本发明提供组合物,其包含(i)至少一种免疫治疗剂,其选自一种或一种以上癌抗 原、一种或一种以上源自与癌症相关的病毒的抗原、一种或一种以上抗癌抗体和抗癌抗 体的一种或一种以上抗独特型抗体;和(ii)一种或一种以上选自式(I)、(II)、(III)、 (IV)和(V)的化合物和/或其医药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物、立体异构体、 非晶形固体,或其任何组合。所述化合物在下文详细描述。所述组合物可为治疗剂,即, 投予化合物来治疗即存的癌症,或阻止癌症的复发;或所述组合物可为预防剂,即,投 予化合物以阻止或延缓癌症的发展。当治疗性地使用组合物时,将其投予癌症患者并用 于引发免疫反应,从而通过阻止或减缓即存癌症的生长来稳定肿瘤,阻止肿瘤扩散或转 移扩散,减小肿瘤尺寸,阻止所治疗癌症的复发,或消除早期治疗未杀死的癌细胞。将 用作预防性治疗的组合物投予不患有癌症的个体,并用于引发免疫反应以靶向潜在癌细 胞或靶向源自与癌症相关的病毒的抗原。
本发明的组合物可包括多于一种免疫治疗剂以及另一种免疫治疗剂,例如,癌抗原 与一种或一种以上源自与癌症相关的病毒的抗原、一种或一种以上抗癌抗体和抗癌抗体 的一种或一种以上抗独特型抗体组合。组合物的另一
实施例可包括一种或一种以上癌抗 原和抗癌抗体和/或抗癌抗体的抗独特型抗体。组合物的其它实施例可包括抗癌抗体和抗 癌抗体的抗独特型抗体。另一实施例可包括一种或一种以上源自与癌症相关的病毒的抗 原和抗癌抗体和/或抗癌抗体的抗独特型抗体。
4.1癌抗原
医药组合物的免疫治疗剂之一可为一种或一种以上癌抗原。癌抗原是(a)可在恶 性细胞上发现的细胞表面抗原,(b)可在恶性细胞内部发现的抗原或(c)肿瘤细胞生 长的介体。
术语“癌抗原”指的是(i)肿瘤特异性抗原、(ii)肿瘤相关抗原、(iii)表达肿瘤 特异性抗原的细胞、(iv)表达肿瘤相关抗原的细胞、(v)肿瘤上的胚胎抗原、(vi)自 体性肿瘤细胞、(vii)肿瘤特异性膜抗原、(viii)肿瘤相关膜抗原、(ix)生长因子受体、 (x)生长因子配位体和(xi)任何其它类型的抗原或提供抗原的细胞或与癌症相关的物 质。
癌抗原可为此项技术中已知的任何类型的癌抗原。癌抗原可为上皮癌抗原(例如, 乳腺、胃肠、
肺)、前列腺特异性癌抗原(PSA)或前列腺特异性膜抗原(PSMA)、膀 胱癌抗原、肺(例如,小细胞肺)癌抗原、结肠癌抗原、卵巢癌抗原、脑癌抗原、胃癌 抗原、肾细胞癌抗原、胰腺癌抗原、肝癌抗原、食道癌抗原、头颈部癌抗原或结肠直肠 癌抗原。
在另一实施例中,癌抗原为淋巴瘤抗原(例如,非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin′s lymphoma)或霍奇金氏淋巴瘤(Hodgkin′s lymphoma))、B细胞淋巴瘤癌抗原、白血病 抗原、骨髓瘤(即,多发性骨髓瘤或浆细胞骨髓瘤)抗原、急性淋巴母细胞性白血病抗 原、慢性髓细胞白血病抗原或急性骨髓性白血病抗原。
在另一实施例中,癌抗原为在所有人类腺癌上发现的粘蛋白-1蛋白或肽(MUC-1): 胰腺癌、结肠癌、
乳腺癌、卵巢癌、肺癌、
前列腺癌、头颈部癌,包括多发性骨髓瘤和 一些B细胞淋巴瘤。患有发炎性肠病(克罗恩氏病(Crohn′s disease)或溃疡性结肠炎) 的患者发展结肠直肠癌的风险增多。MUC-1是I型跨膜糖蛋白。MUC-1的主要胞外部 分具有许多由包含免疫原性表位的20种
氨基酸组成的
串联重复。在一些癌症中,其以 由免疫系统识别的未糖基化形式暴露。参看Gendler,S.J.,等人,J.Biol.Chem. 265:15286-15293(1990)。
在另一实施例中,癌抗原为突变B-Raf抗原,其与黑素瘤和结肠癌有关。绝大多数 这些突变都代表在核苷酸1796处的T-A的单核苷酸变化,从而导致在B-Raf的活化区 段内的残基599处缬氨酸变成谷氨酸。Raf蛋白作为活化Ras蛋白的效应物也间接地与 癌症有关,致癌形式的Raf蛋白存在于所有人类癌症的约三分之一中。正常非突变B-Raf 与细胞
信号转导、从细胞膜转播信号到核有关。所述蛋白通常只在需要转播信号时具有 活性。相反,已报导突变体B-Raf始终有活性,从而中断信号转播。Mercer和Pritchard, Biochim Biophys Acta.(2003);1653(1):25-40;Sharkey,等人,Cancer Res.(2004);64(5): 1595-9。
在一实施例中,癌抗原为人类表皮生长因子受体-2(HER-2/neu)抗原。具有过度 表达HER-2/neu的细胞的癌症被称为HER-2/neu+癌症。示范性的HER-2/neu+癌症包括 前列腺癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌、
皮肤癌、肝癌(例如,
肝细胞性腺癌)、 肠癌和膀胱癌。
HER-2/neu具有与表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)具 40%同源性的约645aa的胞外结合域(extracellular binding domain,ECD)、高度疏水性 跨膜锚定域(transmembrane anchor domain,TMD)和与EGFR具80%同源性的约580aa 的羧基末端胞内域(intracellular domain,ICD)。HER-2/neu的核苷酸序列可以下列名称 得到:登录号AH002823(人类HER-2基因,启动子区和外显子1);M16792 (人类HER-2基因,外显子4);M16791(人类HER-2基因,外显子3);M16790(人类 HER-2基因,外显子2);和M16789(人类HER-2基因,启动子区和外显子1)。HER-2/neu 蛋白的氨基酸序列可以登录号AAA58637得到。基于这些序列,所属领域 的技术人员可使用已知分析来开发HER-2/neu抗原,从而发现产生有效免疫反应的适当 表位。示范性的HER-2/neu抗原包括p369-377(HER-2/neu衍生的HLA-A2肽);dHER2 (Corixa Corporation);li-Key MHC II型表位杂合体(Generex Biotechnology Corporation); 肽P4(氨基酸378-398);肽P7(氨基酸610-623);肽P6(氨基酸544-560)和P7的混 合物;肽P4、P6和P7的混合物;HER2[9754];和类似物。
在一实施例中,癌抗原为表皮生长因子受体(EGFR)抗原。EGFR抗原可为EGFR 变异体1抗原、EGFR变异体2抗原、EGFR变异体3抗原和/或EGFR变异体4抗原。 具有过度表达EGFR的细胞的癌症被称为EGFR+癌症。示范性的EGFR+癌症包括肺癌、 头颈部癌、结肠癌、结肠直肠癌、乳腺癌、前列腺癌、胃癌、卵巢癌、脑癌和膀胱癌。
EGFR变异体1的核苷酸序列(mRNA)可由登录号NM_005228得到。 EGFR变异体2的核苷酸序列(mRNA)可由登录号NM_201282得到。EGFR 变异体3的核苷酸序列(mRNA)可由登录号NM_201283得到。EGFR变 异体4的核苷酸序列(mRNA)可由登录号NM_201284得到。示范性的 EGFR抗原包括GI-3001;肽aa 1168-1181;和类似物。
在一实施例中,癌抗原为血管内皮生长因子受体(vascular endothelial growth factor receptor,VEGFR)抗原。VEGFR抗原可为VEGFR变异体1抗原或VEGFR变异体2 抗原。VEGFR变异体1与Flt-1同义。VEGFR变异体2与Flk-1和Kdr(即,插入域蛋 白受体的激酶)同义。VEGFR被认为是癌症诱发的血管生成的调节物。具有过度表达 VEGFR的细胞的癌症被称为VEGFR+癌症。示范性的VEGFR+癌症包括乳腺癌、肺癌、 小细胞肺癌、结肠癌、结肠直肠癌、肾癌、白血病和淋巴细胞白血症。
VEGFR变异体1(Flt-1)的核苷酸序列(DNA)可由登录号D64016 (血管内皮生长因子受体的人类基因,启动子和外显子1)得到。VEGFR变异体2(Flk-1 或Kdr)的核苷酸序列(mRNA)可由登录号AF063658(人类血管内皮生 长因子受体2)得到。
在一实施例中,癌抗原为在雄
激素非依赖性前列腺癌中普遍表达的前列腺特异性抗 原(prostate-specific antigen,PSA)和/或前列腺特异性膜抗原(prostate-specific membrane antigen,PSMA)。
在另一实施例中,癌抗原为Gp-100。糖蛋白100(gp 100)是一种与黑素瘤相关的 肿瘤特异性抗原。
在一实施例中,癌抗原为癌胚(carcinoembryonic,CEA)抗原。具有过度表达CEA 的细胞的癌症被称为CEA+癌症。示范性的CEA+癌症包括结肠直肠癌、胃癌和胰腺癌。 人类癌胚样抗原1的核苷酸序列(mRNA)可由登录号NM_020219得到。 示范性的CEA抗原包括CAP-1(即,CEA aa 571-579)、CAP1-6D、CAP-2(即,CEA aa 555-579)、CAP-3(即,CEA aa 87-89)、CAP-4(CEA aa 1-11)、CAP-5(即,CEA aa 345-354)、 CAP-6(即,CEA aa 19-28)和CAP-7。
在一实施例中,癌抗原为糖抗原10.9(CA 19.9)。CA 19.9是一种与路易斯A血型 物质(Lewis Ablood group substance)有关的寡糖并且与结肠直肠癌有关。
在另一实施例中,癌抗原为黑素瘤癌抗原。黑素瘤癌抗原适用于治疗黑素瘤。示范 性的黑素瘤癌抗原包括MART-1(例如,MART-126-35肽、MART-127-35肽); MART-1/Melan A;pMe117;pMe117/gp100;gp100(例如,gp 100肽280-288、gp 100 肽154-162、gp 100肽457-467);TRP-1;TRP-2;NY-ESO-1;p16;β-索
烃素(beta-catenin); mum-1;和类似物。
在一实施例中,癌抗原为突变体或野生型ras肽。突变体ras肽可为突变体K-ras肽、 突变体N-ras肽和/或突变体H-ras肽。ras蛋白中的突变通常发生在
位置12(例如,精 氨酸或缬氨酸取代甘氨酸)、13(例如,天冬酰胺取代甘氨酸)、61(例如,谷氨酰胺取 代亮氨酸)和/或59。突变体ras肽可用作肺癌抗原、胃肠癌抗原、肝癌抗原、髓细胞癌 抗原(例如,急性白血病、骨髓发育不良)、皮肤癌抗原(例如,黑素瘤、基底细胞、 鳞状细胞)、膀胱癌抗原、结肠癌抗原、结肠直肠癌抗原和肾细胞癌抗原。
在本发明的另一实施例中,癌抗原为突变体和/或野生型p53肽。p53肽可用作结肠 癌抗原、肺癌抗原、乳腺癌抗原、肝细胞癌癌抗原、淋巴瘤癌抗原、前列腺癌抗原、甲 状腺癌抗原、膀胱癌抗原、胰腺癌抗原和卵巢癌抗原。
癌抗原可为细胞、蛋白、肽、融合蛋白、编码肽或蛋白的DNA、编码肽或蛋白的 RNA、糖蛋白、脂蛋白、磷蛋白、糖、脂多糖、脂质、其两种或两种以上的化学连接组 合、其两种或两种以上的融合或其两种或两种以上的混合物。在另一实施例中,癌抗原 为包含约6到约24个氨基酸;约8到约20个氨基酸;约8到约12个氨基酸;约8到 约10个氨基酸;或约12到约20个氨基酸的肽。在一实施例中,癌抗原为具有MHC I 型结合基元或MHC II型结合基元的肽。在另一实施例中,癌抗原包含对应于一种或一 种以上细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)表位的肽。
在另一实施例中,癌抗原为外来同源癌抗原的形式。外来同源癌抗原和其制造方法 在美国
专利第6,942,862号中有所描述。因为许多人类癌抗原自身是蛋白(即,通常由 个体产生而非必定只有癌症才产生的蛋白),所以可能存在免疫耐受性,而且免疫耐受 性代表对抵抗人类癌抗原的有效疫苗接种的障碍。本发明的此方面通过用外来(即,与 个体内的蛋白或肽不一致)但却与个体自身的癌抗原或其部分同源的蛋白或肽使患者免 疫来克服免疫耐受性。“外来”癌抗原可例如由兔子、大鼠、小鼠和猪产生。通常,外 来癌抗原(例如,蛋白或肽)将与靶向的癌抗原具有至少约75%的序列同源性。序列同 源性的意思是在序列中相同位置处的一致氨基酸(即,序列一致性),或在序列中相同 位置处氨基酸的保守取代。保守取代在此项技术中众所周知。实例是异亮氨酸取代亮氨 酸、缬氨酸取代丙氨酸、谷氨酸取代天冬氨酸、苏氨酸取代丝氨酸等。通常,外来癌抗 原(例如,蛋白或肽)将具有约80%、85%、90%、95%或99%的序列同源性。优选的 外来癌抗原(例如,蛋白或肽)是高度同源的那些癌抗原,例如具有约(但小于)100% 的序列同源性。尤其优选的外来癌抗原(例如,蛋白或肽)是上述序列同源性百分比各 自表示序列一致性百分比的那些癌抗原。
4.2源自与癌症相关的病毒的病毒抗原
医药组合物的免疫治疗剂之一可为一种或一种以上源自与癌症相关的病毒的抗原。 已知某些病毒的感染导致不同类型癌症的发展,例如,
人类乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)、
肝炎病毒感染、伊波病毒(Epstein-Barr virus,EBV)、人类疱疹病毒8 (human herpes virus 8,HHV-8)、人类T细胞白血病病毒-1(human T-cell leukemia viras-1, HTLV-1)和人类T细胞白血病病毒-2(human T-cell leukemia virus-2,HTLV-2)。
已感染人类乳头瘤病毒(HPV)或存在感染风险的患者比HPV阴性患者发展子宫 颈癌的风险更高。具有HPV-16、HPV-18、HPV-31、HPV-33和/或HPV-35感染的患者 罹患子
宫颈癌的风险尤其高。可用于本发明的医药组合物和方法中的HPV抗原可为 HPV-16抗原、HPV-18抗原、HPV-31抗原、HPV-33抗原和/或HPV-35抗原;并且优选 为HPV-16抗原和/或HPV-18抗原。HPV-16的基因组在Virology,145:181-185(1985)中 有所描述,而编码HPV-18的DNA序列在美国专利第5,840,306号中有所描述,所述文 献的公开内容以全文引用的方式并入本文中。HPV-16抗原(例如,HPV-16的E1和/或 E2蛋白的血清活性区)在美国专利第6,531,127号中有所描述,而HPV-18抗原(例如, HPV-18的L1和/或L2蛋白的血清活性区)在美国专利第5,840,306号中有所描述,所 述专利的公开内容以引用的方式并入本文中。基于这些参考文献中所述的HPV-16和 HPV-18的序列和抗原,所属领域的技术人员可使用已知分析来开发其它HPV抗原,从 而发现产生有效免疫反应的适当表位。
已感染肝炎病毒感染(诸如B型肝炎(HBV)和/或C型肝炎(HCV)病毒感染) 或存在感染风险的患者比不具有肝炎病毒感染的患者发展肝癌的风险更高。HBV抗原和 HCV抗原可用于本发明的医药组合物和方法中。HBV的完整基因组可由 登录号NC_003977得到,其公开内容并入本文中。HCV的基因组在欧洲专利
申请案第 318216号中有所描述,所述专利申请案的公开内容并入本文中。以引用的方式并入本 文中的PCT/US90/01348公开HCV基因组的克隆体的序列信息、HCV病毒蛋白的氨基 酸序列和对于包含HCV蛋白和其所衍生的肽的HCV疫苗制造和使用所述组合物的方 法。基于这些参考文献中所述的HBV和HCV的序列和抗原,所属领域的技术人员可使 用已知分析来开发其它HBV和/或HCV抗原,从而发现产生有效免疫反应的适当表位。
已感染伊波病毒(EBV)或存在感染风险的患者比EBV阴性患者发展伯基特氏淋 巴瘤(Burkitt′s lymphoma)、鼻咽癌和霍奇金氏病的风险更高。EBV抗原可用于本发明 的医药组合物和方法中。EBV DNA的核苷酸序列例如在美国专利第4,707,358号中有所 描述。基于EBV的这些序列,所属领域的技术人员可使用已知分析来开发EBV抗原, 从而发现产生有效免疫反应的适当表位。本发明的化合物、EBV抗原和免疫刺激化合物 可单独投予或以组合物的形式投予。组合物可呈预防性疫苗(即,用于EBV阴性患者) 或治疗性疫苗(即,用于EBV阳性患者)的形式。
已感染人类疱疹病毒8(HHV-8)或存在感染风险的患者比HHV-8阴性患者发展卡 波西氏肉瘤(Kaposi′s sarcoma)的风险更高。HHV-8抗原可用于本发明的医药组合物和 方法中。HHV-8的核苷酸序列例如由Russo等人的“Nucleotide sequence of the Kaposi sarcoma-associated herpes virus(HHV8),”Proc.Natl.Acad.Sci USA,93:14862-14867 (1996)加以描述。基于HHV-8的已知序列,所属领域的技术人员可使用已知分析来开发 HHV-8抗原,从而发现产生有效免疫反应的适当表位。
已感染人类T细胞白血病病毒-1(HTLV-1)或人类T细胞白血病病毒-2(HTLV-2) 或存在感染风险的患者比HTLV-1或HTLV-2阴性患者发展T细胞白血病的风险更高。 HTLV-1和HTLV-2的序列在此项技术中众所周知并在Wong-Staal F,Gallo RC.Human T-lymphotropic retroviruses.Nature 317:395-403,1985中有所描述。
4.3抗癌抗体
医药组合物的免疫治疗剂之一可为一种或一种以上抗癌抗体,即,一种或一种以上 癌抗原的已产生抗体。示范性的抗癌抗体包括以下抗体:
曲妥珠单抗(trastuzumab)(Genentech的),其用于治疗HER-2/neu 阳性乳腺癌或转移性乳腺癌;
贝伐单抗(bevacizumab)(Genentech的),其用于治疗结肠直肠癌、转 移性结肠直肠癌、乳腺癌、转移性乳腺癌、非小细胞肺癌或肾细胞癌;
利妥昔单抗(rituximab)(Genentech的),其用于治疗非霍奇金氏淋巴 瘤或慢性淋巴细胞白血病;
帕妥珠单抗(pertuzumab)(Genentech的),其用于治疗乳腺癌、前 列腺癌、非小细胞肺癌或卵巢癌;
西妥昔单抗(cetuximab)(ImClone Systems Incorporated的),其可用于 治疗结肠直肠癌、转移性结肠直肠癌、肺癌、头颈部癌、结肠癌、乳腺癌、前列腺癌、 胃癌、卵巢癌、脑癌、胰腺癌、食道癌、肾细胞癌、前列腺癌、子
宫颈癌或膀胱癌;
IMC-1C11(ImClone Systems Incorporated),其用于治疗结肠直肠癌、头颈部癌,以 及其它潜在癌症目标;
托西莫单抗(tositumomab)和托西莫单抗和碘I131(Corixa Corporation的 ),其用于治疗可为CD20阳性、滤泡性的非霍奇金氏淋巴瘤,已转型或未转 型的非霍奇金氏淋巴瘤,所述疾病用利妥昔单抗难以治愈而且在化疗后会复发;
In111替伊莫单抗(ibirtumomab tiuxetan);Y90替伊莫单抗;In111替伊莫单抗和Y90 替伊莫单抗(Biogen Idec的),其用于治疗淋巴瘤或非霍奇金氏淋巴瘤,其 可包括复发性滤泡性淋巴瘤;复发性或难治性、低级或滤泡性非霍奇金氏淋巴瘤;或已 转型B细胞非霍奇金氏淋巴瘤;
EMD 7200(EMD Pharmaceuticals),其用于治疗非小细胞肺癌或子宫颈癌的癌症;
SGN-30(Seattle Genetics的靶向CD30抗原的遗传工程化单克隆抗体)(霍奇金氏 淋巴瘤或非霍奇金氏淋巴瘤);SGN-15(Seattle Genetics的靶向与阿霉素(doxorubicin) 结合的路易斯γ相关抗原的遗传工程化单克隆抗体)(非小细胞肺癌);SGN-40(Seattle Genetics的靶向CD40抗原的人化单克隆抗体)(多发性骨髓瘤或非霍奇金氏淋巴瘤); SGN-35(Seattle Genetics的靶向与奥瑞他汀E(Auristatin E)结合的CD30抗原的遗传 工程化单克隆抗体)(非霍奇金氏淋巴瘤);SGN-17/19(Seattle Genetics的含有与美法 仑(melphalan)前药结合的抗体和酶的融合蛋白)(黑素瘤或转移性黑素瘤)。
抗癌抗体可为抗体的
片段;包含抗体的复合物;或包含抗体的结合物。抗体可视情 况为嵌合的或人化的。
这些抗体中许多抗体的作用机制尚不完全清楚,但经常相信诸如抗体依赖性细胞介 导的细胞毒性(ADCC)的免疫反应的产生是治疗作用的一部分。由具有Fc受体的细胞 上的TLR4连接活化ADCC可增强抗体的抗肿瘤功效。使用抗癌抗体与一种或一种以上 选自式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的化合物的组合将增加免疫反应。
4.4抗独特型抗体
抗原的抗体在抗原结合部位处具有血清学独特结构,称为独特型。可产生原始抗体 的抗体,从而导致产生抗独特型抗体。原始抗体称为Ab1,而抗独特型抗体称为Ab2。 Ab2抗体识别Ab1的抗原结合部位,且因此与原始抗原共享基元或结构类似性。发展到 Ab2上的结合部位的抗体可因此与原始抗原反应。如果原始抗原是癌抗原,那么抗Ab2 抗体可具有治疗作用。
当单独投予时,抗独特型抗体不能对癌抗原产生足够的免疫反应。然而,当抗独特 型抗体与一种或一种以上选自式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的化合物组合用作本 发明的医药组合物或用于本发明的投药方法中时,产生免疫反应。式(I)、(II)、(III)、 (IV)和(V)的佐剂化合物可改善抗独特型抗体的免疫原性或通过中断免疫耐受性为抗 独特型抗体提供产生免疫反应的能
力。另外,本发明的医药组合物也可以减少诱发免疫 反应所必需的抗独特型抗体的量和/或减少诱发所需免疫反应所必需的投药次数。
抗独特型抗体在此项技术中已知。抗独特型抗体可为对上文所述癌抗原作出反应而 产生的抗体或抗癌抗体的抗体。示范性的抗独特型抗体包括105AD7(在美国专利第 6,042,827号中有所描述,所述专利的公开内容以全文引用的方式并入本文中);BEC2 (ImClone Systems Incorporated);IGN301(Igeneon,Aphton Corporation的子公司);和 类似物。抗独特型抗体的产生在此项技术中众所周知且例如在美国专利第6,926,893号 中有所描述,所述专利的公开内容以全文引用的方式并入本文中。
4.5医药组合物的投药方式
医药组合物的投药可通过适合于传递的几种途径来完成。示范性的传递方式包括非 经肠投药,例如皮下注射、经皮、静脉内、肿瘤内、肿瘤周围、鼻内、眼部、肌肉内、 皮内、腹膜内、肺部;和经肠投药,例如经粘膜、透皮、吸入、
阴道内、直肠或口服投 药。
4.6治疗方法
医药组合物提供一种用于刺激或引发或增强受检者个体的免疫反应的方法。尽管本 发明可应用于包括
哺乳动物或
鸟类物种的动物物种的兽医应用,但受检者个体优选为人 类。
受检者个体可能存在发展癌症的风险、经诊断患有癌症、处于癌症治疗期间或处于 癌症治疗后恢复期间。
术语“免疫反应”包括细胞和体液免疫反应,包括刺激细胞因子的产生、刺激免疫 细胞的增殖、刺激免疫细胞的活化或刺激免疫细胞的溶解活性。通过本发明的方法刺激 的免疫反应的实例是细胞因子的分泌,NK细胞的活化,B细胞、T细胞、巨噬细胞、 单核细胞和其它免疫细胞的增殖,以及其它免疫反应。举例来说,为了检测细胞免疫反 应,可使用标准分析来检测抵抗表达抗原的细胞的T细胞效应物活性,例如靶细胞杀死、 巨噬细胞活化、B细胞活化或淋巴因子产生。可以通过使用诸如ELISA的常规方法检测 例如抗原特异性抗体的出现或其效价的增加来测量体液反应。可以通过测量级别转变 (诸如从早期IgM反应转变成后期IgG反应)来确定抗体反应的进展。
如本文中所使用,术语“刺激免疫反应”包括刺激、引发、增加、增强、持续和/ 或改善新免疫反应或先前存在的免疫反应的刺激。因此,“刺激免疫反应”作为免疫疗 法指的是增强治疗功效,增加存活时间,减缓癌性肿瘤的发展或缩小癌性肿瘤的尺寸, 阻止肿瘤扩散或转移扩散,阻止或减缓所治疗癌症的复发,消除早期治疗未杀死的癌细 胞,靶向潜在癌细胞或靶向源自与癌症相关的病毒的抗原。在本发明的方法中,以有效 刺激受检者个体的免疫反应的量,以足以产生有效免疫反应而无不可接受的毒性的剂量 投予免疫治疗剂和选自式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的化合物。如所属领域的技 术人员将了解,免疫反应的量值和反应的维持可具有不同的程度,这将通过具有潜在治 疗性或预防性益处来识别。
为刺激免疫反应,向受检者个体投予(i)至少一种免疫治疗剂,其选自一种或一种 以上癌抗原、一种或一种以上源自与癌症相关的病毒的抗原、抗癌抗体和抗癌抗体的抗 独特型抗体;和(ii)一种或一种以上选自式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的化合物 和/或其医药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物、立体异构体、非晶形固体,或其任何 组合。通常,免疫治疗剂和选自式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的化合物的投予将 呈疫苗的形式或以疫苗方案投予。治疗剂和选自式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的 化合物可大约同时投予受检者个体,或可分开和/或依次投予。“大约同时”包括同时投 予,同时但通过不同投药方式或在身体的不同部位投予,在同一天的不同时间投予,或 在不同日期投予一种或一种以上免疫治疗剂和一种或一种以上选自式(I)、(II)、(III)、 (IV)和(V)的化合物,但是其都是作为整体
给药治疗方案的一部分投予。当分开或依 次投予时,所述一种或一种以上免疫治疗剂和一种或一种以上选自式(I)、(II)、(III)、 (IV)和(V)的化合物是整体治疗方案(诸如治疗性混合物或组合疗法)的一部分。给 药
进程常规上可由所属领域的技术人员来确定,而且可根据用于受检者个体的适当治疗 而变化或
修改。举例来说,免疫治疗剂和式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的化合物 可以单一剂量形式,或以一剂量治疗剂与一剂量式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)化 合物的形式大约同时投予。给药进程可以诸如1到4周时期的规律时间间隔持续,接着 以例如1到3个月的规律时间间隔给药。在另一实施例中,给药进程可以基于“初免” 和“加强”治疗,其中投予免疫治疗剂来初免或刺激CTL的产生,且接着投予另一剂量 的免疫治疗剂与一种或一种以上选自式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的化合物的组 合来加强中和抗体的产生和抗体依赖性细胞细胞毒性。可以通过已知方法评估和监控受 检者个体的免疫反应。
在某些情况下,这些治疗可与适用于治疗癌症或传染性疾病的常规癌症疗法或医药 配方组合使用。这些治疗可以包括外科手术、放射疗法和/或
切除疗法(例如,激光疗法、 红外线疗法和类似疗法)。
癌症疗法包括树突状
细胞疗法、趋化因子、细胞因子、肿瘤
坏死因子(例如,TNF-α)、 化疗剂(例如,腺苷类似物(例如,克拉屈滨(cladribine)、喷司他丁(pentostatin))、 磺酸烷基酯(例如,白消安(busulfan)))、抗肿瘤抗生素(例如,博莱霉素(bleomycin)、 放线菌素D(dactinomycin)、柔红霉素(daunorubicin)、阿霉素(doxorubicin)、表柔比 星(epirubicin)、伊达比星(idarubicin)、米托蒽醌(mitoxantrone)、丝裂霉素(mitomycin))、 氮丙啶(例如,塞替派(thiotepa))、喜树
碱类似物(例如,伊立替康(irinotecan)、拓 朴替康(topotecan))、自念珠藻环肽(cryptophycin)(例如,自念珠藻环肽52、自念珠 藻环肽1)、海兔毒素(dolastatin)(例如,海兔毒素10、海兔毒素15)、烯二炔抗癌药 (例如,埃斯培拉霉素(esperamicin)、刺孢霉素(calicheamicin)、达内霉素(dynemicin)、 新制癌菌素(neocarzinostatin)、新制癌菌素发色团、可达霉素(kedarcidin)、可达霉素 发色团、C-1027发色团和类似物)、表鬼臼素(epipodophyllotoxin)(例如,依托泊苷 (etoposide)、替尼泊苷(teniposide))、叶酸类似物(例如,甲氨喋呤)、美登素类 (maytansinoids)(例如,美登醇(maytansinol)和美登醇类似物)、微管剂(例如,多烯 紫杉醇(docetaxel)、太平洋紫杉醇(paclitaxel)、长春碱(vinblastine)、长春新碱 (vincristine)、长春瑞宾(vinorelbine))、氮芥类(例如,苯丁酸氮芥(chlorambucil)、 环磷酰胺(cyclophosphamide)、雌氮芥(estramustine)、异环磷酰胺(ifosfamide)、氮 芥(mechlorethamine)、美法仑)、亚硝基脲(例如,卡莫司汀(carmustine)、洛莫司汀 (lamustine)、鏈脲佐菌素(streptoxacin))、非典型烷基化剂(例如,六甲密胺(altretamine)、 达卡巴嗪(dacarbazine)、丙卡巴肼(procarbazine)、替莫唑胺(temozolamide))、铂络 合物(例如,卡铂(carboplatin)、
顺铂(cisplatin))、嘌呤类似物(例如,
氟达拉滨 (fludarabine)、巯嘌呤(mercaptopurine)、硫鸟嘌呤(thioguanine))、嘧啶类似物(例如, 卡培他滨(capecitabine)、阿糖胞苷(cytarabine)、脂质体阿糖胞苷(depocyt)、氮尿苷 (floxuridine)、氟尿嘧啶(fluorouracil)、吉西他滨(gemcitabine))、经取代的尿素(例 如,羟基脲)];抗血管生成剂(例如,血管生成抑制素(canstatin)、肌
钙蛋白I(troponin I))、
生物药剂(例如,ZD 1839、维如利金(virulizin)和干扰素(interferon))、抗体和 其片段(例如,抗EGFR、抗HER-2/neu、抗KDR、IMC-C225)、止吐药(例如,劳拉 西泮(lorazepam)、甲
氧氯普胺(metroclopramide)和多潘立
酮(domperidone))、上皮 生长因子
抑制剂(例如,转化生长因子β1)、抗粘剂(例如,达克罗宁(dyclonine)、利 多卡因(lignocaine)、氮拉斯汀(azelastine)、谷氨酰胺、类皮质激素甾类和别嘌呤醇 (allopurinol))、抗破骨剂(例如,双膦酸盐{例如,依替膦酸盐(etidronate)、帕米膦酸 盐(pamidronate)、伊班膦酸盐(ibandronate)和护骨素(osteoprotegerin)})、激素调 节剂(例如,抗雄激素、LHRH激动剂、安美达锭(anastrozole)、他莫昔芬(tamoxifen))、 造血生长因子、抗毒性剂(例如,氨磷汀(amifostine))、激酶抑制剂(吉非替尼(gefitinib)、 伊
马替尼(imatinib))和其两种或两种以上的混合物。
阻断免疫抑制功能的抗体,例如阻断T细胞上切断活化的受体的抗CTLA4抗体也 可以与免疫治疗剂和式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的化合物组合使用。因此,投 予免疫治疗剂和式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的化合物以及抗CTLA4抗体将增 加受检者个体的免疫反应。
关于治疗的预防性和治疗性方法,基于从药物基因组学领域获得的认识,可特别制 定或修改所述治疗。如本文中所使用,“药物基因组学”指的是将诸如基因测序、统计 遗传学和基因表达分析的基因组学技术应用于临床开发和出售的药物。更确切地说,所 述术语指的是研究患者的基因如何决定他或她对药物的反应(例如,患者的“药物反应 表型”或“药物反应基因型”)。因此,本发明的另一方面提供用于根据个体的药物反应 基因型来制定个体的预防性或治疗性治疗的方法。药物基因组学使得临床医师或内科医 师可以把将最得益于所述治疗的患者作为预防性或治疗性治疗的目标,而且可以避免治 疗将经历毒性药物相关
副作用的患者。临床医师或内科医师进而可以制定可能为特定患 者所必需的治疗类型。
4.7可选免疫刺激化合物
在免疫疗法的方法的一实施例中,通过投予可充当免疫刺激化合物的化合物来进一 步扩大免疫反应。示范性的免疫刺激化合物包括toll样受体(TLR)激动剂(例如,TLR4、 TLR7、TLR9)、N-乙酰基胞壁酰基-L-丙氨酸-D-异谷氨酰胺(MDP)、脂多糖(LPS)、 遗传修饰和/或降解的LPS、明矾、葡聚糖、集落刺激因子(例如,EPO、GM-CSF、G-CSF、 M-CSF、
聚乙二醇化G-CSF、SCF、IL-3、IL6、PIXY 321)、干扰素(例如,γ-干扰素、 α-干扰素)、白细胞介素(例如,IL-2、IL-7、IL-12、IL-15、IL-18)、MHC II型结合肽、 皂苷(例如,QS21)、未甲基化的CpG序列、1-甲基
色氨酸、精氨酸酶抑制剂、环磷酰 胺或阻断免疫抑制功能的抗体(例如,抗CTLA4抗体)或其两种或两种以上的混合物。 示范性的TLR4激动剂包括脂多糖(LPS);大肠杆菌(E.coli)LPS;和
牙龈卟啉单胞 菌(P.gingivalis)LPS。示范性的TLR7激动剂包括咪唑并喹啉化合物(例如,咪喹莫 特(imiquimod)、雷西喹莫特(resiquimod)和类似物);和洛索立宾(loxoribine)。
4.8医药配方
将医药组合物调配成与其既定投药途径相容,且通常将包括医药学上可接受的载 剂。如本文中所使用,术语“医药学上可接受的载剂”包括与医药投药相容的溶剂、分 散介质、涂层、
抗菌剂和抗
真菌剂、等张剂和吸收延迟剂和类似物。也可以向组合物中 并入补充活性化合物。可根据常规医药规范来调配医药组合物(例如参看Remington:The Science and Practice of Pharmacy(第20版),编辑A.R.Gennaro,Lippincott Williams & Wilkins,2000和Encyclopedia of Pharmaceutical Technology,(编辑J.Swarbrick和J.C. Boylan),1988-1999,Marcel Dekker,New York)。
用于非经肠、皮内或皮下应用的溶液或悬浮液可包括以下组分:无菌稀释剂,诸如 注射用水、生理食盐水溶液、不挥发性油类、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶剂; 抗菌剂,诸如苄醇或对羟基苯
甲酸甲酯;抗
氧化剂,诸如
抗坏血酸或亚
硫酸氢钠;螯合 剂,诸如
乙二胺四乙酸;缓冲剂,诸如乙酸盐、
柠檬酸盐或
磷酸盐;和用于调节
张力的 药剂,诸如
氯化钠或右旋糖。可以用诸如
盐酸或氢氧化钠的酸或碱来调节pH值。可将 非经肠制剂封装到由玻璃或塑料制成的安瓿、一次性
注射器或多剂量小瓶中。
适合于可注射使用的医药组合物包括无菌水性溶液(当为
水溶性时)或分散液和用 于临时制备无菌可注射溶液或分散液的无菌粉末。对于静脉内投药来说,合适的载剂包 括生理盐水、抑菌水、Cremophor ELTM(BASF,Parsippany,NJ)或磷酸盐缓冲生理食盐 水(PBS)。在所有情况下,组合物必须是无菌的,而且应为达到存在易注射性程度的流 体。它在制造和储存条件下应该是稳定的,而且必须防止诸如细菌和真菌的
微生物的污 染作用。载剂可为含有例如水、
乙醇、多元醇(例如,甘油、丙二醇和液体聚乙二醇和 类似物)和其合适混合物的溶剂或分散介质。例如可以通过使用诸如卵磷酯的涂层,通 过维持所选择的粒度(就分散液来说)和通过使用
表面活性剂来维持适当的流动性。可 以通过各种抗菌剂和抗真菌剂来实现防御微生物的作用,所述抗菌剂和抗真菌剂例如对 羟基
苯甲酸酯、氯丁醇、
苯酚、抗坏血酸、硫柳汞(thimerosal)和类似物。在多数情况 下,组合物中包括等张剂,例如糖、多元醇(诸如甘露糖醇、山梨糖醇)和氯化钠。可 以通过在组合物中包括延缓吸收的药剂(例如,单
硬脂酸铝和明胶)来使可注射组合物 的吸收延长。
可以通过将选自式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的化合物以及上文列举成分中 的一种或其组合以规定量并入适当溶剂中,视需要接着进行过滤灭菌来制备无菌可注射 溶液。一般通过将活性化合物并入无菌媒剂中来制备分散液,所述无菌媒剂含有碱性分 散介质和其它选自上文例举成分或此项技术中已知的其它成分的成分。在用于制备无菌 可注射溶液的无菌粉末的情况下,制备方法可为
真空干燥和
冷冻干燥,从而产生活性成 份加上来自其预先经无菌过滤的溶液的任何其它所需成分的粉末。
4.9共价键结、复合物和结合物
在一实施例中,一种或一种以上免疫治疗剂和选自式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V) 的化合物可以通过选自式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的化合物的烷基、氨基、羰 基、醚、羟基、磷酸酯、膦酰基、磺酰基、硫酸酯、硫醇醚或硫醇部分而共价键结在一 起。举例来说,一种或一种以上免疫治疗剂可以与选自式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V) 的化合物中的R1、X1和/或Y1取代基共价键结。举例来说,免疫治疗剂可以与本发明的 一种或一种以上化合物中的-C(O)-基团的羰基部分(例如,C1羰基)或与其中R1取代基 的-C(O)-C1-4烷基-C(O)-基团共价键结。再举例来说,免疫治疗剂可以通过选自式(I)、 (II)、(III)、(IV)和(V)的化合物中的X1和/或Y1取代基中的氮
原子共价键结。所属 领域的技术人员将能够按照例如由以下文献所述的方法将一种或一种以上免疫治疗剂 与选自式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的化合物连接在一起:Hoffman等人,Biol.Chem. Hoppe-Sayler,370:575-582(1989);Wiesmuller等人,Vaccine,7:29-33(1989);Wiesmuller 等人,Int.J.Peptide Protein Res.,40:255-260(1992);Defourt等人,Proc.Natl.Acad.Sci., 89:3879-3883(1992);Tohokuni等人,J.Am.Chem.Soc.,116:395-396(1994);Reichel,Chem. Commun.,2087-2088(1997);Kamitakahara,Agnew.Chem.Int.编辑37:1524-1528(1998); Dullenkopf等人,Chem.Eur.J.,5:2432-2438(1999);所述文献的公开内容以全文引用的 方式并入本文中。
在一实施例中,免疫治疗剂可呈复合物的形式。所述复合物可包含至少一种癌抗原 (视情况与选自式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的化合物键结)和一种或一种以上蛋 白、肽、免疫刺激化合物和/或细胞。示范性的蛋白和肽包括热休克蛋白、热休克肽、 MHC I型
蛋白质、MHC I型肽、MHC II型蛋白、MHC II型肽和类似物。
示范性的细胞包括树突状细胞、自体性树突状细胞、受癌抗原冲击的树突状细胞、 受癌抗原冲击的自体性树突状细胞和类似细胞。示范性的免疫刺激化合物包括TLR激动 剂(例如,TLR4、TLR7、TLR9)、N-乙酰基胞壁酰基-L-丙氨酸-D-异谷氨酰胺(MDP)、 脂多糖(LPS)、遗传修饰和/或降解的LPS、明矾、葡聚糖、集落刺激因子(例如,EPO、 GM-CSF、G-CSF、M-CSF、聚乙二醇化G-CSF、SCF、IL-3、IL6、PIXY 321)、干扰素 (例如,γ-干扰素、α-干扰素)、白细胞介素(例如,IL-2、IL-7、IL-12、IL-15、IL-18)、 皂苷(例如,QS21)、单磷酰脂质A、3De-O-酰化单磷酰脂质A(3D-MPL)、未甲基化 的CpG序列、1-甲基色氨酸、精氨酸酶抑制剂、环磷酰胺、阻断免疫抑制功能的抗体(例 如,抗CTLA4抗体)和类似物。与至少一种癌抗原(视情况与选自式(I)、(II)、(III)、 (IV)和(V)的化合物键结)和蛋白、肽、免疫刺激化合物和/或细胞的复合物可为非 共价键结、离子键结、共价键结、范德瓦尔斯力(van der Waals′forces)键结、氢键结 和类似键结。
在另一实施例中,癌抗原(视情况与选自式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的化 合物键结)呈包含热休克蛋白或热休克肽(HSP),尤其gp96的复合物形式。在一实施 例中,通过活体外肽冲击热休克蛋白和/或热休克肽来形成复合物。复合物可为共价或非 共价的。在另一实施例中,癌抗原(视情况与选自式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V) 的化合物键结)呈包含肽、至少一种热休克蛋白和/或热休克肽和至少一种MHC I型和/ 或II型蛋白或肽的复合物形式。
在另一实施例中,癌抗原(视情况与选自式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的化 合物键结)呈包含肽和树突状细胞的复合物形式。在一实施例中,通过活体外肽冲击树 突状细胞以形成载有癌抗原的树突状细胞来形成复合物。可以用癌抗原和/或表达癌抗原 的有
机体(例如,重组病毒或细菌)来冲击树突状细胞。树突状细胞可为自体性的。
在另一实施例中,癌抗原(视情况与选自式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的化 合物键结)呈包含肽和MHC I型蛋白或肽;和/或包含肽和MHC II型蛋白或肽的复合物 形式。在一实施例中,MHC I型蛋白或肽是HLA(例如,HLA-A*0201、HLA-A2、HLA-A3、 HLA-A*1101、HLA-A*3101、HLA-A*3301、HLA-A*6801、HLA-A24)。复合物可为共 价或非共价的。在另一实施例中,癌抗原(视情况与选自式(I)、(II)、(III)、(IV)和 (V)的化合物键结)呈包含肽、MHC I型和/或II型蛋白或肽和至少一种热休克蛋白和/ 或热休克肽的复合物形式。
在另一实施例中,癌抗原呈结合物的形式。举例来说,一种或一种以上癌抗原可与 一种或一种以上蛋白、肽、糖、
聚合物、脂质和/或毒性部分化学连接。结合物可具有下 式:A-L-X,其中“A”为如本文中所述的一种或一种以上癌抗原,“L”为一种或一种 以上连接基团,且“X”为一种或一种以上蛋白、肽、糖、聚合物、脂质和/或毒性部分。 示范性的连接基团包括化学连接基团和肽连接基团。连接“A”和“X”的最常见方法 依赖于游离氨基(α-氨基或Lys)、巯基(Cys)或
羧酸基团(Asp、Glu或α-羧基)的存 在。应该使用通过羧基-末端残基或氨基-末端残基将肽与载体蛋白、肽、糖、脂质和/或 毒性部分连接在一起的连接方法。其它常见的连接方法包括马来酰亚胺和
碳化二酰亚胺 偶合化学。可以选择如此的连接基团以使得酶对连接基团起作用,从而使得“A”和“X” 在活体内相互分开。或者,可以选择如此的连接基团以使得“A”和“X”在活体内仍 通过连接基团共价键结。在其它实施例中,“L”可简单地是“A”与“X”之间的共价 键。“X”可为肽、蛋白(诸如MHC I型蛋白或MHC II型蛋白);钥孔嘁血蓝蛋白;白 蛋白;
牛血清
白蛋白;卵清蛋白;兔血清白蛋白、抗体和类似物。“X”可为肽。所述肽 可以是与“A”相同或不同的癌抗原。所述结合物可以称作多抗原肽(MAP),而且肽在 存在或不存在连接基团“L”的情况下都可以形成融合蛋白。肽可以是可有助于产生免 疫反应的I型和/或II型肽。所属领域的技术人员将了解,当两个肽连接在一起时,可使 用术语“融合蛋白”,在这种情况下,“L”基团可以离开结构。在其它实施例中,“X” 可以是毒性部分。示范性的毒性部分包括病毒毒素、细菌毒素(例如,白喉毒素(diphtheria toxin)、破伤风毒素(tetanus toxin)、梭状芽孢杆菌毒素(clostridia toxin)、霍乱毒素(cholera toxin)、炭疽毒素(anthrax toxin)、肉毒梭菌毒素(botulinum toxin)、百日咳毒素(pertussis toxin)、气管毒素(tracheal toxin),
5.式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的化合物
医药组合物包括上文所述的免疫治疗剂和选自式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V) 的化合物和/或其医药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物、立体异构体、非晶固体,或 其任何组合。所述式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的化合物可充当佐剂和/或免疫刺 激化合物,这取决于使用其的应用。
其中:
R1为:(a)-C(O)-;
(b)-C(O)-C1-14烷基-C(O)-或-C(O)-C1-14烯基-C(O)-;
其中-C1-14烷基-或-C1-14烯基-视情况经一个或一个以上选自以下各基的取代基取代: 羟基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷基二氧基、C1-5烷基氨基、羧基、C1-6烷氧羰基、 C1-6氨甲酰基、C1-6酰基氨基和/或(芳基)C1-6烷基;且
其中(芳基)C1-6烷基的芳基部分视情况经一个或一个以上选自以下各基的取代基取 代:C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷基氨基、C1-6烷氧基氨基、C1-6烷基氨基-C1-6烷氧基、 -O-C1-6烷基氨基-C1-6烷氧基、-O-C1-6烷基氨基-C(O)-C1-6烷基-C(O)OH、-O-C1-6烷基氨 基-C(O)-C1-6烷基-C(O)-C1-6烷基、-O-C1-6烷基-NH-C1-6烷基-O-C1-6烷基、-O-C1-6烷基 -NH-C(O)-C1-6烷基-C(O)OH和/或-O-C1-6烷基-NH-C(O)-C1-6烷基-C(O)-C1-6烷基;
(c)C2到C15直链或支链烷基,其视情况经一个或一个以上羟基和/或烷氧基取代; 或
(d)-C(O)-C6-12芳基-C(O)-,其中芳基视情况经一个或一个以上羟基、卤素(例如, 氟)、硝基、氨基、C1-6烷基和/或C1-6烷氧基取代;
a和b各自独立地为0、1、2、3或4;(优选为2);
a′和b′独立地为2、3、4、5、6、7或8;(优选为2);
d和e各自独立地为1、2、3、4、5或6;
d′和e′各自独立地为0、1、2、3或4;(优选为0、1或2);
d″和e″各自独立地为0、1、2、3或4;(优选为1、2、3或4);
T为氧或硫;
X1、X2、Y1和Y2各自独立地为空、氧、NH、-N(C(O)C1-4烷基)-或-N(C1-4烷基)-;
W1和W2各自独立地为羰基、亚甲基、砜或亚砜;
R2、R3、R4、R5、R6和R7各自独立地为:
(a)C2到C20直链或支链烷基,其视情况经一个或一个以上氧基、卤素(优选为氟)、 羟基和/或烷氧基取代;
(b)C2到C20直链或支链烯基,其视情况经氧基、卤素(优选为氟)、羟基和/或烷 氧基中的一个或一个以上取代;
(c)C2到C20直链或支链烷氧基,其视情况经一个或一个以上氧基、卤素(例如, 氟)、羟基和/或烷氧基取代;
(d)-NH-C2-20直链或支链烷基,其中烷基视情况经一个或一个以上氧基、卤素(例 如,氟)、羟基和/或烷氧基取代;
(e)-C(O)-C2-20直链或支链烷基或烯基,其中烷基或烯基视情况经一个或一个以上 氧基、卤素(例如,氟)、羟基和/或烷氧基取代;
Z为O或NH;且M和N各自独立地为C2到C20直链或支链烷基、烯基、烷氧基、 酰氧基、烷基氨基或酰基氨基;
R8为C1-6直链或支链烷基或C2-6直链或支链烯基或炔基;
R9和R10独立地选自由以下各基组成的群组:
(i)C1到C20直链或支链烷基,其视情况经一个或一个以上卤素、氧基、羟基和/或 烷氧基取代;和
(ii)C2到C20直链或支链烯基或炔基,其视情况经一个或一个以上卤素、氧基、羟 基和/或烷氧基取代;
G1、G2、G3、G4和G5各自独立地为氧、亚甲基、-NH-、硫醇、-N(C1-4烷基)-、-N[C(O)-C1-4 烷基]-、-NH-C(O)-、-NH-SO2-、-C(O)-O-、-C(O)-NH-、-O-C(O)-、-O-C(O)-NH-、-O-C(O)-O-、 -NH-C(O)-NH-、-C(O)NH-、-C(O)N(C1-4烷基)、芳基和-S(O)n-,其中n为0、1或2;
或G1R2、G2R4、G3R5和/或G4R7可一起为氢原子或羟基;
Z1和Z2各自独立地选自-OP(O)(OH)2、-P(O)(OH)2、-OP(O)(OR8)(OH){其中R8为 C1-4烷基}、-OS(O)2OH、-S(O)2OH-、-CO2H、-OB(OH)2、-OH、-CH3、-NH2和-N(R9)2{其 中R9为C1-4烷基};
R12为H或C1-4直链或支链烷基;且
M独立地选自氢原子和医药学上可接受的阳离子{一价阳离子将代替一个M,而二 价阳离子将代替两个M变量}。
在一实施例中,式(I)-(V)的化合物中的R1为-C(O)-或-C(O)-C1-4烷基-C(O)-。 在另一实施例中,式(I)-(V)的化合物中的R1为-C(O)-。
在本发明的一个实施例中,在式(I)-(V)的化合物中,T为氧。
在另一实施例中,式(I)-(V)的化合物中的G1、G2、G3和G4各自独立地为氧、 -NH-、-NH-C(O)-、-C(O)-O-、-C(O)-NH-、-O-C(O)-、-O-C(O)-NH-、-O-C(O)-O-、 -NH-C(O)-NH-或-C(O)NH-。在另一实施例中,式(I)-(V)的化合物中的G1、G2、G3 和G4各自独立地为氧、-C(O)-O-或-O-C(O)-。在另一实施例中,式(I)-(V)的化合 物中的G1和G3为-O-C(O)-。
在式(I)-(V)化合物{优选为式(I)-(III)的化合物}的一个实施例中,R2和 R5各自独立地为选自本文R2和R5定义中的(a)、(b)、(c)、(d)和(f)的取代基; R3和R6各自独立地为选自本文R3和R6定义中的(a)和(b)的取代基;且R4和R7 各自独立地为选自本文R4和R7定义中的(a)、(b)、(c)和(e)的取代基。
在式(I)-(V)的化合物{优选式(IV)或(V)的化合物}的其它实施例中,R2、 R3、R4、R5、R6和R7各自独立地为选自本文R2、R3、R4、R5、R6和R7定义中的(a)、 (b)、(g)和(h)的取代基。
在式(I)-(III)的化合物的其它实施例中,存在下列中的一项或一项以上:a和b 各为2;X1和Y1各为NH;R1为-C(O)-或-C(O)-C1-4烷基-C(O)-;d′和e′各为1;d″和e″ 各为1;X为O或NH,更优选为NH;且W为C(O);或d′和e′各为2。
在式(I)-(III)的其它实施例中,R1为-C(O)C1-4烷基-C(O)-,其中C1-14烷基例如 经C1-5烷氧基取代。
在一实施例中,式(I)-(III)的化合物是“类型1”,其中a和b的值相同;d和 e的值相同;d′和e′的值相同;d″和e″的值相同;X1和Y1相同;X2和Y2相同;W1和 W2相同;R2和R5相同;G1和G3相同;R3和R6相同;G2和G4相同;且R4和R7相同。
在另一实施例中,式(I)-(III)的化合物是“类型2”,其中a和b的值不同、d 和e的值相同、d′和e′的值不同;d″和e″的值相同;X1和Y1不同;X2和Y2不同;W1 和W2不同;R2和R5同;G1和G3不同;R3和R6不同;G2和G4不同;或R4和R7不 同。
在另一实施例中,式(I)-(III)的化合物是“类型3”,其中a和b的值不同、d 和e的值不同、d′和e′的值不同;d″和e″的值不同;X1和Y1不同;X2和Y2不同;W1 和W2不同;R2和R5不同;G1和G3不同;R3和R6不同;G2和G4不同;或R4和R7不 同。
在其它实施例中,式(I)、(II)和/或(III)的化合物优选为:
ER 803022;其医药学上可接受的盐,如下所示的钠盐除外;和/或如下所示的一个 或一个以上钠阳离子可由氢原子置换:
ER 803058;其医药学上可接受的盐,如下所示的钠盐除外;和/或如下所示的一个 或一个以上钠阳离子可由氢原子置换:
ER 803732;其医药学上可接受的盐,如下所示的钠盐除外;和/或如下所示的一个 或一个以上钠阳离子可由氢原子置换:
ER 804053;其医药学上可接受的盐,如下所示的钠盐除外;和/或如下所示的一个 或一个以上钠阳离子可由氢原子置换:
ER 804058;其医药学上可接受的盐,如下所示的钠盐除外;和/或如下所示的一个 或一个以上钠阳离子可由氢原子置换:
ER 804059;其医药学上可接受的盐,如下所示的钠盐除外;和/或如下所示的一个 或一个以上钠阳离子可由氢原子置换:
ER 804442;其医药学上可接受的盐,如下所示的钠盐除外;和/或如下所示的一个 或一个以上钠阳离子可由氢原子置换:
ER 804680;其医药学上可接受的盐,如下所示的钠盐除外;和/或如下所示的一个 或一个以上钠阳离子可由氢原子置换:
ER 804764;其医药学上可接受的盐,如下所示的钠盐除外;和/或如下所示的一个 或一个以上钠阳离子可由氢原子置换:
在一实施例中,优选化合物为112066;其立体异构体;其医药学上可接受的盐,如 下所示的钠盐除外;和/或如下所示的一个或一个以上钠阳离子可由氢原子置换:
在一实施例中,优选化合物为ER 804057;其医药学上可接受的盐,如下所示的钠 盐除外;或如下所示的一个或一个以上钠阳离子可由氢原子置换:
在式(IV)和(V)的一些实施例中,存在以下限制中的一种或一种以上:a和b 各为2;X1和Y1各为NH;d和e各为1或2;且d′和e′各为0、1或2。在特定优选实 施例中,d和e各为1且d′和e′各为0。在特定其它优选实施例中,d和e各为1且d′和 e′各为1或2。
在式(IV)和(V)的一些实施例中,R1为-C(O)-或-C(O)-C1-14烷基-C(O)-,其中 C1-14烷基视情况经一或两个选自由羟基、C1-6烷氧基、C1-6烷基二氧基、C1-6烷基氨基或 (芳基)C1-6烷基组成的群组的取代基取代,其中(芳基)C1-6烷基的芳基部分视情况经C1-6 烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷基氨基、(C1-6烷氧基)C1-6烷基氨基、(C1-6烷基氨基)C1-6烷氧 基、-O-C1-6烷基-NH-C1-6烷基-O-C1-6烷基、-O-C1-6烷基-NH-C(O)-C1-6烷基-C(O)OH或 -O-C1-6烷基-NH-C(O)-C1-6烷基-C(O)-C1-6烷基取代。
在式(IV)和(V)的一些实施例中,G1、G2、G3和G4各自独立地选自由-NH-C(O)- 和-O-C(O)-组成的群组。
在式(IV)和(V)的一些实施例中,R2、R3、R4、R5、R6、R7、R9和R10中的至 少两个是C6-20直链或支链烷基、烯基或炔基;其中任一者都可以视情况经一个或一个以 上选自由卤素、氧、羟基和/或烷氧基组成的群组的取代基取代。在其它实施例中,R2、 R3、R4、R5、R6、R7、R9和R10中的至少两个是C8-15直链或支链烷基、烯基或炔基;其 中任一者都可以视情况经一个或一个以上选自由卤素、氧基、羟基和烷氧基组成的群组 的取代基取代。
在式(IV)和(V)的一些实施例中,R2、R3、R4、R5、R6、R7、R9和R10中的至 少四个是C6-20直链或支链烷基、烯基或炔基;其中任一者都可以视情况经一个或一个以 上选自由卤素、氧基、羟基和烷氧基组成的群组的取代基取代。在特定优选实施例中, R2、R3、R4、R5、R6、R7、R9和R10中的至少四个是C8-15直链或支链烷基、烯基或炔基; 其中任一者都可以视情况经一个或一个以上选自由卤素、氧基、羟基和烷氧基组成的群 组的取代基取代。
在式(IV)和(V)的一些实施例中,R2、R3、R4、R5、R6、R7、R9和R10中的至 少六个是C6-20直链或支链烷基、烯基或炔基;其中任一者都可以视情况经一个或一个以 上选自由卤素、氧基、羟基和烷氧基组成的群组的取代基取代。在其它实施例中,R2、 R3、R4、R5、R6、R7、R9和R10中的至少六个是C8-15直链或支链烷基、烯基或炔基;其 中任一者都可以视情况经一个或一个以上选自由卤素、氧基、羟基和烷氧基组成的群组 的取代基取代。
在其它实施例中,本发明提供式(I)、(II)、(III)、(IV)或(V)的化合物,其中 T为硫。在其它实施例中,本发明提供式(I)、(II)、(III)、(IV)或(V)的化合物, 其中T为硫;但是所述化合物不是第804678号化合物。
在本发明的另一实施例中,存在限制条件,即式(I)、(II)或(III)的化合物不是:
如本文中所使用,术语“烷基”包括经取代或未经取代之直链或支链一价或二价脂 族烃基团。鉴于术语“烷基”在任何特定取代基定义中的内容,所属领域的技术人员将 了解一价烷基和二价烷基之间的区别。当烷基是端基时,其将是一价的,诸如-CH3、 -CH2CH3、-CH2CH2CH3、-CH2CH2CH2CH3和类似基团。当烷基在其它部分之间时,诸 如R1定义中的“-C(O)-C1-14烷基-C(O)-”,烷基就将是二价的,诸如-CH2-、-CH2CH2-、 -CH2CH2CH2-、-CH2CH2CH2CH2-和类似基团。
如本文中所使用,术语“烯基”包括经取代或未经取代之直链或支链不饱和一价或 二价脂族烃基团。“烯基”基团可具有任何数目的碳-碳双键,优选具有一个或两个。鉴 于术语“烯基”在任何特定取代基定义中的内容,所属领域的技术人员将了解一价烯基 和二价烯基之间的区别。当烯基是端基时,其将是一价的,诸如-CH=CH2、-CH=CHCH3 和类似基团。当烯基在其它部分之间时,诸如R1定义中的“-C(O)-C1-14烯基-C(O)-”, 烯基就将是二价的,诸如-CH=CH-、-CH=CHCH2-、-CH2CH=CHCH2-和类似基团。
如本文中所使用,术语“芳基”包括经取代或未经取代的一价或二价芳族烃基团。 鉴于术语“芳基”在任何特定取代基定义中的内容,所属领域的技术人员将了解一价芳 基和二价芳基之间的区别。当芳基是端基时,其将是一价的。当芳基在其它部分之间时, 诸如R1定义中的“-C(O)-C6-12芳基-C(O)-”,芳基就将是二价的。
Boc为叔丁基氧基羰基。
关于特定取代基的空意思是所述取代基不存在,而且取代基介于中间的化学基团通 过共价键直接相互连接。
式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的化合物可能具有一个或一个以上的不对称碳 原子,这取决于取代基,而且可以具有立体异构体,这在本发明的范畴内。式(I)、(II)、 (III)、(IV)和/或(V)的化合物可以医药学上可接受的盐(例如,其中式(I)、(II)、 (III)、(IV)和/或(V)的化合物中的M是医药学上可接受的阳离子)的形式来投予。 式(I)、(II)、(III)、(IV)和/或(V)的化合物可以化合物立体异构体的医药学上可接 受的盐的形式来投予。“医药学上可接受的盐”指的是保留其生物有效性的盐。可由无 机碱和有机碱来制备医药学上可接受的碱加成盐。衍生自无机碱的示范性医药学上可接 受的盐包括钠盐、
钾盐、锂盐、铵盐、钙盐和镁盐。衍生自有机碱的示范性盐包括伯胺、 仲胺和叔胺的盐。可由
无机酸和
有机酸来制备医药学上可接受的
酸加成盐。衍生自无机 酸的示范性盐包括盐酸、
氢溴酸、硫酸、
硝酸、磷酸和类似酸的盐。衍生自有机酸的示 范性盐包括乙酸、丙酸、乙醇酸、丙
酮酸、
草酸、苹果酸、
丙二酸、丁二酸、马来酸、 延胡索酸、
酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、
肉桂酸、
扁桃酸、甲烷磺酸、乙烷磺酸、对
甲苯 磺酸、水杨酸和类似酸的盐。
用于制造式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的化合物的方法在美国公开案第 2004/0006242号、美国公开案第2003/0153532号、美国公开案第2002/0176861号、美 国公开案第2002/0049314号、美国专利第6,551,600号、美国专利第6,521,776号、美国 专利第6,290,973号和WO 03/099195中有所描述,所述专利的公开内容以全文引用的方 式并入本文中。一些式(I)、(II)、(III)、(IV)和(V)的化合物和其制造方法也由 Hawkins等人,The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, 300(2):655-661(2000);Lien等人,The Journal of Biological Chemistry,276(3):1873-1880 (2001);Przetak等人,Vaccine,21:961-970(2003);和Seydel等人,Eur.J.Immunol., 33:1586-1592(2003)描述,所述文献的公开内容以全文引用的方式并入本文中。
属于式(I)-(V)的化合物范畴内的示范性化合物在下文中列出。
实例
实例1
腹膜内投予TLR激动剂增强疫苗的治疗功效
为确定E6020在与癌症疫苗(例如,分泌粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF) 的肿瘤细胞)一起腹膜内投予时的作用,使用具有黑素瘤细胞的小鼠模型。E6020是 TLR-4(Toll样受体-4)激动剂。用1×106个同基因B16F10鼠科动物黑素瘤细胞经皮下 植入B6小鼠(C57BL/6小鼠)。在肿瘤细胞接种三天后,将小鼠:(1)经皮下(s.c.) 接种1×106个经过遗传改良来稳定表达和分泌鼠科动物GM-CSF的B16F10肿瘤细胞 (B16-GM-CSF细胞);(2)经腹膜内(i.p.)接种E6020;或(3)用皮下GM-CSF细胞 疫苗接种和腹膜内E6020的组合来治疗(GM-CSF细胞疫苗接种和E6020疫苗接种在小 鼠体内的分开部位进行投予)。在这些实验中,在接种之前通过γ照射使GM-CSF细胞 失活。监测动物的存活率。
这些实验证明用B16GM-CSF细胞和腹膜内E6020对动物进行疫苗接种增强了 GM-CSF细胞的治疗功效(图1)。
实例2
局部投予TLR激动剂增强癌症疫苗的治疗功效
检查E6020对皮下植入1×106个同基因B16F10鼠科动物黑素瘤细胞的B6小鼠的 治疗作用。当肿瘤变得可触知时,对小鼠肿瘤内单独注射GM-CSF细胞,或注射GM-CSF 细胞与E6020(约3-10μg)的组合。监测动物的存活率。
发现用GM-CSF细胞与E6020的组合肿瘤内治疗的动物群体与未经治疗或单独用 GM-CSF细胞治疗的动物相比存活率增加(图2)。
实例3
MUC-1/E6020疫苗治疗作用
为测试MUC-1疫苗和E6020佐剂对于治疗发炎性肠病(IBD)和随后结肠腺癌的 发展的作用,使用缺乏IL-10基因并且表达转基因人类MUC1的工程化小鼠品系。所述 小鼠自发地发展类似IBD的肠炎,接着发展结肠腺癌。这些数据在Beatty等人,AACR Annual Meeting 2006,Washington D.C.,2006年4月4日中提供和公开。
在这些实验中,每个鼻孔用30mg的Tn MUC100mer(HGVTSAPDTRPAPGSTAPPA) ×5、SEQ ID NO:1)和3mg的E6020经鼻内使小鼠免疫。
在实验期间,用疫苗和E6020治疗的MUC1IL-10-/-小鼠延缓了IBD的发作或不发 展D3D(图3)。用疫苗和E6020治疗的小鼠改善了存活率,而且不发展结肠癌(图4 和表1)。
表1
治疗/所治疗小鼠的数目 年龄(周) 结肠肿瘤 疫苗/6只小鼠 14-35.5 0/6 佐剂/3只小鼠 12.5-18 3/3 未治疗/4只小鼠 8-15.5 4/4
数据证明向MUC-1疫苗中添加E6020可以减缓与IBD相关的直肠脱垂的进展,并 抑制
组织学检测的肿瘤的出现。
实例4
EGFRvIII治疗作用和佐剂
为确定佐剂是否可以增强肿瘤学抗原的作用(即,可用于对动物接种抵抗癌症的疫 苗的抗原),经皮下用与蛋白质载体钥孔嘁血蓝蛋白(KLH)结合的肿瘤相关肽, LEEKKGNYVVTDHC(SEQ ID NO:2)(源自EGFR的突变体形式,EGFRvIII),在有 或没有E6020或鼠科动物GM-CSF(一种用于癌症疫苗试验中来加强免疫反应的细胞因 子)的情况下,使C57/BL6J小鼠免疫。每剂给予3μg的E6020,5μg的GM-CSF和25 μg的肽-KLH结合物。以三周的时间间隔使小鼠免疫三次。在每次免疫后两周时从小鼠 制备血清,并使用ELISA在涂有与牛血清白蛋白结合的EGFRvIII肽的平板上测试 EGFRvIII肽特异性抗体。表2中的结果以个别动物的效价形式提供。效价定义为观察到 0.25OD单位时的信号高于本底时的最终血清稀释度。
这些实验的数据证明E6020增强了抗原特异性IgG2a的平均效价,所述抗原特异性 IgG2a与抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)中所涉及的高亲合力Fc受体相结合。 IgG2a是人类IgG1同型的小鼠相关物,因为人类IgG1同型在肿瘤杀死方面最为有效, 所以其用于目前销售的人类抗肿瘤单克隆抗体中。
在用EGFRvIII肽的疫苗接种中,E6020与GM-CSF的组合证明比单独任一种物质 对IgG2a效价的作用都更大。这些数据证明E6020与其它免疫增强剂组合的适用性。
表2.由E6020增强EGFRvIII肽的抗体效价
等效物
所属领域的技术人员只使用常规实验就将认识到或能够确认本文所述特定物质和 程序的多种等效物。所述等效物被认为在本发明的范畴内,并由随附的
权利要求书所涵 盖。