一种纳米多向层析核酸提取介质及其制备方法
阅读：662发布：2023-03-08
专利汇可以提供一种纳米多向层析核酸提取介质及其制备方法专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 揭露一种纳米多向层析核酸提取介质，其具有高分子 碳 水 化合物的基材与渗入所述基材中提取物，该提取物包括第一层的 盐酸 胍、SDS、EDTA混合物，位于第二层保护剂，位于第三层的盐酸胍、SDS、EDTA混合物及位于第四层的保护剂，所述第一层的盐酸胍、SDS、EDTA混合物与第三层的盐酸胍、SDS、EDTA混合物含量不同。基材可以很好的保存核酸的完整性，防止核酸的降解。，下面是一种纳米多向层析核酸提取介质及其制备方法专利的具体信息内容。
1.一种纳米多向层析核酸提取介质，其具有高分子碳水化合物的基材与渗入所述基材中提取物，其特征在于：所述基材为棉制纤维滤纸，滤纸纤维上的羟基具有亲水性，该提取物包括第一层的盐酸胍、SDS、EDTA混合物，位于第二层保护剂，位于第三层的盐酸胍、SDS、EDTA混合物及位于第四层的保护剂，所述第一层的盐酸胍、SDS、EDTA混合物与第三层的盐酸胍、SDS、EDTA混合物含量不同；所述保护剂为羟乙基淀粉。
2.一种纳米多向层析核酸提取介质的制备方法，其特征在于：其步骤如下，第一步骤：提供吸附用的基材，所述基材为棉制纤维滤纸，滤纸纤维上的羟基具有亲水性；
第二步骤：在所述基材上滴加第一种缓冲液直至所述基材吸水饱和，其中，第一种缓冲液按照重量份数计：盐酸胍占缓冲液的0.7-10.0％，SDS占缓冲液的0.7-10.2％，EDTA占缓冲液的0.06-6.0％；
第三步骤：将滴加第一种缓冲液的基材干燥；
第四步骤：对所述基材进行滴加具有50-100mg/mL 羟乙基淀粉的保护剂，该保护剂覆盖于第一种缓冲液上，直至保护剂被所述基材吸收完成沉降；
第五步骤：干燥；
第六步骤：在所述基材上滴加第二种缓冲液直至基材吸水饱和，第二种缓冲液覆盖于上述保护剂上，其中，第二种缓冲液按照重量份数计：盐酸胍占缓冲液的0.5-8.8％，SDS占缓冲液的1-5.5％，EDTA占缓冲液的0.05-0.06％；
第七步骤：将滴加第二种缓冲液的基材干燥；
第八步骤：对所述基材进行滴加具有50-100mg/mL 羟乙基淀粉的保护剂，所述保护剂覆盖于所述第二种缓冲液上；
第九步骤：干燥。
3.如权利要求2所述的纳米多向层析核酸提取介质的制备方法，其特征在于：用分析天平称量，并确认基材吸水是否饱和，当相邻两次质量差小于0.001g，表明基材吸水已饱和。
4.如权利要求2所述的纳米多向层析核酸提取介质的制备方法，其特征在于：确认提取介质已干燥完成的方法为：所述基材放置当相邻两次测量质量差小于0.001g，提取介质完成干燥。
5.如权利要求2所述的纳米多向层析核酸提取介质的制备方法，其特征在于：在第一步骤中，将基材进行干燥，其干燥方式为：-5℃-5℃的真空中干燥，再置于常温相对湿度≤
30％下达到平衡。
一种纳米多向层析核酸提取介质及其制备方法
技术领域
[0001] 本发明涉及一种核酸提取材料，尤其涉及一种纳米多向层析核酸提取介质及其制备方法。
背景技术
[0002] 目前，核酸提取的原则一般为.保证核酸一级结构的完整性，排除其它分子的污染。核酸提取应注意的问题：简化步骤，缩短提取时间，减少化学因素对核酸的降解，减少物理因素对核酸的降解：机械剪切力和高温，防止核酸的生物降解，核酸提取大致分为3大部分：破碎、提取、纯化。
[0003] 在破碎、提取前，现有的技术为用不同的容器收集/采集各种液体样本，再将液体样本运送至特定地点(实验室)进行处理，如此，液体样本运输的条件要求比较苛刻，而且液体样本暴露在空气中的时间较长，可能会导致液体样本降解。另外，液体样本在运输过程中，容易挥发，也易污染、变性、腐败、或仍有潜在传染风险，容易造成病毒、细菌传播，传染给其他人。
[0004] 核酸的提取，现有的技术为将待检测液体样本分步滴入各液态提取介质上，分多步在液态提取介质上完成破碎、提取、纯化，得到的核酸亦为液态。步骤较为复杂，另外，液态核酸保存、运输的条件要求比较苛刻，而且液态核酸保存过程中会发生降解，导致后期的检测结果不可靠。
[0005] 故，有必要提供一种新的核酸提取介质来解决上述问题。
发明内容
[0006] 针对现有技术中存在的上述问题，本发明提供一种更加安全、方便提取核酸的纳米多向层析核酸提取介质及其制备方法。
[0007] 为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：一种纳米多向层析核酸提取介质，其具有高分子碳水化合物的基材与渗入所述基材中提取物，该提取物包括第一层的盐酸胍、SDS、EDTA混合物，位于第二层保护剂，位于第三层的盐酸胍、SDS、EDTA混合物及位于第四层的保护剂，所述第一层的盐酸胍、SDS、EDTA混合物与第三层的盐酸胍、SDS、EDTA混合物含量不同。
[0008] 具体的，所述保护剂为羟乙基淀粉。
[0009] 为实现上述目的，本发明还采用如下技术方案：一种纳米多向层析核酸提取介质的制备方法，其特征在于：其步骤如下，第一步骤：提供吸附用的基材；第二步骤：在所述基材上滴加第一种缓冲液直至所述基材吸水饱和，其中，第一种缓冲液按照重量份数计：盐酸胍占缓冲液的0.7-10.0％，SDS占缓冲液的0.7-10.2％，EDTA占缓冲液的0.06-6.0％；第三步骤：将滴加第一种缓冲液的基材干燥；第四步骤：对所述基材进行滴加具有50-100mg/ml羟乙基淀粉的保护剂，该保护剂覆盖于第一种缓冲液上，直至保护剂被所述基材吸收完成沉降；第五步骤：干燥；第六步骤：在所述基材上滴加第二种缓冲液直至基材吸水饱和，第二种缓冲液覆盖于上述保护剂上，其中，第二种缓冲液按照重量份数计：盐酸胍占缓冲液的0.5-8.8％，SDS占缓冲液的1-5.5％，EDTA占缓冲液的0.05-0.06％；第七步骤：将滴加第二种缓冲液的基材干燥；第八步骤：对所述基材进行滴加具有50-100mg/ml羟乙基淀粉的保护剂，所述保护剂覆盖于所述第二种缓冲液上。第九步骤：干燥。
[0010] 具体的，用分析天平称量，并确认基材吸水是否饱和，当相邻两次质量差小于0.001g，表面基材吸水已饱和。
[0011] 具体的，确认提取介质已干燥完成的方法为：所述基材放置当相邻两次测量质量差小于0.001g，提取介质完成干燥。
[0013] 与现有技术相比，本发明的有益效果在于：在基材上增加两层不同比重的缓冲液与两层保护剂后，当对液体样本进行采集时，基材可吸收一定量的液体样本，将其固化，便于运输、保存(常温)；并在固化过程中基质上的处理液可以将病毒、细胞破碎，并完成核酸的提取、纯化，从而使固化的样本失去传染性。处理过的基材可以很好的保存核酸的完整性，防止核酸的降解。
具体实施方式
[0014] 下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
[0015] 本发明纳米多向层析核酸提取介质为一种高分子碳水化合物的单层或复合多层平面的基材、渗入基材中的缓冲液与保护剂(提取核酸的的提取物)，基材可以为如过滤纸材料。该基材可以为棉制纤维滤纸，滤纸纤维上的羟基具有亲水性，能够吸附变性蛋白质。棉制纤维滤纸作为惰性支持物，不会与缓冲液中的化学成分进行反应，从而保持处理液的活性，有一定的吸附性，可吸附缓冲液。其中该基材的孔径小于10um，保证基材经过处理后其孔径能够达到纳米级的要求。通过多次的渗入方式，将提取物分层与基材中。该提取物包括第一层的盐酸胍、SDS、EDTA混合物，位于第二层保护剂，位于第三层的盐酸胍、SDS、EDTA混合物及位于第四层的保护剂，所述第一层的盐酸胍、SDS、EDTA混合物与第三层的盐酸胍、SDS、EDTA混合物含量不同。
[0016] 具体的，提供两种成分比重的缓冲液，缓冲液为含有盐酸胍、SDS(十二烷基硫酸钠)、EDTA(乙二胺四乙酸)的水溶液，第一种缓冲液按照重量份数计：盐酸胍占缓冲液的0.7-10.0％，SDS占缓冲液的0.7-10.2％，EDTA占缓冲液的0.06-6.0％。第二种缓冲液按照重量份数计：盐酸胍占缓冲液的0.5-8.8％，SDS占缓冲液的1-5.5％，EDTA占缓冲液的0.05-
0.06％。其中盐酸胍的主要作用为使蛋白质变性并抑制酶活性，SDS的主要作用为能裂解细胞，使蛋白变性，释放核酸，EDTA的的主要作用为：酶抑制剂。
0.06％。其中盐酸胍的主要作用为使蛋白质变性并抑制酶活性，SDS的主要作用为能裂解细胞，使蛋白变性，释放核酸，EDTA的的主要作用为：酶抑制剂。
[0017] 另外，提供一种保护剂为一种含50-100mg/ml羟乙基淀粉的溶液。
[0018] 该多向层析核酸提取介质的制备方法如下：
[0019] 实施例一：
[0020] 第一步骤：提供一平方厘米吸附用的基材，将基材进行干燥，其干燥方式为：-5℃-5℃的真空中干燥，再置于常温相对湿度≤30％下达到平衡；
[0021] 第二步骤：在室温相对湿度≥80％条件下，在基材上滴加第一种缓冲液直至基材吸水饱和。其中，盐酸胍占缓冲液的0.7％，SDS占缓冲液的0.7％，EDTA占缓冲液的0.06％。
[0022] 具体为每次100ul(一滴)缓冲液，用分析天平称量，并确认基材吸水是否饱和，当相邻两次质量差小于0.001g，表面基材吸水已饱和。如下表：
[0023]
[0024]
[0025] 以上说明，该基材在第四次加缓冲液后，基材已吸水饱和。
[0026] 第三步骤：在室温相对湿度≤20％下，将滴加第一种缓冲液的基材干燥30min。
[0027] 干燥时间确定实验：将上述基材置于室内干燥，记录干燥过程中一定时间后基材重量的变化，见下表：
[0028]基材片状态 质量(g)
完全湿润 0.4075
20min后(肉眼观察干燥：基材表面无液体残留) 0.2172
30min后 0.1221
40min后 0.1223
完全湿润 0.4075
20min后(肉眼观察干燥：基材表面无液体残留) 0.2172
30min后 0.1221
40min后 0.1223
[0029] 实验条件：室温；相对湿度≤20％
[0030] 实验结论：基材放置30分钟与放置40分钟重量基本无差异，说明基材放置30分钟即可完成干燥。
[0031] 第四步骤：对基材进行滴加具有50mg/ml羟乙基淀粉的保护剂，该保护剂覆盖于第一种缓冲液上，以达到基材每平方厘米液量在30-50ul，保护剂完全被基材吸收完成沉降；
[0032] 具体的，通过喷雾加湿器向基材连续滴加保护剂，25ul雾滴大小，在1平方厘米的基材上喷50ul的保护剂后，喷雾在距离基材上方0.5M左右，旋转喷洒，然后沉降10min-15min左右，在5-10min内，肉眼可见液体完全被基材吸收完成沉降。
[0033] 第五步骤：在相对湿度小于20％的环境干燥30min。
[0034] 第六步骤：在室温相对湿度≥80％条件下，在基材上滴加第二种缓冲液直至基材吸水饱和，第二种缓冲液覆盖于上述保护剂上。其中，盐酸胍占缓冲液的0.5％，SDS占缓冲液的1％，EDTA占缓冲液的0.05％。
[0035] 第七步骤：在室温相对湿度≤20％下，将滴加第二种缓冲液的基材干燥30min。
[0036] 第八步骤：对基材进行滴加具有50mg/ml羟乙基淀粉的保护剂以达到每平方厘米液量在30-50ul，保护剂覆盖于所述第二种缓冲液上，保护剂完全被基材吸收完成沉降。
[0037] 第九步骤：干燥。
[0038] 如此，在基材上增加两层不同比重的缓冲液与两层保护剂后，当对样本进行采集时，基材可吸收一定量的液体样本，将其固化，便于运输、保存(常温)；并在固化过程中基质上的处理液可以将病毒、细胞破碎，从而使固化的样本失去传染性。处理过的基材可以很好的保存核酸的完整性，防止核酸的降解。
[0039] 按照实施例一的步骤，针对不同比例成分的第一种缓冲液、保护剂、第二种缓冲液进行试验，确认实施效果。
[0040] 实施例二：
[0041] 第一步骤：提供一平方厘米吸附用的基材，将基材进行干燥，其干燥方式为：5℃的真空中干燥，再置于常温相对湿度≤30％下达到平衡；
[0042] 第二步骤：在室温相对湿度≥80％条件下，在基材上滴加第一种缓冲液直至基材吸水饱和。其中，盐酸胍占缓冲液的10.0％，SDS占缓冲液的10.2％，EDTA占缓冲液的6.0％。
[0043] 第三步骤：在室温相对湿度≤20％下，将滴加第一种缓冲液的基材干燥30min。
[0044] 第四步骤：对基材进行滴加具有100mg/ml羟乙基淀粉的保护剂，以达到基材每平方厘米液量在30-50ul，保护剂完全被基材吸收完成沉降；
[0045] 第五步骤：在相对湿度≤20％的环境干燥30min。
[0046] 第六步骤：在室温相对湿度≥80％条件下，在基材上滴加第二种缓冲液直至基材吸水饱和。其中，盐酸胍占缓冲液的8.8％，SDS占缓冲液的5.5％，EDTA占缓冲液的0.06％。
[0047] 第七步骤：在室温相对湿度≤20％下，将滴加第二种缓冲液的基材干燥30min。
[0048] 第八步骤：对基材进行滴加具有100mg/ml羟乙基淀粉的保护剂以达到每平方厘米液量在30-50ul，保护剂完全被基材吸收完成沉降。
[0049] 第九步骤：干燥。
[0050] 实施例三：
[0051] 第一步骤：提供一平方厘米吸附用的基材，将基材进行干燥，其干燥方式为：0℃的真空中干燥，再置于常温相对湿度≤30％下达到平衡；
[0052] 第二步骤：在室温相对湿度≥80％条件下，在基材上滴加第一种缓冲液直至基材吸水饱和。其中，盐酸胍占缓冲液的5.0％，SDS占缓冲液的5.0％，EDTA占缓冲液的3.0％。
[0053] 第三步骤：在室温相对湿度≤20％下，将滴加第一种缓冲液的基材干燥30min。
[0054] 第四步骤：对基材进行滴加具有100mg/ml羟乙基淀粉的保护剂，以达到基材每平方厘米液量在30-50ul，保护剂完全被基材吸收完成沉降；
[0055] 第五步骤：在相对湿度≤20％的环境干燥30min。
[0056] 第六步骤：在室温相对湿度≥80％条件下，在基材上滴加第二种缓冲液直至基材吸水饱和。其中，盐酸胍占缓冲液的4.0％，SDS占缓冲液的3.2％，EDTA占缓冲液的0.055％。
[0057] 第七步骤：在室温相对湿度≤20％下，将滴加第二种缓冲液的基材干燥30min。
[0058] 第八步骤：对基材进行滴加具有75mg/ml羟乙基淀粉的保护剂以达到每平方厘米液量在30-50ul，保护剂完全被基材吸收完成沉降。
[0059] 第九步骤：干燥。
[0060] 实施例四：
[0061] 第一步骤：提供一平方厘米吸附用的基材，将基材进行干燥，其干燥方式为：0℃的真空中干燥，再置于常温相对湿度≤30％下达到平衡；
[0062] 第二步骤：在室温相对湿度≥80％条件下，在基材上滴加第一种缓冲液直至基材吸水饱和。其中，盐酸胍占缓冲液的1.0％，SDS占缓冲液的1.0％，EDTA占缓冲液的0.1％。
[0063] 第三步骤：在室温相对湿度≤20％下，将滴加第一种缓冲液的基材干燥30min。
[0064] 第四步骤：对基材进行滴加具有100mg/ml羟乙基淀粉的保护剂，以达到基材每平方厘米液量在30-50ul，保护剂完全被基材吸收完成沉降；
[0065] 第五步骤：在相对湿度≤20％的环境干燥30min。
[0066] 第六步骤：在室温相对湿度≥80％条件下，在基材上滴加第二种缓冲液直至基材吸水饱和。其中，盐酸胍占缓冲液的7.8％，SDS占缓冲液的5.0％，EDTA占缓冲液的0.055％。
[0067] 第七步骤：在室温相对湿度≤20％下，将滴加第二种缓冲液的基材干燥30min。
[0068] 第八步骤：对基材进行滴加具有100mg/ml羟乙基淀粉的保护剂以达到每平方厘米液量在30-50ul，保护剂完全被基材吸收完成沉降。
[0069] 第九步骤：干燥。
[0070] 实施例五：
[0071] 第一步骤：提供一平方厘米吸附用的基材，将基材进行干燥，其干燥方式为：5℃的真空中干燥，再置于常温相对湿度≤30％下达到平衡；
[0072] 第二步骤：在室温相对湿度≥80％条件下，在基材上滴加第一种缓冲液直至基材吸水饱和。其中，盐酸胍占缓冲液的9.8％，SDS占缓冲液的10.0％，EDTA占缓冲液的0.055％。
[0073] 第三步骤：在室温相对湿度≤20％下，将滴加第一种缓冲液的基材干燥30min。
[0074] 第四步骤：对基材进行滴加具有75mg/ml羟乙基淀粉的保护剂，以达到基材每平方厘米液量在30-50ul，保护剂完全被基材吸收完成沉降；
[0075] 第五步骤：在相对湿度≤20％的环境干燥30min。
[0076] 第六步骤：在室温相对湿度≥80％条件下，在基材上滴加第二种缓冲液直至基材吸水饱和。其中，盐酸胍占缓冲液的0.6％，SDS占缓冲液的1.2％，EDTA占缓冲液的0.055％。
[0077] 第七步骤：在室温相对湿度≤20％下，将滴加第二种缓冲液的基材干燥30min。
[0078] 第八步骤：对基材进行滴加具有75mg/ml羟乙基淀粉的保护剂以达到每平方厘米液量在30-50ul，保护剂完全被基材吸收完成沉降。
[0079] 第九步骤：干燥。
[0080] 通过上述多个实验实施例，形成可以纳米多向层析核酸提取介质，该提取介质可以将液体样本进行固化，并在固化过程中基质上的处理液可以将病毒、细胞破碎，很好的解决现有技术在液体样本运输保存不便利上存在的问题，同事简化了核酸的提取步骤。
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