罐中装入发酵罐容积50％-60％的解淀粉芽孢杆菌发酵培养基，110℃-124℃湿热灭菌30-50min，将150L或200L二级种子液全部接种于解淀粉芽孢杆菌活菌发酵培养基中，控制罐压0.03MPa-0.06MPa，在29℃-37℃培养48-72h后，当解淀粉芽孢杆菌的发酵产物中解淀粉芽孢杆菌的活孢子数可达100亿/ml以上，即可停止发酵出料得到解淀粉芽孢杆菌发酵产物；

[0021] 2、淡紫紫孢菌发酵产物的制备：

[0022] ①摇瓶扩增培养：将经斜面活化的菌株接种于摇瓶培养基中进行种子摇瓶培养，培养条件为：转速170-210r/min，温度28℃-31℃，培养12-24h，制得摇瓶培养液；

[0023] ②一级种子培养：500mL茄子瓶中装有100mL一级种子培养基，110℃-124℃湿热灭菌40-55min，将上述淡紫紫孢菌摇瓶培养液全部接种于一级种子培养基中，在28℃-31℃培养24-48h，得一级种子液；

[0024] ③二级种子培养：在300L发酵罐中装有150L二级种子培养基，110℃-124℃湿热灭菌40-55min，将100-300mL一级种子液接种于二级种子培养基中；在28℃-31℃培养24-48h，得二级种子液；

[0025] ④发酵：在3000L发酵罐中装入发酵罐容积50％-60％的淡紫紫孢菌发酵培养基，110℃-124℃湿热灭菌40-55min，将150L或200L的二级种子液接种于淡紫紫孢菌活菌发酵培养基中，控制罐压0.03MPa-0.06MPa，在28℃-31℃培养48-72h后，当淡紫紫孢菌的发酵产物中淡紫紫孢菌的活孢子数可达90亿/ml以上，即可停止发酵出料得到淡紫紫孢菌发酵产物；

[0026] 3、将解淀粉芽孢杆菌的发酵产物和淡紫紫孢菌的发酵产物按体积比1:1-4混合，得到所述防治根结线虫及根系促生的有益微生物复合菌剂。

[0027] 优选的，所述解淀粉芽孢杆菌所采用的牛肉膏蛋白胨培养基的成分具体为，按重量百分比计为：牛肉膏0.3％-2.7％，蛋白胨1.0％-3.5％，氯化钠0.4-1.0％，营养琼脂1.3％-2.3％，余量为水，培养基pH为6.7-7.5。

[0028] 优选的，所述解淀粉芽孢杆菌所采用的二级种子培养基的成分具体为，按重量百分比计为：葡萄糖0.6％-2.2％，玉米粉1.3％-5.0％，豆粕粉1.0％-5.0％，磷酸氢二钠0.3‰-0.6‰，磷酸二氢钠0.4‰-4.0‰，消泡剂0.3‰-1.9‰，余量为水，培养基pH调为6.7-
7.5，并在110℃-124℃湿热灭菌25-45min备用。

[0029] 优选的，所述解淀粉芽孢杆菌所采用的发酵培养基的成分具体为，按重量百分比计为：葡萄糖0.6％-2.0％，玉米粉1.5％-5.0％，豆粕粉1.0％-5.0％，磷酸氢二钠0.3‰-0.6‰，磷酸二氢钠0.4‰-4.0‰，消泡剂0.1‰-1.5‰，余量为水，培养基的pH调为6.7-7.5，并在110℃-124℃湿热灭菌25-45min。

[0030] 优选的，所述淡紫紫孢菌培养时的摇瓶培养基的成分具体为，按重量百分比计为：玉米淀粉0.7％-2.0％，豆粕粉0.5％-1.0％，白糖0.8％-3.2％，麸皮粉1.0％-3.0％，磷酸二氢钾0.4‰-1.8‰，三氯化铁0.3％-1.5％，硫酸镁0.8‰-2.3‰，余量为水，110℃-124℃湿热灭菌25-45min备用；

[0031] 所述淡紫紫孢菌培养时的一级种子培养基的具体成分，按重量百分比计为：玉米淀粉0.8％-2.2％，豆粕粉0.1％-1.5％，白糖1.0％-3.0％，麸皮粉1.0％-3.0％，磷酸二氢钾0.3‰-1.5‰，三氯化铁0.3％-1.5％，硫酸镁0.8‰-2.2‰，余量为水；

[0032] 所述淡紫紫孢菌培养时的二级种子培养基的具体成分，按重量百分比计为：玉米淀粉0.8％-2.2％，豆粕粉0.1％-1.5％，白糖1.0％-3.0％，麸皮粉1.5％-3.0％，磷酸二氢钾0.3‰-1.5‰，三氯化铁0.3％-1.5％，硫酸镁0.3‰-1.8‰，消泡剂0.1‰-1.5‰，余量为水；

[0033] 所述淡紫紫孢菌培养时的发酵培养基，按重量百分比计为：玉米淀粉0.8％-2.2％，豆粕粉0.1％-1.5％，白糖1.0％-3.0％，麸皮粉1.5％-3.0％，磷酸二氢钾0.3‰-
1.5‰，三氯化铁0.3％-1.5％，硫酸镁0.5‰-2‰，余量为水。

[0034] 本发明还提供了有益微生物复合菌剂的应用，将所述有益微生物复合菌剂用水稀释400倍后，结合现代滴灌技术用于防治根结线虫及根系促生中的应用。

[0035] 有益效果：

[0036] 本发明利用有益微生物复合菌剂中主效有益微生物在土壤中的大面积繁殖，有效抑制或杀灭根结线虫，通过有益微生物代谢产物的不断形成促进根系的生长，显著提高作物的产量和品质。本发明一种解淀粉芽孢杆菌和淡紫紫孢菌有益微生物复合菌剂具有无毒无害、无残留、不抑制生长以及用量少的特点，促进植物对养分的吸收，减少化肥农药使用量，有效降低作物农残，保护环境的同时达到防治土传病害、增质增产的效果。

具体实施方式

[0037] 下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。

[0038] 此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

[0039] 实施例1

[0040] 一种解淀粉芽孢杆菌和淡紫紫孢菌有益微生物复合菌剂的制备和应用，所述有益微生物复合菌剂由解淀粉芽孢杆菌的发酵产物和淡紫紫孢菌的发酵产物按体积比1：3的比例复配而成的。

[0041] 所述的解淀粉芽孢杆菌保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.6462；

[0042] 所述的淡紫紫孢菌保藏于中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.13690。

[0043] 本发明还提供了上述的防治根结线虫及根系促生的有益微生物复合菌剂的制备方法，具体包括以下步骤：

[0044] (一)解淀粉芽孢杆菌发酵产物的制备：

[0045] ①菌种活化扩增培养：在500mL锥形瓶中装入100mL无菌水，挑取解淀粉芽孢杆菌斜面菌种于锥形瓶中，摇匀，取5-10mL液体至500mL克氏瓶中，克氏瓶中事先装入100mL牛肉膏蛋白胨培养基，110℃-124℃湿热灭菌40-55min，将克氏瓶置于27℃-32℃条件下培养36-48h，得活化菌群；

[0046] ②一级种子液的制备：将上述制得的活化菌群的克氏瓶取出，倒入10-150mL无菌水，刮取菌胎制成菌悬液，将其全部倒入装有100-300mL且温度为6℃的无菌水的种子瓶中，得一级种子液；

[0047] ③二级种子液的制备：在300L发酵罐中装有150L二级种子培养基，将100-300mL一级种子液接种于二级种子培养基中；在28℃-36℃培养24-36h，得到二级种子培养液；

[0048] ④发酵罐发酵：在3000L发酵罐中装入发酵罐容积50％-60％的解淀粉芽孢杆菌发酵培养基，110℃-124℃湿热灭菌30-50min，将150L或200L二级种子液全部接种于解淀粉芽孢杆菌活菌发酵培养基中，控制罐压0.03MPa-0.06MPa，在29℃-37℃培养48-72h后，当解淀粉芽孢杆菌的发酵产物中解淀粉芽孢杆菌的活孢子数可达100亿/ml以上，即可停止发酵出料得到解淀粉芽孢杆菌发酵产物；

[0049] 其中，所述活化培养的解淀粉芽孢杆菌所采用的牛肉膏蛋白胨培养基的成分具体为，按重量百分比计为：牛肉膏1.8％，蛋白胨2.5％，氯化钠0.8％，营养琼脂2.0％，余量为水，培养基pH为6.8。

[0050] 其中，所述解淀粉芽孢杆菌所采用的二级种子培养基的成分具体为，按重量百分比计为：葡萄糖1.0％，玉米粉3.0％，豆粕粉2.5％，磷酸氢二钠0.4‰，磷酸二氢钠2.5‰，消泡剂1.5‰，余量为水，培养基pH调为7.2，并在110℃-124℃湿热灭菌25-45min备用。

[0051] 其中，所述解淀粉芽孢杆菌所采用的发酵培养基的成分具体为，按重量百分比计为：葡萄糖1.0％，玉米粉3.0％，豆粕粉2.5％，磷酸氢二钠0.5‰，磷酸二氢钠3.0‰，消泡剂1.0‰，余量为水，培养基的pH调为6.7，并在110℃-124℃湿热灭菌25-45min。

[0052] (二)淡紫紫孢菌发酵产物的制备：

[0053] ①摇瓶扩增培养：将经斜面活化的菌株接种于摇瓶培养基中进行种子摇瓶培养，培养条件为：转速170-210r/min，温度28℃-31℃，培养12-24h，制得摇瓶培养液；

[0054] ②一级种子培养：500mL茄子瓶中装有100mL一级种子培养基，110℃-124℃湿热灭菌40-55min，将上述淡紫紫孢菌摇瓶培养液全部接种于一级种子培养基中，在28℃-31℃培养24-48h，得一级种子液；

[0055] ③二级种子培养：在300L发酵罐中装有150L二级种子培养基，110℃-124℃湿热灭菌40-55min，将100-300mL一级种子液接种于二级种子培养基中；在28℃-31℃培养24-48h，得二级种子液；

[0056] ④发酵：在3000L发酵罐中装入发酵罐容积50％-60％的淡紫紫孢菌发酵培养基，110℃-124℃湿热灭菌40-55min，将150L或200L的二级种子液接种于淡紫紫孢菌活菌发酵培养基中，控制罐压0.03MPa-0.06MPa，在28℃-31℃培养48-72h后，当淡紫紫孢菌的发酵产物中淡紫紫孢菌的活孢子数可达90亿/ml以上，即可停止发酵出料得到淡紫紫孢菌发酵产物；

[0057] 其中，所述淡紫紫孢菌培养时的摇瓶培养基的成分具体为，按重量百分比计为：玉米淀粉1.0％，豆粕粉0.8％，白糖1.2％，麸皮粉1.5％，磷酸二氢钾1.0‰，三氯化铁1.0％，硫酸镁1.5‰，余量为水，110℃-124℃湿热灭菌25-45min备用；

[0058] 其中，所述淡紫紫孢菌培养时的一级种子培养基的具体成分，按重量百分比计为：玉米淀粉1.5％，豆粕粉0.7％，白糖1.5％，麸皮粉2.0％，磷酸二氢钾1.0‰，三氯化铁
0.8％，硫酸镁1.3‰，余量为水；其中，所述淡紫紫孢菌培养时的二级种子培养基的具体成分，按重量百分比计为：玉米淀粉1.0％，豆粕粉0.8％，白糖1.5％，麸皮粉2.5％，磷酸二氢钾1.0‰，三氯化铁1.0％，硫酸镁1.3‰，消泡剂1.0‰，余量为水；

[0059] 其中，所述淡紫紫孢菌培养时的发酵培养基，按重量百分比计为：玉米淀粉1.5％，豆粕粉0.9％，白糖1.5％，麸皮粉2.0％，磷酸二氢钾0.9‰，三氯化铁0.8％，硫酸镁1.5‰，余量为水。

[0060] (三)、将解淀粉芽孢杆菌的发酵产物和淡紫紫孢菌的发酵产物按体积比1:3混合，得到防治根结线虫及根系促生的有益微生物复合菌剂。

[0061] 实施例2

[0062] 1.一种解淀粉芽孢杆菌和淡紫紫孢菌有益微生物复合菌剂的制备和应用，所述有益微生物复合菌剂由解淀粉芽孢杆菌的发酵产物和淡紫紫孢菌的发酵产物按体积比1：1的比例复配而成的。

[0063] 2.试验处理：选取烟草为本次试验作物其品种为红花大金元，处理一：烤烟移栽时每株烟施用本发明的有益微生物液体菌剂5ml；处理二:烤烟移栽时每株烟市售生根液5ml；处理三：以清水作为对照。

[0064] 3.试验方法：在移栽之后，处理一：将实施例1中复配制得的有益微生物菌剂稀释400倍以后，用于滴灌技术进行处理；处理二：将生根液结合滴灌技术进行处理；处理三：以清水对照。在移栽60天之后挖根调查并记录根长、根重以及根茎个数。试验结果见表一。

[0065]

[0066] (附注：表中取值为所移栽的所有株数测量平均值。)

[0067] 实施例3

[0068] 一种解淀粉芽孢杆菌和淡紫紫孢菌有益微生物复合菌剂对根结线虫的毒杀作用，所述有益微生物复合菌剂由解淀粉芽孢杆菌的发酵产物和淡紫紫孢菌的发酵产物按体积比1：4的比例复配而成的。

[0069] 根结线虫的分离采用贝曼漏斗法进行，获得根结线虫的二龄幼虫。将分离的根结线虫添加到一种解淀粉芽孢杆菌和淡紫紫孢菌有益微生物复合菌剂的400倍稀释液中，以等量的水为对照，室温放置1h观测线虫存活和死亡数量。结果表明，在对照中，根结线虫二龄幼虫的死亡率是4.41％，而一种解淀粉芽孢杆菌和淡紫紫孢菌有益微生物复合菌剂的400倍稀释液的处理根结线虫二龄幼虫的死亡率达到了94.45％，由此可见，本发明一种解淀粉芽孢杆菌和淡紫紫孢菌有益微生物复合菌剂对根结线虫二龄幼虫具有强烈的毒杀效果。

[0070] 实施例4

[0071] 一种解淀粉芽孢杆菌和淡紫紫孢菌有益微生物复合菌剂对烟草根结线虫的防治作用，所述有益微生物复合菌剂由解淀粉芽孢杆菌的发酵产物和淡紫紫孢菌的发酵产物按体积比1：2的比例复配而成的。

[0072] 烤烟品种为红花大金元，根结线虫为病土接种，烤烟移栽时每株烟施用一种解淀粉芽孢杆菌和淡紫紫孢菌有益微生物复合液体菌剂5ml，以不施用制剂为对照。移栽后60天挖根调查烟草根结线虫病的病情指数，在移栽期间处理组用稀释了400倍菌液进行滴灌处理，对照组用清水进行滴灌处理。经过本发明一种解淀粉芽孢杆菌和淡紫紫孢菌有益微生物复合液体菌剂处理的烟草根结线虫病情指数为15.02，而没有施用该制剂的空白对照病情指数达到了78.32，由此可见，以解淀粉芽孢杆菌和淡紫紫孢菌为活性成分的有益微生物菌剂对烟草根结线虫病的防治效果为80.82％。

[0073] 防治效果(％)＝(对照病情指数-处理病情指数)/对照病情指数。从上述的对比结果可以看出，本发明一种解淀粉芽孢杆菌和淡紫紫孢菌有益微生物复合菌剂，不仅有效防治根结线虫，同时具有增产提质作用。

[0074] 本发明一种解淀粉芽孢杆菌和淡紫紫孢菌有益微生物复合菌剂具有无毒无害、无残留、不抑制生长以及用量少的特点，促进植物对养分的吸收，减少化肥农药使用量，有效降低作物农残，保护环境的同时达到防治土传病害、增质增产的效果。

[0075] 以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但不限于以上实施方式。本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术的技术人员在本发明披露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

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一种解淀粉芽孢杆菌和淡紫紫孢菌有益微生物复合菌剂的制备和应用

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