一种靶向DNA纳米探针及其制备和应用
专利汇可以提供一种靶向DNA纳米探针及其制备和应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开一种靶向DNA四面体 纳米探针 及其制备和应用，将标记有Cy5的DNA单链以及另外三条具有特定 碱 基序列的DNA链加入到Tris-MgCl2溶液中混合、反应，得DNA四面体即TDN；将上述DNA四面体溶液和一定浓度的 肿瘤 穿透肽溶液混合，利用click反应，合成靶向DNA四面体，即靶向TDN；步骤三、将上述靶向DNA四面体溶液加入到浓缩离心管，离心去除反应液中残存的小分子，再将沉淀物重悬在TM buffer （10mM Tris base、50mM MgCl2、pH=8）中，即可得到DNA靶向纳米探针。将Cy5 荧光 分子修饰在DNA四面体上，同时连接靶向多肽，使得该探针具有靶向和体内 近红外 成像的功能。，下面是一种靶向DNA纳米探针及其制备和应用专利的具体信息内容。
1.一种靶向DNA纳米探针的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一、将标记有Cy5的DNA单链以及另外三条具有特定碱基序列的DNA链加入到Tris-MgCl2溶液中混合、反应，得DNA四面体即TDN；
步骤二、将上述DNA四面体溶液和一定浓度的肿瘤穿透肽溶液混合，利用click反应，合成靶向DNA四面体，即靶向TDN；
步骤三、将上述靶向DNA四面体溶液加入到浓缩离心管，离心去除反应液中残存的小分子，再将沉淀物重悬在TM buffer （10mM Tris base、50mM MgCl2、pH=8）中，即可得到DNA靶向纳米探针。
2.根据权利要求1所述一种靶向DNA纳米探针的制备方法，其特征在于，步骤一中所述DNA单链为可通过碱基互补配对自组装成DNA四面体三维构型的DNA单链；所述DNA单链的浓度为50μM，序列包括如TDN-1、TDN-2、TDN-3、TDN-4所示的序列；所述序列TDN-3后续可以用Cy5等荧光标记，TDN-4后续可以用N3标记。
3.根据权利要求1所述一种靶向DNA纳米探针的制备方法，其特征在于，步骤一中所述Tris-MgCl2溶液含10mM Tris、50mM MgCl2、pH=8的水溶液。
4.根据权利要求1所述一种靶向DNA纳米探针的制备方法，其特征在于，步骤一中所述反应具体为：在PCR仪中，反应温度为95℃，10分钟后快速冷却至4℃，继续反应30分钟。
5.根据权利要求1所述一种靶向DNA纳米探针的制备方法，其特征在于，步骤一中所述DNA四面体最终浓度为2μM。
6.根据权利要求1所述一种靶向DNA纳米探针的制备方法，其特征在于，步骤二中为保证click反应充分进行，所述DNA四面体溶液和靶肽溶液中靶肽的摩尔量大于DNA四面体；
进一步地，所述DNA四面体和靶肽的摩尔比为1:2。
7.根据权利要求1所述一种靶向DNA纳米探针的制备方法，其特征在于，步骤二中所述反应溶液中，PBS溶液（磷酸缓冲溶液）的pH为7.3， 0.1 mM的CuSO4水溶液，TCEP（三(2-羧乙基)膦）溶液为0.1mM水溶液，TBTA（叔丁基三氯乙酰亚胺酯）溶液为含10μM TBTA的DMSO（二甲基亚砜）溶液。
8.根据权利要求1所述一种靶向DNA纳米探针的制备方法，其特征在于，步骤二中，所述恒温反应的条件具体为：37℃、175rpm震荡5小时；步骤三中所述离心采用的转速为
6000rpm，采用的离心管为超滤管（OD010C35, 10k, PALL, USA），离心的目的是去除反应液中的残存的小分子。
9.一种靶向DNA纳米探针，其特征在于，根据上述任一权利要求所述方法制备得到。
10.根据权利要求9所述的靶向DNA纳米探针作为脑肿瘤靶向DNA纳米探针在近红外成像的应用。
一种靶向DNA纳米探针及其制备和应用
技术领域
背景技术
发明内容
步骤一、将标记有Cy5的DNA单链以及另外三条具有特定碱基序列的DNA链加入到Tris-MgCl2溶液中混合、反应，得DNA四面体即TDN；
步骤二、将上述DNA四面体溶液和一定浓度的肿瘤穿透肽溶液混合，利用click反应，合成靶向DNA四面体，即靶向TDN；
步骤三、将上述靶向DNA四面体溶液加入到浓缩离心管，离心去除反应液中残存的小分子，再将沉淀物重悬在TM buffer （10mM Tris base、50mM MgCl2、pH=8）中，即可得到DNA靶向纳米探针。
图2为DNA靶向纳米探针粒度图（Ds为双链DNA，TDN为靶肽修饰前的DNA四面体，p-TDN为肿瘤穿透肽修饰的DNA四面体）；
图3为DNA靶向纳米探针体外细胞激光共聚焦图；
图4为DNA材料活体成像图（从左往右以此是对照组，DNA双链组，DNA四面体组，靶向性DNA四面体组）。
具体实施方式
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