发明背景

胆汁酸盐是衍生自胆固醇的有机酸、它们是天然离子型去污剂、 在脂质的吸收、转运和分泌中起关键作用。在胆汁酸化学中、胆汁酸 盐的甾核具有与所有全氢化甾体化合物共同的氢化环戊并菲核。胆 汁酸的区别特征包括饱和19碳甾核、5-位上的β氢、末端为羧酸的饱 和支链5碳侧链、及3-位上的α羟基。在大多数天然胆汁酸中存在的 唯一取代基是羟基。在大多数哺乳动物中、该羟基位于3、6、7或 12位。

一般的胆汁酸主要在甾醇环上羟基的数目核定向方面有所不同。 术语初级胆汁酸是指由肝脏重新合成的胆汁酸。在人体中、初级胆汁 酸包括胆酸(3α、7α、12α-三羟基-5β-胆烷酸)(“CA”)和鹅脱氧 胆酸(3α、7α-二羟基-5β-胆烷酸)(“CDCA”)。肠内细菌使这些 胆汁酸脱羟基会生成疏水性更强的次级胆汁酸、脱氧胆酸(3α、12α- 二羟基-5β-胆烷酸)(“DCA”)和石胆酸(3α-羟基-5β-胆烷酸) (“LCA”)。这四种胆汁酸CA、CDCA、DCA、LCA通常占人体中胆汁 酸盐汇集物的99％以上。已被肝脏代谢过的次级胆汁酸有时称为叔胆 汁酸。

酮基胆汁酸是由于胆汁酸羟基、尤其是7-羟基被结肠菌氧化而 在人体内继发生成的。然而、酮基胆汁酸被肝脏迅速还原成相应的α 或β-羟基胆汁酸。  例如、CDCA的相应酮基胆汁酸是7-酮基石胆酸、 具有相应β-羟基胆汁酸的其一个还原产物是乌索脱氧胆酸(3α、7β- 二羟基-5β-胆烷酸)(“UDCA”)、这是一种叔胆汁酸。

UDCA是熊胆汁的主要主分、其作为治疗和预防多种类型肝炎疾病 的主要药物已经使用了70多年。其医药应用包括溶解射线可透过的胆 结石、治疗胆囊运动障碍、原发性胆汁性肝硬变、原发性硬变性 Choplangitis、慢性肝炎和丙型肝炎。在其他哺乳动物中、包含 6β-羟基、在大鼠和小鼠中发现的胆汁酸称为鼠胆酸(Muricholic acid)、猪生成的6β-羟基胆汁酸称为猪胆酸和猪脱氧胆酸。水生哺 乳动物的23-羟基胆汁酸称为Phocecholic和Phocedeoxycholic acids。

一般来说99％以上的分泌到人胆汁中的天然胆汁酸盐是共轭的。 这种共轭物是其中另一有机取代基(例如甘氨酸、牛磺酸、葡萄糖醛 酸酯、硫酸酯、或其他取代基(很少见))通过酯、醚、酰胺键连接 到侧链羧酸或其中一个环羟基上的胆汁酸。因此、甘氨酸或牛磺酸取 代基的酸性决定了具有甘氨酸或牛磺酸的共轭胆汁酸的离子化特性。

游离、未共轭胆汁酸单体的pKa值约为5.0。然而、与甘氨酸共 轭的胆汁酸的pKa值平均为3.9、与牛磺酸共轭的胆汁酸的pKa值不 到1.0。因此、共轭的影响是减小了胆汁酸的pKa、从而使得大部分胆 汁酸在任意给定的pH下被离子化。因为离子化盐形式的水溶性比质子 化酸形式强、所以共轭增强了在低pH的溶解度。在pH6.5-7游离胆汁 酸盐从水溶液中沉淀出来。相反、与甘氨酸共轭的胆汁酸仅在低于5 的pH下发生沉淀。与牛磺酸共轭的胆汁酸在非常强的酸性条件下(pH 低于1)仍能保持在水溶液中。然而、在胃的pH范围下、一些胆汁酸 如UDCA和CDCA不再溶解。

胆汁酸的侧链与甘氨酸或牛磺酸的共轭对全离子化胆汁酸的疏水 性影响很小。疏水性更强的胆汁酸对磷脂和胆固醇的溶解能力更大、 因此是更好的去污剂。疏水性更强的胆汁酸盐在体内合体外还破坏 不同膜。

天然胆汁酸盐汇集物始终含有多种胆汁酸盐。两种或更多种具有 不同疏水性的胆汁酸盐的混合物可表现出具有中间疏水性的单一胆汁 酸盐的性质。结果使得具有不同疏水性的两种胆汁酸的混合物的去污 特性和毒性经常在各组分的中间。由其两亲特性所致胆汁酸的生物功 能和生物特性如下： 1.乌索脱氧胆酸作为免疫调节剂有用。 2.乌索脱氧胆酸通过调节粒线体跨细胞膜电位差和反应性含氧物 种的产生来抑制脱氧胆酸所诱致的凋零。 3.乌索脱氧胆酸可抑制人的肠上皮细胞和体内一氧化氮合成酵素 (NOS)的诱导。 4.乌索脱氧胆酸的亲水性可为坏死发炎性肝炎赋予细胞保护。 5.乌索脱氧胆酸可显著改善转氨酶和慢性肝炎的肝损伤胆汁郁滞 酶指数。 6.胆汁酸实质上可以抑制的H.pylori生长。 7.乌索脱氧胆酸是胆汁酸中最有力的胃蛋白酶抑制剂。 8.高水准的胆汁酸可以显著地抑制C型肝炎病毒的增殖。 9.乌索脱氧胆酸具有细胞膜稳定特性。 10.乌索脱氧胆酸具有减轻酒精性脂肪肝的作用。 11.乌索脱氧胆酸对系统的血管床具有血舒张作用、但不会改变肺内 血管功能或心脏功能。 12.由胆固醇合成胆汁酸是从体内消除胆固醇的两个途径之一。 13.胆汁流动是由于胆汁酸盐通过肝脏的流动所致。胆汁形成是溶解 和排泄有机化合物例如胆红素、内源性代谢物例如甾体激素的 Emphipathic衍生物、以及多种药物和其他外来生物的重要途径。 14.分泌到胆汁中的胆汁酸盐与分泌的其他胆汁脂质、即磷脂酰胆碱 (卵磷脂)和胆固醇偶合。偶合有卵磷脂胆固醇的胆汁酸盐的排出给 肝胆固醇的消除提供了重要的途径。 15.胆汁酸盐与卵磷脂在胆汁中以混合微团和囊泡的形式溶解胆固 醇。胆汁中胆汁酸盐不足和所致的胆固醇溶解度下降可能在胆固醇性 胆结石的发病机理中起重要作用。 16.据信胆汁酸是调节胆固醇合成的因子。目前不能肯定胆汁酸是通 过直接作用于羟甲戊二酸单酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶调节胆固醇合 成、还是通过调节肠中胆固醇吸收而间接调节胆固醇合成。 17.据信肠肝循环中的胆汁酸盐通过抑制或脱抑制胆固醇7-羟化酶 来调节胆汁酸合成、该酶是胆汁酸生物合成路径中的速度限制酶。 18.胆汁酸可在肝脂蛋白受体(apo B.E.)的调节中起作用、并由此调 节肝脏摄取脂蛋白胆固醇的速度。 19.在肠中、混合微团形式的胆汁酸盐参与胆固醇、脂溶性维生素和 其他脂质的阀内Intraliminal溶解、转运和吸收。 20.胆汁酸盐可参与钙和铁从肠腔到刷状缘的转运。

最近关于天然胆汁酸作为辅料和/或载体的特征和生物功能的药 物递送研究已经集中在用作把药物递送到肠道和肝脏的新药物递送系 统的胆汁酸衍生物和类似物以及胆汁酸本身。这些系统利用活性运输 机制以通过口服给药或胆囊施用把目的药物分子递送到特定靶组织 中。因此、如果胆汁酸或胆汁酸衍生物能迅速且高效地被肝脏吸收、 并从而进行肠肝循环、则可预见到包括下述应用在内的许多潜在治疗 应用：改善有内在生物活性、但是吸收不佳的亲水性和疏水性药物的 口服吸收；将药物定向递送到肝脏位点、以自害病肝脏中带来高效治 疗浓度、并适用使体内其他部位的一般毒性反应减至最小；胆囊造影 剂和胆固醇性胆结石溶解促进剂的胆囊位点递送系统。例如、1985 年、Gordon & Moses博士等人证实了当与常见胆汁酸盐例如DCA、 UDCA、CDCA、CA、TUDCA、TCDCA等作为鼻用喷雾剂施用时、人体 鼻粘膜能吸收治疗有效量的的胰岛素、参见Moses、Alan C.等人 《Diabetes》vol.32(1983年11月)1040-1047；Gordon、G.S. 等人、 Proc.  Nat’1  Acad. Sci. USA、vol.82(1985年11月) 7419-7423。在他们的实验中、胆汁酸使血清胰岛素浓度显著提高、并 且血液葡萄糖浓度下降了大约50％。然而、该含有胆汁酸(盐)的革 命性鼻用喷雾溶液剂型不能作为辅剂得到进一步发展和商品化、这是 由于在7.4-7.8的pH水平下胆汁酸盐会沉淀以及胰岛素不稳定、该鼻 用喷雾容易必须在临用前即刻制备。此外、正如该公开文献所指出的 一样、乌索脱氧胆酸由于在7.4-7.8的pH水平下不溶解而不能用作辅 剂。

因此、胆汁酸盐和胰岛素表现为物理和化学不相容性。市售胰岛 素注射溶的pH为2.5-3.5(对于酸化剂型)和7.00-7.4(对于 中性剂型)。由传统技术制成的胆汁酸盐剂型未能克服这些pH水平的 胆汁盐沉淀和7.4以上时的胰岛素不稳定的问题。因此、目前在商业 上没有可使用的含有胆汁酸(盐)的任意胰岛素制剂。

肝素---最有效的抗凝剂被广泛用于血栓栓塞的治疗和预防当中。 然而、肝素治疗由于其仅能通过注射给药而通常局限在住院患者上。 已经尝试过的替代途径是肺内喷雾、栓剂、和灌肠剂。根据众多出版 物、为了促进穿过胃肠粘膜的肝素吸收、制剂应当是酸性制剂。根 据Ziv博士和Eldor博士等人、只有在含有胆酸钠或脱氧胆酸钠的溶 液中施用时肝素才能通过啮齿动物和灵长目动物直肠粘膜被吸收。 参见Ziy E.等人、《生化药物学》( Biochemical  Pharmacology)， vol.32，No.5，pp.773-776(1983)。然而肝素仅在酸性条件下稳 定。胆汁酸在酸性条件下溶解性特别不好。因此、由于它们的不配伍 性、目前没有含肝素的市售剂型。

涉及胆汁酸的药物递送系统可提供肝脏特异性药物靶向递送、这 是药物开发的重要方向、因为治疗肝病的标准药物学方法已经遭遇到 了下述问题：没有将活性剂充分递送到肝细胞内、及对其他器官的非 特异性毒性。例如、在肝脏纤维变性的治疗中、为了防止在肝外组织 中出现非特异性和不利的副作用、对于胶原合成抑制剂、药物的肝脏 特异性递送是必需的。此外、为了治疗胆汁系统的癌症、必须在肝脏 和胆汁系统中达到高药物水平、同时在肝外组织中希望药物浓度很低 以使对正常非肿瘤细胞的细胞抑制毒性作用降至最小。Kramer博士、 Wess博士等人证实、由药物与修饰的胆汁酸分子的共价键合所形成的 杂交分子杂交分子被肝脏和回肠中的Na依赖性胆汁酸摄取系统识 别。参见U.S.Patent No.5,641,767。即使如上所述胆汁盐及其衍 生物起着把药物特异性递送到肝脏中的穿梭子的作用、对于开发用作 载体的胆汁酸或胆汁酸盐衍生物也有很多风险、这是因为通过药物与 胆汁酸共价键合所形成的新胆汁酸或胆汁酸盐衍生物必须进行试验来 确定其药理学、毒性和临床有效性。因此、与开发新的胆汁酸衍生物 相比、开发其中药物可与胆汁酸或胆汁酸盐一起从肠中含有过量胆汁 酸的部位被吸收的制剂要容易得多和有价值得多、这是因为其需要较 少试验。

尽管基于胆汁酸的上述生物特征和功能、胆汁酸作为治疗活性剂 和载体和/或辅剂有着非常有价值得治疗活性和历史悠久的医药应用、 但是市售胆汁酸给药制剂局限在含有在片剂、胶囊和悬浮液中的固体 形式胆汁酸得药物制剂上、这是因为在大约1-8的pH下胆汁酸不溶于 含水介质、并且其具有非常苦的味道和持续数小时的同样苦的余味。 乌索脱氧胆酸、鹅脱氧胆酸和石胆酸几乎不溶于水；脱氧胆酸和胆酸 的溶解度分别为0.24g/L和0.2g/L。牛磺乌索脱氧胆酸、牛磺鹅 脱氧胆酸和牛磺胆酸不溶于盐酸。由于pH控制和维持问题、可使用的 为数不多的几种剂型是不稳定的。此外、如《欧洲临床观察杂志》 (European Journal of Clinical Investigation)(1985)15、 171-178所述、据表明有一些市售胆汁酸剂型具有不充分的生物利用 度。胆汁酸、尤其是乌索脱氧胆酸在禁食个体的胃-十二指肠空肠内含 物中的溶解度不佳。回收到21％-50％固体形式的吞咽剂量、这是由 于固体乌索脱氧胆酸在胃肠道中非常缓慢的溶解过程具有不可预知的 变异所致。胆汁酸、尤其是乌索脱氧胆酸、脱氧胆酸、鹅脱氧胆酸、 胆酸、猪脱氧胆酸、7-酮基石胆酸、牛磺乌索脱氧胆酸、和牛磺鹅脱 氧胆酸等特别不溶于胃液和盐酸。然而、随着肠中pH的增加、胆汁酸 的溶解度非常缓慢且不完全地增加、最终胆汁酸在8-9.5的pH下变 得可溶。

为了克服由于胆汁酸的不完全和缓慢溶解所致的在肠中缓慢以及 无效的吸收、已经制备了多种新开发的药物制剂、例如含有通常呈强 碱性的水溶性固体胆汁酸得延迟释放剂型。这些新开发的药物剂型是 肠溶-耐胃的。这些肠溶-耐胃剂型在胃中胃液内保持完整、但是当它 们到达小肠后立即在有限时间内在靶定区域释放出制剂得强碱性固体 胆汁酸盐。

如U.S.Patent No.5,380,533、这些剂型当然表现出比目前市 售剂型要好的生物利用度。然而、制备可以通过在有限的时间内在预 定区域崩解、溶解和扩散来释放治疗活性组分的精确延迟释放剂型极 端困难和非常昂贵。根据U.S.Patent No.5,302,398、胆汁酸、特 别是乌索脱氧胆酸的耐胃-肠溶剂型在人体中的吸收试验表明、与在目 前市售的剂型中施用相同剂量相比、其吸收提高了大约40％。与市售 制剂相比、其最大血液浓度平均提高了3倍、并且更快地到达了最大 血液浓度。施用给患者后、任何胆汁酸剂型都必须能以已知和不变的 方式释放胆汁酸。释放的速度和程度都很重要、并且应当可以再现。 理想的情况是、释放程度应当达到100％、同时释放速度应当反映出所 期望的剂型特性。

与配制成片剂、胶囊剂、或悬浮剂的相同药物相比、药物的溶液 剂型表现出显著改善的吸收速度和程度、这是众所周知的事实。这是 因为溶液剂型是两种或更多种物质的化学和物理同质溶液。此外、可 在任意pH条件下保持溶液体系不被破坏的特定设计的溶液剂型易于 在预定区域扩散以立即和完全吸收、而片剂、胶囊剂或延迟释放制剂 始终必须在有限时间内在预定区域经受崩解、溶解和扩散。由于具有 同pH有关的不稳定性的延迟释放或即释剂型是通过崩解、溶解和扩散 进行释放、胆汁酸的释放速度和程度有不可预知的变异、这导致其吸 收缓慢和低生物利用率。

胃的内腔表面覆以厚层保护粘膜。该胶性粘膜从腔室到上膜保持一 定的pH梯度、并被认为对细胞保护作用由一定的贡献。H.pylori感 染出现在粘液内胃粘膜内腔表面、上皮、及胃Pints上。细菌性酵素 被认为降解糖蛋白网并将聚合物分解为单体(小单元)、从而粘液不 再以胶粘状存在。此外、随着粘蛋白产生的减少、粘膜会变得容易受 酸的腐蚀作用。这种状态会导致胃炎和消化性溃疡。

铋化合物在胃-十二指肠障碍的治疗方面、特别是在消灭被认为与 病因有关的Helicobacterpylor细菌方面越来越受到人们的关注。 已经使用过多种铋的口服制剂。不同的制剂在临床效能和药物动力学 方面表现出不同。所使用的无机盐有次硝酸盐、次碳酸盐、次没食子 盐、酒石酸盐、枸橼酸盐、和亚柳酸(水杨酸)盐。市售制剂一般不 需要医师的处方便可买到、并常常另外含有铋盐。市售制剂在胃和十 二指肠溃疡症的治疗中均取得了成功。这些制剂被证实胃和十二指肠 溃疡症的治疗中具有同组胺H2拮抗剂相当的效能、并在停止治疗后表 现出较低的复发率。用铋制剂最初治疗后的较低的复发率是基于其H. pylori的消灭和与对这种有机体感染相关的胃十二指肠疾病的缓解 能力。如果并用如胆汁酸的抗生素或杀菌剂(局部递送)、对H.pylori 的长期消灭会有更好的效果。

多种抗生素和杀菌剂在体外对H.pylori具有很好的活性。然 而、在临床研究中作为单一用剂使用时在消灭这种有机体方面没有得 到成功。治疗失败和复发是共同的特点。体外和临床研究结果的这种 不一致性的理由没有得到纠明。其可能的原因是化合物透过胃粘液不 良、在酸性pH条件下被破坏、在酸性介质下中不溶性、及这些因素的 复合作用结果。结果、为了消灭H.pylori、每天需要大剂量的抗菌 剂。这种治疗过程的效能、随着伴随痢疾、恶性、作呕、和肠内正常 细菌丛的破坏等反作用、由于患者没有遵随而受到了 阻碍。

不完全消灭的另外一个原因可能是抗生剂在胃中的停留时间过于 短、致使不能在H.pylori所存在的胃粘膜层或上皮细胞表面达到有 效的抗菌浓度。因此消灭h.pylori可通过改善抗生剂的递送以增 进局部活性并通过改善吸收以增进系统活性来达到。但尚无有关利用 可以延长在胃中的滞留时间以增进局部活性并具有在胃肠道内的高吸 收率的剂型的体内消灭的试验报告。至今最好的结果是结合具有局部 活性的非吸收剂、胶态铋化合物、具有系统活性的良好的吸收剂、阿 莫西林(Van Caekemberghe and Breyssens、1987、Antimicrobial Agent and Chemotherapy、pp 1429-1430)所得。不过显然其对H. pylori感染的治疗仍然不是最佳的。

除了杀菌作用之外、一些铋化合物对H.pylori的粘膜破坏致病 机转具有深度的作用。铋化合物是有力的非特异性酵素以至剂。通过 体外研究得知、这些化合物可以抑制细菌性酵素、包括脂酶、蛋白酶、 及由H.pylori合成的配糖(G1ycosidases)。看来对细菌酶的抑 制和保持原有的粘弹性膜是与H.pylori相关胃炎和消化性溃疡治 疗有关的。

铋化合物将阻断H.pylori附于上皮细胞。口服这些化合物后稍 后、这些有机体处在胃粘液内部、而非粘液的下面。看来这是由于其 没有粘附于胃上皮细胞的上膜所致。可以看到电子稠密的铋是沉积于 细菌性细胞的表面和内部。不幸的是、由于食物的稀释作用、市售片 剂在pH＜1.1下长时间崩解、及在酸性介质中由于不溶解导致的沉淀、 粘液内铋的浓度常常低于H.pylori的平均抑制浓度。另外由于暴露 于铋化合物的生长抑制浓度的H.pylori可以在几小时内保持生存、 因此铋被排除后H.pylori还将恢复继续生长。

胆汁中的抑制因子在为除去沉淀的甘氨酸结合胆汁酸进行的离心 分离和接下来的酸化中显著减少、并通过使用分离剂---消胆胺 (Cholestyramine)完全被消除。这些结果同十二指肠球部的酸性 环境使抑制性胆酸(或其他抑制性物质)沉淀以使H.pylori可在另 外的友好的环境中生长的看法是一致的。D.Y.Graham(Osato et al.、 1999、Digestive Diseases and Sciences 44(3)：462-464)的逆流 性胃炎相关观察、也许可以引延伸到理解酸的分泌和十二指肠溃疡之 间的关系。患有与高胃酸分泌、快速胃排空、和酸的局部生成有关的 十二指肠溃疡患者的十二指肠球内的低pH不仅会促进胃组织化生还 会使有害的甘氨酸结合胆汁酸沉淀、以允许H.pylori的兴旺增殖。

                     发明简述

本发明是关于组合物、其中包含(1)胆汁酸、其衍生物、其盐、 或其与胺的共轭物、(2)水、及(3)足够量的水溶性淀粉转化产物、其 中胆汁酸和淀粉转化产物在所选pH范围内任意pH值下都保持在溶液 中。

本发明是进一步关于组合物、其中包含(1)胆汁酸、其衍生物、其 盐、或其与胺的共轭物、(2)水、(3)及充足量的非淀粉多糖类、其中 胆汁酸和多糖类在所选pH范围内任意pH值下都保持在溶液中。

本发明是进一步关于组合物、其中包含：(1)胆汁酸、其盐、或其 与胺的共轭物、(2)水、(3)制药适当量的制药化合物、和(4)充分 量的水溶性淀粉转化产物或水溶性非淀粉多糖类、其胆汁酸、制药化 合物、和碳水化合物在所选pH范围内的任何pH下均保持在溶液中。

本发明是进一步关于胆汁酸组合物的溶液剂型。这些溶液的优点包 括改善胆汁酸的生物利用率和吸收率。其另外的优点包括改善制药化 合物的生物利用性和吸收性。

本发明一些实施例中提供一种组合物、其中包含：(1)胆汁酸、其 衍生物、其盐、或其与胺的共轭物、(2)水、和(3)充分量的碳水化 合物、其胆汁酸成分和碳水化合物在所选pH范围内的任何pH下均保 持在溶液中、其中碳水化合物是水溶性淀粉转化产物和水溶性非淀粉 多糖类的组合。在可溶性非淀粉多糖类和高分子量淀粉转化产物两种 都包含的实施例中、当一起被组合于组合物时其各自的量应足以使胆 汁酸组分、高分子量淀粉转化产物、可溶性非淀粉多糖类、和制药化 合物(如果有)保持在所选pH范围内的任何pH下。

本发明一些实施例中提供一种结合性治疗组合物、这种组合物可 以增强对药物的反应和效能强度。这种组合物允许使用较少的制药化 合物、在不同的部位攻击综合症、对消除病症有影响、并/或改变制药 化合物的吸收。这样的组合物可以导致或贡献药物减少毒性和/或副作 用。

本发明是进一步关于一种组合物、其中包含(1)胆汁酸、其盐、 或其与胺的共轭物、(2)水、(3)水溶性铋化合物、和(4)充分量的 水溶性淀粉转化产物或水溶性非淀粉多糖类、其中胆汁酸、铋、和碳 水化合物在所选pH范围内的任何pH下均保持在溶液中。

本发明是进一步关于包含本发明组合物施用的、对人和动物的治疗 和预防方法。

                图示简要说明

图1：血清图-根据实施例II和VI和表4剂型投入制剂后UDCA (四角形)和GUDCA(三角形)血清浓度-时间曲线。

图2：根据实施例III和VI和表4胆汁酸剂型投入制剂后UDCA的 血清浓度-时间曲线。

图3：根据实施例IX制备的不含铋UDCA液体口服剂型给药后第I 组的人体药物动力学参数平均值(n＝5)图示

图4：根据实施例IX制备的UDCA液体口服剂型给药后第II组的 人体药物动力学参数平均值(n＝5)图示

图5A.哥伦比亚培养基培养的H.pylori的投射电子显微镜照片

图5B.使用根据实施例IX制备的UDCA和枸橼酸铋处理48小时 后H.pylori的投射电子显微镜照片

图5C.UDCA和枸橼酸铋处理72小时后H.pylori的投射电子显 微镜照片

图6：根据实施例III制备的UDCA液体剂型的NMR(核磁共振法) 数据、无防腐剂、调味剂、和甜味剂

图7：根据实施例III制备的UDCA液体剂型的HPLC液相色谱、 无防腐剂、调味剂、和甜味剂

图8：标准UDCA的HPLC液相色谱

图9：H.pylori培养法

图10：H.pylori培养法

图11：H.pylori培养法

                       发明详述

本发明是关于水溶液、其中包含(1)一种或更多种可溶性胆汁酸、 水溶性胆汁酸衍生物、胆汁酸盐、或与胺共轭的胆汁酸(统称″胆汁 酸”)、(2)水、及(3)一种或更多种水溶性淀粉转化产物或水溶性非 淀粉多糖类、其量足以形成在预期pH范围内任意pH值下都不产生沉 淀的溶液。在本发明的实施方案中、优先胆汁酸和糖类在pH值约1-10 的范围内不形成沉淀、更优选其在pH值约1-14的范围内不形成沉淀、 最优先其在含水系统所能达到的所有pH值下不形成沉淀。在本发明的 一些实施方案中、胆汁酸在酸性条件下以游离胆汁酸形式保持溶解、 虽然胆汁酸在酸性条件下通常不溶。在本发明的一些实施方案中、本 发明组合物可以用作药物制剂、该药物制剂在口、胃和肠中的通畅pH 水平下保持溶解。本发明组合物可包含自身具有药理作用的胆汁酸或 其盐。本发明制剂可在预期pH范围内溶于本发明组合物的药物的载 体、辅剂或溶解促进剂的作用。在本发明的一些实施方案中、使用一 种非胆汁酸药物、但不是以溶液的形式。

本发明的优点是、在从酸性到碱性的任意pH环境下胆汁酸及其糖 类保持溶解而不形成沉淀。这些水溶液系统不产生任何沉淀或颗粒。 本发明的进一步的优点是、该水溶液系统在加入强酸或强碱并在50° C的加速储存条件下在物理外观例如透明度、颜色或气味方面没有表 现出任何变化。

在本发明的一些实施方案中、可以通过口服胆汁酸水溶液体系通 过胃肠道到达肠内、同时胆汁酸没有因为暴露于酸性胃液和肠的碱性 汁液中而作为固体沉淀出来。被证实在肠中保持完整溶液体系的这些 溶解的胆汁酸制剂可有效且完全地被吸收、并从而进入肠肝循环。根 据本发明、胆汁酸溶解度不会由于一些胆汁酸的侧链羧酸是否可被质 子化(非电离)、离子化或者是单纯的羧酸而受到影响(如沉淀和物 理外观)。

胆汁酸侧链羧酸的电离化状态大大影响这些水溶液体系中的胆汁 酸的疏水性和亲水性。在本发明的一些实施方案中、这种离子化状态 可通过调节pH值而调整、以控制胆汁酸的毒性、吸收、和两亲性。一 种或更多的胆汁酸可以被溶解于这种水溶液体系中、可作为治疗活性 剂、药物辅剂、药物载体、或药物溶解促进剂。这些水溶液体系可制 成口服制剂、灌肠剂、洗口剂、含漱剂、鼻用制剂、耳用制剂、注射 剂、灌洗剂、局部皮肤用制剂、其他局部用制剂、和美容剂、这些制 剂具有所需pH、并没有长时间后发生沉淀或物理外观发生改变的缺点。

可溶性胆汁酸是任何类型的水溶性胆汁酸。胆汁酸盐是胆汁酸的 任何水溶性盐。本发明可溶性胆汁酸衍生物是与相应的未衍生胆汁酸 相比溶解性相同或更大的胆汁酸衍生物。胆汁酸衍生物包括但不限于 在胆汁酸羟基和羧基上用其他官能团(包括但不限于卤素和氨基)形 成的衍生物。水溶性胆汁酸盐可通过上述胆汁酸与胺反应来制得、所 述胺包括但不限于脂族游离胺例如Trientine、二亚乙基三胺、四亚 乙基五胺、和碱性氨基酸例如精氨酸、赖氨酸、乌氨酸、和氨基糖例 如D-葡糖胺、N-烷基葡糖胺、和季铵衍生物如胆碱、杂环胺例如哌嗪、 N-烷基哌嗪、哌啶、N-烷基哌啶、吗啉、N-烷基吗啉、吡咯烷、三乙 醇胺、和三甲醇胺。依据本发明、胆汁酸的水溶性金属盐、胆汁酸和 环糊精及其衍生物之间的包结物、和水溶性O-磺化胆汁酸也属于水溶 性胆汁酸盐。  水溶性胆汁酸可以包括与盐酸、乙酸、氨、或精氨酸之 一结合的游离胆汁酸形式的含水制剂。

使用于本发明的胆汁酸包括但不限于：乌索脱氧胆酸、鹅脱氧胆 酸、胆酸、猪脱氧胆酸、脱氧胆酸、7-氧代石胆酸、石胆酸、碘脱氧 胆酸、碘胆酸、牛磺乌索脱氧胆酸、牛磺鹅脱氧胆酸、牛磺脱氧胆酸、 牛磺石胆酸、葡萄糖乌索脱氧胆酸、牛磺胆酸、甘氨胆酸、它们在甾 核上的羟基或羧酸基上的衍生物。

本发明实施例的主要优点是通过递送胆汁酸溶液、以得到比现有制 剂更高的体内胆汁酸水平。因此胆汁酸的治疗效能会比现有的剂型更 充分地达到。从前的剂型中胆汁酸的溶解不完全、因此只能得到较低 的体内胆汁酸水平、并需要比较多的胆汁酸。不过在本发明中、胆汁 酸可被完全地溶解、因此即使使用较少的施用剂量也能达到较高的体 内胆汁酸水平。

在本发明的一些实施例中、多数胆汁酸是以单一剂型使用的。疏水 活性度不同的两种或更多种胆汁酸的混合物如同具有中间疏水活性度 的单一胆汁酸一样作用。结果、具有不同疏水活性度的胆汁酸混合物 的洗净特性和毒性常常处于个组分的中间水平。

适合使用于本发明的碳水化合物包括水溶性淀粉转化产物和水溶 性非淀粉多糖类。对于本发明、水溶性淀粉转化产物的定义如下： 1.它们可在多种pH下通过淀粉的部分或不完全的加水分解得到。 2.其例子包含但不限于如下所列：麦芽糖糊精、糊精、液体葡萄糖、 玉米糖浆固体物(液体葡萄糖干粉)、可溶性淀粉、其中优选麦芽糖糊 精或玉米糖浆固体物、最优选玉米糖浆固体物。特别优选的有 MALTRINM200玉米糖浆固体物、和MALTRINM700麦芽糖糊精、 这两种都由美国艾奥瓦的GPC、Grain Processing Corporation of Muscatine生产。在本发明中、所谓“玉米糖浆”包括玉米糖浆和液 体葡萄糖。 3.如果是聚合的、聚合物至少应该有一个还原端和一个非还原端。 聚合物可以是线性的或有分支的。 4.分子量在约100mass到106mass以上。高分子量水溶性淀粉 转化产物是指具有105以上的分子量。

在本发明中、水溶性非淀粉多糖类的定义如下： 1.它们可以在多种pH条件下通过多种加水分解或合成机理得到。 2.其例子包括但不限于葡聚糖、瓜尔豆胶、果胶、非消化性可溶 性纤维。 3.如果是聚合的、聚合物至少应该有一个还原端和一个非还原端。 聚合物可以是线性的或有分支的。 4.分子量在约100mass到106mass以上、优选的分子量是105 mass以上。

高分子量水溶性淀粉转化产物和/或水溶性非淀粉多糖类在本发 明中的用量至少是所选胆汁酸盐在预期pH范围内已所需浓度溶解而 需要的量。在本发明的实施方案中、作为一种防止胆汁酸从本发明水 溶液剂型中沉淀出来的麦芽糖糊精的最小需用量优选为、在100mL水 中每0.2g乌索脱氧胆酸是大约5g、每1g乌索脱氧胆酸是大约25g、 每2g乌索脱氧胆酸是大约50g。在本发明的实施方案中、麦芽糖 糊精的最小需用量优选为、每200mg鹅脱氧胆酸大约是30g、每 200mg7-酮基石胆酸大约是12g、每200mg胆酸大约是10g、及每 200mg脱氧胆酸大约是50g。在本发明的实施方案中、作为一种防 止胆汁酸从本发明水溶液剂型中沉淀出来的液体葡萄糖(市售玉米糖 浆)的最小需用量优选为、在100mL水中每500mg乌索脱氧胆酸是大 约80g；在200mL水中每500mg乌索脱氧胆酸是大约80g。在本发 明的实施方案中、作为一种防止胆汁酸从本发明水溶液剂型中沉淀出 来的液体葡萄糖(市售玉米糖浆、如MALTRINM200)干粉的最小需 用量优选为、在100mL水中每500mg乌索脱氧胆酸是大约30g；在 200mL水中每500mg乌索脱氧胆酸是大约30g。在本发明的实施方案 中、作为一种防止胆汁酸从本发明水溶液剂型中沉淀出来的非淀粉多 糖类(如果胶、瓜尔豆胶、阿拉伯胶)的最小需用量优选为、在100mL 水中每500mg乌索脱氧胆酸是大约50g瓜尔豆胶、在100mL水中每 500mg乌索脱氧胆酸是大约80g果胶。高分子量水溶性淀粉转化产物 或水溶性非淀粉多糖类的最小需用量主要取决于在制剂溶液中的胆汁 酸绝对量而不是浓度。

在本方案的一些实施方案的制剂可包含环糊精。

在本方案的一些实施方案的制剂还可包含膳食纤维。膳食纤维的 例子如下、但不局限于此：瓜尔豆胶、果胶、洋车前子、燕麦胶、大 豆纤维、燕麦麸、玉米糠、纤维素、和小麦麸。

在本方案的一些实施方案的制剂还可包含乳化剂。出于本发明 的目的、术语″乳化剂”包含乳化剂和悬浮剂的意思。乳化剂的例子如 下所示、但不局限于此：瓜尔豆胶、果胶、阿拉伯胶、卡拉胶、羧 甲基纤维素钠、羟甲基纤维素、羟丙基纤维素、甲基纤维素、聚乙烯 醇、聚维酮、黄蓍胶、黄原胶、及山梨醇酯。

依据给药方法、其中制剂不沉淀出其胆汁酸、淀粉转化产物、水 溶性非淀粉糖类、或其制药化合物的所选pH范围可以是含水体系可以 达到的任意pH范围、优选大约pH1-pH14、更优选大约pH1-pH10、更 优选足以使药物制剂从制备到施用再到被身体吸收期间保持溶液状态 的含水体系可达pH范围的任何子集。

本发明在考察广泛的制药化合物的使用。其包括但不限于如下例 子：激素、激素拮抗剂、止痛剂、解热剂、抗炎药物、免疫增强药 物、抗肿瘤(癌)药物、抗生素、抗炎制剂、仿交感神经作用药、抗 感染药物、抗肿瘤剂、和麻醉剂。进一步包括但不限于如下例子：靶 定且作用于胃肠道、肝、心血管系统、和呼吸系统。进一步包括但不 限于如下制药化合物的例子：胰岛素、肝素、降钙素、氨苄西林、 奥曲肽、昔多芬、骨化三醇、双氢速变固醇、阿扑吗啡、育亨宾、氯 哌三唑酮、阿昔洛韦、金刚烷胺、金刚乙胺、西多福韦、甲黄酸 地拉维定、双脱氧肌苷、泛昔洛韦、forscarnet sodium，氟尿嘧 啶、更昔洛韦钠、碘苷、干扰素、拉咪夫定、奈韦拉平、喷昔 洛韦、利巴韦林、司他夫定、三氟尿苷、盐酸伐昔洛韦、扎西他滨、 齐多夫定、硫酸英地那韦、利托那韦、甲磺酸奈非那韦、甲磺酸沙奎 那韦、d-青霉胺、氯喹、羟基氯喹、金硫葡糖、金硫丁二钠、左旋唑 咪金诺芬、DTC(双乙基双硫氨基甲酸酯)、异丙肌苷、甲基肌苷 单磷酸盐、胞壁酰二肽、二氮嗪、盐酸胼屈嗪、米诺克定、双嘧达莫、 盐酸苯氧丙酚胺、烟酸、烟酸苄丙酚胺、酚妥拉明、甲磺酸多沙唑嗪、 盐酸哌唑嗪、terazocin·HCl、盐酸可乐定、硝苯地平、吗多明、胺碘 酮、乙酰水杨酸、维拉帕夫、地尔硫、尼索地平、伊拉地平、苄普地 尔、硝酸异山梨酯、pentaerythrytol·tetranitrate、硝酸甘油、西 咪替丁、法莫替丁、尼扎替丁、雷尼替丁、兰索拉唑、奥美拉唑、米 索前列醇、硫糖铝、盐酸甲氧氯普胺、红霉素、铋化合物、前列地尔、 沙丁胺醇、吡布特里、硫酸特布它林、脉舒妥、氨茶碱、二羟丙茶碱、 ephedrine、乙基去甲肾上腺素、乙基异丙肾上腺素、异丙肾上腺素、 间羟异丙肾上腺素、n·docromil、oxy triphylline、茶碱、二甲苯 苄醇、菲诺特罗、布地奈德、氟尼缩松、倍氯美松双丙酸酯、氯替卡 松丙酸酯、可待因、硫酸可待因、磷酸可待因、氢溴酸右美沙芬、曲 安奈德、前列腺素钠、孟鲁司特钠、扎鲁司特、齐鲁通、色甘酸钠、 异丙托溴铵、苯甲酸奈多罗米钠、盐酸苯海拉明、酒石酸氢可酮、盐 酸美沙酮、

硫酸吗啡、乙酰半胱氨酸、愈创甘油醚、碳酸铵、氯化铵、酒石 酸锑钾、甘油、水合萜品、colfosceril palmitate，阿托伐他汀钙、 西立伐他汀钠、氟伐他汀钠、洛伐他汀钠、普洛伐他汀钠、和辛伐他 汀、picrorrhazia kurrva，穿心莲内酯、辣木、albizzia lebeck， 鸭嘴花、姜黄、苦瓜、吉米尼玛、阿珍榄仁、印度苦楝、tinosporia cordifolia，甲硝唑、两性霉素B、克霉唑、氟康唑、碘氯苯快醚、 酮康唑、灰黄霉素、依曲康唑、terbinafin·HCl，硝酸益康唑、咪康 唑、制霉菌素、硝酸奥昔康唑、硝酸硫康唑、盐酸西替列嗪、地塞米 松、氢化可的松、泼尼松龙、可的松、儿茶素及其衍生物、甘草甜素、 甘草酸、倍地米松、ludrocortisone·acetate，氟尼缩松、氟替 卡松丙酸酯、甲基波尼松龙、生长抑素、立速普、生糖素、胰岛素原、 不溶性胰岛素、阿卡波糖、氯磺丙脲、格列吡嗪、格列本脲、盐酸二 甲双胍、瑞格列奈、甲磺丁脲、氨基酸、秋水仙碱、苯磺唑酮、别嘌 醇、吡罗昔康、托美汀钠、吲哚美辛、布洛芬、二氟尼柳、甲灭酸、 萘普生、和曲恩汀。

可包含在本发明制剂中的另外的制药化合物是当加到该制剂时保 持可溶解的任何化合物。当制剂中有另外的制药化合物时，溶液中的 胆汁酸可起一些治疗活性剂的辅剂、载体、或溶解促进剂的作用，所 述治疗活性剂包括但不限于胰岛素(pH7.4-7.8)，肝素(pH5-7.5)， 降钙素、氨苄西林、金刚烷胺、金刚乙胺、西地那非、硫酸新霉素 (pH5-7.5)、阿朴吗啡、育亨宾、氯哌三唑酮、利巴韦林、紫杉醇及 其衍生物、维生素A、和维A酸，这些在酸和/或碱中是可溶的且稳定 的，并且可依需要加到本发明的某些浓度胆汁酸的水溶液剂型中。一 些治疗活性剂，包括但不限于盐酸二甲双胍(pH5-7)、盐酸雷尼替丁、 西咪替丁、拉咪夫定、盐酸西地利嗪(pH4-5)、金刚烷胺、金刚乙 胺、西地那非、阿朴吗啡、育亨宾、氯哌三唑酮、利巴韦林和地塞米 松、氢化可的松、泼尼松龙、去炎松、可的松、烟酸、牛磺酸、维生 素、天然存在的氨基酸、和儿茶素及其衍生物、甘草提取物及其主要 组份如甘草甜素和甘草酸、水溶性铋化合物(如酒石酸铋钠)、并且 可按需要加到含有乌索脱氧胆酸的本发明水溶液制剂中。

根据本发明、铋化合物包含一种铋离子和螯和剂之间的水溶性反 应产物。这种螯和剂的离子包括但不限于：枸橼酸、酒石酸、苹果酸、 乳酸、Eidetic Acid和碱。铋化合物的例子包括但不限于：铋螯和体 的铵盐、枸橼酸铋、没食子酸盐、硫酸铋、次硝酸铋、亚水杨酸铋、 Tripotassium dicitrato bismuthate、和酒石酸铋纳。

本发明在考察使用pH调节剂。其例子包括但不限于如下所列： HCl、H2SO4、HNO3、CH3COOH、枸橼酸、苹果酸、酒石酸、乳酸、磷 酸、Eidetic Acid和碱。

在本发明的一些实施例中、其制剂可用于治疗人和哺乳动物的疾 病。本发明在考察胃肠疾病、肝病、胆结石、和高脂血症的治疗。肝 病的例子包括但不限于如下所列：酒精性肝病和非酒精性肝病。胃肠 障碍的例子包括但不限于慢性胃炎、逆流性胃炎、和消化性溃疡症。 非酒精性肝病的例子包括但不限于原发性胆汁性肝硬变、慢性活动性 肝炎、原发性胆汁滞留性肝硬化、脂肪肝。本发明在进一步考察病 毒性、细菌性、和真菌性疾病。在本发明的一些实施例中、为了治疗 Helicobacter pylori感染和/或消灭、使用一种制剂。在本发明的 一些实施例中、为了治疗和/或消灭C型肝炎病毒感染、流行性感冒A、 流行性感冒C、副流行性感冒1、仙台、德国麻疹、和假性狂犬病病毒 使用一种制剂。在本发明的一些实施例中、为了治疗急性或慢性炎症 使用一种制剂。炎症的例子包括但不限于支气管炎、慢性咽头炎、慢 性扁桃腺炎。在本发明的一些实施例中、为了治疗高胆甾醇血使用一 种制剂。

在本发明的一些实施例中、制剂剂型将变形为液体、固体、粉末、 或片剂。在本发明的一些实施例中、剂型包含糖浆、浓糖浆、糊状。 糖浆的例子包括但不限于麦芽糖糊精溶液、其中麦芽糖糊精的浓度小 于1.0kg/L。浓糖浆的例子包括但不限于麦芽糖糊精溶液、其中麦 芽糖糊精的浓度在1.0kg/L-1.2kg/L之间。糊状的例子包括但 不限于麦芽糖糊精溶液、其中麦芽糖糊精的浓度大于1.2kg/L。

                    实施例

通过测定在不同pH和温度水平下包含可溶性胆汁酸、高分子量水 溶性淀粉转化产物、和水的制剂中相关胆汁酸的浓度时间变化来评价 本发明制剂的稳定性。根据需要可调整各胆汁酸的保持时间、以允许 对综合实施例即具有多胆汁酸的实施例中对个别胆汁酸进行分析。

用三种不同水溶液体系进行稳定性测试：

1.依据实施例I、将胆汁酸和高分子水溶性淀粉转化产物混合 在水溶液中、结果如表1A和1B。

2.依据实施例II、将混合的胆汁酸与高分子水溶性淀粉转化产 品混合在水溶液中、结果如表2。

3.依据实施例IV、将胆汁酸、高分子水溶性淀粉转化产物和 支链氨基酸(例如亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、或其他具有支侧链的 氨基酸)混合在水溶液中、结果如表3A-3F。

这些稳定性测试是用HPLC和光学显微镜在不同pH下于正常和加 速条件下进行的。制药化合物测试的加速条件已在(Remington、 The Science and Practice of Pharmacy、19th ed.、p.640)中 有叙述。所有这些稳定性测试结果都令人满意、因为通过HPLC测定的 胆汁酸浓度在不同pH水平下随着时间没有发生明显改变。因此这些 实施例制剂适于制备市售液体剂型。特别是含有胆汁酸的所有溶液制 剂在稳定性测试中都表现出优良的结果、在测试期间没有产生沉淀和 任何物理外观变化。有些制剂在两年的期间内都保持稳定。

此外、溶液稳定性测试是用水溶液剂型进行的、依据实施例IV、 所述水溶液剂型包含水溶性UDCA、支链氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸、 缬氨酸)和麦芽糖糊精的混合物、在所述溶液剂型的典型实施例IV中、 作为治疗活性剂、辅剂或载体、药物活性剂、或溶解促进剂的胆汁酸 与高分子水溶性淀粉转化产物或可溶性非淀粉多糖类是溶解在溶液剂 型中。根据测试结果、没有任何变色、透明度改变、及沉淀。此外、 在不同的pH下例如在Ph1、3、5、7、9和10于加速条件下或者在(50℃) 保温时、通过PHLC进行测定、结果没有检测到任何由于UDCA或支链 氨基酸变质所生成的杂质。

尽管加入了在盐酸溶液中是稳定并且溶解的治疗和化学活性剂、本 发明水溶液剂型在不同pH条件下于加速条件下仍然没有发生物理或 化学上的改变。因此、对于治疗活性胆汁酸制剂、和/或其中胆汁酸起 药物辅剂、药物载体、或药物溶解促进剂(通过形成胶束)作用的药 物(制药化合物)递送制剂来说、这些水溶性体系在不同pH条件下是 非常有价值的药物剂型、没有稳定性问题发生、包括在酸性条件下的 沉淀。

在溶液稳定性测试中、对于每种胆汁酸、都是在下述条件下用HPLC 测定相关可溶性胆汁酸的浓度：比例为55∶45的0.02M KH2PO4∶乙腈 洗脱溶剂、pH为3.01、流速为0.8mL/分钟、注射体积为20μL、检 测波长为195nm。在表中、3个编号试验中每一试验的胆汁酸盐浓度 及其平均值记录于每行中。百分比是指放置一定时间后与最初浓度相 比所得的胆汁酸盐相对浓度。

                       实施例I

按如下原则制备的溶液剂型经测试在任何测试pH下没有发生任 何沉淀。

可溶性胆汁酸                 200mg(游离酸) 最小量的麦芽糖糊精        对于CDCA：约30g； 对于UDCA：约5g； 对于7-酮基石胆酸：约12g； 对于胆酸：约10g； 对于脱氧胆酸：约50g； 对于猪脱氧胆酸：约3.5g   净化水       100mL

制备溶液有上述一种胆汁酸的100mL水溶液。在室温、搅拌下将 麦芽糖糊精---一种高分子量水溶性淀粉转化产物---加到所得澄清溶 液中。加入净化水将体积调整到100mL。根据随时的开发和所有实施 例、净化水为去离子水、去离子蒸馏水、或一般药物制备等级的水。

根据这些配方、制得了含有不同浓度的某些胆汁酸(或盐)和其 相应最小或更大量的高分子量水溶性淀粉转化产物(例如麦芽糖糊精、 液体葡萄糖、液体葡萄糖干粉(市售固体玉米糖浆)、葡聚糖、糊精、 和可溶性淀粉)或可溶性非淀粉多糖类(例如瓜尔豆胶、果胶、阿拉 伯胶)的水溶液剂型。

                      实施例II

按如下原则制备下述溶液剂型、它们在任意pH下没有发生任何沉 淀。

可溶性胆酸  200mg(游离酸)、

可溶性7-酮基石胆酸  200mg(游离酸)、

可溶性鹅脱氧胆酸  200mg(游离酸)、

最小量的麦芽糖糊精40g、及

净化水        100mL

制备溶解有可溶性胆酸、7-酮基石胆酸、可溶性鹅脱氧胆酸的60 mL水溶液。在室温、搅拌下将麦芽糖糊精加到所得澄清水溶液中。加 净化水将体积调整为100mL。

使用该制剂、进行可控制亲水性和疏水性控制的不同胆汁酸混合 物水溶液的稳定性测试。

表1A显示、根据实施例I制备的麦芽糖糊精溶液中CA、7-酮基 石胆酸、CDCA、及DCA制剂在pH7、50℃温度下稳定性随时间变化的 测试结果。胆汁酸的浓度用HPLC测定、其对0天的初始浓度的百分 率在标有百分率的柱上显示。

表1B显示、根据实施例I制备的麦芽糖糊精溶液中CA、7-酮基 石胆酸、CDCA、及DCA制剂在pH10、50℃温度下稳定性随时间变化的 测试结果。

表2显示、根据实施例II制备的麦芽糖糊精溶液中CA、7-酮基 石胆酸、CDCA、及DCA制剂在pH1、50℃温度下稳定性随时间变化的 测试结果。 表1A     天       #1       #2     #3   平均    百分比     0     0.529     0.530   0.522   0.527     100.0     4     0.460     0.524   0.524   0.502     95.4     7     0.520     0.525   0.547   0.531     100.8     20     0.516     0.576   0.535   0.542     103.0 CA   天数     #1     #2     #3   平均  百分比     0   0.888   0.879   0.874   0.880   100.0     4   0.871   0.887   0.888   0.882   100.2     7   0.897   0.893   0.888   0.893   101.4     20   0.893   0.909   0.894   0.899   102.1 KLCA     天     #1     #2     #3   平均   百分比     0   0.572   0.539   0.530   0.547   100.0     4   0.540   0.552   0.576   0.556   101.6     7   0.581   0.588   0.553   0.574   105.0     20   0.565   0.608   0.560   0.578   105.7 CDCA    天     #1     #2     #3   平均   百分比     0   0.499   0.491   0.489   0.493   100.0     4   0.501   0.500   0.474   0.491   99.6     7   0.488   0.487   0.484   0.486   98.6     20   0.478   0.476   0.472   0.475   96.3 DCA 表1B     天       #1       #2      #3     平均     百分比     0     0.534     0.524     0.490     0.516     100.0     4     0.501     0.509     0.524     0.511     99.1     7     0.552     0.518     0.533     0.534     103.6     20     0.535     0.563     0.548     0.549     106.4 CA     天     #1     #2      #3    平均   百分比     0   0.879    0.874    0.857    0.870   100.0     4   0.870    0.873    0.880    0.874   100.5     7   0.893    0.876    0.882    0.884   101.5     20   0.887    0.893    0.887    0.889   102.2 KLCA     天      #1       #2       #3     平均     百分比     0     0.541     0.532     0.495     0.522     100.0     4     0.511     0.519     0.538     0.523     100.0     7     0.564     0.527     0.540     0.544     104.1     20     0.556     0.569     0.558     0.561     107.4 CDCA     天     #1     #2    #3   平均   百分比     0   0.491   0.488   0.471   0.483   100.0     4   0.493   0.487   0.472   0.484   100.2     7   0.479   0.488   0.479   0.482   99.7     20   0.468   0.478   0.479   0.475   98.3 DCA 表2     天     #1    #2     #3   平均   百分比     0   0.516   0.509   0.503   0.509   100.0     4   0.453   0.453   0.466   0.457   89.8     7   0.434   0.426   0.468   0.443   86.9     20   0.207   --   0.206   0.207   40.6 CA     天     #1     #2     #3   平均   百分比     0   0.883   0.877   0.869   0.876   100.0     4   0.870   0.866   0.847   0.861   98.3     7   0.848   0.844   0.843   0.845   96.4     20   0.661   --   0.651   0.656   74.9 KLCA     天     #1     #2     #3   平均   百分比     0   0.560   0.528   0.513   0.534   100.0     4   0.488   0.510   0.519   0.506   94.7     7   0.460   0.469   0.463   0.464   87.0     20   0.169   --   0.154   0.161   30.2 CDCA

                     实施例III

按如下原则制备的溶液剂型经测试在任何测试pH下没有发生任 何沉淀。 可溶性UDCA        200mg(100mg-2000mg游离碱)

最小量的麦芽糖糊精约5g(约1.25g-50g)

防腐剂        适量

调味剂        适量

甜味剂        适量

净化水        100mL

制备溶解有可溶性UDCA的80mL水溶液、然后在室温、搅拌下将 麦芽糖糊精加到该澄清溶液中。将甜味剂、防腐剂、调味剂以适于药 物制剂的量加到澄清溶液中。加入净化水使体积总共为100mL。

根据这些配方、制备含有不同浓度乌索脱氧胆酸(或其盐)和其 相应最小量或更大量的水溶性淀粉转化产物(例如麦芽糖糊精、液体 葡萄糖、液体葡萄糖干粉(市售固体玉米糖浆)、葡聚糖、或可溶性 淀粉)的水溶液剂型。

图6中UDCA的NMR(核磁共振谱)显示、当UDCA处于根据实施 例III制备的组成时为绝对游离的UDCA。也就是说、处于UDCA的C-24 的羧酸是游离(R-COOH)、并位于C-3和C-7的两个羟基是游离 (R-OH)。

此外、根据实施例III(图7)制备的组成中UDCA的HPLC图像 同溶解于甲醇中的UDCA的HPLC图像(图8)该数据表明没有UDCA 复合物存在。只有游离的UDCA。UDCA标准溶液是在100mL甲醇中溶解 100mgUDCA制备。乙腈(51)、水(49)和乙酸(1)的混合液用作流 动相。

                      实施例IV

按如下原则制备的溶液剂型经测试在任一所选预期pH下没有发 生任何沉淀。

可溶性UDCA    0.2g(1g-2g游离酸) 麦芽糖糊精        5g(35g-50g) 支链氨基酸        15g(5g-15g游离碱)

(如亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸)

甜味剂        适量

调味剂        适量

净化水    至        100mL

制备溶解有可溶性UDCA的85mL水溶液、然后将麦芽糖糊精加到 该澄清溶液中。在搅拌下加支链氨基酸到所得澄清溶液中同时调整pH (4-7)、然后加甜味剂、防腐剂、调味剂。加净化水使体积总共为100mL。

根据这些配方、制备含有不同浓度乌索脱氧胆酸(或其盐)和其相 应最小量或更大量的麦芽糖糊精、液体葡萄糖、液体葡萄糖干粉(市 售玉米糖浆)、或葡聚糖、并且含有不同量支链氨基酸(亮氨酸、异 亮氨酸、缬氨酸)的水溶液剂型。

表3A-3F显示根据实施例IV用氨基酸制备制剂的稳定性随时间变 化的测试结果。所有测试均在50℃下进行。与pH值相应的各稳定性 测试结果表列为：pH1(表3A)、pH3(表3B)、pH5(表3C)、 pH7(表3D)、pH9(表3E)、及pH10(表3F)。 表3A：实施例IV的UDCA溶液在pH1、50℃下的稳定性。     天   #1   #2   #3   平均   百分比     0   0.261   0.236   0.249   0.248   100.0     1   0.256   0.275   0.251   0.261   105.0     2   0.268   0.263   0.251   0.260   104.9     6   0.295   0.268   0.291   0.285   114.6     7   0.249   0.254   0.267   0.257   103.4     8   0.253   0.243   0.240   0.245   98.8     9   0.263   0.268   0.263   0.265   106.6 Ile     天   #1   #2   #3   平均   百分比     0   0.485   0.428   0.470   0.461   100.0     1   0.470   0.477   0.456   0.468   101.5     2   0.485   0.481   0.460   0.475   103.1     6   0.553   0.510   0.529   0.531   115.1     7   0.478   0.473   0.513   0.488   105.8     8   0.474   0.454   0.511   0.480   104.0     9   0.483   0.485   0.476   0.481   104.4 Leu     天     #1     #2     #3     平均     百分比     0     0.506     0.448     0.460     0.471     100.0     1     0.438     0.458     0.471     0.456     96.7     2     0.479     0.485     0.513     0.492     104.5     6     0.505     0.536     0.549     0.530     112.4     7     0.494     0.465     0.496     0.485     102.9     8     0.488     0.491     0.459     0.479     101.7     9     0.479     0.496     0.490     0.488     103.6 Val     天     #1     #2     #3     平均     百分比     0     0.319     0.315     0.322     0.319     100.0     1     0.332     0.344     0.351     0.342     107.4     2     0.371     0.339     0.403     0.371     116.4     6     0.396     0.409     0.411     0.405     127.2     7     0.365     0.351     0.381     0.366     114.7     8     0.409     0.365     0.331     0.368     115.6     9     0.338     0.391     0.374     0.368     115.4 Sol     天     #1     #2     #3     平均     百分比     0     0.388     0.387     0.389     0.388     100.0     1     0.367     0.370     0.366     0.368     94.8     2     0.374     0.388     0.388     0.383     98.9     6     0.371     0.380     0.382     0.377     97.3     7     0.378     0.376     0.379     0.378     97.4     8     0.374     0.382     0.384     0.380     97.9     9     0.370     0.367     0.370     0.369     95.1 UDCA 表3B：实施例IV的UDCA溶液在pH3、50℃下的稳定性。     天     #1     #2     #3     平均     百分比     0     0.261     0.254     0.253     0.256     100.0     1     0.266     0.268     0.261     0.265     103.3     2     0.273     0.243     0.247     0.254     99.3     6     0.296     0.306     0.300     0.301     117.4     7     0.247     0.265     0.257     0.256     100.0     8     0.250     0.247     0.247     0.248     96.7     13     0.285     0.240     0.250     0.258     100.9 Ile     天     #1     #2     #3     平均     百分比     0     0.495     0.465     0.452     0.471     100.0     1     0.489     0.480     0.470     0.480     101.9     2     0.495     0.472     0.481     0.483     102.6     6     0.522     0.532     0.556     0.537     114.0     7     0.492     0.482     0.491     0.488     103.7     8     0.543     0.515     0.495     0.517     109.9     13     0.512     0.496     0.543     0.517     109.8 Leu     天     #1     #2     #3     平均     百分比     0     0.485     0.491     0.498     0.491     100.0     1     0.467     0.481     0.446     0.465     94.6     2     0.510     0.493     0.527     0.510     103.8     6     0.527     0.491     0.553     0.524     106.6     7     0.485     0.481     0.468     0.478     97.3     8     0.490     0.491     0.544     0.508     103.5     13     0.519     0.498     0.517     0.511     104.1 Leu     天     #1     #2     #3    平均    百分比     0   0.343    0.355    0.370    0.356    100.0     1   0.340    0.350    0.316    0.335    94.2     2   0.383    0.371    0.400    0.385    108.0     6   0.378    0.341    0.416    0.378    106.3     7   0.355    0.381    0.315    0.350    98.4     8   0.343    0.350    0.395    0.363    101.9     13   0.377    0.382    0.423    0.394    110.7 Sol     天     #1     #2    #3   平均   百分比     0   0.395   0.396   0.393   0.395   100.0     1   0.396   0.401   0.392   0.396   100.4     2   0.427   0.421   0.416   0.421   106.8     6   0.407   0.408   0.402   0.405   102.7     7   0.412   0.409   0.411   0.411   104.1     8   0.415   0.418   0.408   0.414   104.9     13   0.415   0.412   0.416   0.414   105.0 UDCA 表3C：实施例IV的UDCA溶液pH5、50℃下的稳定性。     天     #1     #2     #3    平均   百分比     0   0.285    0.258    0.295    0.279   100.0     3   0.280    0.275    0.275    0.277   99.0     6   0.285    0.273    0.270    0.276   98.7     10   0.274    0.276    0.276    0.275   98.4     13   0.273    0.287    0.278    0.279   100.0     17   0.278    0.276    0.270    0.275   98.3     20   0.261    0.275    0.261    0.266   95.0     24   0.267    0.274    0.292    0.277   99.3 Ile     天     #1     #2     #3   平均   百分比     0   0.495   0.467   0.535   0.499   100.0     3   0.510   0.495   0.494   0.500   100.1     6   0.489   0.479   0.484   0.484   97.0     10   0.486   0.490   0.499   0.492   98.5     13   0.492   0.509   0.508   0.503   100.8     17   0.514   0.508   0.504   0.509   100.9     20   0.499   0.500   0.499   0.499   101.1     24   0.488   0.509   0.528   0.508   101.9 Leu     天     #1     #2     #3   平均   百分比     0   0.483   0.498   0.481   0.487   100.0     3   0.492   0.494   0.526   0.504   103.4     6   0.459   0.475   0.481   0.472   96.8     10   0.500   0.436   0.480   0.472   96.9     13   0.464   0.451   0.474   0.463   95.0     17   0.407   0.491   0.462   0.453   93.0     20   0.471   0.512   0.477   0.487   99.9     24   0.471   0.476   0.458   0.468   96.1 Val     天   #1   #2   #3   平均   百分比     0   0.341   0.351   0.360   0.351   100.0     3   0.342   0.386   0.371   0.366   104.5     6   0.316   0.321   0.342   0.326   93.1     10   0.341   0.299   0.335   0.325   92.7     13   0.355   0.326   0.350   0.344   98.0     17   0.334   0.376   0.353   0.354   101.0     20   0.347   0.398   0.394   0.380   108.3     24   0.416   0.353   0.378   0.382   109.0 Sol  天  #1  #2  #3  平均  百分比  0  0.407  0.404  0.404  0.405  100.0  3  0.409  0.402  0.403  0.405  99.9  6  0.410  0.403  0.409  0.407  100.6  10  0.404  0.405  0.407  0.405  100.1  13  0.408  0.403  0.395  0.402  99.3  17  0.411  0.402  0.404  0.406  100.2  20  0.405  0.394  0.396  0.398  98.4  24  0.399  0.408  0.406  0.404  99.9 UDCA 表3D：实施例IV的UDCA溶液在pH7、50℃下的稳定性。     天     #1     #2     #3     平均   百分比     0   0.296   0.289   0.281    0.289   100.0     5   0.300   0.282   0.281    0.288   99.7     8   0.277   0.282   0.268    0.276   95.5     12   0.273   0.278   0.278    0.277   95.8     15   0.271   0.273   0.266    0.270   93.5     19   0.294   0.285   0.281    0.287   99.3 Ile     天     #1     #2     #3     平均     百分比     0     0.519     0.513     0.495     0.509     100.0     5     0.499     0.499     0.498     0.498     97.9     8     0.498     0.513     0.480     0.497     97.7     12     0.508     0.516     0.515     0.513     100.9     15     0.503     0.505     0.499     0.502     98.7     19     0.521     0.509     0.516     0.515     101.3 Leu     天     #1     #2     #3     平均     百分比     0     0.483     0.530     0.525     0.513     100.0     5     0.502     0.447     0.499     0.483     94.1     8     0.488     0.498     0.493     0.493     96.2     12     0.490     0.469     0.443     0.467     91.2     15     0.492     0.541     0.442     0.492     95.9     19     0.458     0.500     0.482     0.480     93.6 Val     天     #1     #2     #3     平均     百分比     0     0.333     0.352     0.363     0.349     100.0     5     0.344     0.309     0.349     0.334     95.6     8     0.334     0.379     0.377     0.363     104.0     12     0.345     0.344     0.317     0.335     96.0     15     0.286     0.406     0.321     0.338     96.7     19     0.338     0.416     0.351     0.368     105.4 Sol     天     #1     #2     #3     平均     百分比     0     0.427     0.416     0.428     0.424     100.0     5     0.406     0.427     0.432     0.422     99.4     8     0.419     0.408     0.417     0.414     97.7     12     0.414     0.418     0.419     0.417     98.4     15     0.413     0.418     0.409     0.414     97.5     19     0.429     0.421     0.424     0.425     100.1 UDCA 表3E：实施例IV的UDCA溶液在pH9、50℃下的稳定性。     天     #1     #2     #3     平均     百分比     0     0.291     0.286     0.282     0.286     100.0     3     0.266     0.273     0.282     0.273     95.6     6     0.277     0.274     0.272     0.274     95.9     10     0.243     0.245     0.295     0.261     91.2     13     0.246     0.269     0.236     0.250     87.4     17     0.275     0.280     0.245     0.267     93.1 Ile     天     #1     #2     #3     平均     百分比     0     0.509     0.513     0.511     0.511     100.0     3     0.485     0.487     0.492     0.488     95.5     6     0.495     0.496     0.492     0.494     96.8     10     0.470     0.467     0.528     0.488     95.6     13     0.461     0.491     0.450     0.467     91.5     17     0.468     0.516     0.500     0.495     96.9 Leu     天     #1     #2     #3     平均     百分比     0     0.508     0.476     0.484     0.489     100.0     3     0.463     0.487     0.485     0.478     97.8     6     0.493     0.473     0.495     0.487     99.5     10     0.441     0.428     0.471     0.447     91.3     13     0.467     0.483     0.537     0.496     101.3     17     0.499     0.495     0.501     0.498     101.8 Val     天     #1     #2     #3     平均     百分比     0     0.341     0.316     0.328     0.328     100.0     3     0.297     0.317     0.317     0.310     94.5     6     0.313     0.291     0.314     0.306     93.2     10     0.268     0.253     0.324     0.282     85.8     13     0.270     0.266     0.334     0.290     88.3     17     0.337     0.329     0.317     0.328     99.8 Sol     天     #1     #2     #3     平均     百分比     0     0.389     0.385     0.389     0.388     100.0     3     0.405     0.400     0.394     0.400     103.2     6     0.427     0.411     0.416     0.418     107.9     10     0.420     0.418     0.450     0.429     110.8     13     0.465     0.434     0.441     0.447     115.3     17     0.454     0.457     0.413     0.441     113.9 UDCA 表3F：实施例IV的UDCA溶液在pH10、50℃下的稳定性。     天     #1     #2     #3     平均     百分比     0     0.292     0.282     0.287     0.287     100.0     2     0.253     0.237     0.239     0.243     84.7     5     0.221     0.212     0.221     0.218     76.0     7     0.219     0.215     0.207     0.214     74.5     9     0.206     0.192     0.207     0.202     70.2 Ile     天     #1     #2     #3     平均     百分比     0     0.507     0.495     0.509     0.504     100.0     2     0.462     0.442     0.442     0.449     89.1     5     0.429     0.428     0.427     0.428     85.0     7     0.410     0.417     0.414     0.414     82.1     9     0.417     0.377     0.418     0.404     80.2 Leu     天     #1     #2     #3     平均     百分比     0     0.480     0.506     0.471     0.486     100.0     2     0.536     0.478     0.504     0.506     104.2     5     0.371     0.445     0.400     0.405     83.5     7     0.384     0.384     0.424     0.397     81.8     9     0.389     0.354     0.362     0.368     75.8 Val     天     #1     #2     #3     平均     百分比     0     0.368     0.376     0.331     0.358     100.0     2     0.284     0.257     0.266     0.269     75.1     5     0.053     0.217     0.192     0.154     43.0     7     0.042     0.026     0.156     0.075     20.8     9     0.033     0.019     0.023     0.025     7.0 Sol     天     #1    #2    #3   平均   百分比     0   0.416   0.402   0.406   0.408   100.0     2   0.402   0.397   0.400   0.399   97.9     5   0.425   0.413   0.423   0.420   103.0     7   0.406   0.402   0.408   0.406   99.4     9   0.424   0.426   0.421   0.423   103.8 UDCA

                           实施例V

按如下原则制备的溶液剂型经测试在任一所选预期pH下没有发 生任何沉淀。该配方基于胆汁酸的药物应用相关已知数据。

牛磺UDCA    7g

牛磺CDCA    1g

牛磺UDCA    0.8g

牛磺CDCA    0.2g

牛磺UDCA    1g(或3g游离形式)

水溶性淀粉转化产物   250g

甜味剂      适量

调味剂      适量

净化水至少           2.0L

将可溶性UDCA溶于水中、然后加入高分子量水溶性淀粉转化产物 和水。将牛磺UDCA、牛磺CDCA、葡萄糖UDCA、葡萄糖CDCA、甜味剂、 和调味加到所得澄清溶液中。加净化水使总体积为2.0L。

                       实施例VI

依据上述实施例III中描述的方法、制备含有200mg乌索脱氧胆 酸(UDCA)的本发明水溶液剂型、并施用给3名具有正常体重的禁食 后的健康男子。通过众所周知的化学方法评价UDCA和葡萄糖UDCA 的血液水平。将缓冲的血清用于分离用填充(sep-pak)柱上后、用苯 甲酰甲基溴将甲醇洗出液在80℃衍生化45分钟。这些苯甲酰甲基 溴衍生物溶于乙腈中以进行HPLC测定。在给药后一定时间测定的吸收 实验结果包括以血清浓度-时间曲线下面积表示的总吸收(AUC：μg/mL x小时)、已经达到的最大血液浓度(Cmax；μg/mL)、和达到所述最大浓 度的时间(Tmax；小时)。这些结果如表4、图1和图2所示。

用人体进行的本发明水溶液剂型的药物动力学实验测试表明、与 用目前已知的任意剂型所获得的最佳结果相比、AUC、Cmax、Tmax有了 相当改善。表4中的最大血液浓度(Cmax)平均为8.43±1.69μg/mL、比 报道的使用肠包衣UDCA钠盐制剂所获得的Cmax高至少一倍、比使用常 规UDCA片剂所获得的Cmax高三倍。此外、与该水溶液剂型的UDCA吸 收速度紧密相关的峰值浓度时间Tmax为0.25小时、比现有技术中已知 的最快Tmax快了至少两倍。

依据上述实施例VI中描述的方法、制备含有UDCA和GUDCA的制 剂、  并口服给药3名男子、然后测定UDCA和GUDCA的与时间相关血 液浓度、并与使用UDCA的不同药物制剂的结果进行比较、其结果如表 4A和表4B所示。

将UDCA的液体制剂口服给药男子所表现的人体药物动力学参数 如表5所示。表中显示Cmax。

总之、表4、表5、图3和图4表明了本发明实施例的制剂在Cmax 和Tmax。方面比传统制剂优越。本发明实施例溶液体系不会由于胃肠的 pH环境受到破坏。使用本发明制剂、可以更有效地使胆汁酸甚至另外 的药物实现治疗效能。当水溶液形式的治疗活性组分在胃液的酸性和 肠汁的不同pH水准的碱性环境不沉淀出固体、该制剂将自然地克服由 于崩解、溶解和分散的释放程度和速度结果所致不期待的生物利用率 的不足。 表4A：将本发明制剂200mg口服给药3名男子后UDCA和GUDCA的血 中浓度。                                UDCA                                                                  GUDCA    时间(h)     #1     #2     #3     平均     #1     #2     #3     平均     0.25   5.1202   10.9171   9.159   8.43±1.69   0.1419   0.4549   0.3328   0.31±0.09     0.5   4.4528   7.7432   7.4395   6.55±1.05   0.2564   1.2455   0.864   0.79±0.29     1   1.6921   1.546   0.2163   1.15±0.47   0.2162   0.6926   0.2142   0.37±0.16     1.5   0.5256   0.2759   0.168   0.32±0.11   1.1573   0.1929   0.4752   0.61±0.29     2   0.2349   0.2176   0.1227   0.19±0.03   0.4013   0.0312   0.0657   0.17±0.12     3   0.1237   N.D.   0.2074   0.17±0.04   0.5085   0.4303   0.3315   0.42±0.05     5   1.9205   0.0229   1.6311   1.18±0.61     7   0.5328   0.4797   0.91   0.64±0.14     AUC(μg     h/mL)   4.32   6.6   5.47   5.46±0.66   6.26   2.22   4.65   4.38±1.17     Cmax     (μg/mL)   5.21   10.92   9.16   8.43±1.69   1.92   1.25   1.63   1.6     Tmax(h)   0.25   0.25   0.25   0.25   5   0.5   5   3.5±1.5 表4B：将UDCA口服给药后UDCA在人体中药物动力学参数(M±S.E.)   Cmax(ug/mL)     Tmax(hr) Roda等人(1994)   UDCA凝胶蒴、450mg     2.59     3.8     NaUDC凝胶蒴、475mg     3.42     2.4     NaUDC肠包衣、475mg     10     3.4 Nagamatsu等人(1997)     UDCA 200mg     1.9±0.25     1.5±0.4     UDCA 400mg     7.09±1.43     0.8±0.2 本发明的UDCA 200mg     8.43±1.69     0.25 表5A：将含有600mgUDCA的液体溶液每天口服给药后UDCA在人体 中药物动力学参数(Cmax)   时间   (min)     人#1     人#2     人#3     人#4     人#5  平均     Std Dev     0     0.35     1.63     0.40     0.00     0.71  0.618     0.619     5     2.51     9.79     1.68     2.65     6.26  4.578     3.405     15     12.50     47.46     8.34     11.84     21.83  20.394     15.933     60     9.72     6.46     7.77     9.81     17.25  10.202     4.183     120     3.77     1.71     1.40     1.15     2.81  2.168     1.097     240     0.65     0.93     0.50     0.48     1.30  0.772     0.346 表5B：将含有600mgUDCA的糖浆每天口服给药后UDCA在人体中药 物动力学参数(Cmax) 时间 (min)    人#1    人#2    人#3    人#4    人#5   平均  Std Dev   0    0.62    0.58    0.38    0.00    0.41   0.398   0.246   5    2.76    2.63    0.83    1.42    2.24   1.976   0.827   15    7.80    4.45    3.54    5.85    14.08   7.144   4.197   60    16.08    20.33    8.76    12.06    17.77   15.000   4.605   120    3.98    4.24    5.09    7.79    3.00   4.820   1.820   240    0.81    0.99    1.47    1.85    1.17   1.258   0.411

                                  实施例VII

按如下原则制备的溶液剂型经测试在任一所选预期pH下没有发 生任何沉淀。 可溶性UDCA                  0.2g(0.05g-2g游离酸) 液体葡萄糖干粉                 20g(3g-120g) (市售玉米糖浆固体) 可溶性非淀粉多糖类           0.01g(0.001g-0.05g)   (瓜尔豆胶、果胶等) 净化水    至         100mL

制备溶解有UDCA的水溶液85mL、然后将液体葡萄糖干粉、高分 子量水溶性淀粉转化产物、和可溶性非淀粉多糖类(瓜尔豆胶、果 胶等)加到该澄清溶液。加净化水至总体积成为100mL。

              实施例VIII：混合溶液

实施例VIII、IX、和X的制剂包含硫酸铋。在这些各实施例中、 溶液剂型是通过加进可足以提供指示量的硫酸铋的硫酸铋铵盐制备。

按如下原则制备的溶液剂型在任一所选预期pH范围内没有表现 出任何沉淀产生。

UDCA        5g

CDCA        5g

枸橼酸铋        5g

玉米糖浆固态物    260g

枸橼酸     适量

净化水  至      1.0L

首先将UDCA和CDCA溶解于1.5mL的1N NaOH溶液中。然后、 将硫酸铋和150mL的水加到该所得澄清溶液。然后按照比例将玉米糖 浆固态物在强力搅拌下加到该溶液中。将所得溶液用橼酸酸滴定至 pH4、加净化水将总体积成为1.0L。

        实施例IX：UDCA-糖浆(20g UDCA/L)

按如下原则制备的溶液剂型在任一所选预期pH范围内没有表现 出任何沉淀产生。 UDCA          20g   1N NaOH        60mL

麦芽糖糊精     700g

枸橼酸铋       4g

枸橼酸或乳酸   适量

净化水  至     1.0L

首先将UDCA溶解于60mL的1N NaOH溶液中。然后、将硫酸铋 和150mL的水加到该所得澄清溶液。然后按照比例将麦芽糖糊精在强 力搅拌下加到该溶液中。将所得溶液用橼酸酸滴定至pH3.5、加净化 水将总体积成为1.0L。

            实施例X：UDCA-糖浆(20g UDCA/L)

按如下原则制备的溶液剂型在任一所选预期pH范围内没有表现 出任何沉淀产生。 UDCA           20g   1N NaOH         60mL   玉米糖浆固态物   1,050g   枸橼酸铋     4g   枸橼酸或乳酸   适量   净化水  至     1.0L

首先将UDCA溶解于60mL的1N NaOH溶液中。然后、将硫酸铋 和280mL的水加到该所得澄清溶液。然后按照比例将玉米糖浆固态物 1,050g在强力搅拌下加到该溶液中。将所得溶液用枸橼酸滴定至 pH3.5、加净化水将总体积成为1.0L。

           实施例XI：UDCA-浓糖浆(30g UDCA/L)

按如下原则制备的溶液剂型在任一所选预期pH范围内没有表现出任

                    何沉淀产生。 UDCA       30g 1N NaOH     90mL   麦芽糖糊精    1,050g   枸橼酸或乳酸  50g   净化水至      1.0L

首先将UDCA溶解于90mL的1N NaOH溶液中。然后、将硫酸铋 和250mL的水加到该所得澄清溶液。然后按照比例将麦芽糖糊精1,050 g在强力搅拌下加到该溶液中。将所得溶液用枸橼酸50g滴定至 pH3.5、加净化水将总体积成为1.0L。

         实施例XII：UDCA-浓糖浆(30g UDCA/L)

按如下原则制备的溶液剂型在任一所选预期pH范围内没有表现 出任何沉淀产生。   UDCA       30g   1N NaOH      90mL   玉米糖浆固态物  1,500g   枸橼酸或乳酸 50g   净化水至     1.0L

首先将UDCA溶解于90mL的1N NaOH溶液中。然后、将硫酸铋 和230mL的水加到该所得澄清溶液。然后按照比例将玉米糖浆固态物 1,500g在强力搅拌下加到该溶液中。将所得溶液用枸橼酸50g滴定 至pH3.5、加净化水将总体积成为1.0L。

        实施例XIII：UDCA-糊状(45g UDCA/L)

实施例XIII、XIV、XV、和XVI的制剂包含枸橼酸铋。在这些各 实施例中、溶液剂型是通过加进可足以提供指示量的枸橼酸铋的枸橼 酸铋的一种铵盐制备。

UDCA      45g

1N NaOH        135mL

麦芽糖糊精    1,575g

枸橼酸铋  10g

枸橼酸或乳酸  适量

净化水    1.0L

首先将UDCA溶解于135mL的1N NaOH溶液中。然后、将枸橼酸 铋和200mL的水加到该所得澄清溶液。然后按照比例将麦芽糖糊精 1,575g在强力搅拌下加到该溶液中。将所得溶液用枸橼酸滴定至 pH3、加净化水将总体积成为1.0L。

将按照本实施例制备的机型施用给5人。其结果列于表5A和表 5B、并提供了图3和图4所示图像。通过比较图3的窄峰和图4的宽 峰可以看出有经验的医师可以通过调节剂型来处理胆汁酸的Cmax和 Tmax。

H.pylori是在含有实施例IX制剂的Columbia Bood Agar Base (CRAB)培养基上培养出来的。准备了2L CRAB培养板、其中包含9.9 g of CRAB、胰酶大豆琼脂9.1g、羊血50mL、万古霉素、两性霉素 B、多粘菌素B、实施例IX 2mL、和蒸馏水358mL。经48或 72小时的微需氧培养、细菌被Karnovsky固定剂固定并被嵌入环氧 树脂。H.pylori细胞的电子显微照片如图5A-5C所示。 实施例XIV：UDCA-糊状(45g UDCA/L)

按如下原则制备的溶液剂型在任一所选预期pH范围内没有表现出 任何沉淀产生。

UDCA      45g

1N NaOH      135mL

玉米糖浆固态物  2,300g

枸橼酸或乳酸  50g

净化水    1.0L

首先将UDCA溶解于135mL的1N NaOH溶液中。然后、将枸橼酸 铋和150mL的水加到该所得澄清溶液。然后按照比例将玉米糖浆固体 物2,300g在强力搅拌下加到该溶液中。将所得溶液用枸橼酸滴定至 pH3、加净化水将总体积成为1.0L。

        实施例XV：UDCA(22g)和CDCA(3g)的混合溶液

按如下原则制备的溶液剂型在任一所选预期pH范围内没有表现 出任何沉淀产生。

UDCA      22g

1N NaOH      75mL

CDCA      3g

麦芽糖糊精   875g

枸橼酸铋  4g

枸橼酸或乳酸 适量

净化水    1.0L

首先将UDCA和CDCA溶解于75mL的1N NaOH溶液中。然后、 将枸橼酸铋和240mL的水加到该所得澄清溶液。然后按照比例将麦芽 糖糊精、875g在强力搅拌下加到该溶液中。将所得溶液用枸橼酸滴 定至pH3、加净化水将总体积成为1.0L。

        实施例XVI：UDCA(22g)和CDCA(3g)的混合溶液

按如下原则制备的溶液剂型在任一所选预期pH范围内没有表现 出任何沉淀产生。

UDCA      22g

1N NaOH    75mL

CDCA    3g

玉米糖浆固态物  1,320g

枸橼酸铋  4g

枸橼酸或乳酸  适量

净化水    1.0L

首先将UDCA和CDCA溶解于75mL的1N NaOH溶液中。然后、 将枸橼酸铋和240mL的水加到该所得澄清溶液。然后按照比例将玉米 糖浆固态物1,320g在强力搅拌下加到该溶液中。将所得溶液用枸橼 酸滴定至pH3、加净化水将总体积成为1.0L。

                  实施例XVII

利用本发明溶液剂型对被H.pylori感染的鼠进行了治疗效果 的测试。通过喂给六周的C57BL/6雌鼠含有109 CFU/mL H.pylori、 SS1菌株的食物使其感染。对这些鼠每隔一周喂给了两次这样的饲料。 其次将实施例VIII的0.2mL溶液剂型施与四只被感染的鼠。在最 终一次投入本发明药剂一周后牺牲了两只老鼠、剩下的两只老鼠在最 终一次投入本发明药剂一周后致死。为了去除胃粘膜和残留物、使用 盐水彻底清洗了整个胃。将每只鼠胃组织的试样利用急速脲酶测试包 (Delta West、Australia)进行CLO测试。对剩下的各鼠胃进行10％ 福尔马林固定和石蜡包埋。将切片(4μm thick)收集在载玻片上以 H&E和Warthin染色液染色。用一般的光学显微镜对组织进行了病理 学评定。

如表6所示结果、停止投入液体剂型一周后的鼠的尿素酶检验结 果表现出阴性、并在Warthin检查中没有观察到H.pylori。其他 两只鼠当中的一只其尿素酶检验结果表现出阴性、并在Warthin检查 中没有观察到H.pylori、不过另外的一只却得到尿素酶检验的阳性 结果、虽然在Warthin检查中观察到只有很少的H.pylori。 表6 处置后经过的周   动物   尿素酶检验   Warthin检查     1     1     阴性   无H.pylori     1     2     阴性   无H.pylori     4     3     阴性   无H.pylori     4     4     阳性   少量H.pylori

                    实施例XVIII

对在含有UDCA或枸橼酸铋或两者都含有的培养基上的H.pylori 生长进行了分析。在该分析中使用了如下培养基。

pH为4并包含麦芽糖糊精525g/L和UDCA15g/L的000112B-1。

pH为3.7并包含玉米糖浆固态物1kg/L和枸橼酸铋6g/L的 OSABY。

为了评价在UDCA、铋、或两者都存在的条件下pylori的生 长能力、根据不同的pH、浓度、和暴露时间进行了三种分析。 1.将Helicobacter pylori悬浮于生理盐水、每毫升约繁殖109 个。将该接种原50μL转移至盛有pH为3.0、4.0、及4.5的枸橼 酸盐-磷酸盐缓冲液1mL的试管中、准备有6mM尿素和没有的一对试 管。在常温下培养30分钟后、使用1μL接种环将该悬浊液在包含 000112B-1的琼脂培养板上继代培养。这些板是在微需氧和37℃下培 养72小时。该程序显示于图9。

如表7所示、H.pylori在pH3和pH4对照培养基上生长微乎其 微。表7进一步显示H.pylori在含有UDCA并pH3和pH的培养基 上不生长。“3mL”、“4mL”和“5mL”标示指每个培养板上 000112B-1培养的总体积。“PBS”是指pH7.0的磷酸盐缓冲盐水。 表7     板     pH     尿素                   尿素酵素检验  1-2 sec.   10 min.   2 hr.   20 hr.   Control     3.0     Yes     No     FO     FO     FO     FO     O     O     O     O     4.0     Yes     No     FO     FO     FO     FO     O     O     O     P     4.5     Yes     No     FP     FO     FP     O     P     FP     P     P     PBS     Yes     No     O     O     FP     FP     P     P     P     P   000112B-1     (3mL)     3.0     Yes     No     Y     Y     Y     Y     Y     Y     Y     Y     4.0     Yes     No     Y     Y     Y     Y     FO     Y     O     FO     4.5     Yes     No     FP     FP     FP     FP     P     P     P     P   000112B-1     (4mL)     3.0     Yes     No     Y     Y     Y     Y     Y     Y     Y     Y     4.0     Yes     No     Y     Y     Y     Y     Y     FO     FO     FO     4.5     Yes     No     FP     FP     FP     FP     P     FP     P     P   000112B-1     (5mL)     3.0     Yes     No     Y     Y     Y     Y     Y     Y     Y     Y     4.0     Yes     No     Y     Y     Y     Y     FO     Y     FO     Y     4.5     Yes     No     FP     FP     FP     FP     P     P     P     P Key   Y   FO   O   FP     P     色   Yellow   Faint Orange   Orange   Faint Pink     Pink Helicobacter   不在   非常稀疏   稀疏   存在     多 2.将Helicobacter pylori悬浮于生理盐水、每毫升约繁殖109 个。将该接种原50μL转移至装有培养浓度不同的枸橼酸盐-磷酸盐 缓冲液1mL的试管中、其浓度如1/10、1/30、1/50、1/100、1/200、 1/500、1/800、1/1000、1/2000。这些试管均有6mM尿素。在常温 下培养30分钟后、使用1μL接种环将该悬浊液在琼脂培养板上继 代培养。这些培养板实质上不存在铋和胆汁酸。这些板是在微需氧和 37℃下培养72小时。该程序显示于图10。

表8显示将H.pylori在包含UDCA(000112B-1)、枸橼酸铋 (OSABY)或UDCA和枸橼酸铋稀释液的培养基上生长72小时后尿素酵素 的检验情况。在包含UDCA或枸橼酸铋的培养基中可以观察到H. pylori的生长微弱(表8)。在UDCA和枸橼酸铋均存在的培养基上H. pylori的生长愈加微弱(表8)。 表8     培养板              尿素酵素检验    即时  10分钟  30分钟  60分钟 000112B-1     Control     P     P     P     P     1/10     Y     FP     P     P     1/30     Y     FP     P     P     1/50     Y     FP     P     P     1/100     Y     FP     P     P     1/200     Y     FP     P     P     1/500     Y     FP     P     P     1/800     FP     P     P     P     1/1000     FP     P     P     P     1/2000     FP     P     P     P  OSABY     Control     P     P     P     P     1/10     Y     FP     P     P     1/30     Y     FP     P     P     1/50     Y     FP     P     P     1/100     FP     FP     P     P     1/200     FP     FP     P     P     1/500     FP     FP     P     P     1/800     FP     P     P     P     1/1000     FP     P     P     P     1/2000     FP     P     P     P 000122B-1+OSABY     Control     P     P     P     P     1/10     Y     FP     FP     FP     1/50     Y     Y     Y     Y     1/100     Y     Y     Y     Y     1/500     Y     FP     FP     FP     1/1000     Y     FP     P     P

                                     Key    Y     FO     O     FP    P     色 Yellow Faint Orange  Orange  Faint Pink   Pink  Helicobacter  不在   非常稀疏   稀疏    存在    多

3.将Helicobacter pylori悬浮于生理盐水、每毫升约繁殖 109个。将该接种原50μL转移至装有多种培养浓度的枸橼酸盐-磷 酸盐缓冲液1mL的试管中、浓度如15分钟内、、1/4和1/10、30 分钟内、1/4和1/10、及45分钟内、1/4和1/10。移植到一对 含有和未含有6mM尿素的试管。在常温下培养30分钟后、使用1μL 接种环将该悬浊液在琼脂培养板上继代培养。这些培养板实质上不 存在铋和胆汁酸。这些板是在微需氧和37℃下培养72小时。该程序 显示于图11。

表9显示将H.pylori在包含UDCA(000112B-1)、枸橼酸铋 (OSABY)或UDCA和枸橼酸铋稀释液的培养基上生长72小时后尿素酵素 的检验情况。如所指出、较长的暴露时间会增加溶液对H.pylori的 反作用。 表9     稀释液  培养时间   (分钟)             尿素酵素检验(分钟)     1     30     60     120     240 000112B-1     Control     P     P     P     P     P          15     Y     Y     Y     Y     Y     30     Y     Y     Y     Y     Y     45     Y     Y     Y     Y     Y     1/4     15     Y     FO     FP     P     P     30     Y     Y     FO     FO     FO     45     Y     Y     Y     Y     Y     1/10     15     Y     FO     FO     FO     FO     30     Y     FO     FO     O     P     45     Y     Y     Y     FO     FO OSABY     Control     P     P     P     P     P          15     Y     Y     Y     Y     Y     30     Y     Y     Y     Y     Y     45     Y     Y     Y     Y     Y     1/4     15     Y     Y     Y     Y     Y     30     Y     Y     Y     Y     Y     45     Y     Y     Y     Y     Y     1/10     15     Y     FO     FO     FO     P     30     Y     Y     Y     Y     Y     45     Y     Y     Y     Y     Y 000122B-1+OSABY     Control     P     P     P     P     P          15     Y     Y     Y     Y     Y     30     Y     Y     Y     Y     Y     45     Y     Y     Y     Y     Y     1/4     15     Y     Y     Y     Y     Y     30     Y     Y     Y     Y     Y     45     Y     Y     Y     Y     Y     1/10     15     Y     Y     Y     FO     FO     30     Y     FO     FO     FO     P     45     Y     Y     Y     Y     Y