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抗τ抗体及其使用方法

阅读：259发布：2021-02-09

专利汇可以提供抗τ抗体及其使用方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且在一方面，提供特异性结合至人类τ蛋白的 抗体 。在一些实施方案中，抗τ抗体识别在全长人类τ蛋白的残基111-125内的表位、在全长人类τ蛋白的残基251-270和/或残基346-360内的表位或在全长人类τ蛋白的残基186-205内的表位。在一些实施方案中，抗τ抗体特异性结合至磷 酸化 的人类τ蛋白、未 磷酸 化的人类τ蛋白和/或人类τ蛋白的多种剪接同功型。本文所公开的抗τ抗体也可包括一种或两种修饰的Fc多肽。，下面是抗τ抗体及其使用方法专利的具体信息内容。

1.一种分离的抗体或其抗原结合部分，其特异性结合至人类τ蛋白且识别在SEQ ID NO:1的残基111-125内的表位。
2.根据权利要求1所述的分离的抗体，其包含一个或多个选自由以下组成的组的互补决定区(CDR)：
(a)与SEQ ID NO:22的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:22的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR1；
(b)与SEQ ID NO:23的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:23的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR2；
(c)与SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR3；
(d)与SEQ ID NO:26和42中任一个的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:26和42中任一个的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR1；
(e)与SEQ ID NO:27、43和50中任一个的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:27、43和50中任一个的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR2；以及
(f)与SEQ ID NO:28、44、46和51中任一个的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:28、44、46和51中任一个的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR3。
3.根据权利要求2所述的分离的抗体，其包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：
(a)含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的重链CDR1；
(b)含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链CDR2；
(c)含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3；
(d)含SEQ ID NO:26和42中任一个的氨基酸序列的轻链CDR1；
(e)含SEQ ID NO:27、43和50中任一个的氨基酸序列的轻链CDR2；以及
(f)含SEQ ID NO:28、44、46和51中任一个的氨基酸序列的轻链CDR3。
4.根据权利要求3所述的分离的抗体，其包含：
(a)含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的重链CDR1；
(b)含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链CDR2；以及
(c)含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3。
5.根据权利要求3所述的分离的抗体，其包含：
(a)含SEQ ID NO:26的氨基酸序列的轻链CDR1；
(b)含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2；以及
(c)含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链CDR3。
6.根据权利要求3所述的分离的抗体，其包括含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的重链CDR1、含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链CDR2、含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3、含SEQ ID NO: 26的氨基酸序列的轻链CDR1、含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2和含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链CDR3。
7.根据权利要求3所述的分离的抗体，其包含：
(a)含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的轻链CDR1；
(b)含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的轻链CDR2；以及
(c)含SEQ ID NO:44的氨基酸序列的轻链CDR3。
8.根据权利要求3所述的分离的抗体，其包括含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的重链CDR1、含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链CDR2、含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3、含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的轻链CDR1、含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的轻链CDR2和含SEQ ID NO:44的氨基酸序列的轻链CDR3。
9.根据权利要求3所述的分离的抗体，其包含：
(a)含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的轻链CDR1；
(b)含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的轻链CDR2；以及
(c)含SEQ ID NO:46的氨基酸序列的轻链CDR3。
10.根据权利要求3所述的分离的抗体，其包括含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的重链CDR1、含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链CDR2、含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3、含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的轻链CDR1、含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的轻链CDR2和含SEQ ID NO:46的氨基酸序列的轻链CDR3。
11.根据权利要求1所述的分离的抗体，其包括含与SEQ ID NO:21和40中的任一个具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区。
12.根据权利要求1所述的分离的抗体，其包括含与SEQ ID NO:25、41和45中的任一个具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区。
13.根据权利要求1所述的分离的抗体，其包括含与SEQ ID NO:21具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区和含与SEQ ID NO:25具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区。
14.根据权利要求1所述的分离的抗体，其包括含与SEQ ID NO:40具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区和含与SEQ ID NO:41具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区。
15.根据权利要求1所述的分离的抗体，其包括含与SEQ ID NO:40具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区和含与SEQ ID NO:45具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区。
16.根据权利要求1所述的分离的抗体，其包括含与SEQ ID NO:21和40中的任一个具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区。
17.根据权利要求1所述的分离的抗体，其包括含与SEQ ID NO:25、41和45中的任一个具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区。
18.根据权利要求1所述的分离的抗体，其包括含与SEQ ID NO:21具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区和含与SEQ ID NO:25具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区。
19.根据权利要求1所述的分离的抗体，其包括含与SEQ ID NO:40具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区和含与SEQ ID NO:41具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区。
20.根据权利要求1所述的分离的抗体，其包括含与SEQ ID NO: 40具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区和含与SEQ ID NO:45具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区。
21.根据权利要求1所述的分离的抗体，其包含一个或多个选自由以下组成的组的互补决定区(CDR)：
(a)与SEQ ID NO:22、150-154、420-437、586、587、617和620中任一个的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:22、150-154、420-437、586、587、617和620中任一个的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR1；
(b)与SEQ ID NO:23、438-443、588和621的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:23、438-443、588和621中任一个的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR2；
(c)与SEQ ID NO:24、155和622中任一个的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:24、155和622中任一个的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR3；
(d)与SEQ ID NO:26、156-158、444-459和618中任一个的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:26、156-158、444-459和618中任一个的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR1；
(e)与SEQ ID NO:27和623的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:27和623的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR2；以及
(f)与SEQ ID NO:28、159-162、460-462、619和624中任一个的氨基酸序列具有至少
90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:28、159-162、460-462、619和624中任一个的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR3。
22.根据权利要求21所述的分离的抗体，其包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：
(a)含SEQ ID NO:22、150-154、420-437、586、587、617和620中任一个的氨基酸序列的重链CDR1；
(b)含SEQ ID NO:23、438-443、588和621中任一个的氨基酸序列的重链CDR2；
(c)含SEQ ID NO:24、155和622中任一个的氨基酸序列的重链CDR3；
(d)含SEQ ID NO:26、156-158、444-459和618中任一个的氨基酸序列的轻链CDR1；
(e)含SEQ ID NO:27和623的氨基酸序列的轻链CDR2；以及
(f)含SEQ ID NO:28、159-162、460-462、619和624中任一个的氨基酸序列的轻链CDR3。
23.根据权利要求22所述的分离的抗体，其包含：
(a)含SEQ ID NO:22、150-154、420-437、586、587、617和620中任一个的氨基酸序列的重链CDR1；
(b)含SEQ ID NO:23、438-443、588和621中任一个的氨基酸序列的重链CDR2；以及(c)含SEQ ID NO:24、155和622中任一个的氨基酸序列的重链CDR3。
24.根据权利要求22所述的分离的抗体，其包含：
(a)含SEQ ID NO:26、156-158、444-459和618中任一个的氨基酸序列的轻链CDR1；
(b)含SEQ ID NO:27和623的氨基酸序列的轻链CDR2；以及
(c)含SEQ ID NO:28、159-162、460-462、619和624中任一个的氨基酸序列的轻链CDR3。
25.根据权利要求22所述的分离的抗体，其包括含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的重链CDR1、含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链CDR2、含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3、含SEQ ID NO:450的氨基酸序列的轻链CDR1、含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2以及含SEQ ID NO:461的氨基酸序列的轻链CDR3。
26.根据权利要求22所述的分离的抗体，其包括含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的重链CDR1、含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链CDR2、含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3、含SEQ ID NO:459的氨基酸序列的轻链CDR1、含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2以及含SEQ ID NO:461的氨基酸序列的轻链CDR3。
27.根据权利要求22所述的分离的抗体，其包括含SEQ ID NO:151的氨基酸序列的重链CDR1、含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链CDR2、含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3、含SEQ ID NO:26的氨基酸序列的轻链CDR1、含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2以及含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链CDR3。
28.根据权利要求22所述的分离的抗体，其包括含SEQ ID NO:151的氨基酸序列的重链CDR1、含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链CDR2、含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3、含SEQ ID NO:156的氨基酸序列的轻链CDR1、含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2以及含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链CDR3。
29.根据权利要求22所述的分离的抗体，其包括含SEQ ID NO:151的氨基酸序列的重链CDR1、含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链CDR2、含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3、含SEQ ID NO:158的氨基酸序列的轻链CDR1、含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2以及含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链CDR3。
30.根据权利要求22所述的分离的抗体，其包括含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的重链CDR1、含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链CDR2、含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3、含SEQ ID NO:158的氨基酸序列的轻链CDR1、含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2以及含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链CDR3。
31.根据权利要求22所述的分离的抗体，其包括含SEQ ID NO:150的氨基酸序列的重链CDR1、含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链CDR2、含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3、含SEQ ID NO:158的氨基酸序列的轻链CDR1、含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2以及含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链CDR3。
32.根据权利要求22所述的分离的抗体，其包括含SEQ ID NO:153的氨基酸序列的重链CDR1、含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链CDR2、含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3、含SEQ ID NO:158的氨基酸序列的轻链CDR1、含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2以及含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链CDR3。
33.根据权利要求22所述的分离的抗体，其包括含SEQ ID NO:154的氨基酸序列的重链CDR1、含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链CDR2、含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3、含SEQ ID NO:158的氨基酸序列的轻链CDR1、含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2以及含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链CDR3。
34.根据权利要求22所述的分离的抗体，其包括含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的重链CDR1、含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链CDR2、含SEQ ID NO:155的氨基酸序列的重链CDR3、含SEQ ID NO:158的氨基酸序列的轻链CDR1、含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2以及含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链CDR3。
35.根据权利要求22所述的分离的抗体，其包括含SEQ ID NO:150的氨基酸序列的重链CDR1、含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链CDR2、含SEQ ID NO:155的氨基酸序列的重链CDR3、含SEQ ID NO:158的氨基酸序列的轻链CDR1、含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2以及含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链CDR3。
36.根据权利要求22所述的分离的抗体，其包括含SEQ ID NO:151的氨基酸序列的重链CDR1、含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链CDR2、含SEQ ID NO:155的氨基酸序列的重链CDR3、含SEQ ID NO:158的氨基酸序列的轻链CDR1、含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2以及含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链CDR3。
37.根据权利要求22所述的分离的抗体，其包括含SEQ ID NO:153的氨基酸序列的重链CDR1、含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链CDR2、含SEQ ID NO:155的氨基酸序列的重链CDR3、含SEQ ID NO:158的氨基酸序列的轻链CDR1、含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2以及含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链CDR3。
38.根据权利要求22所述的分离的抗体，其包括含SEQ ID NO:154的氨基酸序列的重链CDR1、含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链CDR2、含SEQ ID NO:155的氨基酸序列的重链CDR3、含SEQ ID NO:158的氨基酸序列的轻链CDR1、含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2以及含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链CDR3。
39.根据权利要求1和4至6中任一项所述的分离的抗体，其包括含与SEQ ID NO:145-
148中的任一个具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区。
40.根据权利要求1、4至6和39中任一项所述的分离的抗体，其包括含与SEQ ID NO:149具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区。
41.根据权利要求1和4至6中任一项所述的分离的抗体，其包括含与SEQ ID NO:145具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区和含与SEQ ID NO:149具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区。
42.根据权利要求1和4至6中任一项所述的分离的抗体，其包括含与SEQ ID NO:146具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区和含与SEQ ID NO:149具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区。
43.根据权利要求1和4至6中任一项所述的分离的抗体，其包括含与SEQ ID NO:147具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区和含与SEQ ID NO:149具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区。
44.根据权利要求1和4至6中任一项所述的分离的抗体，其包括含与SEQ ID NO:148具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区和含与SEQ ID NO:149具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区。
45.根据权利要求1或25所述的分离的抗体，其包括含与SEQ ID NO:146具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区和含与SEQ ID NO:463具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区。
46.根据权利要求1或26所述的分离的抗体，其包括含与SEQ ID NO:146具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区和含与SEQ ID NO:464具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区。
47.根据权利要求1所述的分离的抗体，其包含一个或多个选自由以下组成的组的互补决定区(CDR)：
(a)与SEQ ID NO:151、153、426-430、432-437、586和587中任一个的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:151、153、426-430、432-437、586和587中任一个的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR1；
(b)与SEQ ID NO:23和588中任一个的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:23和588中任一个的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR2；
(c)与SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR3；
(d)与SEQ ID NO:158和448-458中任一个的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:158和448-458中任一个的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR1；
(e)与SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR2；以及
(f)与SEQ ID NO:28和461中任一个的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:28和461中任一个的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR3。
48.根据权利要求47所述的分离的抗体，其包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：
(a)含SEQ ID NO:151、153、426-430、432-437、586和587中任一个的氨基酸序列的重链CDR1；
(b)含SEQ ID NO:23和588中任一个的氨基酸序列的重链CDR2；
(c)含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3；
(d)含SEQ ID NO:158和448-458中任一个的氨基酸序列的轻链CDR1；
(e)含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2；以及
(f)含SEQ ID NO:28和461中任一个的氨基酸序列的轻链CDR3。
49.根据权利要求48所述的分离的抗体，其包含：
(a)含SEQ ID NO:151、153、426-430、432-437、586和587中任一个的氨基酸序列的重链CDR1；
(b)含SEQ ID NO:23和588中任一个的氨基酸序列的重链CDR2；以及
(c)含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3。
50.根据权利要求48所述的分离的抗体，其包含：
(a)含SEQ ID NO:158和448-458中任一个的氨基酸序列的轻链CDR1；
(b)含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2；以及
(c)含SEQ ID NO:28和461中任一个的氨基酸序列的轻链CDR3。
51.根据权利要求48所述的分离的抗体，其包含：
(a)含SEQ ID NO:151、153、426-430、432-437、586和587中任一个的氨基酸序列的重链CDR1；
(b)含SEQ ID NO:23和588中任一个的氨基酸序列的重链CDR2；
(c)含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3；
(d)含SEQ ID NO:158和448-458中任一个的氨基酸序列的轻链CDR1；
(e)含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2；以及
(f)含SEQ ID NO:28和461中任一个的氨基酸序列的轻链CDR3。
52.一种分离的抗体或其抗原结合部分，其特异性结合至人类τ蛋白且识别在SEQ ID NO:1的残基251-270和/或残基346-360内的表位。
53.根据权利要求52所述的分离的抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分识别在SEQ ID NO:1的残基251-270内的表位且识别在SEQ ID NO:1的残基346-360内的表位。
54.根据权利要求52或权利要求53所述的分离的抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分识别在SEQ ID NO:1的残基256-270内的表位。
55.根据权利要求52或权利要求53所述的分离的抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分识别在SEQ ID NO:1的残基251-270和/或残基346-360内的包含序列SKIGS的表位。
56.根据权利要求52所述的分离的抗体，其包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：
(a)与SEQ ID NO:9、17和47中任一个的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:9、17和47中任一个的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR1；
(b)与SEQ ID NO:10的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:10的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR2；
(c)与SEQ ID NO:11、18、30、33和48中任一个的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:11、18、30、33和48中任一个的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR3；
(d)与SEQ ID NO:13的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:13的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR1；
(e)与SEQ ID NO:14的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:14的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR2；以及
(f)与SEQ ID NO:15、20和49中任一个的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:15、20和49中任一个的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR3。
57.根据权利要求52所述的分离的抗体，其包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：
(a)含SEQ ID NO:9、17和47中任一个的氨基酸序列的重链CDR1；
(b)含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链CDR2；
(c)含SEQ ID NO:11、18、30、33和48中任一个的氨基酸序列的重链CDR3；
(d)含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的轻链CDR1；
(e)含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的轻链CDR2；以及
(f)含SEQ ID NO:15、20和49中任一个的氨基酸序列的轻链CDR3。
58.根据权利要求57所述的分离的抗体，其包含：
(a)含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链CDR1；
(b)含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链CDR2；以及
(c)含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的重链CDR3。
59.根据权利要求57所述的分离的抗体，其包含：
(a)含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的轻链CDR1；
(b)含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的轻链CDR2；以及
(c)含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的轻链CDR3。
60.根据权利要求57所述的分离的抗体，其包括含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链CDR1、含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链CDR2、含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的重链CDR3、含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的轻链CDR1、含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的轻链CDR2以及含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的轻链CDR3。
61.根据权利要求57所述的分离的抗体，其包含：
(a)含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的重链CDR1；
(b)含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链CDR2；以及
(c)含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的重链CDR3。
62.根据权利要求57所述的分离的抗体，其包含：
(a)含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的轻链CDR1；
(b)含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的轻链CDR2；以及
(c)含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的轻链CDR3。
63.根据权利要求57所述的分离的抗体，其包括含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的重链CDR1、含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链CDR2、含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的重链CDR3、含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的轻链CDR1、含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的轻链CDR2以及含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的轻链CDR3。
64.根据权利要求57所述的分离的抗体，其包含：
(a)含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链CDR1；
(b)含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链CDR2；以及
(c)含SEQ ID NO:30的氨基酸序列的重链CDR3。
65.根据权利要求57所述的分离的抗体，其包括含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链CDR1、含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链CDR2、含SEQ ID NO:30的氨基酸序列的重链CDR3、含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的轻链CDR1、含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的轻链CDR2以及含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的轻链CDR3。
66.根据权利要求57所述的分离的抗体，其包含：
(a)含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链CDR1；
(b)含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链CDR2；以及
(c)含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的重链CDR3。
67.根据权利要求57所述的分离的抗体，其包括含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链CDR1、含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的氨基酸序列的重链CDR2、含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的重链CDR3、含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的轻链CDR1、含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的轻链CDR2以及含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的轻链CDR3。
68.根据权利要求52所述的分离的抗体，其包括含与SEQ ID NO:8、16、29和32中的任一个具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区。
69.根据权利要求52所述的分离的抗体，其包括含与SEQ ID NO:12、19、31和34中的任一个具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区。
70.根据权利要求52所述的分离的抗体，其包括含与SEQ ID NO:8、16、29和32中的任一个具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区和含与SEQ ID NO:12、19、31和34中的任一个具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区。
71.根据权利要求52所述的分离的抗体，其包括含与SEQ ID NO:8具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区和含与SEQ ID NO:12具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区。
72.根据权利要求52所述的分离的抗体，其包括含与SEQ ID NO:16具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区和含与SEQ ID NO:19具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区。
73.根据权利要求52所述的分离的抗体，其包括含与SEQ ID NO:29具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区和含与SEQ ID NO:31具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区。
74.根据权利要求52所述的分离的抗体，其包括含与SEQ ID NO:32具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区和含与SEQ ID NO:34具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区。
75.一种分离的抗体或其抗原结合部分，其特异性结合至人类τ蛋白且识别在SEQ ID NO:1的残基186-205内的表位。
76.根据权利要求75所述的分离的抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分识别在SEQ ID NO:1的残基186-200或残基191-205内的表位。
77.根据权利要求75或76所述的分离的抗体，其包含一个或多个选自由以下组成的组的互补决定区(CDR)：
(a)与SEQ ID NO:168的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:168的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR1；
(b)与SEQ ID NO:169的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:169的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR2；
(c)与SEQ ID NO:170的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:170的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR3；
(d)与SEQ ID NO:172的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:172的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR1；
(e)与SEQ ID NO:173的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:173中任一个的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR2；以及
(f)与SEQ ID NO:174的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:174中任一个的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR3。
78.根据权利要求77所述的分离的抗体，其包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：
(a)含SEQ ID NO:168的氨基酸序列的重链CDR1；
(b)含SEQ ID NO:169的氨基酸序列的重链CDR2；
(c)含SEQ ID NO:170的氨基酸序列的重链CDR3；
(d)含SEQ ID NO:172的氨基酸序列的轻链CDR1；
(e)含SEQ ID NO:173的氨基酸序列的轻链CDR2；以及
(f)含SEQ ID NO:174的氨基酸序列的轻链CDR3。
79.根据权利要求78所述的分离的抗体，其包含：
(a)含SEQ ID NO:168的氨基酸序列的重链CDR1；
(b)含SEQ ID NO:169的氨基酸序列的重链CDR2；以及
(c)含SEQ ID NO:170的氨基酸序列的重链CDR3。
80.根据权利要求78所述的分离的抗体，其包含：
(a)含SEQ ID NO:172的氨基酸序列的轻链CDR1；
(b)含SEQ ID NO:173的氨基酸序列的轻链CDR2；以及
(c)含SEQ ID NO:174的氨基酸序列的轻链CDR3。
81.根据权利要求78所述的分离的抗体，其包括含SEQ ID NO:168的氨基酸序列的重链CDR1、含SEQ ID NO:169的氨基酸序列的重链CDR2、含SEQ ID NO:170的氨基酸序列的重链CDR3、含SEQ ID NO:172的氨基酸序列的轻链CDR1、含SEQ ID NO:173的氨基酸序列的轻链CDR2和含SEQ ID NO:174的氨基酸序列的轻链CDR3。
82.根据权利要求75或76所述的分离的抗体，其包括含与SEQ ID NO:167具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区。
83.根据权利要求75或76所述的分离的抗体，其包括含与SEQ ID NO:171具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区。
84.根据权利要求75或76所述的分离的抗体，其包括含与SEQ ID NO:167具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区和含与SEQ ID NO:171具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区。
85.一种分离的抗体或其抗原结合部分，其特异性结合至人类τ蛋白且识别与由抗体克隆19F7.C9或24D2.B2所识别的表位相同或大体上相同的表位。
86.根据权利要求85所述的分离的抗体，其中所述由抗体克隆19F7.C9或24D2.B2所识别的表位包含一个或多个在SEQ ID NO:1的残基50-421内的残基。
87.根据权利要求85或86所述的分离的抗体，其中所述由抗体克隆19F7.C9或24D2.B2所识别的表位是在SEQ ID NO:1的残基50-421内。
88.根据权利要求1至87中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含第一Fc多肽且任选地包含第二Fc多肽。
89.根据权利要求88所述的分离的抗体，其中所述抗体包含所述第一Fc多肽和所述第二Fc多肽。
90.根据权利要求88或89所述的分离的抗体，其中所述第一Fc多肽是修饰的Fc多肽和/或所述第二Fc多肽是修饰的Fc多肽。
91.根据权利要求1至87中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包括：
(a)含特异性结合至所述人类τ蛋白的第一可变区的第一抗原结合部分，其中所述第一抗原结合部分包括(i)含第一Fc多肽的第一重链和(ii)第一轻链；以及
(b)含特异性结合至所述人类τ蛋白的第二可变区的第二抗原结合部分，其中所述第二抗原结合部分包括(i)含第二Fc多肽的第二重链和(ii)第二轻链，其中所述第一Fc多肽和所述第二Fc多肽形成Fc二聚体。
92.根据权利要求91所述的分离的抗体，其中所述第一Fc多肽是修饰的Fc多肽和/或所述第二Fc多肽是修饰的Fc多肽。
93.根据权利要求91所述的分离的抗体，其中所述第一可变区与所述第二可变区识别所述人类τ蛋白中的相同表位。
94.根据权利要求91所述的分离的抗体，其中所述第一可变区与所述第二可变区识别所述人类τ蛋白中的不同表位。
95.根据权利要求90至94中任一项所述的分离的抗体，其中所述第一Fc多肽与所述第二Fc多肽各自含有促进异二聚化的修饰。
96.根据权利要求95所述的分离的抗体，其中根据EU编号，所述Fc多肽之一具有T366W取代且所述另一Fc多肽具有T366S、L368A和Y407V取代。
97.根据权利要求90至96中任一项所述的分离的抗体，其中所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽包含天然FcRn结合位点。
98.根据权利要求90至96中任一项所述的分离的抗体，其中所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽包含改变FcRn结合的修饰。
99.根据权利要求90至98中任一项所述的分离的抗体，其中所述第一Fc多肽和所述第二Fc多肽不具有效应子功能。
100.根据权利要求90至98中任一项所述的分离的抗体，其中所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽包含减弱效应子功能的修饰。
101.根据权利要求100所述的分离的抗体，其中所述减弱效应子功能的修饰包含根据EU编号在234位处的Ala和在235位处的Ala取代。
102.根据权利要求90至101中任一项所述的分离的抗体，其中相对于天然Fc序列，所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽包含延长血清半衰期的氨基酸变化。
103.根据权利要求102所述的分离的抗体，其中所述氨基酸变化包含根据EU编号在252位处的Tyr、在254位处的Thr和在256位处的Glu取代。
104.根据权利要求102所述的分离的抗体，其中所述氨基酸变化包含根据EU编号在428位处的Leu和在434位处的Ser取代。
105.根据权利要求102所述的分离的抗体，其中所述氨基酸变化包含根据EU编号在434位处的Ser或Ala取代。
106.根据权利要求90至103中任一项所述的分离的抗体，其中所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽特异性结合至转铁蛋白受体。
107.根据权利要求106所述的分离的抗体，其中根据EU编号，所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽在选自由384、386、387、388、389、390、413、416和421组成的组的位置处包含至少两个取代。
108.根据权利要求107所述的分离的抗体，其中所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽在所述位置中的至少三个、四个、五个、六个、七个、八个或九个处包含取代。
109.根据权利要求107或108所述的分离的抗体，其中根据EU编号，所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽还在包含380、391、392和415的位置处包含一个、两个、三个或四个取代。
110.根据权利要求107至109中任一项所述的分离的抗体，其中根据EU编号，所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽还在包含414、424和426的位置处包含一个、两个或三个取代。
111.根据权利要求107至110中任一项所述的分离的抗体，其中所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽在388位包含Trp。
112.根据权利要求107至111中任一项所述的分离的抗体，其中所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽在421位包含芳香族氨基酸。
113.根据权利要求112所述的分离的抗体，其中在421位的所述芳香族氨基酸是Trp或Phe。
114.根据权利要求107至113中任一项所述的分离的抗体，其中所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽包含至少一个选自以下的位置：380位是Trp、Leu或Glu；384位是Tyr或Phe；
386位是Thr；387位是Glu；388位是Trp；389位是Ser、Ala、Val或Asn；390位是Ser或Asn；413位是Thr或Ser；415位是Glu或Ser；416位是Glu；以及421位是Phe。
115.根据权利要求114所述的分离的抗体，其中所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽包含2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个选自以下的位置：380位是Trp、Leu或Glu；384位是Tyr或Phe；386位是Thr；387位是Glu；388位是Trp；389位是Ser、Ala、Val或Asn；390位是Ser或Asn；
413位是Thr或Ser；415位是Glu或Ser；416位是Glu；以及421位是Phe。
116.根据权利要求115所述的分离的抗体，其中所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽包含如下11个位置：380位是Trp、Leu或Glu；384位是Tyr或Phe；386位是Thr；387位是Glu；
388位是Trp；389位是Ser、Ala、Val或Asn；390位是Ser或Asn；413位是Thr或Ser；415位是Glu或Ser；416位是Glu；以及421位是Phe。
117.根据权利要求115或116所述的分离的抗体，其中所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽具有与SEQ ID NO:214-218、238、240-270和469-475中任一个的氨基酸111-217具有至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性的CH3结构域。
118.根据权利要求117所述的分离的抗体，其中在对应于SEQ ID NO:214-218、238、
240-270和469-475中任一个的EU索引位置380、384、386、387、388、389、390、391、392、413、
414、415、416、421、424和426的位置中的至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16个处的残基未缺失或被取代。
119.根据权利要求1至90中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO:283-286和626-628中任一个的序列的第一Fc多肽。
120.根据权利要求119所述的分离的抗体，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO:279-282和629-631中任一个的序列的第二Fc多肽。
121.根据权利要求1至90中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO:271的序列的第一Fc多肽和具有SEQ ID NO:279的序列的第二Fc多肽。
122.根据权利要求1至90中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO:272的序列的第一Fc多肽和具有SEQ ID NO:280的序列的第二Fc多肽。
123.根据权利要求1至90中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO:273的序列的第一Fc多肽和具有SEQ ID NO:281的序列的第二Fc多肽。
124.根据权利要求1至90中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO:274的序列的第一Fc多肽和具有SEQ ID NO:282的序列的第二Fc多肽。
125.根据权利要求1至90中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO:275的序列的第一Fc多肽和具有SEQ ID NO:283的序列的第二Fc多肽。
126.根据权利要求1至90中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO:276的序列的第一Fc多肽和具有SEQ ID NO:284的序列的第二Fc多肽。
127.根据权利要求1至90中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO:277的序列的第一Fc多肽和具有SEQ ID NO:285的序列的第二Fc多肽。
128.根据权利要求1至90中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO:278的序列的第一Fc多肽和具有SEQ ID NO:286的序列的第二Fc多肽。
129.根据权利要求1至90中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO:271的序列的第一Fc多肽和具有SEQ ID NO:275的序列的第二Fc多肽。
130.根据权利要求1至90中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO:272的序列的第一Fc多肽和具有SEQ ID NO:276的序列的第二Fc多肽。
131.根据权利要求1至90中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO:273的序列的第一Fc多肽和具有SEQ ID NO:277的序列的第二Fc多肽。
132.根据权利要求1至90中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO:274的序列的第一Fc多肽和具有SEQ ID NO:278的序列的第二Fc多肽。
133.根据权利要求106至132中任一项所述的分离的抗体，其中所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽结合至所述转铁蛋白受体的顶端结构域。
134.根据权利要求133所述的分离的抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分与所述转铁蛋白受体的结合大体上不抑制转铁蛋白与所述转铁蛋白受体的结合。
135.根据权利要求88至134中任一项所述的分离的抗体，其中所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽相较于相应野生型Fc多肽具有至少75％，或至少80％、90％、92％或95％的氨基酸序列同一性。
136.根据权利要求135所述的分离的抗体，其中所述相应野生型Fc多肽是人类IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc多肽。
137.根据权利要求106至136中任一项所述的分离的抗体，其中脑中所述抗体或其抗原结合部分的吸收比在所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽中无引起转铁蛋白受体结合的修饰的所述抗体或其抗原结合部分的吸收高至少十倍。
138.根据权利要求88至128和133至137中任一项所述的分离的抗体，其中所述Fc多肽之一未被修饰以结合至血脑屏障受体且所述另一Fc多肽被修饰以特异性结合至转铁蛋白受体。
139.一种分离的抗体或其抗原结合部分，其包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：
(a)含SEQ ID NO:586的氨基酸序列的重链CDR1；
(b)含SEQ ID NO:588的氨基酸序列的重链CDR2；
(c)含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3；
(d)含SEQ ID NO:158的氨基酸序列的轻链CDR1；
(e)含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2；以及
(f)含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链CDR3。
140.根据权利要求139所述的分离的抗体，其包含：
(a)含SEQ ID NO:586的氨基酸序列的重链CDR1；
(b)含SEQ ID NO:588的氨基酸序列的重链CDR2；
(c)含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3；
(d)含SEQ ID NO:158的氨基酸序列的轻链CDR1；
(e)含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2；以及
(f)含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链CDR3。
141.根据权利要求139或140所述的分离的抗体，其包括含与SEQ ID NO:602具有至少
90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区和含与SEQ ID NO:604具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区。
142.根据权利要求141所述的分离的抗体，其包括含SEQ ID NO:602的氨基酸序列的重链可变区和含SEQ ID NO:604的氨基酸序列的轻链可变区。
143.一种分离的抗体或其抗原结合部分，其包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：
(a)含SEQ ID NO:586的氨基酸序列的重链CDR1；
(b)含SEQ ID NO:588的氨基酸序列的重链CDR2；
(c)含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3；
(d)含SEQ ID NO:158的氨基酸序列的轻链CDR1；
(e)含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2；以及
(f)含SEQ ID NO:461的氨基酸序列的轻链CDR3。
144.根据权利要求143所述的分离的抗体，其包含：
(a)含SEQ ID NO:586的氨基酸序列的重链CDR1；
(b)含SEQ ID NO:588的氨基酸序列的重链CDR2；
(c)含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3；
(d)含SEQ ID NO:158的氨基酸序列的轻链CDR1；
(e)含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2；以及
(f)含SEQ ID NO:461的氨基酸序列的轻链CDR3。
145.根据权利要求144所述的分离的抗体，其包括含与SEQ ID NO:602具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区和含与SEQ ID NO:616具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区。
146.根据权利要求145所述的分离的抗体，其包括含SEQ ID NO:602的氨基酸序列的重链可变区和含SEQ ID NO:616的氨基酸序列的轻链可变区。
147.一种分离的抗体或其抗原结合部分，其包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：
(a)含SEQ ID NO:586的氨基酸序列的重链CDR1；
(b)含SEQ ID NO:588的氨基酸序列的重链CDR2；
(c)含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3；
(d)含SEQ ID NO:450的氨基酸序列的轻链CDR1；
(e)含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2；以及
(f)含SEQ ID NO:461的氨基酸序列的轻链CDR3。
148.根据权利要求147所述的分离的抗体，其包含：
(a)含SEQ ID NO:586的氨基酸序列的重链CDR1；
(b)含SEQ ID NO:588的氨基酸序列的重链CDR2；
(c)含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3；
(d)含SEQ ID NO:450的氨基酸序列的轻链CDR1；
(e)含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2；以及
(f)含SEQ ID NO:461的氨基酸序列的轻链CDR3。
149.根据权利要求147所述的分离的抗体，其包括含与SEQ ID NO:602具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区和含与SEQ ID NO:463具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区。
150.根据权利要求149所述的分离的抗体，其包括含SEQ ID NO:602的氨基酸序列的重链可变区和含SEQ ID NO:463的氨基酸序列的轻链可变区。
151.一种分离的抗体或其抗原结合部分，其包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：
(a)含SEQ ID NO:587的氨基酸序列的重链CDR1；
(b)含SEQ ID NO:588的氨基酸序列的重链CDR2；
(c)含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3；
(d)含SEQ ID NO:158的氨基酸序列的轻链CDR1；
(e)含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2；以及
(f)含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链CDR3。
152.根据权利要求151所述的分离的抗体，其包含：
(a)含SEQ ID NO:587的氨基酸序列的重链CDR1；
(b)含SEQ ID NO:588的氨基酸序列的重链CDR2；
(c)含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3；
(d)含SEQ ID NO:158的氨基酸序列的轻链CDR1；
(e)含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2；以及
(f)含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链CDR3。
153.根据权利要求151所述的分离的抗体，其包括含与SEQ ID NO:603具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区和含与SEQ ID NO:604具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区。
154.根据权利要求153所述的分离的抗体，其包括含SEQ ID NO:603的氨基酸序列的重链可变区和含SEQ ID NO:604的氨基酸序列的轻链可变区。
155.一种分离的抗体或其抗原结合部分，其包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：
(a)含SEQ ID NO:587的氨基酸序列的重链CDR1；
(b)含SEQ ID NO:588的氨基酸序列的重链CDR2；
(c)含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3；
(d)含SEQ ID NO:158的氨基酸序列的轻链CDR1；
(e)含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2；以及
(f)含SEQ ID NO:461的氨基酸序列的轻链CDR3。
156.根据权利要求155所述的分离的抗体，其包含：
(a)含SEQ ID NO:587的氨基酸序列的重链CDR1；
(b)含SEQ ID NO:588的氨基酸序列的重链CDR2；
(c)含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3；
(d)含SEQ ID NO:158的氨基酸序列的轻链CDR1；
(e)含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2；以及
(f)含SEQ ID NO:461的氨基酸序列的轻链CDR3。
157.根据权利要求155所述的分离的抗体，其包括含与SEQ ID NO:603具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区和含与SEQ ID NO:616具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区。
158.根据权利要求157所述的分离的抗体，其包括含SEQ ID NO:603的氨基酸序列的重链可变区和含SEQ ID NO:616的氨基酸序列的轻链可变区。
159.一种分离的抗体或其抗原结合部分，其包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：
(a)含SEQ ID NO:587的氨基酸序列的重链CDR1；
(b)含SEQ ID NO:588的氨基酸序列的重链CDR2；
(c)含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3；
(d)含SEQ ID NO:450的氨基酸序列的轻链CDR1；
(e)含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2；以及
(f)含SEQ ID NO:461的氨基酸序列的轻链CDR3。
160.根据权利要求159所述的分离的抗体，其包含：
(a)含SEQ ID NO:587的氨基酸序列的重链CDR1；
(b)含SEQ ID NO:588的氨基酸序列的重链CDR2；
(c)含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3；
(d)含SEQ ID NO:450的氨基酸序列的轻链CDR1；
(e)含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2；以及
(f)含SEQ ID NO:461的氨基酸序列的轻链CDR3。
161.根据权利要求159所述的分离的抗体，其包括含与SEQ ID NO:603具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的重链可变区和含与SEQ ID NO:463具有至少90％序列同一性的氨基酸序列的轻链可变区。
162.根据权利要求161所述的分离的抗体，其包括含SEQ ID NO:603的氨基酸序列的重链可变区和含SEQ ID NO:463的氨基酸序列的轻链可变区。
163.根据权利要求139至162中任一项所述的分离的抗体，其中所述分离的抗体包括含SEQ ID NO:342-353和516-522中任一个的序列的修饰的Fc多肽。
164.根据权利要求139至162中任一项所述的分离的抗体，其中所述分离的抗体包括含SEQ ID NO:354-365和523-529中任一个的序列的修饰的Fc多肽。
165.根据权利要求139至162中任一项所述的分离的抗体，其中所述分离的抗体包括含SEQ ID NO:366-377和530-536中任一个的序列的修饰的Fc多肽。
166.根据权利要求139至162中任一项所述的分离的抗体，其中所述分离的抗体包括含SEQ ID NO:378-389和537-543中任一个的序列的修饰的Fc多肽。
167.根据权利要求139至162中任一项所述的分离的抗体，其中所述分离的抗体包括含SEQ ID NO:390-401和544-550中任一个的序列的修饰的Fc多肽。
168.根据权利要求139至162中任一项所述的分离的抗体，其中所述分离的抗体包括含SEQ ID NO:402-413和551-557中任一个的序列的修饰的Fc多肽。
169.根据权利要求139至162中任一项所述的分离的抗体，其中所述分离的抗体包括含SEQ ID NO:271-278、476-479和558-564中任一个的序列的修饰的Fc多肽。
170.根据权利要求139至162中任一项所述的分离的抗体，其中所述分离的抗体包括含SEQ ID NO:480-491和565-571中任一个的序列的修饰的Fc多肽。
171.根据权利要求139至162中任一项所述的分离的抗体，其中所述分离的抗体包括含SEQ ID NO:492-503和572-578中任一个的序列的修饰的Fc多肽。
172.根据权利要求139至162中任一项所述的分离的抗体，其中所述分离的抗体包括含SEQ ID NO:504-515和579-585中任一个的序列的修饰的Fc多肽。
173.根据权利要求163至192中任一项所述的分离的抗体，其中所述修饰的Fc多肽与所述分离的抗体的重链可变区融合。
174.根据权利要求163至172中任一项所述的分离的抗体，其中所述修饰的Fc多肽结合至所述转铁蛋白受体的顶端结构域。
175.根据权利要求174所述的分离的抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分与所述转铁蛋白受体的结合大体上不抑制转铁蛋白与所述转铁蛋白受体的结合。
176.根据权利要求163至175中任一项所述的分离的抗体，其中所述修饰的Fc多肽相较于所述相应野生型Fc多肽具有至少75％，或至少80％、90％、92％或95％的氨基酸序列同一性。
177.根据权利要求176所述的分离的抗体，其中所述相应野生型Fc多肽是人类IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc多肽。
178.根据权利要求163至177中任一项所述的分离的抗体，其中脑中所述抗体或其抗原结合部分的吸收比无引起转铁蛋白受体结合的所述修饰的Fc多肽的所述抗体或其抗原结合部分的吸收高至少十倍。
179.根据权利要求1至178中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分以小于约50nM的结合亲和力特异性结合至所述人类τ蛋白。
180.根据权利要求179所述的分离的抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分以约1pM至约50nM的结合亲和力特异性结合至所述人类τ蛋白。
181.根据权利要求1至180中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分特异性结合至磷酸化的人类τ蛋白和/或未磷酸化的人类τ蛋白。
182.根据权利要求1至181中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分特异性结合至磷酸化的人类τ蛋白和未磷酸化的人类τ蛋白两者。
183.根据权利要求1至182中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分特异性结合至两种或更多种选自由以下组成的组的所述人类τ蛋白的同功型：2N4R、
2N3R、1N4R、1N3R、0N4R和0N3R。
184.根据权利要求183所述的分离的抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分特异性结合至所述人类τ蛋白的所有同功型。
185.根据权利要求1至184中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分与食蟹猕猴τ蛋白和/或小鼠τ蛋白展现出交叉反应性。
186.根据权利要求1至185中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体是单克隆抗体。
187.根据权利要求1至185中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体是嵌合抗体。
188.根据权利要求1至185中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体是人源化抗体。
189.根据权利要求1至185中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗体是完全人类抗体。
190.根据权利要求1至189中任一项所述的分离的抗体，其中所述抗原结合部分是Fab、F(ab')2、scFv或二价scFv。
191.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至190中任一项所述的分离的抗体和药学上可接受的载体。
192.一种双特异性抗体，其包含根据权利要求1至190中任一项所述的抗体。
193.一种分离的多核苷酸，其包含编码根据权利要求1至190中任一项所述的分离的抗体的核苷酸序列。
194.一种载体，其包含根据权利要求193所述的多核苷酸。
195.一种宿主细胞，其包含根据权利要求193所述的多核苷酸或根据权利要求194所述的载体。
196.一种抗体，其与根据权利要求1至190中任一项所述的分离的抗体竞争结合至人类τ蛋白。
197.一种杂交瘤细胞系，其产生抗体克隆17G2.A1、19F7.C9或24D2.B2。
198.一种抗体，其由根据权利要求197所述的杂交瘤细胞系产生。
199.一种防止或减少受试者脑中致病性τ蛋白播种和/或扩散的方法，所述方法包括向所述受试者施用根据权利要求1至190中任一项所述的分离的抗体、根据权利要求191所述的药物组合物或根据权利要求192所述的双特异性抗体。
200.根据权利要求199所述的方法，其中所述受试者患有神经退化性τ蛋白病。
201.一种用于治疗神经退化性疾病的方法，所述方法包括向患有神经退化性疾病的受试者施用根据权利要求1至190中任一项所述的分离的抗体、根据权利要求191所述的药物组合物或根据权利要求192所述的双特异性抗体。
202.根据权利要求201所述的方法，其中所述神经退化性疾病是τ蛋白病。
203.根据权利要求202所述的方法，其中所述τ蛋白病是神经退化性τ蛋白病。
204.根据权利要求201至203中任一项所述的方法，其中所述神经退化性τ蛋白病选自由以下组成的组：阿尔茨海默氏病、原发性年龄相关τ蛋白病、进行性核上麻痹(PSP)、额颞叶性痴呆、与17号染色体相关的额颞叶性痴呆伴发帕金森氏症、嗜银颗粒性痴呆、关岛型肌萎缩侧索硬化症/帕金森氏症-痴呆复合征、皮质基底核退化症、慢性创伤性脑病、克-雅二氏病、拳击员痴呆、弥漫型神经原纤维缠结伴钙化、唐氏综合征、家族性英国型痴呆、家族性丹麦型痴呆、杰茨曼-斯脱司勒-史茵克氏病、球状胶质τ蛋白病、瓜德罗普岛型帕金森氏病伴发痴呆、瓜德罗普岛型PSP、哈勒沃登-施帕茨氏病、包涵体肌炎、多系统萎缩、强直性肌营养不良、神经原纤维缠结主导型痴呆、C型尼曼-皮克氏病、苍白球-桥脑-黑质退化、帕金森氏病、皮克氏病、脑炎后帕金森氏病、朊病毒蛋白型脑部淀粉样血管病、进行性皮质下胶质细胞增生症、亚急性硬化性全脑炎、亨廷顿氏病以及仅有神经原纤维缠结的痴呆。
205.根据权利要求204所述的方法，其中所述神经退化性τ蛋白病是阿尔茨海默氏病。

说明书全文

抗τ抗体及其使用方法

背景技术

[0001] τ蛋白(Tau protein)聚集和神经原纤维缠结是包括阿尔茨海默氏病(Alzheimer's disease)和额颞叶性痴呆在内的多种神经退化性疾病的共有特征。τ蛋白在神经元中大
量表达并且用于使微管稳定，并帮助微管蛋白组装成微管。τ蛋白磷酸化是调控τ蛋白功能的一种主要机制。然而，τ蛋白的异常过度磷酸化会引起τ蛋白聚集。相信在τ蛋白聚集起始之后，聚集物充当脑中天然τ蛋白错误折叠的模板(或“种子”)，引起τ蛋白聚集物的持续增多以及神经原纤维缠结的形成。
[0002] 仍需要靶向τ蛋白并防止τ蛋白播种和扩散的治疗剂。发明内容
[0003] 在一方面，提供特异性结合至人类τ蛋白的抗体(或其抗原结合部分)。在一些实施方案中，所述抗体识别在SEQ ID NO:1的残基111-125内的表位。在一些实施方案中，所述抗体识别包含SEQ ID NO:1的残基111-125内的至少6个氨基酸的表位。在一些实施方案中，所述抗体识别包含SEQ ID NO:1的残基111-125内的至少6个连续氨基酸的表位。在一些实施方案中，所述抗体包含一个或多个(例如一个、两个、三个、四个、五个或全部六个)选自由以下组成的组的互补决定区(CDR)：
[0004] (a)与SEQ ID NO:22的氨基酸序列具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)或相对于SEQ ID NO:22的氨基酸序列具有至多两个
氨基酸取代的重链CDR1；
[0005] (b)与SEQ ID NO:23的氨基酸序列具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)或相对于SEQ ID NO:23的氨基酸序列具有至多两个
氨基酸取代的重链CDR2；
[0006] (c)与SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)或相对于SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至多两个
氨基酸取代的重链CDR3；
[0007] (d)与SEQ ID NO:26及42中任一个的氨基酸序列具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)或相对于SEQ ID NO:26和42中任一个的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR1；
[0008] (e)与SEQ ID NO:27、43及50中任一个的氨基酸序列具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)或相对于SEQ ID NO:27、43和50中任一个的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR2；以及
[0009] (f)与SEQ ID NO:28、44、46及51中任一个的氨基酸序列具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)或相对于SEQ ID NO:28、44、46和
51中任一个的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR3。
[0010] 在一些实施方案中，所述抗体包含一个或多个(例如一个、两个、三个、四个、五个或全部六个)选自由以下组成的组的CDR：
[0011] (a)含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的重链CDR1；
[0012] (b)含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链CDR2；
[0013] (c)含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3；
[0014] (d)含SEQ ID NO:26和42中任一个的氨基酸序列的轻链CDR1；
[0015] (e)含SEQ ID NO:27、43和50中任一个的氨基酸序列的轻链CDR2；以及
[0016] (f)含SEQ ID NO:28、44、46和51中任一个的氨基酸序列的轻链CDR3。
[0017] 在一些实施方案中，所述抗体包括含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的重链CDR1、含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链CDR2和含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3。在一
些实施方案中，所述抗体包括含SEQ ID NO:26的氨基酸序列的轻链CDR1、含SEQ ID NO:27
的氨基酸序列的轻链CDR2和含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链CDR3。在一些实施方案
中，所述抗体包括含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的重链CDR1、含SEQ ID NO:23的氨基酸序
列的重链CDR2、含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3、含SEQ ID NO:26的氨基酸序列
的轻链CDR1、含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2以及含SEQ ID NO:28的氨基酸序列
的轻链CDR3。
[0018] 在一些实施方案中，所述抗体包括含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的重链CDR1、含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链CDR2和含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3。在一
些实施方案中，所述抗体包括含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的轻链CDR1、含SEQ ID NO:43
的氨基酸序列的轻链CDR2和含SEQ ID NO:44的氨基酸序列的轻链CDR3。在一些实施方案
中，所述抗体包括含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的重链CDR1、含SEQ ID NO:23的氨基酸序
列的重链CDR2、含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3、含SEQ ID NO:42的氨基酸序列
的轻链CDR1、含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的轻链CDR2以及含SEQ ID NO:44的氨基酸序列
的轻链CDR3。
[0019] 在一些实施方案中，所述抗体包括含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的重链CDR1、含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链CDR2和含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3。在一
些实施方案中，所述抗体包括含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的轻链CDR1、含SEQ ID NO:43
的氨基酸序列的轻链CDR2和含SEQ ID NO:46的氨基酸序列的轻链CDR3。在一些实施方案
中，所述抗体包括含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的重链CDR1、含SEQ ID NO:23的氨基酸序
列的重链CDR2、含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3、含SEQ ID NO:42的氨基酸序列
的轻链CDR1、含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的轻链CDR2以及含SEQ ID NO:46的氨基酸序列
的轻链CDR3。
[0020] 在一些实施方案中，所述抗体包括含与SEQ ID NO:21和40中的任一个具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列的重链可变区。在一些实施方案中，所述抗体包括含与SEQ ID NO:25、41和45中的任一个具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，所述抗体包括含与SEQ ID NO:21具有至少90％序列
同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列的重链可变区和含与SEQ ID NO:25具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或
100％序列同一性)的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，所述抗体包括含与SEQ ID NO:40具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列的重链可变区和含与SEQ ID NO:41具有至少90％序列同一性(90％、
92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，所述抗体包括含与SEQ ID NO:40具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、
96％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列的重链可变区和含与SEQ ID NO:45具
有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列的轻链可变区。
[0021] 在一些实施方案中，所述抗体包含一个或多个选自由以下组成的组的互补决定区(CDR)：
[0022] (a)与SEQ ID NO:22、150-154、420-437、586、587、617和620中任一个的氨基酸序列具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)或相对于SEQ ID NO:22、150-154、420-437、586、587、617和620中任一个的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR1；
[0023] (b)与SEQ ID NO:23、438-443、588和621中任一个的氨基酸序列具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)或相对于SEQ ID NO:23、
438-443、588和621中任一个的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR2；
[0024] (c)与SEQ ID NO:24、155和622中任一个的氨基酸序列具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)或相对于SEQ ID NO:24、155和622中任一个的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR3；
[0025] (d)与SEQ ID NO:26、156-158、444-459和618中任一个的氨基酸序列具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)或相对于SEQ ID NO:26、156-158、444-459和618中任一个的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链
CDR1；
[0026] (e)与SEQ ID NO:27和623的氨基酸序列具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)或相对于SEQ ID NO:27和623的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR2；以及
[0027] (f)与SEQ ID NO:28、159-162、460-462、619和624中任一个的氨基酸序列具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)或相对于SEQ ID NO:28、159-162、460-462、619和624中任一个的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR3。
[0028] 在一些实施方案中，所述抗体包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：
[0029] (a)含SEQ ID NO:22、150-154、420-437、586、587、617和620中任一个的氨基酸序列的重链CDR1；
[0030] (b)含SEQ ID NO:23、438-443、588和621中任一个的氨基酸序列的重链CDR2；
[0031] (c)含SEQ ID NO:24、155和622中任一个的氨基酸序列的重链CDR3；
[0032] (d)含SEQ ID NO:26、156-158、444-459和618中任一个的氨基酸序列的轻链CDR1；
[0033] (e)含SEQ ID NO:27和623的氨基酸序列的轻链CDR2；以及
[0034] (f)含SEQ ID NO:28、159-162、460-462、619和624中任一个的氨基酸序列的轻链CDR3。
[0035] 在一些实施方案中，所述抗体包括含SEQ ID NO:22、150-154、420-437、586、587、617和620中任一个的氨基酸序列的重链CDR1；含SEQ ID NO:23、438-443、588和621中任一个的氨基酸序列的重链CDR2；以及含SEQ ID NO:24、155和622中任一个的氨基酸序列的重
链CDR3。
[0036] 在一些实施方案中，所述抗体包括含SEQ ID NO:26、156-158、444-459和618中任一个的氨基酸序列的轻链CDR1；含SEQ ID NO:27和623的氨基酸序列的轻链CDR2；以及含
SEQ ID NO:28、159-162、460-462、619和624中任一个的氨基酸序列的轻链CDR3。
[0037] 在一些实施方案中，所述抗体包括含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的重链CDR1、含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链CDR2、含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3、含SEQ ID NO:450的氨基酸序列的轻链CDR1、含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2以及含SEQ ID NO:461的氨基酸序列的轻链CDR3。
[0038] 在一些实施方案中，所述抗体包括含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的重链CDR1、含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链CDR2、含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3、含SEQ ID NO:459的氨基酸序列的轻链CDR1、含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2以及含SEQ ID NO:461的氨基酸序列的轻链CDR3。
[0039] 在一些实施方案中，所述抗体包括含SEQ ID NO:151的氨基酸序列的重链CDR1、含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链CDR2、含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3、含SEQ ID NO:26的氨基酸序列的轻链CDR1、含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2以及含SEQ 
ID NO:28的氨基酸序列的轻链CDR3。
[0040] 在一些实施方案中，所述抗体包括含SEQ ID NO:151的氨基酸序列的重链CDR1、含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链CDR2、含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3、含SEQ ID NO:156的氨基酸序列的轻链CDR1、含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2以及含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链CDR3。
[0041] 在一些实施方案中，所述抗体包括含SEQ ID NO:151的氨基酸序列的重链CDR1、含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链CDR2、含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3、含SEQ ID NO:158的氨基酸序列的轻链CDR1、含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2以及含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链CDR3。
[0042] 在一些实施方案中，所述抗体包括含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的重链CDR1、含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链CDR2、含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3、含SEQ ID NO:158的氨基酸序列的轻链CDR1、含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2以及含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链CDR3。
[0043] 在一些实施方案中，所述抗体包括含SEQ ID NO:150的氨基酸序列的重链CDR1、含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链CDR2、含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3、含SEQ ID NO:158的氨基酸序列的轻链CDR1、含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2以及含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链CDR3。
[0044] 在一些实施方案中，所述抗体包括含SEQ ID NO:153的氨基酸序列的重链CDR1、含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链CDR2、含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3、含SEQ ID NO:158的氨基酸序列的轻链CDR1、含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2以及含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链CDR3。
[0045] 在一些实施方案中，所述抗体包括含SEQ ID NO:154的氨基酸序列的重链CDR1、含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链CDR2、含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3、含SEQ ID NO:158的氨基酸序列的轻链CDR1、含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2以及含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链CDR3。
[0046] 在一些实施方案中，所述抗体包括含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的重链CDR1、含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链CDR2、含SEQ ID NO:155的氨基酸序列的重链CDR3、含
SEQ ID NO:158的氨基酸序列的轻链CDR1、含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2以及
含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链CDR3。
[0047] 在一些实施方案中，所述抗体包括含SEQ ID NO:150的氨基酸序列的重链CDR1、含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链CDR2、含SEQ ID NO:155的氨基酸序列的重链CDR3、含
SEQ ID NO:158的氨基酸序列的轻链CDR1、含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2以及
含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链CDR3。
[0048] 在一些实施方案中，所述抗体包括含SEQ ID NO:151的氨基酸序列的重链CDR1、含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链CDR2、含SEQ ID NO:155的氨基酸序列的重链CDR3、含
SEQ ID NO:158的氨基酸序列的轻链CDR1、含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2以及
含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链CDR3。
[0049] 在一些实施方案中，所述抗体包括含SEQ ID NO:153的氨基酸序列的重链CDR1、含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链CDR2、含SEQ ID NO:155的氨基酸序列的重链CDR3、含
SEQ ID NO:158的氨基酸序列的轻链CDR1、含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2以及
含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链CDR3。
[0050] 在一些实施方案中，所述抗体包括含SEQ ID NO:154的氨基酸序列的重链CDR1、含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链CDR2、含SEQ ID NO:155的氨基酸序列的重链CDR3、含
SEQ ID NO:158的氨基酸序列的轻链CDR1、含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2以及
含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链CDR3。
[0051] 在一些实施方案中，所述抗体包括含与SEQ ID NO:145-148中的任一个具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列的重链可变区。
[0052] 在一些实施方案中，所述抗体包括含与SEQ ID NO:149具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列的轻链可变区。
[0053] 在一些实施方案中，所述抗体包括含与SEQ ID NO:145具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列的重链可变区和含与SEQ ID NO:149具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列的轻链可变区。
[0054] 在一些实施方案中，所述抗体包括含与SEQ ID NO:146具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列的重链可变区和含与SEQ ID NO:149具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列的轻链可变区。
[0055] 在一些实施方案中，所述抗体包括含与SEQ ID NO:147具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列的重链可变区和含与SEQ ID NO:149具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列的轻链可变区。
[0056] 在一些实施方案中，所述抗体包括含与SEQ ID NO:148具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列的重链可变区和含与SEQ ID NO:149具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列的轻链可变区。
[0057] 在一些实施方案中，所述抗体包括含与SEQ ID NO:146具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列的重链可变区和含与SEQ ID NO:463具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列的轻链可变区。
[0058] 在一些实施方案中，所述抗体包括含与SEQ ID NO:146具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列的重链可变区和含与SEQ ID NO:464具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列的轻链可变区。
[0059] 在一些实施方案中，所述抗体包含一个或多个选自由以下组成的组的互补决定区(CDR)：(a)与SEQ ID NO:151、153、426-430、432-437、586和587中任一个的氨基酸序列具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)或相对于SEQ ID NO:151、153、426-430、432-437、586和587中任一个的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR1；(b)与SEQ ID NO:23和588中任一个的氨基酸序列具有至少90％序列同一
性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)或相对于SEQ ID NO:23和588中任一个的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR2；(c)与SEQ ID NO:24的氨基酸
序列具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)或相对于SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR3；(d)与SEQ ID 
NO:158和448-458中任一个的氨基酸序列具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、
96％、98％、99％或100％序列同一性)或相对于SEQ ID NO:158和448-458中任一个的氨基
酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR1；(e)与SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有至少
90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)或相对于SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR2；以及(f)与SEQ ID NO:28和461
中任一个的氨基酸序列具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或
100％序列同一性)或相对于SEQ ID NO:28和461中任一个的氨基酸序列具有至多两个氨基
酸取代的轻链CDR3。
[0060] 在一些实施方案中，所述抗体包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：(a)包含SEQ ID NO:151、153、426-430、432-437、586和587中任一个的氨基酸序列的重链CDR1；
(b)包含SEQ ID NO:23和588中任一个的氨基酸序列的重链CDR2；(c)包含SEQ ID NO:24的
氨基酸序列的重链CDR3；(d)包含SEQ ID NO:158和448-458中任一个的氨基酸序列的轻链
CDR1；(e)包含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2；以及(f)包含SEQ ID NO:28和461中任一个的氨基酸序列的轻链CDR3。
[0061] 在一些实施方案中，所述抗体包括(a)含SEQ ID NO:151、153、426-430、432-437、586和587中任一个的氨基酸序列的重链CDR1；(b)含SEQ ID NO:23和588中任一个的氨基酸
序列的重链CDR2；以及(c)含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3。
[0062] 在一些实施方案中，所述抗体包括(a)含SEQ ID NO:158和448-458中任一个的氨基酸序列的轻链CDR1；(b)含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2；以及(c)含SEQ ID 
NO:28和461中任一个的氨基酸序列的轻链CDR3。
[0063] 在一些实施方案中，所述抗体包括(a)含SEQ ID NO:151、153、426-430、432-437、586和587中任一个的氨基酸序列的重链CDR1；(b)含SEQ ID NO:23和588中任一个的氨基酸
序列的重链CDR2；(c)含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3；(d)含SEQ ID NO:158和
448-458中任一个的氨基酸序列的轻链CDR1；(e)含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链
CDR2；以及(f)含SEQ ID NO:28和461中任一个的氨基酸序列的轻链CDR3。
[0064] 在一些实施方案中，特异性结合至人类τ蛋白的抗体(或其抗原结合部分)识别在SEQ ID NO:1的残基251-270和/或残基346-360内的表位。在一些实施方案中，所述抗体识
别在SEQ ID NO:1的残基251-270内的表位。在一些实施方案中，所述抗体识别在SEQ ID 
NO:1的残基346-360内的表位。在一些实施方案中，所述抗体识别在SEQ ID NO:1的残基
251-270内的表位且识别在SEQ ID NO:1的残基346-360内的表位。在一些实施方案中，所述抗体识别在SEQ ID NO:1的残基256-270内的表位。在一些实施方案中，所述抗体识别包含
在SEQ ID NO:1的残基251-270和/或残基346-360内的序列SKIGS的表位。
[0065] 在一些实施方案中，所述抗体包含一个或多个(例如一个、两个、三个、四个、五个或全部六个)选自由以下组成的组的CDR：
[0066] (a)与SEQ ID NO:9、17和47中任一个的氨基酸序列具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)或相对于SEQ ID NO:9、17和47中任一个的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR1；
[0067] (b)与SEQ ID NO:10的氨基酸序列具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)或相对于SEQ ID NO:10的氨基酸序列具有至多两个
氨基酸取代的重链CDR2；
[0068] (c)与SEQ ID NO:11、18、30、33和48中任一个的氨基酸序列具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)或相对于SEQ ID NO:11、18、
30、33和48中任一个的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR3；
[0069] (d)与SEQ ID NO:13的氨基酸序列具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)或相对于SEQ ID NO:13的氨基酸序列具有至多两个
氨基酸取代的轻链CDR1；
[0070] (e)与SEQ ID NO:14的氨基酸序列具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)或相对于SEQ ID NO:14的氨基酸序列具有至多两个
氨基酸取代的轻链CDR2；以及
[0071] (f)与SEQ ID NO:15、20和49中任一个的氨基酸序列具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)或相对于SEQ ID NO:15、20和49中任一个的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR3。
[0072] 在一些实施方案中，所述抗体包含一个或多个(例如一个、两个、三个、四个、五个或全部六个)选自由以下组成的组的CDR：
[0073] (a)含SEQ ID NO:9、17和47中任一个的氨基酸序列的重链CDR1；
[0074] (b)含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链CDR2；
[0075] (c)含SEQ ID NO:11、18、30、33和48中任一个的氨基酸序列的重链CDR3；
[0076] (d)含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的轻链CDR1；
[0077] (e)含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的轻链CDR2；以及
[0078] (f)含SEQ ID NO:15、20和49中任一个的氨基酸序列的轻链CDR3。
[0079] 在一些实施方案中，所述抗体包括含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链CDR1、含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链CDR2和含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的重链CDR3。在一
些实施方案中，所述抗体包括含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的轻链CDR1、含SEQ ID NO:14
的氨基酸序列的轻链CDR2和含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的轻链CDR3。在一些实施方案
中，所述抗体包括含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链CDR1、含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链CDR2、含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的重链CDR3、含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的
轻链CDR1、含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的轻链CDR2以及含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的
轻链CDR3。
[0080] 在一些实施方案中，所述抗体包括含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的重链CDR1、含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链CDR2和含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的重链CDR3。在一
些实施方案中，所述抗体包括含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的轻链CDR1、含SEQ ID NO:14
的氨基酸序列的轻链CDR2和含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的轻链CDR3。在一些实施方案
中，所述抗体包括含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的重链CDR1、含SEQ ID NO:10的氨基酸序
列的重链CDR2、含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的重链CDR3、含SEQ ID NO:13的氨基酸序列
的轻链CDR1、含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的轻链CDR2以及含SEQ ID NO:20的氨基酸序列
的轻链CDR3。
[0081] 在一些实施方案中，所述抗体包括含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链CDR1、含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链CDR2和含SEQ ID NO:30的氨基酸序列的重链CDR3。在一
些实施方案中，所述抗体包括含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的轻链CDR1、含SEQ ID NO:14
的氨基酸序列的轻链CDR2和含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的轻链CDR3。在一些实施方案
中，所述抗体包括含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链CDR1、含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链CDR2、含SEQ ID NO:30的氨基酸序列的重链CDR3、含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的
轻链CDR1、含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的轻链CDR2以及含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的
轻链CDR3。
[0082] 在一些实施方案中，所述抗体包括含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链CDR1、含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链CDR2和含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的重链CDR3。在一
些实施方案中，所述抗体包括含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的轻链CDR1、含SEQ ID NO:14
的氨基酸序列的轻链CDR2和含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的轻链CDR3。在一些实施方案
中，所述抗体包括含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链CDR1、含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链CDR2、含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的重链CDR3、含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的
轻链CDR1、含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的轻链CDR2以及含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的
轻链CDR3。
[0083] 在一些实施方案中，所述抗体包括含与SEQ ID NO:8、16、29和32中的任一个具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列的重链可变区。在一些实施方案中，所述抗体包括含与SEQ ID NO:12、19、31和34中的任一个具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，所述抗体包括含与SEQ ID NO:8、16、29和32中的任一个具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列的重链可变区和含与SEQ ID NO:12、19、31和34中的任一个具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，所述抗体包括与SEQ ID NO:8具有至少90％序列同一性(90％、
92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列和含与SEQ ID NO:12具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，所述抗体包括含与SEQ ID NO:16具有至少90％序列
同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列的重链可变区和含与SEQ ID NO:19具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或
100％序列同一性)的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，所述抗体包括含与SEQ ID NO:29具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列的重链可变区和含与SEQ ID NO:31具有至少90％序列同一性(90％、
92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，所述抗体包括含与SEQ ID NO:32具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、
96％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列的重链可变区和含与SEQ ID NO:34具
有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列的轻链可变区。
[0084] 另一方面，提供一种分离的抗体或其抗原结合部分，其特异性结合至人类τ蛋白并识别在SEQ ID NO:1的残基186-205内的表位。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合部分识别在SEQ ID NO:1的残基186-200或残基191-205内的表位。
[0085] 在一些实施方案中，所述抗体包含一个或多个选自由以下组成的组的互补决定区(CDR)：
[0086] (a)与SEQ ID NO:168的氨基酸序列具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)或相对于SEQ ID NO:168的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR1；
[0087] (b)与SEQ ID NO:169的氨基酸序列具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)或相对于SEQ ID NO:169的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR2；
[0088] (c)与SEQ ID NO:170的氨基酸序列具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)或相对于SEQ ID NO:170的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR3；
[0089] (d)与SEQ ID NO:172的氨基酸序列具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)或相对于SEQ ID NO:172的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR1；
[0090] (e)与SEQ ID NO:173的氨基酸序列具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)或相对于SEQ ID NO:173的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR2；以及
[0091] (f)与SEQ ID NO:174的氨基酸序列具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)或相对于SEQ ID NO:174的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR3。
[0092] 在一些实施方案中，所述抗体包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：含SEQ ID NO:168的氨基酸序列的重链CDR1、含SEQ ID NO:169的氨基酸序列的重链CDR2、含SEQ 
ID NO:170的氨基酸序列的重链CDR3、含SEQ ID NO:172的氨基酸序列的轻链CDR1、含SEQ 
ID NO:173的氨基酸序列的轻链CDR2以及含SEQ ID NO:174的氨基酸序列的轻链CDR3。在一
些实施方案中，所述抗体包括含SEQ ID NO:168的氨基酸序列的重链CDR1、含SEQ ID NO:
169的氨基酸序列的重链CDR2和含SEQ ID NO:170的氨基酸序列的重链CDR3。在一些实施方
案中，所述抗体包括含SEQ ID NO:172的氨基酸序列的轻链CDR1、含SEQ ID NO:173的氨基
酸序列的轻链CDR2和含SEQ ID NO:174的氨基酸序列的轻链CDR3。
[0093] 在一些实施方案中，所述抗体包括含SEQ ID NO:168的氨基酸序列的重链CDR1、含SEQ ID NO:169的氨基酸序列的重链CDR2、含SEQ ID NO:170的氨基酸序列的重链CDR3、含
SEQ ID NO:172的氨基酸序列的轻链CDR1、含SEQ ID NO:173的氨基酸序列的轻链CDR2以及
含SEQ ID NO:174的氨基酸序列的轻链CDR3。
[0094] 在一些实施方案中，所述抗体包括含与SEQ ID NO:167具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列的重链可变区。在一些实施方案中，所述抗体包括含与SEQ ID NO:171具有至少90％序列同一性(90％、92％、
94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，所述抗体包括含与SEQ ID NO:167具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、
98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列的重链可变区和含与SEQ ID NO:171具有至
少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列的轻链可变区。
[0095] 另一方面，提供一种分离的抗体或其抗原结合部分，其特异性结合至人类τ蛋白并识别与由抗体克隆19F7.C9或24D2.B2所识别的表位相同或大体上相同的表位。在一些实施方案中，由抗体克隆19F7.C9或24D2.B2所识别的表位包含一个或多个在SEQ ID NO:1的残
基50-421内的残基。在一些实施方案中，由抗体克隆19F7.C9或24D2.B2所识别的表位是在
SEQ ID NO:1的残基50-421内。
[0096] 在一些实施方案中，在本文所述的抗τ抗体中的任一种中，所述抗体包含第一Fc多肽且任选地包含第二Fc多肽。在一些实施方案中，所述抗体包含第一Fc多肽和第二Fc多肽。在一些实施方案中，所述第一Fc多肽是修饰的Fc多肽和/或所述第二Fc多肽是修饰的Fc多
肽。
[0097] 在一些实施方案中，在本文所述的抗τ抗体中的任一种中，所述抗体包括：
[0098] (a)含特异性结合至所述人类τ蛋白的第一可变区的第一抗原结合部分，其中所述第一抗原结合部分包括(i)含第一Fc多肽的第一重链和(ii)第一轻链；以及
[0099] (b)含特异性结合至所述人类τ蛋白的第二可变区的第二抗原结合部分，其中所述第二抗原结合部分包括(i)含第二Fc多肽的第二重链和(ii)第二轻链；
[0100] 其中所述第一Fc多肽与所述第二Fc多肽形成Fc二聚体。
[0101] 在一些实施方案中，所述第一Fc多肽是修饰的Fc多肽和/或所述第二Fc多肽是修饰的Fc多肽。
[0102] 在一些实施方案中，所述第一与第二可变区识别人类τ蛋白中的相同表位。在其它实施方案中，所述第一与第二可变区识别人类τ蛋白中的不同表位。
[0103] 在一些实施方案中，所述第一Fc多肽和所述第二Fc多肽各自含有促进异二聚化的修饰。在一些实施方案中，根据EU编号，所述Fc多肽之一具有T366W取代且所述另一Fc多肽具有T366S、L368A和Y407V取代。
[0104] 在一些实施方案中，所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽包含天然FcRn结合位点。在一些实施方案中，所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽包含改变FcRn结合的修饰。
[0105] 在一些实施方案中，所述第一Fc多肽和所述第二Fc多肽不具有效应子功能。在一些实施方案中，所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽包括减弱效应子功能的修饰。在一些实施方案中，所述减弱效应子功能的修饰包含根据EU编号在234位处的Ala和在235位处的
Ala取代。
[0106] 在一些实施方案中，所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽相对于天然Fc序列包含延长血清半衰期的氨基酸变化。在一些实施方案中，所述氨基酸变化包含根据EU编号在
252位处的Tyr、在254位处的Thr和在256位处的Glu取代。或者，在其它实施方案中，所述氨基酸变化包含根据EU编号在428位处的Leu和在434位处的Ser取代。或者，在其它实施方案
中，所述氨基酸变化包含根据EU编号在434位处的Ser或Ala取代。
[0107] 在一些实施方案中，所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽特异性结合至转铁蛋白受体。在一些实施方案中，根据EU编号，所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽在选自由
384、386、387、388、389、390、413、416和421组成的组的位置处包含至少两个取代。在一些实施方案中，所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽在所述位置中的至少三个、四个、五个、六个、七个、八个或九个处包含取代。
[0108] 在一些实施方案中，根据EU编号，所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽还在包含380、391、392和415的位置处包含一个、两个、三个或四个取代。在一些实施方案中，根据EU编号，所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽还在包含414、424和426的位置处包含一个、两个或三个取代。
[0109] 在一些实施方案中，所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽在388位包含Trp。在一些实施方案中，所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽在421位包含芳族氨基酸。在一些实
施方案中，在421位的芳香族氨基酸是Trp或Phe。
[0110] 在一些实施方案中，所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽包含至少一个选自以下的位置：380位是Trp、Leu或Glu；384位是Tyr或Phe；386位是Thr；387位是Glu；388位是Trp；389位是Ser、Ala、Val或Asn；390位是Ser或Asn；413位是Thr或Ser；415位是Glu或Ser；
416位是Glu；以及421位是Phe。
[0111] 在一些实施方案中，所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽包含2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个选自以下的位置：380位是Trp、Leu或Glu；384位是Tyr或Phe；386位是Thr；387位是Glu；388位是Trp；389位是Ser、Ala、Val或Asn；390位是Ser或Asn；413位是Thr或Ser；415位是Glu或Ser；416位是Glu；以及421位是Phe。
[0112] 在一些实施方案中，所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽包含如下11个位置：380位是Trp、Leu或Glu；384位是Tyr或Phe；386位是Thr；387位是Glu；388位是Trp；389位是Ser、Ala、Val或Asn；390位是Ser或Asn；413位是Thr或Ser；415位是Glu或Ser；416位是Glu；
以及421位是Phe。
[0113] 在一些实施方案中，所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽包含与SEQ ID NO:214-218、238、240-270和469-475中任一个的氨基酸111-217具有至少85％同一性、至少
90％同一性或至少95％同一性的CH3结构域。在一些实施方案中，在对应于SEQ ID NO:214-
218、238、240-270和469-475中任一个的EU索引位置380、384、386、387、388、389、390、391、
392、413、414、415、416、421、424和426的位置中的至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16个处的残基未缺失或取代。
[0114] 在一些实施方案中，所述抗体包含具有SEQ ID NO:283-286和626-628中任一个的序列的第一Fc多肽。在一些实施方案中，所述抗体包含具有SEQ ID NO:279-282和629-631
中任一个的序列的第二Fc多肽。
[0115] 在一些实施方案中，在本文所述的抗τ抗体中的任一种中，所述抗体包含具有SEQ ID NO:271的序列的第一Fc多肽和具有SEQ ID NO:279的序列的第二Fc多肽。在一些实施方案中，所述抗τ抗体包含具有SEQ ID NO:272的序列的第一Fc多肽和具有SEQ ID NO:280的
序列的第二Fc多肽。在一些实施方案中，所述抗τ抗体包含具有SEQ ID NO:273的序列的第一Fc多肽和具有SEQ ID NO:281的序列的第二Fc多肽。在一些实施方案中，所述抗τ抗体包含具有SEQ ID NO:274的序列的第一Fc多肽和具有SEQ ID NO:282的序列的第二Fc多肽。
[0116] 在一些实施方案中，在本文所述的抗τ抗体中的任一种中，所述抗体包含具有SEQ ID NO:275的序列的第一Fc多肽和具有SEQ ID NO:283的序列的第二Fc多肽。在一些实施方案中，所述抗τ抗体包含具有SEQ ID NO:276的序列的第一Fc多肽和具有SEQ ID NO:284的
序列的第二Fc多肽。在一些实施方案中，所述抗τ抗体包含具有SEQ ID NO:277的序列的第一Fc多肽和具有SEQ ID NO:285的序列的第二Fc多肽。在一些实施方案中，所述抗τ抗体包含具有SEQ ID NO:278的序列的第一Fc多肽和具有SEQ ID NO:286的序列的第二Fc多肽。
[0117] 在一些实施方案中，在本文所述的抗τ抗体中的任一种中，所述抗体包含具有SEQ ID NO:271的序列的第一Fc多肽和具有SEQ ID NO:275的序列的第二Fc多肽。在一些实施方案中，所述抗τ抗体包含具有SEQ ID NO:272的序列的第一Fc多肽和具有SEQ ID NO:276的
序列的第二Fc多肽。在一些实施方案中，所述抗τ抗体包含具有SEQ ID NO:273的序列的第一Fc多肽和具有SEQ ID NO:277的序列的第二Fc多肽。在一些实施方案中，所述抗τ抗体包含具有SEQ ID NO:274的序列的第一Fc多肽和具有SEQ ID NO:278的序列的第二Fc多肽。
[0118] 在一些实施方案中，所述抗体的第一Fc多肽和/或第二Fc多肽结合至转铁蛋白受体的顶端结构域。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合部分与所述转铁蛋白受体的
结合大体上不抑制转铁蛋白与所述转铁蛋白受体的结合。
[0119] 在一些实施方案中，第一Fc多肽和/或第二Fc多肽与相应野生型Fc多肽(例如作为人类IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc多肽的野生型Fc多肽)具有至少75％，或至少80％、90％、
92％或95％氨基酸序列同一性。
[0120] 在一些实施方案中，脑中所述抗体或其抗原结合部分的吸收高于在第一Fc多肽和/或第二Fc多肽中无引起转铁蛋白受体结合的修饰的所述抗体或其抗原结合部分的吸
收。在一些实施方案中，脑中所述抗体或其抗原结合部分的吸收比在第一Fc多肽和/或第二Fc多肽中无引起转铁蛋白受体结合的修饰的所述抗体或其抗原结合部分的吸收高至少2、
3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95或100倍。
[0121] 在一些实施方案中，所述抗τ抗体中Fc多肽之一未被修饰成结合至血脑屏障受体且所述抗τ抗体中的另一Fc多肽被修饰成特异性结合至转铁蛋白受体。
[0122] 另一方面，本公开的特征在于一种分离的抗体或其抗原结合部分，其包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：(a)含SEQ ID NO:586的氨基酸序列的重链CDR1；(b)含SEQ ID NO:588的氨基酸序列的重链CDR2；(c)含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3；(d)含SEQ ID NO:158的氨基酸序列的轻链CDR1；(e)含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2；
以及(f)含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链CDR3。在一些实施方案中，所述分离的抗体包括(a)含SEQ ID NO:586的氨基酸序列的重链CDR1；(b)含SEQ ID NO:588的氨基酸序列的重
链CDR2；(c)含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3；(d)含SEQ ID NO:158的氨基酸序列的轻链CDR1；(e)含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2；以及(f)含SEQ ID NO:28的氨
基酸序列的轻链CDR3。在一些实施方案中，所述分离的抗体包括含与SEQ ID NO:602具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列的重链可变区和含与SEQ ID NO:604具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、
98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，所述分离的抗体包括含SEQ ID NO:602的氨基酸序列的重链可变区和含SEQ ID NO:604的氨基酸序
列的轻链可变区。
[0123] 另一方面，本公开的特征在于一种分离的抗体或其抗原结合部分，其包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：(a)含SEQ ID NO:586的氨基酸序列的重链CDR1；(b)含SEQ ID NO:588的氨基酸序列的重链CDR2；(c)含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3；(d)含SEQ ID NO:158的氨基酸序列的轻链CDR1；(e)含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2；
以及(f)含SEQ ID NO:461的氨基酸序列的轻链CDR3。在一些实施方案中，所述分离的抗体
包括(a)含SEQ ID NO:586的氨基酸序列的重链CDR1；(b)含SEQ ID NO:588的氨基酸序列的
重链CDR2；(c)含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3；(d)含SEQ ID NO:158的氨基酸序列的轻链CDR1；(e)含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2；以及(f)含SEQ ID NO:461的氨基酸序列的轻链CDR3。在一些实施方案中，所述分离的抗体包括含与SEQ ID NO:602具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列的重链可变区和含与SEQ ID NO:616具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、
98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，所述分离的抗体包括含SEQ ID NO:602的序列的重链可变区和含SEQ ID NO:616的序列的轻链可变
区。
[0124] 另一方面，本公开的特征在于一种分离的抗体或其抗原结合部分，其包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：(a)含SEQ ID NO:586的氨基酸序列的重链CDR1；(b)含SEQ ID NO:588的氨基酸序列的重链CDR2；(c)含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3；(d)含SEQ ID NO:450的氨基酸序列的轻链CDR1；(e)含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2；
以及(f)含SEQ ID NO:461的氨基酸序列的轻链CDR3。在一些实施方案中，所述分离的抗体
包括(a)含SEQ ID NO:586的氨基酸序列的重链CDR1；(b)含SEQ ID NO:588的氨基酸序列的
重链CDR2；(c)含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3；(d)含SEQ ID NO:450的氨基酸序列的轻链CDR1；(e)含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2；以及(f)含SEQ ID NO:461的氨基酸序列的轻链CDR3。在一些实施方案中，所述分离的抗体包括含与SEQ ID NO:602具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列的重链可变区和含与SEQ ID NO:463具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、
98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，所述分离的抗体包括含SEQ ID NO:602的序列的重链可变区和含SEQ ID NO:463的序列的轻链可变
区。
[0125] 另一方面，本公开的特征在于一种分离的抗体或其抗原结合部分，其包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：(a)含SEQ ID NO:587的氨基酸序列的重链CDR1；(b)含SEQ ID NO:588的氨基酸序列的重链CDR2；(c)含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3；(d)含SEQ ID NO:158的氨基酸序列的轻链CDR1；(e)含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2；
以及(f)含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链CDR3。在一些实施方案中，所述分离的抗体包括(a)含SEQ ID NO:587的氨基酸序列的重链CDR1；(b)含SEQ ID NO:588的氨基酸序列的重
链CDR2；(c)含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3；(d)含SEQ ID NO:158的氨基酸序列的轻链CDR1；(e)含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2；以及(f)含SEQ ID NO:28的氨
基酸序列的轻链CDR3。在一些实施方案中，所述分离的抗体包括含与SEQ ID NO:603具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列的重链可变区和含与SEQ ID NO:604具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、
98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，所述分离的抗体包括含SEQ ID NO:603的序列的重链可变区和含SEQ ID NO:604的序列的轻链可变
区。
[0126] 另一方面，本公开的特征在于一种分离的抗体或其抗原结合部分，其包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：(a)含SEQ ID NO:587的氨基酸序列的重链CDR1；(b)含SEQ ID NO:588的氨基酸序列的重链CDR2；(c)含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3；(d)含SEQ ID NO:158的氨基酸序列的轻链CDR1；(e)含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2；
以及(f)含SEQ ID NO:461的氨基酸序列的轻链CDR3。在一些实施方案中，所述分离的抗体
包括(a)含SEQ ID NO:587的氨基酸序列的重链CDR1；(b)含SEQ ID NO:588的氨基酸序列的
重链CDR2；(c)含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3；(d)含SEQ ID NO:158的氨基酸序列的轻链CDR1；(e)含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2；以及(f)含SEQ ID NO:461的氨基酸序列的轻链CDR3。在一些实施方案中，所述分离的抗体包括含与SEQ ID NO:603具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列的重链可变区和含与SEQ ID NO:616具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、
98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，所述分离的抗体包括含SEQ ID NO:603的序列的重链可变区和含SEQ ID NO:616的序列的轻链可变
区。
[0127] 另一方面，本公开的特征在于一种分离的抗体或其抗原结合部分，其包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：(a)含SEQ ID NO:587的氨基酸序列的重链CDR1；(b)含SEQ ID NO:588的氨基酸序列的重链CDR2；(c)含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3；(d)含SEQ ID NO:450的氨基酸序列的轻链CDR1；(e)含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2；
以及(f)含SEQ ID NO:461的氨基酸序列的轻链CDR3。在一些实施方案中，所述分离的抗体
包括(a)含SEQ ID NO:587的氨基酸序列的重链CDR1；(b)含SEQ ID NO:588的氨基酸序列的
重链CDR2；(c)含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3；(d)含SEQ ID NO:450的氨基酸序列的轻链CDR1；(e)含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2；以及(f)含SEQ ID NO:461的氨基酸序列的轻链CDR3。在一些实施方案中，所述分离的抗体包括含与SEQ ID NO:603具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列的重链可变区和含与SEQ ID NO:463具有至少90％序列同一性(90％、92％、94％、96％、
98％、99％或100％序列同一性)的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，所述分离的抗体包括含SEQ ID NO:603的序列的重链可变区和含SEQ ID NO:463的序列的轻链可变
区。
[0128] 在前六个方面的一些实施方案中，所述分离的抗体包括含SEQ ID NO:342-353和516-522中任一个的序列的修饰的Fc多肽。
[0129] 在前六个方面的一些实施方案中，所述分离的抗体包括含SEQ ID NO:354-365和523-529中任一个的序列的修饰的Fc多肽。
[0130] 在前六个方面的一些实施方案中，所述分离的抗体包括含SEQ ID NO:366-377和530-536中任一个的序列的修饰的Fc多肽。
[0131] 在前六个方面的一些实施方案中，所述分离的抗体包括含SEQ ID NO:378-389和537-543中任一个的序列的修饰的Fc多肽。
[0132] 在前六个方面的一些实施方案中，所述分离的抗体包括含SEQ ID NO:390-401和544-550中任一个的序列的修饰的Fc多肽。
[0133] 在前六个方面的一些实施方案中，所述分离的抗体包括含SEQ ID NO:402-413和551-557中任一个的序列的修饰的Fc多肽。
[0134] 在前六个方面的一些实施方案中，所述分离的抗体包括含SEQ ID NO:271-278、476-479和558-564中任一个的序列的修饰的Fc多肽。
[0135] 在前六个方面的一些实施方案中，所述分离的抗体包括含SEQ ID NO:480-491和565-571中任一个的序列的修饰的Fc多肽。
[0136] 在前六个方面的一些实施方案中，所述分离的抗体包括含SEQ ID NO:492-503和572-578中任一个的序列的修饰的Fc多肽。
[0137] 在前六个方面的一些实施方案中，所述分离的抗体包括含SEQ ID NO:504-515和579-585中任一个的序列的修饰的Fc多肽。
[0138] 在一些实施方案中，所述修饰的Fc多肽与所述分离的抗体的重链可变区融合。
[0139] 在一些实施方案中，所述修饰的Fc多肽结合至转铁蛋白受体的顶端结构域。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合部分与所述转铁蛋白受体的结合大体上不抑制转铁
蛋白与所述转铁蛋白受体的结合。
[0140] 在一些实施方案中，所述修饰的Fc多肽与相应野生型Fc多肽具有至少75％，或至少80％、90％、92％或95％氨基酸序列同一性。在一些实施方案中，所述相应野生型Fc多肽是人类IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc多肽。
[0141] 在一些实施方案中，脑中所述抗体或其抗原结合部分的吸收比无引起转铁蛋白受体结合的修饰的Fc多肽的所述抗体或其抗原结合部分的吸收高至少十倍。
[0142] 在一些实施方案中，所述抗体(或其抗原结合部分)以小于约50nM的结合亲和力特异性结合至人类τ蛋白。在一些实施方案中，所述抗体以约1pM至约50nM的结合亲和力特异性结合至人类τ蛋白。在一些实施方案中，所述抗体以约50pM至约50nM的结合亲和力特异性结合至人类τ蛋白。在一些实施方案中，所述抗体特异性结合至磷酸化的人类τ蛋白和/或未磷酸化的人类τ蛋白。在一些实施方案中，所述抗体特异性结合至磷酸化的人类τ蛋白和未磷酸化的人类τ蛋白两者。在一些实施方案中，所述抗体特异性结合至两种或更多种选自由以下组成的组的人类τ蛋白的剪接同功型：2N4R、2N3R、1N4R、1N3R、0N4R和0N3R。在一些实施方案中，所述抗体特异性结合至人类τ蛋白的所有剪接同功型2N4R、2N3R、1N4R、1N3R、0N4R和0N3R。在一些实施方案中，所述抗体特异性结合至剪接同功型2N4R、2N3R、1N4R、1N3R、
0N4R和0N3R中的两种或更多种(例如2、3、4、5或6种)的未磷酸化形式和/或磷酸化形式。在一些实施方案中，所述抗体特异性结合至剪接同功型2N4R、2N3R、1N4R、1N3R、0N4R和0N3R各自的未磷酸化形式和磷酸化形式。在一些实施方案中，所述抗体与食蟹猕猴τ蛋白和/或小鼠τ蛋白展现交叉反应性。
[0143] 在一些实施方案中，所述抗体(或其抗原结合部分)是单克隆抗体。在一些实施方案中，所述抗体是嵌合抗体。在一些实施方案中，所述抗体是人源化抗体。在一些实施方案中，所述抗体是完全人类抗体。在一些实施方案中，所述抗原结合部分是Fab、F(ab')2、scFv或二价scFv。
[0144] 另一方面，提供特异性结合至人类τ蛋白的抗原结合片段。在一些实施方案中，所述抗原结合片段另外包含Fc多肽。在一些实施方案中，所述Fc多肽是修饰的Fc多肽。在一些实施方案中，所述Fc多肽含有一种或多种本文所述的修饰，例如以促进异二聚化、减弱效应子功能、延长血清半衰期和/或结合至转铁蛋白受体。作为一个非限制性实例，所述抗原结合片段可以包括另外包含Fc多肽的Fab片段，例如Fab-Fc融合物。在其它实施方案中，所述抗原结合片段另外包含第一Fc多肽和第二Fc多肽。在一些实施方案中，所述第一Fc多肽是修饰的Fc多肽和/或所述第二Fc多肽是修饰的Fc多肽。在一些实施方案中，所述第一Fc多肽和/或所述第二Fc多肽含有一种或多种本文所述的修饰，例如以促进异二聚化、减弱效应子功能、延长血清半衰期和/或结合至转铁蛋白受体。作为一个非限制性实例，所述抗原结合片段可以包括另外包含第一Fc多肽和第二Fc多肽的F(ab')2片段，例如F(ab')2-Fc融合物。
[0145] 另一方面，提供药物组合物。在一些实施方案中，所述药物组合物包含如本文所描述的特异性结合至人类τ蛋白的抗体且另外包含一种或多种药学上可接受的赋形剂。
[0146] 另一方面，提供多特异性抗体(例如双特异性抗体)。在一些实施方案中，所述抗体是包含如本文所描述的特异性结合至人类τ蛋白的抗体的双特异性抗体。
[0147] 另一方面，提供分离的多核苷酸。在一些实施方案中，所述分离的多核苷酸包含编码如本文所描述的特异性结合至人类τ蛋白的分离的抗体的核苷酸序列。另一方面，提供包含此类分离的多核苷酸的载体和宿主细胞。
[0148] 另一方面，提供与本文所描述的抗体竞争特异性结合至人类τ蛋白的抗体。
[0149] 在又另一方面，提供防止、减少或抑制τ蛋白低聚合和/或τ蛋白聚集(例如在受试者体内)的方法。在一些实施方案中，所述方法包括向受试者施用如本文所描述的特异性结合至人类τ蛋白的抗体(或抗原结合部分)，或包含如本文所描述的抗τ抗体的药物组合物或双特异性抗体。在一些实施方案中，所述受试者患有神经退化性疾病，如τ蛋白病(例如神经退化性τ蛋白病)。
[0150] 在又另一方面，提供防止或减少受试者脑中τ蛋白播种和/或扩散的方法。在一些实施方案中，所述方法包括向受试者施用如本文所描述的特异性结合至人类τ蛋白的抗体
(或抗原结合部分)，或包含如本文所描述的抗τ抗体的药物组合物或双特异性抗体。在一些实施方案中，所述受试者患有神经退化性疾病，如τ蛋白病(例如神经退化性τ蛋白病)。
[0151] 在又另一方面，提供治疗神经退化性疾病的方法。在一些实施方案中，神经退化性疾病是τ蛋白病(例如神经退化性τ蛋白病)。在一些实施方案中，所述方法包括向受试者施用如本文所描述的特异性结合至人类τ蛋白的抗体(或抗原结合部分)，或包含如本文所描述的抗τ抗体的药物组合物或双特异性抗体。
[0152] 在一些实施方案中，所述神经退化性τ蛋白病选自由以下组成的组：阿尔茨海默氏病、原发性年龄相关τ蛋白病、进行性核上麻痹(PSP)、额颞叶性痴呆、与17号染色体相关的额颞叶性痴呆伴发帕金森氏症、嗜银颗粒性痴呆、关岛型肌萎缩侧索硬化症/帕金森氏症-痴呆复合征、皮质基底核退化症、慢性创伤性脑病、克-雅二氏病(Creutzfeldt-Jakob 
disease)、拳击员痴呆、弥漫型神经原纤维缠结伴钙化、唐氏综合征(Down's syndrome)、家族性英国型痴呆(familial British dementia)、家族性丹麦型痴呆(familial Danish 
dementia)、杰茨曼-斯脱司勒-史茵克氏病(Gerstmann-Straussler-Scheinker disease)、球状胶质τ蛋白病、瓜德罗普岛型帕金森氏病伴发痴呆(Guadeloupean parkinsonism with dementia)、瓜德罗普岛型PSP、哈勒沃登-施帕茨氏病(Hallevorden-Spatz disease)、包涵体肌炎、多系统萎缩、强直性肌营养不良、神经原纤维缠结主导型痴呆、C型尼曼-皮克氏病(Niemann-Pick disease type C)、苍白球-桥脑-黑质退化、帕金森氏病(Parkinson's 
disease)、皮克氏病(Pick's disease)、脑炎后帕金森氏病、朊病毒蛋白型脑部淀粉样血管病、进行性皮质下胶质细胞增生症、亚急性硬化性全脑炎、亨廷顿氏病(Huntington's 
disease)以及仅有神经原纤维缠结的痴呆。在一些实施方案中，所述神经退化性τ蛋白病是阿尔茨海默氏病。
[0153] 另一方面，提供用于防止、减少或抑制τ蛋白低聚合和/或τ蛋白聚集的方法中的抗τ抗体。在一些实施方案中，本文所描述的特异性结合至人类τ蛋白的抗体或其抗原结合部分，或包含如本文所描述的抗τ抗体的药物组合物或双特异性抗体被用于防止、减少或抑制τ蛋白低聚合的方法中。在一些实施方案中，本文所描述的特异性结合至人类τ蛋白的抗体或其抗原结合部分，或包含如本文所描述的抗τ抗体的药物组合物或双特异性抗体被用于防止、减少或抑制τ蛋白聚集的方法中。
[0154] 在又另一方面，提供用于防止或减少致病性τ蛋白播种和/或扩散(例如在受试者脑中)的方法中的抗τ抗体。在一些实施方案中，本文所描述的特异性结合至人类τ蛋白的抗体或其抗原结合部分，或包含如本文所描述的抗τ抗体的药物组合物或双特异性抗体被用
于防止或减少致病性τ蛋白播种和/或扩散的方法中。
[0155] 在又另一方面，提供用于治疗神经退化性疾病的方法中的抗τ抗体。在一些实施方案中，神经退化性疾病是τ蛋白病(例如神经退化性τ蛋白病)。在一些实施方案中，本文所描述的特异性结合至人类τ蛋白的抗体或其抗原结合部分，或包含如本文所描述的抗τ抗体的药物组合物或双特异性抗体被用于治疗神经退化性疾病(例如τ蛋白病)的方法中。在一些实施方案中，本文所描述的特异性结合至人类τ蛋白的抗体或其抗原结合部分，或包含如本文所描述的抗τ抗体的药物组合物或双特异性抗体被用于治疗选自由以下组成的组的神经
退化性τ蛋白病：阿尔茨海默氏病、原发性年龄相关τ蛋白病、进行性核上麻痹(PSP)、额颞叶性痴呆、与17号染色体相关的额颞叶性痴呆伴发帕金森氏症、嗜银颗粒性痴呆、关岛型肌萎缩侧索硬化症/帕金森氏症-痴呆复合征、皮质基底核退化症、慢性创伤性脑病、克-雅二氏病、拳击员痴呆、弥漫型神经原纤维缠结伴钙化、唐氏综合征、家族性英国型痴呆、家族性丹麦型痴呆、杰茨曼-斯脱司勒-史茵克氏病、球状胶质τ蛋白病、瓜德罗普岛型帕金森氏病伴发痴呆、瓜德罗普岛型PSP、哈勒沃登-施帕茨氏病、包涵体肌炎、多系统萎缩、强直性肌营养不良、神经原纤维缠结主导型痴呆、C型尼曼-皮克氏病、苍白球-桥脑-黑质退化、帕金森氏病、皮克氏病、脑炎后帕金森氏病、朊病毒蛋白型脑部淀粉样血管病、进行性皮质下胶质细胞增生症、亚急性硬化性全脑炎、亨廷顿氏病以及仅有神经原纤维缠结的痴呆。
[0156] 在又另一方面，提供如本文所描述的抗τ抗体(或如本文所描述的其抗原结合部分，或包含如本文所描述的抗τ抗体的药物组合物或双特异性抗体)在制造用于防止、减少或抑制τ蛋白低聚合和/或用于防止、减少或抑制τ蛋白聚集的药剂中的用途。
[0157] 在又另一方面，提供如本文所描述的抗τ抗体(或如本文所描述的其抗原结合部分，或包含如本文所描述的抗τ抗体的药物组合物或双特异性抗体)在制造用于防止或减少致病性τ蛋白播种和/或扩散(例如在受试者脑中)的药剂中的用途。
[0158] 在又另一方面，提供如本文所描述的抗τ抗体(或如本文所描述的其抗原结合部分，或包含如本文所描述的抗τ抗体的药物组合物或双特异性抗体)在制造用于治疗神经退化性疾病(例如τ蛋白病)的药剂中的用途。在一些实施方案中，本文所描述的抗τ抗体被用于制造供治疗选自由以下组成的组的τ蛋白病用的药剂：阿尔茨海默氏病、原发性年龄相关τ蛋白病、进行性核上麻痹(PSP)、额颞叶性痴呆、与17号染色体相关的额颞叶性痴呆伴发帕金森氏症、嗜银颗粒性痴呆、关岛型肌萎缩侧索硬化症/帕金森氏症-痴呆复合征、皮质基底核退化症、慢性创伤性脑病、克-雅二氏病、拳击员痴呆、弥漫型神经原纤维缠结伴钙化、唐氏综合征、家族性英国型痴呆、家族性丹麦型痴呆、杰茨曼-斯脱司勒-史茵克氏病、球状胶质τ蛋白病、瓜德罗普岛型帕金森氏病伴发痴呆、瓜德罗普岛型PSP、哈勒沃登-施帕茨氏病、包涵体肌炎、多系统萎缩、强直性肌营养不良、神经原纤维缠结主导型痴呆、C型尼曼-皮克氏病、苍白球-桥脑-黑质退化、帕金森氏病、皮克氏病、脑炎后帕金森氏病、朊病毒蛋白型脑部淀粉样血管病、进行性皮质下胶质细胞增生症、亚急性硬化性全脑炎、亨廷顿氏病和仅有神经原纤维缠结的痴呆。
附图说明
[0159] 图1.使用噬菌体展示技术发现抗τ抗体的工作流程。
[0160] 图2A-2D.τ抗原的产生。(A)在大肠杆菌中产生的τ蛋白的氨基酸序列，包括His6-Smt3标签(SEQ ID NO:3)。(B)原始未裂解的τ蛋白和被类泛素特异性蛋白酶1(Ulp1)裂解而移除所述标签的τ蛋白产物的SDS-PAGE凝胶。(C)最终纯化的无标签重组τ(r-Tau)抗原(“Tau-441”)的SDS-PAGE凝胶。(D)显示r-Tau的磷酸化情况的蛋白质印迹(Western blot)。
包括可商购的抗τ抗体HT7作为总τ蛋白的对照。
[0161] 图3.具有人类免疫球蛋白κ可变区4(IGKV4)(轻链)和免疫球蛋白重链可变区3(IGHV3)(重链)序列的克隆1C7的序列比对。以阴影显示的Kabat编号表示在抗体内产生关
键接触以支持其与抗原的相互作用的Vernier位置。在1C7序列中，以阴影显示的氨基酸表
示与相应IGKV4或IGHV3序列不同的位置。
[0162] 图4.具有人类免疫球蛋白κ可变区2(IGKV2)(轻链)和免疫球蛋白重链可变区1(IGHV1)(重链)序列的克隆1A1的序列比对。以阴影显示的Kabat编号表示在抗体内产生关
键接触以支持其与抗原的相互作用的Vernier位置。在1A1序列中，以阴影显示的氨基酸表
示与相应IGKV2或IGHV1序列不同的位置。
[0163] 图5.具有人类免疫球蛋白κ可变区2(IGKV2)(轻链)和免疫球蛋白重链可变区1(IGHV1)(重链)序列的克隆1A5的序列比对。以阴影显示的Kabat编号表示在抗体内产生关
键接触以支持其与抗原的相互作用的Vernier位置。在1A5序列中，以阴影显示的氨基酸表
示与相应IGKV2或IGHV1序列不同的位置。
[0164] 图6.具有人类免疫球蛋白κ可变区2(IGKV2)(轻链)和免疫球蛋白重链可变区1(IGHV1)(重链)序列的克隆1D10的序列比对。以阴影显示的Kabat编号表示在抗体内产生关
键接触以支持其与抗原的相互作用的Vernier位置。在1D10序列中，以阴影显示的氨基酸表示与相应IGKV2或IGHV1序列不同的位置。
[0165] 图7.具有人类免疫球蛋白κ可变区2(IGKV2)(轻链)和免疫球蛋白重链可变区1(IGHV1)(重链)序列的克隆1G7的序列比对。以阴影显示的Kabat编号表示在抗体内产生关
键接触以支持其与抗原的相互作用的Vernier位置。在1G7序列中，以阴影显示的氨基酸表
示与相应IGKV2或IGHV1序列不同的位置。
[0166] 图8.嵌合IgG抗体1A5、1C7、1G7和1D10的ELISA，分析了所述抗体与人类τ蛋白的所有剪接同功型(τ441(2N4R)、τ352(0N3R)、τ381(1N3R)、τ410(2N3R)、τ383(0N4R)和τ412(1N4R))和与过度磷酸化的τ441(p-Tau)的结合。
[0167] 图9A-9E.有关嵌合IgG抗体1C7(A)、1A1(B)、1A5(C)、1D10(D)和1G7(E)与全长人类τ蛋白(τ441)的结合的BiacoreTM分析。
[0168] 图10A和10B.所选嵌合IgG克隆的表位。(A)克隆1C7识别在人类τ蛋白2N4R(SEQ ID NO:1)的氨基酸111-125内的表位。(B)克隆1A1识别在人类τ蛋白2N4R(SEQ ID NO:1)的氨基酸251-270内的表位，其中在氨基酸256-270内有最强结合(加下划线)，且也识别在人类τ蛋白2N4R(SEQ ID NO:1)的氨基酸346-360内的表位。
[0169] 图11.嵌合IgG克隆1A1、1A5、1D10和1G7的表位构象和磷酸化分析。上图：对应于SEQ ID NO:1的氨基酸251-270的肽。测试对应于SEQ ID NO:1的251-270表位的四种不同
肽：未磷酸化的肽、在258位丝氨酸处磷酸化的肽(pSer258)、在262位丝氨酸处磷酸化的肽(pSer262)以及同时具有pSer258和pSer262的肽。下图：对应于SEQ ID NO:1的氨基酸346-
360的肽。测试对应于SEQ ID NO:1的346-360表位的四种不同肽：未磷酸化的肽、在352位丝氨酸处磷酸化的肽(pSer352)、在356位丝氨酸处磷酸化的肽(pSer356)以及同时具有
pSer352和pSer356的肽。对于所有分析，以250、125、63.5、31.25、15.6、7.8、3.9和0ng(自左至右)的稀释液分析肽。
[0170] 图12A和12B.嵌合IgG克隆1A1和1C7通过人脑溶解产物抑制τ蛋白播种。(A)涂铺τ蛋白FRET生物传感器细胞，接着在含有τ蛋白的人脑溶解产物存在下培育24小时，接着固定并获取τ蛋白聚集的图像(FRET)。(B)对于基准抗体(Ab306)、1A1和1C7，τ抗体与脑溶解产物的预培育使τ蛋白播种和聚集受抑制。使用抗RSV作为阴性对照。
[0171] 图13.嵌合IgG克隆1A1和1C7的体内药物动力学分析。
[0172] 图14A和14B.嵌合抗τ抗体1C7的ELISA，分析了所述抗体与带有单一丙氨酸突变的全长野生型τ蛋白变体的结合。
[0173] 图15A.嵌合IgG克隆1C7和1A1在PS19τ转基因小鼠中的血浆7天靶接合研究的概述。
[0174] 图15B.相较于阴性对照或基准抗τ克隆(Ab306或Ab017)，嵌合IgG克隆1A1和1C7在血浆中均具有预期的PK。
[0175] 图15C.血浆总τ含量在给与抗τ抗体Ab017、嵌合IgG克隆1C7或嵌合IgG克隆1A1之后2天增加，且在给药后至少7天仍保持高含量。
[0176] 图15D.血浆结合的τ含量在给与抗τ抗体Ab017、嵌合IgG克隆1C7或嵌合IgG克隆1A1之后2天也增加。对于嵌合IgG克隆1C7，此效果在给药后至少7天仍充分保持。
[0177] 图16A.嵌合IgG克隆1C7在PS19τ转基因小鼠中的血浆和脑2天靶接合研究的概述。
[0178] 图16B-16D.相较于阴性对照或基准抗τ抗体Ab017，嵌合IgG克隆1C7在血浆和脑中具有预期的PK。
[0179] 图16E和16F.在给药后2天，嵌合IgG克隆1C7和基准抗τ抗体Ab017使血浆总τ蛋白含量(E)和经结合τ蛋白含量(F)显著增加。
[0180] 图16G.如在给药后2天，观察到CSF中经结合τ蛋白增加所指示，嵌合IgG克隆1C7也结合至CNS中的τ蛋白。
[0181] 图17.嵌合IgG克隆1C7和基准抗τ抗体Ab017能够自阿尔茨海默氏病(AD)患者CSF下拉τ蛋白，而抗τ1A1则不能，表明抗体1A1的表位不存在或不可接近CSFτ蛋白。
[0182] 图18.使用杂交瘤技术发现抗τ抗体的工作流程。
[0183] 图19A-19C.鼠类抗τ杂交瘤抗体17G2.A1(A)、19F7.C9(B)和24D2.B2(C)的ELISA，分析了所述抗体与重组τ441(r-Tau)、过度磷酸化的τ441(p-Tau)、食蟹猕猴τ441(cyno-Tau)、人类τ蛋白的剪接同功型(τ352(0N3R)、τ383(0N4R)、τ381(1N3R)、τ410(2N3R)和τ441(2N4R))、N末端截短的τ蛋白(τ(50-441))和C末端截短的τ蛋白(τ(1-421))的结合。
[0184] 图20A-20C.有关抗τ杂交瘤抗体17G2.A1(A)、19F7.C9(B)和24D2.B2(C)与全长人类τ蛋白(τ441)的结合的BiacoreTM分析。
[0185] 图21.抗τ抗体17G2.A1结合至来自人类阿尔茨海默氏病(AD)患者的脑脊髓液(CSF)的τ蛋白。
[0186] 图22A和22B.鼠类抗τ杂交瘤抗体17G2.A1的ELISA，分析了所述抗体与表位GEPPKSGDRSGYSSPGSPGT(SEQ ID NO:178)的直接结合(A)和竞争性结合(B)。
[0187] 图23A-23C.抗τ抗体1C7/3C.35.21与人类τ蛋白(400pM)的结合(A)、嵌合IgG克隆1C7与人类τ蛋白(440pM)的结合(B)以及抗τ抗体1C7/3C.35.21与转铁蛋白受体(TfR)的结
合(C)的代表性感应图。
[0188] 图24.显示抗τ抗体1C7/3C.35.21结合至τ蛋白和TfR(迹线A)或单独τ蛋白(迹线B)的代表性感应图。在无1C7/3C.35.21存在下未观察到τ蛋白与TfR之间的相互作用(迹线C)且1C7/3C.35.21和TfR均不非特异性结合至传感器尖端(迹线D)。
[0189] 图25.嵌合IgG克隆1C7(τ1C7)和τ1C7/3C.35.21通过人脑溶解产物抑制τ蛋白播种。对于τ1C7和τ1C7/3C.35.21，τ抗体与脑溶解产物的预培育抑制τ蛋白播种和聚集。
[0190] 图26A和26B.各种抗τ克隆的体内药物动力学分析(血浆浓度(图26A)和清除率值(图26B))。

具体实施方式

[0191] I.引言
[0192] 本发明涉及发现能够特异性结合至τ蛋白的抗体。在一个方面，提供能够特异性结合至磷酸化τ蛋白和未磷酸化的τ蛋白两者的抗体。在一些实施方案中，本文所描述的抗τ抗体特异性结合至人类τ蛋白的多种同功型(2N4R、2N3R、1N4R、1N3R、0N4R和/或0N3R)。在一些实施方案中，抗τ抗体还与小鼠τ蛋白和/或食蟹猕猴τ蛋白展现交叉反应性。
[0193] 在一些实施方案中，抗τ抗体识别τ蛋白的超过一个表位。在一些实施方案中，抗τ抗体与特异性结合至转铁蛋白受体的修饰的Fc多肽融合。在一些实施方案中，抗τ抗体包含一个或多个促进异二聚化、减弱效应子功能和/或增加血清半衰期的修饰。在一些实施方案中，抗τ抗体包含天然FcRn结合位点。在一些实施方案中，抗τ抗体是双表位抗体。如以下实施例部分中所述，已鉴别出识别全长τ蛋白内的两个不同表位的抗τ抗体。τ蛋白是一种磷酸蛋白，并且τ蛋白的磷酸化可以影响抗体结合至所述抗体所识别的呈未磷酸化状态的表位的能力。因此，对于结合至表位含有磷酸化位点的τ蛋白的磷酸化形式，双表位抗体提供能够在τ抗原中的一个结合位点被磷酸化情况下识别第二结合位点的益处。另外，如下文所描述，已鉴别出识别呈未磷酸化的形式和呈磷酸化形式的τ表位的抗τ抗体。
[0194] 作为非限制性实例，本文所描述的抗τ抗体可用于防止、减少或抑制致病性τ蛋白播种、扩散、低聚合和/或聚集。因此，本发明的抗体可用于预防或治疗神经退化性疾病，如τ蛋白病(例如阿尔茨海默氏病)。
[0195] II.定义
[0196] 除非上下文另作清楚规定，否则如本文所使用，单数形式“一个/种(a/an)”和“所述”包括复数个(种)指示物。因此，例如提到“一种抗体”任选地包括两个或更多个此类分子的组合，和其类似物。
[0197] 如本文所使用，术语“约”和“大约”当用于修饰以数字值或范围指定的量时指示，所述数字值以及本领域技术人员已知的与所述值的合理偏差，例如±20％、±10％或±5％是在所述值的预定含义内。
[0198] 如本文所使用，术语“τ蛋白”是指来自任何脊椎动物来源，如但不限于人类、非人类灵长类动物(例如食蟹猕猴)、啮齿动物(例如小鼠)和其它哺乳动物的天然(即，野生型)τ蛋白。如本文所使用，术语“τ蛋白”涵盖具有441个氨基酸长度的“全长”τ蛋白(SEQ ID NO:1)以及τ蛋白的天然存在的同功型。本领域的普通技术人员应认识到，在人体中，存在由编码τ蛋白(微管相关蛋白，MAPT)的基因替代性剪接而产生的六种τ蛋白同功型：长度是441个氨基酸的2N4R(SEQ ID NO:1)；长度是412个氨基酸的1N4R(SEQ ID NO:56)；长度是410个氨基酸的2N3R(SEQ ID NO:54)；长度是383个氨基酸的0N4R(SEQ ID NO:55)；长度为381个氨
基酸的1N3R(SEQ ID NO:53)；以及长度是352个氨基酸的0N3R(SEQ ID NO:52)。
[0199] 如本文所使用，术语“特异性结合至τ蛋白的抗体”和“抗τ抗体”可互换地指特异性结合至τ蛋白(例如未磷酸化的τ蛋白、磷酸化的τ蛋白、总τ蛋白(磷酸化和未磷酸化的τ蛋白)或τ蛋白剪接同功型)的抗体。在一些实施方案中，抗τ抗体是特异性结合至多种形式τ蛋白(例如多种τ蛋白剪接同功型、未磷酸化的τ蛋白和/或磷酸化τ蛋白)的抗体。在一些实施方案中，抗τ抗体是特异性结合至全部六种人类τ蛋白剪接同功型和未磷酸化的τ蛋白的抗体。
[0200] 如本文所使用，术语“抗体”是指这样一种蛋白质，该蛋白质在功能上定义为结合蛋白且在结构上定义为包含被本领域技术人员视为来源于免疫球蛋白编码基因的可变区的氨基酸序列。所述术语涵盖完整多克隆抗体、完整单克隆抗体、单链抗体、多特异性抗体如双特异性抗体、单特异性抗体、单价抗体、嵌合抗体、人源化抗体以及人类抗体。如本文所使用，术语“抗体”还包括保持结合特异性的抗体片段，包括但不限于Fab、F(ab')2、Fv、scFv和二价scFv。抗体可以由一个或多个大体上由免疫球蛋白基因或免疫球蛋白基因片段编码
的多肽组成。所识别的免疫球蛋白基因包括κ、λ、α、γ、δ、ε和μ恒定区基因，以及众多的免疫球蛋白可变区基因。轻链被分类为κ或λ。重链被分类为γ、μ、α、δ或ε，其又分别定义免疫球蛋白类别IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。
[0201] 例示性免疫球蛋白(抗体)结构单元包含四聚体。各四聚体由两对相同的多肽链构成，每对具有一条“轻”链(约25kD)和一条“重”链(约50-70kD)。每条链的N末端确定具有约
100至110个或更多个氨基酸的可变区，其主要负责抗原识别。术语“可变轻链”(VL)和“可变重链”(VH)分别指这些轻链和重链。
[0202] 术语“可变区”是指抗体重链或轻链中来源于生殖系可变区(V)基因、多样性(D)基因或接合(J)基因(且不来源于恒定区(Cμ和Cδ)基因区段)并赋予抗体结合至抗原的特异性的结构域。典型地，抗体可变区包含间杂有三个高变“互补决定区”的四个保守“构架”区。
[0203] 术语“互补决定区”或“CDR”是指每条链中的中断由轻链和重链可变区建立的四个构架区的三个高变区。CDR主要负责抗体与抗原表位的结合。每条链的CDR典型地称为CDR1、CDR2和CDR3，自N末端开始依序编号，并且也典型地由特定CDR所处的链标识。因此，VH CDR3或CDR-H3是位于发现其的抗体重链可变区中，而VL CDR1或CDR-L1是来自发现其的抗体轻链可变区的CDR1。
[0204] 不同轻链或重链的“构架区”或“FR”在物种内相对保守。抗体构架区是构成轻链和重链的组合构架区，用于在三维空间中定位和排列CDR。可自包括生殖系抗体基因序列的公共DNA数据库或出版的参考文献获得构架序列。例如，人类重链和轻链可变区基因的生殖系DNA序列可以见于有关人类和小鼠序列的“VBASE2”生殖系可变基因序列数据库。
[0205] CDR和构架区的氨基酸序列可以使用本领域中各种众所周知的定义，例如Kabat、Chothia、国际ImMunoGeneTics数据库(IMGT)、AbM和所观察到的抗原接触(“Contact”)测定。在一些实施方案中，CDR是根据Contact定义确定。参见MacCallum等人,J.Mol.Biol.,
262:732-745(1996)。在一些实施方案中，CDR是由Kabat、Chothia和Contact CDR定义的组合确定。
[0206] 术语“抗原结合部分”和“抗原结合片段”在本文中可互换使用且指一个分子，例如抗体中保持特异性结合至抗原(例如τ蛋白)的能力的一个或多个片段。抗原结合片段的实例包括但不限于，Fab片段(由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段)、F(ab')2片段(由两个Fab片段在铰链区经二硫桥连接组成的二价片段)、单链Fv(scFv)、二硫键连接的Fv
(dsFv)、互补决定区(CDR)、VL(轻链可变区)、VH(重链可变区)、纳米抗体、双功能抗体(各自通过可变区结合抗原)，以及以引用的方式并入本文中的Spiess等人,Mol.Immun.67(2015)
95-106所描述的其它形式，和其任何组合、或免疫球蛋白肽中能够结合至靶抗原的任何其
它功能部分。
[0207] 术语“表位”是指抗原中与分子，例如抗体的CDR特异性结合的部分，并且可以包括少数氨基酸或少数氨基酸的一部分，例如5或6个或更多个，例如20个或更多个氨基酸，或这些氨基酸的一部分。在一些情况下，表位包括例如来自碳水化合物、核酸或脂质的非蛋白质组分。在一些情况下，表位是三维部分。因此，例如，在靶是蛋白质的情况下，表位可以由连续氨基酸(例如线性表位)，或因蛋白质折叠而邻近的来自蛋白质不同部分的氨基酸(例如不连续或构象表位)构成。在一些实施方案中，抗体特异性结合至抗原中因蛋白质折叠而不邻近的两个不同区域，在本文中称为“双重表位”。在一些实施方案中，表位在一个氨基酸(例如丝氨酸或苏氨酸残基)处磷酸化。
[0208] 如本文所使用，当结合抗τ抗体使用时，短语“识别表位”意味着，所述抗体CDR在所述表位或抗原(即，τ蛋白)中含有所述表位的部分处与所述抗原相互作用或特异性结合。
[0209] 如本文所使用，术语“多特异性抗体”是指包含两个或两个以上不同抗原结合部分的抗体，或所述抗体中结合至所述两个或两个以上不同抗原的片段或部分，其中各抗原结合部分包含识别不同抗原的不同可变区。如本文所使用，术语“双特异性抗体”是指包含两个不同抗原结合部分的抗体，或所述抗体中结合至所述两个不同抗原的片段或部分，其中
各抗原结合部分包含识别不同抗原的不同可变区。在一些实施方案中，双特异性抗体包括
含识别τ抗原的第一可变区的第一抗原结合部分和含识别除τ抗原外的抗原的第二可变区
的第二抗原结合部分。
[0210] “单克隆抗体”是指由单一细胞集落或单一细胞系产生并且由或基本上由一级氨基酸序列一致的抗体分子组成的抗体。
[0211] “多克隆抗体”是指由异质抗体群获得的一组抗体，其中所述群体中的不同抗体结合至抗原的不同表位。
[0212] “嵌合抗体”是指这样一种抗体分子，其中恒定区或其一部分被改变、置换或交换以使得抗原结合位点(即，可变区、CDR或其部分)连接至具有不同或改变的类别、效应功能和/或物种的恒定区，或其中可变区或其一部分被具有不同或改变的抗原特异性的可变区(例如来自不同物种的CDR和构架区)改变、置换或交换。在一些实施方案中，嵌合抗体是包含来自一种来源或物种(例如小鼠)的可变区和来源于第二来源或物种(例如人类)的恒定
区的单克隆抗体。用于制备嵌合抗体的方法在本领域中有描述。
[0213] “人源化”抗体是保留非人类抗体的反应性，同时在人体中具有较低免疫原性的抗体。这可例如通过保留非人类CDR区并用其人类对应物置换所述抗体的其余部分实现。在一些情况下，需要保留特定非人类构架残基以便在人源化之后保留非人类抗体的结合亲和力和/或特异性。
[0214] “人类抗体”或“完全人类抗体”是具有典型地来源于人类生殖系基因的人类重链和轻链序列的抗体。在一些实施方案中，所述抗体是由人类细胞、由利用人类抗体谱系的非人类动物(例如被遗传工程改造成表达人类抗体序列的转基因小鼠)或由噬菌体展示平台产生。
[0215] 术语“特异性结合”是指分子(例如抗体(或其抗原结合部分)或修饰的Fc多肽(或其靶结合部分))结合至表位或靶且对样品中所述表位或靶的亲和力、亲合力和/或持续时
间高于其结合至另一表位或非靶化合物(例如结构不同的抗原)。在一些实施方案中，特异
性结合至表位或靶的抗体(或其抗原结合部分)或修饰的Fc多肽(或其靶结合部分)是结合
至所述表位或靶的亲和力比结合至其它表位或非靶化合物的亲和力高至少5倍，例如高至
少6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、20倍、25倍、50倍或100倍的抗体(或其抗原结合部分)或修饰的Fc多肽(或其靶结合部分)。在一些实施方案中，特异性结合至τ蛋白的抗体结合至τ蛋白的亲和力比结合至非τ蛋白的亲和力高至少5倍(例如亲和力高至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍或至少10倍)。本领域技术人员将认识到，特异性结合至来自一个物种的靶(例如τ蛋白)的抗体也可特异性结合至所述靶(例如τ蛋白)的直系同源物。
[0216] 术语“结合亲和力”在本文中用于指两个分子之间，例如抗体(或其抗原结合部分)与抗原之间，或修饰的Fc多肽(或其靶结合部分)与靶之间的非共价相互作用的强度。因此，例如，除非上下文另作指示或显而易见，否则所述术语可以指抗体(或其抗原结合部分)与抗原之间或修饰的Fc多肽(或其靶结合部分)与靶之间的1:1相互作用。结合亲和力可以通
-1
过测量平衡解离常数(KD)定量，所述平衡解离常数是指解离速率常数(kd，时间 )除以缔合速率常数(ka，时间-1M-1)。KD可以通过例如使用表面等离子体共振(SPR)法，例如BiacoreTM系统；动力学排除分析，如 和生物膜层干涉法(例如使用 Octet平台)测
量复合物形成和解离的动力学确定。如本文所使用，“结合亲和力”不仅包括形式上的结合亲和力，如反映抗体(或其抗原结合部分)与抗原之间或修饰的Fc多肽(或其靶结合部分)与
靶之间的1:1相互作用的结合亲和力，而且还包括可以反映希望结合的计算KD的表观亲和
力。
[0217] 如本发明上下文中所使用，术语“转铁蛋白受体”或“TfR”是指转铁蛋白受体蛋白质1。人类转铁蛋白受体1多肽序列陈述于SEQ ID NO:288中。来自其它物种的转铁蛋白受体蛋白质1(例如，黑猩猩，寄存编号XP_003310238.1；恒河猴，NP_001244232.1；狗，NP_001003111.1；牛，NP_001193506.1；小鼠，NP_035768.1；大鼠，NP_073203.1；以及鸡，NP_
990587.1)也是已知的。术语“转铁蛋白受体”也涵盖由位于转铁蛋白受体蛋白质1染色体基因座处的基因编码的例示性参考序列，例如人类序列的等位基因变体。全长转铁蛋白受体
蛋白质包括短N末端细胞内区域、跨膜区和较大的细胞外结构域。所述细胞外结构域是以三个结构域表征：蛋白酶样结构域、螺旋结构域和顶端结构域。
[0218] 如本文所使用，术语“Fc多肽”是指以Ig折叠成结构性结构域为特征的天然存在的免疫球蛋白重链多肽的C末端区。Fc多肽含有包括至少CH2结构域和/或CH3结构域的恒定区序列并且可以含有铰链区的至少一部分，但不含可变区。
[0219] “修饰的Fc多肽”是指相较于野生型免疫球蛋白重链Fc多肽序列，具有至少一个突变，例如取代、缺失或插入，但保持天然Fc多肽的总体Ig折叠或结构的Fc多肽。
[0220] 术语“FcRn”是指新生儿Fc受体。Fc多肽与FcRn结合将降低Fc多肽的清除率并增加其血清半衰期。人类FcRn蛋白是由类似于I类主要组织相容性(MHC)蛋白的大小为约50kDa的蛋白质和大小为约15kDa的β2-微球蛋白构成的异二聚体。
[0221] 如本文所使用，“FcRn结合位点”是指Fc多肽中结合至FcRn的区域。在人类IgG中，如使用EU索引编号，FcRn结合位点包括L251、M252、I253、S254、R255、T256、M428、H433、N434、H435和Y436。这些位置对应于SEQ ID NO:181的位置21至26、198和203至206。
[0222] 如本文所使用，“天然FcRn结合位点”是指Fc多肽中结合至FcRn的区域且其氨基酸序列与天然存在的Fc多肽中结合至FcRn的区域相同。
[0223] 如本文所使用，术语“CH3结构域”和“CH2结构域”是指免疫球蛋白恒定区结构域多肽。出于本申请案的目的，CH3结构域多肽是指如根据EU编号方案所编号，由自约341位至约447位的氨基酸构成的区段，并且CH2结构域多肽是指如根据EU编号方案所编号，由自约231位至约340位的氨基酸构成的区段且不包括铰链区序列。CH2和CH3结构域多肽也可利用
IMGT(ImMunoGeneTics)编号方案编号，其中根据IMGT Scientific图表编号(IMGT网站)，
CH2结构域编号是1-110并且CH3结构域编号是1-107。CH2和CH3结构域是免疫球蛋白Fc区的
一部分。Fc区是指如根据EU编号方案所编号，由自约231位至约447位的氨基酸构成的区段，但如本文所使用，其可以包括抗体铰链区的至少一部分。说明性铰链区序列是人类IgG1铰
链序列EPKSCDKTHTCPPCP(SEQ ID NO:287)。
[0224] 关于CH3或CH2结构域的术语“野生型”、“天然”和“天然存在”在本文中用于指具有自然界中存在的序列的结构域。
[0225] 在本发明的上下文中，关于突变多肽或突变多核苷酸的术语“突变体”与“变体”可互换使用。关于给定野生型CH3或CH2结构域参考序列的变体可以包括天然存在的等位基因变体。“非天然”存在的CH3或CH2结构域是指在自然界中不存在于细胞中且由例如使用基因工程技术或诱变技术基因修饰天然CH3结构域或CH2结构域多核苷酸或多肽产生的变异或
突变结构域。“变体”包括相对于野生型含有至少一个氨基酸突变的任何结构域。突变可以包括取代、插入和缺失。
[0226] 如本文所使用，术语“交叉反应”是指抗体可变区结合至除该抗体所针对的抗原外的抗原的能力。在一些实施方案中，交叉反应性是指抗体可变区结合至来自不同于该抗体所针对的抗原的另一物种的抗原的能力。作为一个非限制性实例，针对人类τ蛋白产生的如本文所描述的抗τ抗体可以与来自不同物种(例如小鼠或猴)的τ蛋白展现交叉反应性。
[0227] 如关于核酸或蛋白质(例如抗体)所使用的术语“经分离”表示，所述核酸或蛋白质基本上不含在天然状态下与其相关联的其它细胞组分。其优选呈同源状态。纯度和同源性典型地使用分析化学技术，如电泳(例如聚丙烯酰胺凝胶电泳)或色谱法(例如高效液相色
谱法)测定。在一些实施方案中，分离的核酸或蛋白质(例如抗体)是至少85％纯、至少90％纯、至少95％纯或至少99％纯。
[0228] 术语“氨基酸”是指天然存在和合成的氨基酸以及氨基酸类似物和以类似于天然存在氨基酸的方式起作用的氨基酸模拟物。
[0229] 天然存在的氨基酸是由遗传密码编码的氨基酸，以及随后修饰的氨基酸，例如羟脯氨酸、γ-羧基谷氨酸和O-磷酸丝氨酸。“氨基酸类似物”是指具有与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构(即，α碳结合至氢、羧基、氨基和R基团)的化合物，例如高丝氨酸、正亮氨酸、甲硫氨酸亚砜、甲硫氨酸甲基锍。此类类似物具有修饰的R基团(例如正亮氨酸)或修饰的肽骨架，但保留与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构。“氨基酸模拟物”是指结构不同于氨基酸的一般化学结构但以类似于天然存在氨基酸的方式作用的化合物。氨基酸在本
文中可以用其通常已知的三字母符号或由IUPAC-IUB生物化学命名委员会(IUPAC-IUB 
Biochemical Nomenclature Commission)所推荐的单字母符号描述。
[0230] 天然存在的氨基酸是由遗传密码编码的氨基酸，以及随后修饰的氨基酸，例如羟脯氨酸、γ-羧基谷氨酸和O-磷酸丝氨酸。天然存在的α-氨基酸包括但不限于，丙氨酸
(Ala)、半胱氨酸(Cys)、天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、苯丙氨酸(Phe)、甘氨酸(Gly)、组氨酸(His)、异亮氨酸(Ile)、精氨酸(Arg)、赖氨酸(Lys)、亮氨酸(Leu)、甲硫氨酸(Met)、天冬酰胺(Asn)、脯氨酸(Pro)、谷氨酰胺(Gln)、丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)、缬氨酸(Val)、色氨酸(Trp)、酪氨酸(Tyr)及其组合。天然存在的α-氨基酸的立体异构体包括但不限于，D-丙氨酸(D-Ala)、D-半胱氨酸(D-Cys)、D-天冬氨酸(D-Asp)、D-谷氨酸(D-Glu)、D-苯丙氨酸(D-Phe)、D-组氨酸(D-His)、D-异亮氨酸(D-Ile)、D-精氨酸(D-Arg)、D-赖氨酸(D-Lys)、D-亮氨酸(D-Leu)、D-甲硫氨酸(D-Met)、D-天冬酰胺(D-Asn)、D-脯氨酸(D-Pro)、D-谷氨酰胺(D-Gln)、D-丝氨酸(D-Ser)、D-苏氨酸(D-Thr)、D-缬氨酸(D-Val)、D-色氨酸(D-Trp)、D-酪氨酸(D-Tyr)及其组合。
[0231] 术语“多肽”与“蛋白质”在本文中可互换使用，指呈单链形式的氨基酸残基聚合物。这些术语适用于一个或多个氨基酸残基是相应天然存在氨基酸的人造化学模拟物的氨基酸聚合物，并且也适用于天然存在的氨基酸聚合物和非天然存在的氨基酸聚合物。氨基
酸聚合物可以仅包含L-氨基酸、仅包含D-氨基酸，或包含L和D氨基酸的混合物。
[0232] 如本文所使用，术语“蛋白质”是指多肽或者单链多肽的二聚体(即，两个)或多聚体(即，三个或三个以上)。蛋白质的单链多肽可以通过共价键(例如二硫键)或非共价相互作用接合。
[0233] 术语“多核苷酸”和“核酸”可互换地指任何长度的核苷酸链，并且包括DNA和RNA。核苷酸可以是脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、修饰的核苷酸或碱基，和/或其类似物，或者可以利用DNA或RNA聚合酶并入链中的任何底物。多核苷酸可以包含修饰的核苷酸，如甲基化
核苷酸和其类似物。本文所涵盖的多核苷酸的实例包括单股和双股DNA、单股和双股RNA，以及具有单股和双股DNA和RNA的混合物的杂合分子。
[0234] 术语“保守取代”或“保守突变”是指用可归类为具有类似特征的一个氨基酸取代另一氨基酸的改变。以此方式定义的保守氨基酸组的类别的实例可以包括：“带电/极性组”，包括Glu(谷氨酸或E)、Asp(天冬氨酸或D)、Asn(天冬酰胺或N)、Gln(谷氨酰胺或Q)、Lys(赖氨酸或K)、Arg(精氨酸或R)和His(组氨酸或H)；“芳香族氨基酸组”，包括Phe(苯丙氨酸或F)、Tyr(酪氨酸或Y)、Trp(色氨酸或W)和(组氨酸或H)；和“脂肪族氨基酸组”，包括Gly(甘氨酸或G)、Ala(丙氨酸或A)、Val(缬氨酸或V)、Leu(亮氨酸或L)、Ile(异亮氨酸或I)、Met(甲硫氨酸或M)、Ser(丝氨酸或S)、Thr(苏氨酸或T)和Cys(半胱氨酸或C)。在各组内，也可鉴别出亚组。例如，带电或极性氨基酸组可以细分成包括以下亚组：“带正电亚组”，包含Lys、Arg和His；“带负电亚组”，包含Glu和Asp；以及“极性亚组”，包含Asn和Gln。在另一实施例中，芳香族或环状氨基酸组可以细分成包括以下亚组：“氮环亚组”，包含Pro、His和Trp；以及“苯基亚组”，包含Phe和Tyr。在又另一实施例中，脂肪族氨基酸组可以细分成数个亚组，例如“脂肪族非极性亚组”，包含Val、Leu、Gly和Ala；以及“脂肪族低极性亚组”，包含Met、Ser、Thr和Cys。保守突变的类别的实例包括在以上亚组内的氨基酸间的氨基酸取代，如但不限
于：Lys取代Arg或反之亦然，由此可以维持正电荷；Glu取代Asp或反之亦然，由此可以维持负电荷；Ser取代Thr或反之亦然，由此可以维持游离-OH；以及Gln取代Asn或反之亦然，由此可以维持游离-NH2。在一些实施方案中，用疏水性氨基酸取代例如活性位点中的天然存在
的疏水性氨基酸，以保持疏水性。
[0235] 在两个或更多个多肽序列的情形中，术语“一致”或“同一性”百分比是指当比较并在比较窗或指定区域内对准以达到最大对应性时，如使用序列比较演算法或通过手动对准和目测检查所测量的相同或在指定区域内具有指定百分比的氨基酸残基一致，例如至少
60％同一性、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％或更高百分比同一性的两个或两个以上序列或子序列。
[0236] 对于多肽的序列比较，典型地一个序列充当参考序列，用以与候选序列相比较。对准可以使用本领域技术人员可用的各种方法，例如目测对准或使用公开可用的软件，使用已知演算法进行，以实现最大比对。此类程序包括BLAST程序、ALIGN、ALIGN-2(Genentech,South San Francisco,Calif.)或Megalign(DNASTAR)。用于对准达到最大对准性的参数可
以由本领域技术人员决定。出于本申请案的目的，对于多肽序列的序列比较，使用以默认参数比对两个蛋白质序列的BLASTP演算法标准蛋白质BLAST。
[0237] 当用于标识多肽序列中的给定氨基酸残基时，术语“对应于”、“参照……确定”或“参照……编号”是指当将给定氨基酸序列与指定参考序列最大程度地对准并进行比较时，所述参考序列中残基的位置。因此，例如，修饰的Fc多肽中的氨基酸当与SEQ ID NO:181最佳地对准时，在残基与SEQ ID NO:181中的氨基酸对准的情况下，其“对应于”SEQ ID NO:181中的氨基酸。与参考序列对准的多肽的长度无需与参考序列相同。
[0238] 术语“受试者”、“个体”和“患者”在本文中可互换使用，意思指哺乳动物，包括但不限于人类、非人类灵长类动物、啮齿动物(例如大鼠、小鼠和天竺鼠)、兔、牛、猪、马以及其它哺乳动物物种。在一个实施方案中，受试者、个体或患者是人类。
[0239] 术语“治疗(treat/treatment)”在本文中一般用于指获得所希望的药理学和/或生理学作用。“治疗”可以指在治疗或改善神经退化性疾病(例如阿尔茨海默氏病或本文所描述的另一神经退化性疾病)方面的任何成功指标，包括任何客观或主观参数，如消除、缓解、患者存活状况的改善、存活时间或存活率增加、减轻症状或使患者对疾病更易忍受、减慢退化或减退的速率，或改善患者的身体或精神健康。症状的治疗或改善可以基于客观或
主观参数。治疗效果可以与未接受所述治疗的一位个体或一组个体，或与同一患者在治疗
前或在治疗期间的不同时间的状况相比较。
[0240] 术语“药学上可接受的赋形剂”是指在生物学上或药理学上适合用于人类或动物的非活性医药成分，如但不限于，缓冲剂、载体或防腐剂。
[0241] 如本文所使用，一种药剂(例如，如本文所述的抗体)的“治疗量”或“治疗有效量”是治疗、减轻、消除受试者疾病的症状，或降低其严重程度的量。“治疗量”或“治疗有效量”的药剂(例如，如本文所述的抗体)可以改善患者存活状况；增加存活时间或存活率；减轻症状；使损伤、疾病或病症(例如τ蛋白病)更易忍受；减慢退化或减退的速率；或改善患者的身体或精神健康。
[0242] 术语“施用”是指将药剂、化合物或组合物递送至所希望的生物作用部位的方法。这些方法包括但不限于，表面递送、肠胃外递送、静脉内递送、皮内递送、肌肉内递送、鞘内递送、结肠递送、直肠递送或腹膜内递送。在一个实施方案中，本文所描述的抗体是静脉内施用。
[0243] III.抗τ抗体
[0244] 在一个方面，提供特异性结合至τ蛋白(例如人类τ蛋白)的抗体和抗体的抗原结合部分。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合部分特异性结合至未磷酸化的τ蛋白。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合部分特异性结合至磷酸化的τ蛋白。在一些实施方案中，磷酸化τ蛋白包括1、2、3、4、5或更多个磷酸化丝氨酸和/或苏氨酸残基。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合部分特异性结合至未磷酸化的τ蛋白和磷酸化的τ蛋白两种。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合部分特异性结合至单体τ蛋白。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合部分特异性结合至低聚τ蛋白。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合部分特异性结合至细胞内τ蛋白。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合部分特异性结合至细胞外τ蛋白。
[0245] 在一些实施方案中，所述抗体特异性结合至人类τ蛋白的一种或多种剪接同功型(即，剪接同功型2N4R、2N3R、1N4R、1N3R、0N4R和0N3R中的一种或多种)。在一些实施方案中，所述抗体特异性结合至人类τ蛋白的两种或更多种剪接同功型，例如2N4R、2N3R、1N4R、
1N3R、0N4R和0N3R中的两种、三种、四种、五种或全部六种。在一些实施方案中，所述抗体特异性结合至人类τ蛋白的两种或更多种剪接同功型，例如2N4R、2N3R、1N4R、1N3R、0N4R和
0N3R中的两种、三种、四种、五种或全部六种的未磷酸化形式和/或磷酸化形式。在一些实施方案中，所述抗体特异性结合至剪接同功型2N4R、2N3R、1N4R、1N3R、0N4R和0N3R中的一种、两种、三种、四种、五种或全部六种的未磷酸化形式和磷酸化形式。
[0246] 抗τ抗体的结合特征
[0247] 在一些实施方案中，抗τ抗体以高亲和力特异性结合至全长人类τ蛋白(SEQ ID NO:1)。在一些实施方案中，所述抗体对SEQ ID NO:1的结合亲和力(KD)小于50nM，例如小于
40nM、小于30nM、小于25nM、小于20nM、小于15nM、小于10nM、小于5nM、小于1nM、小于500pM、小于250pM、小于150pM、小于100pM、小于50pM、小于40pM、小于30pM、小于20pM，或小于约
10pM。在一些实施方案中，所述抗体对SEQ ID NO:1的KD范围是约1pM至约50nM，例如约1pM至约25nM、约1pM至约10nM、约1pM至约5nM、约1pM至约500pM、约5pM至约250pM，或约10pM至约100pM。
[0248] 在一些实施方案中，抗τ抗体以高亲和力特异性结合至人类τ蛋白的一种以上剪接同功型(例如剪接同功型2N4R、2N3R、1N4R、1N3R、0N4R和0N3R中的两种、三种、四种、五种或全部六种)。在一些实施方案中，所述抗体对人类τ蛋白的两种或更多种剪接同功型的KD小于50nM，例如小于40nM、小于30nM、小于25nM、小于20nM、小于15nM、小于10nM、小于5nM、小于1nM、小于500pM、小于250pM、小于150pM、小于100pM、小于50pM、小于40pM、小于30pM、小于
20pM，或小于约10pM。在一些实施方案中，所述抗体对人类τ蛋白的两种或更多种剪接同功型的KD范围是约1pM至约50nM，例如约1pM至约25nM、约1pM至约10nM、约1pM至约5nM、约1pM至约500pM、约5pM至约250pM，或约10pM至约100pM。
[0249] 在一些实施方案中，所述抗τ抗体与食蟹猕猴(“cyno”)τ蛋白(例如具有序列SEQ ID NO:7的cynoτ蛋白)展现交叉反应性。在一些实施方案中，所述抗τ抗体与小鼠τ蛋白(例如具有序列SEQ ID NO:6的小鼠τ蛋白)展现交叉反应性。在一些实施方案中，所述抗τ抗体与食蟹猕猴(“cyno”)τ蛋白(例如具有序列SEQ ID NO:7的cynoτ蛋白)和小鼠τ蛋白(例如具有序列SEQ ID NO:6的小鼠τ蛋白)展现交叉反应性。
[0250] 用于分析结合亲和力、结合动力学和交叉反应性的方法是本领域中所知的。这些方法包括但不限于，固相结合分析(例如ELISA分析)、免疫沉淀法、表面等离子体共振(例如BiacoreTM(GE Healthcare,Piscataway,NJ))、动力学排除分析(例如 )、流式细胞
术、荧光活化细胞分选(FACS)、生物膜层干涉法(例如OctetTM(FortéBio,Inc.,Menlo Park,CA))以及蛋白质印迹分析。在一些实施方案中，使用ELISA测定结合亲和力和/或交叉反应
性。用于进行ELISA分析的方法是本领域中所知的，并且在以下实施例部分中也有描述。在一些实施方案中，使用表面等离子体共振(SPR)测定结合亲和力、结合动力学和/或交叉反
应性。在一些实施方案中，使用动力学排除分析测定结合亲和力、结合动力学和/或交叉反应性。在一些实施方案中，使用生物膜层干涉分析测定结合亲和力、结合动力学和/或交叉反应性。
[0251] 在一些实施方案中，抗τ抗体识别具有序列TPSLEDEAAGHVTQA(SEQ ID NO:35)或由所述序列组成的人类τ蛋白的表位，所述序列对应于SEQ ID NO:1的残基111-125。在一些实施方案中，抗τ抗体识别在SEQ ID NO:1的残基111-125内的表位。在一些实施方案中，抗τ抗体识别在SEQ ID NO:1的残基111-125内的包含至少4个、至少5个、至少6个、至少7个、至少8个、至少9个或至少10个氨基酸的表位。在一些实施方案中，抗τ抗体识别在SEQ ID NO:1的残基111-125内的包含至少4个、至少5个、至少6个、至少7个、至少8个、至少9个或至少10个连续氨基酸的表位。在一些实施方案中，抗τ抗体识别在SEQ ID NO:1的残基111-125内的包含4-15、4-12、4-10、4-8、5-15、5-12、5-10、5-8、6-15、6-12、6-10、6-8、8-15、8-12、8-10、10-
15、10-12或12-15个连续氨基酸的表位。在一些实施方案中，所述表位不是由序列AAGHV
(SEQ ID NO:632)组成的表位。
[0252] 在一些实施方案中，抗τ抗体识别具有序列PDLKNVKSKIGSTENLKHQP(SEQ ID NO:36)或由所述序列组成的人类τ蛋白的表位，所述序列对应于SEQ ID NO:1的残基251-270。
在一些实施方案中，抗τ抗体识别在SEQ ID NO:1的残基251-270内的表位。在一些实施方案中，抗τ抗体识别具有序列VKSKIGSTENLKHQP(SEQ ID NO:37)或由所述序列组成的人类τ蛋白的表位，所述序列对应于SEQ ID NO:1的残基256-270。在一些实施方案中，抗τ抗体识别具有序列SKIGS(SEQ ID NO:39)或由所述序列组成的人类τ蛋白的表位，所述序列对应于
SEQ ID NO:1的残基251-270。在一些实施方案中，抗τ抗体识别在SEQ ID NO:1的残基251-
270内或在SEQ ID NO:1的残基256-270内的包含至少4个、至少5个、至少6个、至少7个、至少
8个、至少9个或至少10个氨基酸的表位。在一些实施方案中，抗τ抗体识别在SEQ ID NO:1的残基251-270内或在SEQ ID NO:1的残基256-270内的包含至少4个、至少5个、至少6个、至少
7个、至少8个、至少9个或至少10个连续氨基酸的表位。在一些实施方案中，抗τ抗体识别在SEQ ID NO:1的残基251-270内或在SEQ ID NO:1的残基256-270内的包含4-15、4-12、4-10、
4-8、5-15、5-12、5-10、5-8、6-15、6-12、6-10、6-8、8-15、8-12、8-10、10-15、10-12或12-15个连续氨基酸的表位。
[0253] 在一些实施方案中，抗τ抗体识别具有序列FKDRVQSKIGSLDNI(SEQ ID NO:38)或由所述序列组成的人类τ蛋白的表位，所述序列对应于SEQ ID NO:1的残基346-360。在一些实施方案中，抗τ抗体识别在SEQ ID NO:1的残基346-360内的表位。在一些实施方案中，抗τ抗体识别具有序列SKIGS(SEQ ID NO:52)或由所述序列组成的人类τ蛋白的表位，所述序列对应于SEQ ID NO:1的残基346-360。在一些实施方案中，抗τ抗体识别在SEQ ID NO:1的残基
346-360内的包含至少4个、至少5个、至少6个、至少7个、至少8个、至少9个或至少10个氨基酸的表位。在一些实施方案中，抗τ抗体识别在SEQ ID NO:1的残基346-360内的包含至少4个、至少5个、至少6个、至少7个、至少8个、至少9个或至少10个连续氨基酸的表位。在一些实施方案中，抗τ抗体识别在SEQ ID NO:1的残基346-360内的包含4-15、4-12、4-10、4-8、5-
15、5-12、5-10、5-8、6-15、6-12、6-10、6-8、8-15、8-12、8-10、10-15、10-12或12-15个连续氨基酸的表位。
[0254] 在一些实施方案中，抗τ抗体具有双重表位特异性并且识别具有对应于SEQ ID NO:1的残基251-270的序列PDLKNVKSKIGSTENLKHQP(SEQ ID NO:36)、由所述序列组成或在
所述序列内的人类τ蛋白的表位，以及具有对应于SEQ ID NO:1的残基346-360的序列
FKDRVQSKIGSLDNI(SEQ ID NO:38)、由所述序列组成或在所述序列内的表位。在一些实施方案中，抗τ抗体是双表位抗体，其识别具有对应于SEQ ID NO:1的残基256-270的序列
VKSKIGSTENLKHQP(SEQ ID NO:37)、由所述序列组成或在所述序列内的表位，并且还识别具有对应于SEQ ID NO:1的残基346-360的序列FKDRVQSKIGSLDNI(SEQ ID NO:38)、由所述序
列组成或在所述序列内的表位。在一些实施方案中，抗τ抗体是双表位抗体，其识别在SEQ ID NO:1的残基251-270内的人类τ蛋白的表位并且还识别在SEQ ID NO:1的残基346-360内
的表位。在一些实施方案中，抗τ抗体是双表位抗体，其识别在SEQ ID NO:1的残基256-270内的表位并且还识别在SEQ ID NO:1的残基346-360内的表位。在一些实施方案中，抗τ抗体识别在SEQ ID NO:1的残基251-270内和/或在SEQ ID NO:1的残基346-360内的包含序列
SKIGS(SEQ ID NO:39)的表位。
[0255] 在一些实施方案中，抗τ抗体识别具有序列GEPPKSGDRSGYSSPGSPGT(SEQ ID NO:178)或由所述序列组成的人类τ蛋白的表位，所述序列对应于SEQ ID NO:1的残基186-205。
在一些实施方案中，抗τ抗体识别在SEQ ID NO:1的残基186-205内的表位。在一些实施方案中，抗τ抗体识别具有序列GEPPKSGDRSGYSSP(SEQ ID NO:179)或由所述序列组成的人类τ蛋白的表位，所述序列对应于SEQ ID NO:1的残基186-200。在一些实施方案中，抗τ抗体识别在SEQ ID NO:1的残基186-200内的表位。在一些实施方案中，抗τ抗体识别具有序列
SGDRSGYSSPGSPGT(SEQ ID NO:180)或由所述序列组成的人类τ蛋白的表位，所述序列对应
于SEQ ID NO:1的残基191-205。在一些实施方案中，抗τ抗体识别在SEQ ID NO:1的残基
191-205内的表位。在一些实施方案中，抗τ抗体识别在SEQ ID NO:1的残基186-205内、在SEQ ID NO:1的残基186-200内或在SEQ ID NO:1的残基191-205内的包含至少4个、至少5
个、至少6个、至少7个、至少8个、至少9个或至少10个氨基酸的表位。在一些实施方案中，抗τ抗体识别在SEQ ID NO:1的残基186-205内、在SEQ ID NO:1的残基186-200内或在SEQ ID 
NO:1的残基191-205内的包含至少4个、至少5个、至少6个、至少7个、至少8个、至少9个或至少10个连续氨基酸的表位。在一些实施方案中，抗τ抗体识别在SEQ ID NO:1的残基186-205内、在SEQ ID NO:1的残基186-200内或在SEQ ID NO:1的残基191-205内的包含4-15、4-12、
4-10、4-8、5-15、5-12、5-10、5-8、6-15、6-12、6-10、6-8、8-15、8-12、8-10、10-15、10-12或
12-15个连续氨基酸的表位。
[0256] 在一些实施方案中，抗τ抗体识别人类τ蛋白中与选自由19F7.C9和24D2.B2组成的组的抗体克隆所识别的表位相同或大体上相同的表位。在一些实施方案中，由抗体克隆19F7.C9或24D2.B2所识别的表位包含一个或多个在SEQ ID NO:1的残基50-421内的残基。
在一些实施方案中，由抗体克隆19F7.C9或24D2.B2所识别的表位是在SEQ ID NO:1的残基
50-421内。如关于本文所描述的抗体克隆所识别的表位所使用，本文所使用的术语“大体上相同”意谓，抗τ抗体识别与本文所描述的抗体克隆所识别的表位一致、在一定同一性范围内或近似一致(例如相对于所述表位，具有至少90％序列同一性，或具有一个、两个或三个氨基酸取代，例如保守取代)或与所述表位大体上重叠(例如至少50％、60％、70％、80％、
90％或95％重叠)的表位。
[0257] 抗τ抗体序列
[0258] 在一些实施方案中，特异性结合至人类τ蛋白的抗体或其抗原结合部分包含源自于以下本文所描述的抗体中的任一种的轻链序列或其部分，和/或重链序列或其部分：克隆
1A1、克隆1A5、克隆1D10、克隆1G7、克隆1C7、克隆1H_G11、克隆1H_B12、克隆17G2.A1、hu1C7.v1、hu1C7.v2、hu1C7.v3、hu1C7.v4、hu1C7.v2-1及hu1C7.v2-2。这些抗τ抗体的轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)的氨基酸序列如下：克隆1A1(例如SEQ ID NO:8和12)、克隆
1A5(例如SEQ ID NO:16和19)、克隆1D10(例如SEQ ID NO:29和31)、克隆1G7(例如SEQ ID 
NO:32和34)、克隆1C7(例如SEQ ID NO:21和25)、克隆1H_G11(例如SEQ ID NO:40和41)、克隆1H_B12(例如SEQ ID NO:40和45)、克隆17G2.A1(例如SEQ ID NO:167和171)、hu1C7.v1
(例如SEQ ID NO:145和149)、hu1C7.v2(例如SEQ ID NO:146和149)、hu1C7.v3(例如SEQ ID NO:147和149)、hu1C7.v4(例如SEQ ID NO:148和149)、hu1C7.v2-1(例如SEQ ID NO:146和
463)及hu1C7.v2-2(例如SEQ ID NO:146和464)。
[0259] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含与SEQ ID NO:8、16、21、29、32、40、145-148和167中的任一个具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的重链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:8、16、21、29、32、40、145-148和167中任一个的氨基酸序列的重链可变区。在一些实施方案中，与参考序列(例如SEQ ID NO:8、
16、21、29、32、40、145-148和167)具有至少90％序列同一性的重链可变区序列相对于所述参考序列含有一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或更多个取代(例如保守取代)、插入或缺失，但保持特异性结合至人类τ蛋白和识别一个或多个如本文所描述的表位的能力。在一些实施方案中，重链可变区在SEQ ID NO:8、16、21、29、32、40、145-
148和167中的任一个中含有一个、两个或三个取代(例如保守取代)。
[0260] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含与SEQ ID NO:12、19、25、31、34、41、45、149、171、463和464中的任一个具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含12、19、25、31、34、41、45、149、171、463和
464中任一个的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，与参考序列(例如SEQ ID 
NO:12、19、25、31、34、41、45、149、171、463和464)具有至少90％序列同一性的轻链可变区序列相对于所述参考序列含有一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或更多个取代(例如保守取代)、插入或缺失，但保持结合至人类τ蛋白和识别一个或多个如本文所描述的表位的能力。在一些实施方案中，轻链可变区在SEQ ID NO:12、19、25、31、34、41、
45、149、171、463和464中的任一个中含有一个、两个或三个取代(例如保守取代)。
[0261] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含与SEQ ID NO:8、16、21、29、32、40、145-148和167中的任一个具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的重链可变区且进一步包括含与SEQ ID NO:12、19、25、31、34、41、45、149、171、463和464中的任一个具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少
96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:8、16、21、29、32、40、145-148和167中的任一个的氨基酸序列的重链可变区且进一步包括含SEQ ID NO:12、19、25、31、34、41、45、149、171、463和
464中的任一个的氨基酸序列的轻链可变区。
[0262] 识别残基111-125内的表位的抗τ抗体
[0263] 在一些实施方案中，抗τ抗体识别在SEQ ID NO:1的残基111-125内的表位(例如包含残基111-125内的至少6个连续氨基酸的表位)，或识别包含SEQ ID NO:1的残基111-125
或由所述残基组成的表位。在一些实施方案中，抗τ抗体进一步包含一个或多个如本文所述(例如，如序列表中所述)的互补决定区(CDR)、重链可变区和/或轻链可变区序列。
[0264] 在一些实施方案中，抗τ抗体特异性结合至具有序列TPSLEDEAAGHVTQA(SEQ ID NO:70)的肽，所述序列对应于SEQ ID NO:1的残基111-125。在一些实施方案中，SEQ ID NO:
70中所陈述的肽序列足以结合至抗τ抗体。在一些实施方案中，抗τ抗体进一步包含一个或多个如本文所述(例如，如序列表中所述)的互补决定区(CDR)、重链可变区和/或轻链可变
区序列。
[0265] 在一些实施方案中，抗τ抗体包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：
[0266] (a)与SEQ ID NO:22的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:22的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR1；
[0267] (b)与SEQ ID NO:23的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:23的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR2；
[0268] (c)与SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR3；
[0269] (d)与SEQ ID NO:26和42中任一个的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:26和42中任一个的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR1；
[0270] (e)与SEQ ID NO:27、43和50中任一个的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:27、43和50中任一个的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链
CDR2；以及
[0271] (f)与SEQ ID NO:28、44、46和51中任一个的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:28、44、46和51中任一个的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻
链CDR3。
[0272] 在一些实施方案中，抗τ抗体包含(a)-(f)中的两个、三个、四个、五个或全部六个。在一些实施方案中，抗τ抗体包含(a)的重链CDR1、(b)的重链CDR2和(c)的重链CDR3。在一些实施方案中，抗τ抗体包含(d)的轻链CDR1、(e)的轻链CDR2和(f)的轻链CDR3。在一些实施方案中，具有至多两个氨基酸取代的CDR相对于参考序列具有一个氨基酸取代。在一些实施方案中，具有至多两个氨基酸取代的CDR相对于参考序列具有两个氨基酸取代。在一些实施方案中，所述至多两个氨基酸取代是保守取代。
[0273] 在一些实施方案中，抗τ抗体包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：
[0274] (a)含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的重链CDR1；
[0275] (b)含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链CDR2；
[0276] (c)含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3；
[0277] (d)含SEQ ID NO:26和42中任一个的氨基酸序列的轻链CDR1；
[0278] (e)含SEQ ID NO:27、43和50中任一个的氨基酸序列的轻链CDR2；以及
[0279] (f)含SEQ ID NO:28、44、46和51中任一个的氨基酸序列的轻链CDR3。
[0280] 在一些实施方案中，抗τ抗体包含(a)-(f)中的两个、三个、四个、五个或全部六个。在一些实施方案中，抗τ抗体包含(a)的重链CDR1、(b)的重链CDR2和(c)的重链CDR3。在一些实施方案中，抗τ抗体包含(d)的轻链CDR1、(e)的轻链CDR2和(f)的轻链CDR3。
[0281] 在一些实施方案中，抗τ抗体包含作为一个或多个共同序列的变体的一个或多个序列。作为非限制性实施例，共同序列可以通过比对来自相同(或类似)生殖系的抗体的重
链或轻链序列(例如CDR)来鉴别。在一些实施方案中，共同序列可以由含有长度相同(或类
似)和/或具有至少一个高度类似的CDR(例如高度类似的CDR3)的序列的抗体产生。在一些
实施方案中，这些抗体中的此类序列可以通过比对和比较以在序列出现变化的情况下，鉴
别保守氨基酸或基元(即，在序列中的变化可能改变蛋白质功能时)和/或区域(即，在序列
变异不会显著影响蛋白质功能时)。或者，可以通过比对结合至相同或相似(例如重叠)表位的抗体的重链或轻链序列(例如CDR)以在序列比对时出现变化情况下，确定保守氨基酸或
基元(即，在序列中的变化可能改变蛋白质功能时)和区域(即，在序列变异不会显著影响蛋白质功能时)。在一些实施方案中，可以鉴别出与1C7识别相同或相似表位的抗体中的一个
或多个共同序列。例示性1C7样共同序列包括SEQ ID NO:50和SEQ ID NO:51。在SEQ ID NO:
50和51的共同序列中，大写的字母表示在所比对的序列(例如所比对的CDR序列)间完全保
守的氨基酸残基，而“x”表示在所比对的序列间不完全保守的氨基酸残基。应理解，当选择一个氨基酸插入标为“x”的位置处时，在一些实施方案中，所述氨基酸选自在所比对的序列中相应位置所见的氨基酸。
[0282] 在一些实施方案中，所述抗体包含具有共同序列WASxRxS(SEQ ID NO:50)的轻链CDR2序列。在一些实施方案中，轻链CDR2共同序列包含序列WAS[T/Y]R[E/Y]S(SEQ ID NO:
633)。
[0283] 在一些实施方案中，所述抗体包含具有共同序列QQYxxYPLT(SEQ ID NO:51)的轻链CDR3序列。在一些实施方案中，轻链CDR3共同序列包含序列QQY[N/S][S/T]YPLT(SEQ ID NO:634)。
[0284] 在一些实施方案中，抗τ抗体结合至SEQ ID NO:1中以下残基中的至少一个：T111、P112、S113、L114、E115、D116、E117、A118、A119、G120、H121、V122、T123、Q124或A125。在一些实施方案中，抗τ抗体结合至SEQ ID NO:1中以下残基中的至少两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个或全部十五个：T111、P112、S113、L114、E115、D116、E117、A118、A119、G120、H121、V122、T123、Q124或A125。在一些实施方案中，抗τ抗体结合至SEQ ID NO:1中的连续残基。在一些实施方案中，抗τ抗体结合至SEQ ID NO:1中的不连续残基。在一些实施方案中，抗τ抗体结合至SEQ ID NO:1中的连续和不连续残基。
[0285] 在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基T111。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基P112。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基S113。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基L114。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基E115。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基D116。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基E117。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基A118。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基A119。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基G120。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基H121。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID 
NO:1中的残基V122。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基T123。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基Q124。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基A125。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基L114和E115。
[0286] 在一些实施方案中，识别在SEQ ID NO:1的残基111-125内的表位的抗τ抗体使致病性τ蛋白播种和/或扩散防止、减少或抑制例如至少10％、15％、20％、25％、30％、35％、
40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％(例如，相较于在无抗τ抗体存在下致病性τ蛋白播种和/或扩散的量)。在一些实施方案中，识别在SEQ ID NO:1的残基111-125内的表位的抗τ抗体使τ蛋白低聚合防止、减少或抑制例如至少10％、15％、
20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或
95％(例如，相较于在无抗τ抗体存在下τ蛋白低聚合的量)。在一些实施方案中，识别在SEQ ID NO:1的残基111-125内的表位的抗τ抗体使τ蛋白聚集防止、减少或抑制例如至少10％、
15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、
90％或95％(例如，相较于在无抗τ抗体存在下τ蛋白聚集的量)。在一些实施方案中，识别在SEQ ID NO:1的残基111-125内的表位的抗τ抗体使另一抗τ抗体的结合防止、减少或抑制例如至少10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、
80％、85％、90％或95％(例如，相较于在无识别SEQ ID NO:1的残基111-125内的表位的抗τ抗体存在下的抗体结合)。用于测量τ蛋白播种、扩散、低聚合和/或聚集的方法是本领域中已知的。一种此类用于测量τ蛋白播种和/或聚集的方法的具体实施例描述于实施例2中。
[0287] 1C7
[0288] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的重链CDR1序列、含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链CDR2序列和含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3序列。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:26的氨基酸序列的轻链CDR1序
列、含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2序列和含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链
CDR3序列。在一些实施方案中，抗τ抗体包括分别含SEQ ID NO:22、23、24、26、27和28的氨基酸序列的重链CDR1-3和轻链CDR1-3。
[0289] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含与SEQ ID NO:21具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的重链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的重链可变区。
[0290] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含与SEQ ID NO:25具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的轻链可变区。
[0291] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含与SEQ ID NO:21具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的重链可变区且进一步包括含与SEQ ID NO:25具有至少
90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少
97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的重链可变区且进一步包括含SEQ ID NO:25的
氨基酸序列的轻链可变区。
[0292] 在一些实施方案中，抗τ抗体是与如本文所述的抗体(例如包括分别含SEQ ID NO:22、23、24、26、27和28的氨基酸序列的重链CDR1-3和轻链CDR1-3的抗体，或包括含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的重链可变区且进一步包括含SEQ ID NO:25的氨基酸序列的轻链可变
区的抗体)竞争结合的抗体。
[0293] 在一些实施方案中，抗τ抗体包含具有SEQ ID NO:315的序列的轻链、具有SEQ ID NO:316的序列的第一重链和具有SEQ ID NO:317的序列的第二重链。
[0294] 克隆1C7所识别的表位相对于基准抗体的结合位点较为有利，因为其识别针对N末端或C末端表位的抗体不识别的截短形式的τ蛋白。
[0295] 1H_G11
[0296] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的重链CDR1序列、含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链CDR2序列和含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3序列。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的轻链CDR1序
列、含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的轻链CDR2序列和含SEQ ID NO:44的氨基酸序列的轻链
CDR3序列。在一些实施方案中，抗τ抗体包括分别含SEQ ID NO:22、23、24、42、43和44的氨基酸序列的重链CDR1-3和轻链CDR1-3。
[0297] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含与SEQ ID NO:40具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的重链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:40的氨基酸序列的重链可变区。
[0298] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含与SEQ ID NO:41具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的轻链可变区。
[0299] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含与SEQ ID NO:40具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的重链可变区且进一步包括含与SEQ ID NO:41具有至少
90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少
97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:40的氨基酸序列的重链可变区且进一步包括含SEQ ID NO:41的
氨基酸序列的轻链可变区。
[0300] 在一些实施方案中，抗τ抗体是与如本文所述的抗体(例如包括分别含SEQ ID NO:22、23、24、42、43和44的氨基酸序列的重链CDR1-3和轻链CDR1-3的抗体，或包括含SEQ ID NO:40的氨基酸序列的重链可变区且进一步包括含SEQ ID NO:41的氨基酸序列的轻链可变
区的抗体)竞争结合的抗体。
[0301] 1H_B12
[0302] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的重链CDR1序列、含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链CDR2序列和含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3序列。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:42的氨基酸序列的轻链CDR1序
列、含SEQ ID NO:43的氨基酸序列的轻链CDR2序列和含SEQ ID NO:46的氨基酸序列的轻链
CDR3序列。在一些实施方案中，抗τ抗体包括分别含SEQ ID NO:22、23、24、42、43和46的氨基酸序列的重链CDR1-3和轻链CDR1-3。
[0303] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含与SEQ ID NO:40具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的重链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:40的氨基酸序列的重链可变区。
[0304] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含与SEQ ID NO:45具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:45的氨基酸序列的轻链可变区。
[0305] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含与SEQ ID NO:40具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的重链可变区且进一步包括含与SEQ ID NO:45具有至少
90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少
97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:40的氨基酸序列的重链可变区且进一步包括含SEQ ID NO:45的
氨基酸序列的轻链可变区。
[0306] 在一些实施方案中，抗τ抗体是与如本文所述的抗体(例如包括分别含SEQ ID NO:22、23、24、42、43和46的氨基酸序列的重链CDR1-3和轻链CDR1-3的抗体，或包括含SEQ ID NO:40的氨基酸序列的重链可变区且进一步包括含SEQ ID NO:45的氨基酸序列的轻链可变
区的抗体)竞争结合的抗体。
[0307] 识别在残基251-270和/或残基346-360内的表位的抗τ抗体
[0308] 在一些实施方案中，抗τ抗体识别在SEQ ID NO:1的残基251-270内的表位(例如在SEQ ID NO:1的残基256-270内的表位或包含在残基251-270内的序列SKIGS的表位)和/或
识别在残基346-360内的表位(例如包含在残基346-360内的序列SKIGS的表位)。在一些实
施方案中，抗τ抗体识别在SEQ ID NO:1的残基251-270内的表位(例如在SEQ ID NO:1的残
基256-270内的表位或包含在残基251-270内的序列SKIGS的表位)和在残基346-360内的表
位(例如包含在残基346-360内的序列SKIGS的表位)。在一些实施方案中，所述抗体进一步
包含一个或多个如本文所述(例如，如序列表中所述)的互补决定区(CDR)、重链可变区和/
或轻链可变区。
[0309] 在一些实施方案中，抗τ抗体特异性结合至具有序列PDLKNVKSKIGSTEN(SEQ ID NO:113)的肽，所述序列对应于SEQ ID NO:1的残基251-265。在一些实施方案中，SEQ ID 
NO:113中所陈述的肽序列足以结合至抗τ抗体。在一些实施方案中，抗τ抗体进一步包含一个或多个如本文所述(例如，如序列表中所述)的互补决定区(CDR)、重链可变区和/或轻链
可变区序列。
[0310] 在一些实施方案中，抗τ抗体特异性结合至具有序列VKSKIGSTENLKHQP(SEQ ID NO:112)的肽，所述序列对应于SEQ ID NO:1的残基256-270。在一些实施方案中，SEQ ID 
NO:112中所陈述的肽序列足以结合至抗τ抗体。在一些实施方案中，抗τ抗体进一步包含一个或多个如本文所述(例如，如序列表中所述)的互补决定区(CDR)、重链可变区和/或轻链
可变区序列。
[0311] 在一些实施方案中，抗τ抗体特异性结合至具有序列FKDRVQSKIGSLDNI(SEQ ID NO:117)的肽，所述序列对应于SEQ ID NO:1的残基346-360。在一些实施方案中，SEQ ID 
NO:117中所陈述的肽序列足以结合至抗τ抗体。在一些实施方案中，抗τ抗体进一步包含一个或多个如本文所述(例如，如序列表中所述)的互补决定区(CDR)、重链可变区和/或轻链
可变区序列。
[0312] 在一些实施方案中，抗τ抗体包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：
[0313] (a)与SEQ ID NO:9、17和47中任一个的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:9、17和47中任一个的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR1；
[0314] (b)与SEQ ID NO:10的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:10的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR2；
[0315] (c)与SEQ ID NO:11、18、30、33和48中任一个的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:11、18、30、33和48中任一个的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR3；
[0316] (d)与SEQ ID NO:13的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:13的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR1；
[0317] (e)与SEQ ID NO:14的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:14的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR2；以及
[0318] (f)与SEQ ID NO:15、20和49中任一个的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:15、20和49中任一个的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链
CDR3。
[0319] 在一些实施方案中，抗τ抗体包含(a)-(f)中的两个、三个、四个、五个或全部六个。在一些实施方案中，抗τ抗体包含(a)的重链CDR1、(b)的重链CDR2和(c)的重链CDR3。在一些实施方案中，抗τ抗体包含(d)的轻链CDR1、(e)的轻链CDR2和(f)的轻链CDR3。在一些实施方案中，具有至多两个氨基酸取代的CDR相对于参考序列具有一个氨基酸取代。在一些实施方案中，具有至多两个氨基酸取代的CDR相对于参考序列具有两个氨基酸取代。在一些实施方案中，所述至多两个氨基酸取代是保守取代。
[0320] 在一些实施方案中，抗τ抗体包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：
[0321] (a)含SEQ ID NO:9、17和47中任一个的氨基酸序列的重链CDR1；
[0322] (b)含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链CDR2；
[0323] (c)含SEQ ID NO:11、18、30、33和48中任一个的氨基酸序列的重链CDR3；
[0324] (d)含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的轻链CDR1；
[0325] (e)含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的轻链CDR2；以及
[0326] (f)含SEQ ID NO:15、20和49中任一个的氨基酸序列的轻链CDR3。
[0327] 在一些实施方案中，抗τ抗体包含(a)-(f)中的两个、三个、四个、五个或全部六个。在一些实施方案中，抗τ抗体包含(a)的重链CDR1、(b)的重链CDR2和(c)的重链CDR3。在一些实施方案中，抗τ抗体包含(d)的轻链CDR1、(e)的轻链CDR2和(f)的轻链CDR3。
[0328] 在一些实施方案中，抗τ抗体包含一个或多个共同序列。在一些实施方案中，可以鉴别出与1A1识别相同或相似的一个或多个表位的抗体中的一个或多个共同序列。例示性1A1样共同序列包括SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:48和SEQ ID NO:49。在SEQ ID NO:47-49的
共同序列中，大写的字母表示在所比对的序列(例如所比对的CDR序列)间完全保守的氨基
酸残基，而“x”表示在所比对的序列间不完全保守的氨基酸残基。应理解，当选择一个氨基酸插入标为“x”的位置处时，在一些实施方案中，所述氨基酸选自在所比对的序列中相应位置所见的氨基酸。
[0329] 在一些实施方案中，所述抗体包含具有共同序列GFNIKDSLxH(SEQ ID NO:47)的重链CDR1序列。在一些实施方案中，所述重链CDR1共同序列在变化残基(“x”)处包含甲硫氨酸(M)或异亮氨酸(I)氨基酸。
[0330] 在一些实施方案中，所述抗体包含具有共同序列xRRDWEGP(SEQ ID NO:48)的重链CDR3序列。在一些实施方案中，所述重链CDR3共同序列在变化残基(“x”)处包含丙氨酸(A)或苏氨酸(T)氨基酸。
[0331] 在一些实施方案中，所述抗体包含具有共同序列VQGTHFPxT(SEQ ID NO:49)的轻链CDR3序列。在一些实施方案中，所述轻链CDR3共同序列在变化残基(“x”)处包含苯丙氨酸(F)或酪氨酸(Y)氨基酸。
[0332] 在一些实施方案中，抗τ抗体结合至SEQ ID NO:1中的以下残基中的至少一个：P251、D252、L253、K254、N255、V256、K257、S258、K259、I260、G261、S262、T263、E264、N265、L266、K267、H268、Q269或P270。在一些实施方案中，抗τ抗体结合至SEQ ID NO:1中的以下残基中的至少一个：F346、K347、D348、R349、V350、Q351、S352、K353、I354、G355、S356、L357、D358、N359或I360。在一些实施方案中，抗τ抗体结合至SEQ ID NO:1中的以下残基中的至少一个：P251、D252、L253、K254、N255、V256、K257、S258、K259、I260、G261、S262、T263、E264、N265、L266、K267、H268、Q269或P270，和SEQ ID NO:1中的以下残基中的至少一个：F346、K347、D348、R349、V350、Q351、S352、K353、I354、G355、S356、L357、D358、N359或I360。
[0333] 在一些实施方案中，抗τ抗体结合至SEQ ID NO:1中的以下残基中的至少两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个、十七个、十八个、十九个或全部二十个：P251、D252、L253、K254、N255、V256、K257、S258、K259、I260、G261、S262、T263、E264、N265、L266、K267、H268、Q269或P270。在一些实施方案中，抗τ抗体结合至SEQ ID NO:1中以下残基中的至少两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个或全部十五个：F346、K347、D348、R349、V350、Q351、S352、K353、I354、G355、S356、L357、D358、N359或I360。在一些实施方案中，抗τ抗体结合至SEQ ID NO:1中的以下残基中的至少两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个、十七个、十八个、十九个或全部二十个：P251、D252、L253、K254、N255、V256、K257、S258、K259、I260、G261、S262、T263、E264、N265、L266、K267、H268、Q269或P270，以及SEQ ID NO:1中的至少两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个或全部十五个：F346、K347、D348、R349、V350、Q351、S352、K353、I354、G355、S356、L357、D358、N359或I360。
[0334] 在一些实施方案中，抗τ抗体结合至SEQ ID NO:1的连续残基(例如在SEQ ID NO:1的残基251-270内的两个或两个以上残基，或在SEQ ID NO:1的残基346-360内的两个或两
个以上残基)。在一些实施方案中，抗τ抗体结合至SEQ ID NO:1的不连续残基(例如在SEQ ID NO:1的残基251-270内的一个或多个残基，和/或在SEQ ID NO:1的残基346-360内的一
个或多个残基)。在一些实施方案中，抗τ抗体结合至SEQ ID NO:1中的连续和不连续残基。
[0335] 在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基P251。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基D252。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基L253。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基K254。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基N255。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基V256。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基K257。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基S258。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基K259。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基I260。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基G261。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID 
NO:1中的残基S262。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基T263。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基E264。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基N265。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基L266。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基
K267。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基H268。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基Q269。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基P270。
[0336] 在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基F346。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基K347。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基D348。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基R349。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基V350。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基Q351。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基S352。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基K353。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基I354。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基G355。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基S356。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID 
NO:1中的残基L357。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基D358。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基N359。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基I360。
[0337] 在一些实施方案中，识别在SEQ ID NO:1的残基251-270内的表位和/或在SEQ ID NO:1的残基346-360内的表位的抗τ抗体使致病性τ蛋白播种和/或扩散防止、减少或抑制例如至少10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、
80％、85％、90％或95％(例如，相较于在无抗τ抗体存在下致病性τ蛋白播种和/或扩散的量)。在一些实施方案中，识别在SEQ ID NO:1的残基251-270内的表位和/或在SEQ ID NO:1的残基346-360内的表位的抗τ抗体使τ蛋白低聚合防止、减少或抑制例如至少10％、15％、
20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或
95％(例如，相较于在无抗τ抗体存在下τ蛋白低聚合的量)。在一些实施方案中，识别在SEQ ID NO:1的残基251-270内的表位和/或在SEQ ID NO:1的残基346-360内的表位的抗τ抗体
使τ蛋白聚集防止、减少或抑制例如至少10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、
50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％(例如，相较于在无抗τ抗体存在下τ蛋白聚集的量)。在一些实施方案中，识别在SEQ ID NO:1的残基251-270内的表位和/或在SEQ ID NO:1的残基346-360内的表位的抗τ抗体使另一抗τ抗体的结合防止、减少或抑制例如至少10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、
75％、80％、85％、90％或95％(例如，相较于在无识别SEQ ID NO:1的残基251-270内的表位和/或在SEQ ID NO:1的残基346-360内的表位的抗τ抗体存在下的抗体结合)。用于测量τ蛋白播种、扩散、低聚合和/或聚集的方法是本领域中已知的。一种此类用于测量τ蛋白播种和/或聚集的方法的具体实施例描述于实施例2中。
[0338] 1A1
[0339] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链CDR1序列、含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链CDR2序列和含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的重链
CDR3序列。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的轻链CDR1序
列、含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的轻链CDR2序列和含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的轻链
CDR3序列。在一些实施方案中，抗τ抗体包括分别含SEQ ID NO:9、10、11、13、14和15的氨基酸序列的重链CDR1-3和轻链CDR1-3。
[0340] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含与SEQ ID NO:8具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的重链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的重链可变区。
[0341] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含与SEQ ID NO:12具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的轻链可变区。
[0342] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含与SEQ ID NO:8具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的重链可变区且进一步包括含与SEQ ID NO:12具有至少
90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少
97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的重链可变区且进一步包括含SEQ ID NO:12的
氨基酸序列的轻链可变区。
[0343] 在一些实施方案中，抗τ抗体是与如本文所述的抗体(例如包括分别含SEQ ID NO:9、10、11、13、14和15的氨基酸序列的重链CDR1-3和轻链CDR1-3的抗体，或包括含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的重链可变区且进一步包括含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的轻链可变
区的抗体)竞争结合的抗体。
[0344] 在一些实施方案中，如本文所描述，具有一个或多个CDR序列、重链可变区序列和/或轻链可变区序列的抗τ抗体识别在SEQ ID NO:1的残基251-270内的未磷酸化的表位。在一些实施方案中，所述抗体识别在SEQ ID NO:1的残基251-270内的磷酸化表位。在一些实
施方案中，所述抗体识别在SEQ ID NO:1的残基251-270内的残基Ser258处磷酸化的磷酸化
表位。在一些实施方案中，所述抗体识别在SEQ ID NO:1的残基251-270内的残基Ser262处
磷酸化的磷酸化表位。在一些实施方案中，所述抗体识别在SEQ ID NO:1的残基251-270内
的残基Ser258和残基Ser262处磷酸化的磷酸化表位。
[0345] 在一些实施方案中，如本文所描述，具有一个或多个CDR序列、重链可变区序列和/或轻链可变区序列的抗τ抗体识别在SEQ ID NO:1的残基346-360表位内的未磷酸化的表位。在一些实施方案中，所述抗体识别在SEQ ID NO:1的残基346-360内的磷酸化表位。在一些实施方案中，所述抗体识别在SEQ ID NO:1的残基346-360内的残基Ser352处磷酸化的磷
酸化表位。在一些实施方案中，所述抗体识别在SEQ ID NO:1的残基346-360内的残基
Ser356处磷酸化的磷酸化表位。在一些实施方案中，所述抗体不识别在SEQ ID NO:1的残基
346-360内的残基Ser352和残基Ser356处磷酸化的磷酸化表位。
[0346] 1A5
[0347] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的重链CDR1序列、含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链CDR2序列和含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的重链CDR3序列。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的轻链CDR1序
列、含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的轻链CDR2序列和含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的轻链
CDR3序列。在一些实施方案中，抗τ抗体包括分别含SEQ ID NO:17、10、18、13、14和20的氨基酸序列的重链CDR1-3和轻链CDR1-3。
[0348] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含与SEQ ID NO:16具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的重链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:16的氨基酸序列的重链可变区。
[0349] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含与SEQ ID NO:19具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的轻链可变区。
[0350] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含与SEQ ID NO:16具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的重链可变区且进一步包括含与SEQ ID NO:19具有至少
90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少
97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:16的氨基酸序列的重链可变区且进一步包括含SEQ ID NO:19的
氨基酸序列的轻链可变区。
[0351] 在一些实施方案中，抗τ抗体是与如本文所述的抗体(例如包括分别含SEQ ID NO:17、10、18、13、14和20的氨基酸序列的重链CDR1-3和轻链CDR1-3的抗体，或包括含SEQ ID NO:16的氨基酸序列的重链可变区且进一步包括含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的轻链可变
区的抗体)竞争结合的抗体。
[0352] 在一些实施方案中，如本文所描述，具有一个或多个CDR序列、重链可变区序列和/或轻链可变区序列的抗τ抗体识别在SEQ ID NO:1的残基251-270内的未磷酸化的表位。在一些实施方案中，所述抗体识别在SEQ ID NO:1的残基251-270内的磷酸化表位。在一些实
施方案中，所述抗体识别在SEQ ID NO:1的残基251-270内的残基Ser258处磷酸化的磷酸化
表位。在一些实施方案中，所述抗体不识别在SEQ ID NO:1的残基251-270内的残基Ser262
处磷酸化或在残基Ser258和残基Ser262处磷酸化的磷酸化表位。
[0353] 在一些实施方案中，如本文所描述，具有一个或多个CDR序列、重链可变区序列和/或轻链可变区序列的抗τ抗体识别在SEQ ID NO:1的残基346-360内的未磷酸化的表位。在一些实施方案中，所述抗体不识别在SEQ ID NO:1的残基346-360内的磷酸化表位。
[0354] 1D10
[0355] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链CDR1序列、含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链CDR2序列和含SEQ ID NO:30的氨基酸序列的重链
CDR3序列。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的轻链CDR1序
列、含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的轻链CDR2序列和含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的轻链
CDR3序列。在一些实施方案中，抗τ抗体包括分别含SEQ ID NO:9、10、30、13、14和20的氨基酸序列的重链CDR1-3和轻链CDR1-3。
[0356] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含与SEQ ID NO:29具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的重链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:29的氨基酸序列的重链可变区。
[0357] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含与SEQ ID NO:31具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的轻链可变区。
[0358] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含与SEQ ID NO:29具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的重链可变区且进一步包括含与SEQ ID NO:31具有至少
90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少
97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:29的氨基酸序列的重链可变区且进一步包括含SEQ ID NO:31的
氨基酸序列的轻链可变区。
[0359] 在一些实施方案中，抗τ抗体是与如本文所述的抗体(例如包括分别含SEQ ID NO:9、10、30、13、14和20的氨基酸序列的重链CDR1-3和轻链CDR1-3的抗体，或包括含SEQ ID NO:29的氨基酸序列的重链可变区且进一步包括含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的轻链可变
区的抗体)竞争结合的抗体。
[0360] 在一些实施方案中，如本文所描述，具有一个或多个CDR序列、重链可变区序列和/或轻链可变区序列的抗τ抗体识别在SEQ ID NO:1的残基251-270内的未磷酸化的表位。在一些实施方案中，所述抗体识别在SEQ ID NO:1的残基251-270内的磷酸化表位。在一些实
施方案中，所述抗体识别在SEQ ID NO:1的残基251-270内的残基Ser258处磷酸化的磷酸化
表位。在一些实施方案中，所述抗体识别在SEQ ID NO:1的残基251-270内的残基Ser262处
磷酸化的磷酸化表位。在一些实施方案中，所述抗体不识别在残基251-270内的残基Ser258和残基Ser262处磷酸化的磷酸化表位。
[0361] 在一些实施方案中，如本文所描述，具有一个或多个CDR序列、重链可变区序列和/或轻链可变区序列的抗τ抗体识别在SEQ ID NO:1的残基346-360内的未磷酸化的表位。在一些实施方案中，所述抗体不识别在SEQ ID NO:1的残基346-360内的磷酸化表位。
[0362] 1G7
[0363] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链CDR1序列、含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链CDR2序列和含SEQ ID NO:33的氨基酸序列的重链
CDR3序列。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的轻链CDR1序
列、含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的轻链CDR2序列和含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的轻链
CDR3序列。在一些实施方案中，抗τ抗体包括分别含SEQ ID NO:9、10、33、13、14和20的氨基酸序列的重链CDR1-3和轻链CDR1-3。
[0364] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含与SEQ ID NO:32具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的重链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的重链可变区。
[0365] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含与SEQ ID NO:34具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的轻链可变区。
[0366] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含与SEQ ID NO:32具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的重链可变区且进一步包括含与SEQ ID NO:34具有至少
90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少
97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的重链可变区且进一步包括含SEQ ID NO:34的
氨基酸序列的轻链可变区。
[0367] 在一些实施方案中，抗τ抗体是与如本文所述的抗体(例如包括分别含SEQ ID NO:9、10、33、13、14和20的氨基酸序列的重链CDR1-3和轻链CDR1-3的抗体，或包括含SEQ ID NO:32的氨基酸序列的重链可变区且进一步包括含SEQ ID NO:34的氨基酸序列的轻链可变
区的抗体)竞争结合的抗体。
[0368] 在一些实施方案中，如本文所描述，具有一个或多个CDR序列、重链可变区序列和/或轻链可变区序列的抗τ抗体识别在SEQ ID NO:1的残基251-270内的未磷酸化的表位。在一些实施方案中，所述抗体识别在SEQ ID NO:1的残基251-270内的磷酸化表位。在一些实
施方案中，所述抗体识别在SEQ ID NO:1的残基251-270内的残基Ser258处磷酸化的磷酸化
表位。在一些实施方案中，所述抗体不识别在SEQ ID NO:1的残基251-270内的残基Ser262
处磷酸化或在残基Ser258和残基Ser262处磷酸化的磷酸化表位。
[0369] 在一些实施方案中，如本文所描述，具有一个或多个CDR序列、重链可变区序列和/或轻链可变区序列的抗τ抗体识别在SEQ ID NO:1的残基346-360内的未磷酸化的表位。在一些实施方案中，所述抗体识别在SEQ ID NO:1的残基346-360内的磷酸化表位。在一些实
施方案中，所述抗体识别在SEQ ID NO:1的残基346-360内的残基Ser352处磷酸化的磷酸化
表位。在一些实施方案中，所述抗体不识别在SEQ ID NO:1的残基346-360内的残基Ser356
处磷酸化或在残基Ser352和残基Ser356处磷酸化的磷酸化表位。
[0370] 识别残基186-205内的表位的抗τ抗体
[0371] 在一些实施方案中，抗τ抗体识别在SEQ ID NO:1的残基186-205内的表位(例如包含残基186-205内的至少6个连续氨基酸的表位)，或识别包含SEQ ID NO:1的残基186-205
或由所述残基组成的表位。在一些实施方案中，抗τ抗体进一步包含一个或多个如本文所述(例如，如序列表中所述)的互补决定区(CDR)、重链可变区和/或轻链可变区序列。
[0372] 在一些实施方案中，抗τ抗体特异性结合至具有序列GEPPKSGDRSGYSSPGSPGT(SEQ ID NO:178)的肽，所述序列对应于SEQ ID NO:1的残基186-205。在一些实施方案中，SEQ ID NO:178中所陈述的肽序列足以结合至抗τ抗体。在一些实施方案中，抗τ抗体进一步包含一个或多个如本文所述(例如，如序列表中所述)的互补决定区(CDR)、重链可变区和/或轻链
可变区序列。
[0373] 在一些实施方案中，抗τ抗体包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：
[0374] (a)与SEQ ID NO:168的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:168的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR1；
[0375] (b)与SEQ ID NO:169的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:169的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR2；
[0376] (c)与SEQ ID NO:170的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:170的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR3；
[0377] (d)与SEQ ID NO:172的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:172的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR1；
[0378] (e)与SEQ ID NO:173的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:173中任一个的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR2；以及
[0379] (f)与SEQ ID NO:174的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:174中任一个的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR3。
[0380] 在一些实施方案中，抗τ抗体包含(a)-(f)中的两个、三个、四个、五个或全部六个。在一些实施方案中，抗τ抗体包含(a)的重链CDR1、(b)的重链CDR2和(c)的重链CDR3。在一些实施方案中，抗τ抗体包含(d)的轻链CDR1、(e)的轻链CDR2和(f)的轻链CDR3。在一些实施方案中，具有至多两个氨基酸取代的CDR相对于参考序列具有一个氨基酸取代。在一些实施方案中，具有至多两个氨基酸取代的CDR相对于参考序列具有两个氨基酸取代。在一些实施方案中，所述至多两个氨基酸取代是保守取代。
[0381] 在一些实施方案中，抗τ抗体包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：
[0382] (a)含SEQ ID NO:168的氨基酸序列的重链CDR1；
[0383] (b)含SEQ ID NO:169的氨基酸序列的重链CDR2；
[0384] (c)含SEQ ID NO:170的氨基酸序列的重链CDR3；
[0385] (d)含SEQ ID NO:172的氨基酸序列的轻链CDR1；
[0386] (e)含SEQ ID NO:173的氨基酸序列的轻链CDR2；以及
[0387] (f)含SEQ ID NO:174的氨基酸序列的轻链CDR3。
[0388] 在一些实施方案中，抗τ抗体包含(a)-(f)中的两个、三个、四个、五个或全部六个。在一些实施方案中，抗τ抗体包含(a)的重链CDR1、(b)的重链CDR2和(c)的重链CDR3。在一些实施方案中，抗τ抗体包含(d)的轻链CDR1、(e)的轻链CDR2和(f)的轻链CDR3。
[0389] 在一些实施方案中，抗τ抗体包含一个或多个共同序列。可以通过比对结合至相同或相似(例如重叠)表位的抗体的重链或轻链序列(例如CDR)以在序列比对时出现变化情况下，确定保守氨基酸或基元(即，在序列中的变化可能改变蛋白质功能时)和区域(即，在序列变异不会显著影响蛋白质功能时)。在一些实施方案中，可以鉴别出与17G2.A1识别相同
或相似表位的抗体中的一个或多个共同序列。
[0390] 在一些实施方案中，抗τ抗体结合至SEQ ID NO:1中的以下残基中的至少一个：G186、E187、P188、P189、K190、S191、G192、D193、R194、S195、G196、Y197、S198、S199、P200、G201、S202、P203、G204或T205。在一些实施方案中，抗τ抗体结合至SEQ ID NO:1中的以下残基中的至少两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个、十七个、十八个、十九个或全部二十个：G186、E187、P188、P189、K190、S191、G192、D193、R194、S195、G196、Y197、S198、S199、P200、G201、S202、P203、G204或T205。在一些实施方案中，抗τ抗体结合至SEQ ID NO:1中的连续残基。在一些实施方案中，抗τ抗体结合至SEQ ID NO:1中的不连续残基。在一些实施方案中，抗τ抗体结合至SEQ ID NO:1中的连续和不连续残基。
[0391] 在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基G186。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基E187。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基P188。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基P189。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基K190。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基S191。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基G192。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基D193。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基R194。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基S195。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基G196。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID 
NO:1中的残基Y197。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基S198。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基S199。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基P200。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基G201。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基
S202。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基P203。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基G204。在一些实施方案中，抗τ抗体结合到至少SEQ ID NO:1中的残基T205。
[0392] 在一些实施方案中，识别在SEQ ID NO:1的残基186-205内的表位的抗τ抗体使致病性τ蛋白播种和/或扩散防止、减少或抑制例如至少10％、15％、20％、25％、30％、35％、
40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％(例如，相较于在无抗τ抗体存在下致病性τ蛋白播种和/或扩散的量)。在一些实施方案中，识别在SEQ ID NO:1的残基186-205内的表位的抗τ抗体使τ蛋白低聚合防止、减少或抑制例如至少10％、15％、
20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或
95％(例如，相较于在无抗τ抗体存在下τ蛋白低聚合的量)。在一些实施方案中，识别在SEQ ID NO:1的残基186-205内的表位的抗τ抗体使τ蛋白聚集防止、减少或抑制例如至少10％、
15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、
90％或95％(例如，相较于在无抗τ抗体存在下τ蛋白聚集的量)。在一些实施方案中，识别在SEQ ID NO:1的残基186-205内的表位的抗τ抗体使另一抗τ抗体的结合防止、减少或抑制例如至少10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、
80％、85％、90％或95％(例如，相较于在无识别SEQ ID NO:1的残基186-205内的表位的抗τ抗体存在下的抗体结合)。用于测量τ蛋白播种、扩散、低聚合和/或聚集的方法是本领域中已知的。一种此类用于测量τ蛋白播种和/或聚集的方法的具体实施例描述于实施例2中。
[0393] 17G2.A1
[0394] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:168的氨基酸序列的重链CDR1序列、含SEQ ID NO:169的氨基酸序列的重链CDR2序列和含SEQ ID NO:170的氨基酸序列的重
链CDR3序列。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:172的氨基酸序列的轻链CDR1序列、含SEQ ID NO:173的氨基酸序列的轻链CDR2序列和含SEQ ID NO:174的氨基酸序列的
轻链CDR3序列。在一些实施方案中，抗τ抗体包括分别含SEQ ID NO:168、169、170、172、173和174的氨基酸序列的重链CDR1-3和轻链CDR1-3。
[0395] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含与SEQ ID NO:167具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的重链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:167的氨基酸序列的重链可变区。
[0396] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含与SEQ ID NO:171具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:171的氨基酸序列的轻链可变区。
[0397] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含与SEQ ID NO:167具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的重链可变区且进一步包括含与SEQ ID NO:171具
有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少
96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:167的氨基酸序列的重链可变区且进一步包括含SEQ ID NO:171的氨基酸序列的轻链可变区。
[0398] 在一些实施方案中，抗τ抗体是与如本文所述的抗体(例如包括分别含SEQ ID NO:168、169、170、172、173和174的氨基酸序列的重链CDR1-3和轻链CDR1-3的抗体，或包括含SEQ ID NO:167的氨基酸序列的重链可变区且进一步包括含SEQ ID NO:171的氨基酸序列
的轻链可变区的抗体)竞争结合的抗体。
[0399] 来自鼠类抗τ抗体1C7的人源化和亲和力成熟的抗τ抗体
[0400] 在一些实施方案中，抗τ抗体是人源化抗体。一般而言，使非人类抗体人源化以便降低其免疫原性。人源化抗体典型地包含一个或多个非人类可变区(例如CDR)(例如来源于小鼠可变区序列)或其部分，并且可包含一些非人类构架区或其部分，且进一步包含一个或多个来源于人类抗体序列的恒定区。用于使非人类抗体人源化的方法是本领域中已知的。
可以使用转基因小鼠，或其它生物体如其它哺乳动物表达人源化或人类抗体。
[0401] 如实施例5中所述，人源化抗τ抗体是通过将来自鼠类抗τ抗体1C7(mu1C7)的VL和VH区与人类VLκIV(VLKIV)和人类VH亚群III(VHIII)共同序列相比对来构建(图3)。来自mu1C7的高变区(HVR)被工程改造至VLKIV和VHIII受体构架中以产生CDR移植变体。将来自mu1C7 VL区的位置24-34(L1)、50-56(L2)和89-97(L3)移植至VLKIV中。将来自mu1C7 VH区的位置26-
35(H1)、50-65(H2)和93-102(H3)移植至VHIII中(图3)。为了评价可能很重要的构架Vernier位置，使VH中选定的Vernier位置S49和S75回复突变成鼠类序列以产生人源化克隆。
[0402] hu1C7.v1、hu1C7.v2、hu1C7.v3、hu1C7.v4、hu1C7.v2-1和hu1C7.v2-2
[0403] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含与SEQ ID NO:145-148中的任一个具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少
97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的重链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:145-148中任一个的氨基酸序列的重链可变区。
[0404] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含与SEQ ID NO:149具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:149的氨基酸序列的轻链可变区。
[0405] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含与SEQ ID NO:463具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:463的氨基酸序列的轻链可变区。
[0406] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含与SEQ ID NO:464具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:464的氨基酸序列的轻链可变区。
[0407] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含与SEQ ID NO:145-148中的任一个具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少
97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的重链可变区且进一步包括含与SEQ ID NO:149具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少
95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:145-148中任一个的氨基酸序列的重链可变区且进一步包括含SEQ ID NO:149的氨基酸序列的轻链可变区。
[0408] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含与SEQ ID NO:145-148中的任一个具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少
97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的重链可变区且进一步包括含与SEQ ID NO:463具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少
95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:145-148中任一个的氨基酸序列的重链可变区且进一步包括含SEQ ID NO:463的氨基酸序列的轻链可变区。
[0409] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含与SEQ ID NO:145-148中的任一个具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少
97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的重链可变区且进一步包括含与SEQ ID NO:464具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少
95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:145-148中任一个的氨基酸序列的重链可变区且进一步包括含SEQ ID NO:464的氨基酸序列的轻链可变区。
[0410] 在一些实施方案中，可以产生在高变区中含有变化的噬菌体文库以改善抗τ抗体的亲和力(参见例如实施例5)。可以选择噬菌体以富集具有高结合亲和力的克隆。所选克隆随后可以被测序且可以使用BiacoreTM评价其结合亲和力。
[0411] 在一些实施方案中，抗τ抗体包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：
[0412] (a)含与SEQ ID NO:22、150-154和420-437中的任一个具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的重链CDR1；
[0413] (b)含与SEQ ID NO:23和438-443中的任一个具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的重链CDR2；
[0414] (c)含与SEQ ID NO:24和155中的任一个具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的重链CDR3；
[0415] (d)含与SEQ ID NO:26、156-158和444-459中的任一个具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的轻链CDR1；
[0416] (e)含与SEQ ID NO:27具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的轻链CDR2；以及
[0417] (f)含与SEQ ID NO:28、159-162和460-462中的任一个具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的轻链CDR3。
[0418] 在一些实施方案中，亲和力成熟的抗τ抗体包含(a)-(f)中的两个、三个、四个、五个或全部六个。在一些实施方案中，抗τ抗体包含(a)的重链CDR1、(b)的重链CDR2和(c)的重链CDR3。在一些实施方案中，抗τ抗体包含(d)的轻链CDR1、(e)的轻链CDR2和(f)的轻链CDR3。
[0419] 在一些实施方案中，抗τ抗体包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：
[0420] (a)含SEQ ID NO:22、150-154和420-437中任一个的氨基酸序列的重链CDR1；
[0421] (b)含SEQ ID NO:23和438-443中任一个的氨基酸序列的重链CDR2；
[0422] (c)含SEQ ID NO:24和155中任一个的氨基酸序列的重链CDR3；
[0423] (d)含SEQ ID NO:26、156-158和444-459中任一个的氨基酸序列的轻链CDR1；
[0424] (e)含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2；以及
[0425] (f)含SEQ ID NO:28、159-162和460-462中任一个的氨基酸序列的轻链CDR3。
[0426] 在一些实施方案中，亲和力成熟的抗τ抗体包含(a)-(f)中的两个、三个、四个、五个或全部六个。在一些实施方案中，抗τ抗体包含(a)的重链CDR1、(b)的重链CDR2和(c)的重链CDR3。在一些实施方案中，抗τ抗体包含(d)的轻链CDR1、(e)的轻链CDR2和(f)的轻链CDR3。
[0427] 在一些实施方案中，亲和力成熟的抗τ抗体包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：
[0428] (a)相对于SEQ ID NO:22的氨基酸序列具有至多六个氨基酸取代的重链CDR1；
[0429] (b)相对于SEQ ID NO:23的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR2；
[0430] (c)相对于SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR3；
[0431] (d)相对于SEQ ID NO:26的氨基酸序列具有至多八个氨基酸取代的轻链CDR1；
[0432] (e)相对于SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR2；以及
[0433] (f)相对于SEQ ID NO:28的氨基酸序列具有至多三个氨基酸取代的轻链CDR3。
[0434] 在一些实施方案中，亲和力成熟的抗τ抗体包含(a)-(f)中的两个、三个、四个、五个或全部六个。在一些实施方案中，抗τ抗体包含(a)的重链CDR1、(b)的重链CDR2和(c)的重链CDR3。在一些实施方案中，抗τ抗体包含(d)的轻链CDR1、(e)的轻链CDR2和(f)的轻链CDR3。
[0435] 在一些实施方案中，亲和力成熟的抗τ抗体包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：
[0436] (a)相对于SEQ ID NO:22的氨基酸序列具有至多六个氨基酸取代的重链CDR1；
[0437] (b)相对于SEQ ID NO:23的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR2；
[0438] (c)相对于SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR3；
[0439] (d)相对于SEQ ID NO:450的氨基酸序列具有至多八个氨基酸取代的轻链CDR1；
[0440] (e)相对于SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR2；以及
[0441] (f)相对于SEQ ID NO:461的氨基酸序列具有至多三个氨基酸取代的轻链CDR3。
[0442] 在一些实施方案中，亲和力成熟的抗τ抗体包含(a)-(f)中的两个、三个、四个、五个或全部六个。在一些实施方案中，抗τ抗体包含(a)的重链CDR1、(b)的重链CDR2和(c)的重链CDR3。在一些实施方案中，抗τ抗体包含(d)的轻链CDR1、(e)的轻链CDR2和(f)的轻链CDR3。
[0443] 在一些实施方案中，亲和力成熟的抗τ抗体包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：
[0444] (a)相对于SEQ ID NO:22的氨基酸序列具有至多六个氨基酸取代的重链CDR1；
[0445] (b)相对于SEQ ID NO:23的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR2；
[0446] (c)相对于SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR3；
[0447] (d)相对于SEQ ID NO:459的氨基酸序列具有至多八个氨基酸取代的轻链CDR1；
[0448] (e)相对于SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR2；以及
[0449] (f)相对于SEQ ID NO:461的氨基酸序列具有至多三个氨基酸取代的轻链CDR3。
[0450] 在一些实施方案中，亲和力成熟的抗τ抗体包含(a)-(f)中的两个、三个、四个、五个或全部六个。在一些实施方案中，抗τ抗体包含(a)的重链CDR1、(b)的重链CDR2和(c)的重链CDR3。在一些实施方案中，抗τ抗体包含(d)的轻链CDR1、(e)的轻链CDR2和(f)的轻链CDR3。
[0451] 在一些实施方案中，抗τ抗体包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：
[0452] (a)含SEQ ID NO:163的氨基酸序列的重链CDR1；
[0453] (b)含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链CDR2；
[0454] (c)含SEQ ID NO:164的氨基酸序列的重链CDR3；
[0455] (d)含SEQ ID NO:165的氨基酸序列的轻链CDR1；
[0456] (e)含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2；以及
[0457] (f)含SEQ ID NO:166的氨基酸序列的轻链CDR3。
[0458] 在一些实施方案中，亲和力成熟的抗τ抗体包含(a)-(f)中的两个、三个、四个、五个或全部六个。在一些实施方案中，抗τ抗体包含(a)的重链CDR1、(b)的重链CDR2和(c)的重链CDR3。在一些实施方案中，抗τ抗体包含(d)的轻链CDR1、(e)的轻链CDR2和(f)的轻链CDR3。
[0459] 在一些实施方案中，抗τ抗体包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：
[0460] (a)含SEQ ID NO:465的氨基酸序列的重链CDR1；
[0461] (b)含SEQ ID NO:466的氨基酸序列的重链CDR2；
[0462] (c)含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3；
[0463] (d)含SEQ ID NO:467的氨基酸序列的轻链CDR1；
[0464] (e)含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2；以及
[0465] (f)含SEQ ID NO:468的氨基酸序列的轻链CDR3。
[0466] 在一些实施方案中，亲和力成熟的抗τ抗体包含(a)-(f)中的两个、三个、四个、五个或全部六个。在一些实施方案中，抗τ抗体包含(a)的重链CDR1、(b)的重链CDR2和(c)的重链CDR3。在一些实施方案中，抗τ抗体包含(d)的轻链CDR1、(e)的轻链CDR2和(f)的轻链CDR3。
[0467] 在一些实施方案中，抗τ抗体包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：
[0468] (a)与SEQ ID NO:22的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:22的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR1；
[0469] (b)与SEQ ID NO:23的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:23的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR2；
[0470] (c)与SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR3；
[0471] (d)与SEQ ID NO:450的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:450的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR1；
[0472] (e)与SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR2；以及
[0473] (f)与SEQ ID NO:461的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:461的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR3。
[0474] 在一些实施方案中，抗τ抗体包含(a)-(f)中的两个、三个、四个、五个或全部六个。在一些实施方案中，抗τ抗体包含(a)的重链CDR1、(b)的重链CDR2和(c)的重链CDR3。在一些实施方案中，抗τ抗体包含(d)的轻链CDR1、(e)的轻链CDR2和(f)的轻链CDR3。在一些实施方案中，具有至多两个氨基酸取代的CDR相对于参考序列具有一个氨基酸取代。在一些实施方案中，具有至多两个氨基酸取代的CDR相对于参考序列具有两个氨基酸取代。在一些实施方案中，所述至多两个氨基酸取代是保守取代。
[0475] 在一些实施方案中，抗τ抗体包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：
[0476] (a)含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的重链CDR1；
[0477] (b)含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链CDR2；
[0478] (c)含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3；
[0479] (d)含SEQ ID NO:450的氨基酸序列的轻链CDR1；
[0480] (e)含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2；以及
[0481] (f)含SEQ ID NO:461的氨基酸序列的轻链CDR3。
[0482] 在一些实施方案中，抗τ抗体包含(a)-(f)中的两个、三个、四个、五个或全部六个。在一些实施方案中，抗τ抗体包含(a)的重链CDR1、(b)的重链CDR2和(c)的重链CDR3。在一些实施方案中，抗τ抗体包含(d)的轻链CDR1、(e)的轻链CDR2和(f)的轻链CDR3。
[0483] 在一些实施方案中，抗τ抗体包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：
[0484] (a)与SEQ ID NO:22的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:22的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR1；
[0485] (b)与SEQ ID NO:23的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:23的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR2；
[0486] (c)与SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR3；
[0487] (d)与SEQ ID NO:459的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:459的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR1；
[0488] (e)与SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR2；以及
[0489] (f)与SEQ ID NO:461的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:461的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR3。
[0490] 在一些实施方案中，抗τ抗体包含(a)-(f)中的两个、三个、四个、五个或全部六个。在一些实施方案中，抗τ抗体包含(a)的重链CDR1、(b)的重链CDR2和(c)的重链CDR3。在一些实施方案中，抗τ抗体包含(d)的轻链CDR1、(e)的轻链CDR2和(f)的轻链CDR3。在一些实施方案中，具有至多两个氨基酸取代的CDR相对于参考序列具有一个氨基酸取代。在一些实施方案中，具有至多两个氨基酸取代的CDR相对于参考序列具有两个氨基酸取代。在一些实施方案中，所述至多两个氨基酸取代是保守取代。
[0491] 在一些实施方案中，抗τ抗体包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：
[0492] (a)含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的重链CDR1；
[0493] (b)含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链CDR2；
[0494] (c)含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3；
[0495] (d)含SEQ ID NO:459的氨基酸序列的轻链CDR1；
[0496] (e)含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2；以及
[0497] (f)含SEQ ID NO:461的氨基酸序列的轻链CDR3。
[0498] 在一些实施方案中，抗τ抗体包含(a)-(f)中的两个、三个、四个、五个或全部六个。在一些实施方案中，抗τ抗体包含(a)的重链CDR1、(b)的重链CDR2和(c)的重链CDR3。在一些实施方案中，抗τ抗体包含(d)的轻链CDR1、(e)的轻链CDR2和(f)的轻链CDR3。
[0499] 在一些实施方案中，抗τ抗体包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：
[0500] (a)与SEQ ID NO:150或151的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:150或151的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR1；
[0501] (b)与SEQ ID NO:23的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:23的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR2；
[0502] (c)与SEQ ID NO:155的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:155的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR3；
[0503] (d)与SEQ ID NO:450的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:450的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR1；
[0504] (e)与SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR2；以及
[0505] (f)与SEQ ID NO:461的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:461的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR3。
[0506] 在一些实施方案中，抗τ抗体包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：
[0507] (a)具有SEQ ID NO:150或151的氨基酸序列的重链CDR1；
[0508] (b)具有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链CDR2；
[0509] (c)具有SEQ ID NO:155的氨基酸序列的重链CDR3；
[0510] (d)具有SEQ ID NO:450的氨基酸序列的轻链CDR1；
[0511] (e)具有SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2；以及
[0512] (f)具有SEQ ID NO:461的氨基酸序列的轻链CDR3。
[0513] 在一些实施方案中，抗τ抗体包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：
[0514] (a)与SEQ ID NO:150或151的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:150或151的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR1；
[0515] (b)与SEQ ID NO:23的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:23的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR2；
[0516] (c)与SEQ ID NO:155的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:155的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR3；
[0517] (d)与SEQ ID NO:459的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:459的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR1；
[0518] (e)与SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR2；以及
[0519] (f)与SEQ ID NO:461的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:461的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR3。
[0520] 在一些实施方案中，抗τ抗体包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：
[0521] (a)具有SEQ ID NO:150或151的氨基酸序列的重链CDR1；
[0522] (b)具有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链CDR2；
[0523] (c)具有SEQ ID NO:155的氨基酸序列的重链CDR3；
[0524] (d)具有SEQ ID NO:459的氨基酸序列的轻链CDR1；
[0525] (e)具有SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2；以及
[0526] (f)具有SEQ ID NO:461的氨基酸序列的轻链CDR3。
[0527] 在一些实施方案中，抗τ抗体包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：
[0528] (a)与SEQ ID NO:153的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:153的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR1；
[0529] (b)与SEQ ID NO:23的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:23的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR2；
[0530] (c)与SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR3；
[0531] (d)与SEQ ID NO:158的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:158的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR1；
[0532] (e)与SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR2；以及
[0533] (f)与SEQ ID NO:28的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:28的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR3。
[0534] 在一些实施方案中，抗τ抗体包含(a)-(f)中的两个、三个、四个、五个或全部六个。在一些实施方案中，抗τ抗体包含(a)的重链CDR1、(b)的重链CDR2和(c)的重链CDR3。在一些实施方案中，抗τ抗体包含(d)的轻链CDR1、(e)的轻链CDR2和(f)的轻链CDR3。在一些实施方案中，具有至多两个氨基酸取代的CDR相对于参考序列具有一个氨基酸取代。在一些实施方案中，具有至多两个氨基酸取代的CDR相对于参考序列具有两个氨基酸取代。在一些实施方案中，所述至多两个氨基酸取代是保守取代。
[0535] 在一些实施方案中，抗τ抗体包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：
[0536] (a)含SEQ ID NO:153的氨基酸序列的重链CDR1；
[0537] (b)含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链CDR2；
[0538] (c)含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3；
[0539] (d)含SEQ ID NO:158的氨基酸序列的轻链CDR1；
[0540] (e)含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2；以及
[0541] (f)含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链CDR3。
[0542] 在一些实施方案中，抗τ抗体包含(a)-(f)中的两个、三个、四个、五个或全部六个。在一些实施方案中，抗τ抗体包含(a)的重链CDR1、(b)的重链CDR2和(c)的重链CDR3。在一些实施方案中，抗τ抗体包含(d)的轻链CDR1、(e)的轻链CDR2和(f)的轻链CDR3。
[0543] 在一些实施方案中，抗τ抗体包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：
[0544] (a)与SEQ ID NO:150的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:150的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR1；
[0545] (b)与SEQ ID NO:23的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:23的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR2；
[0546] (c)与SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:24的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR3；
[0547] (d)与SEQ ID NO:158的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:158的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR1；
[0548] (e)与SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR2；以及
[0549] (f)与SEQ ID NO:28的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:28的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR3。
[0550] 在一些实施方案中，抗τ抗体包含(a)-(f)中的两个、三个、四个、五个或全部六个。在一些实施方案中，抗τ抗体包含(a)的重链CDR1、(b)的重链CDR2和(c)的重链CDR3。在一些实施方案中，抗τ抗体包含(d)的轻链CDR1、(e)的轻链CDR2和(f)的轻链CDR3。在一些实施方案中，具有至多两个氨基酸取代的CDR相对于参考序列具有一个氨基酸取代。在一些实施方案中，具有至多两个氨基酸取代的CDR相对于参考序列具有两个氨基酸取代。在一些实施方案中，所述至多两个氨基酸取代是保守取代。
[0551] 在一些实施方案中，抗τ抗体包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：
[0552] (a)含SEQ ID NO:150的氨基酸序列的重链CDR1；
[0553] (b)含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链CDR2；
[0554] (c)含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3；
[0555] (d)含SEQ ID NO:158的氨基酸序列的轻链CDR1；
[0556] (e)含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2；以及
[0557] (f)含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链CDR3。
[0558] 在一些实施方案中，抗τ抗体包含(a)-(f)中的两个、三个、四个、五个或全部六个。在一些实施方案中，抗τ抗体包含(a)的重链CDR1、(b)的重链CDR2和(c)的重链CDR3。在一些实施方案中，抗τ抗体包含(d)的轻链CDR1、(e)的轻链CDR2和(f)的轻链CDR3。
[0559] 在一些实施方案中，抗τ抗体包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：
[0560] (a)与SEQ ID NO:22的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:22的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR1；
[0561] (b)与SEQ ID NO:23的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:23的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR2；
[0562] (c)与SEQ ID NO:155的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:155的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的重链CDR3；
[0563] (d)与SEQ ID NO:158的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:158的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR1；
[0564] (e)与SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:27的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR2；以及
[0565] (f)与SEQ ID NO:28的氨基酸序列具有至少90％序列同一性或相对于SEQ ID NO:28的氨基酸序列具有至多两个氨基酸取代的轻链CDR3。
[0566] 在一些实施方案中，抗τ抗体包含(a)-(f)中的两个、三个、四个、五个或全部六个。在一些实施方案中，抗τ抗体包含(a)的重链CDR1、(b)的重链CDR2和(c)的重链CDR3。在一些实施方案中，抗τ抗体包含(d)的轻链CDR1、(e)的轻链CDR2和(f)的轻链CDR3。在一些实施方案中，具有至多两个氨基酸取代的CDR相对于参考序列具有一个氨基酸取代。在一些实施方案中，具有至多两个氨基酸取代的CDR相对于参考序列具有两个氨基酸取代。在一些实施方案中，所述至多两个氨基酸取代是保守取代。
[0567] 在一些实施方案中，抗τ抗体包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：
[0568] (a)含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的重链CDR1；
[0569] (b)含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链CDR2；
[0570] (c)含SEQ ID NO:155的氨基酸序列的重链CDR3；
[0571] (d)含SEQ ID NO:158的氨基酸序列的轻链CDR1；
[0572] (e)含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2；以及
[0573] (f)含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链CDR3。
[0574] 在一些实施方案中，抗τ抗体包含(a)-(f)中的两个、三个、四个、五个或全部六个。在一些实施方案中，抗τ抗体包含(a)的重链CDR1、(b)的重链CDR2和(c)的重链CDR3。在一些实施方案中，抗τ抗体包含(d)的轻链CDR1、(e)的轻链CDR2和(f)的轻链CDR3。
[0575] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:151的氨基酸序列的重链CDR1序列、含SEQ ID NO:588的氨基酸序列的重链CDR2序列和含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重
链CDR3序列。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含分别为SEQ ID NO:151、588和24的重链
CDR1-3序列且氨基酸序列与SEQ ID NO:589具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少
92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的重链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:589的氨基酸序列的重链可变区。
[0576] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:426的氨基酸序列的重链CDR1序列、含SEQ ID NO:588的氨基酸序列的重链CDR2序列和含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重
链CDR3序列。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含分别为SEQ ID NO:426、588和24的重链
CDR1-3序列且氨基酸序列与SEQ ID NO:590具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少
92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的重链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:590的氨基酸序列的重链可变区。
[0577] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:427的氨基酸序列的重链CDR1序列、含SEQ ID NO:588的氨基酸序列的重链CDR2序列和含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重
链CDR3序列。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含分别为SEQ ID NO:427、588和24的重链
CDR1-3序列且氨基酸序列与SEQ ID NO:591具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少
92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的重链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:591的氨基酸序列的重链可变区。
[0578] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:428的氨基酸序列的重链CDR1序列、含SEQ ID NO:588的氨基酸序列的重链CDR2序列和含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重
链CDR3序列。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含分别为SEQ ID NO:428、588和24的重链
CDR1-3序列且氨基酸序列与SEQ ID NO:592具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少
92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的重链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:592的氨基酸序列的重链可变区。
[0579] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:429的氨基酸序列的重链CDR1序列、含SEQ ID NO:588的氨基酸序列的重链CDR2序列和含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重
链CDR3序列。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含分别为SEQ ID NO:429、588和24的重链
CDR1-3序列且氨基酸序列与SEQ ID NO:593具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少
92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的重链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:593的氨基酸序列的重链可变区。
[0580] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:430的氨基酸序列的重链CDR1序列、含SEQ ID NO:588的氨基酸序列的重链CDR2序列和含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重
链CDR3序列。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含分别为SEQ ID NO:430、588和24的重链
CDR1-3序列且氨基酸序列与SEQ ID NO:594具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少
92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的重链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:594的氨基酸序列的重链可变区。
[0581] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:432的氨基酸序列的重链CDR1序列、含SEQ ID NO:588的氨基酸序列的重链CDR2序列和含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重
链CDR3序列。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含分别为SEQ ID NO:432、588和24的重链
CDR1-3序列且氨基酸序列与SEQ ID NO:595具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少
92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的重链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:595的氨基酸序列的重链可变区。
[0582] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:153的氨基酸序列的重链CDR1序列、含SEQ ID NO:588的氨基酸序列的重链CDR2序列和含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重
链CDR3序列。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含分别为SEQ ID NO:153、588和24的重链
CDR1-3序列且氨基酸序列与SEQ ID NO:596具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少
92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的重链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:596的氨基酸序列的重链可变区。
[0583] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:433的氨基酸序列的重链CDR1序列、含SEQ ID NO:588的氨基酸序列的重链CDR2序列和含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重
链CDR3序列。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含分别为SEQ ID NO:433、588和24的重链
CDR1-3序列且氨基酸序列与SEQ ID NO:597具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少
92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的重链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:597的氨基酸序列的重链可变区。
[0584] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:434的氨基酸序列的重链CDR1序列、含SEQ ID NO:588的氨基酸序列的重链CDR2序列和含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重
链CDR3序列。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含分别为SEQ ID NO:434、588和24的重链
CDR1-3序列且氨基酸序列与SEQ ID NO:598具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少
92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的重链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:598的氨基酸序列的重链可变区。
[0585] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:435的氨基酸序列的重链CDR1序列、含SEQ ID NO:588的氨基酸序列的重链CDR2序列和含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重
链CDR3序列。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含分别为SEQ ID NO:435、588和24的重链
CDR1-3序列且氨基酸序列与SEQ ID NO:599具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少
92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的重链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:599的氨基酸序列的重链可变区。
[0586] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:436的氨基酸序列的重链CDR1序列、含SEQ ID NO:588的氨基酸序列的重链CDR2序列和含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重
链CDR3序列。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含分别为SEQ ID NO:436、588和24的重链
CDR1-3序列且氨基酸序列与SEQ ID NO:600具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少
92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的重链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:600的氨基酸序列的重链可变区。
[0587] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:437的氨基酸序列的重链CDR1序列、含SEQ ID NO:588的氨基酸序列的重链CDR2序列和含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重
链CDR3序列。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含分别为SEQ ID NO:437、588和24的重链
CDR1-3序列且氨基酸序列与SEQ ID NO:601具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少
92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的重链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:601的氨基酸序列的重链可变区。
[0588] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:586的氨基酸序列的重链CDR1序列、含SEQ ID NO:588的氨基酸序列的重链CDR2序列和含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重
链CDR3序列。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含分别为SEQ ID NO:586、588和24的重链
CDR1-3序列且氨基酸序列与SEQ ID NO:602具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少
92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的重链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:602的氨基酸序列的重链可变区。
[0589] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:587的氨基酸序列的重链CDR1序列、含SEQ ID NO:588的氨基酸序列的重链CDR2序列和含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重
链CDR3序列。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含分别为SEQ ID NO:587、588和24的重链
CDR1-3序列且氨基酸序列与SEQ ID NO:603具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少
92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的重链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:603的氨基酸序列的重链可变区。
[0590] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:158的氨基酸序列的轻链CDR1序列、含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2序列和含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链
CDR3序列。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含分别为SEQ ID NO:158、27和28的轻链CDR1-3序列且氨基酸序列与SEQ ID NO:604具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、
至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的轻链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:604的氨基酸序列的轻链可变区。
[0591] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:448的氨基酸序列的轻链CDR1序列、含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2序列和含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链
CDR3序列。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含分别为SEQ ID NO:448、27和28的轻链CDR1-3序列且氨基酸序列与SEQ ID NO:605具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、
至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的轻链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:605的氨基酸序列的轻链可变区。
[0592] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:449的氨基酸序列的轻链CDR1序列、含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2序列和含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链
CDR3序列。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含分别为SEQ ID NO:449、27和28的轻链CDR1-3序列且氨基酸序列与SEQ ID NO:606具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、
至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的轻链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:606的氨基酸序列的轻链可变区。
[0593] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:450的氨基酸序列的轻链CDR1序列、含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2序列和含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链
CDR3序列。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含分别为SEQ ID NO:450、27和28的轻链CDR1-3序列且氨基酸序列与SEQ ID NO:607具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、
至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的轻链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:607的氨基酸序列的轻链可变区。
[0594] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:451的氨基酸序列的轻链CDR1序列、含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2序列和含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链
CDR3序列。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含分别为SEQ ID NO:451、27和28的轻链CDR1-3序列且氨基酸序列与SEQ ID NO:608具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、
至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的轻链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:608的氨基酸序列的轻链可变区。
[0595] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:452的氨基酸序列的轻链CDR1序列、含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2序列和含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链
CDR3序列。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含分别为SEQ ID NO:452、27和28的轻链CDR1-3序列且氨基酸序列与SEQ ID NO:609具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、
至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的轻链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:609的氨基酸序列的轻链可变区。
[0596] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:453的氨基酸序列的轻链CDR1序列、含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2序列和含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链
CDR3序列。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含分别为SEQ ID NO:453、27和28的轻链CDR1-3序列且氨基酸序列与SEQ ID NO:610具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、
至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的轻链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:610的氨基酸序列的轻链可变区。
[0597] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:454的氨基酸序列的轻链CDR1序列、含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2序列和含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链
CDR3序列。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含分别为SEQ ID NO:454、27和28的轻链CDR1-3序列且氨基酸序列与SEQ ID NO:611具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、
至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的轻链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:611的氨基酸序列的轻链可变区。
[0598] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:455的氨基酸序列的轻链CDR1序列、含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2序列和含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链
CDR3序列。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含分别为SEQ ID NO:455、27和28的轻链CDR1-3序列且氨基酸序列与SEQ ID NO:612具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、
至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的轻链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:612的氨基酸序列的轻链可变区。
[0599] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:456的氨基酸序列的轻链CDR1序列、含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2序列和含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链
CDR3序列。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含分别为SEQ ID NO:456、27和28的轻链CDR1-3序列且氨基酸序列与SEQ ID NO:613具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、
至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的轻链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:613的氨基酸序列的轻链可变区。
[0600] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:457的氨基酸序列的轻链CDR1序列、含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2序列和含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链
CDR3序列。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含分别为SEQ ID NO:457、27和28的轻链CDR1-3序列且氨基酸序列与SEQ ID NO:614具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、
至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的轻链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:614的氨基酸序列的轻链可变区。
[0601] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:458的氨基酸序列的轻链CDR1序列、含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2序列和含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链
CDR3序列。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含分别为SEQ ID NO:458、27和28的轻链CDR1-3序列且氨基酸序列与SEQ ID NO:615具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、
至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的轻链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:615的氨基酸序列的轻链可变区。
[0602] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:158的氨基酸序列的轻链CDR1序列、含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2序列和含SEQ ID NO:461的氨基酸序列的轻
链CDR3序列。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含分别为SEQ ID NO:158、27和461的轻链
CDR1-3序列且氨基酸序列与SEQ ID NO:616具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少
92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的轻链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:616的氨基酸序列的轻链可变区。
[0603] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:450的氨基酸序列的轻链CDR1序列、含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2序列和含SEQ ID NO:461的氨基酸序列的轻
链CDR3序列。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含分别为SEQ ID NO:450、27和461的轻链
CDR1-3序列且氨基酸序列与SEQ ID NO:463具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少
92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的轻链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:463的氨基酸序列的轻链可变区。
[0604] 抗τ抗体可以包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：
[0605] (a)含SEQ ID NO:586的氨基酸序列的重链CDR1；
[0606] (b)含SEQ ID NO:588的氨基酸序列的重链CDR2；
[0607] (c)含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3；
[0608] (d)含SEQ ID NO:158的氨基酸序列的轻链CDR1；
[0609] (e)含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2；以及
[0610] (f)含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链CDR3。
[0611] 抗τ抗体可以包括含分别为SEQ ID NO:586、588和24的重链CDR1-3序列且氨基酸序列与SEQ ID NO:602的序列具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少
93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的重链可变区且进一步包括含分别为SEQ ID NO:158、27和28的轻链CDR1-3序列且氨基酸序列与
SEQ ID NO:604的序列具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少
94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的轻链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:602的氨基酸序列的重链可变区且进一步包括含SEQ ID NO:604的氨基酸序列的轻链可变区。
[0612] 抗τ抗体可以包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：
[0613] (a)含SEQ ID NO:586的氨基酸序列的重链CDR1；
[0614] (b)含SEQ ID NO:588的氨基酸序列的重链CDR2；
[0615] (c)含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3；
[0616] (d)含SEQ ID NO:158的氨基酸序列的轻链CDR1；
[0617] (e)含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2；以及
[0618] (f)含SEQ ID NO:461的氨基酸序列的轻链CDR3。
[0619] 抗τ抗体可以包括含分别为SEQ ID NO:586、588和24的重链CDR1-3序列且氨基酸序列与SEQ ID NO:602的序列具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少
93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的重链可变区且进一步包括含分别为SEQ ID NO:158、27和461的轻链CDR1-3序列且氨基酸序列与
SEQ ID NO:616的序列具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少
94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的轻链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:602的氨基酸序列的重链可变区且进一步包括含SEQ ID NO:616的氨基酸序列的轻链可变区。
[0620] 抗τ抗体可以包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：
[0621] (a)含SEQ ID NO:586的氨基酸序列的重链CDR1；
[0622] (b)含SEQ ID NO:588的氨基酸序列的重链CDR2；
[0623] (c)含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3；
[0624] (d)含SEQ ID NO:450的氨基酸序列的轻链CDR1；
[0625] (e)含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2；以及
[0626] (f)含SEQ ID NO:461的氨基酸序列的轻链CDR3。
[0627] 抗τ抗体可以包括含分别为SEQ ID NO:586、588和24的重链CDR1-3序列且氨基酸序列与SEQ ID NO:602的序列具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少
93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的重链可变区且进一步包括含分别为SEQ ID NO:450、27和461的轻链CDR1-3序列且氨基酸序列与
SEQ ID NO:463的序列具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少
94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的轻链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:602的氨基酸序列的重链可变区且进一步包括含SEQ ID NO:463的氨基酸序列的轻链可变区。
[0628] 抗τ抗体可以包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：
[0629] (a)含SEQ ID NO:587的氨基酸序列的重链CDR1；
[0630] (b)含SEQ ID NO:588的氨基酸序列的重链CDR2；
[0631] (c)含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3；
[0632] (d)含SEQ ID NO:158的氨基酸序列的轻链CDR1；
[0633] (e)含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2；以及
[0634] (f)含SEQ ID NO:28的氨基酸序列的轻链CDR3。
[0635] 抗τ抗体可以包括含分别为SEQ ID NO:587、588和24的重链CDR1-3序列且氨基酸序列与SEQ ID NO:603的序列具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少
93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的重链可变区且进一步包括含分别为SEQ ID NO:158、27和28的轻链CDR1-3序列且氨基酸序列与
SEQ ID NO:604的序列具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少
94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的轻链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:603的氨基酸序列的重链可变区且进一步包括含SEQ ID NO:604的氨基酸序列的轻链可变区。
[0636] 抗τ抗体可以包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：
[0637] (a)含SEQ ID NO:587的氨基酸序列的重链CDR1；
[0638] (b)含SEQ ID NO:588的氨基酸序列的重链CDR2；
[0639] (c)含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3；
[0640] (d)含SEQ ID NO:158的氨基酸序列的轻链CDR1；
[0641] (e)含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2；以及
[0642] (f)含SEQ ID NO:461的氨基酸序列的轻链CDR3。
[0643] 抗τ抗体可以包括含分别为SEQ ID NO:587、588和24的重链CDR1-3序列且氨基酸序列与SEQ ID NO:603的序列具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少
93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的重链可变区且进一步包括含分别为SEQ ID NO:158、27和461的轻链CDR1-3序列且氨基酸序列与
SEQ ID NO:616的序列具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少
94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的轻链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:603的氨基酸序列的重链可变区且进一步包括含SEQ ID NO:616的氨基酸序列的轻链可变区。
[0644] 抗τ抗体可以包含一个或多个选自由以下组成的组的CDR：
[0645] (a)含SEQ ID NO:587的氨基酸序列的重链CDR1；
[0646] (b)含SEQ ID NO:588的氨基酸序列的重链CDR2；
[0647] (c)含SEQ ID NO:24的氨基酸序列的重链CDR3；
[0648] (d)含SEQ ID NO:450的氨基酸序列的轻链CDR1；
[0649] (e)含SEQ ID NO:27的氨基酸序列的轻链CDR2；以及
[0650] (f)含SEQ ID NO:461的氨基酸序列的轻链CDR3。
[0651] 抗τ抗体可以包括含分别为SEQ ID NO:587、588和24的重链CDR1-3序列且氨基酸序列与SEQ ID NO:603的序列具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少
93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的重链可变区且进一步包括含分别为SEQ ID NO:450、27和461的轻链CDR1-3序列且氨基酸序列与
SEQ ID NO:463的序列具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少
94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的轻链可变区。在一些实施方案中，抗τ抗体包括含SEQ ID NO:603的氨基酸序列的重链可变区且进一步包括含SEQ ID NO:463的氨基酸序列的轻链可变区。
[0652] 在一些实施方案中，抗τ抗体包含一个或多个共同序列。可以通过比对结合至相同或相似(例如重叠)表位的抗体的重链或轻链序列(例如CDR)以在序列比对时出现变化情况下，确定保守氨基酸或基元(即，在序列中的变化可能改变蛋白质功能时)和区域(即，在序列变异不会显著影响蛋白质功能时)。在一些实施方案中，可以鉴别出与1C7识别相同或相
似表位的抗体中的一个或多个共同序列。例示性hu1C7.v2样共同序列包括SEQ ID NO:163-
166和465-468。在SEQ ID NO:163-166、465-468和617-624的共同序列中，各“X”表示在所比对的序列(例如所比对的CDR序列)间并非绝对保守的氨基酸残基。应理解，当选择一个氨基酸插入标为“X”的位置处时，在一些实施方案中，所述氨基酸选自在所比对的序列中相应位置所见的氨基酸。
[0653] 在一些实施方案中，所述抗体包含具有共同序列X1X2X3X4X5X6X7GX8S(SEQ ID NO:163)的重链CDR1序列，其中X1是G或V；X2是F或I；X3是T、K或R；X4是F或W；X5是S或R；X6是S、R、G或I；X7是Y、V或P；且X8是M、V或T。在一些实施方案中，所述重链CDR1共同序列包含序列GFTFSSYGMS(SEQ ID NO:22)；GFKFSRVGVS(SEQ ID NO:150)；GFTFSRVGTS(SEQ ID NO:151)；
GFRFSRVGMS(SEQ ID NO:152)；GFRFSGPGMS(SEQ ID NO:153)；或VIKWRIYGMS(SEQ ID NO:
154)。
[0654] 在一些实施方案中，所述抗体包含具有共同序列GFX1FSX2X3GX4S(SEQ ID NO:465)的重链CDR1序列，其中X1是T、K、R、Q或M；X2是S、R、Q、M、L、K、G、or、S；X3是Y、V或P；且X4是M、V或T。在一些实施方案中，所述抗体包含具有共同序列X1X2X3X4X5X6X7GX8S(SEQ ID NO:617)的重链CDR1序列，其中X1是G或V；X2是F或I；X3是T、K、R、Q或M；X4是F或W；X5是S或R；X6是S、R、G、I、Q、M、L或K；X7是Y、V或P；且X8是M、V或T。在一些实施方案中，所述抗体包含具有共同序列X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10(SEQ ID NO:620)的重链CDR1序列，其中X1是G、V或R；X2是F或I；X3是T、K、R、Q、M或N；X4是F、W或I；X5是S、R、E或K；X6是S、R、G、I、Q、M、L、K或D；X7是Y、V、P或D；X8是G或Y；X9是M、V或T；且X10是S或H。在一些实施方案中，所述重链CDR1共同序列包含SEQ ID NO:
22、150-154、420-437、586和587中任一个的序列。
[0655] 在一些实施方案中，所述抗体包含具有共同序列SISGX1X2GSYIHYAX3X4VK(SEQ ID NO:466)的重链CDR2序列，其中X1是D、E、T或S；X2是G或A；且X3是D或S；X4是S或A。在一些实施方案中，所述抗体包含具有共同序列SISGX1X2GSYIX3YAX4X5VK(SEQ ID NO:621)的重链CDR2序列，其中X1是D、E、T或S；X2是G或A；X3是H或R；X4是D或S；且X5是S或A。在一些实施方案中，所述重链CDR2共同序列包含SEQ ID NO:23和438-443中任一个的序列。
[0656] 在一些实施方案中，所述抗体包含具有共同序列AX1LPX2(SEQ ID NO:164)的重链CDR3序列，其中X1是R或K；且X2是Y或F。在一些实施方案中，所述抗体包含具有共同序列
X1X2LX3X4(SEQ ID NO:622)的重链CDR3序列，其中X1是A、T或N；X2是R、K或T；X3是P或R；且X4是Y或F。在一些实施方案中，所述重链CDR3共同序列包含序列ARLPY(SEQ ID NO:24)或AKLPF
(SEQ ID NO:155)。
[0657] 在一些实施方案中，所述抗体包含具有共同序列KSSX1SLX2X3SX4X5X6X7X8YLX9(SEQ ID NO:165)的轻链CDR1序列，其中X1是Q或H；X2是L、Y或H；X3是N、S或R；X4是G或R；X5是N、R、K或T；X6是Q、H或R；X7是K或Q；X8是N、H或D；且X9是N、T、V。在一些实施方案中，所述轻链CDR1共同序列包含序列KSSQSLLNSGNQKNYLT(SEQ ID NO:26)、KSSHSLYSS RRHKHYLA(SEQ ID NO:156)、KSSQSLLRSGKRQNYLV(SEQ ID NO:157)或KSSQSLHRSGTQKDYLV(SEQ ID NO:158)。
[0658] 在一些实施方案中，所述抗体包含具有共同序列KSSQSLX1X2X3GX4QKX5YLX6(SEQ ID NO:467)的轻链CDR1序列，其中X1是L、H或V；X2是N、Y、S、Q、R、M、K或L；X3是S或A；X4是T或N；X5是N或D；X6是T、V或A。在一些实施方案中，所述抗体包含具有共同序列KSSX1SLX2X3X4X5X6X7X8X9YLX10(SEQ ID NO:618)的轻链CDR1序列，其中X1是Q或H；X2是L、Y、H或V；X3是N、S、R、Y、Q、M、K或L；X4是S或A；X5是G或R；X6是N、R、K或T；X7是Q、H或R；X8是K或Q；X9是N、H或D；且X10是T、A或V。在一些实施方案中，所述轻链CDR1共同序列包含SEQ ID NO:444-
459的序列。
[0659] 在一些实施方案中，所述抗体包含具有共同序列X1X2SX3X4X5X6(SEQ ID NO:623)的轻链CDR2序列，其中X1是S、W、R或L；X2是A、M或V；X3是Y、T、F、N或K；X4是R、L或K；X5是Y、H、A或E；且X6是S或T。
[0660] 在一些实施方案中，所述抗体包含具有共同序列QX1YX2X3YPX4T(SEQ ID NO:166)的轻链CDR3序列，其中X1是Q、K或H；X2是N、D或R；X3是S或T；且X4是L或M。在一些实施方案中，所述轻链CDR3共同序列包含序列QQYNSYPLT(SEQ ID NO:28)、QKYNSYPLT(SEQ ID NO:159)、QKYDSYPLT(SEQ ID NO:160)、QHYRTYPLT(SEQ ID NO:161)或QHYRSYPMT(SEQ ID NO:162)。
[0661] 在一些实施方案中，所述抗体包含具有共同序列QQYX1X2YPLT(SEQ ID NO:468)的轻链CDR3序列，其中X1是N、Y或S；X2是S或A。在一些实施方案中，所述抗体包含具有共同序列QX1YX2X3YPX4T(SEQ ID NO:619)的轻链CDR3序列，其中X1是Q、K或H；X2是N、D、R、Y或S；X3是S、T或A；且X4是L或M。在一些实施方案中，所述抗体包含具有共同序列X1X2X3X4X5X6PX7T(SEQ ID NO:624)的轻链CDR3序列，其中X1是Q、A、V或P；X2是Q、K、H或L；X3是Y、M、G或S；X4是N、D、R、Y、S、L或T；X5是S、T、A、E或H；X6是Y、R、F或D；且X7是L、M或Y。在一些实施方案中，所述轻链CDR3共同序列包含SEQ ID NO:460-462中任一个的序列。
[0662] 抗体的制备
[0663] 可以使用本领域中已知的技术制备抗τ抗体。在一些实施方案中，通过用诱导抗体反应的抗原或抗原混合物对一个或多个动物(例如小鼠、兔或大鼠)进行免疫接种来制备抗体。在一些实施方案中，所述抗原或抗原混合物是与佐剂(例如弗氏佐剂(Freund's 
adjuvant))组合施用。在初始免疫接种后，可以施用一次或多次所述一种或多种抗原的后
续追加注射以提高抗体产量。在免疫接种后，自例如脾和/或淋巴组织收集抗原特异性B细
胞。制备抗体的方法描述于以下实施例部分中。在一些实施方案中，制备抗τ抗体的方法包括用抗原混合物对动物免疫接种，其中所述抗原混合物包含未磷酸化的τ蛋白(例如重组人类τ蛋白)和磷酸化τ蛋白(例如磷酸化的人类τ蛋白)。
[0664] 可以自细胞克隆编码所关注抗体的重链和轻链的基因，例如，可以自杂交瘤克隆编码单克隆抗体的基因并使用所述基因产生重组单克隆抗体。也可由杂交瘤或浆细胞制备
编码单克隆抗体的重链和轻链的基因文库。或者，可以使用噬菌体或酵母展示技术鉴别特
异性结合至所选抗原的抗体和Fab片段。用于产生单链抗体或重组抗体的技术也可用于产
生抗体。也可制备双特异性抗体，即，能够识别两个不同抗原的抗体。抗体还可以是异源偶联物，例如两个共价接合的抗体，或免疫毒素。
[0665] 抗体可以使用多种表达系统，包括原核和真核表达系统产生。在一些实施方案中，所述表达系统是哺乳动物表达系统，如杂交瘤或CHO细胞表达系统。许多此类系统通常可从商业供应商得到。在抗体同时包含VH和VL区的实施方案中，VH和VL区可以使用单一载体，例如在双顺反子表达单元中，或在不同启动子控制下表达。在其它实施方案中，VH和VL区可以使用独立载体表达。本文所描述的VH或VL区可以任选地在N末端包含甲硫氨酸。一般本领域技术人员已知产生和筛选杂交瘤细胞系的方法，包括适合动物的选择和免疫接种、用于产生杂交瘤的适当细胞的分离和融合、用于分泌所需抗体的杂交瘤的筛选和抗体的表征。非
限制性实施例也描述于本文的实施例6中。在一些实施方案中，杂交瘤细胞系产生(例如分
泌)本发明的抗τ抗体(例如抗τ抗体17G2.A1、19F7.C9或24D2.B2)。
[0666] 在一些实施方案中，所述抗体是嵌合抗体。用于制备嵌合抗体的方法是本领域中已知的。例如，可以制备嵌合抗体，其中来自一种物种如小鼠的抗原结合部分(重链可变区和轻链可变区)与来自另一物种如人类的效应子区(恒定结构域)融合。作为另一实施例，可以制备“类别转换”嵌合抗体，其中抗体的效应子区被不同免疫球蛋白类别或亚类的效应子区替代。
[0667] 在一些实施方案中，所述抗体是人源化抗体。一般而言，使非人类抗体人源化以便降低其免疫原性。人源化抗体典型地包含一个或多个非人类可变区(例如CDR)(例如来源于小鼠可变区序列)或其部分，且可能包含一些非人类构架区或其部分，并且进一步包含一个或多个来源于人类抗体序列的恒定区。用于使非人类抗体人源化的方法是本领域中已知
的。可以使用转基因小鼠，或其它生物体，如其它哺乳动物表达人源化或人类抗体。使抗体人源化的其它方法包括例如可变区表面重塑、CDR移植、移植特异性决定残基
(specificity-determining residue，SDR)、引导选择和构架改组。
[0668] 作为人源化的替代选择，可以产生完全人类抗体。作为非限制性实施例，可以产生在免疫接种后能够在无内源免疫球蛋白产生的情况下产生完全人类抗体谱系的转基因动物(例如小鼠)。例如，已描述嵌合和生殖系突变小鼠中纯合性缺失抗体重链接合区(JH)基
因会导致内源抗体产生的完全抑制。在此类生殖系突变小鼠中转移人类生殖系免疫球蛋白
基因阵列将在抗原激发后产生人类抗体。作为另一实施例，可以通过基于杂交瘤的方法，如通过使用原代人类B细胞产生产人类单克隆抗体的细胞系来产生人类抗体。
[0669] 也可使用噬菌体展示或酵母展示技术产生人类抗体。在噬菌体展示中，在噬菌体展示载体中扩增并表达可变重链和可变轻链基因的谱系。在一些实施方案中，所述抗体文
库是自人类来源扩增的天然谱系。在一些实施方案中，抗体文库是通过克隆重链和轻链序
列并重组产生一大组具有不同抗原特异性的抗体而制备的合成文库。噬菌体典型地展示抗
体片段(例如Fab片段或scFv片段)，接着针对与所关注抗原的结合进行筛选。
[0670] 在一些实施方案中，产生抗体片段(如Fab、Fab'、F(ab')2、scFv、VH、VHH或双功能抗体)。已开发出用于产生抗体片段的各种技术。传统上，这些片段是通过蛋白水解消化完整抗体得到。然而，现可以使用重组宿主细胞直接产生这些片段。例如，可以自抗体噬菌体文库分离抗体片段。或者，可以自大肠杆菌细胞直接回收Fab'-SH片段并将其以化学方式偶合以形成F(ab')2片段。根据另一方法，可以自重组宿主细胞培养物直接分离F(ab')2片段。本领域技术人员将易于了解用于产生抗体片段的其它技术。
[0671] 在一些实施方案中，将所述抗体或抗体片段与另一分子，例如聚乙二醇(聚乙二醇化)或血清白蛋白偶联以延长在体内的半衰期。
[0672] 多特异性抗体
[0673] 在一些实施方案中，提供包含如本文所描述的抗τ抗体(或其抗原结合部分)的多特异性抗体，例如双特异性抗体。在一些实施方案中，多特异性抗体(例如双特异性抗体)具有对τ蛋白具结合特异性的可变区和对至少一种其它抗原具有结合特异性的另一可变区。
在一些实施方案中，多特异性抗体(例如双特异性抗体)结合至τ蛋白的两个不同表位。
[0674] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括：
[0675] (a)含特异性结合至τ蛋白(例如人类τ蛋白)的第一可变区的第一抗原结合部分，其中所述第一抗原结合部分包括(i)含第一Fc多肽的第一重链和(ii)第一轻链；以及
[0676] (b)含特异性结合至所述τ蛋白(例如人类τ蛋白)的第二可变区的第二抗原结合部分，其中所述第二抗原结合部分包括(i)含第二Fc多肽的第二重链和(ii)第二轻链，其中所述第一Fc多肽和所述第二Fc多肽形成Fc二聚体。在一些实施方案中，所述第一Fc多肽是修
饰的Fc多肽和/或所述第二Fc多肽是修饰的Fc多肽。
[0677] 在一些实施方案中，抗τ抗体包括：
[0678] (a)含特异性结合至τ蛋白(例如人类τ蛋白)的第一可变区的第一抗原结合部分，其中所述第一抗原结合部分包括(i)含第一Fc多肽的第一重链和(ii)第一轻链；以及
[0679] (b)含特异性结合至所述τ蛋白(例如人类τ蛋白)的第二可变区的第二抗原结合部分，其中所述第二抗原结合部分包括(i)含第二Fc多肽的第二重链和(ii)第二轻链，其中所述第一Fc多肽和所述第二Fc多肽形成Fc二聚体且其中所述第一Fc多肽是修饰的Fc多肽和/
或所述第二Fc多肽是修饰的Fc多肽。
[0680] 在一些实施方案中，所述第一与第二可变区识别τ蛋白中的相同表位。在一些实施方案中，所述第一与第二可变区识别τ蛋白中的不同表位。
[0681] 用于制备多特异性抗体的方法包括但不限于，在宿主细胞中重组共表达两对重链和轻链、“孔中节(knobs-into-holes)”工程改造、“双功能抗体”技术、分子内三聚化，以及抗体片段与另一抗体的N末端或C末端融合，例如串联可变结构域。
[0682] 核酸、载体和宿主细胞
[0683] 在一些实施方案中，本文所描述的抗τ抗体是使用重组方法制备。因此，在一些方面中，本发明提供分离的核酸，其包含编码如本文所描述的抗τ抗体中的任一种的核酸序列(例如本文描述的CDR、重链可变区和轻链可变区中的任一个或多个)；包含此类核酸的载体；以及引入所述核酸的宿主细胞，所述核酸用于复制抗体编码核酸和/或表达所述抗体。
[0684] 在一些实施方案中，多核苷酸(例如分离的多核苷酸)包含编码如本文所描述的抗体或其抗原结合部分(例如，如以上题为“抗τ抗体序列”的部分中所描述)的核苷酸序列。在一些实施方案中，所述多核苷酸包含编码序列表中所公开的一个或多个氨基酸序列(例如
CDR、重链、轻链和/或构架区)的核苷酸序列。在一些实施方案中，所述多核苷酸包含编码与序列表中所公开的序列(例如CDR、重链、轻链和/或构架区序列)具有至少85％序列同一性
(例如至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的核苷酸序列。在一些实施方案中，本文所描述的多核苷酸可操作地连接至异源核酸，例如异源启动子。
[0685] 含有编码本发明的抗体或其片段的多核苷酸的适合载体包括克隆载体和表达载体。尽管所选克隆载体可根据打算使用的宿主细胞而变化，但有用的克隆载体一般能够自
复制，可以具有特定限制性核酸内切酶的单一靶，和/或可以携带能用于选择含载体的克隆的标记物基因。实例包括质粒和细菌病毒，例如pUC18、pUC19、Bluescript(例如pBS SK+)和其衍生物、mpl8、mpl9、pBR322、pMB9、ColE1、pCR1、RP4、噬菌体DNA，以及穿梭载体，如pSA3和pAT28。这些和许多其它克隆载体可购自商业供应商，如BioRad、Strategene和Invitrogen。
[0686] 表达载体一般是含有本发明核酸的可复制的多核苷酸构建体。表达载体可以在宿主细胞中作为游离基因或作为染色体DNA的整体部分复制。适合表达载体包括但不限于质
粒、病毒载体，包括腺病毒、腺相关病毒、反转录病毒，以及任何其它载体。
[0687] 适于克隆或表达本文所描述的多核苷酸或载体的宿主细胞包括原核或真核细胞。在一些实施方案中，宿主细胞是原核细胞。在一些实施方案中，宿主细胞是真核细胞，例如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或淋巴细胞。在一些实施方案中，宿主细胞是人类细胞，例如人胚肾(HEK)细胞。
[0688] 另一方面，提供制备如本文所描述的抗τ抗体的方法。在一些实施方案中，所述方法包括在适于表达所述抗体的条件下培养如本文所描述的宿主细胞(例如表达如本文所描述的多核苷酸或载体的宿主细胞)。在一些实施方案中，随后自宿主细胞(或宿主细胞培养
基)回收抗体。
[0689] IV.用于血脑屏障(BBB)受体结合的FC多肽修饰
[0690] 在一些方面中，本文提供能够跨血脑屏障(BBB)转运的抗τ抗体。此类抗体包含结合至BBB受体的修饰的Fc多肽。BBB受体是在BBB内皮以及其它细胞和组织类型上表达。在一些实施方案中，BBB受体是转铁蛋白受体(TfR)。
[0691] 在各种Fc修饰中指明的氨基酸残基，包括引入结合至BBB受体(例如TfR)的修饰的Fc多肽中的氨基酸残基，在本文中是使用EU索引编号进行编号。任何Fc多肽，例如IgG1、
IgG2、IgG3或IgG4 Fc多肽均可在如本文所描述的一个或多个位置中具有修饰，例如氨基酸取代。
[0692] 在一些实施方案中，抗τ抗体包含第一Fc多肽和任选地第二Fc多肽，其各自可以独立地修饰。在一些实施方案中，对第一和/或第二Fc多肽进行的修饰(例如促进TfR结合的修饰)使脑中抗体(或其抗原结合部分)的吸收增加，即相较于未进行所述修饰的吸收增加至少约2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、11倍、12倍、13倍、14倍、15倍、16倍、17倍、
18倍、19倍、20倍或更多倍。
[0693] 本发明的抗τ抗体中存在的修饰的(例如增强异二聚化和/或BBB受体结合)Fc多肽可以与天然Fc区序列或其片段，例如长度是至少50个氨基酸或至少100个氨基酸或更长的
片段具有至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，天然Fc氨基酸序列是SEQ ID NO:181的Fc区序列。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽与SEQ ID NO:181的氨基酸1-110，或与SEQ ID NO:
181的氨基酸111-217，或其片段，例如长度是至少50个氨基酸或至少100个氨基酸或更长的片段具有至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。
[0694] 在一些实施方案中，修饰的(例如增强异二聚化和/或BBB受体结合)Fc多肽包含至少50个氨基酸，或至少60、65、70、75、80、85、90或95个或更多个，或至少100个或更多个氨基酸对应于天然Fc区氨基酸序列。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含至少25个连续氨基
酸，例如至少30、35、40或45个连续氨基酸，或50个连续氨基酸，或至少60、65、70、75、80、85、
90或95个或更多个连续氨基酸，或100个或更多个连续氨基酸对应于天然Fc区氨基酸序列，如SEQ ID NO:181。
[0695] 在一些实施方案中，针对BBB受体结合活性修饰的结构域是人类Ig CH3结构域，如IgG1 CH3结构域。所述CH3结构域可以属于任何IgG亚型，即，来自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。
在IgG1抗体的情况下，CH3结构域是指如根据EU编号方案编号，由自约341位至约447位的氨基酸构成的区段。
[0696] 在一些实施方案中，针对BBB受体结合活性修饰的结构域是人类Ig CH2结构域，如IgG CH2结构域。所述CH2结构域可以属于任何IgG亚型，即，来自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。在IgG1抗体的情况下，CH2结构域是指如根据EU编号方案编号，由自约231位至约340位的氨基酸构成的区段。
[0697] 在一些实施方案中，本发明的抗τ抗体中存在的修饰的(例如BBB受体结合)Fc多肽在根据EU编号方案，包含266、267、268、269、270、271、295、297、298和299的氨基酸位置处包含至少一个、两个或三个取代；且在一些实施方案中包含至少四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个取代。
[0698] 在一些实施方案中，本发明的抗τ抗体中存在的修饰的(例如BBB受体结合)Fc多肽在根据EU编号方案，包含274、276、283、285、286、287、288、289和290的氨基酸位置处包含至少一个、两个或三个取代；且在一些实施方案中包含至少四个、五个、六个、七个、八个或九个取代。
[0699] 在一些实施方案中，本发明的抗τ抗体中存在的修饰的(例如BBB受体结合)Fc多肽在根据EU编号方案，包含268、269、270、271、272、292、293、294、296和300的氨基酸位置处包含至少一个、两个或三个取代；且在一些实施方案中包含至少四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个取代。
[0700] 在一些实施方案中，本发明的抗τ抗体中存在的修饰的(例如BBB受体结合)Fc多肽在根据EU编号方案，包含272、274、276、322、324、326、329、330和331的氨基酸位置处包含至少一个、两个或三个取代；且在一些实施方案中包含至少四个、五个、六个、七个、八个或九个取代。
[0701] 在一些实施方案中，本发明的抗τ抗体中存在的修饰的(例如BBB受体结合)Fc多肽在根据EU编号方案，包含345、346、347、349、437、438、439和440的氨基酸位置处包含至少一个、两个或三个取代；且在一些实施方案中包含至少四个、五个、六个或七个取代。
[0702] 在一些实施方案中，本发明的抗τ抗体中存在的修饰的(例如BBB受体结合)Fc多肽在根据EU编号方案，包含384、386、387、388、389、390、413、416和421的氨基酸位置处包含至少一个、两个或三个取代；且在一些实施方案中包含至少四个、五个、六个、七个、八个或九个取代。
[0703] FcRn结合位点
[0704] 在某些方面，本发明的抗τ抗体中存在的不特异性结合至BBB受体的修饰的(例如BBB受体结合)Fc多肽，或Fc多肽也可包含FcRn结合位点。在一些实施方案中，所述FcRn结合位点是在Fc多肽或其片段内。
[0705] 在一些实施方案中，FcRn结合位点包含天然FcRn结合位点。在一些实施方案中，相对于天然FcRn结合位点的氨基酸序列，所述FcRn结合位点不包含氨基酸变化。在一些实施方案中，天然FcRn结合位点是IgG结合位点，例如人类IgG结合位点。在一些实施方案中，
FcRn结合位点包含改变FcRn结合的修饰。
[0706] 在一些实施方案中，FcRn结合位点具有一个或多个突变，例如被取代的氨基酸残基，其中所述突变增加血清半衰期或基本上不缩短血清半衰期(即，当在相同条件下分析
时，相较于在突变位置处具有野生型残基的对应修饰的Fc多肽，血清半衰期缩短不超过
25％)。在一些实施方案中，根据EU编号方案，FcRn结合位点在位置251-256、428和433-436处具有一个或多个氨基酸残基被取代。
[0707] 在一些实施方案中，相对于天然人类IgG序列，在FcRn结合位点处或附近的一个或多个残基被突变，以延长修饰的多肽的血清半衰期。在一些实施方案中，根据EU编号方案，在位置244-257、279-284、307-317、383-390和428-435中的一个或多个位置处引入突变，例如取代。在一些实施方案中，根据EU编号方案，在位置251、252、254、255、256、307、308、309、
311、312、314、385、386、387、389、428、433、434或436处引入一个或多个突变。在一些实施方案中，在252位、254位和256位中的一个、两个或三个位置处引入突变。在一些实施方案中，突变是M252Y、S254T和T256E。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽进一步包含突变M252Y、
S254T和T256E。在一些实施方案中，突变是M428L和/或N434S。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽进一步包含突变N434S且包含或不含突变M428L。在一些实施方案中，根据EU编号，修饰的Fc多肽在T307位、E380位和N434位中的一个、两个或全部三个位置处包含突变。在一些实施方案中，突变是T307Q和N434A。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含突变T307A、E380A和N434A。在一些实施方案中，根据EU编号方案，修饰的Fc多肽在T250位和M428位包含突变。
在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含突变T250Q和/或M428L。在一些实施方案中，根据EU编号方案，修饰的Fc多肽在M428位和N434位包含突变。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含突变M428L和N434S。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含N434S或N434A突变。
[0708] V.转铁蛋白受体结合Fc多肽
[0709] 本节描述结合至转铁蛋白受体(TfR)且能够跨血脑屏障(BBB)转运的根据本发明的修饰的Fc多肽的产生。
[0710] 在CH3结构域中包含突变的TfR结合Fc多肽
[0711] 在一些实施方案中，特异性结合至TfR的修饰的Fc多肽在CH3结构域中包含取代。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含针对TfR结合活性进行修饰的人类Ig CH3结构域，如IgG CH3结构域。所述CH3结构域可以属于任何IgG亚型，即，来自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。在IgG抗体的情况下，CH3结构域是指如根据EU编号方案编号，由自约341位至约447位的氨基
酸构成的区段。
[0712] 在一些实施方案中，特异性结合至TfR的修饰的Fc多肽结合至TfR的顶端结构域且可以结合至TfR，而不阻断或以其它方式抑制转铁蛋白与TfR的结合。在一些实施方案中，转铁蛋白与TfR的结合大体上不受抑制。在一些实施方案中，对于转铁蛋白与TfR的结合的抑
制作用低于约50％(例如低于约45％、40％、35％、30％、25％、20％、15％、10％或5％)。在一些实施方案中，对于转铁蛋白与TfR的结合的抑制作用低于约20％(例如低于约19％、18％、
17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或
1％)。
[0713] 在一些实施方案中，根据EU编号方案，特异性结合至TfR的修饰的Fc多肽在位置384、386、387、388、389、390、413、416和421处包含至少两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个或九个取代。可以在这些位置处引入的示例性取代显示于表13和14中。在一些实施方
案中，388位和/或421位的氨基酸是芳香族氨基酸，例如Trp、Phe或Tyr。在一些实施方案中，
388位的氨基酸是Trp。在一些实施方案中，在421位的芳香族氨基酸是Trp或Phe。
[0714] 在一些实施方案中，至少一个如下位置被取代：在384位的Leu、Tyr、Met或Val；在386位的Leu、Thr、His或Pro；在387位的Val、Pro或酸性氨基酸；在388位的芳香族氨基酸，例如Trp；在389位的Val、Ser或Ala；在413位的酸性氨基酸、Ala、Ser、Leu、Thr或Pro；在416位的Thr或酸性氨基酸；或在421位的Trp、Tyr、His或Phe。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽可以在所述组的一个或多个位置处包含特定氨基酸的保守取代，例如在同一带电分组、疏水
性分组、侧链环结构分组(例如芳香族氨基酸)或大小分组，和/或极性或非极性分组中的氨基酸。因此，例如，Ile可以存在于384位、386位和/或413位。在一些实施方案中，在387位、
413位和416位中一个、两个或所有位置处的酸性氨基酸是Glu。在其它实施方案中，在387
位、413位和416位中一个、两个或所有位置处的酸性氨基酸是Asp。在一些实施方案中，在位置384、386、387、388、389、413、416和421中的两个、三个、四个、五个、六个、七个或全部八个位置具有如本段中所说明的氨基酸取代。
[0715] 在一些实施方案中，如前两段中所描述进行修饰的Fc多肽在390位包含天然Asn。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽在390位包含Gly、His、Gln、Leu、Lys、Val、Phe、Ser、Ala或Asp。在一些实施方案中，根据EU编号方案，修饰的Fc多肽在包含380、391、392和415的位置处包含一个、两个、三个或四个取代。在一些实施方案中，Trp、Tyr、Leu或Gln可以存在于380位。在一些实施方案中，Ser、Thr、Gln或Phe可以存在于391位。在一些实施方案中，Gln、Phe或His可以存在于392位。在一些实施方案中，Glu可以存在于415位。
[0716] 在某些实施方案中，修饰的Fc多肽包含选自以下的两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或十一个位置：在380位的Trp、Leu或Glu；在384位的Tyr或Phe；在386位的Thr；在387位的Glu；在388位的Trp；在389位的Ser、Ala、Val或Asn；在390位的Ser或Asn；在413位的Thr或Ser；在415位的Glu或Ser；在416位的Glu；和/或在421位的Phe。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含如下全部十一个位置：在380位的Trp、Leu或Glu；在384位的Tyr或Phe；在386位的Thr；在387位的Glu；在388位的Trp；在389位的Ser、Ala、Val或Asn；在390位的Ser或Asn；在413位的Thr或Ser；在415位的Glu或Ser；在416位的Glu；和/或在421位的Phe。
[0717] 在某些实施方案中，修饰的Fc多肽包含在384位的Leu或Met；在386位的Leu、His或Pro；在387位的Val；在388位的Trp；在389位的Val或Ala；在413位的Pro；在416位的Thr；和/或在421位的Trp。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含在391位的Ser、Thr、Gln或Phe。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含在380位的Trp、Tyr、Leu或Gln和/或在392位的Gln、Phe或His。在一些实施方案中，Trp存在于380位和/或Gln存在于392位。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽在380位不具有Trp。
[0718] 在其它实施方案中，修饰的Fc多肽包含在384位的Tyr；在386位的Thr；在387位的Glu或Val；在388位的Trp；在389位的Ser；在413位的Ser或Thr；在416位的Glu；和/或在421位的Phe。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽在390位包含天然Asn。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含在380位的Trp、Tyr、Leu或Gln；和/或在415位的Glu。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽进一步包含在380位的Trp；和/或在415位的Glu。
[0719] 在其它实施方案中，根据EU编号方案，修饰的Fc多肽进一步在包含414、424和426的位置处包含一个、两个或三个取代。在一些实施方案中，414位是Lys、Arg、Gly或Pro；424位是Ser、Thr、Glu或Lys；和/或426位是Ser、Trp或Gly。
[0720] 在一些实施方案中，根据EU编号方案，修饰的Fc多肽包含以下取代中的一个或多个：在380位的Trp；在386位的Thr；在388位的Trp；在389位的Val；在413位的Thr或Ser；在
415位的Glu；和/或在421位的Phe。
[0721] 一些实施方案中，修饰的Fc多肽与SEQ ID NO:184-278(例如SEQ ID NO:214-218、238、240-270和469-475)中任一个的氨基酸111-217具有至少70％同一性、至少75％同一
性、至少80％同一性、至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽与SEQ ID NO:184-278(例如SEQ ID NO:214-218、238、240-270和469-
475)中的任一个具有至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少85％同一
性、至少90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含在SEQ ID NO:184-278(例如SEQ ID NO:214-218、238、240-270和469-475)中任一个的EU索引位置
384-390和/或413-421处的氨基酸。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含在SEQ ID NO:
184-278(例如SEQ ID NO:214-218、238、240-270和469-475)中任一个的EU索引位置380-
390和/或413-421处的氨基酸。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含在SEQ ID NO:184-
278(例如SEQ ID NO:214-218、238、240-270和469-475)中任一个的EU索引位置380-392和/或413-426处的氨基酸。
[0722] 在一些实施方案中，修饰的Fc多肽与SEQ ID NO:184-278(例如SEQ ID NO:214-218、238、240-270和469-475)中的任一个具有至少75％同一性、至少80％同一性、至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性，且进一步包含根据EU索引编号的如下位置中
的至少五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个或十六个：在380位的Trp、Tyr、Leu、Gln或Glu；在384位的Leu、Tyr、Met或Val；在386位的Leu、Thr、His或Pro；在387位的Val、Pro或酸性氨基酸；在388位的芳香族氨基酸，例如Trp；在389位的Val、Ser或Ala；在390位的Ser或Asn；在391位的Ser、Thr、Gln或Phe；在392位的Gln、Phe或His；在413位的酸性氨基酸、Ala、Ser、Leu、Thr或Pro；在414位的Lys、Arg、Gly或Pro；在415位的Glu或Ser；在416位的Thr或酸性氨基酸；在421位的Trp、Tyr、His或Phe；在424位的Ser、Thr、Glu或Lys；以及在426位的Ser、Trp或Gly。
[0723] 在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含SEQ ID NO:214-218、238、240-270和469-475中任一个的氨基酸序列。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含SEQ ID NO:214-218、
238、240-270和469-475中任一个的氨基酸序列，但其中一个、两个或三个氨基酸被取代。
[0724] 在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含另外的突变，如以下第VI部分中所描述的突变，包括但不限于节(knob)突变(例如，参照EU编号进行编号的T366W)、孔突变(例如，参照EU编号进行编号的T366S、L368A和Y407V)、调节效应子功能的突变(例如，参照EU编号进行编号的L234A、L235A和/或P329G(例如L234A和L235A))，和/或增加血清稳定性的突变(例如，(i)参照EU编号进行编号的M252Y、S254T和T256E，或(ii)参照EU编号进行编号的N434S和存在或不存在M428L)。举例说明，SEQ ID NO:271-278、342-413和476-585提供在CH3结构域(例如CH3C.35.20.1、CH3C.35.23.2、CH3C.35.23.3、CH3C.35.23.4、CH3C.35.21.17.2、CH3C.35.23、CH3C.35.21、CH3C.35.20.1.1、CH3C.23.2.1和CH3C.35.23.1.1)中具有包含这些另外的突变中的一个或多个的突变的修饰的Fc多肽的非限制性实例。
[0725] 在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含节突变(例如，参照EU编号进行编号的T366W)且与SEQ ID NO:271、342、354、366、378、390、402、480、492和504中任一个的序列具有至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含SEQ ID NO:271、342、354、366、378、390、402、480、492和504中任一个的序列。
[0726] 在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含节突变(例如，参照EU编号进行编号的T366W)和调节效应子功能的突变(例如，参照EU编号进行编号的L234A、L235A和/或P329G
(例如L234A和L235A))，且与SEQ ID NO:272、343、344、355、356、367、368、379、380、391、
392、403、404、476、481、482、493、494、505和506中任一个的序列具有至少85％同一性、至少
90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含SEQ ID NO:272、
343、344、355、356、367、368、379、380、391、392、403、404、476、481、482、493、494、505和506中任一个的序列。
[0727] 在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含节突变(例如，参照EU编号进行编号的T366W)和增加血清稳定性的突变(例如，参照EU编号进行编号的M252Y、S254T和T256E)且与SEQ ID NO:273、345、357、369、381、393、405、483、495和507中任一个的序列具有至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含SEQ ID NO:273、345、357、369、381、393、405、483、495和507中任一个的序列。
[0728] 在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含节突变(例如，参照EU编号进行编号的T366W)和增加血清稳定性的突变(例如，参照EU编号进行编号的N434S和存在或不存在
M428L)且与SEQ ID NO:517、524、531、538、545、552、559、566、573和580中任一个的序列具有至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含SEQ ID NO:517、524、531、538、545、552、559、566、573和580中任一个的序列。
[0729] 在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含节突变(例如，参照EU编号进行编号的T366W)、调节效应子功能的突变(例如，参照EU编号进行编号的L234A、L235A和/或P329G(例如L234A和L235A))和增加血清稳定性的突变(例如，参照EU编号进行编号的M252Y、S254T和T256E)，且与SEQ ID NO:274、346、347、358、359、370、371、382、383、394、395、406和407、
477、484、485、496、497、508和509中任一个的序列具有至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含SEQ ID NO:274、346、347、358、
359、370、371、382、383、394、395、406和407、477、484、485、496、497、508和509中任一个的序列。
[0730] 在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含节突变(例如，参照EU编号进行编号的T366W)、调节效应子功能的突变(例如，参照EU编号进行编号的L234A、L235A和/或P329G(例如L234A和L235A))和增加血清稳定性的突变(例如，参照EU编号进行编号的N434S和存在或
不存在M428L)，且与SEQ ID NO:518、519、525、526、532、533、539、540、546、547、553、554、
560、561、567、568、574、575、581和582中任一个的序列具有至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含SEQ ID NO:518、519、525、
526、532、533、539、540、546、547、553、554、560、561、567、568、574、575、581和582中任一个的序列。
[0731] 在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含孔突变(例如，参照EU编号进行编号的T366S、L368A和Y407V)且与SEQ ID NO:275、348、360、372、384、396、408、486、498和510中任一个的序列具有至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含SEQ ID NO:275、348、360、372、384、396、408、486、498和510中任一个的序列。
[0732] 在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含孔突变(例如，参照EU编号进行编号的T366S、L368A和Y407V)和调节效应子功能的突变(例如，参照EU编号进行编号的L234A、
L235A和/或P329G(例如L234A和L235A))，且与SEQ ID NO:276、349、350、361、362、373、374、
385、386、397、398、409、410、478、487、488、499、500、511和512中任一个的序列具有至少
85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含
SEQ ID NO:276、349、350、361、362、373、374、385、386、397、398、409、410、478、487、488、
499、500、511和512中任一个的序列。
[0733] 在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含孔突变(例如，参照EU编号进行编号的T366S、L368A和Y407V)和增加血清稳定性的突变(例如，参照EU编号进行编号的M252Y、
S254T和T256E)且与SEQ ID NO:277、351、363、375、387、399、411、489、501和513中任一个的序列具有至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含SEQ ID NO:277、351、363、375、387、399、411、489、501和513中任一个的序列。
[0734] 在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含孔突变(例如，参照EU编号进行编号的T366S、L368A和Y407V)和增加血清稳定性的突变(例如，参照EU编号进行编号的N434S和存
在或不存在M428L)且与SEQ ID NO:520、527、534、541、548、555、562、569、576和583中任一个的序列具有至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含SEQ ID NO:520、527、534、541、548、555、562、569、576和583中任一个的序列。
[0735] 在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含孔突变(例如，参照EU编号进行编号的T366S、L368A和Y407V)、调节效应子功能的突变(例如，参照EU编号进行编号的L234A、L235A和/或P329G(例如L234A和L235A))和增加血清稳定性的突变(例如，参照EU编号进行编号的
M252Y、S254T和T256E)，且与SEQ ID NO:278、352、353、364、365、376、377、388、389、400、
401、412、413、479、490、491、502、503、514和515中任一个的序列具有至少85％同一性、至少
90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含SEQ ID NO:278、
352、353、364、365、376、377、388、389、400、401、412、413、479、490、491、502、503、514和515中任一个的序列。
[0736] 在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含孔突变(例如，参照EU编号进行编号的T366S、L368A和Y407V)、调节效应子功能的突变(例如，参照EU编号进行编号的L234A、L235A和/或P329G(例如L234A和L235A))和增加血清稳定性的突变(例如，参照EU编号进行编号的
N434S和存在或不存在M428L)，且与SEQ ID NO:521、522、528、529、535、536、542、543、549、
550、556、557、563、564、570、571、577、578、584和585中任一个的序列具有至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含SEQ ID NO:
521、522、528、529、535、536、542、543、549、550、556、557、563、564、570、571、577、578、584和
585中任一个的序列。
[0737] 在一些实施方案中，根据EU编号方案，特异性结合至TfR的修饰的Fc多肽在位置345、346、347、349、437、438、439和440处包含至少两个、三个、四个、五个、六个、七个或八个取代。示例性修饰的Fc多肽提供于SEQ ID NO:289-293中。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含在437位的Gly；在438位的Phe；和/或在440位的Asp。在一些实施方案中，Glu是存在于440位。在某些实施方案中，修饰的Fc多肽包含在如下位置处的至少一个取代：在345位的Phe或Ile；在346位的Asp、Glu、Gly、Ala,或Lys；在347位的Tyr、Met、Leu、Ile或Asp；在349位的Thr或Ala；在437位的Gly；在438位的Phe；在439位的His、Tyr、Ser或Phe；或在440位的Asp。在一些实施方案中，在位置345、346、347、349、437、438、439和440中的两个、三个、四个、五个、六个、七个或全部八个位置具有如本段中所说明的取代。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽可以在所述组的一个或多个位置处包含特定氨基酸的保守取代，例如在同一带电
分组、疏水性分组、侧链环结构分组(例如芳香族氨基酸)或大小分组，和/或极性或非极性分组中的氨基酸。
[0738] 一些实施方案中，修饰的Fc多肽与SEQ ID NO:289-293中任一个的氨基酸111-217具有至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。一些实施方案中，修饰的Fc多肽与SEQ ID NO:289-293具有至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含SEQ ID NO:289-293中任一个的氨基酸序
列。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含SEQ ID NO:289-293中任一个的氨基酸序列，但其中一个、两个或三个氨基酸被取代。
[0739] 在CH2结构域中包含突变的TfR结合Fc多肽
[0740] 在一些实施方案中，特异性结合至TfR的修饰的Fc多肽在CH2结构域中包含取代。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含针对TfR结合活性进行修饰的人类Ig CH2结构域，如IgG CH2结构域。所述CH2结构域可以属于任何IgG亚型，即，来自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。在IgG抗体的情况下，CH2结构域是指如根据EU编号方案编号，由自约231位至约340位的氨基
酸构成的区段。
[0741] 在一些实施方案中，根据EU编号方案，特异性结合至TfR的修饰的Fc多肽在位置274、276、283、285、286、287、288和290处包含至少两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个或九个取代。示例性修饰的Fc多肽提供于SEQ ID NO:294-298中。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含在287位的Glu；和/或在288位的Trp。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含在如下位置处的至少一个取代：在274位的Glu、Gly、Gln、Ser、Ala、Asn、Tyr或Trp；在276位的Ile、Val、Asp、Glu、Thr、Ala或Tyr；在283位的Asp、Pro、Met、Leu、Ala、Asn或Phe；在285位的Arg、Ser、Ala或Gly；在286位的Tyr、Trp、Arg或Val；在287位的Glu；在288位的Trp或Tyr；
在289位的Gln、Tyr、His、Ile、Phe、Val或Asp；或在290位的Leu、Trp、Arg、Asn、Tyr或Val。在一些实施方案中，在位置274、276、283、285、286、287、288和290中的两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个或全部九个位置具有如本段中所说明的取代。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽可以在所述组的一个或多个位置处包含特定氨基酸的保守取代，例如在同一带电分
组、疏水性分组、侧链环结构分组(例如芳香族氨基酸)或大小分组，和/或极性或非极性分组中的氨基酸。
[0742] 在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含在274位的Glu、Gly、Gln、Ser、Ala、Asn、或Tyr；在276位的Ile、Val、Asp、Glu、Thr、Ala或Tyr；在283位的Asp、Pro、Met、Leu、Ala或Asn；在285位的Arg、Ser或Ala；在286位的Tyr、Trp、Arg或Val；在287位的Glu；在288位的Trp；在
289位的Gln、Tyr、His、Ile、Phe或Val；和/或在290位的Leu、Trp、Arg、Asn或Tyr。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含在285位的Arg；在286位的Tyr或Trp；在287位的Glu；在288位的Trp；和/或在290位的Arg或Trp。
[0743] 一些实施方案中，修饰的Fc多肽与SEQ ID NO:294-298中任一个的氨基酸1-110具有至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。一些实施方案中，修饰的Fc多肽与SEQ ID NO:294-298具有至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含SEQ ID NO:294-298中任一个的氨基酸序列。
在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含SEQ ID NO:294-298中任一个的氨基酸序列，但其中一个、两个或三个氨基酸被取代。
[0744] 在一些实施方案中，根据EU编号方案，特异性结合至TfR的修饰的Fc多肽在位置266、267、268、269、270、271、295、297、298和299处包含至少两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个取代。示例性修饰的Fc多肽提供于SEQ ID NO:299-303中。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含在270位的Pro、在295位的Glu和/或在297位的Tyr。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含在如下位置处的至少一个取代：在266位的Pro、Phe、Ala、Met或Asp；在267位的Gln、Pro、Arg、Lys、Ala、Ile、Leu、Glu、Asp或Tyr；在268位的Thr、Ser、Gly、Met、Val、Phe、Trp或Leu；在269位的Pro、Val、Ala、Thr或Asp；在270位的Pro、Val或Phe；在
271位的Trp、Gln、Thr或Glu；在295位的Glu、Val、Thr、Leu或Trp；在297位的Tyr、His、Val或Asp；在298位的Thr、His、Gln、Arg、Asn或Val；或在299位的Tyr、Asn、Asp、Ser或Pro。在一些实施方案中，在位置266、267、268、269、270、271、295、297、298和299中的两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或全部十个位置具有如本段中所说明的取代。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽可以在所述组的一个或多个位置处包含特定氨基酸的保守取代，例如在
同一带电分组、疏水性分组、侧链环结构分组(例如芳香族氨基酸)或大小分组，和/或极性或非极性分组中的氨基酸。
[0745] 在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含在266位的Pro、Phe或Ala；在267位的Gln、Pro、Arg、Lys、Ala或Ile；在268位的Thr、Ser、Gly、Met、Val、Phe或Trp；在269位的Pro、Val或Ala；在270位的Pro；在271位的Trp或Gln；在295位的Glu；在297位的Tyr；在298位的Thr、His或Gln；和/或在299位的Tyr、Asn、Asp或Ser。
[0746] 在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含在266位的Met；在267位的Leu或Glu；在268位的Trp；在269位的Pro；在270位的Val；在271位的Thr；在295位的Val或Thr；在197位的His；在198位的His、Arg或Asn；和/或在299位的Pro。
[0747] 在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含在266位的Asp；在267位的Asp；在268位的Leu；在269位的Thr；在270位的Phe；在271位的Gln；在295位的Val或Leu；在297位的Val；在
298位的Thr；和/或在299位的Pro。
[0748] 一些实施方案中，修饰的Fc多肽与SEQ ID NO:299-303中任一个的氨基酸1-110具有至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。一些实施方案中，修饰的Fc多肽与SEQ ID NO:299-303具有至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含SEQ ID NO:299-303中任一个的氨基酸序列。
在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含SEQ ID NO:299-303中任一个的氨基酸序列，但其中一个、两个或三个氨基酸被取代。
[0749] 在一些实施方案中，根据EU编号方案，特异性结合至TfR的修饰的Fc多肽在位置268、269、270、271、272、292、293、294和300处包含至少两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个取代。示例性修饰的Fc多肽提供于SEQ ID NO:304-308中。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含在如下位置处的至少一个取代：在268位的Val或Asp；在269位的
Pro、Met或Asp；在270位的Pro或Trp；在271位的Arg、Trp、Glu或Thr；在272位的Met、Tyr或Trp；在292位的Leu或Trp；在293位的Thr、Val、Ile或Lys；在294位的Ser、Lys、Ala或Leu；在
296位的His、Leu或Pro；或在300位的Val或Trp。在一些实施方案中，在位置268、269、270、
271、272、292、293、294和300中的两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或全部十个位置具有如本段中所说明的取代。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽可以在所述组的一个
或多个位置处包含特定氨基酸的保守取代，例如在同一带电分组、疏水性分组、侧链环结构分组(例如芳香族氨基酸)或大小分组，和/或极性或非极性分组中的氨基酸。
[0750] 在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含在268位的Val；在269位的Pro；在270位的Pro；在271位的Arg或Trp；在272位的Met；在292位的Leu；在293位的Thr；在294位的Ser；在
296位的His；和/或在300位的Val。
[0751] 在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含在268位的Asp；在269位的Met或Asp；在270位的Trp；在271位的Glu或Thr；在272位的Tyr或Trp；在292位的Trp；在293位的Val、Ile或Lys；在294位的Lys、Ala或Leu；在296位的Leu或Pro；和/或在300位的Trp。
[0752] 一些实施方案中，修饰的Fc多肽与SEQ ID NO:304-308中任一个的氨基酸1-110具有至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。一些实施方案中，修饰的Fc多肽与SEQ ID NO:304-308具有至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含SEQ ID NO:304-308中任一个的氨基酸序列。
在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含SEQ ID NO:304-308中任一个的氨基酸序列，但其中一个、两个或三个氨基酸被取代。
[0753] 在一些实施方案中，根据EU编号方案，特异性结合至TfR的修饰的Fc多肽在位置272、274、276、322、324、326、329、330和331处包含至少两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个取代。示例性修饰的Fc多肽提供于SEQ ID NO:309-313中。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽在330位包含Trp。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含在如下位置处的至少一个取代：在272位的Trp、Val、Ile或Ala；在274位的Trp或Gly；在276位的Tyr、Arg或Glu；在322位的Ser、Arg或Gln；在324位的Val、Ser或Phe；在326位的Ile、Ser或Trp；在329位的Trp、Thr、Ser、Arg或Asp；在330位的Trp；或在331位的Ser、Lys、Arg或Val。在一些实施方案中，在位置272、274、276、322、324、326、329、330和331中的两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个或全部九个位置具有如本段中所说明的取代。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽可以在所述组的一个或多个位置处包含特定氨基酸的保守取代，例如在同一带电分组、疏
水性分组、侧链环结构分组(例如芳香族氨基酸)或大小分组，和/或极性或非极性分组中的氨基酸。
[0754] 在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含选自以下的两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个或九个位置：272位是Trp、Val、Ile或Ala；274位是Trp或Gly；276位是Tyr、Arg或Glu；322位是Ser、Arg或Gln；324位是Val、Ser或Phe；326位是Ile、Ser或Trp；329位是Trp、Thr、Ser、Arg或Asp；330位是Trp；和331位是Ser、Lys、Arg或Val。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含在272位的Val或Ile；在274位的Gly；在276位的Arg；在322位的Arg；在324位的Ser；在326位的Ser；在329位的Thr、Ser或Arg；在330位的Trp；和/或在331位的Lys或Arg。
[0755] 一些实施方案中，修饰的Fc多肽与SEQ ID NO:309-313中任一个的氨基酸1-110具有至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。一些实施方案中，修饰的Fc多肽与SEQ ID NO:309-313具有至少70％同一性、至少75％同一性、至少80％同一性、至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含SEQ ID NO:309-313中任一个的氨基酸序列。
在一些实施方案中，修饰的Fc多肽包含SEQ ID NO:309-313中任一个的氨基酸序列，但其中一个、两个或三个氨基酸被取代。
[0756] VI.另外的Fc多肽突变
[0757] 在一些方面，本发明的抗τ抗体包含两个Fc多肽，其各自可以独立地包含所选修饰或者可以是野生型Fc多肽，例如人类IgG1 Fc多肽。在一些实施方案中，一个或两个Fc多肽含有一个或多个使得能够结合至血脑屏障(BBB)受体，例如转铁蛋白受体(TfR)的修饰。可以引入一个或两个Fc多肽中的其它突变的非限制性实例包括例如，用以增加血清稳定性、
调节效应子功能、影响糖基化、降低在人体中的免疫原性和/或提供Fc多肽的节和孔异二聚化的突变。
[0758] 在一些实施方案中，一个或多个Fc多肽(例如第一和任选地第二Fc多肽)与相应的野生型Fc多肽(例如人类IgG1、IgG2、IgG3或IgG4Fc多肽)具有至少约75％、76％、77％、
78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、
93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％氨基酸序列同一性。
[0759] 在一些实施方案中，抗τ抗体中存在的Fc多肽包括节和孔突变以促进异二聚体形成且阻碍同二聚体形成。一般而言，所述修饰在第一多肽的界面处引入突起(“节”)且在第二多肽界面中引入相应空腔(“孔”)，由此所述突起可以安置于空腔中以促进异二聚体形成且由此阻碍同二聚体形成。突起是通过用较大侧链(例如酪氨酸或色氨酸)替代来自第一多
肽的界面的小氨基酸侧链来构建。通过用较小氨基酸侧链(例如丙氨酸或苏氨酸)替代较大
氨基酸侧链，在第二多肽的界面中产生与所述突起相同或类似大小的补偿性空腔。在一些
实施方案中，此类另外的突变是在Fc多肽中对所述多肽与BBB受体，例如TfR的结合无不利
影响的位置处。
[0760] 在节和孔二聚化方法的一个说明性实施方案中，抗τ抗体中存在的Fc多肽之一的366位(根据EU编号方案编号)包含色氨酸替代天然苏氨酸。所述二聚体中的另一Fc多肽在
407位(根据EU编号方案编号)具有缬氨酸替代天然酪氨酸。所述另一Fc多肽可以进一步包
含取代，其中366位(根据EU编号方案编号)的苏氨酸被丝氨酸取代且在368位(根据EU编号
方案编号)的天然亮氨酸被丙氨酸取代。因此，本发明的抗τ抗体的Fc多肽之一具有T366W节突变且另一Fc多肽具有Y407V突变，所述突变典型地伴随T366S和L368A孔突变。
[0761] 在一些实施方案中，可以引入增加血清半衰期的修饰。例如，在一些实施方案中，如根据EU编号方案所编号，本发明的抗τ抗体中存在的一个或两个Fc多肽可以包含在252位的酪氨酸、在254位的苏氨酸和在256位的谷氨酸。因此，一个或两个Fc多肽可以具有M252Y、S254T和T256E突变。或者，根据EU编号，一个或两个Fc多肽可以具有M428L和N434S取代。或者，一个或两个Fc多肽可以具有N434S或N434A取代。
[0762] Fc效应子功能
[0763] 在一些实施方案中，一个或两个Fc多肽可以包含减弱效应子功能，即在结合至介导效应子功能的效应细胞上表达的Fc受体后诱导某些生物功能的能力减弱的修饰。抗体效
应子功能的实例包括但不限于，C1q结合和补体依赖性细胞毒性(CDC)、Fc受体结合、抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)、抗体依赖性细胞介导的吞噬作用(ADCP)、细胞表面受体
(例如B细胞受体)下调以及B细胞活化。效应子功能可以随抗体类别而变化。例如，天然人类IgG1和IgG3抗体在结合至免疫系统细胞上存在的适当Fc受体时能够引起ADCC和CDC活性；
且天然人类IgG1、IgG2、IgG3和IgG4在结合至免疫细胞上存在的适当Fc受体时能够引起
ADCP功能。
[0764] 在一些实施方案中，一个或两个Fc多肽也可被工程改造成含有某些针对异二聚化的修饰，例如CH3-CH3界面内接触残基的静电工程改造，其通常为带电或疏水补丁(patch)
修饰。
[0765] 在一些实施方案中，一个或两个Fc多肽可以包括调节效应子功能的另外的修饰。
[0766] 在一些实施方案中，一个或两个Fc多肽可以包括减弱或去除效应子功能的修饰。减弱效应子功能的示例性Fc多肽突变包括但不限于，在CH2结构域中，例如根据EU编号方案在234和235位处的取代。例如，在一些实施方案中，一个或两个Fc多肽可以在234和235位处包含丙氨酸残基。因此，一个或两个Fc多肽可以具有L234A和L235A(LALA)突变。
[0767] 调节效应子功能的另外的Fc多肽突变包括但不限于，根据EU编号方案在位置238、265、269、270、297、327和329处的一个或多个取代。示例性取代包括以下：329位可以具有脯氨酸被甘氨酸或精氨酸或足够大以破坏Fc/Fcγ受体界面的氨基酸残基取代的突变，所述
Fc/Fcγ受体界面是形成于Fc的脯氨酸329与FcγRIII的色氨酸残基Trp 87和Trp 110之
间。根据EU编号方案，另外的示例性取代包括S228P、E233P、L235E、N297A、N297D和P331S。也可能存在多个取代，例如根据EU编号方案，人类IgG1 Fc区的L234A和L235A；人类IgG1 Fc区的L234A、L235A和P329G；人类IgG4 Fc区的S228P和L235E；人类IgG1 Fc区的L234A和G237A；
人类IgG1 Fc区的L234A、L235A和G237A；人类IgG2 Fc区的V234A和G237A；人类IgG4 Fc区的L235A、G237A和E318A；以及人类IgG4 Fc区的S228P和L236E。在一些实施方案中，一个或两个Fc多肽可以具有一个或多个调节ADCC的氨基酸取代，例如根据EU编号方案，在位置298、
333和334处的取代。
[0768] 包含另外的突变的示例性Fc多肽
[0769] 在非限制性实施例中，本发明的融合蛋白中存在的一个或两个Fc多肽可以包含另外的突变，包括节突变(例如，根据EU编号方案编号的T366W)、孔突变(例如，根据EU编号方案编号的T366S、L368A和Y407V)、调节效应子功能的突变(例如，根据EU编号方案编号的
L234A、L235A和/或P329G(例如L234A和L235A))，和/或增加血清稳定性的突变(例如，(i)根据EU编号方案编号的M252Y、S254T和T256E，或(ii)参照EU编号进行编号的N434S和存在或
不存在M428L)。
[0770] 在一些实施方案中，Fc多肽可以具有节突变(例如，根据EU编号方案编号的T366W)且与SEQ ID NO:181、184-270、289-313和469-475中任一个的序列具有至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，具有SEQ ID NO:181、184-270、289-
313和469-475中任一个的序列的Fc多肽可被修饰成具有节突变。
[0771] 在一些实施方案中，Fc多肽可以具有节突变(例如，根据EU编号方案编号的T366W)、调节效应子功能的突变(例如，根据EU编号方案编号的L234A、L235A和/或P329G(例如L234A和L235A))且与SEQ ID NO:181、184-270、289-313和469-475中任一个的序列具有
至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，具有SEQ ID NO:
181、184-270、289-313和469-475中任一个的序列的Fc多肽可被修饰成具有节突变和调节
效应子功能的突变。
[0772] 在一些实施方案中，Fc多肽可以具有节突变(例如，根据EU编号方案编号的T366W)、增加血清稳定性的突变(例如，(i)根据EU编号方案编号的M252Y、S254T和T256E，或(ii)参照EU编号进行编号的N434S和存在或不存在M428L)且与SEQ ID NO:181、184-270、
289-313和469-475中任一个的序列具有至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一
性。在一些实施方案中，具有SEQ ID NO:181、184-270、289-313和469-475中任一个的序列的Fc多肽可被修饰成具有节突变和增加血清稳定性的突变。
[0773] 在一些实施方案中，Fc多肽可以具有节突变(例如，根据EU编号方案编号的T366W)、调节效应子功能的突变(例如，根据EU编号方案编号的L234A、L235A和/或P329G(例如L234A和L235A))、增加血清稳定性的突变(例如，(i)根据EU编号方案编号的M252Y、S254T和T256E，或(ii)参照EU编号进行编号的N434S和存在或不存在M428L)且与SEQ ID NO:181、
184-270、289-313和469-475中任一个的序列具有至少85％同一性、至少90％同一性或至少
95％同一性。在一些实施方案中，具有SEQ ID NO:181、184-270、289-313和469-475中任一个的序列的Fc多肽可被修饰成具有节突变、调节效应子功能的突变和增加血清稳定性的突
变。
[0774] 在一些实施方案中，Fc多肽可以具有孔突变(例如，根据EU编号方案编号的T366S、L368A和Y407V)且与SEQ ID NO:181、184-270、289-313和469-475中任一个的序列具有至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，具有SEQ ID NO:181、
184-270、289-313和469-475中任一个的序列的Fc多肽可被修饰成具有孔突变。
[0775] 在一些实施方案中，Fc多肽可以具有孔突变(例如，根据EU编号方案编号的T366S、L368A和Y407V)、调节效应子功能的突变(例如，根据EU编号方案编号的L234A、L235A和/或P329G(例如L234A和L235A))且与SEQ ID NO:181、184-270、289-313和469-475中任一个的序列具有至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，具有
SEQ ID NO:181、184-270、289-313和469-475中任一个的序列的Fc多肽可被修饰成具有孔
突变和调节效应子功能的突变。
[0776] 在一些实施方案中，Fc多肽可以具有孔突变(例如，根据EU编号方案编号的T366S、L368A和Y407V)、增加血清稳定性的突变(例如，(i)根据EU编号方案编号的M252Y、S254T和T256E，或(ii)参照EU编号进行编号的N434S和存在或不存在M428L)且与SEQ ID NO:181、184-270、289-313和469-475中任一个的序列具有至少85％同一性、至少90％同一性或至少
95％同一性。在一些实施方案中，具有SEQ ID NO:181、184-270、289-313和469-475中任一个的序列的Fc多肽可被修饰成具有孔突变和增加血清稳定性的突变。
[0777] 在一些实施方案中，Fc多肽可以具有孔突变(例如，根据EU编号方案编号的T366S、L368A和Y407V)、调节效应子功能的突变(例如，根据EU编号方案编号的L234A、L235A和/或P329G(例如L234A和L235A))、增加血清稳定性的突变(例如，(i)根据EU编号方案编号的M252Y、S254T和T256E，或(ii)参照EU编号进行编号的N434S和存在或不存在M428L)且与SEQ ID NO:181、184-270、289-313和469-475中任一个的序列具有至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性。在一些实施方案中，具有SEQ ID NO:181、184-270、289-313和469-
475中任一个的序列的Fc多肽可被修饰成具有孔突变、调节效应子功能的突变和增加血清
稳定性的突变。
[0778] VII.具有修饰的FC多肽的抗τ抗体
[0779] 在一些实施方案中，本文所述的抗τ抗体包含具有如关于SEQ ID NO:271-274、476、477和559-561中每一个所说明的节(根据EU编号的T366W)、LALA(根据EU编号的L234A
和L235A)、YTE(根据EU编号的M252Y、S254T和T256E)和LS(根据EU编号的N434S和存在或不
存在M428L)突变且与各别序列具有至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性的
第一Fc多肽，和具有SEQ ID NO:279的序列的第二Fc多肽。在一些实施方案中，本文所述的抗τ抗体包含具有SEQ ID NO:214-218、238、240-270和469-475中任一个的序列且具有节突变(例如根据EU编号的T366W取代)的第一Fc多肽，和具有SEQ ID NO:279的序列的第二Fc多
肽。在一些实施方案中，本文所述的抗τ抗体包含具有SEQ ID NO:271的序列的第一Fc多肽和具有SEQ ID NO:279的序列的第二Fc多肽。在一些实施方案中，本文所述的抗τ抗体包含具有SEQ ID NO:272的序列的第一Fc多肽和具有SEQ ID NO:280的序列的第二Fc多肽。在一
些实施方案中，本文所述的抗τ抗体包含具有SEQ ID NO:273的序列的第一Fc多肽和具有
SEQ ID NO:281的序列的第二Fc多肽。在一些实施方案中，本文所述的抗τ抗体包含具有SEQ ID NO:274的序列的第一Fc多肽和具有SEQ ID NO:282的序列的第二Fc多肽。
[0780] 在一些实施方案中，本文所述的抗τ抗体包含具有如关于SEQ ID NO:275-278、478、479和562-564中每一个所说明的孔(根据EU编号的T366S、L368A和Y407V)、LALA(根据EU编号的L234A和L235A)、YTE(根据EU编号的M252Y、S254T和T256E)和LS(根据EU编号的
N434S和存在或不存在M428L)突变且与各别序列具有至少85％同一性、至少90％同一性或
至少95％同一性的第一Fc多肽，和具有SEQ ID NO:283的序列的第二Fc多肽。在一些实施方案中，本文所述的抗τ抗体包含具有SEQ ID NO:214-218、238、240-270和469-475中任一个的序列且具有孔突变(例如根据EU编号的T366S、L368A和/或Y407V取代)的第一Fc多肽，和
具有SEQ ID NO:283的序列的第二Fc多肽。在一些实施方案中，本文所述的抗τ抗体包含具有SEQ ID NO:275的序列的第一Fc多肽和具有SEQ ID NO:283的序列的第二Fc多肽。在一些
实施方案中，本文所述的抗τ抗体包含具有SEQ ID NO:276的序列的第一Fc多肽和具有SEQ ID NO:284的序列的第二Fc多肽。在一些实施方案中，本文所述的抗τ抗体包含具有SEQ ID NO:277的序列的第一Fc多肽和具有SEQ ID NO:285的序列的第二Fc多肽。在一些实施方案
中，本文所述的抗τ抗体包含具有SEQ ID NO:278的序列的第一Fc多肽和具有SEQ ID NO:
286的序列的第二Fc多肽。
[0781] 在一些实施方案中，本文所述的抗τ抗体包含具有如关于SEQ ID NO:271-274、476、477和559-561中每一个所说明的节(根据EU编号的T366W)、LALA(根据EU编号的L234A
和L235A)、YTE(根据EU编号的M252Y、S254T和T256E)和LS(根据EU编号的N434S和存在或不
存在M428L)突变且与各别序列具有至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性的
第一Fc多肽，和具有如关于SEQ ID NO:275-278、478、479和562-564中每一个所说明的孔
(根据EU编号的T366S、L368A和Y407V)、LALA(根据EU编号的L234A和L235A)、YTE(根据EU编号的M252Y、S254T和T256E)和LS(根据EU编号的N434S和存在或不存在M428L)突变且与各别
序列具有至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性的第二Fc多肽。在一些实施
方案中，本文所述的抗τ抗体包含具有SEQ ID NO:214-218、238、240-270和469-475中任一个的序列且具有节突变(例如根据EU编号的T366W)的第一Fc多肽，和具有SEQ ID NO:214-
218、238、240-270和469-475中任一个的序列且具有孔突变(例如根据EU编号的T366S、
L368A和/或Y407V取代)的第二Fc多肽。在一些实施方案中，本文所述的抗τ抗体包含具有
SEQ ID NO:271的序列的第一Fc多肽和具有SEQ ID NO:275的序列的第二Fc多肽。在一些实
施方案中，本文所述的抗τ抗体包含具有SEQ ID NO:272的序列的第一Fc多肽和具有SEQ ID NO:276的序列的第二Fc多肽。在一些实施方案中，本文所述的抗τ抗体包含具有SEQ ID NO:
273的序列的第一Fc多肽和具有SEQ ID NO:277的序列的第二Fc多肽。在一些实施方案中，
本文所述的抗τ抗体包含具有SEQ ID NO:274的序列的第一Fc多肽和具有SEQ ID NO:278的
序列的第二Fc多肽。
[0782] 在一些实施方案中，本文所述的抗τ抗体包含具有如关于SEQ ID NO:283-286和626-628中每一个所说明的节(根据EU编号的T366W)、LALA(根据EU编号的L234A和L235A)、
YTE(根据EU编号的M252Y、S254T和T256E)和LS(根据EU编号的N434S和存在或不存在M428L)
突变且与各别序列具有至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性的第一Fc多
肽，和具有如关于SEQ ID NO:279-282和629-631中每一个所说明的孔(根据EU编号的
T366S、L368A和Y407V)、LALA(根据EU编号的L234A和L235A)和YTE(根据EU编号的M252Y、
S254T和T256E)突变且与各别序列具有至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一
性的第二Fc多肽。在一些实施方案中，本文所述的抗τ抗体包含具有SEQ ID NO:283的序列的第一Fc多肽和具有SEQ ID NO:279的序列的第二Fc多肽。在一些实施方案中，本文所述的抗τ抗体包含具有SEQ ID NO:284的序列的第一Fc多肽和具有SEQ ID NO:280的序列的第二
Fc多肽。在一些实施方案中，本文所述的抗τ抗体包含具有SEQ ID NO:285的序列的第一Fc多肽和具有SEQ ID NO:281的序列的第二Fc多肽。在一些实施方案中，本文所述的抗τ抗体包含具有SEQ ID NO:286的序列的第一Fc多肽和具有SEQ ID NO:282的序列的第二Fc多肽。
[0783] 在上述实施方案中的任一个中，抗τ抗体可以包括分别含SEQ ID NO:22、23、24、26、27和28的氨基酸序列的重链CDR1-3和轻链CDR1-3。
[0784] 在一些实施方案中，抗τ抗体包含具有轻链CDR1-3(SEQ ID NO:26-28)且与SEQ ID NO:315的序列具有至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性的轻链；具有重链CDR1-3(SEQ ID NO:22-24)和如关于SEQ ID NO:317的序列所说明的节(根据EU编号的
T366W)、LALA(根据EU编号的L234A和L235A)、P329G和/或YTE(根据EU编号的M252Y、S254T和T256E)突变的第一重链；以及具有重链CDR1-3(SEQ ID NO:22-24)和如关于SEQ ID NO:316
的序列所说明的孔(根据EU编号的T366S、L368A和Y407V)、LALA(根据EU编号的L234A和
L235A)、P329G和/或YTE(根据EU编号的M252Y、S254T和T256E)突变的第二重链。在一些实施方案中，抗τ抗体包含具有SEQ ID NO:315的序列的轻链、具有SEQ ID NO:317的序列的第一重链和具有SEQ ID NO:316的序列的第二重链。
[0785] 在一些实施方案中，抗τ抗体包含具有轻链CDR1-3(SEQ ID NO:26-28)且与SEQ ID NO:315的序列具有至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性的轻链；具有重链CDR1-3(SEQ ID NO:22-24)和如关于SEQ ID NO:317-322中任一个的每一序列所说明的节
(根据EU编号的T366W)、LALA(根据EU编号的L234A和L235A)、P329G和/或YTE(根据EU编号的M252Y、S254T和T256E)突变且与各别序列具有至少85％同一性、至少90％同一性或至少
95％同一性的第一重链；以及具有重链CDR1-3(SEQ ID NO:22-24)和如关于SEQ ID NO:316
和329-333中任一个的每一序列所说明的孔(根据EU编号的T366S、L368A和Y407V)、LALA(根据EU编号的L234A和L235A)、P329G和/或YTE(根据EU编号的M252Y、S254T和T256E)突变且与各别序列具有至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性的第二重链。在一些实
施方案中，抗τ抗体包含具有SEQ ID NO:315的序列的轻链、具有SEQ ID NO:317-322中任一个的序列的第一重链和具有SEQ ID NO:316和329-333中任一个的序列的第二重链。
[0786] 在一些实施方案中，抗τ抗体包含具有轻链CDR1-3(SEQ ID NO:26-28)且与SEQ ID NO:315的序列具有至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性的轻链；具有重链CDR1-3(SEQ ID NO:22-24)和如关于SEQ ID NO:323-328中任一个的每一序列所说明的孔
(根据EU编号的T366S、L368A和Y407V)、LALA(根据EU编号的L234A和L235A)、P329G和/或YTE(根据EU编号的M252Y、S254T和T256E)突变且与各别序列具有至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性的第一重链；以及具有重链CDR1-3(SEQ ID NO:22-24)和如关于SEQ ID NO:334-339中任一个的每一序列所说明的节(根据EU编号的T366W)、LALA(根据EU编号
的L234A和L235A)、P329G和/或YTE(根据EU编号的M252Y、S254T和T256E)突变且与各别序列具有至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性的第二重链。在一些实施方案中，抗τ抗体包含具有SEQ ID NO:315的序列的轻链、具有SEQ ID NO:323-328中任一个的序列
的第一重链和具有SEQ ID NO:334-339中任一个的序列的第二重链。
[0787] 在一些实施方案中，抗τ抗体包含具有轻链CDR1-3(SEQ ID NO:26-28)且与SEQ ID NO:315的序列具有至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性的轻链；具有重链CDR1-3(SEQ ID NO:22-24)和如关于SEQ ID NO:317-322中任一个的每一序列所说明的节
(根据EU编号的T366W)、LALA(根据EU编号的L234A和L235A)、P329G和/或YTE(根据EU编号的M252Y、S254T和T256E)突变且与各别序列具有至少85％同一性、至少90％同一性或至少
95％同一性的第一重链；以及具有重链CDR1-3(SEQ ID NO:22-24)和如关于SEQ ID NO:
323-328中任一个的每一序列所说明的孔(根据EU编号的T366S、L368A和Y407V)、LALA(根据EU编号的L234A和L235A)、P329G和/或YTE(根据EU编号的M252Y、S254T和T256E)突变且与各别序列具有至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性的第二重链。在一些实施
方案中，抗τ抗体包含具有SEQ ID NO:315的序列的轻链、具有SEQ ID NO:317-322中任一个的序列的第一重链和具有SEQ ID NO:323-328中任一个的序列的第二重链。
[0788] 在一些实施方案中，抗τ抗体包含具有轻链CDR1-3(SEQ ID NO:26-28)且与SEQ ID NO:315的序列具有至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性的轻链；具有重链CDR1-3(SEQ ID NO:22-24)和如关于SEQ ID NO:334-339中任一个的每一序列所说明的节
(根据EU编号的T366W)、LALA(根据EU编号的L234A和L235A)、P329G和/或YTE(根据EU编号的M252Y、S254T和T256E)突变且与各别序列具有至少85％同一性、至少90％同一性或至少
95％同一性的第一重链；以及具有重链CDR1-3(SEQ ID NO:22-24)和如关于SEQ ID NO:316
和329-333中任一个的每一序列所说明的孔(根据EU编号的T366S、L368A和Y407V)、LALA(根据EU编号的L234A和L235A)、P329G和/或YTE(根据EU编号的M252Y、S254T和T256E)突变且与各别序列具有至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性的第二重链。在一些实
施方案中，抗τ抗体包含具有SEQ ID NO:315的序列的轻链、具有SEQ ID NO:334-339中任一个的序列的第一重链和具有SEQ ID NO:316和329-333中任一个的序列的第二重链。
[0789] 在其它实施方案中，抗τ抗体包含具有轻链CDR1-3(SEQ ID NO:26-28)且与SEQ ID NO:315的序列具有至少85％同一性、至少90％同一性或至少95％同一性的轻链；和具有重链CDR1-3(SEQ ID NO:22-24)且与SEQ ID NO:414-419中任一个的序列具有至少85％同一
性、至少90％同一性或至少95％同一性的重链。在一些实施方案中，所述重链包含修饰的Fc多肽，所述Fc多肽具有节突变(例如，根据EU编号的T366W)、孔突变(例如，根据EU编号的
T366S、L368A和Y407V)、调节效应子功能的突变(例如，根据EU编号的L234A、L235A和/或
P329G(例如L234A和L235A))和/或增加血清稳定性的突变(例如，(i)根据EU编号的M252Y、
S254T和T256E，或(ii)根据EU编号的N434S和存在或不存在M428L)。
[0790] 在特定实施方案中，具有SEQ ID NO:414-419中任一个的序列的重链可被修饰成含有根据EU编号的节突变T366W、调节效应子功能的突变L234A、L235A和/或P329G(例如
L234A和L235A)，和/或增加血清稳定性的突变(i)M252Y、S254T和T256E，或(ii)N434S和存在或不存在M428L。
[0791] 在特定实施方案中，具有SEQ ID NO:414-419中任一个的序列的重链可被修饰成含有根据EU编号的孔突变T366S、L368A和Y407V、调节效应子功能的突变L234A、L235A和/或P329G(例如L234A和L235A)，和/或增加血清稳定性的突变(i)M252Y、S254T和T256E，或(ii)N434S和存在或不存在M428L。
[0792] 在上述实施方案中的任一个中，所述抗τ抗体可以包括：
[0793] (a)含与SEQ ID NO:22、150-154和420-437中的任一个具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的重链CDR1；
[0794] (b)含与SEQ ID NO:23和438-443中的任一个具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的重链CDR2；
[0795] (c)含与SEQ ID NO:24和155中的任一个具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的重链CDR3；
[0796] (d)含与SEQ ID NO:26、156-158和444-459中的任一个具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的轻链CDR1；
[0797] (e)含与SEQ ID NO:27具有至少90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的轻链CDR2；以及(f)含与SEQ ID NO:28、159-162和460-462中的任一个具有至少
90％序列同一性(例如至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少
97％、至少98％或至少99％序列同一性)的氨基酸序列的轻链CDR3。
[0798] VIII.使用抗τ抗体的治疗方法
[0799] 另一方面，提供使用如本文所描述的抗τ抗体的方法。在一些实施方案中，使用以上第III部分中所述的抗τ抗体实践本文所述的方法。
[0800] 在一些实施方案中，提供用于防止或减少致病性τ蛋白播种和/或扩散的方法。在一些实施方案中，所述方法包括抑制、防止或减少受试者中，例如受试者的脑中致病性τ蛋白播种和/或扩散。在一些实施方案中，所述方法包括向所述受试者施用如本文所描述的抗τ抗体或其抗原结合部分、包含如本文所描述的抗τ抗体的药物组合物，或包含如本文所描述的抗τ抗体的多特异性(例如双特异性)抗体。在一些实施方案中，所述受试者是患有τ蛋白病的个体。
[0801] 在一些实施方案中，提供防止、减少或抑制τ蛋白低聚合的方法。在一些实施方案中，所述方法包括防止、减少或抑制受试者中，例如受试者的脑中的τ蛋白低聚合。在一些实施方案中，所述方法包括向所述受试者施用如本文所描述的抗τ抗体或其抗原结合部分、包含如本文所描述的抗τ抗体的药物组合物，或包含如本文所描述的抗τ抗体的多特异性(例如双特异性)抗体。在一些实施方案中，所述受试者是患有τ蛋白病的个体。
[0802] 在一些实施方案中，提供防止、减少或抑制τ蛋白聚集的方法。在一些实施方案中，所述方法包括防止、减少或抑制受试者中，例如受试者的脑中的τ蛋白聚集。在一些实施方案中，所述方法包括向所述受试者施用如本文所描述的抗τ抗体或其抗原结合部分、包含如本文所描述的抗τ抗体的药物组合物，或包含如本文所描述的抗τ抗体的多特异性(例如双特异性)抗体。在一些实施方案中，所述受试者是患有τ蛋白病的个体。
[0803] 在一些实施方案中，提供治疗τ蛋白病的方法。在一些实施方案中，所述方法包括向患有τ蛋白病的受试者施用如本文所描述的抗τ抗体或其抗原结合部分、包含如本文所描述的抗τ抗体的药物组合物，或包含如本文所描述的抗τ抗体的多特异性(例如双特异性)抗体。
[0804] 在一些实施方案中，提供治疗神经退化性疾病的方法。在一些实施方案中，所述神经退化性疾病是τ蛋白病。在一些实施方案中，τ蛋白病选自由以下组成的组的神经退化性τ蛋白病：阿尔茨海默氏病、原发性年龄相关τ蛋白病、进行性核上麻痹(PSP)、额颞叶性痴呆、与17号染色体相关的额颞叶性痴呆伴发帕金森氏症、嗜银颗粒性痴呆、关岛型肌萎缩侧索硬化症/帕金森氏症-痴呆复合征、皮质基底核退化症、慢性创伤性脑病、克-雅二氏病、拳击员痴呆、弥漫型神经原纤维缠结伴钙化、唐氏综合征、家族性英国型痴呆、家族性丹麦型痴呆、杰茨曼-斯脱司勒-史茵克氏病、球状胶质τ蛋白病、瓜德罗普岛型帕金森氏病伴发痴呆、瓜德罗普岛型PSP、哈勒沃登-施帕茨氏病、包涵体肌炎、多系统萎缩、强直性肌营养不良、神经原纤维缠结主导型痴呆、C型尼曼-皮克氏病、苍白球-桥脑-黑质退化、帕金森氏病、皮克氏病、脑炎后帕金森氏病、朊病毒蛋白型脑部淀粉样血管病、进行性皮质下胶质细胞增生
症、亚急性硬化性全脑炎、亨廷顿氏病以及仅有神经原纤维缠结的痴呆。在一些实施方案
中，所述神经退化性τ蛋白病是阿尔茨海默氏病。在一些实施方案中，所述神经退化性τ蛋白病是额颞叶性痴呆。在一些实施方案中，所述神经退化性τ蛋白病是进行性核上麻痹。
[0805] 在一些实施方案中，使用本文所描述的抗τ抗体(或抗原结合片段、多特异性抗体或药物组合物)治疗阿尔茨海默氏病。在一些实施方案中，使用抗τ抗体治疗前驱阿尔茨海默氏病。在一些实施方案中，使用抗τ抗体治疗轻度阿尔茨海默氏病(该病的早期形式)。在一些实施方案中，使用抗τ抗体治疗中度阿尔茨海默氏病(该病的中期形式)。在一些实施方案中，使用抗τ抗体治疗重度阿尔茨海默氏病(该病的晚期形式)。在一些实施方案中，使用抗τ抗体治疗早期发作性阿尔茨海默氏病。在一些实施方案中，使用抗τ抗体治疗晚期发作性阿尔茨海默氏病。
[0806] 在一些实施方案中，待治疗的受试者是人类，例如成年人或儿童。
[0807] 在一些实施方案中，所述方法还包括向所述受试者施用一种或多种其它治疗剂。在一些实施方案中，所述方法包括向所述受试者施用结合至淀粉样β肽或防止淀粉样β肽聚集的药剂，例如抗体。在一些实施方案中，所述方法包括向所述受试者施用抗淀粉样β(Aβ)抗体，包括但不限于杜卡努单抗(aducanumab)、巴匹珠单抗(bapineuzumab)、苏兰珠单抗
(solanezumab)和甘特鲁单抗(gantenerumab)。在一些实施方案中，所述方法包括向所述受试者施用β位淀粉样前驱蛋白裂解酶1(BACE1)抑制剂，包括但不限于维罗斯他
(verubecestat)。在一些实施方案中，所述方法包括向所述受试者施用α-共核蛋白(α-
synuclein)抗体。在一些实施方案中，所述方法包括向所述受试者施用神经保护剂。在一些实施方案中，所述神经保护剂是抗胆碱剂、多巴胺剂、谷氨酸能剂、组蛋白去乙酰化酶
(HDAC)抑制剂、大麻碱、半胱天冬酶抑制剂、褪黑激素、抗炎剂、激素(例如雌激素或孕酮)或维生素。在一些实施方案中，所述方法包括向所述受试者施用供治疗τ蛋白病的认知或行为症状用的药剂(例如抗抑郁剂、多巴胺激动剂或抗精神病剂)。
[0808] 在一些实施方案中，向受试者施用治疗有效量或剂量的抗τ抗体。可以使用的日剂量范围是约0.01mg/kg至约500mg/kg，或约0.1mg/kg至约200mg/kg，或约1mg/kg至约100mg/kg，或约10mg/kg至约50mg/kg。然而，剂量可能根据若干因素而变化，包括所选施用途径、所述组合物的配制物、患者反应、病况的严重程度、受试者的体重以及处方医师的判断。根据个别患者的要求，所述剂量可以随时间增加或减少。在某些情况下，患者最初给予较低剂量，接着将剂量增加至患者耐受的有效剂量。有效剂量的确定是在本领域技术人员的能力
范围内。
[0809] 本文所描述的抗τ抗体(或抗原结合片段、多特异性抗体或药物组合物)的施用途径可以是经口、腹膜内、经皮、皮下、静脉内、肌肉内、鞘内、吸入、表面、病灶内、直肠、支气管内、鼻、经黏膜、肠、眼或耳递送，或本领域中已知的任何其它方法。在一些实施方案中，所述抗体是经口、静脉内或腹膜内施用。
[0810] 共施用剂(例如抗τ抗体和另一治疗剂)可以一起或分开、同时或在不同时间施用。当施用时，视需要，治疗剂可以每日独立地施用一次、两次、三次、四次，或以更高或更低频率施用。在一些实施方案中，施用的治疗剂是每日施用一次。在一些实施方案中，施用的治疗剂是在一个或多个相同时间施用，例如以混合物施用。在一些实施方案中，一种或多种治疗剂是以持续释放配制物形式施用。
[0811] 在一些实施方案中，抗τ抗体和另一治疗剂是同时施用。在一些实施方案中，抗τ抗体和另一治疗剂是依序施用。例如，在一些实施方案中，先施用抗τ抗体例如约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、40、50、60、70、80、90、100天或更长时间，随后施用另一治疗剂。
在一些实施方案中，先施用所述另一治疗剂例如约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、
40、50、60、70、80、90、100天或更长时间，随后施用抗τ抗体。
[0812] 在一些实施方案中，向受试者施用抗τ抗体(和任选地另一治疗剂)一段较长时间，例如至少30、40、50、60、70、80、90、100、150、200、250、300、350天或更长时间。
[0813] IX.药物组合物和试剂盒
[0814] 另一方面，提供包含特异性结合至人类τ蛋白的抗体的药物组合物和试剂盒。在一些实施方案中，所述药物组合物和试剂盒被用于防止或减少例如受试者的脑中致病性τ蛋白播种和/或扩散。在一些实施方案中，所述药物组合物和试剂盒被用于治疗τ蛋白病。
[0815] 药物组合物
[0816] 在一些实施方案中，提供包含抗τ抗体的药物组合物。在一些实施方案中，所述抗τ抗体是如以上第III部分中所描述的抗体(或抗原结合片段或多特异性抗体)。
[0817] 在一些实施方案中，药物组合物包含如本文所描述的抗τ抗体且进一步包含一种或多种药学上可接受的载体和/或赋形剂。药学上可接受的载体包括在生理上相容且优选
不干扰或以其它方式抑制活性剂的活性的任何溶剂、分散介质或包衣剂。本领域中众所周
知各种药学上可接受的赋形剂。
[0818] 在一些实施方案中，所述载体适于静脉内、肌肉内、经口、腹膜内、鞘内、经皮、表面或皮下施用。药学上可接受的载体可以含有一种或多种用于例如使组合物稳定，或者增加或减少活性剂的吸收的生理上可接受的化合物。生理上可接受的化合物可以包括例如碳水
化合物，如葡萄糖、蔗糖或葡聚糖；抗氧化剂，如抗坏血酸或谷胱甘肽；螯合剂；低分子量蛋白质；减少活性剂的清除或水解的组合物；或者赋形剂，或其它稳定剂和/或缓冲剂。本领域中众所周知其它药学上可接受的载体和其配制物。
[0819] 本文所描述的药物组合物可以本领域技术人员已知的方式，例如借助于常规混合、溶解、制粒、制糖衣丸、乳化、囊封、包封或冻干方法制造。以下方法和赋形剂仅为示例性的且决不作为限制。
[0820] 对于经口施用，抗τ抗体可以通过与本领域中众所周知的药学上可接受的载体组合来配制。所述载体能够将所述化合物配制为片剂、丸剂、糖衣丸、胶囊、乳液、亲脂性和亲水性悬浮液、液体、凝胶、糖浆、浆液、悬浮液等，以供待治疗的患者口服。可以通过将化合物与固体赋形剂混合，任选地研磨所得混合物，并且必要时，在添加适合的佐剂后处理颗粒混合物，以获得片剂或糖衣丸核心，来得到口服药物制剂。适合的赋形剂包括例如填充剂，如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露糖醇或山梨糖醇；纤维素制剂，如玉米淀粉、小麦淀粉、大米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、黄芪胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠，和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。必要时，可添加崩解剂，如交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂，或者海藻酸或其盐，如海藻酸钠。
[0821] 抗τ抗体可以配制成通过注射，例如通过快速注射或连续输注肠胃外施用。对于注射，可以通过在水性或非水性溶剂，如植物油或其它类似油、合成脂肪酸甘油酯、高级脂肪酸或丙二醇酯中溶解、悬浮或乳化所述一种或多种化合物；且必要时，添加常规添加剂，如增溶剂、等渗剂、悬浮剂、乳化剂、稳定剂以及防腐剂将其配制成制剂。在一些实施方案中，可以在水溶液中，优选在生理上相容的缓冲液，如汉氏溶液(Hanks's solution)、林格氏溶液或生理盐水缓冲液中配制化合物。注射用配制物可以呈单位剂型提供于例如加有防腐剂的安瓿或多剂量容器中。所述组合物可呈如于油性或水性媒剂中的悬浮液、溶液或乳液的
形式，并且其可含有配制剂，如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。
[0822] 在一些实施方案中，抗τ抗体是制备成于含有活性剂的固体疏水性聚合物的半渗透基质中的持续释放、控制释放、延长释放、定时释放或延迟释放配制物形式递送。已经确定且本领域技术人员众所周知各种类型的持续释放材料。当前的延长释放配制物包括膜包
覆的片剂、多颗粒或丸粒系统、使用亲水性或亲脂性材料的基质技术和含有成孔赋形剂的
基于蜡的片剂。取决于设计，持续释放递送系统可以在数小时或数天时间内，例如经4、6、8、
10、12、16、20、24小时或更长时间释放化合物。通常，持续释放配制物可以使用天然存在或合成聚合物，例如聚合乙烯吡咯烷酮，如聚乙烯吡咯烷酮(PVP)；羧基乙烯基亲水性聚合物；
疏水性和/或亲水性水胶体，如甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙基纤维素和羟丙基甲基纤维素；以及羧基聚甲烯制备。
[0823] 典型地，用于体内施用的药物组合物是无菌的。灭菌可以根据本领域中已知的方法，例如热灭菌、蒸汽灭菌、无菌过滤或照射实现。
[0824] 本公开的药物组合物的剂量和所需药物浓度可以取决于预期的特定用途而变化。适当施用剂量或途径的确定是在本领域技术人员的技能范围内。适合剂量于以上第VIII部
分中也有描述。
[0825] 试剂盒
[0826] 在一些实施方案中，提供包含如本文所描述(例如，如以上第III部分中所描述)的抗τ抗体(或抗原结合部分或多特异性抗体)的试剂盒。在一些实施方案中，所述试剂盒被用于防止或减少例如受试者的脑中致病性τ蛋白播种和/或扩散。在一些实施方案中，所述药物组合物和试剂盒被用于治疗τ蛋白病，例如神经退化性τ蛋白病。
[0827] 在一些实施方案中，所述试剂盒另外包含一种或多种另外的治疗剂。例如，在一些实施方案中，所述试剂盒包含如本文所描述的抗τ抗体且进一步包含一种或多种用于治疗τ蛋白病的另外的治疗剂。在一些实施方案中，所述治疗剂被用于治疗τ蛋白病的认知或行为症状的药剂(例如抗抑郁剂、多巴胺激动剂或抗精神病剂)。在一些实施方案中，所述治疗剂是神经保护剂(例如抗胆碱剂、多巴胺剂、谷氨酸能剂、组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂、大麻碱、半胱天冬酶抑制剂、褪黑激素、抗炎剂、激素(例如雌激素或孕酮)或维生素)。在一些实施方案中，所述治疗剂是结合至淀粉样β肽或防止淀粉样β肽聚集的药剂，例如抗体。
[0828] 在一些实施方案中，所述试剂盒另外包含说明材料，其含有关于实践本文所描述的方法的指导(即，方案)(例如有关使用所述试剂盒治疗τ蛋白病的说明书)。尽管所述说明材料典型地包含书面或印刷材料，但其不限于此。能够储存此类说明书并将其传达给终端
使用者的任何媒体均涵盖在本发明中。此类媒体包括但不限于电子存储媒体(例如磁盘、磁带、盒式磁盘、晶片)、光学媒体(例如CD-ROM)等。此类媒体可以包括提供此类说明材料的互联网站点的地址。
[0829] X.实施例
[0830] 本发明将借助于具体实施例更详细地描述。提供以下实施例仅用于说明目的，且不意欲以任何方式限制本发明。
[0831] 实施例1.抗τ抗体的发现和筛选
[0832] 本实施例描述特异性结合至多种τ蛋白剪接同功型且特异性结合至磷酸化的人类τ蛋白和未磷酸化的人类τ蛋白的抗体的设计、产生和表征。所述抗体也在人类τ蛋白与食蟹猕猴τ蛋白，且在一些情况下与小鼠τ蛋白之间展现交叉物种反应性。
[0833] 有关抗τ抗体发现和筛选程序的示意性表示显示于图1中。如下文所详述，用重组τ蛋白(r-Tau)和/或过度磷酸化τ蛋白(p-Tau)对小鼠免疫接种，收集脾细胞和淋巴细胞，并提取RNA以产生cDNA。随后，通过扩增V基因并在噬菌粒载体中组装成Fab片段与噬菌体衣壳蛋白pIII的融合物形式以产生噬菌体文库，并针对r-Tau进行淘选。接着，产生针对r-Tau和p-Tau的重组Fab片段。使用ELISA选择抗τ抗体以筛选出结合至所有人类τ蛋白剪接同功型0N3R、1N3R、2N3R、0N4R、1N4R和2N4R并展现与食蟹猕猴(cyno)τ蛋白的结合的抗体。对由ELISA筛选得到的阳性匹配进行测序并使用所述序列产生嵌合IgG。测试嵌合抗体克隆的结
合亲和力和结合特征并对高亲和力抗体进行表位定位。
[0834] 抗原产生
[0835] 重组τ蛋白
[0836] 在大肠杆菌BL21(DE3)细胞中产生全长(441个氨基酸长度)重组τ蛋白(r-Tau)。表达具有His6-Smt3标签的r-Tau(图2A)，所述标签用于亲和纯化且随后使用类泛素特异性蛋
白酶1(Ulp1)裂解并移除。图2B显示初始和裂解产物的SDS-PAGE凝胶。图2C显示最终纯化的r-Tau抗原的SDS-PAGE凝胶。
[0837] 体外r-Tau磷酸化
[0838] 通过在室温下，将重组τ蛋白(r-Tau)与1:1量的PKA和GSK3β于50mM MES(pH 6.8)、100mM NaCl、0.5mM EGTA、5mM MgCl2和1mM ATP中培育24小时，在体外使r-Tau磷酸化。接着，纯化磷酸化的r-Tau以移除激酶和内毒素。如图2D中所示，确定r-Tau的磷酸化。
[0839] 小鼠免疫接种
[0840] 用重组τ蛋白(r-Tau)、重组过度磷酸化τ蛋白(p-Tau)，或交替注射任一抗原对NZBW小鼠进行免疫接种。免疫接种是经跗关节或足垫，通过每周注射含5-10μg抗原的Ribi或弗氏佐剂，直至超过105的稀释度时针对r-Tau或p-Tau的血清抗体在ELISA中反应来执
行，典型地持续约六至八周。在无佐剂存在下，通过腹膜内注射对小鼠最后一次加强免疫并在加强免疫后3天将其处死。收集脾以及腘和腹股沟淋巴结，通过使其通过细胞筛网制成单细胞悬浮液，且接着在液氮中速冻脾细胞和淋巴细胞。
[0841] 脾细胞和淋巴细胞中RNA的纯化和cDNA的产生
[0842] 在冰上解冻来自冷冻脾细胞或淋巴细胞的细胞沉淀物并将其再悬浮于1mL TRIzolTM中。在室温下培育所述溶液5分钟，接着添加0.2mL氯仿并剧烈振荡管15秒。在4℃下，以20×g离心各管15分钟以分离各相。小心地移除无色水相，留下白色中间相和粉色氯
仿相。通过添加0.6mL异丙醇，倒转混合，接着在4℃下以20×g离心15分钟来使RNA沉淀。丢弃上清液，并用75％乙醇洗涤沉淀物，并将其溶解于DEPC处理的水中。使用
SuperScriptTMIII逆转录酶(自Thermo Fisher获得)，使用制造商推荐的有关用低聚dT起始的方案，由总RNA产生cDNA。
[0843] 免疫噬菌体展示文库的产生
[0844] 使用各别小鼠生殖系基因特异性引物进行PCR反应以扩增V基因的重链或轻链可变区。利用琼脂糖凝胶纯化PCR产物。通过使用VH产物和人类CH1区的DNA以及终端引物进行接合PCR反应，产生VH-CH1片段。通过使用VL产物和人类κ区的DNA以及终端引物进行接合
PCR反应，产生VL-CL片段。利用琼脂糖凝胶纯化各别片段。进行最终PCR反应以接合VH-CH1和VL-CL片段，并通过琼脂糖凝胶再次纯化由此得到的编码Fab的DNA，接着用SfiI限制性酶消化。将消化的Fab片段连接至经SfiI消化的噬菌粒载体中，在16℃下保持过夜，并通过乙醇沉淀纯化连接产物。使用 630电穿孔系统和制造商建议的参数对电感受
态TG1大肠杆菌细胞(自 获得)进行电穿孔。对于每一文库，与每一反应0.5μg连接
产物进行四至六次电穿孔反应。在每一电穿孔反应之后，立即用2mL回收培养基(自
获得)洗涤比色管并在振荡下，在37℃下保持1小时来回收TG1细胞。添加含有100
μg/mL羧苄西林(carbenicillin)(2YTC)的选择性培养基2YT，并使TG1细胞生长至OD600是约
0.5。以约MOI 10添加M13K07辅助噬菌体，并在不振荡情况下，在37℃下感染30分钟，随后在振荡下感染30分钟，且接着添加50μg/mL卡那霉素。振荡下，在30℃下使细胞生长过夜。通过在4℃温度下以8,000rpm离心来收集培养物，并丢弃沉淀物。将PEG/NaCl(自Teknova获得)
以4％PEG的最终浓度添加至上清液中。在冰上使噬菌体沉淀1小时，接着以8,000rpm离心以使其沉淀。移除上清液，并将噬菌体溶解于40mL PBS中。以最大速度离心溶液10分钟以移除任何不溶性物质，接着通过添加PEG/NaCl并在冰上培育，再次自上清液沉淀出噬菌体。再次通过离心使噬菌体沉淀并将其悬浮于8mL含15％甘油的PBS中，接着等分试样并冷冻。
[0845] 噬菌体淘选
[0846] 将噬菌体等分试样(0.5mL)解冻并与0.5mL含10％BSA的PBS混合以阻断。将噬菌体添加至一份200μL M280-抗生蛋白链菌素(M280SA)珠粒中并在室温下，在轻柔旋转下培育1小时。同时，将生物素化r-Tau(r-Tau-生物素，100pmol)添加至另一份200μL M280SA珠粒中并在室温下，在轻柔旋转下培育30分钟，接着用含1％BSA的PBS(PBSA)洗涤珠粒三次，在每次洗涤之间使用磁铁分开珠粒。接着，使用磁铁将噬菌体溶液与阴性M280SA珠粒分离，并将其添加至载有r-Tau的珠粒中。在轻柔旋转下培育1小时后，用含有0.1％BSA和0.05％
20的PBS洗涤珠粒四次，每次洗涤持续5分钟。使用0.1M甘氨酸(pH 2.7)经30分钟
自珠粒洗脱经结合噬菌体；接着用1M Tris(pH 7.5)中和洗脱的噬菌体溶液。使用洗脱的噬菌体感染10mL生长至对数中期(OD600是约0.5)的TG1大肠杆菌，在37℃且不振荡情况下保持
30分钟，随后在振荡下保持30分钟。添加选择性培养基(2YTC)(40mL体积)，并在振荡下，使培养物在37℃下生长1-2小时。此时，培养物的OD600是0.5或更低，并用MOI是约10的M13K07辅助噬菌体感染。感染后，添加50μg/mL卡那霉素并在振荡下，使培养物在30℃下生长过夜。
对于第二轮淘选，用PEG/NaCl使噬菌体沉淀一次并浓缩20倍，接着遵循与上述相同的方案，不过进行更严格的洗涤(6×PBST洗涤2次，历时10分钟)。在第二轮淘选后，将被感染的TG1
细胞涂铺至2YTCG板(自Teknova获得)上以拣选单一集落进行筛选。
[0847] 通过周质表达产生Fab
[0848] 拣选来自第二轮淘选输出的单一集落并将其置放于含有0.5mL 2YTC培养基的96孔深孔板中。密封所述板并振荡下，使其在37℃生长过夜。为诱导周质Fab表达，将50μL过夜培养物转移至每孔含有950μL含自诱导补充物(自EMD Millipore获得)的2YTC培养基的新
96孔深孔板中。密封所述板并使其在37℃生长过夜。以4,000rpm离心所述板10分钟以使细
菌沉淀，并丢弃培养基。将沉淀物悬浮于0.1mL PPB缓冲液(自Teknova获得)并在10℃下以
1,000rpm振荡一小时，之后向各孔中添加0.3mL水。再振荡30分钟后，以最大速度离心所述板10分钟。由此得到的上清液含有可溶性粗Fab供筛选。
[0849] 筛选结合至r-Tau和p-Tau的Fab
[0850] 在4℃下，用每孔25μL的0.5μg/mL r-Tau或p-Tau涂布半量ELISA板(CostarTM)过夜。使用 洗板器，用PBST洗涤所述板三次。接着在室温下，用每孔100μL PBSA阻断
所述板一小时。再用PBST洗涤三次，添加周质表达的Fab(每孔25μL)并培育所述板一小时。
随后，用PBST洗涤所述板三次，并添加每孔25μL含有HRP偶联的兔抗人类κ(自Bethyl 
Laboratories获得)的1:5,000稀释液的PBSA。在室温下培育所述板30分钟，接着用PBST洗
涤三次。通过添加每孔25μL TMB底物(自Thermo Fisher获得)使所述板显色并用2N H2SO4淬灭。在 酶标仪上，在A450下定量信号。针对r-Tau和p-Tau的信号比背景高5倍的孔视
为阳性，并且再排列来自初级培养物的克隆以确定结合(通过重复ELISA)并对可变区测序。
[0851] 筛选具有同功型和物种特异性的Fab
[0852] 基本上如以上所描述进行ELISA，不过使用1μg/mL各重组τ蛋白物种并使用含Fab上清液的1:1稀释液(在含0.1％BSA、0.05％ 的PBS中稀释)进行涂布。ELISA的结果
显示于下表1中，该结果显示Fab结合至食蟹猕猴τ蛋白和小鼠τ蛋白，并且也结合至磷酸化全长人类τ蛋白和人类τ蛋白同功型。
[0853] 表1.具有人类τ蛋白同功型和物种特异性的Fab筛选
[0854]
[0855]
[0856] 抗体产生
[0857] 通过HEK293细胞短暂转染，表达呈小鼠-人类嵌合抗体形式的抗τ抗体。利用蛋白质A亲和色谱法纯化IgG。
[0858] 图3至图7描绘针对人类轻链(免疫球蛋白κ可变区4(IGKV4)或免疫球蛋白κ可变区2(IGKV2))和重链(免疫球蛋白重链可变区3(IGHV3)或免疫球蛋白重链可变区1(IGHV1))序
列比对的抗体克隆1C7、1A1、1A5、1D10和1G7的序列比对。对于比对，CDR定义是以其序列高变性定义。
[0859] 嵌合IgG ELISA
[0860] 用1μg/ml重组τ蛋白、p-Tau或τ蛋白同功型涂布 微量滴定盘。使用 洗板器，用PBST洗涤所述板三次，并在室温下，用每孔200μL PBSA阻断1小时。
在室温下，在各孔中培育各嵌合IgG抗体的连续4倍稀释液1小时。随后，用PBST洗涤所述板三次，并添加每孔60μL含有HRP偶联的山羊抗人类IgG Fc二次抗体的1:1,000稀释液的
PBSA。在室温下培育所述板30分钟，接着用PBST洗涤三次。通过添加每孔60μL TMB底物(自Thermo Fisher获得)使所述板显色并用650nm ELISA停止溶液淬灭。使用 酶标仪
在A650下定量信号并用PRISM软件绘制结合曲线。
[0861] 图8描绘ELISA的结果，其中测试四种嵌合IgG克隆(克隆1A5、1C7、1G7和1D10)与全长人类τ蛋白(τ441(2N4R))、过度磷酸化τ441(p-Tau)以及人类τ蛋白的其它五种剪接同功型(τ352(0N3R)、τ381(1N3R)、τ410(2N3R)、τ383(0N4R)和τ412(1N4R))的结合。如图8中所示，所有克隆均结合至未磷酸化的全长τ蛋白和p-Tau。此外，所有克隆结合至其余剪接同功型0N3R、1N3R、2N3R、0N4R和1N4R。
[0862] 另外，在ELISA分析中测试嵌合IgG克隆1A5、1C7、1G7和1D10与小鼠τ蛋白(SEQ ID NO:6)和食蟹猕猴τ蛋白(SEQ ID NO:7)的交叉物种反应性。全部四个克隆展现的与食蟹猕猴τ蛋白的结合类似于与人类全长τ蛋白的结合。1A5、1G7和1D10克隆也展现与小鼠τ蛋白的结合。也测试所述四个嵌合IgG克隆与C末端截短的人类τ蛋白(Tau(1-421)；SEQ ID NO:4)和N末端截短的人类τ蛋白(Tau(50-441)；SEQ ID NO:5)的结合。发现所有测试克隆均结合至在SEQ ID NO:1的氨基酸残基50-421内的τ蛋白。
[0863] 所选抗体的表位分组
[0864] 使用 RED384仪器，使用 抗生蛋白链菌素生物传感器进行表位分组分析。在动力学缓冲液(自 获得)中将生物素化重组τ蛋白稀释
至2μg/mL浓度并将其捕捉于各个生物传感器上，保持1分钟。接着在动力学缓冲液中保持1分钟以确定基线。将所装载的生物传感器浸入10μg/mL第一嵌合IgG抗体中直至信号饱和，随后将其浸入1μg/mL第二抗体中。第二抗体的结合针对在无第一抗体存在下的总结合归一化。
[0865] 分组分析的结果概述于下表2中，结果显示克隆1A5、1G7和1D10分组在一起，而克隆1C7属于单独组。
[0866] 表2.嵌合IgG克隆的表位分组
[0867]
[0868]
[0869] 所选抗τ抗体的Biacore评估
[0870] 使用BiacoreTMT200仪器，通过表面等离子体共振测定嵌合IgG抗体1C7、1A1、1A5、1D10和1G7对重组τ蛋白的亲和力。BiacoreTM S系列CM5传感器晶片用单克隆小鼠抗人类IgG(Fc)抗体(来自GE Healthcare的人类抗体捕捉试剂盒)固定。将1μg/mL抗体捕捉于各流槽
上，保持1分钟，并以30μL/min流速注入重组τ蛋白的连续3倍稀释液。通过3分钟缔合和10分钟解离分析各样品。在每次注射后，使用3M MgCl2使晶片再生。通过用以类似密度捕捉不相关IgG的流槽减去RU来校正结合反应。使用同时拟合kon和koff的1:1朗谬尔模型(Languir 
model)进行动力学分析。
[0871] 如图9A至9E中所示，克隆1C7、1A1、1A5、1D10和1G7均展现较快缔合速率和极慢的解离速率，与对重组τ蛋白的亲和力较强相符。
[0872] 下表3显示出克隆1C7、1A5、1G7、1A1和1D10的结合特性，包括如通过Biacore所测量的其对重组人类τ蛋白的亚纳摩尔浓度亲和力、其对食蟹猕猴和小鼠τ蛋白的结合特异性以及各抗体所识别的一个或多个表位。
[0873] 表3.抗体克隆的结合特性
[0874]
[0875] 使用肽微阵列进行的表位定位
[0876] 将全长人类τ蛋白(由微管相关蛋白τ蛋白同功型2基因(MAPT)编码，氨基酸序列NCBI参考序列编号NP_005901.2，SEQ ID NO:1，变体名称“2N4R”)分成15个氨基酸的肽，偏移5个氨基酸(10个氨基酸重叠)。合成肽并一式三份将其共价连接至二氧化硅载片(自JPT 
Technologies,Berlin,Germany获得)且斑点大小是0.5mm。在补充有0.05％ 20的
含3％牛血清白蛋白的Tris缓冲生理盐水(10mM Tris，pH 7.5，150mM NaCl)(3％BSA-TBST)中将嵌合IgG抗体稀释至5μg/mL浓度。如PepStarTM使用者手册(JPT Technologies)中所描述，在室温下使稀释的抗体结合至印在载片上的肽，保持2小时。在充分洗涤(用TBST洗涤5次，每次5分钟)后，将载片与二次抗体山羊抗人类IgG(Alexa 568偶联物，1μg/mL于
3％BSA-TBST中)一起在室温下培育1小时。在充分洗涤(用TBST洗涤5次，每次5分钟，接着用超纯水洗涤5次，每次5分钟)后，使载片干燥过夜并使用Opera PhenixTM系统在568nm通道中获取图像。使用自JPT Technologies获得的Galviewer软件以及ImageJ软件，并使用对照人类IgG作为标志，比对图像与肽阵列定义文件。
[0877] 表位定位结果显示于下图10和表12中。图10A描绘克隆1C7结合至对应于SEQ ID NO:1的残基111-125的肽，表明残基111-125足以使抗体结合至τ蛋白。图10B显示1A1结合至对应于SEQ ID NO:1的残基251-265和残基256-270的肽，且最强结合出现在残基256-270
内，表明残基251-265或残基256-270足以使抗体结合至τ蛋白。图10B也显示1A1结合至对应于SEQ ID NO:1的残基346-360的肽，表明残基346-360足以使抗体结合至τ蛋白。克隆1A5、
1G7和1D10显示于克隆1A1一致的肽结合谱。
[0878] 表位确证和磷酸化研究
[0879] 合成对应于微阵列上的初始结合位点的肽并且其包括关于磷酸丝氨酸表位的所有列举。合成具有生物素化N末端和C末端酰胺的肽。纯化肽并通过质谱法确证。接着将自每孔250ng各肽半数连续稀释的肽结合至涂有抗生蛋白链菌素的板。测试在5％BSA TBST中1μg/mL抗体的结合，随后洗涤并用山羊抗人类HRP进行检测(如以上在“嵌合IgG ELISA”部分中所描述)。
[0880] 图11显示有关克隆1A1、1A5、1D10和1G7的表位确证和磷酸化研究的结果。对于表位251-270，测量抗体与未磷酸化的PDLKNVKSKIGSTENLKHQP(SEQ ID NO:36)肽、在Ser258或Ser262处磷酸化的PDLKNVKSKIGSTENLKHQP(SEQ ID NO:36)肽，或在Ser258和Ser262处磷酸
化的PDLKNVKSKIGSTENLKHQP(SEQ ID NO:36)肽的结合。参看图11，上图。1A1、1A5、1D10和
1G7抗体均展现出于未磷酸化肽的较强结合，证实这些抗体识别251-270表位。另外，1A1、
1A5、1D10和1G7抗体均展现与至少一种单磷酸化肽的较强结合。1A1也展现与在Ser258和
Ser262处磷酸化的肽的较强结合。
[0881] 对于表位346-360，测量抗体与未磷酸化的FKDRVQSKIGSLDNI(SEQ ID NO:38)肽、在Ser352或Ser356处磷酸化的FKDRVQSKIGSLDNI(SEQ ID NO:38)肽，或在Ser352和Ser356
处磷酸化的FKDRVQSKIGSLDNI(SEQ ID NO:38)肽的结合。参看图11，下图。1A1、1A5、1D10和
1G7抗体均展现出于未磷酸化肽的较强结合，证实这些抗体识别346-360表位。另外，1A1抗体展现于各单磷酸化肽的较强结合，而1G7抗体展现于一种单磷酸化肽(pSer352)的较强结
合。
[0882] 实施例2.抗τ抗体的功能表征
[0883] 本实施例说明如本文所描述的抗τ抗体能够结合至对照和阿尔茨海默氏病脑溶解产物样品中的可溶性τ蛋白，并且所述抗体通过人脑溶解产物抑制τ蛋白播种。
[0884] 人脑溶解产物结合
[0885] 对照和阿尔茨海默氏病脑样品是自Banner  获得。将样品切片并在2mL管和组织破碎仪(在25/s下3分钟×2)中，使用3mm珠粒将一个约30mg的切片于五体积(w/v)冷
PBS(含蛋白酶和磷酸酶抑制剂)中均质化。接着，在4℃下以3,000×g离心所得溶解产物10
分钟并收集上清液作为可溶性部分。根据制造商的方案进行PierceTM BCA蛋白质分析和人τ蛋白ELISA(自Life Technologies获得)以分别测定总蛋白质和总τ蛋白含量。
[0886] 如以上实施例1中所描述，使用嵌合IgG抗体1C7和1A1进行ELISA，不过在4℃下用50μL含有100ng/mL总τ蛋白的可溶性脑溶解产物于PBS(含蛋白酶和磷酸酶抑制剂)中的稀
释液涂布过夜。如下表4中所示，抗体克隆1C7和1A1能够在测试的两种抗体浓度(0.5和5nM)下结合自对照和阿尔茨海默氏病脑组织获得的溶解产物样品中的可溶性τ蛋白。使用抗RSV抗体作为阴性对照。
[0887] 表4.结合至对照和阿尔茨海默氏病样品中的可溶性τ蛋白
[0888]
[0889] τ蛋白播种分析
[0890] 如下所描述，分析嵌合IgG抗体1A1和1C7通过人脑溶解产物抑制τ蛋白播种的能力。有关实验设计的简要综述显示于图12A中。
[0891] 将FRET传感器细胞(Tau RD P301S FRET生物传感器，目录号：CRL-3275TM，自获得)以于每孔100μL补充有10％HI-FBS(目录号：10082-147)、1×MEM非必需氨基
酸溶液(目录号：11-140-050)、1mM丙酮酸钠(目录号：11-360-070)和1×青霉素-链霉素-谷氨酰胺(目录号：10-378-016)的DMEM(高葡萄糖DMEM(目录号：11-965-092)(全部自Thermo Fisher ScientificTM获得)中每孔30,000个的密度涂铺于涂有聚D-赖氨酸(PDL)的96孔板(
BioCoatTM聚D-赖氨酸多孔板，目录号：356640，自Thermo Fisher ScientificTM获
得)上，并在37℃和5％CO2浓度下培养。涂铺细胞之后4-5小时，使用 2000
共转染含有人类τ蛋白的蛋白质种子和抗τ抗体。在每个孔中，在25μl Opti-MEMTM(目录号：
31-985-088，自Thermo Fisher ScientificTM获得)中稀释含1μg总蛋白质(约0.2ngτ蛋白)的来自阿尔茨海默氏病(AD)患者脑组织或年龄相配的健康对照脑组织(自Banner
获得并使用与以上关于ELISA所描述相同的方案制备)的可溶于PBS的部分，以及抗τ抗体或对照抗RSV抗体(2μg)，并在37℃下培育20分钟。接着，将含0.5μl 2000(目
录号：11-668-019，自Thermo Fisher ScientificTM获得)的25μL Opti-MEMTM添加至蛋白质-抗体混合物中并再在室温下培育10分钟。随后，用转染混合物(每孔50μL含蛋白质种子(1μg总蛋白质)的Opti-MEMTM、抗体(2μg)和 2000(0.5μl))完全更换FRET
传感器细胞的DMEM，并将FRET传感器细胞在37℃和5％CO2浓度下保持24小时。接着，在室温下，将在存在或不存在抗体下被蛋白质种子转染的FRET传感器细胞固定于含4％PFA(目录
号：15714-S，Electron Microscopy Sciences)和4％蔗糖(目录号：S5-3，自Thermo Fisher ScientificTM获得)的1×PBS(目录号：P0191,Teknova)中，保持15分钟，随后用1×PBS洗涤4次。
[0892] 对于FRET定量，使用Opera Phenix HighTM内含物筛选系统(Content Screening System)(自 获得)获取固定的FRET传感器细胞(典型地为每孔约10,000个细
胞)的图像，并使用 软件(自 获得)对图像定量。为获取FRET图
像，使用内置式CFP/YFP FRET获取方案(在425nm下激发，在435-480nm下供体发射，且在
500-550nm下受体发射)和处于非共聚焦模式的水浸20×物镜(NA＝1.0)。FRET强度定义为
每个像素中受体荧光度与供体荧光度的比率(FRET＝受体/供体)。接着计算每个细胞的平
均FRET强度并生成在各条件(例如在无抗体下经AD患者脑组织溶解产物转染的细胞)下显
示平均FRET强度分布(每个细胞)的直方图。确定FRET阳性细胞的阈值设定为在无抗体下被
健康对照脑组织溶解产物转染的FRET传感器细胞的最高平均FRET值周围(典型的平均FRET
强度大于2.5或2.6)。对FRET阳性细胞的FRET信号积分(iFRET：积分FRET)并通过每孔所有
细胞的积分FRET强度归一化。
[0893] 如图12B中所示，预培育抗τ抗体克隆1A1和1C7与脑溶解产物使τ蛋白播种和聚集受到抑制。
[0894] 药物动力学研究
[0895] 对野生型6-8周龄雄性C57Bl6小鼠(n＝3只/组)静脉内给与10mg/kg抗体(1A1或1C7)。在给药后30分钟、1天、4天和7天经颌下抽血获取活体血液。将血液收集于EDTA血浆管中并以14,000rpm离心5分钟。接着分离血浆以进行后续药物动力学分析。
[0896] 使用普通人类IgG分析(MSD人类IgG试剂盒#K150JLD-4)，遵循制造商的方案定量抗体浓度。简单点说，用MSD阻断剂A阻断所述板30分钟并使用Hamilton Nimbus液体处理
器，一式两份将被稀释的血浆样品(1:2500)添加至被阻断的板中。另外，分析同一板上的给药溶液以确定正确剂量。使用四参数逻辑斯蒂回归(four-parameter  logistic 
regression)拟合标准曲线0.78–200ng/mL IgG。如图13和下表5中所示，1A1和1C7在预期的IgG范围内展现体内药物动力学特性且不显示任何脱靶清除作用。
[0897] 表5
[0898]
[0899]
[0900] 另外，也遵循与上述相同的实验方案，不过在1小时、1天、4天和7天时取得活体血液来测量另外的抗τ克隆的血浆药物动力学特性(表6以及图26A和26B)。
[0901] 表6
[0902]
[0903] 实施例3.嵌合IgG抗体1C7的精确表位定位
[0904] 本实施例描述抗体1C7的精确表位定位，由此揭露残基L114和E115为表位中的关键残基。
[0905] 精确表位定位
[0906] 将全长野生型τ蛋白和具有单丙氨酸突变的变体以基因方式与C末端截短的噬菌体衣壳蛋白P3融合并展示于噬菌体粒子上。为进行噬菌体ELISA，在4℃下将60μL含1μg/mL抗τ抗体的PBS涂布于maxi-sorp 96孔板上过夜。次日，用PBST洗涤所述板并在室温下用
ELISA缓冲液(含0.5％BSA的PBS)阻断1小时。在ELISA缓冲液中稀释新鲜制备的噬菌体粒子
并在室温下将其于板上培育1小时。洗涤所述板，接着添加HRP偶联的抗M13单克隆偶联物
(GE 27942101)，在室温下再保持一小时。充分洗涤后，用每孔60μL TMB单组分底物使板显色，并且当颜色完全显现(典型地1-5分钟)时，用每孔60μL的650nm停止溶液停止显色。以结合信号与来自全长τ蛋白的信号的比率计算与各截短的τ蛋白形式的结合的百分比。
[0907] 精确表位定位的结果显示于图14A和14B中。全长野生型τ蛋白(SEQ ID NO:1)在L114和E115处的丙氨酸突变消除了抗体1C7与各别突变τ蛋白的结合(图14A中的框图)。如
由myc标签结合所指示，L114A和E115A突变不影响蛋白质表达。
[0908] 实施例4.嵌合IgG克隆1C7和1A1于小鼠中的体内剂量研究本实施例描述在小鼠中的抗体剂量研究。
[0909] 小鼠免疫接种
[0910] 使用来自PS19的过度表达人类τ蛋白的小鼠评价嵌合IgG克隆1C7和1A1的靶接合。此转基因模型带有微管相关蛋白τ蛋白的T34同功型，所述同功型具有一个N末端插入序列
和全部由小鼠朊蛋白启动子驱动的四个编码人P301S突变的微管结合重复序列(1N4R)。自
Jackson Laboratory获得雌性或雄性半合小鼠(2-4个月大)。对其静脉内(35mg/kg)或腹膜
内(50mg/kg)注射对照IgG、嵌合IgG克隆1C7或嵌合IgG克隆1A1。经颌下静脉收集活体血液。
注射后2或7天，用Avertin使小鼠深度麻醉并经心脏内穿刺收集血液，并通过以13,000RPM
离心10分钟进行加工以分离出血浆。此外，经大池收集脑脊髓液(CSF)并目测检查潜在的血液污染情况。在穿心脏灌注冰冷的PBS后，取出脑组织并急速冷冻。
[0911] 制备脑(例如海马体)成分
[0912] 遵循先前公开的方法并略加修改，制备来自脑组织的可溶性蛋白质提取物。简单点说，对脑组织(或再分割的海马体)称重并使用Qiagen组织破碎仪，在9体积高盐缓冲液
(补充有蛋白酶和磷酸酶抑制剂的再组装(RAB)缓冲液)中均质化。均质化的溶解产物以
100,000×g离心30分钟并保存上清液作为“可溶性部分”。再在RIPA缓冲液中对沉淀物均质化以分析清洁剂可溶部分。使用BCA分析(Pierce)测量总蛋白质含量。
[0913] 结合至τ蛋白的抗体的ELISA测量
[0914] 总τ蛋白
[0915] 遵照制造商的方案，使用可商购的用于人类τ蛋白的MSD试剂盒，或使用小鼠单克隆抗体HT7捕捉τ蛋白并以生物素化BT2抗体作为检测抗体的内部开发的ELISA测量来自
PS19小鼠脑、血浆和CSF的总人类τ蛋白。简单点说，将2μg/mL PBS稀释的HT7涂布于384孔ELISA板上，在4℃下保持过夜。次日，用TBS-T洗涤板并将2μg/mL脑溶解产物、被稀释的血浆或被稀释的CSF添加至板中并在4℃下培育板过夜。次日，洗涤板并添加0.5μg/mL检测抗体生物素化的BT2，保持15分钟。使用1:10000-1:20000的抗生蛋白链菌素HRP进行检测。
[0916] 被结合的τ蛋白
[0917] 使用改良的以上方案测量结合至治疗性嵌合IgG克隆1C7和1A1的τ蛋白。简单点说，如上文所述涂板并添加样品。培育样品后，洗涤板并以1:5000添加抗人类HRP以检测抗体结合的τ蛋白。由结合至脑溶解产物、血浆或CSF中的τ蛋白的人类IgG的存在将可能发现阳性信号。
[0918] 游离τ蛋白
[0919] 使用改良的上述总τ蛋白分析测量游离τ蛋白。简单点说，如上文所述涂板并添加样品。对于测量游离τ蛋白，产生所述治疗性抗体的生物素化形式并用作检测抗体。由于生物素化抗体的结合位点与治疗性抗体相同，故仅游离τ蛋白会产生阳性信号，因为结合至治疗性抗体的τ蛋白结合位点已被堵塞。使用抗生蛋白链菌素HRP作为二次抗体。生成每一抗体对的标准曲线以内插τ蛋白值。所有值均以nM为单位报导并将脑τ蛋白针对总脑蛋白质归一化。
[0920] 图15A-15D描绘有关嵌合IgG克隆1C7和1A1在PS19τ转基因小鼠中的7天靶接合研究的结果。图15A略述血浆研究。在注射后，在基线时以及给药后2天(2d)、4天(4d)和7天
(7d)收集血浆样品。图15B示出，相较于阴性对照或基准抗τ克隆(Ab306或Ab017)，嵌合IgG克隆1A1和1C7均在血浆中具有预期的PK。图15C示出，血浆总τ蛋白含量在给药后2天增加并在给药后至少7天仍保持较高含量。图15D示出，被结合的τ蛋白的含量在给药后也增加并且此效应在1C7克隆中仍持续。
[0921] 图16A-16G描绘有关嵌合IgG克隆1C7在PS19τ转基因小鼠中的2天靶接合研究的结果。图16A略述血浆和脑研究。在基线时收集血浆样品且在给药后2天(2d)收集末梢CSF。图
16B-16D示出，相较于阴性对照或基准抗τ抗体Ab017，嵌合IgG克隆1C7在血浆和脑中具有预期的PK。图16E和16F示出，在给药后2天，嵌合IgG克隆1C7和基准抗τ抗体Ab017使血浆总τ蛋白含量(图16E)和经结合τ蛋白含量(图16F)显著增加。图16G示出，如在给药后2天，观察到CSF中经结合τ蛋白增加所指示，嵌合IgG克隆1C7也结合至CNS中的τ蛋白。
[0922] AD患者脑脊髓液(CSF)免疫沉淀
[0923] 患者CSF是购自PrecisionMed。在24℃下，在2％BSA中阻断蛋白质A珠粒(SureBeads；Bio-Rad)1小时，接着在TBST中洗涤三次。在与抗体一起培育之前，将
20(0.02％)和不含EDTA的完全蛋白酶抑制剂(Roche)添加至CSF中。将CSF(50μL)与2μg抗体一起在4℃下培育1小时。接着，将CSF/抗体混合物添加至100μL被阻断/洗涤的珠粒中并在4℃下培育18小时。收集未结合的部分并用1mL洗涤缓冲液(50mM Tris pH7、100mM NaCl、
0.5％TritonX-100)洗涤三次，随后用1mL PBS洗涤一次。接着，通过与45μL洗脱缓冲液
(Pierce)一起培育10分钟来洗脱被结合部分并通过添加5μL Tris缓冲液(pH 8.8)进行中
和。
[0924] 如图17中所示，利用ELISA测量未结合(▲)和被结合(●)τ蛋白并且每个点表示唯一患者(n＝3)且线指示这些值的平均值。虚线表示ELISA分析的定量下限(LLOQ)。嵌合IgG
克隆1C7和基准抗τ抗体Ab017能够自阿尔茨海默氏病(AD)患者CSF下拉τ蛋白，而抗τ1A1则不能，表明抗体1A1的表位不存在或不可接近CSFτ蛋白。
[0925] 实施例5.鼠类抗τ抗体1C7的人源化鼠类抗体和亲和力成熟抗体发现和筛选
[0926] 本实施例说明鼠类抗τ抗体1C7的人源化和亲和力成熟抗体的设计、产生和表征。
[0927] 材料和方法
[0928] 残基编号是根据Kabat(Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,
MD(1991))。
[0929] 高变区直接移植至受体人类共同构架上
[0930] 评估在鼠类抗τ抗体1C7(mu1C7)人源化期间构建的呈IgG形式的变体。将来自mu1C7的VL和VH区与人类VLκIV(VLKIV)和人类VH亚群III(VHIII)共同序列比对。来自mu1C7的高变区(HVR)被工程改造至VLKIV和VHIII受体构架中以产生CDR移植变体。将来自mu1C7 VL区的位置24-34(L1)、50-56(L2)和89-97(L3)移植至VLKIV中。将来自mu1C7 VH区的位置26-35(H1)、50-65(H2)和93-102(H3)移植至VHIII中(图3)。HVR定义是根据其序列高变性(Wu和
Kabat,J.Exp.Med.132:211-250,1970)、其结构位置(Chothia和Lesk,J.Mol.Biol.196:
901-917,1987)和其参与抗原-抗体接触(MacCallum等人,J.Mol.Biol.262:732-745,1996)
来定义。为了评价可能很重要的构架Vernier位置，使选定的Vernier位置回复突变成鼠类
序列。Vernier位置包括VH中的S49和S75。合成四种不同形式的VH序列(来自Integrated 
DNA Technologies(IDT)的gblocks)并将其克隆至哺乳动物表达载体中。产生四种不同的
人源化移植变体(v1、v2、v3和v4)并利用表面等离子体共振(SPR)分析进行评价。
[0931] 亲和力成熟
[0932] 本研究中所用的噬菌粒是由处于单个Lac启动子控制下的2个开放阅读框组成的单价Fab-g3展示载体。第一个开放阅读框由OmpA信号序列与受体轻链的VL和CL结构域的融
合物而组成，且第二个开放阅读框由PelB信号序列与受体重链的VH和CH1结构域的融合物，后接C末端截短的噬菌体衣壳蛋白P3组成。产生CDR移植变体(hu1C7.v2)作为Fab展示于噬
菌体上。
[0933] 为了提高亲和力，产生总计十三个在高变区中含有变化的噬菌体文库(参见表7)。使用Kunkel诱变技术在选定的随机区域引入序列多样性。对于NNK随机化文库，使用编码
NNK的寡核苷酸，一次一个使高变区中各位置完全随机变为所有可能的20个氨基酸。汇集位于同一高变区中的位置的寡聚物并对于每一CDR环，产生一个文库。对于软性随机化文库，通过使用具有含70％在野生型序列中所见的碱基和10％在各位置处的其它三个碱基中的
每一个的混合物的寡核苷酸，以50％突变率保持高变区中的位置。由此允许使靶区域中的
多个残基同时随机突变。
[0934] 表7
[0935]文库 随机突变区域
1 L1.NNK
2 L2.NNK
3 L3.NNK
4 H1.NNK
5 H2.NNK
6 H3.NNK
7 L1.软性
8 L2.软性
9 L3.软性
10 H1.软性
11 H2.软性
12 H3.软性
13 L3.soft_H3.软性
[0936] 产生噬菌体文库
[0937] 在37℃下，使设计用于将多样性引入各高变区中的寡核苷酸在含660ng寡核苷酸、50mM Tris pH 7.5、10mM MgCl2、1mM ATP、20mM DTT和5U多核苷酸激酶的20μL反应物中独立地磷酸化1小时。将2μL磷酸化寡核苷酸反应物添加至含500ng Kunkel模板的50mM Tris pH 7.5、10mM MgCl2中，最终体积是25μL。混合物在90℃下退火1分钟，在50℃下退火3分钟，接着在冰上冷却。接着，在室温下，通过添加0.5μL 10mM ATP、0.5μL 10mM dNTP(dATP、dCTP、dGTP和dTTP各10mM)、1μL 100mM DTT、1μL 10X TM缓冲液(0.5M Tris pH 7.5、0.1M MgCl2)、80U T4连接酶和4U T7聚合酶填充退火的模板，保持2小时，总体积为30μL。这些被填充和连接的产物接着分别转化至XL1-blue细胞中。在37℃下，使所述文库在10mL SOC培
养基中复原1小时。添加羧苄西林(50μg/mL)和M13/KO7辅助噬菌体(MOI 10)。在37℃下再培育培养物30分钟，将其转移至500mL含50μg/mL羧苄西林和50μg/mL卡那霉素的2YT中并在30℃下生长过夜。
[0938] 噬菌体选择
[0939] 使用磺基-NHS-LC-生物素(Thermo Scientific)，通过游离胺使重组τ蛋白(r-Tau)生物素化。对于生物素化反应，在PBS中使用3倍摩尔过量的生物素试剂。反应之后在
PBS中进行充分透析。
[0940] 自细胞培养物上清液收集噬菌体并将其悬浮于含1％BSA的PBS中。将噬菌体文库与生物素化τ蛋白一起在室温下培育，接着将结合至生物素-r-Tau的噬菌体捕捉于
Dynabeads M-280抗生蛋白链菌素上，保持5分钟。用含0.05％Tween 20(PBST)的PBS充分洗涤珠粒并通过将所述孔与100mM甘氨酸(pH 2.7)一起培育15分钟来洗脱被结合的噬菌体。
用1.5M Tris pH 8.8中和被洗脱的噬菌体，使用TG1细胞和M13/KO7辅助噬菌体扩增，并使
其在37℃下于2YT、50μg/mL羧苄西林和50μg/mL卡那霉素中生长过夜。将自抗原固定珠粒洗脱的噬菌体的效价与自不含抗原的珠粒回收的噬菌体的效价相比较来评估富集情况。通过
降低结合期间生物素-r-Tau的浓度(自10nM至0.1nM)并增加与1μM未标记r-Tau溶液的竞争
时间(在室温下自0至2小时)来增加选择严格度。
[0941] 变体的SPR评估
[0942] 通过293短暂转染，表达呈IgG形式的鼠类抗τ抗体1C7的人源化变体(hu1C7变体)。利用蛋白质A亲和色谱法纯化IgG。使用BiacoreTM T200仪器，通过表面等离子体共振测定各hu1C7 IgG变体对r-Tau的亲和力。BiacoreTM S系列CM5传感器晶片用单克隆小鼠抗人类IgG(Fc)抗体(来自GE Healthcare的人类抗体捕捉试剂盒)固定。以30μL/min的流速注入各
hu1C7变体的连续3倍稀释液。通过3分钟缔合和10分钟解离分析各样品。在每次注射后，使用3M MgCl2使晶片再生。通过用以类似密度捕捉不相关IgG的流槽减去RU来校正结合反应。
使用同时拟合kon和koff的1:1朗谬尔模型进行动力学分析。
[0943] 结果与讨论
[0944] 1C7的人源化
[0945] 用于使鼠类抗τ抗体1C7人源化的人类受体构架是基于人类VLκIV共同(VLKIV)序列和人类VHIII共同(VHIII)序列。将鼠类抗τ抗体1C7的VL和VH区与人类VLKIV和VHIII结构域相比对；鉴别高变区并将其移植至人类受体构架中以产生hu1C7变体(图3)。嵌合鼠类抗τ抗体1C7以0.8nM的单价亲和力结合至r-Tau。人源化1C7变体显示出与r-Tau的弱两倍的结合且
亲和力是约1.6nM(表8)。
[0946] 表8.人源化1C7克隆的结合动力学的概述
[0947]  ka(1/Ms) kd(1/s) KD(nM)
1C7.IgG 8.6E+05 7.3E-04 0.8
hu1C7.v1 7.2E+05 1.3E-03 1.8
hu1C7.v2(S49A) 7.6E+05 1.1E-03 1.5
hu1C7.v3(S75A) 7.3E+05 1.2E-03 1.7
hu1C7.v4(S49A,S75A) 6.6E+05 1.1E-03 1.8
[0948] 亲和力成熟
[0949] 研究亲和力成熟文库旨在发现使用在重链中含Vernier位置(S49A)的hu1C7.v2构架的进一步改良。使用Kunkle诱变技术使各高变区随机突变(总计13个文库，有6个NNK文库和7个软性随机突变文库；表7)。在溶液中利用生物素化r-Tau淘选亲和力成熟文库4轮。通过降低生物素-r-Tau的浓度(自10至0.1nM)并增加与1μM未标记r-Tau的竞争时间(在室温
下自0至2小时)，逐渐增加选择严格度。观察L1、L3、H1和H3文库的显著富集情况。
[0950] 拣选来自最后一轮的克隆进行DNA序列分析。鉴别各CDR中的序列变化(表9A)。通过293短暂转染产生呈IgG形式的所选克隆和另外的组合变体。使用BiacoreTM评价结合亲和力。观察到亲和力改善的变体的解离速率改善五倍至十倍。所有变体均显示与r-Tau的两位数至三位数皮摩尔浓度亲和力(表10A)。
[0951] 表9A.来自亲和力成熟变体的CDR-H1、CDR-H3、CDR-L1和CDR-L3的序列比对
[0952]
[0953] 表10A.基于hu1C7.v2的亲和力成熟克隆的结合动力学的概述
[0954]  ka(1/Ms) kd(1/s) KD(pM)
hu1C7.v2 7.6E+05 1.1E-03 1500
具有H1_1的克隆 2.07E+06 2.52E-04 122
具有H1_2的克隆 1.56E+06 1.44E-04 92
具有H1_4的克隆 1.32E+06 2.30E-04 174
具有H1_5的克隆 1.34E+06 2.44E-04 183
具有H3_1的克隆 1.97E+06 4.78E-04 242
具有L1_1的克隆 1.54E+06 2.97E-04 192
具有L1_3的克隆 2.15E+06 2.86E-04 133
具有L1_3和H1_4的克隆 2.28E+06 8.72E-05 38
具有L1_3和H1_1的克隆 1.64E+06 1.13E-04 69
具有L1_3和H3_1的克隆 2.36E+06 1.45E-04 62
[0955] 通过使表9A中选定的CDR-H1、CDR-L1和CDR-L3序列以及hu1C7.v2的CDR-H2序列(SEQ ID NO:23)中某些氨基酸突变来进行另一轮亲和力成熟。鉴别各CDR中的序列变化(表
9B)。使用BiacoreTM评价结合亲和力(表10B)。
[0956] 表9B.来自亲和力成熟变体的CDR-H1、CDR-H2、CDR-L1和CDR-L3的序列比对
[0957]
[0958]
[0959] 表10B.基于hu1C7.v2的其它亲和力成熟克隆的结合动力学的概述
[0960]
[0961]
[0962] 实施例6.抗τ杂交瘤抗体的发现和筛选
[0963] 本实施例说明特异性结合至多种τ蛋白剪接同功型且特异性结合至磷酸化的人类τ蛋白和未磷酸化的人类τ蛋白的抗τ杂交瘤抗体的设计、产生和表征。所述抗体也在人类τ蛋白与食蟹猕猴τ蛋白之间展现交叉物种反应性。
[0964] 有关杂交瘤抗τ抗体发现和筛选程序的示意性表示显示于图18中。如下文所详述，用重组磷酸化τ蛋白(p-Tau)对小鼠进行免疫接种，并收集脾细胞和淋巴细胞，且处理B细胞并用于产生杂交瘤文库。随后，在初次筛选中选出结合至r-Tau的抗τ抗体。来自初次筛选的阳性匹配进入二次筛选，在所述筛选中，通过ELISA筛选结合至r-Tau、p-Tau和cyno-Tau的抗体。通过相同方法对五种不同τ蛋白同功型(τ352(0N3R)、τ383(0N4R)、τ381(1N3R)、τ410(2N3R)和τ441(2N4R))、N末端截短的τ蛋白(τ(50-441))和C末端截短的τ蛋白(τ(1-421))上的匹配进行进一步表征。测试抗体克隆的结合亲和力和结合特征并对高亲和力抗体进行表位定位。
[0965] 抗原产生
[0966] 重组τ蛋白
[0967] 在大肠杆菌BL21(DE3)细胞中产生全长(441个氨基酸长度)重组τ蛋白(r-Tau)。最初产生的r-Tau具有His6-Smt3标签，所述标签用于亲和力纯化，随后被裂解并移除。
[0968] 体外r-Tau磷酸化
[0969] 通过在室温下，将重组τ蛋白(r-Tau)与1:1量的PKA和GSK3β于50mM MES(pH 6.8)、100mM NaCl、0.5mM EGTA、5mM MgCl2和1mM ATP中培育24小时，在体外使r-Tau磷酸化。接着纯化磷酸化的r-Tau和p-Tau以移除激酶和内毒素。
[0970] 小鼠免疫接种
[0971] 用重组过度磷酸化τ蛋白(p-Tau)对基因敲除小鼠进行免疫接种。免疫接种是经跗关节或足垫，通过每周注射含5-10μg抗原的Ribi或弗氏佐剂，直至超过105的稀释度时针对r-Tau或p-Tau的血清抗体在ELISA中反应来执行，典型地持续约六至八周。在无佐剂存在
下，经由腹膜内注射对小鼠最后一次加强免疫且在加强免疫后3天将其处死。收集脾以及腘和腹股沟淋巴结，通过使其通过细胞筛网制成单细胞悬浮液，且接着使用脾细胞和淋巴细
胞产生杂交瘤。
[0972] 杂交瘤文库的产生
[0973] 处理自淋巴结收集的B细胞并计数。将其与P3X63Ag8细胞1:1混合并使用BTX Hybrimune电融合装置使其融合。将融合的杂交瘤涂铺于每孔含100μL次黄嘌呤-氨基喋呤-胸苷(HAT)选择培养基的50-96孔板中。一周后，向板中馈入次黄嘌呤胸苷(HT)。两周后，收集每孔50μL上清液并针对抗原特异性结合进行筛选。
[0974] 筛选结合至r-Tau、p-Tau和cyno-Tau的抗体
[0975] 通过在4℃下用含1μg/mL r-Tau的PBS涂布96孔ELISA Nunc板过夜来进行初次筛选。使用Biotek洗板器，用PBST洗涤所述板三次。将每孔50μL杂交瘤上清液添加至所述板中并在室温下培育1小时。用PBST洗涤板三次。将每孔50μL以1:2000稀释的二次检测抗体山羊X m HRP(Southern Biotech)添加至所述板中并在室温下培育1小时。在一小时结束时，用
PBST洗涤板三次。用每孔50μL TMB底物(Thermo Fisher)使板显色并用每孔50μL的1N硫酸淬灭。在 酶标仪上，在A450下定量信号。OD值为关于r-Tau的背景值的三倍的孔视
为阳性且进行二次筛选。
[0976] 在初次筛选中呈阳性的孔进入二次筛选，在所述筛选中，通过ELISA，使用上述有关r-Tau、p-Tau和cyno-Tau的方案，针对结合和交叉反应性进行筛选。利用相同方法对五种不同τ蛋白同功型进行进一步表征。
[0977] 图19A-19C描绘ELISA的结果，其中克隆17G2.A1、19F7.C9和24D2.B2均结合至重组τ441(r-Tau)、过度磷酸化的τ441(p-Tau)、食蟹猕猴τ441(cyno-Tau)、人类τ蛋白的剪接同功型(τ352(0N3R)、τ383(0N4R)、τ381(1N3R)、τ410(2N3R)和τ441(2N4R))、N末端截短的τ蛋白(τ(50-441))和C末端截短的τ蛋白(τ(1-421))。克隆17G2.A1、19F7.C9和24D2.B2也均结合于τ蛋白的中间区域(τ(50-421)；SEQ ID NO:1的残基50-421)。
[0978] 所选抗τ抗体的Biacore评估
[0979] 使用BiacoreTM T200仪器，通过表面等离子体共振测定各杂交瘤抗体对r-Tau的亲和力。BiacoreTM S系列CM5传感器晶片用多克隆兔抗小鼠IgG(Fc)抗体(来自GE Healthcare的小鼠抗体捕捉试剂盒)固定。将1μg/mL抗体捕捉于各流槽上，保持1分钟，并以30μL/min流速注入r-Tau的连续3倍稀释液。通过3分钟缔合和10分钟解离分析各样品。每次注射后，使用10mM盐酸甘氨酸(pH 1.7)使晶片再生。通过用以类似密度捕捉不相关IgG的流槽减去RU
来校正结合反应。使用同时拟合kon和koff的1:1朗谬尔模型进行动力学分析。
[0980] 如图20A至20C中所示，克隆17G2.A1、19F7.C9和24D2.B2均展现较快缔合速率和较慢的解离速率，与对r-Tau的结合亲和力较强相符。下表11进一步显示克隆17G2.A1、
TM
19F7.C9和24D2.B2的结合动力学，包括如通过Biacore 所测量的其一位数的纳摩尔浓度结
合亲和力，此与对r-Tau的亲和力较强相符。
[0981] 表11.克隆17G2.A1、19F7.C9和24D2.B2的结合动力学
[0982]配体 ka(1/Ms) kd(1/s) KD(M)
17G2.A1 1.55E+05 3.83E-04 2.48E-09
19F7.C9 8.25E+05 2.40E-03 2.91E-09
24D2.B2 6.15E+04 1.44E-04 2.34E-09
[0983] 使用噬菌体展示进行表位定位
[0984] 将全长τ蛋白和截短的τ蛋白以基因方式融合至C末端截短的噬菌体衣壳蛋白P3并将其展示于噬菌体粒子上。为进行噬菌体ELISA，在4℃下将60μL含1μg/mL抗τ抗体的PBS涂布于maxi-sorp 96孔板上过夜。次日，用PBST洗涤所述板并在室温下用ELISA缓冲液(含
0.5％BSA的PBS)阻断1小时。在ELISA缓冲液中稀释新鲜制备的噬菌体粒子，并在室温下将
其于板上培育1小时。洗涤所述板，接着添加HRP偶联的抗M13单克隆偶联物(GE 27942101)，在室温下再保持一小时。充分洗涤后，用每孔60μL TMB单组分底物使板显色，并且当颜色完全显现(典型地1-5分钟)时，用每孔60μL的650nm停止溶液停止显色。以结合信号与来自全长τ蛋白的信号的比率计算与各截短的τ蛋白的结合的百分比。
[0985] 使用肽微阵列进行的表位定位
[0986] 将全长人类τ蛋白(由微管相关蛋白τ蛋白同功型2基因(MAPT)编码，氨基酸序列NCBI参考序列编号NP_005901.2，SEQ ID NO:1，变体名称“2N4R”)分成15个氨基酸的肽，偏移5个氨基酸(10个氨基酸重叠)。合成肽并一式三份将其共价连接至二氧化硅载片(自JPT 
Technologies,Berlin,Germany获得)且斑点大小是0.5mm。在补充有0.05％ 20的
含3％牛血清白蛋白的Tris缓冲生理盐水(10mM Tris，pH 7.5，150mM NaCl)(3％BSA-TBST)中将抗体muIgG稀释至30μg/mL浓度。如PepstarTM使用者手册(JPT Technologies)中所描
述，在室温下使稀释的抗体结合至印在载片上的肽，保持2小时。在充分洗涤(用TBST洗涤5次，每次5分钟)后，将载片与二次抗体(驴抗小鼠IgG，Alexafluor 647偶联物，5μg/mL于3％BSA-TBST中)一起在室温下培育1小时。在充分洗涤(用TBST洗涤5次，每次5分钟；超纯水洗涤5次，每次5分钟)后，在氮气流下干燥载片并在Opera Phenix上于647nm通道中获取图像。
使用自JPT Technologies获得的Galviewer软件以及ImageJ软件，并使用对照小鼠IgG作为
标志，比对图像与肽阵列定义文件。
[0987] AD患者脑脊髓液(CSF)免疫沉淀
[0988] 患者CSF是购自PrecisionMed。在24℃下，在2％BSA中阻断蛋白质A珠粒(SureBeads；Bio-Rad)1小时且接着在TBST中洗涤三次。在与抗体一起培育之前，将
20(0.02％)和不含EDTA的完全蛋白酶抑制剂(Roche)添加至CSF中。将CSF(50μL)
与2μg抗体一起在4℃下培育1小时。接着，将CSF/抗体混合物添加至100μL经阻断/洗涤的珠粒中并在4℃下培育18小时。收集未结合的部分并用1mL洗涤缓冲液(50mM Tris pH7、100mM NaCl、0.5％TritonX-100)洗涤三次，随后用1mL PBS洗涤一次。接着，通过与45μL洗脱缓冲液(Pierce)一起培育10分钟来洗脱被结合部分并通过添加5μL Tris缓冲液(pH 8.8)进行
中和。
[0989] 如图21中所示，基准抗τAb017和抗τ17G2.A1均能够结合大量来自阿尔茨海默氏病(AD)患者的人类CSF中的τ蛋白。每个点表示唯一的AD患者样品且每条线指示阴性对照、Ab017和抗τ17G2.A1各三个样品的平均值。
[0990] 实施例7.17G2.A1的表位定位确证
[0991] 直接结合ELISA
[0992] 合成呈N末端生物素化的肽形式的对应于SEQ ID NO:1的氨基酸186-205的肽(GEPPKSGDRSGYSSPGSPGT；SEQ ID NO:178)。用中性链亲和素(neutravidin)(1μg/ml)涂布ELISA板(Corning 3690)并阻断(3％BSA/TBST)。自1μg/mL开始，以0.5log稀释度将所述肽稀释于3％BSA/TBST中，并使其结合至中性链亲和素涂布的板。在所有步骤之间用PBST洗涤板5次。在3％BSA/TBST中将17G2.A1稀释至5μg/mL并在室温下培育1小时，随后将其与在
BSA/TBST中以1/5000稀释的抗小鼠IgG-HRP(Novex)一起在室温下培育45分钟。用50μL 1-
step TMB Ultra使ELISA显色。
[0993] 竞争结合ELISA
[0994] 用自5μg/mL开始以0.5log稀释度稀释的重组τ蛋白(r-Tau)(τ441；SEQ ID NO:1)(Ceptor制造)涂布ELISA板(Corning 3690)，并用3％BSA/TBST阻断。用3％BSA/TBST将17G2.A1稀释至2.5μg/mL并将其与自50μg/mL以每步骤0.5log递减至0μg/mL的浓度的
17G2.A1肽(如上文所述)一起在室温下共培育1小时。接着在室温下，将板与在BSA/TBST中
1/5000稀释的抗小鼠IgG-HRP(Novex)一起培育45分钟。在所有步骤之间用TBST洗涤板5次。
用50μL 1-step TMB Ultra使ELISA显色。
[0995] 直接结合和竞争结合ELISA的结果显示于图22A和22B中。抗τ抗体17G2.A1展示特异性结合至在SEQ ID NO:1的氨基酸186-205内的表位。另外，当将r-Tau固定于板上时，表位肽GEPPKSGDRSGYSSPGSPGT(SEQ ID NO:178)以剂量依赖性方式竞争结合17G2.A1。
[0996] 实施例8.结合至TfR的修饰的Fc多肽
[0997] 本实施例描述实现转铁蛋白受体(TfR)结合和跨血脑屏障(BBB)转运的Fc多肽修饰。
[0998] 除非另外指示，否则本部分中的氨基酸残基位置是基于有关人类IgG1野生型Fc区的EU索引编号进行编号。
[0999] 在位置384、386、387、388、389、390、413、416和421处包含修饰的Fc多肽的产生和表征(CH3C克隆)
[1000] 如下文所述，产生含有在包括氨基酸位置384、386、387、388、389、390、413、416和421的位置中引入修饰的Fc区的酵母文库。结合至TfR的示例性克隆显示于表13和14中。
[1001] 在另外两轮分选后，对单个克隆测序并鉴别出四个独特序列。这些序列在388位始终具有Trp，并且在421位均具有芳香族残基(即，Trp、Tyr或His)。在其它位置存在较大多样性。
[1002] 在CHO或293细胞中将选自所述文库的四个克隆表达为Fc与Fab片段的融合物形式，并通过蛋白质A和尺寸排阻色谱法纯化，接着利用ELISA针对在存在或不存在全铁转铁
蛋白(holo-Tf)下与人类TfR的结合进行筛选。所述克隆均结合至人类TfR且添加过量(5μM)holo-Tf不影响所述结合。另测试克隆与内源性表达人类TfR的293F细胞的结合。所述克隆
结合至293F细胞，但总体结合大体上不如高亲和力阳性对照。
[1003] 接下来，使用克隆CH3C.3作为测试克隆，测试克隆是否能内化于TfR表达细胞中。使黏附HEK 293细胞在96孔板中生长至约80％汇合，移除培养基并添加1μM浓度样品：克隆CH3C.3、抗TfR基准阳性对照抗体(Ab204)、抗BACE1基准阴性对照抗体(Ab107)和人类IgG同型对照(自Jackson Immunoresearch获得)。在37℃和8％CO2浓度下培育所述细胞30分钟，
接着洗涤，用0.1％TritonTMX-100透性化，并用抗人类IgG-Alexa  488二次抗体染
色。再次洗涤后，在高内含物荧光显微镜(即，Opera PhenixTM系统)下获取细胞图像，并定量每个细胞的斑点数。在1μM下，克隆CH3C.3显示与阳性抗TfR对照类似的内化倾向，而阴性对照不显示内化作用。
[1004] 克隆的进一步工程改造
[1005] 使用软性随机突变方法，产生另外的文库以提高初始匹配针对人类TfR的亲和力，其中基于初始四个匹配中的每一个产生DNA寡核苷酸以引入软性诱变。鉴别出结合TfR的另
外的克隆并进行选择。所选克隆分为两个综合序列组。第1组克隆(即，克隆CH3C.18、
CH3C.21、CH3C.25和CH3C.34)具有在384位半保守的Leu、在386位的Leu或His以及在387位
和389位分别保守和半保守的Val，且在413位、416位和421位分别具有半保守的P-T-W基元。
第2组克隆具有在384位的保守Tyr、在位置386-390处的基元TXWSX并且在413位、416位和
421位分别具有保守基元S/T-E-F。在另外的研究中，使用克隆CH3C.18和CH3C.35作为各序
列组的代表性成员。
[1006] 表位定位
[1007] 为了确定工程改造的Fc区是否结合至TfR的顶端结构域，在噬菌体表面上表达TfR顶端结构域。为正确折叠并展示顶端结构域，须截短一个环并且序列需要进行环状变换。将克隆CH3C.18和CH3C.35涂布于ELISA板上并遵循噬菌体ELISA方案。简单点说，在用1％PBSA洗涤并阻断后，添加噬菌体展示的稀释液并在室温下培育1小时。随后洗涤板并添加抗M13-HRP，且再次洗涤之后，用TMB底物使板显色并用2N H2SO4淬灭。在本分析中，克隆CH3C.18和CH3C.35均结合至顶端结构域。
[1008] 互补位定位
[1009] 为了解Fc结构域中对于TfR结合最重要的残基，产生一系列突变体克隆CH3C.18和克隆CH3C.35Fc区，其中各突变体在TfR结合区中有一个位置回复突变成野生型。所得变体
重组表达为Fab-Fc融合物形式且测试其与人类或食蟹猕猴TfR的结合。对于克隆CH3C.35，
位置388和421对于结合很重要；这些位置回复突变成野生型完全消除与人类TfR的结合。
[1010] 成熟克隆的结合表征
[1011] 如上文所述，利用纯化的Fab-Fc融合物和涂布于板上的人类或食蟹猕猴TfR进行结合ELISA。来自克隆CH3C.18成熟文库的变体，即克隆CH3C.3.2-1、克隆CH3C.3.2-5和克隆CH3C.3.2-19以大致相等的EC50值结合人类和食蟹猕猴TfR，而亲本克隆CH3C.18和CH3C.35
与人类TfR的结合比与食蟹猕猴TfR的结合强10倍。
[1012] 接下来，测试修饰的Fc多肽是否内化于人类和猴细胞中。使用上述方案，测试在人类HEK 293细胞和恒河猴LLC-MK2中的内化情况。类似地结合人类和食蟹猕猴TfR的变体，即克隆CH3C.3.2-5和CH3C.3.2-19相较于克隆CH3C.35在LLC-MK2细胞中具有明显改善的内化作用。
[1013] 克隆的进一步工程改造
[1014] 针对其它亲和力成熟克隆CH3C.18和CH3C.35的进一步工程改造涉及添加另外的突变至通过直接相互作用、第二壳相互作用或结构稳定化增强结合的位置。此目的是通过
产生“NNK步行(NNK walk)”或“NNK补丁(NNK patch)”文库并进行选择来实现。NNK步行文库涉及使互补位附近的残基逐一发生NNK突变。通过观察结合至FcγRI(PDB ID:4W4O)的Fc的
结构，鉴别出初始修饰位置附近的44个残基作为询问的候选物。确切地说，将以下残基作为NNK诱变的靶：K248、R255、Q342、R344、E345、Q347、T359、K360、N361、Q362、S364、K370、E380、E382、S383、G385、Y391、K392、T393、D399、S400、D401、S403、K409、L410、T411、V412、K414、S415、Q418、Q419、G420、V422、F423、S424、S426、Q438、S440、S442、L443、S444、P4458、G446和K447。使用Kunkel诱变技术产生44个单点NNK文库，且汇集产物并如以上关于其它酵母文库所描述，通过电穿孔将其引入酵母中。
[1015] 组合这些微型文库(其各自具有一个位置突变，产生20种变体)产生一个小型文库，所述文库是使用酵母表面展示引起较高亲和力结合的任何位置进行选择。如上文所述，使用TfR顶端结构域蛋白质进行选择。在三轮分选之后，对来自富集酵母文库的克隆进行测序，并鉴别出若干“热点”位置，其中某些点突变明显改善与顶端结构域蛋白质的结合。对于克隆CH3C.35，这些突变包括E380(突变成Trp、Tyr、Leu或Gln)和S415(突变成Glu)。克隆
CH3C.35单突变体和组合突变体的序列陈述于SEQ ID NO:207-218中。对于克隆CH3C.18，这些突变包括E380(突变成Trp、Tyr或Leu)和K392(突变成Gln、Phe或His)。克隆CH3C.18单突变体的序列陈述于SEQ ID NO:201-206中。
[1016] 改善克隆CH3C.35亲和力的其它成熟文库
[1017] 如关于先前的酵母文库所描述，产生另一文库，以鉴别NNK步行文库中的突变组合，同时在其周围添加若干另外的位置。在此文库中，YxTEWSS(SEQ  ID NO:635)和
TxxExxxxF(SEQ ID NO:636)保持不变，并且有六个位置完全随机突变：E380、K392、K414、S415、S424和S426。包括位置E380和S415是因为它们是NNK步行文库中的“热点”。包括位置K392、S424和S426是因为其构成可以定位结合区的核心的一部分，而选择K414是因为其邻
近415位。
[1018] 如先前所描述，仅用食蟹猕猴TfR顶端结构域分选所述文库。五轮分选后，对富集的池进行测序，且所鉴别的独特克隆的修饰的区域的序列陈述于SEQ ID NO:222-239中。
[1019] 设计下一批文库以进一步研究主要结合互补位中可接受的多样性。用NNK密码子使初始位置(384、386、387、388、389、390、413、416和421)中的每一个加所述两个热点(380和415)个别地随机突变以在酵母上产生一系列单位置饱和诱变文库。此外，使每个位置个
别地回复突变成野生型残基，并将这些个别克隆展示于酵母上。注意到，位置380、389、390和415是在回复突变成野生型残基后与TfR保持显著结合的唯一位置(关于413回复突变成
野生型观察到有一些残留但明显减弱的结合)。
[1020] 针对人类TfR顶端结构域对单位置NNK文库进行三轮分选以收集约前5％的结合物，接着对来自各文库的至少16个克隆进行测序。结果指示在克隆CH3C.35的背景下各位置处可以接受而不会明显减弱与人类TfR的结合的氨基酸。概述于下：
[1021] 位置380：Trp、Leu或Glu；
[1022] 位置384：Tyr或Phe；
[1023] 位置386：仅Thr；
[1024] 位置387：仅Glu；
[1025] 位置388：仅Trp；
[1026] 位置389：Ser、Ala或Val(尽管野生型Asn残基看来保持一定结合，但其未出现在后续文库分选中)；
[1027] 位置390：Ser或Asn；
[1028] 位置413：Thr或Ser；
[1029] 位置415：Glu或Ser；
[1030] 位置416：仅Glu；和
[1031] 位置421：仅Phe。
[1032] 以上残基当作为单一变化或组合变化取代至克隆CH3C.35中时，表示保持与TfR顶端结构域的结合的互补位多样性。在这些位置具有突变的克隆包括表14中所示的所述克
隆，并且这些克隆的CH3结构域的序列陈述于SEQ ID NO:214-218、238、240-270和469-475中。
[1033] 实施例9.可被修饰用以实现TfR结合的另外的Fc位置
[1034] 产生结合至转铁蛋白受体(TfR)的另外的修饰的Fc多肽，所述多肽在Fc区中的替代位置，例如在以下位置具有修饰：
[1035] 位置274、276、283、285、286、287、288和290(CH2A2克隆)；
[1036] 位置266、267、268、269、270、271、295、297、298和299(CH2C克隆)；
[1037] 位置268、269、270、271、272、292、293、294和300(CH2D克隆)；
[1038] 位置272、274、276、322、324、326、329、330和331(CH2E3克隆)；或
[1039] 位置345、346、347、349、437、438、439和440(CH3B克隆)。
[1040] 结合至TfR的示例性CH3B克隆陈述于SEQ ID NO:289-293中。结合至TfR的示例性CH2A2克隆陈述于SEQ ID NO:394-398中。结合至TfR的示例性CH2C克隆陈述于SEQ ID NO:
299-303中。结合至TfR的示例性CH2D克隆陈述于SEQ ID NO:304-308中。结合至TfR的示例
性CH2E3克隆陈述于SEQ ID NO:309-313中。
[1041] 实施例10.包含修饰的Fc多肽的抗τ抗体的结合
[1042] 产生抗τFab与BBB渗透性Fc多肽的融合物
[1043] 通过将克隆1C7的Fd(VH+CH1区)克隆至表达载体中来构建两条重链中的第一条，所述表达载体包含工程改造成结合至转铁蛋白受体且也包含“节”突变(T366W)以防止同二聚化并促进与包含“孔”突变(T366W/L368A/Y407V)的Fc异二聚化的Fc。Fc也包含L234A、
L235A和P329G取代(根据EU编号方案)以改变效应子功能。所述两条重链中的第一条是设计
成表达序列SEQ ID NO:317。
[1044] 通过将克隆1C7的Fd(VH+CH1区)克隆至表达载体中来构建两条重链中的第二条，所述表达载体包括含“孔”突变(T366W/L368A/Y407V)但缺乏转铁蛋白受体结合突变的Fc。
Fc也包含L234A、L235A和P329G取代(根据EU编号方案)以改变效应子功能。所述两条重链中的第二条是设计成表达序列SEQ ID NO:316。
[1045] 使用含对应于序列SEQ ID NO:315的多核苷酸的表达载体构建轻链。
[1046] 将1:1:2比率(第一条重链:第二条重链:轻链)的包含编码前述序列SEQ ID NO:315-317的多核苷酸的载体以共转染至ExpiCHO或Expi293中。依序用蛋白质A色谱法、制备
型尺寸排阻色谱法(SEC)和本领域技术人员熟悉的方法纯化所表达的抗体(在本文中称为
“1C7/3C.35.21”)。
[1047] τ蛋白/转铁蛋白受体(TfR)结合
[1048] 使用 RED384仪器和 抗生蛋白链菌素生物传感器(FortéBio,18-5019)评价重组τ蛋白和TfR与1C7/3C.35.21的同时结合。在动力学缓冲液
(自 获得)中将生物素化重组τ蛋白稀释至10μg/mL浓度并将其捕捉于抗生蛋白
链菌素生物传感器上，保持70秒。接着在动力学缓冲液中保持1分钟以确定基线。随后，将抗τ抗体1C7/3C.35.21(50μg/mL)结合至固定的重组τ蛋白。接着，将所装载的生物传感器浸入动力学缓冲液中以建立新基线。在存在或不存在预先结合的重组τ蛋白或1C7/3C.35.21下，在传感器上测量重组人类TfR(50ng/mL)的结合1分钟。
[1049] 抗τ抗体1C7/3C.35.21的Biacore评估
[1050] 使用BiacoreTM T200仪器，通过表面等离子体共振测定抗τ抗体1C7/3C.35.21对重组τ蛋白和TfR的亲和力。使用与先前实施例中所述类似的实验方案。
[1051] τ蛋白播种实验
[1052] 细胞培养和分析
[1053] 将FRET传感器细胞(Tau RD P301S FRET生物传感器，目录号：CRL-3275，ATCC)以于每孔100μL补充有10％HI-FBS(Thermo Fisher Scientific；目录号：10082-147)、1×MEM非必需氨基酸溶液(Thermo Fisher Scientific；目录号：11-140-050)、1mM丙酮酸钠
(Thermo Fisher Scientific；目录号：11-360-070)和1×青霉素-链霉素-谷氨酰胺
(Thermo Fisher Scientific；目录号：10-378-016)的DMEM(高葡萄糖DMEM(Thermo Fisher Scientific；目录号：11-965-092)中每孔30,000个的密度涂铺于涂有聚D-赖氨酸(PDL)的
96孔板(Corning BioCoat聚D-赖氨酸多孔板，目录号：356640)上，并在37℃和5％CO2浓度下培养。
[1054] 涂铺细胞后四至五小时，使用Lipofectamine 2000共转染人类AD患者脑溶解产物以及包括阴性对照、嵌合IgG克隆1C7和抗τ抗体1C7/3C.35.21在内各种抗体的可溶部分。在
25μL OPTI-MEM(Thermo Fisher Scientific，目录号：31-985-088)中稀释含有1μg总蛋白质(约0.2ngτ蛋白)的来自AD患者脑或年龄相配的健康对照脑的可溶于PBS的部分和所述抗
体(2μg)，并在37℃下培育20分钟。接着，将含0.5μl Lipofecatmine 2000(Thermo Fisher Scientific；目录号：11-668-019)的25μL OPTI-MEM添加至蛋白质-抗体混合物中且再在室温下培育10分钟。对于每个孔，用转染混合物完全更换培养基，并将FRET传感器细胞在37℃和5％CO2下保持24小时。接着，在室温下，将在存在或不存在抗体下经蛋白质种子转染的
FRET传感器细胞固定于含4％PFA(Electron Microscopy Sciences；目录号：15714-S)和
4％蔗糖(Thermo Fisher Scientific；目录号：S5-3)的1×PBS(Teknova，目录号：P0191)
中，保持15分钟，随后用1×PBS洗涤4次。接着，在室温下，含0.2％TritonX-100的1x PBS中用CellMask深红浆膜染色剂(Deep Red Plasma Membrane Stain)(Thermo Fisher 
Scientific，目录号：C10046)对细胞染色，保持10分钟，随后立即获取图像，接着用1×PBS洗涤2次。
[1055] FRET定量
[1056] 使用Opera Phenix高内含物筛选系统(PerkinElmer)获取固定的FRET传感器细胞的图像并使用Harmony软件(PerkinElmer)对图像定量。为获取FRET图像，使用内置式CFP/
YFP FRET获取方案(在425nm下激发，在435-480nm下供体发射，且在500-550nm下受体发
射)、Alexa647获取方案(在640nm下激发，且在650-760nm下发射)和处于非共聚焦模式的水浸20×物镜(NA＝1.0)。FRET强度定义为每个像素中受体荧光度与供体荧光度的比率(FRET
＝受体/供体)。细胞是通过Cell Mask染色确定。接着计算每个细胞的平均FRET强度并生成在各条件(例如在无抗体下被AD患者脑转染的细胞)下显示平均FRET强度分布(每个细胞)
的直方图。确定FRET阳性细胞的阈值任意地设定为在无抗体下被健康对照受试者脑转染的
FRET传感器细胞的最高平均FRET值周围(典型的平均FRET强度大于2.5或2.6)。对FRET阳性
细胞的FRET信号积分(iFRET：积分FRET)并通过每孔所有细胞的积分FRET强度归一化。
[1057] 结果
[1058] 图23A-23C显示结合至人类τ蛋白和人类TfR的抗τ抗体1C7/3C.35.21和嵌合IgG克隆1C7的SPR分析。抗τ抗体1C7/3C.35.21结合至τ蛋白和TfR两者。1C7/3C.35.21对τ蛋白的结合亲和力与嵌合IgG克隆1C7对τ蛋白的亲和力相当。图24显示，抗τ抗体1C7/3C.35.21能够同时结合至τ蛋白和TfR。生物素-τ蛋白先结合至Octet抗生蛋白链菌素传感器，且接着将传感器尖端依序浸入1C7/3C.35.21和TfR溶液中。图24中的代表性感测图显示，1C7/
3C.35.21结合至τ蛋白和TfR(迹线A)或单独τ蛋白(迹线B)。在无1C7/3C.35.21存在下未观察到τ蛋白与TfR之间的相互作用(迹线C)且1C7/3C.35.21和TfR均不非特异性结合至传感
器尖端(迹线D)。图25显示，抗τ抗体1C7/3C.35.21阻止HEK293T细胞中τ蛋白播种。AD脑溶解产物在τ蛋白生物传感器FRET中接种而引起τ蛋白聚集且通过添加嵌合IgG克隆1C7(τ1C7)或
1C7/3C.35.21(τ1C7/3C.35.21)阻断此接种作用。
[1059] 实施例11.方法
[1060] 产生噬菌体展示文库
[1061] 合成编码野生型人类Fc序列的DNA模板并将其并入噬菌粒载体中。噬菌粒载体含有ompA或pelB前导序列、Fc插入序列与c-Myc和6×His表位标签的融合物，以及琥珀终止密
码子，后接M13衣壳蛋白pIII。
[1062] 产生在所需修饰位置处含有“NNK”三密码子的引物，其中N是任何DNA碱基(即，A、C、G或T)且K是G或T。或者，使用进行“软”随机突变的引物，其中在每一随机突变位置使用对应于70％野生型碱基和10％其它三个碱基中的每一个的碱基混合物。通过以PCR扩增Fc区中对应于随机突变区域的片段，接着使用含SfiI限制性位点的末端引物组装，随后用SfiI
消化并连接至噬菌粒载体中来产生文库。或者，使用所述引物进行Kunkel诱变。将连接的产物或Kunkel产物转化至电感受态TG1大肠杆菌细胞(自 获得)中。在回收并生长过
夜后，用M13K07辅助噬菌体感染大肠杆菌细胞，之后用5％PEG/NaCl使文库噬菌体沉淀，将
9 11
其再悬浮于含15％甘油的PBS中，并冷冻待用。典型文库大小在约10至约10 个转化体范围
内。通过pIII融合的Fc与未连接至pIII的可溶性Fc(所述可溶性Fc是由于琥珀终止密码子
在pIII之前而产生)之间配对，将Fc二聚体展示于噬菌体上。
[1063] 产生酵母展示文库
[1064] 合成编码野生型人类Fc序列的DNA模板并将其并入酵母展示载体中。对于CH2和CH3文库，将Fc多肽展示于Aga2p细胞壁蛋白质上。两种载体均含有具有Kex2裂解序列之前
原前导肽，和c-Myc表位标签与Fc末端的融合物。
[1065] 使用与关于噬菌体文库所描述的方法类似的方法，不过用含所述载体同源末端的引物进行片段扩增来组装酵母展示文库。将线性化载体和组装的文库插入序列被电穿孔放
入新鲜制备的电感受态酵母(即，EBY100菌株)中。电穿孔方法是本领域技术人员所知的。在选择性SD-CAA培养基中回收之后，使酵母生长至汇合并分离两次，接着通过转移至SG-CAA
培养基中诱导蛋白质表达。典型文库大小在约107至约109个转化体范围内。通过相邻展示的Fc单体配对来形成Fc二聚体。
[1066] 噬菌体选择的通用方法
[1067] 噬菌体方法改编自Phage Display:A Laboratory Manual(Barbas,2001)。另外的方案详情可自所述参考文献获得。
[1068] 板分选法
[1069] 将人类TfR靶涂布于 微量滴定板上(典型地1-10μg/mL于PBS中，200μL)，在4℃下保持过夜。所有结合均在室温下进行，除非另外说明。将噬菌体文库添加至各孔中并培育过夜进行结合。用含0.05％ 20的PBS(PBST)充分洗涤微量滴定孔并通过
将所述孔与酸(典型地为50mM HCl和500mM KCl，或100mM甘氨酸，pH 2.7)一起培育30分钟
来洗脱被结合的噬菌体。用1M Tris(pH 8)中和被洗脱的噬菌体，并使用TG1细胞和M13/KO7辅助噬菌体扩增，并使其在37℃下于含50μg/mL羧苄西林和50μg/mL卡那霉素的2YT中生长过夜。将自含靶孔洗脱的噬菌体的效价与自不含靶孔回收的噬菌体的效价相比较来评估富
集情况。随后，通过缩短结合期间的培育时间以及增加洗涤时间和洗涤次数来增加选择严
格度。
[1070] 珠粒分选法
[1071] 使用NHS-PEG4-生物素(自PierceTM获得)，通过游离胺使抗原生物素化。对于生物素化反应，在PBS中使用3倍至5倍摩尔过量的生物素试剂。用Tris淬灭反应，随后在PBS中充分透析。将生物素化抗原固定于涂有抗生蛋白链菌素的磁珠(即，自Thermo Fisher获得的
M280-抗生蛋白链菌素珠粒)上。将噬菌体展示文库与涂有抗原的珠粒一起在室温下培育1
小时。接着移除未结合的噬菌体并用PBST洗涤珠粒。通过与含500mM KCl(或0.1M甘氨酸，pH 
2.7)的50mM HCl一起培育30分钟洗脱被结合噬菌体，接着如上文关于板分选所描述进行中
和以及繁殖。
[1072] 在三轮至五轮淘选后，通过在噬菌体上表达Fc或在大肠杆菌周质中可溶性表达Fc来筛选单一克隆。所述表达方法是本领域技术人员所知的。使个别噬菌体上清液或周质提
取物暴露于涂有抗原或阴性对照的经阻断ELISA板上且随后，对于周质提取物使用HRP偶联
的山羊抗Fc(自Jackson Immunoresearch获得)或对于噬菌体使用抗M13(GE Healthcare)
进行检测，接着用TMB试剂(自Thermo Fisher获得)显色。将OD450值为背景值约5倍的孔视为阳性克隆并测序，之后，将一些克隆表达为可溶性Fc片段或Fc片段与Fab片段的融合物形
式。
[1073] 酵母选择的通用方法
[1074] 珠粒分选(磁性辅助的细胞分选(magnetic-assisted cell sorting，MACS)方法
[1075] 以与Ackerman等人,2009Biotechnol.Prog.25(3),774中所描述类似的方法进行MACS和FACS选择。用生物素化抗原标记抗生蛋白链菌素磁珠(例如来自Thermo Fisher的M-
280抗生蛋白链菌素珠粒)并将其与酵母(典型地5-10×文库多样性)一起培育。移除未结合
的酵母，洗涤珠粒，并使经结合酵母在选择性培养基中生长并诱导用于后续数轮选择。
[1076] 荧光活化细胞分选(FACS)方法
[1077] 用抗c-Myc抗体标记酵母以监测表达和生物素化抗原(浓度随分选次数而变化)。在一些实验中，为增强相互作用的亲合力，将抗原与抗生蛋白链菌素-Alexa 647预
混合。在其它实验中，在与抗生蛋白链菌素-Alexa 647结合并洗涤后，检测生物素化
抗原。使用FACS Aria III细胞分选仪分选经结合的单一酵母。使分选的酵母在选择性培养基中生长，接着诱导用于后续数轮选择。
[1078] 在获得富集的酵母群后，将酵母涂铺于SD-CAA琼脂板上并使单一集落生长并诱导表达，接着如上文所描述进行标记以确定其结合至靶的倾向。随后对结合抗原的阳性单一
克隆进行测序，之后，一些克隆表达为可溶性Fc片段或Fc片段与Fab片段的融合物形式。
[1079] 通用筛选方法
[1080] 通过ELISA筛选
[1081] 自淘选输出物选择克隆并使其在96孔深孔板各孔中生长。所述克隆使用自动诱导培养基(自EMD Millipore获得)诱导周质表达，或用辅助噬菌体感染以将个别Fc变体噬菌
体展示于噬菌体上。使培养物生长过夜并离心以使大肠杆菌沉淀。对于噬菌体ELISA，直接使用含噬菌体的上清液。对于周质表达，将沉淀物再悬浮于20％蔗糖中，随后用水以4:1稀释，并在4℃下振荡1小时。对板离心以使固体沉淀且上清液用于ELISA中。
[1082] 用典型地0.5mg/mL抗原涂布ELISA板过夜，接着用1％BSA阻断，随后添加噬菌体或周质提取物。在培育1小时并洗掉经结合蛋白质之后，添加HRP偶联的二次抗体(即，抗Fc或抗M13，分别针对可溶性Fc或噬菌体展示的Fc)并培育30分钟。再次洗涤板，接着用TMB试剂显色并用2N硫酸淬灭。使用酶标仪 定量在450nm下的吸光度，并在适用时，使用
Prism软件绘制结合曲线。将测试克隆的吸光度信号与阴性对照(不含Fc的噬菌体或周质提
取物)相比较。在一些分析中，在结合步骤期间添加典型地大量摩尔过量(大于10倍过量)的可溶性转铁蛋白或其它竞争剂。
[1083] 通过流式细胞术筛选
[1084] 将Fc变体多肽(在噬菌体上、周质提取物中或以与Fab片段的融合物形式可溶地表达)添加至96孔V形底培养板(每孔约100,000个细胞于PBS+1％BSA(PBSA)中)中，并在4℃下
培育1小时。随后对板离心并移除培养基，接着用PBSA洗涤细胞一次。将细胞再悬浮于含二次抗体(典型地山羊抗人类IgG-Alexa 647(自Thermo Fisher获得))的PBSA中。30分
钟后，对板离心并移除培养基，用PBSA洗涤细胞1-2次，且接着在流式细胞仪(即，
FACSCantoTMII流式细胞仪)上读取板。使用FlowJo软件计算各条件下的中值荧光度值并用
Prism软件绘制结合曲线。
[1085] 如果出现矛盾，表(例如表14)中描述的各克隆的氨基酸取代指示在所述克隆的登记位置处的氨基酸取代，而非序列表中陈述的序列中所见的氨基酸。
[1086] 应了解，本文所述的实施例和实施方案仅出于说明的目的，并且本领域技术人员将提出根据所述实施例和实施方案的各种修改或改变，且所述修改和改变均包括在本申请
精神和范围以及随附权利要求书的范围内。
[1087] 表12.克隆1C7、1A1、1A5、1D10和1G7的表位定位
[1088]
[1089]
[1090]
[1091]
[1092] 表13.CH3结构域修饰
[1093]克隆名称 分组 384385386387388389390391 ...413414415 416 417 418419 420 421
野生型 n/a N G Q P E N N Y ...D K S R W Q Q G N
1   L G L V W V G Y ...A K S T W Q Q G W
2   Y G T V W S H Y ...S K S E W Q Q G Y
3   Y G T E W S Q Y ...E K S D W Q Q G H
4   V G T P W A L Y ...L K S E W Q Q G W
17 2 Y G T V W S K Y ...S K S E W Q Q G F
18 1 L G H V W A V Y ...P K S T W Q Q G W
21 1 L G L V W V G Y ...P K S T W Q Q G W
25 1 M G H V W V G Y ...D K S T W Q Q G W
34 1 L G L V W V F S ...P K S T W Q Q G W
35 2 Y G T E W S S Y ...T K S E W Q Q G F
44 2 Y G T E W S N Y ...S K S E W Q Q G F
51 1/2 L G H V W V G Y ...S K S E W Q Q G W
3.1-3 1 L G H V W V A T ...P K S T W Q Q G W
3.1-9 1 L G P V W V H T ...P K S T W Q Q G W
3.2-5 1 L G H V W V D Q ...P K S T W Q Q G W
3.2-19 1 L G H V W V N Q ...P K S T W Q Q G W
3.2-1 1 L G H V W V N F ...P K S T W Q Q G W
[1094] 表14.另外的CH3结构域修饰
[1095]
[1096] 简略序列表
[1097]
[1098]
[1099]
[1100]
[1101]
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