专利汇可以提供海水藻蓝蛋白的制备方法专利检索,专利查询,专利分析的服务。并且本 发明 涉及以 海 水 螺旋藻为原料提取藻蓝蛋白的制备方法。目前所报道的藻蓝蛋白的制备方法,均采用低 盐度 的 淡水 培养基培养螺旋藻,经反复冻融 破碎 细胞后,用冷冻高速离心方法进行固液分离, 硫酸 铵盐析、0-4℃ 透析 、上色譜柱、多次梯度洗脱、洗脱液用硫酸铵盐析、0-4℃透析、低温 冷冻干燥 等工艺,虽然能达到高纯度,但工艺路线长、大部分过程需在低温下进行、提取周期长,因而成本高、效率低,生产应用价值不高。本发明的目的是通过 海水 培养螺旋藻,以此为原料大量、低成本提取较高纯度的藻蓝蛋白,应用于天然色素、保健食品和海洋新药的研究开发,本方法具有原料特殊、工艺简单、提取率高,和成本低的特点。,下面是海水藻蓝蛋白的制备方法专利的具体信息内容。
1、一种海水藻蓝蛋白的制备方法,其特征在于采用海水或人工海水为培养基培 养螺旋藻藻种,并在制备过程中采用超滤浓缩,添加稳定剂、和向提取液直 接浸泡色谱材料,整个工艺过程在较高温度下进行,其具体步骤包括如下:
1)、采收藻体,冲洗,干燥,将海水螺旋藻干品加入含有食用稳定剂、糖类、 无机盐类、pH调节剂保护成分的水溶液中;
2)、1)中混合液在0-50℃条件下搅拌提取,去除残渣,得藻蓝蛋白粗提物 上清液;
3)、2)中藻蓝蛋白粗提物上清液的纯化由下列A、B两步进行,A、B两 步可颠倒顺序进行:
A、粗提物上清液经超滤脱盐浓缩后,向提取物中直接加入用0.015-0.05M 磷酸缓冲溶液平衡过的色谱分离材料,使溶液的浓度和pH参数刚好使C-藻 蓝蛋白不被吸附,搅拌,去除羟基磷灰石;
B、提取液加入硫酸铵搅拌,使藻蓝蛋白盐析沉淀,离心收集藻蓝蛋白沉淀, 超滤脱盐;
4)、所得脱盐溶液进一步超滤浓缩,得藻蓝蛋白液态制品;将浓缩液低温冷 冻干燥或喷雾干燥,得藻蓝蛋白固体制品。
5)、藻蓝蛋白固体产品的进一步纯化,上述步骤(3)完成后所收集的藻蓝 蛋白溶液可继续采用类似上述(3)的方法进行纯化:加入用0.001-0.01M 磷缓冲溶液平衡过的羟基磷灰石混合,然后去除上清液,收集色谱材料, 加入0.015-0.05M磷酸缓冲溶液浸泡,所得的藻蓝蛋白的纯度可接近或达 到生化试剂标准。
2、根据权利要求1中所述的海水藻蓝蛋白的制备方法,其特征在于所述的稳 定剂为水扬酸、苯甲酸钠、或山梨酸钾。
3、根据权利要求1中所述的海水藻蓝蛋白的制备方法,其特征在于所述的 0.015-0.05M磷酸缓冲溶液是pH6-7,含0.1-0.5MNaCl的磷酸缓冲溶液。
4、根据权利要求1中所述的海水藻蓝蛋白的制备方法,其特征在于所述的色 谱分离材料是羟基磷灰石。
5、根据权利要求1中所述的海水藻蓝蛋白的制备方法,其特征在于所述的藻 蓝蛋白固体产品,干燥前可加入安全无毒的糖类、盐类成分作为稳定剂。
6、根据权利要求1中所述的海水藻蓝蛋白的制备方法,其特征在于本方法还 可用于特殊离子富集藻蓝蛋白的制备,这些离子可以通过在海水螺旋藻培 养基中添加它们的无机态成分,通过螺旋藻的生物富集作用,与藻蓝蛋白有 机结合。
7、根据权利要求1或6中所述的海水藻蓝蛋白的制备方法,其特征在于特殊 离子富集藻蓝蛋白是硒化藻蓝蛋白、富铁藻蓝蛋白或富锌藻蓝蛋白。
8、根据权利要求1中所述的海水藻蓝蛋白的制备方法,其特征在于海水螺旋 藻是指将淡水培养基培养的螺旋藻属中藻类进行驯化,其驯化方法为:通 过逐步增加螺旋藻的盐度,先用NaCl驯化,盐度每次增加幅度为3-5‰, 待藻细胞生长正常后,再次添加,直至达到天然海水盐度30-35‰,或更高 盐度35-80‰然后逐步用粗盐取代NaCl,并逐步减少Ca、Mg、K离子的用 量,最后用天然海水取代粗盐,完成海水驯化过程。
技术背景
海水螺旋藻(Spirulina,seawater strain)是蓝藻门(Cyanophyta)、段殖藻目 (Homogoneles)、颤藻科(Oscillatoniaceae)、螺旋藻属(Spirulina)或节旋藻 属的海水培养品系,我国已在国际上率先实现产业化养殖。通过对海水胁迫 条件的适应,海水螺旋藻中的藻蓝蛋白含量、稳定性和生物学活性得以明 显提高。
目前所报道的藻蓝蛋白的制备方法,均采用低盐度的淡水培养基培养所得的 螺旋藻为原料,未见有用海水或人工海水为培养基的报道;另外现有的藻蓝蛋 白的制备方法,见“中国科学(C缉)“第30卷、第5期PP449-454中所报道 的藻细胞通过反复冻融破碎细胞、冷冻高速离心方法进行固液分离,硫酸铵盐 析、0-4℃透析、上色譜柱、多次梯度洗脱、洗脱液用硫酸铵盐析、0-4℃透 析、低温冷冻干燥等,虽然能达到高纯度,但工艺路线长、大部分过程需在低 温下进行、提取周期在一个星期左右,因而成本高、效率低,生产应用价值不 高。
本发明的目的是通过海水培养螺旋藻,以此为原料大量、低成本提取较高纯 度的藻蓝蛋白,应用于天然色素、保健食品和海洋新药的研究开发。
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