白介素-21在制备干细胞样记忆T细胞体外扩增诱导剂中的应用
专利汇可以提供白介素-21在制备干细胞样记忆T细胞体外扩增诱导剂中的应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 公开了白介素-21在制备干细胞样记忆T细胞体外扩增诱导剂中的应用， 发明人 发现在T细胞诱导培养基中添加白介素-21作为诱导剂，可以诱导Naïve CD8+ T细胞分化扩增为TSCM细胞，TSCM细胞的形成比例和绝对数显著提高，并且显著优于细胞过继免疫 治疗 通用的诱导剂IL-2。此外，白介素-21是一种 机体 天然分泌的细胞因子，安全性高，不存在药物毒性等问题，能为过继免疫治疗的广泛开展提供了良好的技术支持，具有重要的推广意义。，下面是白介素-21在制备干细胞样记忆T细胞体外扩增诱导剂中的应用专利的具体信息内容。
1.白介素-21在制备干细胞样记忆T细胞体外扩增诱导剂中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的干细胞样记忆T细胞为CD8+ T细胞的亚群。
3.干细胞样记忆T细胞体外扩增的方法，其步骤包括：
（1）将分选获得的Naïve CD8+ T细胞置于添加有Anti-CD3抗体、Anti-CD28抗体的T细胞培养液中培养；
（2）在培养液中加入诱导剂白介素-21进行诱导培养；
+
（3）诱导培养完成后，分选出需要的CD8 TSCM。
4.根据权利要求3所述的干细胞样记忆T细胞体外扩增方法，其特征在于，每3天补充一次Anti-CD3抗体、Anti-CD28抗体和白介素-21，培养时长为14天。
5.根据权利要求3、4所述的干细胞样记忆T细胞体外扩增方法，其特征在于，白介素-21在培养液中的终浓度为5～40ng/mL。
6.根据权利要求3、4所述的干细胞样记忆T细胞体外扩增方法，其特征在于，白介素-21在培养液中的终浓度为20ng/mL。
7.根据权利要求3～6任意一项所述的干细胞样记忆T细胞体外扩增方法，其特征在于，Anti-CD3抗体、Anti-CD28抗体在培养液中的终浓度均为1μg/mL。
白介素-21在制备干细胞样记忆T细胞体外扩增诱导剂中的
应用
技术领域
背景技术
发明内容
（1）将分选获得的Naïve CD8+ T细胞置于添加有1μg/mL (终浓度) Anti-CD3抗体、1μg/mL (终浓度) Anti-CD28抗体的T细胞培养液中培养；
（2）在培养液中加入诱导剂白介素-21进行诱导培养，每3天补充一次Anti-CD3抗体、Anti-CD28抗体和白介素-21；
（3）诱导培养完成后，分选出需要的CD8+ TSCM。
图2：IL-21浓度在5～40ng/mL时，CD8 TSCM绝对数逐步增加，其中IL-21的终浓度为
20ng/mL时最适；
图3：10ng/mL IL-2和20ng/mL IL-21分别扩增CD8+ TSCM的流式细胞对比图；
图4：20ng/mL IL-21扩增CD8+ TSCM的形成比例显著高于10ng/mL IL-2的形成比例，图中NC为仅用Anti-CD3/28激活的处理组，UD(Undetected)表示未能检测到有效信号，细胞大部分凋亡。
具体实施方式
（2）随后进行5种不同的处理，每组分别添加终浓度为0、5、10、20、40ng/mL的IL-21，每种处理设置三个复孔作为平行对照，并在细胞培养的第4、7、10、13天施加相应浓度的Anti-CD3抗体、Anti-CD28抗体和IL-21；
（3）细胞培养14天后，运用流式细胞仪检测。采用CD8、CD45RA、CD45RO、CD62L、CCR7、CD122、CD95等7个表面分子对 CD8+ T 细胞中的TSCM进行细胞群确定。首先，依次圈定淋巴细胞群和 CD8+ T细胞；然后，依次圈定 naïve表型的表面分子：CD45RA+、CD45RO-、CD62L+、CCR7+；最后，圈定记忆表型的表面分子：CD122+、CD95+。对照组与实验组均为同一供体的CD8+ T细胞，每个时间点分别取不同供体的细胞进行检测。
（2）随后进行3种不同的处理，NC组为不做任何处理，IL-2组添加终浓度为10ng/mL 的IL-2，IL-21组添加终浓度为20ng/mL 的IL-21，每种处理设置三个复孔作为平行对照，并在细胞培养的第4、7、10、13天施加相应浓度的Anti-CD3抗体、Anti-CD28抗体和诱导剂(IL-2或IL-21)；
（3）细胞培养14天后，运用流式细胞仪检测。采用CD8、CD45RA、CD45RO、CD62L、CCR7、CD122、CD95等7个表面分子对 CD8+ T 细胞中的TSCM进行细胞群确定。首先，依次圈定淋巴细胞群和 CD8+ T细胞；然后，依次圈定 naïve表型的表面分子：CD45RA+CD45RO-、CD62L+CCR7+；最后，圈定记忆表型的表面分子：CD122+CD95+。对照组与实验组均为同一供体的CD8+ T细胞，每个时间点分别取不同供体的细胞进行检测。
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