治疗性DLL4结合蛋白
专利汇可以提供治疗性DLL4结合蛋白专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 描述了DLL4结合蛋白，包括 抗体 、CDR嫁接的抗体、人源化抗体及其DLL4结合 片段 、以高亲和 力 结合人DLL4的 蛋白质 、和中和DLL4和/或VEGF活性的DLL4结合蛋白。DLL4结合蛋白用于 治疗 或 预防 癌症和 肿瘤 且尤其用于治疗或预防肿瘤血管生成。，下面是治疗性DLL4结合蛋白专利的具体信息内容。
1.一种能够结合DLL4的结合蛋白，其包含选自下述氨基酸序列组的至少一种氨基酸序列：SEQ ID NO:157、SEQ ID NO:158、SEQ ID NO:159、SEQ ID NO:160、SEQ ID NO:161、SEQ ID NO:162、SEQ ID NO:163和SEQ ID NO:164。
2.一种包含抗原结合结构域的结合蛋白，其中所述结合蛋白能够结合人DLL4，所述抗原结合结构域包含至少一个CDR，其中：
CDR-H1选自：
X1–X2–X3–X4–X5（SEQ ID NO:151），其中；
X1是N、H或Y；
X2是F；
X3是P；
X4是M；和
X5是A或S；
SEQ ID NO:157的残基31-35（CDR-H1 38H12）；
SEQ ID NO:161的残基31-35（CDR-H1 37D10）；
SEQ ID NO:163的残基31-35（CDR-H1 32C7）；
SEQ ID NO:165的残基31-35（CDR-H1 14G1）；
SEQ ID NO:167的残基31-35（CDR-H1 14A11）；
SEQ ID NO:169的残基31-35（CDR-H1 15D6）；
SEQ ID NO:171的残基31-35（CDR-H1 VH.1 1A11）；
SEQ ID NO:172的残基31-35（CDR-H1 VH.1a 1A11）；
SEQ ID NO:173的残基31-35（CDR-H1 VH.1b 1A11）；
SEQ ID NO:174的残基31-35（CDR-H1 VH.2a 1A11）；
SEQ ID NO:179的残基31-35（CDR-H1 VH.1 38H12）；
SEQ ID NO:180的残基31-35（CDR-H1 VH.1A 38H12）；
SEQ ID NO:181的残基31-35（CDR-H1 VH.1b 38H12）；
SEQ ID NO:182的残基31-35（CDR-H1 VH.2a 38H12）；
SEQ ID NO:187的残基31-35（CDR-H1 h1A11VH.1）；
SEQ ID NO:188的残基31-35（CDR-H1 h1A11.A6）；
SEQ ID NO:189的残基31-35（CDR-H1 h1A11.A8）；
SEQ ID NO:190的残基31-35（CDR-H1 h1A11.C6）；
SEQ ID NO:191的残基31-35（CDR-H1 h1A11.A11）；
SEQ ID NO:192的残基31-35（CDR-H1 h1A11.B5）；
SEQ ID NO:193的残基31-35（CDR-H1 h1A11.E12）；
SEQ ID NO:194的残基31-35（CDR-H1 h1A11.G3）；
SEQ ID NO:195的残基31-35（CDR-H1 h1A11.F5）；和
SEQ ID NO:196的残基31-35（CDR-H1 h1A11.H2）；
CDR-H2选自：
X1–X2–X3–X4–X5–X6–X7–X8–X9–X10–X11–X12–X13–X14–X15–X16–X17（SEQ ID NO:152），其中；
X1是T或S；
X2是I；
X3是S；
X4是S或G；
X5是S；
X6是D；
X7是G、A、D、S或E；
X8是T或W；
X9是T、P或A；
X10是Y、S、T或N；
X11是Y或I；
X12是R或G；
X13是D；
X14是S；
X15是V；
X16是K；和
X17是G；
SEQ ID NO:157的残基50-66（CDR-H2 38H12）；
SEQ ID NO:161的残基50-68（CDR-H2 37D10）；
SEQ ID NO:163的残基50-66（CDR-H2 32C7）；
SEQ ID NO:165的残基50-66（CDR-H2 14G1）；
SEQ ID NO:167的残基50-66（CDR-H2 14A11）；
SEQ ID NO:169的残基50-66（CDR-H2 15D6）；
SEQ ID NO:171的残基50-66（CDR-H2 VH.1 1A11）；
SEQ ID NO:172的残基50-66（CDR-H2 VH.1a 1A11）；
SEQ ID NO:173的残基50-66（CDR-H2 VH.1b 1A11）；
SEQ ID NO:174的残基50-66（CDR-H2 VH.2a 1A11）；
SEQ ID NO:179的残基50-66（CDR-H2 VH.1 38H12）；
SEQ ID NO:180的残基50-66（CDR-H2 VH.1A 38H12）；
SEQ ID NO:181的残基50-66（CDR-H2 VH.1b 38H12）；
SEQ ID NO:182的残基31-35（CDR-H1 VH.2a 38H12）；
SEQ ID NO:187的残基50-66（CDR-H2 h1A11VH.1）；
SEQ ID NO:188的残基50-66（CDR-H2 h1A11.A6）；
SEQ ID NO:189的残基50-66（CDR-H2 h1A11.A8）；
SEQ ID NO:190的残基50-66（CDR-H2 h1A11.C6）；
SEQ ID NO:191的残基50-66（CDR-H2 h1A11.A11）；
SEQ ID NO:192的残基50-66（CDR-H2 h1A11.B5）；
SEQ ID NO:193的残基50-66（CDR-H2 h1A11.E12）；
SEQ ID NO:194的残基50-66（CDR-H2 h1A11.G3）；
SEQ ID NO:195的残基50-66（CDR-H2 h1A11.F5）；和
SEQ ID NO:196的残基50-66（CDR-H2 h1A11.H2）；
CDR-H3选自：
X1–X2–X3–X4–X5–X6–X7–X8–X9（SEQ ID NO:153），其中；
X1是G；
X2是Y；
X3是Y；
X4是N；
X5是S；
X6是P；
X7是F；
X8是A；和
X9是Y、F或S；
SEQ ID NO:157的残基99-107（CDR-H3 38H12）；
SEQ ID NO:161的残基101-111（CDR-H3 37D10）；
SEQ ID NO:163的残基99-105（CDR-H3 32C7）；
SEQ ID NO:165的残基99-105（CDR-H3 14G1）；
SEQ ID NO:167的残基99-110（CDR-H3 14A11）；
SEQ ID NO:169的残基99-110（CDR-H3 15D6）；
SEQ ID NO:171的残基99-107（CDR-H3 VH.1 1A11）；
SEQ ID NO:172的残基99-107（CDR-H3 VH.1a 1A11）；
SEQ ID NO:173的残基99-107（CDR-H3 VH.1b 1A11）；
SEQ ID NO:174的残基99-107（CDR-H3 VH.2a 1A11）；
SEQ ID NO:179的残基99-107（CDR-H3 VH.1 38H12）；
SEQ ID NO:180的残基99-107（CDR-H3 VH.1A 38H12）；
SEQ ID NO:181的残基99-107（CDR-H2 VH.1b 38H12）；
SEQ ID NO:182的残基99-107（CDR-H1 VH.2a 38H12）；
SEQ ID NO:187的残基99-107（CDR-H3 h1A11VH.1）；
SEQ ID NO:188的残基99-107（CDR-H3 h1A11.A6）；
SEQ ID NO:189的残基99-107（CDR-H3 h1A11.A8）；
SEQ ID NO:190的残基99-107（CDR-H3 h1A11.C6）；
SEQ ID NO:191的残基99-107（CDR-H3 h1A11.A11）；
SEQ ID NO:192的残基99-107（CDR-H3 h1A11.B5）；
SEQ ID NO:193的残基99-107（CDR-H3 h1A11.E12）；
SEQ ID NO:194的残基99-107（CDR-H3 h1A11.G3）；
SEQ ID NO:195的残基99-107（CDR-H3 h1A11.F5）；和
SEQ ID NO:196的残基99-107（CDR-H3 h1A11.H2）；
CDR-L1选自：
X1–X2–X3–X4–X5–X6–X7–X8–X9–X10–X11（SEQ ID NO:154），其中；
X1是R；
X2是A；
X3是S；
X4是E或Q；
X5是D或E；
X6是I；
X7是Y或W；
X8是S、I、Y、N或R；
X9是N；
X10是L；和
X11是A；
SEQ ID NO:158的残基24-34（CDR-L1 38H12）；
SEQ ID NO:162的残基24-34（CDR-L1 37D10）；
SEQ ID NO:164的残基24-34（CDR-L1 32C7）；
SEQ ID NO:166的残基24-34（CDR-L1 14G1）；
SEQ ID NO:168的残基23-37（CDR-L1 14A11）；
SEQ ID NO:170的残基23-37（CDR-L1 15D6）；
SEQ ID NO:175的残基24-34（CDR-L1 VL.1 1A11）；
SEQ ID NO:176的残基24-34（CDR-L1 VL.1a 1A11）；
SEQ ID NO:177的残基24-34（CDR-L1 VL.1b 1A11）；
SEQ ID NO:178的残基24-34（CDR-L1 VL.2a 1A11）；
SEQ ID NO:183的残基24-34（CDR-L1 VL.1 38H12）；
SEQ ID NO:184的残基24-34（CDR-L1 VL.1a 38H12）；
SEQ ID NO:185的残基24-34（CDR-L1 VL.1b 38H12）；
SEQ ID NO:186的残基24-34（CDR-L1 VL.2a 38H12）；
SEQ ID NO:197的残基24-34（CDR-L1 h1A11VL.1）；
SEQ ID NO:198的残基24-34（CDR-L1 h1A11.A2）；
SEQ ID NO:199的残基24-34（CDR-L1 h1A11.A12）；
SEQ ID NO:200的残基24-34（CDR-L1 h1A11.A7）；
SEQ ID NO:201的残基24-34（CDR-L1 h1A11.B4）；
SEQ ID NO:202的残基24-34（CDR-L1 h1A11.B5）；和
SEQ ID NO:203的残基24-34（CDR-L1 h1A11.E12）；
CDR-L2选自：
X1–X2–X3–X4–X5–X6–X7（SEQ ID NO:155），其中；
X1是D；
X2是T；
X3是N或S；
X4是N、D、S、I、Y或V；
X5是L；
X6是A；和
X7是D；
SEQ ID NO:158的残基50-56（CDR-L2 38H12）；
SEQ ID NO:162的残基50-56（CDR-L2 37D10）；
SEQ ID NO:164的残基50-56（CDR-L2 32C7）；
SEQ ID NO:166的残基50-56（CDR-L2 14G1）；
SEQ ID NO:168的残基53-59（CDR-L2 14A11）；
SEQ ID NO:170的残基53-59（CDR-L2 15D6）；
SEQ ID NO:175的残基50-56（CDR-L2 VL.1 1A11）；
SEQ ID NO:176的残基50-56（CDR-L2 VL.1a 1A11）；
SEQ ID NO:177的残基50-56（CDR-L2 VL.1b 1A11）；
SEQ ID NO:178的残基50-56（CDR-L2 VL.2a 1A11）；
SEQ ID NO:183的残基50-56（CDR-L2 VL.1 38H12）；
SEQ ID NO:184的残基50-56（CDR-L2 VL.1a 38H12）；
SEQ ID NO:185的残基50-56（CDR-L2 VL.1b 38H12）；
SEQ ID NO:186的残基50-56（CDR-L2 VL.2a 38H12）；
SEQ ID NO:197的残基50-56（CDR-L2 h1A11VL.1）；
SEQ ID NO:198的残基50-56（CDR-L2 h1A11.A2）；
SEQ ID NO:199的残基50-56（CDR-L2 h1A11.A12）；
SEQ ID NO:200的残基50-56（CDR-L2 h1A11.A7）；
SEQ ID NO:201的残基50-56（CDR-L2 h1A11.B4）；
SEQ ID NO:202的残基50-56（CDR-L2 h1A11.B5）；和
SEQ ID NO:203的残基50-56（CDR-L2 h1A11.E12）；
和
CDR-L3选自：
X1–X2–X3–X4–X5–X6–X7–X8–X9（SEQ ID NO:156），其中；
X1是Q；
X2是Q；
X3是Y；
X4是N、D或T；
X5是N、Y或W；
X6是Y或V；
X7是P；
X8是P；和
X9是T；
SEQ ID NO:158的残基89-97（CDR-L3 38H12）；
SEQ ID NO:162的残基89-97（CDR-L3 37D10）；
SEQ ID NO:164的残基89-97（CDR-L3 32C7）；
SEQ ID NO:166的残基89-98（CDR-L3 14G1）；
SEQ ID NO:168的残基92-100（CDR-L3 14A11）；
SEQ ID NO:170的残基92-100（CDR-L3 15D6）；
SEQ ID NO:175的残基89-97（CDR-L3 VL.1 1A11）；
SEQ ID NO:176的残基89-97（CDR-L3 VL.1a 1A11）；
SEQ ID NO:177的残基89-97（CDR-L3 VL.1b 1A11）；
SEQ ID NO:178的残基89-97（CDR-L3 VL.2a 1A11）；
SEQ ID NO:183的残基89-97（CDR-L3 VL.1 38H12）；
SEQ ID NO:184的残基89-97（CDR-L3 VL.1a 38H12）；
SEQ ID NO:185的残基89-97（CDR-L3 VL.1b 38H12）；
SEQ ID NO:186的残基89-97（CDR-L3 VL.2a 38H12）；
SEQ ID NO:197的残基89-97（CDR-L3 h1A11VL.1）；
SEQ ID NO:198的残基89-97（CDR-L3 h1A11.A2）；
SEQ ID NO:199的残基89-97（CDR-L3 h1A11.A12）；
SEQ ID NO:200的残基89-97（CDR-L3 h1A11.A7）；
SEQ ID NO:201的残基89-97（CDR-L3 h1A11.B4）；
SEQ ID NO:202的残基89-97（CDR-L3 h1A11.B5）；和
SEQ ID NO:203的残基89-97（CDR-L3 h1A11.E12）。
3.根据权利要求2的结合蛋白，其中所述至少一个CDR包含选自下述的氨基酸序列：
SEQ ID NO:157的残基31-35（CDR-H1 38H12）；SEQ ID NO:157的残基50-66（CDR-H2
38H12）；SEQ ID NO:157的残基99-107（CDR-H3 38H12）；SEQ ID NO:158的残基24-34（CDR-L1 38H12）；SEQ ID NO:158的残基50-56（CDR-L2 38H12）；SEQ ID NO:158的残基
89-97（CDR-L3 38H12）；SEQ ID NO:159的残基31-35（CDR-H1 1A11）；SEQ ID NO:159的残基50-66（CDR-H2 1A11）；SEQ ID NO:159的残基99-107（CDR-H3 1A11）；SEQ ID NO:160的残基24-34（CDR-L1 1A11）；SEQ ID NO:160的残基50-56（CDR-L2 1A11）；SEQ ID NO:160的残基89-97（CDR-L3 1A11）；SEQ ID NO:161的残基31-35（CDR-H1 37D10）；SEQ ID NO:161的残基50-68（CDR-H2 37D10）；SEQ ID NO:161的残基101-111（CDR-H3 37D10）；SEQ ID NO:162的残基24-34（CDR-L1 37D10）；SEQ ID NO:162的残基50-56（CDR-L2 37D10）；SEQ ID NO:162的残基89-97（CDR-L3 37D10）；SEQ ID NO:163的残基31-35（CDR-H1 32C7）；
SEQ ID NO:163的残基50-66（CDR-H2 32C7）；SEQ ID NO:163的残基99-105（CDR-H3
32C7）；SEQ ID NO:164的残基24-34（CDR-L1 32C7）；SEQ ID NO:164的残基50-56（CDR-L2
32C7）；SEQ ID NO:164的残基89-98（CDR-L3 32C7）；SEQ ID NO:165的残基31-35（CDR-H1
14G1）；SEQ ID NO:165的残基50-66（CDR-H2 14G1）；SEQ ID NO:165的残基99-105（CDR-H3 14G1）；SEQ ID NO:166的残基24-34（CDR-L1 14G1）；SEQ ID NO:166的残基50-56（CDR-L2 14G1）；SEQ ID NO:166的残基89-98（CDR-L3 14G1）；SEQ ID NO:167的残基31-35（CDR-H1 14A11）；SEQ ID NO:167的残基50-66（CDR-H2 14A11）；SEQ ID NO:167的残基
99-110（CDR-H3 14A11）；SEQ ID NO:168的残基23-37（CDR-L1 14A11）；SEQ ID NO:168的残基53-59 （CDR-L2 14A11）；SEQ ID NO:168的残基92-100（CDR-L3 14A11）；SEQ ID NO:169的残基31-35（CDR-H1 15D6）；SEQ ID NO:169的残基50-66（CDR-H2 15D6）；SEQ ID NO:169的残基99-110（CDR-H3 15D6）；SEQ ID NO:170的残基23-37（CDR-L1 15D6）；SEQ ID NO:170的残基53-59 （CDR-L2 15D6）；SEQ ID NO:170的残基92-100（CDR-L3 15D6）；
SEQ ID NO:171的残基31-35（CDR-H1 VH.1 1A11）；SEQ ID NO:171的残基50-66（CDR-H2 VH.1 1A11）；SEQ ID NO:171的残基99-107（CDR-H3 VH.1 1A11）；SEQ ID NO:172的残基
31-35（CDR-H1 VH.1a 1A11）；SEQ ID NO:172的残基50-66（CDR-H2 VH.1a 1A11）；SEQ ID NO:172的残基99-107（CDR-H3 VH.1a 1A11）；SEQ ID NO:173的残基31-35（CDR-H1 VH.1b 1A11）；SEQ ID NO:173的残基50-66（CDR-H2 VH.1b 1A11）；SEQ ID NO:173的残基
99-107（CDR-H3 VH.1b 1A11）；SEQ ID NO:174的残基31-35（CDR-H1 VH.2a 1A11）；SEQ ID NO:174的残基50-66（CDR-H2 VH.2a 1A11）；SEQ ID NO:174的残基99-107（CDR-H3 VH.2a 1A11）；SEQ ID NO:175的残基24-34（CDR-L1 VL.1 1A11）；SEQ ID NO:175的残基
50-56（CDR-L2 VL.1 1A11）；SEQ ID NO:175的残基89-97（CDR-L3 VL.1 1A11）；SEQ ID NO:176的残基24-34（CDR-L1 VL.1a 1A11）；SEQ ID NO:176的残基50-56（CDR-L2 VL.1a
1A11）；SEQ ID NO:176的残基89-97（CDR-L3 VL.1a 1A11）；SEQ ID NO:177的残基24-34（CDR-L1 VL.1b 1A11）；SEQ ID NO:177的残基50-56（CDR-L2 VL.1b 1A11）；SEQ ID NO:177的残基89-97（CDR-L3 VL.1b 1A11）；SEQ ID NO:178的残基24-34（CDR-L1 VL.2a 1A11）；
SEQ ID NO:178的残基50-56（CDR-L2 VL.2a 1A11）；SEQ ID NO:178的残基89-97（CDR-L3 VL.2a 1A11）；SEQ ID NO:179的残基31-35（CDR-H1 VH.1 38H12）；SEQ ID NO:179的残基
50-66（CDR-H2 VH.1 38H12）；SEQ ID NO:179的残基99-107（CDR-H3 VH.1 38H12）；SEQ ID NO:180的残基31-35（CDR-H1 VH.1A 38H12）；SEQ ID NO:180的残基50-66（CDR-H2 VH.1A 38H12）；SEQ ID NO:180的残基99-107（CDR-H3 VH.1A 38H12）；SEQ ID NO:181的残基31-35（CDR-H1 VH.1b 38H12）；SEQ ID NO:181的残基50-66（CDR-H2 VH.1b 38H12）；SEQ ID NO:181的残基99-107（CDR-H3 VH.1b 38H12）；SEQ ID NO:182的残基31-35（CDR-H1 VH.2a 38H12）；SEQ ID NO:182的残基50-66（CDR-H2 VH.2a 38H12）；SEQ ID NO:182的残基99-107（CDR-H3 VH.2a 38H12）；SEQ ID NO:183的残基24-34（CDR-L1 VL.1 38H12）；
SEQ ID NO:183的残基50-56（CDR-L2 VL.1 38H12）；SEQ ID NO:183的残基89-97（CDR-L3 VL.1 38H12）；SEQ ID NO:184的残基24-34（CDR-L1 VL.1a 38H12）；SEQ ID NO:184的残基
50-56（CDR-L2 VL.1a 38H12）；SEQ ID NO:184的残基89-97（CDR-L3 VL.1a 38H12）；SEQ ID NO:185的残基24-34（CDR-L1 VL.1b 38H12）；SEQ ID NO:185的残基50-56（CDR-L2 VL.1b 38H12）；SEQ ID NO:185的残基89-97（CDR-L3 VL.1b 38H12）；SEQ ID NO:186的残基
24-34（CDR-L1 VL.2a 38H12）；SEQ ID NO:186的残基50-56（CDR-L2 VL.2a 38H12）；SEQ ID NO:186的残基89-97（CDR-L3 VL.2a 38H12）；SEQ ID NO:187的残基31-35（CDR-H1 h1A11VH.1）；SEQ ID NO:187的残基50-66（CDR-H2 h1A11VH.1）；SEQ ID NO:187的残基
99-107（CDR-H3 h1A11VH.1）；SEQ ID NO:188的残基31-35（CDR-H1 h1A11.A6）；SEQ ID NO:188的残基50-66（CDR-H2 h1A11.A6）；SEQ ID NO:188的残基99-107（CDR-H3 h1A11.A6）；SEQ ID NO:189的残基31-35（CDR-H1 h1A11.A8）；SEQ ID NO:189的残基50-66（CDR-H2 h1A11.A8）；SEQ ID NO:189的残基99-107（CDR-H3 h1A11.A8）；SEQ ID NO:190的残基31-35（CDR-H1 h1A11.C6）；SEQ ID NO:190的残基50-66（CDR-H2 h1A11.C6）；SEQ ID NO:190的残基99-107（CDR-H3 h1A11.C6）；SEQ ID NO:191的残基31-35（CDR-H1 h1A11.A11）；SEQ ID NO:191的残基50-66（CDR-H2 h1A11.A11）；SEQ ID NO:191的残基99-107（CDR-H3 h1A11.A11）；SEQ ID NO:192的残基31-35（CDR-H1 h1A11.B5）；SEQ ID NO:192的残基50-66（CDR-H2 h1A11.B5）；SEQ ID NO:192的残基99-107（CDR-H3 h1A11.B5）；SEQ ID NO:193的残基31-35（CDR-H1 h1A11.E12）；SEQ ID NO:193的残基50-66（CDR-H2 h1A11.E12）；SEQ ID NO:193的残基99-107（CDR-H3 h1A11.E12）；SEQ ID NO:194的残基31-35（CDR-H1 h1A11.G3）；SEQ ID NO:194的残基50-66（CDR-H2 h1A11.G3）；SEQ ID NO:194的残基99-107（CDR-H3 h1A11.G3）；SEQ ID NO:195的残基31-35（CDR-H1 h1A11.F5）；
SEQ ID NO:195的残基50-66（CDR-H2 h1A11.F5）；SEQ ID NO:195的残基99-107（CDR-H3 h1A11.F5）；SEQ ID NO:196的残基31-35（CDR-H1 h1A11.H2）；SEQ ID NO:196的残基50-66（CDR-H2 h1A11.H2）；SEQ ID NO:196的残基99-107（CDR-H3 h1A11.H2）；SEQ ID NO:197的残基24-34（CDR-L1 h1A11VL.1）；SEQ ID NO:197的残基50-56（CDR-L2 h1A11VL.1）；
SEQ ID NO:197的残基89-97（CDR-L3 h1A11VL.1）；SEQ ID NO:198的残基24-34（CDR-L1 h1A11.A2）；SEQ ID NO:198的残基50-56（CDR-L2 h1A11.A2）；SEQ ID NO:198的残基89-97（CDR-L3 h1A11.A2）；SEQ ID NO:199的残基24-34（CDR-L1 h1A11.A12）；SEQ ID NO:199的残基50-56（CDR-L2 h1A11.A12）；SEQ ID NO:199的残基89-97（CDR-L3 h1A11.A12）；
SEQ ID NO:200的残基24-34（CDR-L1 h1A11.A7）；SEQ ID NO:200的残基50-56（CDR-L2 h1A11.A7）；SEQ ID NO:200的残基89-97（CDR-L3 h1A11.A7）；SEQ ID NO:201的残基24-34（CDR-L1 h1A11.B4）；SEQ ID NO:201的残基50-56（CDR-L2 h1A11.B4）；SEQ ID NO:201的残基89-97（CDR-L3 h1A11.B4）；SEQ ID NO:202的残基24-34（CDR-L1 h1A11.B5）；SEQ ID NO:202的残基50-56（CDR-L2 h1A11.B5）；SEQ ID NO:202的残基89-97（CDR-L3 h1A11.B5）；SEQ ID NO:203的残基24-34（CDR-L1 h1A11.E12）；SEQ ID NO:203的残基50-56（CDR-L2 h1A11.E12）；SEQ ID NO:203的残基89-97（CDR-L3 h1A11.E12）。
4.根据权利要求2的结合蛋白，其中所述结合蛋白包含至少三个CDRs。
5.根据权利要求4的结合蛋白，其中所述至少三个CDRs选自可变结构域CDR组，其选自下述：
VH 38H12 CDR组
CDR-H1: SEQ ID NO:157的残基31-35
CDR-H2: SEQ ID NO:157的残基50-66
CDR-H3 SEQ ID NO:157的残基99-107
VL 38H12 CDR组
CDR-L1: SEQ ID NO:158的残基24-34
CDR-L2: SEQ ID NO:158的残基50-56
CDR-L3: SEQ ID NO:158的残基89-97
VH 1A11 CDR组
CDR-H1: SEQ ID NO:159的残基31-35
CDR-H2: SEQ ID NO:159的残基50-66
CDR-H3: SEQ ID NO:159的残基99-107
VL 1A11 CDR组
CDR-L1: SEQ ID NO:160的残基24-34
CDR-L2: SEQ ID NO:160的残基50-56
CDR-L3: SEQ ID NO:160的残基89-97
VH 37D10 CDR组
CDR-H1: SEQ ID NO:161的残基31-35
CDR-H2: SEQ ID NO:161的残基50-68
CDR-H3: SEQ ID NO:161的残基101-111
VL 37D10 CDR组
CDR-L1: SEQ ID NO:162的残基24-34
CDR-L2: SEQ ID NO:162的残基50-56
CDR-L3: SEQ ID NO:162的残基89-97
VH 32C7 CDR组
CDR-H1: SEQ ID NO:163的残基31-35
CDR-H2: SEQ ID NO:163的残基50-66
CDR-H3: SEQ ID NO:163的残基99-105
VL 32C7 CDR组
CDR-L1: SEQ ID NO:164的残基24-34
CDR-L2: SEQ ID NO:164的残基50-56
CDR-L3: SEQ ID NO:164的残基89-98
VH 14G1 CDR组
CDR-H1: SEQ ID NO:165的残基31-35
CDR-H2: SEQ ID NO:165的残基50-66
CDR-H3: SEQ ID NO:165的残基99-105
VL 14G1 CDR组
CDR-L1: SEQ ID NO:166的残基24-34
CDR-L2: SEQ ID NO:166的残基50-56
CDR-L3: SEQ ID NO:166的残基89-97
VH 14A11 CDR组
CDR-H1: SEQ ID NO:167的残基31-35
CDR-H2: SEQ ID NO:167的残基50-66
CDR-H3: SEQ ID NO:167的残基99-110
VL 14A11 CDR组
CDR-L1: SEQ ID NO:168的残基23-37
CDR-L2: SEQ ID NO:168的残基53-59
CDR-L3: SEQ ID NO:168的残基92-100
VH 15D6 CDR组
CDR-H1: SEQ ID NO:169的残基31-35
CDR-H2: SEQ ID NO:169的残基50-66
CDR-H3: SEQ ID NO:169的残基99-110
VL 15D6 CDR组
CDR-L1: SEQ ID NO:170的残基23-37
CDR-L2: SEQ ID NO:170的残基53-59
CDR-L3: SEQ ID NO:170的残基92-100
VH VH.1 1A11 CDR组
CDR-H1: SEQ ID NO:171的残基31-35
CDR-H2: SEQ ID NO:171的残基50-66
CDR-H3: SEQ ID NO:171的残基99-107
VH VH.1a 1A11 CDR组
CDR-H1: SEQ ID NO:172的残基31-35
CDR-H2: SEQ ID NO:172的残基50-66
CDR-H3: SEQ ID NO:172的残基99-107
VH VH.1b 1A11 CDR组
CDR-H1: SEQ ID NO:173的残基31-35
CDR-H2: SEQ ID NO:173的残基50-66
CDR-H3: SEQ ID NO:173的残基99-107
VH VH.2a 1A11 CDR组
CDR-H1: SEQ ID NO:174的残基31-35
CDR-H2: SEQ ID NO:174的残基50-66
CDR-H3: SEQ ID NO:174的残基99-107
VL VL.1 1A11 CDR组
CDR-L1: SEQ ID NO:175的残基24-34
CDR-L2: SEQ ID NO:175的残基50-56
CDR-L3: SEQ ID NO:175的残基89-97
VL VL.1a 1A11 CDR组
CDR-L1: SEQ ID NO:176的残基24-34
CDR-L2: SEQ ID NO:176的残基50-56
CDR-L3: SEQ ID NO:176的残基89-97
VL VL.1b 1A11 CDR组
CDR-L1: SEQ ID NO:177的残基24-34
CDR-L2: SEQ ID NO:177的残基50-56
CDR-L3: SEQ ID NO:177的残基50-56
VL VL.2a 1A11 CDR组
CDR-L1: SEQ ID NO:178的残基24-34
CDR-L2: SEQ ID NO:178的残基50-56
CDR-L3: SEQ ID NO:178的残基89-97
VH VH.1 38H12 CDR组
CDR-H1: SEQ ID NO:179的残基31-35
CDR-H2: SEQ ID NO:179的残基50-66
CDR-H3: SEQ ID NO:179的残基99-107
VH VH.1a 38H12 CDR组
CDR-H1: SEQ ID NO:180的残基31-35
CDR-H2: SEQ ID NO:180的残基50-66
CDR-H3: SEQ ID NO:180的残基99-107
VH VH.1b 38H12 CDR组
CDR-H1: SEQ ID NO:181的残基31-35
CDR-H2: SEQ ID NO:181的残基50-66
CDR-H3: SEQ ID NO:181的残基99-107
VH VH.2a 38H12 CDR组
CDR-H1: SEQ ID NO:182的残基31-35
CDR-H2: SEQ ID NO:182的残基50-66
CDR-H3: SEQ ID NO:182的残基99-107
VL VL.1 38H12 CDR组
CDR-L1: SEQ ID NO:183的残基24-34
CDR-L2: SEQ ID NO:183的残基50-56
CDR-L3: SEQ ID NO:183的残基89-97
VL VL.1a 38H12 CDR组
CDR-L1: SEQ ID NO:184的残基24-34
CDR-L2: SEQ ID NO:184的残基50-56
CDR-L3: SEQ ID NO:184的残基89-97
VL VL.1b 38H12 CDR组
CDR-L1: SEQ ID NO:185的残基24-34
CDR-L2: SEQ ID NO:185的残基50-56
CDR-L3: SEQ ID NO:185的残基89-97
VL VL.2a 38H12 CDR组
CDR-L1: SEQ ID NO:186的残基24-34
CDR-L2: SEQ ID NO:186的残基50-56
CDR-L3: SEQ ID NO:186的残基89-97
VH hA11VH.1 CDR组
CDR-H1: SEQ ID NO:187的残基31-35
CDR-H2: SEQ ID NO:187的残基50-66
CDR-H3: SEQ ID NO:187的残基99-107
VH hA11.A6 CDR组
CDR-H1: SEQ ID NO:188的残基31-35
CDR-H2: SEQ ID NO:188的残基50-66
CDR-H3: SEQ ID NO:188的残基99-107
VH hA11.A8 CDR组
CDR-H1: SEQ ID NO:189的残基31-35
CDR-H2: SEQ ID NO:189的残基50-66
CDR-H3: SEQ ID NO:189的残基99-107
VH hA11.C6 CDR组
CDR-H1: SEQ ID NO:190的残基31-35
CDR-H2: SEQ ID NO:190的残基50-66
CDR-H3: SEQ ID NO:190的残基99-107
VH hA11.A11 CDR组
CDR-H1: SEQ ID NO:191的残基31-35
CDR-H2: SEQ ID NO:191的残基50-66
CDR-H3: SEQ ID NO:191的残基99-107
VH hA11.B5 CDR组
CDR-H1: SEQ ID NO:192的残基31-35
CDR-H2: SEQ ID NO:192的残基50-66
CDR-H3: SEQ ID NO:192的残基99-107
VH hA11.E12 CDR组
CDR-H1: SEQ ID NO:193的残基31-35
CDR-H2: SEQ ID NO:193的残基50-66
CDR-H3: SEQ ID NO:193的残基99-107
VH hA11.G3 CDR组
CDR-H1: SEQ ID NO:194的残基31-35
CDR-H2: SEQ ID NO:194的残基50-66
CDR-H3: SEQ ID NO:194的残基99-107
VH hA11.F5 CDR组
CDR-H1: SEQ ID NO:195的残基31-35
CDR-H2: SEQ ID NO:195的残基50-66
CDR-H3: SEQ ID NO:195的残基99-107
VH hA11.H2 CDR组
CDR-H1: SEQ ID NO:196的残基31-35
CDR-H2: SEQ ID NO:196的残基50-66
CDR-H3: SEQ ID NO:196的残基99-107
VL h1A11VL.1 CDR组
CDR-L1: SEQ ID NO:197的残基24-34
CDR-L2: SEQ ID NO:197的残基50-56
CDR-L3: SEQ ID NO:197的残基89-97
VL h1A11.A2 CDR组
CDR-L1: SEQ ID NO:198的残基24-34
CDR-L2: SEQ ID NO:198的残基50-56
CDR-L3: SEQ ID NO:198的残基89-97
VL h1A11.A12 CDR组
CDR-L1: SEQ ID NO:199的残基24-34
CDR-L2: SEQ ID NO:199的残基50-56
CDR-L3: SEQ ID NO:199的残基89-97
VL h1A11.A7 CDR组
CDR-L1: SEQ ID NO:200的残基24-34
CDR-L2: SEQ ID NO:200的残基50-56
CDR-L3: SEQ ID NO:200的残基89-97
VL h1A11.B4 CDR组
CDR-L1: SEQ ID NO:201的残基24-34
CDR-L2: SEQ ID NO:201的残基50-56
CDR-L3: SEQ ID NO:201的残基89-97
VL h1A11.B5 CDR组
CDR-L1: SEQ ID NO:202的残基24-34
CDR-L2: SEQ ID NO:202的残基50-56
CDR-L3: SEQ ID NO:202的残基89-97
和
VL h1A11.E12 CDR组
CDR-L1: SEQ ID NO:203的残基24-34
CDR-L2: SEQ ID NO:203的残基50-56
CDR-L3: SEQ ID NO:.203的残基89-97。
6.根据权利要求5的结合蛋白，其包含来自至少两个可变结构域CDR组的CDRs。
7.根据权利要求6的结合蛋白，其中所述至少两个可变结构域CDR组是选自下述的一对CDR组：
VH 38H12 CDR组和VL 38H12 CDR组，
VH 1A11 CDR组和VL 1A11 CDR组，
VH 37D10 CDR组和VL 37D10 CDR组，
VH 32C7 CDR组和VL 32C7 CDR组，
VH 14G1组和VL 14G1 CDR组，
VH 14A11 CDR组和VL 14A11 CDR组，
VH 15D6 CDR组和VL 15D6 CDR组，
VH VH.1 1A11 CDR组和VL VL.1 1A11 CDR组，
VH VH.1 1A11 CDR组和VL VL.1a 1A11 CDR组，
VH VH.1 1A11 CDR组和VL VL.1b 1A11 CDR组，
VH VH.1 1A11 CDR组和VL VL.2a 1A11 CDR组，
VH VH.1a 1A11 CDR组和VL VL.1 1A11 CDR组，
VH VH.1a 1A11 CDR组和VL VL.1a 1A11 CDR组，
VH VH.1a 1A11 CDR组和VL VL.1b 1A11 CDR组，
VH VH.1a 1A11 CDR组和VL VL.2a 1A11 CDR组，
VH VH.1b 1A11 CDR组和VL VL.1 1A11 CDR组，
VH VH.1b 1A11 CDR组和VL VL.1a 1A11 CDR组，
VH VH.1b 1A11 CDR组和VL VL.1b 1A11 CDR组，
VH VH.1b 1A11 CDR组和VL VL.2a 1A11 CDR组，
VH VH.2a 1A11 CDR组和VL VL.1 1A11 CDR组，
VH VH.2a 1A11 CDR组和VL VL.1a 1A11 CDR组，
VH VH.2a 1A11 CDR组和VL VL.1b 1A11 CDR组，
VH VH.2a 1A11 CDR组和VL VL.2a 1A11 CDR组，
VH VH.1 38H12 CDR组和VL VL.1 38H12 CDR组，
VH VH.1 38H12 CDR组和VL VL.1a 38H12 CDR组，
VH VH.1 38H12 CDR组和VL VL.1b 38H12 CDR组，
VH VH.1 38H12 CDR组和VL VL.2a 38H12 CDR组，
VH VH.1a 38H12 CDR组和VL VL.1 38H12 CDR组，
VH VH.1a 38H12 CDR组和VL VL.1a 38H12 CDR组，
VH VH.1a 38H12 CDR组和VL VL.1b 38H12 CDR组，
VH VH.1a 38H12 CDR组和VL VL.2a 38H12 CDR组，
VH VH.1b 38H12 CDR组和VL VL.1 38H12 CDR组，
VH VH.1b 38H12 CDR组和VL VL.1a 38H12 CDR组，
VH VH.1b 38H12 CDR组和VL VL.1b 38H12 CDR组，
VH VH.1b 38H12 CDR组和VL VL.2a 38H12 CDR组，
VH VH.2a 38H12 CDR组和VL VL.1 38H12 CDR组，
VH VH.2a 38H12 CDR组和VL VL.1a 38H12 CDR组，
VH VH.2a 38H12 CDR组和VL VL.1b 38H12 CDR组，
VH VH.2a 38H12 CDR组和VL VL.2a 38H12 CDR组，
VH h1A11.A6 CDR组和VL h1A11VL.1 CDR组，
VH h1A11.C6 CDR组和VL h1A11VL.1 CDR组，
VH h1A11.A11 CDR组和VL h1A11VL.1 CDR组，
VH h1A11.A8 CDR组和VL h1A11VL.1 CDR组，
VH h1A11VH.1 CDR组和VL h1A11.B4 CDR组，
VH h1A11VH.1 CDR组和VL h1A11.A7 CDR组，
VH h1A11VH.1 CDR组和VL h1A11.A12 CDR组，
VH h1A11VH.1 CDR组和VL h1A11.A2 CDR组，
VH h1A11.B5 CDR组和VL h1A11.B5 CDR组，
VH h1A11.E12 CDR组和VL h1A11.E12 CDR组，
VH h1A11.G3 CDR组和VL h1A11.E12 CDR组，
VH h1A11.F5 CDR组和VL h1A11.E12 CDR组，和
VH h1A11.H2 CDR组和VL h1A11.E12 CDR组。
8.根据权利要求4的结合蛋白，其进一步包含人接纳体构架序列。
9.根据权利要求5的结合蛋白，其进一步包含人接纳体构架序列。
10.根据权利要求6的结合蛋白，其进一步包含人接纳体构架序列。
11.根据权利要求7的结合蛋白，其进一步包含人接纳体构架序列。
12.根据权利要求8的结合蛋白，其中所述人接纳体构架序列选自表3和4中列出的接纳体序列。
13.根据权利要求9的结合蛋白，其中所述人接纳体构架序列选自表3和4中列出的接纳体序列。
14.根据权利要求10的结合蛋白，其中所述人接纳体构架序列选自表3和4中列出的接纳体序列。
15.根据权利要求11的结合蛋白，其中所述人接纳体构架序列选自表3和4中列出的接纳体序列。
16.根据权利要求8的结合蛋白，其中所述人接纳体构架序列选自可变区序列中的任何构架序列，所述可变区序列选自下述：
。
17.根据权利要求9的结合蛋白，其中所述人接纳体构架序列选自可变区序列中的任何构架序列，所述可变区序列选自下述：
。
18.根据权利要求10的结合蛋白，其中所述人接纳体构架序列选自可变区序列中的任何构架序列，所述可变区序列选自下述：
。
19.根据权利要求11的结合蛋白，其中所述人接纳体构架序列选自可变区序列中的任何构架序列，所述可变区序列选自下述：
。
20.根据权利要求8的结合蛋白，其中所述结合蛋白包含选自下述的至少一个接纳体构架序列：
重链构架-1（H-FR1）：
E-V-Q-L-V-E-S-G-G-G-L-V-Q-P-G-G-S-L-R-L-S-C-A-A-S-G-F-T-F-X30（SEQ ID NO:143），其中X30是S、R或G；
重链构架-2（H-FR2）：W-V-R-Q-A-P-G-K-G-L-E-W-V-A（SEQ ID NO:144）；
重链构架-3（H-FR3）：
R-F-T-I-S-R-D-N-A-K-X11-S-L-Y-L-Q-M-N-S-L-R-A-E-D-T-A-V-Y-Y-C-X31-R（SEQ ID NO:145），其中；
X11是N或S；和
X31是A或S；
重链构架-4（H-FR4）：W-G-Q-G-T-L-V-T-V-S-S（SEQ ID NO:146）；
轻链构架-1（L-FR1）：
D-I-Q-M-T-Q-S-P-S-S-L-S-A-S-V-G-D-R-V-T-I-T-C（SEQ ID NO:147）；
轻链构架-2（L-FR2）：W-Y-Q-Q-K-P-G-K-X9-P-K-L-L-I-X15（SEQ ID NO:148），其中；
X9是A或S；和
X15是F或Y；
轻链构架-3（L-FR3）：
G-V-P-S-R-F-S-G-S-G-S-G-T-D-X15-T-L-T-I-S-S-L-Q-P-E-D-F-A-T-Y-Y-C（SEQ ID NO:149），其中；
X15是F或S；和
轻链构架-4（L-FR4）：F-G-Q-G-T-K-L-E-I-K（SEQ ID NO:150）。
21.根据权利要求9的结合蛋白，其中所述结合蛋白包含选自下述的至少一个接纳体构架序列：
重链构架-1（H-FR1）：
E-V-Q-L-V-E-S-G-G-G-L-V-Q-P-G-G-S-L-R-L-S-C-A-A-S-G-F-T-F-X30（SEQ ID NO:143），其中X30是S、R或G；
重链构架-2（H-FR2）：W-V-R-Q-A-P-G-K-G-L-E-W-V-A（SEQ ID NO:144）；
重链构架-3（H-FR3）：
R-F-T-I-S-R-D-N-A-K-X11-S-L-Y-L-Q-M-N-S-L-R-A-E-D-T-A-V-Y-Y-C-X31-R（SEQ ID NO:145），其中；
X11是N或S；和
X31是A或S；
重链构架-4（H-FR4）：W-G-Q-G-T-L-V-T-V-S-S（SEQ ID NO:146）；
轻链构架-1（L-FR1）：
D-I-Q-M-T-Q-S-P-S-S-L-S-A-S-V-G-D-R-V-T-I-T-C（SEQ ID NO:147）；
轻链构架-2（L-FR2）：W-Y-Q-Q-K-P-G-K-X9-P-K-L-L-I-X15（SEQ ID NO:148），其中；
X9是A或S；和
X15是F或Y；
轻链构架-3（L-FR3）：
G-V-P-S-R-F-S-G-S-G-S-G-T-D-X15-T-L-T-I-S-S-L-Q-P-E-D-F-A-T-Y-Y-C（SEQ ID NO:149），其中；
X15是F或S；和
轻链构架-4（L-FR4）：F-G-Q-G-T-K-L-E-I-K（SEQ ID NO:150）。
22.根据权利要求10的结合蛋白，其中所述结合蛋白包含选自下述的至少一个接纳体构架序列：
重链构架-1（H-FR1）：
E-V-Q-L-V-E-S-G-G-G-L-V-Q-P-G-G-S-L-R-L-S-C-A-A-S-G-F-T-F-X30（SEQ ID NO:143），其中X30是S、R或G；
重链构架-2（H-FR2）：W-V-R-Q-A-P-G-K-G-L-E-W-V-A（SEQ ID NO:144）；
重链构架-3（H-FR3）：
R-F-T-I-S-R-D-N-A-K-X11-S-L-Y-L-Q-M-N-S-L-R-A-E-D-T-A-V-Y-Y-C-X31-R（SEQ ID NO:145），其中；
X11是N或S；和
X31是A或S；
重链构架-4（H-FR4）：W-G-Q-G-T-L-V-T-V-S-S（SEQ ID NO:146）；
轻链构架-1（L-FR1）：
D-I-Q-M-T-Q-S-P-S-S-L-S-A-S-V-G-D-R-V-T-I-T-C（SEQ ID NO:147）；
轻链构架-2（L-FR2）：W-Y-Q-Q-K-P-G-K-X9-P-K-L-L-I-X15（SEQ ID NO:148），其中；
X9是A或S；和
X15是F或Y；
轻链构架-3（L-FR3）：
G-V-P-S-R-F-S-G-S-G-S-G-T-D-X15-T-L-T-I-S-S-L-Q-P-E-D-F-A-T-Y-Y-C（SEQ ID NO:149），其中；
X15是F或S；和
轻链构架-4（L-FR4）：F-G-Q-G-T-K-L-E-I-K（SEQ ID NO:150）。
23.根据权利要求11的结合蛋白，其中所述结合蛋白包含选自下述的至少一个接纳体构架序列：
重链构架-1（H-FR1）：
E-V-Q-L-V-E-S-G-G-G-L-V-Q-P-G-G-S-L-R-L-S-C-A-A-S-G-F-T-F-X30（SEQ ID NO:143），其中X30是S、R或G；
重链构架-2（H-FR2）：W-V-R-Q-A-P-G-K-G-L-E-W-V-A（SEQ ID NO:144）；
重链构架-3（H-FR3）：
R-F-T-I-S-R-D-N-A-K-X11-S-L-Y-L-Q-M-N-S-L-R-A-E-D-T-A-V-Y-Y-C-X31-R（SEQ ID NO:145），其中；
X11是N或S；和
X31是A或S；
重链构架-4（H-FR4）：W-G-Q-G-T-L-V-T-V-S-S（SEQ ID NO:146）；
轻链构架-1（L-FR1）：
D-I-Q-M-T-Q-S-P-S-S-L-S-A-S-V-G-D-R-V-T-I-T-C（SEQ ID NO:147）；
轻链构架-2（L-FR2）：W-Y-Q-Q-K-P-G-K-X9-P-K-L-L-I-X15（SEQ ID NO:148），其中；
X9是A或S；和
X15是F或Y；
轻链构架-3（L-FR3）：
G-V-P-S-R-F-S-G-S-G-S-G-T-D-X15-T-L-T-I-S-S-L-Q-P-E-D-F-A-T-Y-Y-C（SEQ ID NO:149），其中；
X15是F或S；和
轻链构架-4（L-FR4）：F-G-Q-G-T-K-L-E-I-K（SEQ ID NO:150）。
24.根据权利要求2的结合蛋白，其中所述结合蛋白包含人接纳体构架序列和具有选自下述的氨基酸序列的至少一个可变结构域：
。
25.根据权利要求24的结合蛋白，其中所述结合蛋白包含两个可变结构域，其中所述两个可变结构域具有选自下述的氨基酸序列：
。
26.根据权利要求8的结合蛋白，其中所述人接纳体构架序列包含在关键残基上的至少一个构架区氨基酸取代，所述关键残基选自：
与CDR接近的残基；
糖基化位点残基；
稀有残基；
能够与人DLL4相互作用的残基；
能够与CDR相互作用的残基；
规范残基；
在重链可变区和轻链可变区之间的接触残基；
在Vernier区内的残基；和
在Chothia定义的可变重链CDR1和Kabat定义的第一个重链构架之间重叠的区域中的残基。
27.根据权利要求11的结合蛋白，其中所述人接纳体构架序列包含在关键残基上的至少一个构架区氨基酸取代，所述关键残基选自：
与CDR接近的残基；
糖基化位点残基；
稀有残基；
能够与人DLL4相互作用的残基；
能够与CDR相互作用的残基；
规范残基；
在重链可变区和轻链可变区之间的接触残基；
在Vernier区内的残基；和
在Chothia定义的可变重链CDR1和Kabat定义的第一个重链构架之间重叠的区域中的残基。
28.根据权利要求25的结合蛋白，其中所述人接纳体构架序列包含在关键残基上的至少一个构架区氨基酸取代，所述关键残基选自：
与CDR接近的残基；
糖基化位点残基；
稀有残基；
能够与人DLL4相互作用的残基；
能够与CDR相互作用的残基；
规范残基；
在重链可变区和轻链可变区之间的接触残基；
在Vernier区内的残基；和
在Chothia定义的可变重链CDR1和Kabat定义的第一个重链构架之间重叠的区域中的残基。
29.根据权利要求26的结合蛋白，其中所述结合蛋白包含共有人可变结构域序列。
30.根据权利要求27的结合蛋白，其中所述结合蛋白包含共有人可变结构域序列。
31.根据权利要求28的结合蛋白，其中所述结合蛋白包含共有人可变结构域序列。
32.根据权利要求8的结合蛋白，其中所述人接纳体构架包含至少一个构架区氨基酸取代，其中所述构架的氨基酸序列与人种系接纳体构架的序列至少65％等同，并且包含与人种系接纳体构架等同的至少70个氨基酸残基。
33.根据权利要求11的结合蛋白，其中所述人接纳体构架包含至少一个构架区氨基酸取代，其中所述构架的氨基酸序列与人种系接纳体构架的序列至少65％等同，并且包含与人种系接纳体构架等同的至少70个氨基酸残基。
34.根据权利要求25的结合蛋白，其中所述人接纳体构架包含至少一个构架区氨基酸取代，其中所述构架的氨基酸序列与人种系接纳体构架的序列至少65％等同，并且包含与人种系接纳体构架等同的至少70个氨基酸残基。
35.根据权利要求2的结合蛋白，其中所述结合蛋白包含具有选自下述的氨基酸序列的至少一个可变结构域：
。
36.根据权利要求35的结合蛋白，其中所述结合蛋白包含两个可变结构域，其中所述两个可变结构域具有选自下述的氨基酸序列：
。
37.根据权利要求2的DLL4结合蛋白，其中所述结合蛋白能够阻断DLL4与Notch蛋白质的相互作用。
38.根据权利要求36的DLL4结合蛋白，其中所述结合蛋白能够阻断DLL4与选自下述的Notch蛋白质的相互作用：Notch-1、Notch-2、Notch-3、Notch-4及其组合。
39.根据权利要求2的DLL4结合蛋白，其中所述结合蛋白能够调节DLL4的生物学功能。
40.根据权利要求2的DLL4结合蛋白，其中所述结合蛋白能够中和DLL4的生物学功能。
41.根据权利要求2的DLL4结合蛋白，其中所述结合蛋白能够抑制VEGFR2活性、
VEGFR1活性或两者。
42.根据权利要求2的DLL4结合蛋白，其中所述结合蛋白能够消除DLL4结合其受体的能力。
43.根据权利要求2的DLL4结合蛋白，其中所述结合蛋白能够抑制正常血管生成。
44.根据权利要求2的DLL4结合蛋白，其中如通过表面等离振子共振测量的，所述结合
2 -1 -1 3 -1 -1
蛋白具有选自下述的与DLL4的结合速率常数（Kon）：至少约10M s ；至少约10M s ；至
4 -1 -1 5 -1 -1 6 -1 -1
少约10M s ；至少约10M s ；和至少约10M s 。
45.根据权利要求8的DLL4结合蛋白，其中如通过表面等离振子共振测量的，所述结合
2 -1 -1 3 -1 -1
蛋白具有选自下述的与DLL4的结合速率常数（Kon）：至少约10M s ；至少约10M s ；至
4 -1 -1 5 -1 -1 6 -1 -1
少约10M s ；至少约10M s ；和至少约10M s 。
46.根据权利要求24的DLL4结合蛋白，其中如通过表面等离振子共振测量的，所述结
2 -1 -1 3 -1 -1
合蛋白具有选自下述的与DLL4的结合速率常数（Kon）：至少约10M s ；至少约10M s ；
4 -1 -1 5 -1 -1 6 -1 -1
至少约10M s ；至少约10M s ；和至少约10M s 。
47.根据权利要求2的DLL4结合蛋白，其中如通过表面等离振子共振测量的，所述结合-3 -1 -4 -1
蛋白具有选自下述的与DLL4的解离速率常数（Koff）：至多约10 s ；至多约10 s ；至多-5 -1 -6 -1
约10 s ；和至多约10 s 。
48.根据权利要求8的DLL4结合蛋白，其中如通过表面等离振子共振测量的，所述结合-3 -1 -4 -1
蛋白具有选自下述的与DLL4的解离速率常数（Koff）：至多约10 s ；至多约10 s ；至多-5 -1 -6 -1
约10 s ；和至多约10 s 。
49.根据权利要求24的DLL4结合蛋白，其中如通过表面等离振子共振测量的，所述结-3 -1 -4 -1
合蛋白具有选自下述的与DLL4的解离速率常数（Koff）：至多约10 s ；至多约10 s ；至-5 -1 -6 -1
多约10 s ；和至多约10 s 。
50.根据权利要求2的DLL4结合蛋白，其中所述结合蛋白具有选自下述的与DLL4的解-7 -8 -9 -10 -11
离常数（KD）：至多约10 M；至多约10 M；至多约10 M；至多约10 M；至多约10 M；
-12 -13
至多约10 M；和至多10 M。
51.根据权利要求8的DLL4结合蛋白，其中所述结合蛋白具有选自下述的与DLL4的解-7 -8 -9 -10 -11
离常数（KD）：至多约10 M；至多约10 M；至多约10 M；至多约10 M；至多约10 M；
-12 -13
至多约10 M；和至多10 M。
52.根据权利要求24的DLL4结合蛋白，其中所述结合蛋白具有选自下述的与DLL4的-7 -8 -9 -10 -11
解离常数（KD）：至多约10 M；至多约10 M；至多约10 M；至多约10 M；至多约10 M；
-12 -13
至多约10 M；和至多10 M。
53.一种包含权利要求2中所述的结合蛋白的抗体构建体，所述抗体构建体进一步包含接头多肽或免疫球蛋白恒定结构域。
54.根据权利要求53的抗体构建体，其选自：
免疫球蛋白分子，
单克隆抗体，
嵌合抗体，
CDR嫁接的抗体，
Fab，
Fab'，
F（ab'）2，
Fv，
二硫键连接的Fv，
scFv，
单结构域抗体，
双抗体，
多特异性抗体，
双重特异性抗体，和
双特异性抗体。
55.根据权利要求53的抗体构建体，其中所述抗体构建体包含选自下述的重链免疫球蛋白恒定结构域：
人IgM恒定结构域，
人IgG1恒定结构域，
人IgG2恒定结构域，
人IgG3恒定结构域，
人IgG4恒定结构域，
人IgE恒定结构域，和
人IgA恒定结构域。
56.根据权利要求53的抗体构建体，其包含具有选自下述的氨基酸序列的免疫球蛋白恒定结构域：SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6及其组合。
57.一种包含如权利要求53-56中任一项中所述的抗体构建体的抗体缀合物，所述抗体缀合物进一步包含选自下述的试剂：显像剂、治疗剂、细胞毒剂和免疫粘附分子。
58.根据权利要求57的抗体缀合物，其中所述试剂是选自下述的显像剂：放射性标记、酶、荧光标记、发光标记、生物发光标记、磁性标记和生物素。
3 14
59.根据权利要求57的抗体缀合物，其中所述显像剂是选自下述的放射性标记：H、C、
35 90 99 111 125 131 177 166 153
S、Y、Tc、In、 I、I、 Lu、Ho和 Sm。
60.根据权利要求57的抗体缀合物，其中所述试剂是选自下述的治疗剂或细胞毒剂：
抗代谢物、烷化剂、抗生素、生长因子、细胞因子、抗血管生成剂、抗有丝分裂剂、蒽环霉素、毒素和细胞凋亡剂。
61.根据权利要求53的抗体构建体，其中所述结合蛋白具有人糖基化模式。
62.根据权利要求57的抗体缀合物，其中所述结合蛋白具有人糖基化模式。
63.根据权利要求4的结合蛋白，其中所述结合蛋白作为晶体存在。
64.根据权利要求53的抗体构建体，其中所述抗体构建体作为晶体存在。
65.根据权利要求57的抗体缀合物，其中所述抗体缀合物作为晶体存在。
66.根据权利要求63的结合蛋白，其中所述晶体是无载体的药学控释晶体。
67.根据权利要求64的抗体构建体，其中所述晶体是无载体的药学控释晶体。
68.根据权利要求65的抗体缀合物，其中所述晶体是无载体的药学控释晶体。
69.根据权利要求63的结合蛋白，其中所述结合蛋白晶体具有比所述结合蛋白的可溶性配对物更大的体内半衰期。
70.根据权利要求64的抗体构建体，其中所述抗体构建体晶体具有比所述抗体构建体的可溶性配对物更大的体内半衰期。
71.根据权利要求65的抗体缀合物，其中所述抗体缀合物晶体具有比所述抗体缀合物的可溶性配对物更大的体内半衰期。
72.根据权利要求63的结合蛋白，其中所述结合蛋白晶体保留所述非晶体形式的结合蛋白的生物学活性。
73.根据权利要求64的抗体构建体，其中所述抗体构建体晶体保留所述非晶体形式的抗体构建体的生物学活性。
74.根据权利要求65的抗体缀合物，其中所述抗体缀合物晶体保留所述非晶体形式的抗体缀合物的生物学活性。
75.一种分离的核酸，其编码权利要求2中所述的结合蛋白氨基酸序列。
76.一种编码选自下述的多肽的分离的核酸：包含重链可变结构域的多肽，其中所述重链可变结构域包含如权利要求2中所述的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的一个或多个；包含轻链可变结构域的多肽，其中所述轻链可变结构域包含如权利要求2中所述的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的一个或多个；以及两种多肽的组合。
77.一种载体，其包含根据权利要求76的分离的核酸。
78.根据权利要求77的载体，其中所述载体选自：pcDNA、pTT、pTT3、pEFBOS、pBV、pJV和pBJ。
79.一种宿主细胞，其包含权利要求77中所述的载体。
80.根据权利要求79的宿主细胞，其中所述宿主细胞是原核细胞。
81.根据权利要求80的宿主细胞，其中所述宿主细胞是大肠杆菌细胞。
82.根据权利要求79的宿主细胞，其中所述宿主细胞是真核细胞。
83.根据权利要求82的宿主细胞，其中所述真核细胞选自：原生生物细胞、动物细胞、植物细胞和真菌细胞。
84.根据权利要求83的宿主细胞，其中所述真核细胞是选自下述的动物细胞：哺乳动物细胞、禽类细胞和昆虫细胞。
85.根据权利要求84的宿主细胞，其中所述哺乳动物细胞是CHO细胞。
86.根据权利要求84的宿主细胞，其中所述哺乳动物细胞是COS细胞。
87.根据权利要求83的宿主细胞，其中所述真菌细胞是酿酒酵母。
88.根据权利要求84的宿主细胞，其中所述昆虫细胞是Sf9细胞。
89.一种产生结合人DLL4的结合蛋白的方法，其包括在足以产生结合人DLL4的结合蛋白的条件下在培养基中培养如权利要求79中所述的宿主细胞。
90.一种DLL4结合蛋白，其根据权利要求89的方法产生。
91.一种用于释放结合蛋白的组合物，所述组合物包含：
（a）制剂，其中所述制剂包含如权利要求63-65中任一项中所述的结晶结合蛋白，和成分；和
（b）至少一种聚合载体。
92.根据权利要求93的组合物，其中所述聚合载体是选自下述的一种或多种的聚合物：聚丙烯酸、聚氰基丙烯酸酯、聚氨基酸、聚酐、聚酯肽、聚酯、聚乳酸、乳酸乙醇酸共聚物或PLGA、聚b-羟基丁酸酯、聚己内酯、聚二氧杂环己酮、聚乙二醇、聚（羟丙基）甲基丙烯酰胺、聚有机磷腈、聚原酸酯、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、马来酸酐-烷基乙烯基醚共聚物、pluronic多元醇、清蛋白、藻酸盐、纤维素和纤维素衍生物、胶原、血纤蛋白、明胶、透明质酸、寡糖、糖胺聚糖、硫酸化多糖、其掺合物及其共聚物。
93.根据权利要求91的组合物，其中所述成分选自清蛋白、蔗糖、海藻糖、乳糖醇、明胶、羟丙基-β-环糊精、甲氧基聚乙二醇和聚乙二醇。
94.一种用于治疗哺乳动物的方法，其包括给哺乳动物施用有效量的如权利要求91中所述的组合物的步骤。
95.一种药物组合物，其包含如权利要求2中所述的DLL4结合蛋白和药学可接受的载体。
96.权利要求95的药物组合物，其进一步包含用于治疗其中DLL4活性是有害的病症的至少一种另外试剂。
97.权利要求95的药物组合物，其中所述另外试剂选自下述：治疗剂；显像剂；抗肿瘤药；化学治疗剂；血管生成抑制剂；抗VEGF抗体；抗EGFR抗体；抗cMet抗体；抗ErbB3抗体；抗HER2抗体；抗CD20抗体；阿柏西普；激酶抑制剂；共刺激分子阻断剂；抗B7.2抗体；
CTLA4-Ig；粘附分子阻断剂；抗E选择素抗体；抗L选择素抗体；抗细胞因子抗体或其功能片段；抗IL-18抗体；抗TNF抗体；抗IL-6抗体；氨甲蝶呤；皮质类固醇；环孢素；雷帕霉素；
FK506；DNA烷化剂；顺铂；卡铂；抗微管蛋白剂；紫杉醇；多西他赛；阿霉素；吉西他滨；吉西他宾；蒽环霉素；亚得里亚霉素；拓扑异构酶I抑制剂；拓扑异构酶II抑制剂；5-氟尿嘧啶（5-FU）；甲酰四氢叶酸；依立替康；受体酪氨酸激酶抑制剂；凋亡抑制剂；Bcl2/Bclx抑制剂；埃罗替尼；吉非替尼；COX-2抑制剂；塞来昔布；环孢素；雷帕霉素；可检测标记或报道分子；TNF拮抗剂；抗风湿剂；肌肉弛缓剂；麻醉药；止痛剂；麻醉剂；镇静剂；局部麻醉剂；
神经肌肉阻断剂；抗微生物剂；抗牛皮癣剂；皮质类固醇；促蛋白合成类固醇；促红细胞生成素；免疫接种；免疫球蛋白；免疫抑制剂；生长激素；激素替代药物；放射性药物；抗抑郁剂；抗精神病药；刺激剂；哮喘药物治疗；β激动剂；吸入类固醇；肾上腺素；其肾上腺素类似物；细胞因子；和细胞因子拮抗剂。
98.一种用于减少人DLL4活性的方法，其包括使人DLL4与如权利要求2中所述的结合蛋白接触，从而使得所述人DLL4活性减少。
99.一种用于减少患有其中DLL4活性是有害的病症的人受试者中的人DLL4活性的方法，其包括给所述人受试者施用如权利要求2中所述的结合蛋白，从而使得所述人受试者中的人DLL4活性减少。
100.一种用于就其中DLL4活性是有害的疾病或病症治疗受试者的方法，通过给所述受试者施用如权利要求2中所述的DLL4结合蛋白，从而使得实现治疗。
101.权利要求100的方法，其中所述病症选自：乳腺癌、结肠癌、直肠癌、肺癌、口咽癌、下咽癌、食管癌、胃癌、胰腺癌、肝癌、膀胱癌、胆管癌、小肠癌、泌尿道癌、女性生殖道癌、男性生殖道癌、内分泌腺癌、皮肤癌、血管瘤、黑素瘤、肉瘤、脑瘤、神经癌、眼肿瘤、脑膜癌、来自造血恶性肿瘤的实体瘤、肿瘤转移灶、眼新生血管形成、水肿、类风湿性关节炎、粥样硬化斑块、Crohn氏病、炎性肠病、顽固性腹水、牛皮癣、肉瘤样病、动脉硬化、败血病、溃疡病、烧伤、胰腺炎、多囊卵巢病（POD）、子宫内膜异位症、子宫肌瘤、良性前列腺肥大、T细胞急性成淋巴细胞白血病（T-ALL）、伴皮质下梗死和脑白质病的脑常染色体显性动脉病（CADASIL）、多发性硬化（MS）、法洛四联症（TOF）、Alagille综合征（AS）、黄斑变性和年龄相关的黄斑变性疾病、以及特征在于异常DLL4活性的其他血管生成非依赖性疾病和依赖性疾病。
102.根据权利要求101的方法，其中所述病症是原发性和转移性癌。
103.根据权利要求101的方法，其中所述泌尿道癌选自肾癌、膀胱癌和尿道上皮癌。
104.根据权利要求101的方法，其中所述女性生殖道癌选自宫颈癌、子宫癌、卵巢癌、绒毛膜癌和妊娠滋养细胞疾病。
105.根据权利要求101的方法，其中所述男性生殖道癌选自前列腺癌、精囊癌、睾丸癌和生殖细胞肿瘤。
106.根据权利要求101的方法，其中所述内分泌腺癌选自甲状腺癌、肾上腺癌和垂体癌。
107.根据权利要求101的方法，其中所述肉瘤选自骨肉瘤、软组织肉瘤和卡波济肉瘤。
108.根据权利要求101的方法，其中所述脑膜癌选自星形细胞瘤、神经胶质瘤、成胶质细胞瘤、成视网膜细胞瘤、神经瘤、成神经细胞瘤、许旺细胞瘤和脑膜瘤。
109.根据权利要求101的方法，其中来自造血恶性肿瘤的所述实体瘤是白血病、何杰金氏白血病、非何杰金氏白血病、淋巴瘤、何杰金氏淋巴瘤和非何杰金氏淋巴瘤。
110.110. 根据权利要求101的方法，其中所述眼新生血管形成选自糖尿病失明、视网膜病变、年龄诱导的黄斑变性和发红。
111.根据权利要求101的方法，其中对于所述受试者的所述施用是通过选自下述的至少一种方式：肠胃外、皮下、肌内、静脉内、动脉内、关节内、支气管内、腹内、囊内、软骨内、腔内、体腔内、小脑内、脑室内、结肠内、颈内、胃内、肝内、心肌内、骨内、骨盆内、心包内、腹膜内、胸膜内、前列腺内、肺内、直肠内、肾内、视网膜内、脊柱内、滑膜内、胸内、子宫内、膀胱内、推注、阴道、直肠、颊、舌下、鼻内和经皮。
112.一种治疗患有其中DLL4是有害的病症的患者的方法，其包括在治疗有效量的第二种试剂施用之前、同时或之后，施用如权利要求2中所述的DLL4结合蛋白的步骤，其中所述第二种试剂选自：能够结合人VEGFR2的抗体或其片段；氨甲蝶呤；能够结合人TNF的抗体或其片段；皮质类固醇；环孢素；雷帕霉素；FK506；非类固醇消炎药（NSAID）；放射治疗剂；抗肿瘤药；化学治疗剂；DNA烷化剂；顺铂；卡铂；抗微管蛋白剂；紫杉醇；多西他赛；紫衫酚；阿霉素；吉西他滨；吉西他宾；蒽环霉素；亚得里亚霉素；拓扑异构酶I抑制剂；拓扑异构酶II抑制剂；5-氟尿嘧啶（5-FU）；甲酰四氢叶酸；依立替康；受体酪氨酸激酶抑制剂；
厄洛替尼；吉非替尼；COX-2抑制剂；塞来昔布；激酶抑制剂；血管生成抑制剂；抗VEGF抗体；阿柏西普；共刺激分子阻断剂；抗B7.1抗体；抗B7.2抗体；CTLA4-Ig；抗CD20抗体；粘附分子阻断剂；抗LFA-1抗体；抗E选择素抗体；和抗L选择素抗体；小分子抑制剂；抗细胞因子抗体或其功能片段；抗IL-18抗体；抗TNF抗体；抗IL-6抗体；抗细胞因子受体抗体；
可检测标记或报道物；TNF拮抗剂；抗风湿剂；肌肉弛缓剂；麻醉药；止痛剂；麻醉剂；镇静剂；局部麻醉剂；神经肌肉阻断剂；抗微生物剂；抗牛皮癣剂；皮质类固醇；促蛋白合成类固醇；促红细胞生成素；免疫接种；免疫球蛋白；免疫抑制剂；生长激素；激素替代药物；放射性药物；抗抑郁剂；抗精神病药；刺激剂；哮喘药物治疗；β激动剂；吸入类固醇；肾上腺素；肾上腺素类似物；细胞因子；和细胞因子拮抗剂。
113.根据权利要求2的结合蛋白，其中所述结合蛋白是抗体。
114.根据权利要求113的抗体，其中所述抗体选自单克隆抗体、全长四聚免疫球蛋白、IgG分子、IgG1分子、嵌合抗体、CDR嫁接的抗体、人源化抗体和亲和力成熟的抗体。
115.根据权利要求114的抗体，其中所述抗体是单克隆抗体。
116.根据权利要求36的结合蛋白，其中所述两个可变结构域具有选自下述的氨基酸序列：
SEQ ID NO:188和SEQ ID NO:197,
SEQ ID NO:190和SEQ ID NO:197，和
SEQ ID NO:191和SEQ ID NO:197。
117.根据权利要求36的结合蛋白，其中所述两个可变结构域具有SEQ ID NO:181和SEQ ID NO:185的氨基酸序列。
治疗性DLL4结合蛋白
2011年2月24日创建的所述ASCII拷贝命名为10920WOO1.txt，并且大小是111,426字节。
发明领域
黄斑变性和年龄相关的黄斑变性疾病中的用途。
利用的一种系统是Notch信号传导途径。这个途径尤其是Notch受体对于功能性肿瘤血管
生成也是关键的。因此，Notch受体功能的抑制、Notch受体的阻断和/或Notch信号传导
途径的阻断是抗癌组合物和疗法的潜在策略。Notch受体的小分子抑制剂已证明是毒性的，
因为它们抑制遍及机体的Notch受体的野生型（正常）组织表达。因此，Notch信号传导途
径的不同成员应视为用于治疗学的潜在靶。
Shutter等人，Genes Dev.，14（11）：1313-1318（2000）；Gale等人，Proc. Natl. Acad.
Sci. USA，101（45）：15949-15954（2004）；Krebs等人，Genes Dev.，14（11）：1343-1352
（2000））。由于脉管发育中的主要缺陷，对于DLL4杂合的小鼠是胚胎致死的（Gale等人，
Proc. Natl. Acad. Sci. USA，101（45）：15949-15954（2004）；Duarte等人，Genes Dev.，
18（20）：2474-2478（2004）；Krebs等人，Genes Dev.，18（20）：2469-2473（2004））。DLL4的表达可以通过VEGF诱导（Liu等人，Mol. Cell Biol.，23（1）：14-25（2003）；Lobov等
人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA，104（9）：3219-3224（2007））。总之，DLL4可以负面调
节VEGF信号传导，部分通过阻遏VEGFR2且诱导VEGFR1（Harrington等人，Microvasc.
Res.，75（2）：144-154（2008）；Suchting等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA，104（9）：
3225-3230（2007））。在DLL4和VEGF之间的巧妙配合对于功能性血管生成是必需的。
135-144（2001）；Patel等人，Cancer Res.，65（19）：8690-8697（2005）；Patel等人，Clin. Cancer Res.，12（16）：4836-4844（2006）；Noguera-Troise 等 人，Nature，444（7122）：
1032-1037（2006））。DLL4的阻断潜在抑制多重模型中的原发性肿瘤生长（Noguera-Troise
等人，Nature，444（7122）：1032-1037（2006）；Ridgway等人，Nature，444（7122）：1083-1087（2006）；Scehnet等人，Blood，109（11）：4753-4760（2007））。DLL4的抑制甚至针对对于
抗VEGF疗法有抵抗力的肿瘤也是有效的。DLL4和VEGF的组合抑制提供了增强的抗肿瘤活
性。有趣的是，与减少肿瘤脉管形成的VEGF抑制不同，DLL4阻断导致肿瘤脉管系统密度中
的增加，其中脉管是异常的，不能支持有效的血液运输，并且是有效地无功能的。因此，DLL4
提供了用于癌症治疗的潜在靶。
克隆抗体、嵌合抗体、cDNA嫁接抗体（CDR grafted antibody）、人源化抗体、灵长类化的
（primate-ized）抗体、亲和力成熟的抗体、及其能够结合人DLL4的片段。优选地，本文描述
的结合蛋白以高亲和力结合人DLL4。更优选地，根据本发明的结合蛋白能够中和人DLL4。
本发明还提供了制备且使用DLL4结合蛋白的方法。
NO:159、SEQ ID NO:160、SEQ ID NO:161、SEQ ID NO:162、SEQ ID NO:163和SEQ ID NO:164。
CDRs，其中
CDR-H1选自：
X1–X2–X3–X4–X5（SEQ ID NO:151），其中；
X1是N、H或Y；
X2是F；
X3是P；
X4是M；
X5是A或S；
SEQ ID NO:157的残基31-35（CDR-H1 38H12）；
SEQ ID NO:161的残基31-35（CDR-H1 37D10）；
SEQ ID NO:163的残基31-35（CDR-H1 32C7）；
SEQ ID NO:165的残基31-35（CDR-H1 14G1）；
SEQ ID NO:167的残基31-35（CDR-H1 14A11）；
SEQ ID NO:169的残基31-35（CDR-H1 15D6）；
SEQ ID NO:171的残基31-35（CDR-H1 VH.1 1A11）；
SEQ ID NO:172的残基31-35（CDR-H1 VH.1a 1A11）；
SEQ ID NO:173的残基31-35（CDR-H1 VH.1b 1A11）；
SEQ ID NO:174的残基31-35（CDR-H1 VH.2a 1A11）；
SEQ ID NO:179的残基31-35（CDR-H1 VH.1 38H12）；
SEQ ID NO:180的残基31-35（CDR-H1 VH.1A 38H12）；
SEQ ID NO:181的残基31-35（CDR-H1 VH.1b 38H12）；
SEQ ID NO:182的残基31-35（CDR-H1 VH.2a 38H12）；
SEQ ID NO:187的残基31-35（CDR-H1 h1A11VH.1）；
SEQ ID NO:188的残基31-35（CDR-H1 h1A11.A6）；
SEQ ID NO:189的残基31-35（CDR-H1 h1A11.A8）；
SEQ ID NO:190的残基31-35（CDR-H1 h1A11.C6）；
SEQ ID NO:191的残基31-35（CDR-H1 h1A11.A11）；
SEQ ID NO:192的残基31-35（CDR-H1 h1A11.B5）；
SEQ ID NO:193的残基31-35（CDR-H1 h1A11.E12）；
SEQ ID NO:194的残基31-35（CDR-H1 h1A11.G3）；
SEQ ID NO:195的残基31-35（CDR-H1 h1A11.F5）；和
SEQ ID NO:196的残基31-35（CDR-H1 h1A11.H2）；
CDR-H2选自：
X1–X2–X3–X4–X5–X6–X7–X8–X9–X10–X11–X12–X13–X14–X15–X16–X17（SEQ ID
NO:152），其中；
X1是T或S；
X2是I；
X3是S；
X4是S或G；
X5是S；
X6是D；
X7是G、A、D、S或E；
X8是T或W；
X9是T、P或A；
X10是Y、S、T或N；
X11是Y或I；
X12是R或G；
X13是D；
X14是S；
X15是V；
X16是K；和
X17是G；
SEQ ID NO:157的残基50-66（CDR-H2 38H12）；
SEQ ID NO:161的残基50-68（CDR-H2 37D10）；
SEQ ID NO:163的残基50-66（CDR-H2 32C7）；
SEQ ID NO:165的残基50-66（CDR-H2 14G1）；
SEQ ID NO:167的残基50-66（CDR-H2 14A11）；
SEQ ID NO:169的残基50-66（CDR-H2 15D6）；
SEQ ID NO:171的残基50-66（CDR-H2 VH.1 1A11）；
SEQ ID NO:172的残基50-66（CDR-H2 VH.1a 1A11）；
SEQ ID NO:173的残基50-66（CDR-H2 VH.1b 1A11）；
SEQ ID NO:174的残基50-66（CDR-H2 VH.2a 1A11）；
SEQ ID NO:179的残基50-66（CDR-H2 VH.1 38H12）；
SEQ ID NO:180的残基50-66（CDR-H2 VH.1A 38H12）；
SEQ ID NO:181的残基50-66（CDR-H2 VH.1b 38H12）；
SEQ ID NO:182的残基31-35（CDR-H1 VH.2a 38H12）；
SEQ ID NO:187的残基50-66（CDR-H2 h1A11VH.1）；
SEQ ID NO:188的残基50-66（CDR-H2 h1A11.A6）；
SEQ ID NO:189的残基50-66（CDR-H2 h1A11.A8）；
SEQ ID NO:190的残基50-66（CDR-H2 h1A11.C6）；
SEQ ID NO:191的残基50-66（CDR-H2 h1A11.A11）；
SEQ ID NO:192的残基50-66（CDR-H2 h1A11.B5）；
SEQ ID NO:193的残基50-66（CDR-H2 h1A11.E12）；
SEQ ID NO:194的残基50-66（CDR-H2 h1A11.G3）；
SEQ ID NO:195的残基50-66（CDR-H2 h1A11.F5）；和
SEQ ID NO:196的残基50-66（CDR-H2 h1A11.H2）；
CDR-H3选自：
X1–X2–X3–X4–X5–X6–X7–X8–X9（SEQ ID NO:153），其中；
X1是G；
X2是Y；
X3是Y；
X4是N；
X5是S；
X6是P；
X7是F；
X8是A；和
X9是Y、F或S；
SEQ ID NO:157的残基99-107（CDR-H3 38H12）；
SEQ ID NO:161的残基101-111（CDR-H3 37D10）；
SEQ ID NO:163的残基99-105（CDR-H3 32C7）；
SEQ ID NO:165的残基99-105（CDR-H3 14G1）；
SEQ ID NO:167的残基99-110（CDR-H3 14A11）；
SEQ ID NO:169的残基99-110（CDR-H3 15D6）；
SEQ ID NO:171的残基99-107（CDR-H3 VH.1 1A11）；
SEQ ID NO:172的残基99-107（CDR-H3 VH.1a 1A11）；
SEQ ID NO:173的残基99-107（CDR-H3 VH.1b 1A11）；
SEQ ID NO:174的残基99-107（CDR-H3 VH.2a 1A11）；
SEQ ID NO:179的残基99-107（CDR-H3 VH.1 38H12）；
SEQ ID NO:180的残基99-107（CDR-H3 VH.1A 38H12）；
SEQ ID NO:181的残基99-107（CDR-H2 VH.1b 38H12）；
SEQ ID NO:182的残基99-107（CDR-H1 VH.2a 38H12）；
SEQ ID NO:187的残基99-107（CDR-H3 h1A11VH.1）；
SEQ ID NO:188的残基99-107（CDR-H3 h1A11.A6）；
SEQ ID NO:189的残基99-107（CDR-H3 h1A11.A8）；
SEQ ID NO:190的残基99-107（CDR-H3 h1A11.C6）；
SEQ ID NO:191的残基99-107（CDR-H3 h1A11.A11）；
SEQ ID NO:192的残基99-107（CDR-H3 h1A11.B5）；
SEQ ID NO:193的残基99-107（CDR-H3 h1A11.E12）；
SEQ ID NO:194的残基99-107（CDR-H3 h1A11.G3）；
SEQ ID NO:195的残基99-107（CDR-H3 h1A11.F5）；和
SEQ ID NO:196的残基99-107（CDR-H3 h1A11.H2）；
CDR-L1选自：
X1–X2–X3–X4–X5–X6–X7–X8–X9–X10–X11（SEQ ID NO:154），其中；
X1是R；
X2是A；
X3是S；
X4是E或Q；
X5是D或E；
X6是I；
X7是Y或W；
X8是S、I、Y、N或R；
X9是N；
X10是L；和
X11是A；
SEQ ID NO:158的残基24-34（CDR-L1 38H12）；
SEQ ID NO:162的残基24-34（CDR-L1 37D10）；
SEQ ID NO:164的残基24-34（CDR-L1 32C7）；
SEQ ID NO:166的残基24-34（CDR-L1 14G1）；
SEQ ID NO:168的残基23-37（CDR-L1 14A11）；
SEQ ID NO:170的残基23-37（CDR-L1 15D6）；
SEQ ID NO:175的残基24-34（CDR-L1 VL.1 1A11）；
SEQ ID NO:176的残基24-34（CDR-L1 VL.1a 1A11）；
SEQ ID NO:177的残基24-34（CDR-L1 VL.1b 1A11）；
SEQ ID NO:178的残基24-34（CDR-L1 VL.2a 1A11）；
SEQ ID NO:183的残基24-34（CDR-L1 VL.1 38H12）；
SEQ ID NO:184的残基24-34（CDR-L1 VL.1a 38H12）；
SEQ ID NO:185的残基24-34（CDR-L1 VL.1b 38H12）；
SEQ ID NO:186的残基24-34（CDR-L1 VL.2a 38H12）；
SEQ ID NO:197的残基24-34（CDR-L1 h1A11VL.1）；
SEQ ID NO:198的残基24-34（CDR-L1 h1A11.A2）；
SEQ ID NO:199的残基24-34（CDR-L1 h1A11.A12）；
SEQ ID NO:200的残基24-34（CDR-L1 h1A11.A7）；
SEQ ID NO:201的残基24-34（CDR-L1 h1A11.B4）；
SEQ ID NO:202的残基24-34（CDR-L1 h1A11.B5）；和
SEQ ID NO:203的残基24-34（CDR-L1 h1A11.E12）；
CDR-L2选自：
X1–X2–X3–X4–X5–X6–X7（SEQ ID NO:155），其中；
X1是D；
X2是T；
X3是N或S；
X4是N、D、S、I、Y或V；
X5是L；
X6是A；和
X7是D；
SEQ ID NO:158的残基50-56（CDR-L2 38H12）；
SEQ ID NO:162的残基50-56（CDR-L2 37D10）；
SEQ ID NO:164的残基50-56（CDR-L2 32C7）；
SEQ ID NO:166的残基50-56（CDR-L2 14G1）；
SEQ ID NO:168的残基53-59（CDR-L2 14A11）；
SEQ ID NO:170的残基53-59（CDR-L2 15D6）；
SEQ ID NO:175的残基50-56（CDR-L2 VL.1 1A11）；
SEQ ID NO:176的残基50-56（CDR-L2 VL.1a 1A11）；
SEQ ID NO:177的残基50-56（CDR-L2 VL.1b 1A11）；
SEQ ID NO:178的残基50-56（CDR-L2 VL.2a 1A11）；
SEQ ID NO:183的残基50-56（CDR-L2 VL.1 38H12）；
SEQ ID NO:184的残基50-56（CDR-L2 VL.1a 38H12）；
SEQ ID NO:185的残基50-56（CDR-L2 VL.1b 38H12）；
SEQ ID NO:186的残基50-56（CDR-L2 VL.2a 38H12）；
SEQ ID NO:197的残基50-56（CDR-L2 h1A11VL.1）；
SEQ ID NO:198的残基50-56（CDR-L2 h1A11.A2）；
SEQ ID NO:199的残基50-56（CDR-L2 h1A11.A12）；
SEQ ID NO:200的残基50-56（CDR-L2 h1A11.A7）；
SEQ ID NO:201的残基50-56（CDR-L2 h1A11.B4）；
SEQ ID NO:202的残基50-56（CDR-L2 h1A11.B5）；和
SEQ ID NO:203的残基50-56（CDR-L2 h1A11.E12）；
和
CDR-L3选自：
X1–X2–X3–X4–X5–X6–X7–X8–X9（SEQ ID NO:156），其中；
X1是Q；
X2是Q；
X3是Y；
X4是N、D或T；
X5是N、Y或W；
X6是Y或V；
X7是P；
X8是P；和
X9是T。
SEQ ID NO:164的残基89-97（CDR-L3 32C7）；
SEQ ID NO:166的残基89-98（CDR-L3 14G1）；
SEQ ID NO:168的残基92-100（CDR-L3 14A11）；
SEQ ID NO:170的残基92-100（CDR-L3 15D6）；
SEQ ID NO:175的残基89-97（CDR-L3 VL.1 1A11）；
SEQ ID NO:176的残基89-97（CDR-L3 VL.1a 1A11）；
SEQ ID NO:177的残基89-97（CDR-L3 VL.1b 1A11）；
SEQ ID NO:178的残基89-97（CDR-L3 VL.2a 1A11）；
SEQ ID NO:183的残基89-97（CDR-L3 VL.1 38H12）；
SEQ ID NO:184的残基89-97（CDR-L3 VL.1a 38H12）；
SEQ ID NO:185的残基89-97（CDR-L3 VL.1b 38H12）；
SEQ ID NO:186的残基89-97（CDR-L3 VL.2a 38H12）；
SEQ ID NO:197的残基89-97（CDR-L3 h1A11VL.1）；
SEQ ID NO:198的残基89-97（CDR-L3 h1A11.A2）；
SEQ ID NO:199的残基89-97（CDR-L3 h1A11.A12）；
SEQ ID NO:200的残基89-97（CDR-L3 h1A11.A7）；
SEQ ID NO:201的残基89-97（CDR-L3 h1A11.B4）；
SEQ ID NO:202的残基89-97（CDR-L3 h1A11.B5）；
SEQ ID NO:203的残基89-97（CDR-L3 h1A11.E12）。
SEQ ID NO:157的残基31-35（CDR-H1 38H12）；SEQ ID NO:157的残基50-66（CDR-H2
38H12）；SEQ ID NO:157的残基99-107（CDR-H3 38H12）；
SEQ ID NO:158的残基24-34（CDR-L1 38H12）；SEQ ID NO:158的残基50-56（CDR-L2
38H12）；SEQ ID NO:158的残基89-97（CDR-L3 38H12）；
SEQ ID NO:159的残基31-35（CDR-H1 1A11）；SEQ ID NO:159的残基50-66（CDR-H2
1A11）；SEQ ID NO:159的残基99-107（CDR-H3 1A11）；
SEQ ID NO:160的残基24-34（CDR-L1 1A11）；SEQ ID NO:160的残基50-56（CDR-L2
1A11）；SEQ ID NO:160的残基89-97（CDR-L3 1A11）；
SEQ ID NO:161的残基31-35（CDR-H1 37D10）；SEQ ID NO:161的残基50-68（CDR-H2
37D10）；SEQ ID NO:161的残基101-111（CDR-H3 37D10）；
SEQ ID NO:162的残基24-34（CDR-L1 37D10）；SEQ ID NO:162的残基50-56（CDR-L2
37D10）；SEQ ID NO:162的残基89-97（CDR-L3 37D10）；
SEQ ID NO:163的残基31-35（CDR-H1 32C7）；SEQ ID NO:163的残基50-66（CDR-H2
32C7）；SEQ ID NO:163的残基99-105（CDR-H3 32C7）；
SEQ ID NO:164的残基24-34（CDR-L1 32C7）；SEQ ID NO:164的残基50-56（CDR-L2
32C7）；SEQ ID NO:164的残基89-98（CDR-L3 32C7）；
SEQ ID NO:165的残基31-35（CDR-H1 14G1）；SEQ ID NO:165的残基50-66（CDR-H2
14G1）；SEQ ID NO:165的残基99-105（CDR-H3 14G1）；
SEQ ID NO:166的残基24-34（CDR-L1 14G1）；SEQ ID NO:166的残基50-56（CDR-L2
14G1）；SEQ ID NO:166的残基89-98（CDR-L3 14G1）；
SEQ ID NO:167的残基31-35（CDR-H1 14A11）；SEQ ID NO:167的残基50-66（CDR-H2
14A11）；SEQ ID NO:167的残基99-110（CDR-H3 14A11）；
SEQ ID NO:168的残基23-37（CDR-L1 14A11）；SEQ ID NO:168的残基53-59 （CDR-L2
14A11）；SEQ ID NO:168的残基92-100（CDR-L3 14A11）；
SEQ ID NO:169的残基31-35（CDR-H1 15D6）；SEQ ID NO:169的残基50-66（CDR-H2
15D6）；SEQ ID NO:169的残基99-110（CDR-H3 15D6）；
SEQ ID NO:170的残基23-37（CDR-L1 15D6）；SEQ ID NO:170的残基53-59 （CDR-L2
15D6）；SEQ ID NO:170的残基92-100（CDR-L3 15D6）；
SEQ ID NO:171的残基31-35（CDR-H1 VH.1 1A11）；SEQ ID NO:171的残基50-66
（CDR-H2 VH.1 1A11）；SEQ ID NO:171的残基99-107（CDR-H3 VH.1 1A11）；SEQ ID NO:172
的残基31-35（CDR-H1 VH.1a 1A11）；SEQ ID NO:172的残基50-66（CDR-H2 VH.1a 1A11）；
SEQ ID NO:172的残基99-107（CDR-H3 VH.1a 1A11）；SEQ ID NO:173的残基31-35（CDR-H1
VH.1b 1A11）；SEQ ID NO:173的残基50-66（CDR-H2 VH.1b 1A11）；SEQ ID NO:173的残基
99-107（CDR-H3 VH.1b 1A11）；SEQ ID NO:174的残基31-35（CDR-H1 VH.2a 1A11）；SEQ
ID NO:174的残基50-66（CDR-H2 VH.2a 1A11）；SEQ ID NO:174的残基99-107（CDR-H3
VH.2a 1A11）；SEQ ID NO:175的残基24-34（CDR-L1 VL.1 1A11）；SEQ ID NO:175的残基
50-56（CDR-L2 VL.1 1A11）；SEQ ID NO:175的残基89-97（CDR-L3 VL.1 1A11）；SEQ ID
NO:176的残基24-34（CDR-L1 VL.1a 1A11）；SEQ ID NO:176的残基50-56（CDR-L2 VL.1a
1A11）；SEQ ID NO:176的残基89-97（CDR-L3 VL.1a 1A11）；SEQ ID NO:177的残基24-34
（CDR-L1 VL.1b 1A11）；SEQ ID NO:177的残基50-56（CDR-L2 VL.1b 1A11）；SEQ ID NO:177
的残基89-97（CDR-L3 VL.1b 1A11）；SEQ ID NO:178的残基24-34（CDR-L1 VL.2a 1A11）；
SEQ ID NO:178的残基50-56（CDR-L2 VL.2a 1A11）；SEQ ID NO:178的残基89-97（CDR-L3
VL.2a 1A11）；SEQ ID NO:179的残基31-35（CDR-H1 VH.1 38H12）；SEQ ID NO:179的残基
50-66（CDR-H2 VH.1 38H12）；SEQ ID NO:179的残基99-107（CDR-H3 VH.1 38H12）；SEQ
ID NO:180的残基31-35（CDR-H1 VH.1A 38H12）；SEQ ID NO:180的残基50-66（CDR-H2
VH.1A 38H12）；SEQ ID NO:180的残基99-107（CDR-H3 VH.1A 38H12）；SEQ ID NO:181的残
基31-35（CDR-H1 VH.1b 38H12）；SEQ ID NO:181的残基50-66（CDR-H2 VH.1b 38H12）；SEQ
ID NO:181的残基99-107（CDR-H3 VH.1b 38H12）；SEQ ID NO:182的残基31-35（CDR-H1
VH.2a 38H12）；SEQ ID NO:182的残基50-66（CDR-H2 VH.2a 38H12）；SEQ ID NO:182的残
基99-107（CDR-H3 VH.2a 38H12）；SEQ ID NO:183的残基24-34（CDR-L1 VL.1 38H12）；
SEQ ID NO:183的残基50-56（CDR-L2 VL.1 38H12）；SEQ ID NO:183的残基89-97（CDR-L3
VL.1 38H12）；SEQ ID NO:184的残基24-34（CDR-L1 VL.1a 38H12）；SEQ ID NO:184的残基
50-56（CDR-L2 VL.1a 38H12）；SEQ ID NO:184的残基89-97（CDR-L3 VL.1a 38H12）；SEQ
ID NO:185的残基24-34（CDR-L1 VL.1b 38H12）；SEQ ID NO:185的残基50-56（CDR-L2
VL.1b 38H12）；SEQ ID NO:185的残基89-97（CDR-L3 VL.1b 38H12）；SEQ ID NO:186的残基
24-34（CDR-L1 VL.2a 38H12）；SEQ ID NO:186的残基50-56（CDR-L2 VL.2a 38H12）；SEQ
ID NO:186的残基89-97（CDR-L3 VL.2a 38H12）；SEQ ID NO:187的残基31-35（CDR-H1
h1A11VH.1）；SEQ ID NO:187的残基50-66（CDR-H2 h1A11VH.1）；SEQ ID NO:187的残基
99-107（CDR-H3 h1A11VH.1）；SEQ ID NO:188的残基31-35（CDR-H1 h1A11.A6）；SEQ ID
NO:188的残基50-66（CDR-H2 h1A11.A6）；SEQ ID NO:188的残基99-107（CDR-H3 h1A11.
A6）；SEQ ID NO:189的残基31-35（CDR-H1 h1A11.A8）；SEQ ID NO:189的残基50-66
（CDR-H2 h1A11.A8）；SEQ ID NO:189的残基99-107（CDR-H3 h1A11.A8）；SEQ ID NO:190的
残基31-35（CDR-H1 h1A11.C6）；SEQ ID NO:190的残基50-66（CDR-H2 h1A11.C6）；SEQ ID
NO:190的残基99-107（CDR-H3 h1A11.C6）；SEQ ID NO:191的残基31-35（CDR-H1 h1A11.
A11）；SEQ ID NO:191的残基50-66（CDR-H2 h1A11.A11）；SEQ ID NO:191的残基99-107
（CDR-H3 h1A11.A11）；SEQ ID NO:192的残基31-35（CDR-H1 h1A11.B5）；SEQ ID NO:192的
残基50-66（CDR-H2 h1A11.B5）；SEQ ID NO:192的残基99-107（CDR-H3 h1A11.B5）；SEQ ID
NO:193的残基31-35（CDR-H1 h1A11.E12）；SEQ ID NO:193的残基50-66（CDR-H2 h1A11.
E12）；SEQ ID NO:193的残基99-107（CDR-H3 h1A11.E12）；SEQ ID NO:194的残基31-35
（CDR-H1 h1A11.G3）；SEQ ID NO:194的残基50-66（CDR-H2 h1A11.G3）；SEQ ID NO:194
的残基99-107（CDR-H3 h1A11.G3）；SEQ ID NO:195的残基31-35（CDR-H1 h1A11.F5）；
SEQ ID NO:195的残基50-66（CDR-H2 h1A11.F5）；SEQ ID NO:195的残基99-107（CDR-H3
h1A11.F5）；SEQ ID NO:196的残基31-35（CDR-H1 h1A11.H2）；SEQ ID NO:196的残基50-66
（CDR-H2 h1A11.H2）；SEQ ID NO:196的残基99-107（CDR-H3 h1A11.H2）；SEQ ID NO:197
的残基24-34（CDR-L1 h1A11VL.1）；SEQ ID NO:197的残基50-56（CDR-L2 h1A11VL.1）；
SEQ ID NO:197的残基89-97（CDR-L3 h1A11VL.1）；SEQ ID NO:198的残基24-34（CDR-L1
h1A11.A2）；SEQ ID NO:198的残基50-56（CDR-L2 h1A11.A2）；SEQ ID NO:198的残基89-97
（CDR-L3 h1A11.A2）；SEQ ID NO:199的残基24-34（CDR-L1 h1A11.A12）；SEQ ID NO:199
的残基50-56（CDR-L2 h1A11.A12）；SEQ ID NO:199的残基89-97（CDR-L3 h1A11.A12）；
SEQ ID NO:200的残基24-34（CDR-L1 h1A11.A7）；SEQ ID NO:200的残基50-56（CDR-L2
h1A11.A7）；SEQ ID NO:200的残基89-97（CDR-L3 h1A11.A7）；SEQ ID NO:201的残基24-34
（CDR-L1 h1A11.B4）；SEQ ID NO:201的残基50-56（CDR-L2 h1A11.B4）；SEQ ID NO:201的
残基89-97（CDR-L3 h1A11.B4）；SEQ ID NO:202的残基24-34（CDR-L1 h1A11.B5）；SEQ ID
NO:202的残基50-56（CDR-L2 h1A11.B5）；SEQ ID NO:202的残基89-97（CDR-L3 h1A11.
B5）；SEQ ID NO:203的残基24-34（CDR-L1 h1A11.E12）；SEQ ID NO:203的残基50-56
（CDR-L2 h1A11.E12）；SEQ ID NO:203的残基89-97（CDR-L3 h1A11.E12）。
三个CDRs是如本文描述的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3。在另一个非限制性例子中，本发明
的DLL4结合蛋白包含本文描述的三个CDRs，其中所述三个CDRs是如本文描述的CDR-H1、
CDR-H2和CDR-H3。
中，本发明的DLL4结合蛋白包含本文描述的六个CDRs，例如如本文描述的CDR-H1、CDR-H2、
CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。
VH 38H12 CDR组
CDR-H1: SEQ ID NO:157的残基31-35
CDR-H2: SEQ ID NO:157的残基50-66
CDR-H3 SEQ ID NO:157的残基99-107
VL 38H12 CDR组
CDR-L1: SEQ ID NO:158的残基24-34
CDR-L2: SEQ ID NO:158的残基50-56
CDR-L3: SEQ ID NO:158的残基89-97
VH 1A11 CDR组
CDR-H1: SEQ ID NO:159的残基31-35
CDR-H2: SEQ ID NO:159的残基50-66
CDR-H3: SEQ ID NO:159的残基99-107
VL 1A11 CDR组
CDR-L1: SEQ ID NO:160的残基24-34
CDR-L2: SEQ ID NO:160的残基50-56
CDR-L3: SEQ ID NO:160的残基89-97
VH 37D10 CDR组
CDR-H1: SEQ ID NO:161的残基31-35
CDR-H2: SEQ ID NO:161的残基50-68
CDR-H3: SEQ ID NO:161的残基101-111
VL 37D10 CDR组
CDR-L1: SEQ ID NO:162的残基24-34
CDR-L2: SEQ ID NO:162的残基50-56
CDR-L3: SEQ ID NO:162的残基89-97
VH 32C7 CDR组
CDR-H1: SEQ ID NO:163的残基31-35
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VL 32C7 CDR组
CDR-L1: SEQ ID NO:164的残基24-34
CDR-L2: SEQ ID NO:164的残基50-56
CDR-L3: SEQ ID NO:164的残基89-98
VH 14G1 CDR组
CDR-H1: SEQ ID NO:165的残基31-35
CDR-H2: SEQ ID NO:165的残基50-66
CDR-H3: SEQ ID NO:165的残基99-105
VL 14G1 CDR组
CDR-L1: SEQ ID NO:166的残基24-34
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VH 14A11 CDR组
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VL 14A11 CDR组
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CDR-L2: SEQ ID NO:168的残基53-59
CDR-L3: SEQ ID NO:168的残基92-100
VH 15D6 CDR组
CDR-H1: SEQ ID NO:169的残基31-35
CDR-H2: SEQ ID NO:169的残基50-66
CDR-H3: SEQ ID NO:169的残基99-110
VL 15D6 CDR组
CDR-L1: SEQ ID NO:170的残基23-37
CDR-L2: SEQ ID NO:170的残基53-59
CDR-L3: SEQ ID NO:170的残基92-100
VH VH.1 1A11 CDR组
CDR-H1: SEQ ID NO:171的残基31-35
CDR-H2: SEQ ID NO:171的残基50-66
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VH VH.1a 1A11 CDR组
CDR-H1: SEQ ID NO:172的残基31-35
CDR-H2: SEQ ID NO:172的残基50-66
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VH VH.1b 1A11 CDR组
CDR-H1: SEQ ID NO:173的残基31-35
CDR-H2: SEQ ID NO:173的残基50-66
CDR-H3: SEQ ID NO:173的残基99-107
VH VH.2a 1A11 CDR组
CDR-H1: SEQ ID NO:174的残基31-35
CDR-H2: SEQ ID NO:174的残基50-66
CDR-H3: SEQ ID NO:174的残基99-107
VL VL.1 1A11 CDR组
CDR-L1: SEQ ID NO:175的残基24-34
CDR-L2: SEQ ID NO:175的残基50-56
CDR-L3: SEQ ID NO:175的残基89-97
VL VL.1a 1A11 CDR组
CDR-L1: SEQ ID NO:176的残基24-34
CDR-L2: SEQ ID NO:176的残基50-56
CDR-L3: SEQ ID NO:176的残基89-97
VL VL.1b 1A11 CDR组
CDR-L1: SEQ ID NO:177的残基24-34
CDR-L2: SEQ ID NO:177的残基50-56
CDR-L3: SEQ ID NO:177的残基50-56
VL VL.2a 1A11 CDR组
CDR-L1: SEQ ID NO:178的残基24-34
CDR-L2: SEQ ID NO:178的残基50-56
CDR-L3: SEQ ID NO:178的残基89-97
VH VH.1 38H12 CDR组
CDR-H1: SEQ ID NO:179的残基31-35
CDR-H2: SEQ ID NO:179的残基50-66
CDR-H3: SEQ ID NO:179的残基99-107
VH VH.1a 38H12 CDR组
CDR-H1: SEQ ID NO:180的残基31-35
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VH VH.1b 38H12 CDR组
CDR-H1: SEQ ID NO:181的残基31-35
CDR-H2: SEQ ID NO:181的残基50-66
CDR-H3: SEQ ID NO:181的残基99-107
VH VH.2a 38H12 CDR组
CDR-H1: SEQ ID NO:182的残基31-35
CDR-H2: SEQ ID NO:182的残基50-66
CDR-H3: SEQ ID NO:182的残基99-107
VL VL.1 38H12 CDR组
CDR-L1: SEQ ID NO:183的残基24-34
CDR-L2: SEQ ID NO:183的残基50-56
CDR-L3: SEQ ID NO:183的残基89-97
VL VL.1a 38H12 CDR组
CDR-L1: SEQ ID NO:184的残基24-34
CDR-L2: SEQ ID NO:184的残基50-56
CDR-L3: SEQ ID NO:184的残基89-97
VL VL.1b 38H12 CDR组
CDR-L1: SEQ ID NO:185的残基24-34
CDR-L2: SEQ ID NO:185的残基50-56
CDR-L3: SEQ ID NO:185的残基89-97
VL VL.2a 38H12 CDR组
CDR-L1: SEQ ID NO:186的残基24-34
CDR-L2: SEQ ID NO:186的残基50-56
CDR-L3: SEQ ID NO:186的残基89-97
VH hA11VH.1 CDR组
CDR-H1: SEQ ID NO:187的残基31-35
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CDR-H3: SEQ ID NO:187的残基99-107
VH hA11.A6 CDR组
CDR-H1: SEQ ID NO:188的残基31-35
CDR-H2: SEQ ID NO:188的残基50-66
CDR-H3: SEQ ID NO:188的残基99-107
VH hA11.A8 CDR组
CDR-H1: SEQ ID NO:189的残基31-35
CDR-H2: SEQ ID NO:189的残基50-66
CDR-H3: SEQ ID NO:189的残基99-107
VH hA11.C6 CDR组
CDR-H1: SEQ ID NO:190的残基31-35
CDR-H2: SEQ ID NO:190的残基50-66
CDR-H3: SEQ ID NO:190的残基99-107
VH hA11.A11 CDR组
CDR-H1: SEQ ID NO:191的残基31-35
CDR-H2: SEQ ID NO:191的残基50-66
CDR-H3: SEQ ID NO:191的残基99-107
VH hA11.B5 CDR组
CDR-H1: SEQ ID NO:192的残基31-35
CDR-H2: SEQ ID NO:192的残基50-66
CDR-H3: SEQ ID NO:192的残基99-107
VH hA11.E12 CDR组
CDR-H1: SEQ ID NO:193的残基31-35
CDR-H2: SEQ ID NO:193的残基50-66
CDR-H3: SEQ ID NO:193的残基99-107
VH hA11.G3 CDR组
CDR-H1: SEQ ID NO:194的残基31-35
CDR-H2: SEQ ID NO:194的残基50-66
CDR-H3: SEQ ID NO:194的残基99-107
VH hA11.F5 CDR组
CDR-H1: SEQ ID NO:195的残基31-35
CDR-H2: SEQ ID NO:195的残基50-66
CDR-H3: SEQ ID NO:195的残基99-107
VH hA11.H2 CDR组
CDR-H1: SEQ ID NO:196的残基31-35
CDR-H2: SEQ ID NO:196的残基50-66
CDR-H3: SEQ ID NO:196的残基99-107
VL h1A11VL.1 CDR组
CDR-L1: SEQ ID NO:197的残基24-34
CDR-L2: SEQ ID NO:197的残基50-56
CDR-L3: SEQ ID NO:197的残基89-97
VL h1A11.A2 CDR组
CDR-L1: SEQ ID NO:198的残基24-34
CDR-L2: SEQ ID NO:198的残基50-56
CDR-L3: SEQ ID NO:198的残基89-97
VL h1A11.A12 CDR组
CDR-L1: SEQ ID NO:199的残基24-34
CDR-L2: SEQ ID NO:199的残基50-56
CDR-L3: SEQ ID NO:199的残基89-97
VL h1A11.A7 CDR组
CDR-L1: SEQ ID NO:200的残基24-34
CDR-L2: SEQ ID NO:200的残基50-56
CDR-L3: SEQ ID NO:200的残基89-97
VL h1A11.B4 CDR组
CDR-L1: SEQ ID NO:201的残基24-34
CDR-L2: SEQ ID NO:201的残基50-56
CDR-L3: SEQ ID NO:201的残基89-97
VL h1A11.B5 CDR组
CDR-L1: SEQ ID NO:202的残基24-34
CDR-L2: SEQ ID NO:202的残基50-56
CDR-L3: SEQ ID NO:202的残基89-97
和
VL h1A11.E12 CDR组
CDR-L1: SEQ ID NO:203的残基24-34
CDR-L2: SEQ ID NO:203的残基50-56
CDR-L3: SEQ ID NO:.203的残基89-97。
VH 38H12 CDR组和VL 38H12 CDR组，
VH 1A11 CDR组和VL 1A11 CDR组，
VH 37D10 CDR组和VL 37D10 CDR组，
VH 32C7 CDR组和VL 32C7 CDR组，
VH 14G1组和VL 14G1 CDR组，
VH 14A11 CDR组和VL 14A11 CDR组，
VH 15D6 CDR组和VL 15D6 CDR组，
VH VH.1 1A11 CDR组和VL VL.1 1A11 CDR组，
VH VH.1 1A11 CDR组和VL VL.1a 1A11 CDR组，
VH VH.1 1A11 CDR组和VL VL.1b 1A11 CDR组，
VH VH.1 1A11 CDR组和VL VL.2a 1A11 CDR组，
VH VH.1a 1A11 CDR组和VL VL.1 1A11 CDR组，
VH VH.1a 1A11 CDR组和VL VL.1a 1A11 CDR组，
VH VH.1a 1A11 CDR组和VL VL.1b 1A11 CDR组，
VH VH.1a 1A11 CDR组和VL VL.2a 1A11 CDR组，
VH VH.1b 1A11 CDR组和VL VL.1 1A11 CDR组，
VH VH.1b 1A11 CDR组和VL VL.1a 1A11 CDR组，
VH VH.1b 1A11 CDR组和VL VL.1b 1A11 CDR组，
VH VH.1b 1A11 CDR组和VL VL.2a 1A11 CDR组，
VH VH.2a 1A11 CDR组和VL VL.1 1A11 CDR组，
VH VH.2a 1A11 CDR组和VL VL.1a 1A11 CDR组，
VH VH.2a 1A11 CDR组和VL VL.1b 1A11 CDR组，
VH VH.2a 1A11 CDR组和VL VL.2a 1A11 CDR组，
VH VH.1 38H12 CDR组和VL VL.1 38H12 CDR组，
VH VH.1 38H12 CDR组和VL VL.1a 38H12 CDR组，
VH VH.1 38H12 CDR组和VL VL.1b 38H12 CDR组，
VH VH.1 38H12 CDR组和VL VL.2a 38H12 CDR组，
VH VH.1a 38H12 CDR组和VL VL.1 38H12 CDR组，
VH VH.1a 38H12 CDR组和VL VL.1a 38H12 CDR组，
VH VH.1a 38H12 CDR组和VL VL.1b 38H12 CDR组，
VH VH.1a 38H12 CDR组和VL VL.2a 38H12 CDR组，
VH VH.1b 38H12 CDR组和VL VL.1 38H12 CDR组，
VH VH.1b 38H12 CDR组和VL VL.1a 38H12 CDR组，
VH VH.1b 38H12 CDR组和VL VL.1b 38H12 CDR组，
VH VH.1b 38H12 CDR组和VL VL.2a 38H12 CDR组，
VH VH.2a 38H12 CDR组和VL VL.1 38H12 CDR组，
VH VH.2a 38H12 CDR组和VL VL.1a 38H12 CDR组，
VH VH.2a 38H12 CDR组和VL VL.1b 38H12 CDR组，
VH VH.2a 38H12 CDR组和VL VL.2a 38H12 CDR组，
VH h1A11.A6 CDR组和VL h1A11VL.1 CDR组，
VH h1A11.C6 CDR组和VL h1A11VL.1 CDR组，
VH h1A11.A11 CDR组和VL h1A11VL.1 CDR组，
VH h1A11.A8 CDR组和VL h1A11VL.1 CDR组，
VH h1A11VH.1 CDR组和VL h1A11.B4 CDR组，
VH h1A11VH.1 CDR组和VL h1A11.A7 CDR组，
VH h1A11VH.1 CDR组和VL h1A11.A12 CDR组，
VH h1A11VH.1 CDR组和VL h1A11.A2 CDR组，
VH h1A11.B5 CDR组和VL h1A11.B5 CDR组，
VH h1A11.E12 CDR组和VL h1A11.E12 CDR组，
VH h1A11.G3 CDR组和VL h1A11.E12 CDR组，
VH h1A11.F5 CDR组和VL h1A11.E12 CDR组，和
VH h1A11.H2 CDR组和VL h1A11.E12 CDR组。
CDR-L2和CDR-L3位于轻链可变区（VL），并且其中VH和VL区的结合形成DLL4结合蛋白的
功能性DLL4抗原结合结构域。在这个实施方案的进一步非限制性例子中，具有两个DLL4
抗原结合结构域的DLL4结合蛋白包含两组VH和VL区，并且因此包含十二个CDRs。
链可变区（VL），并且其中每个可变区中的剩余序列这样构成构架（FR）区，从而使得对于总
共四个FR序列，即FR1、FR2、FR3和FR4，每个CDR位于两个FR区序列之间。在这个实施方
案中，FR和CDR序列在可变区中的排列是FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。在这个实施
方案中，由VH区和VL区结合形成的结合结构域包含八个FR序列和六个CDRs。
（接纳体（acceptor））物种的抗体VH和/或VL区的相应CDRs。供体物种的例子是本文描
述的大鼠抗人DLL4单克隆抗体，并且接纳体物种的例子是人免疫球蛋白γ（IgG）分子，其
中人IgG分子的VH和VL区的人FR序列是接受来自供体大鼠单克隆抗体的嫁接入CDRs的
人接纳体构架序列。所得到的CDR嫁接的抗体的人接纳体构架序列可以进一步突变，以改
善CDR嫁接的抗体的一种或多种性质。作为非限制性例子，CDR嫁接的抗体的一个或多个
FR序列的一个或多个残基可以突变，以改善DLL4结合亲和力或降低CDR嫁接的抗体在人受
试者中的免疫原性。
三个、四个、五个、六个、七个或八个）人接纳体构架序列。
和/或已突变为减少或消除不希望有的反应的一个或多个位点的一个或多个氨基酸残基，
例如以减少或消除关于不需要的糖基化的位点和/或关于不需要的N末端焦谷氨酸盐形成
的位点和/或关于潜在减少的免疫原性危险的位点。
五个、六个、七个或八个）人接纳体构架序列。本发明的DLL4结合蛋白中存在的来自表3和
4的一个或多个人接纳体构架序列可以进一步包含一个或多个氨基酸残基，其已回复突变
为结合DLL4的大鼠单克隆抗体中存在的一个或多个相应氨基酸残基，和/或已突变为减少
或消除不希望有的反应的一个或多个位点的一个或多个氨基酸，例如以减少或消除关于不
需要的糖基化的位点和/或关于不需要的N末端焦谷氨酸盐形成的位点和/或关于潜在减
少的免疫原性危险的位点。
多个（例如任何一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个或八个/结合结构域）人接纳体构架
序列。
NO:143），其中X30是S、R或G；
重链构架-2（H-FR2）：W-V-R-Q-A-P-G-K-G-L-E-W-V-A（SEQ ID NO:144）；
重链构架-3（H-FR3）：
R-F-T-I-S-R-D-N-A-K-X11-S-L-Y-L-Q-M-N-S-L-R-A-E-D-T-A-V-Y-Y-C-X31-R（SEQ ID
NO:145），其中；
X11是N或S；和
X31是A或S；
重链构架-4（H-FR4）：W-G-Q-G-T-L-V-T-V-S-S（SEQ ID NO:146）；
轻链构架-1（L-FR1）：
D-I-Q-M-T-Q-S-P-S-S-L-S-A-S-V-G-D-R-V-T-I-T-C（SEQ ID NO:147）；
轻链构架-2（L-FR2）：W-Y-Q-Q-K-P-G-K-X9-P-K-L-L-I-X15（SEQ ID NO:148），其中；
X9是A或S；和
X15是F或Y；
轻链构架-3（L-FR3）：
G-V-P-S-R-F-S-G-S-G-S-G-T-D-X15-T-L-T-I-S-S-L-Q-P-E-D-F-A-T-Y-Y-C（SEQ ID
NO:149），其中；
X15是F或S；和
轻链构架-4（L-FR4）：F-G-Q-G-T-K-L-E-I-K（SEQ ID NO:150）。
构架区氨基酸取代，其中所述关键残基选自与CDR接近的残基、糖基化位点残基、稀有残
基、能够与人DLL4相互作用的残基、能够与CDR相互作用的残基、规范残基、在重链可变区
和轻链可变区之间的接触残基、在Vernier区内的残基、和在Chothia定义的可变重链CDR1
和Kabat定义的第一个重链构架之间重叠的区域中的残基。
等同，并且包含与人种系接纳体构架等同的至少70个氨基酸残基。在另一个实施方案中，
本发明的DLL4结合蛋白包含共有人可变结构域序列。
个可变结构域具有选自下述的氨基酸序列：
SEQ ID NO:188（h1All.A6 VH）和SEQ ID NO:197（h1A11VL.1），
SEQ ID NO:190（h1A11.C6 VH）和SEQ ID NO:197（h1A11VL.1），和
SEQ ID NO:191（h1A11.A11 VH）和SEQ ID NO:197（h1A11.VL.1）。
白，其包含本文描述的VH和VL结构域的多种组合。
（食蟹猴DLL4、cyno DLL4）、小鼠DLL4（mu DLL4）、大鼠DLL4及其组合的DLL4。
DLL4、食蟹猴DLL4、猴DLL4、大鼠DLL4及其组合的DLL4的活性。
有至少约10M s ；至少约10M s ；至少约10M s ；至少约10M s ；或至少约10M s
的与DLL4的结合速率常数（Kon）。优选地，如通过表面等离振子共振测量的，本发明的结
2 -1 -1 3 -1 -1 3 -1 -1 4 -1 -1 4 -1 -1 5 -1 -1 5 -1 -1
合蛋白具有10M s - 10M s ；10M s - 10M s ；10M s - 10M s ；或10M s -
6 -1 -1
10M s 的与DLL4的结合速率常数（Kon）。
具有至多约10 s ；至多约10 s ；至多约10 s ；或至多约10 s 的关于DLL4的解离速率
（off rate）常数（Koff）。优选地，如通过表面等离振子共振测量的，本发明的结合蛋白具有
-3 -1 -4 -1 -4 -1 -5 -1 -5 -1 -6 -1
10 s - 10 s ；10 s - 10 s ；或10 s - 10 s 的与DLL4的解离速率常数（Koff）。
至多约10 M；至多约10 M；至多约10 M；至多约10 M；或至多10 M的与DLL4的
-7 -8 -8 -9 -9
解离常数（KD）。优选地，本发明的结合蛋白具有10 M - 10 M；10 M - 10 M；10 M -
-10 -10 -11 -11 -12 -12 -13
10 M；10 - 10 M；10 M - 10 M；或10 - M 10 M的与DLL4的解离常数（KD）。
免疫球蛋白分子、单克隆抗体、嵌合抗体、CDR嫁接的抗体、人源化抗体、Fab、Fab'、F（ab'）
2、Fv、二硫键连接的Fv、scFv、单结构域抗体、双抗体、多特异性抗体、双重特异性抗体和双
特异性抗体。
IgG4恒定结构域、人IgE恒定结构域和人IgA恒定结构域。
SEQ ID NO:4）、免疫球蛋白κ轻链恒定区（例如SEQ ID NO:5）、免疫球蛋白λ轻链恒定区
（例如SEQ ID NO:6）及其组合。
中，显像剂选自：放射性标记、酶、荧光标记、发光标记、生物发光标记、磁性标记和生物素。
3 14 35 90 99 111 125 131 177 166
更优选地，显像剂是选自下述的放射性标记：H、C、S、Y、Tc、 In、I、 I、Lu、 Ho和
153
Sm。在优选实施方案中，治疗剂或细胞毒剂选自：抗代谢物、烷化剂、抗生素、生长因子、细
胞因子、抗血管生成剂、抗有丝分裂剂、蒽环霉素（anthracyclines）、毒素和细胞凋亡剂。
白、结晶抗体构建体或结晶抗体缀合物具有比其可溶性配对物更大的体内半衰期。在优选
实施方案中，结晶结合蛋白、结晶抗体构建体或结晶抗体缀合物在结晶化后保留可溶性或
非晶体形式的结合蛋白、抗体构建体或抗体缀合物的生物学活性。
中的一个或多个；包含轻链可变结构域的多肽，其中所述轻链可变结构域包含如上所述的
CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的一个或多个；以及两种多肽的组合。
含重链可变结构域的多肽，其中所述重链可变结构域包含如上所述的CDR-H1、CDR-H2或
CDR-H3；包含轻链可变结构域的多肽，其中所述轻链可变结构域包含如上所述的CDR-L1、
CDR-L2或CDR-L3；或两种多肽的组合。
5322（1990））、pBV、pJV和pBJ。
核细胞选自：原生生物细胞、动物细胞、植物细胞和真菌细胞。更优选地，宿主细胞是哺乳
动物细胞，包括但不限于CHO和COS细胞。优选的真菌细胞是酿酒酵母（Saccharomyces
cerevisiae）。优选的昆虫细胞是Sf9细胞。
步骤。
分和进一步的至少一种聚合载体的制剂。优选地，聚合载体是选自下述的一种或多种的聚
合物：聚丙烯酸、聚氰基丙烯酸酯、聚氨基酸、聚酐、聚酯肽、聚酯、聚乳酸、乳酸乙醇酸共聚
物或PLGA、聚b-羟基丁酸酯、聚己内酯、聚二氧杂环己酮（poly（dioxanone））、聚乙二醇、聚
（羟丙基）甲基丙烯酰胺、聚有机磷腈、聚原酸酯、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、马来酸酐-烷
基乙烯基醚共聚物、pluronic多元醇、清蛋白、藻酸盐、纤维素和纤维素衍生物、胶原、血纤
蛋白、明胶、透明质酸、寡糖、糖胺聚糖（glycaminoglycans）、硫酸化多糖、掺合物及其共聚
物。优选地，成分选自清蛋白、蔗糖、海藻糖、乳糖醇（lactitol）、明胶、羟丙基-β-环糊精、
甲氧基聚乙二醇和聚乙二醇。
物包含至少一种另外试剂。所述另外试剂可以是用于治疗其中DLL4是有害的病症的治疗
剂。优选地，本发明的药物组合物包含选自下述的另外试剂：治疗剂；显像剂；抗肿瘤药；化
学治疗剂；血管生成抑制剂；抗VEGF抗体；抗EGFR抗体；抗cMet抗体；抗ErbB3抗体；抗
HER2抗体；抗CD20抗体；VEGF-陷阱分子；激酶抑制剂；共刺激分子阻断剂；抗B7.2抗体；
CTLA4-Ig；粘附分子阻断剂；抗E选择素抗体；抗L选择素抗体；抗细胞因子抗体或其功能
片段；抗IL-18抗体；抗TNF抗体；抗IL-6抗体；氨甲蝶呤；皮质类固醇；环孢素；雷帕霉素；
FK506；DNA烷化剂；顺铂；卡铂；抗微管蛋白剂；紫杉醇；多西他赛；阿霉素；吉西他滨；吉
西他宾（gemzar）；蒽环霉素；亚得里亚霉素；拓扑异构酶I抑制剂；拓扑异构酶II抑制剂；
5-氟尿嘧啶（5-FU）；甲酰四氢叶酸；依立替康；受体酪氨酸激酶抑制剂；细胞凋亡抑制剂；
Bcl2/Bclx抑制剂；埃罗替尼（erlotinib）；吉非替尼（gefitinib）；COX-2抑制剂；塞来昔布
（celecoxib）；环孢素；雷帕霉素；可检测标记或报道分子；TNF拮抗剂；抗风湿剂；肌肉弛缓
剂；麻醉药；止痛剂；麻醉剂；镇静剂；局部麻醉剂；神经肌肉阻断剂；抗微生物剂；抗牛皮
癣剂；皮质类固醇；促蛋白合成类固醇；促红细胞生成素；免疫接种；免疫球蛋白；免疫抑
制剂；生长激素；激素替代药物；放射性药物；抗抑郁剂；抗精神病药；刺激剂；哮喘药物治
疗；β激动剂；吸入类固醇；肾上腺素；其肾上腺素类似物；细胞因子；和细胞因子拮抗剂。
于抑制患有其中DLL4是有害的病症的人受试者中的DLL4活性的方法，其包括给人受试者
施用上文公开的结合蛋白，从而使得人受试者中的人DLL4被抑制且实现治疗。优选地，病
症选自原发性和转移性癌，包括乳腺、结肠、直肠、肺、口咽、下咽、食管、胃、胰腺、肝、膀胱和胆管、小肠、泌尿道（包括肾、膀胱和尿道上皮）、女性生殖道（包括宫颈、子宫和卵巢以及绒
毛膜癌和妊娠滋养细胞疾病）、男性生殖道（包括前列腺、精囊、睾丸和生殖细胞肿瘤）、内分
泌腺（包括甲状腺、肾上腺和垂体）和皮肤癌，以及血管瘤、黑素瘤、肉瘤（包括起于骨和软
组织的那些以及卡波济肉瘤），脑、神经、眼和脑膜的肿瘤（包括星形细胞瘤、神经胶质瘤、成
胶质细胞瘤、成视网膜细胞瘤、神经瘤、成神经细胞瘤、许旺细胞瘤和脑膜瘤），起于造血恶
性肿瘤的实体瘤例如白血病和淋巴瘤（何杰金氏和非何杰金氏淋巴瘤），肿瘤转移灶、眼新
生血管形成（包括糖尿病失明、视网膜病变、年龄诱导的黄斑变性和发红）、水肿、类风湿性
关节炎、粥样硬化斑块、顽固性腹水、牛皮癣、胰腺炎、多囊卵巢病（POD）、子宫内膜异位症、
子宫肌瘤、良性前列腺肥大、T细胞急性成淋巴细胞白血病（T-ALL）、伴皮质下梗死和脑白
质病的脑常染色体显性动脉病（CADASIL）、多发性硬化（MS）、法洛四联症（tetralogy of
Fallot）（TOF）、Alagille综合征（AS）、黄斑变性和年龄相关的黄斑变性疾病、以及特征在
于异常DLL4表达或活性的其他血管生成非依赖性疾病和依赖性疾病。
蛋白的步骤。在优选实施方案中，第二种试剂选自：放射治疗剂；抗肿瘤药；化学治疗剂；
DNA烷化剂；顺铂；卡铂；抗微管蛋白剂；紫杉醇；多西他赛；紫衫酚；阿霉素；吉西他滨；吉
西他宾（gemzar）；蒽环霉素；亚得里亚霉素；拓扑异构酶I抑制剂；拓扑异构酶II抑制剂；
5-氟尿嘧啶（5-FU）；甲酰四氢叶酸；依立替康；受体酪氨酸激酶抑制剂；细胞凋亡抑制剂；
Bcl2/Bclx抑制剂；厄洛替尼；吉非替尼；COX-2抑制剂；塞来昔布；激酶抑制剂；血管生成
抑制剂；抗VEGF抗体；抗EGFR抗体；抗cMet抗体；抗ErbB3抗体；抗HER2抗体；抗CD20抗
体；VEGF-陷阱（阿柏西普）；共刺激分子阻断剂；抗B7.1抗体；抗B7.2抗体；CTLA4-Ig；粘
附分子阻断剂；抗LFA-1抗体；抗E选择素抗体；抗L选择素抗体；小分子抑制剂；抗细胞因
子抗体或其功能片段；抗IL-18抗体；抗TNF抗体；抗IL-6抗体；抗细胞因子受体抗体；氨
甲蝶呤；环孢素；雷帕霉素；FK506；可检测标记或报道物；TNF拮抗剂；抗风湿剂；肌肉弛缓
剂；麻醉药；非类固醇消炎药（NSAID）；镇静剂；止痛剂；麻醉剂；局部麻醉剂；神经肌肉阻
断剂；抗微生物剂；抗牛皮癣剂；皮质类固醇；促蛋白合成类固醇；促红细胞生成素；免疫
接种；免疫球蛋白；免疫抑制剂；生长激素；激素替代药物；放射性药物；抗抑郁剂；抗精神
病药；刺激剂；哮喘药物治疗；β激动剂；吸入类固醇；肾上腺素；肾上腺素类似物；细胞因
子；和细胞因子拮抗剂。
疫球蛋白分子，例如但不限于重或轻链或其配体结合部分的至少一个互补决定区（CDR）、重
链或轻链可变区、重链或轻链恒定区、构架区及其任何部分，其可以掺入本发明的结合蛋白
内。
性免疫测定（RIA）、免疫沉淀、酶联免疫吸附测定（ELISA）、免疫印迹（例如蛋白质）、包含吸
附或固定至基底的本发明DLL4结合蛋白的免疫测试条（immunostrips）（例如免疫浸渍片
（immunodipsticks））、FACS等。使用本发明的DLL4结合蛋白的DLL4的检测可以在体外对
混合物、溶液或生物学样品中进行。可以与本发明的结合蛋白接触以检测或测量样品中的
DLL4的生物学样品包括但不限于尿、唾液、口腔拭子（颊、舌或咽喉拭子）、表皮拭子、表皮刮
擦、直肠拭子、阴道拭子、全血样品、血浆样品、血清样品、组织活组织检查和通过本领域已
知的程序得自个体的任何其他样品。在另一个实施方案中，DLL4结合蛋白可以用于在体内
检测DLL4，例如多种X线断层摄影术和扫描法，包括但不限于X射线计算机辅助X线断层摄
影术（CT）、磁共振成像（MRI）和正电子发射X线断层摄影术（PET）。
人DLL4的氨基酸序列（SEQ ID NO:1）连同相应DLL4核苷酸编码序列（SEQ ID NO:2）一起
显示于表1。本发明的多个方面涉及抗体和抗体片段、及其药物组合物，以及核酸、重组表达
载体和用于制备此类抗体和片段的宿主细胞。本发明还包含使用本发明的抗体检测人DLL4
或鼠DLL4的方法、在体外或体内抑制人或小鼠DLL4和/或人或小鼠VEGFR2或VEGFR1活
性的方法、和调节基因表达的方法。
下，本文提供的定义优先于任何字典或外来定义。进一步地，除非上下文另有要求，单数术
语应包括复数，并且复数术语应包括单数。在本申请中，除非另有说明，“或”的使用意指“和
/或”。此外，术语“包括”以及其他形式的使用是非限制性的。此外，除非另有具体说明，术
语例如“元件”或“组分”包括包含一个单位的元件和组分以及包含超过一个亚单位的元件
和组分。
用的那些。除非另有说明，本发明的方法和技术一般根据本领域众所周知，且如各种一般和
更具体的参考文献中所述的常规方法来进行，所述参考文献在本说明书自始至终引用和讨
论。酶促反应和纯化技术根据制造商的说明书、如本领域通常实现的或如本文描述的执行。
与本文描述的分析化学、合成有机化学以及医学和药物化学结合使用的命名法、以及其实
验室程序和技术是本领域众所周知且通常使用的那些。使用标准技术用于化学合成、化学
分析、药物制备、配制和递送、和患者的治疗。
质片段和蛋白质序列的多肽类似物。多肽可以是单体或聚合的。除非另有说明，“多肽”在
本文中的使用意欲包含多肽及其片段和变体（包括变体的片段）。对于抗原多肽，多肽的片
段任选含有多肽的至少一个连续或非线性表位。可以使用本领域普通技术证实至少一个表
位片段的精确边界。该片段包含至少约5个邻接氨基酸，例如至少约10个邻接氨基酸、至
少约15个邻接氨基酸、或至少约20个邻接氨基酸。多肽的变体如本文描述的。
含来自相同物种的其他蛋白；由来自不同物种的细胞表达；或在自然界中不存在。因此，化
学合成或在不同于其天然起源的细胞的细胞系统中合成的多肽将是与其天然结合的组分
“分离的”。还可以通过分离，使用本领域众所周知的蛋白纯化技术，使得蛋白基本上不含天
然结合的组分。
的结构以及推导的DNA和蛋白质序列在例如Shutter等人，Genes & Dev.，4：1313-1318
（2000）中进一步描述。术语“人DLL4”意欲包括重组人DLL4（rh DLL4），其可以通过标准
重组表达法进行制备。
遏VEGFR2且诱导VEGFR1。
位）的存在；例如，抗体识别且与特定蛋白结构结合而不是一般地与蛋白结合。如果抗体对
于表位“A”特异，那么在含有标记的“A”和抗体的反应中，含有表位A的分子（或游离的、未
标记的A）的存在将减少与抗体结合的标记的A的量。
蛋白特异性结合结合配偶体。结合蛋白包括包含一个或多个抗原结合结构域的抗体和其他
分子，其结合抗原分子或在抗原分子上的特定位点（表位）。结合蛋白包括抗体或其任何抗
原结合片段，和本领域已知和下文描述的抗体的多种形式和衍生物。相应地，结合蛋白包括
但不限于抗体、四聚免疫球蛋白、IgG分子、IgG1分子、单克隆抗体、嵌合抗体、CDR嫁接的抗
体、人源化抗体、亲和力成熟的抗体、和保留结合抗原的能力的任何此类抗体的片段。
变体、变体或衍生物。此类突变体、变体或衍生抗体形式是本领域已知的。其非限制性实施
方案在下文讨论。
或VL）和轻链恒定区。轻链恒定区包括一个结构域CL。VH和VL区可以进一步细分成称为
互补性决定区（CDR）的高变区，由称为构架区（FR）的更保守区域点缀。每个VH和VL由三
个CDRs和四个FRs组成，以下述顺序从氨基末端到羧基末端排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、
FR3、CDR3和FR4。免疫球蛋白分子可以是任何类型（例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY）、
种类（例如IgG 1、IgG2、IgG 3、IgG4、IgA1和IgA2）或亚类。
两个恒定结构域，CH2结构域和CH3结构域，且任选包含CH4结构域。Fc部分中改变抗体效
应子功能的氨基酸残基替换是本领域已知的（美国专利号5,648,260和5,624,821）。抗体
的Fc部分介导几种重要的效应子功能，例如细胞因子诱导、ADCC、吞噬作用、依赖补体的细
胞毒性（CDC）、和抗体或抗原-抗体复合物的半衰期/清除率。取决于治疗目的，在一些情
况下，这些效应子功能对于治疗抗体是希望的，但在其他情况下，可能是不需要的或甚至有
害的。特定人IgG同种型，特别是IgG1和IgG3，分别经由结合FcγRs和补体C1q而介导
ADCC和CDC。新生儿Fc受体（FcRn）是决定抗体的循环半衰期的关键组分。在另外一个实
施方案中，至少一个氨基酸残基在抗体的恒定区例如抗体的Fc区中进行替换，从而使得抗
体的效应子功能被改变。免疫球蛋白的两条等同重链的二聚化由CH3结构域的二聚化来介
导，且通过铰链区内的二硫键来稳定（Huber等人，Nature，264：415-420（1976）；Thies等
人，J. Mol. Biol.，293：67-79（1999））。铰链区内的半胱氨酸残基突变以阻止重链-重链
二硫键将使CH3结构域的二聚化不稳定。负责CH3二聚化的残基已得到鉴定（Dall’Acqua，
Biochem.，37：9266-9273（1998））。因此，可以生成单价半-Ig。有趣的是，已在自然界中
发现关于IgG和IgA亚类的这些单价半Ig分子（Seligman，Ann. Immunol.，129：855-70
（1978）；Biewenga等人，Clin. Exp. Immunol.，51：395-400（1983））。FcRn：Ig Fc区的化
学计量已测定为2:1（West等人，Biochem.，39：9698-9708（2000）），并且半Fc足以介导
FcRn结合（Kim等人，Eur. J. Immunol.，24：542-548（1994））。破坏CH3结构域二聚化的
突变可能对其FcRn结合没有更大的不利作用，因为对于CH3二聚化重要的残基位于CH3 b
折叠结构的内界面上，而负责FcRn结合的区域位于CH2-CH3结构域的外界面上。然而，由
于其与常规抗体那种相比较的较小尺寸，半Ig分子可以在组织穿透中具有特定优点。在一
个实施方案中，至少一个氨基酸残基在本发明的结合蛋白的恒定区例如Fc区中被替换，从
而使得重链的二聚化被破坏，导致半Ig分子。IgG的抗炎活性完全取决于IgG Fc片段的N
联聚糖的唾液酸化作用。已经确定了对抗炎活性准确的聚糖要求，从而使得可以产生合适
的IgG1 Fc片段，从而生成具有极大增强的能力的完全重组的唾液酸化IgG1 Fc（Anthony
等人，Science，320：373-376（2008））。
已显示抗体的抗原结合功能可以通过全长抗体的片段执行。此类抗体实施方案还可以是双
特异性、双重特异性或多特异性形式；特异性结合两种或更多种不同抗原（或相同抗原的两
个或更多个不同表位）。包含在术语抗体的“抗原结合部分”内的结合片段的例子包括（i）
Fab片段，由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；（ii）F（ab'）2片段，包含由铰链区
的二硫桥连接的两个Fab片段的二价片段；（iii）由VH和CH1结构域组成的Fd片段；（iv）
由抗体单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段；（v）包含单个可变结构域的dAb片段（Ward
等人，Nature，341:544-546（1989）；PCT公开号WO 90/05144 A1）；和（vi）分离的互补决
定区（CDR）。此外，尽管Fv片段的两个结构域VL和VH由分开基因编码，但它们可以使用重
组法通过合成接头来连接，所述合成接头使得它们能够作为单条蛋白质链制备，在所述单
条蛋白链中VL和VH区配对以形成单价分子（称为单链Fv（scFv）；参见例如，Bird等人，
Science，242：423-426（1988）；Huston等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA，85：5879-5883
（1988））。此类单链抗体也预期包含在术语抗体的“抗原结合部分”内。还包含其他形式的
单链抗体，例如双抗体。双抗体是二价、双特异性抗体，其中VH和VL结构域在单条多肽链上
表达，但使用的接头太短而不允许相同链上的两个结构域之间的配对，从而迫使结构域与
另一条链的互补结构域配对，并且产生两个抗原结合位点（参见例如，Holliger等人，Proc.
Natl. Acad. Sci. USA，90：6444-6448（1993）；Poljak，R.J.，Structure，2：1121-1123
（1994））。此类抗体结合部分是本领域已知的（参见Kontermann和Dubel编辑，Antibody
Engineering（Springer-Verlag. New York，2001），第790页（ISBN 3-540-41354-5））。此
外，单链抗体还包括包含一对串联Fv区段（VH-CH1-VH-CH1）的“线性抗体”， 所述串联Fv
区段连同互补轻链多肽一起形成一对抗原结合区域（Zapata等人Protein Eng.，8（10）：
1057-1062（1995）；和美国专利号5,641,870）。
过肽键连接的两个或更多个氨基酸残基，并且用于连接一个或多个抗原结合部分。此类接
头多肽是本领域众所周知的（参见例如，Holliger等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA，90：
6444-6448（1993）；Poljak，R.J.，Structure，2：1121-1123（1994））。免疫球蛋白恒定结
构域指重或轻链恒定结构域。人IgG重链和轻链恒定结构域氨基酸序列是本领域已知的且
在表2中表示。
子包括链霉抗生物素蛋白核心区的使用，以制备四聚scFv分子（Kipriyanov等人，Human
Antibodies and Hybridomas，6：93-101（1995）），以及半胱氨酸残基、标记肽和C末端多组
氨酸标签的使用，以制备二价和生物素化的scFv分子（Kipriyanov等人，Mol. Immunol.，
31：1047-1058（1994））。抗体部分例如Fab和F（ab'）2片段可以使用常规技术由完整抗
体制备，例如完整抗体分别地木瓜蛋白酶或胃蛋白酶消化。此外，抗体、抗体部分和免疫粘
附分子可以使用标准重组DNA技术获得，如本文描述和本领域已知的。
体）。然而，特异性结合DLL4的分离的抗体可以与其他抗原例如来自其他物种的DLL4分子
（例如muDLL4）具有交叉反应性。此外，分离的抗体可以基本上不含其他细胞材料和/或化
学药品。
的突变。单克隆抗体是高度特异性的，针对单一抗原。此外，与一般包括针对不同决定簇
（表位）的不同抗体的多克隆抗体制剂形成对照，每种mAb针对抗原上的单一决定簇。修饰
语“单克隆”不应解释为需要通过任何具体方法生产抗体。
疫球蛋白序列编码的氨基酸残基（例如，在体外通过随机或位点专一诱变或在体内通过体
细胞突变引入的突变）。然而，如本文使用的，术语“人抗体”不预期包括其中来源于另一种
哺乳动物物种例如小鼠种系的CDR序列已嫁接到人构架序列上的抗体。
抗体文库中分离的抗体（Hoogenboom，Trends Biotechnol.，15:62-70（1997）；Azzazy和
Highsmith，Clin. Biochem.，35：425-445（2002）；Gavilondo和Larrick，BioTechniques，
29：128-145（2000）；Hoogenboom和Chames，Immunol. Today，21：371-378（2000）），从对
于人免疫球蛋白基因是转基因的动物（例如小鼠）中分离的抗体（参见Taylor等人，Nucl.
Acids Res.，20：6287-6295（1992）；Kellermann和Green，Curr. Opin. Biotechnol.，13：
593-597（2002）；Little等人，Immunol. Today，21：364-370（2000）），或通过包括使人免
疫球蛋白基因序列与其他DNA序列剪接的任何其他方法制备、表达、产生或分离的抗体。此
类重组人抗体具有来源于人种系免疫球蛋白序列的可变和恒定区。然而，在一些实施方案
中，对此类重组人抗体实施体外诱变（或，当使用对于人Ig序列转基因的动物时，体内体细
胞诱变），且因此重组抗体的VH和VL区的氨基酸序列是，尽管来源于人种系VH和VL序列
且与人种系VH和VL序列相关，但可能在体内的人抗体种系谱内非天然存在的序列。
使用的，术语“CDR组”指在能够结合抗原的单个可变区中出现的三个CDRs的组。这些CDRs
的确切边界已根据不同系统不同地定义。由Kabat（Kabat等人，Sequences of Proteins
of Immunological Interest（National Institutes of Health，Bethesda，Md.（1987）
和（1991））描述的系统，不仅提供了可应用于抗体的任何可变区的明确残基编号系统，还提
供了限定三个CDRs的精确残基边界。这些CDRs可以被称为“Kabat CDRs”。Chothia和
同事（Chothia和Lesk，J. Mol. Biol.，196：901-917（1987）；Chothia等人，Nature，342：
877-883（1989））发现Kabat CDRs内的一些亚部分采取几乎相同的肽主链构象，尽管在氨
基酸序列水平上具有大的多样性。这些亚部分命名为“L1”、“L2”和“L3”或“H1”、“H2”和
“H3”，其中“L”和“H”分别指轻链和重链区域。这些区域可以被称为“Chothia CDRs”，所
述“Chothia CDRs”具有与Kabat CDRs重叠的边界。与Kabat CDRs重叠的定义CDRs的其
他边界已由Padlan，FASEB J.，9：133-139（1995）和MacCallum，J. Mol. Biol.，262（5）：
732-745（1996）描述。再其他的CDR边界定义可能不严格地遵循上文系统之一，但仍将与
Kabat CDRs重叠，尽管按照特定残基或残基组或甚至整个CDRs并不显著影响抗原结合的
预测或实验发现，它们可以缩短或加长。本文使用的方法可以利用根据这些系统中的任何
一种定义的CDRs，尽管优选实施方案使用Kabat或Chothia定义的CDRs。
轻链可变区中的其他氨基酸残基更可变（即高变）（Kabat等人，Ann. NY Acad. Sci.，190：
382-391（1971）和Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，
Fifth Edition，U.S. Department of Health and Human Services，NIH公开号91-3242
（1991））。对于重链可变区（VH），高变区对于CDR1为氨基酸位置31－35，对于CDR2为氨
基酸位置50－65，且对于CDR3为氨基酸位置95－102。对于轻链可变区（VL），高变区对
于CDR1为氨基酸位置24－34，对于CDR2为氨基酸位置50－56，且对于CDR3为氨基酸位
置89－97。
术人员能够根据Kabat编号、Chothia编号或其他系统精确地测定CDRs。参见例如，Martin，
"Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains," In
Kontermann和Dübel，编辑，Antibody Engineering（Springer-Verlag，Berlin，2001），第
31章，第432-433页。测定在可变重（VH）和可变轻（VL）区的氨基酸序列内的Kabat CDRs
的氨基酸序列以及从而Kabat FRs的序列的有用方法在下文提供：
对于鉴定CDR-L1氨基酸序列：
从VL区的氨基末端的约24个氨基酸残基开始；
在CDR-L1序列前的残基始终是半胱氨酸（C）；
在CDR-L1序列后的残基始终是色氨酸（W），一般是Trp-Tyr-Gln（W-Y-Q），以及
Trp-Leu-Gln（W-L-Q）、Trp-Phe-Gln（W-F-Q）和Trp-Tyr-Leu（W-Y-L）；
长度一般是10 – 17个氨基酸残基。
在CDR-L2序列前的残基一般是Ile-Tyr（I-Y），以及Val-Tyr（V-Y）、Ile-Lys（I-K）
和Ile-Phe（I-F）；
长度始终是7个氨基酸残基。
在CDR-L3氨基酸序列前的残基始终是半胱氨酸（C）；
之后的残基始终是Phe-Gly-X-Gly（F-G-X-G）（SEQ ID NO:7），其中X是任何氨基酸；
长度一般是7 – 11个氨基酸残基。
基；
之前的残基始终是Cys-X-X-X-X-X-X-X-X（SEQ ID NO:8），其中X是任何氨基酸；
之后的残基始终是Trp（W），一般是Trp-Val（W-V）以及Trp-Ile（W-I）和Trp-Ala
（W-A）；
长度一般是5 – 7个氨基酸残基。
之前的残基一般是Leu-Glu-Trp-Ile-Gly（L-E-W-I-G）（SEQ ID NO:9），以及其他变
异；
之后的残基是Lys/Arg-Leu/Ile/Val/Phe/Thr/Ala-Thr/Ser/Ile/Ala（K/R-L/I/V/F/
T/A-T/S/I/A）；
长度一般是16 - 19个氨基酸残基。
之前的残基始终是Cys-X-X（C-X-X），其中X是任何氨基酸，一般是Cys-Ala-Arg
（C-A-R）；
之后的残基始终是Trp-Gly-X-Gly（W-G-X-G）（SEQ ID NO:10），其中X是任何氨基酸；
长度一般是3 – 25个氨基酸残基。
和轻链可变区的抗体，其中一个或多个鼠CDRs（例如，CDR3）已用人CDR序列替换。
源化抗体”是抗体或其变体、衍生物、类似物或片段，其与目的抗原免疫特异性结合，且包含
基本上具有人抗体的氨基酸序列的构架（FR）区、和基本上具有非人抗体的氨基酸序列的互
补决定区（CDR）。如本文使用的，在CDR上下文中的术语“基本上”指具有的氨基酸序列至少
80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或至少99％等同于非人抗体CDR的氨基酸
序列的CDR。人源化抗体包含基本上所有至少一个、且一般为两个可变结构域（Fab、Fab'、
F（ab'）2、FabC、Fv），其中所有或基本上所有CDR区对应非人免疫球蛋白（即，供体抗体）的
那些，且所有或基本上所有构架区是人免疫球蛋白共有序列的那些。在一个实施方案中，人
源化抗体也包含至少部分免疫球蛋白恒定区（Fc），一般为人免疫球蛋白的那种。在一些实
施方案中，人源化抗体包含轻链以及至少重链的可变结构域。抗体还可以包括重链的CH1、
铰链、CH2、CH3、和CH4区。在一些实施方案中，人源化抗体只包含人源化轻链。在一些实施
方案中，人源化抗体只包含人源化重链。在具体实施方案中，人源化抗体只包含轻链的人源
化可变结构域和/或人源化重链。
或同种型的序列，并且可以使用本领域众所周知的技术选择特定恒定结构域，以最佳化所
需效应子功能。
位点上的CDR或构架残基不对应于供体抗体或共有构架。然而，在优选实施方案中，此类突
变将不是广泛的。通常，至少80％、优选至少85％、更优选至少90％且更优选至少95％的
人源化抗体残基将对应于亲本FR和CDR序列的那些。如本文使用的，术语 “共有构架”指
在共有免疫球蛋白序列中的构架区。如本文使用的，术语“共有免疫球蛋白序列”指在相关
免疫球蛋白序列家族中最频繁出现的氨基酸（或核苷酸）形成的序列（参见例如，Winnaker，
From Genes to Clones（Verlagsgesellschaft，Weinheim，1987））。“共有免疫球蛋白序列”
因此可以包含“一个或多个共有构架区”和/或“一个或多个共有CDR”在免疫球蛋白家族
中，共有序列中的每个位置由家族中在那个位置上最频繁出现的氨基酸占据。如果两个氨
基酸同样频繁出现，那么任一可以包括在共有序列中。
和力成熟的抗体将对靶抗原具有纳摩尔或甚至皮摩尔的亲和力。用于产生亲和力成熟的
抗体的多种程序是本领域已知的。例如，Marks等人，BioTechnology，10：779-783（1992）
描述了通过VH和VL结构域改组的亲和力成熟。CDR和/或构架残基的随机诱变由下述描
述：Barbas等人，Proc. Nat. Acad. Sci. USA，91：3809-3813（1994）；Schier等人，Gene，
169：147- 155（1995）；Yelton等人，J. Immunol.，155：1994-2004（1995）；Jackson等人，
J. Immunol.，154（7）：3310-3319（1995）；Hawkins等人，J. Mol. Biol.，226：889-896
（1992）。在美国专利号6,914,128 B1中描述了由活性增强氨基酸残基在选择性诱变位置
以及在接触或高变位置的选择性突变。
点，且一般不是天然存在的抗体。术语“多特异性结合蛋白”指能够结合两种或更多种相关
或无关靶的结合蛋白，包括能够结合相同靶分子的两个或更多个不同表位的结合蛋白。
缀合（参见Staerz等人，Nature，314（6012）：628-631（1985）），或结进孔（knob-in-hole）
或在Fc区中引入突变的类似方法（参见Holliger等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA，90
（14）：6444-6448（1993）），从而导致其中只有一种是功能性双特异性抗体的多种不同免疫
球蛋白种类。通过分子功能，双特异性抗体结合其两个结合臂之一（一对HC/LC）上的一种
抗原（或表位），且结合其第二个臂（不同对的HC/LC）上的不同抗原（或表位）。通过这个定
义，双特异性抗体具有两个不同的抗原结合臂（在特异性和CDR序列中），且对于其结合的每
种抗原是单价的。
特异性结合蛋白具有两个相同的抗原结合臂，具有相同的特异性和相同的CDR序列，且对
于其与之结合的每种抗原是二价的。
以是单特异性的，即能够结合一种抗原（或一个特异性表位），或多特异性的，即能够结合两
种或更多种抗原（即相同靶抗原分子的两个或更多个表位或不同靶抗原的两个或更多个表
位）。包含两条重链DVD多肽和两条轻链DVD多肽的优选DVD结合蛋白称为“DVD免疫球蛋
白”或“DVD-Ig”。此类DVD-Ig结合蛋白因此是四聚的且暗示IgG分子，但提供比IgG分子
更多的抗原结合位点。因此，每一半四聚DVD-Ig暗示一半IgG分子，且包含重链DVD多肽，
和轻链DVD多肽，但与提供单个抗原结合结构域的IgG分子的一对重和轻链不同，DVD-Ig的
一对重和轻链提供两个或更多个抗原结合位点。
CDRs。相应地，结合两个不同表位（即两个不同抗原分子的两个不同表位或相同抗原分子的
两个不同表位）的DVD-Ig结合蛋白包含衍生自第一种亲本单克隆抗体的抗原结合位点和第
二种亲本单克隆抗体的抗原结合位点。
分子的优选例子包括包含结构式VD1-（X1）n-VD2-C-（X2）n的重链，其中VD1是第一个重
链可变结构域，VD2是第二个重链可变结构域，C是重链恒定结构域，X1是接头，条件是它
不是CH1，X2是Fc区，和n是0或1，但优选1；和包含结构式VD1-（X1）n-VD2-C-（X2）n
的轻链，其中VD1是第一个轻链可变结构域，VD2是第二个轻链可变结构域，C是轻链恒定
结构域，X1是接头，条件是它不是CH1，和X2不包含Fc区；和n是0或1，但优选1。此类
DVD-Ig可以包括两条此类重链和两条此类轻链，其中每条链包括串联连接的可变结构域，
而在可变区之间没有间插恒定区，其中重链和轻链结合以形成串联功能性抗原结合位点，
并且一对重和轻链可以与另一对重和轻链结合，以形成具有四个功能性抗原结合位点的四
聚结合蛋白。在另一个例子中，DVD-Ig分子可以包括重和轻链，其各自包括串联连接的三
个可变结构域（VD1、VD2、VD3），而在可变结构域之间没有间插恒定区，其中一对重和轻链可
以结合以形成三个抗原结合位点，并且一对重和轻链可以与另一对重和轻链结合，以形成
具有六个功能性抗原结合位点的四聚结合蛋白。
地，此类另外的特性是一种或多种亲本单克隆抗体的抗体参数。可以促成来自一种或多种
其亲本单克隆抗体的DVD-Ig结合蛋白的抗体参数包括但不限于抗原特异性、抗原亲和力、
能力、生物学功能、表位识别、蛋白质稳定性、蛋白质可溶性、生产效率、免疫原性、药物代谢
动力学、生物利用率、组织交叉反应性以及直向同源抗原结合。
白、结合人DLL4的表位和另一个物种（例如小鼠）的DLL4的表位的DVD-Ig结合蛋白、和结
合人DLL4的表位和另一种靶分子（例如VEGFR2或VEGFR1）的表位的DVD-Ig结合蛋白。
必须是可使用已知用于评价与抗原结合的抗体的多种方法中的任何一种测量的。此外，本
文的多价抗体的每个抗原结合位点的抗原结合亲和力无需在量上相同。
或核酸序列。在一些实施方案中，术语“接纳体”指提供或编码一个或多个恒定区的抗体
氨基酸或核酸序列。在另外一个实施方案中，术语“接纳体”指提供或编码一个或多个构架
区和一个或多个恒定区的抗体氨基酸或核酸序列。在具体实施方案中，术语“接纳体”指
这样的人抗体氨基酸或核酸序列，其提供或编码一个或多个构架区的至少80％、优选至少
85％、至少90％、至少95％、至少98％或100％氨基酸序列。依照这个实施方案，接纳体可
以包含至少1、至少2、至少3、至少4、至少5或至少10个氨基酸残基，其不在人抗体的一个
或多个特定位置上出现。接纳体构架区和/或一个或多个接纳体恒定区可以例如衍生自或
得自种系抗体基因、成熟抗体基因、功能抗体（例如本领域众所周知的抗体、开发中的抗体
或可通过商业途径获得的抗体）。
227：799-817（1992），两者都引入本文作为参考）限定的。根据Chothia等人，许多抗体的
CDRs的关键部分具有几乎等同的肽主链证实，尽管在氨基酸序列水平上的大多样性。每个
规范结构主要为形成环的氨基酸残基的邻接区段限定了一组肽主链扭转角。
源化抗体的背景中，术语“供体抗体”指提供一个或多个CDRs的非人抗体。
相应不同的解释。六个CDRs（轻链的CDR-L1、-L2和-L3，以及重链的CDR-H1、-H2和-H3）
也将轻链和重链上的构架区分成在每条链上的四个亚区（FR1、FR2、FR3和FR4），其中CDR1
位于FR1和FR2之间，CDR2位于FR2和FR3之间，且CDR3位于FR3和FR4之间。不将特定
亚区指定为FR1、FR2、FR3或FR4，如其他人提及的，构架区代表单条天然存在的免疫球蛋白
链可变区内的组合FRs。如本文使用的，FR代表四个亚区之一，且FRs代表构成构架区的四
个亚区中的两个或更多个。
体。在本发明的一个实施方案中，人重链和轻链接纳体序列选自可公开获得的数据库
例如V-base（hypertext transfer protocol://vbase.mrc-cpe.cam.ac.uk/）或国际
ImMunoGeneTics®（IMGT®）信息系统（hypertext transfer protocol://imgt.cines.fr/
texts/IMGTrepertoire/LocusGenes/）中列出的构架序列。下表3提供了本领域已知的人
重链接纳体序列的例子的非限制性列表。下表4提供了本领域已知的人轻链接纳体序列的
例子的非限制性列表。在本发明的一个实施方案中，人重链和轻链接纳体序列选自下表3
和表4中所述的氨基酸序列，然而，表3和4中未列出的其他人重链和轻链接纳体序列也可
以用于人源化根据本发明的抗体。
纳体序列组成的一组；由VH3共有FR1、VH3共有FR2、VH3共有FR3和JH4 FR4接纳体序列
组成的一组；由VH1-46 FR1、VH1-46 FR2、VH1-46 FR3和JH4 FR4接纳体序列组成的一组；
由VH3-30 FR1、VH3-30 FR2、VH3-30 FR3和JH3 FR4接纳体序列组成的一组；和由VH3共
有FR1、VH3共有FR2、VH3共有FR3和JH3 FR4接纳体序列组成的一组。
组成的一组，和由L2 FR1、L2 FR2、L2 FR3和JK2 FR4接纳体序列组成的一组。
个、六个、七个或八个/结合结构域）接纳体构架序列：
重链构架-1（H-FR1）：
E-V-Q-L-V-E-S-G-G-G-L-V-Q-P-G-G-S-L-R-L-S-C-A-A-S-G-F-T-F-X30（SEQ ID
NO:143），其中X30是S、R或G；
重链构架-2（H-FR2）：W-V-R-Q-A-P-G-K-G-L-E-W-V-A（SEQ ID NO:144）；
重链构架-3（H-FR3）：
R-F-T-I-S-R-D-N-A-K-X11-S-L-Y-L-Q-M-N-S-L-R-A-E-D-T-A-V-Y-Y-C-X31-R（SEQ ID
NO:145），其中；
X11是N或S；和
X31是A或S；
重链构架-4（H-FR4）：W-G-Q-G-T-L-V-T-V-S-S（SEQ ID NO:146）；
轻链构架-1（L-FR1）：
D-I-Q-M-T-Q-S-P-S-S-L-S-A-S-V-G-D-R-V-T-I-T-C（SEQ ID NO:147）；
轻链构架-2（L-FR2）：W-Y-Q-Q-K-P-G-K-X9-P-K-L-L-I-X15（SEQ ID NO:148），其中；
X9是A或S；和
X15是F或Y；
轻链构架-3（L-FR3）：
G-V-P-S-R-F-S-G-S-G-S-G-T-D-X15-T-L-T-I-S-S-L-Q-P-E-D-F-A-T-Y-Y-C（SEQ ID
NO:149），其中；
X15是F或S；和
轻链构架-4（L-FR4）：F-G-Q-G-T-K-L-E-I-K（SEQ ID NO:150）。
抗体人源化。
球蛋白的遗传重排和突变（参见例如，Shapiro等人，Crit. Rev. Immunol.，22（3）：183-200
（2002）；Marchalonis等人，Adv. Exp. Med. Biol.，484:13-30（2001））。由本发明的各种
实施方案提供的优点之一源于下述认识：种系抗体基因比成熟抗体基因更可能保存物种中
个体特有的基本氨基酸序列结构，因此当在那个物种中治疗上使用时，更不可能被识别为
来自外来来源。
个：与CDR接近的残基、潜在糖基化位点（可以是N或O-糖基化位点）、稀有残基、能够与抗
原相互作用的残基、能够与CDR相互作用的残基、规范残基、在重链可变区和轻链可变区之
间的接触残基、在Vernier区内的残基、和在可变重链CDR1的Chothia定义和第一个重链
构架的Kabat定义之间重叠的区域中的残基。
Vernier区残基形成CDRs基础层，并且可以影响CDRs的结构和抗体的亲和力。
40％、60％、80％、85％、90％、95％或更多。
活性的抗hDLL4抗体，例如，在人Notch受体结合测定中PHA胚细胞（PHA blast）增殖的抑
制或受体结合的抑制，或PHA胚细胞干扰素-γ诱导测定。
性表面定组（grouping），且在某些实施方案中，可以具有具体三维结构特征、和/或具体电
荷特征。表位是由抗体结合的抗原区域。表位因此由已知结合特异性结合配偶体上的互补
位点的抗原（或其片段）区域的氨基酸残基组成。抗原或抗原片段可以含有超过一个表位。
因此，本领域技术人员应当理解抗体分子的每一个“抗原结合位点”结合抗原分子的表位，
并且每一个抗原分子可以具有一个、两个、几个或多个表位。此外，本领域技术人员应当理
解针对抗原分子的两种独立分离的抗体可以在相同表位上或在抗原分子的两个不同表位
上结合。
抗体称为“结合相同表位”。另外，表位的结构性定义（重叠、类似、同一）是提供信息的，但
是功能性定义往往更加相关，因为它们包含了结构性（结合）和功能性（调谐、竞争）参数。
Uppsala，Sweden and Piscataway，New Jersey，US），允许分析实时生物特异性相互作用的
光学现象。关于进一步的描述，参见Jönsson等人，Ann. Biol. Clin.，51：19-26（1993）；
Jönsson等人BioTechniques，11：620-627（1991）；Johnsson等人，J. Mol. Recognit.，8：
125-131（1995）；和Johnsson等人，Anal. Biochem.，198：268-277（1991）。
常数。也将“Kon”称为术语“结合速率常数”或“ka”，如此处可互换使用的。指示抗体与其
靶抗原的结合速率、或抗体与抗原之间的复合物形成速率的该值也由等式表示：
抗体（“Ab”）+抗原（“Ag”）→Ab-Ag。
此处可互换使用的。该值指示抗体从其靶抗原的解离速率、或Ab-Ag复合物随时间过去分
离为游离抗体和抗原的解离速率，其表示为下列等式
Ab + Ag ← Ab-Ag。
解离速率常数和平衡解离常数表示抗体对抗原的结合亲和力。确定结合和解离速率常数的
方法为本领域熟知。使用基于荧光的技术提供了高灵敏度以及在生理缓冲液中在平衡时检
查样品的能力。可以使用其他实验途径和仪器例如BIAcore®表面等离振子共振（生物分子
相互作用分析）测定（例如，可以从BIAcore International AB，a GE Healthcare company，
Uppsala，瑞典获得的仪器）。另外，也可以使用可以从Sapidyne Instruments（Boise，
Idaho）获得的KinExA®（动态排阻测定（Kinetic Exclusion Assay））测定。
标记的特异性结合配偶体例如抗体或分析物称为“可检测地标记的”。因而，如本文使用的
术语“标记的结合蛋白”指具有标记掺入的蛋白，所述标记为结合蛋白的鉴定作准备。在一
个实施方案中，标记是可检测标记，其可以产生能通过目视或仪器工具检测的信号，例如，
掺入放射性标记的氨基酸或使生物素化（biotinyl）部分与多肽附着，所述生物素化部分可
以通过标记的抗生物素蛋白（例如包含可以通过光学或比色法检测的荧光标记或酶促活性
的抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白）进行检测。关于多肽的标记例子包括但不限于下述：
3 14 35 90 99 111 125 131 177 166 153
放射性同位素或放射性核素（例如，H、C、S、Y、Tc、 In、I、 I、Lu、 Ho和 Sm），色
原、荧光标记（例如，FITC、罗丹明和镧系磷光体），酶促标记（例如，辣根过氧化物酶、萤光素
酶、碱性磷酸酶）；化学发光标记；生物素化基团；由次级报道分子识别的预定多肽表位（例
如，亮氨酸拉链对序列、关于第二抗体的结合位点、金属结合结构域和附加表位）；和磁性试
剂（例如钆螯合物）。免疫测定一般采用的代表性标记实例包括产生光的部分，例如吖啶鎓
（acridinium）化合物，以及产生荧光的部分，例如荧光素。其他标记是本领域已知的或如此
处所述。在这点上，部分自身可能不是可检测地标记的，但是与另一个部分反应后，可能变
得可检测。使用“可检测地标记的”意指包含后一种类型的可检测标记。
学材料制备的提取物。优选地，治疗剂或细胞毒剂包括但不限于，百日咳毒素、紫衫酚、细胞
松弛素B、短杆菌肽D、溴化乙锭、吐根碱、丝裂霉素、依托泊苷、替尼泊苷（tenoposide）、长
春新碱、长春碱、秋水仙碱、阿霉素、柔红霉素、二羟基炭疽菌素二酮、米托蒽醌、光辉霉素、
放线菌素D、1-去氢睾酮、糖皮质激素、普鲁卡因、丁卡因、利多卡因、心得安、和嘌呤霉素及
其类似物或同源物。
晶态。晶体由规则、重复、三维排列的原子、离子、分子（例如，蛋白例如抗体）、或分子组合
（assembly）（例如，抗原/抗体复合物，包括Fab/抗原复合物）组成。这些三维排列根据本
领域充分了解的特定数学关系排列。晶体中重复的基本单位或构件被称为不对称单位。符
合给定、明确的晶体学对称性的排列中的不对称单位重复提供了晶体的“晶胞”。通过在所
有三个维度中规则平移的晶胞重复提供了晶体。参见Giegé等人，InCrystallization of
Nucleic Acids and Proteins，a Practical Approach，第二版,（Ducruix和Giegé，编辑）
（Oxford University Press，New York，1999），第1章，第1-16页。
酸”与之结合的全部或部分多核苷酸结合；与在自然界中它不与之连接的多核苷酸可操作
地连接；或在自然界中不作为较大序列的部分存在。
体是病毒载体，其中另外的DNA区段可以连接到病毒基因组内。某些载体能够在它们已引
入其内的宿主细胞中自主复制（例如，具有细菌复制起点的细菌载体和游离型哺乳动物载
体）。其他载体（例如非游离型哺乳动物载体）在引入宿主细胞内后可以整合到宿主细胞基
因组内，且因此连同宿主基因组一起进行复制。此外，某些载体能够指导它们与之可操作地
连接的基因表达。此类载体在本文中被称为“重组表达载体”（或简单地，“表达载体”）。一
般而言，在重组DNA技术中使用的表达载体通常为质粒的形式。在本说明书中，“质粒”和
“载体”可以互换使用，因为质粒是最常用的载体形式。然而，本发明预期包括此类其他形式
的表达载体，例如提供等价功能的病毒载体（例如复制缺陷型逆转录病毒、腺病毒和腺伴随
病毒）。RNA形式的载体（包括RNA病毒载体）也可以在本发明中有用。
列的表达在与控制序列相容的条件下完成。“可操作地连接的”序列包括与目的基因邻接的
表达控制序列，反式起作用即位于与目的基因不同的核酸分子上的表达控制序列，以及位
于与目的基因相同的核酸分子上但隔一段距离的表达控制序列。如本文使用的，术语“表达
控制序列”指实现它们与之连接的编码序列表达和加工所必需的多核苷酸序列。表达控制
序列包括合适的转录起始、终止、启动子和增强子序列；有效的RNA加工信号例如剪接和多
腺苷酸化信号；稳定细胞质mRNA的序列；增强翻译效率的序列（即，Kozak共有序列）；增强
蛋白稳定性的序列；和需要时，增强蛋白分泌的序列。此类控制序列的性质依赖于宿主生物
而不同；在原核生物中，此类控制序列一般包括启动子，核糖体结合位点，和转录终止序列；
在真核生物中，此类控制序列一般包括启动子和转录终止序列。术语“控制序列”预期包括
其存在是表达和加工必需的组分，且还可以包括其存在是有利的另外组分，例如前导序列
和融合配偶体序列。
酸序列插入原核或真核宿主细胞内的任何已知方法。该方法基于待转化的宿主细胞进行选
择，且可以包括但不限于，跨越细胞膜的质粒摄取、病毒感染、电穿孔、脂质转染、和粒子轰
击。此类“转化的”细胞包括其中插入的DNA能够作为自主复制质粒或作为宿主染色体部
分复制的稳定转化的细胞。它们还包括瞬时表达插入的DNA或RNA有限时间段的细胞。
限制性例子，美国专利号7,262,028中所述的宿主细胞。此类术语不仅意指特定的受试细
胞，还意指此类细胞的后代。因为由于突变或环境影响可能在随后世代中出现某些修饰，所
以此类后代实际上可能不等同于亲本细胞，但仍包括在如本文使用的术语“宿主细胞”的范
围内。在一个实施方案中，宿主细胞包括选自任何生物界的原核和真核细胞。在另一个实施
方案中，真核细胞包括原生生物、真菌、植物和动物细胞。在另一个实施方案中，宿主细胞包
括但不限于原核物种，例如大肠杆菌；哺乳动物细胞系，例如CHO、HEK 293、COS、NS0、SP2和
PER.C6；昆虫细胞系Sf9；和真菌细胞物种，例如酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）。
文所述的来进行。前述技术和程序一般可以根据本领域众所周知以及如各种一般和更具体
的参考文献中所述的常规方法来进行，所述参考文献在本说明书自始至终引用和讨论。参
见例如，Sambrook等人，Molecular Cloning：A Laboratory Manual，第二版（Cold Spring
Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，1989）。
述DNA构建体稳定且可操作地整合到转基因生物由其发育的细胞的基因组内，从而指导编
码的基因产物在转基因生物的一种或多种细胞类型或组织中表达。
减少。分子的示例性活性和功能包括但不限于，结合特征、酶促活性、细胞受体激活、和信号
转导。
能量级相比较，调节剂可以引起分子某一活性或功能量级中的增加或减少。在某些实施方
案中，调节剂是减少分子至少一种活性或功能量级的抑制剂。示例性抑制剂包括但不限于，
蛋白、肽、抗体、肽体（peptibodies）、碳水化合物或小有机分子。肽体已得到描述。参见例
如PCT公开号WO01/83525。
体目的激动剂可以包括但不限于，Notch信号传导途径的成员、DLL4多肽和核酸、碳水化合
物、或与DLL4结合的任何其他分子。
调节剂。具体目的拮抗剂包括阻断或调节DLL4尤其是人DLL4（hDLL4）的生物学或免疫
学活性的那些。hDLL4拮抗剂和抑制剂可以包括但不限于，蛋白质、核酸、碳水化合物、或与
hDLL4和/或啮齿类动物DLL4结合的任何其他分子。
相关的一种或多种症状复发、发展、发作或进展；检测病症；或增强或改善另一种疗法（例
如，预防或治疗剂）的预防或治疗作用。
患有疾病、病症或状况的人；和/或对疾病、病症或状况进行治疗的人。更优选地，患者或受
试者就癌症或其他疾病进行治疗或评估，其中现有的异常DLL4表达支持癌症或其他疾病，
并且DLL4活性的抑制或破坏是治疗癌症或其他疾病希望的。
但不限于，人、小鼠、大鼠、猴、狗、兔和其他动物。此类物质包括但不限于，血液（例如全血）、血浆、血清、尿、羊膜液、滑液、内皮细胞、白细胞、单核细胞、其他细胞、器官、组织、骨髓、淋巴结和脾。
液、稀释剂、盐、酶、酶的辅因子、检测试剂、预处理试剂/溶液、底物（例如作为溶液）、终止液等，依照此处所述方法和其他本领域已知方法，其可以包括于用于测试样品（例如患者尿、
血清或血浆样品）测定的试剂盒中。因此，在本公开内容上下文中，“至少一种组分”、“组分”
和“多种组分”可以包括如上的多肽或其他分析物，例如包含分析物比如多肽的组合物，其
任选地固定在固体支持物上，例如通过与抗分析物（例如，抗多肽）抗体结合。一些组分可以
在溶液中或者被冻干以重构用于测定。
最高风险。
类似短语指结合蛋白例如抗体（或其抗原结合片段）特异性结合目的分子（或其片段）而不
对其他实体特异性结合的能力。
特异性结合对可以包括生物素和抗生物素蛋白（或链霉抗生物素蛋白）、碳水化合物和凝集
素、互补核苷酸序列、效应物与受体分子、辅因子和酶、酶抑制物和酶等。另外，特异性结合
对可以包括作为最初特异性结合成员类似物的成员，例如分析物类似物。免疫反应性特异
性结合成员包括抗原、抗原片段和抗体，包括单克隆抗体和多克隆抗体及其复合物、片段和
变体（包括变体的片段），无论是分离的还是重组产生的。
给定多肽生物学活性（例如，如果变体DLL4保持野生型DLL4的最初抗体结合位点（表位），
那么变体DLL4可以与野生型DLL4竞争结合抗DLL4抗体）。氨基酸保守取代，即，将氨基酸
用具有相似特性（例如，亲水性和带电区域的程度和分布）的不同氨基酸替换，被本领域认
可为一般涉及小改变。如本领域所理解的，可以部分通过考虑氨基酸的亲水指数而鉴定这
些小改变（见，例如Kyte等人，J. Mol. Biol.，157：105-132（1982））。氨基酸的亲水指数
基于对其疏水性和电荷的考虑。本领域已知，可以取代具有相似亲水指数的氨基酸，而仍然
保持蛋白功能。一方面，取代具有亲水指数±2的氨基酸。也可以使用氨基酸亲水性来揭
示将引起保持生物学功能的蛋白的取代。在肽的上下文中，考虑氨基酸的亲水性允许对该
肽的最大局部平均亲水性的计算，这是据报道与抗原性和免疫原性良好关联的有用的量度
（参见例如，美国专利号4,554,101）。如本领域所理解的，具有相似亲水性值的氨基酸的取
代可以产生保持生物学活性的肽，所述生物学活性例如免疫原性。一方面，用彼此具有±2
以内的亲水性值的氨基酸来实施取代。氨基酸的疏水性指数和亲水性值都受该氨基酸的具
体侧链影响。与那个观察一致，将与生物学功能相容的氨基酸取代理解为取决于氨基酸、且
尤其是那些氨基酸的侧链的相对相似性，如通过疏水性、亲水性、电荷、大小和其他特性所
揭示的。“变体”也可用于描述已经经过不同加工（例如蛋白酶解、磷酸化或其他翻译后修
饰）而仍然保持其生物学活性或抗原反应性（例如结合DLL4的能力）的多肽或其片段。除
非另外与上下文相矛盾，此处使用“变体”意在包含变体的片段。
限于，人、小鼠、大鼠、猴、狗、兔和其他动物。此类物质包括但不限于，血液、血清、尿、滑液、细胞、器官、组织、骨髓、淋巴结和脾。
嵌合抗体。在另一个方面，本发明提供了DLL4的CDR嫁接的抗体或其抗原结合部分。本发
明的另一个方面提供了结合DLL4的人源化抗体或其抗原结合部分。在一个实施方案中，抗
体或其部分是分离的抗体或其分离的部分。在另一个实施方案中，抗体或其抗原结合部分
是中和抗DLL抗体。有利地，结合DLL4的此类抗体或其抗原结合部分作为治疗剂有用，所
述治疗剂可以施用于个体（人或其他哺乳动物）。优选地，本发明的抗体或其抗原结合部分
是中和抗DLL4和/或抗VEGFR2抗体。
领域已知和例如Harlow等人，Antibodies： A Laboratory Manual，第二版（Cold Spring
Harbor Laboratory Press，1988）；Hammerling，等人Monoclonal Antibodies and T-Cell
Hybridomas（Elsevier，New York，1981）中教导的那些。还应当指出，如本文使用的，术语
“单克隆抗体”不限于通过杂交瘤技术产生的抗体。术语“单克隆抗体”指来源于单个克隆，
包括任何真核、原核、或噬菌体克隆，而不是产生其的方法的抗体。
DLL4免疫接种的动物例如大鼠或小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合，且随后就分泌能够结合
本发明多肽的抗体的杂交瘤克隆筛选由融合而造成的杂交瘤，而生成杂交瘤。简言之，大鼠
可以用DLL4抗原进行免疫接种（参见下文实施例）。在优选实施方案中，DLL4抗原与佐剂
一起施用以刺激免疫应答。此类佐剂包括完全或不完全弗氏佐剂、RIBI（胞壁酰二肽）或
ISCOM（免疫刺激复合物）。此类佐剂可以通过使多肽隔绝在局部沉积物而保护其不受快速
分散，或它们可以包含刺激宿主分泌对于巨噬细胞和免疫系统的其他组分是趋化性的因子
的物质。优选地，如果待施用多肽，那么免疫接种时间表将涉及在几周内展开的多肽的两次
或更多次施用；然而，还可以使用多肽的单次施用。
用，可以从血清中获得免疫球蛋白级分，或可以从血清中纯化抗DLL4抗体。以这种方式获
得的血清或免疫球蛋白是多克隆的，从而具有特性的异质阵列。
合，例如来自可从美国典型培养物保藏中心（ATCC，Manassas，Virginia，US）获得的细胞系
SP20的细胞。通过有限稀释选择且克隆杂交瘤。随后通过本领域已知的方法就分泌能够结
合DLL4的抗体的细胞测定杂交瘤克隆。一般包含高水平抗体的腹水可以通过用阳性杂交
瘤克隆免疫接种大鼠生成。
融合。参见例如，Harlow和Lane，同上。在优选实施方案中，骨髓瘤细胞不分泌免疫球蛋白
多肽（非分泌细胞系）。在融合和抗生素选择后，使用DLL4或其部分或表达DLL4的细胞筛
选杂交瘤。在优选实施方案中，使用酶联免疫吸附测定（ELISA）或放射免疫测定（RIA）优选
ELISA执行最初筛选。ELISA筛选的例子在PCT公开号WO 00/37504中提供。
乏免疫系统的动物例如裸鼠、或在体外细胞培养中培养和扩增。选择、克隆和扩增杂交瘤的
方法是本领域普通技术人员众所周知的。
中，杂交瘤是人杂交瘤，其中人非分泌性骨髓瘤与表达抗DLL4抗体的人细胞融合。
产生Fab片段）或胃蛋白酶（以产生F（ab'）2片段）。IgG分子的F（ab'）2片段保留更大
的（“亲本”）IgG分子的两个抗原结合位点，包括亲本IgG分子的轻链（含有可变轻链和恒定
轻链区）、重链的CH1结构域和二硫键形成铰链区。相应地，如同亲本IgG分子，F（ab'）2片
段仍能够交联抗原分子。
92/02551和Babcock等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA，93：7843-7848（1996）中所述。
在这种方法中，使用抗原特异性溶血噬斑测定筛选分泌目的抗体的单个细胞，例如衍生自
在章节I.A.1（上文）中所述的任何一种免疫接种的动物的淋巴细胞，其中使用接头例如生
物素使抗原DLL4、DLL4的亚单位或其片段与绵羊红细胞偶联，且用于鉴定分泌对于DLL4具
有特异性的抗体的单个细胞。在鉴定目的抗体分泌性细胞后，通过逆转录酶PCR（RT-PCR）
从细胞中拯救重和轻链可变区cDNAs，随后可以在合适的免疫球蛋白恒定区（例如，人恒定
区）背景中，在哺乳动物宿主细胞例如COS或CHO细胞中表达这些可变区。用扩增的免疫
球蛋白序列转染的、来源于体内选择的淋巴细胞的宿主细胞，随后可以经历进一步的体外
分析和选择，例如通过淘选转染的细胞以分离表达针对DLL4的抗体的细胞。扩增的免疫球
蛋白序列进一步可以进行体外处理，例如通过体外亲和力成熟法。参见例如PCT公开号WO
97/29131和PCT公开号WO 00/56772。
XENOMOUSE®转基因小鼠，包含人免疫球蛋白基因座大片段且在小鼠抗体产生方面有缺陷的
工程改造的小鼠品系。参见例如，Green等人，Nature Genetics，7：13-21（1994）以及美国专
利 号 5,916,771；5,939,598；5,985,615；5,998,209；6,075,181；6,091,001；6,114,598；
和6,130,364。还参见PCT公开号WO 91/10741；WO 94/02602；WO 96/34096；WO 96/33735；
WO 98/16654；WO 98/24893；WO 98/50433；WO 99/45031；WO 99/53049；WO 00/09560；和
WO 00/37504。XENOMOUSE®转基因小鼠生产全人抗体的成体样人谱，且产生抗原特异性人
单克隆抗体。通过引入兆碱基大小的、人重链基因座和x轻链基因座的种系构型YAC片段，
XENOMOUSE®转基因小鼠包含约80％人抗体谱。参见Mendez 等人，Nature Genetics 15：
146-156（1997），Green和Jakobovits，J. Exp. Med.，188：483-495（1998），其公开内容
在此引入作为参考。
且包括在下述参考文献中描述的方法：例如，美国专利号5,223,409（Ladner等人）；PCT
公开号WO 92/18619（Kang等人）；PCT公开号WO 91/17271（Dower等人）；PCT公开号
WO 92/20791（Winter等人）；PCT公开号WO 92/15679（Markland等人）；PCT公开号WO
93/01288（Breitling等人）；PCT公开号WO 92/01047（McCafferty等人）；PCT公开号WO
92/09690（Garrard等人）；Fuchs等人，Bio/Technology，9：1369-1372（1991）；Hay等人，
Hum. Antibod. Hybridomas，3：81-85（1992）；Huse等人，Science，246：1275-1281（1989）；
McCafferty等人，Nature，348：552-554（1990）；Griffiths等人，EMBO J.，12：725-734
（1993）；Hawkins等人，J. Mol. Biol.，226：889-896（1992）；Clackson等人，Nature，352：
624-628（1991）；Gram等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA，89：3576-3580（1992）；Garrard
等人，Bio/Technology，9：1373-1377（1991）；Hoogenboom等人，Nucl. Acids Res.，19：
4133-4137（1991）；Barbas等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA，88：7978-7982（1991）；美
国专利申请公开号2003/0186374；和PCT公开号WO 97/29131，其各自公开内容在此引入作
为参考。
尚未用DLL4免疫接种的人受试者的人抗体文库。通过用包括人DLL4的肽筛选重组抗体文
库来选择本发明的抗体，以从而选择识别DLL4的那些抗体。用于执行此类筛选和选择的方
法是本领域众所周知的，例如先前段落中在参考文献中描述的。为了选择对于DLL4具有特
定结合亲和力的本发明的抗体，例如以特定Koff速率常数与人DLL4解离的那些，领域已知
的表面等离振子共振法可以用于选择具有所需Koff速率常数的抗体。为了选择对于DLL4具
有特定中和活性的本发明的抗体，例如具有特定IC50的那些，可以使用本领域已知的用于
评估DLL4活性抑制的方法。
其的多核苷酸序列。此类噬菌体可以用于展示由谱或组合抗体文库（例如，人或鼠）表达
的抗原结合结构域。表达结合目的抗原的抗原结合结构域的噬菌体可以用抗原进行选择
或鉴定，例如使用标记的抗原或被固体表面或珠结合或捕获的抗原。这些方法中使用的噬
菌体一般是包括fd和M13结合结构域的丝状噬菌体，所述结合结构域由具有Fab、Fv或
dsFv抗体结构域的噬菌体表达，所述抗体结构域与噬菌体基因III或基因VIII蛋白重组
融合。可以用于制备本发明抗体的噬菌体展示方法的例子包括下述参考文献中公开的那
些：Brinkmann等人，J. Immunol. Methods，182：41-50（1995）；Ames等人，J. Immunol.
Methods，184:177-186（1995）；Kettleborough 等 人，Eur. J. Immunol.，24：952-958
（1994）；Persic等人，Gene，187：9-18（1997）；Burton等人，Advances in Immunology，
57：191-280（1994）；PCT公开号WO 92/01047；PCT公开号WO 90/02809；WO 91/10737；
WO 92/01047；WO 92/18619；WO 93/11236；WO 95/15982；WO 95/20401；以及美国专利
号 5,698,426；5,223,409；5,403,484；5,580,717；5,427,908；5,750,753；5,821,047；
5,571,698；5,427,908；5,516,637；5,780,225；5,658,727；5,733,743；和5,969,108。
需抗原结合片段，所述宿主包括哺乳动物细胞、昆虫细胞、植物细胞、酵母和细菌，例如，如
下文详细描述的。例如，也可以采用重组生产Fab、Fab'和F（ab'）2片段的技术，其中使用
本领域已知的方法，例如下述参考文献中公开的那些：PCT公开号WO 92/22324；Mullinax
等人，BioTechniques，12（6）：864-869（1992）；Sawai等人，Am. J. Reprod. Immunol.，34：
26-34（1995）；和Better等人，Science，240：1041-1043（1988）。可以用于生产单链Fvs
和抗体的技术例子包括下述参考文献中描述的那些：美国专利号4,946,778和5,258,498；
Huston等人，Methods in Enzymology，203：46-88（1991）；Shu等人，Proc. Natl. Acad.
Sci. USA，90：7995-7999（1993）；和Skerra等人，Science，240：1038-1041（1988）。
Roberts），以及Roberts和Szostak，Proc. Natl. Acad. Sci. USA，94：12297-12302（1997）
中描述的，一类可替代的表达系统是其中重组抗体文库作为RNA-蛋白融合物表达的表达
系统。在这种系统中，通过在其3’末端上携带嘌呤霉素－肽基接纳体抗生素的合成mRNAs
的体外翻译，在mRNA及其编码的肽或蛋白之间产生共价融合。因此，基于编码的肽或蛋白
例如抗体或其部分的性质，例如抗体或其部分与双重特异性抗原的结合，特定mRNA可以从
mRNAs的复杂混合物（例如，组合文库）中富集。由此类文库筛选回收的编码抗体或其部分
的核酸序列，可以通过上文所述的重组方法（例如，在哺乳动物宿主细胞中）表达，且此外可
以通过mRNA-肽融合物的另外筛选循环，或通过上文所述用于重组抗体体外亲和力成熟的
其他方法实施进一步的亲和力成熟，在所述mRNA-肽融合物中已将突变引入最初选择的序
列内。这种方法的优选例子是实施例中采用的PROfusion展示技术（下文）。
母表面上。具体地，此类酵母可以用于展示由谱或组合抗体文库（例如，人或鼠）表达的抗原
结合结构域。可以用于制备本发明的抗体的酵母展示方法的例子包括在此引入作为参考的
美国专利号6,699,658（Wittrup等人）公开的那些。
细胞的表达，其中编码重和轻链的一种或多种表达载体通过标准技术转染到宿主细胞内。
术语“转染”的各种形式预期包含通常用于将外源DNA引入原核或真核宿主细胞内的广泛
多样的技术，例如，电穿孔、磷酸钙沉淀、DEAE葡聚糖转染等。尽管可能在原核或真核宿主
细胞中表达本发明的抗体，但在真核细胞中表达抗体是优选的，且最优选在哺乳动物宿主
细胞中，这是因为此类真核细胞（且特别是哺乳动物细胞）比原核细胞更可能装配和分泌正
确折叠和免疫学活性的抗体。
中描述，与DHFR选择标记一起使用的dhfr-CHO细胞，例如，如Kaufman和Sharp，J. Mol.
Biol.，159：601-621（1982）中描述的）、NS0骨髓瘤细胞、COS细胞和SP2细胞。当编码抗
体基因的重组表达载体被引入哺乳动物宿主细胞内时，抗体通过将宿主细胞培养足够时间
段来生产，以允许抗体在宿主细胞中表达，或更优选地抗体分泌到其中宿主细胞生长的培
养基内。抗体可以使用标准蛋白纯化法从培养基中回收。
的功能片段的DNA转染宿主细胞。重组DNA技术还可以用于去除对于与目的抗原的结合不
是必需的编码轻和重链中任一个或两者的一些或全部DNA。由此类截短的DNA分子表达的
分子也由本发明的抗体包含。此外，通过经由标准化学交联法使本发明的抗体与第二种抗
体交联可以产生双功能抗体，其中一条重链和一条轻链是本发明的抗体（即结合人DLL4），
并且另一条重链和轻链对于除人DLL4外的抗原是特异性的。
内，抗体重和轻链基因各自与CMV增强子/AdMLP启动子调节元件可操作地连接，以驱动基
因的高水平转录。重组表达载体还携带DHFR基因，所述DHFR基因允许使用氨甲蝶呤选择/
扩增选择已用载体转染的CHO细胞。培养所选转化体宿主细胞以允许表达抗体重和轻链，
且从培养基中回收完整的抗体。使用标准分子生物学技术以制备重组表达载体、转染宿主
细胞、选择转化体、培养宿主细胞和从培养基中回收抗体。更进一步地，本发明提供了合成
本发明的重组抗体的方法，其通过在合适的培养基中培养本发明的宿主细胞直至本发明的
重组抗体被合成实现。该方法可以进一步包括从培养基中分离重组抗体。
的分离的抗DLL4抗体CDR序列建立了依照本发明分离的DLL4结合蛋白家族，且包含包括
由其衍生的CDR序列及其亲和力成熟的克隆的多肽。单克隆抗体及其亲和力成熟的衍生物
的可变区和CDRs的序列在表9、11、16、20和21中列出。为了生成且选择CDRs用于就人
DLL4而言具有优选的DLL4结合和/或中和活性的根据本发明的结合蛋白，可以使用本领域
已知的用于生成本发明的结合蛋白且评估那些结合蛋白的DLL4结合和/或中和特征的标
准方法，包括但不限于本文具体描述的那些。
白，所述抗原结合结构域包含下文定义的六个CDRs即CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、
CDR-L2和CDRL-3中的至少一个或多个：
CDR-H1选自：
X1–X2–X3–X4–X5（SEQ ID NO:151），其中；
X1是N、H或Y；
X2是F；
X3是P；
X4是M；和
X5是A或S；
SEQ ID NO:157的残基31-35（CDR-H1 38H12）；
SEQ ID NO:161的残基31-35（CDR-H1 37D10）；
SEQ ID NO:163的残基31-35（CDR-H1 32C7）；
SEQ ID NO:165的残基31-35（CDR-H1 14G1）；
SEQ ID NO:167的残基31-35（CDR-H1 14A11）；
SEQ ID NO:169的残基31-35（CDR-H1 15D6）；
SEQ ID NO:171的残基31-35（CDR-H1 VH.1 1A11）；
SEQ ID NO:172的残基31-35（CDR-H1 VH.1a 1A11）；
SEQ ID NO:173的残基31-35（CDR-H1 VH.1b 1A11）；
SEQ ID NO:174的残基31-35（CDR-H1 VH.2a 1A11）；
SEQ ID NO:179的残基31-35（CDR-H1 VH.1 38H12）；
SEQ ID NO:180的残基31-35（CDR-H1 VH.1A 38H12）；
SEQ ID NO:181的残基31-35（CDR-H1 VH.1b 38H12）；
SEQ ID NO:182的残基31-35（CDR-H1 VH.2a 38H12）；
SEQ ID NO:187的残基31-35（CDR-H1 h1A11VH.1）；
SEQ ID NO:188的残基31-35（CDR-H1 h1A11.A6）；
SEQ ID NO:189的残基31-35（CDR-H1 h1A11.A8）；
SEQ ID NO:190的残基31-35（CDR-H1 h1A11.C6）；
SEQ ID NO:191的残基31-35（CDR-H1 h1A11.A11）；
SEQ ID NO:192的残基31-35（CDR-H1 h1A11.B5）；
SEQ ID NO:193的残基31-35（CDR-H1 h1A11.E12）；
SEQ ID NO:194的残基31-35（CDR-H1 h1A11.G3）；
SEQ ID NO:195的残基31-35（CDR-H1 h1A11.F5）；和
SEQ ID NO:196的残基31-35（CDR-H1 h1A11.H2）；
CDR-H2选自：
X1–X2–X3–X4–X5–X6–X7–X8–X9–X10–X11–X12–X13–X14–X15–X16–X17（SEQ ID
NO:152），其中；
X1是T或S；
X2是I；
X3是S；
X4是S或G；
X5是S；
X6是D；
X7是G、A、D、S或E；
X8是T或W；
X9是T、P或A；
X10是Y、S、T或N；
X11是Y或I；
X12是R或G；
X13是D；
X14是S；
X15是V；
X16是K；和
X17是G；
SEQ ID NO:157的残基50-66（CDR-H2 38H12）；
SEQ ID NO:161的残基50-68（CDR-H2 37D10）；
SEQ ID NO:163的残基50-66（CDR-H2 32C7）；
SEQ ID NO:165的残基50-66（CDR-H2 14G1）；
SEQ ID NO:167的残基50-66（CDR-H2 14A11）；
SEQ ID NO:169的残基50-66（CDR-H2 15D6）；
SEQ ID NO:171的残基50-66（CDR-H2 VH.1 1A11）；
SEQ ID NO:172的残基50-66（CDR-H2 VH.1a 1A11）；
SEQ ID NO:173的残基50-66（CDR-H2 VH.1b 1A11）；
SEQ ID NO:174的残基50-66（CDR-H2 VH.2a 1A11）；
SEQ ID NO:179的残基50-66（CDR-H2 VH.1 38H12）；
SEQ ID NO:180的残基50-66（CDR-H2 VH.1A 38H12）；
SEQ ID NO:181的残基50-66（CDR-H2 VH.1b 38H12）；
SEQ ID NO:182的残基31-35（CDR-H1 VH.2a 38H12）；
SEQ ID NO:187的残基50-66（CDR-H2 h1A11VH.1）；
SEQ ID NO:188的残基50-66（CDR-H2 h1A11.A6）；
SEQ ID NO:189的残基50-66（CDR-H2 h1A11.A8）；
SEQ ID NO:190的残基50-66（CDR-H2 h1A11.C6）；
SEQ ID NO:191的残基50-66（CDR-H2 h1A11.A11）；
SEQ ID NO:192的残基50-66（CDR-H2 h1A11.B5）；
SEQ ID NO:193的残基50-66（CDR-H2 h1A11.E12）；
SEQ ID NO:194的残基50-66（CDR-H2 h1A11.G3）；
SEQ ID NO:195的残基50-66（CDR-H2 h1A11.F5）；和
SEQ ID NO:196的残基50-66（CDR-H2 h1A11.H2）；
CDR-H3选自：
X1–X2–X3–X4–X5–X6–X7–X8–X9（SEQ ID NO:153），其中；
X1是G；
X2是Y；
X3是Y；
X4是N；
X5是S；
X6是P；
X7是F；
X8是A；和
X9是Y、F或S；
SEQ ID NO:157的残基99-107（CDR-H3 38H12）；
SEQ ID NO:161的残基101-111（CDR-H3 37D10）；
SEQ ID NO:163的残基99-105（CDR-H3 32C7）；
SEQ ID NO:165的残基99-105（CDR-H3 14G1）；
SEQ ID NO:167的残基99-110（CDR-H3 14A11）；
SEQ ID NO:169的残基99-110（CDR-H3 15D6）；
SEQ ID NO:171的残基99-107（CDR-H3 VH.1 1A11）；
SEQ ID NO:172的残基99-107（CDR-H3 VH.1a 1A11）；
SEQ ID NO:173的残基99-107（CDR-H3 VH.1b 1A11）；
SEQ ID NO:174的残基99-107（CDR-H3 VH.2a 1A11）；
SEQ ID NO:179的残基99-107（CDR-H3 VH.1 38H12）；
SEQ ID NO:180的残基99-107（CDR-H3 VH.1A 38H12）；
SEQ ID NO:181的残基99-107（CDR-H2 VH.1b 38H12）；
SEQ ID NO:182的残基99-107（CDR-H1 VH.2a 38H12）；
SEQ ID NO:187的残基99-107（CDR-H3 h1A11VH.1）；
SEQ ID NO:188的残基99-107（CDR-H3 h1A11.A6）；
SEQ ID NO:189的残基99-107（CDR-H3 h1A11.A8）；
SEQ ID NO:190的残基99-107（CDR-H3 h1A11.C6）；
SEQ ID NO:191的残基99-107（CDR-H3 h1A11.A11）；
SEQ ID NO:192的残基99-107（CDR-H3 h1A11.B5）；
SEQ ID NO:193的残基99-107（CDR-H3 h1A11.E12）；
SEQ ID NO:194的残基99-107（CDR-H3 h1A11.G3）；
SEQ ID NO:195的残基99-107（CDR-H3 h1A11.F5）；和
SEQ ID NO:196的残基99-107（CDR-H3 h1A11.H2）；
CDR-L1选自：
X1–X2–X3–X4–X5–X6–X7–X8–X9–X10–X11（SEQ ID NO:154），其中；
X1是R；
X2是A；
X3是S；
X4是E或Q；
X5是D或E；
X6是I；
X7是Y或W；
X8是S、I、Y、N或R；
X9是N；
X10是L；和
X11是A；
SEQ ID NO:158的残基24-34（CDR-L1 38H12）；
SEQ ID NO:162的残基24-34（CDR-L1 37D10）；
SEQ ID NO:164的残基24-34（CDR-L1 32C7）；
SEQ ID NO:166的残基24-34（CDR-L1 14G1）；
SEQ ID NO:168的残基23-37（CDR-L1 14A11）；
SEQ ID NO:170的残基23-37（CDR-L1 15D6）；
SEQ ID NO:175的残基24-34（CDR-L1 VL.1 1A11）；
SEQ ID NO:176的残基24-34（CDR-L1 VL.1a 1A11）；
SEQ ID NO:177的残基24-34（CDR-L1 VL.1b 1A11）；
SEQ ID NO:178的残基24-34（CDR-L1 VL.2a 1A11）；
SEQ ID NO:183的残基24-34（CDR-L1 VL.1 38H12）；
SEQ ID NO:184的残基24-34（CDR-L1 VL.1a 38H12）；
SEQ ID NO:185的残基24-34（CDR-L1 VL.1b 38H12）；
SEQ ID NO:186的残基24-34（CDR-L1 VL.2a 38H12）；
SEQ ID NO:197的残基24-34（CDR-L1 h1A11VL.1）；
SEQ ID NO:198的残基24-34（CDR-L1 h1A11.A2）；
SEQ ID NO:199的残基24-34（CDR-L1 h1A11.A12）；
SEQ ID NO:200的残基24-34（CDR-L1 h1A11.A7）；
SEQ ID NO:201的残基24-34（CDR-L1 h1A11.B4）；
SEQ ID NO:202的残基24-34（CDR-L1 h1A11.B5）；和
SEQ ID NO:203的残基24-34（CDR-L1 h1A11.E12）；
CDR-L2选自：
X1–X2–X3–X4–X5–X6–X7（SEQ ID NO:155），其中；
X1是D；
X2是T；
X3是N或S；
X4是N、D、S、I、Y或V；
X5是L；
X6是A；和
X7是D；
SEQ ID NO:158的残基50-56（CDR-L2 38H12）；
SEQ ID NO:162的残基50-56（CDR-L2 37D10）；
SEQ ID NO:164的残基50-56（CDR-L2 32C7）；
SEQ ID NO:166的残基50-56（CDR-L2 14G1）；
SEQ ID NO:168的残基53-59（CDR-L2 14A11）；
SEQ ID NO:170的残基53-59（CDR-L2 15D6）；
SEQ ID NO:175的残基50-56（CDR-L2 VL.1 1A11）；
SEQ ID NO:176的残基50-56（CDR-L2 VL.1a 1A11）；
SEQ ID NO:177的残基50-56（CDR-L2 VL.1b 1A11）；
SEQ ID NO:178的残基50-56（CDR-L2 VL.2a 1A11）；
SEQ ID NO:183的残基50-56（CDR-L2 VL.1 38H12）；
SEQ ID NO:184的残基50-56（CDR-L2 VL.1a 38H12）；
SEQ ID NO:185的残基50-56（CDR-L2 VL.1b 38H12）；
SEQ ID NO:186的残基50-56（CDR-L2 VL.2a 38H12）；
SEQ ID NO:197的残基50-56（CDR-L2 h1A11VL.1）；
SEQ ID NO:198的残基50-56（CDR-L2 h1A11.A2）；
SEQ ID NO:199的残基50-56（CDR-L2 h1A11.A12）；
SEQ ID NO:200的残基50-56（CDR-L2 h1A11.A7）；
SEQ ID NO:201的残基50-56（CDR-L2 h1A11.B4）；
SEQ ID NO:202的残基50-56（CDR-L2 h1A11.B5）；和
SEQ ID NO:203的残基50-56（CDR-L2 h1A11.E12）；
和
CDR-L3选自：
X1–X2–X3–X4–X5–X6–X7–X8–X9（SEQ ID NO:156），其中；
X1是Q；
X2是Q；
X3是Y；
X4是N、D或T；
X5是N、Y或W；
X6是Y或V；
X7是P；
X8是P；和
X9是T。
SEQ ID NO:164的残基89-97（CDR-L3 32C7）；
SEQ ID NO:166的残基89-98（CDR-L3 14G1）；
SEQ ID NO:168的残基92-100（CDR-L3 14A11）；
SEQ ID NO:170的残基92-100（CDR-L3 15D6）；
SEQ ID NO:175的残基89-97（CDR-L3 VL.1 1A11）；
SEQ ID NO:176的残基89-97（CDR-L3 VL.1a 1A11）；
SEQ ID NO:177的残基89-97（CDR-L3 VL.1b 1A11）；
SEQ ID NO:178的残基89-97（CDR-L3 VL.2a 1A11）；
SEQ ID NO:183的残基89-97（CDR-L3 VL.1 38H12）；
SEQ ID NO:184的残基89-97（CDR-L3 VL.1a 38H12）；
SEQ ID NO:185的残基89-97（CDR-L3 VL.1b 38H12）；
SEQ ID NO:186的残基89-97（CDR-L3 VL.2a 38H12）；
SEQ ID NO:197的残基89-97（CDR-L3 h1A11VL.1）；
SEQ ID NO:198的残基89-97（CDR-L3 h1A11.A2）；
SEQ ID NO:199的残基89-97（CDR-L3 h1A11.A12）；
SEQ ID NO:200的残基89-97（CDR-L3 h1A11.A7）；
SEQ ID NO:201的残基89-97（CDR-L3 h1A11.B4）；
SEQ ID NO:202的残基89-97（CDR-L3 h1A11.B5）；和
SEQ ID NO:203的残基89-97（CDR-L3 h1A11.E12）。
上文描述的任何五个CDRs、和最优选上文描述的任何六个CDRs（即如上所述的CDR-H1、
CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3）。包含三个CDRs的特别优选的DLL4结合蛋白
包含如上所述的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3。
1202-1207（1985）；Oi等人，BioTechniques，4：214（1986）；Gillies等人，J. Immunol.
Methods，125：191-202（1989）；美国专利号5,807,715；4,816,567；和4,816,397。此外，可
以使用开发用于产生“嵌合抗体”的技术，其通过剪接来自具有合适抗原特异性的小鼠抗体
分子的基因连同来自具有合适生物学活性的人抗体分子的基因实现。参见例如，Morrison
等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA，81：6851-6855（1984）；Neuberger等人，Nature，312：
604-608（1984）；Takeda等人，Nature，314：452-454（1985），其整体引入本文作为参考。
子交叉反应性、表位、理化性质、药物代谢动力学性质、药效性质或药理性质。CDR嫁接的抗
体包含来自人抗体或非人灵长类动物抗体的重和轻链可变区序列，其中VH和/或VL的一
个或多个CDR区替换为最初抗DLL4抗体的CDR序列。来自任何人或非人灵长类动物抗体
的构架序列可以充当用于CDR嫁接的模板。然而，在此类构架上的直接链替换通常导致与
抗原的结合亲和力的一些丧失。人或其他物种抗体与最初人抗体越同源，使CDRs与新的人
构架或非人灵长类动物构架组合将在CDRs中引入可减小亲和力或其他特性的变形的可能
性越小。因此，优选选择替换除CDRs外的人可变区构架的可变构架与人抗体可变区构架具
有至少30％的序列同一性。更优选选择替换除CDRs外的人可变区构架的可变构架与人抗
体可变区构架具有至少40％的序列同一性。更优选选择替换除CDRs外的人可变区构架的
可变构架与人抗体可变区构架具有至少50％的序列同一性。更优选选择替换除CDRs外的
人可变区构架的可变构架与人抗体可变区构架具有至少60％的序列同一性。更优选选择
替换除CDRs外的人可变区构架的可变构架与人抗体可变区构架具有至少70％的序列同一
性。甚至更优选选择替换除CDRs外的人可变区构架的可变构架与人抗体可变区构架具有
至少75％的序列同一性。最优选选择替换除CDRs外的人可变区构架的可变构架与人抗体
可变区构架具有至少80％的序列同一性。甚至使用高度同源的人或非人灵长类动物构架以
嫁接最初人抗DLL4抗体的CDRs，所得到的嫁接的抗体可能仍丧失与抗原的结合亲和力至
一定程度。在这种情况下，为了重新获得亲和力，必须包括最初抗体的至少一个或多个关键
构架残基取代至新近嫁接的抗体的相应位置。此类关键残基选自：
与CDR接近的残基；
糖基化位点残基；
稀有残基；
能够与人DLL4相互作用的残基；
规范残基；
在重链可变区和轻链可变区之间的接触残基；
在Vernier区内的残基；和
在Chothia定义的可变重链CDR1和Kabat定义的第一个重链构架之间重叠的区域中
的残基。
用本发明的组合物进行制备。人源化抗体是来自结合所需抗原的非人物种的抗体分
子，具有来自非人物种抗体的一个或多个互补性决定区（CDRs）和来自人免疫球蛋白分
子的构架区。已知的人Ig序列在经由环球网（www.）可获得的网站公开，例如ncbi.
nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi；atcc.org/phage/hdb.html；sciquest.com/；abcam.
com/；antibodyresource.com/onlinecomp.html；public.iastate.edu/.about.pedro-/
research_tools.html；mgen.uniheidelberg.de/SD/IT/IT.html；whfreeman.com/
immunology-/CH05/kuby05.htm；library.thinkquest.org/12429/Immune/Antibody.
html；hhmi.org/grants/lectures/1996/vlab/；path.-cam.ac.uk/.about.mrc7/
mikeimages.html；antibodyresource.com/；mcb.harvard.edu/BioLinks-/Immunology.
html；immunologylink.com/；pathbox.wustl.edu/.about.hcenter/index.html；
bio-tech.ufl.edu/.about.hcl/；pebio.com/pa/340913-/340913.html；nal.usda.gov/
awic/pubs/antibody/；m.ehimeu.acjp/.about.yasuhito-/Elisa.html；biodesign.com/
table.asp；icnet.uk/axp/facs/davies/lin- ks.html；biotech.ufl.edu-/.about.fccl/
protocol.html；isac-net.org/sites_geo.html；aximtl.imt.uni-marburg.de/.about.
rek/AEP-Start.html；baserv.uci.kun.nl/.about.jraats/linksl.html；recab.uni-hd.
de/immuno.bme.nwu.edu/；mrc-cpe.cam.ac.uk/imt-doc/public/INTRO.html；ibt.unam.
mx/-vir/V_mice.html；imgt.cnusc.fr:8104/；biochem.ucl.ac.uk/.about.martin/abs/
index.html；anti-body.bath.ac.uk/；abgen.cvm.tamu.edu/lab/wwwabgen.html；unizh.
ch/.about.honegger/AHO-seminar/Slide01.html；cryst.bbk.ac.uk/.about.ubcg07s/；
nimr.mrc.ac.uk/CC/ccaewg/ccaewg.htm；path.cam.ac.uk/.about.mrc7/humanisation/
TAHHP.html；ibt.unam.mx/vir/structure/stat_aim.-html；biosci.missouri.edu/
smithgp/index.html；cryst.bioc.cam.ac.uk/.about.fmolina/Webpages-/Pept/
spottech.html；jerini.de/frroducts.htm；patents.ibm.com/ibm.html。Kabat 等 人，
Sequences of Proteins of Immunological Interest，U.S. Dept. Health（1983），各自在
此整体引入作为参考。如本领域已知的，此类输入的序列可以用于减少免疫原性，或减少、
增强或修饰结合、亲和力、结合速率、解离速率、抗体亲抗原性、特异性、半衰期、或任何其他
合适的特征
人构架区中的构架残基可以用来自CDR供体抗体的相应残基取代，以改变优选改善抗
原结合。这些构架取代通过本领域众所周知的方法鉴定，例如通过对CDR和构架残基的相
互作用建模以鉴定对抗原结合重要的构架残基，和序列比较以鉴定在特定位置上的罕见构
架残基。参见例如，美国专利号5,585,089（Queen等人）；Riechmann等人，Nature，332：
323-327（1988），在此将其整体引入作为参考）。三维免疫球蛋白模型通常是可获得的且是
本领域技术人员熟悉的。举例说明且展示所选候选免疫球蛋白序列的可能三维构象结构
的计算机程序是可获得的。这些展示的检查允许分析残基在候选免疫球蛋白序列功能发挥
中的可能作用，即分析影响候选免疫球蛋白结合其抗原的能力的残基。以这种方式，可以
选择FR残基且从共有和输入序列组合，从而使得达到所需抗体特征，例如对一种或多种靶
抗原的亲和力增加。一般而言，CDR残基直接且最重要地与影响抗原结合有关。抗体可以
使用本领域已知的多种技术进行人源化，例如但不限于下述参考文献中描述的那些：Jones
等人，Nature，321：522-525（1986）；Verhoeyen等人，Science，239：1534-1536（1988），
Sims等人，J. Immunol.，151：2296-2308（1993）；Chothia和Lesk，J. Mol. Biol.，196：
901-917（1987），Carter等 人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA，89：4285-4289（1992）；
Presta等人，J. Immunol.，151：2623-2632（1993），Padlan，E.A.，Molecular Immunology，
28（4/5）：489-498（1991）；Studnicka 等 人，Protein Engineering，7（6）：805-814
（1994）；Roguska.等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA，91:969-973（1994）；PCT公开号WO
91/09967、WO 99/06834（PCT/US98/16280）、WO 97/20032（PCT/US96/18978）、WO 92/11272
（PCT/US91/09630）、WO 92/03461（PCT/US91/05939）、WO 94/18219（PCT/US94/01234）、WO
92/01047（PCT/GB91/01134）、WO 93/06213（PCT/GB92/01755）、WO90/14443、WO90/14424
和WO90/14430；欧洲公开号EP 0 592 106、EP 0 519 596和EP 0 239 400；美国专利
号 5,565,332；5,723,323；5,976,862；5,824,514；5,817,483；5,814,476；5,763,192；
5,723,323；5,766,886；5,714,352；6,204,023；6,180,370；5,693,762；5,530,101；
5,585,089；5,225,539；和4,816,567，各自在此整体引入作为参考，包括其中引用的参考
文献。
-7 -8
Notch信号传导途径中的DLL4相互作用，其中DLL4中的IC50值在至少约10 M或约10 M
的范围中。优选地，本发明的抗DLL4抗体还显示出减少或中和DLL4活性的高能力。
等离振子共振测量的，所述抗体或其抗原结合部分以约0.1 s 或更少的Koff速率常数与人
-6
DLL4解离，或以约1 x 10 M或更少的IC50抑制人DLL4活性。可替代地，如通过表面等离
-2 -1
振子共振测量的，抗体或其抗原结合部分可以以约1 x 10 s 或更少的Koff速率常数与人
-7
DLL4解离，或可以以约1 x 10 M或更少的IC50抑制人DLL4活性。可替代地，如通过表面
-3 -1
等离振子共振测量的，抗体或其抗原结合部分可以以约1 x 10 s 或更少的Koff速率常数
-8
与人DLL4解离，或可以以约1 x 10 M或更少的IC50抑制人DLL4活性。可替代地，如通过
-4 -1
表面等离振子共振测量的，抗体或其抗原结合部分可以以约1 x 10 s 或更少的Koff速率
-9
常数与人DLL4解离，或可以以约1 x 10 M或更少的IC50抑制人DLL4活性。可替代地，如
-5 -1
通过表面等离振子共振测量的，抗体或其抗原结合部分可以以约1 x 10 s 或更少的Koff
-10
速率常数与人DLL4解离，或可以以约1 x 10 M或更少的IC50抑制人DLL4活性。可替代
-5 -1
地，如通过表面等离振子共振测量的，抗体或其抗原结合部分可以以约1 x 10 s 或更少
-11
的Koff速率常数与人DLL4解离，或可以以约1 x 10 M或更少的IC50抑制人DLL4活性。
地，抗体可以包括轻链恒定区，κ轻链恒定区或λ轻链恒定区。优选地，抗体包括κ轻链
恒定区。可替代地，抗体部分可以是例如Fab片段或单链Fv片段。
例如细胞因子诱导、ADCC、吞噬作用、依赖补体的细胞毒性（CDC）以及抗体和抗原-抗体复
合物的半衰期/清除率。取决于治疗目的，在一些情况下这些效应子功能对于治疗用抗体
是所需的，但在其他情况下可能是不必要的或甚至有害的。某些人IgG同种型，特别是IgG1
和IgG3，经由分别与FcγRs和补体C1q结合介导ADCC和CDC。新生Fc受体（FcRn）是决
定抗体循环半衰期的关键组分。在另外一个实施方案中，至少一个氨基酸残基在抗体恒定
区例如抗体Fc区中进行替换，从而使得抗体的效应子功能被改变。
本发明的抗体或抗体部分与一种或多种其他分子实体功能性连接（通过化学偶联、遗传融
合、非共价结合或其他方式）来衍生，所述其他分子实体例如另一种抗体（例如，双特异性抗
体或双抗体）、可检测试剂、细胞毒剂、药学试剂、和/或可以介导抗体或抗体部分与另一种
分子（例如链霉抗生物素蛋白核心区或聚组氨酸标签）结合的蛋白或肽。
红蛋白等。抗体也可以用可检测酶衍生化，例如碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶、葡糖氧化酶
等。当抗体用可检测酶衍生化时，它通过添加酶用于生产可检测反应产物的另外的试剂进
行检测。例如，当可检测试剂辣根过氧化物酶存在时，添加过氧化氢和二氨基联苯胺导致可
检测的有色反应产物。抗体也可以用生物素衍生化，且通过抗生物素蛋白或链霉抗生物素
蛋白结合的间接测量进行检测。
结合蛋白缀合物（包括抗体缀合物），以及包含此类晶体的制剂和组合物。在一个实施方案
中，结晶结合蛋白具有比结合蛋白的可溶性配对物更长的体内半衰期。在另一个实施方案
中，结合蛋白在结晶化后保留生物学活性。本发明的结晶结合蛋白可以根据本领域已知的
和如在此引入作为参考的PCT公开号WO 02/72636中公开的方法来生产。
工。特别地，糖（糖基）残基可以酶促添加，这个过程称为糖基化。所得到的具有共价连接
的寡糖侧链的蛋白被称为糖基化蛋白或糖蛋白。蛋白质糖基化取决于目的蛋白的氨基酸序
列，以及在其中表达蛋白的宿主细胞。不同生物可以产生不同的糖基化酶（例如，糖基转移
酶和糖苷酶），且具有不同的可用底物（核苷酸糖）。由于此类因素，蛋白质糖基化模式和糖
基残基组成可以依赖于在其中表达特定蛋白的宿主系统而不同。在本发明中有用的糖基残
基可以包括但不限于，葡萄糖、半乳糖、甘露糖、岩藻糖、n-乙酰葡糖胺和唾液酸。优选地，
糖基化的结合蛋白包含糖基残基，从而使得糖基化模式是人的。
酵母中生产，和利用酵母内源性途径糖基化的治疗用蛋白的功效可能是减少的。此类糖蛋
白在人中也可以是免疫原性的，且在施用后显示减少的体内半衰期。人和其他动物中的特
定受体可以识别特定糖基残基且促进蛋白从血流中快速清除。其他不利效应可以包括蛋白
折叠、可溶性、对蛋白酶的易感性、运输、转运、区室化、分泌、由其他蛋白或因子识别、抗原
性、或变应原性中的变化。因此，从业者可能更喜欢具有特定糖基化组成和模式的治疗用蛋
白，例如等同于或至少类似于在人细胞或预期受试动物的物种特异性细胞中生产的那种的
糖基化组成和模式。
其抗原结合部分。例如，酵母菌株已进行遗传修饰以表达非天然存在的糖基化酶，从而使得
在这些酵母菌株中生产的糖基化蛋白（糖蛋白）显示等同于动物细胞特别是人细胞那种的
蛋白质糖基化（美国专利申请公开号2004/0018590和2002/0137134）。
体糖基化模式的目的蛋白。从业者随后可以选择并分离具有特定新糖基化模式的目的蛋
白。优选地，具有特定选择的新糖基化模式的蛋白显示改善或改变的生物学性质。
如血液、血清或血浆），其中使用本领域已知的任何常规免疫测定，例如酶联免疫吸附测定
（ELISA）、放射免疫测定（RIA）或组织免疫组织化学。本发明提供了用于检测样品中的人
DLL4和/或鼠DLL4的方法，其包括使样品与DLL4结合蛋白接触，且检测与人DLL4和/或
鼠DLL4结合的DLL4结合蛋白或未结合的结合蛋白，以从而检测样品中的人DLL4和/或
鼠DLL4。本文描述的DLL4结合蛋白可以用可检测物质直接或间接标记，以促进结合或未
结合的DLL4结合蛋白的检测。合适的可检测物质包括各种酶、辅基、荧光材料、发光材料
和放射性材料。合适酶的例子包括辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或乙酰
胆碱酯酶；合适辅基复合物的例子包括链霉抗生物素蛋白/生物素和抗生物素蛋白/生
物素；合适荧光材料的例子包括伞形酮、荧光素、异硫氰酸荧光素、罗丹明、二氯三嗪基胺
（dichlorotriazinylamine）荧光素、丹磺酰氯或藻红蛋白；发光材料的例子包括鲁米诺；
3 14 35 90 99 111 125 131 177 166 153
且合适放射性材料的例子包括 H、C、S、Y、Tc、 In、I、 I、Lu、 Ho或 Sm。
域可获得的方法获得的任何其他组织样品。
DLL4结合蛋白。在这种测定中，组合生物学样品、标记的rhDLL4标准和DLL4结合蛋白，并
且测定与未标记的结合蛋白结合的标记的rhDLL4标准的量。在生物学样品中人DLL4的量
与和DLL4结合蛋白结合的标记的rhDLL4标准的量成反比。类似地，人DLL4还可以通过竞
争免疫测定在生物学流体中进行测定，其中利用由可检测物质标记的rhDLL4标准和本文
描述的未标记的DLL4结合蛋白。
在表达本发明的结合蛋白与其交叉反应的DLL4的其他哺乳动物受试者中用于抑制DLL4活
性。在一个实施方案中，本发明提供了用于抑制DLL4活性的方法，其包括使DLL4与本发明
的DLL4抗体或其抗体部分接触，从而使得DLL4活性被抑制。例如，在含有或怀疑含有DLL4
的细胞培养物中，本发明的抗体或抗体部分可以添加到培养基中，以抑制培养物中的DLL4
活性。
类疾病或病症的受试者中的DLL4或DLL4活性的方法，所述方法包括给受试者施用本发明
的DLL4结合蛋白，从而使得受试者中的DLL4或DLL4活性减少。优选地，DLL4是人DLL4，
并且受试者是人受试者。可替代地，受试者可以是表达本发明的DLL4结合蛋白能够与之结
合的DLL4的哺乳动物。更进一步地，受试者可以是DLL4已引入其内的哺乳动物（例如通过
施用DLL4或通过表达DLL4转基因）。本发明的抗体或其他DLL4结合蛋白可以施用于人受
试者用于治疗目的。此外，本发明的DLL4结合蛋白可以施用于表达结合蛋白能够与之结合
的DLL4的非人哺乳动物，用于兽医学目的或作为人疾病的动物模型。关于后者，此类动物
模型可以用于评价本发明的抗体和其他DLL4结合蛋白的治疗功效（例如测试施用剂量和
时程）。
性的存在已显示或怀疑负责病症的病理生理学或是或怀疑是促进病症恶化的因素。因此，
其中DLL4和/或Notch信号传导活性是有害的病症是其中DLL4和/或Notch信号传导活
性减少预期减轻病症症状和/或进展的病症（例如肿瘤生长）。此类病症可以例如由患有病
症的受试者中血管生成的增加（例如在肿瘤生长和形成过程中受试者的血清、血浆、滑液等
中本领域已知的多种蛋白质浓度中的增加）来证实，这可以例如使用如上所述的抗DLL4抗
体进行检测。可以用本发明的抗体治疗的病症的非限制性例子包括下文关于本发明抗体的
药物组合物部分中讨论的那些病症。
病症诊断、检测或监控，病症或其一种或多种症状的预防、治疗、管理或改善和/或研究。在
具体实施方案中，组合物包含本发明的一种或多种DLL4结合蛋白。在另一个实施方案中，
药物组合物包含本发明的一种或多种结合蛋白，以及除本发明结合蛋白外用于治疗其中
DLL4和/或DLL4活性是有害的病症的一种或多种预防或治疗剂。优选地，预防或治疗剂已
知在病症例如癌症或肿瘤或其一种或多种症状的预防、治疗、管理或改善中有用，或已在其
中使用或目前正在其中使用。依照这些实施方案，组合物可以进一步包含载体、稀释剂或赋
形剂。
用的，“药学可接受的载体”包括生理学相容的任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂
和抗真菌剂、等渗和吸收延迟剂等。药学可接受的载体的例子包括下述一种或多种：水、盐
水、磷酸缓冲盐水、葡萄糖、甘油、乙醇等，及其组合。在许多情况下，将优选在组合物中包括
等渗剂，例如糖、多元醇例如甘露糖醇、山梨糖醇、或氯化钠。药学可接受的载体可以进一步
包含少量辅助物质，例如湿润剂或乳化剂、防腐剂或缓冲液，所述辅助物质增强抗体或抗体
部分的保存期限或效力。
症或其一种或多种症状，例如减少肿瘤血管生成，被囊化在脂质体中、微粒、微胶囊、能够
表达DLL4结合蛋白的重组细胞、受体介导的胞吞（参见例如，Wu和Wu，J. Biol. Chem.，
262：4429-4432（1987））、作为逆转录病毒或其他载体等的部分的核酸构建。施用本发明
的预防或治疗剂的方法包括但不限于，肠胃外施用（例如，皮内、肌内、腹膜内、静脉内和皮
下），硬膜外施用，瘤内施用和粘膜施用（例如，鼻内和经口途径）。此外，可以使用肺施用，例
如利用吸入器或喷雾器，和含气溶胶化剂（aerosolizing agent）的制剂。参见例如，美国
专利号6,019,968、5,985,320、5,985,309、5,934,272、5,874,064、5,855,913、5,290,540、
和4,880,078；以及PCT公开号WO 92/19244、WO 97/32572、WO 97/44013、WO 98/31346、
和WO 99/66903，其各自在此整体引入作为参考。在一个实施方案中，本发明的DLL4结合
蛋白、组合疗法、或本发明的组合物使用Alkermes AIR®肺药物递送技术（Alkermes，Inc.，
Cambridge，Massachusetts，US）来施用。在具体实施方案中，本发明的预防或治疗剂肌内、
静脉内、瘤内、经口、鼻内、肺、或皮下施用。预防或治疗剂可以通过任何方便的途径施用，例
如通过输注或单次快速静脉注射，通过经由上皮或粘膜皮肤衬里（例如，口腔粘膜、直肠和
肠粘膜等）吸收，且可以连同其他生物学活性剂一起施用。施用可以是全身或局部的。
无孔材料，包括膜和基质，例如硅橡胶（sialastic）膜、聚合物、纤维基质（例如，Tissuel®）、或胶原基质。在一个实施方案中，有效量的本发明拮抗剂的一种或多种DLL4结合蛋白局部
施用于受试者的受累区域，以预防、治疗、管理、和/或改善病症或其症状。在另一个实施方
案中，有效量的本发明的一种或多种DLL4结合蛋白，与有效量的除本发明结合蛋白外的一
种或多种疗法（例如，一种或多种预防或治疗剂）组合，局部施用于受试者的受累区域，以预
防、治疗、管理、和/或改善病症或其一种或多种症状。
（1990））；Sefton，CRC Crit. Ref. Biomed. Eng.，14：201-240（1987）；Buchwald等人，
Surgery，88：507-516（1980）；Saudek等人，N. Engl. J. Med.，321：574-579（1989））。
在另一个实施方案中，聚合材料可以用于达到本发明疗法的控释或持续释放（参见例如，
Goodson，J.M，InMedical Applications of Controlled Release，第II卷，Applications
and Evaluations,（Langer和Wise，编辑）,（CRC Press Inc.，Boca Raton，1984），第6章，第
115-138页；Controlled Drug Bioavailability，Drug Product Design and Performance，
Smolen和Ball（编辑）（Wiley，New York，1984）；Langer和Peppas，J. Macromol. Sci. Rev.
Macromol. Chem. Phys.，C23：61-126（1983）；还参见Levy等人，Science，228：190-192
（1985）；During等人，Ann. Neurol.，25：351-356（1989）；Howard等人，J. Neurosurg.，71：
105-112（1989）；美国专利号5,679,377；5,916,597；5,912,015；5,989,463；和5,128,326；
以及PCT公开号WO 99/15154和WO 99/20253。在持续释放制剂中使用的聚合物的例子包
括但不限于，聚甲基丙烯酸2-羟乙酯、聚甲基丙烯酸甲酯、聚丙烯酸、乙烯-乙酸乙烯酯共
聚物、聚甲基丙烯酸、聚乙醇酸交酯（PLG）、聚酐、聚N-乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚丙烯酰
胺、聚乙二醇、聚丙交酯（PLA）、丙交酯-乙醇酸交酯共聚物（PLGA）、和聚原酸酯。在优选实
施方案中，持续释放制剂中使用的聚合物是惰性的、不含可沥滤杂质、贮藏稳定、无菌和生
物可降解的。在另外一个实施方案中，控释或持续释放系统可以接近预防或治疗靶放置，从
而只需要全身剂量的部分（参见例如，Goodson，InMedical Applications of Controlled
Release,（1984），第115-138页）。
剂。参见例如，美国专利号4,526,938；PCT公开号WO 91/05548和WO 96/20698；Ning等
人，"Intratumoral Radioimmunotherapy of a Human Colon Cancer Xenograft Using a
Sustained-Release Gel," Radiother. Oncol.，39：179-189（1996）；Song等人，"Antibody
Mediated Lung Targeting of Long- Circulating Emulsions," PDA J. Pharm. Sci.
Tech.，50：372-377（1996）；Cleek等人，"Biodegradable Polymeric Carriers for a bFGF
Antibody for Cardiovascular Application," Proceed. Intl. Symp. Control. Rel.
Bioact. Mater.，24：853-854（1997），和Lam等人，"Microencapsulation of Recombinant
Humanized Monoclonal Antibody for Local Delivery," Proceed. Intl. Symp. Control
Rel. Bioact. Mater. ：24：759-760（1997），其各自在此整体引入作为参考。
表达载体的部分且施用，从而使得其成为细胞内的，例如利用逆转录病毒载体（参见美国专
利号4,980,286），或直接注射，或使用微粒轰击（例如，基因枪；Biolistic，DuPont），或用
脂质或细胞表面受体或转染剂包被，或与已知进入核的同源异型框样肽连接施用（参见例
如，Joliot等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA，88：1864-1868（1991））。可替代地，核酸
可以细胞内引入且通过同源重组整合入宿主细胞DNA内用于表达。
合于静脉内、皮下、肌内、经口、鼻内或局部施用于人类。一般地，用于静脉内施用的组合物
是在无菌等渗水性缓冲液中的溶液。必要时，组合物还可以包括增溶剂和局部麻醉剂例如
利多卡因（lignocamne），以减轻注射部位处的疼痛。
其他形式。参见例如，Remington's Pharmaceutical Sciences and Introduction to
Pharmaceutical Dosage Forms，第19版,（Mack Publishing Co.，Easton，Pennsylvania，
1995）。对于不可喷雾的局部剂型，一般采用包含与局部应用相容的载体或一种或多种赋
形剂，且具有优选大于水的动态粘度的粘性至半固体或固体形式。合适的制剂包括但不限
于，溶液、悬浮液、乳剂、乳膏、软膏、粉末、搽剂、油膏等，必要时进行灭菌或与助剂（例如防
腐剂、稳定剂、湿润剂、缓冲液或盐）混合用于影响各种性质，例如，渗透压。其他合适的局部
剂型包括可喷雾的气溶胶制剂，其中活性成分，优选与固体或液体惰性载体组合，与加压挥
发物（例如，气体推进剂，例如FREON®）在混合物中包装或包装在挤压瓶中。必要时保湿剂
（moisturizer）或湿润剂也可以加到药物组合物和剂型中。此类另外成分的例子是本领域
众所周知的。
雾器呈递的气溶胶喷雾剂形式方便地递送，使用合适的推进剂（例如二氯二氟甲烷、三氯氟
甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他合适的气体）。在加压气溶胶的情况下，剂量单位可以
通过提供阀来确定，以递送计量的量。可以配制包含化合物和合适粉末基例如乳糖或淀粉
的粉末混合物的胶囊和药液筒（由例如明胶组成），用于在吸入器或吹入器中使用。
的赋形剂制备，所述赋形剂例如粘合剂（例如，预凝胶玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、或羟丙基
甲基纤维素）；充填剂（例如，乳糖、微晶纤维素、或磷酸氢钙）；润滑剂（例如，硬脂酸镁、滑石或硅石）；崩解剂（例如，马铃薯淀粉或羟基乙酸淀粉钠）；或湿润剂（例如，十二烷基硫酸钠）。
片剂可以通过本领域众所周知的方法进行包被。用于经口施用的液体制剂可以采取下述形
式，但不限于下述形式，溶液、糖浆或悬浮液，或它们可以呈现为干燥产品，用于在使用前用
水或其他合适的载体构建。此类液体制剂可以通过常规方法用药学可接受的添加剂制备，
所述添加剂例如悬浮剂（例如，山梨糖醇糖浆、纤维素衍生物、或氢化食用脂肪）；乳化剂（例
如，卵磷脂或阿拉伯胶）；非水载体（例如，杏仁油、油酯、乙醇、或分馏植物油）；和防腐剂（例如，对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸）。适当时制剂还可以包含缓冲盐、调
味剂、着色剂和甜味剂。用于经口施用的制剂可以适当地配制，用于缓慢释放、控释、或持续
释放一种或多种预防或治疗剂。
5,985,309；5,934,272；5,874,064；5,855,913；5,290,540；和4,880,078；和PCT公开号
WO 92/19244、WO 97/32572、WO 97/44013、WO 98/31346、和WO 99/66903，其各自在此整体
引入引用作为参考。在具体实施方案中，本发明的抗体、组合疗法、和/或本发明的组合物
使用Alkermes AIR®肺药物递送技术（Alkermes，Inc.，Cambridge，Massachusetts，US）来
施用。
如，在安瓿或多剂容器中）呈递。组合物可以采取此类形式，如在油性或水性载体中的悬浮
液、溶液或乳剂，且可以包含配制试剂例如悬浮、稳定和/或分散剂。可替代地，活性成分可
以为粉末形式用于在使用前用合适的载体（例如，无菌无致热原水）构建。
适的聚合或疏水材料（例如，作为在可接受的油中的乳剂）或离子交换树脂配制，或配制为
微溶衍生物（例如，作为微溶盐）。
成的那些，例如来源于钠、钾、铵、钙、铁氢氧化物，异丙胺，三乙胺，2-乙氨基乙醇，组氨酸，
普鲁卡因等的那些。
活性剂的量。当施用方式是输注时，组合物可以用包含无菌药物级别的水或盐水的输注瓶
分配。当施用方式是注射时，可以提供无菌注射用水或盐水安瓿，从而使得成分可以在施用
前进行混合。
发明的一种或多种预防或治疗剂或药物组合物，作为在密封容器中的干无菌冷冻干燥粉末
或无水浓缩剂提供，且可以重构（例如，用水或盐水）至合适浓度以用于给受试者施用。优选
地，本发明的一种或多种预防或治疗剂或药物组合物，作为在密封容器中的干无菌冷冻干
燥粉末提供，其单位剂量为至少5 mg、更优选至少10 mg、至少15 mg、至少25 mg、至少35
mg、至少45 mg、至少50 mg、至少75 mg、或至少100 mg。冷冻干燥的本发明的预防或治疗
剂或药物组合物应在其原容器中贮存于2℃－8℃，并且本发明的预防或治疗剂或药物组
合物应在重构后1周内施用，优选5天内、72小时内、48小时内、24小时内、12小时内、6小
时内、5小时内、3小时内、或1小时内。在可替代的实施方案中，本发明的一种或多种预防或
治疗剂或药物组合物，以液体形式在指示试剂的量和浓度的密封容器中提供。优选地，液体
形式的施用的组合物在密封容器中提供，其量为至少0.25 mg/ml，更优选至少0.5 mg/ml、
至少1 mg/ml、至少2.5 mg/ml、至少5 mg/ml、至少8 mg/ml、至少10 mg/ml、至少15 mg/kg、
至少25 mg/ml、至少50 mg/ml、至少75 mg/ml或至少100 mg/ml。液体形式应在其原容器
中贮存于2℃－8℃。
小瓶、安瓿或预装注射器中的液体或冷冻干燥剂型组成。缓冲液可以是L-组氨酸（1－50
mM），最佳5－10 mM，pH 5.0－7.0（最佳pH 6.0）。其他合适的缓冲液包括但不限于，琥
珀酸钠、柠檬酸钠、磷酸钠或磷酸钾。氯化钠可以用于修饰浓度0－300 mM（对于液体剂型
最佳150 mM）的溶液的毒性。对于冷冻干燥剂型可以包括冷冻保护剂，主要为0－10％蔗
糖（最佳0.5－1.0％）。其他合适的冷冻保护剂包括海藻糖和乳糖。对于冷冻干燥剂型可
以包括膨胀剂，主要为1－10％甘露糖醇（最佳2－4％）。稳定剂可以在液体和冷冻干燥
剂型中使用，主要为1－50 mM L-甲硫氨酸（最佳5－10 mM）。其他合适的膨胀剂包括甘
氨酸、精氨酸，可以作为0－0.05％聚山梨醇酯80（最佳0.005－0.01％）包括。另外的
表面活性剂包括但不限于，聚山梨醇酯20和BRIJ表面活性剂。
优选形式取决于预期施用方式和治疗应用。一般的优选组合物为可注射或可输注溶液形
式，例如类似于由其他抗体被动免疫接种人使用的那些的组合物。优选施用方式是肠胃外
的（例如，静脉内、皮下、腹膜内、肌内）。在优选实施方案中，本文描述的DLL4结合蛋白通过
静脉内输注或注射来施用。在另一个优选实施方案中，DLL4结合蛋白通过肌内或皮下注射
来施用。
通过下述制备：将需要量的活性化合物（即，抗体或抗体部分）与上文列举的一种成分或成
分组合一起掺入合适的溶剂中，必要时随后进行过滤灭菌。一般地，分散体通过将活性化合
物掺入无菌载体内来制备，所述无菌载体包含基本分散介质和来自上文列举那些的必需的
其他成分。在用于制备无菌可注射溶液的无菌、冷冻干燥粉末的情况下，优选制备方法是由
其先前无菌过滤的溶液产生活性成分加任何另外所需成分的粉末的真空干燥和喷雾干燥。
溶液的正确流动性可以通过下述来维持，例如利用包衣例如卵磷脂，在分散体的情况下维
持所需颗粒大小和利用表面活性剂。可注射组合物的延长吸收可以通过在组合物中包括延
迟吸收的试剂来引起，所述试剂例如单硬脂酸盐和明胶。
施用途径和/或模式将依所需结果而变。在某些实施方案中，活性化合物可以与载体一起
制备，所述载体将保护化合物免于快速释放，例如控释制剂，包括植入物、经皮贴剂、和微囊
化递送系统。可以使用生物可降解的、生物相容的聚合物，例如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙
醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。用于制备此类制剂的许多方法是获得专利保护的或是本领
域技术人员一般已知的。参见例如，Sustained and Controlled Release Drug Delivery
Systems，J.R. Robinson，编辑,（Marcel Dekker，Inc.，New York，1978）。
片剂，或直接掺入受试者的饮食内。对于经口治疗施用，化合物可以与赋形剂掺合，且以可
摄食片剂、口腔含化片剂、锭剂、胶囊、酏剂、悬浮液、糖浆、糯米纸囊剂（wafer）等的形式使
用。为了通过除肠胃外施用外施用本发明的化合物，可能必须用材料包被化合物、或将化合
物与材料共施用，以防止其失活。
害的病症。例如，本发明的抗huDLL4抗体或抗体部分可以与结合其他靶的一种或多种另外
的抗体（例如，结合其他细胞因子或结合细胞表面分子的抗体）共配制和/或共施用。此外，
本发明的一种或多种结合蛋白可以与两种或更多种前述治疗剂组合使用。此类组合疗法可
以有利地利用较低剂量的施用的治疗剂，从而避免与各种单一疗法相关的可能毒性或并发
症。
6,660,843 B1和公开的PCT公开号WO 99/25044中描述，在此将其引入作为参考。
多种症状。基因疗法指通过给受试者施用表达的或可表达核酸来进行的疗法。在本发明的
这个实施方案中，核酸生产其编码的结合蛋白或介导预防或治疗作用的本发明预防或治疗
剂。
Biotherapy，3：87-95（1991）；Tolstoshev，Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol.，32：573-596
（1993）；Mulligan，Science，260：926- 932（1993）；以及Morgan和Anderson，Ann. Rev.
Biochem.，62：191-217（1993）；Robinson，C.，Trends Biotechnol.，11（5）:155（1993）。可使用的重组DNA技术领域中通常已知的方法描述于Ausubel等人（编辑），Current Protocols
in Molecular Biology（John Wiley & Sons，New York，1993）；和Kriegler，Gene Transfer
and Expression，A Laboratory Manual,（Stockton Press，New York，1990）。各种基因治
疗方法的详细描述于在此引入作为参考的美国专利申请公开号20050042664 A1中公开。
结合蛋白，例如如本文描述的抗DLL4抗体或其片段，其量足以治疗或预防DLL4结合的肿瘤
或癌症。DLL4拮抗剂即抗DLL4抗体或其片段可以单独或与如本文描述的其他治疗方式组
合施用于受试者。
那些病症：神经元功能和发育；动脉内皮命运和血管生成的稳定作用；在瓣膜原始和心室
发育和分化的形成过程中在心内膜和心肌之间的关键细胞通讯事件的调节；心瓣膜稳态，
以及涉及心血管系统的其他人病症中的牵涉；内分泌和外分泌性胰腺的及时的细胞谱系规
格（specification）；必须在肠中的分泌性和吸收性谱系之间选择的细胞的二元命运决定
的影响；在骨发育和参与定型至成骨细胞谱系例如骨质疏松症的过程中造血干细胞区室的
扩张；在几个不同的发育阶段时在乳腺中细胞命运决定的调节；和某些非核机制，例如肌
动蛋白细胞骨架通过酪氨酸激酶Abl的控制。更具体而言，DLL4相关的病症包括但不限于
癌症、T-ALL（T细胞急性成淋巴细胞白血病）、CADASIL（伴皮质下梗死和脑白质病的大脑
常染色体显性动脉病）、MS（多发性硬化）、法洛四联症（TOF）和Alagille综合征（AS）、黄斑
变性和年龄相关的黄斑变性疾病、以及特征在于异常DLL4表达或活性的其他血管生成非
依赖性和依赖性疾病。
个体的健康有利的其他病症。
认为治疗癌症、肿瘤或其他疾病或状况有用的治疗剂，其中DLL4的结合或抑制视为对于治
疗癌症、肿瘤或其他疾病或状况是希望或有利的。另外的试剂也可以是赋予治疗组合物有
利属性的试剂，例如影响组合物粘度的试剂。
抗体和选自下列的至少一种另外的试剂。组合还可以包括超过一种另外的试剂，例如，两种
或三种另外的试剂，如果组合是这样的，从而使得形成的组合物可以执行其预期功能的话。
化学疗法例如DNA烷化剂、顺铂、卡铂、抗微管蛋白剂、紫杉醇、多西他赛、紫衫酚、阿霉素、
吉西他滨、吉西他宾、蒽环霉素、亚得里亚霉素、拓扑异构酶I抑制剂、拓扑异构酶II抑制
剂、5-氟尿嘧啶（5-FU）、甲酰四氢叶酸、依立替康、受体酪氨酸激酶抑制剂（例如埃罗替尼、
吉非替尼）、COX-2抑制剂（例如塞来昔布）和激酶抑制剂。
酸金（肌内和经口）、硫唑嘌呤、秋水仙碱、皮质类固醇（经口、吸入和局部注射）、β2肾上腺
素受体激动剂（沙丁胺醇、特布他林、沙美特罗）、黄嘌呤（茶碱、氨茶碱）、色甘酸盐、萘多罗
米、酮替芬、异丙托铵和乙东碱、环孢菌素、FK506、雷帕霉素、霉酚酸酯、来氟洛米、NSAIDs
例如布洛芬、皮质类固醇例如强的松龙、磷酸二酯酶抑制剂、腺苷激动剂、抗凝剂、补体抑
制剂、肾上腺素能药、干扰经由促炎细胞因子例如TNFα或IL-1的信号传导的试剂（例如
IRAK、NIK、IKK、p38或MAP激酶抑制剂）、IL-1β转换酶抑制剂、TNFα转换酶（TACE）抑制剂、
T细胞信号传导抑制剂例如激酶抑制剂、金属蛋白酶抑制剂、柳氮磺吡啶、硫唑嘌呤、6-巯
基嘌呤、血管紧张素转换酶抑制剂、可溶性细胞因子受体及其衍生物（例如，可溶性p55或
TM
p75 TNF受体和衍生物p75TNFRIgG（Enbrel ）和p55TNFRIgG（Lenercept）、sIL-1RI、
sIL-1RII、sIL-6R）、抗炎细胞因子（例如，IL-4、IL-10、IL-11、IL-13和TGFβ）、塞来昔布、
叶酸、硫酸羟氯喹、洛芬昔布、依那西普、英夫单抗、萘普生、伐地考昔、柳氮磺吡啶、甲基强
的松龙、美洛昔康、乙酸甲基强的松龙、硫代苹果酸金钠、阿司匹林、曲安缩松、萘磺酸右丙
氧芬/扑热息痛、叶酸盐、萘普酮、扶他林、吡罗昔康、依托度酸、双氯酚酸钠、奥沙普嗪、盐
酸羟可酮、重酒石酸二氢可待因酮/扑热息痛、双氯酚酸钠/米索前列醇、芬太尼、阿那白滞
素（anakinra）、人重组体、盐酸曲马多、双水杨酸酯、舒林酸、氰钴胺素/fa/吡哆醇、扑热息
痛、阿仑膦酸钠、强的松龙、硫酸吗啡、盐酸利多卡因、吲哚美辛、硫酸葡糖胺（glucosamine
sulf）/软骨素、盐酸阿米替林、磺胺嘧啶、盐酸羟可酮/扑热息痛、盐酸奥洛帕定、米索前列
醇、甲氧萘丙酸钠、奥美拉唑、环磷酰胺、利妥希玛、IL-1 TRAP、MRA、CTLA4-IG、IL-18 BP、抗
IL-18、抗IL15、BIRB-796、SCIO-469、VX-702、AMG-548、VX-740、罗氟司特（Roflumilast）、
IC-485、CDC-801、和美苏帕玛（Mesopram）。
呤；甲硝唑；脂肪加氧酶抑制剂；美沙拉秦；奥沙拉嗪；巴柳氮；抗氧化剂；血栓烷抑制剂；
IL-1受体拮抗剂；抗-IL-1β单克隆抗体；抗-IL-6单克隆抗体；生长因子；弹性蛋白酶抑
制剂；吡啶基-咪唑化合物；和针对其他人细胞因子或生长因子的抗体或拮抗剂，所述细胞
因子或生长因子例如TNF、LT、IL-1、IL-2、IL-6、IL-7、IL-8、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、
EMAP-II、GM-CSF、FGF、和PDGF。本发明的抗体或其抗原结合部分可以与针对细胞表面分子
或其配体的抗体组合，所述细胞表面分子例如CD2、CD3、CD4、CD8、CD25、CD28、CD30、CD40、
CD45、CD69、CD90。
TNFR-Ig构建体（p75TNFRIgG（ENBREL®）和p55TNFRIgG（LENERCEPT））和PDE4抑制剂。本
发明的结合蛋白可以与下述试剂组合：美沙拉秦、强的松、硫唑嘌呤、巯基嘌呤、英夫单抗、
甲基强的松龙琥珀酸钠、地芬诺酯/硫酸阿托品、盐酸洛哌丁胺、氨甲蝶呤、奥美拉唑、叶酸
盐、环丙沙星/葡萄糖-水、重酒石酸二氢可待因酮/扑热息痛、盐酸四环素、氟轻松、甲硝
唑、硫柳汞/硼酸、消胆胺/蔗糖、盐酸环丙沙星、硫酸莨菪碱、盐酸哌替啶、盐酸咪达唑、盐
酸羟可酮/扑热息痛、盐酸异丙嗪、磷酸钠、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶、塞来昔布、聚卡波非、萘
磺酸右丙氧芬、氢化可的松、多种维生素、巴柳氮二钠、磷酸可待因/扑热息痛、盐酸考来维
仑（colesevelam hcl）、氰钴胺素、叶酸、左氟沙星、甲基强的松龙、那他珠单抗和干扰素γ。
盐、盐酸地尔硫 、硝酸异山梨酯、重硫酸氯吡格雷、硝苯地平、阿托伐他汀钙、氯化钾、呋塞
米、斯伐他汀、盐酸维拉帕米、地高辛、盐酸普萘洛尔、卡维地洛、赖诺普利、螺内酯、氢氯噻
嗪、马来酸依那普利、纳多洛尔、雷米普利、依诺肝素钠、肝素钠、缬沙坦、盐酸索他洛尔、非
诺贝特、依泽替米贝（ezetimibe）、布美他尼、氯沙坦钾、赖诺普利/氢氯噻嗪、非洛地平、卡
托普利和富马酸比索洛尔。
效量可以由本领域技术人员来确定，且可以根据下述因素而变，例如个体疾病状态、年龄、
性别、和重量，以及结合蛋白在个体中引起所需应答的能力。治疗有效量也是其中治疗有利
作用大于结合蛋白的任何毒性或有害作用的量。“预防有效量”指在所需剂量和时间段有效
达到所需预防结果的量。一般地，因为预防剂量在疾病前或疾病早期时在受试者中使用，所
以预防有效量将小于治疗有效量。
态所指示的按比例减少或增加。为了易于施用和剂量一致，以单位剂型配制肠胃外组合物
是特别有利的。如本文使用的，单位剂型指适合作为单一剂量用于待治疗的哺乳动物受试
者的物理上不连续单位；每个单位包含与所需药学载体结合的计算为产生所需疗效的预定
量的活性化合物。关于本发明的单位剂型的详细说明由下述指示且直接取决于下述：（a）
活性化合物的独特特征和待达到的具体治疗或预防作用，和（b）配合这种用于治疗个体中
敏感性的活性化合物的领域固有的局限性。
变。应进一步理解对于任何特定受试者，根据个体需要和施用或监督组合物施用的人的专
业判断，具体剂量方案应当随着时间过去进行调整，并且本文所述的剂量范围仅是示例性
的，且不希望限制要求保护的组合物的范围或实践。
不限于放射性免疫测定（RIA）、免疫沉淀、酶联免疫吸附测定（ELISA）、免疫印迹（例如蛋白
质印迹）、包含吸附或固定至基底的本发明DLL4结合蛋白的免疫测试条（例如免疫浸渍片）、
荧光激活细胞分选（FACS）等。本文描述的DLL4结合蛋白可以吸附或固定至基底，例如树
脂颗粒或其他材料，用于在亲和柱或本领域可获得的其他亲和形式中使用，以从样品中纯
化DLL4。使用本发明的DLL4结合蛋白的DLL4的检测可以在体外对混合物、溶液或生物学
样品中进行。可以与本发明的结合蛋白接触以检测或测量样品中的DLL4的生物学样品包
括但不限于尿、唾液、口腔拭子（颊、舌或咽喉拭子）、表皮拭子、表皮刮擦、直肠拭子、阴道拭
子、全血样品、血浆样品、血清样品、组织活组织检查和通过本领域已知的程序得自个体的
任何其他样品。在另一个实施方案中，DLL4结合蛋白可以用于在体内检测DLL4，例如多种
X线断层摄影术和扫描法，包括但不限于X射线计算机辅助X线断层摄影术（CT）、磁共振成
像（MRI）和正电子发射X线断层摄影术（PET）。
进行。尽管本发明目前已得到详细描述，但通过参考下述实施例将更清楚地理解本发明，所
述实施例被包括仅用于举例说明性目的且不希望限制本发明。
实施例
振的测量，在25℃用Biacore®仪器（Biacore 2000、Biacore 3000或Biacore T100；GE
Healthcare，Piscataway，New Jersey，US）测定DLL4抗体与纯化的重组DLL4细胞外结构域
（ECD）的结合，使用运行缓冲液HBS-EPB（10 mM HEPES [pH 7.4]、150 mM NaCl、3 mM EDTA、
0.1 mg/ml BSA和0.005％表面活性剂P20）。例如，根据制造商的说明书和程序使用标准胺
偶联试剂盒，将在10 mM乙酸钠（pH 4.5）中稀释的约9000 RU的山羊抗人Fc特异性多克隆
抗体（Thermo Fisher Scientific Inc.，Rockford，Illinois，US）以25 μg/ml跨越CM5研
究级别的生物传感器芯片直接固定。在生物传感器芯片上的未反应部分用乙醇胺阻断。对
于动力学分析，衍生自1:1兰米尔（Langmuir）结合模型的速率方程与多次抗原注射同时拟
合（使用总体拟合分析），使用Scrubber 2（BioLogic Software），Biacore Biaevaluation
4.0.1软件或Biacore T100 Evaluation软件。将纯化的抗体在运行缓冲液中稀释用于跨
越山羊抗人Fc反应表面捕获。将作为配体（1 μg/ml）的待捕获的抗体以10 μl/分钟的
流速注射经过反应基质。在测定过程中，所有测量针对单独的捕获表面（即不含捕获的抗
-1 -1 -1
DLL4抗体）进行参考。结合和解离速率常数Kon（M s ）和Koff（s ）在80 μl/分钟的连
续流速下进行测定。通过在范围为1.23 – 900 nM作为3倍稀释系列的不同抗原浓度作出
动态结合测量衍生速率常数，并且包括仅缓冲液的注射（待用于双重参考）。在抗体和靶抗
原之间的反应的平衡解离常数KD（M）随后通过下式由动力学速率常数进行计算：KD = Koff/
6
Kon。结合记录为时间的函数，并且计算动力学速率常数。在这种测定中，可以测量快至10
-1 -1 -6 -1
M s 的结合速率和慢至10 s 的解离常数。
包被，并且在4℃温育过夜。将ELISA板用洗涤缓冲液（PBS、0.05％Tween-20）洗涤3次，
并且随后在25℃用200 ml/孔封闭缓冲液（D-PBS、1％BSA、1 mM CaCl2、0.05％Tween-20）
封闭1小时。将板洗涤3次，并且与100 μl/孔DLL4抗体（0.0001-100 nM，在封闭缓冲液
中10倍连续稀释）一起在25℃温育1小时，并且随后再洗涤3次。将含有捕获的DLL4抗
体的板与生物素标记的人DLL4细胞外结构域（10 nM的封闭缓冲液溶液，100 µl/孔）一起
在25℃温育1小时，洗涤3次，并且与缀合至HRP的链霉抗生物素蛋白（KPL #474-3000，在
封闭缓冲液中1:10,000稀释，100 µl/孔）一起在25℃温育1小时。在末次洗涤后，将板与
100 μl/孔ELISA底物（1-Step Ultra TMB-ELISA，Pierce #340280）一起温育。在2分钟
后在25℃用100 µl/孔2 N H2SO4停止反应，并且在450 nm处阅读吸光度。使用Graphpad
Prism软件分析数据，并且报道EC50值。
DLL4细胞外结构域（ECD）（"6xHis"作为SEQ ID NO：206公开）的PBS溶液一起在25℃伴
随振荡温育1小时。随后将板洗涤3次。随后在25℃将100 μl/孔重组大鼠/人嵌合或
重组人抗DLL4抗体加入板（0.00164-27 nM，在ELISA缓冲液中4倍系列稀释= PBST，10％
Superblock（Pierce #37515）中）伴随振荡1小时，并且随后再洗涤3次。将板与山羊抗
人HRP（Pierce #31412）（在ELISA缓冲液中1:40,000稀释，100 μl/孔）一起在25℃伴
随振荡温育1小时，随后洗涤3次。在末次洗涤后，将板与100 μl/孔ELISA底物（Sigma
#T8665）一起温育。在8分钟后在25℃用100 μl/孔1N HCl停止反应，并且在450 nm处
阅读吸光度。使用Graphpad Prism软件分析数据，并且报道EC50值。
5
x10 细胞与以多种浓度的抗体一起在FACS缓冲液中在冰上温育60分钟。将细胞洗涤两次，
并且加入50 μL R-藻红蛋白缀合的抗大鼠IgG，F（ab'）2片段（在FACS缓冲液中1:200
稀释）（Jackson ImmunoResearch，West Grove，PA，目录#112-116-072）。在冰上温育后
（4℃，60分钟），将细胞洗涤三次，并且重悬浮于FACS缓冲液中。使用Becton Dickinson
FACSCalibur-HTS（Becton Dickinson，San Jose，California，US）测量荧光。使用Graphpad
Prism软件分析数据，并且EC50值报道为达到与DLL4表达细胞结合的最大DLL4抗体的50％
的抗体浓度。
液）包被，并且在4℃温育过夜。随后将板用洗涤缓冲液（PBS、0.05％Tween-20）洗涤3次，
并且用200 μl/孔封闭缓冲液（D-PBS、1％BSA、1 mM CaCl2、0.05％Tween-20）在25℃封
闭1小时。在封闭时，将生物素标记的DLL4细胞外结构域（14 nM）与抗体（30 pM-66 nM，
在封闭缓冲液中3倍系列稀释）在25℃伴随振荡混合1小时。在封闭后洗涤测定板，并且
与DLL4/抗体混合物（100 μl/孔，在25℃伴随振荡1小时）一起温育。将板再次洗涤，并
且加入100 μl/孔与HRP缀合的链霉抗生物素蛋白（Fitzgerald #65R-S104PHRPx，在封
闭缓冲液中1:5,000稀释）在25℃伴随振荡1小时。在末次洗涤后，使用100 μl/孔底物
（TMB Sigma #T8665）使板显色，并且使用100 μl/孔1N HCl停止反应，并且在450 nm处
阅读吸光度。使用Graphpad Prism软件分析数据，并且IC50值报道为达到与Notch1结合
的DLL4的50％减少的抗体浓度。
5
冲液）。将HEK293G-DLL4细胞以1.5 x10 细胞/孔分配到96孔板（v形底）内FACS缓冲
液中。在短暂离心细胞且弃去上清液后，将以合适稀释度的50 μL纯化的IgG加入每个
孔，并且在冰上在4℃温育60分钟，随后对于人DLL4-293G加入以0.2 μg/mL或对于小鼠
DLL4-293G（最终1.0或0.1 μg/mL）加入以2.0 μg/mL的50 μL/孔Notch1-生物素，
在4℃在冰上温育另外1小时。在将细胞用FACS缓冲液洗涤两次后，加入50 μL R-藻红
蛋白缀合的链霉抗生物素蛋白（在FACS缓冲液中1:150稀释）（Jackson ImmunoResearch，
West Grove，PA，目录#016-110-084）。在冰上温育后（4℃，60分钟），将细胞洗涤三次，并且
重悬浮于FACS缓冲液中。使用Becton Dickinson FACSCalibur-HTS（Becton Dickinson，
San Jose，CA）测量荧光。使用Graphpad Prism软件分析数据，并且IC50值报道为达到与
DLL4表达细胞结合的Notch1的50％减少的抗体浓度。
的表达全长DLL4的5,000 HEK293G细胞/孔混合15分钟。在测试抗体的存在下，将293G/
DLL4细胞与EA.hy926 Notch报道细胞共培养24小时。通过Promega的底物（Promega #
E2940）分析萤光素酶活性。使用Graphpad Prism软件分析数据，并且IC50值报道为达到
DLL4诱导的Notch活化的50％减少的抗体浓度。
变性（不影响蛋白质的三级结构）且不需要在4℃ - 30℃范围内的温度控制，即沉淀研究可
以在环境温度在实验室工作台上执行。
且最终沉淀。在热力学术语中，立体排阻导致蛋白质的化学势中的增加，直至它超过纯固
态的那种，导致蛋白质沉淀。这主要由于在PEG和蛋白质之间的相互作用的大量不利的自
由能而发生，减少由于立体排阻效应的蛋白质的优先水合。在水溶液中，优先水合帮助维持
蛋白质的天然结构。一般地，体积排阻已显示随着PEG的分子量增加而变得更有效，即随着
PEG分子量增加，需要更少的PEG以沉淀蛋白质。
溶液中，所述抗体溶液最初以小于或等于0.5 mg/ml的浓度和0.5 mL的体积。将PEG溶液
连续加入且混合直至最初的混浊持续。引起这种沉淀所需的PEG 3000百分比计算为（50）
x（加入的PEG 3000溶液的体积）/（在PEG加入前抗体溶液的起始体积）。
3000百分比类似于沉淀阿达木单抗所需的百分比，那么那种蛋白质的预测可溶性将类似于
阿达木单抗的可溶性。
后者，15 mL Amicon离心滤器具有~50 µl的最低限度体积，而4 mL Amicon离心滤器具有
~15 µl的最低限度体积。
有当实施离心力时，允许小于10 – 30千道尔顿的分子经过的孔。一般超过140千道尔顿
的抗体被保留，而水、缓冲液分子、小赋形剂和盐经过。离心滤器随后根据制造商说明书进
行离心，直至观察到蛋白质沉淀出溶液时，或直至达到蛋白质可以在滤器单元内浓缩的最
低限度体积时。
UVCD区域（250 – 320 nm）中的生色团是芳香族氨基酸（即色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸）和
二硫键，并且当生色团存在于不对称（埋入）环境中时，CD效应出现。在250-270 nm区域中
的信号可归于苯丙氨酸残基，来自270-290 nm的信号可归于酪氨酸，并且来自280-300 nm
的那些可归于色氨酸。二硫键引起遍及近UV谱的广泛弱信号。近UV CD谱可以对三级结
构中的小变化，例如由于蛋白质-蛋白质相互作用和/或配制条件中的变化的那些是敏感
的。
带的取消，具有大量此类氨基酸的蛋白质可以具有更小的CD条带。
质溶液的扫描的那种中扣除读数。近UV-CD谱是摩尔椭圆率与250或240 - 320 nm的波
长比较的图表。
弱折叠暴露疏水内部，其可以导致在蛋白质分子中的疏水作用，导致不需要的聚集物的形
成。
Buckinghamshire，UK）。对于以1 mg/mL的样品，经过25℃ - 95℃温度范围应用1℃/分
钟扫描率研究分子的解折叠。应用的另外测量参数是16秒的拟合时期，10分钟的预扫描等
待时间，并且测量以非反馈模式进行。每次个别测量，将420 µL样品/空白充填到DSC测
量样品支架内，使用如下提供的板充填方案。将获得的热图与非两状态模型拟合，以获得不
同转变的中点温度和焓。
定性基于系统的Gibbs自由能（DG）的量级以及在焓（DH）和熵（DS）变化之间的热力学关
系。阳性DG指示天然状态比变性状态更稳定 – DG越阳性，稳定性越大。对于蛋白质解
折叠，稳定力需要被破坏。构象熵克服稳定力，允许蛋白质在其中熵变得占优势的温度解
折叠。DSC测量由于热变性的蛋白质解折叠的DH。作为一般原则，可以陈述转变中点（Tm）
越高，蛋白质在更低温度越稳定。在相同实验过程中，DSC还测量对于蛋白质变性的热容量
（DCp）中的变化。与蛋白质解折叠结合的热容量变化主要是由于侧链的水合中的变化，所
述侧链在天然状态中是埋入的，但在变性状态变得溶剂暴露的。DSC已显示是对于蛋白质
和其他生物学大分子的液体制剂稳定性的有价值的预测物（Remmele，R.L. Jr.，Gombotz，
W.R.，BioPharm 13，36-46，2000；和Remmele，R.L. Jr.，Nightlinger，N.S.，Srinivasen，
S.，Gombotz，W.R.，Pharm. Res. 15，200-208，1998）。
的树脂床中的孔大小的函数。更小的分子可以渗透到树脂中更小的孔内并且保留得比更
大的分子更久。在从柱中洗脱后，通过UV吸光度检测蛋白质。SEC法使用TSK凝胶保护
（TOSOH Biosciences，Montgomeryville，PA，目录号08543）和TSK凝胶G3000SWxL（TOSOH
Biosciences，Montgomeryville，PA，目录号08541）。流动相是100 mM Na2HPO4、200 mM
Na2SO4，pH 6.8。流速是0.25 mL/分钟。注射体积是20 μL 1 mg/mL样品。柱温是室温。
自动采样器温度是2-8℃。总运行时间是55分钟。检测基于在214 nm波长处的UV吸光
度，其中带宽设为8 nm，使用在360 nm具有带宽100 nm的参考波长。
循环后，例如第二次和第四次，抽取溶液的部分用于在再冷冻前通过SEC分析。冻融稳定性
测试以低蛋白质浓度完成，以便获得由于蛋白质分子对于变性冰水界面的更大暴露的“更
糟糕的情况”。在更高浓度，按比例更少的蛋白质遇到冰水界面，代替与其他蛋白质分子的
相互作用。
等分试样并且实施通过SEC的分析。随后将溶液送回温育。
鼠免疫接种。表达全长人DLL4和重组小鼠DLL4-ECD（DLL4细胞外结构域）蛋白质的人细
胞系用作免疫原。表达人DLL4或小鼠DLL4的小鼠细胞系用于测定抗血清滴度和筛选分泌
6
抗原特异性抗体的杂交瘤。免疫接种剂量含有1 x 10 细胞/大鼠/注射用于初次和加强
免疫接种。为了增加对于小鼠DLL4的免疫应答，将大鼠用以具有不完全弗氏佐剂（Sigma，
St. Louis，MO，US）的乳剂形式的重组小鼠DLL4-ECD进一步加强。简言之，通过使用涡旋首
先将佐剂在小瓶中轻轻混合来制备佐剂-抗原混合物。从小瓶中取出所需量的佐剂并且放
入高压灭菌的1.5 mL微量离心管内。将抗原在PBS或盐水中制备，其浓度范围为0.5-1.0
mg/ml。随后将计算量的抗原加入具有佐剂的微量离心管，并且通过轻轻涡旋2分钟将溶液
混合，以生成油包水乳状液。随后将佐剂-抗原溶液抽取到合适的注射器内用于动物注射。
将总共50 μg抗原以50-100 μl的体积注射。将每只动物免疫接种，并且随后取决于滴
度加强2 – 3次。在融合前具有良好滴度的动物给予用表达DLL4的细胞系的末次皮下加
强。
Manual,（Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，NY，1998）；
Kohler G和Milstein C.，"Continuous cultures of fused cell secreting antibody of
predefined specificity," Nature，256：495-497（1975）），将免疫接种的大鼠脾细胞无菌
制备且与骨髓瘤细胞融合。随后将融合的“杂交细胞”分配到96孔板内的DMEM/20％FCS/
HAT培养基中。在融合后七至十天在显微镜下观察存活的杂交瘤集落。在两周后，对来自每
个孔的上清液实施基于细胞的结合筛选，使用表达重组人DLL4或小鼠DLL4的小鼠细胞系。
6
简言之，将表达人或小鼠DLL4的小鼠细胞系混合物（1:1比）以1 x 10 细胞/孔分配到96
孔（圆底）板内，并且与杂交瘤上清液（50 μl）一起在4℃温育1小时。随后将细胞用FACS
缓冲液（PBS+2％BSA）洗涤3次，HRP山羊抗大鼠Ig-PE（藻红蛋白）用于FACS机器中的检
测。根据下述程序使用ELISA形式筛选杂交瘤。将ELISA板用50 μl人DLL4或小鼠DLL4
（2.0 μg/ml的PBS溶液）在4℃包被过夜。将板用250 μl PBS/0.5％Tween20洗涤3次，
并且用200 μl封闭缓冲液（在含有0.5％Tween20的PBS中的2％BSA）封闭。将稀释的血
清或杂交瘤上清液（100 μl）加入每个孔，并且在室温温育1小时。随后将板用PBS/0.5％
Tween20洗涤3次，HRP山羊抗大鼠IgG用于检测，并且在450 nm处观察到结合ODs。随后选
择分泌结合人DLL4或小鼠DLL4或两者的抗体的阳性杂交瘤，并且转移至24孔板，并且通
过有限稀释亚克隆，以确保细胞系的克隆形成能力。使用Zymed's Mouse MonoAb-ID Kit测
定每种单克隆抗体的同种型。将产生显示高特异性结合活性的抗体的杂交瘤克隆亚克隆且
纯化（表5），并且如下表征抗体的亲和力（Biacore）和能力（Notch阻断FACS和报道测定）。
体外活性，并且概括于表8中。进一步的表征测定37D10和40B10是等同的大鼠mAbs。
hu = 人；cyno = 食蟹猴；mu = 小鼠。
过与无RNA酶注射器配合的20号针10次，将细胞裂解产物匀浆化。将一体积的70％乙醇
加入匀浆化的裂解产物，并且通过吸液充分混合。每次将最高达700 μl样品加入RNeasy
旋转柱，并且以10,000 rpm旋转15秒，弃去流通物。将700 μl缓冲液RW1加入柱，并且
以10,000 rpm旋转15秒，弃去流通物。将500 μl缓冲液RPE加入，以洗涤柱膜，并且以
10,000 rpm旋转15秒，弃去流通物。将相同步骤再一次重复，但将柱离心2分钟。随后将样
品以10,000 rpm离心1分钟，以消除缓冲液RPE的任何携带（carryover）。通过以10,000
rpm离心1分钟，用30 μl无RNA酶水洗脱RNA。随后，根据下述方案，使用SuperScript
First-Strand Synthesis System for RT-PCR（Invitrogen，目录# 11904-018），将2 μg
总RNA用于合成第一链cDNA：将2 μg RNA + 2 μl dNTP + 2 μl Oligo（dT）+ DEPC-H2O
（至20 μl）在65℃温育5分钟，随后转移至冰至少1分钟。随后将样品加入下述混合物
中：4 μl 10X RT缓冲液 + 8 μl 25 mM MgCl2 + 4 μl 0.1 M DTT + 2 μl RNA酶OUT，
并且在42℃温育2分钟。随后，将2 μl SuperScript II RT加入样品中且在42℃温育
50分钟。随后将样品在70℃温育15分钟，并且在冰上冷却。随后加入2 μl RNA酶H，并
且将样品在37℃温育20分钟。随后将cDNA用作模板用于抗体可变区的PCR扩增。使用
第一链cDNA，来自Mouse Ig-Primer Set（Novagen，目录# 69831-3）的引物和Platinum
Super Mix High Fidelity（Invitrogen，目录# 12532-016）执行PCR。为了扩增重链可变
区，如下装配PCR样品：22.5 μl PCR Super Mix + 0.25 μl反向引物MuIgG VH3'-2 + 1
μl cDNA + 1.25 μl正向引物之一（VH-A、VH-B）或0.5 μl正向引物之一（VH-C、VH-D、
VH-E、VH-F）。为了扩增轻链可变区，如下装配PCR样品：22.5 μl PCR Super Mix + 0.25
μl反向引物MuIgKVL-3'-1 + 1 μl cDNA + 1.25 μl正向引物之一（VL-A、VL-B）或0.5
μl正向引物之一（VL-C、VL-D、VL-E、VL-F、VL-G）。
1-变性94℃2分钟。
1-变性94℃2分钟。
# 28704）纯化DNA：将凝胶切片称重。对于每个凝胶切片加入3体积的缓冲液QG与1体积
的凝胶。将样品在50℃温育10分钟，直至凝胶切片完全溶解，每2-3分钟混合。随后将一
凝胶体积的异丙醇加入每个样品中且混合。随后将样品施加于QIAquick柱，并且以13000
rpm离心1分钟。为了洗涤，将750 μl缓冲液PE加入样品中且以13000 rpm旋转1分钟。
随后将柱以13,000 rpm离心另外1分钟，以完全去除残留乙醇。通过将30 μl H2O加入
每个柱且通过以13000 rpm旋转1分钟洗脱DNA。随后将纯化的PCR产物测序，以鉴定可变
区序列（下表9）。
的嵌合抗体的活性（下表10），并且与其亲本大鼠mAbs类似。
N/D = 未测得（not determined）。
DNA序列且合成。对于重链变体，使用人种系重链接纳体序列VH3-7 FR1、VH3-7 FR2、VH3-7
FR 3和JH4 FR4（参见上表3）。对于轻链变体VL.1、VL.1a和VL.1b，使用人种系轻链接纳
体序列O2 FR1、O2 FR2、O2 FR3和JK2 FR4（参见上表3）。对于轻链变体VL.2a，使用人种
系轻链接纳体序列L2 FR1、L2 FR2、L2 FR3和JK2 FR4（参见上表4）。将个别构建体序列
验证，以检查准确度。随后将阳性变体接种到250 mls Luria肉汤加上氨苄青霉素中，并且
在37℃培养过夜。使用Qiagen Hi speed maxi prep试剂盒（12662），从变体培养物中提
取DNA。
回复突变，VL.1b：1个回复突变，和VL.2a：5个回复突变。各含有VH.1a的变体5-8与每种
VL变体配对：VL.1：2个回复突变，VL.1a：6个回复突变，VL.1b：3个回复突变，和VL.2a：7
个回复突变。各含有VH.1b的变体9-12与每种VL变体配对：VL.1：1个回复突变，VL.1a：5
个回复突变，VL.1b：2个回复突变，和VL.2a：6个回复突变。各含有VH.2a的变体13-16与
每种VL变体配对：VL.1：3个回复突变，VL.1a：7个回复突变，VL.1b：4个回复突变，VL.2a：
8个回复突变。
清液，短暂离心以使细胞形成团块，并且通过0.22 μm滤器过滤以使IgG与培养污染物分
离。最初通过捕获结合ELISA评估与人DLL4结合的变体（实施例1.2），所述捕获结合ELISA
利用山羊抗人Fc捕获抗体（Jackson ImmunoResearch，109-005-008），以捕获在过滤的293
6e细胞上清液中的IgG（下表13）。所有16种变体具有非常类似的亲和力，并且纯化用于
进一步表征。
体（h1A11.1-h1A11.16）。加入珠和缓冲液的上清液在4℃摇动过夜，并且第二天通过重力
经过多聚制备型层析柱（Bio Rad，731-1550）收集珠。一旦上清液已经过柱，就将珠用10柱
体积的结合缓冲液洗涤，并且将IgG用Immunopure IgG洗脱缓冲液（Pierce，185 1520）洗
脱且收集在1 ml等分试样中。将含有IgG的级分合并且在PBS中在4℃透析过夜。
种测定中都显示与亲本重组抗体1A11类似的亲和力（表13）。随后通过竞争性ELISA（实
施例1.3）和Notch报道测定（实施例1.6），就其与人和鼠DLL4的功能性测试人源化变体。
所有16种变体在两个测定中都显示与亲本重组抗体1A11类似的能力（下表14）。
使用Kabat编号。
DNA序列且合成。人种系重链接纳体序列VH3-30 FR1、VH3-30 FR2、VH3-30 FR3和JH3 FR4
（参见表3）用于生成表16中所示的人源化重链变体。人种系轻链接纳体序列O2 FR1、O2
FR2、O2 FR3和JK2 FR4（参见表4）用于生成表16中所示的人源化轻链变体。将个别构建
体序列验证，以检查准确度。随后将阳性变体接种到150 mls Luria肉汤加上氨苄青霉素
中，并且在37℃培养过夜。使用Qiagen Hi speed maxi prep试剂盒（12662），从变体培养
物中提取DNA。
回复突变，VL.1b：1个回复突变，和VL.2a：5个回复突变。各含有VH.1a的变体5-8与每种
VL变体配对：VL.1：4个回复突变，VL.1a：8个回复突变，VL.1b：5个回复突变，和VL.2a：9
个回复突变。各含有VH.1b的变体9-12与每种VL变体配对：VL.1：1个回复突变，VL.1a：5
个回复突变，VL.1b：2个回复突变，和VL.2a：5个回复突变。各含有VH.2a的变体13-16与
每种VL变体配对：VL.1：5个回复突变，VL.1a：9个回复突变，VL.1b：6个回复突变，VL.2a：
10个回复突变。
使用Kabat编号。
液，短暂离心以使细胞形成团块，并且通过0.22 μm滤器过滤以使IgG与培养污染物分离。
最初通过捕获结合ELISA评估与人DLL4结合的变体（实施例1.2），所述捕获结合ELISA利
用山羊抗人Fc捕获抗体（Jackson immuno research，109-005-008），以捕获在过滤的293
6e细胞上清液中的IgG（参见ELISA结合EC50，下表18）。含有VH.1的变体显示出与其他
变体类似的最低结合亲和力，并且考虑离开筛选。VH.1是CDR嫁接的，不含构架回复突变。
化良好结合物（binders）（h38H12.5-h38H12.16）。加入珠和缓冲液的上清液在室温搅拌
4小时，并且通过重力经过多聚制备型层析柱（Bio Rad，731-1550）收集珠。一旦上清液已
经过柱，就将珠用10 mls的结合缓冲液洗涤，并且将IgG用Immunopure IgG洗脱缓冲液
（Pierce，185 1520）洗脱且收集在用100 μl 1M Tris，pH 8中和的1 ml等分试样中。
式。通过与Notch-1 Fc结合的游离生物素化的DLL4评估信号。强结合物在低抗体浓度抑
制信号。与其他变体相比较，h38H12.5直到h38H12.7显示出低竞争能力（参见Notch竞争
性ELISA EC50，下表18）。
中的Biacore，KD）。在检查与人DLL4的直接结合（实施例1.3；下表18中的FACS结合EC50）
和Notch-1信号传导的抑制（实施例1.6；下表18中的Notch报道测定EC50）的基于细胞的
测定中筛选变体。
h38H12.2 26.88
h38H12.3 5.57
h38H12.4 20.65
h38H12.5 0.2015 14.81 77.15 7.307 0.401
h38H12.6 0.1584 26.96 12.29 6.317 0.434
h38H12.7 0.1798 12.49 19.06 2.598 0.34
h38H12.8 0.1972 8.315 20.02 5.557 0.397
h38H12.9 0.1155 4.158 3.71 1.436 0.986
h38H12.100.1226 3.902 2.489 0.7861 0.578
h38H12.110.1264 3.8 2.477 0.6572 0.554
h38H12.120.1651 3.228 1.478 1.062 0.819
h38H12.130.1534 5.287 2.556 0.7943 0.507
h38H12.140.146 5.839 1.04 1.014 0.303
h38H12.150.0904 5.714 2.369 0.837 0.355
h38H12.160.1696 3.766 2.914 1.185 0.392
使用Kabat编号。
uk/abs/#kabatnum），并且用于生成下文描述的文库。
中的最初密码子无关。这些密码子基于下述标准进行选择：
1. 增加非同义突变
2. 当突变时，增加更多氨基酸的涵盖
3. 使用高频率密码子
4. 避免SSS和WWW密码子。
细胞分选针对低浓度的生物素化的DLL4细胞外结构域选择。执行关于改善的结合速率或
解离速率或两者的选择，并且从酵母细胞中回收亲和力调节的hu1A11克隆的抗体蛋白质
序列（下表20和21），用于转换回到IgG形式用于进一步表征（参见表22中克隆的概括）。
表23列出了在构架区（FR）和CDRs中在亲和力成熟选择过程中观察到的氨基酸。
文）中。使用实施例1.3和1.6中所述的方法进一步检查其结合细胞结合的DLL4且抑制细
胞结合的DLL4诱导的Notch活化的活性，并且概括于表26（下文）中。
NB = 无法观察到的结合。
到的分子量是50,190道尔顿；50,352道尔顿；和50,514道尔顿，其中差异对应于由于不同
糖基化的162道尔顿。
到的分子量是50,368道尔顿；50,530道尔顿；和50,692道尔顿，其中差异对应于由于不同
糖基化的162道尔顿。
何沉淀。通过近紫外圆（UV-CD）和示差扫描量热法（DSC）推断可溶性。对于冻融和在升高
温度（加速稳定性）的稳定性通过尺寸排阻层析（SEC）进行评估。该技术的细节在实施例
1.7中描述，并且结果在下文描述。
体，将各2 mg用Amicon离心滤器浓缩至超过60 mg/ml。在25℃或在5℃贮存1天后未观察
到沉淀或混浊。各自的浓度是对于1A11.1 63 mg/ml，对于1A11.3 76 mg/ml，对于1A11.9
63 mg/ml，对于1A11.11 69 mg/ml，和对于嵌合1A11 76 mg/ml。
固定在CM5芯片表面上。具有类似固定的无关IgG的流动池充当参考表面。首先，允许固
定的单克隆抗体（mAbs）以50 μl/分钟结合重组抗原（以至少200 nM的浓度）共120秒。
随后，将另一种抗体以50 μl/ml注射120-240秒，以监控其结合已结合固定的mAbs的抗
原的能力。在传感图上另外的结合应答的不存在构成两个mAbs（固定在芯片上的一个和引
入液相中的一个）的表位中的重叠。随后将测定的方向以这样的方式转变，从而使得在液相
中的抗体被固定并且反之亦然。不允许在测定的两个方向中的另外抗体结合的mAbs对分
组为在这些实验中真正重叠的。具有重叠表位的所得到的mAbs分组显示于下表27中。
将血纤蛋白原溶液用抑肽酶（4单位/ml）和凝血酶（50单位/ml）重构。将Cytodex 3珠
（Amersham Pharmacia Biotech）用350–400 HUVECs/珠包被过夜。将约20个HUVEC包被的
珠嵌入血纤蛋白凝块/ 96孔组织培养板的孔。将以80％汇合的正常人成纤维细胞（NHLF，
Lonza）衍生的糖基化培养基铺平板到凝胶之上。将DLL4抗体和对照抗体KLH以15 μg/
ml加到孔上。在第10和12天时，用倒置显微镜和Nikon CCD照相机获得图像。表28概括
一些DLL4抗体在体外增强内皮细胞出芽的活性。（Nakatsu等人，"Angiogenic sprouting
and capillary lumen formation modeled by human umbilical vein endothelial cells
（HUVEC）in fibrin gels：the role of fibroblasts and Angiopoietin-1," Microvasc.
Res. 66，102–112（2003））。
38H12大鼠mAb 是
1A11大鼠mAb 是
h1A11.1 是
40B10大鼠mAb 未观察到
32C7大鼠mAb 未观察到
经过21天从每只动物中收集纵向血清样品（在HBS-EP+缓冲液中1:50稀释的5 μl全血
/时间点）。使用DLL4特异性Biacore平台测定血清浓度。简言之，将人DLL4固定至传感
器芯片，且将样品以5 μl/分钟注射经过流动池共5分钟，其中测定所得到的结合水平且
与标准相比较。血清浓度时间曲线图用于估计概括于下表29中的药代动力学参数Cma（x 峰
血清浓度）、CL（清除率）和t1/2（抗体半衰期）。
瘤生长的作用。简言之，将2 x 10 细胞皮下接种到雌性SCID-Beige小鼠的右后胁腹内。
允许肿瘤建立14-18天，在这个点，使用电子测径器测量来测定肿瘤体积。使用下式计算
2
肿瘤大小：L x W/2。将小鼠分配到处理组（n = 10/组）内，从而使得在治疗起始前，动物
3
的每个队列具有相等的平均肿瘤体积（一般在180 - 250 mm 之间）。随后将动物用抗DLL4
抗体腹膜内给药，或者每周两次共两周（总共4个剂量）或者每周一次共四周（总共4个剂
量）。对于实验的持续时间平均每周两次测量肿瘤体积，直至每个组中的平均肿瘤体积达到
3
≥ 2,000 mm 的终点。结果显示于下表30中。
1A11大鼠mAb 30mg/kg，IP，2X/周X2 37** 89**
1A11大鼠mAb 10mg/kg，IP，2X/周X2 47** 39**
1A11大鼠mAb 5mg/kg，IP，2X/周X2 43** 57**
14A11大鼠mAb 10mg/kg，IP，2X/周X2 37** 57**
40B10大鼠mAb 30mg/kg，IP，2X/周X2 29** 89**
32C7大鼠mAb 30mg/kg，IP，2X/周X2 65* 28*
14A11嵌合体 10mg/kg，IP，q7dX4 32** 114**
15D6嵌合体 10mg/kg，IP，q7dX4 47** 57**
40B10嵌合体 10mg/kg，IP，q7dX4 43** 73**
32C7嵌合体 10mg/kg，IP，q7dX4 71* 18*
h1A11.1 10mg/kg，IP，q7dX4 34** 75**
h1A11.1 5mg/kg，IP，q7dX4 31** 80**
h1A11.1 1mg/kg，IP，q7dX4 43** 36**
h1A11.1 0.5mg/kg，IP，q7dX4 62** 25*
a
％T/C = 处理组的平均肿瘤体积/处理对照组的肿瘤体积x 100。P值（如由星号指
示的）衍生自处理组与处理对照组比较的斯氏T检验比较。基于第25/26/27天测量。
b
％ILS =（T - C）/C x 100，其中T = 处理组的中值时间至终点，并且C = 处理对
照组的中值时间至终点。P值（如由星号指示的）衍生自处理组与处理对照组比较的Kaplan
3
Meier时序比较。基于2000 mm 的终点。
*p < 0.05；**p < 0.001。
网站）的内容都为了所有目的在此明确地整体引入作为参考，其中引用的参考文献也如此。
案因此在所有方面被视为是示例性的，而不是限制此处所述的本发明。本发明的范围因而
由所附的权利要求而不是由前述说明书指出，且在权利要求的等价含义和范围内的所有改
变因而预期包含在其中。
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