SPG-抗体多聚体及其制备方法和应用
阅读：487发布：2021-01-31
专利汇可以提供SPG-抗体多聚体及其制备方法和应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了一种SPG- 抗体 多聚体及其制备方法和应用。该SPG-抗体多聚体由抗血型糖蛋白A单克隆抗体、SPG与目标 抗原 的抗体偶联而成。该多聚体一端通过抗血型糖蛋白A单克隆抗体与红细胞相偶联，另一端通过目标细胞表面抗原或其他抗原的抗体与目标抗原相偶联，之后静置通过红细胞沉淀来检测目标抗原，或通过 密度 梯度离心来去除血液中成熟的有核细胞与红细胞，保留所有的干细胞/祖细胞。本发明用来分离提取干/祖细胞是采用负选与密度梯度离心相结合的方法，收集的干/祖细胞表面没有任何标记，细胞活性好，方法简单实用，可工业化生产，易于推广，可广泛应用于实验室与临床细胞损伤性 疾病 的研究与 治疗 ，前景广阔。，下面是SPG-抗体多聚体及其制备方法和应用专利的具体信息内容。
1.一种SPG-抗体多聚体，其特征在于：由抗血型糖蛋白A单克隆抗体、SPG与目标抗原的抗体偶联而成。
2.根据权利要求1所述的SPG-抗体多聚体，其特征在于：所述的SPG与抗血型糖蛋白A单克隆抗体相偶联结合。
3.根据权利要求1所述的SPG-抗体多聚体，其特征在于：所述的SPG分子量为
22~65KD。
4.一种制备权利要求1所述的SPG-抗体多聚体的方法，其特征在于：将SPG以无菌磷酸盐缓冲液稀释至浓度为0.1mg/ml，抗血型糖蛋白A单克隆抗体以抗体稀释液稀释至
0.1mg/ml，目标抗原的抗体以抗体稀释液稀释至0.1mg/ml，在37℃下混合稀释后3种溶液，反应30min～2h，得到SPG-抗体多聚体溶液，在2～8℃下保存；其中，目标抗原的抗体、链球菌G蛋白和抗血型糖蛋白A单克隆抗体的质量比为0.1~1：1：10。
5.权利要求1所述的SPG-抗体多聚体在制备用于分离提取骨髓/脐带血干细胞/祖细胞的试剂盒中的应用。
6.一种基于权利要求1所述的SPG-抗体多聚体的用于分离提取骨髓/脐带血干细胞/祖细胞的试剂盒，其特征在于：包括细胞稀释液、SPG-抗体多聚体溶液和细胞分离液；其中，SPG-抗体多聚体溶液中的目标抗原的单克隆抗体，包括淋巴系抗CD2、CD3、CD7、CD19、CD21、CD24、CD73、CD81，巨核细胞系抗CD31、CD41、CD42、CD61、CD63、CD107，NK系抗CD16、CD25、CD56、CD158，粒细胞抗CD13、CD15、CD16、CD66a、CD66b，单核细胞抗CD14、CD52、CD87中的一种或多种抗原的抗体四聚体的混合物。
7.权利要求5所述的基于权利要求1所述的SPG-抗体多聚体的用于分离提取骨髓/脐带血干细胞/祖细胞的试剂盒的使用方法，其特征在于：首先用细胞稀释液将骨髓/脐带血按1:1的比例进行稀释，然后加入SPG-抗体多聚体溶液，缓慢摇匀，静置30分钟，取上清液离心浓缩，将浓缩液加入到细胞分离液，离心30分钟，收取细胞层洗涤2-4次即可使用。
8.权利要求1所述的SPG-抗体多聚体在制备用于检验血液中特异性抗原的指示剂中的应用。
9.一种基于权利要求1所述的SPG-抗体多聚体的检验血液中特异性抗原的试剂盒，其特征在于：包括抗体稀释液和SPG-抗体多聚体溶液；其中，SPG-抗体多聚体溶液中的目标抗原的抗体为抗肿瘤抗体、抗猪瘟病毒抗体或牛腹泻病毒抗体。
10.权利要求9所述的基于权利要求1所述的SPG-抗体多聚体的检验血液中特异性抗原的试剂盒的使用方法，其特征在于：将SPG-抗体多聚体进行稀释，加入到待测液中，37℃下30min后形成肉眼或显微镜下可见的经典玫瑰花环状，即为阳性。
SPG-抗体多聚体及其制备方法和应用
技术领域
[0001] 本发明属于生物医学技术应用领域，具体涉及一种SPG-抗体多聚体及其制备方法和应用。SPG-抗体多聚体为抗血型糖蛋白A单克隆抗体-链球菌G蛋白-抗体多聚体的简称。链球菌G蛋白简称为SPG。
背景技术
[0002] 干细胞（stem cell,SC）是一类具有自我更新、高度增值和多向分化潜能的细胞群体，即这些细胞可以通过细胞分裂维持自身细胞群的大小，同时又可以进一步分化成为各种不同的组织细胞，从而构成机体各种复杂的组织器官。干细胞治疗技术，又称为再生医疗技术，是指通过对干细胞进行分离，再靶向移植到受损组织或器官中去以实现对疾病的治疗。
[0003] 临床开展干细胞治疗的最核心是取得足够量的，活性好的，纯度高的干细胞。因此，干细胞提取纯化是临床治疗最核心的环节，是开展细胞治疗可能性的关键。
[0004] 目前从人血液中分离干细胞主要有流式细胞仪，免疫磁珠法，血细胞分离机，体外培养等，这些方法存在的问题是：第一，分离的干细胞表面有特异性标记不利于临床应用；第二，只能分离一种类型的干细胞，不能保留所有类型的干细胞；第三，分离成本高；第四，体外培养细胞污染率高，细胞可塑性减弱，功能差。
[0005] 有方法用（中国专利申请200910187212.4与中国专利申请200610106875.5）甲基纤维素或羟乙基淀粉与密度为1.074～1.077g/ml的聚蔗糖-泛影葡胺分离液（Ficoll试剂）直接分离干细胞，此方法虽能除去血浆、血小板、血浆蛋白及绝大多数红细胞，但所得的为所有的有核细胞，即成熟的单核细胞、淋巴细胞、多核细胞、粒细胞以及所有的干细胞、祖细胞等，不能直接获取干细胞，所得细胞中干细胞纯度差并且有红细胞残留。经实验及众多文献表明，经上诉方法分离的细胞中干细胞所得率一般不高于70%，并且在用脐带血作为干细胞来源时，所得细胞中含有的大量淋巴细胞、NK细胞、粒细胞，干细胞纯度极低，移植后容易引起移植物抗宿主等免疫反应，部分残留的红细胞易引起溶血反应，给临床带来巨大的安全隐患。为此，在中国专利申请200710137781.9中，对此问题进行改进，公开了骨髓脐带血干细胞体外分离试剂盒及其应用方法，该技术方案在一定程度上处理骨髓/脐带血，可以制得干细胞/祖细胞，但是还存在这些问题：首先，此专利中Lin抗体挂靠在大分子的羟乙基淀粉或甲基纤维素上涉及到大分子的化学合成与产物纯化，二者反应困难，反应产物难控制，步骤繁琐，最终的产率极低，造成抗体的大量浪费，成本大大增加。其次，此专利中Lin抗体的具体抗体组成及浓度并未给出，对最后所分离的细胞的种类、纯度、细胞质量等不能保证；最后，在此专利的据此实施方案中，对抗体在内的试剂盒的所有组成成分经过121°C，35分钟高压灭菌，这使所有的抗体蛋白因变性而失活，导致此专利的实施性存在问题。在中国专利申请201010022753.4中，公开了SPA-抗体三聚体、含有该三聚体的细胞处理试剂盒及其制备方法和用途，该技术方案在一定程度上处理外周血/骨髓/脐带血或其他动物的血液，可以分离得到有核细胞或进行抗原的检测，但是还存在这些不足：SPA与免疫球蛋白的结合谱窄，结合弱。对于人类SPA只能与人抗体免疫球蛋白IgG中的IgG1、IgG2、IgG4不能与IgG3结合，造成SPA与人IgG结合不完全结合率低。对于其他动物SPA不能与大鼠、绵羊、山羊、牛、马、鸡、仓鼠的IgG结合，这大大限制了其应用。SPG可与人IgG的所有亚类结合，也可与几乎所有哺乳动物的IgG结合，结合率在98%以上，其结合谱与结合能力远比葡萄球菌A蛋白强[Lew,A.M, Beck D.J and Thomas,L.M.: J.Immunol.Meth.(1991)136,211-219.]。其次，此专利用于细胞处理试剂盒分离外周血/骨髓血/脐带血中的干细胞时所用cd3、cd19、cd14、cd56单克隆抗体分别能标记除去血液中的大部分T淋巴细胞、B淋巴细胞和单核细胞和NK细胞，不能除去数量极大的粒细胞、巨噬细胞。分离的干细胞中残留的淋巴细胞、单核细胞、NK细胞和未除去的大量的粒细胞、巨噬细胞对其临床应用带来巨大的安全隐患。
发明内容
[0006] 发明目的：针对现有技术中存在的不足，本发明的目的是提供一种SPG-抗体多聚体，本发明的另一目的是提供上述SPG-抗体多聚体的制备方法，本发明的第三目的是提供SPG-抗体多聚体的应用。
[0007] 技术方案：为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：一种SPG-抗体多聚体，由抗血型糖蛋白A单克隆抗体、SPG与目标抗原或其他抗原的抗体偶联而成。
[0008] 其中，目标抗原的抗体为单克隆抗体，包括抗血清白蛋白抗体、特异性肿瘤抗体和抗伤寒抗体等；用于分离干细胞/祖细胞的目标抗原的抗体包括淋巴系抗CD2、CD3、CD7、CD19、CD21、CD24、CD73、CD81，巨核细胞系抗CD31、CD41、CD42、CD61、CD63、CD107，NK系抗CD16、CD25、CD56、CD158，粒细胞抗CD13、CD15、CD16、CD66e、CD66b，单核细胞抗CD14、CD52、CD87中的一种或多种抗原的抗体四聚体的混合物。
[0009] 所述的SPG分子量在22～65KD之间。
[0010] 所述的SPG是与抗血型糖蛋白A单克隆抗体相偶联结合。
[0011] 上述的SPG-抗体多聚体的制备方法，将SPG以无菌磷酸盐缓冲液稀释浓度为0.1mg/ml，抗血型糖蛋白A单克隆抗体与目标抗原的抗体以抗体稀释液稀释至0.1mg/ml，取稀释后的抗体、SPG蛋白在37℃下混合，反应30min～2h，得到SPG-抗体多聚体制备，在
2～8℃下保存；其中，目标抗原的抗体、链球菌G蛋白和抗血型糖蛋白A单克隆抗体的质量比为0.1~1：1：10。
2～8℃下保存；其中，目标抗原的抗体、链球菌G蛋白和抗血型糖蛋白A单克隆抗体的质量比为0.1~1：1：10。
[0012] 上述的SPG-抗体多聚体在制备用于检验血液中特异性抗原的指示剂中的应用。
[0013] 所述的用于检验血液中特异性抗原的指示剂是通过将血液中特异性抗原的抗体偶联到抗血型糖蛋白A单克隆抗体-链球菌G蛋白上，利用红细胞作为指示剂，形成肉眼或显微镜下可观察到的玫瑰花环结构的“红细胞-抗血型糖蛋白A单克隆抗体 –SPG-目标抗原的抗体-目标抗原”复合物。
[0014] 上述的SPG-抗体多聚体在制备用于分离提取骨髓/脐带血干细胞/祖细胞的试剂盒中的应用。
[0015] 所述的用于分离提取骨髓/脐带血干细胞/祖细胞的试剂盒是通过将血液中目标抗原的抗体偶联到抗血型糖蛋白A单克隆抗体-链球菌G蛋白上，形成“红细胞-抗血型糖蛋白A单克隆抗体 –SPG-目标抗原的抗体-靶细胞”复合物，再通过血沉过程和密度梯度离心的方法将血液中红细胞和靶细胞除去。
[0016] 一种基于上述的SPG-抗体多聚体得用于分离提取骨髓/脐带血干细胞/祖细胞的试剂盒，包括细胞稀释液、SPG-抗体多聚体溶液和细胞分离液；上述三种溶液分开保存。其中，细胞稀释液为质量/体积百分比浓度为0.85-0.9%的生理盐水；细胞分离液为密度#
为1.077g/ml的聚蔗糖400-泛影酸钠溶液，PH为7-7.8。其中，SPG-抗体多聚体溶液中的目标抗原为单克隆抗体，包括淋巴系抗CD2、CD3、CD7、CD19、CD21、CD24、CD73、CD81，巨核细胞系抗CD31、CD41、CD42、CD61、CD63、CD107，NK系抗CD16、CD25、CD56、CD158，粒细胞抗CD13、CD15、CD16、CD66e、CD66b，单核细胞抗CD14、CD52、CD87中的一种或多种抗原的抗体四聚体的混合物。
为1.077g/ml的聚蔗糖400-泛影酸钠溶液，PH为7-7.8。其中，SPG-抗体多聚体溶液中的目标抗原为单克隆抗体，包括淋巴系抗CD2、CD3、CD7、CD19、CD21、CD24、CD73、CD81，巨核细胞系抗CD31、CD41、CD42、CD61、CD63、CD107，NK系抗CD16、CD25、CD56、CD158，粒细胞抗CD13、CD15、CD16、CD66e、CD66b，单核细胞抗CD14、CD52、CD87中的一种或多种抗原的抗体四聚体的混合物。
[0017] 上述的骨髓/脐带血干细胞/祖细胞的试剂盒的使用方法，首先用细胞稀释液将骨髓/脐带血按1:1的比例进行稀释，然后加入抗血型糖蛋白A单克隆抗体-链球菌G蛋白-抗体多聚体，缓慢摇匀，静置30分钟，取上清液离心浓缩，将浓缩液加入到细胞分离液，离心30分钟，收取细胞层洗涤2-4次即可使用。
[0018] 一种基于SPG-抗体多聚体的检验血液中特异性抗原的试剂盒，包括抗体稀释液和SPG-抗体多聚体溶液；其中，SPG-抗体多聚体溶液中的目标抗原的抗体为抗肿瘤抗体、抗猪瘟病毒抗体或牛腹泻病毒抗体。
[0019] 上述的SPG-抗体多聚体的检验血液中特异性抗原的试剂盒的使用方法，将SPG-抗体多聚体进行稀释，加入到待测液中，37℃下30min后形成肉眼或显微镜下可见的经典玫瑰花环状，即为阳性。
[0020] 当某种疾病患者体内出现特异性抗原，将目标抗原对应的单克隆抗体偶联到抗血型糖蛋白A单克隆抗体-SPG上形成“抗血型糖蛋白A单克隆抗体-SPG-抗目标抗原抗体”即SPG-抗体多聚体。过滤除菌后2～8℃保存。使用时将SPG-抗体多聚体进行稀释，加入到待测液中，37℃下30min后形成肉眼或显微镜下可见的经典玫瑰花环状“抗血型糖蛋白A单克隆抗体-SPG-抗目标抗原抗体-目标抗原”复合物。
[0021] 在链球菌菌株的细胞壁中含有一种能与免疫球蛋白（IgG）Fc段特异结合的蛋白质，被称为IgG Fc段受体蛋白或链球菌G蛋白（简称SPG）。这类蛋白质能特异地与Fc段结合而不影响IgG分子的Fab段与抗原分子的结合，与葡萄球菌A蛋白（简称SPA）相比，SPG更易与IgG相结合，亲和力强，结合谱广。SPG除能与人IgG1、IgG2、IgG3、IgG4四个亚类全部相结合，还能与几乎除鸡以外的所有哺乳动物的IgG相结合。SPA只能与人IgG1、IgG2、IgG4不与占8%的人IgG3结合，不与小鼠IgG1以及其他常规实验动物如大鼠、绵羊、山羊、马及鸡等的IgG结合，因此其应用有一定的局限性。
[0022] 现在已基本肯定SPG比SPA对IgG的结合更为优越，是一种有效地IgG结合物，在免疫学研究方面可取代SPA。据推测，SPG分子中至少有2个以上的IgG结合点，其与IgG的结合开始速度很快，30～45min结合律超过50%。通过计算G蛋白与多克隆抗体IgG反应的平衡常数并与SPA进行比较，结果G蛋白对各种IgG的亲和常数较SPA高。SPG与IgG结合率可达98%。可见，与SPA相比SPG更易与IgG反应，亲和力强，结合谱广。
[0023] 采用不同的处理方法得到的SPG分子量亦不同，用木瓜蛋白酶水解SPG可得到34KD和36KD两种蛋白；用胃蛋白酶、胰蛋白酶处理可得到28KD、35KD、42KD的分子。而完整的SPG蛋白分子量为64～65KD，具有功能活性的最小分子为22KD。
[0024] 本发明充分利用了SPG的上述性质，将目前为止SPA所不能够完全解决或解决不好的问题，例如：人类IgG3的结合检测，鼠类IgG的检测，羊IgG的检测等等都得到了很好的解决。
[0025] 有益效果：本发明用来分离提取干/祖细胞是采用负选与密度梯度离心相结合的方法，优点是能将骨髓或脐带血中的红细胞以及淋巴细胞、NK细胞、粒细胞、巨噬等免疫细胞除尽，真正做到杜绝移植后免疫排斥反应的发生，所收集的干细胞/祖细胞纯度纯度高，并且最终分离的细胞中不含试剂盒中的任何成分，临床应用安全性极好；并且收集的干/祖细胞表面没有任何标记，分离的干细胞/祖细胞种类全，细胞数量大，回收率在85%以上；细胞活性强，台盼蓝染色活检细胞存活率高于98%。本发明的另一个优点是SPG是一种新型抗体Fc段结合蛋白，其与抗体的结合谱广，应用范围远高于SPA；产物SPG-抗体多聚体制备简单，反应迅速（60分钟），反应条件要求低（室温即可），结合牢固稳定性好，适宜浓度下产物得率高达100%，不会造成抗体的浪费，大大降低成本，减轻患者负担。本发明方法实用，分离速度快，试剂稳定性好，易于保存运输，可工业化生产，易于推广，可广泛应用于实验室与临床细胞损伤性疾病的研究与治疗，是临床迫切需要的一种干细胞的分离方法。
具体实施方式
[0026] 下面结合具体实施例对本发明做进一步的解释。
[0027] 以下实施例所使用的材料如下：实施例1 SPG-抗体多聚体的制备
SPG-抗体多聚体的制备，将SPG以无菌磷酸盐缓冲液稀释浓度为0.1mg/ml，抗血型糖蛋白A单克隆抗体以抗体稀释液稀释至0.1mg/ml，目标抗原的抗体以抗体稀释液稀释至
0.1mg/ml，在37℃下混合上述3种稀释液，反应30min～2h，得到SPG-抗体多聚体，在2～
8℃下保存；其中目标抗原的抗体、SPG和抗血型糖蛋白A单克隆抗体的质量比为0.1：1：
10。
SPG-抗体多聚体的制备，将SPG以无菌磷酸盐缓冲液稀释浓度为0.1mg/ml，抗血型糖蛋白A单克隆抗体以抗体稀释液稀释至0.1mg/ml，目标抗原的抗体以抗体稀释液稀释至
0.1mg/ml，在37℃下混合上述3种稀释液，反应30min～2h，得到SPG-抗体多聚体，在2～
8℃下保存；其中目标抗原的抗体、SPG和抗血型糖蛋白A单克隆抗体的质量比为0.1：1：
10。
[0028] SPG分子量在22～65KD之间。SPG是与抗血型糖蛋白A单克隆抗体相偶联结合。
[0029] 目标抗原的抗体为单克隆抗体，包括抗血清白蛋白抗体、特异性肿瘤抗体和抗伤寒抗体等。用于分离干细胞/祖细胞的目标抗原的抗体包括：淋巴系抗CD2、CD3、CD7、CD19、CD21、CD24、CD73、CD81，巨核细胞系抗CD31、CD41、CD42、CD61、CD63、CD107，NK系抗CD16、CD25、CD56、CD158，粒细胞抗CD13、CD15、CD16、CD66a、CD66b，单核细胞抗CD14、CD52、CD87中的一种或多种抗原的抗体四聚体的混合物。其中SPG-抗体多聚体中一种或多种目标抗原的单克隆抗体四聚体混合物浓度，淋巴系抗CD2、CD3、CD7、CD19、CD21、CD24、CD73、CD81为3ng/ml，巨核细胞系抗CD31、CD41、CD42、CD61、CD63、CD107为3ng/ml，NK系抗CD16、CD25、CD56、CD158为3ng/ml，粒细胞抗CD13、CD15、CD16、CD66a、CD66b为4ng/ml，单核细胞抗CD14、CD52、CD87为2ng/ml。
[0030] 实施例2：用于分离提取骨髓/脐带血干细胞/祖细胞的试剂盒该试剂盒包含：SPG-抗体多聚体溶液、细胞稀释液、细胞分离液。
[0031] SPG-抗体多聚体溶液的制备方法同实施例1，其中，目标抗原的抗体、链球菌G蛋白和抗血型糖蛋白A单克隆抗体的质量比为0.1：1：10。
[0032] 目标抗原的抗体包括：2ng/ml淋巴系抗CD2、CD3、CD7、CD19、CD21、CD24、CD73、CD81，2ng/ml巨核细胞系抗CD31、CD41、CD42、CD61、CD63、CD107，1ng/mlNK系CD16、CD25、CD56、CD158，2ng/ml粒细胞抗CD13、CD15、CD16、CD66b，1ng/ml单核细胞抗CD14、CD52、CD87中的一种或多种单克隆抗体四聚体的混合物。
[0033] 用磷酸盐缓冲液（PBS）将SPG-抗体多聚体溶液稀释至1??g/ml，2～8℃下保存。
[0035] 细胞分离液为泛影葡胺-聚蔗糖400#溶液，有0.3～1.5%的泛影葡胺与8%的聚#蔗糖400 组成的水溶液，其密度为1.077g/ml，PH=7.0～7.8。
[0036] 上诉抗体试剂经过过滤除菌，细胞稀释液，细胞分离液等经过121℃，30min高温高压灭菌，检测内毒素≤0.5EU/ml，无菌操作后，分别存放于试剂盒中。
[0037] 使用时将含有枸橼酸钠抗凝的人骨髓/脐带血200ml加入到含有200ml的细胞稀释液的500ml细胞培养瓶中，之后加入100ml 1??g/ml的SPG-抗体多聚体溶液中缓慢摇匀，静置30分钟，形成“红细胞-抗血型糖蛋白A 单克隆抗体-SPG-目标抗原的抗体”复合物，通过血沉过程除去红细胞、淋巴细胞、多核细胞、粒细胞与成熟的单核细胞，之后用含有细菌过滤功能的电动细胞移液器将上清液移至50ml的无菌离心管中，在低温（4℃）水平式离心机中2500转，5分钟离心浓缩，弃上清液，用生理盐水重悬沉淀至离心管底部的细胞，收集至一管中。另取两支50ml离心管，每支加入细胞分离液20ml，将上述用生理盐水重悬的细胞液沿离心管壁缓慢加入，之后2000转离心30分钟。离心后收取离心管中间絮状细胞层至新的离心管中，用生理盐水洗涤2-4次，再用生理盐水稀释至所需要的体积即可使用。
[0038] 实施例3：用于分离提取骨髓/脐带血干细胞/祖细胞的试剂盒该试剂盒包含：SPG-抗体多聚体溶液、细胞稀释液、细胞分离液。
[0039] SPG-抗体多聚体溶液制备方法同实施例1，其中，目标抗原的抗体、SPG和抗血型糖蛋白A单克隆抗体的质量比为1：1：10。
[0040] 目标抗原的抗体包括：4ng/ml淋巴系抗CD2、CD3、CD7、CD19、CD21、CD24、CD73、CD81，3ng/ml巨核细胞系抗CD31、CD41、CD42、CD61、CD63、CD107，4ng/ml NK系CD16、CD25、CD56、CD158，5ng/ml粒细胞抗CD13、CD15、CD16、CD66b，3ng/ml单核细胞抗CD14、CD52、CD87中的一种或多种单克隆抗体四聚体的混合物。
[0041] 用PBS将SPG-抗体多聚体溶液稀释至1??g/ml，2～8℃下保存。
[0042] 细胞稀释液选用0.85～0.9%的生理盐水（市售）#
细胞分离液为泛影葡胺-聚蔗糖400 溶液，有0.3～1.5%的泛影葡胺与8%的聚蔗糖#
400 组成的水溶液，其密度为1.077g/ml，PH=7.0～7.8。
细胞分离液为泛影葡胺-聚蔗糖400 溶液，有0.3～1.5%的泛影葡胺与8%的聚蔗糖#
400 组成的水溶液，其密度为1.077g/ml，PH=7.0～7.8。
[0043] 上诉抗体试剂经过过滤除菌，细胞稀释液，细胞分离液等经过121℃，30min高温高压灭菌，检测内毒素≤0.5EU/ml，无菌操作后，分别存放于试剂盒中。
[0044] 使用方法同实例2。
[0045] 实施例4：抗原检测试剂盒肿瘤细胞存在着与正常组织不同的抗原成分，通过检测这种抗原成分或用这种抗原成分诱导机体的抗肿瘤免疫应答，可以达到诊断和治疗肿瘤的目的，但这方面研究没有取得明显的进展。本发明提供了一种利用SPG-抗体多聚体溶液生产肿瘤快速检测的试剂盒。
[0046] 该试剂盒包含有SPG-抗体多聚体溶液、抗体稀释液。
[0047] SPG-抗体多聚体溶液制备：SPG用无菌PBS液稀释至浓度为0.1mg/ml，将抗红细胞单克隆抗体与抗肿瘤抗体用抗体稀释液稀释至0.1mg/ml，其中抗肿瘤抗体、抗红细胞单克隆抗体和SPG蛋白的质量比为3：3：1。取上述浓度与质量比的抗体、SPG在37℃下反应30分钟～2小时，得到SPG-抗体多聚体，用PBS将SPG-抗体多聚体溶液稀释至1??g/ml，
2～8℃下保存。
2～8℃下保存。
[0048] 抗体稀释液为含有0.1~1%牛血清白蛋白，0.1%明胶的无菌磷酸盐缓冲液，PH为7.2。
[0049] 使用时将样本加入到SPG-抗体多聚体溶液中，摇匀后37℃下静置40分钟，肉眼可看到凝集现象，取样本显微镜下观察有花环聚集沉淀即为阳性。
[0050] 实施例5：抗原检测试剂盒猪瘟俗称"烂肠瘟"是一种具有高度传染性疫病，是由黄病毒科猪瘟病毒属的猪瘟病毒引起的一种急性、发热、接触性传染传染病。其具有高度传染性和致死性，是威胁养猪业的主要传染病之一。
[0051] 该试剂盒包含有抗体稀释液、SPG-抗体多聚体溶液。
[0052] SPG-抗体多聚体溶液：SPG用无菌PBS液稀释至浓度为0.1mg/ml，将抗红细胞单克隆抗体与抗猪瘟病毒抗体用抗体稀释液稀释至0.1mg/ml，其中牛腹泻病毒抗体、抗红细胞单克隆抗体和SPG蛋白的质量比为3：3：1。取上述浓度与质量比的抗体、SPG在37℃下反应30分钟～2小时，得到SPG-抗体多聚体，用PBS将SPG-抗体多聚体溶液稀释至1??g/ml，2～8℃下保存。
[0053] 抗体稀释液为含有0.1~1%牛血清白蛋白，0.1%明胶的磷酸盐缓冲液，PH为7.2。
[0054] 使用时将样本加入到SPG-抗体多聚体溶液中，摇匀后37℃下静置30分钟，取样本显微镜下观察有花环聚集沉淀即为阳性，即感染了猪瘟病毒。
[0055] 实施例5：抗原检测试剂盒牛病毒性腹泻（粘膜病）是由病毒引起的传染病，各种年龄的牛都易感染、以幼龄牛易感性最高。传染来源主要是病畜。病牛的分泌物、排泄物、血液和脾脏等都含有病毒，以直接接触或间接接触方式传播。
[0056] 该试剂盒包含有抗体稀释液、SPG-抗体多聚体溶液。
[0057] SPG-抗体多聚体溶液：SPG用无菌PBS液稀释至浓度为0.1mg/ml，将抗红细胞单克隆抗体与牛腹泻病毒抗体用抗体稀释液稀释至0.1mg/ml，其中牛腹泻病毒抗体、抗红细胞单克隆抗体和SPG蛋白的质量比为3：3：1。取上述浓度与质量比的抗体、SPG在37℃下反应30分钟～2小时，得到SPG-抗体多聚体，用PBS将SPG-抗体多聚体溶液稀释至1??g/ml，2～8℃下保存。
[0058] 抗体稀释液为含有0.1~1%牛血清白蛋白，0.1%明胶的磷酸盐缓冲液，PH为7.2。
[0059] 使用时将样本加入到SPG-抗体多聚体溶液中，摇匀后37℃下静置30分钟，取样本显微镜下观察有花环聚集沉淀即为阳性，即感染了牛病腹泻病毒。
[0060] 实施例6 检验血液中特异性抗原的指示剂。
[0061] 疟疾是严重危害人类健康的主要疾病之一，及时准确、快速简便的诊断对疟疾的防治有重要意义，这不仅可以降低重症患者和死亡的发生，改善愈后，还可用于疟疾的流行
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