制备取代的核苷酸类似物的方法
阅读：739发布：2020-11-11
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1.制备式(I)的化合物的方法：
其中所述方法包括：
将式(A)的化合物与式(B)的化合物偶联，其中在所述偶联反应中所述式(A)的化合物的-OH基团和-NH基团为未被保护的。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述式(I)的化合物包含式(I)(i)的化合物和式(I)(ii)的化合物的非对映体混合物，
3.如权利要求1或权利要求2所述的方法，其中在碱、酸或格氏试剂的存在下进行所述偶联。
4.如权利要求1-3中任一权利要求所述的方法，其中所述碱为任选取代的胺碱、任选取代的吡啶或任选取代的咪唑。
5.如权利要求4所述的方法，其中所述胺碱为单烷基胺、二烷基胺或三烷基胺。
6.如权利要求4所述的方法，其中所述胺碱为单乙胺、二乙胺或三乙胺。
7.如权利要求4所述的方法，其中所述任选取代的吡啶为可力丁。
8.如权利要求4所述的方法，其中所述任选取代的咪唑为N-甲基咪唑。
9.如权利要求1-8中任一权利要求所述的方法，其中在溶剂中进行所述偶联。
10.如权利要求9所述的方法，其中所述溶剂为极性质子惰性溶剂。
11.如权利要求10所述的方法，其中所述极性质子惰性溶剂为乙腈。
12.如权利要求10所述的方法，其中所述极性质子惰性溶剂为甲基异丁基酮。
13.如权利要求1-12中任一权利要求所述的方法，其中与式(A)的化合物相比，所述式(B)的化合物以过量的摩尔浓度存在。
14.如权利要求13所述的方法，其中在所述偶联反应中，所述式(B)的化合物与所述式(A)的化合物的摩尔比为至少1.15当量:1.0当量。
15.如权利要求13所述的方法，其中在所述偶联反应中，所述式(B)的化合物与所述式(A)的化合物的摩尔比为至少1.6当量:1.0当量。
16.如权利要求13所述的方法，其中在所述偶联反应中，所述式(B)的化合物与所述式(A)的化合物的摩尔比为1.3当量:1当量至1.6当量:1当量。
17.如权利要求2-16中任一权利要求所述的方法，其中所述式(I)(i)的化合物和式(I)(ii)的化合物的混合物为富含式(I)(ii)的化合物的非对映体。
18.如权利要求2-16中任一权利要求所述的方法，其中所述式(I)(i)的化合物和所述式(I)(ii)的化合物的混合物为非对映体混合物，其中所述式(I)(i)的化合物与所述式(I)(ii)的化合物的非对映体比为1:1.5或更高。
19.如权利要求2-16中任一权利要求所述的方法，其中所述式(I)(i)的化合物和式(I)(ii)的化合物的混合物为非对映体混合物，其中所述式(I)(i)的化合物与所述式(I)(ii)的化合物的非对映体比为1:1.7或更高。
20.如权利要求2-16中任一权利要求所述的方法，其中所述式(I)(i)的化合物和式(I)(ii)的化合物的混合物为非对映体混合物，其中所述式(I)(i)的化合物与所述式(I)(ii)的化合物的非对映体比为1:2.0或更高。
21.如权利要求1-20中任一权利要求所述的方法，其还包括：
(i)所述式(I)的化合物和乙酸异丙酯混合；
(ii)进行包含叔丁基甲基醚的第一结晶；和
(iii)任选地，进行包含叔丁基甲基醚的第二结晶。
22.如权利要求1-20中任一权利要求所述的方法，其还包括：
(i)进行包含叔丁基甲基醚的第一结晶；和
(ii)任选地，包含叔丁基甲基醚的第二重结晶。
23.如权利要求1-20中任一权利要求所述的方法，其还包括：
(i)将所述式(I)的化合物和乙酸乙酯混合；
(ii)进行包含叔丁基甲基醚的第一结晶；和
(iii)任选地，进行包含叔丁基甲基醚的第二结晶。
24.如权利要求21-23中任一权利要求所述的方法，其还包括使用所述式(I)(ii)的化合物的晶种以促进所述第一结晶和所述第二结晶的至少一种。
25.如权利要求21-24中任一权利要求所述的方法，其还包括在所述第一结晶和所述第二结晶的至少一种期间加热并然后冷却。
26.如权利要求25所述的方法，其中所述加热在约30℃至约60℃的温度下进行。
27.如权利要求25-26中任一权利要求所述的方法，其中所述加热进行约1小时至约6小时的时间。
28.如权利要求25-27中任一权利要求所述的方法，其中所述冷却在约-5℃至约10℃的温度下进行。
29.如权利要求25-28中任一权利要求所述的方法，其中所述冷却进行约1小时至约3小时的时间。
30.如权利要求1-29中任一权利要求所述的方法，其中所获得的式(I)的化合物为富含式(I)(ii)的化合物的非对映体。
31.如权利要求30所述的方法，其中所获得的式(I)(ii)的化合物的非对映体富集>90％(式(I)(ii)的化合物的当量/(所述式(I)(i)的化合物的总当量+所述式(I)(ii)的化合物的总当量)。
32.如权利要求30所述的方法，其中所获得的式(I)(ii)的化合物的非对映体富集>98％(式(I)(ii)的化合物的当量/(化合物式(I)(i)的总当量+式(I)(ii)的化合物的总当量)。
33.如权利要求30所述的方法，其中所获得的式(I)(ii)的化合物的非对映体富集>99％(式(I)(ii)的化合物的当量/(化合物式(I)(i)的总当量+式(I)(ii)的化合物的总当量)。
34.如权利要求1-33中任一权利要求所述的方法，其还包括通过超临界流体色谱法从所述式(I)(i)的化合物和式(I)(ii)的化合物的非对映体混合物中分离部分所述式(I)(i)的化合物。
35.如权利要求34所述的方法，其中对于所述式(I)(ii)的化合物，所述超临界流体色谱法使用液态二氧化碳作为流动相并且使用甲醇作为溶剂。
36.如权利要求1-33中任一权利要求所述的方法，其还包括通过重结晶从所述式(I)(i)的化合物和式(I)(ii)的化合物的非对映体混合物中分离部分所述式(I)(i)的化合物。
37.如权利要求34-36中任一权利要求所述的方法，其中所获得的式(I)(ii)的化合物的非对映体富集>95％(式(I)(ii)的化合物的当量/(化合物式(I)(i)的总当量+式(I)(ii)的化合物的总当量)。
38.如权利要求34-36中任一权利要求所述的方法，其中所获得的式(I)(ii)的化合物的非对映体富集>98％(式(I)(ii)的化合物的当量/(化合物式(I)(i)的总当量+式(I)(ii)的化合物的总当量)。
39.如权利要求34-36中任一权利要求所述的方法，其中所获得的式(I)(ii)的化合物的非对映体富集>99％(式(I)(ii)的化合物的当量/(化合物式(I)(i)的总当量+式(I)(ii)的化合物的总当量)。
40.制备式(B)的化合物的方法，其包括：
将O-苯基硫代二氯磷酸酯与(S)-2-氨基丙酸异丙基酯甲磺酸反应。
41.如权利要求40所述的方法，其还包括使用碱。
42.如权利要求41所述的方法，其中所述碱为胺碱、任选取代的吡啶或任选取代的咪唑。
43.如权利要求40-42中任一权利要求所述的方法，其还包括在溶剂中进行所述反应。
44.如权利要求43所述的方法，其中所述溶剂为非极性溶剂。
制备取代的核苷酸类似物的方法
[0001] 背景
[0002] 领域
[0004] 描述
[0005] 核苷类似物是已被证实在体外和体内均发挥抗病毒和抗癌活性的一类化合物，因此成为用于治疗病毒感染和癌症的广泛研究的对象。核苷类似物通常是在治疗上无活性的化合物，其被宿主或病毒酶转化为它们各自的活性抗代谢物，其反过来可抑制与病毒或细胞增殖有关的聚合酶。可通过许多机制产生活化，例如加入一种或多种磷酸基团和、或结合其他代谢过程。
[0006] 概述
[0007] 本文公开的一些实施方案涉及制备式(I)的化合物或其药物可接受的盐的方法。本文公开的一些实施方案涉及制备式(I)(i)的化合物和/或式(I)(ii)的化合物或其药物可接受的盐的方法。
[0008] 本文公开的一些实施方案涉及制备化合物2的方法。
[0010] 图1示出化合物(C)(i)和化合物(C)(ii)的非对映体混合物的1H NMR光谱。
[0011] 图2示出化合物(C)(i)和化合物(C)(ii)的非对映体混合物的31P NMR光谱。
[0012] 图3A和3B各自示出选自化合物(C)(i)和化合物(C)(ii)的非对映异构体的LCMS光谱。
[0013] 详细描述
[0014] 除非另外定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本领域一般技术人员通常理解的相同的含义。除非另外规定，本文引用的所有专利、申请、公开申请和其他公开以其整体内容通过引用并入。在对于本文的术语存在多个定义的情况下，除非另外规定，以在本部分内容中的那些为准。
[0015] 如本文使用的，“烷基”是指包括完全饱和(没有双键或三键)的烃基团的直链烃链或支链烃链。烷基可具有1至20个碳原子(每当其在本文出现时，诸如“1至20”的数值范围是指在给定范围内的各个整数；例如，“1至20个碳原子”是指烷基可包括1个碳原子、2个碳原子、3个碳原子等，多达并且包括20个碳原子，尽管在没有指定数值范围的情况下本定义还包括术语“烷基”的出现)。烷基基团还可为具有1至10个碳原子的中等大小的烷基。烷基基团还可为具有1至6个碳原子的低级烷基。化合物的烷基可被指定为“C1-C4烷基”或类似名称。仅通过实例，“C1-C4烷基”表示在烷基链中有一至四个碳原子，即，烷基链选自甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基和叔丁基。典型的烷基包括但绝不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基和己基。烷基可为取代的或未取代的。
[0016] 如本文使用的，“芳基”是指具有遍及所有环的完全离域化的π-电子体系的碳环(所有碳)单环或多环芳香族环体系(包括其中两个碳环共享化学键的稠环体系)。芳基基团中的碳原子数可变化。例如，芳基基团可为C6-C14芳基、C6-C10芳基或C6芳基。芳基的实例包括但不限于苯、萘和薁。芳基基团可为取代的或未取代的。
[0017] 如本文使用的，“胺”是指式NRARB的化合物，其中RA和RB独立地为氢、任选取代的烷基或任选取代的芳基。术语胺包括伯胺、仲胺和叔胺。
[0018] 当将基团描述为“任选取代的”时，所述基团可为未取代的或被一种或多种指定的取代基所取代。同样地，当将基团描述为“未取代的或取代的”时，如果取代的，则取代基可选自一种或多种指定的取代基。如果没有指定取代基，则意思是指定的“任选取代的”或“取代的”基团可被一种或多种单独和独立地选自以下的基团所取代：烷基、烯基、炔基、环烷基、环烯基、环炔基、芳基、杂芳基、杂脂环基、芳烷基、杂芳烷基、(杂脂环基)烷基、羟基、保护的羟基、烷氧基、芳氧基、酰基、巯基、烷基硫代、芳基硫代、氰基、卤素、硫代羰基、O-氨基甲酰基、N-氨基甲酰基、O-硫代氨基甲酰基、N-硫代氨基甲酰基、C-酰胺基、N-酰胺基、S-磺酰胺基、N-磺酰胺基、C-羧基、保护的C-羧基、O-羧基、异氰酸基、硫氰酸基、异硫氰酸基、硝基、甲硅烷基、次磺酰基(sulfenyl)、亚磺酰基、磺酰基、卤代烷基、卤代烷氧基、三卤代甲磺酰基、三卤代甲磺酰胺基、氨基、单取代氨基和二取代氨基以及上述基团的被保护的衍生物。
[0019] 如本文使用的术语“保护基团”和“多个保护基团”是指添加至分子的任何原子或原子的基团以防止分子中存在的基团经历不期望的化学反应。保护基团部分的实例在T.W.Greene和P.G.M.Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis(有机合成中的保护基团)，第3版，John Wiley&Sons，1999以及J.F.W.McOmie，Protective Groups in Organic Chemistry(有机化学中的保护基团)，Plenum Press，1973中进行描述，其二者通过引用并入本文用于公开合适的保护基团的限制性目的。可以使它们对一些反应条件稳定并在方便的阶段使用本领域已知的方法容易去除的方式来对保护基团部分进行选择。保护基团的非限制性实例包括苄基；取代的苄基；烷基羰基和烷氧基羰基(例如，叔丁氧基羰基(BOC)、乙酰基或异丁酰基)；芳基烷基羰基和芳基烷氧基羰基(例如，苄氧基羰基)；取代的甲基醚(例如，甲氧基甲基醚)；取代的乙基醚；取代的苄基醚；四氢吡喃基醚；甲硅烷基(例如，三甲基甲硅烷基、三乙基甲硅烷基、三异丙基甲硅烷基、叔丁基二甲基甲硅烷基、三异丙基甲硅烷氧基甲基、[2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基]甲基或叔丁基二苯基甲硅烷基)；酯(例如，苯甲酸酯)；碳酸酯(例如，甲氧基甲基碳酸酯)；磺酸酯(例如，甲苯磺酸酯或甲磺酸酯)；无环缩酮(例如，二甲缩醛)；环状缩酮(例如，1,3-二氧六环、1,3-二氧戊环和本文描述的那些)；无环缩醛；环缩醛(例如，本文描述的那些)；无环半缩醛；环状半缩醛；环状二硫代缩酮(例如，1,3-二噻烷或1,3-二硫戊环)；原酸酯(例如，本文描述的那些)和三芳基甲基(例如，三苯甲基；单甲氧基三苯甲基(MMTr)；4,4’-二甲氧基三苯甲基(DMTr)；4,4’,4”-三甲氧基三苯甲基(TMTr)；和本文描述的那些)。
[0020] 术语“药物可接受的盐”是指对被给予其的生物体不产生显著的刺激并且不影响化合物的生物活性和性质的化合物的盐。在一些实施方案中，所述盐为化合物的酸加成盐。能通过使化合物与诸如氢卤酸(例如，盐酸或氢溴酸)、硫酸、硝酸和磷酸的无机酸反应获得药物盐。还能通过使化合物与诸如脂肪族或芳香族羧酸或磺酸的有机酸反应获得药物盐，例如甲酸、乙酸、琥珀酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、烟酸、甲烷磺酸、乙烷磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸或萘磺酸。还能通过使化合物与碱反应以形成以下的盐而获得药物盐，诸如铵盐、诸如钠盐或钾盐的碱金属盐、诸如钙盐或镁盐的碱土金属盐，诸如二环己基胺、N-甲基-D-葡糖胺、三(羟基甲基)甲基胺、C1-C7烷基胺、环己基胺、三乙醇胺、乙二胺的有机碱的盐以及诸如精氨酸和赖氨酸的氨基酸的盐。
[0021] 本申请中特别是在附加权利要求中使用的术语和短语及其变型，除非另外清楚规定，应被解释为开放式，而与限制性相反。作为前述的实例，术语‘包括’应被理解为是指‘包括而不限于’、‘包括但不限于’等；如本文使用的术语‘包含’与‘包括’、‘含有’或‘特征在于’同义并且为包括式或开放式的并且不排除另外的、未列举的元素或方法步骤；术语‘具有’应被解释为‘至少具有’；术语‘包括’应被解释为‘包括但不限于’；术语‘实例’用于提供所讨论项目的示例性实例，不是穷尽的或其限制性实例；并且术语如‘优选地’、‘优选的’、‘所需的’或‘期望的’以及类似含义的词语的使用应被理解为意味着一些特征是关键的、必需的或甚至对本发明的结构或功能是重要的，但正相反，仅意图强调可用于或者可不用于本发明的特殊实施方案的替代或附加特征。此外，术语“包含”被理解为与短语“至少具有”或“至少包括”同义。当在方法的上下文中使用时，术语“包括”意指所述方法至少包括所列举的步骤，但可包括附加步骤。当用于化合物、组合物或设备的上下文中时，术语“包括”意指化合物、组合物或设备至少包括列举的特征或组分，但还可包括附加特征或组分。同样地，除非另外清楚规定，与连词‘和’连接的一组项目应被理解为要求在所述分组中存在那些项目的各个，而不应被理解为‘和/或’。类似地，除非另外清楚规定，与连词‘或’连接的一组项目应被理解为要求在所述分组之中的互斥性，而不应被理解为‘和/或’。
[0022] 关于本文基本上任何复数和/或单数术语的使用，本领域技术人员可根据适用于上下文和/或申请，从复数转化为单数和/或从单数转化为复数。出于清楚的目的，在本文可清楚阐述各个单数/复数排列。不定冠词“a”或“an”不排除复数。不能仅凭相互不同的从属权利要求中限定某些量度的单纯事实而认为这些量度的组合不能用于处于优势。权利要求中的任何参考符号不应理解为限制范围。
[0023] 应当理解，在本文描述的具有一个或多个手性中心的任何化合物中，如果未清楚规定绝对立体化学，则各个中心可独立地为R-构型或S-构型或其混合物。因此，本文提供的化合物可为对映异构体纯的、对映异构体富集的、外消旋混合物、非对映体纯、非对映体富集或立体异构体混合物。此外，应当理解，在本文描述的任何具有一个或多个产生可被定义为E或Z的几何异构体的双键的化合物中，各个双键可独立地为E或Z、其混合物。
[0024] 同样地，应当理解，在描述的任何化合物中，还意图包括所有互变异构体形式。例如，意图包括磷酸和硫代磷酸基团的所有互变异构体。硫代磷酸的互变异构体的实例包括下列： 此外，意图包括本领域已知的杂环碱基的所有互变异构体，包括天然和非天然嘌呤碱基和嘧啶碱基的互变异构体。
[0025] 应当理解，在本文公开的化合物具有空化合价的情况下，则可使用氢或其同位素填充所述化合价，例如，氢-1(氕)和氢-2(氘)。
[0026] 应当理解，可对本文描述的化合物同位素标记。使用诸如氘的同位素取代可提供更大的代谢稳定性所产生的一些治疗优点，诸如，例如增加体内半衰期或减少剂量需求。在化合物结构中代表的各个化学元素可包括所述元素的任何同位素。例如，在化合物结构中，氢原子可明确地表示出或理解为存在于化合物中。在可能存在氢原子的化合物的任何位置，氢原子可为氢的任何同位素，包括但不限于氢-1(氕)和氢-2(氘)。因此，除非上下文另外清楚规定，本文对化合物的引用包括所有可能的同位素形式。
[0027] 应当理解，本文描述的方法和组合包括晶体形式(还称为多晶型，其包括化合物的相同元素组成的不同晶体堆积排列)、无定形相、盐、溶剂化物和水合物。在一些实施方案中，本文描述的化合物以与诸如水、乙醇等的药物可接受的溶剂的溶剂化物形式存在。在其他实施方案中，本文描述的化合物以非溶剂化物形式存在。溶剂化物包含化学计量或者非化学计量的溶剂，并且可在与诸如水、乙醇等的药物可接受的溶剂结晶的过程期间形成。当溶剂为水时形成水合物，或者当溶剂为醇时形成醇化物。此外，本文提供的化合物能以非溶剂化物形式和溶剂化物形式存在。通常，出于本文提供的化合物和方法的目的，认为溶剂化物形式等效于非溶剂化物形式。
[0028] 在提供值的范围的情况下，应当理解，在实施方案中包括所述范围的上限和下限，以及所述上限和下限之间的各个居中值。
[0029] 本文公开的一些实施方案涉及制备式(I)的化合物或其药物可接受的盐的方法：
[0030]
[0031] 在一些实施方案中，制备式(I)的化合物的方法能包括将式(A)的化合物和式(B)的化合物偶联，其中在偶联反应过程中式(A)的化合物的-OH基团和-NH基团为未被保护的：
[0032]
[0033] 在一些实施方案中，可以单一非对映异构体形式获得式(I)的化合物。在其他实施方案中，可以非对映异构体的混合物形式获得式(I)的化合物，例如和 在一些实
施方案中，式(I)的化合物可为诸如本文描述的那些(例如，式(I)(i)的化合物和式(I)(ii)的化合物)的两种非对映异构体的1:1混合物。在一些实施方案中，式(I)的化合物可为非对映体富集的(例如，与存在的任何其他非对映异构体相比，一种非对映异构体能以>55％(当量)、≥75％(当量)、≥80％(当量)、≥90％(当量)、≥95％(当量)、≥98％(当量)或≥99％(当量)的量存在于混合物中。在一些实施方案中，式(I)的化合物可为非对映体富集的式(I)(i)的化合物。在其他实施方案中，式(I)的化合物可为非对映体富集的式(I)(ii)的化合物，例如，>55％(当量)、≥75％(当量)、≥80％(当量)、≥90％(当量)、≥95％(当量)、≥98％(当量)或≥99％(当量)。
施方案中，式(I)的化合物可为诸如本文描述的那些(例如，式(I)(i)的化合物和式(I)(ii)的化合物)的两种非对映异构体的1:1混合物。在一些实施方案中，式(I)的化合物可为非对映体富集的(例如，与存在的任何其他非对映异构体相比，一种非对映异构体能以>55％(当量)、≥75％(当量)、≥80％(当量)、≥90％(当量)、≥95％(当量)、≥98％(当量)或≥99％(当量)的量存在于混合物中。在一些实施方案中，式(I)的化合物可为非对映体富集的式(I)(i)的化合物。在其他实施方案中，式(I)的化合物可为非对映体富集的式(I)(ii)的化合物，例如，>55％(当量)、≥75％(当量)、≥80％(当量)、≥90％(当量)、≥95％(当量)、≥98％(当量)或≥99％(当量)。
[0034] 在一些实施方案中，中和硫代磷酸基团上的电荷可促进式(I)的化合物或其药物可接受的盐(包括式(I)(i)和式(I)(ii)的化合物或前述的药物可接受的盐)渗透细胞膜，其通过使化合物比具有包含在硫代磷酸上存在一个或多个电荷的类似结构的硫代核苷酸更具亲脂性。一旦在细胞内被吸收或吸入，就能通过酯酶、蛋白酶或其他酶容易地去除与硫代磷酸连接的基团。在一些实施方案中，可通过简单的水解去除与硫代磷酸连接的基团。因此，然后在细胞内释放的硫代-单磷酸可被细胞酶代谢为硫代-二磷酸或活性硫代-三磷酸。在一些实施方案中，式(I)的化合物或其药物可接受的盐的硫代-单磷酸的磷酸化可为立体选择性的。例如，可将式(I)的化合物(包括式(I)(i)的化合物和式(I)(ii)的化合物)的硫代-单磷酸进行磷酸化以提供对于5’-O-磷原子富含(R)或(S)非对映异构体的α-硫代二磷酸和/或α-硫代三磷酸化合物。
[0035]
[0036] 例如，相比于对于5’-O-磷原子的(R)或(S)构型的另一个的量比较，对于α-硫代二磷酸和/或α-硫代三磷酸化合物的5’-O-磷原子的(R)和(S)构型之一可以>50％、≥75％、≥90％、≥95％或≥99％的量存在。在一些实施方案中，式(I)的化合物或其药物可接受的盐的磷酸化可形成5’-O-磷原子为(R)-构型的化合物。在一些实施方案中，式(I)的化合物或其药物可接受的盐的磷酸化可形成5’-O-磷原子为(S)-构型的化合物。
[0037] 合成
[0038] 制备式(I)化合物的一般合成路线和用于合成式(I)化合物的起始原料的一些实例在反应方案1中示出并在本文描述。本文示出和描述的路线仅为例示性的并且不意图也不能将它们理解为以任何方式限制权利要求的范围。本领域技术人员能够识别公开的合成的修改并且能够基于本文的公开内容设计替代路线；所有这样的修改和替代路线在权利要求的范围内。
[0039] 反应方案1
[0040]
[0041] 用于形成式(I)的化合物的一种方法在反应方案1中示出。许多方法可用于式(A)的化合物与式(B)的化合物之间的反应。在一些实施方案中，能使用碱、酸或格氏试剂将式(A)的化合与式(B)的化合物偶联。在一些实施方案中，为了促进偶联，可使用格氏试剂。合适的格氏试剂是本领域技术人员已知的并且包括但不限于烷基氯化镁和烷基溴化C C C镁。在一些实施方案中，格氏试剂可具有R-MgBr或R-MgCl的通式，其中R 可为任选取代的烷基或任选取代的芳基。在一些实施方案中，能在碱的存在下进行式(A)的化合物和式(B)的化合物之间的反应。例如，可将式(B)的化合物加入至式(A)的化合物和碱的混合物。碱的实例包括但不限于诸如烷基胺(包括单烷基胺、二烷基胺和三烷基胺(例如，单乙胺、二乙胺和三乙胺))的任选取代的胺碱，任选取代的吡啶(例如可力丁)和任选取代的咪唑(例如，N-甲基咪唑))。在一些实施方案中，能在N-甲基咪唑的存在下进行式(A)的化合物和式(B)的化合物之间的反应。在一些实施方案中，可在酸的存在下进行式(A)的化合物和式(B)的化合物之间的反应。合适的酸的实例为三氟甲磺酸。
[0042] 格氏试剂可与式(A)的化合物反应以在式(A)的化合物的5’-位形成醇盐。与式(A)的化合物的5’-位连接的醇盐能与式(B)的化合物反应以形成式(I)的化合物。诸如N-甲基咪唑(NMI)的碱可置换式(B)的化合物的氯以形成中间体。该中间体可与式(A)的化合物反应以形成式(I)的化合物，其中相同碱或不同碱可通过去除与式(A)的化合物的5’-位连接的羟基的氢而促进反应。当碱为NMI时，可形成式(C)的化合物，其中抗衡离子为氯阴离子。
[0043]
[0044] 可改变用于式(A)的化合物和式(B)的化合物之间的反应的碱的量。在一些实施方案中，碱的量能以大于催化量而存在。在一些实施方案中，与式(B)的化合物的量相比碱的量能≥3当量(碱:式(B)的化合物≥3当量:1当量)。在一些实施方案中，碱的量可为约2当量至约5当量相比于式(B)的化合物的量(碱:式(B)的化合物≥2-5当量:1当量)。在一些实施方案中，碱的量可为约3当量相比于式(B)的化合物的量(碱:式(B)的化合物≥3当量:1当量)。在一些实施方案中，碱的量和式(B)的化合物的量能近似相同(1当量:1当量的碱:式(B)的化合物)。当碱的量与式(B)的化合物的量相比过量时，碱可通过去除反应中产生的氯化氢而促进反应。
[0045] 反应方案2
[0046]
[0047] 在一些实施方案中，式(B)的化合物和碱之间的反应可提供式(C)(i)的化合物和式(C)(ii)的化合物的非对映体混合物。在一些实施方案中，式(B)的化合物和碱之间的反应可提供能富集一种非对映异构体的式(C)化合物，例如，对于磷(化合物C(ii))的(S)-非对映异构体。在一些实施方案中，本文描述的式(B)的化合物和碱(例如NMI)之间的反应可提供对于磷富集(S)-非对映异构体≥60％、≥75％、≥90％的式(C)化合物。在一些实施方案中，本文描述的式(B)的化合物和碱(例如NMI)之间的反应能提供具有非对映体比为2或更多:1的式(C)(ii)化合物与式(C)(i)化合物(式(C)(ii)的化合物:
式(C)(i)的化合物)的非对映体混合物。在其他实施方案中，式(B)的化合物和碱之间的反应能提供能对于磷(化合物C(i))富集的(R)-非对映异构体的式(C)化合物。在其他实施方案中，本文描述的式(B)的化合物和碱(例如NMI)之间的反应可提供对于磷富集的(R)-非对映异构体≥60％、≥75％、≥90％的式(C)化合物。在其他实施方案中，本文描述的式(B)的化合物和碱(例如NMI)之间的反应可提供式(C)(i)化合物与式(C)(ii)化合物的非对映体比(式(C)(i)的化合物:式(C)(ii)的化合物)为2或更高:1的非对映体混合物。
式(C)(i)的化合物)的非对映体混合物。在其他实施方案中，式(B)的化合物和碱之间的反应能提供能对于磷(化合物C(i))富集的(R)-非对映异构体的式(C)化合物。在其他实施方案中，本文描述的式(B)的化合物和碱(例如NMI)之间的反应可提供对于磷富集的(R)-非对映异构体≥60％、≥75％、≥90％的式(C)化合物。在其他实施方案中，本文描述的式(B)的化合物和碱(例如NMI)之间的反应可提供式(C)(i)化合物与式(C)(ii)化合物的非对映体比(式(C)(i)的化合物:式(C)(ii)的化合物)为2或更高:1的非对映体混合物。
[0048] 反应方案3
[0049]
[0050] 各种方法和试剂可用于制备式(B)的化合物。一种合适的方法在反应方案3中示出。如反应方案3所示，O-苯基硫代二氯磷酸酯能与(S)-2-氨基丙酸异丙基酯反应。在一些实施方案中，(S)-2-氨基丙酸异丙基酯可为游离碱形式。在其他实施方案中，(S)-2-氨基丙酸异丙基酯可为盐形式。在一些实施方案中，(S)-2-氨基丙酸异丙基酯盐可为HCl盐。在其他实施方案中，(S)-2-氨基丙酸异丙基酯可为甲磺酸盐。用于制备式(B)的化合物的方法还可包括使用诸如本文描述的那些碱。在一些实施方案中，碱可为三乙胺。此外，反应可在溶剂中进行。合适的溶剂包括但不限于非极性溶剂。非极性溶剂的实例包括下列：己烷、苯、甲苯、1,4-二氧六环、氯仿、二氯甲烷和二乙基醚。
[0051] 反应方案1所示的合成的优点在于在与式(B)的化合物偶联之前，不需要再保护式(A)的化合物的一个羟基(例如与戊糖环的2’-位和3’-位连接的羟基)和/或一个或多个胺基团(例如，尿嘧啶上)。保护基团，例如，戊糖环2’-位和/或3’-位的氧上和/或尿嘧啶的胺上的保护基团能用于使不期望量的副反应副产物的形成最小化。然而，保护基团的使用增加了期望产物形成中的步骤数量并且可降低期望产物的总产率。因为不包括保护和脱保护步骤，反应方案1所示的合成可产生更高产率的所需产物和/或更少的反应步骤。
[0052] 可改变式(A)的化合物与式(B)的化合物的比。在一些实施方案中，式(B)的化合物的量可以与式(A)的化合物相比过量形式存在，例如，1.15当量或更高(或者任选地，式(A)与式(B)的摩尔比为1.0:(1.15或更大))。在一些实施方案中，使用甚至更高过量的式(B)的化合物，例如，相对于式(A)的1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9或2.0或更高的当量。在一些实施方案中，相对于式(A)的当量，式(B)的化合物的当量可为1.0当量:1.0当量至2.0当量:1.0当量(例如为1.3当量:1.0当量至1.6当量:1.0当量)。在一些实施方案中，式(A)的化合物的量可以与式(B)的化合物相比过量形式存在，例如，
1.15当量或更高。在一些实施方案中，可使用甚至更高过量的式(A)的化合物，例如，1.2、
1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9或2.0或更高的当量。在一些实施方案中，与式(I)(i)的化合物相比，更高过量的式(B)的化合物可提高式(I)(ii)的化合物的选择性形成。
1.15当量或更高。在一些实施方案中，可使用甚至更高过量的式(A)的化合物，例如，1.2、
1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9或2.0或更高的当量。在一些实施方案中，与式(I)(i)的化合物相比，更高过量的式(B)的化合物可提高式(I)(ii)的化合物的选择性形成。
[0053] 可在一种溶剂或两种溶剂或多种溶剂的混合物中进行式(A)的化合物和式(B)的化合物之间的反应。在一些实施方案中，可使用极性质子惰性溶剂进行式(A)的化合物和式(B)的化合物之间的反应。极性质子惰性溶剂的实例包括但不限于二甲基甲酰胺、四氢呋喃、乙酸乙酯、丙酮、乙腈、二甲基亚砜或甲基异丁基酮)。在一些实施方案中，溶剂可为乙腈(ACN)。在一些实施方案中，溶剂可为甲基异丁基酮(MIBK)。
[0054] 在一些实施方案中，可在有机相(例如，诸如乙酸乙酯或乙酸异丙酯的乙酸酯，二氯甲烷，甲基叔丁基醚(MTBE)，其组合，或其他合适的溶剂或溶剂混合物)和水相(例如，诸如盐酸溶液的酸性溶液)之间将式(I)的化合物分离。可相继地将有机相浓缩并且添加例如MTBE的合适的溶剂进行任何次数(例如，1、2、3、4或5或更多次)。在一些实施方案中，本文描述的方法还能包括：(i)将式(I)的化合物和乙酸异丙酯混合；(ii)进行可包含叔丁基甲基醚的第一结晶；和(iii)任选地，进行可包含叔丁基甲基醚的第二结晶。在其他实施方案中，本文描述的方法还能包括：(i)进行可包含叔丁基甲基醚的第一结晶；和(ii)任选地，使用可包含叔丁基甲基醚的溶剂的第二重结晶。在其他实施方案中，本文描述的方法还能包括：(i)将式(I)的化合物和乙酸乙酯混合；(ii)进行可包含叔丁基甲基醚的第一结晶；和(iii)任选地，进行可包含叔丁基甲基醚的第二结晶。在本文描述的一些实施方案中，包括本段中的那些，所述方法还可包括使用式(I)(ii)的化合物的晶种以促进结晶(例如，在第一结晶和第二结晶的至少一个期间)。在一些实施方案中，本文描述的方法可包括(i)将乙酸乙酯和式(I)的化合物混合；和(ii)进行可包含MTBE和式(I)(ii)的化合物的晶种的结晶。
[0055] 在本文描述的一些实施方案中，包括前面段落的那些，方法还可包括加热，然后冷却(例如，在包括第一结晶和第二结晶的结晶的至少一个期间)。加热可在任何合适的温度下进行，例如，适于在溶剂中溶解式(I)的化合物的温度下。加热还可进行合适的时间。在一些实施方案中，加热可在约30℃至约60℃(例如，约30℃或约50℃)的温度下进行。
在一些实施方案中，加热可进行约1小时至约6小时的时间。同样地，冷却可进行合适的时间并且在足以使期望的化合物或一种或多种杂质脱离溶剂的温度下进行。在一些实施方案中，包括本段和前面段落的那些，冷却可在约-5℃至约10℃(例如约0℃)的温度下进行。
在一些实施方案中，冷却可进行约1小时至约3小时的时间。在一些实施方案中，当所述方法包括多次结晶时，可在一次或多次结晶之间过滤混合物。
在一些实施方案中，加热可进行约1小时至约6小时的时间。同样地，冷却可进行合适的时间并且在足以使期望的化合物或一种或多种杂质脱离溶剂的温度下进行。在一些实施方案中，包括本段和前面段落的那些，冷却可在约-5℃至约10℃(例如约0℃)的温度下进行。
在一些实施方案中，冷却可进行约1小时至约3小时的时间。在一些实施方案中，当所述方法包括多次结晶时，可在一次或多次结晶之间过滤混合物。
[0056] 在一些实施方案中，有机相的量可为约10mL至约1000mL。在一些实施方案中，有机相的量可为约20mL至约40mL。在其他实施方案中，有机相的量可为约100mL至约800mL。在一些实施方案中，用于结晶的溶剂(例如，MTBE)的量可为约30mL至约750mL。在一些实施方案中，用于结晶的溶剂(例如，MTBE)的量可为约50mL至约150mL。在其他实施方案中，用于结晶的溶剂(例如，MTBE)的量为约400mL至约600mL。在其他实施方案中，用于溶解剩余物的合适的溶剂(例如，MTBE)的量可为约500mL。
[0057] 从本文描述的方法获得的式(I)(i)的化合物与式(I)(ii)的化合物的非对映体比可改变。在一些实施方案中，本文描述的方法可提供非对映体比为1:1的式(I)(ii)的化合物与式(I)(i)的化合物(式(I)(ii)的化合物:式(I)(i)的化合物)的非对映体混合物。在其他实施方案中，本文描述的方法可提供式(I)(ii)的化合物富集的非对映体的式(I)(i)的化合物和式(I)(ii)的化合物的混合物。在一些实施方案中，本文描述的方法可提供其为非对映体比为1.5或更高:1的式(I)(ii)的化合物与式(I)(i)的化合物(式(I)(ii)的化合物:式(I)(i)的化合物)的非对映体混合物的式(I)(i)的化合物和式(I)(ii)的化合物的非对映体混合物。在一些实施方案中，本文描述的方法可提供非对映体比为1.7或更高:1的式(I)(ii)的化合物与式(I)(i)的化合物(式(I)(ii)的化合物:式(I)(i)的化合物)的非对映体混合物。在一些实施方案中，本文描述的方法可提供其为非对映体比为2.0或更多:1的式(I)(ii)的化合物与式(I)(i)的化合物(式(I)(ii)的化合物:式(I)(i)的化合物)的非对映体混合物的式(I)(i)的化合物和式(I)(ii)的化合物的非对映体混合物。在一些实施方案中，本文描述的方法可提供其为非对映体比为2.1或更多:1的式(I)(ii)的化合物与式(I)(i)的化合物(式(I)(ii)的化合物:式(I)(i)的化合物)的非对映体混合物的式(I)(i)的化合物和式(I)(ii)的化合物的非对映体混合物。在其他实施方案中，本文描述的方法能提供为富集式(I)(i)化合物的非对映体的式(I)(i)的化合物和式(I)(ii)的化合物的混合物。在一些实施方案中，本文描述的方法可提供非对映体比为式(I)(i)的化合物和式(I)(ii)的化合物为1:1.5或更高、1:1.7或更高或1:2.0或更高的式(I)(ii)的化合物与式(I)(i)的化合物(式(I)(ii)的化合物与式(I)(i)的化合物)的非对映体混合物。
[0058] 在一些实施方案中，本文描述的方法，包括前面描述的那些可产生其中获得的式(I)(ii)的化合物可为非对映体富集>90％(式(I)(ii)的化合物的当量/(化合物式(I)(i)的总当量+式(I)(ii)的化合物总当量)的混合物。在一些实施方案中，本文描述的方法，包括前面描述的那些可产生其中获得的式(I)(ii)的化合物可为非对映体富集>95％(式(I)(ii)的化合物的当量/(化合物式(I)(i)的总当量+式(I)(ii)的化合物总当量)的混合物。在一些实施方案中，本文描述的方法，包括前面描述的那些可产生其中获得的式(I)(ii)的化合物可为非对映体富集>98％(式(I)(ii)的化合物的当量/(化合物式(I)(i)的总当量+式(I)(ii)的化合物总当量)的混合物。在一些实施方案中，本文描述的方法，包括前面描述的那些可产生其中获得的式(I)(ii)的化合物可为非对映体富集>99％(式(I)(ii)的化合物的当量/(化合物式(I)(i)的总当量+式(I)(ii)的化合物总当量)的混合物。
[0059] 使用本文描述的方法的一个优点在于可纯化式(I)的化合物以获得式(I)(ii)的化合物和/或式(I)(i)的化合物而在第二结晶步骤中不使用硅胶和/或不必改变溶剂。因此，与在第二结晶步骤中使用硅胶和/或不同溶剂的方法相比，式(I)(ii)的化合物和/或式(I)(i)的化合物的总产率可提高。还可根据制备更大量的产物(例如式(I)(ii)的化合物)的期望放大结晶步骤。
[0060] 当以式(I)(i)的化合物和式(I)(ii)的化合物的非对映异构体混合物形式获得式(I)的化合物时，可使用本领域技术人员已知的方法分离非对映异构体。在一些实施方案中，能通过超临界流体色谱法从式(I)(i)的化合物和式(I)(ii)的化合物的非对映体混合物中分离部分式(I)(i)的化合物。在其他实施方案中，可通过重结晶从式(I)(i)的化合物和式(I)(ii)的化合物的非对映体混合物中分离部分式(I)(i)的化合物。通过分离式(I)(i)的化合物和式(I)(ii)的化合物，产物可变为非对映体富集的非对映异构体之一，例如产物可变为非对映体富集的(I)(ii)的化合物。
[0061] 在一些实施方案中，可使用采用液态形式的二氧化碳作为流动相的超临界流体色谱法(SFC)将式(I)的化合物分离为其式(I)(i)的化合物和式(I)(ii)的化合物的非对映异构体，其中可将式(I)的化合物溶于合适的溶剂，例如，甲醇、乙醇、异丙醇、乙腈或氯仿。在一些实施方案中，用于式(I)的化合物的溶剂可为甲醇。SFC分离方法在Craig White and John Burnett(2005年5月13日)，“Integration of supercritical fluid chromatography into drug discovery as a routine support tool:II(超临界流体色谱法融入药物开发作为常规支持工具：II)，Investigation and evaluation of supercritical fluid chromatography for achiral batch purification(超临界流体色谱法的研究和评价用于非手性批次纯化)”，Journal of Chromatography A 1074:175-185中描述。
[0062] 在其他实施方案中，可通过重结晶分离式(I)的化合物(例如式(I)(i)的化合物和式(I)(ii)的化合物)的非对映异构体。在单一溶剂重结晶中，能将式(I)的非对映体混合物溶于完全溶解混合物所必需的量的溶剂(例如，最小量的溶剂)，制备饱和溶液。在一些实施方案中，溶剂的温度可高于室温。然后，可使溶液冷却，产生从溶液中重结晶的非对映异构体之一。可通过过滤收集包含期望的非对映异构体的晶体并可将滤液丢弃。或者，可将滤液保留并蒸发以获得期望的非对映异构体。在多溶剂重结晶中，可使用两种或多种溶剂，将第二溶剂缓慢加入至包含溶解的非对映异构体混合物的第一溶剂。在加入第二溶剂后，非对映异构体之一可从溶液中结晶。在一些实施方案中，通过使用可包含二氯甲烷和/或乙酸乙酯连同MTBE；以及任选地，式(I)(ii)的化合物的晶种的多溶剂体系的重结晶，可从式(I)(i)的化合物和式(I)(ii)的化合物的非对映体混合物中分离部分式(I)(i)的化合物。
[0063] 式(I)化合物的非对映异构体的分离可提供各种比例的式(I)(i)的化合物和式(I)(ii)的化合物。在一些实施方案中，本文描述的一种或多种分离技术可产生其中获得的式(I)的化合物为式(I)(ii)的化合物富集的非对映体的混合物。在一些实施方案中，本文描述的一种或多种分离技术可产生其中获得的式(I)(ii)的化合物可为非对映体富集>95％(式(I)(ii)的化合物的当量/(化合物式(I)(i)的总当量+式(I)(ii)的化合物的总当量)的混合物。在一些实施方案中，本文描述的一种或多种分离技术可产生其中获得的式(I)(ii)的化合物可为非对映体富集>98％(式(I)(ii)的化合物的当量/(化合物式(I)(i)的总当量+式(I)(ii)的化合物的总当量)的混合物。在一些实施方案中，本文描述的一种或多种分离技术可产生其中获得的式(I)(ii)的化合物可为非对映体富集>99％(式(I)(ii)的化合物的当量/(化合物式(I)(i)的总当量+式(I)(ii)的化合物的总当量)的混合物。
[0064] 在一些实施方案中，本文描述的一种或多种分离技术可产生其中获得的式(I)的化合物为(I)(i)化合物富集的非对映体的混合物。在一些实施方案中，本文描述的一种或多种分离技术可产生其中获得的式(I)(i)的化合物可为非对映体富集>90％(式(I)(i)的化合物的当量/(化合物式(I)(i)的总当量+式(I)(ii)的化合物的总当量)的混合物。在一些实施方案中，本文描述的一种或多种分离技术可产生其中获得的式(I)(i)的化合物可为非对映体富集>98％(式(I)(i)的化合物的当量/(化合物式(I)(i)的总当量+式(I)(ii)的化合物的总当量)的混合物。在一些实施方案中，本文描述的一种或多种分离技术可产生其中获得的式(I)(i)的化合物可为非对映体富集>99％(式(I)(i)的化合物的当量/(化合物式(I)(i)的总当量+式(I)(ii)的化合物的总当量)的混合物。
[0065] 本领域技术人员已知许多用于分离最终化合物(例如，式(I)(ii)的化合物)的方法。在一些实施方案中，可通过过滤分离最终化合物。
[0066] 本文描述的一些实施方案一般地涉及制备式(B)的化合物的方法，其能包括使O-苯基硫代二氯磷酸酯与(S)-2-氨基丙酸异丙基酯甲磺酸反应。如果需要，碱可用于提供式(B)的化合物的反应。在本文中描述了各种合适的碱(例如，胺碱、任选取代的吡啶或任选取代的咪唑)。在一些实施方案中，碱可为三乙胺。可在一种或多种溶剂或溶剂的混合物中进行提供式(B)的化合物的反应。在一些实施方案中，溶剂可为非极性溶剂。非极性溶剂的实例包括但不限于己烷、苯、甲苯、1,4-二氧六环、氯仿、二氯甲烷和二乙基醚。实施例
[0067] 在下列实施例中进一步详细地公开另外的实施方案，其不意图以任何方式限制权利要求的范围。
[0068] 实施例1
[0069] L-丙氨酸异丙基酯衍生的1-苯基氧基-氯硫代磷酸酯(2)的制备
[0070] 能根据下列反应步骤制备化合物2。
[0071] 步骤1：1-苯基氧基二氯硫代磷酸酯试剂(1)的合成
[0072]
[0073] 在氩气环境下将30L装备有机械搅拌器(搪瓷)、温度计、滴液漏斗和冷却浴的玻璃反应器填充二氯甲烷(DCM)(16L)。在搅拌下加入三氯硫磷(1.613L,15.56mol)，并将混合物冷却至-74℃。在氩气下在10L烧瓶中，将苯酚(1.509kg,16.03mol)溶于DCM(2.8L)。将溶液冷却至10℃。加入三乙胺(2.200L,15.87mol)。然后，将溶液转移至滴液漏斗并以保持内温低于-70℃的速率加入至反应器。将生成的白色悬浮液在-70℃下再搅拌2h，然后使其缓慢升温至环境温度过夜。将悬浮液转移至旋转蒸发仪并在真空下浓缩(<80mbar，T浴＝45℃)。使用叔丁基甲基醚(MTBE)(6L)稀释浓缩液并在烧结玻璃真空吸滤器上过滤以去除铵盐。使用TBME(4L)洗涤盐，并通过旋转蒸发(T浴＝45℃)将滤液浓缩。在旋转蒸发仪上将油状物干燥5h(T浴＝50℃，p<30mbar)。获得淡黄色油状物形式的粗化合物
1(3.442kg)。通过使用下列条件的短浴(薄层蒸发仪)的蒸馏纯化粗产物：真空：0.5mbar，冷却棒：-15℃和加热棒：+85℃。获得无色液体形式的纯净化合物1(2.75kg)。
1(3.442kg)。通过使用下列条件的短浴(薄层蒸发仪)的蒸馏纯化粗产物：真空：0.5mbar，冷却棒：-15℃和加热棒：+85℃。获得无色液体形式的纯净化合物1(2.75kg)。
[0074] 步骤2：L-丙氨酸异丙基酯衍生的1-苯基氧基-氯硫代磷酸酯试剂(2)的合成[0075]
[0076] 方法A
[0077] 在氩气下，向30L装备有机械搅拌器、温度计、滴液漏斗和冷却浴的玻璃反应器加入二氯甲烷(10L)。加入溶于2L的二氯甲烷的O-苯基硫代二氯磷酸酯(化合物1,1600g,7.047mol)溶液。将生成的溶液冷却至-74℃，并以保持内温低于-60℃的速率加入三乙胺(2.002L,14.4mol)。以保持内温低于-70℃的速率加入溶于1.7L的2-氨基丙酸(S)-异丙基酯盐酸盐(1281g,7.64mol)二氯甲烷溶液。将生成的悬浮液在-70℃下搅拌
30min，然后升温至环境温度过夜。
30min，然后升温至环境温度过夜。
[0078] 使用5L的甲基叔丁基醚稀释混合物，搅拌1h，然后过滤。使用3L的甲基叔丁基醚洗涤滤饼。在40℃下在真空下浓缩滤液。将粗产物溶于1:1二氯甲烷和庚烷(12L)并与5kg的60-200μm目硅胶混合。在真空下浓缩混合物。将吸附的物质填充在装填硅胶(5Kg,40-63μm目)的柱的上部并使用15L的庚烷、25L的庚烷/乙酸乙酯(98％:2％)和52L的庚烷/乙酸乙酯(95％:5％)洗脱。在真空下浓缩收集的馏分以提供无色液体的化合物2(1503g,66％)。
[0079] 方法B
[0080] 向装备有回流冷凝器、N2入口、温度控制器和与反应监测软件连接的热电偶的20L的夹套反应器填充2-氨基丙酸(S)-异丙基酯盐酸盐(620.19g,3.70mol,1.05当量)、二氯甲烷(8.0L)和O-苯基硫代二氯磷酸酯(化合物1,800g,3.52mol,1.0当量)。将混合物冷却至0℃。在3至5hr内加入三乙胺(749g,7.40mol,2.1当量)同时保持温度低于0℃。将混合物在0℃下搅拌2hr，在约5hr时间内升温至20℃并搅拌16hr。使用过程控制测试样品并且转化率被证实为99.5％。
[0081] 将混合物浓缩为2.4至3.2L，然后填充甲基叔丁基醚(8L)。将混合物搅拌约30min。将浆液过滤。使用甲基叔丁基醚(1.6L)洗涤湿滤饼以获得澄清溶液。通过硅胶垫过滤溶液并使用甲基叔丁基醚(2.4L)洗涤。在真空下浓缩合并的有机溶液以提供无色油状物形式的化合物2(91％)。产物用于下一步而不进一步纯化。
[0082] 方法C
[0083]
[0084] 向装备有回流冷凝器、N2入口、温度控制器和与反应监测软件连接的热电偶的100L的夹套反应器填充(S)-2-氨基丙酸异丙基酯甲磺酸(1.73g,0.013mol,1.05当量)、二氯甲烷(28.5mL)和O-苯基硫代二氯磷酸酯(化合物1,2.85g,0.013mol,1.0当量)。将混合物冷却至0℃。在3hr内加入三乙胺(2.67g,2.1当量)同时保持温度低于0℃。将混合物在0℃下搅拌2hr，在1hr时间内升温至20℃并搅拌16hr。使用过程控制测试样品并且转化率被证实为99.5％。
[0085] 将混合物浓缩为9至12L，然后填充甲基叔丁基醚(28.5L)并搅拌约30min。将浆液过滤。使用甲基叔丁基醚(6mL)洗涤湿滤饼以获得澄清溶液。通过硅胶垫过滤溶液并使用甲基叔丁基醚(9mL)洗涤。在真空下浓缩合并的有机溶液以提供无色油状物形式的化合物2(91％)。产物用于下一步而不进一步纯化。
[0086] 实施例2
[0087] 2’-C-甲基尿苷5’-(O-苯基-N-(S)-1-(异丙氧基羰基)乙基)硫代氨基磷酸酯(3)的制备
[0088]
[0089] 方法A
[0090] 通过与吡啶(50mL)共蒸发两次将起始原料2’-C-甲基尿苷(10.7g,41.5mmol,1当量)干燥并在高真空(约0.5mmHg)中将剩余物干燥至干燥(约15min)。将泡沫状半晶体剩余物溶于无水乙腈(ACN；60mL)和N-甲基咪唑(NMI；17mL,207mmol,5当量)。将生成的溶液冷却至0℃。通过色谱法纯化化合物2(15.4g,47.8mmol,1.15当量)并在15分钟内以无溶剂形式滴加至生成的溶液。将混合物在0℃下搅拌1小时，使其升温至室温，并放置过夜。薄层色谱(TLC；15％甲醇-DCM)显示2’-C-甲基尿苷几乎全部消耗以产生化合物3。
[0091] 使用甲醇(15mL)淬灭反应，在室温下搅拌1hr，并在减压下浓缩。将剩余物放入乙酸乙酯(约150mL)和2N盐酸水溶液(80mL)并使用2N盐酸将pH调整至约2。将有机相分离并相继使用水(约50mL)和碳酸氢钠水溶液(约50mL)洗涤。使用乙酸乙酯反萃水相。在硫酸镁上干燥合并的有机溶液(约200mL)并通过小硅胶垫(10g的硅胶)过滤。将更多的乙酸乙酯(约250mL)通过硅胶以洗脱产物。过程控制显示非对映体比为1.68:1的化合物3(ii)-Sp:化合物3(i)-Rp。
[0092] 在真空下去除溶剂并将生成的泡沫溶于MTBE(100mL)。使用3(ii)-Sp晶体接种澄清溶液。在室温下(不需真空)使用旋转蒸发仪将混合物轻轻搅拌3小时，然后放置在冰箱中过夜。滤除沉淀的固体并使用冷MTBE冲洗以提供具有约99％HPLC纯度的淡白色固体形式的8.96g(39.8％产率)的化合物3并且通过手性HPLC测定为87:13的非对映异构体化合物3(ii)-Sp:化合物3(i)-Rp的混合物。在回流下将获得的化合物3的淡白色固体溶于DCM(30mL；能使用乙酸乙酯代替DCM以获得相似结果)，使用MTBE(60mL)稀释生成的溶液，使用化合物3(ii)-Sp晶体接种并在室温下放置结晶3小时，然后在0℃下过夜。滤除结晶固体，使用冷MTBE洗涤，并在真空下干燥过夜。产率为6.46g(28.6％；未校正)的淡白色结晶固体化合物3(ii)-Sp。HPLC99％(化合物3(i)-Rp：2％(手性HPLC)；剩余的MTBE约5％)。
[0093] 方法B
[0094] 向装备有回流冷凝器、N2入口、温度控制器和与反应监测软件连接的热电偶的1.5L的夹套反应器填充2’-C-甲基尿苷(50g,0.193mol,1当量)，无水乙腈(300mL)和NMI(79.5g,0.968mol,5.0当量)。在搅拌混合物30min后，使其冷却至0-5℃。然后，在
0.5hr内将化合物2(99.7g,0.309mol,1.6当量)滴加至溶液。将混合物在0℃下搅拌1hr并升温至25℃，并搅拌16hr直至HPLC显示99％转化率。过程控制显示非对映体比为1.75:1的化合物3(ii)-Sp:化合物3(i)-Rp。
0.5hr内将化合物2(99.7g,0.309mol,1.6当量)滴加至溶液。将混合物在0℃下搅拌1hr并升温至25℃，并搅拌16hr直至HPLC显示99％转化率。过程控制显示非对映体比为1.75:1的化合物3(ii)-Sp:化合物3(i)-Rp。
[0095] 使用MeOH(75mL)淬灭反应并放置以在25℃下搅拌2hr。将反应混合物浓缩为150至175mL，然后填充乙酸异丙酯(IPAc)(500mL)，并将混合物浓缩为200至250mL。在IPAc(750mL)和2N HCl(300mL×2)之间将剩余物分层。将有机层分离并使用饱和NaHCO3(250mL)水溶液和水(250mL)洗涤。
[0096] 将溶液浓缩为150至200mL并填充MTBE(500mL)。将溶液再次浓缩为150至200mL。剩余物中IPAc的量为约25mL。将MTBE(500mL)填充至混合物并将混合物在30℃下搅拌
2hr。将混合物冷却至0℃并搅拌4hr，并过滤以提供具有90％非对映异构体纯度的粗化合物3(ii)-Sp。在50℃下，在MTBE(500mL)中将粗化合物3(ii)-Sp制浆2hr。然后，将混合物冷却至0℃并搅拌2hr，并且过滤以提供36g(35％产率)的具有98％纯度的纯净化合物
3(ii)-Sp(化合物3(ii)-Rp：2％)。
2hr。将混合物冷却至0℃并搅拌4hr，并过滤以提供具有90％非对映异构体纯度的粗化合物3(ii)-Sp。在50℃下，在MTBE(500mL)中将粗化合物3(ii)-Sp制浆2hr。然后，将混合物冷却至0℃并搅拌2hr，并且过滤以提供36g(35％产率)的具有98％纯度的纯净化合物
3(ii)-Sp(化合物3(ii)-Rp：2％)。
[0097] 方法C
[0098] 在0℃下搅拌2’-甲基尿苷(50g,0.193mol,1当量)和N-甲基咪唑(NMI)(79.5g,0.968mol,5.0当量)的甲基异丁基酮(MIBK)(300mL)溶液。在0.5hr内将化合物2(99.7g,0.309mol,1.6当量)滴加至溶液。将混合物在0℃下搅拌5hr，升温至并搅拌
16hr直至过程控制显示95％转化率并且非对映体比为2.1:1的化合物3(ii)-Sp:化合物
3(i)-Rp。
16hr直至过程控制显示95％转化率并且非对映体比为2.1:1的化合物3(ii)-Sp:化合物
3(i)-Rp。
[0099] 通过缓慢加入2N HCl(300mL)并在20℃下搅拌1hr淬灭反应。将有机层分离并使用2N HCl(300mL)、7％NaHCO3(300mL)和水(250mL)洗涤。
[0100] 将溶液浓缩为约150mL并填充MTBE(500mL)。将混合物升温至50℃，搅拌1hr，在1hr内冷却至0℃并搅拌4hr。过滤固体以提供具有95％纯度和4％非对映异构体的粗产物。在50℃下在MTBE(500mL)中将粗产物制浆2hr。然后，将混合物冷却至0℃，搅拌2hr并过滤以提供具有98％纯度的纯净化合物3(ii)-Sp(化合物3(ii)-Rp：2％)。在RT下，在真空下将固体干燥过夜以提供40g(38％产率)的3(ii)-Sp。
[0101] 实施例2的方法A、方法B和C有利地提供化合物3，当与2011年9月19日提交的第2012/0071434号美国公开中描述的用于制备化合物3的方法相比对化合物3(ii)-Sp具有更大选择性，所述公开通过引用并入本文用于其在实施例3中化合物3的制备的公开内容的限制目的。分别从实施例2的方法A、实施例2的方法B和实施例2的方法C获得1.68:1、1.75:1和2.1:1的化合物3(ii)-Sp:化合物3(i)-Rp的非对映体比，对比于，在通过SFC或结晶(步骤4：3b(i)-Rp和3b(ii)-Sp的分离)分离之前从第2012/0071434号美国公开的实施例3中获得的1:1的非对映体比。
[0102] 实施例4
[0103] 化合物(C)(i)和化合物(C)(ii)的制备
[0104]
[0105] 在0℃下，在10分钟内向搅拌的化合物2(5g,15.6mmol,1当量)的乙腈溶液(30mL)加入NMI(1.3g,15.6mmol)。将混合物在0℃下搅拌30min，然后升温至25℃并搅拌30mins。将反应混合物浓缩以提供具有2.3:1比例的两种非对映异构体的混合物形式的化合物(C)(i)和(C)(ii)(6.3g,定量)。分析产物而不进一步纯化。
[0106] 图1示出产物的1H NMR光谱。1H NMR(400MHz,CD3CN)δ1.1-1.3(6H,m),1.4-1.6(3H,m),4.0(3H,s),4.1-4.3(1H,m),4.8-5.0(1H,m),7.2-7.5(5H,m),7.6(1H,s),8.5(1H,m)和31 31
9.9-10.0(1H,m)。图2示出产物的 P NMR光谱。 P NMR(162MHz,去耦,CD3CN)δ57.6(s,较少非对映异构体)和58.7(s,较多非对映异构体)。产物的LCMS(ESI)光谱在图3A和+
3B中给出：测定C16H23N3O3PS 的质量为368.118(计算的精确质量为368.12)。
9.9-10.0(1H,m)。图2示出产物的 P NMR光谱。 P NMR(162MHz,去耦,CD3CN)δ57.6(s,较少非对映异构体)和58.7(s,较多非对映异构体)。产物的LCMS(ESI)光谱在图3A和+
3B中给出：测定C16H23N3O3PS 的质量为368.118(计算的精确质量为368.12)。
[0107] 尽管为了清楚和理解目的通过例示和实施例相当详细地描述了前述内容，但本领域技术人员理解在不背离本公开实质下能进行许多和各种修改。因此，应当清楚地理解，本文公开的形式仅为例示性的并且不意图限制本公开的范围，而相反意图还包括属于本发明真实范围和实质的所有修改和替代物。
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