本发明涉及多肽及其制备方法、含有该多肽的药物制剂及其作为药物的应用，如治疗生长激素释放抑制因子受体阳性肿瘤，或作为体内诊断显像剂的应用。

GB-A-2，225，579公开了带有至少一个能够进行标记以用于体内诊断和治疗的螯合基团的生长激素释放抑制因子肽。这些化合物能结合至生长激素释放抑制因子受体上，例如由肿瘤或转移瘤表达或过渡表达的受体。

本发明提供了带有至少一个螯合基团的新的生长激素释放抑制因子肽配位体，这些螯合基团选自特别适于Tc、Rh、Cu、Co或Re标记的一种双功能N4-螯合基团和特别适于In或Y-标记的一种双功能聚氨基-聚羧酸螯合基团，这些结合至氨基基团上的螯合基团不会显著地干扰或阻碍所修饰的肽与受体的结合。这种螯合基团可直接或间接通过间隔基结合至生长激素释放抑制因子肽上。

根据本发明，提供了式Ⅰ化合物：

X-HN-P Ⅰ

其中X为选自下列的一个基团：

a）式X1的螯合基团

其中：

R21至R28各自独立地为氢、C1-6烷基或羟基取代的C1-6烷基，

R29至R30的其中之一是氢、C1-6烷基或一种氨基保护基，另一个则是氢或C1-4烷基，

S为2、3或4，

Z是二价基团，并且

Y1是一单键或间隔基团，以及

b）式X2的基团

[R1]-CH2-R2-NH-Y2（X2）

其中R1是一个由聚氨基-聚羧酸或酸酐衍生的并在叔位碳原子上带有-CH2-R2-NH-Y2部分的双功能螯合基团。

R2是C1-3亚烷基或可任意取代的亚苯基，和

Y2为-CO-或间隔基团，该间隔基团在一端含有-CO-、在另一端含有-CH2-基团或者在两端均为-CO，

P-NH-为式P-NH2的生长激素释放抑制因子肽的N-末端残基。

这些化合物此后称作本发明的配位体。

术语“生长激素释放抑制因子肽”包括天然产生的生长激素释放抑制因子（14肽）以及其类似物或衍生物。

这里所用的衍生物或类似物指由天然产生的14肽生长激素释放抑制因子衍生而来的任何直链或环状多肽，其结构中一个或多个氨基酸单位已经缺失和/或由一个或多个其它氨基酸残基替代，和/或其结构中的一个或多个功能基团已由一个或多个其它基团替代和/或一个或多个基团被一个或数个其它等同基团替代。一般地，该术语包含了所有修饰的天然产生的生长激素释放抑制因子肽的衍生物或类似物，这些衍生物或类似物显示了与未修饰的生长激素释放抑制因子肽性质相似的作用，例如它们能与生长激素释放抑制因子受体结合。

环状、桥式环状以及直链生长激素释放抑制因子类似物是已知的化合物。这些化合物及其制备在欧洲专利29，579、215，171、203，031以及214，872中进行了描述。

优选的本发明配位体为式Ⅰ的化合物，其中P-NH-为式（a）的一个残基

其中：R是：a）可由F、Cl、Br、NO2、NH2、OH、C1-3烷基和/或C1-3烷氧基任意在环上取代的L-或D-苯丙氨酸残基;

b）前述a）所定义范围以外的天然或非天然α-氨基酸残基或相应的D-氨基酸残基，或

c）二肽残基，其中各氨基酸残基是相同或不同的并且选自前述a）和/或b）所定义的氨基酸残基，

Y1a和Y2a一起表示直连键或者独立地为氢，

B是可由卤素、NO2、NH2、OH、C1-3烷基和/或C1-3烷氧基在环上任意取代的-Phe-（包括五氟丙氨酸），或是β-萘基-Ala，

C是可任意地α-N-甲基化的并且可由卤素、NO2、NH2、OH、C1-3烷基和/或C1-3烷氧基任意在苯环上取代的（L）-Trp-或（D）-Trp-，

E是Thr、Ser、Val、Phe、Ile或氨基异丁酸或氨基丁酸残基，

G为下式基团

其中：

R7为氢或C1-3烷基，

R10为氢或一种生理上可接受的、生理条件可水解的酯的残基，

R11为氢、C1-3烷基、苯基或C7-10苯基-烷基，

R12为氢、C1-3烷基或式-CH（R13）-X3的基团，

R13为-CH2OH、-（CH2）2-OH、-（CH2）3-OH、或-CH（CH3）OH，或代表结合于天然或非天然α-氨基酸的α-碳原子上的取代基（包括氢），和

X3为式-COOR7、-CH2OR10或-CO-N 的基团，其中：

R7和R10意义同上，

R14为氢或C1-3烷基，和

R15为氢、C1-3烷基、苯基或C7-10苯基烷基，和

R16为氢或羟基，其条件是：

当R12为-CH（R13）-X3时，则R11为氢或甲基，

其中残基B和E具有L-构型，并且残基在2-和7-位上具有（L）-或（D）-构型。

卤素优选氟、氯或碘，更优选氟。

在式（a）的残基中，不管单独地或者以任何结合形式或部分结合形式，以下意义是优选的：

1.1.当R具有a）的含义时，优选a′）为L-或D-苯丙氨酸 或-酪氨酸残基。更优选a′）为L-或D-苯丙氨酸残基。

1.2.当R具有b）或c）的含义时，所定义的残基优选亲脂基。优选残基b），则b′）为具有烃侧链的α-氨基酸残基，其烃侧链为例如有3个、优选4个或更多碳原子如多至7个碳原子的烷基，或萘-甲基或杂芳香基侧链，例如吡啶-甲基或吲哚-3-基-甲基，所述残基具有L-或D-构型。优选残基c）为二肽残基，其中的单个氨基酸残基是相同或不同的并且选自上述a′）和b′）所定义的氨基酸残基。

1.3.最优选的R具有a）的含义，尤其是a′）。

2.B是B′，而B′为Phe或Tyr。

3.C是C′，而C′为（D）Trp。

4.E是E′，而E′为Ser、Val或Thr，尤其是Thr。

5.G是G′，而G′为式-CO- 的基团，尤其是式-CO- （该情况下R11＝H或CH3）的基团。在后一种情况下，-CH（R13）-X3部分优选为L-构型。

6.1.R11优选氢。

6.2.作为结合于天然或非天然氨基酸的α-碳原子（即式H2N-CH（R13）-COOH的α-碳原子）上的取代基时，R13优选为-CH2OH、-CH（CH3）-OH、 -（CH2）2-OH、-（CH2）3-OH、异丁基、丁基、萘基-甲基或吲哚-3-基-甲基。尤其是-CH2OH或-CH（CH3）OH。

6.3.X3优选式-CO- 或-CH2-OR10的基团，尤其是式-CH2-OR10的基团，并且R10优选为氢或作为酯残基甲酰基、C2-12烷羰基、C8-12苯基烷羰基或苯甲酰基。最优选R10为氢。

7.优选Y1a和Y2a一起代表直连键。

下列残基用于说明式（a）的残基：

更优选的本发明配位体为式Ⅰ化合物，其中P-NH-为式（b）或（c）的残基：

可以理解X1中的-Z-Y1替代了氢原子结合至-[CH2]s中的一个碳原子上。

在式X1的基团中，作为R21至R28的任意一项，C1-6烷基优选C1-3烷基，尤其是甲基。羟基取代的C1-6烷基优选羟基取代的C1-3烷基，尤其是-CH2OH或-CH2CH2-OH。最优选的R21至R30为H。

作为R30，保护基的例子例如已在“Protective Groups in Organic Synthesis”，T.W.Greene，J.Wiley ＆Sons NY（1981），219-287中公开，例如酰基如乙酰基、甲氧琥珀酰基、羟基琥珀酰基或如可由对-甲氧羰基、对-甲氧基或对-硝基在其苯环上任意取代的苯甲酰基;烷氧羰基如叔-丁氧羰基;芳甲氧羰基如9-芴甲氧羰基或苄氧羰基（可由对-甲氧基、对-硝基、对-氯代或间-苯基在其苯环上任意取代）;芳甲基如可由对-甲氧基、对-硝基或对-氯代任意地在环上取代的苄基;或芳磺酰基如可由对-甲基或对-甲氧基任意地在环上取代的苯磺酰基，或如可由氨基或二（C1-4烷基）氨基任意地在环上取代的萘磺酰基。

优选R29和R30其中之一为H或CH3，更优选R29和R30均为H。

Z的例子包括式-（Z1）t-Z2的基团，其中Z1为C1-6亚烷基;通过一个氧原子或-NH-结合于碳原子上的C1-6亚烷基;或（CH2）k-O-，其中k为0、1、2或3;t为0或1，当Y1为单键时，Z2来源于能够与生长激素释放抑制因子肽末端氨基反应的基团，或者当Y1为间隔基团如-NCS或者羧基或其功能性衍生物如酰基卤、酸酐或酰肼时，Z2来源于能够与能够提供Y1的化合物反应的基团。

Z优选为源于-CH2- -NCS的基团，尤其当Y1为单键时。

作为间隔基团，Y1的例子包括如式（b）的基团：

-Z3-R5-X4（b）

其中：

Z3为源自能够与衍生Z的功能部分进行共价反应的功能部分的二价基团，

X4为源自能够与生长激素释放抑制因子肽末端氨基进行共价反应的功能部分的二价基团，和

R5为可任意插入一个或多个选自氧、硫、CO、-NHCO-、-N（C1-4烷基）-CO-、-NH-和-N（C1-4烷基）-的杂原子或基团的C1-6亚烷基;羟基取代的C1-6亚烷基;C2-6亚链烯基;可任意取代的环亚烷基; ; 或通式（α1）的基团

其中m′，n′各自独立地为0、1、2或3，A环可任意被取代，并且R5为结合于天然或非天然α-氨基酸的Cα上的残基。

R6的例子包括如结合于Ala、Leu、Ile、Val、Nle、Lys或Orn的Cα上的残基。

当R5为取代的环亚烷基或为取代的A环或含有取代的A环时，R5优选被多至3个的选自卤素、羟基、C1-3烷基和C1-3烷氧基的取代基取代。优选环亚烷基部分或A环未被取代。

Z3和X4各自独立地例如可为-CO-或-CS-。Z3也可是例如-NH-。式（b）的基团合适的例子例如可是琥珀酰基、β-Ala或源自6-氨基-己酸的二价残基。优选Y1为单键。

在式X2基团中，R1优选为双功能螯合基团，该螯合基团源于聚氨基聚乙酸或酐，例如二亚乙基三胺五乙酸（DTPA）、大环化合物如1，4，7，10-四氮杂环十二烷-N，N′，N″，N＂＇四乙酸（DOTA）、1，4，8，11-四氮杂环十四烷-N，N′，N″，N″＇四乙酸（TETA）或1，4，7，10-四氮杂环十三烷-N，N′，N″，N″＇四乙酸（TRITA）。除-CH2-R2-NH-Y2部分以外，R1还可进一步被例如C1-3烷基取代。

R1更优选为源自DTPA、4-甲基-DTPA或DOTA的螯合基团。

当R2为取代的亚苯基时，R2可以带有多至三个取代基，这些取代基选自卤素、羟基、C1-3烷基和C1-3烷氧基。R2优选为未被取代的亚苯基。

当Y2为如前所示的间隔基团时，它可以是例如-CO-CH2-、-CO-（CH2）2-、-CH2-CO-、-（CH2）2-CO或式（b′）的基团，

-CO-R5-CO-（b′）

其中R5的意义如前。

式（b′）残基的合适例子是二羧酸的二羰残基，如琥珀酰基。

本发明的配位体可以例如以游离态或盐的形式存在。盐包括例如有机酸、聚合酸或无机酸的酸加成盐，如盐酸盐和乙酸盐。

本发明还包括制备本发明的配位体的方法。这些配位体可以以类似于已知方法的方法制备。

本发明的配位体例如可以如下的方法制备：

a）去除至少一个以被保护形式存在的式Ⅰ化合物中的保护基，基

b）借助酰胺键将两个肽单位连接起来，每个肽单位均含有至少一个以保护或未保护的形式存在的氨基酸或氨基醇，并且其中一个肽单位含有X基团，其中酰胺键是以能获得所需氨基酸顺序的方式存在的，然后任选地实现制备方式中的步骤a），或

c）将可任意带有能产生Y2的功能部分或间隔基团Y1的螯合剂和以保护或未保护的形式存在的所需生长激素释放抑制因子肽连接在一起，其方法是将X基团固定于肽的末端氨基上，然后任选地 实现制备方法中的步骤a），或

d）连接螯合剂和以保护或未保护的形式存在的所需生长激素释放抑制因子肽，该肽在其末端氨基上带有能够产生Y2或间隔基团Y1的功能部分，其连接方法是将X基团固定于肽的末端氨基上，然后任选地实现步骤a），或

e）去除带有X基团的未保护或保护的肽的功能基团或将其转化成另一功能基，以获得另一式Ⅰ的未保护或保护的化合物，在后一种情况下，实现了制备方法的步骤a），并且使如此获得的配位体恢复至游离态或盐的形式。

上面的反应可以类似于已知的方法如在下面的实施例中所描述的方法实现，在这些反应中，如果需要，适用于肽或适于所需螯合基团的保护基可被用作不参与反应的功能基团。术语保护基也可包括具有功能基团的聚合树脂。

带有X基团并在步骤b）中应用的肽片段可以用下述方法制备，即将以保护或未保护的形式存在并含有至少一个氨基酸的肽片段与如制备方法中步骤c）或d）所示的螯合剂反应。

带有能够提供Y2或Y1的功能部分并用作制备方法的步骤b）或d）中起始物的生长激素释放抑制因子肽或者其片段或氨基酸可以按下述方法制备，即将肽、其片段或氨基酸与能提供Y2或Y1的化合物反应，这种化合物例如的ω一氨基羧酸、二羧酸或ω-甲酰基羧酸，如NH2-R5-COOH、琥珀酸、己二酸、二羟乙酸或其功能性衍生物。

带有能提供Y2或Y1的功能部分并在制备方法步骤b）或c）中用作起始物的螯合剂可以按照如前所示的方法，将螯合剂与能提供 Y2或Y1的化合物反应制备。

其中Y2为-CO-的化合物可以用由与光气反应获得的原料制备。

羧酸或二羧酸的功能性衍生物是指如酐类、酰基卤类、酯类等…。

根据制备方法步骤e），例如式Ⅰ化合物（其中Y1和Y2均为H）能被氧化成其中Y1和Y2一起构成直连键的式Ⅰ的化合物。

以游离态形式或以可药用盐的形式存在的本发明的配位体为有用的化合物。根据进一步的实施方案，本发明的配位体可以与核素形成复合体，这些核素有如能发射γ-、正电子、α-或β-的核素或有俄歇电子能级（Auger-e--Cascades）的核素。

因此，本发明也提供了如上所定义的以游离态或盐的形式存在的本发明的配位体，其制备方法以及它们在体内诊断和治疗中的应用，所说的本发明的配位体与核素形成复合体（这以后称作本发明的螯合物）。

式Ⅰ的配位体（其中X为式X1的螯合基团）优选与Tc、Rh、Cu、Co或Re同位素，如99mTc、186Re、188Re、105Rh、57Co、64Cu或67Cu，优选99mTc形成复合体。式Ⅰ的配位体（其中X为式X2的螯合基团）优选与放射性镧系元素形成复合体，尤其是111In、90Y、140La、161Tb、169Er、212Bi、153Sm、64Cu、67Cu、211At、111Ag、32P、51Cr、67Ga、71Ge、169Yb，更优选能发射α-或β-的核素，最优选90Y。

本发明的螯合物可以通过将配位体与能产生相应核素的化合物反应进行制备，这种化合物是例如金属盐，优选水溶性盐。该反应可以 用已知方法的类似方法进行，已知的方法有例如由D.E.Trontner，W.A.Valket.T.J.Hoffmann等，Int.J.Appl.Radiat.lsot.1984，35（6），467-70所公开的方法。99mTc可以以氧化的形式应用，如99mTc-高锝酸盐，它可在还原条件下形成复合体。

优选在本发明配位体稳定的pH值下实现配位体的复合。

另外，核素也可以以与中间体螯合剂形成复合体的形式提供给溶液，这种中间体螯合剂例如为形成螯合物复合体的螯合剂，使核素在配位体的生理pH条件下可以溶解但比螯合物有更小的热动力学稳定性。这种中间螯合剂的例子为4，5-二羟基-1，3-苯二磺酸（Tiron）、柠檬酸（盐）、酒石酸（盐）、葡庚糖酸（盐）。在这一方法中，核素交换配位体。

上述反应在避免痕量金属污染的条件下可以很方便地进行。优选使用蒸馏的去离子水、超纯试剂、无载体加入的放射活性以减少痕量金属的效应。

本发明的螯合物可以以如游离态或盐的形式存在。盐包括如有机酸、聚合酸或无机酸的酸加成盐，例如盐酸盐和乙酸盐。

本发明的螯合物以及其可药用盐显示出药物活性，从而或者当与能发射γ-或正电子的核素如111In、99mTc或68Ga形成复合体时，用作显像剂，例如显现生长激素释放抑制因子受体积聚如生长激素释放抑制因子受体阳性肿瘤及转移瘤、显示生长激素释放抑制因子受体的炎性或自身免疫性疾病、结核病或移植后的器官排斥;或者当与能发射α-或β-的核素、或与有俄歇电子能级的核素如90Y、186Re或188Re按照标准试验所示形成复合体时，用作放射性药物， 用于体内治疗生长激素释放抑制因子受体阳性肿瘤和转移瘤。

特别地，本发明的配位体和本发明的螯合物具有能被结合试验测定的对生长激素释放抑制因子受体的亲和力，测定方法为由J.C.Reubi，Life  Sci.36，1829（1985）和C.Bruns等，Biochem.J.，265，39（1990）所公开的方法。

已观察到本发明的螯合物如111In、88Y、90Y或99mTc螯合物与生长激素释放抑制因子受体结合具有良好的亲和力，其pKi值为约8至11。实施例2的化合物pKi值为9.4，实施例9和10的化合物pKi值分别为9.0和8.9。

根据标准试验方法，如在GB-A-2，225，579中所公开的方法，通过体内试验也能显示本发明的螯合物对生长激素释放抑制因子受体的亲和力。例如，在给患有外分泌性胰腺肿瘤的大白鼠注射实施例2化合物4小时后，其肿瘤积聚了1.9±0.4%注射剂量/克（n＝6）。

给药本发明螯合物如111In、86Y或99mTc螯合物，剂量为1至5μg/Kg的、标记有0.1至5mCi（优选0.1至2mCi）的配位体，之后可以检测出肿瘤位置及主要发生分泌的器官。螯合物（特别是其中X为X2的螯合物）具有高的血浆稳定性并且与正常器官相比，在肿瘤组织中有高浓度的积聚。

因此，在一系列特定或可选择的实施方案中，本发明还提供了：

1.对受者体内检测生长激素释放抑制因子受体积聚的方法，它包括a）给所说受者施用本发明螯合物和b）记录被所说螯合物标记的受体的位置。

用于本发明体内检测的方法的本发明螯合物为与能发射γ-或正 电子的核素复合形成的螯合物，所述核素尤其是Tc、Re、In或Cu，更优选99mTc、111In或86Y。

在方法（1）中用作显像剂的本发明螯合物可以腹膜内施用，优选静脉内施用，如以可注射溶液剂或悬浊剂的形式，优选一次注射。适宜的剂量必然依例如配位体而不同。注射的适宜剂量范围为保证能用现有已知照相扫描法显像。

本发明的螯合物有利的给药剂量为含有0.1至50mCi的稳定螯合的核素，优选0.1至30mCi;更优选为2至30mCi/μMol配位体，尤其是当核素为99mTc时。核素为111In或86Y时，螯合物可以0.1至10mCi的剂量施用。

所指示的剂量范围，例如X为X1时，为1至200μg标记有例如2至30mCi的99mTc的螯合物，或例如X为X2时，为1至20μg标记有例如1至10mCi的111In或86Y的螯合物。

螯合物在生长激素释放抑制因子受体积聚位置富集后，随后进行相应的显像技术，如应用核医学影像仪器，例如扫描器、γ-相机、旋转γ-相机、PET，其每种仪器优选采用计算机辅助。本发明螯合物也能用于对生长激素释放抑制因子受体阳性肿瘤进行放射性引导外科手术，尤其是161Tb螯合物。

本发明的In或Tc螯合物基本上是从肾脏排泄。

2.对需要治疗的受者进行体内治疗生长激素释放抑制因子受体阳性肿瘤和转移瘤的方法，它包括给所说受者施用治疗有效量的本发明螯合物。

用于本发明体内治疗方法的本发明螯合物为与能发射α-或β-的核素或与有俄歇电子能级的核素如前面公开的（优选90Y）而复合 形成的螯合物。

本发明治疗方法中所用的剂量根据例如进行治疗的具体情况当然会有所不同，所述具体情况例如有肿瘤的体积、所用的具体螯合物和所需的治疗方案。一般地，剂量是以每个器官的放射性分布和所观察到的靶组织摄取为基础而计算的。能发射β-的螯合物可在1至3周的时间内，在几个时间点施用。例如其中X为X2时，单次剂量可以为从0.1至20μg标记有10-40mCi例如90Y的螯合物。

所示的剂量范围为从0.1-20μg螯合物（其中X为X2，标记有如10至40mCi的90Y）或从1至200μg螯合物（其中X为X1，标记有如0.1至1.5mCi的Re）。

用于方法（2）中的本发明螯合物可以以常规途径施用，尤其是例如以可注射溶液剂或悬浊剂的形式腹膜内或静脉内施用。它们也可有益地以输注形式施用，例如输注30-60分钟。依据肿瘤的位置，螯合物可尽可能靠近肿瘤位置施用，例如通过导管的方法。所选择的施用方式可根据所用螯合物的药代动力学特点及排泄率决定。

本发明的螯合物可以以游离态或以可药用的盐形式施用。这种盐可以用常规方法制备并能表现出与游离化合物相同的活性。

应用于本发明方法中的本发明螯合物可优选在施用给受者之前不久进行制备（即以所需核素进行放射标记）。

本发明螯合物可适用于对肿瘤显像或治疗，这些肿瘤有例如垂体瘤、胃肠胰腺瘤、中枢神经系统肿瘤、乳腺肿瘤、前列腺肿瘤、卵巢肿瘤或结肠肿瘤、小细胞肺癌、副神经节瘤、肾癌、皮肤癌、成神经细胞瘤。嗜铬细胞瘤、髓状甲状腺癌、骨髓瘤、淋巴瘤、何杰金氏病和非何杰金氏病，骨肿瘤及其转移瘤。

根本发明的进一步方面，提供了一种药物组合物，该组合物包括以游离态或可药用盐的形式存在的本发明配位体或螯合物，以及一种或多种其可药用的载体或稀释剂。这种组合物可以用常规方法制备。

根据本发明的组合物也可以为分开包装的形式，包装上有将配位体与所需核素混合以及施用所获得螯合物的指导说明。组合物也可以为孪生包装（twin-pack）的形式，即在单个的包装中含有分开的单位剂量的配位体和所需核素，并附有将其混合和施用螯合物的指导说明。稀释剂或载体也可以为单位剂量的形式。

在下述实施例中，所有温度单位均为℃，并且[α]20D值未校正。实施例中使用了下述缩写：

DMF    二甲基甲酰胺

Boc        叔丁氧羰基

TFA    三氟乙酸

Fmoc    9-芴基甲氧羰基

AcOH    乙酸

HOBT    1-羟基苯并三唑

Octreotide

实施例1

6－（对异硫氰酸根合苄基）－1，4，8，11－四氮杂十一烷基

-Thr-醇，和2滴三乙胺加入到595mg（497μmol）的Fmoc-6-（对异硫氰酸根合苄基）-1，4，8，11-四氮杂十一烷的溶液中。室温搅动24小时后，将黄色悬浊液在硅胶上用CHCl3CH3OH97∶3作为洗脱液进行层析。冷冻干燥得到无色固体。

MS（FAB）m/z（相对密度）：2439（MH+，25），1343（100）.

Rf.0，42（SiO2，CHCl3/CH3OH 9∶1）.

b）将10ml哌啶/DMF（1∶4v/v）加入到上面获得的530mg（217μmol）化合物中，混合物在室温保持45分钟。高度真空下蒸馏去除溶剂和碱后，在硅胶上对残余物进行层析。用CHCl3/CH3OH/AcOH/H2O 7∶4∶1∶1去除杂质，并用CHCl3/CH3OH/AcOH 5∶8∶3洗脱未保护的化合物。通过在5μm的Spherisrb柱上进行HPLC脱盐（溶液A：1000ml H2O/1ml TFA;溶液B：200ml H2O/800ml CH3CN/1ml TFA;在20分钟内线性梯度从95%溶液A至5%溶液A）并冷冻干燥后，获得了无色TFA-盐形式的标题化合物。

MS（FAB）m/z（相对密度）：1326（M+，18），872（100）

Rf0.41（SiO2，CHCl3/CH3OH/AcOH 5∶8∶3）

用作原料的6-（对异硫氰酸根合苄基）-1，4，8，11-四氮杂十一烷可按如下方法制备：

a）6-（对硝基苄基）-1，4，8，11-四氮杂-5，7-二氧代十一烷

将2g新鲜蒸馏的乙二胺一次性加入至0.5g对硝基苄基-丙二酸二乙基酯的50ml CH3OH的溶液中，将混合物加热至80°回流。12小时后，将混合物冷却至室温。将所产生的混浊浅黄色混合物置于冰箱内结晶。滤除残余物。应用硅胶和作为流动相的异丙醇0.25%氢氧化铵8∶2进行中压层析以纯化。收集RfO.34的级份。蒸发后，获得呈白黄色固体的标题a）的化合物。

FAB-MS（基质∶硫甘油）MH+324

b）6-（对硝基苄基）-1，4，8，11-四氮杂十一烷

在室温将30ml 1M BH3的THF溶液加入至480mg6-（4-硝基苄基）-1，4，8，11-四氮杂-5，7-二氧代-十一烷中，混合物加热回流60小时。通过小心滴加无水CH3OH至冷却到0℃的黄色溶液中，破坏过剩的乙硼烷，用CH3OH浓缩反应混合物数次。用超声浴使残余物在无水乙醇中悬浮，然后过滤。使气态HCl通过黄色滤液20分钟。所产生的沉淀用CHCl3/CH3OH/25%NH4OH 5∶5∶2在硅胶柱上纯化。为获得盐酸盐，将气态HCl通过已纯化的胺的乙醇溶液中。

Rf：0.36（SiO2CHCl3/CH3OH/25%NH4OH 5∶5∶2）

MS（FAB）m/z相对密度∶296（MH+，100）

c）Fmoc-6-（对硝基苄基）-1，4，8，11-四氮杂十一烷

在室温将750mg6-（对硝基苄基）-1，4，8，11-四氮杂十一烷·4HCl悬浮于45ml二噁烷和15ml H2O中。然后向其中加入5730mg 9-芴甲基-琥珀酰亚胺基碳酸酯和 1430mg碳酸氢钠。在室温搅动2小时后，用2N HCl调整无色悬浮液至pH4，然后冷冻干燥。用CHCl3在硅胶上对无色固体进行层析。冷冻干燥所得物质。

Rf：0.30（SiO2CHCl3/CH3OH 100∶1）

MS（FAB）m/z（相对密度）1184（M+，73），962（MH+-Fmoc，100）

d）Fmoc-6-（对氨基苄基）-1，4，8，11-四氮杂十一烷

将910mg化合物c）溶于10ml乙酸异丙基酯中并以60mlCH3OH稀释。将水逐滴加入至该溶液中直至其混浊（约4ml）。在氩气氛下加入200mg于活化Al2O3中的Pd/（5%Pd）并以H2对悬液脱气。在760mmHg下进行1小时氢化作用。然后将悬液于Hyflo上过滤，浓缩滤液，将油性残余物溶于二噁烷/H2O中并冷冻干燥。用CHCl3于硅胶上进行层析纯化后，将产物溶解在二噁烷中并冷冻干燥。

Rf：0.13（SiO2，CHCl3/CH3OH 100∶1）

MS（FAB）m/z（相对密度）∶1154（M+，35），

932（MH+-Fmoc，100）.

e）Fmoc-6-（对异硫氰酸根合苄基）-1，4，8，11-四氮杂十一烷

在室温将460μl二氯硫化碳加入到640mg化合物d）在4ml CCl4与4ml 3N HCl的两相混合物中。室温搅动桔 黄色混合物1小时。在高度真空蒸馏除溶剂后，用二噁烷/水提取油性残余物并冷冻干燥。所得浅黄色固体不需进一步纯化即可使用。

Rf：0.29（SiO2，CHCl3/CH3OH 100∶2）

MS（FAB）m/z相对密度∶1196（M+，100），974（MH+-Fmoc，84）

实施例2

实施例1的99mTc标记的化合物

将1ml预先用氮气流脱气的酒石酸盐溶液（2.09×10-5mol，pH＝7）和溶于0.1N HCl中的10μl SnCl2·2H2O（1.49×10-8mol）加至于生理盐水中具有30-45mCi放射性的1ml99mTcO4Na发生器洗脱液（洗脱3小时后）中，然后加入50μg实施例1化合物并将所得混合物搅动。如果需要，可以在PRP-1 Hamilton柱（有机聚合物）上纯化螯合物。

实施例3

a）将150mg琥珀酰基-DPhe1-ε-Fmoc-Lys5-Tyr3-octreotide、100mg N，N，N′，N″，N″-五（叔丁基- 羧基甲基）-1-[（4-氨基苯基）甲基]-二亚乙基三胺、35mgDCCI和27mg HOBT溶于20ml DMF中。室温16小时后，减压蒸发除去溶剂。用氯仿/甲醇/50%AcOH 8/2/0.25在硅胶60上纯化得到纯的N，N，N′，N″，N″-五（叔丁基羧基甲基）-1-[（4-酰氨基-琥珀酰基-DPhe1-Tyr3-ε-Fmoc-Lys5-octreotide）苄基]-二亚乙基三胺。

b）裂解Lys5位上的Fmoc-基团：

在室温用10ml DMF/哌啶4/1处理100mg步骤a）的化合物30分钟。然后去除溶剂（高度真空）并用氯仿/甲醇/50%AcOH8/2/0.25→7/4/2在硅胶上进行纯化得到纯净和均匀的N，N，N′，N″，N″-五（叔丁基-羧基甲基）-1-[（酰氨基-琥珀酰基-DPhe1-Tyr3-ε-Fmoc-Lys5-octreotide）苄基]-二亚乙基三胺。

c）去除叔丁基基团：

将30mg步骤b）终产物悬浮于3ml二氯甲烷中。在惰性气氛（氩）下以3ml乙烷二硫醇处理后，加入3ml三氟乙酸/水95/5。室温24小时后，加入100ml二乙基醚/3N HCl使粗品标题化合物沉淀。以过滤法收集该化合物，并用水/乙腈/TFAC缓冲液A：100/00.1%TFA和B：200/800 0.1%（TFA）缓冲系统（在20分钟内5→95%B）于RP18-HPLC上纯化和脱盐，从而得到标题化合物。

[α]20D＝-17℃（C＝1.0，溶剂95%AcOH）MH+：1615。

起始物的制备如下：

d）ε-Fmoc-Lys5-Tyr3-octreotide

将5g Tyr3-octreotide的乙酸酯溶解于200ml DMF/水（3/1）中，然后向其中加入5g碳酸氢钠、1.6g芴甲氧羰基-羟基琥珀酰亚胺酯（FmocHOSu）。在薄层层析控制（溶剂系统氯仿/甲醇/AcOH8/2/0.25）下反应1小时后，将反应混合物以800ml 0.1N NaOH溶液稀释，并以乙酸乙酯/甲醇9/1萃取。用硫酸钠干燥有机相，并使有机相减压蒸发。

以硅胶60（Merck    9385）作固定相、二氯甲烷/甲醇（9/10）作洗脱液进行纯化。收集纯化等级高于95%（TLC控制）的级份，并蒸发去除溶剂。

[α]20D＝-18.7℃（C＝0.5，溶剂95%AcOH）

e）琥珀酰基-DPhe1-ε-Fmoc-Lys5-Tyr3-octreotide

将600ml ε-Fmoc-Tyr5-Tyr3-octreotide溶于100ml含有1ml三乙胺的水/二噁烷3/2混合物中。加入100mg琥珀酐后，将反应混合物在室温保存3至4小时。通过冷冻干燥及随后在硅胶柱上用氯仿/甲醇/50%AcOH 9/1/0.125作洗脱液纯化分离标题化合物。

[α]20D＝-34°（C＝0.25，溶剂95% AcOH）

用适宜的原料重复实施例3的步骤可制备下列化合物：

[α]20D＝-14.2°（c＝0.58，溶剂95%AcOH）MH+：1573

MH+：1626非晶形

实施例5中用作原料的乙醛酰-DPhe1-ε-Fmoc-Lys5-Tyr3-octreotide可按下述方法制备：

将620mg ε-Fmoc-Lys5-Tyr3-octreotide溶解在50ml水/二噁烷1/3混合物中，在加入70mg二羟乙酸和41mgNaCNBH3后，用0.1N HCl将反应混合物调至pH5并在室温保存过夜。通过冷冻干燥和随后的用氯仿/甲醇/50%AcOH 8/2/0.25→7/3/1作为洗脱液在硅胶柱上进行纯化分离标题化合物。

[α]20D＝-42°（c＝0.5，溶剂95%AcOH）

实施例6中用作原料的N，N，N′，N″，N″-五-叔丁基-羧基甲基-1-（4-氨基-羧基甲基苄基）-二亚乙基三胺可按下述方法制备：

将700mg    N，N，N′，N″，N″-五-叔丁基-羧基甲 基-1-（4-氨基苄基）-二亚乙基三胺溶解在25ml水/二噁烷1/2混合物中。加入103mg二羟乙酸单水化物和64mg NaCNBH3后，用0.1N HCl调节反应混合物至pH5并在室温保存5小时。通过冷冻干燥和随后的用氯仿/甲醇/50%AcOH9/1/0.125→8/2/0.25作为洗脱液在硅胶柱上进行纯化分离标题化合物。

实施例9

111In标记的实施例3的化合物

将8.6μl的111InCl3（21mCi/ml，0.01-0.03M HCl）和2μl 0.1M NaOH加入至10μl 0.1M NaOAc（pH4.0）中。再加入1μl配位体（于0.1M NaOAc pH4.0中的100μM实施例3的化合物）。获得的溶液在实验环境中存留3至30分钟以完全进行复合作用。取出一份溶液用于HPLC质量控制，从而确定复合至轭合物的111In的水平，轭合物表现为乙酸复合物。在μbondapak （注册商标，Waters）C18柱（3.4×300mm）上，用20mM NH4OAc（pH4.0）和线性0→60% MeCN梯度组成的洗脱系统以1.2ml/分的速度进行HPLC分析。一般地说，洗脱分布型显示游离111In以溶剂前沿洗脱，放射标记的轭合物在9-11分钟时洗脱。放射化学纯度一般地大于99.5%。

实施例10

88Y标记的实施例3的化合物

按下法制备88Y标记的螯合物：通过加入0.02ml在滤过的空气中蒸发至干的88Y（5mCi/ml，6M HCl），将所获残余物 溶解于20μl 0.1M NaOAc（pH4.0）中并加入4.0μl 100μM实施例3的化合物（0.1M NaOAc pH4.0）。溶液在实验环境中存留3至15分钟以完全进行复合作用。取出一份溶液用于HPLC质量控制，从而确定复合至轭合物的88Y的水平，轭合物如实施例6所公开的一样表现为乙酸复合物。放射化学纯度一般大于99.5%。

实施例11

90Y标记的实施例3的化合物

按下法制备90Y标记的螯合物：将1μl90Y（0.16mCi，0.01M HCl）加入至11μl 9μM实施例3化合物（0.1M NH4OAc pH5.0）中，溶液使用前在室温孵育3分钟。取出一份溶液用于HPLC质量控制，从而确定复合至轭合物的90Y的水平，轭合物如实施例9所公开的一样表现为乙酸复合物。放射化学纯度一般大于99.5%。

实施例9、10和11的标记方法可以用前述作为配位体的实施例4到6的化合物进行重复，从而得到相应的111In、88Y和90Y螯合物。

实施例12

90Y标记的实施例7的化合物

按下法制备90Y标记的螯合物：将10μl90Y（0.6mCi，0.04M HCl）加入至12μl 20μM实施例7的化合物（0.1M NMe4OAc，0.1%BSA，pH6.0）中，溶液使用前加热至90°维持15分钟。取出一份溶液，在进行HPLC质量控制以确定结合至轭合物中90Y水平之前以0.1M DTPA（pH6.0）稀释。放射标记的纯度一般大于99.5%，并且放射标记的化合物是稳定的，如在4℃可保持多达6天。

按照上述实施例12的方法，可以制备实施例8化合物的90Y复合物。