吡啶类IRAK4抑制剂、其制备方法及应用
阅读：137发布：2020-10-24
专利汇可以提供吡啶类IRAK4抑制剂、其制备方法及应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 属于药物领域，具体涉及一种具有式(I)结构特征的吡啶类类化合物或其药学上可接受的盐、其制备方法、以及它们作为IRAK4 抑制剂 的用途。实验结果表明，本发明的化合物对IRAK4具有显著的抑制作用，可以用于 治疗 自身免疫性 疾病 、炎性疾病、癌症、异种免疫性疾病和血栓栓塞等。，下面是吡啶类IRAK4抑制剂、其制备方法及应用专利的具体信息内容。
1.通式(I)所示的吡啶类化合物或其药学上可接受的盐：
其中：
R1代表氢、卤素、羟基、硝基、三氟甲基、氰基、NH(CO)R4、C1-C8烷基、C1-C8烷氧基或C3-C6环烷基；
R2代表氢、卤素或NR5R6；
R3代表氢、卤素或氨基；
R4代表C1-C8烷基、C3-C6环烷基、C5-C10芳基或C5-C10芳杂环基；其中所述的芳杂环基可任选地包含一个或多个选自O、S或N的其它杂原子；其中所述的芳基或芳杂环基可任选地被下述相同或不相同的取代基单取代至五取代，所述的取代基选自：卤素、三氟甲基、氰基、硝基或羟基；
R5和R6可相同或不相同，代表氢、C1-C8烷基，或R5和R6与跟它们连接的氮一起形成5-7元杂环基团，该杂环基团可任选地包含一个或多个选自O、S或N的其它杂原子，并且该杂环基团可任选地由下述相同或不同的取代基单取代至五取代，所述取代基选自：甲酰胺基、卤素、羟基、硝基、氰基或氨基。
2.根据权利要求1所述的吡啶类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于：
R1代表氢、卤素、羟基、硝基、三氟甲基、氰基或NH(CO)R4；
R2代表氢或NR5R6；
R3代表氢或氨基；
R4代表C1-C8烷基、C3-C6环烷基、C5-C10芳基或C5-C10芳杂环基；其中所述的芳杂环基可任选地包含一个或多个选自O、S或N的其它杂原子；其中所述的芳基或芳杂环基可任选地被下述相同或不相同的取代基单取代至五取代，所述的取代基选自：三氟甲基或羟基；
R5和R6可相同或不相同，代表氢、C1-C8烷基，或R5和R6与跟它们连接的氮一起形成5-7元杂环基团，该杂环基团可任选地包含一个或多个选自O、S或N的其它杂原子，并且该杂环基团可任选地由下述相同或不同的取代基单取代至五取代，所述取代基选自：甲酰胺基。
3.根据权利要求2所述的吡啶类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于：
R1代表氢、卤素或NH(CO)R4；
R2代表氢、哌啶或哌啶-4-甲酰胺；
R3代表氢或氨基；
R4代表甲基、乙基、环己基或苯基。
4.根据权利要求1所述的吡啶类化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于所述化合物优先选自：
N-(6-乙酰氨基吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺；
N-(6-丙酰氨基吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺；
N-(6-(环己烷甲酰氨基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺；
N-(6-苯甲酰氨基吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺；
N-(6-乙酰胺基-2-(哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺；
N-(2-(哌啶-1-基)-6-丙酰胺基吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺；
N-(6-(环己烷甲酰胺基)-2-(哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺；
N-(6-苯甲酰氨基-2-(哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺；
N-(6-氯-2-(哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺；
N-(2-(哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺；
N-(2-(4-氨基甲酰基哌啶-1-基)-6-氯吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺；
N-(2-(4-氨基甲酰基哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺；
N-(6-乙酰氨基吡啶-3-基)-2-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺；
2-氨基-N-(6-(环己烷甲酰氨基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺；
2-氨基-N-(6-苯甲酰氨基吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺；
N-(6-乙酰氨基-2-(哌啶-1-基)吡啶-3-基)-2-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺；
2-氨基-N-(6-(环己烷甲酰氨基)-2-(哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺；
2-氨基-N-(6-苯甲酰氨基-2-(哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺；
2-氨基-N-(6-氯-2-(哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺；
2-氨基-N-(2-(4-氨基甲酰基哌啶-1-基)-6-氯吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺。
5.根据权利要求1所述的吡啶类化合物的制备方法，其特征在于：
a)当R2为H，R3为H时，通式(I)所示化合物的制备方法为：以氰乙酸甲酯为起始原料，与原甲酸三乙酯反应生成中间体1，1在水合肼中于100℃环合得到3-氨基-1H-吡唑-4-羧酸甲酯2，2与1,1,3,3-四甲氧基丙烷反应制得吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸甲酯3，3经氢氧化钾水解得到吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸4；以5-硝基吡啶-2-胺为原料，与各种酰氯反应制得中间体5a-d，5a-d经Zn粉/NH4Cl还原制得中间体6a-d；最后，中间体4与二氯亚砜反应制得酰氯后再与6a-d缩合生成目标化合物A-1～A-4：
其中，R4的定义如权利要求1所述；
b)当R2为哌啶，R3为H时，通式(I)所示化合物的制备方法为：以2,6-二氯-3-硝基吡啶为起始原料，与哌啶发生亲核取代反应制得6-氯-3-硝基-2-(哌啶-1-基)吡啶7a，7a与氨水在封管中反应得到5-硝基-6-(哌啶-1-基)吡啶-2-胺8，8分别与各种酰氯反应制得中间体9a-d，9a-d经Zn粉/NH4Cl还原得到中间体10a-d，最后中间体4与二氯亚砜反应制得酰氯后再与
9a-d缩合生成目标化合物A-5～A-8：
其中，R4的定义如权利要求1所述；
c)当R1为H或Cl，R3为H时，通式(I)所示化合物的制备方法为：以2,6-二氯-3-硝基吡啶为起始原料，分别与哌啶、哌啶-4-甲酰胺发生亲核取代反应制得中间体7a-b，7a-b经Zn粉/NH4Cl还原生成中间体11a-b，或经Pd/H2还原得中间体12a-b，最后中间体4与二氯亚砜反应制得酰氯后再与11a-b、12a-b缩合生成目标化合物A-9～A-12：
其中，R2的定义如权利要求1所述；
d)当R3为氨基时，通式(I)所示化合物的制备方法为：以氰乙酸甲酯为起始原料，与三氯乙腈制得中间体13，13在水合肼中于120℃环合得到3,5-二氨基-1H-吡唑-4-羧酸甲酯14，
14与1,1,3,3-四甲氧基丙烷在2M稀盐酸溶液中反应制得2-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸甲酯15，15经氢氧化钾水解得到2-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸16，最后中间体16与二氯亚砜反应制得酰氯后再与胺基吡啶缩合生成目标化合物A-13～A-20：
其中，R1和R2的定义如权利要求1所述。
6.一种药物组合物，其由治疗上有效量的活性组分和药学上可接受的辅料组成；所述的活性组分包括如权利要求1-4中任一项所述的吡啶类化合物或其药学上可接受的盐；所述的药学上可接受的辅料包括药学上可接受的载体、稀释剂和/或赋形剂。
7.权利要求1-4和6中任一项的化合物或其药学上可接受的盐在制备药物中的用途，所述药物用于抑制IRAK4激酶的活性。
8.权利要求1-4和6中任一项的化合物或其药学上可接受的盐在制备IRAK4激酶抑制剂药物中的应用，所述药物用于治疗患者的自身免疫性疾病、炎性疾病、癌症、异种免疫性疾病或血栓栓塞。
9.根据权利要求8所述的应用，所述的自身免疫性疾病和炎性疾病包括但不限于：类风湿性关节炎、骨关节炎、慢性阻塞性肺疾病、系统性红斑狼疮、银屑病、溃疡性结肠炎、肠道应激综合症中的一种或多种；所述的癌症包括但不限于：B细胞性慢性淋巴细胞白血病、急性淋巴细胞性白血病、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、急性髓性白血病、弥漫性大B细胞淋巴瘤、多发性骨髓瘤、华氏巨球蛋白血症中的一种或多种。
10.根据权利要求8-9所述的应用，其特征在于进一步给予所述疾病患者施用一种或多种免疫抑制剂、靶向抗肿瘤药物、糖皮质激素、非甾体抗炎药、抗肿瘤疫苗、过继性细胞免疫治疗或放射治疗；所述的免疫抑制剂包括但不限于：6-巯基嘌呤、环孢素、他克莫司、抗淋巴细胞球蛋白或抗Tac单抗；所述的糖皮质激素包括但不限于：氢化可的松、地塞米松、倍他米松、强的松；所述的非甾体抗炎药包括但不限于：阿司匹林、布洛芬、双氯芬酸或罗非昔布；
所述的靶向抗肿瘤药物包括但不限于：蛋白激酶抑制剂、蛋白酶体抑制剂、异柠檬酸脱氢酶抑制剂、基于表观遗传学的抗肿瘤药物或细胞周期信号通路抑制剂；所述的蛋白激酶抑制剂包括但不限于：BTK抑制剂、PI3K抑制剂、SYK抑制剂或JAK抑制剂。
吡啶类IRAK4抑制剂、其制备方法及应用
技术领域
[0001] 本发明属于药物领域，具体涉及一种吡啶类化合物或其药学上可接受的盐、其制备方法、以及它们作为IRAK4抑制剂的用途。技术背景
[0002] 白细胞介素-1受体相关激酶-4(IRAK4)是细胞内一种丝/苏氨酸蛋白激酶，系IRAK家族的成员之一。IRAK4主要由N端保守的死亡结构域(DD)、铰链区、C端的中央激酶结构域(KD)组成(Wang Z,etal.Structure,2006,14(2):1835-1844)。DD区是IRAK4与接头蛋白髓系分化因子88(MyD88)相结合的区域，它在IRAK4发挥分子识别及激活下游信号通路中起重要的作用。KD区由12个亚区域构成，具有典型的丝/苏氨酸激酶结构域特征。IRAK4主要的功能是通过KD区将其底物磷酸化，进而激活下游信号分子。研究表明，IRAK4是Toll样受体(TLR)/白介素-1受体(IL-1R)介导的炎症信号转导通路下游的关键因子，在机体炎症反应中发挥重要的作用(Sims JE,etal.NatRevImmunol,2010,10(2):89-102)。
[0003] TLRs/IL-1R信号通路不仅是固有免疫系统识别病原相关分子模式(PAMP)的主要途径，而且参与适应性免疫应答的调控。研究表明，TLRs和IL-1R与配体结合后通过其TIR结构域招募MyD88蛋白，随后MyD88分子通过其N端的DD区进一步将IRAK4招募到TLRs/IL-1R复合物中，并与IRAK1紧密接触，IRAK4通过KD区发生自身磷酸化，随即激活IRAK1，从而向下游传递信号至E3泛素连接酶TNF受体相关因子6(TRAF6)，活化丝氨酸/苏氨酸激酶TAK1，进而激活NF-κB及MAPK信号通路，引起多种炎症细胞因子和抗凋亡分子的释放(Flannery S,etal.BiochemPharmacol,2010,80(12):1981-1991)。
[0004] IRAK4依赖性的TLR/IL-1R信号通路的过度激活已经被证明与以下疾病的发生发展相关：痛风、动脉粥样硬化、类风湿性关节炎、心肌梗死、系统性红斑狼疮、多发性硬化症、代谢综合症、脓血症、炎症性肠病、哮喘、过敏和器官移植后的排斥反应(Dinarello CA.Eur JImmunol,2011,41(5):1203-1217；Keogh B,etal.TrendsPharmacolSci,2011,32(7):435-442；Mann DL.Circ Res,2011,108(9):1133-1145；Cario E.Inflamm Bowel Dis,2010,16(9):1583-1597)。实验表明，在LPS或CpG诱导的人白细胞中，IRAK4抑制剂能够有效地阻断促炎细胞因子肿瘤坏死因子(TNF)的产生；在胶原蛋白诱导关节炎的小鼠模型中，IRAK4抑制剂能够显著抑制TNF的释放，从而控制疾病的进程；在MyD88依赖性炎症性痛风小鼠模型中，IRAK4抑制剂能够剂量依赖性地阻断白细胞浸润(Priscilla N,etal.JExpMed,2015,13(212):2189-2201)。
[0005] 近年来，在多种血液肿瘤中发现MyD88蛋白编码区第265位亮氨酸突变为脯氨酸(L265P)，从而导致IRAK4介导的NF-κB信号通路的持续激活、放大，进而促进细胞恶性增殖。在弥漫性大B细胞淋巴瘤中，由于MyD88蛋白出现L265P突变，从而导致IRAK4的过度活化(Ngo VN,etal.Nature,2011,470(7332):115-119)。MyD88L265P突变导致的IRAK4过度活化在慢性淋巴性白血病、华氏巨球蛋白血症中也得到确证，通过抑制IRAK4的活性能够降低细胞内IL-6、IL-10水平，从而抑制细胞的恶性增殖与分化(Puente XS,etal.Nature,2011,
475(7354):101-105；Treon SP,etal.NEnglJMed,2012,367(9):826-833)。
475(7354):101-105；Treon SP,etal.NEnglJMed,2012,367(9):826-833)。
[0006] 此外，文献还报道了IRAK4抑制剂与B细胞受体信号通路中的抑制剂(例如：BTK抑制剂、SYK抑制剂、Bcl-2抑制剂)的联合用药可以起协同作用(PriscillaN,etal.JExpMed,2015,13(212):2189-2201)。在携带MyD88L265P突变的弥漫性大B细胞淋巴瘤中，IRAK4抑制剂与BTK抑制剂ibrutinib的联用能够显著增强对肿瘤细胞的杀伤力，更能有效地抑制IKK的活性，促进细胞的凋亡(Chaudhary D,etal.Blood,2013,122(21):3833)。
[0007] 综上所述，IRAK4已成为炎症、免疫相关疾病和血液肿瘤治疗领域中的一个重要靶标(Chaudhary D,etal.JMedChem.2015,58(1):96-110)。PF-06650833是由Pfizer公司研发的小分子IRAK4抑制剂，是该靶点至今唯一进入临床试验阶段的小分子化合物，目前正在开展治疗类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等临床试验。
发明内容
[0008] 本发明所要解决的技术问题在于提供了一种吡啶类化合物或其药学上可接受的盐、其制备方法、药物组合物及应用。本发明的化合物具有良好的IRAK4抑制活性，可以用于治疗和/或预防IRAK4引起的相关疾病。
[0009] 本发明公开通式(I)所示的吡啶类化合物或其药学上可接受的盐：
[0010]
[0011] 其中：
[0013] R2代表氢、卤素或NR5R6；
[0014] R3代表氢、卤素或氨基；
[0015] R4代表C1-C8烷基、C3-C6环烷基、C5-C10芳基或C5-C10芳杂环基；其中所述的芳杂环基可任选地包含一个或多个选自O、S或N的其它杂原子；其中所述的芳基或芳杂环基可任选地被下述相同或不相同的取代基单取代至五取代，所述的取代基选自：卤素、三氟甲基、氰基、硝基或羟基；
[0016] R5和R6可相同或不相同，代表氢、C1-C8烷基，或R5和R6与跟它们连接的氮一起形成5-7元杂环基团，该杂环基团可任选地包含一个或多个选自O、S或N的其它杂原子，并且该杂环基团可任选地由下述相同或不同的取代基单取代至五取代，所述取代基选自：甲酰胺基、卤素、羟基、硝基、氰基或氨基。
[0017] 进一步地，具有通式(I)所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于：
[0018] R1代表氢、卤素、羟基、硝基、三氟甲基、氰基或NH(CO)R4；
[0019] R2代表氢或NR5R6；
[0020] R3代表氢或氨基；
[0021] R4代表C1-C8烷基、C3-C6环烷基、C5-C10芳基或C5-C10芳杂环基；其中所述的芳杂环基可任选地包含一个或多个选自O、S或N的其它杂原子；其中所述的芳基或芳杂环基可任选地被下述相同或不相同的取代基单取代至五取代，所述的取代基选自：三氟甲基或羟基；
[0022] R5和R6可相同或不相同，代表氢、C1-C8烷基，或R5和R6与跟它们连接的氮一起形成5-7元杂环基团，该杂环基团可任选地包含一个或多个选自O、S或N的其它杂原子，并且该杂环基团可任选地由下述相同或不同的取代基单取代至五取代，所述取代基选自：甲酰胺基。
[0023] 更进一步地，具有通式(I)所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于：
[0024] R1代表氢、卤素或NH(CO)R4；
[0025] R2代表氢、哌啶或哌啶-4-甲酰胺；
[0026] R3代表氢或氨基；
[0027] R4代表甲基、乙基、环己基或苯基。
[0028] 具体来说，通式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于所述化合物优先选自：
[0029] N-(6-乙酰氨基吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(A-1)；
[0030] N-(6-丙酰氨基吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(A-2)；
[0031] N-(6-(环己烷甲酰氨基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(A-3)；
[0032] N-(6-苯甲酰氨基吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(A-4)；
[0033] N-(6-乙酰胺基-2-(哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(A-5)；
[0034] N-(2-(哌啶-1-基)-6-丙酰胺基吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(A-6)；
[0035] N-(6-(环己烷甲酰胺基)-2-(哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(A-7)；
[0036] N-(6-苯甲酰氨基-2-(哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(A-8)；
[0037] N-(6-氯-2-(哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(A-9)；
[0038] N-(2-(哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(A-10)；
[0039] N-(2-(4-氨基甲酰基哌啶-1-基)-6-氯吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(A-11)；
[0040] N-(2-(4-氨基甲酰基哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(A-12)；
[0041] N-(6-乙酰氨基吡啶-3-基)-2-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(A-13)；
[0042] 2-氨基-N-(6-(环己烷甲酰氨基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(A-14)；
[0043] 2-氨基-N-(6-苯甲酰氨基吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(A-15)；
[0044] N-(6-乙酰氨基-2-(哌啶-1-基)吡啶-3-基)-2-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(A-16)；
[0045] 2-氨基-N-(6-(环己烷甲酰氨基)-2-(哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(A-17)；
[0046] 2-氨基-N-(6-苯甲酰氨基-2-(哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(A-18)；
[0047] 2-氨基-N-(6-氯-2-(哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(A-19)；
[0048] 2-氨基-N-(2-(4-氨基甲酰基哌啶-1-基)-6-氯吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(A-20)；
[0049] 下面药理实验中涉及的化合物代号等同于此处代号所对应的化合物。
[0050] 本发明的另一目的在于提供通式(I)所示化合物的制备方法，其特征在于：
[0051] a)当R2为H，R3为H时，通式(I)所示化合物的制备方法为：以氰乙酸甲酯为起始原料，与原甲酸三乙酯反应生成中间体1，1在水合肼中于100℃环合得到3-氨基-1H-吡唑-4-羧酸甲酯2，2与1,1,3,3-四甲氧基丙烷反应制得吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸甲酯3，3经氢氧化钾水解得到吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸4；以5-硝基吡啶-2-胺为原料，与各种酰氯反应制得中间体5a-d，5a-d经Zn粉/NH4Cl还原制得中间体6a-d；最后，中间体4与二氯亚砜反应制得酰氯后再与6a-d缩合生成目标化合物A-1～A-4：
[0052]
[0053] 其中，R4的定义如前所述；
[0054] b)当R2为哌啶，R3为H时，通式(I)所示化合物的制备方法为：以2,6-二氯-3-硝基吡啶为起始原料，与哌啶发生亲核取代反应制得6-氯-3-硝基-2-(哌啶-1-基)吡啶7a，7a与氨水在封管中反应得到5-硝基-6-(哌啶-1-基)吡啶-2-胺8，8分别与各种酰氯反应制得中间体9a-d，9a-d经Zn粉/NH4Cl还原得到中间体10a-d，最后中间体4与二氯亚砜反应制得酰氯后再与9a-d缩合生成目标化合物A-5～A-8：
[0055]
[0056] 其中，R4的定义如前所述；
[0057] c)当R1为H或Cl，R3为H时，通式(I)所示化合物的制备方法为：以2,6-二氯-3-硝基吡啶为起始原料，分别与哌啶、哌啶-4-甲酰胺发生亲核取代反应制得中间体7a-b，7a-b经Zn粉/NH4Cl还原生成中间体11a-b，或经Pd/H2还原得中间体12a-b，最后中间体4与二氯亚砜反应制得酰氯后再与11a-b、12a-b缩合生成目标化合物A-9～A-12：
[0058]
[0059] 其中，R2的定义如前所述；
[0060] d)当R3为氨基时，通式(I)所示化合物的制备方法为：以氰乙酸甲酯为起始原料，与三氯乙腈制得中间体13，13在水合肼中于120℃环合得到3,5-二氨基-1H-吡唑-4-羧酸甲酯14，14与1,1,3,3-四甲氧基丙烷在2M稀盐酸溶液中反应制得2-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸甲酯15，15经氢氧化钾水解得到2-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸16，最后中间体
16与二氯亚砜反应制得酰氯后再与胺基吡啶缩合生成目标化合物A-13～A-20：
16与二氯亚砜反应制得酰氯后再与胺基吡啶缩合生成目标化合物A-13～A-20：
[0061]
[0062] 其中，R1和R2的定义如前所述。
[0063] 所述通式(I)化合物的药学上可接受的盐可通过一般的化学方法合成。
[0065] 本发明还提供了一种药物组合物，其由治疗上有效量的活性组分和药学上可接受的辅料组成；所述的活性组分包括通式(I)化合物和其药学上可接受的盐中的一种或多种。所述药物组合物中，所述的辅料包括药学上可接受的载体、稀释剂和/或赋形剂。
[0066] 根据治疗目的可将药物组合物制成各种类型的给药单位剂型，如片剂、丸剂、粉剂、液体、悬浮液、乳液、颗粒剂、胶囊、栓剂和针剂(溶液和悬浮液)等，优选片剂、胶囊、液体、悬浮液、和针剂(溶液和悬浮液)。
[0067] 为了使片剂、丸剂或栓剂形式的药物组合物成形，可使用本领域任何已知并广泛使用的赋形剂。
[0068] 为了制备针剂形式的药物组合物，可将溶液或悬浮液消毒后(最好加入适量的氯化钠，葡萄糖或甘油)，制成与血液等渗压的针剂。在制备针剂时，也可以使用本领域内任何常用的载体。例如：水、乙醇、丙二醇、乙氧基化的异硬脂醇、聚乙氧基化的异硬脂醇和聚乙烯脱水山梨醇的脂肪酸酯等。此外，还可以加入通常溶解剂和缓冲剂等。
[0069] 本发明所述的组合物在药物组合物中的含量无特殊限制，可在很宽的范围内进行选择，通常可为质量百分比的5～95％，优先为质量百分比的30～85％。
[0070] 本发明所述的药物组合物的给药方法没有特殊限制。可根据患者年龄、性别和其它条件及症状，选择各种剂型的制剂给药。
[0071] 本发明另外提供了所述通式(I)化合物、其药学上可接受的盐或所述药物组合物在制备IRAK4抑制剂中的应用。所述的IRAK4抑制剂用于治疗患者的自身免疫性疾病、炎性疾病、癌症、异种免疫性疾病或血栓栓塞。
[0073] 所述的癌症包括但不限于：B细胞性慢性淋巴细胞白血病、急性淋巴细胞性白血病、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、急性髓性白血病、弥漫性大B细胞淋巴瘤、多发性骨髓瘤、华氏巨球蛋白血症中的一种或多种。
[0074] 本发明还提供了所述通式(I)化合物、其药学上可接受的盐或所述药物组合物可以和一种或多种其它种类的治疗剂和/或治疗方法联合用于治疗由IRAK4介导的相关疾病。
[0076] 所述的免疫抑制剂包括但不限于：6-巯基嘌呤、环孢素、他克莫司、抗淋巴细胞球蛋白、抗Tac单抗。
[0077] 所述的糖皮质激素包括但不限于：氢化可的松、地塞米松、倍他米松、强的松。
[0078] 所述的非甾体抗炎药包括但不限于：阿司匹林、布洛芬、双氯芬酸、罗非昔布。
[0079] 所述的靶向抗肿瘤药物包括但不限于：蛋白激酶抑制剂、蛋白酶体抑制剂、异柠檬酸脱氢酶抑制剂、基于表观遗传学的抗肿瘤药物或细胞周期信号通路抑制剂。
[0080] 所述的蛋白激酶抑制剂包括但不限于：BTK抑制剂、PI3K抑制剂、SYK抑制剂、JAK抑制剂。
具体实施方式
[0081] 为了进一步阐明本发明，下面给出一系列实施例，这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本发明具体描述，不应当理解为对本发明的限制。
[0082] 实施例1
[0083] (E)-2-氰基-3-乙氧基丙烯酸甲酯(1)的制备
[0084]
[0085] 将氰乙酸甲酯(5.0g,50.5mmol)和原甲酸三乙酯(7.6g,51.0mmol)加入20mL乙酸酐中，回流搅拌6h，冷却，乙酸乙酯萃取，无水MgSO4干燥，过滤，旋干溶剂，得淡黄色固体7.1g，产率91％。1H NMR(300MHz,Chloroform-d):δ(ppm):7.91(s,1H),4.06(q,J＝5.9Hz,
2H),3.87(s,3H),1.26(t,J＝5.9Hz,3H).
2H),3.87(s,3H),1.26(t,J＝5.9Hz,3H).
[0086] 3-氨基-1H-吡唑-4-羧酸甲酯(2)的制备
[0087]
[0088] 将1(7.8g,50.3mmol)加入30mL无水乙醇中，缓慢滴加80％水合肼(15.2mL,248.5mmol)，回流搅拌10h，乙酸乙酯萃取，无水MgSO4干燥，过滤，旋干溶剂，柱层析纯化得
1
黄色固体，产率65％。H-NMR(300MHz,DMSO-d6):δ(ppm):11.94(s,1H),7.57(s,1H),5.84(s,
2H),3.67(s,3H).
1
黄色固体，产率65％。H-NMR(300MHz,DMSO-d6):δ(ppm):11.94(s,1H),7.57(s,1H),5.84(s,
2H),3.67(s,3H).
[0089] 吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸甲酯(3)的制备
[0090]
[0091] 将2(5.0g,35.4mmol)加入由20mL冰醋酸和5mL无水乙醇组成的混合溶液中，随后滴加1,1,3,3-四甲氧基丙烷(6.4mL,38.9mmol)，加热至90℃，反应10h，旋除乙醇，乙酸乙酯萃取，合并有机相，饱和碳酸氢钠溶液洗涤，无水MgSO4干燥，过滤，旋干溶剂，柱层析纯化得白色固体5.2g，产率83％。1H NMR(300MHz,Chloroform-d):δ(ppm):9.25(dd,J＝7.4,1.6Hz,1H),8.83(dd,J＝7.5,1.5Hz,1H),8.62(s,1H),7.14(t,J＝7.5Hz,1H),3.95(s,3H).吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(4)的制备
[0092]
[0093] 将3(0.3g,1.7mmol)加入5mL乙醇中，随后加入5mL水，加热至50℃，缓慢滴加1mL的1M KOH溶液，反应3h，冷却，在冰浴下滴加6M稀盐酸将反应液pH值调至2，析出大量固体，抽滤，干燥，得黄色固体0.25g，产率91％。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):δ(ppm):12.33(s,1H),
9.39-9.16(m,1H),8.93-8.71(m,1H),8.69-8.49(m,1H),7.27(dt,J＝7.1,3.6Hz,1H).[0094] N-(5-硝基吡啶-2-基)乙酰胺(5a)的制备
9.39-9.16(m,1H),8.93-8.71(m,1H),8.69-8.49(m,1H),7.27(dt,J＝7.1,3.6Hz,1H).[0094] N-(5-硝基吡啶-2-基)乙酰胺(5a)的制备
[0095]
[0096] 将2-氨基-5-硝基吡啶(1.5g,10.8mmol)和三乙胺(2.2mL,15.9mmol)加入10mL无水二氯甲烷中，在冰浴条件下慢慢滴加乙酰氯(0.9mL,12.7mmol)，室温下搅拌6h，乙酸乙酯萃取，无水MgSO4干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得黄色固体1.5g，产率77％。1HNMR(300MHz,Chloroform-d):δ(ppm):9.16(d,J＝2.7Hz,1H),8.58-8.38(m,2H),8.26(s,1H),2.31(s,3H).
[0097] N-(5-氨基吡啶-2-基)乙酰胺(6a)的制备
[0098]
[0099] 将5a(1.0g,5.5mmol)加入10mL 95％乙醇中，随后加入锌粉(3.6g,55.1mmol)和氯化铵(3.0g,56.1mmol)，并滴加2mL水，室温下搅拌5h，乙酸乙酯萃取，无水MgSO4干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得灰白色固体0.7g，产率84％。1H NMR(300MHz,Chloroform-d):δ(ppm):8.33(d,J＝1.3Hz,1H),8.26(d,J＝7.9Hz,1H),7.74(s,1H),7.11(dd,J＝7.9,1.3Hz,1H),
3.50(s,2H),2.16(s,3H).
3.50(s,2H),2.16(s,3H).
[0100] N-(6-乙酰氨基吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(A-1)的制备[0101]
[0102] 将4(0.1g,0.6mmol)加5mL氯化亚砜中，回流搅拌5h，旋干，溶于5ml无水二氯甲烷，滴加至溶有6a(0.09g,0.6mmol)和三乙胺(0.08mL,0.6mmol)的二氯甲烷中，室温反应过夜，旋干，乙酸乙酯萃取，无水MgSO4干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得白色固体0.03g，产率17％。ESI-MS:297.1[M+H]+；1H-NMR(300MHz,Chloroform-d):δ(ppm):9.14(dd,J＝7.5,1.7Hz,
1H),8.98(dd,J＝7.5,1.5Hz,1H),8.82(s,1H),8.60(d,J＝1.1Hz,1H),8.47-8.39(m,1H),
8.43(s,2H),7.78(s,1H),7.14(t,J＝7.5Hz,1H),2.16(s,3H).
1H),8.98(dd,J＝7.5,1.5Hz,1H),8.82(s,1H),8.60(d,J＝1.1Hz,1H),8.47-8.39(m,1H),
8.43(s,2H),7.78(s,1H),7.14(t,J＝7.5Hz,1H),2.16(s,3H).
[0103] 实施例2
[0104] N-(5-硝基吡啶-2-基)苯甲酰胺(5b)的制备
[0105]
[0106] 参照5a的制备方法，由2-氨基-5-硝基吡啶和丙酰氯反应得黄色固体，产率68％。1H-NMR(300MHz,Chloroform-d):δ(ppm):9.34(d,J＝1.1Hz,1H),8.62-8.54(m,2H),8.20(s,1H),2.31(q,J＝8.0Hz,2H),1.18(t,J＝8.0Hz,3H).
[0107] N-(5-氨基吡啶-2-基)苯甲酰胺(6b)的制备
[0108]
[0109] 参照6a的制备方法，由5b反应得白色固体，产率69％。1H-NMR(300MHz,Chloroform-d):δ(ppm):8.02(d,J＝9.1Hz,2H),7.72(d,J＝2.9Hz,1H),7.06(dd,J＝8.9,2.9Hz,1H),3.53(s,2H),2.38(q,J＝7.7Hz,2H),0.85(t,J＝8.3Hz,3H).
[0110] N-(6-丙酰氨基吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(A-2)的制备[0111]
[0112] 参照A-1的制备方法，由6b和4反应得白色固体，产率39％。ESI-MS:311.1[M+H]+；1H-NMR(300MHz,Chloroform-d):δ(ppm):10.44(s,1H),9.95(s,1H),9.47-9.31(m,1H),
8.89(d,J＝4.5Hz,1H),8.70(d,J＝11.9Hz,2H),8.09(s,2H),7.34(dd,J＝6.9,4.2Hz,1H),
2.37(q,J＝7.5Hz,2H),1.06(t,J＝7.5Hz,3H).
8.89(d,J＝4.5Hz,1H),8.70(d,J＝11.9Hz,2H),8.09(s,2H),7.34(dd,J＝6.9,4.2Hz,1H),
2.37(q,J＝7.5Hz,2H),1.06(t,J＝7.5Hz,3H).
[0113] 实施例3
[0114] N-(5-硝基吡啶-2-基)环己烷甲酰胺(5c)的制备
[0115]
[0116] 将2-氨基-5-硝基吡啶(1.0g,7.2mmol)加至15mL吡啶中，在冰浴条件下慢慢滴加环己酰氯(0.9mL,7.2mmol)，室温下搅拌6h，用稀盐酸将反应溶液pH值调至5，乙酸乙酯萃取，无水MgSO4干燥，过滤，旋干，柱层析得黄色固体1.5g，产率78％。1H-NMR(300MHz,Chloroform-d):δ(ppm):9.36(s,1H),8.57(d,J＝7.9Hz,1H),8.48(d,J＝8.0Hz,1H),7.71(s,1H),2.56(s,1H),2.03-1.94(m,2H),1.72(dddd,J＝41.2,14.2,12.7,7.0Hz,5H),1.49(q,J＝6.3,5.7Hz,1H),1.44(dt,J＝13.8,6.4Hz,1H),1.42-1.31(m,1H).
[0117] N-(5-氨基吡啶-2-基)环己烷甲酰胺(6c)的制备
[0118]
[0119] 参照6a的制备方法，由5c得白色固体，产率60％。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):δ(ppm):8.35(s,1H),8.25(d,J＝7.9Hz,1H),7.71(s,1H),7.02(d,J＝8.1Hz,1H),3.50(s,2H),2.40(s,1H),2.09(dt,J＝13.1,6.9Hz,2H),1.83(dt,J＝12.9,6.8Hz,2H),1.73(ddt,J＝17.5,14.7,6.7Hz,3H),1.54-1.35(m,3H).
[0120] N-(6-(环己烷甲酰氨基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(A-3)的制备[0121]
[0122] 参照A-1的制备方法，由6c和4反应得白色固体，产率39％。ESI-MS:365.0[M+H]+；1H-NMR(300MHz,Chloroform-d):δ(ppm):9.83(s,1H),8.85(dd,J＝7.0,1.7Hz,1H),8.79-
8.72(m,2H),8.70(d,J＝2.6Hz,1H),8.26(d,J＝8.9Hz,1H),8.10(dd,J＝8.9,2.7Hz,1H),
7.96(s,1H),7.09(dd,J＝7.0,4.2Hz,1H),2.27(tt,J＝11.6,3.4Hz,1H),1.86(q,J＝
3.4Hz,8H),1.70(s,2H).
8.72(m,2H),8.70(d,J＝2.6Hz,1H),8.26(d,J＝8.9Hz,1H),8.10(dd,J＝8.9,2.7Hz,1H),
7.96(s,1H),7.09(dd,J＝7.0,4.2Hz,1H),2.27(tt,J＝11.6,3.4Hz,1H),1.86(q,J＝
3.4Hz,8H),1.70(s,2H).
[0123] 实施例4
[0124] N-(5-硝基吡啶-2-基)苯甲酰胺(5d)的制备
[0125]
[0126] 参照5a的制备方法，由2-氨基-5-硝基吡啶和苯甲酰氯反应得黄色固体，产率58％。1H-NMR(300MHz,Chloroform-d):δ(ppm):9.08-9.02(m,1H),8.64-8.41(m,2H),7.89(d,J＝7.5Hz,2H),7.53(dt,J＝27.8,7.4Hz,4H).
[0127] N-(5-氨基吡啶-2-基)苯甲酰胺(6d)的制备
[0128]
[0129] 参照6a的制备方法，由5d得灰白色固体，产率70％。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):δ(ppm):10.33(s,1H),8.04-7.97(m,2H),7.86-7.74(m,2H),7.58-7.45(m,3H),7.04(dd,J＝8.8,2.9Hz,1H),5.19(s,2H).
[0130] N-(6-苯甲酰氨基吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(A-4)的制备[0131]
[0132] 参照A-1的制备方法，由6d和4反应得淡黄色固体，产率25％。ESI-MS:359.1[M+H]+；1H-NMR(300MHz,Chloroform-d):δ(ppm):9.88(s,1H),8.97-8.82(m,2H),8.79-8.66(m,3H),8.20(dd,J＝9.1,2.6Hz,1H),7.95(d,J＝7.4Hz,2H),7.52(dt,J＝15.1,7.1Hz,4H),
7.09(dd,J＝7.0,4.2Hz,1H).
7.09(dd,J＝7.0,4.2Hz,1H).
[0133] 实施例5
[0134] 6-氯-3-硝基-2-(哌啶-1-基)吡啶(7a)的制备
[0135]
[0136] 将2,6-二氯-3-硝基吡啶(1.0g,5.2mmol)加入15mL无水乙醇中，在冰浴下慢慢滴加哌啶(0.6mL,6.1mmol)，室温下搅拌4h，乙酸乙酯萃取，无水MgSO4干燥，过滤，旋干溶剂，柱层析纯化得黄色固体1.0g，产率80％。1HNMR(300MHz,Chloroform-d):δ(ppm):8.08(d,J＝8.2Hz,1H),6.64(d,J＝8.2Hz,1H),3.43(d,J＝5.0Hz,4H),1.71(d,J＝2.9Hz,6H).[0137] 5-硝基-6-(哌啶-1-基)吡啶-2-胺(8)的制备
[0138]
[0139] 将7a(0.5g,2.1mmol)加入10mL氨水溶液中，80℃条件下封管反应12h，乙酸乙酯萃取，无水MgSO4干燥，过滤，旋干溶剂，柱层析纯化得黄色固体0.4g，产率87％。1H-NMR(300MHz,Chloroform-d):δ(ppm):8.06(d,J＝8.8Hz,1H),5.78(d,J＝8.8Hz,1H),4.81(s,2H),3.30(t,J＝4.5Hz,4H),1.59(s,6H).
[0140] N-(5-硝基-6-(哌啶-1-基)吡啶-2-基)乙酰胺(9a)的制备
[0141]
[0142] 参照5c的制备方法，由8和乙酰氯反应得黄色固体，产率55％。1H-NMR(300MHz,Chloroform-d):δ(ppm):8.21(d,J＝8.5Hz,1H),7.93(s,1H),7.64-7.39(m,1H),3.12-3.06(m,4H),2.23(s,3H),1.66-1.57(m,6H).
[0143] N-(5-氨基-6-(哌啶-1-基)吡啶-2-基)乙酰胺(10a)的制备
[0144]
[0145] 参照6a的制备方法，由9a得灰白色固体，产率75％。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):7.83(d,J＝8.0Hz,1H),7.71(s,1H),6.85(d,J＝8.0Hz,1H),4.29(s,2H),3.12-3.06(m,4H),2.16(s,3H),1.66-1.57(m,6H).
[0146] N-(6-乙酰胺基-2-(哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(A-5)的制备
[0147]
[0148] 将4(0.1g,0.6mmol)加入5mL氯化亚砜中，回流搅拌5h，旋干，溶于5ml无水四氢呋喃，滴加至溶有10a(0.15g,0.6mmol)和K3PO4(0.4g,1.9mmol)的四氢呋喃中，室温反应过夜，旋干溶剂，乙酸乙酯萃取，无水MgSO4干燥，过滤，旋干溶剂，柱层析纯化得灰白色固体0.05g，产率22％。ESI-MS:380.2[M+H]+；1H-NMR(300MHz,Chloroform-d):δ(ppm):10.19(s,
1H),9.14-8.52(m,4H),7.91(d,J＝8.7Hz,1H),7.71(s,1H),7.08(dd,J＝7.0,4.1Hz,1H),
3.02(t,J＝5.4Hz,4H),2.21(s,3H),1.80(q,J＝5.7Hz,4H),0.88(d,J＝7.8Hz,2H).[0149] 实施例6
1H),9.14-8.52(m,4H),7.91(d,J＝8.7Hz,1H),7.71(s,1H),7.08(dd,J＝7.0,4.1Hz,1H),
3.02(t,J＝5.4Hz,4H),2.21(s,3H),1.80(q,J＝5.7Hz,4H),0.88(d,J＝7.8Hz,2H).[0149] 实施例6
[0150] N-(5-硝基-6-(哌啶-1-基)吡啶-2-基)乙酰胺(9b)的制备
[0151]
[0152] 参照5c的制备方法，由8和丙酰氯反应得黄色固体，产率63％。1H-NMR(300MHz,Chloroform-d):δ(ppm):8.10(d,J＝8.1Hz,1H),8.01-7.92(m,2H),3.76-3.70(m,4H),2.31(q,J＝8.0Hz,2H),1.65-1.56(m,6H),1.19(t,J＝8.0Hz,3H).
[0153] N-(5-氨基-6-(哌啶-1-基)吡啶-2-基)乙酰胺(10b)的制备
[0154]
[0155] 参照6a的制备方法，由9b得灰白色固体，产率72％。1H-NMR(300MHz,Chloroform-d):δ(ppm):7.72(d,J＝8.3Hz,1H),7.53(s,1H),7.00(d,J＝8.3Hz,1H),3.65(s,2H),3.04-2.95(m,4H),2.40(q,J＝7.6Hz,2H),1.62(s,6H),0.90-0.84(m,3H).
[0156] N-(2-(哌啶-1-基)-6-丙酰胺基吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(A-6)的制备
[0157]
[0158] 参照A-5的制备方法，由10b和4反应得淡黄色固体，产率38％。ESI-MS:394.1[M+H]+；1H-NMR(300MHz,Chloroform-d):δ(ppm):10.21(s,1H),8.88-8.83(m,1H),8.81(d,J＝2.6Hz,1H),8.75(dd,J＝4.1,1.7Hz,1H),7.95(d,J＝8.8Hz,1H),7.65(s,1H),7.28(s,1H),
7.09(dd,J＝7.1,4.1Hz,1H),3.14-2.90(m,4H),2.45(q,J＝7.6Hz,2H),1.81(d,J＝6.6Hz,
4H),1.27(s,3H),0.87(s,2H).
7.09(dd,J＝7.1,4.1Hz,1H),3.14-2.90(m,4H),2.45(q,J＝7.6Hz,2H),1.81(d,J＝6.6Hz,
4H),1.27(s,3H),0.87(s,2H).
[0159] 实施例7
[0160] N-(5-硝基-6-(哌啶-1-基)吡啶-2-基)环己烷甲酰胺(9c)的制备
[0161]
[0162] 参照5c的制备方法，由8和环己烷甲酰氯反应得黄色固体，产率74％。1H-NMR(300MHz,Chloroform-d):δ(ppm):8.21(d,J＝8.9Hz,1H),7.77(s,J＝7.9Hz,1H),7.59(d,1H),3.73(s,4H),2.51(s,1H),1.95(dt,J＝13.3,6.8Hz,2H),1.78(dt,J＝13.1,6.7Hz,
2H),1.70-1.56(m,8H),1.60-1.45(m,4H).
2H),1.70-1.56(m,8H),1.60-1.45(m,4H).
[0163] N-(5-氨基-6-(哌啶-1-基)吡啶-2-基)环己烷甲酰胺(10c)的制备
[0164]
[0165] 参照6a的制备方法，由9c得灰色固体，产率75％。1H-NMR(300MHz,Chloroform-d):δ(ppm):7.74(d,J＝8.3Hz,1H),7.61-7.53(m,1H),6.99(d,J＝8.3Hz,1H),3.65(s,2H),
2.99(t,J＝5.1Hz,4H),2.22(td,J＝11.7,5.8Hz,1H),1.97(d,J＝12.9Hz,2H),1.75-1.64(m,6H),1.62-1.46(m,4H),1.28(d,J＝8.4Hz,2H).
2.99(t,J＝5.1Hz,4H),2.22(td,J＝11.7,5.8Hz,1H),1.97(d,J＝12.9Hz,2H),1.75-1.64(m,6H),1.62-1.46(m,4H),1.28(d,J＝8.4Hz,2H).
[0166] N-(6-(环己烷甲酰胺基)-2-(哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(A-7)的制备
[0167]
[0168] 参照A-5的制备方法，由10c和4反应得白色固体，产率28％。ESI-MS:448.1[M+H]+；1H-NMR(300MHz,Chloroform-d):δ(ppm):10.18(s,1H),8.86-8.80(m,1H),8.78(d,J＝
2.1Hz,1H),8.72(dd,J＝4.2,1.7Hz,1H),7.94(d,J＝8.8Hz,1H),7.64(s,1H),7.26(s,1H),
7.06(dd,J＝7.0,4.1Hz,1H),3.01(t,J＝5.3Hz,4H),2.26(s,1H),2.11-1.87(m,6H),0.96-
0.57(m,10H).
2.1Hz,1H),8.72(dd,J＝4.2,1.7Hz,1H),7.94(d,J＝8.8Hz,1H),7.64(s,1H),7.26(s,1H),
7.06(dd,J＝7.0,4.1Hz,1H),3.01(t,J＝5.3Hz,4H),2.26(s,1H),2.11-1.87(m,6H),0.96-
0.57(m,10H).
[0169] 实施例8
[0170] N-(5-硝基-6-(哌啶-1-基)吡啶-2-基)苯甲酰胺(9d)的制备
[0171]
[0172] 参照5c的制备方法，由8和苯甲酰氯反应得黄色固体，产率74％。1H-NMR(300MHz,Chloroform-d):δ(ppm):8.47(s,1H),8.27(dd,J＝8.8,1.8Hz,1H),8.01-7.82(m,2H),7.74(dd,J＝8.9,1.8Hz,1H),7.60-7.40(m,3H),3.37(t,J＝4.2Hz,4H),1.67(s,6H).[0173] N-(5-氨基-6-(哌啶-1-基)吡啶-2-基)苯甲酰胺(10d)的制备
[0174]
[0175] 参照6a的制备方法，由9d得灰色固体，产率65％。1H-NMR(300MHz,Chloroform-d):δ(ppm):8.28(s,1H),8.09-7.73(m,3H),7.70-7.39(m,3H),7.04(dd,J＝10.4,5.1Hz,1H),
5.45(s,2H),3.18-2.97(m,4H),1.60(s,6H).
5.45(s,2H),3.18-2.97(m,4H),1.60(s,6H).
[0176] N-(6-苯甲酰氨基-2-(哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(A-8)的制备
[0177]
[0178] 参照A-5的制备方法，由10d和4反应得白色固体，产率28％。ESI-MS:442.2[M+H]+；1H-NMR(300MHz,Chloroform-d):δ(ppm):10.38(s,1H),9.05-8.87(m,3H),8.50(s,1H),
8.25(d,J＝8.7Hz,1H),8.12-8.07(m,1H),8.01-7.93(m,2H),7.69-7.58(m,4H),3.19(t,J＝5.4Hz,4H),1.40(s,6H).
8.25(d,J＝8.7Hz,1H),8.12-8.07(m,1H),8.01-7.93(m,2H),7.69-7.58(m,4H),3.19(t,J＝5.4Hz,4H),1.40(s,6H).
[0179] 实施例9
[0180] 6-氯-2-(哌啶-1-基)吡啶-3-胺(11a)的制备
[0181]
[0182] 参照6a的制备方法，由7a得灰色固体，产率78％。1H-NMR(300MHz,Chloroform-d):δ(ppm):6.85(d,J＝7.9Hz,1H),6.57(d,J＝8.1Hz,1H),4.28(s,2H),3.13-3.06(m,4H),
1.67-1.57(m,6H).
1.67-1.57(m,6H).
[0183] N-(6-氯-2-(哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(A-9)的制备[0184]
[0185] 参照A-5的制备方法，由11a和4反应得白色固体，产率36％。ESI-MS:357.0[M+H]+；1
H-NMR(300MHz,Chloroform-d):δ(ppm):10.22(s,1H),8.86-8.75(m,2H),8.75-8.66(m,
2H),7.11-6.96(m,2H),3.03(t,J＝5.4Hz,4H),1.75(q,J＝5.5Hz,4H),0.87(dt,J＝24.9,
7.3Hz,2H).
H-NMR(300MHz,Chloroform-d):δ(ppm):10.22(s,1H),8.86-8.75(m,2H),8.75-8.66(m,
2H),7.11-6.96(m,2H),3.03(t,J＝5.4Hz,4H),1.75(q,J＝5.5Hz,4H),0.87(dt,J＝24.9,
7.3Hz,2H).
[0186] 实施例10
[0187] 1-(6-氯-3-硝基吡啶-2-基)哌啶-4-甲酰胺(7b)的制备
[0188]
[0189] 将2,6-二氯-3-硝基吡啶(1.0g,5.2mmol)和哌啶-4-甲酰胺(0.7g,5.5mmol)加入10mL无水乙醇中，在冰浴下慢慢加入碳酸钾(0.7g,5.0mmol)，室温下搅拌6h，乙酸乙酯萃取，无水MgSO4干燥，过滤，旋干溶剂，柱层析纯化得黄色固体1.1g，产率74％。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):δ(ppm):8.12(d,J＝8.3Hz,1H),6.71(d,J＝8.3Hz,1H),5.46(d,J＝
32.0Hz,2H),3.90(d,J＝13.6Hz,2H),3.24-3.06(m,2H),2.57-2.37(m,1H),2.13-1.74(m,
4H).
32.0Hz,2H),3.90(d,J＝13.6Hz,2H),3.24-3.06(m,2H),2.57-2.37(m,1H),2.13-1.74(m,
4H).
[0190] 1-(3-氨基-6-氯吡啶-2-基)哌啶-4-甲酰胺(11b)的制备
[0191]
[0192] 参照6a的制备方法，由7b得灰色固体，产率58％。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):δ(ppm):7.22(s,1H),6.92(d,J＝8.1Hz,1H),6.76(d,J＝8.1Hz,1H),6.69(s,1H),4.84(s,2H),3.32(s,4H),2.15(q,J＝7.3Hz,1H),1.70(dd,J＝7.8,3.6Hz,4H).
[0193] N-(2-(4-氨基甲酰基哌啶-1-基)-6-氯吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(A-10)的制备
[0194]
[0195] 参照A-5的制备方法，由11b和4反应得白色固体，产率25％。ESI-MS:400.1[M+H]+；1H-NMR(300MHz,Chloroform-d):δ(ppm):10.71(s,1H),9.40(dd,J＝4.3,1.7Hz,1H),9.15(d,J＝8.5Hz,1H),9.07-8.92(m,2H),7.46(s,2H),5.77(s,1H),5.55(s,1H),3.52(d,J＝
11.7Hz,2H),3.14(t,J＝11.4Hz,2H),2.16(s,1H),1.64(q,J＝7.5Hz,4H).
11.7Hz,2H),3.14(t,J＝11.4Hz,2H),2.16(s,1H),1.64(q,J＝7.5Hz,4H).
[0196] 实施例11
[0197] 2-(哌啶-1-基)吡啶-3-胺(12a)的制备
[0198]
[0199] 将7a(0.5g,2.1mmol)和10％钯碳(0.2g,0.2mmol)加入10mL甲醇中，H2保护，室温反应过夜，抽滤，乙酸乙酯萃取，无水MgSO4干燥，过滤，旋干溶剂，柱层析纯化得灰白色固体0.3g，产率82％。1H-NMR(300MHz,Chloroform-d):δ(ppm):8.02(dd,J＝5.1,1.2Hz,1H),
6.78(dd,J＝8.0,1.3Hz,1H),6.68(dd,J＝8.1,4.9Hz,1H),4.58(s,2H),3.12-3.06(m,4H),
1.67-1.57(m,6H).
6.78(dd,J＝8.0,1.3Hz,1H),6.68(dd,J＝8.1,4.9Hz,1H),4.58(s,2H),3.12-3.06(m,4H),
1.67-1.57(m,6H).
[0200] N-(2-(哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(A-11)的制备[0201]
[0202] 参照A-5的制备方法，由12a和4反应得白色固体，产率35％。ESI-MS:323.1[M+H]+；1H-NMR(300MHz,Chloroform-d):δ(ppm):10.44(s,1H),8.87(dt,J＝7.9,1.8Hz,2H),8.81(s,1H),8.78(dd,J＝4.2,1.8Hz,1H),8.12(dd,J＝4.8,1.7Hz,1H),7.20-7.02(m,2H),
3.19-2.97(m,4H),1.84(p,J＝5.6Hz,4H),1.27(q,J＝4.1Hz,2H).
3.19-2.97(m,4H),1.84(p,J＝5.6Hz,4H),1.27(q,J＝4.1Hz,2H).
[0203] 实施例12
[0204] 1-(3-氨基吡啶-2-基)哌啶-4-甲酰胺(12b)的制备
[0205]
[0206] 参照12a的制备方法，由7b得灰色固体，产率62％。1H-NMR(300MHz,Chloroform-d):δ(ppm):7.53(s,1H),7.27(s,1H),6.92(s,1H),6.76(s,2H),4.75(s,2H),3.49(d,J＝49.5Hz,4H),2.56(s,4H),2.21(s,1H).
[0207] N-(2-(4-氨基甲酰基哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(A-12)的制备
[0208]
[0209] 参照A-5的制备方法，由12b和4反应得白色固体，产率25％。ESI-MS:366.0[M+H]+；1H-NMR(300MHz,Chloroform-d):δ(ppm):10.66(s,1H),9.24(dd,J＝4.2,1.7Hz,1H),9.00(dd,J＝8.1,1.7Hz,1H),8.93-8.60(m,2H)，8.12(dd,J＝4.8,1.7Hz,1H),7.15(dt,J＝8.1,
4.6Hz,2H),5.61(d,J＝6.0Hz,1H),5.44(s,1H),3.35(d,J＝11.7Hz,2H),2.97(t,J＝
11.6Hz,2H),2.38(s,1H),1.64(d,J＝7.2Hz,4H).
4.6Hz,2H),5.61(d,J＝6.0Hz,1H),5.44(s,1H),3.35(d,J＝11.7Hz,2H),2.97(t,J＝
11.6Hz,2H),2.38(s,1H),1.64(d,J＝7.2Hz,4H).
[0210] 实施例13
[0211] (Z)-3-氨基-4,4,4-三氯-2-氰基丁-2-烯酸甲酯(13)的制备
[0212]
[0213] 将氰乙酸甲酯(4.5mL,50.9mmol)和三氯乙腈(9.6mL,95.7mmol)加至100mL无水乙醇中，在冰浴条件下慢慢滴加三乙胺(7.0mL,50.5mmol)，室温下反应过夜，乙酸乙酯萃取，无水MgSO4干燥，过滤，旋干溶剂，柱层析纯化得白色固体10.5g，产率85％。1HNMR(300MHz,Chloroform-d):δ(ppm):11.19(s,1H),8.26(s,1H),2.31(s,3H).
[0214] 3,5-二氨基-1H-吡唑-4-羧酸甲酯(14)的制备
[0215]
[0216] 将13(5.0g,20.5mmol)加入40mL DMF中，缓慢加入80％水合肼(3.1mL,51.1mmol)，加热至100℃，反应10h，冷却，乙酸乙酯萃取，无水MgSO4干燥，过滤，旋干溶剂，柱层析纯化得白色固体1.5g，产率47％。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ(ppm):11.52(s,1H),5.41(s,4H),3.65(td,J＝6.0,5.3,2.3Hz,3H).
[0217] 2-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酸甲酯(15)的制备
[0218]
[0219] 将14(5.0g,32.0mmol)加入20mL的2M HCl水溶液中，加热至55℃，缓慢加入1,1,3,3-四甲氧基丙烷(4.8mL,29.1mmol)，反应4h，乙酸乙酯萃取，无水MgSO4干燥，过滤，旋干溶剂，柱层析纯化得白色固体4.5g，产率73％。1H NMR(300MHz,Chloroform-d):δ(ppm):9.12(dd,J＝7.5,1.5Hz,1H),9.00(dd,J＝7.5,1.5Hz,1H),7.00(t,J＝7.5Hz,1H),5.80(s,2H),
3.95(s,3H).
3.95(s,3H).
[0220] 2-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-羧酸(16)的制备
[0221]
[0222] 参照4的制备方法，由15反应得黄色固体，产率90％。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):δ(ppm):12.05(s,1H),8.83(dd,J＝6.7,1.8Hz,1H),8.47(dd,J＝4.4,1.8Hz,1H),6.98(dd,J＝6.7,4.4Hz,1H),6.39(s,2H).
[0223] N-(6-乙酰氨基吡啶-3-基)-2-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(A-13)的制备[0224]
[0225] 将16(0.1g,0.6mmol)和三乙胺(0.08mL,0.6mmol)加入5mL无水二氯甲烷中，缓慢滴加氯化亚砜(0.09mL,1.2mmol)，室温下反应4h，旋干，溶于5mL无水四氢呋喃，滴加至溶有6a(0.09g,0.6mmol)和K3PO4(0.4g,1.8mmol)的四氢呋喃中，室温反应过夜，旋干，乙酸乙酯萃取，无水MgSO4干燥，过滤，旋干，柱层析分离得白色固体0.04g，产率23％。ESI-MS:297.1[M+H]+；1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):δ(ppm):9.08(dd,J＝7.5,1.5Hz,1H),8.96(dd,J＝7.5,
1.5Hz,1H),8.85(s,1H),8.60(d,J＝1.1Hz,1H),8.48-8.39(m,2H),7.78(s,1H),7.00(t,J＝7.5Hz,1H),5.80(s,2H),2.16(s,3H).
1.5Hz,1H),8.85(s,1H),8.60(d,J＝1.1Hz,1H),8.48-8.39(m,2H),7.78(s,1H),7.00(t,J＝7.5Hz,1H),5.80(s,2H),2.16(s,3H).
[0226] 实施例14
[0227] 2-氨基-N-(6-(环己烷甲酰氨基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(A-14)的制备
[0228]
[0229] 参照A-13的制备方法，由16和6c反应得灰色固体，产率30％。ESI-MS:469.1[M+H]+；1H-NMR(300MHz,Chloroform-d):δ(ppm):9.71(s,1H),8.66(d,J＝2.5Hz,1H),8.51(t,J＝4.6Hz,2H),8.27(d,J＝8.9Hz,1H),8.11(d,J＝9.0Hz,1H),7.94(s,1H),6.89(s,1H),5.76(s,2H),2.27(d,J＝11.5Hz,1H),2.01(d,J＝13.1Hz,2H),1.86(s,2H),1.39-1.20(m,
6H).
6H).
[0230] 实施例15
[0231] 2-氨基-N-(6-苯甲酰氨基吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(A-15)的制备
[0232]
[0233] 参照A-13的制备方法，由16和6d反应得灰色固体，产率30％。ESI-MS:469.1[M+H]+；1H-NMR(300MHz,Chloroform-d):δ(ppm):9.77(s,1H),8.70(d,J＝10.2Hz,2H),8.56-8.49(m,1H),8.45(d,J＝8.9Hz,1H),8.20(d,J＝9.3Hz,1H),7.97(d,J＝7.6Hz,2H),7.55(dq,J＝15.1,8.0,7.5Hz,4H),6.90(t,J＝5.6Hz,1H),5.78(s,2H).
[0234] 实施例16
[0235] N-(6-乙酰氨基-2-(哌啶-1-基)吡啶-3-基)-2-氨基吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(A-16)的制备
[0236]
[0237] 参照A-13的制备方法，由16和10a反应得灰色固体，产率30％。ESI-MS:469.1[M+H]+；1H-NMR(300MHz,Chloroform-d):δ(ppm):10.04(s,1H),8.73(d,J＝8.6Hz,1H),8.58-8.43(m,2H),7.94-7.73(m,2H),6.87(dd,J＝6.7,4.4Hz,1H),5.86(s,2H),3.01(t,J＝
5.3Hz,4H),2.21(s,3H),1.79(t,J＝5.6Hz,4H),1.62(td,J＝7.0,6.5,3.1Hz,2H).[0238] 实施例17
5.3Hz,4H),2.21(s,3H),1.79(t,J＝5.6Hz,4H),1.62(td,J＝7.0,6.5,3.1Hz,2H).[0238] 实施例17
[0239] 2-氨基-N-(6-(环己烷甲酰氨基)-2-(哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(A-17)的制备
[0240]
[0241] 参照A-13的制备方法，由16和10c反应得灰色固体，产率30％。ESI-MS:469.1[M+H]+；1H-NMR(300MHz,Chloroform-d):δ(ppm):10.06(s,1H),8.74(d,J＝8.7Hz,1H),8.51(dt,J＝6.3,2.0Hz,2H),7.94(d,J＝8.8Hz,1H),7.68(s,1H),6.87(dd,J＝6.6,4.5Hz,1H),5.84(s,2H),3.02(t,J＝5.4Hz,4H),2.25(d,J＝11.9Hz,1H),2.00(d,J＝12.9Hz,2H),1.82(dt,J＝9.9,3.7Hz,4H),1.64(d,J＝4.6Hz,4H),1.54(d,J＝11.6Hz,2H),1.39-1.26(m,4H).[0242] 实施例18
[0243] 2-氨基-N-(6-苯甲酰氨基-2-(哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(A-18)的制备
[0244]
[0245] 参照A-13的制备方法，由16和10d反应得白色固体，产率30％。ESI-MS:469.1[M+H+ 1] ；H-NMR(300MHz,Chloroform-d):δ(ppm):10.10(s,1H),8.82(d,J＝8.7Hz,1H),8.51(d,J＝5.6Hz,2H),8.35(s,1H),8.10(d,J＝8.7Hz,1H),8.03-7.91(m,2H),7.66-7.47(m,3H),
6.94-6.81(m,1H),5.83(s,2H),3.16-2.98(m,4H),1.81(d,J＝5.7Hz,2H),1.65(s,4H).[0246] 实施例19
6.94-6.81(m,1H),5.83(s,2H),3.16-2.98(m,4H),1.81(d,J＝5.7Hz,2H),1.65(s,4H).[0246] 实施例19
[0247] 2-氨基-N-(6-氯-2-(哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(A-19)的制备
[0248]
[0249] 参照A-13的制备方法，由16和11a反应得白色固体，产率30％。ESI-MS:469.1[M+H]+；1H-NMR(300MHz,Chloroform-d):δ(ppm):10.12(s,1H),8.76(d,J＝8.4Hz,1H),8.58-8.46(m,2H),7.05(d,J＝8.4Hz,1H),6.96-6.85(m,1H),5.80(s,2H),3.14-3.05(m,4H),
1.86-1.76(m,4H),1.65(d,J＝3.7Hz,2H).
1.86-1.76(m,4H),1.65(d,J＝3.7Hz,2H).
[0250] 实施例20
[0251] 2-氨基-N-(2-(4-氨基甲酰基哌啶-1-基)-6-氯吡啶-3-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-甲酰胺(A-20)的制备
[0252]
[0253] 参照A-13的制备方法，由16和11b反应得白色固体，产率30％。ESI-MS:469.1[M+H]+；1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):δ(ppm):9.25(s,1H),9.17(ddd,J＝22.6,7.5,1.6Hz,2H),8.41(d,J＝8.1Hz,1H),7.00(t,J＝7.5Hz,1H),6.91(d,J＝8.1Hz,1H),5.80(d,J＝3.6Hz,
4H),4.31(dt,J＝12.6,7.1Hz,2H),3.76(dt,J＝12.4,7.1Hz,2H),2.54(p,J＝7.0Hz,1H),
2.17(dq,J＝14.0,7.1Hz,2H),1.87-1.76(m,2H).
4H),4.31(dt,J＝12.6,7.1Hz,2H),3.76(dt,J＝12.4,7.1Hz,2H),2.54(p,J＝7.0Hz,1H),
2.17(dq,J＝14.0,7.1Hz,2H),1.87-1.76(m,2H).
[0254] 实施例21
[0255] IRAK4激酶活性测试
[0256] 采用放射性同位素P33-ATP标记方法检测本发明化合物以及(R)-1-[3-[[5-(4-苯氧基苯甲酰基)-6-氨基嘧啶-4-基]氨基]哌啶-1-基]-2-丙烯-1-酮(化合物b)对BTK激酶的抑制活性。放射性同位素检测方法的灵敏度很高，测试结果非常准确，因此被认为是蛋白激酶生化活性检测的“金标准”。
[0257] 具体由Reaction Biology Corp(Malvem PA)公司通过HotSpot法测试。首先将8nM人类IRAK4激酶和肽底物在缓冲液中(20mM Hepes pH7.5,10mM MgCl2,1mM EGTA,0.02％Brij35,0.02mg/ml BSA,0.1mM Na3VO4,2mM DTT,1％DMSO)室温下混合，然后化合物溶解于指示剂量的100％DMSO中(从10μM不断稀释3倍)并通过Acoustic技术(Echo550；nanoliter range)递送到激酶反应的混合液中，接着室温下保持20min。随后加入10μM的33P-ATP(specifical activity 10μCi/μl)，反应开始，监测反应120min。激酶活性通过filter-binding法测定，IC50值和曲线拟合由Prism(GraphPad Software)实现。
[0258] 实验结果如表1所示。其中符号“+++”表示化合物的IC50≤1μM；符号“++”表示化合物的1μM≤IC50≤10μM；符号“+”表示化合物的IC50＞10μM。
[0259] 表1本发明化合物对IRAK4的抑制活性
[0260]
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