CNS中的恶性肿瘤的检测和治疗
阅读：647发布：2022-11-08
专利汇可以提供CNS中的恶性肿瘤的检测和治疗专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及通过检测表达整合素α10亚基或其 片段 或变体的 哺乳动物 组织并施用对整合素α10亚基特异性的药物，来诊断和 治疗 CNS的 恶性 肿瘤 的方法。，下面是CNS中的恶性肿瘤的检测和治疗专利的具体信息内容。
1.一种用于治疗中枢神经系统中的恶性肿瘤的用途的组合物，所述组合物包含与整合素α10亚基特异性结合的抗体。
2.用于根据权利要求1的用途的组合物，其中所述抗体与细胞毒性部分共价结合，所述细胞毒性部分如选自毒素、化疗剂和放射性剂的细胞毒性部分。
3.用于根据前述权利要求中任一项的用途的组合物，其中所述毒素为核糖体失活蛋白，如选自下组的核糖体失活蛋白：志贺毒素和志贺样毒素；I型核糖体失活蛋白，如天花粉蛋白和丝瓜素；II型核糖体失活蛋白，如蓖麻蛋白、凝集素和相思豆毒素；和皂草素。
4.用于根据前述权利要求中任一项的用途的组合物，其中所述抗体与生物反应调节物如细胞因子，如淋巴因子或干扰素共价结合。
5.用于根据前述权利要求中任一项的用途的组合物，其中所述组合物进一步包含一种或多种化疗剂。
6.用于根据前述权利要求中任一项的用途的组合物，其中所述组合物进一步包含至少一种药学上可接受的稀释剂、载体或赋形剂。
7.用于根据前述权利要求中任一项的用途的组合物，其中所述整合素α10亚基为整合素α10亚基的天然存在的变体、整合素α10亚基的同种型或整合素α10亚基的剪接变体。
8.用于根据前述权利要求中任一项的用途的组合物，其中所述抗体能够诱导表达整合素α10亚基的细胞的细胞死亡和/或抑制其生长和/或增殖和迁移。
9.用于根据权利要求8的用途的组合物，其中所述细胞为恶性细胞或肿瘤相关细胞。
10.用于根据权利要求9的用途的组合物，其中所述恶性细胞或肿瘤相关细胞包含选自下组的细胞：胶质细胞；周细胞；内皮细胞；造血细胞；干细胞和小胶质细胞。
11.用于根据权利要求10的用途的组合物，其中所述造血细胞选自下组：造血干细胞、T细胞、B细胞、浆细胞、NK细胞、树突细胞、巨噬细胞和单核细胞。
12.用于根据权利要求11的用途的组合物，其中所述巨噬细胞为肿瘤相关巨噬细胞(TAM)。
13.用于根据前述权利要求中任一项的用途的组合物，其中所述整合素α10亚基为整合素α10β1异二聚体的一部分。
14.用于根据前述权利要求中任一项的用途的组合物，其中所述治疗是预防性、改善性或治愈性的。
15.用于根据前述权利要求中任一项的用途的组合物，其中在所述受试者中检测到整合素α10亚基时开始所述治疗。
16.一种用于诱导与中枢神经系统中的恶性肿瘤相关的细胞的细胞死亡和/或抑制其生长和/或增殖和/或迁移的方法，其中所述细胞表达整合素α10亚基。
17.一种制剂，其包含具有对于整合素α10亚基的特异性的抗体或由其组成，用于检测与哺乳动物的中枢神经系统的恶性肿瘤相关的细胞的用途，其中所述细胞表达整合素α10亚基。
18.一种用于检测哺乳动物的中枢神经系统中的恶性肿瘤的方法，所述方法包括分析在分离样品中如下项的存在或者不存在：
a)包含整合素α10亚基多肽的抗原；和/或
b)编码整合素α10亚基多肽或其片段或变体的多核苷酸转录物，
其中a)的抗原和/或b)的多核苷酸转录物的存在指示在所述哺乳动物的中枢神经系统中的恶性肿瘤。
19.一种用于检测恶性或肿瘤相关哺乳动物细胞的方法，所述方法包括分析在分离样品中如下项的存在或者不存在：
a)包含整合素α10亚基多肽的第一抗原；
和/或
b)编码整合素α10亚基多肽或其片段或变体的第一多核苷酸转录物；和
c)包含选自EGFRvIII、巢蛋白、PSA-NCAM、GFAP、PDGFRb(CD140b)、PECAM-1(CD31)、CD45、CD68、CD163和CD206的多肽的第二抗原；和/或
d)编码多肽或其片段或变体的第二多核苷酸转录物，其中所述多肽选自EGFRvIII、巢蛋白、PSA-NCAM、GFAP、PDGFRb(CD140b)、PECAM-1(CD31)、CD45、CD68、CD163和CD206；
其中a)的第一抗原和/或b)的第一多核苷酸转录物；与c)的第二抗原和/或d)的第二转录物的存在指示所述哺乳动物细胞为恶性细胞或肿瘤相关细胞。
20.根据权利要求18至19中任一项的方法，其中所述样品包含恶性细胞或肿瘤相关细胞，例如其中所述恶性细胞或肿瘤相关细胞包括选自下组的细胞：胶质细胞；星形胶质细胞；周细胞；内皮细胞；造血细胞；干细胞和小胶质细胞。
21.根据权利要求20的方法，其中所述造血细胞选自下组：造血干细胞、T细胞、B细胞、血浆细胞、NK细胞、树突细胞、巨噬细胞，如肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)和单核细胞。
22.根据权利要求19至21中任一项的方法，其中所述细胞选自下组：EGFRvIII+细胞、巢蛋白+细胞、PSA-NCAM+细胞、GFAP+细胞、PDGFRb+细胞(CD140b+细胞)、PECAM-1+细胞(CD31+细胞)、CD45+细胞、CD68+细胞、CD163+细胞和CD206+细胞或它们的任何组合。
23.根据权利要求19至22中任一项的方法，其中所述细胞为整合素α10亚基+且EGFRvIII+细胞。
24.根据权利要求19至22中任一项的方法，其中所述细胞为整合素α10亚基+且巢蛋白+细胞。
25.根据权利要求19至22中任一项的方法，其中所述细胞为整合素α10亚基+且PSA-NCAM+细胞。
26.根据权利要求19至22中任一项的方法，其中所述细胞为整合素α10亚基+且GFAP+细胞。
27.根据权利要求19至22中任一项的方法，其中所述细胞为整合素α10亚基+且PDGFRb+细胞(CD140b+细胞)。
28.根据权利要求19至22中任一项的方法，其中所述细胞为整合素α10亚基+且PECAM-1++
细胞(CD31细胞)。
29.根据权利要求19至22中任一项的方法，其中所述细胞为整合素α10亚基+且CD45+细胞。
30.根据权利要求19至22中任一项的方法，其中所述细胞为整合素α10亚基+且CD68+细胞。
31.根据权利要求19至22中任一项的方法，其中所述细胞为整合素α10亚基+且CD163+细胞。
32.根据权利要求19至22中任一项的方法，其中所述细胞为整合素α10亚基+且CD206+细胞。
33.用于根据前述权利要求中任一项的用途、制剂或方法的组合物，其中所述恶性肿瘤选自下组：
a)选自以下的神经上皮组织肿瘤
i)选自以下的星形细胞肿瘤
毛细胞型星形细胞瘤(ICD-O 9421/1，WHO I级)、毛细胞粘液状星形细胞瘤(ICD-O
9425/3，WHO II级)、室管膜下巨细胞型星形细胞瘤(ICD-O 9384/1，WHO I级)、多形性黄色瘤型星形细胞瘤(ICD-O 9424/3，WHO II级)、弥漫性星形细胞瘤(ICD-O 9400/3，WHO II级)、间变性星形细胞瘤(ICD-O 9401/3，WHO III级)、胶质母细胞瘤(ICD-O 9440/3，WHO IV级)、巨细胞型胶质母细胞瘤(ICD-O 9441/3，WHO IV级)、胶质肉瘤(ICD-O 9442/3，WHO IV级)、大脑胶质瘤病(ICD-O 9381/3，WHO III级)、和
ii)选自以下的少突胶质细胞肿瘤
少突胶质细胞瘤(ICD-O 9450/3，WHO II级)和间变性少突胶质细胞瘤(ICD-O 9451/3，WHO III级)、和
iii)选自以下的少突星型细胞肿瘤
少突星型细胞瘤(ICD-O 9382/3，WHO II级)和间变性少突星型细胞瘤(ICD-O 9382/3，WHO III级)、和
iv)选自以下的室管膜肿瘤
室管膜下室管膜瘤(ICD-O 9383/1，WHO I级)、粘液乳头状型室管膜瘤(ICD-O 9394/1，WHO I级)、室管膜瘤(ICD-O 9391/3，WHO II级)、间变性室管膜瘤(ICD-O 9392/3，WHO III级)、和
v)选自以下的脉络丛肿瘤
脉络丛乳头状瘤(ICD-O 9390/0，WHO I级)、
非典型性脉络丛乳头状瘤(ICD-O 9390/1，WHO II级)、和
脉络丛癌(ICD-O 9390/3，WHO III级)、和
vi)选自以下的其它神经上皮肿瘤
星形母细胞瘤(ICD-O 9430/3，WHO I级)、三脑室的脊索瘤样胶质瘤(ICD-O 9444/1，WHO II级)、和血管中心型胶质瘤(ICD-O 9431/1，WHO I级)和，
vii)选自以下的神经元及混合性神经元-胶质肿瘤
小脑发育不良性神经节细胞瘤(Lhermitte-Duclos)(ICD-O 9493/0)、促纤维增生性婴儿星形细胞瘤/神经节胶质细胞瘤(ICD-O 9412/1，WHO I级)、胚胎发育不良性神经上皮肿瘤(ICD-O 9413/0，WHO I级)、神经节细胞瘤(ICD-O 9492/0，WHO I级)、神经节细胞胶质瘤(ICD-O 9505/1，WHO I级)、间变性神经节细胞胶质瘤(ICD-O 9505/3，WHO III级)、中枢神经细胞瘤(ICD-O 9506/1，WHO II级)、脑室外神经细胞瘤(ICD-O 9506/1，WHO II级)、小脑脂肪神经细胞瘤(ICD-O 9506/1，WHO II级)、乳头状型胶质神经元肿瘤(ICD-O 9509/1，WHO I级)、第四脑室菊形团形成型胶质神经元肿瘤(ICD-O 9509/1，WHO I级)、和副神经节瘤(ICD-O 8680/1，WHO I级)、和
viii)选自以下的松果体区的肿瘤
松果体细胞瘤(ICD-O 9361/1，WHO I级)、中等分化的松果体实质肿瘤(ICD-O 9362/3，WHO II、III级)、松果体母细胞瘤(ICD-O 9362/3，WHO IV级)、和松果体区乳头状肿瘤(ICD-O 9395/3，WHO II、III级)，和
ix)选自以下的胚胎性肿瘤
髓母细胞瘤(ICD-O 9470/3，WHO IV级)、髓母细胞瘤伴广泛结节(ICD-O 9471/3，WHO IV级)、间变性髓母细胞瘤(ICD-O 9474/3，WHO IV级)、中枢神经系统原始神经外胚层肿瘤(ICD-O 9473/3，WHO IV级)、中枢神经系统神经母细胞瘤(ICD-O 9500/3，WHO IV级)、和非典型性畸胎瘤/横纹肌样肿瘤(ICD-O 9508/3，WHO IV级)、和
b)选自以下的颅神经和脊旁神经肿瘤
i)许旺细胞瘤(ICD-O 9560/0，WHO I级)
ii)神经纤维瘤(ICD-O 9540/0，WHO I级)、
iii)神经束膜瘤(ICD-O 9571/0，9571/3，WHO I、II、III级)，和
iv)恶性外周神经鞘膜瘤(MPNST)(ICD-O 9540/3，WHO II、III、IV级)，和c)选自以下的脑膜肿瘤
i)选自脑膜瘤(ICD-O 9530/0，WHO I级)、非典型性脑膜瘤(ICD-O 9539/1，WHO II级)、间变性脑膜瘤(ICD-O 9530/3，WHO III级)的脑膜皮细胞肿瘤、和
ii)选自脂肪瘤(ICD-O 8850/0)、血管脂肪瘤(ICD-O 8861/0)、冬眠瘤(ICD-O 8880/
0)、脂肪肉瘤(ICD-O 8850/3)、单发性纤维性肿瘤(ICD-O 8815/0)、纤维肉瘤(ICD-O 8810/
3)、恶性纤维组织细胞瘤(ICD-O 8830/3)、平滑肌瘤(ICD-O 8890/0)、平滑肌肉瘤(ICD-O
8890/3)、横纹肌瘤(ICD-O 8900/0)、横纹肌肉瘤(ICD-O 8900/3)、软骨瘤(ICD-O 9220/0)、软骨肉瘤(ICD-O 9220/3)、骨瘤(ICD-O 9180/0)、骨肉瘤(ICD-O 9180/3)、骨软骨瘤(ICD-O
9210/0)、血管瘤(ICD-O 9120/0)、上皮样血管内皮瘤(ICD-O 9133/1)、血管外皮瘤(ICD-O
9150/1，WHO II级)、间变性血管外皮瘤(ICD-O 9150/3，WHO III级)、和血管肉瘤(ICD-O
9120/3)3.2.22卡波西肉瘤(ICD-O 9140/3)、尤文肉瘤－PNET(ICD-O 9364/3)的间叶肿瘤，和
iii)选自以下的原发性黑色素细胞性病变
弥漫性黑色素细胞增生病(ICD-O 8728/0)、黑色素细胞瘤(ICD-O 8728/1)
恶性黑色素瘤(ICD-O 8720/3)、脑膜黑色素瘤病(ICD-O 8728/3)，和
iv)其他脑膜相关性肿瘤如血管母细胞瘤(ICD-O 9161/1，WHO I级)、和
d)选自以下的造血系统肿瘤
i)恶性淋巴瘤(ICD-O 9590/3)4.2浆细胞瘤(ICD-O 9731/3)，和
ii)颗粒细胞肉瘤(ICD-O 9930/3)，和
e)选自以下的蝶鞍区肿瘤
i)颅咽管瘤(ICD-O 9350/1，WHO I级)
ii)颗粒细胞瘤(ICD-O 9582/0，WHO I级)
iii)垂体细胞瘤(ICD-O 9432/1，WHO I级)、和
iv)垂体前叶梭形细胞嗜酸细胞瘤(ICD-O 8991/0，WHO I级)。
34.用于根据前述权利要求中任一项的用途的组合物、药物或方法，其中所述恶性肿瘤为胶质瘤，如II、III或IV级胶质瘤。
35.用于根据前述权利要求中任一项的用途的组合物、药物或方法，其中所述恶性肿瘤为星形细胞瘤。
36.用于根据前述权利要求中任一项的用途、制剂或方法的组合物，其中所述恶性肿瘤为胶质母细胞瘤，如原发性或继发性胶质母细胞瘤。
37.用于根据前述权利要求中任一项的用途、制剂或方法的组合物，其中所述恶性肿瘤为髓母细胞瘤。
38.用于根据前述权利要求中任一项的用途、制剂或方法的组合物，其中所述恶性肿瘤为神经母细胞瘤。
39.用于根据权利要求33至38中任一项的用途的组合物，其中所述样品为脑组织或脊髓组织样品。
40.用于根据权利要求33至39中任一项的用途的组合物，其中所述样品为血液样品。
41.用于根据前述权利要求中任一项的用途、制剂或方法的组合物，其中抗体选自单克隆抗体、多克隆抗体、抗体片段和单链抗体。
42.用于根据前述权利要求中任一项的用途、制剂或方法的组合物，其中所述抗体为单克隆抗体。
43.用于根据前述权利要求中任一项的用途、制剂或方法的组合物，其中抗体为非人抗体、嵌合抗体、双特异性抗体、人源化抗体或人抗体。
44.用于根据前述权利要求中任一项的用途、制剂或方法的组合物，其中至少一个抗体与可检测部分，如选自下组的可检测部分共价结合：荧光团、酶或放射性示踪物或放射性同位素。
45.用于根据前述权利要求中任一项的用途、制剂或方法的组合物，其中细胞毒性部分和/或可检测部分经由连接部分与抗体或其抗原结合片段间接连接。
46.用于根据前述权利要求中任一项的用途、制剂或方法的组合物，其中所述抗体具有选自IgA、IgD、IgG和IgM的同种型。
47.用于根据前述权利要求中任一项的用途、制剂或方法的组合物，其中所述特异性针对整合素α10亚基的抗体为:
a)单克隆抗体，其由保藏于Deutsche Sammlung von Microorganismen und Zellkulturen GmbH的保藏号为DSM ACC2583的杂交瘤细胞系产生；或
b)抗体，其与由保藏于Deutsche Sammlung von Microorganismen und Zellkulturen GmbH的保藏号为DSM ACC2583的杂交瘤产生的单克隆抗体结合的表位相同的表位竞争结合；或
c)a)或b)的片段，其中所述片段能够与整合素α10的细胞外I结构域亚基链特异性结合。
48.一种抗体-药物缀合物，其包含与放射性示踪物共价连接的整合素-α10特异性抗体。
49.根据权利要求48的抗体-药物缀合物，其用于诊断中枢神经系统的恶性肿瘤如胶质瘤、神经母细胞瘤或髓母细胞瘤的用途。
50.一种纳米颗粒，其包含整合素α-10特异性抗体和放射性示踪物。
51.一种用于在体外、原位或体内检测中枢神经系统的恶性肿瘤如胶质瘤、神经母细胞瘤或髓母细胞瘤的试剂盒，所述试剂盒包含特异性针对整合素α10亚基的抗体、能够与整合素α10亚基抗原特异性结合的肽或能够与整合素α10亚基转录物或其互补体特异性杂交的多核苷酸探针，并任选地包含使用说明书。
52.一种治疗罹患中枢神经系统中的恶性肿瘤的受试者的方法，所述方法包括：
a)根据权利要求33至38中任一项确定受试者是否罹患中枢神经系统的恶性肿瘤；和b)向诊断为患有中枢神经系统的恶性肿瘤的受试者施用治疗有效量的与整合素α10亚基特异性结合的抗体。
53.包含与整合素α10亚基特异性结合的抗体的组合物用于制造用于治疗中枢神经系统中的恶性肿瘤的药物的用途。
54.一种在哺乳动物中抑制肿瘤相关的血管化的方法，所述方法包括向所述哺乳动物施用治疗有效量的抗整合素α10亚基抗体。
55.一种抗体-药物缀合物，包含与细胞毒性剂如核糖体失活蛋白共价连接的抗整合素-α10亚基特异性抗体。
56.根据权利要求55的抗体-药物缀合物，其中所述核糖体失活蛋白选自下组：志贺毒素和志贺样毒素；I型核糖体失活蛋白，如天花粉蛋白和丝瓜素；II型核糖体失活蛋白，如蓖麻蛋白、凝集素和相思豆毒素；和皂草素。
57.根据前述权利要求中任一项的组合物、药物、方法、用途或抗体-药物缀合物，其中整合素α10亚基为整合素α10β1异二聚体的一部分。
CNS中的恶性肿瘤的检测和治疗
技术领域
[0001] 本发明涉及基于整合素α10亚基表达的用于检测和治疗中枢神经系统中的恶性肿瘤的方法。
背景技术
[0002] 原发性脑肿瘤起源于脑组织中。存在数种类型的原发性脑肿瘤。诊断为恶性原发性脑肿瘤的最常见类型属于胶质瘤组。胶质瘤可以从数种类型的胶质细胞，例如星形胶质细胞、少突胶质细胞和室管膜细胞发展而来。胶质瘤从低级(I)至高级(IV)分级，反映了肿瘤的生长潜力和侵袭性。
[0003] 胶质母细胞瘤(也称为多形性胶质母细胞瘤，GBM)属于胶质瘤组，并被分级为高级胶质瘤。其为最常见和侵袭性最强型的原发性脑肿瘤。如世界卫生组织分类描述，胶质母细胞瘤肿瘤的特征在于存在被间变细胞包围的小面积的坏死组织。该特征以及增生性血管的存在，将该肿瘤与不具有这些特征的III级星形细胞瘤区分。不仅仅基于形态学的新兴分类方案可能会合并进一步区分这些肿瘤的分子差异。因此胶质母细胞瘤能够根据它们的分子表达模式被附加表征入四个不同亚型(Verhaak等，2010；Dunn等，2012)。经典亚型、间充质亚型、原神经亚型和神经亚型由表皮生长因子受体(EGFR)、神经纤维瘤病(NF1)、血小板源性生长因子受体A(PDGFRA)和异柠檬酸脱氢酶(IDH1)的畸变和基因表达定义。
[0004] 胶质母细胞瘤为含有不同类型的细胞的高度异质性肿瘤，且在患者之间在细胞含量上存在较大差异。出现的细胞类型例如为星形胶质细胞、少突胶质细胞和成纤维细胞。肿瘤细胞非常迅速地扩散和浸润邻近组织，并且它们对辐射和化疗都表现出高抗性。在美国和欧盟每年诊断大约28000个该疾病的新病例(来源：U.S.National Cancer Registry)。胶质母细胞瘤为最致命的脑肿瘤。在没有治疗情况下，中位生存时间为4个月，在有可用的治疗情况下中位生存时间为大约15个月。许多患者不会活得比从诊断开始的6个月长，并大多数在2年内死亡。只有少数生存到5年之久。
[0005] 截至目前，没有具体的术前实验室研究有助于诊断GBM。脑的成像研究对于进行诊断(包括有无对比的计算机断层扫描、磁共振成像，正电子发射断层扫描和磁共振波谱分析)是至关重要的。为确认上述诊断，需要进行脑组织的病理检查。肿瘤遗传学可用于预测反应以辅助治疗。然而，目前在不同类型的胶质母细胞瘤之间的治疗方案没有差异。
[0006] 胶质母细胞瘤是最常见和侵袭性最强的CNS的恶性肿瘤。发病率为2-3例/100000个个体。目前的治疗包括手术、化疗和放射。标准治疗包括最大程度的手术切除以减轻对脑压力、放射疗法，及用替莫唑胺伴随和辅助化疗。没有治疗的平均生存时间为4.5个月，用现有可用的治疗，平均生存时间可以延长至15个月。由于疾病的严重性，已经尝试寻找新的药物来治疗胶质母细胞瘤和脑的其他恶性肿瘤。然而，这些疗法或传统疗法均没有导致胶质母细胞瘤患者的任何显著改善或增加存活率。
[0007] 因此存在急切需要找到更有效的用于检测、诊断和治疗CNS的恶性肿瘤(包括胶质瘤)的方法。
[0008] 发明概述
[0010] 因此，本发明的目的是提供用于确定患者的CNS中的恶性肿瘤的存在并对其治疗的方法。
[0011] 在一个方面，本发明涉及用于中枢神经系统中的恶性肿瘤的治疗的组合物，所述组合物包含与整合素α10亚基特异性结合的抗体。
[0012] 在另一方面，本发明涉及治疗对其有需要的受试者的中枢神经系统中的恶性肿瘤的方法，所述方法包括对所述受试者施用与整合素α10亚基特异性结合的抗体。
[0013] 在又一个方面，本发明涉及治疗罹患中枢神经系统中的恶性肿瘤的受试者的方法，所述方法包括：
[0014] a)根据本文所述的方法确定受试者是否罹患中枢神经系统的恶性肿瘤；和[0015] b)对诊断为患有中枢神经系统的恶性肿瘤的受试者，如上述实施方案中的任一项所定义，向所述受试者施用治疗有效量的与整合素α10亚基特异性结合的抗体。
[0016] 在另一方面，本发明涉及包含与整合素α10亚基特异性结合的抗体的组合物的用途，其用于制造用于治疗中枢神经系统中的恶性肿瘤的药物。
[0018] 在另一方面，本发明涉及抗体-药物缀合物，其包含与放射性示踪物或细胞毒性部分共价连接的整合素-α10特异性抗体。
[0019] 在另一方面，本发明涉及纳米颗粒，其包含整合素α-10特异性抗体和放射性示踪物。
[0020] 在另一方面，本发明涉及用于在体外、原位或体内检测中枢神经系统的恶性肿瘤如胶质瘤的试剂盒，所述试剂盒包含特异性针对整合素α10亚基的抗体、能够与整合素α10亚基抗原特异性结合的肽，或能够与整合素α10亚基转录物或其互补体特异性杂交的多核苷酸探针，并任选地包含使用说明书。
[0021] 本发明的进一步目的是提供可用于CNS的恶性肿瘤如胶质瘤的检测、诊断和成功和靶向治疗的产品。
[0022] 本发明的第一方面涉及用于检测哺乳动物的中枢神经系统中的恶性肿瘤的方法，所述方法包括分析分离样品中如下项的存在或不存在：
[0023] i)包含整合素α10亚基多肽的抗原，或
[0024] ii)编码整合素α10亚基多肽或其片段或变体的多核苷酸转录物，
[0025] 其中a)的抗原或b)的多核苷酸转录物的存在指示所述哺乳动物的中枢神经系统中的恶性肿瘤。
[0026] 另一方面，本发明涉及用于检测哺乳动物的中枢神经系统中的恶性肿瘤的方法，所述方法包括以下步骤：
[0027] a)向受试者施用能够与整合素α10亚基多肽或整合素α10亚基多核苷酸转录物特异性结合的分子探针，所述探针共价结合至可发射光子的部分，
[0028] b)检测从所述部分发射的光子并形成中枢神经系统或其部分的图像，[0029] 其中从所述部分的光子的局部发射指示所述哺乳动物的中枢神经系统中的恶性肿瘤。
[0030] 另一方面，本发明涉及诊断哺乳动物的中枢神经系统中的恶性肿瘤的体外诊断方法，所述方法包括以下步骤：
[0031] a)用能够与整合素α10亚基多肽或整合素α10亚基多核苷酸转录物特异性结合的分子探针接触体外样品，所述探针共价结合至可发射光子的部分，
[0032] b)检测从所述部分发射的光子并形成样品的图像，
[0033] 其中从所述部分的光子的局部发射指示所述哺乳动物的中枢神经系统中的恶性肿瘤。
[0034] 另一方面，本发明涉及用于在分离样品中检测整合素α10亚基的体外方法，所述方法包括在存在或不存在以下组分的情况下，在所述分离样品中分析：
[0035] a)包含整合素α10亚基多肽的抗原，或
[0036] b)编码整合素α10亚基多肽或其片段或变体的多核苷酸转录物，
[0037] 其中存在a)的抗原或b)的多核苷酸转录物指示所述分离样品中的恶性肿瘤。
[0038] 另一方面，本发明涉及抗整合素α10亚基特异性抗体在体外、原位或体内检测生物样品中的中枢神经系统的恶性肿瘤的用途，所述抗体与整合素α10亚基特异性结合。
[0039] 另一方面，本发明涉及整合素α10亚基核酸探针在体外、原位或体内检测生物样品中的中枢神经系统的恶性肿瘤的用途，所述核酸探针在杂交反应中与整合素α10亚基mRNA或cDNA结合。
[0040] 另一方面，本发明涉及整合素α10亚基核酸探针化合物在制备用于诊断中枢神经系统的恶性肿瘤的试剂盒中的用途。
[0041] 另一方面，本发明涉及抗整合素α10亚基特异性抗体在制备用于诊断中枢神经系统的恶性肿瘤的试剂盒中的用途，所述抗体与整合素α10亚基结合。
[0042] 另一方面，本发明涉及整合素α10亚基核酸探针化合物用于制备用于诊断、监测或测定受试者是否具有中枢神经系统的恶性肿瘤的诊断剂的用途，其中制备所述诊断剂以测量生物样品中的整合素α10亚基多核苷酸的存在，其中在所述样品中整合素α10亚基多核苷酸的存在指示所述受试者的中枢神经系统的恶性肿瘤。
[0043] 另一方面，本发明涉及抗整合素α10亚基特异性抗体用于制备用于诊断、监测或测定哺乳动物是否具有中枢神经系统的恶性肿瘤的诊断剂的用途，所述抗体与整合素α10亚基结合，其中制备所述诊断剂以测量在样品中整合素α10亚基多肽的存在，其中在所述样品中整合素α10亚基多肽的存在指示所述哺乳动物的中枢神经系统的恶性肿瘤。附图说明
[0044] 图1：脑的恶性肿瘤及其进展的概述。恶性肿瘤根据它们的表观形态学进行表型分类，并根据它们的基于肿瘤的组织学特征的严重程度进行分级。本图中显示的是胶质瘤的主要类别和公认的从正常细胞至胶质母细胞瘤的肿瘤进展途径。
[0045] 图2：整合素α10由从胶质母细胞瘤肿瘤组织分离的细胞表达。通过使用针对整合素α10的抗体，显示整合素α10在通过免疫荧光染色可视化的胶质母细胞瘤细胞系中的胶质母细胞瘤细胞上特异性且强地表达。
[0046] 图3：整合素α10由从胶质母细胞瘤组织中的细胞表达。通过使用针对整合素α10的抗体，显示整合素α10在包括通过免疫荧光染色可视化的胶质母细胞瘤组织样品的患者材料中的胶质母细胞瘤细胞上特异性且强地表达。
[0047] 图4：在胶质母细胞瘤中检测到整合素α10，但未感染的脑组织中未检测到。图4A显示所述患者样品的一部分具有典型的脑形态学，而图4B显示相同样品的另一部分具有恶性脑组织(多形性胶质母细胞瘤)的形态学。使用针对整合素α10亚基的多克隆抗体(Camper等(1998)J Biol Chem.273(32):20383-9)，显示尽管在形态学上未感染的脑组织中见到可忽略表达的整合素α10亚基，整合素α10亚基在胶质母细胞瘤细胞上特异性且强地表达。
[0048] 图5：在不同级的胶质瘤中差异检测到整合素α10的表达。通过使用针对整合素α10的抗体，显示在通过免疫组化染色可视化的包括星形细胞瘤II级(少数细胞；参见箭头)(A)、星形细胞瘤III级(B)、多形性胶质母细胞瘤也称为星形细胞瘤IV级(C)的患者脑肿瘤组织样品的细胞上，整合素α10特异性表达。整合素α10的表达随着级别而提高，并在星形细胞瘤III和IV级中强表达。在所有的级的胶质瘤(D)中，可以找到血管中的细胞的阳性染色。
[0049] 图6：在神经母细胞瘤和髓母细胞瘤中的整合素α10的表达。通过使用针对整合素α10的抗体，显示如免疫组织化学可视化那样，整合素α10在来自患者的神经母细胞瘤肿瘤组织(A)和髓母细胞瘤肿瘤组织(B)中的细胞上特异性且强地表达。
[0050] 图7：在数种脑肿瘤组织中检测到整合素α10。脑癌症cDNA芯片(Brain Cancer cDNA Arrays)用于差异基因表达分析和验证患者脑肿瘤组织材料中的基因表达。每个芯片的cDNA从病理学家验证的组织的高质量总RNA合成，在两个序贯的qPCR分析中用β-肌动蛋白进行归一化和验证，并与临床信息一起分析。图显示对于两个运行的平均相对定量(RQ)值。如图所示，在星形细胞瘤、间变性星形细胞瘤、纤维型星形细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤、脑的血管外皮细胞瘤的、脑膜瘤、血管瘤型血管瘤、非典型性脑膜瘤、纤维母细胞型脑膜瘤、脑膜皮型脑膜瘤、微囊型脑膜瘤、分泌型脑膜瘤、少突星型细胞瘤、间变性少突星型细胞瘤、少突胶质细胞瘤和间变性少突胶质细胞瘤中可以检测到对于整合素α10亚基的mRNA。
[0051] 图8：在胶质母细胞瘤组织中的细胞上，整合素α10与CD163和CD206的共定位。图8A显示用DAPI对于DNA标记的脑肿瘤胶质母细胞瘤组织的共聚焦显微镜成像。图8B显示通过相差显微镜可视化的组织的显微镜成像。图8C显示使用抗CD 163抗体的肿瘤组织中的CD 163表达的共聚焦显微镜成像。图8D显示使用抗整合素α10亚基抗体的肿瘤组织中的整合素α10亚基表达的共聚焦显微镜成像。图8E显示在组织中使用抗CD 206抗体的肿瘤组织中的CD 206表达的共聚焦显微镜成像。图8F显示图8A-E的综合，并表明CD163、整合素α10亚基和CD206的共定位。
[0052] 图9：在胶质母细胞瘤组织中的细胞上，用EGFRvIII的整合素α10的共定位。图9A显示用DAPI对于DNA标记的脑肿瘤胶质母细胞瘤组织的共聚焦显微镜成像。图9B显示通过相差显微镜可视化的组织的显微镜成像。图9C显示使用抗EGFRvIII抗体的肿瘤组织中的EGFRvIII表达的共聚焦显微镜成像。图9D显示使用抗整合素α10亚基抗体的肿瘤组织中的整合素α10亚基表达的共聚焦显微镜成像。图9E显示图9A-D的综合,并表明EGFRvIII和整合素α10亚基的共定位。
[0053] 图10：针对整合素α10亚基的抗体抑制胶质母细胞瘤细胞的球体形成。图片显示与未处理细胞相比，胶质母细胞瘤细胞上的与整合素α10亚基结合的单克隆抗体可以降低球体形成能力。在用IgG对照抗体处理的细胞中未见此效果。
[0054] 图11：针对整合素α10亚基的抗体减少胶质母细胞瘤细胞的活力和/或生长。图片显示，使用WST-1分析，胶质瘤(GBM)细胞对用针对整合素α10亚基的非缀合单克隆抗体治疗敏感。与未处理细胞相比，用抗整合素α10抗体治疗降低了胶质母细胞瘤细胞的细胞存活力和/或生长。
[0055] 图12：针对整合素α10亚基的抗体减少胶质母细胞瘤细胞的细胞生存和/或增殖。图片显示，与用对照抗体治疗相比，用针对α10的单克隆抗体，接着添加用皂草素缀合的第二抗体(与α10抗体结合)的胶质母细胞瘤细胞的治疗，减少了胶质母细胞瘤细胞的生存和/或增殖。
[0056] 定义
[0057] 本文所用的“抗整合素α10抗体”或“抗整合素α10亚基抗体”指能够识别并结合至少异二聚体蛋白整合素α10β1的α10亚基的抗体。这些抗体可以是识别异二聚体蛋白整合素α10β1的表位的抗体，其中所述表位包含α10和β1亚基两者的氨基酸残基。
[0058] 本文所用的“整合素α10”或“整合素α10亚基”指异二聚体蛋白整合素α10β1的α10亚基。本释义并不排除与α10亚基结合因此形成整合素α10β1异二聚体的四级结构的β1亚基的存在。
[0059] 本文所用的“双特异性抗体”指具有两个不同的可变域结合部位(Fv)的抗体，每个可变域结合部位与不同抗原结合。
[0060] 本文所用的“受试者”指哺乳动物，如啮齿类动物、猫、犬和灵长类动物。根据本发明的优选受试者为人。
[0061] 本文中所使用的单数形式“一种”、“一个”和“所述”包括复数指代，除非上下文另有明确规定。因此，例如“抗体”的提述包括多个该抗体。
[0062] 本文所用的“生物样品”涵盖任何受试者和获取自任何受试者的多种样品类型。在公开方法中有用的生物样品的实例包括但不限于：受试者、液体组织样品如血液，或固体组织样品如活检材料或源自其的组织培养物或细胞及其子代。例如，生物样品包括获取自从受试者收集的组织样品的细胞。因此生物样品涵盖临床样品、培养的细胞、细胞上清、细胞裂解物和组织样品，例如来自脑如成年脑的组织样品，来自CNS的组织样品包括来自脑等的肿瘤样品。
[0063] 本文所用的“检测”、“进行检测”、“检测了”包括与或者不与对照相比的定性和/或定量检测(测量水平)，并进一步指给定的靶标(具体为整合素α10亚基的靶标)的存在、不存在或量的鉴定。
[0064] 本文所用的“分析”包括与或者不与对照相比的定性和/或定量检测(测量水平)，并进一步指给予的靶标(具体为整合素α10亚基的靶标)的存在、不存在或量的鉴定。
[0065] “放射性示踪物”，或“放射性标记”为一种或多种原子被放射性同位素替代的化学化合物，因此通过其的放射性衰变，其可以用来通过追踪放射性同位素从反应物到产品所依循的途径来探讨化学反应的机制。
[0066] 氢、碳、磷、硫和碘的放射性同位素已广泛用于追踪生化反应的途径。放射性示踪物也可以用于跟踪物质在天然系统如细胞或组织中的分布。放射性示踪物构成了多种成像系统如PET扫描、SPECT扫描和锝扫描的基础。术语“放射性示踪物”包括发射治疗性剂量的辐射的放射性同位素如碘131。
[0067] 发明详述
[0068] 本发明人惊奇地发现：整合素α10亚基(Uniprot:O75578)由在获取自活检的CNS组织(具体来自脑的恶性肿瘤)的组织中表达的基因ITGA10编码。基于该发现，发明人开发了用于检测整合素α10亚基的方法和工具，并证明整合素α10亚基可能诊断和/或治疗CNS的恶性肿瘤和亚型如胶质瘤。
[0069] I.中枢神经系统的恶性肿瘤的治疗
[0070] 在一个方面，本发明涉及一种或多种CNS的恶性肿瘤的治疗。在优选实施方案中，所述治疗使用本文所述的特异性抗整合素α10亚基抗体进行。优选将所述抗体制备为包含于如下概述的药物组合物中。
[0071] 药品组合物及其施用
[0072] 在一个实施方案中，本发明涉及包含根据本发明的抗体和其功能等效物的药品组合物。本发明进一步涉及用于临床病况的治疗的包含抗体的药物，包括施用所述抗体的治疗CNS的恶性肿瘤方法，或所述抗体用于制备用于治疗临床病况的药物的用途。
[0074] 治疗可以是治愈性、姑息性、改善性和/或预防性治疗。
[0075] 本发明的药品组合物优选包含：药品有效量的至少一个抗体或其功能等效物，其特异性识别在整合素α10亚基的胞外结构域的表位(本文上文和下文指定的“抗整合素α10抗体”或“抗整合素α10亚基抗体”)。也可以使用能够识别整合素α10β1的细胞质结构域的抗体，用于体外目的，例如用于检测血液或组织样品中的整合素α10β1。
[0076] 本文所称的药学有效量，通常指在接受所述药物组合物的个体中诱导期望反应的抗整合素α10亚基抗体的量。
[0077] 抗整合素α10亚基抗体的药学有效量取决于其应被施用的个体，具体取决于所述个体的体格，以及临床病况和施用的具体模式。然而通常每次剂量应对成年人施用范围为1mg至5000mg，优选范围为10mg至3000mg，更优选范围为50mg至1000mg，例如范围为100mg至
750mg，如范围为150mg至500mg，例如范围为200mg至400mg，如范围为250mg至350mg，例如
300mg左右的整合素α10亚基抗体。
750mg，如范围为150mg至500mg，例如范围为200mg至400mg，如范围为250mg至350mg，例如
300mg左右的整合素α10亚基抗体。
[0078] 本发明的组合物可以为适合用于非胃肠施用的药物组合物。这样的组合物优选包括可以含有润湿剂或乳化剂、抗氧剂、pH缓冲剂、抑菌性化合物和使制剂与个体的体液(优选血液)等渗的溶质的水性和非水性无菌注射溶液；以及可以包括悬浮剂或增稠剂的水性和非水性无菌悬浮液。药物组合物可以以单位剂量或多剂量容器例如密封的安瓿和小瓶提供，并且可以存储在仅需在使用前即时加入无菌液体载体的冷冻干燥条件下。
[0079] 优选，本发明的组合物包含一种或多种可以为非无菌或无菌的适合的药品赋形剂，用于与细胞、组织或有机体使用，如适合用于对个体施用的药品赋形剂。这样的赋形剂可以包括但不限于各种量的盐水、缓冲盐水、葡萄糖、水、甘油、乙醇以及这些赋形剂的组合。所述制剂应适应给药方式。本发明进一步涉及药品试剂盒的部分，所述部分包含用一种或多种本发明的上述组合物的成分填充的一种或多种容器。非水性赋形剂的实例为丙二醇、聚乙二醇，植物油如橄榄油和可注射有机酯如油酸乙酯。
[0080] 优选地，本发明的药品组合物以可注射的形式，以液体溶液或悬浮液形式制备；进一步，适合在注射前溶解为或悬浮为液体的固体形式也包括在本发明的范围内。所述制备也可以是乳化或封装在脂质体中。
[0081] 抗整合素α10亚基抗体可以单独或与其它化合物组合以同时或以任何顺序序贯施用。
[0082] 施用例如可以是经由注射或输注的胃肠外施用。胃肠外注射例如可以为脑室内、肿瘤内、静脉内，肌内，真皮内或皮下注射。优选地所述施用为通过注射或输注而胃肠外施用。
[0083] 抗整合素α10亚基抗体应按所需频率施用，因此抗整合素α10亚基抗体可以施用一次以上如至少两次，例如至少3次，如至少4次，例如至少5次，如范围为1至100次，例如范围为1至50次，如范围为1至25次，例如范围为1至10次。
[0084] 优选在2次施用之间有至少1天，如至少2天，例如至少3天，如至少5天，例如至少一个周，如至少2周，例如至少一个月，如至少6个月，例如至少1年，如至少2年，例如至少3年，如至少5年，例如至少10年。
[0085] 可以使用整合素α-10结合蛋白质，如抗整合素α-10抗体将化疗剂靶向至CNS的恶性肿瘤，如胶质瘤。在其他的实施方案中，CNS的恶性肿瘤如胶质瘤可以用具有合适的效应功能如激活补体的能力的抗整合素α10亚基抗体治疗。
[0086] 在一个方面，本发明涉及用于治疗中枢神经系统中的恶性肿瘤的用途的组合物，所述组合物包含与整合素α10亚基特异性结合的抗体。
[0087] 在一个实施方案中，抗体特异性结合包含SEQ ID NO:2(整合素α10的胞外结构域)的多肽或由其组成，并在另一实施方案中，抗体特异性结合包含SEQ ID NO:3(整合素α10的细胞外I结构域)或由其组成的多肽。
[0088] 在一个实施方案中，抗体选自下组：单克隆抗体、多克隆抗体和抗体片段，如选自Fab-片段，Fab'片段，F(ab')2片段和Fv片段的抗体片段，如单链可变片段(scFv)和单域抗体。
[0089] 用于治疗性应用的抗体优选为嵌合抗体、人源化抗体或完全人抗体，优选为具有人恒定区。
[0090] 在一个实施方案中，抗体为非人抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体或异种特异性抗体如双特异性抗体。
[0091] 所述抗体可以具有选自IgA、IgD、IgG和IgM的同种型。IgG同种型可以例如选自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。
[0092] 在具体实施方案中，抗体为:
[0093] a.由保藏于Deutsche Sammlung von Microorganismen und Zellkulturen GmbH，保藏号为DSM ACC2583的杂交瘤产生的单克隆抗体或其抗原结合片段，其中抗体或抗原结合片段特异性结合整合素α10链的细胞外I结构域；或
[0094] b.与由保藏于Deutsche Sammlung von Microorganismen und Zellkulturen GmbH，保藏号DSM ACC2583的杂交瘤产生的单克隆抗体结合的表位相同的表位竞争结合的抗体；或
[0095] c.a)或b)的片段，其中所述片段能够与整合素α10亚基链的细胞外I结构域特异性结合。
[0096] 在一个实施方案中，本发明的抗α10抗体是能够阻断经由整合素α10β1的细胞功能的抗体。
[0097] 所述抗体可以与细胞毒性部分共价结合，如选自毒素、化疗剂和放射性剂的细胞毒性部分。
[0098] 在一个实施方案中，所述毒素是核糖体失活蛋白，如选自下组的核糖体失活蛋白：天花粉蛋白和丝瓜素；II型核糖体失活蛋白，如蓖麻蛋白、凝集素和相思豆毒素；以及皂草素。
[0099] 在一个实施方案中，所述毒素为皂草素。皂草素为植物酶，具有N-糖苷酶活性的30kDa的蛋白质，所述N-糖苷酶活性在28S核糖体RNA中使特异核苷酸脱嘌呤，不可逆地阻断蛋白质合成。其属于充分表征的核糖体失活蛋白家族(RIP)。靶SAP缀合物是在称为分子手术的技术中使用的强大且特异的损伤剂。皂草素(来自植物肥皂草(Saponaria officinalis)的种子)可以与靶向剂结合，靶向剂在这种情况下为抗整合素α抗体并施用于细胞(体外或体内)。靶向剂寻找并与细胞表面的它的靶结合。缀合物被内化，皂草素从靶向剂脱离，并灭活引起蛋白质抑制的核糖体，并且最终细胞死亡。不具有细胞表面标记物的细胞不受影响。
[0100] 在一个实施方案中，化疗剂与抗体共价结合。在其他的实施方案中，化疗剂囊封在纳米颗粒如脂质体中，并且粒子通过具有在它们的表面结合的抗整合素α10亚基抗体而被靶向至胶质瘤。
[0101] 抗体-药物缀合物(ADCs)如结合了皂草素的抗整合素α10亚基抗体，可以由本领域技术人员例如在Bidard和Trédan(2014)Targ Oncol 9:1-8或Agarwal和Bertozzi(2015)Bioconjugate Chem.26:176-192中的例示制备。
[0102] 在一个实施方案中，用于CNS的恶性肿瘤的治疗的用途的组合物包含与生物反应调节物如细胞因子(例如选自淋巴因子和干扰素的细胞因子)共价结合的抗体。
[0103] 用于治疗用途的组合物可以包含进一步活性成分如一种或多种化疗剂，并任选药学上可接受的稀释剂、载体或赋形剂。
[0104] 本发明的抗体在一个实施方案中设计成特异性针对整合素α10亚基，并在另一实施方案中设计成特异性针对整合素α10亚基的天然存在变体，例如整合素α10亚基的同种型或整合素α10亚基的剪接变体。
[0105] 在一个实施方案中，本发明涉及结合整合素α10β1异二聚体的述α10和β1亚基两者的抗体。
[0106] 在另一实施方案中，本发明涉及结合整合素α10β1异二聚体的α10亚基但不结合β1亚基的抗体。
[0107] 在一个实施方案中，抗体能够诱导表达整合素α10亚基的细胞的细胞死亡和/或抑制其生长和/或增殖。
[0108] 在一个实施方案中，抗体能够诱导表达整合素α10亚基的细胞的细胞死亡。在一个实施方案中，抗体能够抑制表达整合素α10亚基的细胞的生长。在一个实施方案中，抗体能够抑制表达整合素α10的细胞的增殖。在一个实施方案中，抗体能够抑制表达整合素α10的细胞的迁移。
[0109] 在一个实施方案中，细胞还表达EGFRvIII、巢蛋白、PSA-NCAM、GFAP、PDGFRb(CD140b)、PECAM-1(CD31)、CD45、CD68、CD163和/或CD206中的一种或多种。
[0110] 在一个实施方案中，所述细胞还表达EGFRvIII。在一个实施方案中，所述细胞还表达巢蛋白。在一个实施方案中，所述细胞还表达PSA-NCAM。
[0111] 在一个实施方案中，所述细胞还表达GFAP。在一个实施方案中，所述细胞还表达PDGFRb(CD140b)。在一个实施方案中，所述细胞还表达PECAM-1(CD31)。在一个实施方案中，所述细胞还表达CD45。在一个实施方案中，所述细胞还表达CD68。在一个实施方案中，所述细胞还表达CD163。在一个实施方案中，所述细胞还表达CD206。
[0112] 因此，在一个实施方案中，本发明涉及用于诱导中枢神经系统中的恶性肿瘤相关的细胞的细胞死亡和/或抑制其生长和/或增殖和迁移的方法，其中所述表达整合素α10亚基的细胞以及任选地EGFRvIII、巢蛋白、PSA-NCAM、GFAP、PDGFRb(CD140b)、PECAM-1(CD31)、CD45、CD68、CD163和/或CD206中的一种或多种。
[0113] 在一个实施方案中，中枢神经系统中的恶性肿瘤相关的细胞是恶性细胞或肿瘤相关的细胞。
[0114] 恶性细胞或肿瘤相关的细胞的实例包括：胶质细胞；星形胶质细胞；周细胞；内皮细胞；造血细胞；和小胶质细胞。
[0115] 在一个实施方案中，所述细胞是胶质细胞。
[0116] 所述造血细胞可以例如选自下组：造血干细胞、T细胞、B细胞、血浆细胞、NK细胞、树突细胞、巨噬细胞和单核细胞。
[0117] 在一个实施方案中，所述巨噬细胞为肿瘤相关的巨噬细胞(TAM)。
[0118] 临床病况
[0119] 根据本发明的临床病况可以为任一个如本文定义的CNS的恶性肿瘤的治疗，包括通过施用本发明的抗整合素α10亚基抗体的治愈、改善或预防性治疗。
[0120] 本文以上定义的组合物用于治疗选自下组的恶性肿瘤的用途：
[0121] a)选自以下的神经上皮组织肿瘤
[0122] i)选自以下的星形细胞肿瘤
[0123] 毛细胞型星形细胞瘤(ICD-O 9421/1，WHO I级)、毛细胞粘液状星形细胞瘤(ICD-O 9425/3，WHO II级)、室管膜下巨细胞型星形细胞瘤(ICD-O 9384/1，WHO I级)、多形性黄色瘤型星形细胞瘤(ICD-O 9424/3，WHO II级)、弥漫性星形细胞瘤(ICD-O 9400/3，WHO II级)、间变性星形细胞瘤(ICD-O 9401/3，WHO III级)、胶质母细胞瘤(ICD-O 9440/3，WHO IV级)、巨细胞型胶质母细胞瘤(ICD-O 9441/3，WHO IV级)、胶质肉瘤(ICD-O 9442/3，WHO IV级)、大脑胶质瘤病(ICD-O 9381/3，WHO III级)、和
[0124] ii)选自以下的少突胶质细胞肿瘤
[0125] 少突胶质细胞瘤(ICD-O 9450/3，WHO II级)和间变性少突胶质细胞瘤(ICD-O 9451/3，WHO III级)、和
[0126] iii)选自以下的少突星型细胞肿瘤
[0127] 少突星型细胞瘤(ICD-O 9382/3，WHO II级)和间变性少突星型细胞瘤(ICD-O 9382/3，WHO III级)、和
[0128] iv)选自以下的室管膜肿瘤
[0129] 室管膜下室管膜瘤(ICD-O 9383/1，WHO I级)、粘液乳头状型室管膜瘤(ICD-O 9394/1，WHO I级)、室管膜瘤(ICD-O 9391/3，WHO II级)、间变性室管膜瘤(ICD-O 9392/3，WHO III级)、和
[0130] v)选自以下的脉络丛肿瘤
[0131] 脉络丛乳头状瘤(ICD-O 9390/0，WHO I级)、
[0132] 非典型性脉络丛乳头状瘤(ICD-O 9390/1，WHO II级)、和
[0133] 脉络丛癌(ICD-O 9390/3，WHO III级)、和
[0134] vi)选自以下的其它神经上皮肿瘤
[0135] 星形母细胞瘤(ICD-O 9430/3，WHO I级)、三脑室的脊索瘤样胶质瘤(ICD-O 9444/1，WHO II级)、和血管中心型胶质瘤(ICD-O 9431/1，WHO I级)和，
[0136] vii)选自以下的神经元及混合性神经元-胶质肿瘤
[0137] 小脑发育不良性神经节细胞瘤(Lhermitte-Duclos)(ICD-O 9493/0)、促纤维增生性婴儿星形细胞瘤/神经节胶质细胞瘤(ICD-O 9412/1，WHO I级)、胚胎发育不良性神经上皮肿瘤(ICD-O 9413/0，WHO I级)、神经节细胞瘤(ICD-O 9492/0，WHO I级)、神经节细胞胶质瘤(ICD-O9505/1，WHO I级)、间变性神经节细胞胶质瘤(ICD-O 9505/3，WHO III级)、中枢神经细胞瘤(ICD-O 9506/1，WHO II级)、脑室外神经细胞瘤(ICD-O 9506/1，WHO II级)、小脑脂肪神经细胞瘤(ICD-O 9506/1，WHO II级)、
[0138] 乳头状型胶质神经元肿瘤(ICD-O 9509/1，WHO I级)、第四脑室菊形团形成型胶质神经元肿瘤(ICD-O 9509/1，WHO I级)、和副神经节瘤(ICD-O 8680/1，WHO I级)、和[0139] viii)选自以下的松果体区的肿瘤
[0140] 松果体细胞瘤(ICD-O 9361/1，WHO I级)、中等分化的松果体实质肿瘤(ICD-O 9362/3，WHOII、III级)、松果体母细胞瘤(ICD-O 9362/3，WHO IV级)、和松果体区乳头状肿瘤(ICD-O 9395/3，WHO II、III级)，和
[0141] ix)选自以下的胚胎性肿瘤
[0142] 髓母细胞瘤(ICD-O 9470/3，WHO IV级)、髓母细胞瘤伴广泛结节(ICD-O 9471/3，WHO IV级)、间变性髓母细胞瘤(ICD-O 9474/3，WHO IV级)、中枢神经系统原始神经外胚层肿瘤(ICD-O 9473/3，WHO IV级)、中枢神经系统神经母细胞瘤(ICD-O 9500/3，WHO IV级)、和非典型性畸胎瘤/横纹肌样肿瘤(ICD-O 9508/3，WHO IV级)、和
[0143] b)选自以下的颅神经和脊旁神经肿瘤
[0144] i)许旺细胞瘤(ICD-O 9560/0，WHO I级)
[0145] ii)神经纤维瘤(ICD-O 9540/0，WHO I级)、
[0146] iii)神经束膜瘤(ICD-O 9571/0，9571/3，WHOI、II、III级)，和
[0147] iv)恶性外周神经鞘膜瘤(MPNST)(ICD-O 9540/3，WHOII、III、IV级)，和[0148] c)选自以下的脑膜肿瘤
[0149] i)选自脑膜瘤(ICD-O 9530/0，WHO I级)、非典型性脑膜瘤(ICD-O 9539/1，WHO II级)、间变性脑膜瘤(ICD-O 9530/3，WHO III级)的脑膜皮细胞肿瘤、和
[0150] ii)选自脂肪瘤(ICD-O 8850/0)、血管脂肪瘤(ICD-O 8861/0)、冬眠瘤(ICD-O 8880/0)、脂肪肉瘤(ICD-O 8850/3)、单发性纤维性肿瘤(ICD-O 8815/0)、纤维肉瘤(ICD-O
8810/3)、恶性纤维组织细胞瘤(ICD-O 8830/3)、平滑肌瘤(ICD-O 8890/0)、平滑肌肉瘤(ICD-O 8890/3)、横纹肌瘤(ICD-O 8900/0)、横纹肌肉瘤(ICD-O 8900/3)、软骨瘤(ICD-O
9220/0)、软骨肉瘤(ICD-O 9220/3)、骨瘤(ICD-O 9180/0)、骨肉瘤(ICD-O 9180/3)、骨软骨瘤(ICD-O 9210/0)、血管瘤(ICD-O 9120/0)、上皮样血管内皮瘤(ICD-O 9133/1)、血管外皮瘤(ICD-O 9150/1，WHO II级)、间变性血管外皮瘤(ICD-O 9150/3，WHO III级)、和血管肉瘤(ICD-O 9120/3)3.2.22卡波西肉瘤(ICD-O 9140/3)、尤文肉瘤－PNET(ICD-O 9364/3)的间叶肿瘤，和
8810/3)、恶性纤维组织细胞瘤(ICD-O 8830/3)、平滑肌瘤(ICD-O 8890/0)、平滑肌肉瘤(ICD-O 8890/3)、横纹肌瘤(ICD-O 8900/0)、横纹肌肉瘤(ICD-O 8900/3)、软骨瘤(ICD-O
9220/0)、软骨肉瘤(ICD-O 9220/3)、骨瘤(ICD-O 9180/0)、骨肉瘤(ICD-O 9180/3)、骨软骨瘤(ICD-O 9210/0)、血管瘤(ICD-O 9120/0)、上皮样血管内皮瘤(ICD-O 9133/1)、血管外皮瘤(ICD-O 9150/1，WHO II级)、间变性血管外皮瘤(ICD-O 9150/3，WHO III级)、和血管肉瘤(ICD-O 9120/3)3.2.22卡波西肉瘤(ICD-O 9140/3)、尤文肉瘤－PNET(ICD-O 9364/3)的间叶肿瘤，和
[0151] iii)选自以下的原发性黑色素细胞性病变
[0152] 弥漫性黑色素细胞增生病(ICD-O 8728/0)、黑色素细胞瘤(ICD-O 8728/1)[0153] 恶性黑色素瘤(ICD-O 8720/3)、脑膜黑色素瘤病(ICD-O 8728/3)，和[0154] iv)其他脑膜相关性肿瘤如血管母细胞瘤(ICD-O 9161/1，WHO I级)、和[0155] d)选自以下的造血系统肿瘤
[0156] i)恶性淋巴瘤(ICD-O 9590/3)4.2浆细胞瘤(ICD-O 9731/3)，和
[0157] ii)颗粒细胞肉瘤(ICD-O 9930/3)，和
[0158] e)选自以下的蝶鞍区肿瘤
[0159] i)颅咽管瘤(ICD-O 9350/1，WHO I级)
[0160] ii)颗粒细胞瘤(ICD-O 9582/0，WHO I级)
[0161] iii)垂体细胞瘤(ICD-O 9432/1，WHO I级)、和
[0162] iv)垂体前叶梭形细胞嗜酸细胞瘤(ICD-O 8991/0，WHO I级)
[0163] 在一个实施方案中，要用本发明的抗整合素α10抗体或包含抗整合素α10抗体的组合物治疗的恶性肿瘤为胶质瘤。
[0164] 在一个实施方案中，要用本发明的抗整合素α10抗体或包含抗整合素α10抗体的组合物治疗的恶性肿瘤为II、III或IV级胶质瘤。
[0165] 在一个实施方案中，要用本发明的抗整合素α10抗体或包含抗整合素α10抗体的组合物治疗的恶性肿瘤为星形细胞瘤，如星形细胞瘤II级、星形细胞瘤III级或星形细胞瘤IV级。
[0166] 在一个实施方案中，要用本发明的抗整合素α10抗体或包含抗整合素α10抗体的组合物治疗的胶质瘤为胶质母细胞瘤。
[0167] 在一个实施方案中，所述胶质瘤为原发性胶质母细胞瘤。
[0168] 在一个实施方案中，所述胶质瘤为继发性胶质母细胞瘤。
[0169] 在一个实施方案中，要用本发明的抗整合素α10抗体或包含抗整合素α10抗体的组合物治疗的恶性肿瘤为髓母细胞瘤。
[0170] 在一个实施方案中，要用本发明的抗整合素α10抗体或包含抗整合素α10抗体的组合物治疗的恶性肿瘤为神经母细胞瘤。
[0171] 在一个实施方案中，要用本发明的组合物治疗的恶性肿瘤选自星形细胞瘤、间变性星形细胞瘤、血管外皮细胞瘤的脑、脑膜瘤、血管瘤型血管瘤、非典型性脑膜瘤、纤维母细胞型脑膜瘤、脑膜皮型脑膜瘤、分泌型脑膜瘤、少突星型细胞瘤、间变性少突星型细胞瘤、少突胶质细胞瘤和间变性少突胶质细胞瘤。
[0172] 在一个实施方案中，要用本发明的组合物治疗的恶性肿瘤选自下组：星形细胞肿瘤、少突胶质细胞肿瘤、室管膜细胞肿瘤、混合性胶质瘤、起源不明的神经上皮肿瘤、脉络丛的肿瘤、神经元及混合性神经元-胶质肿瘤、松果体实质肿瘤和具有成神经细胞或胶质母细胞成分的肿瘤(胚胎性肿瘤)、室管膜瘤、星形细胞瘤、少突胶质细胞瘤、少突星型细胞瘤、神经上皮肿瘤、以及神经元及混合性神经元-神经胶质肿瘤。
[0173] 在一个方面，本发明涉及对其有需要的受试者的中枢神经系统中的恶性肿瘤的治疗方法，所述方法包括对所述受试者施用与整合素α10亚基特异性结合的抗体。所述治疗可以是预防性、改善性或治愈性的。
[0174] 本文以上定义的治疗可以在所述受试者中检测到整合素α10亚基时开始。
[0175] 在一个方面，本发明涉及治疗罹患中枢神经系统中的恶性肿瘤的受试者的方法，所述方法包括：
[0176] a)根据本文定义的方法确定受试者是否罹患中枢神经系统的恶性肿瘤；和[0177] b)对诊断为患有中枢神经系统的恶性肿瘤的受试者，向所述受试者施用治疗有效量的与整合素α10亚基特异性结合的抗体。
[0178] 在一个方面，本发明涉及包含与整合素α10亚基特异性结合的抗体的组合物用于制备用于治疗中枢神经系统中的恶性肿瘤的药物的用途。
[0179] 另一方面，本发明涉及在哺乳动物中抑制肿瘤相关的血管化的方法，所述方法包括向所述哺乳动物施用治疗有效量的抗整合素α10亚基抗体。
[0180] 在一个实施方案中，本发明涉及用于抑制表达整合素α10亚基的细胞的生长和/或增殖的方法，其包括对所述细胞施用有效量的抗整合素α10亚基抗体。所述细胞可以表达一种或多种进一步的如本文定义的标记物。在特别优选的实施方案中，所述细胞为胶质瘤细胞。所述方法可以在体外或体内进行。
[0181] 在一个实施方案中，本发明涉及用于降低表达整合素α10亚基的细胞的致瘤或转移潜力的方法，其包括对所述细胞施用有效量的抗整合素α10亚基抗体。所述细胞可以表达一种或多种进一步的如本文定义的标记物。在特别优选的实施方案中，所述细胞为胶质瘤细胞。所述方法可以在体外或体内进行。本文报告的数据显示，用抗整合素α10亚基抗体治疗表达整合素α10亚基的胶质瘤(GBM)细胞，显著降低球体形成能力，因此指示用抗整合素α10亚基抗体治疗抑制或至少降低了表达整合素α10亚基的细胞形成肿瘤的能力。
[0182] 在进一步的实施方案中，治疗的方法包括使用本文所述方法获取中枢神经系统的图像以检测胶质瘤的定位，优选为其中所述定位是在3D空间中检测，并使用关于定位的信息来指导随后的放射治疗来治疗胶质瘤。
[0183] 在更进一步的实施方案中，外科医生能够在手术期间用整合素α10亚基特异性分子探针来检测胶质瘤的存在。
[0184] II.中枢神经系统的恶性肿瘤的检测和诊断
[0185] 本发明也涉及用于检测哺乳动物的中枢神经系统中的恶性肿瘤的方法，所述方法包括分析在分离样品中如下项的存在或者不存在：
[0186] a)包含整合素α10亚基多肽的抗原，或
[0187] b)编码整合素α10亚基多肽或其片段或变体的多核苷酸转录物，
[0188] 其中a)的抗原或存在b)的多核苷酸转录物的存在指示所述哺乳动物的中枢神经系统中的恶性肿瘤。
[0189] 另一方面，本发明涉及用于检测哺乳动物的中枢神经系统中的恶性肿瘤的方法，所述方法包括以下步骤：
[0190] a)向受试者施用能够与整合素α10亚基多肽或整合素α10亚基多核苷酸转录物特异性结合的分子探针，所述探针共价结合至可发射光子的部分，
[0191] b)检测从所述部分发射的光子并形成中枢神经系统或其部分的图像，[0192] 其中从所述部分的光子的局部发射指示所述哺乳动物的中枢神经系统中的恶性肿瘤。
[0193] 另一方面，本发明涉及诊断哺乳动物的中枢神经系统中的恶性肿瘤的体外诊断方法，所述方法包括以下步骤：
[0194] a)用能够与整合素α10亚基多肽或整合素α10亚基多核苷酸转录物特异性结合的分子探针接触体外样品，所述探针被共价结合至能够发射光子的部分，
[0195] b)检测从所述部分发射的光子并形成样品的图像，
[0196] 其中从所述部分的光子的局部发射指示所述哺乳动物的中枢神经系统中的恶性肿瘤。
[0197] 另一方面，本发明涉及用于检测在分离样品中的整合素α10亚基的体外方法，所述方法包括分析在分离样品中如下项的存在或不存在：
[0198] a)包含整合素α10亚基多肽的抗原，或
[0199] b)编码整合素α10亚基多肽或其片段或变体的多核苷酸转录物，
[0200] 其中a)的抗原或b)的多核苷酸转录物的存在指示所述分离样品中的恶性肿瘤。
[0201] 另一方面，本发明涉及药物包含具有相对整合素α10亚基的特异性的抗体或由其组成，用于检测哺乳动物的中枢神经系统的恶性肿瘤的相关细胞的用途，其中所述细胞表达整合素α10亚基。
[0202] 另一方面，本发明涉及诊断哺乳动物的中枢神经系统中的恶性肿瘤的体外诊断方法，所述方法包括以下步骤：
[0203] a)用能够与整合素α10亚基多肽或整合素α10亚基多核苷酸转录物特异性结合的分子探针接触体外样品，所述探针共价结合至可发射光子的部分，
[0204] b)检测从所述部分发射的光子并形成样品的图像，
[0205] 其中从所述部分的光子的局部发射指示所述哺乳动物的中枢神经系统中的恶性肿瘤。
[0206] 另一方面，本发明涉及用于检测从哺乳动物获得的分离样品中的整合素α10亚基的体外方法，所述方法包括分析如下项在分离样品中的存在或不存在：
[0207] a)包含整合素α10亚基多肽的抗原；和/或
[0208] b)编码整合素α10亚基多肽或其片段或变体的多核苷酸转录物，
[0209] 其中a)的抗原和/或b)的多核苷酸转录物的存在指示在所述哺乳动物的中枢神经系统中的恶性肿瘤。
[0210] 另一方面，本发明涉及与整合素α10亚基特异性结合的抗整合素α10亚基特异性抗体在体外、原位或体内检测生物样品中的中枢神经系统的恶性肿瘤的用途。
[0211] 另一方面，本发明涉及整合素α10亚基核酸探针在体外、原位或体内检测生物样品中的中枢神经系统的恶性肿瘤的用途，所述核酸探针在杂交反应中与整合素α10亚基mRNA或cDNA结合。
[0212] 另一方面，本发明涉及整合素α10亚基核酸探针化合物在制备用于诊断中枢神经系统的恶性肿瘤的试剂盒中的用途。
[0213] 另一方面，本发明涉及抗整合素α10亚基特异性抗体在制备用于诊断中枢神经系统的恶性肿瘤的试剂盒中的用途，所述抗体与整合素α10亚基结合。
[0214] 另一方面，本发明涉及整合素α10亚基核酸探针化合物用于制备用于诊断、监测或测定受试者是否具有中枢神经系统的恶性肿瘤的诊断剂的用途，其中制备所述诊断剂以测量生物样品中的整合素α10亚基多核苷酸的存在，其中在所述样品中整合素α10亚基多核苷酸的存在指示所述受试者的中枢神经系统的恶性肿瘤。
[0215] 另一方面，本发明涉及抗整合素α10亚基特异性抗体用于制备用于诊断、监测或测定哺乳动物是否具有中枢神经系统的恶性肿瘤的诊断剂的用途，所述抗体与整合素α10亚基结合，其中制备所述诊断剂以测量在样品中整合素α10亚基多肽的存在，其中在所述样品中整合素α10亚基多肽的存在指示所述哺乳动物的中枢神经系统的恶性肿瘤。
[0216] 另一方面，本发明涉及用于检测恶性或肿瘤相关哺乳动物细胞的方法，所述方法包括分析在分离样品中如下项的存在或者不存在：
[0217] a)包含整合素α10亚基多肽的第一抗原；和/或
[0218] b)编码整合素α10亚基多肽或其片段或变体的第一多核苷酸转录物；
[0219] 且
[0220] c)包含选自EGFRvIII、巢蛋白、PSA-NCAM、GFAP、PDGFRb(CD140b)、PECAM-1(CD31)、CD45、CD68、CD163和CD206的多肽的第二抗原；和/或
[0221] d)编码多肽或其片段或变体的第二多核苷酸转录物，其中所述多肽选自EGFRvIII、巢蛋白、PSA-NCAM、GFAP、PDGFRb(CD140b)、PECAM-1(CD31)、CD45、CD68、CD163、和CD206。
[0222] a)的第一抗原和/或b)的第一多核苷酸转录物；与c)的第二抗原和/或d)的第二转录物的存在指示所述哺乳动物细胞为恶性细胞或肿瘤相关细胞。
[0223] 另一方面，本发明涉及用于检测恶性或肿瘤相关细胞的哺乳动物的方法，所述方法包括以下步骤：
[0224] a)对哺乳动物施用能够与整合素α10亚基多肽；和/或与整合素α10亚基多核苷酸转录物特异性结合的第一分子探针，所述第一探针被共价结合至可发射光子的第一部分；和
[0225] b)对哺乳动物施用能够与选自下组的多肽：EGFRvIII、巢蛋白、PSA-NCAM、GFAP、PDGFRb(CD140b)、PECAM-1(CD31)、CD45、CD68、CD163、和CD206；和/或与编码选自下组的多肽的多核苷酸转录物：EGFRvIII、巢蛋白、PSA-NCAM、GFAP、PDGFRb(CD140b)、PECAM-1(CD31)、CD45、CD68、CD163、和CD206特异性结合的第二分子探针，所述第二探针被共价结合至可发射光子的第二部分；
[0226] c)检测从所述第一和所述第二部分发射的光子，因此形成中枢神经系统或其部分的图像。
[0227] 从所述第一和所述第二部分的光子的局部发射指示哺乳动物的恶性或肿瘤相关细胞。
[0228] CNS的恶性肿瘤
[0229] 恶性肿瘤以两种方法分类。它们根据其表观形态学分类，并根据其严重程度分级。该分级也基于肿瘤的组织学特征。
[0230] 例如在胶质瘤中，当恶性肿瘤它们在形态学上表现为星型细胞样时被命名为星形细胞瘤，和当恶性细胞在形态学上表现为少突胶质细胞样时被命名为少突胶质细胞瘤。也有混合性形式的胶质瘤，在这种情况下被命名为少突星型细胞瘤。
[0231] 肿瘤级别为肿瘤将要生长和扩散多快的指标。如果肿瘤的细胞和肿瘤的组织的结构与正常细胞和组织的结构相近，肿瘤被称为高度分化(低级)。这些肿瘤倾向于以比低分化或未分化的肿瘤慢的速率生长和扩散，低分化或未分化的肿瘤具有异常外观的细胞并且生长更快(高级)。对于胶质瘤分类的实例参见图1。
[0232] WHO的CNS肿瘤分级基于肿瘤的组织学特征，建立了恶性肿瘤量表。组织学分级如下：WHO I级包括具有增殖潜力低、常常可分离的特性的病变，和在仅手术切除后的治愈可能性。WHO II级包括常常浸润，有丝分裂活性低的病变，但在局部治疗后比I级恶性肿瘤复发更频繁。一些肿瘤类型倾向于向更高等级的恶性肿瘤发展。WHO III级包括具有恶性的组织学证据，包括核异型和有丝分裂活性增加的病变。这些病变具有间变性组织学和可浸润能力。这些病变经常用侵袭辅助治疗处理。WHO IV级包括为有丝分裂活性，易坏死，并通常与术前和术后快速发展和致命结果相关的病变。这些病变经常用侵袭辅助治疗处理。
[0233] 对于完整和现有分类，请参见2000年出版的新的世界卫生组织(WHO)的神经系统肿瘤分类，出自1999年international consensus conference of neuropathologists，(Kleihues and Cavanee,Eds.,2000:Pathology and Genetics of Tumours of the Nervous System.Lyon，France:International Agency For Research on Cancer.；Kleihues等(2002)The WHO Classification of Tumours of the Nervous System.Journal of Neuropathology&Experimental Neurology61:215-225)。实际分类伴随着每一个肿瘤类型的临床病理特征的大量的描述和说明，包括分子遗传特征、预测因素和针对遗传的肿瘤综合征的单独章节。
[0234] 本公开涉及特征在于整合素α10亚基表达的CNS中恶性肿瘤的检测和/或治疗。因此，在一个实施方案中，CNS的恶性肿瘤选自下组：
[0235] a)选自以下的神经上皮组织肿瘤
[0236] i)选自以下的星形细胞肿瘤
[0237] 毛细胞型星形细胞瘤(ICD-O 9421/1，WHO I级)、毛细胞粘液状星形细胞瘤(ICD-O 9425/3，WHO II级)、室管膜下巨细胞型星形细胞瘤(ICD-O 9384/1，WHO I级)、多形性黄色瘤型星形细胞瘤(ICD-O 9424/3，WHO II级)、弥漫性星形细胞瘤(ICD-O 9400/3，WHO II级)、间变性星形细胞瘤(ICD-O 9401/3，WHO III级)、胶质母细胞瘤(ICD-O 9440/3，WHO IV级)、巨细胞型胶质母细胞瘤(ICD-O 9441/3，WHO IV级)、胶质肉瘤(ICD-O 9442/3，WHO IV级)、大脑胶质瘤病(ICD-O 9381/3，WHO III级)、和
[0238] ii)选自以下的少突胶质细胞肿瘤
[0239] 少突胶质细胞瘤(ICD-O 9450/3，WHO II级)和间变性少突胶质细胞瘤(ICD-O 9451/3，WHO III级)、和
[0240] iii)选自以下的少突星型细胞肿瘤
[0241] 少突星型细胞瘤(ICD-O 9382/3，WHO II级)和间变性少突星型细胞瘤(ICD-O 9382/3，WHO III级)、和
[0242] iv)选自以下的室管膜肿瘤
[0243] 室管膜下室管膜瘤(ICD-O 9383/1，WHO I级)、粘液乳头状型室管膜瘤(ICD-O 9394/1，WHO I级)、室管膜瘤(ICD-O 9391/3，WHO II级)、间变性室管膜瘤(ICD-O 9392/3，WHO III级)、和
[0244] v)选自以下的脉络丛肿瘤
[0245] 脉络丛乳头状瘤(ICD-O 9390/0，WHO I级)、
[0246] 非典型性脉络丛乳头状瘤(ICD-O 9390/1，WHO II级)、和
[0247] 脉络丛癌(ICD-O 9390/3，WHO III级)、和
[0248] vi)选自以下的其它神经上皮肿瘤
[0249] 星形母细胞瘤(ICD-O 9430/3，WHO I级)、三脑室的脊索瘤样胶质瘤(ICD-O 9444/1，WHO II级)、和血管中心型胶质瘤(ICD-O 9431/1，WHO I级)和，
[0250] vii)选自以下的神经元及混合性神经元-胶质肿瘤
[0251] 小脑发育不良性神经节细胞瘤(Lhermitte-Duclos)(ICD-O 9493/0)、促纤维增生性婴儿星形细胞瘤/神经节胶质细胞瘤(ICD-O 9412/1，WHO I级)、胚胎发育不良性神经上皮肿瘤(ICD-O 9413/0，WHO I级)、神经节细胞瘤(ICD-O 9492/0，WHO I级)、神经节细胞胶质瘤(ICD-O 9505/1，WHO I级)、间变性神经节细胞胶质瘤(ICD-O 9505/3，WHO III级)、中枢神经细胞瘤(ICD-O 9506/1，WHO II级)、脑室外神经细胞瘤(ICD-O 9506/1，WHO II级)、小脑脂肪神经细胞瘤(ICD-O 9506/1，WHO II级)、
[0252] 乳头状型胶质神经元肿瘤(ICD-O 9509/1，WHO I级)、第四脑室菊形团形成型胶质神经元肿瘤(ICD-O 9509/1，WHO I级)、和副神经节瘤(ICD-O 8680/1，WHO I级)、和[0253] viii)选自以下的松果体区的肿瘤
[0254] 松果体细胞瘤(ICD-O 9361/1，WHO I级)、中等分化的松果体实质肿瘤(ICD-O 9362/3，WHOII、III级)、松果体母细胞瘤(ICD-O 9362/3，WHO IV级)、和松果体区乳头状肿瘤(ICD-O 9395/3，WHO II、III级)，和
[0255] ix)选自以下的胚胎性肿瘤
[0256] 髓母细胞瘤(ICD-O 9470/3，WHO IV级)、髓母细胞瘤伴广泛结节(ICD-O 9471/3，WHO IV级)、间变性髓母细胞瘤(ICD-O 9474/3，WHO IV级)、中枢神经系统原始神经外胚层肿瘤(ICD-O 9473/3，WHO IV级)、中枢神经系统神经母细胞瘤(ICD-O 9500/3，WHO IV级)、和非典型性畸胎瘤/横纹肌样肿瘤(ICD-O 9508/3，WHO IV级)、和
[0257] b)选自以下的颅神经和脊旁神经肿瘤
[0258] i)许旺细胞瘤(ICD-O 9560/0，WHO I级)
[0259] ii)神经纤维瘤(ICD-O 9540/0，WHO I级)、
[0260] iii)神经束膜瘤(ICD-O 9571/0，9571/3，WHOI、II、III级)，和
[0261] iv)恶性外周神经鞘膜瘤(MPNST)(ICD-O 9540/3，WHOII、III、IV级)，和[0262] c)选自以下的脑膜肿瘤
[0263] i)选自脑膜瘤(ICD-O 9530/0，WHO I级)、非典型性脑膜瘤(ICD-O 9539/1，WHO II级)、间变性脑膜瘤(ICD-O 9530/3，WHO III级)的脑膜皮细胞肿瘤、和
[0264] ii)选自脂肪瘤(ICD-O 8850/0)、血管脂肪瘤(ICD-O 8861/0)、冬眠瘤(ICD-O 8880/0)、脂肪肉瘤(ICD-O 8850/3)、单发性纤维性肿瘤(ICD-O 8815/0)、纤维肉瘤(ICD-O
8810/3)、恶性纤维组织细胞瘤(ICD-O 8830/3)、平滑肌瘤(ICD-O 8890/0)、平滑肌肉瘤(ICD-O 8890/3)、横纹肌瘤(ICD-O 8900/0)、横纹肌肉瘤(ICD-O 8900/3)、软骨瘤(ICD-O
9220/0)、软骨肉瘤(ICD-O 9220/3)、骨瘤(ICD-O 9180/0)、骨肉瘤(ICD-O 9180/3)、骨软骨瘤(ICD-O 9210/0)、血管瘤(ICD-O 9120/0)、上皮样血管内皮瘤(ICD-O 9133/1)、血管外皮瘤(ICD-O 9150/1，WHO II级)、间变性血管外皮瘤(ICD-O 9150/3，WHO III级)、和血管肉瘤(ICD-O 9120/3)3.2.22卡波西肉瘤(ICD-O 9140/3)、尤文肉瘤－PNET(ICD-O 9364/3)的间叶肿瘤，和
8810/3)、恶性纤维组织细胞瘤(ICD-O 8830/3)、平滑肌瘤(ICD-O 8890/0)、平滑肌肉瘤(ICD-O 8890/3)、横纹肌瘤(ICD-O 8900/0)、横纹肌肉瘤(ICD-O 8900/3)、软骨瘤(ICD-O
9220/0)、软骨肉瘤(ICD-O 9220/3)、骨瘤(ICD-O 9180/0)、骨肉瘤(ICD-O 9180/3)、骨软骨瘤(ICD-O 9210/0)、血管瘤(ICD-O 9120/0)、上皮样血管内皮瘤(ICD-O 9133/1)、血管外皮瘤(ICD-O 9150/1，WHO II级)、间变性血管外皮瘤(ICD-O 9150/3，WHO III级)、和血管肉瘤(ICD-O 9120/3)3.2.22卡波西肉瘤(ICD-O 9140/3)、尤文肉瘤－PNET(ICD-O 9364/3)的间叶肿瘤，和
[0265] iii)选自以下的原发性黑色素细胞性病变
[0266] 弥漫性黑色素细胞增生病(ICD-O 8728/0)、黑色素细胞瘤(ICD-O 8728/1)[0267] 恶性黑色素瘤(ICD-O 8720/3)、脑膜黑色素瘤病(ICD-O 8728/3)，和[0268] iv)其他脑膜相关性肿瘤如血管母细胞瘤(ICD-O 9161/1，WHO I级)、和[0269] d)选自以下的造血系统肿瘤
[0270] i)恶性淋巴瘤(ICD-O 9590/3)4.2浆细胞瘤(ICD-O 9731/3)，和
[0271] ii)颗粒细胞肉瘤(ICD-O 9930/3)，和
[0272] e)选自以下的蝶鞍区肿瘤
[0273] i)颅咽管瘤(ICD-O 9350/1，WHO I级)
[0274] ii)颗粒细胞瘤(ICD-O 9582/0，WHO I级)
[0275] iii)垂体细胞瘤(ICD-O 9432/1，WHO I级)、和
[0276] iv)垂体前叶梭形细胞嗜酸细胞瘤(ICD-O 8991/0，WHO I级)。
[0277] 在一个实施方案中，利用本发明的方法检测和/或治疗的恶性肿瘤为胶质瘤，如II、III或IV级胶质瘤。在另一个实施方案中，利用本发明的方法检测和/或治疗的恶性肿瘤为星形细胞瘤。
[0278] 在某些实施方案中，恶性肿瘤为胶质瘤如胶质母细胞瘤。利用本发明检测的胶质母细胞瘤肿瘤也可以选自下组：星形细胞肿瘤、少突胶质细胞肿瘤、室管膜细胞肿瘤、混合性胶质瘤、未明确起点的神经上皮肿瘤、脉络丛的肿瘤、神经元及混合性神经元－胶质肿瘤、松果体实质肿瘤和具有成神经细胞或胶质母细胞成分的肿瘤(胚胎性肿瘤)、室管膜瘤、星形细胞瘤、少突胶质细胞瘤、少突星型细胞瘤、神经上皮肿瘤、以及神经元及混合性神经元-神经胶质肿瘤。
[0279] III.整合素α10亚基
[0280] 整合素类是包含α和β亚基的异二聚体。整合素α10β1异二聚体可以利用抗整合素α10亚基特异性抗体和整合素α10亚基结合肽和蛋白质检测。整合素α10β1是在软骨组织中最丰富的胶原结合整合素，其表达模式与其他胶原结合整合素不同。体外和体内研究，已经将整合素α10β1鉴别为对于软骨细胞分化的独特表型标记物，并且是适当的软骨发育所需要的细胞-基质相互作用的关键介质(Lundgren kerlund and Aszòdi(2014)Adv Exp Med Biol.819:61-71)。
[0281] 在1998年，整合素α10β1被鉴别为胶原II型结合受体关节软骨细胞(Camper等，1998)。在发展期间和成年组织中的免疫组化分析已经证明了所述标记物对含软骨组织的限制定位(Camper等，1998，Camper等，2001)。缺少所述标记物的敲除小鼠具有紊乱的生长板、在基质中胶原降低和更短的长骨，进一步支持了其的细胞结构重要性(Bengtsson等，
2005)。所述氨基酸序列、变体、同种型和序列诠释可以在Uniprot登录号O75578-ITA10_HUMAN中找到。
2005)。所述氨基酸序列、变体、同种型和序列诠释可以在Uniprot登录号O75578-ITA10_HUMAN中找到。
[0282] 再者，整合素α10β1存在于间充质干细胞(MSCs)，并在聚集培养物中的体外软骨形成期间增加。软骨大量的培养的MSCs下调整合素α10β1，而当培养的间充质干细胞用成纤维细胞生长因子-2处理时，软骨特异性分子，如胶原蛋白II型和聚集蛋白聚糖(aggrecan)与整合素α10β1一起增加表达。这表明α10β1为具有软骨形成潜力的MSCs的细胞表面生物标记物(Varas等，2007)。
[0283] 早前已经对数种不同小鼠脑结构(包括全脑)分析了整合素α10亚基的表达，并显示在分析的任何健康脑结构中，没有整合素α10亚基的表达(WO 99/51639)。
[0284] 因此整合素α10亚基是对疾病的优异生物标记物。因此本发明涉及抗原整合素α10亚基多肽的检测，例如用直接对SEQ ID NO:1(整合素α10亚基)、SEQ ID NO:2(整合素α10的胞外结构域)或SEQ ID NO:3(整合素α10的细胞外I结构域)特异性的抗体。进一步的抗原是作为整合素α10亚基的同种型、剪接变体或天然存在的变体的抗原。
[0285] 在一个实施方案中，通过检测作为整合素α10亚基的变体的抗原的存在或不存在来检测或诊断CNS的恶性肿瘤，其中所述变体与SEQ ID NO:1、2或3至少70％相同，例如与SEQ ID NO:1、2或3至少75％相同的变体，如与SEQ ID NO:1、2或3至少80％相同的变体，例如与SEQ ID NO:1、2或3至少85％相同的变体，如与SEQ ID NO:1、2或3至少90％相同的变体，例如与SEQ ID NO:1、2或3至少95％相同的变体，如与SEQ ID NO:1、2或3至少96％相同的变体，例如与SEQ ID NO:1、2或3至少97％相同的变体，例如与SEQ ID NO:1、2或3至少98％相同的变体，例如与SEQ ID NO:1、2或3至少99％相同的变体，如与SEQ ID NO:1、2或3至少99.5％相同的变体。
[0286] 在一个实施方案中，通过检测作为抗原的整合素α10亚基的片段的存在或不存在来检测或诊断CNS的恶性肿瘤，其中所述片段包含SEQ ID NO:1的至少100个连续氨基酸，优选SEQ ID NO:1的至少200个连续氨基酸，优选SEQ ID NO:1的至少300个连续氨基酸，优选SEQ ID NO:1的至少400个连续氨基酸，优选SEQ ID NO:1的至少500个连续氨基酸，优选SEQ ID NO:1的至少600个连续氨基酸，优选SEQ ID NO:1的至少700个连续氨基酸，优选SEQ ID NO:1的至少800个连续氨基酸，优选SEQ ID NO:1的至少900个连续氨基酸，优选SEQ ID NO:1的至少1000个连续氨基酸。
[0287] 通过分析样品中mRNA转录物(其在翻译时生产如本文以上定义的整合素α10亚基抗原)的存在，也能够在核苷酸水平检测整合素α10亚基。
[0288] 针对整合素α10亚基的抗体
[0289] 在一个实施方案中，在生物样品中整合素α10亚基(通常以整合素α10β1异二聚体蛋白质的一部分的形式)的存在，通过使用在免疫反应中与整合素α10亚基结合的抗整合素α10-特异性抗体来检测。优选抗体与整合素α10亚基胞外结构域结合，但在某些实施方案中，抗整合素α10亚基抗体具有对整个整合素α10β1异二聚体复合体的重叠特异性。这可以例如意味本发明的抗体与覆盖α10亚基和β1亚基两者的表位结合。
[0290] 抗体和其功能等效物可以通过本领域技术人员已知的任何适合方法产生。在一个实施方案中，本发明的抗体产生于杂交瘤细胞系(例如以保藏号DSM ACC2583保藏于Deutsche Sammlung von Microorganismen und Zellkulturen GmbH的mAb 365杂交瘤细胞系)中，这样产生与细胞外α10β1-结构域结合的抗体。整合素α10β1的基因敲除小鼠的可以使用用于产生所述杂交瘤。敲除小鼠描述于WO 03/101497中，通过提述并入本文。
[0291] 一种产生特异性识别和结合整合素α10亚基的胞外结构域或I结构域中的表位的抗体的方法，其包括对哺乳动物施用整合素α10亚基的胞外结构域或I结构域或其片段或其功能同系物的步骤。所述整合素α10亚基的胞外结构域或I结构域或其片段或其功能同系物，可以为本文所述的任何整合素α10亚基片段和肽。本文中，施用给所述哺乳动物的整合素α10亚基的胞外结构域或I结构域或其片段或其功能同系物也被指定为“整合素α10亚基抗原”或“整合素α10抗原”。
[0292] 在一个实施方案中，本发明涉及产生能够抑制整合素α10亚基的活性抗体的方法，其中所述抗体特异性识别在整合素α10亚基的胞外结构域或I结构域中的表位。
[0293] 整合素α10亚基抗原可以施用至所述哺乳动物多于一次，如2次，例如3次，如3至5次，例如5至10次，如10至20次，例如20至50次，如多于50次。也可能将不同的整合素α10亚基抗原同时或以任何顺序序贯施用于同一哺乳动物。
[0294] 通常，施用前整合素α10亚基抗原将在水溶液或悬浮液中。此外，可以将整合素α10亚基抗原与一种或多种其它化合物混合。例如，整合素α10亚基抗原可以与一种或多种适当的佐剂和/或与一种或多种载体混合。
[0295] 佐剂是任何这样的物质，所述物质与施用的抗原的混合物增加或者调节对所述抗原的免疫反应。适当佐剂为本领域技术人员所熟知。
[0296] 载体为能够缔合抗原的支架(scaffold)结构，例如多肽或多糖。载体可以无佐剂独立存在。适当载体为本领域技术人员所熟知。
[0297] 制备单克隆抗体、单克隆抗体的混合物或多克隆抗体的方法为本领域已知，并例如描述于Antibodies:A Laboratory Manual,By Ed Harlow and David Lane,Cold Spring Harbor Laboratory Press,1988中。
[0298] 在一个实施方案中，本发明的抗整合素α10亚基为能够抑制整合素α10亚基的生物学活性的抗体。
[0299] 在一个实施方案中，本发明的抗体具有选自IgA、IgD、IgG和IgM的同种型。在进一步的实施方案中，抗体为IgG同种型，如选自IgG1、IgG2(例如IgG2a)、IgG3和IgG4的IgG同种型。
[0300] 本发明考虑了能够与整合素α10亚基结合的单克隆和多克隆抗体两者和其片段，其抗原结合片段和重组蛋白质。
[0301] 在一个实施方案中，用于检测生物样品中的整合素α10亚基的存在的抗整合素α10亚基特异性抗体为多克隆抗体。
[0302] 在一个实施方案中，用于检测整合素α10亚基抗原的抗体为抗体片段。抗体的抗原结合片段，为抗体的保持与抗原特异性结合能力的片段。本发明的抗体片段的实例包括选自以下的抗体片段：Fab-片段、Fab'片段、F(ab')2片段和Fv片段、如单链可变片段(scFv)和单域抗体。
[0303] 根据本发明的抗体也可以是嵌合抗体，即包含源自不同种的区域的抗体。嵌合抗体可以例如包含来自一种动物的可变区和来自另一种动物的恒定区。例如，嵌合抗体可以是具有源自小鼠单克隆抗体的可变区和源自人的恒定区的抗体。这样的抗体也可以称为人源化抗体。
[0304] 在一个实施方案中，抗体是异种特异性抗体如双特异性抗体，其为蛋白质或多肽，其包含具有不同特异性的两个不同的抗原结合部位。例如，双特异性抗体可以识别和与(a)在整合素α10亚基的表位和(b)在整合素α10亚基上的另一表位结合。其可以因此识别和与具有相同抗原的两个不同表位结合。术语“异种特异性抗体”意欲包括具有具有不同特异性的多于两个的不同抗原结合位点的任何蛋白质或多肽。因此，本发明包括但不限于涉及整合素α10亚基的双特异性、三特异性、四特异性和其它多特异性抗体。
[0305] 在一个实施方案中，特异性针对整合素α10亚基的抗体为：
[0306] a)单克隆抗体，加工by所述杂交瘤细胞系保藏于Deutsche Sammlung von Microorganismen und Zellkulturen GmbH的保藏号DSM ACC2583；或
[0307] b)抗体，其与由保藏于Deutsche Sammlung von Microorganismen und Zellkulturen GmbH的保藏号DSM ACC2583的杂交瘤产生的单克隆抗体结合的表位相同的表位竞争结合；或
[0308] c)a)或b)的片段，其中所述片段能够与整合素α10的细胞外I结构域亚基链特异性结合。
[0309] 为了在检测抗整合素α10亚基抗体时得到良好的信噪比，可能需要将一部分缀合至抗体以方便检测。
[0310] 在一个实施方案中，抗体与可检测部分共价结合，如选自荧光团、酶或放射性示踪物的可检测部分。也能够以通过检测除了整合素α10亚基以外的肽、蛋白质或多肽来检测整合素α10亚基抗原，其中所述其它肽、蛋白质或多肽能够与整合素α10亚基抗原特异性结合。在一个实施方案中，所述肽、蛋白质或多肽连接至酶、荧光团或放射性示踪物。放射性示踪物可以例如选自正电子发射体或γ发射体。
[0311] 所述本领域技术人员能够根据样品的情况和物理状态选择标准实验室设备用于检测抗整合素α10亚基抗体。
[0312] 在一个实施方案中，本领域技术人员将使用流式细胞术如荧光活化细胞分选(FACS)进行检测步骤。
[0314] 检测整合素α10亚基可以使用本领域熟知的检测和成像方法实现，如临床成像，如常用荧光显微镜、共聚焦显微镜、双光子显微镜、受激发射损耗(Stimulated emission depletion)(STED)等。
[0315] 用于检测整合素α10亚基的分子探针
[0316] 对于整合素α10亚基抗原或整合素α10亚基编码多核苷酸的存在的生物样品的分析，也能够通过使用分子探针(蛋白质或多核苷酸)或通过使用PCR，优选Q-PCR实施，所述分子探针能够与整合素α10亚基mRNA、cDNA或蛋白质结合或杂交来检测其在生物样品中的表达。
[0317] 在一个实施方案中，整合素α10亚基特异性多核苷酸探针与任选能够发射光子的可检测部分连接。通过使用该实施方案，待诊断或研究的受试者可以通过使用可激励所述可检测部分例如荧光团的光源被照射。用于检测光子的方法包括但不限于PET扫描和SPECT扫描。
[0318] 在某些实施方案中，可检测部分选自荧光团、酶或放射性示踪物。
[0319] 多核苷酸转录物也可以使用PCR进行检测，优选Q-PCR。
[0320] 在进一步的实施方案中，在生物样品中的整合素α10亚基的存在，通过使用在杂交反应中与整合素α10亚基RNA或cDNA结合的整合素α10亚基核酸探针检测。
[0321] 示例性核酸整合素-α10-特异性靶向成分包括：DNA-探针、反义RNA或RNAi，如微小RNA、短干扰RNA(siRNA)和短发夹RNA(shRNA)。
[0322] 用于检测核酸的本领域熟知的常用方法包括但不限于：Northern印迹、Southern印迹、聚合酶链式反应(PCR)、基因芯片、原位杂交等。
[0323] 在进一步的实施方案中。生物样品中的整合素α10亚基的存在通过使用整合素α10亚基结合肽或蛋白质检测。这些肽或蛋白质可以重组制作、化学合成，或从天然来源纯化。
[0324] 在进一步的实施方案中，生物样品中的整合素α10亚基的存在通过使用整合素α10亚基-特异性抗体，或整合素α10亚基结合肽或蛋白质，或在杂交反应中与整合素α10亚基RNA或cDNA结合的整合素α10亚基核酸探针进行体内检测。
[0325] 用于在体内检测细胞表面抗原的本领域熟知的常用方法包括但不限于：正电子发射断层扫描、x-ray计算机断层扫描(CT)，磁共振成像(MRI)和功能磁共振成像(fMRI)、超声和单光子发射计算机断层扫描(SPECT)。特别地，细胞表面抗原可以使用用与抗体结合的放射性示踪物或其它特异性结合蛋白质进行免疫标记，在体内成像。
[0326] 优选用于体内成像的抗体为如Fab片段和单链抗体的抗体片段，这归因于它们更小的体积及不存在效应功能。
[0327] 进一步，方法的步骤可以涵盖：将检测到整合素α10亚基的量与阳性和/或阴性对照相比，因此检测CNS的恶性肿瘤。这可以通过特定实验组中设置染色的背景水平来进行，所述特定实验组建立为能够将阳性染色与阴性区分以评估该方法已经如预期相应地进行，并且阳性染色是所述肿瘤检测为真。
[0328] 进一步，阳性对照可以包括已知表达整合素α10亚基的细胞系或组织。对照样品的实例包括但不限于胶质母细胞瘤细胞系。
[0329] 进一步，阴性对照可以包括已知不表达整合素α10亚基的细胞系或组织。对照样品的实例包括但不限于来自脑如人脑的正常细胞、组织或细胞系。
[0330] IV.与整合素α10亚基共表达的标记物
[0331] 恶性肿瘤细胞也称为癌症细胞，是癌症作为疾病的基础。这些细胞启动肿瘤并推动肿瘤向前发展，携带了将癌症定义为遗传疾病的致癌和肿瘤抑制基因突变(Hanahan和Weinberg(2011)Cell 144(5):646-74))。
[0332] 恶性肿瘤细胞的具体特征是其侵入邻近组织、进入血管、转移到较远部位。除了恶性细胞以外，肿瘤微环境也包括非恶性细胞(例如成纤维细胞、肌成纤维细胞、内皮细胞、周细胞和炎症细胞)和分泌包围和支持肿瘤生长的蛋白质。在肿瘤细胞和微环境的交叉对话，在一个方向上改变了微环境的组成，且相反地，微环境影响肿瘤细胞如何生长和扩散(Ansell和Vonderheide(2013)Ansell SM，Vonderheide RH(2013)Cellular composition of the tumour microenvironment.Am Soc Clin Oncol Educ Book)。
[0333] 肿瘤微环境组成分类取决于肿瘤部位。脑具体包括多种特化的细胞类型如小胶质细胞、星形胶质细胞和脑内皮细胞。除了脑-固有细胞以外，显示脑肿瘤也被不同群体的造血细胞浸润(Lorger(2012)Cancers 4:218-243)。
[0334] 许多不同细胞类型是用于癌症治疗的可能靶点。例如显示脑中的血管在胶质瘤中对癌症干细胞群体的扩大和维持较重要，显示周细胞和它们与肿瘤脉管的相互作用在动物模型中对颅内肿瘤生长较关键，以及抑制内皮祖细胞向肿瘤募集也有治疗价值。
[0335] 普遍认为血管通过向癌细胞提供营养和氧来促进肿瘤生长。而且，肿瘤细胞通过沿在内皮细胞与星形胶质细胞足突突起之间的近腔血管位置迁移，使用血管来扩散通过脑实质。在原发性脑肿瘤中，癌症干细胞(CSC)群体的维持也取决于所谓的血管周围小生境(perivascular niche)的存在。
[0336] 单核细胞系的细胞基于它们的成熟状态进行分类，且它们的子代包括巨噬细胞和树突细胞。这些细胞的分化由多种细胞表面标记物如CD11c、CD14和CD68定义。
[0337] 单核细胞对所述天然免疫反应至关重要，用作针对病原体的抗性的第一线，也激活适应性免疫应答。取决于刺激的类型，巨噬细胞可以经历经典M1活化(通过脂多糖和IFN-γ刺激)或，可替换地M2活化(通过IL-4和IL-13刺激)。产生的M1和M2巨噬细胞产生不同的细胞因子并在天然免疫反应中具有不同功能作用。例如，M1巨噬细胞分泌IL-12并促进TH1细胞发育，而M2巨噬细胞生产IL-10并有助于TH2细胞的发育(Schmieder等(2012)Semin Cancer Biol.22:289-297)。M1巨噬细胞被向早期-阶段肿瘤招募，响应炎症信号渗透肿瘤微环境。随后，M1巨噬细胞释放促炎性细胞因子和趋化因子以促进T细胞和NK细胞的发展和分化。在后期阶段，巨噬细胞分化成称为肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)的亚群。TAMs可以极化为M2细胞，释放细胞因子以促使TH2分化和募集。此外，TAM通过分泌抑制性细胞因子(例如TGF-)来抑制抗肿瘤免疫，导致血管生成增加和涉及支持肿瘤生长的生长因子的表达增加。临床观察表明，肿瘤内巨噬细胞的数量或密度的增加与大多数恶性肿瘤的发展和预后均相关(Bingle等(2002)Bingle L,Brown NJ,Lewis CE.(2002)。肿瘤相关巨噬细胞在肿瘤发展中的作用阐述于Bingle等(2002)J Pathol.196:254-265中。
[0338] 如实施例7和图8-9所证明，本发明人发现有许多标记物与整合素α10亚基各种程度共表达。这些标记物包括EGFRvIII、巢蛋白、PSA-NCAM、GFAP、PDGFRb(CD140b)、PECAM-1(CD31)、CD45、CD68、CD163和CD206。基于这些发现，发明人提供了用于检测和治疗细胞包括哺乳动物的中枢神经系统的恶性肿瘤的多维度方法。
[0339] 因此，从一个方面，本发明涉及用于检测恶性或肿瘤相关哺乳动物细胞的方法，所述方法包括分析在分离样品中如下项的存在或者不存在：
[0340] a)包含整合素α10亚基多肽的第一抗原；和/或
[0341] b)编码整合素α10亚基多肽或其片段或变体的第一多核苷酸转录物；和[0342] c)包含选自EGFRvIII、巢蛋白、PSA-NCAM、GFAP、PDGFRb(CD140b)、PECAM-1(CD31)、CD45、CD68、CD163和CD206的多肽的第二抗原；和/或
[0343] 编码多肽或其片段或变体的第二多核苷酸转录物，其中所述多肽选自EGFRvIII、巢蛋白、PSA-NCAM、GFAP、PDGFRb(CD140b)、PECAM-1(CD31)、CD45、CD68、CD163和CD206；
[0344] 其中a)的第一抗原和/或b)的第一多核苷酸转录物；与c)的第二抗原和/或d)的第二转录物的存在指示所述哺乳动物细胞为恶性或肿瘤相关细胞。
[0345] 在一个方面，本发明涉及用于检测哺乳动物的恶性或肿瘤相关细胞的方法，所述方法包括以下步骤：
[0346] a)对受试者施用能够与整合素α10亚基多肽；和/或与整合素α10亚基多核苷酸转录物特异性结合的第一分子探针，所述第一探针被共价结合至可发射光子的第一部分；和[0347] b)对受试者施用能够与选自下组的多肽：其中所述多肽选自EGFRvIII、巢蛋白、PSA-NCAM、GFAP、PDGFRb(CD140b)、PECAM-1(CD31)、CD45、CD68、CD163、和CD206；和/或与编码选自下组的多肽的多核苷酸转录物：EGFRvIII、巢蛋白、PSA-NCAM、GFAP、PDGFRb(CD140b)、PECAM-1(CD31)、CD45、CD68、CD163、和CD206特异性结合的第二分子探针，所述第二探针被共价结合至可发射光子的第二部分；
[0348] c)检测从所述第一和所述第二部分发射的光子，因此形成中枢神经系统或其部分的图像，
[0349] 其中从所述第一和所述第二部分的光子的局部发射指示所述哺乳动物的恶性或肿瘤相关细胞的。
[0350] EGFRvIII
[0351] 表皮生长因子受体(EGFR)在多种人上皮肿瘤过表达，通常作为基因扩增的结果。具有EGFR基因扩增的肿瘤经常包含EGFR基因重排，具有最常见的胞外结构域突变EGFRvIII。已经显示异常的EGFRvIII信号在重要推动肿瘤发展中较重要，并通常与不良预后相关。显然，EGFRvIII在可观比例的具有多形性胶质母细胞瘤(GBM)的患者中表达。
EGFRvIII在其它肿瘤类型中的存在然而仍保持争议。(Gan等(2013)FEBS J 280(21):5350-
5370)。本发明人发现：在恶性细胞中，EGFRvIII以非常高的程度与整合素α10亚基共表达。
因此在本发明的一个实施方案中，检测共表达整合素α10亚基抗原和EGFRvIII抗原的细胞指示在所述样品来源的哺乳动物中所述细胞为恶性细胞，如CNS的恶性肿瘤的细胞，例如胶质瘤的细胞。在另一实施方案中，检测包含多核苷酸转录物编码整合素α10亚基多肽；和多核苷酸转录物编码EGFRvIII多肽的细胞，指示所述样品来源的哺乳动物中所述细胞为恶性细胞，如CNS的恶性肿瘤的细胞，例如胶质瘤的细胞。
EGFRvIII在其它肿瘤类型中的存在然而仍保持争议。(Gan等(2013)FEBS J 280(21):5350-
5370)。本发明人发现：在恶性细胞中，EGFRvIII以非常高的程度与整合素α10亚基共表达。
因此在本发明的一个实施方案中，检测共表达整合素α10亚基抗原和EGFRvIII抗原的细胞指示在所述样品来源的哺乳动物中所述细胞为恶性细胞，如CNS的恶性肿瘤的细胞，例如胶质瘤的细胞。在另一实施方案中，检测包含多核苷酸转录物编码整合素α10亚基多肽；和多核苷酸转录物编码EGFRvIII多肽的细胞，指示所述样品来源的哺乳动物中所述细胞为恶性细胞，如CNS的恶性肿瘤的细胞，例如胶质瘤的细胞。
[0352] 巢蛋白
[0353] 巢蛋白为VI型中间纤维(IF)蛋白质。这些中间丝蛋白主要表达在神经元中，其中它们与轴突的径向生长有关。巢蛋白是最广泛使用的在发育神经系统的各种区域和体外培养细胞中鉴定CNS干细胞的标记物。本发明人发现：在一些CNS细胞中巢蛋白与整合素α10亚基共表达。因此在本发明的一个实施方案中，检测共表达整合素α10亚基抗原和巢蛋白抗原的细胞指示所述样品来源的哺乳动物中所述细胞为恶性或肿瘤相关细胞，如CNS的恶性肿瘤的细胞，例如胶质瘤的细胞。在另一实施方案中，检测包含编码整合素α10亚基多肽的多核苷酸转录物；和编码巢蛋白多肽的多核苷酸转录物的细胞，指示所述样品来源的哺乳动物中所述细胞为恶性或肿瘤相关细胞，如CNS的恶性肿瘤的细胞，例如胶质瘤的细胞。
[0354] PSA-NCAM
[0355] 多唾液酸神经细胞粘附分子(PolySialylated Neuronal Cell Adhesion Molecule)(PSA-NCAM)为在未成熟脊椎动物神经系统中发育和迁移神经元的标记物及突触发生的标记物。本发明人发现：在恶性或肿瘤相关的细胞中PSA-NCAM与整合素α10亚基共表达。因此在本发明的一个实施方案中，检测到共表达整合素α10亚基抗原和PSA-NCAM抗原的细胞，指示所述样品来源的哺乳动物中所述细胞为恶性或肿瘤相关细胞，如CNS的恶性肿瘤的细胞，例如胶质瘤的细胞。
[0356] 在另一实施方案中，检测包含编码整合素α10亚基多肽的多核苷酸转录物；和编码PSA-NCAM多肽的多核苷酸转录物的细胞指示在所述样品来源的哺乳动物中所述细胞为恶性或肿瘤相关细胞，如CNS的恶性肿瘤的细胞，例如胶质瘤的细胞。
[0357] GFAP
[0358] 胶质纤维酸性蛋白(GFAP)是由中枢神经系统(CNS)的多种细胞类型包括星形胶质细胞和室管膜细胞表达的中间纤维(IF)蛋白质。GFAP被认为帮助保持星形胶质细胞机械强度以及细胞的形状,但对其准确功能仍然理解不多，尽管使用其作为细胞标记物的研究数目众多。
[0359] 本发明人发现：在恶性细胞中GFAP与整合素α10亚基共表达。因此在本发明的一个实施方案中，检测共表达整合素α10亚基抗原和GFAP抗原的细胞指示在所述样品来源的哺乳动物中所述细胞为恶性或肿瘤相关细胞，如CNS的恶性肿瘤的细胞，例如胶质瘤的细胞。在另一实施方案中，检测包含编码整合素α10亚基多肽的多核苷酸转录物；和编码GFAP多肽的多核苷酸转录物的细胞，指示所述样品来源的哺乳动物中所述细胞为恶性或肿瘤相关细胞，如CNS的恶性肿瘤的细胞，例如胶质瘤的细胞。
[0360] PDGFRb(CD140b)
[0361] β型血小板衍生生长因子受体为在人中由PDGFRB基因编码的蛋白质。该基因编码用于血小板衍生生长因子家族的成员细胞表面酪氨酸激酶受体。这些生长因子为用于细胞的间充质起点的丝裂原。本发明人发现：在恶性细胞中PDGFRb/CD140b与整合素α10亚基共表达。因此在本发明的一个实施方案中，检测共表达整合素α10亚基抗原和PDGFRb/CD140b抗原的细胞指示在所述样品来源的哺乳动物中所述细胞为恶性或肿瘤相关细胞，如CNS的恶性肿瘤的细胞，例如胶质瘤的细胞。在另一实施方案中，检测包含编码整合素α10亚基多肽的多核苷酸转录物；和编码PDGFRb/CD140b多肽的多核苷酸转录物的细胞，指示所述样品来源的哺乳动物中所述细胞为恶性或肿瘤相关细胞，如CNS的恶性肿瘤的细胞，例如胶质瘤的细胞。
[0362] PECAM-1(CD31)
[0363] 也称为分化簇31(CD31)血小板内皮细胞粘附分子(PECAM-1)在从人体中除去老年嗜中性粒细胞中起关键作用。PECAM-1通常发现于内皮细胞、血小板、巨噬细胞和枯否细胞、粒细胞、T/NK细胞、淋巴细胞、巨核细胞、破骨细胞、嗜中性粒细胞上。CD31也在某些肿瘤包括上皮样血管内皮瘤、上皮样肉瘤样血管内皮瘤、其他脉管肿瘤、组织细胞性恶性肿瘤和浆细胞瘤中表达。其在一些肉瘤如卡波西氏肉瘤和癌症(carcinoma)中很少发现。本发明人发现：在恶性细胞中PECAM-1(CD31)与整合素α10亚基共表达。因此在本发明的一个实施方案中，检测共表达整合素α10亚基抗原和PECAM-1(CD31)抗原的细胞指示在所述样品来源的哺乳动物中所述细胞为恶性或肿瘤相关细胞，如CNS的恶性肿瘤的细胞，例如胶质瘤的细胞。在另一实施方案中，检测包含编码整合素α10亚基多肽的多核苷酸转录物；和编码PECAM-1(CD31)多肽的多核苷酸转录物的细胞，指示所述样品来源的哺乳动物中所述细胞为恶性或肿瘤相关细胞，如CNS的恶性肿瘤的细胞，例如胶质瘤的细胞。
[0364] CD45
[0365] CD45也称为蛋白酪氨酸磷酸酶受体型C(PTPRC)，是一种在人中由PTPRC基因编码的酶。CD45是以各种形式存在于所有分化的造血细胞(除了协助激活这些细胞的红细胞和浆细胞)上的I型跨膜蛋白。CD45在淋巴瘤、B细胞慢性淋巴细胞白血病、毛细胞白血病和急性非淋巴细胞性白血病中表达。本发明人发现：在恶性细胞中，CD45以高的程度与整合素α10亚基共表达。因此在本发明的一个实施方案中，检测共表达整合素α10亚基抗原和CD45抗原的细胞，指示所述样品来源的哺乳动物中所述细胞为恶性或肿瘤相关细胞，如CNS的恶性肿瘤的细胞，例如胶质瘤的细胞。
[0366] 在另一实施方案中，检测包含编码整合素α10亚基多肽的多核苷酸转录物；和编码CD45多肽的多核苷酸转录物的细胞，指示所述样品来源的哺乳动物中所述细胞为恶性或肿瘤相关细胞，如CNS的恶性肿瘤的细胞，例如胶质瘤的细胞。
[0367] CD68
[0368] CD68(分化簇68)为与低密度脂蛋白结合的糖蛋白。CD68发现于一系列不同的血细胞和肌细胞的细胞质颗粒中。其被认为特别可用作巨噬细胞系的各种细胞，包括单核细胞、组织细胞、巨细胞、枯否细胞和破骨细胞的标记物。其在巨噬细胞中的存在也使得它在诊断与这些细胞的增殖或异常有关的病况，例如恶性组织细胞增多症、组织细胞淋巴瘤和戈谢病(Gaucher's disease)中有用。本发明人发现：在恶性细胞中，CD68以非常高的程度与整合素α10亚基共表达。因此在本发明的一个实施方案中，检测共表达整合素α10亚基抗原和CD68抗原的细胞指示在所述样品来源的哺乳动物中所述细胞为恶性或肿瘤相关细胞，如CNS的恶性肿瘤的细胞，例如胶质瘤的细胞。在另一实施方案中，检测包含编码整合素α10亚基多肽的多核苷酸转录物；和编码CD68多肽的多核苷酸转录物的细胞，指示所述样品来源的哺乳动物中所述细胞为恶性或肿瘤相关细胞，如CNS的恶性肿瘤的细胞，例如胶质瘤的细胞。
[0369] CD163
[0370] CD163(分化簇163)为用于血红蛋白-结合珠蛋白复合体的清道夫受体。
[0371] 其也已经显示为标记单核细胞/巨噬细胞系的细胞。本发明人发现：在恶性细胞中CD163与整合素α10亚基共表达。因此在本发明的一个实施方案中，检测共表达整合素α10亚基抗原和CD163抗原的细胞指示在所述样品来源的哺乳动物中所述细胞为恶性或肿瘤相关细胞，如CNS的恶性肿瘤的细胞，例如胶质瘤的细胞。在另一实施方案中，检测包含编码整合素α10亚基多肽的多核苷酸转录物；和编码CD163多肽的多核苷酸转录物的细胞，指示所述样品来源的哺乳动物中所述细胞为恶性或肿瘤相关细胞，如CNS的恶性肿瘤的细胞，例如胶质瘤的细胞。
[0372] CD206
[0373] 又称为甘露糖受体的CD206(分化簇206)主要存在于巨噬细胞和未成熟树突细胞的表面上，但也在皮肤细胞如人真皮成纤维细胞和角质形成细胞的表面上表达。本发明人发现：在恶性细胞中CD206与整合素α10亚基共表达。因此在本发明的一个实施方案中，检测共表达整合素α10亚基抗原和CD206抗原的细胞指示在所述样品来源的哺乳动物中所述细胞为恶性或肿瘤相关细胞，如CNS的恶性肿瘤的细胞，例如胶质瘤的细胞。在另一实施方案中，检测包含编码整合素α10亚基多肽的多核苷酸转录物；和编码CD206多肽的多核苷酸转录物的细胞，指示所述样品来源的哺乳动物中所述细胞为恶性或肿瘤相关细胞，如CNS的恶性肿瘤的细胞，例如胶质瘤的细胞。
[0374] 基于本发明的数据和文献证据，本发明人提供了用于鉴定表达整合素α10亚基多肽和选自下组的进一步的多肽的细胞的方法：EGFRvIII、巢蛋白、PSA-NCAM、GFAP、PDGFRb(CD140b)、PECAM-1(CD31)、CD45、CD68、CD163和CD206。根据表达模式，可以如表1中所示鉴定细胞。
[0375] 根据本发明分析的样品包括恶性细胞或肿瘤相关细胞。在一个实施方案中，表达整合素α10亚基的细胞为恶性细胞。在一个实施方案中，表达整合素α10亚基的细胞为肿瘤相关细胞。在一个实施方案中，恶性细胞或肿瘤相关细胞包括选自下组的细胞：胶质细胞；干细胞；祖细胞；星形胶质细胞；周细胞；内皮细胞；造血细胞；和小胶质细胞。
[0376] 造血细胞可以例如选自下组：造血干细胞、T-细胞、B-细胞、血浆细胞、NK-细胞、树突细胞、巨噬细胞和单核细胞。在具体实施方案中，巨噬细胞为肿瘤相关巨噬细胞(TAM)。
[0377] 在一个实施方案中，所述细胞选自下组：EGFRvIII+细胞、巢蛋白+细胞、PSA-NCAM++ + + + + + +细胞、GFAP细胞、PDGFRb细胞(CD140b细胞)、PECAM-1细胞(CD31细胞)、CD45细胞、CD68细胞、CD163+细胞和CD206+细胞或其任何组合。
[0378] V.样品
[0379] 样品可以为来自或源自CNS的任何样品。用于获得组织或血液样品的方法是本领域技术人员的常规方法。在某些实施方案中，生物样品是脑组织样品或脊髓组织样品。在进一步的实施方案中，生物样品是脑肿瘤组织样品或脊髓肿瘤组织样品。在进一步的实施方案中，生物样品为血液样品。
[0380] 如实施例4和图5所证明，也可能在存在于血液如全血或血浆中的细胞中检测整合素α10亚基。因此在一个实施方案中，CNS的恶性肿瘤的检测或诊断通过以下进行：取血液样品并分析在存在于所述血液样品中的细胞上或细胞中存在或者不存在整合素α10亚基或其片段(例如包含SEQ ID NO:2或3的片段)。
[0381] 在进一步的实施方案中，生物样品为受试者，即对于整合素α10亚基表达的试验在体内或原位进行。在通过手术从受试者移除CNS的恶性肿瘤后，可以使用整合素α10亚基-特异性抗体，或整合素α10亚基结合肽或蛋白质，或整合素α10亚基核酸探针来检测来自肿瘤的剩余细胞。这可以通过以下实现：通过向在肿瘤移除后出现的腔应用整合素α10亚基-特异性抗体，或整合素α10亚基结合肽或蛋白质，或整合素α10亚基核酸探针，而与已从中移除脑肿瘤的空间接触。因此应用的整合素α10亚基-特异性抗体，或整合素α10亚基结合肽或蛋白质，或整合素α10亚基核酸探针将在肿瘤移除后，检测在腔中留下的来自胶质瘤肿瘤的任何剩余的细胞。
[0382] 在进一步的实施方案中，可以将整合素α10亚基-特异性抗体，或整合素α10亚基结合肽或蛋白质，或整合素α10亚基核酸探针应用于通过洗刷(brushing)或喷涂(spraying)移除肿瘤后出现的腔。
[0383] 用于在体内检测组织或细胞的多种检测方法为本领域技术人员已知。这些成像方法包括正电子发射断层扫描(PET)、单光子发射计算机断层扫描(SPECT)、X射线计算机断层扫描(CT)、磁共振成像(MRI)、功能磁共振成像(fMRI)和超声。
[0384] 本发明的进一步方面为整合素α10亚基-特异性抗体，或整合素α10亚基结合肽或蛋白质，或整合素α10亚基核酸探针在体外、原位或体内检测生物样品中的胶质瘤的用途。
[0385] VI.试剂盒
[0386] 本公开的进一步方面提供用于在生物样品中检测CNS的恶性肿瘤如胶质瘤的试剂盒，所述试剂盒包含：
[0387] a)特异性针对整合素α10亚基的抗体，与整合素α10亚基抗原结合的肽，能够与整合素α10亚基转录物杂交的多核苷酸探针；或
[0388] b)用于扩增整合素α10亚基转录物的成对引物；
[0389] 和
[0390] c)任选的使用说明书。
[0391] 进一步，所述试剂盒可以包括阳性和/或阴性对照样品，如已知表达或不表达整合素α10亚基的细胞系或组织。对照样品的实例包括但不限于来自脑，如人脑的胶质母细胞瘤细胞系、正常细胞、组织或细胞系。在进一步的实施方案中，脑细胞或细胞系是成人来源的。
[0392] 在一些实施方案中，试剂盒包括公开例如使用抗整合素α10亚基特异性抗体、或与整合素α10亚基抗原结合的肽、或编码整合素α10亚基的核酸探针或其互补体的意义的说明材料。说明书可以以电子形式书写，或可以为可见形式。
[0393] 在一些实施方案中，试剂盒也可以包括附加成分，以方便设计试剂盒目的的具体应用。因此，例如，试剂盒可以包括常规用于实施公开方法的缓冲液和其它试剂。这些试剂盒和合适的内容为本领域技术人员所熟知。
[0394] 在某些实施方案中，试剂盒包含进一步的试剂如抗体，所述进一步的试剂用于检测如本文其他内容所述的已知与整合素α10亚基共表达或共定位的一种或多种进一步标记物。
[0395] VII.可检测部分
[0396] 本发明的抗整合素α10亚基抗体可以包含可检测部分，例如可以与可检测部分共价结合的抗体。
[0397] 在一个实施方案中，抗体与选自下组的可检测部分共价结合：荧光团、酶或放射性示踪物或放射性同位素。在一个实施方案中，可检测部分为选自正电子发射体和γ发射体的放射性示踪物。在一个实施方案中，放射性同位素选自下组：99mTc、111In、67Ga、68Ga、72As、89Zr、123I和201Tl。在一个实施方案中，抗体包含成对可检测并细胞毒性的放射性核素，如86Y/90Y或124I/211At。
[0398] 在一个实施方案中，放射性同位素能够以多模式方式，同时作为可检测部分也作为细胞毒性部分作用。
[0399] 在一个实施方案中，可检测部分包含如选自下组的一种顺磁同位素：157Gd、55Mn、162Dy、52Cr和56Fe或由其组成。在一个实施方案中，可检测部分可通过如SPECT、PET、MRI、光学或超声成像的成像技术检测。
[0400] 在一个实施方案中，细胞毒性部分和/或可检测部分经由连接部分与抗体或其抗原结合片段间接连接。连接部分可以例如是螯合剂，例如选自下组的螯合剂：1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10,四乙酸(DOTA)的衍生物、去铁胺(DFO))、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)的衍生物、S-2-(4-异硫氰酸苄基)-1,4,7-三氮杂环壬烷-1,4,7-三乙酸(NOTA)的衍生物和1,4,8,11-四氮杂环己酮-1,4,8,11-四乙酸(TETA)。
[0401] 项
[0402] 1.一种用于治疗中枢神经系统中的恶性肿瘤的用途的组合物，所述组合物包含与整合素α10亚基特异性结合的抗体。
[0403] 2.用于根据项1的用途的组合物，其中所述抗体与细胞毒性部分共价结合。
[0404] 3.用于根据前述任一项所述用途的组合物，其中所述细胞毒性部分选自毒素、化疗剂和放射性剂。
[0405] 4.用于根据前述任一项所述用途的组合物，其中所述毒素为核糖体失活蛋白。
[0406] 5.用于根据前述任一项所述用途的组合物，其中所述核糖体失活蛋白选自下组：志贺毒素和志贺样毒素；I型核糖体失活蛋白，如天花粉蛋白和丝瓜素；II型核糖体失活蛋白，如蓖麻蛋白、凝集素和相思豆毒素；和皂草素。
[0407] 6.用于根据前述任一项所述用途的组合物，其中所述核糖体失活蛋白为皂草素。
[0408] 7.用于根据前述任一项所述用途的组合物，其中抗体与生物反应调节物共价结合。
[0409] 8.用于根据前述任一项所述用途的组合物，其中所述生物反应调节物为细胞因子，如淋巴因子或干扰素。
[0410] 9.用于根据前述任一项所述用途的组合物，其中所述组合物进一步包含一种或多种化疗剂。
[0411] 10.用于根据前述任一项所述用途的组合物，其中所述组合物进一步包含至少一种药学上可接受的稀释剂、载体或赋形剂。
[0412] 11.用于根据前述任一项所述用途的组合物，其中整合素α10亚基为整合素α10亚基的天然存在的变体、整合素α10亚基的同种型或整合素α10亚基的剪接变体。
[0413] 12.用于根据前述任一项所述用途的组合物，其中所述抗体能够诱导表达整合素α10亚基的细胞的细胞死亡和/或抑制其生长和/或增殖和迁移。
[0414] 13.用于根据前述任一项所述用途的组合物，其中所述细胞为恶性细胞或肿瘤相关细胞。
[0415] 14.用于根据前述任一项所述用途的组合物，其中所述恶性细胞或肿瘤相关细胞包括选自下组的细胞：胶质细胞；周细胞；内皮细胞；造血细胞；小胶质细胞和干细胞。
[0416] 15.用于根据前述任一项所述用途的组合物，其中所述造血细胞选自选自下组：造血干细胞、T-细胞、B-细胞、浆细胞、NK-细胞、树突细胞、巨噬细胞和单核细胞。
[0417] 16.用于根据前述任一项所述用途的组合物，其中所述巨噬细胞为肿瘤相关巨噬细胞(TAM)。
[0418] 17.用于根据前述任一项所述用途的组合物，其中所述中枢神经系统中的恶性肿瘤与表达整合素α10亚基的细胞相关。
[0419] 18.用于根据前述任一项所述用途的组合物，其中整合素α10亚基作为整合素α10β1异二聚体的一部分。
[0420] 19.对其有需要的受试者的中枢神经系统中的恶性肿瘤的治疗方法，所述方法包括对所述受试者施用临床有效量的与整合素α10亚基特异性结合的抗体。
[0421] 20.根据上述项中任一项的治疗方法，其中所述治疗是预防性、改善性或治愈性的。
[0422] 21.根据上述项中任一项的治疗方法，其中在所述受试者中检测到整合素α10亚基时开始所述治疗。
[0423] 22.用于诱导与中枢神经系统中的恶性肿瘤相关的细胞的细胞死亡和/或抑制其生长和/或增殖的方法，其中所述细胞表达整合素α10亚基。
[0424] 23.一种药物，其包含具有针对整合素α10亚基的特异性的抗体或由其组成，用于检测与哺乳动物的中枢神经系统的恶性肿瘤相关的细胞的用途，其中所述细胞表达整合素α10亚基。
[0425] 24.用于检测哺乳动物的中枢神经系统中的恶性肿瘤的方法，所述方法包括以下步骤：
[0426] a)向哺乳动物施用能够与整合素α10亚基多肽和/或整合素α10亚基多核苷酸转录物特异性结合的分子探针；所述探针共价结合至可发射光子的部分，
[0427] b)检测从所述部分发射的光子并形成中枢神经系统或其部分的图像，[0428] 其中从所述部分的光子的局部发射指示在所述哺乳动物的中枢神经系统中的恶性肿瘤。
[0429] 25.用于检测哺乳动物的中枢神经系统中的恶性肿瘤的方法，所述方法包括分析在分离样品中如下项的存在或者不存在：
[0430] a)包含整合素α10亚基多肽的抗原；和/或
[0431] b)编码整合素α10亚基多肽或其片段或变体的多核苷酸转录物，
[0432] 其中a)的抗原和/或b)的多核苷酸转录物的存在指示在所述哺乳动物的中枢神经系统中的恶性肿瘤。
[0433] 26.一种诊断哺乳动物的中枢神经系统中的恶性肿瘤的体外诊断方法，所述方法包括以下步骤：
[0434] a)用能够与整合素α10亚基多肽或整合素α10亚基多核苷酸转录物特异性结合的分子探针接触体外样品，所述探针共价结合至可发射光子的部分，
[0435] b)检测从所述部分发射的光子并形成样品的图像，
[0436] 其中从所述部分的光子的局部发射指示所述哺乳动物的中枢神经系统中的恶性肿瘤。
[0437] 27.一种用于检测在分离样品中的整合素α10亚基的体外方法，所述方法包括分析在分离样品中如下项的存在或不存在：
[0438] a)包含整合素α10亚基多肽的抗原；和/或
[0439] b)编码整合素α10亚基多肽或其片段或变体的多核苷酸转录物，
[0440] 其中a)的抗原和/或b)的多核苷酸转录物的存在指示在所述哺乳动物的中枢神经系统中的恶性肿瘤。
[0441] 28.抗整合素α10亚基抗体在体外、原位或体内检测生物样品中的中枢神经系统的恶性肿瘤的用途，所述抗整合素α10亚基抗体能够与整合素α10亚基多肽特异性结合。
[0442] 29.整合素α10亚基核酸探针在体外、原位或体内检测生物样品中的中枢神经系统的恶性肿瘤的用途，所述整合素α10亚基核酸探针能够在杂交反应中与整合素α10亚基mRNA或cDNA特异性结合。
[0443] 30.整合素α10亚基核酸探针化合物在制备用于诊断中枢神经系统的恶性肿瘤的试剂盒中的用途。
[0444] 31.抗整合素α10亚基特异性抗体在制备用于诊断中枢神经系统的恶性肿瘤的试剂盒中的用途。
[0445] 32.整合素α10亚基核酸探针化合物用于制备用于诊断、监测或测定哺乳动物是否具有中枢神经系统的恶性肿瘤的诊断剂的用途，其中制备所述诊断剂以测量生物样品中的整合素α10亚基多核苷酸的存在，其中在所述样品中存在所述整合素α10亚基多核苷酸指示所述哺乳动物的中枢神经系统的恶性肿瘤。
[0446] 33.抗整合素α10亚基特异性抗体用于制备用于诊断、监测或测定哺乳动物是否具有中枢神经系统的恶性肿瘤的诊断剂的用途，其中制备所述诊断剂以测量样品中的整合素α10亚基多肽的存在，其中在所述样品中存在所述整合素α10亚基多肽指示所述哺乳动物的中枢神经系统的恶性肿瘤。
[0447] 34.用于检测恶性或肿瘤相关哺乳动物细胞的方法，所述方法包括分析在分离样品中如下项的存在或者不存在：
[0448] a)包含整合素α10亚基多肽的第一抗原；
[0449] 和/或
[0450] b)编码整合素α10亚基多肽或其片段或变体的第一多核苷酸转录物；和[0451] c)包含选自EGFRvIII、巢蛋白、PSA-NCAM、GFAP、PDGFRb(CD140b)、PECAM-1(CD31)、CD45、CD68、CD163和CD206的多肽的第二抗原；和/或
[0452] d)编码多肽或其片段或变体的第二多核苷酸转录物，其中所述多肽选自EGFRvIII、巢蛋白、PSA-NCAM、GFAP、PDGFRb(CD140b)、PECAM-1(CD31)、CD45、CD68、CD163和CD206；
[0453] 其中a)的第一抗原和/或b)的第一多核苷酸转录物；与c)的第二抗原和/或d)的第二转录物的存在指示所述哺乳动物细胞为恶性细胞或肿瘤相关细胞。
[0454] 35.用于检测恶性或肿瘤相关细胞的哺乳动物的方法，所述方法包括以下步骤：
[0455] a)对哺乳动物施用能够与整合素α10亚基多肽；和/或与整合素α10亚基多核苷酸转录物特异性结合的第一分子探针，所述第一探针被共价结合至可发射光子的第一部分；和
[0456] b)对哺乳动物施用能够与选自下组的多肽：EGFRvIII、巢蛋白、PSA-NCAM、GFAP、PDGFRb(CD140b)、PECAM-1(CD31)、CD45、CD68、CD163、和CD206；和/或与编码选自下组的多肽的多核苷酸转录物：EGFRvIII、巢蛋白、PSA-NCAM、GFAP、PDGFRb(CD140b)、PECAM-1(CD31)、CD45、CD68、CD163、和CD206特异性结合的第二分子探针，所述第二探针被共价结合至可发射光子的第二部分；
[0457] c)检测从所述第一和所述第二部分发射的光子，因此形成中枢神经系统或其部分的图像，
[0458] 其中从所述第一和所述第二部分的光子的局部发射指示所述哺乳动物的恶性或肿瘤相关细胞。
[0459] 36.根据上述项中任一项的制剂、方法或用途，其中所述样品包含恶性细胞或肿瘤相关细胞。
[0460] 37.根据上述项中任一项的制剂、方法或用途，其中所述恶性细胞或肿瘤相关细胞包括选自下组的细胞：胶质细胞；星形胶质细胞；周细胞；内皮细胞；造血细胞；小胶质细胞和干细胞。
[0461] 38.根据上述项中任一项的制剂、方法或用途，其中所述造血细胞选自造血干细胞、T-细胞、B-细胞、血浆细胞、NK-细胞、树突细胞、巨噬细胞和单核细胞。
[0462] 39.根据上述项中任一项的制剂、方法或用途，其中所述巨噬细胞为肿瘤相关的巨噬细胞(TAM)。
[0463] 40.根据上述项中任一项的制剂、方法或用途，其中所述细胞选自下组：EGFRvIII+细胞、巢蛋白+细胞、PSA-NCAM+细胞、GFAP+细胞、PDGFRb+细胞(CD140b+细胞)、PECAM-1+细胞(CD31+细胞)、CD45+细胞、CD68+细胞、CD163+细胞和CD206+细胞或它们的任何组合。
[0464] 41.根据上述项中任一项的制剂、方法或用途，其中所述细胞为整合素α10亚基+且EGFRvIII+细胞。
[0465] 42.根据上述项中任一项的制剂、方法或用途，其中所述细胞为整合素α10亚基+和巢蛋白+细胞。
[0466] 43.根据上述项中任一项的制剂、方法或用途，其中所述细胞为整合素α10亚基+和PSA-NCAM+细胞。
[0467] 44.根据上述项中任一项的制剂、方法或用途，其中所述细胞为整合素α10亚基+和GFAP+细胞。
[0468] 45.根据上述项中任一项的制剂、方法或用途，其中所述细胞为整合素α10亚基+和PDGFRb+细胞(CD140b+细胞)。
[0469] 46.根据上述项中任一项的制剂、方法或用途，其中所述细胞为整合素α10亚基+和PECAM-1+细胞(CD31+细胞)。
[0470] 47.根据上述项中任一项的制剂、方法或用途，其中所述细胞为整合素α10亚基+和CD45+细胞。
[0471] 48.根据上述项中任一项的制剂、方法或用途，其中所述细胞为整合素α10亚基+和CD68+细胞。
[0472] 49.根据上述项中任一项的制剂、方法或用途，其中所述细胞为整合素α10亚基+和CD163+细胞。
[0473] 50.根据上述项中任一项的制剂、方法或用途，其中所述细胞为整合素α10亚基+和CD206+细胞。
[0474] 51.根据上述项中任一项的制剂、方法或用途，进一步包含检测下组中至少一个：
[0475] a)包含选自EGFRvIII、巢蛋白、PSA-NCAM、GFAP、PDGFRb(CD140b)、PECAM-1(CD31)、CD45、CD68、CD163和CD206的多肽的抗原；和/或
[0476] b)编码多肽或其片段或变体的多核苷酸转录物，其中所述多肽选自EGFRvIII、巢蛋白、PSA-NCAM、GFAP、PDGFRb(CD140b)、PECAM-1(CD31)、CD45、CD68、CD163和CD206。
[0477] 52.根据前述任一项用于所述用途的组合物、制剂、方法或用途，其中所述恶性肿瘤选自下组：
[0478] a)选自以下的神经上皮组织肿瘤
[0479] i)选自以下的星形细胞肿瘤
[0480] 毛细胞型星形细胞瘤(ICD-O 9421/1，WHO I级)、毛细胞粘液状星形细胞瘤(ICD-O 9425/3，WHO II级)、室管膜下巨细胞型星形细胞瘤(ICD-O 9384/1，WHO I级)、多形性黄色瘤型星形细胞瘤(ICD-O 9424/3，WHO II级)、弥漫性星形细胞瘤(ICD-O 9400/3，WHO II级)、间变性星形细胞瘤(ICD-O 9401/3，WHO III级)、胶质母细胞瘤(ICD-O 9440/3，WHO IV级)、巨细胞型胶质母细胞瘤(ICD-O 9441/3，WHO IV级)、胶质肉瘤(ICD-O 9442/3，WHO IV级)、大脑胶质瘤病(ICD-O 9381/3，WHO III级)、和
[0481] ii)选自以下的少突胶质细胞肿瘤
[0482] 少突胶质细胞瘤(ICD-O 9450/3，WHO II级)和间变性少突胶质细胞瘤(ICD-O 9451/3，WHO III级)、和
[0483] iii)选自以下的少突星型细胞肿瘤
[0484] 少突星型细胞瘤(ICD-O 9382/3，WHO II级)和间变性少突星型细胞瘤(ICD-O 9382/3，WHO III级)、和
[0485] iv)选自以下的室管膜肿瘤
[0486] 室管膜下室管膜瘤(ICD-O 9383/1，WHO I级)、粘液乳头状型室管膜瘤(ICD-O 9394/1，WHO I级)、室管膜瘤(ICD-O 9391/3，WHO II级)、间变性室管膜瘤(ICD-O 9392/3，WHO III级)、和
[0487] v)选自以下的脉络丛肿瘤
[0488] 脉络丛乳头状瘤(ICD-O 9390/0，WHO I级)、
[0489] 非典型性脉络丛乳头状瘤(ICD-O 9390/1，WHO II级)、和
[0490] 脉络丛癌(ICD-O 9390/3，WHO III级)、和
[0491] vi)选自以下的其它神经上皮肿瘤
[0492] 星形母细胞瘤(ICD-O 9430/3，WHO I级)、三脑室的脊索瘤样胶质瘤(ICD-O 9444/1，WHO II级)、和血管中心型胶质瘤(ICD-O 9431/1，WHO I级)和，
[0493] vii)选自以下的神经元及混合性神经元-胶质肿瘤
[0494] 小脑发育不良性神经节细胞瘤(Lhermitte-Duclos)(ICD-O 9493/0)、促纤维增生性婴儿星形细胞瘤/神经节胶质细胞瘤(ICD-O 9412/1，WHO I级)、胚胎发育不良性神经上皮肿瘤(ICD-O 9413/0，WHO I级)、神经节细胞瘤(ICD-O 9492/0，WHO I级)、神经节细胞胶质瘤(ICD-O 9505/1，WHO I级)、间变性神经节细胞胶质瘤(ICD-O 9505/3，WHO III级)、中枢神经细胞瘤(ICD-O 9506/1，WHO II级)、脑室外神经细胞瘤(ICD-O 9506/1，WHO II级)、小脑脂肪神经细胞瘤(ICD-O 9506/1，WHO II级)、
[0495] 乳头状型胶质神经元肿瘤(ICD-O 9509/1，WHO I级)、第四脑室菊形团形成型胶质神经元肿瘤(ICD-O 9509/1，WHO I级)、和副神经节瘤(ICD-O 8680/1，WHO I级)、和[0496] viii)选自以下的松果体区的肿瘤
[0497] 松果体细胞瘤(ICD-O 9361/1，WHO I级)、中等分化的松果体实质肿瘤(ICD-O 9362/3，WHOII、III级)、松果体母细胞瘤(ICD-O 9362/3，WHO IV级)、和松果体区乳头状肿瘤(ICD-O 9395/3，WHO II、III级)，和
[0498] ix)选自以下的胚胎性肿瘤
[0499] 髓母细胞瘤(ICD-O 9470/3，WHO IV级)、髓母细胞瘤伴广泛结节(ICD-O 9471/3，WHO IV级)、间变性髓母细胞瘤(ICD-O 9474/3，WHO IV级)、中枢神经系统原始神经外胚层肿瘤(ICD-O 9473/3，WHO IV级)、中枢神经系统神经母细胞瘤(ICD-O 9500/3，WHO IV级)、和非典型性畸胎瘤/横纹肌样肿瘤(ICD-O 9508/3，WHO IV级)、和
[0500] b)选自以下的颅神经和脊旁神经肿瘤
[0501] i)许旺细胞瘤(ICD-O 9560/0，WHO I级)
[0502] ii)神经纤维瘤(ICD-O 9540/0，WHO I级)、
[0503] iii)神经束膜瘤(ICD-O 9571/0，9571/3，WHOI、II、III级)，和
[0504] iv)恶性外周神经鞘膜瘤(MPNST)(ICD-O 9540/3，WHOII、III、IV级)，和[0505] c)选自以下的脑膜肿瘤
[0506] i)选自脑膜瘤(ICD-O 9530/0，WHO I级)、非典型性脑膜瘤(ICD-O 9539/1，WHO II级)、间变性脑膜瘤(ICD-O 9530/3，WHO III级)的脑膜皮细胞肿瘤、和
[0507] ii)选自脂肪瘤(ICD-O 8850/0)、血管脂肪瘤(ICD-O 8861/0)、冬眠瘤(ICD-O 8880/0)、脂肪肉瘤(ICD-O 8850/3)、单发性纤维性肿瘤(ICD-O 8815/0)、纤维肉瘤(ICD-O
8810/3)、恶性纤维组织细胞瘤(ICD-O 8830/3)、平滑肌瘤(ICD-O 8890/0)、平滑肌肉瘤(ICD-O 8890/3)、横纹肌瘤(ICD-O 8900/0)、横纹肌肉瘤(ICD-O 8900/3)、软骨瘤(ICD-O
9220/0)、软骨肉瘤(ICD-O 9220/3)、骨瘤(ICD-O 9180/0)、骨肉瘤(ICD-O 9180/3)、骨软骨瘤(ICD-O 9210/0)、血管瘤(ICD-O 9120/0)、上皮样血管内皮瘤(ICD-O 9133/1)、血管外皮瘤(ICD-O 9150/1，WHO II级)、间变性血管外皮瘤(ICD-O 9150/3，WHO III级)、和血管肉瘤(ICD-O 9120/3)3.2.22卡波西肉瘤(ICD-O 9140/3)、尤文肉瘤－PNET(ICD-O 9364/3)的间叶肿瘤，和
8810/3)、恶性纤维组织细胞瘤(ICD-O 8830/3)、平滑肌瘤(ICD-O 8890/0)、平滑肌肉瘤(ICD-O 8890/3)、横纹肌瘤(ICD-O 8900/0)、横纹肌肉瘤(ICD-O 8900/3)、软骨瘤(ICD-O
9220/0)、软骨肉瘤(ICD-O 9220/3)、骨瘤(ICD-O 9180/0)、骨肉瘤(ICD-O 9180/3)、骨软骨瘤(ICD-O 9210/0)、血管瘤(ICD-O 9120/0)、上皮样血管内皮瘤(ICD-O 9133/1)、血管外皮瘤(ICD-O 9150/1，WHO II级)、间变性血管外皮瘤(ICD-O 9150/3，WHO III级)、和血管肉瘤(ICD-O 9120/3)3.2.22卡波西肉瘤(ICD-O 9140/3)、尤文肉瘤－PNET(ICD-O 9364/3)的间叶肿瘤，和
[0508] iii)选自以下的原发性黑色素细胞性病变
[0509] 弥漫性黑色素细胞增生病(ICD-O 8728/0)、黑色素细胞瘤(ICD-O 8728/1)[0510] 恶性黑色素瘤(ICD-O 8720/3)、脑膜黑色素瘤病(ICD-O 8728/3)，和iv)其他脑膜相关性肿瘤如血管母细胞瘤(ICD-O 9161/1，WHO I级)、和
[0511] d)选自以下的造血系统肿瘤
[0512] i)恶性淋巴瘤(ICD-O 9590/3)4.2浆细胞瘤(ICD-O 9731/3)，和
[0513] ii)颗粒细胞肉瘤(ICD-O 9930/3)，和
[0514] e)选自以下的蝶鞍区肿瘤
[0515] i)颅咽管瘤(ICD-O 9350/1，WHO I级)
[0516] ii)颗粒细胞瘤(ICD-O 9582/0，WHO I级)
[0517] iii)垂体细胞瘤(ICD-O 9432/1，WHO I级)、和
[0518] iv)垂体前叶梭形细胞嗜酸细胞瘤(ICD-O 8991/0，WHO I级)。
[0519] 53.根据前述任一项用于所述用途的组合物、制剂、方法或用途，其中所述恶性肿瘤选自下组：
[0520] a)选自以下的神经上皮组织肿瘤
[0521] i)选自以下的星形细胞肿瘤
[0522] 毛细胞型星形细胞瘤(ICD-O 9421/1，WHO I级)、毛细胞粘液状星形细胞瘤(ICD-O 9425/3，WHO II级)、室管膜下巨细胞型星形细胞瘤(ICD-O 9384/1，WHO I级)、多形性黄色瘤型星形细胞瘤(ICD-O 9424/3，WHO II级)、弥漫性星形细胞瘤(ICD-O 9400/3，WHO II级)、间变性星形细胞瘤(ICD-O 9401/3，WHO III级)、胶质母细胞瘤(ICD-O 9440/3，WHO IV级)、巨细胞型胶质母细胞瘤(ICD-O 9441/3，WHO IV级)、胶质肉瘤(ICD-O 9442/3，WHO IV级)、大脑胶质瘤病(ICD-O 9381/3，WHO III级)、和
[0523] ii)选自以下的少突胶质细胞肿瘤
[0524] 少突胶质细胞瘤(ICD-O 9450/3，WHO II级)和间变性少突胶质细胞瘤(ICD-O 9451/3，WHO III级)、和
[0525] iii)选自以下的少突星型细胞肿瘤
[0526] 少突星型细胞瘤(ICD-O 9382/3，WHO II级)和间变性少突星型细胞瘤(ICD-O 9382/3，WHO III级)、和
[0527] iv)选自以下的室管膜肿瘤
[0528] 室管膜下室管膜瘤(ICD-O 9383/1，WHO I级)、粘液乳头状型室管膜瘤(ICD-O 9394/1，WHO I级)、室管膜瘤(ICD-O 9391/3，WHO II级)、间变性室管膜瘤(ICD-O 9392/3，WHO III级)、和
[0529] v)选自以下的脉络丛肿瘤
[0530] 脉络丛乳头状瘤(ICD-O 9390/0，WHO I级)、
[0531] 非典型性脉络丛乳头状瘤(ICD-O 9390/1，WHO II级)、和
[0532] 脉络丛癌(ICD-O 9390/3，WHO III级)、和
[0533] vi)选自以下的其它神经上皮肿瘤
[0534] 星形母细胞瘤(ICD-O 9430/3，WHO I级)、三脑室的脊索瘤样胶质瘤(ICD-O 9444/1，WHO II级)、和血管中心型胶质瘤(ICD-O 9431/1，WHO I级)和，
[0535] vii)选自以下的神经元及混合性神经元-胶质肿瘤
[0536] 小脑发育不良性神经节细胞瘤(Lhermitte-Duclos)(ICD-O 9493/0)、促纤维增生性婴儿星形细胞瘤/神经节胶质细胞瘤(ICD-O 9412/1，WHO I级)、胚胎发育不良性神经上皮肿瘤(ICD-O 9413/0，WHO I级)、神经节细胞瘤(ICD-O 9492/0，WHO I级)、神经节细胞胶质瘤(ICD-O 9505/1，WHO I级)、间变性神经节细胞胶质瘤(ICD-O 9505/3，WHO III级)、中枢神经细胞瘤(ICD-O 9506/1，WHO II级)、脑室外神经细胞瘤(ICD-O 9506/1，WHO II级)、小脑脂肪神经细胞瘤(ICD-O 9506/1，WHO II级)、
[0537] 乳头状型胶质神经元肿瘤(ICD-O 9509/1，WHO I级)、第四脑室菊形团形成型胶质神经元肿瘤(ICD-O 9509/1，WHO I级)、和副神经节瘤(ICD-O 8680/1，WHO I级)、和[0538] viii)选自以下的松果体区的肿瘤
[0539] 松果体细胞瘤(ICD-O 9361/1，WHO I级)、中等分化的松果体实质肿瘤(ICD-O 9362/3，WHOII、III级)、松果体母细胞瘤(ICD-O 9362/3，WHO IV级)、和松果体区乳头状肿瘤(ICD-O 9395/3，WHO II、III级)，和
[0540] ix)选自以下的胚胎性肿瘤
[0541] 髓母细胞瘤(ICD-O 9470/3，WHO IV级)、髓母细胞瘤伴广泛结节(ICD-O 9471/3，WHO IV级)、间变性髓母细胞瘤(ICD-O 9474/3，WHO IV级)、中枢神经系统原始神经外胚层肿瘤(ICD-O 9473/3，WHO IV级)、中枢神经系统神经母细胞瘤(ICD-O 9500/3，WHO IV级)、和非典型性畸胎瘤/横纹肌样肿瘤(ICD-O 9508/3，WHO IV级)、和
[0542] b)选自以下的颅神经和脊旁神经肿瘤
[0543] i)许旺细胞瘤(ICD-O 9560/0，WHO I级)
[0544] ii)神经纤维瘤(ICD-O 9540/0，WHO I级)、
[0545] iii)神经束膜瘤(ICD-O 9571/0，9571/3，WHOI、II、III级)，和
[0546] iv)恶性外周神经鞘膜瘤(MPNST)(ICD-O 9540/3，WHOII、III、IV级)，和[0547] c)选自以下的脑膜肿瘤
[0548] i)选自脑膜瘤(ICD-O 9530/0，WHO I级)、非典型性脑膜瘤(ICD-O 9539/1，WHO II级)、间变性脑膜瘤(ICD-O 9530/3，WHO III级)的脑膜皮细胞肿瘤、和
[0549] ii)选自脂肪瘤(ICD-O 8850/0)、血管脂肪瘤(ICD-O 8861/0)、冬眠瘤(ICD-O 8880/0)、脂肪肉瘤(ICD-O 8850/3)、单发性纤维性肿瘤(ICD-O 8815/0)、纤维肉瘤(ICD-O
8810/3)、恶性纤维组织细胞瘤(ICD-O 8830/3)、平滑肌瘤(ICD-O 8890/0)、平滑肌肉瘤(ICD-O 8890/3)、横纹肌瘤(ICD-O 8900/0)、横纹肌肉瘤(ICD-O 8900/3)、软骨瘤(ICD-O
9220/0)、软骨肉瘤(ICD-O 9220/3)、骨瘤(ICD-O 9180/0)、骨肉瘤(ICD-O 9180/3)、骨软骨瘤(ICD-O 9210/0)、血管瘤(ICD-O 9120/0)、上皮样血管内皮瘤(ICD-O 9133/1)、血管外皮瘤(ICD-O 9150/1，WHO II级)、间变性血管外皮瘤(ICD-O 9150/3，WHO III级)、和血管肉瘤(ICD-O 9120/3)3.2.22卡波西肉瘤(ICD-O 9140/3)、尤文肉瘤－PNET(ICD-O 9364/3)的间叶肿瘤，和
8810/3)、恶性纤维组织细胞瘤(ICD-O 8830/3)、平滑肌瘤(ICD-O 8890/0)、平滑肌肉瘤(ICD-O 8890/3)、横纹肌瘤(ICD-O 8900/0)、横纹肌肉瘤(ICD-O 8900/3)、软骨瘤(ICD-O
9220/0)、软骨肉瘤(ICD-O 9220/3)、骨瘤(ICD-O 9180/0)、骨肉瘤(ICD-O 9180/3)、骨软骨瘤(ICD-O 9210/0)、血管瘤(ICD-O 9120/0)、上皮样血管内皮瘤(ICD-O 9133/1)、血管外皮瘤(ICD-O 9150/1，WHO II级)、间变性血管外皮瘤(ICD-O 9150/3，WHO III级)、和血管肉瘤(ICD-O 9120/3)3.2.22卡波西肉瘤(ICD-O 9140/3)、尤文肉瘤－PNET(ICD-O 9364/3)的间叶肿瘤，和
[0550] iii)选自以下的原发性黑色素细胞性病变
[0551] 弥漫性黑色素细胞增生病(ICD-O 8728/0)、黑色素细胞瘤(ICD-O 8728/1)[0552] 恶性黑色素瘤(ICD-O 8720/3)、脑膜黑色素瘤病(ICD-O 8728/3)，和[0553] iv)其他脑膜相关性肿瘤如血管母细胞瘤(ICD-O 9161/1，WHO I级)。
[0554] 54.根据前述任一项用于所述用途的组合物、制剂、方法或用途，其中所述恶性肿瘤选自下组：
[0555] a)选自以下的神经上皮组织肿瘤：
[0556] i)选自以下的星形细胞肿瘤
[0557] 毛细胞型星形细胞瘤(ICD-O 9421/1，WHO I级)、毛细胞粘液状星形细胞瘤(ICD-O 9425/3，WHO II级)、室管膜下巨细胞型星形细胞瘤(ICD-O 9384/1，WHO I级)、多形性黄色瘤型星形细胞瘤(ICD-O 9424/3，WHO II级)、弥漫性星形细胞瘤(ICD-O 9400/3，WHO II级)、间变性星形细胞瘤(ICD-O 9401/3，WHO III级)、胶质母细胞瘤(ICD-O 9440/3，WHO IV级)、巨细胞型胶质母细胞瘤(ICD-O 9441/3，WHO IV级)、胶质肉瘤(ICD-O 9442/3，WHO IV级)、大脑胶质瘤病(ICD-O 9381/3，WHO III级)、和
[0558] ii)选自以下的胚胎性肿瘤:
[0559] 髓母细胞瘤(ICD-O 9470/3，WHO IV级)、髓母细胞瘤伴广泛结节(ICD-O 9471/3，WHO IV级)、间变性髓母细胞瘤(ICD-O 9474/3，WHO IV级)、中枢神经系统原始神经外胚层肿瘤(ICD-O 9473/3，WHO IV级)、中枢神经系统神经母细胞瘤(ICD-O 9500/3，WHO IV级)、和非典型性畸胎瘤/横纹肌样肿瘤(ICD-O 9508/3，WHO IV级)、和
[0560] b)选自以下的脑膜肿瘤:
[0561] i)选自脑膜瘤(ICD-O 9530/0，WHO I级)、非典型性脑膜瘤(ICD-O 9539/1，WHO II级)、间变性脑膜瘤(ICD-O 9530/3，WHO III级)的脑膜皮细胞肿瘤、和
[0562] ii)选自脂肪瘤(ICD-O 8850/0)、血管脂肪瘤(ICD-O 8861/0)、冬眠瘤(ICD-O 8880/0)、脂肪肉瘤(ICD-O 8850/3)、单发性纤维性肿瘤(ICD-O 8815/0)、纤维肉瘤(ICD-O
8810/3)、恶性纤维组织细胞瘤(ICD-O 8830/3)、平滑肌瘤(ICD-O 8890/0)、平滑肌肉瘤(ICD-O 8890/3)、横纹肌瘤(ICD-O 8900/0)、横纹肌肉瘤(ICD-O 8900/3)、软骨瘤(ICD-O
9220/0)、软骨肉瘤(ICD-O 9220/3)、骨瘤(ICD-O 9180/0)、骨肉瘤(ICD-O 9180/3)、骨软骨瘤(ICD-O 9210/0)、血管瘤(ICD-O 9120/0)、上皮样血管内皮瘤(ICD-O 9133/1)、血管外皮瘤(ICD-O 9150/1，WHO II级)、间变性血管外皮瘤(ICD-O 9150/3，WHO III级)、和血管肉瘤(ICD-O 9120/3)3.2.22卡波西肉瘤(ICD-O 9140/3)、尤文肉瘤－PNET(ICD-O 9364/3)的间叶肿瘤，和
8810/3)、恶性纤维组织细胞瘤(ICD-O 8830/3)、平滑肌瘤(ICD-O 8890/0)、平滑肌肉瘤(ICD-O 8890/3)、横纹肌瘤(ICD-O 8900/0)、横纹肌肉瘤(ICD-O 8900/3)、软骨瘤(ICD-O
9220/0)、软骨肉瘤(ICD-O 9220/3)、骨瘤(ICD-O 9180/0)、骨肉瘤(ICD-O 9180/3)、骨软骨瘤(ICD-O 9210/0)、血管瘤(ICD-O 9120/0)、上皮样血管内皮瘤(ICD-O 9133/1)、血管外皮瘤(ICD-O 9150/1，WHO II级)、间变性血管外皮瘤(ICD-O 9150/3，WHO III级)、和血管肉瘤(ICD-O 9120/3)3.2.22卡波西肉瘤(ICD-O 9140/3)、尤文肉瘤－PNET(ICD-O 9364/3)的间叶肿瘤，和
[0563] iii)选自以下的原发性黑色素细胞性病变
[0564] 弥漫性黑色素细胞增生病(ICD-O 8728/0)、黑色素细胞瘤(ICD-O 8728/1)[0565] 恶性黑色素瘤(ICD-O 8720/3)、脑膜黑色素瘤病(ICD-O 8728/3)，和[0566] iv)其他脑膜相关性肿瘤如血管母细胞瘤(ICD-O 9161/1，WHO I级)。
[0567] 55.根据前述任一项用于所述用途的组合物、制剂、方法或用途，其中所述恶性肿瘤为胶质瘤。
[0568] 56.根据前述任一项用于所述用途的组合物、制剂、方法或用途，其中所述恶性肿瘤为II、III或IV级胶质瘤。
[0569] 57.根据前述任一项用于所述用途的组合物、制剂、方法或用途，其中所述恶性肿瘤为星形细胞瘤。
[0570] 58.根据前述任一项用于所述用途的组合物、制剂、方法或用途，其中所述恶性肿瘤为胶质母细胞瘤。
[0571] 59.根据前述任一项用于所述用途的组合物、制剂、方法或用途，其中脑的恶性肿瘤选自下组：胶质母细胞瘤、髓母细胞瘤、神经母细胞瘤、星形细胞瘤、间变性星形细胞瘤、脑的血管外皮细胞瘤、脑膜瘤、血管瘤型血管瘤、非典型性脑膜瘤、纤维母细胞型脑膜瘤、脑膜皮型脑膜瘤、分泌型脑膜瘤、少突星型细胞瘤、间变性少突星型细胞瘤、少突胶质细胞瘤和间变性少突胶质细胞瘤。
[0572] 60.根据前述任一项用于所述用途的组合物、制剂、方法或用途，其中所述胶质母细胞瘤肿瘤选自下组：星形细胞肿瘤、少突胶质细胞肿瘤、室管膜细胞肿瘤、混合性胶质瘤、未明确起点的神经上皮肿瘤、脉络丛的肿瘤、神经元及混合性神经元－胶质肿瘤、松果体实质肿瘤和具有成神经细胞或胶质母细胞成分的肿瘤(胚胎性肿瘤)、室管膜瘤、星形细胞瘤、少突胶质细胞瘤、少突星型细胞瘤、神经上皮肿瘤、以及神经元及混合性神经元-神经胶质肿瘤。
[0573] 61.根据前述任一项用于所述用途的组合物、制剂、方法或用途，其中所述样品为脑组织或脊髓组织样品。
[0574] 62.根据前述任一项用于所述用途的组合物、制剂、方法或用途，其中所述样品为脑肿瘤组织样品。
[0575] 63.根据前述任一项用于所述用途的组合物、制剂、方法或用途，其中所述样品为血液样品。
[0576] 64.根据前述任一项用于所述用途的组合物、制剂、方法或用途，其中所述检测或诊断基于存在于血液样品如全血样品或血浆样品中的细胞。
[0577] 65.根据前述任一项用于所述用途的组合物、制剂、方法或用途，其中所述方法或用途使用一种或多种特异性针对整合素α10亚基的抗体实施。
[0578] 66.根据前述任一项用于所述用途的组合物、制剂、方法或用途，其中所述抗原为整合素α10亚基的同种型、剪接变体或的天然存在的变体。
[0579] 67.根据前述任一项用于所述用途的组合物、制剂、方法或用途，其中所述抗原包含整合素α10亚基(SEQ ID NO:1)。
[0580] 68.根据前述任一项用于所述用途的组合物、制剂、方法或用途，其中所述抗原包含整合素α10的胞外结构域亚基(SEQ ID NO:2)。
[0581] 69.根据前述任一项用于所述用途的组合物、制剂、方法或用途，其中所述抗原包含整合素α10亚基的I结构域(SEQ ID NO:3)。
[0582] 70.根据前述任一项用于所述用途的组合物、制剂、方法或用途，其中所述抗体选自单克隆抗体、多克隆抗体、抗体片段或单链抗体。
[0583] 71.根据前述任一项用于所述用途的组合物、制剂、方法或用途，其中所述抗体为单克隆抗体。
[0584] 72.根据前述任一项用于所述用途的组合物、制剂、方法或用途，其中所述抗体为多克隆抗体。
[0585] 73.根据前述任一项用于所述用途的组合物、制剂、方法或用途，其中所述抗体为非人抗体、嵌合抗体、双特异性抗体、人源化抗体或人抗体。
[0586] 74.根据前述任一项用于所述用途的组合物、制剂、方法或用途，其中所述抗体特异性结合SEQ ID NO:1(整合素α10亚基)。
[0587] 75.根据前述任一项用于所述用途的组合物、制剂、方法或用途，其中抗体特异性结合SEQ ID NO:2(整合素α10的胞外结构域)。
[0588] 76.根据前述任一项用于所述用途的组合物、制剂、方法或用途，其中抗体特异性结合SEQ ID NO:3(整合素α10的细胞外I结构域)。
[0589] 77.根据前述任一项用于所述用途的组合物、制剂、方法或用途，其中至少一个抗体与可检测部分共价结合。
[0590] 78.根据前述任一项用于所述用途的组合物、制剂、方法或用途，其中至少一个抗体与选自下组可检测部分共价结合：荧光团、酶或放射性示踪物或放射性同位素。
[0591] 79.根据前述任一项用于所述用途的组合物、制剂、方法或用途，其中所述抗体连接至选自正电子发射体或γ发射体的放射性示踪物。
[0592] 80.根据前述任一项用于所述用途的组合物、制剂、方法或用途，其中所述放射性同位素选自99mTc、111In、67Ga、68Ga、72As、89Zr、123I和201Tl。
[0593] 81.根据前述任一项用于所述用途的组合物、制剂、方法或用途，其中抗体包含成对可检测并细胞毒性的放射性核素，如86Y/90Y或124I/211At。
[0594] 82.根据前述任一项用于所述用途的组合物、制剂、方法或用途，其中所述放射性同位素能够以多模式方式，同时作为能够检测部分也作为细胞毒性部分作用。
[0595] 83.根据前述任一项用于所述用途的组合物、制剂、方法或用途，其中所述可检测部分包含顺磁同位素或由其组成。
[0596] 84.根据前述任一项用于所述用途的组合物、制剂、方法或用途，其中所述顺磁同位素选自157Gd、55Mn、162Dy、52Cr和56Fe。
[0597] 85.根据前述任一项用于所述用途的组合物、制剂、方法或用途，其中所述可检测部分通过如SPECT、PET、MRI、光学或超声成像的成像技术检测。
[0598] 86.根据前述任一项用于所述用途的组合物、制剂、方法或用途，其中所述细胞毒性部分和/或可检测部分经由连接部分与抗体或抗原结合片段连接。
[0599] 87.根据项86用于所述用途的组合物、制剂、方法或用途，其中所述连接部分为螯合剂。
[0600] 88.根据前述任一项用于所述用途的组合物、制剂、方法或用途，其中所述螯合剂选自下组：1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10,四乙酸(DOTA)的衍生物、去铁胺(DFO)、二亚乙基三胺五乙酸(DTPA)的衍生物、S-2-(4-异硫氰酸苄基)-1,4,7-三氮杂环壬烷-1,4,7-三乙酸(NOTA)的衍生物和1,4,8,11-四氮杂环己酮-1,4,8,11-四乙酸(TETA)。
[0601] 89.根据前述任一项用于所述用途的组合物、制剂、方法或用途，其中所述抗体具有选自IgA、IgD、IgG和IgM的同种型。
[0602] 90.根据前述任一项用于所述用途的组合物、制剂、方法或用途，其中抗体为IgG同种型，如选自下组的IgG同种型：IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。
[0603] 91.根据前述任一项用于所述用途的组合物、制剂、方法或用途，其中抗体片段选自Fab-片段、Fab'片段、F(ab')2片段和Fv片段，如单链可变片段(scFv)和单域抗体。
[0604] 92.根据前述任一项用于所述用途的组合物、制剂、方法或用途，其中所述特异性针对整合素α10亚基的抗体为：
[0605] a)单克隆抗体，由保藏于Deutsche Sammlung von Microorganismen und Zellkulturen GmbH，保藏号为DSM ACC2583的杂交瘤细胞系产生；或
[0606] b)抗体，其与由保藏于Deutsche Sammlung von Microorganismen und Zellkulturen GmbH，保藏号为DSM ACC2583的杂交瘤产生的单克隆抗体结合的表位相同的表位竞争结合；或
[0607] c)a)或b)的片段，其中所述片段能够与整合素α10的细胞外I结构域亚基链特异性结合。
[0608] 93.根据前述任一项用于所述用途的组合物、制剂、方法或用途，其中所述抗原通过检测能够与整合素α10亚基抗原特异性结合的肽进行检测。
[0609] 94.根据前述任一项用于所述用途的组合物、制剂、方法或用途，其中所述检测使用流式细胞术如荧光活化细胞分选(FACS)进行。
[0610] 95.根据前述任一项用于所述用途的组合物、制剂、方法或用途，其中所述方法通过使用一种或多种与连接可发射光子的部分连接的整合素α10亚基特异性多核苷酸探针实施。
[0611] 96.根据前述任一项用于所述用途的组合物、制剂、方法或用途，其中所述多核苷酸转录物通过PCR，优选Q-PCR进行检测。
[0612] 97.根据前述任一项用于所述用途的组合物、制剂、方法或用途，其中所述可检测部分选自荧光团、酶或放射性示踪物。
[0613] 98.根据前述任一项用于所述用途的组合物、制剂、方法或用途，其中所述可发射光子的部分为荧光团。
[0614] 99.根据前述任一项用于所述用途的组合物、制剂、方法或用途，其中所述哺乳动物被可激励所述荧光团的光源照射。
[0615] 100.根据前述任一项用于所述用途的组合物、制剂、方法或用途，其中所述光子使用PET扫描或SPECT扫描检测。
[0616] 101.根据前述任一项用于所述用途的组合物、制剂、方法或用途，其中所述哺乳动物是人。
[0617] 102.一种抗体-药物缀合物，其包含与放射性示踪物共价连接的整合素-α10特异性抗体。
[0618] 103.根据上述项中任一项的抗体-药物缀合物，其用于诊断中枢神经系统的恶性肿瘤如胶质瘤、神经母细胞瘤或髓母细胞瘤的用途。
[0619] 104.一种纳米颗粒，其包含整合素α-10特异性抗体和放射性示踪物。
[0620] 105.用于在体外、原位或体内检测中枢神经系统的恶性肿瘤如胶质瘤的试剂盒，所述试剂盒包含特异性针对整合素α10亚基的抗体、能够与整合素α10亚基抗原特异性结合的肽或能够与整合素α10亚基转录物或其互补体特异性杂交的多核苷酸探针，并任选包含使用说明书。
[0621] 106.治疗罹患中枢神经系统中的恶性肿瘤的受试者的方法，所述方法包括：
[0622] a)根据上述项中任一项确定受试者是否罹患中枢神经系统的恶性肿瘤；和[0623] b)向诊断为患有中枢神经系统的恶性肿瘤的受试者，施用治疗有效量的如上述项中的任一项所定义的与整合素α10亚基特异性结合的抗体。
[0624] 107.根据上述项中任一项的方法，其中所述整合素α10亚基的检测包含以下步骤：
[0625] a.从所述受试者获得生物样品，
[0626] b.分析在所述样品中存在或者不存在：
[0627] i)整合素α10亚基多肽，或
[0628] ii)编码整合素α10亚基多肽或其片段或变体的多核苷酸转录物，
[0629] 其中存在整合素α10亚基多肽或多核苷酸转录物指示所述哺乳动物的中枢神经系统中的恶性肿瘤，并且其中不存在整合素α10亚基多肽或多核苷酸转录物，指示不存在CNS的恶性肿瘤。
[0630] 108.根据上述项中任一项的方法，其中所述检测为进行使用与整合素α10亚基特异性结合的抗体。
[0631] 109.根据上述项中任一项的方法，其中所述抗体与可检测部分结合。
[0632] 110.根据上述项中任一项的方法，其中所述可检测部分选自荧光团、酶或放射性示踪物。
[0633] 111.根据上述项中任一项的方法，其中所述整合素α10亚基的检测通过检测与能够与整合素α10亚基多肽或多核苷酸特异性结合的肽结合的分子探针或抗体实现。
[0634] 112.根据上述项中任一项的方法，其中所述样品为脑组织样品。
[0635] 113.根据上述项中任一项的方法，其中所述样品为脑肿瘤组织样品。
[0636] 114.根据上述项中任一项的方法，其中所述样品为血液样品。
[0637] 115.根据上述项中任一项的方法，其中所述检测如上述项中的任一项所定义的进行。
[0638] 116.根据上述项中任一项的方法或用于其用途的组合物，其中所述受试者为哺乳动物如人。
[0639] 117.一种包含与整合素α10亚基特异性结合的抗体的组合物的用途，用于制造用于治疗中枢神经系统中的恶性肿瘤的药物。
[0640] 118.一种在哺乳动物中抑制肿瘤相关的血管化的方法，所述方法包括向所述哺乳动物施用治疗有效量的根据上述项中任一项的抗整合素α10亚基抗体。
[0641] 119.一种抗体-药物缀合物，其包含与核糖体失活蛋白共价连接的整合素-α10亚基特异性抗体。
[0642] 120.根据上述项中任一项的抗体-药物缀合物，其中所述核糖体失活蛋白选自下组：志贺毒素和志贺样毒素；I型核糖体失活蛋白，如天花粉蛋白和丝瓜素；II型核糖体失活蛋白，如蓖麻蛋白、凝集素和相思豆毒素；和皂草素。
[0643] 121.根据上述项中任一项的抗体-药物缀合物，其中所述核糖体失活蛋白为皂草素。
[0644] 122.根据上述项中任一项的组合物、药物、方法、用途或抗体-药物缀合物，其中整合素α10亚基为整合素α10β1异二聚体的一部分。实施例
[0645] 实施例1：分离自胶质母细胞瘤脑肿瘤的细胞上的整合素α10亚基表达[0646] 于Lund University Hospital作为手术活检收集脑肿瘤组织样品，源自获取自脑肿瘤组织样品的患者材料的细胞系于37℃，5％CO2在添加了10％FBS和1％链霉素的DMEM培养基中培养。细胞生长至70-90％汇合。细胞在PBS(0.1m，pH 7.4)中洗涤并在胰蛋白酶处理后移动至经特化的显微镜载玻片的底(Ibidi，Germany)。在固定前，细胞生长至50-100％汇合，然后进行免疫荧光标记。
[0647] 遵循以下方案制作细胞的免疫荧光标记：
[0648] 1.移除/抽吸细胞培养基。细胞在冷(<10℃)4％PFA中固定10-20分钟。
[0649] 2.将细胞在PBS(0.1M，pH 7.4)中漂洗2x5分钟。
[0650] 3.将细胞在封闭液，含有Triton-X 100 0.02％的PBS中温育20分钟。
[0652] 5.将细胞在一抗中温育90分钟，一抗以1μg/ml 10MAb(1-2μg)稀释于含有Triton-X 100 0.001％(0.1-0.001％*)和牛血清白蛋白(BSA)1％的PBS(0.1M，pH 7.4)中。
[0653] 6.将细胞在PBS(pH 7.4)中漂洗2x10分钟，然后在二抗中温育30分钟，二抗(山羊中制备的抗小鼠AlexaFluor 488和抗兔AlexaFluor 568，Invitrogen，USA)以1:150稀释于含有Triton-X 100 0.001％(0.1-0.001％)和牛血清白蛋白(BSA)1％的PBS(0.1M，pH 7.4)中。
[0654] 7.将细胞在PBS(0.1M，pH 7.4)中漂洗1+2x7分钟。
[0655] 8.将细胞在DAPI(0.1μm，PBS中)中温育>10分钟。
[0656] 如这里使用的经由倒置显微镜的分析不需要装片(mounting)。
[0657] 使用共聚焦显微镜用于成像和分析。
[0658] 综上所述，通过使用针对整合素α10的抗体(mAb 365(WO 99/51639))，令人惊讶地显示整合素α10在源自胶质母细胞瘤(胶质瘤IV级，多形性胶质母细胞瘤)(最侵袭的形式的胶质瘤)的胶质母细胞瘤细胞上特异性且强地表达(图2)。
[0659] 实施例2:在来自胶质母细胞瘤患者的脑肿瘤组织中，通过免疫荧光可视化的整合素α10的亚基表达
[0660] 于Lund University Hospital以手术活检从患者收集脑肿瘤组织样品。
[0661] 组织被切片成5μm(MICROM HM 360microtome)并收集在SuperFrost Plus slides(Menzel- GmbH)上。切片直接或在用丙酮后固定(于-20℃，浓度100％，10分钟，见下文)后用于免疫标记。
[0662] 新鲜冷冻组织包埋于TissueTek(Sakura，Jpn)中。切片，10μm(在MICROM HM 500OM cryostat中制备)，收集在SuperFrost Plus载玻片上。切片在用丙酮后固定(于-20℃，浓度100％，10分钟，见下文)后用于免疫标记。
[0663] 在抗原修复后，遵循以下方案:
[0664] 1.于室温在PBS中漂洗/缓冲5分钟。
[0665] 2.于室温用含有1％BSA的PBS封闭20分钟。
[0666] 3.于室温用PBS(PBS-Triton X100)漂洗5分钟。
[0667] 4.于室温用0.03％H2O2(在PBS中)温育切片10分钟(淬灭内源性过氧化物酶活性)[0668] 5.于室温在PBS中漂洗5分钟x2。
[0669] 6.用一抗温育切片，用稀释在含有1％BSA 0.05％Triton X100)PBS中的α10PAb 1μg/ml(0.6-1.2μg/ml)。
[0670] -于4℃过夜(ca 16-18h)。
[0671] 7.在PBS中漂洗5分钟x2(与载玻片/切片相同的温度)。
[0672] 8.于室温应用缀合的二抗(抗兔)30分钟。
[0673] (稀释在含有1％BSA 0.05％Triton X100的PBS中)。
[0674] 9.于室温在PBS中漂洗5分钟x2。
[0675] 10.于室温在DAB/0.03％H2O2溶液中温育/反应1-10分钟。
[0676] 11.于室温在PBS中漂洗5分钟x2。
[0677] 计数经免疫标记的切片的染色：
[0678] 1.于室温用苏木素(Mayers)温育2分钟。
[0679] 2.于室温在PBS中漂洗3分钟。
[0680] 3.于室温用PBS洗涤2分钟。
[0681] 装片：
[0682] 经由在以下制剂中浸泡，将切片脱水
[0683] 1.在乙醇70％、96％、100％x2，每一浓度中2分钟。
[0684] 2.二甲苯≥3分钟x2。
[0685] 3.载玻片在 (Histolab，Sweden)中装片并用盖玻片(22x30-50mm)盖片。
[0686] 分析和记录：明场显微镜提供细胞关系的整体标记分布的良好检测，特别是在较薄的石蜡切片(5μm)中。
[0687] 仪器：Leica DMRE显微镜，使用10x/0.3和20x/0.5Plan Apochromate物镜。用Leica DCF500CCD-照相机和图像获取软件LAS(Leica Application Suite)v4.4获得数码图像(1360x1024px)。
[0688] 综上所述，通过使用针对整合素α10亚基的多克隆抗体，令人惊讶地显示整合素α10亚基在于Lund University Hospital作为手术活检从患者收集的肿瘤组织样品中的胶质母细胞瘤细胞上特异性且强地表达(图3)。
[0689] 实施例3：与未感染的脑组织相比，在来自胶质母细胞瘤患者的脑肿瘤组织中通过免疫组织化学可视化的整合素α10亚基的表达
[0690] 于Lund University Hospital以手术活检从患者收集来自看起来未感染的区域的和来自具有恶性脑组织(如被两个独立的病理学家诊断)的区域的患者脑组织样品。
[0691] 经由根据标准方案，载玻片在二甲苯然后乙醇梯度和水中浸泡，将石蜡切片脱蜡和脱水。
[0692] 石蜡切片在丙酮中后固定，接着在PBS中漂洗，5分钟x2。为了抗原修复，通过将载玻片浸泡于酸性缓冲溶液-柠檬酸盐缓冲液(10mM钠柠檬酸盐，0.05％Tween 20，pH 6.0)和热处理来处理石蜡切片。在抗原修复后，遵循以下方案:
[0693] 1.于室温在PBS中漂洗/缓冲5分钟。
[0694] 2.于室温用含有1％BSA的PBS封闭20分钟。
[0695] 3.于室温用PBS(PBS-Triton X100)漂洗5分钟。
[0696] 4.于室温用0.03％H2O2(在PBS中)温育切片10分钟(淬灭内源性过氧化物酶活性)[0697] 5.于室温在PBS中漂洗5分钟x2。
[0698] 6.用一抗温育切片，用稀释在含有1％BSA 0.05％Triton X100)PBS中的α10PAb 1μg/ml(0.6-1.2μg/ml)。
[0699] -于4℃过夜(ca 16-18h)。
[0700] 7.在PBS中漂洗5分钟x2(与载玻片/切片相同的温度)。
[0701] 8.于室温应用缀合的二抗(抗兔)30分钟。
[0702] (稀释在含有1％BSA 0.05％Triton X100的PBS中)。
[0703] 9.于室温在PBS中漂洗5分钟x2。
[0704] 10.于室温在DAB/0.03％H2O2溶液中温育/反应1-10分钟。
[0705] 11.于室温在PBS中漂洗5分钟x2。
[0706] 计数经免疫标记的切片的染色：
[0707] 1.于室温用苏木素(Mayers)温育2分钟。
[0708] 2.于室温在PBS中漂洗3分钟。
[0709] 3.于室温用PBS洗涤2分钟。
[0710] 装片：
[0711] 经由在以下制剂中浸泡，将切片脱水
[0712] 1.在乙醇70％、96％、100％x2，每一浓度中2分钟。
[0713] 2.二甲苯≥3分钟x2。
[0714] 3.载玻片在 (Histolab，Sweden)中装片并用盖玻片(22x30-50mm)盖片。
[0715] 分析和记录：明场显微镜提供细胞关系的整体标记分布的良好检测，特别是在较薄的石蜡切片(5μm)中。
[0716] 仪器：Leica DMRE显微镜，使用10x/0.3和20x/0.5Plan Apochromate物镜。用Leica DCF500 CCD-照相机和图像获取软件LAS(Leica Application Suite)v4.4获得数码图像(1360x1024px)。
[0717] 图4A显示患者样品的一部分具有典型的未感染的脑形态学，而图4B显示相同样品的另一部分具有恶性脑组织(多形性胶质母细胞瘤)的形态学。综上所述，通过使用针对整合素α10亚基的多克隆抗体(Camper等(1998)J Biol Chem.273(32):20383-9)，显示尽管在形态学上未感染的脑组织中见到可忽略表达的整合素α10亚基，但整合素α10亚基在胶质母细胞瘤细胞上特异性且强地表达。
[0718] 实施例4：在来自具有不同等级的胶质瘤的患者的脑肿瘤组织中的整合素α10的亚基表达
[0719] 使用的患者材料包括从Lund University Hospital作为手术活检或尸体解剖收集的脑肿瘤组织样品。
[0720] 组织被切片成5μm(MICROM HM 360 microtome)并收集在SuperFrost Plus slides(Menzel- GmbH)上。切片直接或在用丙酮后固定(于-20℃，浓度100％，10分钟，见下文)后用于免疫标记。
[0721] 新鲜冷冻组织嵌入TissueTek(Sakura，Jpn)中。切片，10μm(在MICROM HM 500 OM cryostat中制备)，收集在SuperFrost Plus slides上。切片在用丙酮后固定(于-20℃，浓度100％，10分钟，见下文)后用于免疫标记。
[0722] 1.Cryo-切片(新鲜切下或来自深度冷冻)：于37℃空气干燥切片大约20分钟，并让切片达到室温。
[0723] 2.在PBS中漂洗>5分钟x2
[0724] 3.切片在丙酮中后固定，接着在PBS中漂洗5分钟x2
[0726] 5.于室温在含有0.05％(0.1-0.001)TritonX-100和1％BSA的PBS中温育/封闭30分钟。
[0727] 6.在PBS中漂洗1x2分钟
[0728] 7.于4-8℃用与制作为针对其它抗原的抗体(先单独评价，用于特异性和最佳工作稀释浓度)混合(“鸡尾酒”形式)的一抗温育16-18小时，用α10 PAb 1.2μg/ml(0.6-1.2μg/ml)(稀释在含有0.05％TritonX-100和1％BSA的PBS中)。
[0729] 8.为了同时分别荧光可视化第一和二抗的两个表位，以混合物“鸡尾酒”形式应用。
[0730] 9.在PBS中漂洗1分钟接着2x5分钟。
[0731] 10.于室温用缀合荧光团的第二Ab/Abs(见下文)温育切片30-45分钟，第二Ab/Abs以1:150稀释在混合物(针对一抗的不同宿主动物)中。
[0732] 用于多重标记的二抗(高度亲和纯化，主要为Fab2片段)是在驴或山羊中制备的抗兔、小鼠或山羊IgG的或抗鸡IgY(Jackson，USA或Invitrogen，USA)。稀释在含有1％BSA的PBS中。为了同时荧光可视化第一和第二两个表位，以混合物，“鸡尾酒”形式应用。
[0733] 11.在PBS-TritonX-100中漂洗2分钟。
[0734] 12.在PBS中漂洗1x5分钟。
[0735] 13.在细胞器(核)染色剂DAPI中温育15分钟，DAPI以0.1μm稀释在PBS中。
[0736] 14.在PBS中漂洗2x5分钟。
[0737] 15.装片并在”抗脱落溶液”：ProLong Gold(Invitrogen，USA)中盖片。
[0738] 分析-免疫荧光-共聚焦激光扫描显微镜：
[0740] 设备:
[0741] 在Zeiss LSM 510 META共聚焦显微镜中检测样品，利用激光在305-633nm之间激发并检测420-650nm之间的发射。图像用20x/0.8Plan Apochromate和40x/1.3油浸Plan Apochromate物镜，三个免疫荧光通道，一个DAPI通道和一个明视野DIC通道获得。
[0742] 使用40x/1.3物镜获得连续共焦平面的Z-叠层(无DIC)，其具有1024×1024px帧尺寸(像素宽度0.22μm)或者具有“缩放”(扫描较小面积)和奈奎斯特(Nyquist)最优采样频率(像素宽度0.115μm)以获得最大分辨率。连续共焦平面之间的步长根据奈奎斯特最优采样频率(0.48μm)。
[0743] 综上所述，通过使用针对整合素α10的抗体，令人惊讶地显示整合素α10在包括星形细胞瘤II级(在少数细胞上)、星形细胞瘤III级、多形性胶质母细胞瘤也称为星形细胞瘤IV级的患者材料的细胞上特异性表达(图5A-C)。有趣的是，整合素α10的表达随着级别提高并在星形细胞瘤III和IV级中强表达。注意在所有级的星形细胞瘤中在血管或血液注入的区域中，细胞阳性染色(图5D)。
[0744] 实施例5：在来自神经母细胞瘤和髓母细胞瘤的患者肿瘤组织样品中，通过免疫组织化学可视化的整合素α10亚基表达
[0745] 使用包括从Uppsala University和Lund University Hospital从作为手术样品收集的神经母细胞瘤和髓母细胞瘤组织标本的患者材料。经由根据标准方案，载玻片在二甲苯然后乙醇梯度和水中浸泡，将石蜡切片脱蜡和脱水。石蜡切片在丙酮中后固定，接着在PBS中漂洗，5分钟x2。为了抗原修复，通过将载玻片浸泡于酸性缓冲溶液-柠檬酸盐缓冲液(10mM钠柠檬酸盐，0.05％Tween 20，pH 6.0)和热处理来处理石蜡切片。在抗原修复后，遵循以下方案:
[0746] 1.于室温在PBS中漂洗/缓冲5分钟。
[0747] 2.于室温用含有1％BSA的PBS封闭20分钟。
[0748] 3.于室温用PBS(PBS-Triton X100)漂洗5分钟。
[0749] 4.于室温用0.03％H2O2(在PBS中)温育切片10分钟(淬灭内源性过氧化物酶活性)[0750] 5.于室温在PBS中漂洗5分钟x2。
[0751] 6.于4℃用一抗温育切片过夜(ca 16-18h)，用稀释在含有1％BSA 0.05％Triton X100)PBS中的α10PAb 1μg/ml(0.6-1.2μg/ml)。
[0752] 7.在PBS中漂洗5分钟x2(与载玻片/切片相同的温度)。
[0753] 8.于室温应用缀合的二抗(抗兔)30分钟，(稀释在含有1％BSA 0.05％Triton X100的PBS中)。
[0754] 9.于室温在PBS中漂洗5分钟x2。
[0755] 10.于室温在DAB/0.03％H2O2溶液中温育/反应1-10分钟。
[0756] 11.于室温在PBS中漂洗5分钟x2。
[0757] 对经免疫标记的切片进行计数染色：
[0758] 1.于室温用苏木素(Mayers)温育2分钟。
[0759] 2.于室温在PBS中漂洗3分钟。
[0760] 3.于室温用PBS洗涤2分钟。
[0761] 装片：
[0762] 经由在以下制剂中浸泡，将切片脱水
[0763] 1.在乙醇70％、96％、100％x2，每一浓度中2分钟。
[0764] 2.二甲苯≥3分钟x2。
[0765] 3.载玻片在 (Histolab，Sweden)中装片并用盖玻片(22x30-50mm)盖片。
[0766] 仪器：Leica DMRE显微镜，使用10x/0.3和20x/0.5Plan Apochromate物镜。用Leica DCF500CCD-照相机和图像获取软件LAS(Leica Application Suite)v4.4获得数码图像(1360x1024px)。
[0767] 分析和记录：明场显微镜提供细胞关系的整体标记分布的良好检测，特别是在较薄的石蜡切片(5μm)中。
[0768] 综上所述，我们发现整合素α10亚基在来自恶性神经母细胞瘤和髓母细胞瘤的患者肿瘤组织样品中的细胞上特异性且强地表达(图6)。
[0769] 实施例6：通过定量PCR分析在来自患者的脑肿瘤中的α10RNA表达。
[0770] 使用用于检测整合素α10亚基的引物，进行于Lund University Hospital作为手术活检从患者收集的脑肿瘤组织样品的定量PCR。Brain Cancer cDNA芯片(OriGene Technologies Inc.)用于在来自不同脑肿瘤的患者组织材料中进行差异基因表达分析和基因表达的验证。每个芯片的cDNA均从病理学家验证的组织的高质量总RNA合成，在两个序贯的qPCR分析中用β-肌动蛋白进行标准化和验证，并与临床信息一起分析。使用基因特异性引物和TaqMan探针(gene expression assay HS00174623_m1，Life Technology)进行整合素α10亚基的实时PCR检测，并按制造商的推荐运行。使用的检测系统为ICycler(Bio-Rad).根据健康脑组织标准化了脑癌症组织整合素α10亚基表达，并计算整合素α10亚基的相对定量值(RQ)。图7显示两次运行的平均相对定量值。RQ定义为2-△△Ct，其中△△Ct＝△Ct肿瘤样品-△Ct正常脑组织和且△Ct获取自CtITGA10-Ctβ-actin。
[0771] 如图7中所示，令人惊讶地在数种脑肿瘤包括：星形细胞瘤、间变性星形细胞瘤、纤维型星形细胞瘤、多形性胶质母细胞瘤、脑的血管外皮细胞瘤、脑膜瘤、血管瘤型血管瘤、非典型性脑膜瘤、纤维母细胞型脑膜瘤、脑膜皮型脑膜瘤、微囊型脑膜瘤、分泌型脑膜瘤、少突星型细胞瘤、间变性少突星型细胞瘤、少突胶质细胞瘤和间变性少突胶质细胞瘤中检测到整合素α10亚基。
[0772] 实施例7：整合素α10亚基与其它标记物的共表达的分析
[0773] 肿瘤是异质性的并包括许多不同细胞类型。为了显示在胶质瘤(GBM)中不同类型的整合素α10亚基表达阳性细胞，在从Lund University Hospital作为手术活检或尸体解剖收集的脑肿瘤胶质母细胞瘤组织样品中，使用了通常和特异性免疫标记不同细胞类型的数种标记物。
[0774] 样品准备：
[0775] 新鲜冷冻组织包埋于TissueTek(Sakura，Jpn)中。切片，10μm(在MICROM HM 500OM cryostat中制备)，收集在SuperFrost Plus载玻片上。切片在用丙酮后固定(于-20℃，浓度100％，10分钟)后用于免疫标记。
[0776] Cryo-切片(新鲜切下或来自深度冷冻)于37℃空气干燥大约20分钟。当切片达到室温时，将其在PBS中漂洗5分钟，两次。切片在丙酮中后固定，接着在PBS中漂洗两轮(5分钟x2)。围绕切片应用硅屏障“silicone barrier”(“PAP pen”)。切片于室温在含有0.05％(0.1-0.001)TritonX-100和1％BSA的PBS中温育30分钟，然后在PBS中漂洗1x2分钟。切片于4-8℃用与制作为针对其它抗原(先单独评价，用于特异性和最佳工作稀释浓度)混合的抗体的一抗温育16-18小时，用α10PAb 1.2μg/ml(0.6-1.2μg/ml)(稀释在含有0.05％Triton X-100和1％BSA的PBS中)。为了同时分别荧光可视化第一和二抗的两个表位，以混合物(“鸡尾酒”)形式应用。切片在PBS中漂洗1分钟，接着2x5分钟，并于室温用混合物中的荧光团缀合的第二Ab/Abs温育30-45分钟，第二Ab/Abs以1:150稀释。
[0777] 用于多重标记的二抗(高度亲和纯化，主要为Fab2片段)为在驴或山羊中制备的抗兔、小鼠或山羊IgG′s或抗鸡IgY(Jackson，USA或Invitrogen，USA)。稀释在含有1％BSA的PBS中。为了同时荧光可视化第一和第二两个表位，以混合物“鸡尾酒”形式应用。切片在PBS-Triton X100中漂洗2分钟，并在PBS中漂洗1x5分钟。切片在细胞器(核)染色剂DAPI中温育15分钟并在PBS中漂洗2x5分钟，DAPI以0.1μm稀释在PBS中。切片装片并在“抗脱落溶液”：ProLong Gold(Invitrogen，USA)中盖片。
[0778] 本研究使用的抗体：
[0779]
[0780]
[0781] 分析：
[0782] 通过激光共聚焦扫描显微镜进行分析。共聚焦显微镜镜提供了高分辨率、标签的信噪比和特异性的波长信号检测。只有共焦显微镜图像的分析可以解决结构定位，细胞外/内定位和标记的共定位(通过Z-叠层光学切片和3-D重建)。
[0783] 在Zeiss LSM 510 META共聚焦显微镜中检测样品，利用激光在305-633nm之间激发并检测420-650nm之间的发射。图像用20x/0,8Plan Apochromate和40x/1.3油浸Plan Apochromate物镜，三个免疫荧光通道，一个DAPI通道和一个明视野DIC通道获得。
[0784] 使用40x/1.3物镜获得连续共焦平面的Z-叠层(无DIC)，其具有1024×1024px帧尺寸(像素宽度0.22μm)或者具有“缩放”(扫描较小面积)和奈奎斯特(Nyquist)最优采样频率像素宽度0.115μm)以获得最大分辨率。连续共焦平面之间的步长根据奈奎斯特最优采样频率(0.48μm)。
[0785] 整合素α10与不同标记物的共存在的定量分析使用数字化的图像数据制作。从单个通道分析数据，代表不同的标签。首先通过鉴定细胞核来确定感兴趣区域(ROI)。使用围绕核的1微米的区域来分析标记物的共表达。通过经验丰富的显微镜操作者的目视检查确定用于阳性染色的阈值，并设定为5％。
[0786] 结果：下表1显示了与整合素α10亚基共表达的标记物的表达模式。在左栏中表明使用的针对抗原的抗体。在中栏中表明预期表达抗原的不同细胞类型(免疫表型)。在右栏中表明每个标记物与整合素α10的共表达程度。
[0787] 表1：标记物矩阵
[0788]
[0789] CD163、CD206和整合素α10亚基的共表达和共定位示于图8中，而EGFRvIII和整合素α10亚基的共表达和共定位示于图9中。
[0790] 实施例8：迁移试验
[0791] 恶性细胞依赖于迁移来扩散和转移。为了阐明整合素α10是否对于该细胞过程重要，进行了迁移试验。
[0792] 迁移试验使用CytoSelect Cell Migration Assay试剂盒(Cell Biolabs′，US)进行。其为允许细胞从上室迁移到填充了趋化介质(化学引诱物培养基，chemoattractant medium)的下室的两室系统。上述室被仅允许积极迁移的细胞通过的膜分开。使用accutase收获例如从原代培养物或建立的细胞系中获得的胶质瘤细胞(GBM)，重新悬浮于不含胎牛血清的培养基(FCS)中，并转移到CytoSelect插入室的上室中。迁移试验使用针对整合素α10亚基的单克隆未缀合和/或抗体-药物缀合物(ADC)抗体或IgG对照抗体进行。于37℃温育
24-48小时后，收集插入室，并对附着在下表面的细胞固定、染色和定量。
24-48小时后，收集插入室，并对附着在下表面的细胞固定、染色和定量。
[0793] 用针对整合素α10亚基的抗体温育的胶质瘤细胞显示迁移能力降低。
[0794] 实施例9：凋亡-细胞形态学的分析和流式细胞术
[0795] 细胞依赖于整合素来粘附细胞外基质来生存。如果这些整合素-基质键断裂，细胞可能进入凋亡。为了阐明当整合素α10键断裂时在胶质瘤(GBM)细胞中是否发生诱导凋亡，进行了凋亡测定。
[0796] 为了凋亡的测定，胶质瘤细胞(GBM)培养在6-孔板中并温育过夜。次日添加针对整合素α10亚基的未缀合或ADC单克隆抗体、或IgG对照抗体。使用倒置显微镜观察到形态学变化，并在处理72h后收获细胞用于流式细胞术分析以观察早期和晚期凋亡。通过市售的凋亡检测试剂盒如具有7-AAD的FITC膜联蛋白V细胞凋亡检测试剂盒(FITC annexin V Apoptosis detection kit)(Biolegend)确定整合素α10亚基抗体诱导的凋亡程度，并且通过流式细胞术分析数据。在流式细胞术分析中，Annexin V-FITC单阳性细胞代表早期凋亡细胞。Annexin V-FITC和7-AAD(7-氨基-放线菌素D)双阳性染色细胞代表晚期凋亡细胞。7-AAD阳性染色仅表示细胞的坏死群体。
[0797] 用针对整合素α10亚基抗体温育的胶质瘤细胞显示凋亡增强。
[0798] 实施例10：用针对整合素α10亚基的单克隆抗体处理的胶质瘤细胞(GBM)的球体形成能力
[0799] 球体形成测定是用于确定细胞群体的自我更新能力以及因此其在异种移植物移植后在体内诱导肿瘤的能力的常见体外测定。
[0800] 本分析中使用了来自人胶质瘤细胞培养(Human Glioma Cell Culture)(HGCC)biobank，Uppsala University的胶质瘤细胞系(GBM)，并且这些细胞源自获取自Xie等，2015描述的作为手术活检收集的脑肿瘤组织样品的患者材料(EBioMedicine.15；2(10):
1351-63)。细胞于37℃，5％CO2培养在添加了50X B27、100X N2、1％链霉素、bFGF(10ng/ml)和EGF(10ng/ml)DMEM/F12 w/Glutamax与神经基质培养基(1:1)中。为了评估球体形成能力，细胞用accutase处理，收集并以300xg离心4分钟，然后重悬于培养基中。测定在96孔板中进行，且每孔接种5000个细胞。用不同浓度的针对整合素α10亚基的单克隆抗体或IgG对照抗体处理细胞。所有处理进行一式三份。于37℃，5％CO2温育7天后，取每一孔的显微镜图像，并计数直径达到100μm的球体。
1351-63)。细胞于37℃，5％CO2培养在添加了50X B27、100X N2、1％链霉素、bFGF(10ng/ml)和EGF(10ng/ml)DMEM/F12 w/Glutamax与神经基质培养基(1:1)中。为了评估球体形成能力，细胞用accutase处理，收集并以300xg离心4分钟，然后重悬于培养基中。测定在96孔板中进行，且每孔接种5000个细胞。用不同浓度的针对整合素α10亚基的单克隆抗体或IgG对照抗体处理细胞。所有处理进行一式三份。于37℃，5％CO2温育7天后，取每一孔的显微镜图像，并计数直径达到100μm的球体。
[0801] 综上所述，通过使用针对整合素α10亚基的单克隆抗体，与未处理细胞相比，胶质瘤细胞显示球体形成能力减少。在用IgG对照抗体处理的细胞中未见到此效果(图10)。
[0802] 实施例11：用针对整合素α10亚基的抗体处理的胶质瘤细胞(GBM)的存活力和生长[0803] 癌症的标志之一是恶性细胞中持续的增殖信号。为了阐明抗整合素α10亚基抗体是否能够抑制胶质瘤细胞存活力和增殖，进行了比色细胞存活力(Colorimetric Cell Viability)测定如WST-1(Roche，DE)和XTT。比色细胞存活力测定包含四氮唑盐，四氮唑盐在代谢活性细胞中被还原成有色的甲臜化合物。因此，甲臜染料的量与活细胞的数量相关。
[0804] 对于细胞存活力测定，用accutase处理获取自原代培养物的胶质瘤细胞，收集并以300xg离心4分钟，然后重悬于培养基中。使用了数种胶质瘤(GBM)细胞系。来自Lund University的细胞系于37℃，5％CO2培养在添加了10％FBS和1％链霉素的DMEM培养基中，而HGCC细胞系培养在添加了50X B27、100X N2、1％链霉素、bFGF(10ng/ml)和EGF(10ng/ml)的DMEM/F12w/Glutamax与神经基质培养基(1:1)中。使用每孔5000个细胞的密度，并用层粘连蛋白( Mouse Laminin I，R&D系统)包被96孔板，以获得良好的HGCC细胞的塑性粘附。次日，添加不同浓度的针对整合素α10亚基的未缀合的单克隆抗体。细胞也用针对整合素α10亚基的未缀合的单克隆抗体和与皂草素缀合的二抗(ATSbio，US)的组合进行处理，所述组合为良好的体外模型系统。使用未处理细胞以及对照抗体作为对照。所有处理进行一式三份。细胞于37℃，5％CO2进一步培养72h。通过向每个孔中加入10-50μl四氮唑盐试剂评估细胞存活力，然后于37℃温育1-4小时。轻轻摇动板，并使用分光光度计(SpectraMax i3)在450-500纳米的波长测量样品的吸光度。
[0805] 如图11中所示，与未处理的胶质瘤(GBM)细胞相比，仅利用针对整合素α10亚基的未缀合的单克隆抗体处理显著降低了细胞存活力和/或增殖。图12显示，与对照抗体相比，用针对整合素α10亚基的单克隆抗体与皂草素缀合的二抗的组合处理，减少了胶质瘤(GBM)细胞的生存和/或生长。
[0806] 实施例12：整合素α10β1作为用于治疗中枢神经系统(CNS)中的恶性肿瘤的候选靶标的功能评估的体内鼠模型。
[0807] 为了证明包含抗整合素α10抗体的未缀合的整合素α10抗体、或缀合的整合素α10抗体(抗体-药物缀合物，ADC)作为抗癌症药物的抗肿瘤效果，使用了免疫受损小鼠的立体定向原位脑肿瘤异种移植模型。将人肿瘤细胞移植到免疫受损小鼠的脑中。用于原位注射癌细胞的方法基本如Joo KM等，2013(Cell Rep.3，260-73)的描述进行。
[0808] 在恶性细胞移植前和诱导肿瘤后的不同时间点，对模型动物施用不同剂量的针对整合素α10的未缀合/ADC单克隆抗体或对照抗体。抗体通过静脉内注射、静脉内注射或脑室内注射导入。通过将抗整合素α10处理的动物与用对照抗体处理的动物相比，评估整合素α10特异性抗体的治疗性效果。
[0809] 通过基于器官、细胞和分子分析以及生存的多重病理学比较，进行试剂的治疗价值的评估。病理性状和标记物的实例为：
[0810] -肿瘤大小
[0811] -肿瘤生长速率
[0812] -形态学、分子和组织病理学特征
[0813] -侵袭性
[0814] -恶性标记物的基因表达
[0815] -细胞周期状态
[0816] -凋亡
[0817] 本试验的一个目标是确定不引起或激发毒性反应的试剂最有效剂量。以下介绍了体内决策设置的主要和一般步骤，包括更详细的试验方案：
[0818] 详细实验方案
[0819] 通常，胶质瘤的发展从起始日(day 0)即从将肿瘤细胞注射到正常移植宿主中起至肿瘤在宿主动物中完全发育为约2-20周，取决于选择的异种移植模型。研究分成三个不同阶段:
[0820] 1.起始
[0821] 2.发展
[0822] 3.终止
[0823] 阶段1，起始：
[0824] 在第0天在注射恶性细胞前进行以下步骤。
[0825] 准备用于移植的细胞：
[0826] a)肿瘤细胞系，或
[0827] b)肿瘤解离(dissociation)以获得原代恶性细胞悬浮液
[0828] 为了原位移植到小鼠脑中，根据制造商的说明书准备立体定向设备。
[0829] 手术步骤：
[0830] 每一注射条件和每一时间点使用至少五只动物。
[0831] a)手术前动物准备(动物的麻醉、清洁、固定)
[0832] b)手术前细胞准备(细胞洗涤和计数)
[0833] c)程序护理(维持麻醉和手术步骤)
[0834] d)注射细胞
[0835] e)动物的护理和监测
[0836] 阶段2，发展：
[0837] 基于治疗计划将试验动物分成四个组。
[0838] 所述组为：
[0839] 1.组1：未治疗组。不用抗体治疗。
[0840] 2.组2：对照组。用对照抗体治疗。
[0841] 3.组3：ITGA10组。利用针对整合素α10亚基的未缀合/ADC抗体治疗。
[0842] 阶段3，终止：
[0843] 根据已建立的方案处死动物并分离脑肿瘤，以获得涉及形态学、分子和组织病理学特征、侵袭性、恶性标志物的基因表达数据、细胞周期状态和细胞凋亡的所有必要信息。
[0844] 实施例13：序列的概述
[0845] SEQ ID NO 1：人整合素α10亚基
[0846] SEQ ID NO 2：人整合素α10亚基的胞外结构域
[0847] SEQ ID NO 3：人整合素α10亚基的I结构域
[0848] SEQ ID NO:4人(Homo sapiens)整合素亚基α10前体，mRNA，完整cds。
| 标题 | 发布/更新时间 | 阅读量 |
|---|---|---|
| 一种纳米激光探针 | 2020-05-11 | 555 |
| 一种香豆素纳米探针的制备方法 | 2020-05-13 | 878 |
| 基于纳米探针的遗传学检验 | 2020-05-13 | 223 |
| 一种检测肿瘤纳米探针的制备方法 | 2020-05-13 | 127 |
| 一种制备纳米钨探针针尖的方法 | 2020-05-13 | 948 |
| 氧化锌棒状单晶纳米探针的制备方法 | 2020-05-14 | 609 |
| 包括纳米管探针的探针卡和构造方法 | 2020-05-11 | 369 |
| 包括纳米管探针的探针卡和构造方法 | 2020-05-11 | 147 |
| 一种纳米探针及纳米探针测试仪 | 2020-05-11 | 31 |
| 用于集成电路测试的纳米管探针结构 | 2020-05-12 | 732 |
高效检索全球专利专利汇是专利免费检索,专利查询,专利分析-国家发明专利查询检索分析平台，是提供专利分析，专利查询，专利检索等数据服务功能的知识产权数据服务商。
我们的产品包含105个国家的1.26亿组数据，免费查、免费专利分析。
分析报告
专利汇分析报告产品可以对行业情报数据进行梳理分析，涉及维度包括行业专利基本状况分析、地域分析、技术分析、发明人分析、申请人分析、专利权人分析、失效分析、核心专利分析、法律分析、研发重点分析、企业专利处境分析、技术处境分析、专利寿命分析、企业定位分析、引证分析等超过60个分析角度，系统通过AI智能系统对图表进行解读，只需1分钟，一键生成行业专利分析报告。
QQ群二维码
意见反馈
意见反馈