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类芽孢杆菌属物种甘露聚糖酶

阅读：582发布：2022-08-02

专利汇可以提供类芽孢杆菌属物种甘露聚糖酶专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本文公开了来自类芽孢杆菌属物种(Paenibacillus sp.)的甘露聚糖酶、编码该甘露聚糖酶的多核苷酸、含有该甘露聚糖酶的组合物、及其使用方法。含有甘露聚糖酶的组合物适合用作洗涤剂和用于清洁织物和硬质表面以及用于各种其他工业应用中。，下面是类芽孢杆菌属物种甘露聚糖酶专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，所述甘露聚糖酶变体或重组多肽或
其活性片段包含如下氨基酸序列，所述氨基酸序列包含选自以下的两种或更多种修饰：
(i)在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代：1、2、3、4、6、10、19、28、30、38、
59、60、61、62、63、66、67、68、70、71、74、75、78、80、82、93、97、103、111、124、129、131、135、
136、139、143、150、167、168、184、213、214、217、225、228、235、242、244、258、259、261、283、和284，和(ii)在位置298处的插入；或
(i)在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代：19、38、59、67、68、71、74、97、
129、167、168、184、225、228、235、242、244、258、和261；并且
其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸
序列相对应来编号。
2.如权利要求1所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，其中所述变体或重
组多肽或其活性片段包含选自以下的两种或更多种修饰：
(i)在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代：M1X、A2X、T3X、G4X、Y6X、N10X、P19X、G28X、S30X、T38X、S59X、L60X、Y61X、T62X、K63X、L66X、N67X、A68X、K70X、N71X、N74X、V75X、Q78X、K80X、I82X、K93X、N97X、V103X、E111X、I124X、Y129X、T131X、S135X、A136X、D139X、K143X、N150X、F167X、P168X、Q184X、N213X、K214X、A217X、G225X、T228X、Y235X、Q242X、K244X、S258X、G259X、N261X、D283X、和T284X，和(ii)在位置Z298.01X处的插入；其中X是任何氨基酸；或
(i)在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代：P19X、T38X、S59X、N67X、A68X、N71X、N74X、N97X、Y129X、F167X、P168X、Q184X、G225X T228X、Y235X、Q242X、K244X、S258X、和N261X，其中X是任何氨基酸；并且
其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸
序列相对应来编号。
3.如权利要求1或2所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，其中所述变体或
重组多肽或其活性片段包含选自以下的两种或更多种修饰：
(i)在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代：X1V、X1L、X2S、X3R、X4S、X6S、X6E、X10T、X10S、X19E、X28A、X28S、X30T、X38E、X59D、X59V、X60Q、X61W、X62E、X63R、X63L、X66V、X67D、X68S、X70R、X71D、X74E、X74S、X75L、X78D、X78H、X80T、X82M、X93R、X97D、X97L、X103I、X111D、X111S、X124V、X129M、X131A、X135L、X136L、X139M、X143Q、X143R、X150T、X167Y、X168A、X168S、X184D、X184L、X213A、X214I、X217P、X225C、X225P、X228V、X235L、X242L、X244L、X258D、X259P、X261Q、X261R、X283S、X284A、和X284E，和(ii)在位置Z298.01Q处的插入；其中X是任何氨基酸；或
(i)在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代：X19E、X38E、X59V、X67D、X68S、X71D、X74E、X74S、X97D、X97L、X129M、X167Y、X168A、X168S、X184D、X184L、X225C、X225P、X228V、X235L、X242L、X244L、X258D、X261Q、和X261R，其中X是任何氨基酸；并且
其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸
序列相对应来编号。
4.如前述权利要求中任一项所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，其中所
述变体或重组多肽或其活性片段包含如下氨基酸序列，所述氨基酸序列包含选自以下的两种或更多种修饰：
(i)在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代：M1V、M1L、A2S、T3R、G4S、Y6S、Y6E、N10T、N10S、P19E、G28A、G28S、S30T、T38E、S59D、S59V、L60Q、Y61W、T62E、K63R、K63L、L66V、N67D、A68S、K70R、N71D、N74E、N74S、V75L、Q78D、Q78H、K80T、I82M、K93R、N97D、N97L、V103I、E111D、E111S、I124V、Y129M、T131A、T135L、A136L、D139M、K143Q、K143R、N150T、F167Y、P168A、P168S、Q184D、Q184L、N213A、K214I、A217P、G225C、G225P、T228V、Y235L、Q242L、K244L、S258D、G259P、N261Q、N261R、D283S、T284A、和T284E，和(ii)在位置Z298.01Q处的插入；或
(i)在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代：P19E、T38E、S59D、S59V、N67D、A68S、N71D、N74E、N74S、N97D、N97L、Y129M、F167Y、P168A、P168S、Q184D、Q184L、G225C、G225P、T228V、Y235L、Q242L、K244L、S258D、N261Q、和N261R；并且其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号。
5.如前述权利要求中任一项所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，其中所
述两种或更多种修饰选自：
(i)在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代：129-244、129-143-244、38-
258、38-143-258、19-184、19-143-184、97-225、97-143-225、60-61、67-168、67-143-168、
63-71、63-71-143、228-235、和143-228-235；
(ii)在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代：Y129X-K244X、Y129X-K143X-
K244X.T38X-S258X、T38X-K143X-S258X、P19X-Q184X、P19X-K143X-Q184X、N97X-G225X、N97X-K143X-G225X、L60X-Y61X、N67X-P168X、N67X-K143X-P168X、K63X-N71X、K63X-N71X-K143X、T228X-Y235X、和K143X-T228X-Y235X，其中X是任何氨基酸；
(iii)在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代：X129M-X244L、X129M-
X143Q-X244L、X38E-X258D、X38E-X143Q-X258D、X19E-X184D、X19E-X143Q-X184D、X19E-X184L、X19E-X143Q-X184L、X97D-X225C、X97D-X143Q-X225C、X97D-X225P、X97D-X143Q-X225P、X60Q-X61W、X67D-X168S、X67D-X143Q-X168S、X63L-X71D、X63L-X71D-X143Q、X63R-X71D、X63R-X71D-X143Q、X228V-X235L、和X143Q-X228V-X235L，其中X是任何氨基酸；以及(iv)Y129M-K244L、Y129M-K143Q-K244L、T38E-S258D、T38E-K143Q-S258D、P19E-Q184D、P19E-K143Q-Q184D、P19E-Q184L、P19E-K143Q-Q184L、N97D-G225C、N97D-K143Q-G225C、L60Q-Y61W、N97D-G225P、N97D-K143Q-G225P、N67D-P168S、N67D-K143Q-P168S、K63L-N71D、K63L-N71D-K143Q、K63R-N71D、K63R-N71D-K143Q、T228V-Y235L、和K143Q-T228V-Y235L；
其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸
序列相对应来编号。
6.如前述权利要求中任一项所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，其中所
述两种或更多种修饰选自：
P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-Q184L-K244L-S258D-N261R；
N67D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-G259P；
P19E-K63L-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-G225C-T228V-K244L；
P19E-T38E-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R；
P19E-T38E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-G225C-K244L-S258D-N261R；
T38E-K63L-N71D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Q242L-K244L-S258D-N261R；
P19E-K63L-N71D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-K244L-S258D-G259P；N10T-T38E-S59V-
L60Q-K63R-L66V-A68S-N74S-V75L-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-A217P-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
P19E-T38E-N67D-N71D-N97D-Y129M-F167Y-Q184L-A217P-K244L-S258D-N261R；
T38E-K63L-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R；
P19E-T38E-N67D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R；
P19E-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L；
P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S-G225C-T228V-K244L-S258D-N261R；
P19E-T38E-N67D-N97D-Q184L-A217P-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R；
N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-N67D-N71D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-Y235L-
K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
P19E-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-
Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
P19E-T38E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-G225C-T228V-K244L-S258D-
N261R-Z298.01Q；
P19E-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111D-Y129M-Q184L-
G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-T38E-K63L-N71D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-
S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-K143Q-Q184L-A217P-G225C-T228V-
Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-T38E-S59V-L60Q-K63L-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-
K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-
T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-Q78D-K80T-N97D-I124V-Y129M-K143Q-
F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10S-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-N67D-Q78H-K80T-I82M-N97D-Y129M-K143Q-
F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-
G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
G4S-N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-
K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-T131A-
F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111D-Y129M-
P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K214I-G225C-
Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-
G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
M1V-P19E-S30T-T38E-T62E-N67D-N71D-Q78D-N97D-Y129M-K143R-F167Y-P168S-
Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-T284A-Z298.01Q；
Y6E-N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-N97D-E111S-Y129M-S135L-P168S-
Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261Q-D283S-Z298.01Q；
N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N71D-N97D-V103I-Y129M-K143Q-
P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
A2S-P19E-G28S-S30T-T38E-K63R-N67D-N71D-N74E-K93R-N97D-Y129M-N150T-P168S-
Q184L-N213A-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q；
M1L-N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-Q78D-N97D-Y129M-A136L-P168A-
Q184L-N213A-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
P19E-T38E-S59V-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-
K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-K63R-N67D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-
K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
T3R-N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-T62E-N67D-N71D-K93R-N97L-E111S-Y129M-D139M-
P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q；
N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-S59D-N67D-A68S-N71D-K93R-N97D-Y129M-K143Q-P168S-
Q184D-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-T284E-Z298.01Q；P19E-K63L-N71D-Y129M-
P168S-Q184L-G225C-K244L；P19E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-Q184L-
K244L；P19E-T38E-N67D-Y129M-P168S-Q184L-T228V-K244L；P19E-T38E-N67D-Y129M-
Q184L-K244L-S258D-N261R；P19E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R；
P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-G259P；K63L-N71D-Y129M-
K143R-P168S-Q184L-G225C-T228V-K244L-S258D-G259P；或P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R，其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号。
7.如前述权利要求中任一项所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，其中所
述两种或更多种修饰选自：
P19E-T38E-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R；
N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-N67D-N71D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-Y235L-
K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-
T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-
G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-
G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N71D-N97D-V103I-Y129M-K143Q-
P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
A2S-P19E-G28S-S30T-T38E-K63R-N67D-N71D-N74E-K93R-N97D-Y129M-N150T-P168S-
Q184L-N213A-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q；
T3R-N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-T62E-N67D-N71D-K93R-N97L-E111S-Y129M-D139M-
P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q；和
N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-S59D-N67D-A68S-N71D-K93R-N97D-Y129M-K143Q-P168S-
Q184D-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-T284E-Z298.01Q；其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号。
8.如前述权利要求中任一项所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，其中所
述两种或更多种修饰选自：
N67D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-G259P；
P19E-T38E-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R；
P19E-T38E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-G225C-K244L-S258D-N261R；
T38E-K63L-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R；
P19E-T38E-N67D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R；
P19E-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L；
N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-N67D-N71D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-Y235L-
K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
P19E-T38E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-G225C-T228V-K244L-S258D-
N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-
G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K214I-G225C-
Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-
G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
M1V-P19E-S30T-T38E-T62E-N67D-N71D-Q78D-N97D-Y129M-K143R-F167Y-P168S-
Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-T284A-Z298.01Q；
Y6E-N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-N97D-E111S-Y129M-S135L-P168S-
Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261Q-D283S-Z298.01Q；
N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N71D-N97D-V103I-Y129M-K143Q-
P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
A2S-P19E-G28S-S30T-T38E-K63R-N67D-N71D-N74E-K93R-N97D-Y129M-N150T-P168S-
Q184L-N213A-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q；
T3R-N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-T62E-N67D-N71D-K93R-N97L-E111S-Y129M-D139M-
P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q；
N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-S59D-N67D-A68S-N71D-K93R-N97D-Y129M-K143Q-P168S-
Q184D-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-T284E-Z298.01Q；
P19E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L；和P19E-T38E-N67D-
Y129M-P168S-Q184L-T228V-K244L；
其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸
序列相对应来编号。
9.如前述权利要求中任一项所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，其中所
述两种或更多种修饰选自：
P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-Q184L-K244L-S258D-N261R；
N67D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-G259P；
P19E-K63L-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-G225C-T228V-K244L；
P19E-T38E-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R；
P19E-T38E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-G225C-K244L-S258D-N261R；
T38E-K63L-N71D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Q242L-K244L-S258D-N261R；
P19E-K63L-N71D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-K244L-S258D-G259P；
N10T-T38E-S59V-L60Q-K63R-L66V-A68S-N74S-V75L-N97D-V103I-Y129M-F167Y-
Q184L-A217P-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
P19E-T38E-N67D-N71D-N97D-Y129M-F167Y-Q184L-A217P-K244L-S258D-N261R；
T38E-K63L-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R；
P19E-T38E-N67D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R；
P19E-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L；
P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S-G225C-T228V-K244L-S258D-N261R；
N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-N67D-N71D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-Y235L-
K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
P19E-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-
Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
P19E-T38E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-G225C-T228V-K244L-S258D-
N261R-Z298.01Q；
P19E-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111D-Y129M-Q184L-
G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-T38E-K63L-N71D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-
S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-K143Q-Q184L-A217P-G225C-T228V-
Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-T38E-S59V-L60Q-K63L-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-
K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-
T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-Q78D-K80T-N97D-I124V-Y129M-K143Q-
F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10S-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-N67D-Q78H-K80T-I82M-N97D-Y129M-K143Q-
F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-
G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
G4S-N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-
K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-T131A-
F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111D-Y129M-
P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K214I-G225C-
Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-
G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
M1V-P19E-S30T-T38E-T62E-N67D-N71D-Q78D-N97D-Y129M-K143R-F167Y-P168S-
Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-T284A-Z298.01Q；
Y6E-N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-N97D-E111S-Y129M-S135L-P168S-
Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261Q-D283S-Z298.01Q；
N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N71D-N97D-V103I-Y129M-K143Q-
P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
A2S-P19E-G28S-S30T-T38E-K63R-N67D-N71D-N74E-K93R-N97D-Y129M-N150T-P168S-
Q184L-N213A-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q；
M1L-N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-Q78D-N97D-Y129M-A136L-P168A-
Q184L-N213A-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
P19E-T38E-S59V-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-
K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-K63R-N67D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-
K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
T3R-N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-T62E-N67D-N71D-K93R-N97L-E111S-Y129M-D139M-
P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q；
N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-S59D-N67D-A68S-N71D-K93R-N97D-Y129M-K143Q-P168S-
Q184D-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-T284E-Z298.01Q；P19E-K63L-N71D-Y129M-
P168S-Q184L-G225C-K244L；P19E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-Q184L-
K244L；P19E-T38E-N67D-Y129M-P168S-Q184L-T228V-K244L；P19E-T38E-N67D-Y129M-
Q184L-K244L-S258D-N261R；P19E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R；
P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-G259P；K63L-N71D-Y129M-
K143R-P168S-Q184L-G225C-T228V-K244L-S258D-G259P；和
P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R；
其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸
序列相对应来编号。
10.如前述权利要求中任一项所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，其中
所述两种或更多种修饰选自：
P19E-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-
Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-K143Q-Q184L-A217P-G225C-T228V-
Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-Q78D-K80T-N97D-I124V-Y129M-K143Q-
F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10S-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-N67D-Q78H-K80T-I82M-N97D-Y129M-K143Q-
F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-
G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-
G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N71D-N97D-V103I-Y129M-K143Q-
P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；和
N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-S59D-N67D-A68S-N71D-K93R-N97D-Y129M-K143Q-P168S-
Q184D-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-T284E-Z298.01Q；
其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸
序列相对应来编号。
11.如前述权利要求中任一项所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，其中
所述两种或更多种修饰选自：
P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-Q184L-K244L-S258D-N261R；
P19E-T38E-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R；
P19E-T38E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-G225C-K244L-S258D-N261R；
T38E-K63L-N71D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Q242L-K244L-S258D-N261R；
N10T-T38E-S59V-L60Q-K63R-L66V-A68S-N74S-V75L-N97D-V103I-Y129M-F167Y-
Q184L-A217P-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
P19E-T38E-N67D-N71D-N97D-Y129M-F167Y-Q184L-A217P-K244L-S258D-N261R；
T38E-K63L-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R；
P19E-T38E-N67D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R；
P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S-G225C-T228V-K244L-S258D-N261R；
P19E-T38E-N67D-N97D-Q184L-A217P-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R；
N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-N67D-N71D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-Y235L-
K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
P19E-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-
Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
P19E-T38E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-G225C-T228V-K244L-S258D-
N261R-Z298.01Q；
P19E-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111D-Y129M-Q184L-
G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-T38E-K63L-N71D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-
S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-K143Q-Q184L-A217P-G225C-T228V-
Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-T38E-S59V-L60Q-K63L-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-
K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-
T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-Q78D-K80T-N97D-I124V-Y129M-K143Q-
F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10S-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-N67D-Q78H-K80T-I82M-N97D-Y129M-K143Q-
F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-
G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
G4S-N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-
K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-T131A-
F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111D-Y129M-
P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K214I-G225C-
Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-
G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
M1V-P19E-S30T-T38E-T62E-N67D-N71D-Q78D-N97D-Y129M-K143R-F167Y-P168S-
Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-T284A-Z298.01Q；
Y6E-N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-N97D-E111S-Y129M-S135L-P168S-
Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261Q-D283S-Z298.01Q；
N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N71D-N97D-V103I-Y129M-K143Q-
P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
A2S-P19E-G28S-S30T-T38E-K63R-N67D-N71D-N74E-K93R-N97D-Y129M-N150T-P168S-
Q184L-N213A-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q；
M1L-N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-Q78D-N97D-Y129M-A136L-P168A-
Q184L-N213A-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
P19E-T38E-S59V-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-
K244L-S258D-N261R-Z298.01；
N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-K63R-N67D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-
K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
T3R-N10T-19E-G28A-S30T-T38E-T62E-N67D-N71D-K93R-N97L-E111S-Y129M-D139M-
P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q；
N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-S59D-N67D-A68S-N71D-K93R-N97D-Y129M-K143Q-P168S-
Q184D-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-T284E-Z298.01Q；P19E-T38E-N67D-Y129M-
Q184L-K244L-S258D-N261R；P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-
G259P；和P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R；
其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸
序列相对应来编号。
12.如前述权利要求中任一项所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，其中
所述两种或更多种修饰选自：
P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-Q184L-K244L-S258D-N261R；
P19E-T38E-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R；
P19E-K63L-N71D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-K244L-S258D-G259P；
P19E-T38E-N67D-N71D-N97D-Y129M-F167Y-Q184L-A217P-K244L-S258D-N261R；
P19E-T38E-N67D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R；
P19E-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L；
P19E-T38E-N67D-N97D-Q184L-A217P-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R；
N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-N67D-N71D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-Y235L-
K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
P19E-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-
Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
P19E-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111D-Y129M-Q184L-
G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-K143Q-Q184L-A217P-G225C-T228V-
Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-T38E-S59V-L60Q-K63L-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-
K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-
T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-Q78D-K80T-N97D-I124V-Y129M-K143Q-
F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10S-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-N67D-Q78H-K80T-I82M-N97D-Y129M-K143Q-
F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-
G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
G4S-N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-
K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-T131A-
F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111D-Y129M-
P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K214I-G225C-
Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-
G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
M1V-P19E-S30T-T38E-T62E-N67D-N71D-Q78D-N97D-Y129M-K143R-F167Y-P168S-
Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-T284A-Z298.01Q；
Y6E-N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-N97D-E111S-Y129M-S135L-P168S-
Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261Q-D283S-Z298.01Q；
N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N71D-N97D-V103I-Y129M-K143Q-
P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
A2S-P19E-G28S-S30T-T38E-K63R-N67D-N71D-N74E-K93R-N97D-Y129M-N150T-P168S-
Q184L-N213A-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q；
M1L-N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-Q78D-N97D-Y129M-A136L-P168A-
Q184L-N213A-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
P19E-T38E-S59V-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-
K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-K63R-N67D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-
K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
T3R-N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-T62E-N67D-N71D-K93R-N97L-E111S-Y129M-D139M-
P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q；
N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-S59D-N67D-A68S-N71D-K93R-N97D-Y129M-K143Q-P168S-
Q184D-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-T284E-Z298.01Q；P19E-K63L-N71D-Y129M-
P168S-Q184L-G225C-K244L；P19E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-Q184L-
K244L；P19E-T38E-N67D-Y129M-P168S-Q184L-T228V-K244L；P19E-T38E-N67D-Y129M-
Q184L-K244L-S258D-N261R；P19E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R；
P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-G259P；和P19E-T38E-K63L-
N71D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R；
其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸
序列相对应来编号。
13.如前述权利要求中任一项所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，其中
所述两种或更多种修饰选自：
P19E-K63L-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-G225C-T228V-K244L；
P19E-T38E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-G225C-K244L-S258D-N261R；
T38E-K63L-N71D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Q242L-K244L-S258D-N261R；
P19E-K63L-N71D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-K244L-S258D-G259P；
N10T-T38E-S59V-L60Q-K63R-L66V-A68S-N74S-V75L-N97D-V103I-Y129M-F167Y-
Q184L-A217P-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
P19E-T38E-N67D-N97D-Q184L-A217P-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R；
N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-N67D-N71D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-Y235L-
K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
P19E-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-
Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
P19E-T38E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-G225C-T228V-K244L-S258D-
N261R-Z298.01Q；
P19E-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111D-Y129M-Q184L-
G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-T38E-K63L-N71D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-
S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-K143Q-Q184L-A217P-G225C-T228V-
Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-T38E-S59V-L60Q-K63L-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-
K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-
T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-Q78D-K80T-N97D-I124V-Y129M-K143Q-
F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10S-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-N67D-Q78H-K80T-I82M-N97D-Y129M-K143Q-
F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-
G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
G4S-N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-
K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-T131A-
F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111D-Y129M-
P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K214I-G225C-
Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-
G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
M1V-P19E-S30T-T38E-T62E-N67D-N71D-Q78D-N97D-Y129M-K143R-F167Y-P168S-
Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-T284A-Z298.01Q；
Y6E-N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-N97D-E111S-Y129M-S135L-P168S-
Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261Q-D283S-Z298.01Q；
N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N71D-N97D-V103I-Y129M-K143Q-
P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
A2S-P19E-G28S-S30T-T38E-K63R-N67D-N71D-N74E-K93R-N97D-Y129M-N150T-P168S-
Q184L-N213A-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q；
M1L-N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-Q78D-N97D-Y129M-A136L-P168A-
Q184L-N213A-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
P19E-T38E-S59V-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-
K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-K63R-N67D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-
K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；和
N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-S59D-N67D-A68S-N71D-K93R-N97D-Y129M-K143Q-P168S-
Q184D-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-T284E-Z298.01Q；
其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸
序列相对应来编号。
14.如前述权利要求中任一项所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，其中
所述两种或更多种修饰选自：
P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-Q184L-K244L-S258D-N261R；
T38E-K63L-N71D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Q242L-K244L-S258D-N261R；
P19E-K63L-N71D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-K244L-S258D-G259P；
P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S-G225C-T228V-K244L-S258D-N261R；
P19E-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111D-Y129M-Q184L-
G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-T38E-K63L-N71D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-
S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-T131A-
F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111D-Y129M-
P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
Y6E-N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-N97D-E111S-Y129M-S135L-P168S-
Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261Q-D283S-Z298.01Q；
N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N71D-N97D-V103I-Y129M-K143Q-
P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
A2S-P19E-G28S-S30T-T38E-K63R-N67D-N71D-N74E-K93R-N97D-Y129M-N150T-P168S-
Q184L-N213A-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q；
M1L-N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-Q78D-N97D-Y129M-A136L-P168A-
Q184L-N213A-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；P19E-K63L-N71D-Y129M-
P168S-Q184L-G225C-K244L；P19E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R；
P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-G259P；K63L-N71D-Y129M-
K143R-P168S-Q184L-G225C-T228V-K244L-S258D-G259P；和P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R；
其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸
序列相对应来编号。
15.如前述权利要求中任一项所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，其中
所述两种或更多种修饰选自：
P19E-T38E-N67D-N97D-Q184L-A217P-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R；
P19E-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111D-Y129M-Q184L-
G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-T38E-K63L-N71D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-
S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-K143Q-Q184L-A217P-G225C-T228V-
Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-
T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-
G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
G4S-N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-
K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111D-Y129M-
P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-
G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
Y6E-N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-N97D-E111S-Y129M-S135L-P168S-
Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261Q-D283S-Z298.01Q；
N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N71D-N97D-V103I-Y129M-K143Q-
P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
P19E-T38E-S59V-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-
K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；和N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-K63R-N67D-N97D-Y129M-
Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸
序列相对应来编号。
16.如前述权利要求中任一项所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，其中
所述两种或更多种修饰是P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-
F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸
序列相对应来编号。
17.如前述权利要求中任一项所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，其中
所述变体或重组多肽或其活性片段进一步包含选自以下的一种或多种基序：
(i)在位置31-40处的WXaKNDLXXAI(SEQ ID NO:15)基序，其中Xa是F或Y，并且X是任何氨
基酸；
(ii)在位置263-274处的LDXXXGPXGXLT(SEQ ID NO:16)基序，其中X是任何氨基酸；
(iii)在位置263-274处的LDX1V/AT/AGPX2GX3LT(SEQ ID NO:17)基序，其中X1是M或L，X2是N、A或S，并且X3是S、T或N；以及
(iv)在位置263-274处的LDM/LATGPN/AGS/TLT(SEQ ID NO:18)基序，
其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸
序列相对应来编号。
18.如前述权利要求中任一项所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，其中
所述变体或重组多肽或其活性片段进一步包含选自以下的一种或多种基序：
(i)在位置31-40处的WXaKNDLXXAI(SEQ ID NO:15)基序，其中Xa是F或Y，并且X是任何氨
基酸；
(ii)在位置263-274处的LDXXXGPXGXLT(SEQ ID NO:16)基序，其中X是任何氨基酸；
(iii)在位置263-274处的LDX1V/AT/AGPX2GX3LT(SEQ ID NO:17)基序，其中X1是M或L，X2是N、A或S，并且X3是S、T或N；以及
(iv)在位置263-274处的LDM/LATGPN/AGS/TLT(SEQ ID NO:18)基序，
其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸
序列相对应来编号，条件是所述变体或重组多肽或其活性片段不是ACU308431、ETT37549、WP_036608478、WP_036670707、WP_017688745、WP_053782127、AAX87003、WP_046227931、WP_
024633848、WP_017813111、PspMan9、AEX60762、WP_046214462、YP_003868989、YP_
003944884、WP_017427981、AAX87002、WP_009593769、YP_006190599、或WP_019912481，或者任选地PamMan2、PamMan3、PtuMan2、或PpaMan2。
19.如权利要求18所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，其中所述变体或
重组多肽或其活性片段进一步包含在位置31-40处的WXaKNDLXXAI(SEQ ID NO:15)基序，其中Xa是F，并且X是任何氨基酸，其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号，条件是所述变体或重组多肽或其活性片段不是ACU308431、ETT37549、WP_036608478、WP_036670707、WP_017688745、WP_053782127、WP_
024633848、AAX87003、或AEX60762，或者任选地PamMan2、PamMan3、PtuMan2、PpaMan2、或PspMan9。
20.如权利要求18所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，其中所述变体或
重组多肽或其活性片段进一步包含在位置263-274处的LDX1V/AT/AGPX2GX3LT(SEQ ID NO:
17)或LDM/LATGPN/AGS/TLT(SEQ ID NO:18)基序，其中X1是M；X2是N、A或S；并且X3是S、T或N，其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列
相对应来编号，条件是所述变体或重组多肽或其活性片段不是ACU30843、ETT37549、WP_
036608478、WP_036670707、WP_017688745、或WP_046214462，或者任选地PamMan2。
21.如权利要求18所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，其中所述变体或
重组多肽或其活性片段进一步包含(i)在位置31-40处的WXaKNDLXXAI(SEQ ID NO:15)基
序，其中Xa是F，并且X是任何氨基酸，和(ii)在位置263-274处的LDX1V/AT/AGPX2GX3LT(SEQ ID NO:17)或LDM/LATGPN/AGS/TLT(SEQ ID NO:18)基序，其中X1是M；X2是N、A或S；并且X3是S、T或N，其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号，条件是所述变体或重组多肽或其活性片段不是ACU30843、ETT37549、WP_036608478、WP_036670707、或WP_017688745，或者任选地PamMan2。
22.如前述权利要求中任一项所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，其包
含与SEQ ID NO:13的氨基酸序列具有至少80％氨基酸序列同一性的氨基酸序列。
23.如权利要求1-16中任一项所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，其包
含与SEQ ID NO:13的氨基酸序列具有至少80％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，条件是所述变体或重组多肽或其活性片段不是ACU30843、ETT37549、WP_036608478、WP_036670707、WP_017688745、WP_053782127、WP_024633848、AAX87003、WP_046227931、WP_017813111、AEX60762、或WP_046214462，或者任选地PamMan2、PamMan3、PtuMan2、PpaMan2、或PspMan9。
24.一种甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，其包含与SEQ ID NO:13的氨基酸
序列具有至少80％氨基酸序列同一性的氨基酸序列，条件是所述变体或重组多肽或其活性片段不是ACU30843、ETT37549、WP_036608478、WP_036670707、WP_017688745、WP_
053782127、PamMan2、PamMan3、PtuMan2、WP_024633848、PpaMan2、AAX87003、WP_046227931、WP_017813111、PapMan9、AEX60762、WP_046214462、或EP2260105-0418。
25.如前述权利要求中任一项所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，其中
所述甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段衍生自参比多肽，其中所述参比多肽选自
SEQ ID NO:14、30、43、44、45、160和162。
26.如权利要求25所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，其中所述甘露聚
糖酶变体或重组多肽或其活性片段与所述参比多肽的氨基酸序列具有至少59％、60％、
65％、70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、
92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％氨基酸序列同一性。
27.如前述权利要求中任一项所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，其中
所述甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段衍生自参比多肽，其中所述参比多肽是GH5甘露聚糖酶，并且所述甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段任选地是GH5甘露聚糖酶或内切-β-甘露聚糖酶。
28.如前述权利要求中任一项所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，其中
所述甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段具有甘露聚糖酶活性。
29.如权利要求28所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，其中所述甘露聚
糖酶活性是在表面活性剂和/或蛋白酶存在的情况下。
30.如前述权利要求中任一项所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，其中
当与参比多肽相比时，所述变体具有一种或多种改善的性质；其中所述改善的性质选自在蛋白酶存在下改善的稳定性、在洗涤剂或缓冲剂中改善的稳定性；和改善的清洁性能。
31.如权利要求30所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，其中所述改善的
性质是
(i)在洗涤剂中改善的稳定性，其中所述甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段在
约40℃至约70℃、约45℃至约65℃、约50℃至约60℃、约60℃至约70℃、或约56℃的温度持续至少5分钟的时间段保持至少10％、20％、30％、40％或50％残余甘露聚糖酶活性；
(ii)在蛋白酶存在下改善的稳定性，其中所述甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片
段在蛋白酶和/或表面活性剂存在下保持至少50％甘露聚糖酶活性持续至少15天或从约15天至约40天；
(iii)改善的清洁性能，其中所述甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段具有槐豆
胶污渍清洁PI>1；以及
(iv)改善的老化清洁性能，其中所述甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段在7小
时后具有至少15％剩余清洁活性或在9小时后具有至少11％剩余清洁活性。
32.如前述权利要求中任一项所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，其中
所述甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段不进一步包含碳水化合物结合模块。
33.一种清洁组合物，其包含如权利要求1-32中任一项所述的甘露聚糖酶变体或重组
多肽或其活性片段。
34.如权利要求33所述的清洁组合物，其进一步包含：至少一种表面活性剂；至少一种
选自钙和锌的离子；至少一种辅助成分；至少一种稳定剂；从约0.001％至约1.0重量％的如权利要求1-32中任一项所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段；至少一种漂白
剂；和/或选自以下的至少一种酶或酶衍生物：酰基转移酶、淀粉酶、α-淀粉酶、β-淀粉酶、α-半乳糖苷酶、阿拉伯糖酶、阿拉伯糖苷酶、芳基酯酶、β-半乳糖苷酶、β-葡聚糖酶、角叉菜胶酶、过氧化氢酶、纤维二糖水解酶、纤维素酶、软骨素酶、角质酶、内切β-1,4-葡聚糖酶、内切β-甘露聚糖酶、外切β-甘露聚糖酶、酯酶、外切甘露聚糖酶、半乳聚糖酶、葡糖淀粉酶、半纤维素酶、透明质酸酶、角蛋白酶、漆酶、乳糖酶、木质素酶、脂肪酶、脂肪分解酶、脂加氧酶、甘露聚糖酶、氧化酶、果胶酸裂合酶、果胶乙酰酯酶、果胶酶、戊聚糖酶、过水解酶、过氧化物酶、酚氧化酶、磷酸酶、磷脂酶、植酸酶、聚半乳糖醛酸酶、蛋白酶、支链淀粉酶、还原酶、鼠李糖半乳糖醛酸酶、β-葡聚糖酶、鞣酸酶、转谷氨酰胺酶、木聚糖乙酰酯酶、木聚糖酶、木葡聚糖酶、木糖苷酶、金属蛋白酶、和其组合。
35.如权利要求33或34所述的清洁组合物，其中所述清洁组合物是选自以下的洗涤剂
组合物：衣物洗涤剂、织物柔顺洗涤剂、餐具洗涤剂和硬表面清洁洗涤剂。
36.如权利要求33-35中任一项所述的清洁组合物，其中所述清洁组合物呈选自以下的
形式：液体、粉末、颗粒状固体、片剂、薄片和单位剂量。
37.如权利要求33-36中任一项所述的清洁组合物，其中所述组合物包含磷酸盐或不含
磷酸盐和/或包含硼或不含硼。
38.一种清洁方法，其包括用(i)如权利要求1-32中任一项所述的甘露聚糖酶变体或重
组多肽或其活性片段，或用(ii)如权利要求33-37中任一项所述的清洁组合物接触包含含有甘露聚糖的污垢或污渍的表面或物品，其中包含在所述污垢或污渍中的甘露聚糖被水
解。
39.如权利要求38所述的方法，其中所述物品是餐具或织物。
40.一种多核苷酸，其包含编码如权利要求1-32中任一项所述的甘露聚糖酶变体或重
组多肽或其活性片段的核酸序列。
41.一种表达载体，其包含如权利要求40所述的多核苷酸。
42.一种宿主细胞，其包含如权利要求41所述的表达载体。
43.一种用于生产如权利要求1-32中任一项所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活
性片段的方法，该方法包括：
(a)将如权利要求42所述的宿主细胞用如权利要求41所述的表达载体稳定转化；
(b)在适合于所述宿主细胞产生所述甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段的条件
下培养所述转化的宿主细胞；以及
(c)回收所述甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段。
44.一种食品或饲料组合物和/或食品添加剂，其包含如权利要求1-32中任一项所述的
甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段。
45.如权利要求1-32中任一项所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段在制备
食品或饲料组合物和/或食品或饲料添加剂和/或食品或饲料原料和/或宠物食品中的用
途。

说明书全文

类芽孢杆菌属物种甘露聚糖酶

[0001] 相关申请的交叉引用

[0002] 本申请涉及并要求美国临时专利申请序列号62/251,516(2015年11月5日提交)和62/278,387(2016年1月13日提交)的优先权，这两个申请特此以其全文通过引用并入本文。

[0003] 本文公开了来自类芽孢杆菌属物种(Paenibacillus sp.)的甘露聚糖酶、编码该甘露聚糖酶的多核苷酸、含有该甘露聚糖酶的组合物、及其使用方法。含有甘露聚糖酶的组合物适合用作洗涤剂和用于清洁织物和硬质表面以及用于各种其他工业应用中。

[0004] 以电子方式提交的序列表的引用

[0005] 作为ASCII文本文件(名称：NB40843WOPCT_ST25；大小：321KB；创建日期：2016年11月3日)以电子方式与申请一起提交的序列表的内容形成本申请的一部分，并且通过引用以其全文并入本文。

[0006] 甘露聚糖酶，包括内切-β-甘露聚糖酶，已经用于洗涤剂清洁组合物中，以通过水解甘露聚糖来去除胶质污渍。天然存在各种甘露聚糖，例如直链甘露聚糖、葡甘露聚糖、半乳甘露聚糖和葡糖半乳甘露聚糖。每种这样的甘露聚糖由含有甘露糖残基的β-1,4-连接的主链的多糖组成，所述残基可以被葡萄糖残基取代高达33％(Yeoman等人，Adv Appl Microbiol[应用微生物学研究进展]，70:1,2010，爱思唯尔出版社(Elsevier))。在半乳甘露聚糖或葡糖半乳甘露聚糖中，半乳糖残基以α-1,6-键与甘露聚糖主链连接(Moreira和
Filho，Appl Microbiol Biotechnol[应用微生物学与生物技术]，79:165,2008)。因此，甘露聚糖水解为其组分糖需要水解主链键的内切-1,4-β-甘露聚糖酶以生成短链甘露低聚
糖，其被1,4-β-甘露糖苷酶进一步降解为单糖。

[0007] 尽管甘露聚糖酶，例如像内切-β-甘露聚糖酶在工业酶领域中是已知的，但仍需要适合于特定条件和用途的其他甘露聚糖酶。

[0008] 本文所公开的变体、组合物和方法涉及通过常规分子生物学技术产生的重组甘露聚糖酶、或重组多肽或其活性片段(参见例如，Sambrook等人，Molecular Cloning:Cold
Spring Harbor Laboratory Press[分子克隆：冷泉港实验室出版社])。另一个实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含两个
或更多个选自以下的修饰：(i)在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代：1、2、3、
4、6、10、19、28、30、38、59、60、61、62、63、66、67、68、70、71、74、75、78、80、82、93、97、103、
111、124、129、131、135、136、139、143、150、167、168、184、213、214、217、225、228、235、242、
244、258、259、261、283、和284，和(ii)在位置298处的插入；其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号。另外的实施例涉
及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含两
个或更多个选自以下的修饰：在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代：19、38、
59、67、68、71、74、97、129、167、168、184、225、228、235、242、244、258、和261；其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号。

[0009] 仍另外的实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含两个或更多个选自以下的修饰：(i)在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代：M1X、A2X、T3X、G4X、Y6X、N10X、P19X、G28X、S30X、T38X、S59X、L60X、Y61X、T62X、K63X、L66X、N67X、A68X、K70X、N71X、N74X、V75X、Q78X、K80X、I82X、K93X、N97X、V103X、E111X、I124X、Y129X、T131X、S135X、A136X、D139X、K143X、N150X、F167X、P168X、Q184X、N213X、K214X、A217X、G225X、T228X、Y235X、Q242X、K244X、S258X、G259X、N261X、D283X、和T284X，和(ii)在位置Z298.01X处的插入；其中X是任何氨基酸；并且其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号。
仍另外的实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该
氨基酸序列包含两个或更多个选自以下的修饰：在选自以下的一个或多个位置处的一个或
多个取代：P19X、T38X、S59X、N67X、A68X、N71X、N74X、N97X、Y129X、F167X、P168X、Q184X、G225X T228X、Y235X、Q242X、K244X、S258X、和N261X；其中X是任何氨基酸；并且其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编
号。

[0010] 又仍另外的实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含两个或更多个选自以下的修饰：(i)在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代：X1V、X1L、X2S、X3R、X4S、X6E、X10T、X10S、X19E、X28A、X28S、X30T、X38E、X59D、X59V、X60Q、X61W、X62E、X63R、X63L、X66V、X67D、X68S、X70R、X71D、X74E、X74S、X75L、X78D、X78H、X80T、X82M、X93R、X97D、X97L、X103I、X111D、X111S、X124V、X129M、X131A、X135L、X136L、X139M、X143Q、X143R、X150T、X167Y、X168A、X168S、X184D、X184L、X213A、X214I、X217P、X225C、X225P、X228V、X235L、X242L、X244L、X258D、X259P、X261Q、X261R、X283S、X284A、和X284E，和(ii)在位置Z298.01Q处的插入；其中X是任何氨基酸；并且其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应
来编号。仍另外的实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性
片段，该氨基酸序列包含两个或更多个选自以下的修饰：在选自以下的一个或多个位置处
的一个或多个取代：X19E、X38E、X59V、X67D、X68S、X71D、X74E、X74S、X97D、X97L、X129M、X167Y、X168A、X168S、X184D、X184L、X225C、X225P、X228V、X235L、X242L、X244L、X258D、X261Q、和X261R；其中X是任何氨基酸；并且其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号。

[0011] 另一个另外的实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含两个或更多个选自以下的修饰：(i)在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代：M1V、M1L、A2S、T3R、G4S、Y6E、N10T、N10S、P19E、G28A、G28S、S30T、T38E、S59D、S59V、L60Q、Y61W、T62E、K63R、K63L、L66V、N67D、A68S、K70R、N71D、N74E、N74S、V75L、Q78D、Q78H、K80T、I82M、K93R、N97D、N97L、V103I、E111D、E111S、I124V、Y129M、T131A、T135L、A136L、D139M、K143Q、K143R、N150T、F167Y、P168A、P168S、Q184D、Q184L、N213A、K214I、A217P、G225C、G225P、T228V、Y235L、Q242L、K244L、S258D、G259P、N261Q、N261R、D283S、T284A、和T284E，和(ii)在位置Z298.01Q处的插入；其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号。另一个实施
例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包
含两个或更多个选自以下的修饰：在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代：
P19E、T38E、S59D、S59V、N67D、A68S、N71D、N74E、N74S、N97D、N97L、Y129M、F167Y、P168A、P168S、Q184D、Q184L、G225C、G225P、T228V、Y235L、Q242L、K244L、S258D、N261Q、和N261R，其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相
对应来编号。

[0012] 另一个实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含两个或更多个选自以下的修饰：(i)在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代：129-244、129-143-244、38-258、38-143-258、19-184、19-143-184、
97-225、97-143-225、60-61、67-168、67-143-168、63-71、63-71-143、228-235、和143-228-
235；(ii)在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代：Y129X-K244X、Y129X-K143X-K244X.T38X-S258X、T38X-K143X-S258X、P19X-Q184X、P19X-K143X-Q184X、N97X-G225X、
N97X-K143X-G225X、L60X-Y61X、N67X-P168X、N67X-K143X-P168X、K63X-N71X、K63X-N71X-K143X、T228X-Y235X、和K143X-T228X-Y235X，其中X是任何氨基酸；(iii)在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代：X129M-X244L、X129M-X143Q-X244L、X38E-X258D、X38E-X143Q-X258D、X19E-X184D、X19E-X143Q-X184D、X19E-X184L、X19E-X143Q-X184L、X97D-
X225C、X97D-X143Q-X225C、X97D-X225P、X97D-X143Q-X225P、X60Q-X61W、X67D-X168S、X67D-X143Q-X168S、X63L-X71D、X63L-X71D-X143Q、X63R-X71D、X63R-X71D-X143Q、X228V-X235L、和X143Q-X228V-X235L，其中X是任何氨基酸；和(iv)Y129M-K244L、Y129M-K143Q-K244L、
T38E-S258D、T38E-K143Q-S258D、P19E-Q184D、P19E-K143Q-Q184D、P19E-Q184L、P19E-
K143Q-Q184L、N97D-G225C、N97D-K143Q-G225C、L60Q-Y61W、N97D-G225P、N97D-K143Q-
G225P、N67D-P168S、N67D-K143Q-P168S、K63L-N71D、K63L-N71D-K143Q、K63R-N71D、K63R-N71D-K143Q、T228V-Y235L、和K143Q-T228V-Y235L；其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号。

[0013] 另外的实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含：P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-Q184L-K244L-S258D-N261R；N67D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-G259P；P19E-K63L-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-
G225C-T228V-K244L；P19E-T38E-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R；
P19E-T38E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-G225C-K244L-S258D-N261R；T38E-
K63L-N71D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Q242L-K244L-S258D-N261R；P19E-K63L-
N71D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-K244L-S258D-G259P；N10T-T38E-S59V-L60Q-K63R-L66V-
A68S-N74S-V75L-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-A217P-G225C-Y235L-K244L-S258D-
N261R-Z298.01Q；P19E-T38E-N67D-N71D-N97D-Y129M-F167Y-Q184L-A217P-K244L-S258D-
N261R；T38E-K63L-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R；P19E-T38E-N67D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R；P19E-N67D-N97D-Y129M-P168S-
Q184L-K244L；P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S-G225C-T228V-K244L-S258D-N261R；
P19E-T38E-N67D-N97D-Q184L-A217P-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R；N10T-
P19E-G28S-S30T-T38E-N67D-N71D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-
N261R-Z298.01Q；P19E-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-K143Q-F167Y-
Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；P19E-T38E-N67D-N71D-Q78D-K80T-
N97D-Y129M-P168S-G225C-T228V-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；P19E-T38E-S59V-L60Q-
K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-
S258D-N261R-Z298.01Q；N10T-T38E-K63L-N71D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-
T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-N97D-
Y129M-K143Q-Q184L-A217P-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；N10T-
P19E-T38E-S59V-L60Q-K63L-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-
S258D-N261R-Z298.01Q；P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-
F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；P19E-S30T-T38E-S59V-
L60Q-K63R-N67D-Q78D-K80T-N97D-I124V-Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-
K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；N10S-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-N67D-Q78H-K80T-
I82M-N97D-Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225C-
T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；G4S-N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-
N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；N10T-P19E-S30T-
T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-T131A-F167Y-Q184L-G225C-
Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-
N71D-Q78D-K80T-N97D-E111D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-
N261R-Z298.01Q；P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-
K214I-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-
K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-
Z298.01Q；M1V-P19E-S30T-T38E-T62E-N67D-N71D-Q78D-N97D-Y129M-K143R-F167Y-P168S-
Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-T284A-Z298.01Q；Y6E-N10T-P19E-G28S-S30T-
T38E-K63L-N67D-N71D-N97D-E111S-Y129M-S135L-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-
K244L-S258D-N261Q-D283S-Z298.01Q；N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-
N71D-N97D-V103I-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-
Z298.01Q；A2S-P19E-G28S-S30T-T38E-K63R-N67D-N71D-N74E-K93R-N97D-Y129M-N150T-
P168S-Q184L-N213A-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q；M1L-N10T-P19E-G28A-
S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-Q78D-N97D-Y129M-A136L-P168A-Q184L-N213A-G225C-Y235L-
K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；P19E-T38E-S59V-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-
Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-
K63R-N67D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；T3R-
N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-T62E-N67D-N71D-K93R-N97L-E111S-Y129M-D139M-P168S-
Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q；N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-S59D-
N67D-A68S-N71D-K93R-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184D-G225C-Y235L-K244L-S258D-
N261R-T284E-Z298.01Q；P19E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-K244L；P19E-N67D-
N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L；P19E-T38E-N67D-Y129M-P168S-Q184L-
T228V-K244L；P19E-T38E-N67D-Y129M-Q184L-K244L-S258D-N261R；P19E-K63L-N71D-
Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R；P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-
K244L-S258D-G259P；K63L-N71D-Y129M-K143R-P168S-Q184L-G225C-T228V-K244L-S258D-
G259P；或P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R，其中所述变体
或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号。

[0014] 另一个实施例涉及包含一种或多种本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段的甘露聚糖酶的NDL-进化枝，其中所述变体或重组多肽或其活性片段包含选自以
下的一种或多种基序：在位置31-40处的WXaKNDLXXAI(SEQ ID NO:15)基序，其中Xa是F或Y，并且X是任何氨基酸(“基序1”)；在位置263-274处的LDXXXGPXGXLT(SEQ ID NO:16)基序，其中X是任何氨基酸(“缺失基序1”)；在位置263-274处的LDX1V/AT/AGPX2GX3LT(SEQ ID NO:
17)基序，其中X1是M或L，X2是N、A或S，并且X3是S、T或N(“缺失基序2”)；和在位置263-274处的LDM/LATGPN/AGS/TLT(SEQ ID NO:18)基序(“缺失基序3”)，其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号。甘露聚糖酶的
NDL-进化枝在2015年7月10日提交的国际专利申请号PCT/US 15/40057(其随后作为WO
2016/007929公开)中更充分地描述。

[0015] 在其他实施例中，甘露聚糖酶变体是内切-β-甘露聚糖酶。在一些实施例中，甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段与SEQ ID NO:13的氨基酸序列具有至少70％氨基酸序列同一性。在一些实施例中，甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段具有甘露聚糖酶
活性，例如在槐豆胶半乳甘露聚糖或魔芋葡甘露聚糖上的活性。在一些实施例中，甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段在表面活性剂存在下具有甘露聚糖酶活性。在一些实施例
中，该甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段在约40℃至约70℃、约45℃至约65℃、约50℃至约60℃、约60℃至约70℃、或约56℃的温度持续至少5分钟的时间段保持至少10％、
20％、30％、40％或50％残余甘露聚糖酶活性。

[0016] 在一些实施例中，甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段在洗涤剂组合物中具有清洁活性。在一些实施例中，甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段在蛋白酶存在下
具有甘露聚糖酶活性。在一些实施例中，该甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段在蛋
白酶和/或表面活性剂存在下保持至少50％甘露聚糖酶活性约15天或更多天或从约15天至
约40天。在一些实施例中，甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段能够水解选自下组的
底物，该组由以下组成：瓜耳胶、槐豆胶及其组合。在一些实施例中，甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段不进一步包含碳水化合物结合模块。

[0017] 另一个实施例涉及包含本文所述的一种或多种甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段的清洁组合物。在一些实施例中，该清洁组合物进一步包含表面活性剂。在一些实施例中，该表面活性剂是离子表面活性剂。在一些实施例中，该离子表面活性剂选自下组，该组由以下组成：阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、两性表面活性剂、及其组合。在一些实施例中，该组合物进一步包含选自下组的酶，该组由以下组成：酰基转移酶、淀粉酶、α-淀粉酶、β-淀粉酶、α-半乳糖苷酶、阿拉伯糖酶、阿拉伯糖苷酶、芳基酯酶、β-半乳糖苷酶、β-葡聚糖酶、角叉菜胶酶、过氧化氢酶、纤维二糖水解酶、纤维素酶、软骨素酶、角质酶、内切β-
1,4-葡聚糖酶、内切β-甘露聚糖酶、外切β-甘露聚糖酶、酯酶、外切甘露聚糖酶、半乳聚糖酶、葡糖淀粉酶、半纤维素酶、透明质酸酶、角蛋白酶、漆酶、乳糖酶、木质素酶、脂肪酶、脂肪分解酶、脂加氧酶、甘露聚糖酶、金属蛋白酶、氧化酶、果胶酸裂合酶、果胶乙酰酯酶、果胶酶、戊聚糖酶、过水解酶、过氧化物酶、酚氧化酶、磷酸酶、磷脂酶、植酸酶、聚半乳糖醛酸酶、蛋白酶、支链淀粉酶、还原酶、鼠李糖半乳糖醛酸酶、β-葡聚糖酶、鞣酸酶、转谷氨酰胺酶、木聚糖乙酰酯酶、木聚糖酶、木葡聚糖酶、木糖苷酶、和其组合。在一些实施例中，该组合物进一步包含蛋白酶和淀粉酶。在一些实施例中，该清洁组合物选自衣物洗涤剂、织物软化洗涤剂、餐具洗涤剂和硬表面清洁洗涤剂。在一些实施例中，组合物是颗粒、粉末、固体、棒状、液体、片剂、凝胶、糊剂、泡沫、薄片、或单位剂量组合物。在一些实施例中，清洁组合物为选自以下的形式：液体、粉末、颗粒状固体和片剂。

[0018] 又另外的实施例涉及一种清洁方法，该方法包括用(i)本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，或用(ii)本文所述的清洁组合物接触包含含有甘露聚糖的污
垢或污渍的表面或物品，其中包含在所述污垢或污渍中的甘露聚糖被水解。

[0019] 一些实施例进一步涉及编码本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段的核酸或分离的核酸。另外的实施例涉及包含与调控序列有效地连接的本文所述的核酸
或分离的核酸的表达载体。甚至另外的实施例涉及包含本文所述表达载体的宿主细胞，或
编码本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段的核酸。在一些实施例中，宿主
细胞是细菌细胞或真菌细胞。仍另外的实施例涉及产生本文所述的甘露聚糖酶变体或重组
多肽或其活性片段的方法，该方法包括用包含编码甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片
段的多核苷酸的表达载体稳定转化宿主细胞；在合适条件下培养所述转化的宿主细胞以产
生所述甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段；和回收所述甘露聚糖酶变体或重组多肽
或其活性片段。
附图说明

[0020] 图1显示了在液体衣物洗涤剂中在16℃在槐豆胶(CFT C-S-73)上的PspMan138甘露聚糖酶和商业甘露聚糖酶(MANNAWAY 丹麦诺维信公司)的清洁性能。

[0021] 图2A-E显示了NDL进化枝甘露聚糖酶(包括PspMan138和PspMan4甘露聚糖酶)的成熟形式与其他甘露聚糖酶(包括BciMan1、芽孢杆菌属物种_BAD99527.1(1WKY_A)、B_
nealsonii_AGU71466.1、芽孢杆菌属物种_WO 2015022428-0015、和迟缓芽孢杆菌_WO
2014100018-0002)的各种成熟形式的序列的MUSCLE比对，该比对包括围绕位置31-40和
263-274处的NDL进化枝基序的盒子。

[0022] 图3显示了使用Geneious Tree builder程序构建的各种甘露聚糖酶的成熟形式的氨基酸的系统发生树，并且包括各种NDL进化枝甘露聚糖酶，包括PspMan138和PspMan4甘露聚糖酶。

[0023] 图4显示了在粉末衣物洗涤剂中在16℃在槐豆胶(CFT C-S-73)上的PspMan118甘露聚糖酶和商业甘露聚糖酶( 4L，丹麦诺维信公司)的清洁性能。

[0024] 图5描绘了1WKY_A甘露聚糖酶与PspMan118甘露聚糖酶变体的结构比较，其中1WKY_A甘露聚糖酶的主链以灰色显示，并且PspMan118甘露聚糖酶的主链以黑色显示。

[0025] 图6描绘了PspMan118和1WKY_A结构在NDL区域和PspMan118的缺失基序中的结构比较。

[0026] 图7A描绘了PspMan148(黑色)和2WHL_A(浅灰色)甘露聚糖酶的主链折叠与结合2WHL_A的甘露三糖基部分(显示为灰色条)(以指示底物结合位点的相对位置)和存在于
PspMan148中的十八个氨基酸取代的侧链(显示为黑色线图)的比较。

[0027] 图7B描绘了PspMan148(黑色)和2WHL_A(浅灰色)甘露聚糖酶的主链折叠与结合2WHL_A的甘露三糖基部分(显示为灰色条)(以指示底物结合位点的相对位置)和围绕和靠
近底物结合位点(显示为黑球)的PspMan148中的七个取代(S30T、S59V、L60Q、K63R、T228V、S258D和N261R)的位置的比较。

[0028] 图7C描绘了PspMan148(黑色)和2WHL_A(浅灰色)甘露聚糖酶的主链折叠与结合2WHL_A的甘露三糖基部分(显示为灰色条)(以指示底物结合位点的相对位置)和PspMan148
中的十一个表面取代(显示为黑球)的比较。

[0029] 本文描述了来自类芽孢杆菌属物种的内切-β-甘露聚糖酶、编码这种内切-β-甘露聚糖酶的多核苷酸、含有这种甘露聚糖酶的清洁组合物、及其使用方法。在一个实施例中，本文描述的类芽孢杆菌属物种内切-β-甘露聚糖酶具有糖基水解酶活性和/或在清洁组合物和/或蛋白酶存在下是稳定的。本文所述的内切-β-甘露聚糖酶的这些特征使得它们非常适合用于各种清洁和其他工业应用中，例如，在所述酶可以在表面活性剂、蛋白酶和/或洗涤剂组合物中发现的其他组分存在下水解甘露聚糖的情况下。

[0030] 以下术语是为了清晰起见而定义的。未定义的术语和缩写应当符合本领域中所使用的常规含义。例如，本文未定义的技术和科学术语具有与本公开所属领域的普通技术人
员通常理解的相同的含义(参见，例如，Singleton和Sainsbury，Dictionary of
Microbiology and Molecular Biology[微生物学和分子生物学词典]，第2版，约翰·威利
父子出版公司，纽约州1994；和Hale和Marham，哈伯科林斯生物学词典(The Harper
Collins Dictionary of Biology)，哈珀永久出版社，纽约州1991)。

[0031] 除非上下文另有明确指示，否则单数术语“一个/一种”(a/an)和“该/所述”(the)包括复数引用。

[0032] 术语“甘露聚糖内切-1,4-β-甘露糖苷酶”、“内切-1,4-β-甘露聚糖酶”、“内切-β-1,4甘露聚糖酶”、“β-甘露聚糖酶B”、“β-1,4-甘露聚糖4-甘露聚糖水解酶”、“内切-β-甘露聚糖酶”、“β-D-甘露聚糖酶”、“1,4-β-D-甘露聚糖甘露聚糖水解酶”或“内切-β-甘露聚糖酶”(EC 3.2.1.78)是指能够随机水解甘露聚糖、半乳甘露聚糖和葡甘露聚糖中的1,4-β-D-甘露糖苷键的酶。内切-1,4-β-甘露聚糖酶是几个糖基水解酶家族的成员，包括GH26和GH5。
特别地，内切-β-甘露聚糖酶构成一组降解甘露聚糖的多糖酶，并且表示能够切割含甘露糖单元的多糖链的酶(即，能够切割甘露聚糖、葡甘露聚糖、半乳甘露聚糖和半乳糖葡甘露聚糖中的糖苷键)。本文所述的“内切-β-甘露聚糖酶”可具有另外的酶活性(例如，内切-1,4-β-葡聚糖酶、1,4-β-甘露糖苷酶和纤维糊精酶活性)。

[0033] 术语“甘露聚糖酶(mannanase)”、“甘露糖苷酶”、“甘露分解酶”、“甘露聚糖酶(mannanase enzyme)”、“甘露聚糖酶多肽”或“甘露聚糖酶蛋白质”是指可降解甘露聚糖的酶、多肽或蛋白质。例如，甘露聚糖酶可以是内切-β-甘露聚糖酶、外切-β-甘露聚糖酶或糖基水解酶。如本文所用，甘露聚糖酶活性可根据本领域已知的任何程序来确定(参见，例如Lever，Anal.Biochem[生物化学年鉴]，47:273,1972；Eriksson和Winell,Acta Chem.Scand.[斯堪的纳维亚化学学报]，(1968),22:1924；US 6,602,842；和WO 95/35362 A1)。

[0034] 如本文所用，“甘露聚糖”是具有由β-1,4-连接的甘露糖组成的主链的多糖；“葡甘露聚糖”是具有或多或少有规律地交替的β-1,4连接的甘露糖和葡萄糖的主链的多糖；“半乳甘露聚糖”和“半乳糖葡甘露聚糖”是具有α-1,6连接的半乳糖侧枝的甘露聚糖和葡甘露聚糖。这些化合物可以被乙酰化。全部或部分去除半乳糖侧枝促进了半乳甘露聚糖和半乳糖葡甘露聚糖的降解。此外，通过全部或部分脱乙酰促进乙酰化甘露聚糖、葡甘露聚糖、半乳甘露聚糖和半乳糖葡甘露聚糖的降解。乙酰基基团可以通过碱或通过甘露聚糖乙酰酯酶
去除。从甘露聚糖酶或通过甘露聚糖酶和α-半乳糖苷酶和/或甘露聚糖乙酰酯酶的组合释
放的低聚物可以进一步降解以通过β-甘露糖苷酶和/或β-葡糖苷酶来释放游离麦芽糖。

[0035] 术语“修饰”是指氨基酸序列中的任何变化或改变，包括用不同于起始氨基酸的氨基酸取代在目的氨基酸序列的鉴定位置处的氨基酸、在目的氨基酸序列的鉴定位置处的氨基酸的缺失、在目的氨基酸序列的鉴定位置处插入氨基酸、置换在目的氨基酸序列中的氨
基酸侧链、和/或目的氨基酸序列的化学修饰。

[0036] 术语“催化活性”或“活性”定量描述了在确定的反应条件下给定底物的转化。术语“残余活性”定义为在一组条件下酶的催化活性与在不同一组条件下的催化活性的比率。术语“比活性”定量描述了在定义的反应条件下每数量的酶的催化活性。

[0037] 术语“pH稳定性”描述了蛋白质承受有限暴露于如下pH值的能力，所述pH值显著偏离pH稳定性最佳的情况下的pH(例如，多于一个pH单位高于或低于最佳pH值)，而在其活性可测量的条件下不丧失其活性。

[0038] 术语“洗涤剂稳定性”是指洗涤剂组合物混合物中指定洗涤剂组合物组分(例如水解酶)的稳定性。

[0039] 术语“过水解酶”是指能够催化导致形成适用于清洁、漂白和消毒等应用的过酸的反应的酶。

[0040] 在短语“水性组合物”和“水性环境”中使用的术语“水性的”是指由至少50％的水构成的组合物。水性组合物可以含有至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、97％、98％或99％的水。

[0041] 术语“表面活性剂”是指本领域通常认为具有表面活性质量的任何化合物。表面活性剂通常包括阴离子、阳离子、非离子和两性离子化合物，其在本文中进一步描述。

[0042] 术语“表面特性”用于指静电电荷、以及诸如蛋白质表面显示的疏水性和亲水性等性质。

[0043] 术语“螯合剂稳定性”是指在本文公开的甘露糖苷、水解、清洁或其他过程期间普遍存在的条件下，例如在暴露于螯合剂或与螯合剂接触时，在给定时间段内，保留指定量的酶活性的本公开的内切-β-甘露聚糖酶。在一些实施例中，在给定的时间段(例如至少约10分钟、约20分钟、约40分钟、约60分钟、约100分钟等)内与螯合剂接触后，甘露聚糖酶保留至少约50％、约60％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约92％、约95％、约96％、约97％、约98％、或约99％的甘露聚糖酶活性。

[0044] 术语“热稳定性(thermal stability)”和“热稳定的(thermostable)”是指在甘露糖苷、水解、清洁或其他过程(例如，暴露于升高的温度时)期间普遍存在的条件下、在给定的时间段内、暴露于升高的温度后，保留指定量的酶活性的甘露聚糖酶。在一些实施例中，在给定的时间段(例如至少约5分钟、10分钟、15分钟、约20分钟、30分钟、40分钟、50分钟、60分钟、120分钟、180分钟、240分钟、300分钟等)内，暴露于升高的温度(例如至少约50℃、约55℃、约60℃、约65℃、或约70℃)后，甘露聚糖酶保留至少约50％、约60％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约92％、约95％、约96％、约97％、约98％、或约99％的甘露聚糖酶活性。

[0045] 术语“清洁活性”是指在本文公开的甘露糖苷、水解、清洁或其他过程期间普遍存在的条件下通过内切-β-甘露聚糖酶实现的清洁性能。在一些实施例中，通过应用涉及源自食物产品、家用剂或个人护理产品的酶敏感污渍的各种清洁测定来确定清洁性能。这些污渍中的一些包括例如冰淇淋、番茄酱、烧烤酱、蛋黄酱、汤、巧克力奶、巧克力布丁、冷冻甜点、洗发水、润肤露、防晒产品、牙膏、槐豆胶或瓜耳胶，如使污渍经受标准洗涤条件后通过各种色谱法、分光光度法或其他定量方法测定的。示例性测定法包括但不限于WO 99/
34011、US 6,605,458和US 6,566,114中描述的那些，以及实例中描述的那些方法。

[0046] 术语“干净表面”和“干净纺织品”是指分别具有至少10％，优选至少15％、20％、25％、30％、35％或40％污染表面或纺织品的去污百分比的表面或纺织品。

[0047] 术语“有效量”当与甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段结合使用时是指在指定清洁组合物中达到期望水平的酶活性所需的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片
段的量。此类有效量可以由本领域普通技术人员容易地确定，并且基于许多因素，例如所使用的特定甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段、清洁应用、清洁组合物的具体组成、以及是否需要液体或干燥(例如，颗粒、棒状、粉末、固体、液体、片剂、凝胶、糊剂、泡沫、薄片、或单位剂量)组合物等。

[0048] 当与清洁组合物结合使用时，术语“辅助成分”是指针对所期望的特定类型的清洁组合物以及产品的形式(例如，液体、颗粒、粉末、棒状、糊剂、喷雾、片剂、凝胶、单位剂量、薄片、或泡沫组合物)选择的任何液体、固体或气体材料，所述材料还优选与组合物中使用的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段相容。在一些实施例中，颗粒组合物呈“紧密”形式，而在其他实施例中，液体组合物呈“浓缩”形式。

[0049] 术语“清洁组合物”和“清洁制剂”是指可用于从待清洁的物品或表面(例如织物、餐具、隐形眼镜、固体表面、头发、皮肤和牙齿)去除不希望的化合物(例如污垢或污渍)的化学成分的混合物。组合物或制剂可以是液体、凝胶、颗粒、粉末、棒状、糊剂、喷雾片、凝胶、单位剂量、薄片或泡沫的形式，取决于待清洁的表面或物品以及组合物或制剂的所期望形式。

[0050] 术语“洗涤剂组合物”和“洗涤剂制剂”是指意在用于洗涤介质中用于清洁污染物品的化学成分的混合物。洗涤剂组合物/制剂通常包含至少一种表面活性剂，并且可以任选地包括水解酶、氧化还原酶、助洗剂、漂白剂、漂白活化剂、上蓝剂、荧光染料、结块抑制剂、掩蔽剂、酶活化剂、抗氧化剂和增溶剂。

[0051] 术语“餐具洗涤组合物”是指所有形式的组合物，包括例如用于清洁餐具和刀具的颗粒、单位剂量和液体形式。在一些实施例中，餐具洗涤组合物是可用于自动餐具洗涤机中的“自动餐具洗涤”组合物。术语“餐具”是指任何材料的餐具(例如，盘子、杯子、玻璃、碗和容器)和刀具(例如器具，包括但不限于匙、刀和叉)，包括但不限于陶瓷、塑料、金属、瓷器、玻璃和丙烯酸树脂。

[0052] 术语“漂白”是指处理材料(例如织物、衣物、纸浆等)或表面持续足够长的时间和在适当的pH和温度条件下处理材料(例如织物、衣物、纸浆等)或表面以实现该材料的增白(即变白)和/或清洁。适合于漂白的化学品的实例包括但不限于ClO2、H2O2、过酸、和NO2。

[0053] 术语甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段的“洗涤性能”是指该变体或重组多肽或其活性片段对洗涤的贡献，其为洗涤剂组合物提供另外的清洁性能。在相关洗涤条
件下比较洗涤性能。本文中使用的术语“相关洗涤条件”表示在餐具或衣物洗涤剂细分市场中实际用于家庭中的条件，特别是洗涤温度、时间、洗涤力学、泡沫浓度、洗涤剂类型和水硬度。

[0054] 如本文使用的，术语“消毒”是指从表面除去污染物，以及在物品表面上抑制或杀死微生物。

[0055] 本文清洁组合物的“紧密”形式最好通过密度来反映，并且就组合物而言通过无机填料盐的量来反映。无机填料盐是处于粉末形式的洗涤剂组合物的常规成分。在常规洗涤剂组合物中，填料盐以相当大的量存在，典型地为总组合物的约17％至约35％(以重量计)。
相比之下，在紧密的组合物中，填料盐以不超过总组合物的约15％的量存在。在一些实施例中，填料盐以不超过组合物(以重量计)的约10％、或更优选地约5％的量存在。在一些实施例中，无机填料盐选自硫酸盐和氯化物的碱盐和碱土金属盐。在一些实施例中，优选的填料盐是硫酸钠。

[0056] 术语“织物”是指例如机织、针织和非机织材料，以及可以转化成例如纱线和机织、针织和非机织织物的短纤维和长丝。该术语包括由天然纤维以及合成(例如，制造的)纤维制成的材料。

[0057] 当核酸或多核苷酸至少部分或完全地与其他组分(包括但不限于例如其他蛋白质、核酸和细胞)分离时，该核酸或多核苷酸是“分离的”。类似地，当多肽、蛋白质或肽至少部分或完全地与其他组分(包括但不限于例如其他蛋白质、核酸和细胞)分离时，该多肽、蛋白质或肽是“分离的”。以摩尔计，在组合物中分离的种类比其他种类更丰富。例如，分离的物种可以包含至少约60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、
95％、96％、97％、98％、99％或100％(以摩尔计)的所有存在的大分子物种。优选地，将目的种类纯化至基本均一性(即，通过常规检测方法不能在组合物中检测到污染物种类)。可以
分别使用本领域熟知的许多技术例如核酸或蛋白质样品的琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳，
接着通过染色后可视化来确定纯度和均一性。如果需要，可以使用高分辨率技术例如高效
液相色谱法(HPLC)或类似方法来纯化物质。

[0058] 术语“纯化的”如应用于核酸或多肽时通常表示基本上不含其他组分的核酸或多肽，如通过本领域熟知的分析技术确定的(例如，纯化的多肽或多核苷酸在电泳凝胶、色谱洗脱液和/或经历密度梯度离心的培养基中形成离散的带)。例如，在电泳凝胶中产生基本
上一条带的核酸或多肽是“纯化的”。纯化的核酸或多肽是至少约50％纯的，通常是至少约
60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、
99％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％或更加纯的(例如，以摩尔计的重量百分比)。在相关意义上，当在应用纯化或富集技术之后存在分子的浓度的大幅度增加时，对于该分子而言
组合物被富集了。术语“富集”是指化合物、多肽、细胞、核酸、氨基酸或其他特定物质或组分以高于起始组合物的相对或绝对浓度存在于组合物中。

[0059] 如本文所用，“多肽”是指包含多个通过肽键连接的氨基酸的分子。术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”可互换使用。蛋白质可以任选地被修饰(例如，糖基化、磷酸化、酰化、法尼基化、异戊二烯化和磺化)以增加功能性。当此类氨基酸序列显示出活性时，它们可以被称为“酶”。使用针对氨基酸残基的常规单字母或三字母密码，采用标准氨基-至-羧基端取向(即N→C)表示的氨基酸序列。

[0060] 术语“多核苷酸”涵盖能够编码多肽的DNA、RNA、异源双链体、以及合成分子。核酸可以是单链或双链的，并且可以具有化学修饰。术语“核酸”和“多核苷酸”可互换地使用。由于遗传密码是简并的，可以使用多于一个密码子来编码具体的氨基酸，并且本发明的组合物和方法涵盖编码具体氨基酸序列的核苷酸序列。除非另有说明，核酸序列以5′-至-3′取向呈现。

[0061] 如本文所用，术语“野生型”和“天然的”是指在自然界中发现的多肽或多核苷酸。

[0062] 关于多肽，术语“野生型”和“亲本”是指在一个或多个氨基酸位置处不包含人为取代、插入或缺失的天然存在的多肽。类似地，关于多核苷酸，术语“野生型”和“亲本”是指在一个或多个核苷处不包含人为取代、插入或缺失的天然存在的多核苷酸。然而，注意，编码野生型或亲本多肽的多核苷酸不限于天然存在的多核苷酸，但是涵盖编码野生型或亲本多肽的任何多核苷酸。

[0063] 关于多肽，术语“参比”是指在一个或多个氨基酸位置处不包含人为取代、插入或缺失的天然存在的多肽，以及在一个或多个氨基酸位置处包含一个或多个人为取代、插入或缺失的多肽。类似地，关于多核苷酸，术语“参比”是指在一个或多个核苷处不包含人为取代、插入或缺失的天然存在的多核苷酸，以及在一个或多个核苷处包含一个或多个人为取
代、插入或缺失的多核苷酸。然而，注意，编码野生型或亲本多肽的多核苷酸不限于天然存在的多核苷酸，但是涵盖编码野生型或亲本多肽的任何多核苷酸。

[0064] 单字母代码“Z”标识亲本或参比氨基酸序列中的插入或缺失。对于相对于亲本或参比序列的插入，单字母代码“Z”位于位置编号的左侧，并且在每个氨基酸被插入其中之前还包括数字(例如，.01)以指示插入的顺序。例如，在位置298处插入一个氨基酸，谷氨酰胺(Q)，将被描述为“Z298.01Q”；在位置298处插入一个氨基酸X(其中X可以是任何氨基酸)将被描述为“Z298.01X”；并且在位置87和88之间插入三个氨基酸，丙氨酸(A)、丝氨酸(S)和酪氨酸(Y)，将被描述为“Z87.01A/Z87.02S/Z87.03Y”。对于缺失，单字母代码“Z”位于位置编号的右侧。例如，从位置100缺失丙氨酸(A)将被描述为A100Z。上述插入和缺失中的一些的组合将被描述为：“G87S/Z87.01A/Z87.02S/Z87.03Y/A100Z”。

[0065] 术语“甘露聚糖酶变体”是指通过取代、添加或缺失一个或多个氨基酸，典型地通过重组DNA技术衍生自参比多肽的多肽。甘露聚糖酶变体可以与参比多肽相差少量的氨基酸残基并且可以通过在催化结构域的长度上与参考多肽的一级氨基酸序列同源性/同一性
的水平来定义。例如，甘露聚糖酶变体与参比多肽具有至少59％、60％、65％、70％、75％、
80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、
95％、96％、97％、98％、或99％氨基酸序列同一性。参比多肽包括甘露聚糖酶GH5_8亚家族内的天然存在的和重组的甘露聚糖酶(内切-1,4β-甘露糖苷酶，EC 3.2.1.78)。该GH5_8亚家族更充分的描述于Aspeborg等人(2012)，“Evolution,substrate specificity and
subfamily classification of glycosyl hydrolase family 5(GH5)[糖基水解酶家族5
(GH5)的进化、底物特异性和亚家族分类]”，BMC Evolutionary Biology[BMC进化生物学]，
12:186。示例性GH5_8细菌甘露聚糖酶包括，例如，NDL-进化枝甘露聚糖酶，例如像PspMan4(SEQ ID NO:14)和PspMan9(SEQ ID NO:30)；和其他甘露聚糖酶，例如，像芽孢杆菌属物种
1WKY_A(BAD99527.1)(SEQ ID NO:43)、黏琼脂芽孢杆菌2WHL_A(Q5YEX6的残基30-330)(SEQ ID NO:45)、WO 2015022428-0015(SEQ ID NO:44)、US 6566114-002(SEQ ID NO:160)的残
基32-330和US 6566114-002(SEQ ID NO:162)的残基32-340。甘露聚糖酶的NDL-进化枝在
2015年7月10日提交的国际专利申请号PCT/US 15/40057(其随后作为WO 2016/007929公
开)中更充分地描述。

[0066] 术语“变体多核苷酸”是指编码甘露聚糖酶变体、与亲本多核苷酸具有特定程度的同源性/同一性、或在严格条件下与亲本多核苷酸或其互补序列杂交的多核苷酸。例如，变体多核苷酸与亲本多核苷酸具有至少59％、60％、65％、70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或
99％核苷酸序列同一性。

[0067] 序列同一性可使用已知程序如BLAST、ALIGN和CLUSTAL使用标准参数来确定(参见例如Altschul等人，[1990]J.Mol.Biol.[分子生物学杂志]215:403-410；Henikoff等人，

[1989]Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]89:10915；Karin等人，[1993]Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院院刊]90:5873；以及Higgins等人，[1988]Gene
[基因]73:237-244)。用于进行BLAST分析的软件可通过国家生物技术信息中心(NCBI)公开
获得。也可以使用FASTA(Pearson等人，[1988]Proc.Natl.Acad.Sci.USA[美国国家科学院
院刊]85:2444-2448)来搜索数据库。两种多肽基本上相同的一个指示是第一多肽与第二多
肽具有免疫交叉反应性。典型地，差别在于保守氨基酸取代的多肽具有免疫交叉反应性。因此，多肽与第二多肽实质上相同，例如，其中两个肽仅相差保守取代。另一个用于比较多个蛋白质序列的有用的算法是来自Geneious软件(生物物质有限公司(Biomatters Ltd.))的
MUSCLE程序(Robert C.Edgar，MUSCLE:Multi sequence alignment with high accuracy
and high throughput[MUSCLE：具有高精确度和高通量的多重序列比对]，Nucleic Acids Res.[核酸研究](2004)32(5):1792-1797)。

[0068] 术语“来源于”涵盖术语“起源于”、“获得自”、“可获得自”、“分离自”和“产生自”，并且通常表示一种指定的材料在另一种指定的材料中找到其起源或具有可以参考另一种指定的材料来描述的特征。

[0069] 术语“杂交”是指通过碱基配对将核酸链与互补链连接的过程，如本领域已知的。

[0070] 术语“杂交条件”是指进行杂交反应的条件。这些条件通常根据杂交在其下测量的条件的“严格”度来分类。严格度可以是基于例如结合复合物或探针的核酸的解链温度(Tm)。例如，“最大严格”通常发生在约Tm-5℃(低于探针的Tm 5℃)；“高严格”发生在低于Tm约5℃-10℃；“中等严格”发生在低于探针的Tm约10℃-20℃；并且“低严格”发生在低于Tm约
20℃-25℃。可替代地，或另外，杂交条件可以基于杂交的盐或离子强度条件，和/或基于一次或多次严格洗涤，例如：6X SSC＝非常低严格；3X SSC＝低至中严格；1X SSC＝中严格；以及0.5X SSC＝高严格。在功能上，最大严格条件可以用于鉴定与杂交探针具有严格同一性
或近乎严格同一性的核酸序列；而高严格条件用于鉴定与探针具有约80％或更高序列同一
性的核酸序列。对于需要高选择性的应用，通常希望使用相对严格的条件来形成杂交(例
如，使用相对较低的盐和/或高温条件)。

[0071] 在至少两种核酸或多肽的背景下，术语“基本相似”或“基本上同一”意指多核苷酸或多肽包含与亲本或参比序列具有至少约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％同一性的序列，或包括只是为了规避本说明书而不添加功能的氨基酸取代、插入、缺失或修饰的序列。

[0072] 术语“表达载体”是指包含编码特定多肽的DNA序列的DNA构建体，并且有效地连接到能够在合适的宿主中实现多肽表达的合适的控制序列。这样的控制序列包括影响转录的启动子，控制这种转录的任选的操纵子序列，编码合适的mRNA核糖体结合位点的序列，以及控制转录和翻译终止的序列。载体可以是质粒、噬菌体颗粒，或简单地是潜在的基因组插入物。一旦转化入合适的宿主中，载体可以独立于宿主基因组复制和起作用，或者在某些情况下可以整合入基因组本身。

[0073] 术语“重组”是指如通过以下被修饰以改变其序列或表达特征的遗传材料(即核酸、它们编码的多肽、以及包含此类多核苷酸的载体和细胞)：使编码序列突变以产生改变的多肽，将编码序列融合到另一基因的编码序列，将基因置于不同启动子的控制下，在异源生物体中表达基因，以降低或升高的水平表达基因，以与其天然表达谱不同的方式有条件
地或组成地表达基因，等等。通常，基于此的重组核酸、多肽和细胞已被人为操纵，这样使得它们与自然界中发现的相关的核酸、多肽和细胞不同一。

[0074] 术语“信号序列”是指与多肽的N末端部分结合的并且有利于成熟形式的蛋白质从细胞中分泌的氨基酸序列。细胞外的蛋白质的成熟形式缺乏在分泌过程中被切除的信号序
列。

[0075] 术语“选择性标志物”或“可选择的标志物”是指能够在宿主细胞中表达的基因，该基因允许容易地选择包含导入的核酸或载体的那些宿主。可选择的标志物的实例包括但不限于在宿主细胞上赋予代谢优势，如营养优势的抗微生物物质(例如，潮霉素、博来霉素或氯霉素)和/或基因。术语“可选基因产物”是指编码如下酶活性的基因，所述酶活性赋予可选择的标志物在其中表达的细胞对抗生素或药物的抗性。

[0076] 如本文所用，术语“调节元件”是指控制核酸序列的表达的一些方面的遗传元件。例如，启动子是有利于有效地连接的编码区的转录的起始的调节元件。另外的调节元件包
括剪接信号、聚腺苷酸化信号和终止信号。

[0077] 术语“宿主细胞”通常是指用本领域已知的重组DNA技术构建的载体转化或转染的原核或真核宿主。转化的宿主细胞能够复制编码蛋白质变体的载体或表达所希望的蛋白质
变体。在编码预成型或形成(pro-form)蛋白质变体的载体的情况下，当表达时，这些变体通常从宿主细胞分泌到宿主细胞培养基中。

[0078] 在将核酸序列插入细胞的背景下，术语“引入”是指转化、转导或转染。转化手段包括本领域已知的原生质体转化、氯化钙沉淀、电穿孔、裸DNA等等。(参见，Chang和Cohen

[1979]，Mol.Gen.Genet.[分子遗传学和普通遗传学]168:111-115；Smith等人[1986]，Appl.Env.Microbiol.[应用与环境微生物学]51:634；以及Ferrari等人在Harwood[哈伍
德]，Bacillus[芽孢杆菌属]，普莱南出版公司，第57-72页，1989中的评论文章)。

[0079] 术语“约”当与数值结合使用时是指数值的-10％至+10％的范围。例如，短语“约6的pH值”是指pH值为从5.4至6.6。

[0080] 本文使用的任何标题是为了方便而提供的，并且不应该被解释为限制。包含在一个标题下的描述可能适用于整个说明书。

[0081] 本文所公开的变体、组合物和方法涉及包含两个或更多个修饰的重组甘露聚糖酶、或重组多肽或其活性片段，其中这类变体通过常规分子生物学技术产生(参见例如，
Sambrook等人，Molecular Cloning:Cold Spring Harbor Laboratory Press[分子克隆：
冷泉港实验室出版社])。在一个实施例中，变体甘露聚糖酶或重组多肽或其活性片段包含
选自至少一个取代、至少一个缺失和至少一个插入的两个或更多个修饰。在一些实施例中，修饰包含突变的组合，例如，像至少一个取代和至少一个缺失、至少一个缺失和至少一个插入、至少一个插入和至少一个取代、或至少一个取代、至少一个缺失、和至少一个插入的组合。

[0082] 一个实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含两个或更多个选自以下的修饰：(i)在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代：1、2、3、4、6、10、19、28、30、38、59、60、61、62、63、66、67、68、70、71、74、
75、78、80、82、93、97、103、111、124、129、131、135、136、139、143、150、167、168、184、213、
214、217、225、228、235、242、244、258、259、261、263、276、283、和284，和(ii)在位置298处的插入；其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸
序列相对应来编号。仍另一个实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多
肽或其活性片段，该氨基酸序列包含两个或更多个选自以下的修饰：(i)在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代：1、2、3、4、6、10、19、28、30、38、59、60、62、63、66、67、68、
70、71、74、75、78、80、82、93、97、103、111、124、129、131、135、136、139、143、150、167、168、
184、213、214、217、225、228、235、242、244、258、259、261、263、276、283、和284，和(ii)在位置298处的插入；其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:
14的氨基酸序列相对应来编号。又另一个实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变
体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含两个或更多个选自以下的修饰：(i)在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代：1、2、3、4、6、10、19、28、30、38、59、60、62、63、
66、67、68、70、71、74、75、78、80、82、93、97、103、111、124、129、131、135、136、139、143、150、
167、168、184、213、214、217、225、228、235、242、244、258、259、261、283、和284，和(ii)在位置298处的插入；其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:
14的氨基酸序列相对应来编号。仍另外的实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变
体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含两个或更多个选自以下的修饰：(i)在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代：1、4、6、10、19、28、30、38、59、60、63、66、67、
68、70、71、74、75、78、80、82、97、103、111、124、129、131、143、167、168、184、214、217、225、
228、235、242、244、258、259、261、263、276、和284，和(ii)在位置298处的插入；其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编
号。

[0083] 另外的实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含两个或更多个选自以下的修饰：(i)在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代：19、30、38、59、60、63、67、68、71、74、97、103、129、167、168、184、225、
228、235、242、244、258、和261，和(ii)在位置298处的插入；其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号。另一个实施例涉
及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含两
个或更多个选自以下的修饰：(i)在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代：19、
30、38、59、60、63、67、97、103、129、167、184、225、228、235、244、258、和261，和(ii)在位置
298处的插入；其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14
的氨基酸序列相对应来编号。又仍另外的实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变
体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含两个或更多个选自以下的修饰：在选自以
下的一个或多个位置处的一个或多个取代：19、38、59、67、68、71、74、97、129、167、168、184、
225、228、235、242、244、258、和261；其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号。

[0084] 甚至另外的实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含两个或更多个选自以下的修饰：(i)在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代：M1X、A2X、T3X、G4X、Y6X、N10X、P19X、G28X、S30X、T38X、S59X、L60X、Y61X、T62X、K63X、L66X、N67X、A68X、K70X、N71X、N74X、V75X、Q78X、K80X、I82X、K93X、N97X、V103X、E111X、I124X、Y129X、T131X、S135X、A136X、D139X、K143X、N150X、F167X、P168X、Q184X、N213X、K214X、A217X、G225X、T228X、Y235X、Q242X、K244X、S258X、G259X、N261X、L263X、F276X、D283X、和T284X，和(ii)在位置Z298.01X处的插入；其中X是任何氨基酸；并且其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列
相对应来编号。仍甚至另外的实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多
肽或其活性片段，该氨基酸序列包含两个或更多个选自以下的修饰：(i)在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代：M1X、A2X、T3X、G4X、Y6X、N10X、P19X、G28X、S30X、T38X、S59X、L60X、T62X、K63X、L66X、N67X、A68X、K70X、N71X、N74X、V75X、Q78X、K80X、I82X、K93X、N97X、V103X、E111X、I124X、Y129X、T131X、S135X、A136X、D139X、K143X、N150X、F167X、P168X、Q184X、N213X、K214X、A217X、G225X、T228X、Y235X、Q242X、K244X、S258X、G259X、N261X、L263X、F276X、D283X、和T284X，和(ii)在位置Z298.01X处的插入；其中X是任何氨基酸；并且其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列
相对应来编号。又仍另外的实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽
或其活性片段，该氨基酸序列包含两个或更多个选自以下的修饰：(i)在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代：M1X、G4X、Y6X、N10X、P19X、G28X、S30X、T38X、S59X、L60X、K63X、L66X、N67X、A68X、K70X、N71X、N74X、V75X、Q78X、K80X、I82X、N97X、V103X、E111X、I124X、Y129X、T131X、K143X、F167X、P168X、Q184X、K214X、A217X、G225X、T228X、Y235X、Q242X、K244X、S258X、G259X、N261X、L263X、F276X、和T284X，和(ii)在位置Z298.01X处的插入；其中X是任何氨基酸；并且其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号。甚至仍又另外的实施例涉及包含如下氨基酸序
列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含两个或更多个选自以下
的修饰：(i)在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代：M1X、A2X、T3X、G4X、Y6X、N10X、P19X、G28X、S30X、T38X、S59X、L60X、T62X、K63X、L66X、N67X、A68X、K70X、N71X、N74X、V75X、Q78X、K80X、I82X、K93X、N97X、V103X、E111X、I124X、Y129X、T131X、S135X、A136X、D139X、K143X、N150X、F167X、P168X、Q184X、N213X、K214X、A217X、G225X、T228X、Y235X、Q242X、K244X、S258X、G259X、N261X、D283X、和T284X，和(ii)在位置Z298.01X处的插入；其中X是任何氨基酸；并且其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID
NO:14的氨基酸序列相对应来编号。

[0085] 仍又另外的实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含两个或更多个选自以下的修饰：(i)在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代：P19X、S30X、T38X、S59X、L60X、K63X、N67X、A68X、N71X、N74X、N97X、V103X、Y129X、F167X、P168X、Q184X、G225X T228X、Y235X、Q242X、K244X、S258X、和N261X，和(ii)在位置Z298.01X处的插入；其中X是任何氨基酸；并且其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号。甚至仍另
外的实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基
酸序列包含两个或更多个选自以下的修饰：(i)在选自以下的一个或多个位置处的一个或
多个取代：P19X、S30X、T38X、S59X、L60X、K63X、N67X、N97X、V103X、Y129X、F167X、Q184X、G225X T228X、Y235X、K244X、S258X、和N261X，和(ii)在位置Z298.01X处的插入；其中X是任何氨基酸；并且其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14
的氨基酸序列相对应来编号。仍又甚至另外的实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖
酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含两个或更多个选自以下的修饰：(i)在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代：P19X、T38X、S59X、N67X、A68X、N71X、N74X、N97X、Y129X、F167X、P168X、Q184X、G225X T228X、Y235X、Q242X、K244X、S258X、和N261X；其中X是任何氨基酸；并且其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通
过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号。

[0086] 另外的实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含两个或更多个选自以下的修饰：(i)在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代：X1V、X1L、X2S、X3R、X4S、X6S、X6E、X10T、X10S、X19E、X28A、X28S、X30T、X38E、X59D、X59V、X60Q、X62E、X63R、X63L、X63E、X66V、X67D、X68S、X70R、X71D、X74E、X74S、X75L、X78D、X78H、X80T、X82M、X93R、X97D、X97L、X103I、X111D、X111S、X124V、X129M、X131A、X135L、X136L、X139M、X143Q、X143R、X150T、X167Y、X168A、X168S、X184D、X184L、X213A、X214I、X217P、X225C、X225P、X228V、X235L、X242L、X244L、X258D、X259P、X261Q、X261R、X263E、X276Y、X283S、X284A、和X284E，和(ii)在位置Z298.01Q处的插入；其中X是任何氨基酸；并且其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基
酸序列相对应来编号。甚至另外的实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重
组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含两个或更多个选自以下的修饰：(i)在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代：X1V、X1L、X2S、X3R、X4S、X6S、X6E、X10T、X10S、X19E、X28A、X28S、X30T、X38E、X59D、X59V、X60Q、X61W、X62E、X63R、X63L、X63E、X66V、X67D、X68S、X70R、X71D、X74E、X74S、X75L、X78D、X78H、X80T、X82M、X93R、X97D、X97L、X103I、X111D、X111S、X124V、X129M、X131A、X135L、X136L、X139M、X143Q、X143R、X150T、X167Y、X168A、X168S、X184D、X184L、X213A、X214I、X217P、X225C、X225P、X228V、X235L、X242L、X244L、X258D、X259P、X261Q、X261R、X263E、X276Y、X283S、X284A、和X284E，和(ii)在位置Z298.01Q处的插入；其中X是任何氨基酸；并且其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号。仍另外的实施例涉及包含如下氨基酸序
列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含两个或更多个选自以下
的修饰：(i)在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代：X1V、X1L、X2S、X3R、X4S、X6E、X10T、X10S、X19E、X28A、X28S、X30T、X38E、X59D、X59V、X60Q、X62E、X63R、X63L、X66V、X67D、X68S、X70R、X71D、X74E、X74S、X75L、X78D、X78H、X80T、X82M、X93R、X97D、X97L、X103I、X111D、X111S、X124V、X129M、X131A、X135L、X136L、X139M、X143Q、X143R、X150T、X167Y、X168A、X168S、X184D、X184L、X213A、X214I、X217P、X225C、X225P、X228V、X235L、X242L、X244L、X258D、X259P、X261Q、X261R、X283S、X284A、和X284E，和(ii)在位置Z298.01Q处的插入；其中X是任何氨基酸；并且其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号。仍甚至另外的实施例涉及包含如下氨基酸序列
的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含两个或更多个选自以下的
修饰：(i)在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代：X1V、X1L、X2S、X3R、X10T、X19E、X28A、X28S、X30T、X38E、X59D、X59V、X60Q、X62E、X63R、X63L、X66V、X67D、X68S、X70R、X71D、X74E、X78D、X80T、X82M、X97D、X97L、X103I、X111D、X111S、X124V、X129M、X131A、X139M、X143Q、X143R、X150T、X167Y、X168A、X168S、X184D、X184L、X213A、X214I、X217P、X225C、X225P、X228V、X235L、X244L、X258D、X259P、X261Q、X261R、X283S、X284A、和X284E，和(ii)在位置Z298.01Q处的插入；其中X是任何氨基酸；并且其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号。甚至仍另外的实施例涉及
包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含两个
或更多个选自以下的修饰：(i)在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代：X1V、
X4S、X6S、X6E、X10T、X10S、X19E、X28S、X30T、X38E、X59V、X60Q、X63R、X63L、X66V、X67D、X68S、X70R、X71D、X74S、X75L、X78D、X78H、X80T、X82M、X97D、X103I、X111D、X124V、X129M、X131A、X143Q、X143R、X167Y、X168S、X184L、X214I、X217P、X225C、X225P、X228V、X235L、X242L、X244L、X258D、X259P、X261R、X263E、X276Y、和X284A，和(ii)在位置Z298.01Q处的插入；其中X是任何氨基酸；并且其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID
NO:14的氨基酸序列相对应来编号。

[0087] 甚至另外的实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含两个或更多个选自以下的修饰：(i)在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代：X19E、X30T、X38E、X59V、X60Q、X63R、X63L、X63E、X67D、X68S、X71D、X74E、X74S、X97D、X97L、X103I、X129M、X167Y、X168A、X168S、X184D、X184L、X225C、X225P、X228V、X235L、X242L、X244L、X258D、X261Q、和X261R，和(ii)在位置Z298.01Q处的插入；其中X是任何氨基酸；并且其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号。又甚至另外的实施例涉及包含如下氨基酸序列
的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含两个或更多个选自以下的
修饰：(i)在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代：X19E、X38E、X59V、X67D、X68S、X71D、X74E、X74S、X97D、X97L、X129M、X167Y、X168A、X168S、X184D、X184L、X225C、X225P、X228V、X235L、X242L、X244L、X258D、X261Q、和X261R；其中X是任何氨基酸；并且其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对
应来编号。又甚至仍另外的实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽
或其活性片段，该氨基酸序列包含两个或更多个选自以下的修饰：(i)在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代：X19E、X38E、X59V、X67D、X68S、X71D、X74E、X97D、X97L、X129M、X167Y、X168A、X168S、X184D、X184L、X225C、X225P、X228V、X235L、X244L、X258D、X261Q、和X261R；其中X是任何氨基酸；并且其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号。仍另外的实施例涉及包含如下氨
基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含两个或更多个选
自以下的修饰：(i)在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代：X19E、X30T、X38E、X59V、X60Q、X63R、X63L、X63E、X67D、X97D、X103I、X129M、X167Y、X184L、X225C、X225P、X228V、X235L、X244L、X258D、和X261R，和(ii)在位置Z298.01Q处的插入；其中X是任何氨基酸；并且其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列
相对应来编号。

[0088] 另外的实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含两个或更多个选自以下的修饰：(i)在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代：M1V、M1L、A2S、T3R、G4S、Y6S、Y6E、N10T、N10S、P19E、G28A、G28S、S30T、T38E、S59D、S59V、L60Q、Y61W、T62E、K63R、K63L、K63E、L66V、N67D、A68S、K70R、N71D、N74E、N74S、V75L、Q78D、Q78H、K80T、I82M、K93R、N97D、N97L、V103I、E111D、E111S、I124V、Y129M、T131A、T135L、A136L、D139M、K143Q、K143R、N150T、F167Y、P168A、P168S、Q184D、Q184L、N213A、K214I、A217P、G225C、G225P、T228V、Y235L、Q242L、K244L、S258D、G259P、N261Q、N261R、L263E、F276Y、D283S、T284A、和T284E，和(ii)在位置Z298.01Q处的插入；其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编
号。仍另外的实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片
段，该氨基酸序列包含两个或更多个选自以下的修饰：(i)在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代：M1V、M1L、A2S、T3R、G4S、Y6S、Y6E、N10T、N10S、P19E、G28A、G28S、S30T、T38E、S59D、S59V、L60Q、T62E、K63R、K63L、K63E、L66V、N67D、A68S、K70R、N71D、N74E、N74S、V75L、Q78D、Q78H、K80T、I82M、K93R、N97D、N97L、V103I、E111D、E111S、I124V、Y129M、T131A、T135L、A136L、D139M、K143Q、K143R、N150T、F167Y、P168A、P168S、Q184D、Q184L、N213A、K214I、A217P、G225C、G225P、T228V、Y235L、Q242L、K244L、S258D、G259P、N261Q、N261R、L263E、F276Y、D283S、T284A、和T284E，和(ii)在位置Z298.01Q处的插入；其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号。又另
外的实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基
酸序列包含两个或更多个选自以下的修饰：(i)在选自以下的一个或多个位置处的一个或
多个取代：M1V、M1L、A2S、T3R、G4S、Y6E、N10T、N10S、P19E、G28A、G28S、S30T、T38E、S59D、S59V、L60Q、T62E、K63R、K63L、L66V、N67D、A68S、K70R、N71D、N74E、N74S、V75L、Q78D、Q78H、K80T、I82M、K93R、N97D、N97L、V103I、E111D、E111S、I124V、Y129M、T131A、T135L、A136L、D139M、K143Q、K143R、N150T、F167Y、P168A、P168S、Q184D、Q184L、N213A、K214I、A217P、G225C、G225P、T228V、Y235L、Q242L、K244L、S258D、G259P、N261Q、N261R、D283S、T284A、和T284E，和(ii)在位置Z298.01Q处的插入；其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号。又仍另外的实施例涉及包含如下氨
基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含两个或更多个选
自以下的修饰：(i)在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代：M1V、M1L、A2S、T3R、N10T、P19E、G28A、G28S、S30T、T38E、S59D、S59V、L60Q、T62E、K63R、K63L、L66V、N67D、A68S、K70R、N71D、N74E、Q78D、K80T、I82M、N97D、N97L、V103I、E111D、E111S、I124V、Y129M、T131A、D139M、K143Q、K143R、N150T、F167Y、P168A、P168S、Q184D、Q184L、N213A、K214I、A217P、G225C、G225P、T228V、Y235L、K244L、S258D、G259P、N261Q、N261R、D283S、T284A、和T284E，和(ii)在位置Z298.01Q处的插入；其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过
与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号。仍甚至另外的实施例涉及包含如下氨基酸序
列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含两个或更多个选自以下
的修饰：(i)在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代：M1V、G4S、Y6S、Y6E、N10T、N10S、P19E、G28S、S30T、T38E、S59V、L60Q、K63R、K63L、K63E、L66V、N67D、A68S、K70R、N71D、N74S、V75L、Q78D、Q78H、K80T、I82M、N97D、V103I、E111D、I124V、Y129M、T131A、K143Q、K143R、F167Y、P168S、Q184L、K214I、A217P、G225C、G225P、T228V、Y235L、Q242L、K244L、S258D、G259P、N261R、L263E、F276Y、和T284A，和在位置Z298.01Q处的插入；并且其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号。

[0089] 另外的实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含两个或更多个选自以下的修饰：(i)在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代：P19E、S30T、T38E、S59D、S59V、L60Q、K63R、K63L、K63E、N67D、A68S、N71D、N74E、N74S、N97D、N97L、V103I、Y129M、F167Y、P168A、P168S、Q184D、Q184L、G225C、G225P、T228V、Y235L、Q242L、K244L、S258D、N261Q、和N261R，和(ii)在位置Z298.01Q处的插入；其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序
列相对应来编号。又另外的实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽
或其活性片段，该氨基酸序列包含两个或更多个选自以下的修饰：选自以下的两个或更多
个取代：P19E、T38E、S59D、S59V、N67D、A68S、N71D、N74E、N97D、N97L、Y129M、F167Y、P168A、P168S、Q184D、Q184L、G225C、G225P、T228V、Y235L、K244L、S258D、N261Q、和N261R；其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来
编号。另一个实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片
段，该氨基酸序列包含两个或更多个选自以下的修饰：(i)在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代：P19E、S30T、T38E、S59V、L60Q、K63R、K63L、K63E、N67D、N97D、V103I、Y129M、F167Y、Q184L、G225C、G225P T228V、Y235L、K244L、S258D、和N261R，和(ii)在位置Z298.01Q处的插入；其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID
NO:14的氨基酸序列相对应来编号。

[0090] 另一个实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含两个或更多个选自以下的修饰：129-244、129-143-244、38-258、
38-143-258、19-184、19-143-184、97-225、97-143-225、67-168、67-143-168、60-61、63-71、
63-71-143、228-235、和143-228-235，其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号。仍另一个实施例涉及包含如下氨基酸
序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含两个或更多个选自以
下的修饰：129-244、129-143-244、38-258、38-143-258、19-184、19-143-184、97-225、97-
143-225、67-168、67-143-168、63-71、63-71-143、228-235、和143-228-235，其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号。
另外的实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨
基酸序列包含两个或更多个选自以下的修饰：129-244、38-258、19-184、97-225、67-168、
63-71、和228-235，其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID
NO:14的氨基酸序列相对应来编号。又另外的实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖
酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含两个或更多个选自以下的修饰：129-
143-244、38-143-258、19-143-184、97-143-225、67-143-168、63-71-143、和143-228-235，其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列
相对应来编号。仍又另外的实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽
或其活性片段，该氨基酸序列包含两个或更多个选自以下的修饰：在选自以下的一个或多
个位置处的一个或多个取代：129-244、38-258、19-184、97-225、67-168、63-71、和228-235；
其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列
相对应来编号。甚至仍另外的实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多
肽或其活性片段，该氨基酸序列包含两个或更多个选自以下的修饰：在选自以下的一个或
多个位置处的一个或多个取代：129-143-244、38-143-258、19-143-184、97-143-225、67-
143-168、63-71-143、和143-228-235；其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号。

[0091] 另一个实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含两个或更多个选自以下的修饰：Y129X-K244X、Y129X-K143X-
K244X、T38X-S258X、T38X-K143X-S258X、P19X-Q184X、P19X-K143X-Q184X、N97X-G225X、N97X-K143X-G225X、L60X-Y61X、N67X-P168X、N67X-K143X-P168X、K63X-N71X、K63X-N71X-K143X、T228X-Y235X、和K143X-T228X-Y235X；其中X是任何氨基酸；并且其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号。仍另
一个实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基
酸序列包含两个或更多个选自以下的修饰：Y129X-K244X、Y129X-K143X-K244X、T38X-
S258X、T38X-K143X-S258X、P19X-Q184X、P19X-K143X-Q184X、N97X-G225X、N97X-K143X-
G225X、N67X-P168X、N67X-K143X-P168X、K63X-N71X、K63X-N71X-K143X、T228X-Y235X、和K143X-T228X-Y235X；其中X是任何氨基酸；并且其中所述变体或重组多肽或其活性片段的
氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号。另外的实施例涉及包含如下
氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含两个或更多个
选自以下的修饰：Y129X-K244X、T38X-S258X、P19X-Q184X、N97X-G225X、N67X-P168X、K63X-N71X、和T228X-Y235X；其中X是任何氨基酸；并且其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号。甚至另外的实施例涉及包含
如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含两个或更
多个选自以下的修饰：Y129X-K143X-K244X、T38X-K143X-S258X、P19X-K143X-Q184X、N97X-K143X-G225X、N67X-K143X-P168X、K63X-N71X-K143X、和K143X-T228X-Y235X；其中X是任何氨基酸；并且其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的
氨基酸序列相对应来编号。仍又另外的实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体
或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含两个或更多个选自以下的修饰：在选自以下
的一个或多个位置处的一个或多个取代：Y129X-K244X、Y129X-K143X-K244X、T38X-S258X、T38X-K143X-S258X、P19X-Q184X、P19X-K143X-Q184X、N97X-G225X、N97X-K143X-G225X、
N67X-P168X、N67X-K143X-P168X、K63X-N71X、K63X-N71X-K143X、T228X-Y235X、和K143X-T228X-Y235X；其中X是任何氨基酸；并且其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸
位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号。甚至仍又另外的实施例涉及包含如
下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含两个或更多
个选自以下的修饰：在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代：Y129X-K244X、
T38X-S258X、P19X-Q184X、N97X-G225X、N67X-P168X、K63X-N71X、和T228X-Y235X；其中X是任何氨基酸；并且其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14
的氨基酸序列相对应来编号。又另一个实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体
或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含两个或更多个选自以下的修饰：在选自以下
的一个或多个位置处的一个或多个取代：Y129X-K143X-K244X、T38X-K143X-S258X、P19X-
K143X-Q184X、N97X-K143X-G225X、N67X-K143X-P168X、K63X-N71X-K143X、和K143X-T228X-Y235X；其中X是任何氨基酸；并且其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通
过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号。

[0092] 另一个实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含两个或更多个选自以下的修饰：X129M-X244L、X129M-X143Q-
X244L、X38E-X258D、X38E-X143Q-X258D、X19E-X184D、X19E-X143Q-X184D、X19E-X184L、X19E-X143Q-X184L、X97D-X225C、X97D-X143Q-X225C、X97D-X225P、X97D-X143Q-X225P、
X60Q-X61W、X67D-X168S、X67D-X143Q-X168S、X63L-X71D、X63L-X71D-X143Q、X63R-X71D、X63R-X71D-X143Q、X228V-X235L、和X143Q-X228V-X235L；其中X是任何氨基酸；并且其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应
来编号。仍另一个实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性
片段，该氨基酸序列包含两个或更多个选自以下的修饰：X129M-X244L、X129M-X143Q-
X244L、X38E-X258D、X38E-X143Q-X258D、X19E-X184D、X19E-X143Q-X184D、X19E-X184L、X19E-X143Q-X184L、X97D-X225C、X97D-X143Q-X225C、X97D-X225P、X97D-X143Q-X225P、
X67D-X168S、X67D-X143Q-X168S、X63L-X71D、X63L-X71D-X143Q、X63R-X71D、X63R-X71D-X143Q、X228V-X235L、和X143Q-X228V-X235L；其中X是任何氨基酸；并且其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号。另外
的实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸
序列包含两个或更多个选自以下的修饰：X129M-X244L、X38E-X258D、X19E-X184D、X19E-
X184L、X97D-X225C、X97D-X225P、X67D-X168S、X63L-X71D、X63R-X71D、和X228V-X235L，其中X是任何氨基酸；并且其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID
NO:14的氨基酸序列相对应来编号。又另外的实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖
酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含两个或更多个选自以下的修饰：
X129M-X143Q-X244L、X38E-X143Q-X258D、X19E-X143Q-X184D、X19E-X143Q-X184L、X97D-
X143Q-X225C、X97D-X143Q-X225P、X67D-X143Q-X168S、X63L-X71D-X143Q、X63R-X71D-
X143Q、和X143Q-X228V-X235L，其中X是任何氨基酸；并且其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号。另外的实施例涉及
包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含两个
或更多个选自以下的修饰：在选自以下的一个或多个位置处的一个或多个取代：X129M-
X244L、X129M-X143Q-X244L、X38E-X258D、X38E-X143Q-X258D、X19E-X184D、X19E-X143Q-X184D、X19E-X184L、X19E-X143Q-X184L、X97D-X225C、X97D-X143Q-X225C、X97D-X225P、X97D-X143Q-X225P、X67D-X168S、X67D-X143Q-X168S、X63L-X71D、X63L-X71D-X143Q、X63R-X71D、X63R-X71D-X143Q、X228V-X235L、和X143Q-X228V-X235L；其中X是任何氨基酸；并且其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相
对应来编号。另一个实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活
性片段，该氨基酸序列包含两个或更多个选自以下的修饰：在选自以下的一个或多个位置
处的一个或多个取代：X129M-X244L、X38E-X258D、X19E-X184D、X19E-X184L、X97D-X225C、X97D-X225P、X67D-X168S、X63L-X71D、X63R-X71D和X228V-X235L，其中X是任何氨基酸；并且其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列
相对应来编号。又另一个实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或
其活性片段，该氨基酸序列包含两个或更多个选自以下的修饰：在选自以下的一个或多个
位置处的一个或多个取代：X129M-X143Q-X244L、X38E-X143Q-X258D、X19E-X143Q-X184D、X19E-X143Q-X184L、X97D-X143Q-X225C、X97D-X143Q-X225P、X67D-X143Q-X168S、X63L-
X71D-X143Q、X63R-X71D-X143Q、和X143Q-X228V-X235L，其中X是任何氨基酸；并且其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来
编号。

[0093] 另一个实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含两个或更多个选自以下的修饰：Y129M-K244L、Y129M-K143Q-
K244L、T38E-S258D、T38E-K143Q-S258D、P19E-Q184D、P19E-K143Q-Q184D、P19E-Q184L、P19E-K143Q-Q184L、N97D-G225C、N97D-K143Q-G225C、N97D-G225P、N97D-K143Q-G225P、
L60Q-Y61W、N67D-P168S、N67D-K143Q-P168S、K63L-N71D、K63L-N71D-K143Q、K63R-N71D、K63R-N71D-K143Q、T228V-Y235L、和K143Q-T228V-Y235L；其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号。仍另一个实施例涉
及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含两
个或更多个选自以下的修饰：Y129M-K244L、Y129M-K143Q-K244L、T38E-S258D、T38E-K143Q-S258D、P19E-Q184D、P19E-K143Q-Q184D、P19E-Q184L、P19E-K143Q-Q184L、N97D-G225C、N97D-K143Q-G225C、N97D-G225P、N97D-K143Q-G225P、N67D-P168S、N67D-K143Q-P168S、
K63L-N71D、K63L-N71D-K143Q、K63R-N71D、K63R-N71D-K143Q、T228V-Y235L、和K143Q-
T228V-Y235L；其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14
的氨基酸序列相对应来编号。另外的实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或
重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含两个或更多个选自以下的修饰：Y129M-K244L、T38E-S258D、P19E-Q184D、P19E-Q184L、N97D-G225C、N97D-G225P、N67D-P168S、K63L-N71D、K63R-N71D、和T228V-Y235L；其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与
SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号。仍另外的实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘
露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含两个或更多个选自以下的修
饰：Y129M-K143Q-K244L、T38E-K143Q-S258D、P19E-K143Q-Q184D、P19E-K143Q-Q184L、N97D-K143Q-G225C、N97D-K143Q-G225P、N67D-K143Q-P168S、K63L-N71D-K143Q、K63R-N71D-
K143Q、和K143Q-T228V-Y235L；其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过
与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号。

[0094] 另外的实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含：P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-Q184L-K244L-S258D-N261R；N67D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-G259P；P19E-K63L-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-
G225C-T228V-K244L；P19E-T38E-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R；
P19E-T38E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-G225C-K244L-S258D-N261R；T38E-
K63L-N71D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Q242L-K244L-S258D-N261R；P19E-K63L-
N71D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-K244L-S258D-G259P；N10T-T38E-S59V-L60Q-K63R-L66V-
A68S-N74S-V75L-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-A217P-G225C-Y235L-K244L-S258D-
N261R-Z298.01Q；P19E-T38E-N67D-N71D-N97D-Y129M-F167Y-Q184L-A217P-K244L-S258D-
N261R；T38E-K63L-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R；P19E-T38E-N67D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R；P19E-N67D-N97D-Y129M-P168S-
Q184L-K244L；P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S-G225C-T228V-K244L-S258D-N261R；
P19E-T38E-N67D-N97D-Q184L-A217P-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R；N10T-
P19E-G28S-S30T-T38E-N67D-N71D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-
N261R-Z298.01Q；P19E-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-K143Q-F167Y-
Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；P19E-T38E-N67D-N71D-Q78D-K80T-
N97D-Y129M-P168S-G225C-T228V-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；P19E-T38E-S59V-L60Q-
K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-
S258D-N261R-Z298.01Q；N10T-T38E-K63L-N71D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-
T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-N97D-
Y129M-K143Q-Q184L-A217P-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；N10T-
P19E-T38E-S59V-L60Q-K63L-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-
S258D-N261R-Z298.01Q；P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-
F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；P19E-S30T-T38E-59V-
L60Q-K63R-N67D-Q78D-K80T-N97D-I124V-Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-
K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；N10S-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-N67D-Q78H-K80T-
I82M-N97D-Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225C-
T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；G4S-N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-
N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；N10T-P19E-S30T-
T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-T131A-F167Y-Q184L-G225C-
Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-
N71D-Q78D-K80T-N97D-E111D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-
N261R-Z298.01Q；P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-
K214I-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-
K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-
Z298.01Q；M1V-P19E-S30T-T38E-T62E-N67D-N71D-Q78D-N97D-Y129M-K143R-F167Y-P168S-
Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-T284A-Z298.01Q；Y6E-N10T-P19E-G28S-S30T-
T38E-K63L-N67D-N71D-N97D-E111S-Y129M-S135L-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-
K244L-S258D-N261Q-D283S-Z298.01Q；N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-
N71D-N97D-V103I-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-
Z298.01Q；A2S-P19E-G28S-S30T-T38E-K63R-N67D-N71D-N74E-K93R-N97D-Y129M-N150T-
P168S-Q184L-N213A-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q；M1L-N10T-P19E-G28A-
S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-Q78D-N97D-Y129M-A136L-P168A-Q184L-N213A-G225C-Y235L-
K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；P19E-T38E-S59V-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-
Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-
K63R-N67D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；T3R-
N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-T62E-N67D-N71D-K93R-N97L-E111S-Y129M-D139M-P168S-
Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q；N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-S59D-
N67D-A68S-N71D-K93R-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184D-G225C-Y235L-K244L-S258D-
N261R-T284E-Z298.01Q；P19E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-K244L；P19E-N67D-
N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L；P19E-T38E-N67D-Y129M-P168S-Q184L-
T228V-K244L；P19E-T38E-N67D-Y129M-Q184L-K244L-S258D-N261R；P19E-K63L-N71D-
Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R；P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-
K244L-S258D-G259P；K63L-N71D-Y129M-K143R-P168S-Q184L-G225C-T228V-K244L-S258D-
G259P；或P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R，其中所述变体
或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号。

[0095] 另外的实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含：P19E-T38E-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-
N261R；N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-N67D-N71D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-Y235L-
K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-V103I-
Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；N10T-P19E-
S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-
K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-
Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；N10T-
P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N71D-N97D-V103I-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-
G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；A2S-P19E-G28S-S30T-T38E-K63R-
N67D-N71D-N74E-K93R-N97D-Y129M-N150T-P168S-Q184L-N213A-G225C-Y235L-K244L-
S258D-N261Q-Z298.01Q；T3R-N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-T62E-N67D-N71D-K93R-N97L-
E111S-Y129M-D139M-P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q；或N10T-
P19E-G28A-S30T-T38E-S59D-N67D-A68S-N71D-K93R-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184D-
G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-T284E-Z298.01Q，其中所述变体或重组多肽或其活性片
段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号。

[0096] 又另外的实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含：N67D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-G259P；P19E-T38E-
N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R；P19E-T38E-N67D-N71D-Q78D-K80T-
N97D-Y129M-P168S-G225C-K244L-S258D-N261R；T38E-K63L-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-
P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R；P19E-T38E-N67D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-
N261R；P19E-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L；N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-N67D-
N71D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；P19E-T38E-
N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-G225C-T228V-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225C-
T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-
N97D-Y129M-P168S-Q184L-K214I-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；N10T-
P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-
Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；M1V-P19E-S30T-T38E-T62E-N67D-N71D-Q78D-N97D-
Y129M-K143R-F167Y-P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-T284A-Z298.01Q；
Y6E-N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-N97D-E111S-Y129M-S135L-P168S-
Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261Q-D283S-Z298.01Q；N10T-P19E-S30T-T38E-
S59V-L60Q-K63R-N67D-N71D-N97D-V103I-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-
Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；A2S-P19E-G28S-S30T-T38E-K63R-N67D-N71D-N74E-
K93R-N97D-Y129M-N150T-P168S-Q184L-N213A-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-
Z298.01Q；T3R-N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-T62E-N67D-N71D-K93R-N97L-E111S-Y129M-
D139M-P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q；N10T-P19E-G28A-S30T-
T38E-S59D-N67D-A68S-N71D-K93R-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184D-G225C-Y235L-K244L-
S258D-N261R-T284E-Z298.01Q；P19E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-Q184L-
K244L；或P19E-T38E-N67D-Y129M-P168S-Q184L-T228V-K244L；其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号。

[0097] 仍另外的实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含：P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-Q184L-K244L-S258D-N261R；
N67D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-G259P；P19E-K63L-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-
G225C-T228V-K244L；P19E-T38E-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R；
P19E-T38E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-G225C-K244L-S258D-N261R；T38E-
K63L-N71D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Q242L-K244L-S258D-N261R；P19E-K63L-
N71D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-K244L-S258D-G259P；N10T-T38E-S59V-L60Q-K63R-L66V-
A68S-N74S-V75L-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-A217P-G225C-Y235L-K244L-S258D-
N261R-Z298.01Q；P19E-T38E-N67D-N71D-N97D-Y129M-F167Y-Q184L-A217P-K244L-S258D-
N261R；T38E-K63L-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R；P19E-T38E-N67D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R；P19E-N67D-N97D-Y129M-P168S-
Q184L-K244L；P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S-G225C-T228V-K244L-S258D-N261R；
N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-N67D-N71D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-
S258D-N261R-Z298.01Q；P19E-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-K143Q-
F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；P19E-T38E-N67D-N71D-Q78D-
K80T-N97D-Y129M-P168S-G225C-T228V-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；P19E-T38E-S59V-
L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-
S258D-N261R-Z298.01Q；N10T-T38E-K63L-N71D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-
T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-N97D-
Y129M-K143Q-Q184L-A217P-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；N10T-
P19E-T38E-S59V-L60Q-K63L-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-
S258D-N261R-Z298.01Q；P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-
F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；P19E-S30T-T38E-S59V-
L60Q-K63R-N67D-Q78D-K80T-N97D-I124V-Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-
K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；N10S-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-N67D-Q78H-K80T-
I82M-N97D-Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225C-
T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；G4S-N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-
N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；N10T-P19E-S30T-
T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-T131A-F167Y-Q184L-G225C-
Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-
N71D-Q78D-K80T-N97D-E111D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-
N261R-Z298.01Q；P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-
K214I-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-
K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-
Z298.01Q；M1V-P19E-S30T-T38E-T62E-N67D-N71D-Q78D-N97D-Y129M-K143R-F167Y-P168S-
Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-T284A-Z298.01Q；Y6E-N10T-P19E-G28S-S30T-
T38E-K63L-N67D-N71D-N97D-E111S-Y129M-S135L-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-
K244L-S258D-N261Q-D283S-Z298.01Q；N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-
N71D-N97D-V103I-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-
Z298.01Q；A2S-P19E-G28S-S30T-T38E-K63R-N67D-N71D-N74E-K93R-N97D-Y129M-N150T-
P168S-Q184L-N213A-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q；M1L-N10T-P19E-G28A-
S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-Q78D-N97D-Y129M-A136L-P168A-Q184L-N213A-G225C-Y235L-
K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；P19E-T38E-S59V-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-
Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-
K63R-N67D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；T3R-
N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-T62E-N67D-N71D-K93R-N97L-E111S-Y129M-D139M-P168S-
Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q；N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-S59D-
N67D-A68S-N71D-K93R-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184D-G225C-Y235L-K244L-S258D-
N261R-T284E-Z298.01Q；P19E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-K244L；P19E-N67D-
N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L；P19E-T38E-N67D-Y129M-P168S-Q184L-
T228V-K244L；P19E-T38E-N67D-Y129M-Q184L-K244L-S258D-N261R；P19E-K63L-N71D-
Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R；P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-
K244L-S258D-G259P；K63L-N71D-Y129M-K143R-P168S-Q184L-G225C-T228V-K244L-S258D-
G259P；或P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R；其中所述变体
或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号。

[0098] 甚至另外的实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含：P19E-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-
K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；N10T-P19E-T38E-N67D-
Q78D-K80T-N97D-Y129M-K143Q-Q184L-A217P-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-
Z298.01Q；P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-Q78D-K80T-N97D-I124V-Y129M-K143Q-
F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；N10S-P19E-S30T-T38E-S59V-
L60Q-K63L-N67D-Q78H-K80T-I82M-N97D-Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-
S258D-N261R-Z298.01Q；N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-
K143Q-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；N10T-P19E-
S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-
K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N71D-N97D-
V103I-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；或
N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-S59D-N67D-A68S-N71D-K93R-N97D-Y129M-K143Q-P168S-
Q184D-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-T284E-Z298.01Q；其中所述变体或重组多肽或其
活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号。

[0099] 另一个实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含：P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-Q184L-K244L-S258D-N261R；P19E-T38E-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R；P19E-T38E-N67D-N71D-Q78D-
K80T-N97D-Y129M-P168S-G225C-K244L-S258D-N261R；T38E-K63L-N71D-N97D-Y129M-
Q184L-G225C-T228V-Q242L-K244L-S258D-N261R；N10T-T38E-S59V-L60Q-K63R-L66V-A68S-
N74S-V75L-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-A217P-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-
Z298.01Q；P19E-T38E-N67D-N71D-N97D-Y129M-F167Y-Q184L-A217P-K244L-S258D-N261R；
T38E-K63L-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R；P19E-T38E-
N67D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R；P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S-
G225C-T228V-K244L-S258D-N261R；P19E-T38E-N67D-N97D-Q184L-A217P-G225C-T228V-
Y235L-K244L-S258D-N261R；N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-N67D-N71D-N97D-Y129M-P168S-
Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；P19E-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-
N97D-V103I-Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
P19E-T38E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-G225C-T228V-K244L-S258D-N261R-
Z298.01Q；P19E-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111D-Y129M-Q184L-
G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；N10T-T38E-K63L-N71D-N97D-V103I-
Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；N10T-P19E-
T38E-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-K143Q-Q184L-A217P-G225C-T228V-Y235L-K244L-
S258D-N261R-Z298.01Q；N10T-P19E-T38E-S59V-L60Q-K63L-N97D-V103I-Y129M-F167Y-
Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-
N67D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-
Z298.01Q；P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-Q78D-K80T-N97D-I124V-Y129M-K143Q-
F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；N10S-P19E-S30T-T38E-S59V-
L60Q-K63L-N67D-Q78H-K80T-I82M-N97D-Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-
S258D-N261R-Z298.01Q；N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-
K143Q-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；G4S-N10T-P19E-
T38E-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-
Z298.01Q；N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-
T131A-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；N10T-P19E-S30T-T38E-
S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-T228V-
Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-
Y129M-P168S-Q184L-K214I-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；N10T-P19E-
S30T-T38E-S59V-60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-
K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；M1V-P19E-S30T-T38E-T62E-N67D-N71D-Q78D-N97D-Y129M-
K143R-F167Y-P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-T284A-Z298.01Q；Y6E-
N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-N97D-E111S-Y129M-S135L-P168S-Q184L-
G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261Q-D283S-Z298.01Q；N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-
L60Q-K63R-N67D-N71D-N97D-V103I-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-
K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；A2S-P19E-G28S-S30T-T38E-K63R-N67D-N71D-N74E-K93R-
N97D-Y129M-N150T-P168S-Q184L-N213A-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q；
M1L-N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-Q78D-N97D-Y129M-A136L-P168A-
Q184L-N213A-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；P19E-T38E-S59V-K63R-N67D-
N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01；
N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-K63R-N67D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-
S258D-N261R-Z298.01Q；T3R-N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-T62E-N67D-N71D-K93R-N97L-
E111S-Y129M-D139M-P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q；N10T-
P19E-G28A-S30T-T38E-S59D-N67D-A68S-N71D-K93R-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184D-
G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-T284E-Z298.01Q；P19E-T38E-N67D-Y129M-Q184L-
K244L-S258D-N261R；P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-G259P；或
P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R；其中所述变体或重组多
肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号。

[0100] 又另一个实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含：P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-Q184L-K244L-S258D-N261R；
P19E-T38E-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R；P19E-K63L-N71D-N97D-
Y129M-Q184L-G225C-K244L-S258D-G259P；P19E-T38E-N67D-N71D-N97D-Y129M-F167Y-
Q184L-A217P-K244L-S258D-N261R；P19E-T38E-N67D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-
N261R；P19E-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L；P19E-T38E-N67D-N97D-Q184L-A217P-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R；N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-N67D-N71D-N97D-
Y129M-P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；P19E-T38E-S59V-L60Q-
K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-
Z298.01Q；P19E-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111D-Y129M-Q184L-
G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-
N97D-Y129M-K143Q-Q184L-A217P-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-T38E-S59V-L60Q-K63L-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-
S258D-N261R-Z298.01Q；P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-
F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；P19E-S30T-T38E-S59V-
L60Q-K63R-N67D-Q78D-K80T-N97D-I124V-Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-
K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；N10S-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-N67D-Q78H-K80T-
I82M-N97D-Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225C-
T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；G4S-N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-
N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；N10T-P19E-S30T-
T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-T131A-F167Y-Q184L-G225C-
Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-
N71D-Q78D-K80T-N97D-E111D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-
N261R-Z298.01Q；P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-
K214I-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-
K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-
Z298.01Q；M1V-P19E-S30T-T38E-T62E-N67D-N71D-Q78D-N97D-Y129M-K143R-F167Y-P168S-
Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-T284A-Z298.01Q；Y6E-N10T-P19E-G28S-S30T-
T38E-K63L-N67D-N71D-N97D-E111S-Y129M-S135L-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-
K244L-S258D-N261Q-D283S-Z298.01Q；N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-
N71D-N97D-V103I-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-
Z298.01Q；A2S-P19E-G28S-S30T-T38E-K63R-N67D-N71D-N74E-K93R-N97D-Y129M-N150T-
P168S-Q184L-N213A-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q；M1L-N10T-P19E-G28A-
S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-Q78D-N97D-Y129M-A136L-P168A-Q184L-N213A-G225C-Y235L-
K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；P19E-T38E-S59V-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-
Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-
K63R-N67D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；T3R-
N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-T62E-N67D-N71D-K93R-N97L-E111S-Y129M-D139M-P168S-
Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q；N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-S59D-
N67D-A68S-N71D-K93R-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184D-G225C-Y235L-K244L-S258D-
N261R-T284E-Z298.01Q；P19E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-K244L；P19E-N67D-
N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-Q184L-K244L；P19E-T38E-N67D-Y129M-P168S-Q184L-
T228V-K244L；P19E-T38E-N67D-Y129M-Q184L-K244L-S258D-N261R；P19E-K63L-N71D-
Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R；P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-
K244L-S258D-G259P；或P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R；
其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列
相对应来编号。

[0101] 甚至另外的实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含：P19E-K63L-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-G225C-T228V-
K244L；P19E-T38E-N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-G225C-K244L-S258D-N261R；
T38E-K63L-N71D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Q242L-K244L-S258D-N261R；P19E-
K63L-N71D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-K244L-S258D-G259P；N10T-T38E-S59V-L60Q-K63R-
L66V-A68S-N74S-V75L-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-A217P-G225C-Y235L-K244L-
S258D-N261R-Z298.01Q；P19E-T38E-N67D-N97D-Q184L-A217P-G225C-T228V-Y235L-K244L-
S258D-N261R；N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-N67D-N71D-N97D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-
Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；P19E-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-V103I-
Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；P19E-T38E-
N67D-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-P168S-G225C-T228V-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
P19E-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111D-Y129M-Q184L-G225C-
T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；N10T-T38E-K63L-N71D-N97D-V103I-Y129M-
F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；N10T-P19E-T38E-N67D-
Q78D-K80T-N97D-Y129M-K143Q-Q184L-A217P-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-
Z298.01Q；N10T-P19E-T38E-S59V-L60Q-K63L-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-
Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-
V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；P19E-
S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-Q78D-K80T-N97D-I124V-Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-
G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；N10S-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-
N67D-Q78H-K80T-I82M-N97D-Y129M-K143Q-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-
N261R-Z298.01Q；N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-
P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；G4S-N10T-P19E-T38E-
N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-T131A-
F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-
L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-
K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-
P168S-Q184L-K214I-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；N10T-P19E-S30T-T38E-
S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-
S258D-N261R-Z298.01Q；M1V-P19E-S30T-T38E-T62E-N67D-N71D-Q78D-N97D-Y129M-K143R-
F167Y-P168S-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-T284A-Z298.01Q；Y6E-N10T-P19E-
G28S-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-N97D-E111S-Y129M-S135L-P168S-Q184L-G225C-T228V-
Y235L-K244L-S258D-N261Q-D283S-Z298.01Q；N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-
N67D-N71D-N97D-V103I-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-
N261R-Z298.01Q；A2S-P19E-G28S-S30T-T38E-K63R-N67D-N71D-N74E-K93R-N97D-Y129M-
N150T-P168S-Q184L-N213A-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q；M1L-N10T-P19E-
G28A-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-Q78D-N97D-Y129M-A136L-P168A-Q184L-N213A-G225C-
Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；P19E-T38E-S59V-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-
F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；N10T-P19E-G28A-S30T-
T38E-K63R-N67D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
或N10T-P19E-G28A-S30T-T38E-S59D-N67D-A68S-N71D-K93R-N97D-Y129M-K143Q-P168S-
Q184D-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-T284E-Z298.01Q；其中所述变体或重组多肽或其
活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号。

[0102] 仍另外的实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含：P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-Q184L-K244L-S258D-N261R；
T38E-K63L-N71D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Q242L-K244L-S258D-N261R；P19E-
K63L-N71D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-K244L-S258D-G259P；P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-
P168S-G225C-T228V-K244L-S258D-N261R；P19E-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-
K80T-N97D-E111D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-T38E-K63L-N71D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-
S258D-N261R-Z298.01Q；N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-
N97D-Y129M-T131A-F167Y-Q184L-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；N10T-
P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111D-Y129M-P168S-
Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；Y6E-N10T-P19E-G28S-S30T-
T38E-K63L-N67D-N71D-N97D-E111S-Y129M-S135L-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-
K244L-S258D-N261Q-D283S-Z298.01Q；N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-
N71D-N97D-V103I-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-
Z298.01Q；A2S-P19E-G28S-S30T-T38E-K63R-N67D-N71D-N74E-K93R-N97D-Y129M-N150T-
P168S-Q184L-N213A-G225C-Y235L-K244L-S258D-N261Q-Z298.01Q；M1L-N10T-P19E-G28A-
S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-Q78D-N97D-Y129M-A136L-P168A-Q184L-N213A-G225C-Y235L-
K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；P19E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-K244L；P19E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R；P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-
P168S-Q184L-K244L-S258D-G259P；K63L-N71D-Y129M-K143R-P168S-Q184L-G225C-T228V-
K244L-S258D-G259P；或P19E-T38E-K63L-N71D-Y129M-P168S-Q184L-K244L-S258D-N261R；
其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列
相对应来编号。

[0103] 仍另外的实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含：P19E-T38E-N67D-N97D-Q184L-A217P-G225C-T228V-Y235L-
K244L-S258D-N261R；P19E-T38E-S59V-L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111D-
Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；N10T-T38E-K63L-N71D-
N97D-V103I-Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-K143Q-Q184L-A217P-G225C-T228V-Y235L-
K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-V103I-
Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；N10T-P19E-
S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-
K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；G4S-N10T-P19E-T38E-N67D-Q78D-K80T-N97D-Y129M-
Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-
L60Q-K63L-K70R-N71D-Q78D-K80T-N97D-E111D-Y129M-P168S-Q184L-G225C-T228V-Y235L-
K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-
Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；Y6E-
N10T-P19E-G28S-S30T-T38E-K63L-N67D-N71D-N97D-E111S-Y129M-S135L-P168S-Q184L-
G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261Q-D283S-Z298.01Q；N10T-P19E-S30T-T38E-S59V-
L60Q-K63R-N67D-N71D-N97D-V103I-Y129M-K143Q-P168S-Q184L-G225P-T228V-Y235L-
K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；P19E-T38E-S59V-K63R-N67D-N97D-V103I-Y129M-F167Y-
Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；或N10T-P19E-G28A-S30T-
T38E-K63R-N67D-N97D-Y129M-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q；
其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列
相对应来编号。

[0104] 又甚至仍另外的实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列包含：P19E-S30T-T38E-S59V-L60Q-K63R-N67D-N97D-V103I-
Y129M-F167Y-Q184L-G225C-T228V-Y235L-K244L-S258D-N261R-Z298.01Q，其中所述变体或
重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号。

[0105] 在另外的实施例中，甘露聚糖酶变体或重组多肽选自SEQ ID NO:13和46-91。在仍另外的实施例中，甘露聚糖酶变体或重组多肽选自SEQ ID NO:13、49、60、69、74、77、78、82、和83。

[0106] 另一个实施例涉及包含一种或多种本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段的甘露聚糖酶的NDL-进化枝，其中所述变体或重组多肽或其活性片段进一步包含
选自以下的一种或多种基序：在位置31-40处的WXaKNDLXXAI(SEQ ID NO:15)基序，其中Xa是F或Y，并且X是任何氨基酸(“基序1”)；在位置263-274处的LDXXXGPXGXLT(SEQ ID NO:16)基序，其中X是任何氨基酸(“缺失基序1”)；在位置263-274处的LDX1V/AT/AGPX2GX3LT(SEQ ID NO:17)基序，其中X1是M或L，X2是N、A或S，并且X3是S、T或N(“缺失基序2”)；和在位置263-274处的LDM/LATGPN/AGS/TLT(SEQ ID NO:18)基序(“缺失基序3”)，其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号。又另外的实
施例涉及包含一种或多种本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段的甘露聚
糖酶的NDL-进化枝，其中所述变体或重组多肽或其活性片段进一步包含选自以下的一种或
多种基序：在位置31-40处的WXaKNDLXXAI(SEQ ID NO:15)基序，其中Xa是F或Y，并且X是任何氨基酸；在位置263-274处的LDXXXGPXGXLT(SEQ ID NO:16)基序，其中X是任何氨基酸；在位置263-274处的LDX1V/AT/AGPX2GX3LT(SEQ ID NO:17)基序，其中X1是M或L，X2是N、A或S，并且X3是S、T或N；和在位置263-274处的LDM/LATGPN/AG S/TLT(SEQ ID NO:18)基序，其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来
编号，条件是所述变体或重组多肽或其活性片段不是ACU308431、ETT37549、WP_036608478、WP_036670707、WP_017688745、WP_053782127、PamMan2、PamMan3、PtuMan2、AAX87003、WP_
046227931、WP_024633848、PpaMan2、WP_017813111、PspMan9、AEX60762、WP_046214462、YP_
003868989、YP_003944884、WP_017427981、AAX87002、WP_009593769、YP_006190599、或WP_
019912481。

[0107] 另外的实施例涉及包含一种或多种本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段的甘露聚糖酶的NDL-进化枝，其中所述变体或重组多肽或活性片段进一步包含在
位置31-40处的WXaKNDLXXAI(SEQ ID NO:15)基序，其中Xa是F，并且X是任何氨基酸，其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应
来编号，条件是所述变体或重组多肽或其活性片段不是ACU308431、ETT37549、WP_
036608478、WP_036670707、WP_017688745、WP_053782127、WP_024633848、AAX87003、或AEX60762。仍另外的实施例涉及包含一种或多种本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或
其活性片段的甘露聚糖酶的NDL-进化枝，其中所述变体或重组多肽或其活性片段进一步包
含在位置31-40处的WXaKNDLXXAI(SEQ ID NO:15)基序，其中Xa是F，并且X是任何氨基酸，其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相
对应来编号，条件是所述变体或重组多肽或其活性片段不是ACU308431、ETT37549、WP_
036608478、WP_036670707、WP_017688745、WP_053782127、WP_024633848、AAX87003、
AEX60762、PamMan2、PamMan3、PtuMan2、PpaMan2、或PspMan9。

[0108] 在仍另外的实施例中，甘露聚糖酶的NDL-进化枝包含一种或多种本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，其中所述变体或重组多肽或其活性片段进一步包含
在位置263-274处的LDX1V/AT/AGPX2GX3LT(SEQ ID NO:17)或LDM/LATGPN/AGS/TLT(SEQ ID
NO:18)基序，其中X1是M；X2是N、A或S；并且X3是S、T或N，其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号，条件是所述变体或重
组多肽或其活性片段不是ACU30843、ETT37549、WP_036608478、WP_036670707、WP_
017688745、或WP_046214462。在又仍另外的实施例中，甘露聚糖酶的NDL-进化枝包含一种或多种本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，其中所述变体或重组多肽或
其活性片段进一步包含在位置263-274处的LDX1V/AT/AGPX2GX3LT(SEQ ID NO:17)或LDM/
LATGPN/AGS/TLT(SEQ ID NO:18)基序，其中X1是M；X2是N、A或S；并且X3是S、T或N，其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来
编号，条件是所述变体或重组多肽或其活性片段不是ACU30843、ETT37549、WP_036608478、WP_036670707、WP_017688745、WP_046214462、或PamMan2。在仍另外的实施例中，甘露聚糖酶的NDL-进化枝包含一种或多种本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，其
中所述变体或重组多肽或其活性片段进一步包含(i)在位置31-40处的WXaKNDLXXAI(SEQ
ID NO:15)基序，其中Xa是F，并且X是任何氨基酸，和(ii)在位置263-274处的LDX1V/AT/
AGPX2GX3LT(SEQ ID NO:17)或LDM/LATGPN/AGS/TLT(SEQ ID NO:18)基序，其中X1是M；X2是N、A或S；并且X3是S、T或N，其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号，条件是所述变体或重组多肽或其活性片段不是
ACU30843、ETT37549、WP_036608478、WP_036670707、或WP_017688745。在甚至仍另外的实施例中，甘露聚糖酶的NDL-进化枝包含一种或多种本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或
其活性片段，其中所述变体或重组多肽或其活性片段进一步包含(i)在位置31-40处的
WXaKNDLXXAI(SEQ ID NO:15)基序，其中Xa是F，并且X是任何氨基酸，和(ii)在位置263-274处的LDX1V/AT/AGPX2GX3LT(SEQ ID NO:17)或LDM/LATGPN/AGS/TLT(SEQ ID NO:18)基序，其中X1是M；X2是N、A或S；并且X3是S、T或N，其中所述变体或重组多肽或其活性片段的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号，条件是所述变体或重组多肽或其活性
片段不是ACU30843、ETT37549、WP_036608478、WP_036670707、WP_017688745、或PamMan2。

[0109] 另一个实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或活性片段，该氨基酸序列与SEQ ID NO:13的氨基酸序列具有至少59％、60％、65％、70％、75％、
80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、
95％、96％、97％、98％、99％或100％氨基酸序列同一性。仍另外的实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列与SEQ ID NO:13的氨
基酸序列具有至少80％或85％氨基酸序列同一性，条件是所述变体或重组多肽或其活性片
段不是ACU30843、ETT37549、WP_036608478、WP_036670707、WP_017688745、WP_053782127、WP_024633848、AAX87003、WP_046227931、WP_017813111、AEX60762、或WP_046214462。甚至仍另外的实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该
氨基酸序列与SEQ ID NO:13的氨基酸序列具有至少80％或85％氨基酸序列同一性，条件是
所述变体或重组多肽或其活性片段不是ACU30843、ETT37549、WP_036608478、WP_
036670707、WP_017688745、WP_053782127、WP_024633848、AAX87003、WP_046227931、WP_
017813111、AEX60762、WP_046214462、PamMan2、PamMan3、PtuMan2、PpaMan2、或PspMan9。甚至另外的实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该
氨基酸序列与SEQ ID NO:13的氨基酸序列具有至少80％或85％氨基酸序列同一性，条件是
所述变体或重组多肽或其活性片段不是ACU30843、ETT37549、WP_036608478、WP_
036670707、WP_017688745、WP_053782127、WP_024633848、AAX87003、WP_046227931、WP_
017813111、AEX60762、WP_046214462、或EP2260105-0418。又另外的实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该氨基酸序列与SEQ ID NO:13的氨
基酸序列具有至少80％或85％氨基酸序列同一性，条件是所述变体或重组多肽或其活性片
段不是ACU30843、ETT37549、WP_036608478、WP_036670707、WP_017688745、WP_053782127、WP_024633848、AAX87003、WP_046227931、WP_017813111、AEX60762、WP_046214462、
EP2260105-0418、PamMan2、PamMan3、PtuMan2、PpaMan2、或PspMan9。仍又另外的实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或活性片段，该氨基酸序列与SEQ ID
NO:13的氨基酸序列具有至少88％氨基酸序列同一性，条件是所述变体或重组多肽或其活
性片段不是ACU30843、ETT37549、WP_036608478、WP_036670707、WP_017688745、WP_
053782127、WP_024633848、或AAX87003。另一个实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或活性片段，该氨基酸序列与SEQ ID NO:13的氨基酸序列具有至少
88％氨基酸序列同一性，条件是所述变体或重组多肽或其活性片段不是ACU30843、
ETT37549、WP_036608478、WP_036670707、WP_017688745、WP_053782127、WP_024633848、AAX87003、PamMan2、PamMan3、PtuMan2、PpaMan2、或PspMan9。另外的实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或活性片段，该氨基酸序列与SEQ ID NO:13的氨基
酸序列具有至少88％氨基酸序列同一性，条件是所述变体或重组多肽或其活性片段不是
ACU30843、ETT37549、WP_036608478、WP_036670707、WP_017688745、WP_053782127、WP_
024633848、AAX87003、或EP2260105-0418。仍另外的实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或活性片段，该氨基酸序列与SEQ ID NO:13的氨基酸序列具有至
少88％氨基酸序列同一性，条件是所述变体或重组多肽或其活性片段不是ACU30843、
ETT37549、WP_036608478、WP_036670707、WP_017688745、WP_053782127、WP_024633848、AAX87003、EP2260105-0418、PamMan2、PamMan3、PtuMan2、PpaMan2、或PspMan9。甚至另外的实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或活性片段，该氨基酸序列
与SEQ ID NO:13的氨基酸序列具有至少92％氨基酸序列同一性，条件是所述变体或重组多
肽或其活性片段不是ACU30843、ETT37549、WP_036608478、WP_036670707、或WP_017688745。
又另外的实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或活性片段，该氨
基酸序列与SEQ ID NO:13的氨基酸序列具有至少92％氨基酸序列同一性，条件是所述变体
或重组多肽或其活性片段不是ACU30843、ETT37549、WP_036608478、WP_036670707、WP_
017688745、PamMan2、PamMan3、或PtuMan2。另一个实施例涉及包含如下氨基酸序列的甘露聚糖酶变体或重组多肽或活性片段，该氨基酸序列与SEQ ID NO:13的氨基酸序列具有至少
95％氨基酸序列同一性。

[0110] 在一个实施例中，参比多肽是GH5甘露聚糖酶。在另一个实施例中，参比多肽选自SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:
160和SEQ ID NO:162。在另一个实施例中，一种或多种本文所述的甘露聚糖酶变体与SEQ
ID NO:14、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:45、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:160和SEQ ID NO:162的氨基酸序列具有至少59％、60％、65％、70％、75％、80％、81％、82％、
83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、
98％、或99％氨基酸序列同一性。

[0111] 在另外的实施例中，SEQ ID NO:14是衍生本文所述的一种或多种甘露聚糖酶变体的参比多肽。在另一个实施例中，一种或多种本文所述的甘露聚糖酶变体与SEQ ID NO:14
的氨基酸序列具有至少59％、60％、65％、70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、
86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％氨基酸序列同一性。在仍另外的实施例中，SEQ ID NO:30是衍生本文所述的一种或多种甘露聚糖
酶变体的参比多肽。在另一个实施例中，一种或多种本文所述的甘露聚糖酶变体与SEQ ID NO:30的氨基酸序列具有至少59％、60％、65％、70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、
85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％氨基酸序列同一性。在又另外的实施例中，SEQ ID NO:43是衍生本文所述的一种或多种甘
露聚糖酶变体的参比多肽。在另一个实施例中，一种或多种本文所述的甘露聚糖酶变体与
SEQ ID NO:43的氨基酸序列具有至少59％、60％、65％、70％、75％、80％、81％、82％、83％、
84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或
99％氨基酸序列同一性。在甚至仍另外的实施例中，SEQ ID NO:44是衍生本文所述的一种
或多种甘露聚糖酶变体的参比多肽。在又另一个实施例中，一种或多种本文所述的甘露聚
糖酶变体与SEQ ID NO:44的氨基酸序列具有至少59％、60％、65％、70％、75％、80％、81％、
82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、
97％、98％、或99％氨基酸序列同一性。在仍另一个实施例中，SEQ ID NO:45是衍生本文所述的一种或多种甘露聚糖酶变体的参比多肽。在另一个实施例中，一种或多种本文所述的
甘露聚糖酶变体与SEQ ID NO:45的氨基酸序列具有至少59％、60％、65％、70％、75％、
80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、
95％、96％、97％、98％、或99％氨基酸序列同一性。在又仍另一个实施例中，SEQ ID NO:160或162是衍生本文所述的一种或多种甘露聚糖酶变体的参比多肽。在甚至仍又另外的实施
例中，一种或多种本文所述的甘露聚糖酶变体与SEQ ID NO:160或162的氨基酸序列具有至
少59％、60％、65％、70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、
90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％氨基酸序列同一性。在另外的实施例中，甘露聚糖酶变体是GH5甘露聚糖酶。

[0112] 在一些实施例中，分离本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段。在其他实施例中，本文所述的甘露聚糖酶变体是内切-β-甘露聚糖酶。在另外的实施例中，本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段具有甘露聚糖酶活性。在其他实施例
中，本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段在表面活性剂存在下具有甘露聚
糖酶活性。在一些实施例中，甘露聚糖酶活性是对甘露糖胶、槐豆胶半乳甘露聚糖和/或魔芋葡甘露聚糖的活性。在另外的实施例中，本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活
性片段在洗涤剂组合物中具有清洁活性。仍其他实施例涉及在蛋白酶存在下具有甘露聚糖
酶活性的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段。其他实施例涉及水解选自下组的底物
的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，该组由以下组成：瓜耳胶、槐豆胶、及其组合。
在一些实施例中，本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段不包含碳水化合物
结合模块。

[0113] 在一些实施例中，甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段在宽范围的pH条件下具有酶活性。在某些实施例中，甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段在从约4.0至约
11.0的pH范围内具有酶活性。在另外的实施例中，甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片
段在从约4.0至约11.0、约4.5至约9.0、约5.5至约8.5、或约6.0至约7.5的pH下具有至少
50％、60％、70％、80％、90％、95％或100％的甘露聚糖酶活性。

[0114] 在仍另外的实施例中，甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段在从约20℃至约90℃、约30℃至约80℃、约20℃至约50℃、或约30℃至约66℃的温度范围内具有甘露聚糖酶活性。在某些实施例中，甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段在从约20℃至约90℃、约
30℃至约80℃、约20℃至约50℃、或约30℃至约66℃的温度范围内具有至少50％、60％、
70％、80％、90％、95％或100％的甘露聚糖酶活性。

[0115] 又仍另外的实施例涉及本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，其中所述变体或重组多肽或其活性片段在4.5-9.0、5.5-8.5、或6.0-7.5的pH范围内保留其最大甘露聚糖酶活性的至少70％。一些实施例涉及本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或
其活性片段，其中所述变体或重组多肽或其活性片段在高于3.0、3.5、4.0或4.5的pH下或在低于9.0、9.5或10.0的pH下保留其最大甘露聚糖酶活性的至少70％。

[0116] 在一些实施例中，本文所述的一种或多种甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段与参比多肽相比具有一种或多种改善的性质，其中所述改善的性质选自在蛋白酶存在下
改善的稳定性、在洗涤剂或缓冲液中改善的稳定性、改善的清洁性能、和改善的老化清洁性能。在另一个实施例中，本文所述的一种或多种甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段
与参比多肽相比具有一种或多种改善的性质，其中所述改善的性质选自在蛋白酶存在下改
善的稳定性、在洗涤剂或缓冲液中改善的稳定性、改善的清洁性能、和改善的老化清洁性
能，其中参比多肽选自SEQ ID NO:14、43、44、45和160。在又另一个实施例中，本文所述的一种或多种甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段与SEQ ID NO:14相比具有一种或多种
改善的性质，其中所述改善的性质选自在蛋白酶存在下改善的稳定性、在洗涤剂或缓冲液
中改善的稳定性、改善的清洁性能、和改善的老化清洁性能。在仍另一个实施例中，本文所述的一种或多种甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段与SEQ ID NO:43相比具有一种
或多种改善的性质，其中所述改善的性质选自在蛋白酶存在下改善的稳定性、在洗涤剂或
缓冲液中改善的稳定性、改善的清洁性能、和改善的老化清洁性能。在甚至另外的实施例
中，本文所述的一种或多种甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段与SEQ ID NO:44相比
具有一种或多种改善的性质，其中所述改善的性质选自在蛋白酶存在下改善的稳定性、在
洗涤剂或缓冲液中改善的稳定性、改善的清洁性能、和改善的老化清洁性能。在甚至仍另外的实施例中，本文所述的一种或多种甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段与SEQ ID
NO:45相比具有一种或多种改善的性质，其中所述改善的性质选自在蛋白酶存在下改善的
稳定性、在洗涤剂或缓冲液中改善的稳定性、改善的清洁性能、和改善的老化清洁性能。在另一个实施例中，本文所述的一种或多种甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段与SEQ
ID NO:160相比具有一种或多种改善的性质，其中所述改善的性质选自在蛋白酶存在下改
善的稳定性、在洗涤剂或缓冲液中改善的稳定性、改善的清洁性能、和改善的老化清洁性
能。

[0117] 在另外的实施例中，本文所述的一种或多种甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段与参比多肽相比具有一种或多种改善的性质，其中所述改善的性质选自(i)在洗涤剂
中改善的稳定性，其中所述甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段在约40℃至约70℃、
约45℃至约65℃、约50℃至约60℃、约60℃至约70℃、或约56℃的温度持续至少5分钟的时间段保持至少10％、20％、30％、40％或50％残余甘露聚糖酶活性；(ii)在蛋白酶存在下改善的稳定性，其中所述甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段在蛋白酶和/或表面活性
剂存在下保持至少50％甘露聚糖酶活性至少15天或从约15天至约40天；(iii)改善的清洁
性能，其中所述甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段具有槐豆胶污渍清洁性能指数
(“PI”)>1；和iv)改善的老化清洁性能，其中所述甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段在7小时后具有至少15％剩余清洁活性或在9小时后具有至少11％剩余清洁活性。在又另外
的实施例中，本文所述的一种或多种甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段与参比多肽
相比具有一种或多种改善的性质，其中所述改善的性质是在洗涤剂中改善的稳定性，并且
所述甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段在约40℃至约70℃、约45℃至约65℃、约50
℃至约60℃、约60℃至约70℃、或约56℃的温度持续至少5分钟的时间段保持至少10％、
20％、30％、40％或50％残余甘露聚糖酶活性。在又甚至另外的实施例中，本文所述的一种或多种甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段与参比多肽相比具有一种或多种改善的
性质，其中所述改善的性质是在蛋白酶存在下改善的稳定性，并且所述甘露聚糖酶变体或
重组多肽或其活性片段在蛋白酶和/或表面活性剂存在下保持至少50％甘露聚糖酶活性至
少15天或从约15天至约40天。在又甚至仍另外的实施例中，本文所述的一种或多种甘露聚
糖酶变体或重组多肽或其活性片段与参比多肽相比具有一种或多种改善的性质，其中所述
改善的性质是改善的清洁性能，并且所述甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段具有槐
豆胶污渍清洁PI>1。在甚至仍另外的实施例中，本文所述的一种或多种甘露聚糖酶变体或
重组多肽或其活性片段与参比多肽相比具有一种或多种改善的性质，其中所述改善的性质
是改善的老化清洁性能，并且所述甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段在7小时后具
有至少15％剩余清洁活性或在9小时后具有至少11％剩余清洁活性。

[0118] 在一些实施例中，甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段在从约40℃-70℃、约45℃-65℃、约50℃-60℃、约60℃-70℃、或约60℃的温度保留至少10％、20％、30％、40％或
50％残余甘露聚糖酶活性。在甚至另外的实施例中，甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性
片段在约40℃-70℃、约45℃-75℃、约45℃-65℃、约50℃-60℃、或约60℃-70℃的温度范围保留其最大甘露聚糖酶活性的至少70％。在另一个实施例中，甘露聚糖酶变体或重组多肽
或其活性片段在高于20℃、25℃、30℃、35℃或40℃的温度或在低于60℃、65℃、70℃、75℃或80℃的温度保留其最大甘露聚糖酶活性的至少70％。在仍另外的实施例中，在5分钟的时间段内测定保留的最大甘露聚糖酶活性的量。

[0119] 在某些其他实施例中，本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段包括基本上不影响多肽的结构和/或功能的取代。示例性取代是保守突变，如表I所概述的。

[0120] 表I.氨基酸取代

[0121]

[0122]

[0123] 涉及天然存在的氨基酸的取代通常通过使编码本文所述的重组多肽突变来制备。涉及非天然存在的氨基酸的取代或对氨基酸的化学修饰通常通过化学修饰本文所述的重
组多肽来制备。

[0124] 在一些实施例中，甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段与SEQ ID NO:13基本上相同，这意味着它们可以含有不显著影响所述变体或多肽或其活性片段的结构、功能或
表达的氨基酸取代、插入或缺失。此类甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段包括仅设
计用于规避本说明书的那些。

[0125] 在一些实施例中，甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段具有1,4-β-D-甘露糖苷水解酶活性，其包括甘露聚糖酶、内切-1,4-β-D-甘露聚糖酶、外切-1,4-β-D-甘露聚糖酶半乳甘露聚糖酶和/或葡糖甘露聚糖酶活性。可以使用本文所述的测定法或通过本领域已
知的其他测定法来测定和测量1,4-β-D-甘露糖苷水解酶活性。在一些实施例中，本发明的多肽在洗涤剂组合物存在下具有活性。

[0126] 在一些实施例中，本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段作为N-和/或C-末端融合蛋白产生，例如，以帮助提取、检测和/或纯化所述变体或重组多肽或其活性片段和/或向其添加功能性质。融合蛋白伴侣的实例包括但不限于：谷胱甘肽-S-转移酶
(GST)、6XHis、GAL4(DNA结合和/或转录激活结构域)、FLAG、MYC、BCE103(WO 2010/044786)、或本领域任何技术人员已知的其他标签。在一些实施例中，在融合蛋白伴侣和目的蛋白质
序列之间提供蛋白水解切割位点以允许去除融合蛋白序列。优选地，融合蛋白不阻碍本文
所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段的活性。

[0127] 在一些实施例中，本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段与功能结构域(包含前导肽、前肽、一个或多个结合结构域(模块)和/或催化结构域)融合。合适的结合结构域包括但不限于，具有各种特异性的碳水化合物结合模块(CBM)，其在应用本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段的过程中对存在的碳水化合物组分提供增加
的亲和力。如本文所述，本发明多肽的CBM和催化结构域有效地连接。

[0128] CBM被定义为碳水化合物活性酶中连续的氨基酸序列，其含有具有碳水化合物结合活性的离散折叠(discreet fold)。一些例外是蛋白质中的纤维素体支架(cellulosomal scaffold)中的CBM和独立推定的CBM的罕见例子。CBM作为大型酶内模块存在的要求设置这
类碳水化合物结合蛋白，除了其他非催化糖结合蛋白(例如凝集素和糖转运蛋白)之外。基
于最初发现的结合纤维素的几个模块，CBM先前被分类为纤维素结合结构域(CBD)(Tomme等
人，Eur J Biochem[欧洲生物化学杂志],170:575-581,1988；和Gilkes等人，J Biol Chem[生物化学杂志],263:10401-10407,1988)。然而，不断发现碳水化合物活性酶中的其他模
块能够结合除纤维素以外的碳水化合物，但其他方面符合CBM标准，因此需要使用更具包容性的术语对这些多肽进行重新分类。先前纤维素结合结构域的分类基于氨基酸相似性。CBD的分组被称为“类型”并用罗马数字编号(例如I型或II型CBD)。为了与糖苷水解酶分类保持一致，这些分组现在称为家族并用阿拉伯数字编号。家族1至13与I至XIII型相同(Tomme等
人，在Enzymatic Degradation of Insoluble Polysaccharides[不溶性多糖的酶促降解]
(Saddler,J.N.和Penner,M.编辑)，Cellulose-binding domains:classification and
properties[纤维素结合结构域：分类和性质]，第142-163页，美国化学协会，华盛顿，
1995)。有关CBM结构和结合模式的详细评论在Boraston等人，Biochem J[生物化学杂志]，
382:769-81,2004中可以找到。预计CBM的家族分类有助于鉴定CBM、预测结合特异性、帮助鉴定功能性残基、揭示进化关系、并可能预测多肽折叠。因为蛋白质的折叠比它们的序列更保守，所以一些CBM家族可以分为超家族或宗族。目前的CBM家族是1-63。CBD发现于蛋白质的N-和C-末端，或者是内部的。酶杂交体在本领域中是已知的(参见例如WO 90/00609和WO
95/16782)并可以通过向宿主细胞中转化DNA构建体并培养该宿主细胞以表达融合基因来
制备，所述DNA构建体包含编码纤维素结合结构域的DNA的至少一个片段，所述结构域用或
不用接头连接至编码本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段的DNA序列。

[0129] 酶杂交体可以用下式描述：

[0130] CBM-MR-X或X-MR-CBM，其中CBM是至少对应于碳水化合物结合模块的氨基酸序列的N-或C-末端区域；MR是中间区域(接头)，并且可以是键，或从约2至约100个碳原子、从约2至约40个碳原子、从约2至约100个氨基酸、或从约2至约40个氨基酸的短连接基团；并且X是本文所述的具有甘露聚糖酶催化活性的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段的N-或
C-末端区域。此外，甘露聚糖酶可能含有多于一个CBM或具有非糖分解功能的其他一个或多个模块/结构域。术语“模块”和“结构域”在本公开中可互换使用。

[0131] 催化结构域的其他非限制性实例包括：纤维素酶；半纤维素酶，如木聚糖酶；外切甘露聚糖酶；葡聚糖酶；阿拉伯糖；半乳糖苷酶；果胶酶；和/或其他活性，例如蛋白酶、脂肪酶、酸性磷酸酶和/或其他或其功能片段。融合蛋白任选地通过接头序列与本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段连接，所述接头序列简单地连接甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段和融合结构域而不显著影响任一组分的性质，或者接头对于预期的应
用任选地具有功能重要性。

[0132] 可替代地，本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段与一种或多种另外的目的蛋白质结合使用。目的蛋白质的非限制性实例包括：酰基转移酶、淀粉酶、α-淀粉酶、β-淀粉酶、α-半乳糖苷酶、阿拉伯糖酶、阿拉伯糖苷酶、芳基酯酶、β-半乳糖苷酶、β-葡聚糖酶、角叉菜胶酶、过氧化氢酶、纤维二糖水解酶、纤维素酶、软骨素酶、角质酶、内切β-1,4-葡聚糖酶、内切β-甘露聚糖酶、外切β-甘露聚糖酶、酯酶、外切甘露聚糖酶、半乳聚糖酶、葡糖淀粉酶、半纤维素酶、透明质酸酶、角蛋白酶、漆酶、乳糖酶、木质素酶、脂肪酶、脂肪分解酶、脂加氧酶、甘露聚糖酶、氧化酶、果胶酸裂合酶、果胶乙酰酯酶、果胶酶、戊聚糖酶、过氧化物酶、酚氧化酶、磷酸酶、磷脂酶、植酸酶、聚半乳糖醛酸酶、蛋白酶、支链淀粉酶、还原酶、鼠李糖半乳糖醛酸酶、β-葡聚糖酶、鞣酸酶、转谷氨酰胺酶、木聚糖乙酰酯酶、木聚糖酶、木葡聚糖酶、木糖苷酶、金属蛋白酶、和/或其他酶。

[0133] 在其他实施例中，本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段与信号肽融合用于指导所述变体或多肽或其活性片段的细胞外分泌。例如，在某些实施例中，信号肽是本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段的天然信号肽。在其他实施例中，
信号肽是非天然信号肽，例如枯草芽孢杆菌AprE信号肽。

[0134] 在一些实施例中，本发明的多肽在异源生物体，即类芽孢杆菌属物种以外的生物体中表达。示例性异源生物体是革兰氏阳性(+)细菌，例如枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、迟缓芽孢杆菌、短芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌(Geobacillus stearothermophilus，即以前的Bacillus stearothermophilus)、嗜碱芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、灿烂芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、变铅青链霉菌、或鼠灰链霉菌；
革兰氏阴性(-)细菌，例如大肠杆菌；酵母，例如酵母属物种或裂殖酵母属物种
(Schizosaccharomyces spp.)，例如酿酒酵母(S.cerevisiae)；和丝状真菌，例如曲霉属物种，例如米曲霉或黑曲霉，和里氏木霉。用于将核酸转化成这些生物体的方法是本领域已知的。在EP 238023中描述了用于转化曲霉属宿主细胞的合适程序。

[0135] 在具体的实施例中，本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段在异源生物体中表达为分泌多肽，在这种情况下，所述组合物和方法包括用于在异源生物中表达
作为分泌多肽的变体或重组多肽或其活性片段的方法。

[0136] 另外的实施例涉及产生本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段的方法，该方法包括用包含编码甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段的多核苷酸的表达
载体稳定转化宿主细胞；在合适条件下培养所述转化的宿主细胞以产生所述甘露聚糖酶变
体或重组多肽或其活性片段；和回收所述甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段。

[0137] 又另一个实施例涉及编码本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段的多核苷酸。在一个方面，多核苷酸包含在表达载体(其包含在异源生物中)中，如本文鉴定的那些。多核苷酸可以与调控元件(例如启动子、终止子、增强子等)有效地连接以帮助表达本文所述的编码的变体或重组多肽或其活性片段。一个实施例涉及编码具有选自SEQ ID
NO:1和93-139的核苷酸序列的变体或重组多肽或其活性片段的多核苷酸序列。另一个实施
例涉及编码具有选自SEQ ID NO:1、96、107、114、117、122、125、126、130和131的核苷酸序列的变体或重组多肽或其活性片段的多核苷酸序列。

[0138] 一些实施例涉及编码如下变体或重组多肽或其活性片段的多核苷酸，所述变体或重组多肽或其活性片段与SEQ ID NO:13的氨基酸序列具有至少59％、60％、65％、70％、
75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、
94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％氨基酸序列同一性。另外的实施例涉及与SEQ ID NO:1具有至少59％、60％、65％、70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、
88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、或100％同一性的多核苷酸。在一些实施例中，将多核苷酸进行密码子优化用于在不同宿主中表达、进行突变以引入克隆位点、或以其他方式改变以添加功能性。

[0139] 在一些实施例中，编码本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段的多核苷酸在信号肽的编码序列的下游融合，所述信号肽指导变体或重组多肽或其活性片段的
细胞外分泌。可以在适用于表达本文所述的变体或重组多肽或其活性片段、或适用于在将
表达载体引入合适的宿主细胞之前繁殖该表达载体的异源宿主细胞中提供表达载体。

[0140] 在一些实施例中，编码变体或重组多肽或其活性片段的多核苷酸在指定杂交条件下与SEQ ID NO:1的多核苷酸或其互补序列杂交。示例性条件是严格条件和高度严格条件，其在本文中描述。

[0141] 编码本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段的DNA可以从公开的序列经化学合成、或者直接从具有该基因的宿主细胞(例如通过cDNA文库筛选或PCR扩增)获
得。在一些实施例中，通过标准分子克隆技术将多核苷酸包含在表达盒中和/或克隆到合适的表达载体中。这种表达盒或载体包含辅助转录起始和终止的序列(例如启动子和终止
子)，并且通常包含可选择的标志物。

[0142] 将表达盒或载体导入合适的表达宿主细胞中，该表达宿主细胞随后表达相应的本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段。特别合适的表达宿主是细菌表达宿主
属，包括埃希氏菌属(例如，大肠杆菌)、假单胞菌属(例如，荧光假单胞菌或施氏假单胞菌)、变形杆菌属(例如，奇异变形杆菌)、罗尔斯通氏菌属(例如，富养罗尔斯通氏菌)、链霉菌属、葡萄球菌属(例如，肉葡萄球菌)、乳球菌属(例如，乳酸乳球菌)、或芽孢杆菌属(例如，枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌等)。酵母表达宿主也是特别合适的，例如酿酒酵母、粟酒裂殖酵母(S.pombe)、解脂耶氏酵母(Y.lipolytica)、多形汉森酵母
(H.polymorpha)、乳酸克鲁维酵母(K.lactis)或巴斯德毕赤酵母(P.pastoris)。特别适合
的是真菌表达宿主，例如勒克瑙金抱菌(C.lucknowense)、曲霉属(例如，米曲霉、黑曲霉、构巢曲霉等)或里氏木霉。还适合的是哺乳动物表达宿主如小鼠(例如，NS0)、中国仓鼠卵巢
(CHO)或幼仓鼠肾(BHK)细胞系。其他真核宿主如昆虫细胞或病毒表达系统(例如噬菌体如
M13、T7噬菌体或λ或病毒如杆状病毒)也适用于生产本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多
肽或其活性片段。

[0143] 在特定目的宿主中与分泌的蛋白质相关的启动子和/或信号序列是在该宿主或其他宿主中用于异源生产和分泌甘露聚糖酶的候选者。例如，在丝状真菌系统中，驱动纤维二糖水解酶I(cbh1)，葡糖淀粉酶A(glaA)，TAKA-淀粉酶(amyA)，木聚糖酶(exlA)，gpd-启动子cbh1、cbhll，内切葡聚糖酶基因EGI-EGV、Cel61B、Cel74A、egl1-egl5、gpd启动子、Pgk1、pki1、EF-1α、tef1、cDNA1和hex1的基因的启动子是特别合适的，并且可以衍生自许多不同的生物体(例如，黑曲霉、里氏木霉、米曲霉、泡盛曲霉、和构巢曲霉)。在一些实施例中，多核苷酸与编码合适的同源或异源信号序列的多核苷酸重组结合，导致本文所述的甘露聚糖酶
变体或重组多肽或其活性片段分泌到细胞外(或周质)空间中，从而允许直接检测细胞上清
液(或周质空间或裂解物)中的酶活性。对大肠杆菌、其他革兰氏阴性细菌和本领域已知的
其他生物体来说特别合适的信号序列包括驱动HlyA、DsbA、Pbp、PhoA、PelB、OmpA、OmpT或M13噬菌体Gill基因的表达的那些。对于枯草芽孢杆菌、革兰氏阳性生物体和本领域已知的其他生物体来说特别合适的信号序列进一步包括驱动AprE、NprB、Mpr、AmyA、AmyE、Blac、SacB的表达的那些，并且针对酿酒酵母或其他酵母，包括杀伤毒素、Bar1、Suc2、交配因子α、Inu1A或Ggplp信号序列。信号序列可以通过许多信号肽酶切割，从而将其从剩余的所表达
的蛋白质中除去。在一些实施例中，其余的多肽单独或作为与位于N-或C-末端的其他肽、标签或蛋白质(例如，6XHis、HA或FLAG标签)的融合物来表达。合适的融合物包括促进亲和纯化或检测的标签、肽或蛋白质(例如BCE103、6XHis、HA、几丁质结合蛋白、硫氧还蛋白或FLAG标签)以及促进靶甘露聚糖酶表达、分泌或加工的那些融合蛋白。合适的加工位点包括肠激酶、STE13、Kex2或其他蛋白酶切割位点，用于体内或体外切割。

[0144] 可以通过多种转化方法将本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段引入表达宿主细胞中，这些方法包括但不限于：电穿孔、脂质辅助转化或转染(“脂转染”)、化学介导的转染(例如CaCl和/或CaP)、乙酸锂介导的转化(例如，宿主细胞原生质体的)、生物射弹“基因枪”转化、PEG介导的转化(例如，宿主细胞原生质体的)、原生质体融合(例如，使用细菌或真核原生质体)、脂质体介导的转化、根癌农杆菌、腺病毒或其他病毒或噬菌体转化或转导。

[0145] 可替代地，本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段可以在细胞内表达。任选地，在细胞内表达酶变体或使用信号序列如上述那些分泌到周质空间中之后，可以使用透化或裂解步骤将多肽释放到上清液中。膜屏障的破坏是受机械手段如超声波、压力
处理(弗氏压碎器)、空泡化使用的影响，或受膜消化酶如溶菌酶或酶混合物使用的影响。作为另一种选择，编码本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段的多核苷酸可以
通过使用合适的无细胞表达系统来表达。在无细胞系统中，目的多核苷酸通常在启动子的
帮助下转录，但形成环状表达载体的连接是任选的。在其他实施例中，RNA是经外源添加的或无需转录而生成的并且在无细胞系统中翻译。

[0146] 另一个实施例涉及包含甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段的清洁组合物以及在清洁应用中使用这些组合物的方法。清洁应用包括但不限于衣物或纺织品清洁、衣
物或纺织品软化、餐具洗涤(手动和自动)、污渍预处理等。具体的应用是如下情况下的那些应用：甘露聚糖(例如槐豆胶、瓜耳胶等)是待除去的污垢或污渍的成分。

[0147] 清洁组合物通常包括有效量的本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，例如至少0.0001重量百分比、从约0.0001重量百分比至约1重量百分比、从约0.001重量百分比至约0.5重量百分比、从约0.01重量百分比至约0.1重量百分比、或甚至从约0.1重量百分比至约1重量百分比、或更多。清洁组合物中有效量的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段产生具有足以水解含甘露聚糖底物(如槐豆胶、瓜耳胶、或其组合)的酶活性的
甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段。

[0148] 一些实施例涉及选自粉末、液体、颗粒、棒状、固体、半固体、凝胶、糊剂、乳剂、片剂、胶囊剂、单位剂量、薄片和泡沫形式的清洁组合物。在一些实施例中，该清洁组合物是洗涤剂组合物。在其他实施例中，该清洁组合物或洗涤剂组合物选自衣物洗涤剂、织物软化洗涤剂、餐具洗涤剂和硬表面清洁洗涤剂。

[0149] 除非另外指出，本文提供的所有组分或组合物水平参考该组分或组合物的活性水平给出，并且不包括可能存在于可商购的来源中的杂质，例如残余溶剂或副产品。酶组分重量是基于总的活性蛋白。除非另外指明，所有百分比和比率均按重量计算。除非另外指明，所有百分比和比率均基于总组合物计算。在例示的洗涤剂组合物中，通过按总组合物的重
量计的纯酶表示酶水平并且除非另外说明，按总组合物的重量计表示洗涤剂成分。

[0150] 在一些实施例中，本文所述的清洁组合物进一步包含表面活性剂。在一些实施例中，表面活性剂选自非离子、两性、半极性、阴离子、阳离子、两性离子、及其组合和混合物。
在又另外的实施例中，该表面活性剂选自阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、两性离子表面活性剂、及其组合。在一些实施例中，本文所述的清洁组合物包含按所述组合物的重量计从约0.1％至约60％、约1％至约50％、或约5％至约40％的表面活性剂。示例性表面活性剂包括但不限于十二烷基苯磺酸钠、C12-14链烷醇聚醚-7、C12-15链烷醇聚醚-7、C12-15链烷醇聚醚硫酸钠、C14-15链烷醇聚醚-4、月桂醇聚醚硫酸钠(例如Steol CS-370)、氢化椰油酸钠、C12乙氧基化物(Alfonic 1012-6、Hetoxol LA7、Hetoxol LA4)、烷基苯磺酸钠(例如Nacconol 90G)及其组合和混合物。阴离子表面活性剂包括但不限于直链烷基苯磺酸盐
(LAS)、α-烯烃磺酸盐(AOS)、烷基硫酸盐(脂肪醇硫酸盐)(AS)、醇乙氧基硫酸盐(AEOS或
AES)、仲链烷磺酸盐(SAS)、α-磺基脂肪酸甲酯、烷基-或烯基琥珀酸或皂。非离子表面活性剂包括但不限于醇乙氧基化物(AEO或AE)、羧化醇乙氧基化物、壬基苯酚乙氧基化物、烷基多糖苷、烷基二甲基胺氧化物、乙氧基化脂肪酸单乙醇酰胺、脂肪酸单乙醇酰胺、或多羟基烷基脂肪酸酰胺(例如，如WO 92/06154中所述)、脂肪酸的聚氧乙烯酯、聚氧乙烯脱水山梨糖醇酯(例如TWEEN)、聚氧乙烯醇、聚氧乙烯异醇、聚氧乙烯醚(例如TRITON和BRIJ)、聚氧乙烯酯、聚氧乙烯-对-叔辛基苯酚或辛基苯基-环氧乙烷缩合物(例如Nonidet P40)、环氧乙
烷与脂肪醇的缩合物(例如Lubrol)、聚氧乙烯壬基酚、聚亚烷基二醇(SynperonicF108)、糖基表面活性剂(例如吡喃葡萄糖苷、硫代吡喃葡萄糖苷)、及其组合和混合物。

[0151] 在另外的实施例中，本文公开的洗涤剂组合物还包含表面活性剂混合物，所述表面活性剂混合物包括但不限于5％-15％阴离子表面活性剂、<5％非离子表面活性剂、阳离
子表面活性剂、膦酸盐、皂、酶、香料、丁基苯基甲基丙酸酯、香叶醇、沸石、聚羧酸酯、己基肉桂醛、柠檬烯、阳离子表面活性剂、香茅醇和苯并异噻唑啉酮。

[0152] 本文所述的清洁组合物可另外包含一种或多种助洗剂或助洗剂系统、络合剂、聚合物、漂白系统、稳定剂、泡沫促进剂、泡沫抑制剂、防腐剂、污垢悬浮剂、抗污垢再沉积剂、染料、杀菌剂、助水溶物(hydrotope)、晦暗抑制剂、荧光增白剂、织物调理剂和香料。本文所述的清洁组合物还可以包括选自蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶、脂肪酶、果胶降解酶、木葡聚糖酶或另外的羧酸酯水解酶的另外的酶。

[0153] 在一些实施例中，本文所述的清洁组合物进一步包含以该清洁组合物重量计从约1％、从约3％至约60％、或甚至从约5％至约40％的助洗剂。助洗剂可以包括但不限于，聚磷酸盐的碱金属、铵和链烷醇铵盐；碱金属硅酸盐、碱土金属和碱金属碳酸盐；铝硅酸盐；聚羧酸化合物；醚羟基聚羧酸酯；马来酸酐与乙烯或乙烯基甲基醚、1,3,5-三羟基苯-2,4,6-三磺酸、和羧基甲基氧基琥珀酸的共聚物；聚乙酸的各种碱金属、铵和取代的铵盐，例如乙二胺四乙酸和次氮基三乙酸；连同聚羧酸酯，例如苯六甲酸、琥珀酸、柠檬酸、氧代二琥珀酸(oxydisuccinic acid)、聚马来酸、苯1,3,5-三羧酸、羧基甲基氧基琥珀酸及其可溶性盐。

[0154] 在一些实施例中，助洗剂形成水溶性硬度离子络合物(例如螯合助洗剂)，例如柠檬酸盐和多磷酸盐(例如三聚磷酸钠和三聚磷酸钠六水合物、三聚磷酸钾、以及混合的三聚磷酸钠和三聚磷酸钾等)。任何适合的助洗剂可用于本文所述的组合物，包括本领域已知的那些(参见例如EP 2100949)。

[0155] 如本文所指示，在一些实施例中，本文所述的清洁组合物还包含辅助成分，所述辅助成分包括但不限于：表面活性剂、助洗剂、漂白剂、漂白活化剂、漂白催化剂、其他酶、酶稳定系统、螯合剂、荧光增白剂、去污聚合物、染料转移剂、染料转移抑制剂、催化材料、过氧化氢、过氧化氢源、预成型过酸、聚合物分散剂、粘土污垢去除剂、结构弹性剂、分散剂、泡沫抑制剂、染料、香料、着色剂、填料盐、助水溶剂、光活化剂、荧光剂、织物调理剂、可水解表面活性剂、溶剂、防腐剂、抗氧化剂、抗收缩剂、抗皱剂、杀菌剂、杀真菌剂、颜色点缀剂、银护理剂、抗晦暗剂和/或抗腐蚀剂、碱性来源、增溶剂、载体、加工助剂、颜料、和pH控制剂(参见，例如，US 6,610,642、6,605,458、5,705,464、5,710,115、5,698,504、5,695,679、5,686,014和5,646,101)。在一些实施例中，掺入一种或多种辅助剂例如以便辅助或增强清洁性能(用于处理待清洁的基材)，或者以便改变清洁组合物的美观性(例如用香料、色素、染料等的情况)。是除了本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段之外的任何此类辅助成分。这些另外的组分的精确性质及其掺入水平将取决于组合物的物理形式和将在使用组合
物的清洁操作的性质。

[0156] 在其中一种或多种辅助成分与甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段不相容的实施例中，可以使用合适的方法来保持清洁辅助成分和甘露聚糖酶分离(即，彼此不接
触)，直到两种组分的组合合适为止。此类分离方法包括本领域已知的任何合适的方法(例
如，囊形片、包封、片剂化、物理分离等)。通过考虑待清洁的表面、物品或织物，以及针对使用过程中(例如在整个清洁洗涤剂使用中)的清洁条件的组合物的所希望的形式而容易地
具体选择合适的辅助成分。

[0157] 本文所述的清洁组合物有利地用于例如衣物洗涤应用、硬表面清洁、餐具洗涤应用、以及装饰品应用中。此外，本发明的多肽可用于颗粒和液体组合物。

[0158] 本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段也可用于清洁添加剂产品。在一些实施例中，该添加剂被包封于适用于添加至清洁过程中的剂型中。在一些实施例中，该添加剂被包封于剂型中用于添加至使用过氧化物来源并且希望得到增加的漂白效果的
清洁过程中。本发明可使用任何适合的单一单位剂型，包括但不限于丸剂、片剂、囊形片或其他单一单位剂型，例如预先测量的粉末或液体。在一些实施例中，包括一种或多种填料或一种或多种载体材料以增加此类组合物的体积。适合的填料或载体材料包括但不限于：硫
酸盐、碳酸盐和硅酸盐的各种盐以及滑石、粘土等。用于液体组合物的适合的填料或载体材料包括但不限于水或低分子量伯醇和仲醇(包括多元醇和二元醇)。此类醇的实施例包括但
不限于：甲醇、乙醇、丙醇和异丙醇。在一些实施例中，组合物包含从约5％至约90％的此类材料。酸性填料可用于降低pH值。可替代地，在一些实施例中，清洁添加剂包括一种或多种辅助成分。

[0159] 在一个实施例中，清洁组合物或清洁添加剂含有有效量的本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，任选地与其他甘露聚糖酶和/或另外的酶组合。在某些实施例中，另外的酶包括但不限于选自以下的至少一种酶：酰基转移酶、淀粉酶、α-淀粉酶、β-淀粉酶、α-半乳糖苷酶、阿拉伯糖酶、阿拉伯糖苷酶、芳基酯酶、β-半乳糖苷酶、β-葡聚糖酶、角叉菜胶酶、过氧化氢酶、纤维二糖水解酶、纤维素酶、软骨素酶、角质酶、内切β-1,4-葡聚糖酶、内切β-甘露聚糖酶、外切β-甘露聚糖酶、酯酶、外切甘露聚糖酶、半乳聚糖酶、葡糖淀粉酶、半纤维素酶、透明质酸酶、角蛋白酶、漆酶、乳糖酶、木质素酶、脂肪酶、脂肪分解酶、脂加氧酶、甘露聚糖酶、金属蛋白酶、氧化酶、果胶酸裂合酶、果胶乙酰酯酶、果胶酶、戊聚糖酶、过水解酶、过氧化物酶、酚氧化酶、磷酸酶、磷脂酶、植酸酶、聚半乳糖醛酸酶、蛋白酶、支链淀粉酶、还原酶、鼠李糖半乳糖醛酸酶、β-葡聚糖酶、鞣酸酶、转谷氨酰胺酶、木聚糖乙酰酯酶、木聚糖酶、木葡聚糖酶、木糖苷酶、和其组合。在进一步的实施例中，本文所述的清洁组合物或清洁添加剂进一步包含蛋白酶和/或淀粉酶。

[0160] 典型地本文的清洁组合物被配制使得在水性清洁操作中使用期间，洗涤水将具有从约3.0至约11的pH。液体产品制剂典型地被配制成具有从约5.0至约9.0的净pH。颗粒洗衣产品典型地被配制成具有从约8.0至约11.0的pH。用于将pH控制在推荐的使用水平的技术
包括使用缓冲液、碱、酸等，并且是本领域的普通技术人员熟知的。

[0161] 典型地，合适的低pH清洁组合物具有从约3.0至约5.0或甚至从约3.5至约4.5的净pH。典型地，低pH清洁组合物不含在这种pH环境中水解的表面活性剂。这样的表面活性剂包括烷基硫酸钠表面活性剂，该烷基硫酸钠包含至少一个环氧乙烷部分或甚至从约1至约16
摩尔的环氧乙烷。这样的清洁组合物典型地包含足够量的pH调节剂，例如氢氧化钠、单乙醇胺或盐酸，以便提供净pH为约3.0至约5.0的这样的清洁组合物。这样的组合物典型地包含
至少一种酸稳定酶。在一些实施例中，组合物是液体，而在其他实施例中，组合物是固体。这样的液体组合物的pH通常以净pH进行测量。这样的固体组合物的pH以所述组合物的10％固
体溶液进行测量，其中溶剂是蒸馏水。在这些实施例中，除非另有说明，所有pH测量均在20℃进行。

[0162] 典型地，合适的高pH清洁组合物具有从约9.0至约11.0的净pH或甚至从9.5至10.5的净pH。这样的清洁组合物典型地包含足够量的pH调节剂，例如氢氧化钠、单乙醇胺或盐
酸，以便提供净pH为约9.0至约11.0的这样的清洁组合物。这样的组合物典型地包含至少一种碱稳定的酶。在一些实施例中，组合物是液体，而在其他实施例中，组合物是固体。这样的液体组合物的pH通常以净pH进行测量。这样的固体组合物的pH以所述组合物的10％固体溶
液进行测量，其中溶剂是蒸馏水。在这些实施例中，除非另有说明，所有pH测量均在20℃进行。

[0163] 在一些实施例中，甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段为包封颗粒的形式，以在储存过程中保护其不受粒状组合物的其他组分的影响。另外，包封还是在清洁过程中
控制甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段的可用性的手段。在一些实施例中，包封增
强了甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段和/或另外的酶的性能。就这一点而言，将甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段使用本领域已知的任何合适的包封材料进行包封。
典型地，包封材料是水溶性和/或水分散性的。在一些实施例中，包封材料具有0℃或更高的玻璃化温度(Tg)。玻璃化转变温度在WO 97/11151中有更详细的描述。该包封材料典型地选自：碳水化合物、天然或合成胶、甲壳素、壳聚糖、纤维素和纤维素衍生物、硅酸盐、磷酸盐、硼酸盐、聚乙烯醇、聚乙二醇、石蜡及其组合。当包封材料是碳水化合物时，其典型地选自单糖、寡糖、多糖及其组合。在一些典型的实施例中，包封材料是淀粉(参见例如EP 0922499和US 4,977,252；5,354,559；和5,935,826)。在一些实施例中，包封材料是由塑料(例如热塑性塑料、丙烯腈、甲基丙烯腈、聚丙烯腈、聚甲基丙烯腈及其混合物)制成的微球；可使用的可商购的微球包括但不限于由 (Stockviksverken，瑞典)、以及PM6545、
PM6550、PM7220、PM7228、和
(PQ公司，宾夕法尼亚州福吉谷市(Valley Forge,PA))供应的那些。

[0164] 术语“颗粒组合物”是指离散的固体宏观颗粒的聚集体。由于粒度较小，粉末是一类特殊的颗粒状材料，这使得它们更具有粘性，并且更容易悬浮。

[0165] 全世界典型的洗涤溶液中的洗涤剂组合物的浓度从洗涤剂组合物的小于约800ppm(“低洗涤剂浓度地理位置”)(例如在日本为约667ppm)变化至在约800ppm至约
2000ppm之间(“中洗涤剂浓度地理位置”)(例如在美国为约975ppm和在巴西为约1500ppm)，变化至大于约2000ppm(“高洗涤剂浓度地理位置”)(例如在欧洲为约4500ppm至约5000ppm，在高泡沫磷酸盐助洗剂地理位置为约为6000ppm)。

[0166] 在一些实施例中，可以在从约10℃至约60℃、或从约20℃至约60℃、或从约30℃至约60℃、从约40℃至约60℃、从约40℃至约55℃、或在10℃至60℃内的所有范围内的温度使用本文所述的洗涤剂组合物。在一些实施例中，在从约10℃至约40℃、或从约20℃至约30℃、从约15℃至约25℃、从约15℃至约35℃、或在10℃至40℃内所有范围的温度，将本文所述的洗涤剂组合物用于“冷水洗涤”中。

[0167] 作为进一步的实例，不同的地理位置具有不同的水硬度。通常按照每加仑颗粒数混合的Ca2+/Mg2+来描述水硬度。硬度是水中钙(Ca2+)和镁(Mg2+)的量的量度。美国大部分水都是硬水，但是硬度却不同。中等硬(60ppm-120ppm)至硬(121ppm-181ppm)水具有60至181
份/百万份(份/百万份转化为颗粒/美国加仑为ppm#除以17.1等于颗粒/加仑)的硬度矿物。

[0168] 表II.水硬度水平

[0169]水每加仑颗粒数百万分率
软小于1.0 小于17
略硬 1.0至3.5 17至60
中等硬 3.5至7.0 60至120
硬 7.0至10.5 120至180
非常硬大于10.5 大于180

[0170] 典型地，欧洲水硬度大于约10.5(例如约10.5至约20.0)颗粒/加仑混合的Ca2+/Mg2+(例如约15颗粒/加仑混合的Ca2+/Mg2+)。典型地，北美水硬度大于日本水硬度、但低于欧洲水硬度。例如，北美水硬度可以在约3至约10颗粒之间、约3至约8颗粒或约6颗粒。典型地，日本水硬度低于北美水硬度，通常小于约4，例如约3颗粒/加仑混合的Ca2+/Mg2+。

[0171] 在一些实施例中，本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段在洗涤性能上与可商购甘露聚糖酶相当。在一些实施例中，本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽
或其活性片段与可商购甘露聚糖酶相比表现出增强的洗涤性能。在一些实施例中，本文所
述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段显示增强的氧化稳定性、增强的热稳定性、
在各种条件下增强的清洁能力、和/或增强的螯合剂稳定性。另外，本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段可单独地或与助洗剂和稳定剂组合地用于不含洗涤剂的清
洁组合物中。

[0172] 除了本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段之外，任何其他合适的甘露聚糖酶可单独或与本文所述的变体或重组多肽或其活性片段组合用于本文所述的组
合物中。合适的甘露聚糖酶包括但不限于糖基水解酶的GH26家族的甘露聚糖酶、糖基水解
酶的GH5家族的甘露聚糖酶、酸性甘露聚糖酶、中性甘露聚糖酶和碱性甘露聚糖酶。碱性甘露聚糖酶的实例包括US 6,060,299；6,566,114；和6,602,842；以及WO 9535362、WO
9964573、WO 9964619、和WO 2015022428中所述的那些。另外，合适的甘露聚糖酶包括但不限于动物、植物、真菌或细菌来源的那些。在本公开中涵盖化学或遗传修饰的突变体。

[0173] 有用的甘露聚糖酶的实例包括芽孢杆菌属内切-β-甘露聚糖酶例如枯草芽孢杆菌内切-β-甘露聚糖酶(参见例如US 6,060,299和WO 9964573)、芽孢杆菌属物种I633内切-β-甘露聚糖酶(参见例如US 6,566,114和WO 9964619)、芽孢杆菌属物种AAI12内切-β-甘露聚糖酶(参见例如US 6,566,114和WO 9964619)、芽孢杆菌属物种AA349内切-β-甘露聚糖酶
(参见例如US 6,566,114和WO 9964619)、黏琼脂芽孢杆菌NCIMB 40482内切-β-甘露聚糖酶(参见例如US 6,566,114和WO 9964619)、耐盐芽孢杆菌(B.halodurans)内切β-甘露聚糖
酶、克劳氏芽孢杆菌内切-β-甘露聚糖酶(参见例如US 6,566,114和WO 9964619)、地衣芽孢杆菌内切-β-甘露聚糖酶(参见例如US 6,566,114和WO 9964619A1)、腐质霉属(Humicola)
内切-β-甘露聚糖酶例如特异腐质霉(H.insolens)内切-β-甘露聚糖酶(参见例如US 6,
566,114和WO9964619)和Caldocellulosiruptor内切-β-甘露聚糖酶例如C.sp.内切-β-甘
露聚糖酶(参见例如US 6,566,114和WO 9964619)。

[0174] 此外，许多鉴定的甘露聚糖酶(即内切-β-甘露聚糖酶和外切-β-甘露聚糖酶)可用于本公开的一些实施例中，包括但不限于双孢蘑菇(A.bisporus)甘露聚糖酶(参见Tang等人，[2001]Appl.Environ.Microbiol.[应用环境微生物学]67:2298-2303)、A.tamarii甘露聚糖酶(参见Civas等人，[1984]Biochem.J.[生物化学杂志]219:857-863)、棘孢曲霉
(A.aculeatus)甘露聚糖酶(参见Christgau等人，[1994]Biochem.Mol.Biol.Int.[国际生
物化学与分子生物学杂志]33:917-925)、泡盛曲霉(A.awamori)甘露聚糖酶(参见Setati等
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(A.fumigatus)甘露聚糖酶(参见Puchart等人，[2004]Biochimica et biophysica Acta.
[生物化学与生物物理学报]1674:239-250)、黑曲霉(A.niger)甘露聚糖酶(参见Ademark等
人，[1998]J.Biotechnol.[生物技术杂志]63:199-210)、米曲霉(A.oryzae)NRRL甘露聚糖
酶(参见Regalado等人，[2000]J.Sci.Food Agric.[食品与农业科学杂志]80:1343-1350)、硫色曲霉(A.sulphureus)甘露聚糖酶(参见Chen等人，[2007]J.Biotechnol.[生物技术杂
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甘露聚糖酶(参见Cui等人，[1999]Wei Sheng Wu Xue Bao.[微生物学报]39(1):60-63)、枯草芽孢杆菌SA-22甘露聚糖酶(参见Sun等人，[2003]Sheng Wu Gong Cheng Xue Bao.[生物
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3101-3108)、噬热网团菌(D.thermophilum)甘露聚糖酶(参见Gibbs等人，[1999]
Curr.Microbiol.[当代微生物学]39(6):351-357)、黄杆菌属物种(Flavobacterium sp.)
甘露聚糖酶(参见Zakaria等人，[1998]Biosci.Biotechnol.Biochem.[生物科学生物技术
生物化学]62:655-660)、G.pulmonata甘露聚糖酶(参见Charrier和Rouland,[2001]
J.Expt.Zool.290:125-135)、L.brevicula甘露聚糖酶(参见Yamamura等人，[1996]
Biosci.Biotechnol.Biochem.[生物科学生物技术生物化学]60:674-676)、L.esculentum
甘露聚糖酶(参见Filichkin等人，[2000]PlantPhysiol.[植物生理学]134:1080-1087)、姜黄素类芽孢杆菌(P.curdlanolyticus)甘露聚糖酶(参见Pason和Ratanakhanokchai,

[2006]Appl.Environ.Microbiol.[应用与环境微生物学]72:2483-2490)、多粘类芽孢杆菌(P.polymyxa)甘露聚糖酶(参见Han等人，[2006]Appl.MicrobiolBiotechnol.[应用微生物
学和生物技术]73(3):618-630)、黄孢原毛平革菌(P.chrysosporium)甘露聚糖酶(参见
Wymelenberg等人，[2005]J.Biotechnol.[生物技术学杂志]118:17-34)、瘤胃壶菌属物种
(Piromycessp.)甘露聚糖酶(参见Fanutti等人，[1995]J.Biol.Chem.[生物化学杂志]270
(49):29314-29322)、P.insulars甘露聚糖酶(参见Yamamura等人，[1993]
Biosci.Biotechnol.Biochem.[生物科学生物技术生物化学]7:1316-1319)、萤光假单胞菌
纤维素亚种(P.fluorescens subsp.cellulosa)甘露聚糖酶(参见Braithwaite等人，

[1995]Biochem J.[生物化学杂志]305:1005-1010)、R.marinus甘露聚糖酶(参见Politz等人，[2000]Appl.Microbiol.Biotechnol.[应用微生物与生物技术]53(6):715-721)、
S.rolfsii甘露聚糖酶(参见Sachslehner等人，[2000]J.Biotechnol.[生物技术杂志]80:
127-134)、S .galbus甘露聚糖酶(参见Kansoh和Nagieb ,[2004]
Anton.van.Leeuwenhoek.85:103-114)、变铅青链霉菌(S.lividans)甘露聚糖酶(参见
Arcand等人，[1993]J.Biochem.[生物化学杂志]290:857-863)、多糖分解高温厌氧芽孢杆
菌(T.Polysaccharolyticum)甘露聚糖酶(参见Cann等人，[1999]J.Bacteriol.[细菌学杂
志]181:1643-1651)、嗜热单孢菌(T.fusca)甘露聚糖酶(参见Hilge等人，[1998]Structure[结构]6:1433-1444)、T.maritima甘露聚糖酶(参见Parker等人，[2001]
Biotechnol.Bioeng.[生物技术与生物工程]75(3):322-333)、新阿波罗栖热袍菌
(T.neapolitana)甘露聚糖酶(参见Duffaud等人，[1997]Appl.Environ.Microbiol.[应用
环境微生物学]63:169-177)、哈茨木霉(T.harzianum)菌株T4甘露聚糖酶(参见Franco等
人，[2004]Biotechnol Appl.Biochem.[应用生物化学与生物技术]40:255-259)、里氏木霉(T.reesei)甘露聚糖酶(参见Stalbrand等人[1993]J.Biotechnol.[生物技术杂志]29:
229-242)和弧菌属物种(Vibrio sp.)甘露聚糖酶(参见Tamaru等人，[1997]
J.Ferment.Bioeng.[发酵和生物工程杂志]83:201-205)。

[0175] 另外的合适的甘露聚糖酶包括可商购的内切-β-甘露聚糖酶，例如(Chemgen公司)；和 (丹麦诺维信公
司(Novozymes A/S,Denmark))；EFFECTENZTMM 1000、 M 100、PURABRITETM
和MANNASTARTM(杜邦公司(DuPont))；以及 160和 200
(Diversa)。

[0176] 在其他实施例中，本文所述的组合物包含本文所述的一种或多种甘露聚糖酶变体和一种或多种另外的酶。所述一种或多种另外的酶选自：酰基转移酶、α-淀粉酶、β-淀粉酶、α-半乳糖苷酶、阿拉伯糖苷酶、芳基酯酶、β-半乳糖苷酶、角叉菜胶酶、过氧化氢酶、纤维二糖水解酶、纤维素酶、软骨素酶、角质酶、内切-β-1,4-葡聚糖酶、内切-β-甘露聚糖酶、酯酶、外切甘露聚糖酶、半乳聚糖酶、葡糖淀粉酶、半纤维素酶、透明质酸酶、角蛋白酶、漆酶、乳糖酶、木质素酶、脂肪酶、脂加氧酶、另外的甘露聚糖酶、金属蛋白酶、氧化酶、果胶裂解酶、果胶乙酰酯酶、果胶酶、戊聚糖酶、过氧化物酶、酚氧化酶、磷酸酶、磷脂酶、植酸酶、聚半乳糖醛酸酶、蛋白酶、支链淀粉酶、还原酶、鼠李糖半乳糖醛酸酶、β-葡聚糖酶、鞣酸酶、转谷氨酰胺酶、木聚糖乙酰酯酶、木聚糖酶、木葡聚糖酶、木糖苷酶、和其任何组合或混合物。一些实施例涉及包含常规酶(如淀粉酶、脂肪酶、角质酶、蛋白酶和/或纤维素酶)的酶的组合(即
“混合物”)，所述酶的组合与本文所述的一种或多种甘露聚糖酶变体和/或一种或多种另外的甘露聚糖酶结合。

[0177] 在一些实施例中，本文所述的清洁组合物进一步包含蛋白酶。在一些实施例中，组合物包含按该组合物的重量计从约0.00001％至约10％的蛋白酶。在另一个实施例中，清洁组合物包含按该组合物重量计从约0.0001％至约10％、约0.001％至约5％、约0.001％至约2％、或约0.005％至约0.5％的蛋白酶。

[0178] 在一个实施例中，蛋白酶是丝氨酸蛋白酶。合适的蛋白酶包括动物、植物或微生物来源的蛋白酶。在一些实施例中，蛋白酶是微生物蛋白酶。在其他实施例中，蛋白酶是化学或遗传修饰的突变体。在另一个实施例中，蛋白酶是碱性微生物蛋白酶或胰蛋白酶样蛋白酶。示例性碱性蛋白酶包括衍生自例如芽孢杆菌的枯草杆菌蛋白酶(例如，枯草杆菌蛋白酶迟缓、枯草杆菌蛋白酶解淀粉、枯草杆菌蛋白酶嘉士伯(Carlsberg)、枯草杆菌蛋白酶309、枯草杆菌蛋白酶147和枯草杆菌蛋白酶168)。示例性另外的蛋白酶包括但不限于描述于以
下文献中的那些：WO 92/21760，WO 95/23221，WO 2008/010925，WO 09/149200，WO 09/
149144，WO 09/149145，WO 10/056640，WO 10/056653，WO 2010/0566356，WO 11/072099，WO
2011/13022，WO 11/140364，WO 12/151534，WO 2015/038792，WO 2015/089447，WO 2015/
089441，WO 2015/143360，WO 2016/061438，WO 2016/069548，WO 2016/069544，WO 2016/
069557，WO 2016/069563，WO 2016/069569，WO 2016/069552，WO 2016/145428，美国公开号
2008/0090747，US 5,801,039，US 5,340,735，US 5,500,364，US 5,855,625，RE 34,606，US
5,955,340，US 5,700,676，US 6,312,936，US 6,482,628，US 8,530,219，美国临时申请号
62/331282、62/332417、62/343618、和62/351649，以及PCT申请号PCT/US 16/32514和PCT/US 2016/038245；以及描述于以下文献中的金属蛋白酶：WO 1999014341、WO 1999033960、WO 1999014342、WO 1999034003、WO 2007044993、WO 2009058303、WO 2009058661、WO
2014071410、WO 2014194032、WO 2014194034、WO 2014194054、和WO 2014/194117。示例性蛋白酶包括但不限于胰蛋白酶(例如猪或牛起源的)和在WO 89/06270中描述的镰孢菌属
(Fusarium)蛋白酶。示例性商业蛋白酶包括但不限于 MAXACALTM、
MAXAPEMTM、
OXP、PURAMAXTM、EXCELLASETM、PREFERENZTM蛋白酶(例如P100、P110、P280)、EFFECTENZTM蛋白酶(例如P1000、P1050、P2000)、EXCELLENZTM蛋白酶(例如P1000)、和PURAFAST
(杜邦公司(DuPont))；
16L、 ULTRA、
DURAZYMTM、
LIQUANASE
PROGRESS 和 (诺维信公司)；BLAPTM和BLAPTM变体
(汉高公司(Henkel))；LAVERGYTMPRO 104L(BASF)、和KAP(嗜碱芽孢杆菌(B.alkalophilus)枯草杆菌蛋白酶(花王公司))。

[0179] 在一些实施例中，本文所述的清洁组合物进一步包含合适的淀粉酶。在一个实施例中，该组合物包含按组合物重量计从约0.00001％至约10％、约0.0001％至约10％、约
0.001％至约5％、约0.001％至约2％、或约0.005％至约0.5％的淀粉酶。适合用于碱性溶液中的任何淀粉酶(例如，α淀粉酶和/或β淀粉酶)可以用于包含在此类组合物中。示例性淀粉酶可以是化学或遗传修饰的突变体。示例性淀粉酶包括但不限于细菌或真菌来源的那些，
例如像描述于以下文献中的淀粉酶：GB 1,296,839、WO 9100353、WO 9402597、WO
94183314、WO 9510603、WO 9526397、WO 9535382、WO 9605295、WO 9623873、WO 9623874、WO
9630481、WO 9710342、WO 9741213、WO 9743424、WO 9813481、WO 9826078、WO 9902702、WO
9909183、WO 9919467、WO 9923211、WO 9929876、WO 9942567、WO 9943793、WO 9943794、WO
9946399、WO 0029560、WO 0060058、WO 0060059、WO 0060060、WO 0114532、WO 0134784、WO
0164852、WO 0166712、WO 0188107、WO 0196537、WO 02092797、WO 0210355、WO 0231124、WO
2004055178、WO 2004113551、WO 2005001064、WO 2005003311、WO 2005018336、WO
2005019443、WO 2005066338、WO 2006002643、WO 2006012899、WO 2006012902、WO
2006031554、WO 2006063594、WO 2006066594、WO 2006066596、WO 2006136161、WO
2008000825、WO 2008088493、WO 2008092919、WO 2008101894、WO 2008/112459、WO
2009061380、WO 2009061381、WO 2009100102、WO 2009140504、WO 2009149419、WO 2010/
059413、WO 2010088447、WO 2010091221、WO 2010104675、WO 2010115021、WO 10115028、WO
2010117511、WO 2011076123、WO 2011076897、WO 2011080352、WO 2011080353、WO
2011080354、WO 2011082425、WO 2011082429、WO 2011087836、WO 2011098531、WO
2013063460、WO 2013184577、WO 2014099523、WO 2014164777、和WO
2015077126。示例性商业淀粉酶包括但不限于 AMPLIFY
STAINZYME
TM
STAINZYME STAINZYME 和BAN (诺维信公司)；
EFFECTENZTMS 1000、POWERASETM、PREFERENZTMS 100、PREFERENZTMS 110、EXCELLENZTMS
2000、和 P(杜邦公司)。

[0180] 在一些实施例中，本文所述的清洁组合物进一步包含合适的果胶降解酶。如本文所用，“一种或多种果胶降解酶”包括阿拉伯聚糖酶(EC 3.2.1.99)、半乳聚糖酶(EC
3.2.1.89)、聚半乳糖醛酸酶(EC 3.2.1.15)、外切-多聚半乳糖醛酸酶(EC 3.2.1.67)、外
切-聚-α-半乳糖醛酸苷酶(EC 3.2.1.82)、果胶裂解酶(EC 4.2.2.10)、果胶酯酶(EC
3.1.1.11)、果胶酸裂合酶(EC 4.2.2.2)、外切-多聚半乳糖醛酸裂合酶(EC 4.2.2.9)和半
纤维素酶(例如内切-1,3-β-木糖苷酶(EC 3.2.1.32)、木聚糖-1,4-β-木糖苷酶(EC
3.2.1.37)和α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶(EC 3.2.1.55))。果胶降解酶是上述酶活性的天然混
合物。因此果胶酶包括水解果胶甲酯键的果胶甲基酯酶、切割半乳糖醛酸分子之间的糖苷
键的多聚半乳糖醛酸酶、以及作用于果胶酸以引起α-1,4糖苷键的非水解切割以形成半乳
糖醛酸的不饱和衍生物的果胶反排除酶(pectin transeliminase)或裂合酶。

[0181] 合适的果胶降解酶包括植物、真菌或微生物来源的那些酶。在一些实施例中，包括化学或遗传修饰的突变体。在一些实施例中，果胶降解酶是碱性果胶降解酶，即在从约7.0至约12的pH下具有其最大活性的至少10％、至少25％、或至少40％的酶活性的酶。在某些其他实施例中，果胶降解酶是在从约7.0至约12的pH下具有其最大活性的酶。碱性果胶降解酶由嗜碱微生物(例如细菌、真菌)和酵母微生物(例如芽孢杆菌物种)产生。在一些实施例中，如JP 56131376和JP 56068393中所述，微生物是坚强芽孢杆菌、环状芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌。碱性果胶分解酶可以包括但不限于galacturan-1,4-α-galacturonidase(EC
3.2.1.67)、多聚半乳糖醛酸酶活性(EC 3.2.1.15)、果胶酯酶(EC 3.1.1.11)、果胶酸裂合酶(EC 4.2.2.2)及其同工酶。碱性果胶分解酶可以由欧文氏菌物种产生。在一些实施例中，如JP 59066588、JP 63042988和World J.Microbiol.Biotechnol.[世界微生物与生物技术
杂志](8,2,115-120)1992中所述，碱性果胶分解酶由菊欧文氏菌(E.chrysanthemi)、胡萝卜软腐欧文氏菌(E.carotovora)、梨火疫病病原菌(E.amylovora)、草生欧文氏菌
(E.herbicola)和溶解肠杆菌(E.dissolvens)产生。在某些其他实施例中，如在JP
73006557和Agr.Biol.Chem.[农业生物化学](1972),36(2)285-93中所公开的，碱性果胶酶
由芽孢杆菌属物种产生。在一些实施例中，本文所述的清洁组合物还包含按该组合物重量
计约0.00001％至约10％、约0.0001％至约10％、约0.001％至约5％、约0.001％至约2％、或约0.005％至约0.5％的果胶降解酶。

[0182] 在一些其他实施例中，本文所述的清洁组合物进一步包含合适的木葡聚糖酶。合适的木葡聚糖酶包括但不限于植物、真菌或细菌来源的那些木葡聚糖酶。在一些实施例中
包括化学或遗传修饰的突变体。如本文所用，“一种或多种木葡聚糖酶”涵盖由Vincken和Voragen在瓦赫宁根大学(Wageningen University)[Vincken等人，(1994)Plant Physiol.
[植物生理学]，104,99-107]所述的酶的家族，并能够降解如Hayashi等人(1989)
Annu.Rev.Plant.Physiol.Plant Mol.Biol.[植物生理学和植物分子生物学年鉴]，40,
139-168中所述的木葡聚糖。Vincken等人证明了通过从绿色木霉[Trichoderma viride]
(内切-IV-葡聚糖酶)纯化的木葡聚糖酶从分离的苹果细胞壁的纤维素中去除木葡聚糖涂
层。这种酶增强了细胞壁嵌入的纤维素的酶降解，并与果胶酶协同作用。来自DSM的
Rapidase LIQ+含有木葡聚糖酶活性。在一些实施例中，本文所述的清洁组合物还包含按该组合物重量计从约0.00001％至约10％、约0.0001％至约10％、约0.001％至约5％、约
0.001％至约2％、或约0.005％至约0.5％的木葡聚糖酶。在某些其他实施例中，用于特定应用的木葡聚糖酶是碱性木葡聚糖酶，即在从7至12的pH范围下具有其最大活性的至少10％、至少25％、或至少40％的酶活性的酶。在某些其他实施例中，木葡聚糖酶是在从约7.0至约
12的pH下具有最大活性的酶。

[0183] 在一些另外的实施例中，本文所述的洗涤剂组合物还包含合适的纤维素酶。在一个实施例中，该组合物包含按组合物重量计从约0.00001％至约10％、0.0001％至约10％、约0.001％至约5％、约0.001％至约2％、或约0.005％至约0.5％的纤维素酶。任何合适的纤维素酶可以用于本文所述的组合物中。示例性纤维素酶可以是化学或遗传修饰的突变体。
示例性纤维素酶包括但不限于细菌或真菌来源的那些纤维素酶，例如像WO 2005054475、WO
2005056787、US 7,449,318、US 7,833,773、US4,435,307；EP 0495257；和美国临时申请号
62/296 ,678中所描述的那些。示例性商业纤维素酶包括但不限于，
和 PREMIUM(诺维信公司)；REVITALENZTM100、REVITALENZTM200/220、和
2000(杜邦公司)；以及KAC-500(B)TM(花王公司)。在一些实施例中，纤维
素酶作为成熟野生型或变体纤维素酶的部分或片段掺入，其中N末端的一部分被缺失(参见
例如US5,874,276)。

[0184] 在仍另外的实施例中，本文所述的洗涤剂组合物还包含合适的脂肪酶。在一些实施例中，该组合物包含按组合物重量计从约0.00001％至约10％、约0.0001％至约10％、约
0.001％至约5％、约0.001％至约2％、或约0.005％至约0.5％的脂肪酶。示例性脂肪酶可以是化学或遗传修饰的突变体。示例性脂肪酶包括但不限于例如细菌或真菌来源的那些，例
如像绵毛状腐质菌(H.lanuginosa)脂肪酶(参见例如EP 258068、和EP 305216)、疏棉状嗜
热丝孢菌(T.lanuginosus)脂肪酶(参见例如WO 2014/059360和WO 2015/010009)、米黑根
毛霉(Rhizomucor miehei)脂肪酶(参见例如EP 238023)、假丝酵母属脂肪酶例如南极洲假
丝酵母(C.antarctica)脂肪酶(例如南极洲假丝酵母脂肪酶A或B)(参见例如EP 214761)、
假单胞菌属脂肪酶例如产碱假单胞菌(P.alcaligenes)和假产碱假单胞菌
(P.pseudoalcaligenes)脂肪酶(参见例如，EP 218272)、洋葱假单胞菌(P.cepacia)脂肪酶(参见例如，EP 331376)、施氏假单胞菌(P.stutzeri)脂肪酶(参见例如，GB 1,372,034)、萤光假单胞菌(P.fluorescens)脂肪酶、芽孢杆菌属脂肪酶(例如枯草芽孢杆菌脂肪酶
(Dartois等人，Biochem.Biophys.Acta[生物化学与生物物理学报]1131:253-260(1993))、嗜热脂肪芽胞杆菌脂肪酶(参见例如，JP64/744992)、和短小芽孢杆菌脂肪酶(参见例如，WO
91/16422))。示例性经克隆的脂肪酶包括但不限于沙门柏干酪青霉(Penicillium
camembertii)脂肪酶(参见Yamaguchi等人，Gene[基因]103:61-67(1991))；白地霉
(Geotricum candidum)脂肪酶(参见Schimada等人，J.Biochem.[生物化学杂志]，106:383-
388(1989))；以及各种根霉属脂肪酶例如德氏根霉(R.delemar)脂肪酶(参见Hass等人，
Gene[基因]109:117-113(1991))；雪白根霉(R.niveus)脂肪酶(Kugimiya等人，
Biosci.Biotech.Biochem.[生物科学、生物技术与生物化学]56:716-719(1992))和米根霉
(R.oryzae)脂肪酶。其他脂解酶如角质酶也可用于本文所述的一种或多种组合物中，包括
但不限于例如衍生自门多萨假单胞菌(Pseudomonas mendocina)的角质酶(参见WO 88/
09367)和/或豌豆根腐镰孢菌(Fusarium solani pisi)(参见WO 90/09446)。示例性商业脂
肪酶包括但不限于M1LIPASETM、LUMA FASTTM、和LIPOMAXTM(杜邦公司)；
和 ULTRA(诺维信公司)；和
TM
LIPASE P (天野药业有限公司(Amano Pharmaceutical Co.Ltd))。

[0185] 在一些实施例中，本文所述清洁组合物进一步包含与过氧化氢或其来源(例如过碳酸盐、过硼酸盐或过硫酸盐)组合使用的过氧化物酶。在一些可替代的实施例中，氧化酶与氧组合使用。两种类型的酶都用于“溶液漂白”，即当织物在洗涤液中一起洗涤时防止纺织染料从一种染色的织物转移到另一种织物上)，优选与增效剂一起使用(参见例如WO 94/
12621和WO 95/01426)。适合的过氧化物酶/氧化酶包括但不限于植物、细菌或真菌起源的
那些。在一些实施例中包括化学或遗传修饰的突变体。在一些实施例中，本公开的清洁组合物还包含按该组合物重量计从约0.00001％至约10％、约0.0001％至约10％、约0.001％至
约5％、约0.001％至约2％、或约0.005％至约0.5％的过氧化物酶和/或氧化酶。

[0186] 在一些实施例中，本文所述的清洁组合物还包含另外的酶，包括但不限于过水解酶(参见例如WO 05/056782)。一些实施例涉及一种或多种上述蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、甘露聚糖酶和/或纤维素酶的混合物。

[0187] 一些实施例涉及清洁组合物，例如在US 6,605,458中描述的那些。在一些实施例中，本文所述的清洁组合物为致密颗粒状织物清洁组合物，而在其他实施例中，该组合物是可用于洗涤有色织物的粒状织物清洁组合物。在另外的实施例中，组合物是通过洗涤能力
提供柔顺的颗粒状织物清洁组合物，并且在另外的实施例中，该组合物是重垢液体(HDL)织物清洁组合物。在其他实施例中，本文所述的清洁组合物是织物清洁组合物，例如在US 6,
610,642和6,376,450中描述的那些。在可替代的实施例中，本文所述的清洁组合物是合适
的硬表面清洁组合物。合适的硬表面清洁组合物包括例如US 6,610,642；6,376,450；和6,
376,450中描述的那些。在又另外的实施例中，本文所述的清洁组合物是餐具洗涤组合物。
在一些另外的实施例中，本文所述的清洁组合物是口腔护理组合物，例如在US 6,376,450
和6,605,458中描述的那些。在上述US 6,376,450；6,605,458；和6,610,642中包含的化合物和清洁辅助材料的制剂和描述可用于本发明的多肽。

[0188] 在仍另外的实施例中，本文所述的清洁组合物是织物软化组合物，例如像在GB 400898、GB 514276、EP 0011340、EP 0026528、EP 0242919、EP 0299575、EP 0313146、和US
5,019,292中描述的那些。

[0189] 可以将本文描述的清洁组合物配制成任何合适的形式并且通过由配方设计师选择的任何方法来制备，其非限制性实例描述于US 5,879,584、5,691,297、5,574,005、5,
569,645、5,565,422、5,516,448、5,489,392和5,486,303中。当希望低pH清洁组合物时，此类组合物的pH经由添加例如单乙醇胺或酸性物质例如HCl等物质来调节。

[0190] 在一些实施例中，本文所述的清洁组合物以单位剂量形式提供，包括片剂、胶囊、药袋、小袋、薄片和多室袋。在一些实施例中，单位剂量形式被设计成在多隔室小袋(或其他单位剂量形式)内提供对成分的控制释放。合适的单位剂量和控释形式是本领域已知的(参见例如EP 2100949、EP 2100947、WO 02/102955、WO 04/111178、WO 2013/165725、以及US
4,765,916和4,972,017)。在一些实施例中，单位剂量形式由用水溶性膜或水溶性小袋包裹的片剂提供。

[0191] 在一些实施例中，本文所述的清洁组合物进一步包含至少一种螯合剂。适合的螯合剂可以包括但不限于铜、铁和/或锰螯合剂及其混合物。在使用至少一种螯合剂的实施例中，本公开的清洁组合物包含以清洁组合物重量计从约0.1％至约15％或甚至从约3.0％至
约10％的螯合剂。

[0192] 在一些仍进一步的实施例中，本文所述的清洁组合物还包含至少一种沉积助剂。合适的沉积助剂包括但不限于聚乙二醇、聚丙二醇、聚羧酸盐、去污聚合物(例如聚对苯二甲酸)、粘土例如高岭土、蒙脱石、绿坡缕石、伊利石、膨润土、多水高岭土及其混合物。

[0193] 在一些实施例中，本文所述的清洁组合物进一步包含至少一种抗再沉积剂。在一些实施例中，抗再沉积剂是非离子表面活性剂，例如像描述于EP 2100949中。在一些自动餐具洗涤实施例中，非离子表面活性剂用作表面改性剂(特别是用于薄片)以避免成膜和沾上
污渍并且改善光泽。

[0194] 在一些实施例中，本文所述的清洁组合物还包括一种或多种染料转移抑制剂。合适的聚合物染料转移抑制剂包括但不限于聚乙烯吡咯烷酮聚合物、多胺N-氧化物聚合物、
N-乙烯基吡咯烷酮与N-乙烯基咪唑的共聚物、聚乙烯基噁唑烷酮以及聚乙烯基咪唑或其混
合物。在一些实施例中，本文所述的清洁组合物包含按所述清洁组合物的重量计从约
0.0001％至约10％、从约0.01％至约5％、或甚至从约0.1％至约3％的染料转移抑制剂。

[0195] 在一些实施例中，本文所述的清洁组合物进一步包含一种或多种硅酸盐。在一些这样的实施例中，可使用硅酸钠(例如，二硅酸钠、偏硅酸钠和结晶页硅酸盐)。在一些实施例中，本文所述的清洁组合物包含按所述组合物的重量计从约1％至约20％、或从约5％至
约15％的硅酸盐。

[0196] 在又另外的实施例中，本文所述的清洁组合物进一步包含一种或多种分散剂。适合的水溶性有机材料包括但不限于均聚合或共聚合的酸或其盐，其中聚羧酸包括至少两个
被不超过两个碳原子彼此分开的羧基自由基。

[0197] 在一些进一步的实施例中，用于清洁组合物中的酶通过任何适合的技术来稳定。在一些实施例中，本文使用的酶通过在成品组合物中钙和/或镁离子的水溶性来源的存在
来稳定。在一些实施例中，酶稳定剂包括寡糖、多糖和无机二价金属盐，包括碱土金属，例如钙盐。预想用于酶稳定化的各种技术将在本公开中使用。例如，在一些实施例中，本文使用的酶通过存在于成品组合物中的锌(II)、钙(II)和/或镁(II)离子的水溶性来源，以及其他金属离子(例如，钡(II)、钪(II)、铁(II)、锰(II)、铝(III)、锡(II)、钴(II)、铜(II)、镍(II)以及氧钒(IV))来稳定。氯化物和硫酸盐也可用于一些实施例中。适合的低聚糖和多糖(例
如糊精)的实例是本领域已知的(参见例如WO 07/145964)。在一些实施例中，可使用可逆的蛋白酶抑制剂，例如含硼化合物(例如硼酸盐、4-甲酰基苯基硼酸)和/或三肽醛来进一步改善稳定性。

[0198] 在一些实施例中，本文所述的清洁组合物还包括一种或多种漂白剂、漂白活化剂和/或漂白催化剂。在一些实施例中，本文所述的清洁组合物包含一种或多种无机和/或有
机漂白化合物。无机漂白剂可以包括但不限于过氧化氢合物盐(例如过硼酸盐、过碳酸盐、过磷酸盐、过硫酸盐和过硅酸盐)。在一些实施例中，无机过氧化氢合物盐是碱金属盐。在一些实施例中，包括的无机过氧化氢合物盐为结晶固体，没有另外的保护，但是在一些其他实施例中，该盐被包被。合适的盐包括例如在EP 2100949中描述的那些盐。漂白活化剂通常为有机过酸前体，其在60℃及以下的温度下在清洁过程中增强漂白作用。适合本文使用的漂
白活化剂包括在过水解条件下给出优选具有从约1至约10个碳原子(尤其是从约2至约4个
碳原子)的脂肪族过氧羧酸的化合物、和/或任选地取代的过氧苯甲酸。合适的漂白活化剂
包括例如在EP 2100949中描述的那些盐。漂白催化剂典型地包括例如锰三氮杂环壬烷，和
相关络合物，以及钴、铜、锰和铁络合物，以及US 4,246,612；5,227,084；4,810,410；和WO
99/06521和EP 2100949中描述的那些。

[0199] 在一些实施例中，本文所述的清洁组合物进一步包含一种或多种催化金属络合物。在一些实施例中，可使用含金属的漂白催化剂。在其他实施例中，金属漂白催化剂包含一种催化体系，该催化体系包括：具有限定的漂白催化活性的过渡金属阳离子(例如铜、铁、钛、钌、钨、钼或锰阳离子)，具有很少或不具有漂白催化活性的辅助金属阳离子(例如锌或铝阳离子)，以及对于催化性和辅助性金属阳离子具有限定的稳定性常数的螯合物，特别是乙二胺四乙酸、乙二胺四(亚甲基膦酸)及其水溶性盐(参见例如US 4,430,243)。在一些实
施例中，本文所述的清洁组合物通过锰化合物的方式来催化。此类化合物和使用水平是本
领域熟知的(参见例如US 5,576,282)。在另外的实施例中，钴漂白催化剂可用于本文所述
的清洁组合物中。各种钴漂白催化剂是本领域已知的(参见例如US 5,597,936和5,595,
967)，并且通过已知的程序容易地制备。

[0200] 在一些另外的实施例中，本文所述的清洁组合物进一步包含大多环刚性配体(macropolycyclic rigid ligand，MRL)的过渡金属络合物。作为实际问题而不当作限制，在一些实施例中，对本文提供的组合物和清洁方法进行调节以在水性洗涤介质中提供至少
一亿分之一数量级的活性MRL种类，并且在其他实施例中，在洗涤液中提供从约0.005ppm至约25ppm、从约0.05ppm至约10ppm、或从约0.1ppm至约5ppm的MRL。

[0201] 在一些实施例中，在瞬时过渡金属漂白催化剂中的过渡金属包括但不限于锰、铁和铬。在其他实施例中，MRL包括但不限于形成交联桥接的特殊超刚性配体(例如5,12-二乙基-1,5,8,12-四氮杂双环[6.6.2]十六烷)。适合的过渡金属MRL通过已知的程序容易地制
备(参见例如WO 2000/32601和US 6,225,464)。

[0202] 在一些实施例中，本文所述的清洁组合物进一步包含金属护理剂。金属护理剂用于预防和/或减少金属的锈蚀、腐蚀和/或氧化，该金属包括铝、不锈钢和非铁金属(例如银和铜)。适合的金属护理剂包括描述于EP 2100949、WO 94/26860和WO 94/26859中的那些)。
在一些实施例中，金属护理剂是锌盐。在一些进一步的实施例中，本文所述的清洁组合物包含以重量计从约0.1％至约5％的一种或多种金属护理剂。

[0203] 本文所述的清洁组合物可用于清洁表面、餐具或织物。典型地，使所述表面、餐具或织物的至少一部分与(i)本文所述的至少一种变体或重组多肽或其活性片段，或(ii)至少一种本文所述的清洁组合物接触，并且然后任选地洗涤和/或冲洗所述表面、餐具或织
物。出于本公开的目的，“洗涤”包括但不限于擦洗和机械搅拌。在一些实施例中，清洁组合物典型地在溶液中以约500ppm至约15,000ppm的浓度使用。当洗涤溶剂为水时，水温典型地在约5℃至约90℃的范围内，并且当涉及织物时，水与织物的质量比通常为从约1:1至约30:
1。

[0204] 一些实施例涉及一种清洁方法，该方法包括使有效量的(i)本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，或(ii)本文所述的清洁组合物与包含含甘露聚糖的污垢
或污渍的物品或表面接触，以水解污垢或污渍中含有的甘露聚糖。

[0205] 在一些实施例中，本文所述的一种或多种甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段用于预防、减少和/或除去选自纺织品和织物的一个或多个物品上的生物膜。

[0206] 本文所述的一种或多种甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段水解含有甘露糖单元的多糖(包括但不限于甘露聚糖、半乳甘露聚糖和葡甘露聚糖)链，使此类多肽特别
适用于进行涉及含有1,4-β-D-甘露糖苷键的多糖底物的甘露聚糖水解反应。一般而言，供体分子在本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段的存在下在适于进行甘露
聚糖水解反应的条件下孵育，接着任选地从反应中分离产物。可替代地，在食品的上下文
中，所述产物可以不经分离而成为该食品的组分。在某些实施例中，所述供体分子是包含甘露糖单元的多糖(包括但不限于甘露聚糖、葡甘露聚糖、半乳甘露聚糖和半乳糖葡甘露聚
糖)链。

[0207] 在一个实施例中，将本文所述的一种或多种甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段用于提取棕榈仁油的方法中。另一个实施例涉及从棕榈仁或棕榈仁粕中提取棕榈仁油
的方法，该方法包括提供棕榈仁和/或棕榈仁粕并用本文所述的一种或多种甘露聚糖酶变
体或重组多肽或其活性片段处理所述种子或)饲料饼(cake)。

[0208] 在一个实施例中，将包含本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段的组合物用于加工和/或制造动物饲料或人类食物。在又另外的实施例中，本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段可以是用于饲喂非人类动物的添加剂。在另一个实施例
中，本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段可用于人类食物，例如作为人类
食物的添加剂。

[0209] 若干种营养因子可以限制可用于制备动物饲料和人类食物的廉价植物材料的量。例如，含有甘露聚糖、半乳甘露聚糖、葡甘露聚糖和半乳糖葡甘露聚糖等低聚甘露聚糖的植物材料可降低动物消化和吸收营养化合物(如矿物质、维生素、糖和脂肪)的能力。这些负面影响特别是由于含甘露聚糖的聚合物的高粘度以及含甘露聚糖的聚合物吸收营养化合物
的能力导致的。可以通过在降解含甘露聚糖的聚合物的饲料中添加酶，如本文所述的内切-β-甘露聚糖酶来降低这些影响，从而可以使得通常在待包括在该饲料中的廉价植物材料中发现更高比例的含甘露聚糖的聚合物，这最终降低了所述饲料的成本。另外，本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段可将含甘露聚糖的聚合物分解成更简单的糖，其可
更容易地被同化以提供额外的能量。

[0210] 在另外的实施例中，将含有植物材料的动物饲料在本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段的存在下在适于分解含甘露聚糖的聚合物的条件下孵育。

[0211] 在另一个实施例中，面包改良剂组合物包含本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段，任选地与甘露聚糖或葡甘露聚糖或半乳甘露聚糖组合，并进一步任选地
与一种或多种其他酶组合。

[0212] 术语“非人类动物”包括所有非反刍动物和反刍动物。在具体的实施例中，非反刍动物选自下组，该组由以下组成(但不限于)：马和单胃动物，例如(但不限于)猪、家禽、生猪和鱼。在进一步的实施例中，猪可以是但不限于仔猪、生长猪和母猪；家禽可以是但不限于火鸡、鸭和鸡，包括但不限于肉仔鸡和蛋鸡；并且鱼可以是但不限于鲑鱼、鳟鱼、罗非鱼、鲶鱼和鲤鱼；以及甲壳类动物，包括但不限于虾和对虾。在另外的实施例中，反刍动物选自下组，该组由以下组成(但不限于)：牛、小牛、山羊、绵羊、长颈鹿、北美野牛、驼鹿、麋鹿、牦牛、水牛、鹿、骆驼、羊驼、美洲驼、羚羊、叉角羚和鹿牛羚。

[0213] 在一些实施例中，本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段用于预处理饲料而不是作为饲料添加剂。在一些实施例中，将本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多
肽或其活性片段添加到断奶仔猪、保育猪、仔猪、育肥猪、生长猪、商品猪、蛋鸡、肉仔鸡和火鸡的饲料中，或用于对前述饲料进行预处理。

[0214] 在另一个实施例中，将本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段添加到来自植物材料(例如棕榈仁、椰子、魔芋、槐豆胶、瓜耳胶、大豆、大麦、燕麦、亚麻、小麦、玉米、亚麻籽、柑橘果肉、棉籽、落花生、油菜籽、向日葵、豌豆和羽扇豆)的饲料中，或用于对前述饲料进行预处理。

[0215] 本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段是热稳定的，并且结果，本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段可用于生产颗粒饲料的工艺中，在该工
艺中在粒化步骤之前将热量施加至饲料混合物。在另一个实施例中，将本文所述的甘露聚
糖酶变体或重组多肽或其活性片段在粒化步骤之前或在粒化步骤之后添加至其他饲料成
分(即，至已经形成的饲料粒料)中。

[0216] 在又另一个实施例中，含有本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段的食品加工或饲料补充物组合物可以任选地进一步含有其他取代物，上述取代物选自着色
剂、芳香化合物、稳定剂、维生素、矿物质和其他饲料或食物增强酶。这尤其适用于所谓的预混合。

[0217] 在仍另外的实施例中，根据本发明的食品添加剂可以以适当量与其他食品组分(例如谷类或植物蛋白质)组合以形成加工食品。

[0218] 在一个实施例中，动物饲料组合物和/或动物饲料添加剂组合物和/或宠物食品包含本文所述的多肽。

[0219] 另一个实施例涉及用于制备动物饲料组合物和/或动物饲料添加剂组合物和/或宠物食品的方法，该方法包括将本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段与一
种或多种动物饲料成分和/或动物饲料添加剂成分和/或宠物食品成分混合。

[0220] 另外的实施例涉及本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段在制备动物饲料组合物和/或动物饲料添加剂组合物和/或宠物食品中的用途。短语“宠物食品”意指用于以下的食物：家庭动物，例如但不限于狗、猫、沙鼠、仓鼠、南美栗鼠、褐鼠、豚鼠；鸟类宠物，例如金丝雀、长尾小鹦鹉和鹦鹉；爬行动物宠物，例如海龟、蜥蜴和蛇；以及水生宠物，例如热带鱼和青蛙。

[0221] 术语“动物饲料组合物”、“饲料”和“喂养料”可互换地使用，并且包含选自下组的一种或多种饲料原料，该组包括：a)谷类，例如小粒谷物(例如小麦、大麦、黑麦、燕麦及其组合)和/或大粒谷物，例如玉米或高粱；b)来自谷类的副产品，例如玉米谷蛋白粉、干酒糟谷物可溶物(Distillers DriedGrain Solubles)(DDGS)(特别是基于玉米的干酒糟谷物可溶物(cDDGS))、小麦麸、粗小麦粉、次麦粉、米糠、稻壳、燕麦壳、棕榈仁和柑橘洛；c)获自以下来源的蛋白质：例如大豆、向日葵、花生、羽扇豆、豌豆、蚕豆、棉花、低芥酸菜籽、鱼粉、干血浆蛋白质、肉和骨粉、马铃薯蛋白、乳清、干椰肉、和芝麻；d)获自植物和动物来源的油和脂肪；以及e)矿物质和维生素。

[0222] 在一个方面，食物组合物或添加剂可以是液体或固体。

[0223] 在本发明的一个方面，食物组合物是饮料，包括但不限于发酵饮料，例如啤酒和葡萄酒。

[0224] 在本发明的上下文中，术语“发酵饮料”意在包括任何这样的饮料，该饮料通过包括发酵工艺(例如微生物发酵，如细菌和/或酵母发酵)的方法制得。

[0225] 在本发明的一个方面，发酵饮料为啤酒。术语“啤酒”意指包括通过发酵/酿造含淀粉植物材料而产生的任何发酵麦芽汁。通常，啤酒由麦芽或作为含淀粉植物材料的辅料、或麦芽与辅料的任何组合产生。如本文所使用的，术语“麦芽”被理解为任何发芽的谷类谷粒，如发芽的大麦或小麦。

[0226] 如本文所使用的，术语“辅料”是指不是麦芽，例如大麦的或小麦的麦芽的任何包含淀粉和/或糖的植物材料。辅料的实例包括例如普通玉米糁、精制玉米糁、制啤酒用研磨酵母、水稻、高粱、精制玉米淀粉、大麦、大麦淀粉、去壳大麦、小麦、小麦淀粉、烘培谷类、谷类片、裸麦、燕麦、马铃薯、树薯、木薯和糖浆，例如玉米糖浆、甘蔗糖浆、转化糖浆、大麦和/或小麦糖浆等。

[0227] 如本文所使用的，术语“醪液”是指任何包含淀粉和/或糖的植物材料如谷粉(例如包括压碎的大麦麦芽、压碎的大麦)和/或其他辅料或其组合的含水浆液，随后与水混合以分离成麦芽汁和废糟。

[0228] 如本文所使用的，术语“麦芽汁”是指在淀粉糖化期间，对谷粉进行提取后，未发酵的液体流出物(run-off)。

[0229] 在另一方面，本发明涉及一种制备发酵饮料(例如啤酒)的方法，该方法包括将本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段与麦芽和/或辅料混合。

[0230] 啤酒的实例包括：全麦芽啤酒、根据“纯净法(Reinheitsgebot)”酿造的啤酒、爱尔啤酒、IPA、陈贮啤酒、苦啤酒、发泡酒(次级啤酒)、三级啤酒、干啤、薄啤酒、淡啤酒、低醇啤酒、低热量啤酒、波特啤酒、黑啤酒、陶特啤酒、麦芽酒、无醇啤酒、无醇麦芽酒等，以及可替代的谷类和麦芽饮料，例如果味麦芽饮料，如柑橘味，如柠檬、橙、酸橙或浆果味麦芽饮料，酒味麦芽饮料，例如伏特加、朗姆酒或龙舌兰酒味麦芽酒，或咖啡味麦芽饮料，例如咖啡味麦芽酒等。

[0231] 本发明的一个方面涉及本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段在生产发酵饮料(例如啤酒)中的用途。

[0232] 另一方面涉及提供发酵饮料的方法，该方法包括使醪液和/或麦芽汁与本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段接触的步骤。

[0233] 另一方面涉及一种提供发酵饮料的方法，该方法包括以下步骤：(a)制备醪液、(b)将该醪液过滤以获得麦芽汁，以及(c)将该麦芽汁发酵以获得发酵饮料(如啤酒)，其中将本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段添加至：(i)步骤(a)的醪液、和/或(ii)步骤(b)的麦芽汁、和/或(iii)步骤(c)的麦芽汁中。

[0234] 根据又另一个方面，通过如下方法生产或提供发酵饮料(如啤酒)，该方法包括以下一个或多个步骤：(1)将醪液和/或麦芽汁与本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其
活性片段接触；和/或(2)(a)制备醪液、(b)将该醪液过滤以获得麦芽汁，以及(c)将该麦芽汁发酵以获得发酵饮料(如啤酒)，其中将本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性
片段添加至：(i)步骤(a)中的醪液、和/或(ii)步骤(b)中的麦芽汁、和/或(iii)步骤(c)中的麦芽汁中。

[0235] 一般而言，将咖啡提取物在本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段的存在下在适于水解存在于液体咖啡提取物中的半乳甘露聚糖的条件下孵育。

[0236] 在另一方面，本发明涉及制备烘焙产品的方法，该方法包括将本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段添加到面团中，接着烘焙该面团。烘焙产品的实例对于
本领域技术人员来说是熟知的，并且包括面包、面包卷、酥皮糕点、甜发酵面团、小圆面包、蛋糕、咸饼干、曲奇、饼干、华夫饼、薄饼、玉米饼、早餐谷物、挤出产品等。

[0237] 本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段可作为面包改良剂组合物的一部分添加到面团中。面包改良剂是含有多种成分的组合物，其改善了面团性质和烘焙
产品(例如，面包和蛋糕)的质量。由于其有益效果，例如面团稳定性和面包质地和体积，面包改良剂通常被添加到工业烘焙工艺中。面包改良剂通常含有脂肪和油以及添加剂(如乳
化剂、酶、抗氧化剂、氧化剂、稳定剂和还原剂)。除了本发明的任何多肽之外，也可以存在于面包改良剂中或者可以与本发明的任何多肽结合使用的其他酶包括淀粉酶、半纤维素酶、
淀粉分解复合物、脂肪酶、蛋白酶、木聚糖酶、果胶酶、支链淀粉酶、非淀粉多糖降解酶和氧化还原酶(如葡萄糖氧化酶、脂加氧酶或抗坏血酸氧化酶)。

[0238] 在一个实施例中，本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段可作为面包改良剂组合物的一部分添加至面团，该组合物还包含葡甘露聚糖和/或半乳甘露聚糖来
源，例如魔芋胶、瓜耳胶、槐豆胶(长角豆(Ceratonia siliqua))、椰子粕、象牙坚果甘露聚糖(象牙椰子(Phytelephas macrocarpa))、海藻甘露聚糖提取物、椰子粕和啤酒酵母的细
胞壁(可以是干燥的，或以啤酒酵母提取物的形式使用)。用于本发明中的其他可接受的甘
露聚糖衍生物包括无支链的β-1,4-连接的甘露聚糖均聚物和甘露低聚糖(甘露二糖、甘露
三糖、甘露四糖和甘露五糖)。本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段可以进一步单独使用或与葡甘露聚糖和/或半乳甘露聚糖和/或半乳糖葡甘露聚糖组合使用以改
善面团耐受性；面团柔韧性和/或面团粘性；和/或面包心结构，以及延缓面包的老化。另一方面，甘露聚糖酶水解产物充当可溶性益生元，例如甘露低聚糖(MOS)，其在结肠中以有利的群体密度被发现时促进通常与良好健康相关的乳酸菌的生长。

[0239] 在一方面，添加了本发明的任何多肽的面团，除了或代替纯小麦粉(即，不是纯白面团)，还包含麸皮或燕麦、稻米、小米、玉米或豆类粉。

[0240] 在另一个实施例中，可将本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段添加至已添加了葡甘露聚糖和/或半乳甘露聚糖的奶或任何其他乳制品中。以上在烘烤食品
方面列出了典型的葡甘露聚糖和/或半乳甘露聚糖来源，并且包括瓜耳胶或魔芋胶。本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段与葡甘露聚糖和/或半乳甘露聚糖的组合释
放甘露聚糖酶水解产物(甘露低聚糖)，当在大肠或结肠中以有利的群体密度发现时，所述
水解产物通过促进益生菌(特别是双歧杆菌(Bifidobacteria)和乳杆菌属
(Lactobacillus)乳酸菌)的选择性生长和增殖(通常与良好健康相关)而起到可溶性益生
元的作用。

[0241] 另一方面涉及制备奶或乳制品的方法，该方法包括添加本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段和任何葡甘露聚糖或半乳甘露聚糖或半乳糖葡甘露聚糖。

[0242] 另一方面，将本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段在添加至基于乳品的食品中之前或之后与任何葡甘露聚糖或半乳甘露聚糖组合使用以生产包含益生元
甘露聚糖水解产物的基于乳品的食品。在另一方面，如此产生的甘露低聚糖乳制品能够增
加有益的人类肠内微生物群落的群体，并且在又另外的方面，基于乳品的食品可以包含本
文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段以及任何来源的葡甘露聚糖和/或半乳
甘露聚糖和/或半乳糖葡甘露聚糖，和足以接种已知在人类大肠中有益的至少一种细菌菌
株(例如双歧杆菌或乳杆菌)的剂量。一方面，基于乳品的食品是酸奶或奶饮料。

[0243] 本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段可进一步用于纸浆(例如化学纸浆、半化学纸浆、牛皮纸浆、机械纸浆和通过亚硫酸盐法制备的纸浆)的酶辅助漂白。一般来说，将纸浆与本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段在适合于漂白纸浆
的条件下一起孵育。

[0244] 在一些实施例中，纸浆是不含氯的纸浆，该纸浆经氧、臭氧、过氧化氢或过氧酸进行漂白。在一些实施例中，本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段用于展示出低木质素含量的纸浆的酶辅助漂白，该纸浆是通过经改良的制浆方法或连续制浆方法生
产的。在一些其他实施例中，本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段单独地
应用或优选地与木聚糖酶和/或内切葡聚糖酶和/或α-半乳糖苷酶和/或纤维二糖水解酶组
合应用。

[0245] 半乳甘露聚糖(如瓜耳胶和槐豆胶)被广泛用作例如食品(例如冰淇淋)中的增稠剂和用于纺织品印染(例如T恤上的印花)的印花色浆。因此，本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段也可用于降低含甘露聚糖底物的厚度或粘度。在一些实施例中，本
文所述的一种或多种甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段用于水解食品(例如冰淇
淋)制造废物流中的半乳甘露聚糖。在某些实施例中，本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段用于降低加工设备中残余食品的粘度，从而促进加工后的清洁。在某些其
他实施例中，本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段用于降低印花色浆的粘
度，从而有助于在纺织品印染后清除多余的印花色浆。一般而言，将含甘露聚糖的底物与本文所述的甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段在适合于降低含甘露聚糖的底物的粘
度的条件下一起孵育。

[0246] 在又另外的实施例中，本文所述的一种或多种甘露聚糖酶变体或重组多肽或其活性片段可用于石油和天然气工业，用于，例如控制钻井液的粘度；提高用于水力压裂中的流体产生从钻孔延伸到岩石中的地下裂缝的速率；清洁钻孔滤饼；及其组合。

[0247] 本发明组合物和方法的其他方面和实施例将从前面的描述和以下实例中显而易见。在不脱离本发明的精神和范围的情况下，可以在实践本发明时采用超出本文所描述的
实施例的各种替代实施例。因此，权利要求书，而不是在此描述的特定实施例，限定了本发明的范围，并且因此在权利要求范围内的这些方法和结构及其等同物被涵盖。

[0248] 实例1

[0249] 类芽孢杆菌属物种甘露聚糖酶PspMan138的克隆和表达

[0250] 使用常规分子生物学技术进行产生类芽孢杆菌属物种PspMan4甘露聚糖酶变体PspMan138的DNA操作(参见，例如Sambrook等人，Molecular Cloning[分子克隆]：Cold
Spring Harbor Laboratory Press[冷泉港实验室出版社])。产生了将多个氨基酸修饰引
入野生型类芽孢杆菌属物种PspMan4甘露聚糖酶序列中的人工DNA序列，其中该野生型甘露
聚糖酶更详细地描述于2015年7月10日提交的PCT/US 15/40057(其随后作为WO 2016/
007929公开)中。

[0251] PspMan138基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示(包括编码预测的天然信号肽的序列)。

[0252] 合成包含枯草芽孢杆菌aprE启动子(SEQ ID NO:2)和枯草芽孢杆菌aprE信号肽(SEQ ID NO:3)的DNA盒。使用本领域已知的技术，使用Gibson组件组装PCR片段以制备最终表达盒。由SEQ ID NO:3编码的来自枯草芽孢杆菌的aprE信号肽的氨基酸序列如SEQ ID
NO:4所示。

[0253] 将含有PspMan138基因和上述其他元件的表达盒克隆到pHYT复制穿梭载体中并转化到合适的枯草芽孢杆菌菌株中。通过使用BstEII和EcoRI位点(SEQ ID NO:5)在四环素抗
性基因之后添加终止子，从pHY300PLK(Takara)获得了pHYT载体。还使用克隆到BamHI和
HindIII位点的接头(SEQ ID NO:6)除去pHY300PLK中的HindIII位点。

[0254] 使用表1中列出的引物(SEQ ID NO:8-11)通过PCR扩增包含枯草芽孢杆菌表达盒(SEQ ID NO:7)和PspMan138基因(SEQ ID NO:1)的DNA片段。

[0255] 枯草芽孢杆菌表达盒的核酸序列如SEQ ID NO:7所示：

[0256]

[0257] 使用本领域已知的技术，使用Gibson组件(SGI DNA Cat#GA1100-10)组装PCR片段以制备最终表达盒。将枯草芽孢杆菌细胞转化至补充有5μg/ml氯霉素的琼脂固化的LB上并在其上生长。

[0258] 由PspMan138基因编码的PspMan138前体蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:12所示。成熟酶PspMan138(298个氨基酸)的氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示。

[0259] 实例2

[0260] 用于表征甘露聚糖酶活性和稳定性的方法

[0261] 为了生成用于生物化学表征的PspMan4(成熟蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO:14所示)和PspMan138变体(SEQ ID NO:13)酶样品，转化的枯草芽孢杆菌细胞的选择性生长
在96孔微量滴定板(MTP)中在37℃在每孔的培养基中进行68小时(以MOPS缓冲液为基础的
富含半定义培养基，以尿素为主要氮源，葡萄糖为主要碳源，并补充1％大豆胨以增强细胞生长)。通过以3600rpm离心45分钟来收获培养物，并使用Millipore 真空系统通过
滤板(EMD密理博公司(EMD Millipore)，比勒利卡(Billerica)，马萨诸塞
州，美国)过滤。将过滤的培养物上清液用于下述测定。

[0262] 甘露聚糖酶活性测定

[0263] 通过测量溶液中槐豆胶(LBG)半乳甘露聚糖的水解来测试PspMan4及其PspMan138变体的甘露聚糖酶活性。使用的底物是在50mMTris-HCl缓冲液(pH 7.5，底物稀释缓冲液)
中的0.28％(w/v)LBG溶液。为了制备工作底物溶液，在搅拌下将LBG粉末(产品编号G0753，西格玛奥德里奇公司(Sigma-Aldrich)，圣路易斯，密苏里州)溶解于50mM Tris-HCl缓冲液(pH 7.5)的加热溶液中。冷却至室温后，将溶液离心并将澄清的上清液用作底物溶液。将酶样品稀释到酶稀释缓冲液(含有0.005％的50mM MOPS缓冲液，pH 7.2)中，
并将稀释酶溶液的等分试样添加到含有LBG底物溶液的平底澄清聚苯乙烯MTP中。将板密封
并在40℃孵育(伴随搅拌，900rpm，10分钟)(例如，在iEMS培养箱/振荡器中，赛默飞世尔科技公司(Thermo Fischer Scientific)，沃尔瑟姆(Waltham)，MA)。孵育后，使用BCA 试剂测定法(目录号23225，伊利诺伊州罗克福德市赛默科技皮尔斯公司(Thermo Scientific
Pierce,Rockford,IL))定量释放的还原糖。具体而言，将来自LBG测定板的每个孔的等分试样添加到含有BCA工作试剂溶液(根据制造商的说明书制备)的PCR板中；样品与工作试剂的
比例为1:9(v/v)。将板密封并在95℃在热循环仪(例如Tetrad2 Peltier热循环仪，伯乐实
验室(Bio-Rad Laboratories)，赫拉克勒斯，加利福尼亚州(Hercules,CA))中孵育2-3min。
将板冷却至30℃后，将反应溶液转移至新鲜的平底澄清聚苯乙烯MTP(例如Costar 9017)，
并在平板读数器分光光度计(例如SpectraMax Plus 384，分子仪器公司(Molecular
Devices)，森尼韦尔，加利福尼亚州)中在562nm处测量吸光度。将不含甘露聚糖酶的样品
(空白)的吸光度值从含甘露聚糖酶的样品的吸光度值中减去。将所得吸光度作为甘露聚糖
酶活性的量度。

[0264] 稳定性测定

[0265] 通过在升高的温度(56℃)孵育5min后测量样品的残余活性，在10％(v/v)可商购液体衣物洗涤剂(原味洗衣液(Original scent)，宝洁公司，于2014年在当地超市
购买，并使用以下实例4中描述的方案热灭活)的水溶液中在胁迫条件下测试PspMan4及其
PspMan138变体的稳定性。

[0266] 制备12.5％(v/v)热灭活洗涤剂的水溶液，并将来自过滤的培养上清液的酶样品与适当体积的这种洗涤剂溶液混合以达到10％(v/v)的最终洗涤剂浓度。为了测量初始(非
胁迫)活性，立即在50mM MOPS缓冲液，pH 7.2，0.005％中稀释该混合物的
等分试样，并使用上文描述的“甘露聚糖酶活性测定”来测定在LBG上的活性。为了测量胁迫活性，将与洗涤剂溶液混合的酶样品在密封PCR板中于56℃在热循环仪(Tetrad2Peltier热
循环仪，伯乐实验室(Bio-Rad Laboratories)，赫拉克勒斯，加利福尼亚州)中孵育5min，然后在50mM MOPS缓冲液，pH 7.2，0.005％中稀释，并如以上“甘露聚糖酶活
性测定”中所述测定其活性。

[0267] 一旦如上所述通过LBG底物水解来测量胁迫和非胁迫活性值，则通过取胁迫与非胁迫活性的比率并乘以100来计算％残余活性。结果总结在表2中，表明在液体衣物
洗涤剂中，PspMan138在该温度胁迫测试之后保留了酶活性。

[0268]

[0269] 实例3

[0270] 甘露聚糖酶的清洁性能

[0271] 通过在pH 5.3的MES缓冲液中沉淀硫酸铵从澄清的芽孢杆菌培养物上清液中分离甘露聚糖酶。通过疏水性交换层析实现纯化，然后透析到pH为6.0的50mM MES缓冲液中。然后添加丙二醇至终浓度为40％，并将样品冷藏保存直到进一步表征。

[0272] 使用Terg-o-tometer在衣物洗涤剂应用中测试PspMan138和商业甘露聚糖酶(4L，丹麦诺维信公司(Novozymes AS，Denmark))的洗涤性能。在16℃进
行性能评估。污垢荷载由填充有1L去离子水的terg-o-tometer烧杯中的两个CFT C-S-73槐
豆胶(LBG)样本(荷兰符拉尔丁根的测试材料BV中心)组成。将水硬度调节至100ppm(3:1Ca:
Mg)，并使用5mM HEPES将pH调节至8.2。将热灭活的液体衣物洗涤剂(原味，2014年
在当地超市购买)以1g/L添加到烧杯中。在下面实例4中描述热灭活方案。将各种甘露聚糖
酶以不同的剂量添加到烧杯中，洗涤时间为15分钟。洗涤处理后，将样本旋转干燥，然后风干。

[0273] 使用比色计(柯尼卡美能达(Konica Minolta)色度计CR-410，50mm孔径)在处理之前和之后测量每个样本。将L、a、b值的差值转换为由CIE-LAB色彩空间定义的总色差(dE)。
这些值用于确定这些样本的清洁水平，并且结果表示为污渍去除百分比(％SRI)。图1显示
了PspMan138和 4L清洁CS-73样本的结果。在此清洁测定中，PspMan138
和 4L在LBG污渍上表现出可比较的去污效果。

[0274] 实例4

[0275] 商业液体衣物洗涤剂中甘露聚糖酶半衰期的测定

[0276] 商业洗涤剂灭活

[0277] 下文所述的表3中列出的液体衣物洗涤剂在当地超市购买。为了消除背景酶活性，通过在95℃加热洗涤剂3-4小时使这些商业洗涤剂中存在的酶失活。加热后，通过下文所述的蛋白酶和淀粉酶活性测定法测定洗涤剂的酶活性。加热洗涤剂4小时后，未检测到蛋白酶和淀粉酶活性。此外，通过下文“残余甘露聚糖酶活性测定”下所述的LBG底物上的活性测定显示了热灭活洗涤剂中不具有甘露聚糖酶活性。

[0278]

[0279] 商业液体衣物洗涤剂中的蛋白酶和淀粉酶活性测定

[0280] 通过首先将洗涤剂1:5稀释到pH 7.2的50mM MOPS缓冲液中来测量酶活性。

[0281] 蛋白酶测定：使用在pH 8.6缓冲液中和在25℃的琥珀酰-L-丙氨酰-L-丙氨酰-L-脯氨酰-L-苯基-对硝基苯胺底物(suc-AAPF-pNA，西格玛公司：S-7388)测量蛋白酶活性。使用的试剂溶液是：含有0.005％的100mM Tris/HCl(pH 8.6)(Tris稀释缓冲
液)；含有10mM CaCl2和0.005％的100mM Tris缓冲液(pH 8.6)(Tris稀释
缓冲液)；和DMSO(suc-AAPF-pNA储备溶液)(西格玛公司：S-7388)中的160mM suc-AAPF-
pNA。通过向含有150μl Tris稀释缓冲液的每个孔中添加10ul稀释的洗涤剂，接着立即在25℃添加100ul的2mg/ml suc-AAPF-pNA工作溶液来进行测定。视觉评估对未加热的商业衣物
洗涤剂的反应，其中颜色产生指示酶活性。

[0282] 淀粉酶测定：使用Ceralpha HR试剂盒(Megazyme，威克洛，爱尔兰)进行Ceralphaα-淀粉酶测定。使用的底物是限定的寡糖“非还原端封闭的对硝基苯基麦芽七糖苷(BP-
NPG7)和过量水平的α-葡糖苷酶(其对天然底物没有活性，这是由于存在‘阻断基’)”的混合物。为了引发反应，将稀释的商业洗涤剂在25℃添加到在50mM MOPS缓冲液(pH 7.2)中的底物中。视觉评估对未加热的商业衣物洗涤剂的反应，其中颜色产生指示酶活性。

[0283] 将PspMan138和商业甘露聚糖酶( 4L，丹麦诺维信公司)样品添加到表3中列出的热灭活洗涤剂中，达到终浓度为0.3％(w/w)。除了甘露聚糖酶之外，将蛋白酶BPN'-Y217L枯草杆菌蛋白酶以3.0％(w/w)添加到洗涤剂中。将含有甘露聚糖酶和蛋白
酶样品的洗涤剂置于37℃。在不同时间点(0至28天)取出等分试样并冷冻。如下文所述测定所有样品的残余甘露聚糖酶活性。

[0284] 残余甘露聚糖酶活性测定

[0285] 通过定量释放的还原糖来测量甘露聚糖酶的β-1,4-甘露聚糖酶活性。使用的底物是0.28％LBG半乳甘露聚糖(西格玛公司G0753)。使用与还原糖反应的二硝基水杨酸(DNS)
定量释放的糖；其在540nm处的吸光度与酶活性成比例。

[0286] 通过在40℃在水浴中预平衡0.4mL等分式样的工作底物溶液(如实例2所述制备的在pH 7.5的50mM Tris-HCl缓冲液中的2.8g/L LBG)10分钟来进行测定。通过向预平衡的底
物溶液中添加0.1mL 1.9ppm甘露聚糖酶溶液来启动反应，混合，并在40℃孵育15min。通过添加0.6mL 3,5-二硝基水杨酸试剂(43.8mM 3,5-二硝基水杨酸，400mM氢氧化钠，1.06M酒
石酸钾钠四水合物)终止反应。将反应管置于100℃水浴中15min，然后在冰浴中冷却5min，并进一步在室温下平衡10min。在540nm处测量吸光度以确定LBG半乳甘露聚糖上的相对酶
活性。

[0287] 然后使用单相指数衰减模型拟合每种甘露聚糖酶的残余甘露聚糖酶活性数据。从这些数据确定半衰期(以天计)并列于表4中。半衰期是观察到50％的原始甘露聚糖酶活性
的时间。在蛋白酶存在下，可商购液体衣物洗涤剂中PspMan138的半衰期比
4L(表4中称为“基准”)有所改善。

[0288]

[0289] 实例5

[0290] 同源甘露聚糖酶的鉴定

[0291] 针对NCBI非冗余蛋白质数据库(NCBI non-redundant protein database)，使用PspMan138(SEQ ID NO:13)的成熟氨基酸序列，通过BLAST搜索(Altschul等人，Nucleic
Acids Res[核酸研究]，25:3389-402,1997)鉴定了相关蛋白质，并在表5A中示出了子集。针对基因组查询专利(Genome Quest Patent)数据库，使用PspMan138(SEQ ID NO:13)的成熟
蛋白质氨基酸序列作为查询序列，将搜索参数设置为默认值进行类似的搜索，并且在表5B
中示出了子集。

[0292] 将两个搜索集的百分比同一性(PID)定义为相同残基的数量除以成对比对中经比对残基的数量。标记为“序列长度”的栏是指与列出的登记号相关的蛋白质序列的长度(以氨基酸计)，而标记为“比对长度”的栏是指用于PID计算的比对的蛋白质序列的长度(以氨基酸计)。

[0293]

[0294]

[0295]

[0296]

[0297]

[0298]

[0299] 同源序列的比对

[0300] NDL进化枝甘露聚糖酶(包括PspMan138(SEQ ID NO:13)和亲本PspMan4(SEQ ID NO:14))的成熟蛋白质氨基酸序列与其他甘露聚糖酶(包括BciMan1_BAA25878.1(SEQ ID
NO:40)、芽孢杆菌属物种_BAD99527.1(SEQ ID NO:43)、B_nealsonii_AGU71466.1(SEQ ID NO:42)、芽孢杆菌属物种_WO 2015022428-0015(SEQ ID NO:44)、迟缓芽孢杆菌
(B.lentus)_WO 2014100018-0002(SEQ ID NO:41)、US 6566114-002(SEQ ID NO:160)以及
PamMan2、PamMan3、PtuMan2、PpaMan2、和PspMan9的成熟形式，其在2015年7月10日提交并随后作为WO 2016/007929公开的国际专利申请号PCT/US 15/40057中更全面地描述)的成熟
蛋白氨基酸序列的比对示于图2中。使用来自Geneious软件(生物物质有限公司
(Biomatters Ltd.))(Robert C.Edgar.，MUSCLE:Multi sequence alignment with high
accuracy and high throughput[MUSCLE：具有高精确度和高通量的多序列比对]，Nucleic Acids Res.[核酸研究](2004)32(5):1792-1797)的MUSCLE程序使用默认参数来比对这些
序列。使用Geneious树构建程序构建了图2中各种甘露聚糖酶的成熟形式的氨基酸序列的
系统发生树，并且描绘于图3中。

[0301] 实例6

[0302] PspMan138甘露聚糖酶的独特特征

[0303] 使用CLUSTALW软件(Thompson等人，Nucleic Acids Research[核酸研究]22:4673-4680，1994)用默认参数比对PspMan138(SEQ ID NO:13)和亲本PspMan4(SEQ ID NO:
14)的氨基酸序列并示于图2中。比对显示PspMan138和PspMan4共享在残基Trp31和Ile40之
间延伸的基序，其中所述多肽的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14中列出的氨基酸序列相对
应来编号。NDL甘露聚糖酶共享创建进化枝(后来称为NDL-进化枝)的特征，其中术语NDL衍
生自N-末端附近的保守残基NDL(Asn34-Asp35-Leu36)。该基序可以描述为WXaKNDLXXAI
(SEQ ID NO:15)，其中Xa是F或Y并且X是任何氨基酸(“基序1”)。该基序在2015年7月10日提交的国际专利申请号PCT/US 15/40057(其随后作为WO 2016/007929公开)中更充分地描
述。

[0304] NDL-进化枝的成员也共享具有如下缺失的主要特征的保守基序(以下称为“缺失基序”)，所述缺失不存在于芽孢杆菌属物种JAMB-602_BAD99527.1(Akita等人(2004)Acta Cryst.[晶体学报]D60:1490-1492)和其他参比甘露聚糖酶序列(例如B_nealsonii_
AGU71466.1和Bciman1_环状芽孢杆菌_BAA25878.1)中。缺失基序出现在残基Leu263-
Asp264(LD)和Leu273-Thr274(LT)之间，其中所述多肽的氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14
中列出的氨基酸序列相对应来编号，并包括序列LDXXXGPXGXLT(SEQ ID NO:16)，其中X是任何氨基酸(“缺失基序1”)；LDX1V/AT/AGPX2GX3LT(SEQ ID NO:17)，其中X1是L或M，X2是N、A或S并且X3是S、T或N(“缺失基序2”)；或LDM/LATGPN/AGS/TLT(SEQ ID NO:18)(“缺失基序3”)。
该缺失基序在2015年7月10日提交的国际专利申请号PCT/US 15/40057(其随后作为WO
2016/007929公开)中更充分地描述。

[0305] 实例7

[0306] 另外的类芽孢杆菌属物种PspMan4变体的克隆和表达

[0307] 如实例1中所述用表1中列出的引物进行DNA操作来产生另外的类芽孢杆菌属物种PspMan4变体。表6中显示了相对于亲本PspMan4(SEQ ID NO:14)用序列取代产生的PspMan4
变体列表。以下成熟PspMan4变体的氨基酸序列列于SEQ ID NO:46-91、141-159和161中：
PspMan115-122、PspMan124-130、PspMan132-145、PspMan148、PspMan150-158、PspMan6153、PspMan6428、PspMan6435、PspMan6574、PspMan6668、PspMan6670、PspMan6722、PspMan7154、PspMan_HM48-64、PspMan_HM66-67、和PspMan_HM71。

[0308]

[0309]

[0310]

[0311]

[0312]

[0313]

[0314]

[0315] PspMan4变体的天然信号肽的核酸序列如SEQ ID NO:92所示。编码以下成熟PspMan4变体的基因的核苷酸序列列于SEQ ID NO:93-139中：PspMan115-122、PspMan124-
130、PspMan132-145、PspMan148、PspMan150-158、PspMan6153、PspMan6428、PspMan6435、PspMan6574、PspMan6668、PspMan6670、PspMan6722、和PspMan7154。PspMan4变体的信号肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:140所示。

[0316] 实例8

[0317] 使用微样本测定的PspMan4变体的清洁性能

[0318] 为了产生用于生物化学表征的PspMan4变体酶样品，转化的枯草芽孢杆菌细胞的选择性生长在96孔MTP中在37℃在每孔的培养基中进行68小时(以MOPS缓冲液为基础的富
含半定义培养基，以尿素为主要氮源，葡萄糖为主要碳源，并补充1％大豆胨以增强细胞生长)。通过以3600rpm离心45分钟来收获培养物，并使用Millipore真空系统通过
滤板(EMD密理博公司(EMD Millipore)，比勒利卡(Billerica)，马萨诸塞
州，美国)过滤。将过滤的培养物上清液用于下述测定。

[0319] 测试PspMan4变体在槐豆胶(LBG)微样本(CFT C-S-73，荷兰符拉尔丁根测试材料中心)上的清洁性能，相对于如下实例所示的亲本性能。

[0320] 使用开发用于测量从技术污渍中去除半乳甘露聚糖的高通量测定来测量清洁性能。该测定法测量来自含有LBG的技术污渍的LBG的释放。将使用可商购的试剂(目录号
23225，伊利诺伊州罗克福德市赛默科技皮尔斯公司)的BCA反应用于测量在酶存在下溶液
中寡糖的还原端，与空白对照相比较。该测量与酶的清洁性能相关。当甘露聚糖酶水解半乳甘露聚糖时，可假定从棉样本中释放出具有还原末端的不同长度的寡糖。BCA试剂中的二喹啉甲酸然后使得可以高灵敏度地比色检测通过还原Cu2+形成的Cu1+。

[0321] 将两个5.5cm直径的LBG微样本(CFT C-S-73)置于平底非粘结96孔测定板(例如Corning 3641)的每个孔中。将酶稀释到含有0.005％的50mM MOPS缓冲液
(pH 7.2)中。将微样本测定缓冲液(25mM HEPES，pH 8，2mM CaCl2，0.005％
)和等分式样的稀释酶添加到96孔微样本测定板的每个孔中，合并体积为100μL。将板密封并在25℃孵育(伴随搅拌，1150rpm，20分钟)(例如，在iEMS培养箱/振荡器中，赛默飞世尔科技公司(Thermo Fischer Scientific)，沃尔瑟姆(Waltham)，MA)。孵育后，如实例2的“甘露聚糖酶活性测定”部分中所述，使用BCA试剂测定法定量释放的还原糖。将所得吸光度作为清洁性能的量度。通过将变体的清洁性能除以相同蛋白质浓度下亲本的清洁性能来计算清
洁性能PI值。使用从亲本酶的标准曲线的测量值的Langmuir拟合中提取的参数计算亲本酶
在相关蛋白质浓度下的清洁性能的理论值。表7列出了在上述微样本测定中相对于PspMan4
亲本具有改善的清洁性能的PspMan4变体。

[0322]

[0323]

[0324] 实例9

[0325] PspMan4变体在缓冲溶液中的稳定性

[0326] 通过在升高温度下孵育5min后测量样品的残余活性，在胁迫条件下，在50mM MOPS缓冲液，pH 7.2，0.005％中，在表8所示的温度下，测试PspMan4变体的稳定
性。表8中列出了用于缓冲液中蛋白质稳定性测定的条件。

[0327]

[0328] 为了测量最初(非胁迫)活性，使用实例2中“甘露聚糖酶活性测定”部分下所述的测定，将酶样品在50mM MOPS缓冲液，pH 7.2，0.005％中稀释，并立即测定
其在LBG上的活性。为了测量胁迫活性，将在50mM MOPS缓冲液，pH 7.2，0.005％
中的稀释酶样品在密封的PCR板中在升高的温度(如表8所示)、在热循环仪
(Tetrad2Peltier热循环仪，伯乐实验室(Bio-Rad Laboratories)，赫拉克勒斯，加利福尼亚州)中孵育5min，然后如实例2中“甘露聚糖酶活性测定”中所述测定其活性。

[0329] 残余活性计算

[0330] 一旦如上所述通过LBG底物水解来测量胁迫和非胁迫活性值，则通过取胁迫与非胁迫活性的比率并乘以100来计算％残余活性。表9列出了在表8所述条件下在稳定性测定
中相比PspMan4亲本具有改善的稳定性的PspMan4变体。

[0331]

[0332]

[0333]

[0334] *ND：未确定的

[0335] 实例10

[0336] PspMan4变体在洗涤剂溶液中的稳定性

[0337] 通过在升高的温度(如表10中所示)孵育5min后测量样品的残余活性，在10％(v/v)可商购液体衣物洗涤剂(原味洗衣液(Original scent)，宝洁公司，于2014年在
当地超市购买，并使用实例4中描述的方案热灭活)的水溶液中在胁迫条件下测试PspMan4
变体的稳定性。

[0338]

[0339] 制备12.5％(v/v)热灭活洗涤剂的水溶液，并将来自过滤的培养上清液的酶样品与适当体积的这种洗涤剂溶液混合以达到10％(v/v)的最终洗涤剂浓度。为了测量初始(非
胁迫)活性，立即在50mM MOPS缓冲液，pH 7.2，0.005％中稀释该混合物的
等分试样，并使用实例2所述的“甘露聚糖酶活性测定”来测定在LBG上的活性。为了测量胁迫活性，将与洗涤剂溶液混合的酶样品在密封PCR板中在升高的温度(如表10中所示)下在
热循环仪(Tetrad2Peltier热循环仪，伯乐实验室(Bio-Rad Laboratories)，赫拉克勒斯，加利福尼亚州)中孵育5min，然后在50mM MOPS缓冲液，pH 7.2，0.005％中
稀释，并如实例2中的“甘露聚糖酶活性测定”中所述测定其活性。

[0340] 残余活性计算

[0341] 一旦如上所述通过LBG底物水解来测量胁迫和非胁迫活性值，则通过取胁迫与非胁迫活性的比率并乘以100来计算％残余活性，其中误差范围在约5％以内。表11列出了在
表10所述条件下在稳定性测定中相比PspMan4亲本具有改善的稳定性的PspMan4变体。

[0342]

[0343]

[0344] *ND：未确定的

[0345] 实例11

[0346] PspMan118变体在Terg-o-tometer中的清洁性能

[0347] 通过在pH 5.3的MES缓冲液中沉淀硫酸铵从澄清的芽孢杆菌培养物上清液中分离PspMan118。通过疏水性交换层析实现纯化，然后透析到pH为6.0的50mM MES缓冲液中。然后添加丙二醇至终浓度为40％，并将样品冷藏保存直到进一步表征。

[0348] 使用Terg-o-tometer在衣物洗涤剂应用中测试PspMan118和商业甘露聚糖酶(4L，丹麦诺维信公司(Novozymes AS，Denmark))的洗涤性能。在16℃进
行性能评估。污垢荷载由填充有1L去离子水的terg-o-tometer烧杯中的两个CFT C-S-
73LBG样本(荷兰符拉尔丁根的测试材料BV中心)组成。将水硬度调节至100ppm(3:1Ca:Mg)。
将Ultra 清风(Clean Breeze)粉末衣物洗涤剂(2014年在当地超市购买)以0.6g/L
添加到烧杯中。将各种甘露聚糖酶以不同的剂量添加到烧杯中，洗涤时间为12min。洗涤处理后，将样本旋转干燥，然后风干。使用比色计(柯尼卡美能达(Konica Minolta)色度计CR-
410，50mm孔径)在处理之前和之后测量每个样本。

[0349] 将L、a、b值的差值转换为由CIE-LAB色彩空间定义的总色差(dE)。这些值用于确定这些样本的清洁水平，并且结果表示为污渍去除百分比(％SRI)。图4显示了PspMan118和4L清洁CFT C-S-73样本的结果。在此清洁测定中，PspMan118和
4L在粉末衣物洗涤剂中在LBG污垢上表现出可比较的去污效果。

[0350] 实例12

[0351] PspMan4变体的晶体结构

[0352] 使用X射线晶体学方法确定PspMan4变体、PspMan118和PspMan148的三维结构。

[0353] 将具有突变P19E/T38E/N67D/N97D/Y129M/P168S/Q184L/K244L/S258D/N261R(其中氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号)的PspMan118(SEQ ID NO:
49)使用悬滴法使用50mM MES缓冲液(pH 6.0)中的1％蛋白质溶液和50mM 氯化钠进行结晶。
储库溶液含有0.7M磷酸钠、0.8M磷酸钾和0.1M HEPES(pH 7.5)。晶体在具有单位晶胞大小
和的不对称单位中具有一个分子的空间群P212121
中增加。

[0354] 将具有突变N10T/P19E/S30T/T38E/S59V/L60Q/K63R/N67D/N97D/Y129M/K143Q/P168S/Q184L/G225P/T228V/Y235L/K244L/S258D/N261R/Z298.01Q(其中氨基酸位置通过与
SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号)的PspMan148(SEQ ID NO:74)使用悬滴法使用
50mM MES缓冲液(pH 6.0)中的1％蛋白质溶液和50mM氯化钠进行结晶。储库溶液含有16％
2-丙醇、0.16M氯化钙和80mM乙酸钠(pH 4.6)。晶体在具有单位晶胞大小
和的不对称单位中具有一个分子的空间群P212121
中增加。

[0355] 在Bruker X8Proteum衍射系统上收集PspMan118和PspMan148晶体的数据，分辨率分别为和数据收集的其他统计资料见表12。

[0356] 使用来自芽孢杆菌属物种JAMB-602甘露聚糖酶(登录号BAD99527.1，PDB条目1WKY_A)的残基27-326的坐标作为起始模型的分子置换来确定PspMan118的结构。使用Coot
软件包拟合该模型[Emsley,P.等人，(2010),Acta Cryst.[晶体学报]D；66:486-501]。

[0357] 使用以PspMan118的坐标作为起始模型的分子置换来确定PspMan148的结构。调整坐标以适应另外取代的电子密度，并使用Coot软件包进行拟合。观察到在PspMan148的C-末端插入的另外的残基Z298.01Q的稀疏的弱密度。在拟合和重新拟合调节之后，使用具有
CCP4 软件套件中的标准默认设置的REFMAC程序对两个结构的坐标进行了细化。

[0358] 最终的模型具有良好的立体化学，如表13所报道。作为参考，PspMan118和PspMan148变体的坐标可以与1954个共同原子的的总均方根(root mean square)
偏差比对。

[0359]

[0360]

[0361] *括号中给出了外壳的值

[0362]

[0363] 使用所有常见的原子，PspMan118 单体的坐标与如下两种其他甘露聚糖酶结构的催化域叠加：芽孢杆菌属物种菌株JAMB-602甘露聚糖酶(PDB条目1WKY_A)和黏琼脂芽孢杆
菌菌株NCIMB 40482甘露聚糖酶(PDB条目2WHL_A)，总均方根偏差分别为和
因此，尽管这三种酶相对于PspMan4的残基1至295仅共享约60％的氨基酸序列同一性，但所有三种甘露聚糖酶对于催化结构域共享共同的折叠。

[0364] 图5描绘了1WKY_A甘露聚糖酶与PspMan118变体的结构比较，其中将1WKY_A的主链折叠(以灰色显示)与PspMan118的主链折叠(以黑色显示)进行比较。图5显示了PspMan118
与1WKY_A共享共同的阳离子结合位点，并且1WKY_A具有另外的碳水化合物结合结构域。
PspMan118与1WKY_A共享的阳离子结合位点由Gly225残基的羰基氧、Asp231的侧链、Thr232的羰基氧和Glu234的侧链形成。

[0365] PspMan118和PspMan148，相对于其他GH5甘露聚糖酶序列，例如以1WKY_A和2WHL_A为例的那些，可以进一步通过如下两个基序表征：(i)位置N34D35L36处的NDL基序和(ii)跨越位置263-274的缺失基序(其中氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来
编号)。图6描述了PspMan118与1WKY_A的进一步结构比较，其中该比较显示，包含PspMan118的NDL和缺失基序的残基彼此非常接近。

[0366] 已报道了黏琼脂芽孢杆菌2WHL_A甘露聚糖酶结构为甘露三糖基酶复合物。将PspMan148的结构与2WHL_A比对以研究变体位点相对于活性位点中结合的甘露三糖的位
置。选择PspMan148进行比较，因为它包括存在于PspMan118中的全部10个取代，以及在C-末端处的九个另外的取代和一个插入。与PspMan118一样，可以将PspMan148的结构与2WHL_A
的结构比对，导致1660个常见原子的的总均方根偏差。图7A-7C中描绘了
PspMan148和2WHL_A结构的叠加。

[0367] 在图7A中，2WHL_A的主链折叠图示地以浅灰色表示，并且甘露三糖显示为浅灰色条形。PspMan148的主链以黑色显示，其中十九个取代氨基酸的侧链显示为黑色线图。插入PspMan148中的氨基酸Z298.01Q(其在电子密度图中无序)不包括在该图中。

[0368] PspMan148中十九个取代中的七个位于底物结合位点。这七个取代包括S30T、S59V、L60Q、K63R、T228V、S258D和N261R(其中氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号)。图7B显示了PspMan148和2WHL_A结构与底物结合位点取代(显示为黑色
球体)的叠加。在这些取代中，L60Q在1WKY_A和2WHL_A结构中引入了可在同源位置看到的侧链。在PspMan148的活性位点发现的如下两个其他残基对于1WKY_A和2WHL_A都是共同的：
Trp61和Trp260(其中氨基酸位置通过与SEQ ID NO:14的氨基酸序列相对应来编号)。考虑
到这些甘露聚糖酶之间的强烈结构相似性，可以预期，在1WKY_A或2WHL_A甘露聚糖酶中的
结构同源位点处引入赋予PspMan4改善的取代可赋予这些分子在性能和/或稳定性方面类
似的改善。

[0369] 在图7B中，与2WHL_A甘露聚糖酶结合的甘露三糖基部分显示为灰色条，以指示底物结合位点的相对位置。在底物结合位点周围和附近的PspMan148中的七个取代(S30T、
S59V、L60Q、K63R、T228V、S258D和N261R)的位置显示为黑色球体。

[0370] 如图7C所示，PspMan148中剩余的十二个取代分布在所述分子表面上(显示为黑色球体)。在这十二个取代中，Q184L和G225P是特别令人感兴趣的。Q184L取代引入亮氨酸侧
链，该侧链掩护Arg149和Glu182之间的盐桥，从而使蛋白质稳定。G225P取代引入僵化脯氨酸残基，其中主链羰基氧形成阳离子(PspMan148中的钙离子)配体，从而有可能使结合的钙稳定，这会使酶对洗涤剂制剂中存在的螯合剂不太敏感。

[0371] 实例13

[0372] PspMan4变体的老化清洁性能

[0373] 在室温下在100％去污剂中孵育之前和之后测试PspMan4变体的清洁性能。孵育后剩余的清洁活性％与孵育前的初始清洁活性进行比较。

[0374] 用于孵育的可商购液体衣物洗涤剂在当地超市购买(洗涤剂名称：Total Color；制造商：私有品牌；购买国家：瑞士；购买年份：2011年)并使用上述实例4中描述的方案热灭活。

[0375] 将一个小型搅拌盘(Tumble Stir Disk，目录号P 721F-1，V&P科学公司(V&P Scientific)，圣地亚哥，加利福尼亚州)置于U型底、低粘结聚丙烯96孔MTP的每个孔中，然后添加100％Total Color液体洗涤剂。将来自过滤的培养上清液的酶样品添加到该洗涤剂
填充的MTP中(样品与去污剂的比例约为1:11(v/v))，并使用磁性滚压混合装置(VP710系
列，V&P科学公司，圣地亚哥，加利福尼亚州)混合5min。通过从酶-洗涤剂孵育板的每个孔中取出等分试样并进行上述实例8中所述的微样本清洗性能测定来测量初始清洁性能(时间
点T＝0)。微样本测定板中样品与缓冲液的比例为1:9(v/v)。

[0376] 然后将洗涤剂-酶板在室温下孵育表14A和14B标题中所示的时间量(分别为7小时和9小时)，并通过在孵育期结束时从酶-洗涤剂孵育板的每个孔中取出等分试样并进行上
述实例8中所述的微样本清洗性能测定来测量孵育后剩余的清洁活性。微样本测定板中样
品与缓冲液的比例为1:9(v/v)。通过取孵育后的清洁活性(在微样本清洁测定中测量的)与
在时间T＝0测量的初始清洁活性的比率并乘以100，获得残留清洁值(剩余清洁活性％)。

[0377] 表14A和14B列出了与PspMan4亲本相比，老化清洁性能测定中的PspMan4变体的性能(显示为在指示的孵育期后剩余的清洁活性％)。

[0378]

[0379]

[0380]

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类芽孢杆菌属物种甘露聚糖酶

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