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用于细胞内递送治疗剂的化合物和组合物

阅读：77发布：2020-11-16

专利汇可以提供用于细胞内递送治疗剂的化合物和组合物专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本公开的特征在于新型脂质和包含这些脂质的组合物。纳米粒子组合物包含新型脂质以及其它脂质，如磷脂、结构性脂质和PEG脂质。另外包含治疗剂和/或预防剂如RNA的纳米粒子组合物可用于将治疗剂和/或预防剂递送至哺乳动物细胞或器官，以例如调控多肽、蛋白质或基因表达。，下面是用于细胞内递送治疗剂的化合物和组合物专利的具体信息内容。

权利要求

1.一种式(I)化合物，
或其N-氧化物，
或其盐或异构体，其中
R1选自由以下组成的组：C5-30烷基、C5-20烯基、-R*YR”、-YR”和-R”M’R’；
R2和R3独立地选自由以下组成的组：H、C1-14烷基、C2-14烯基、-R*YR”、-YR”和-R*OR”，或R2和R3连同其所连接的原子一起形成杂环或碳环；
R4选自由以下组成的组：氢、C3-6碳环、-(CH2)nQ、-(CH2)nCHQR、-(CH2)oC(R10)2(CH2)n-oQ、-CHQR、-CQ(R)2和未被取代的C1-6烷基，其中Q选自碳环、杂环、-OR、-O(CH2)nN(R)2、-C(O)OR、-OC(O)R、-CX3、-CX2H、-CXH2、-CN、-N(R)2、-C(O)N(R)2、-N(R)C(O)R、-N(R)S(O)2R、-N(R)C(O)N(R)2、-N(R)C(S)N(R)2、N(R)R8、-N(R)S(O)2R8、-O(CH2)nOR、-N(R)C(＝NR9)N(R)2、-N(R)C(＝CHR9)N(R)2、-OC(O)N(R)2、-N(R)C(O)OR、-N(OR)C(O)R、-N(OR)S(O)2R、-N(OR)C(O)OR、-N(OR)C(O)N(R)2、-N(OR)C(S)N(R)2、-N(OR)C(＝NR9)N(R)2、-N(OR)C(＝CHR9)N(R)2、-C(＝NR9)N(R)2、-C(＝NR9)R、-C(O)N(R)OR和–C(R)N(R)2C(O)OR，各o独立地选自1、2、3和4，并且各n独立地选自1、2、3、4和5；
各R5独立地选自由OH、C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；
各R6独立地选自由OH、C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；
M和M’独立地选自-C(O)O-、-OC(O)-、-OC(O)-M”-C(O)O-、-C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)-、-C(O)-、-C(S)-、-C(S)S-、-SC(S)-、-CH(OH)-、-P(O)(OR’)O-、-S(O)2-、-S-S-、芳基基团和杂芳基基团，其中M”是键、C1-13烷基或C2-13烯基；
R7选自由C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；
R8选自由C3-6碳环和杂环组成的组；
R9选自由以下组成的组：H、CN、NO2、C1-6烷基、-OR、-S(O)2R、-S(O)2N(R)2、C2-6烯基、C3-6碳环和杂环；
R10选自由H、C1-3烷基和C2-3烯基组成的组；
各R独立地选自由以下组成的组：C1-3烷基、C2-3烯基、(CH2)qOR*和H，
并且各q独立地选自1、2和3；
各R’独立地选自由以下组成的组：C1-18烷基、C2-18烯基、-R*YR”、-YR”和H；
各R”独立地选自由C3-15烷基和C3-15烯基组成的组；
各R*独立地选自由C1-12烷基和C2-12烯基组成的组；
各Y独立地是C3-6碳环；
各X独立地选自由以下组成的组：F、Cl、Br和I；并且
m选自5、6、7、8、9、10、11、12和13；且其中当R4是-(CH2)nQ、-(CH2)nCHQR、–CHQR或-CQ(R)2时，则(i)在n是1、2、3、4或5时，Q不是-N(R)2；或(ii)在n是1或2时，Q不是5、6或7元杂环烷基。
2.一种式(III)化合物，
或其N-氧化物，
或其盐或异构体，其中
或其盐或异构体，其中
R1选自由以下组成的组：C5-30烷基、C5-20烯基、-R*YR”、-YR”和-R”M’R’；
R2和R3独立地选自由以下组成的组：H、C1-14烷基、C2-14烯基、-R*YR”、-YR”和-R*OR”，或R2和R3连同其所连接的原子一起形成杂环或碳环；
R4选自由以下组成的组：氢、C3-6碳环、-(CH2)nQ、-(CH2)nCHQR、-(CH2)oC(R10)2(CH2)n-oQ，-CHQR、-CQ(R)2和未被取代的C1-6烷基，其中Q选自碳环、杂环、-OR、-O(CH2)nN(R)2、-C(O)OR、-OC(O)R、-CX3、-CX2H、-CXH2、-CN、-N(R)2、-C(O)N(R)2、-N(R)C(O)R、-N(R)S(O)2R、-N(R)C(O)N(R)2、-N(R)C(S)N(R)2、N(R)R8、-N(R)S(O)2R8、-O(CH2)nOR、-N(R)C(＝NR9)N(R)2、-N(R)C(＝CHR9)N(R)2、-OC(O)N(R)2、-N(R)C(O)OR、-N(OR)C(O)R、-N(OR)S(O)2R、-N(OR)C(O)OR、-N(OR)C(O)N(R)2、-N(OR)C(S)N(R)2、-N(OR)C(＝NR9)N(R)2、-N(OR)C(＝CHR9)N(R)2、-C(＝NR9)N(R)2、-C(＝NR9)R、-C(O)N(R)OR和–C(R)N(R)2C(O)OR，各o独立地选自1、2、3和4，并且各n独立地选自1、2、3、4和5；
Rx选自由C1-6烷基、C2-6烯基、-(CH2)rOH和-(CH2)rNR2组成的组，
其中r选自1、2、3、4、5和6；
各R5独立地选自由OH、C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；
各R6独立地选自由OH、C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；
M和M’独立地选自-C(O)O-、-OC(O)-、-OC(O)-M”-C(O)O-、-C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)-、-C(O)-、-C(S)-、-C(S)S-、-SC(S)-、-CH(OH)-、-P(O)(OR’)O-、-S(O)2-、-S-S-、芳基基团和杂芳基基团，其中M”是键、C1-13烷基或C2-13烯基；
R7选自由C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；
R8选自由C3-6碳环和杂环组成的组；
R9选自由以下组成的组：H、CN、NO2、C1-6烷基、-OR、-S(O)2R、-S(O)2N(R)2、C2-6烯基、C3-6碳环和杂环；
R10选自由H、C1-3烷基和C2-3烯基组成的组；
各R独立地选自由C1-3烷基、C2-3烯基、(CH2)qOR*和H组成的组；
并且各q独立地选自1、2和3；
各R’独立地选自由以下组成的组：C1-18烷基、C2-18烯基、-R*YR”、-YR”和H；
各R”独立地选自由C3-15烷基和C3-15烯基组成的组；
各R*独立地选自由C1-12烷基和C2-12烯基组成的组；
各Y独立地是C3-6碳环；
各X独立地选自由以下组成的组：F、Cl、Br和I；并且
m选自5、6、7、8、9、10、11、12和13。
3.根据权利要求2所述的化合物，其中Rx是甲基。
4.根据权利要求2或3所述的化合物，其中所述化合物还包含阴离子。
5.根据权利要求3所述的化合物，其中所述阴离子选自氯离子、溴离子、碘离子、氟离子、乙酸根、甲酸根、三氟乙酸根、二氟乙酸根、三氯乙酸根和磷酸根。
6.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中M和M’中的至少一个是-OC(O)-M”-C(O)O-。
7.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中M和M’中的至少一个是-OC(O)-。
8.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中M是-OC(O)-并且M’是-C(O)O-。
9.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中M是-C(O)O-并且M’是-OC(O)-。
10.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中M和M’各自是-OC(O)-。
11.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中M和M’各自是-C(O)O-。
12.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中所述化合物具有式(IA)：
或其N-氧化物，或其盐或异构体，其中
l选自1、2、3、4和5；
m选自5、6、7、8和9；
M1是键或M’；
R4是氢、未被取代的C1-3烷基、-(CH2)oC(R10)2(CH2)n-oQ，或-(CH2)nQ，其中Q是OH、-NHC(S)N(R)2、-NHC(O)N(R)2、-N(R)C(O)R、-N(R)S(O)2R、-N(R)R8、-N(R)S(O)2R8、-NHC(＝NR9)N(R)2、-NHC(＝CHR9)N(R)2、-OC(O)N(R)2、-N(R)C(O)OR、-N(OR)C(O)R、-N(OR)S(O)2R、-N(OR)C(O)OR、-N(OR)C(O)N(R)2、-N(OR)C(S)N(R)2、-N(OR)C(＝NR9)N(R)2、-N(OR)C(＝CHR9)N(R)2、杂芳基或杂环烷基；
M和M’独立地选自-C(O)O-、-OC(O)-、-OC(O)-M”-C(O)O-、-C(O)N(R’)-、-P(O)(OR’)O-、-S-S-、芳基基团和杂芳基基团；并且
R2和R3独立地选自由H、C1-14烷基和C2-14烯基组成的组。
13.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物具有式(IB)：
或其N-氧化物，
或其盐或异构体。
14.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中m是5、7或9。
15.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中所述化合物具有式(II)：
或其N-氧化物，或其盐或异构体，其中
l选自1、2、3、4和5；
M1是键或M’；
R4是氢、未被取代的C1-3烷基、-(CH2)oC(R10)2(CH2)n-oQ或-(CH2)nQ，其中n是2、3或4并且Q是OH、-NHC(S)N(R)2、-NHC(O)N(R)2、-N(R)C(O)R、-N(R)S(O)2R、N(R)R8、-N(R)S(O)2R8、-NHC(＝NR9)N(R)2、-NHC(＝CHR9)N(R)2、-OC(O)N(R)2、-N(R)C(O)OR、-N(OR)C(O)R、-N(OR)S(O)
2R、-N(OR)C(O)OR、-N(OR)C(O)N(R)2、-N(OR)C(S)N(R)2、-N(OR)C(＝NR9)N(R)2、-N(OR)C(＝CHR9)N(R)2、杂芳基或杂环烷基；
M和M’独立地选自-C(O)O-、-OC(O)-、-OC(O)-M”-C(O)O-、-C(O)N(R’)-、-P(O)(OR’)O-、-S-S-、芳基基团和杂芳基基团；并且
R2和R3独立地选自由H、C1-14烷基和C2-14烯基组成的组。
16.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R4是氢。
17.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R4不是氢。
18.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中Q是OH、-NHC(S)N(R)2、-NHC(O)N(R)2、-N(R)C(O)R或-N(R)S(O)2R。
19.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中Q是-N(R)R8、-NHC(＝NR9)N(R)2、-NHC(＝CHR9)N(R)2、-OC(O)N(R)2或-N(R)C(O)OR。
20.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中Q是-N(OR)C(O)R、-N(OR)S(O)2R、-N(OR)C(O)OR、-N(OR)C(O)N(R)2、-N(OR)C(S)N(R)2、-N(OR)C(＝NR9)N(R)2或-N(OR)C(＝CHR9)N(R)2。
21.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中Q是-N(R)C(O)R，其中R是任选被C1-3烷氧基取代的C1-3烷基，或S(O)tC1-3烷基，其中t是0、1或2。
22.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中Q是杂芳基。
23.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中Q是杂环烷基并且n是3、4或5。
24.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R是被一个或多个选自由C1-3烷氧基、氨基和C1-C3二烷基氨基组成的组的取代基取代的C1-6烷基。
25.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R8是4元碳环。
26.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R8是4元碳环。
27.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R8是4元碳环，其中所述碳环被一个或多个选自由以下组成的组的取代基取代：氧代、硫代、氨基、C1-C3烷基氨基、C1-C3二烷基氨基、C1-C3烷氧基烷基氨基、C1-C3二烷氧基烷基氨基、C1-C3烷氧基烷基和5或6元杂环烷基。
28.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中M1是M’。
29.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中M和M’独立地是-C(O)O-或-OC
(O)-。
30.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中M和M’中的至少一个是-S-S-。
31.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中M和M’之一是-S-S-，并且另一个是-C(O)O-或-OC(O)-。
32.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中l是1、3或5。
33.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R4是未被取代的甲基或-(CH2)nQ，其中Q是OH、-NHC(S)N(CH3)2或-NHC(O)N(CH3)2。
34.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中M1不存在。
35.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R’是C1-18烷基、C2-18烯基、-R*YR”或-YR”。
36.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R2和R3独立地是C3-14烷基或C3-14烯基。
37.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R1选自由C5-20烷基和C5-20烯基组成的组。
38.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R1选自由-R*YR”、-YR”和-R”M’R’组成的组。
39.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R1是C5-20烷基。
40.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R1是C6烷基、C8烷基、C9烷基、C14烷基或C18烷基。
41.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R1是C5-20烯基。
42.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R1是C18烯基。
43.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R1是亚油基。
44.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R1是-R”M’R’。
45.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R1不同于–(CHR5R6)m–M–CR2R3R7。
46.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R’选自-R*YR”和-YR”。
47.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中Y是环丙基基团。
48.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中邻近Y的R”是C1烷基。
49.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R’选自C4烷基、C4烯基、C5烷基、C5烯基、C6烷基、C6烯基、C7烷基、C7烯基、C9烷基、C9烯基、C11烷基、C11烯基、C17烷基、C17烯基、C18烷基和C18烯基，其各自是直链或分支的。
50.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R”是C3烷基。
51.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R”是C5烷基。
52.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R”是C7烷基。
53.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R1是被羟基取代的C5-20烷基。
54.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中M’是-C(O)O-、-OC(O)-或-OC(O)-M”-C(O)O-，其中M”是C1-4烷基或C2-4烯基。
55.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中M’是芳基基团或杂芳基基团。
56.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中M’选自由苯基、噁唑和噻唑组成的组。
57.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R1选自-R*YR”和-YR”。
58.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中Y是环丙基基团。
59.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R*是C8烷基。
60.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R*是被一个或多个选自由氨基、C1-C6烷基氨基和C1-C6二烷基氨基组成的组的取代基取代的C1-12烷基。
61.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R”是C3-12烷基。
62.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R”是C8烷基
63.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中各R5是H。
64.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中至少一个R5是羟基。
65.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中各R6是H。
66.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中至少一个R6是羟基。
67.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R2和R3独立地选自由以下组成的组：C1-14烷基、C2-14烯基、-R*YR”、-YR”和-R*OR”，或R2和R3连同其所连接的原子一起形成杂环或碳环。
68.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R2与R3相同。
69.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R2和R3是C8烷基。
70.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R2和R3是C2烷基。
71.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R2和R3是C3烷基。
72.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R2和R3是C4烷基。
73.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R2和R3是C5烷基。
74.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R2和R3是C6烷基。
75.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R2和R3是C7烷基。
76.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R2与R3不同。
77.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R2是C8烷基。
78.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R3是C1烷基。
79.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R3是C2烷基。
80.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R3是C3烷基。
81.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R3是C4烷基。
82.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R3是C5烷基。
83.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R3是C6烷基。
84.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R3是C7烷基。
85.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R3是C9烷基。
86.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R2和R3连同其所连接的原子一起形成杂环。
87.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R2和R3连同其所连接的原子一起形成碳环。
88.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中所述碳环是C6碳环。
89.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中所述碳环是苯基基团。
90.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中所述碳环是环己基基团。
91.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中由R2和R3连同其所连接的原子一起形成的杂环或碳环被一个或多个烷基基团取代。
92.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中M是-C(O)O-。
93.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中M是-OC(O)-。
94.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中M是-OC(O)-M”-C(O)O-，其中M”是C1-6烷基或C2-6烯基。
95.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中M是-OC(O)-M”-C(O)O-，其中M”是C1-4烷基或C2-4烯基。
96.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中M是芳基基团或杂芳基基团。
97.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中M选自由苯基、噁唑和噻唑组成的组。
98.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中m是5。
99.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中m是7。
100.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中m是9。
101.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R4是未被取代的C1-4烷基。
102.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R4是未被取代的甲基。
103.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R4选自由以下组成的组：C3-6碳环、-(CH2)nQ、-(CH2)nCHQR、-CHQR和-CQ(R)2，其中Q选自C3-6碳环、具有一个或多个选自N、O、S和P的杂原子的5至14元芳香族或非芳香族杂环、-OR、-O(CH2)nN(R)2、-C(O)OR，-OC(O)R、-CX3、-CX2H、-CXH2、-CN、-N(R)2、-C(O)N(R)2、-N(R)S(O)2R8、-N(R)C(O)R、-N(R)S(O)2R、-N(R)C(O)N(R)2、-N(R)C(S)N(R)2和-C(R)N(R)2C(O)OR，并且各n独立地选自1、2、3、4和5。
104.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R4选自由以下组成的组：C3-6碳环、-(CH2)nQ、-(CH2)nCHQR、-CHQR和-CQ(R)2，其中Q选自C3-6碳环、具有一个或多个选自N、O和S的杂原子的5至14元杂芳基、-OR、-O(CH2)nN(R)2、-C(O)OR、-OC(O)R、-CX3、-CX2H、-CXH2、-CN、-C(O)N(R)2、-N(R)C(O)R、-N(R)S(O)2R、-N(R)S(O)2R8、-N(R)C(O)N(R)2、-N(R)C(S)N(R)2、-C(R)N(R)2C(O)OR以及具有一个或多个选自N、O和S的杂原子的5至14元杂环烷基，其被一个或多个选自氧代(＝O)、OH、氨基和C1-3烷基的取代基取代，并且各n独立地选自1、2、
3、4和5。
105.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R4选自由以下组成的组：C3-6碳环、-(CH2)nQ、-(CH2)nCHQR、-CHQR和-CQ(R)2，其中Q选自C3-6碳环、具有一个或多个选自N、O和S的杂原子的5至14元杂环、-OR、-O(CH2)nN(R)2、-C(O)OR、-OC(O)R、-CX3、-CX2H、-CXH2、-CN、-C(O)N(R)2、-N(R)C(O)R、-N(R)S(O)2R、-N(R)S(O)2R8、-N(R)C(O)N(R)2、-N(R)C(S)N(R)2、-C(R)N(R)2C(O)OR，并且各n独立地选自1、2、3、4和5；并且当Q是5至14元杂环且(i)R4是-(CH2)nQ，其中n是1或2，或(ii)R4是-(CH2)nCHQR，其中n是1，或(iii)R4是-CHQR和-CQ(R)2时，则Q是5至14元杂芳基或8至14元杂环烷基。
106.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R4选自由以下组成的组：C3-6碳环、-(CH2)nQ、-(CH2)nCHQR、-CHQR和-CQ(R)2，其中Q选自C3-6碳环、具有一个或多个选自N、O和S的杂原子的5至14元杂芳基、-OR、-O(CH2)nN(R)2、-C(O)OR、-OC(O)R、-CX3、-CX2H、-CXH2、-CN、-C(O)N(R)2、-N(R)C(O)R、-N(R)S(O)2R、-N(R)S(O)2R8、-N(R)C(O)N(R)2、-N(R)C(S)N(R)2、-C(R)N(R)2C(O)OR，并且各n独立地选自1、2、3、4和5。
107.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R4选自-(CH2)nQ和-(CH2)nCHQR。
108.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中Q是-OR。
109.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中Q是-OH。
110.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中Q是-O(CH2)nN(R)2。
111.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中Q是-OC(O)R。
112.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中Q是-CX3。
113.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中Q是–CN。
114.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中Q是-N(R)C(O)R或-N(R)S(O)2R。
115.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中Q是-N(H)C(O)R或-N(H)S(O)2R。
116.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中Q是-N(R)C(O)N(R)2。
117.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中Q是-N(H)C(O)N(R)2。
118.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中Q是-N(H)C(O)N(H)(R)。
119.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中Q是-N(R)C(S)N(R)2。
120.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中Q是-N(H)C(S)N(R)2。
121.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中Q是-N(H)C(S)N(H)(R)。
122.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中Q是-C(R)N(R)2C(O)OR。
123.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中Q是-N(R)S(O)2R8。
124.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中Q是-NHR8，其中R8是C3-6环烷基，其任选被一个或多个选自以下的取代基取代：氧代(＝O)、氨基(NH2)、单烷基或二烷基氨基、C1-3烷基和卤代。
125.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中Q是-NHC(＝NR9)N(R)2，其中R9是CN、C1-6烷基或H。
126.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中Q是-NHC(＝CHR9)N(R)2，其中R9是NO2、C1-6烷基或H。
127.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中Q是-OC(O)N(R)2或-N(R)C(O)OR。
128.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中Q选自由三唑、咪唑、嘧啶和嘌呤组成的组。
129.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中Q是含有至少一个氮环原子的5或
6元杂环烷基并且任选被一个或多个选自以下的取代基取代：氧代(＝O)、氨基(NH2)、单烷基或二烷基氨基、卤代和C1-3烷基。
130.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中n是1。
131.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中n是2。
132.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中n是3。
133.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中n是4。
134.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R7是H。
135.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R7选自C1-3烷基。
136.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R3和R7是H。
137.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R2是H。
138.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中至少一个存在的R5和R6是甲基。
139.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中所述化合物选自由化合物1-8和
31以及其盐和异构体组成的组。
140.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中所述化合物选自由以下组成的
组：化合物9-30、32-36和47-61以及其盐和异构体。
141.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中所述化合物选自由以下组成的
组：化合物65-75、79-81、94、101、103、108-116和118-135以及其盐和异构体。
142.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中所述化合物选自化合物136-232以及其盐和异构体。
143.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中所述化合物选自化合物233-235、
236、238-244、246-252、254、259-261和263-280以及其盐和异构体。
144.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中所述化合物选自化合物256和257以及其盐和异构体。
145.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中所述化合物选自化合物281-339以及其盐和异构体。
146.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中所述化合物具有式(IIa)，
或其N-氧化物，或其盐或异构
体。
147.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中所述化合物具有式(IIb)，
或其N-氧化物，或其盐或异构体。
148.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中所述化合物具有式(IIc)或
(IIe)，
或其N-氧化物，或其盐或异构体。
149.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R4选自-(CH2)nQ和-(CH2)nCHQR。
150.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中Q选自由以下组成的组：-OR、-OH、-O(CH2)nN(R)2、-OC(O)R、-CX3、-CN、-N(R)C(O)R、-N(H)C(O)R、-N(R)S(O)2R、-N(H)S(O)
2R、-N(R)C(O)N(R)2、-N(H)C(O)N(R)2、-N(H)C(O)N(H)(R)、-N(R)C(S)N(R)2、-N(H)C(S)N(R)2、-N(H)C(S)N(H)(R)、-N(R)S(O)2R8和杂环。
151.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中n是1、2或3。
152.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中所述化合物具有式(IId)，
或其N-氧化物，或其盐或异构体，
其中R2和R3独立地选自由C5-14烷基和C5-14烯基组成的组，并且n选自2、3和4。
153.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中所述化合物具有式(IIf)，
或其N-氧化物，或其盐或异构体，
其中M是-C(O)O-或–OC(O)-、M”是C1-6烷基或C2-6烯基、R2和R3独立地选自由C5-14烷基和C5-14烯基组成的组、并且n选自2、3和4。
154.根据权利要求所述的化合物1，其中所述化合物具有式(IIg)：
或其N-氧化物，或其盐或异构体，其中
l选自1、2、3、4和5；
m选自5、6、7、8和9；
M1是键或M’；
M和M’独立地选自-C(O)O-、-OC(O)-、-OC(O)-M”-C(O)O-、-C(O)N(R’)-、-P(O)(OR’)O-、-S-S-、芳基基团和杂芳基基团；
并且R2和R3独立地选自由H、C1-14烷基和C2-14烯基组成的组。
155.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R2是C8烷基。
156.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R3是C5烷基、C6烷基或C7烷基。
157.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R3是C8烷基。
158.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R3是C9烷基。
159.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中m是5。
160.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中m是7。
161.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中m是9。
162.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中各R5是H。
163.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中各R6是H。
164.根据权利要求1中任一项所述的化合物，其中所述化合物是化合物18：
165.一种纳米粒子组合物，其包含含根据前述权利要求中任一项所述的化合物的脂质组分。
166.根据权利要求165所述的纳米粒子组合物，其中所述脂质组分还包含磷脂。
167.根据前述权利要求中任一项所述的纳米粒子组合物，其中所述磷脂选自由以下组成的组：1,2-二亚油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DLPC)、1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-磷酸胆碱(DMPC)、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DOPC)、1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DPPC)、1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DSPC)、1,2-双十一烷酰基-sn-甘油-磷酸胆碱(DUPC)、1-棕榈酰基-2-油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(POPC)、1,2-二-O-十八碳烯基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(18:0 Diether PC)、1-油酰基-2-胆固醇基半琥珀酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(OChemsPC)、1-十六烷基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(C16 Lyso PC)、1,2-二亚麻酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱、1,2-二花生四烯酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱、1,2-双二十二碳六烯酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DOPE)、1,2-二植烷酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(ME 16.0 PE)、1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、1,2-二亚油酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、1,2-二亚麻酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、1,
2-二花生四烯酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、1,2-双二十二碳六烯酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸-rac-(1-甘油)钠盐(DOPG)、二棕榈酰基磷脂酰甘油(DPPG)、棕榈酰基油酰基磷脂酰乙醇胺(POPE)、二硬脂酰基-磷脂酰-乙醇胺(DSPE)、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)、二肉豆蔻酰基磷酸乙醇胺(DMPE)、1-硬脂酰基-2-油酰基-硬脂酰乙醇胺(SOPE)、1-硬脂酰基-2-油酰基-磷脂酰胆碱(SOPC)、鞘磷脂、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酸、棕榈酰基油酰基磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰乙醇胺(LPE)以及其混合物。
168.根据前述权利要求中任一项所述的纳米粒子组合物，其中所述磷脂是DOPE。
169.根据前述权利要求中任一项所述的纳米粒子组合物，其中所述磷脂是DSPC。
170.根据前述权利要求中任一项所述的纳米粒子组合物，其中所述磷脂组分还包含结构性脂质。
171.根据前述权利要求中任一项所述的纳米粒子组合物，其中所述结构性脂质选自由以下组成的组：胆固醇、粪固醇、谷固醇、麦角固醇、菜油固醇、豆固醇、菜籽固醇、番茄碱、熊果酸、α-生育酚以及其混合物。
172.根据前述权利要求中任一项所述的纳米粒子组合物，其中所述结构性脂质是胆固醇。
173.根据前述权利要求中任一项所述的纳米粒子组合物，其中所述脂质组分还包含
PEG脂质。
174.根据前述权利要求中任一项所述的纳米粒子组合物，其中所述PEG脂质选自由以下组成的组：PEG改性的磷脂酰乙醇胺、PEG改性的磷脂酸、PEG改性的神经酰胺、PEG改性的二烷基胺、PEG改性的二酰基甘油、PEG改性的二烷基甘油以及其混合物。
175.根据前述权利要求中任一项所述的纳米粒子组合物，其中所述PEG脂质包括大小是约1000Da至约20kDa的PEG部分。
176.根据前述权利要求中任一项所述的纳米粒子组合物，其中所述PEG脂质选自
其中p是1至40。
177.根据前述权利要求中任一项所述的纳米粒子组合物，其中所述脂质组分还包含阳离子性和/或可离子化脂质，其选自由以下组成的组：3-(双十二烷基氨基)-N1,N1,4-三-十二烷基-1-哌嗪乙胺(KL10)、N1-[2-(双十二烷基氨基)乙基]-N1,N4,N4-三-十二烷基-1,4-哌嗪二乙胺(KL22)、14,25-双十三烷基-15,18,21,24-四氮杂-三十八烷(KL25)、1,2-二亚油基氧基-N,N-二甲基氨基丙烷(DLin-DMA)、2,2-二亚油基-4-二甲基氨基甲基-[1,3]-二氧杂环戊烷(DLin-K-DMA)、4-(二甲基氨基)丁酸三十七碳-6,9,28,31-四烯-19-基酯(DLin-MC3-DMA)、2,2-二亚油基-4-(2-二甲基氨基乙基)-[1,3]-二氧杂环戊烷(DLin-KC2-DMA)、1,2-二油氧基-N,N-二甲基氨基丙烷(DODMA)、2-({8-[(3β)-胆固-5-烯-3-基氧基]辛基}氧基)-N,N-二甲基-3-[(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基氧基]丙-1-胺(Octyl-
CLinDMA)、(2R)-2-({8-[(3β)-胆固-5-烯-3-基氧基]辛基}氧基)-N,N-二甲基-3-[(9Z,
12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基氧基]丙-1-胺(Octyl-CLinDMA(2R))以及(2S)-2-({8-[(3β)-胆固-5-烯-3-基氧基]辛基}氧基)-N,N-二甲基-3-[(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基氧基]丙-1-胺(Octyl-CLinDMA(2S))。
178.根据前述权利要求中任一项所述的纳米粒子组合物，其中所述脂质组分还包含磷脂、结构性脂质和PEG脂质。
179.根据前述权利要求中任一项所述的纳米粒子组合物，其中所述脂质组分包含约
30mol％至约60mol％所述化合物、约0mol％至约30mol％磷脂、约18.5mol％至约48.5mol％结构性脂质以及约0mol％至约10mol％PEG脂质。
180.根据前述权利要求中任一项所述的纳米粒子组合物，其中所述脂质组分包含约
50mol％所述化合物、约10mol％磷脂、约38.5mol％结构性脂质以及约1.5mol％PEG脂质。
181.根据前述权利要求中任一项所述的纳米粒子组合物，其还包含治疗剂和/或预防剂。
182.根据前述权利要求中任一项所述的纳米粒子组合物，其中所述治疗剂和/或预防剂是能够引起免疫响应的疫苗或化合物。
183.根据前述权利要求中任一项所述的纳米粒子组合物，其中所述治疗剂和/或预防剂是核酸。
184.根据前述权利要求中任一项所述的纳米粒子组合物，其中所述治疗剂和/或预防剂是核糖核酸(RNA)。
185.根据前述权利要求中任一项所述的纳米粒子组合物，其中所述RNA选自由以下组成的组：小干扰RNA(siRNA)、不对称干扰RNA(aiRNA)、微RNA(miRNA)、Dicer-底物RNA(dsRNA)、小发夹RNA(shRNA)、信使RNA(mRNA)以及其混合物。
186.根据前述权利要求中任一项所述的纳米粒子组合物，其中所述RNA是mRNA。
187.根据前述权利要求中任一项所述的纳米粒子组合物，其中所述mRNA包括以下一种或多种：茎环、链终止核苷、聚腺苷酸序列、聚腺苷酸化信号和/或5’帽结构。
188.根据前述权利要求中任一项所述的纳米粒子组合物，其中所述治疗剂和/或预防剂的包封效率是至少50％。
189.根据前述权利要求中任一项所述的纳米粒子组合物，其中所述治疗剂和/或预防剂的包封效率是至少80％。
190.根据前述权利要求中任一项所述的纳米粒子组合物，其中所述治疗剂和/或预防剂的包封效率是至少90％。
191.根据前述权利要求中任一项所述的纳米粒子组合物，其中所述脂质组分与所述治疗剂和/或预防剂的wt/wt比率是约10:1至约60:1。
192.根据前述权利要求中任一项所述的纳米粒子组合物，其中所述脂质组分与所述治疗剂和/或预防剂的wt/wt比率是约20:1。
193.根据前述权利要求中任一项所述的纳米粒子组合物，其中所述N:P比率是约2:1至约30:1。
194.根据前述权利要求中任一项所述的纳米粒子组合物，其中所述N:P比率是约5.67:
1。
195.根据前述权利要求中任一项所述的纳米粒子组合物，其中所述纳米粒子组合物的平均大小是约70nm至约100nm。
196.根据前述权利要求中任一项所述的纳米粒子组合物，其中所述纳米粒子组合物的多分散指数是约0.10至约0.20。
197.根据前述权利要求中任一项所述的纳米粒子组合物，其中所述纳米粒子组合物的ζ电势是约-10mV至约+20mV。
198.根据前述权利要求中任一项所述的纳米粒子组合物，其中所述纳米粒子的表面
pKa是约6.6。
199.根据前述权利要求中任一项所述的纳米粒子组合物，其中所述纳米粒子的内体逃逸效率是约15％。
200.一种药物组合物，其包含根据前述权利要求中任一项所述的纳米粒子组合物和药学上可接受的载体。
201.一种将治疗剂和/或预防剂递送至哺乳动物细胞的方法，所述方法包括向受试者施用根据前述权利要求中任一项所述的纳米粒子组合物，所述施用包括使所述细胞与所述纳米粒子组合物接触，由此将所述治疗剂及/或预防剂递送至所述细胞。
202.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述哺乳动物细胞是在哺乳动物体内。
203.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述哺乳动物是人。
204.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述纳米粒子组合物经静脉内、肌肉内、皮内、皮下、鼻内或通过吸入施用。
205.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中将约0.01mg/kg至约10mg/kg剂量的所述治疗剂和/或预防剂施用给所述哺乳动物。
206.一种在哺乳动物细胞中产生所关注多肽的方法，所述方法包括使所述细胞与根据前述权利要求中任一项所述的纳米粒子组合物接触，其中所述治疗剂和/或预防剂是mRNA，且其中所述mRNA编码所述所关注多肽，由此所述mRNA能够在所述细胞中翻译以产生所述所关注多肽。
207.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述哺乳动物细胞是在哺乳动物体内。
208.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述哺乳动物是人。
209.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述纳米粒子组合物经静脉内、肌肉内、皮内、皮下、鼻内或通过吸入施用。
210.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中将约0.001mg/kg至约10mg/kg剂量的所述mRNA施用给所述哺乳动物。
211.一种治疗有需要哺乳动物的疾病或病症的方法，所述方法包括向所述哺乳动物施用治疗有效量的根据前述权利要求中任一项所述的纳米粒子组合物。
212.根据前述权利要求中任一项所述的纳米粒子组合物，其用于治疗有需要哺乳动物的疾病或病症。
213.根据前述权利要求中任一项所述的纳米粒子组合物，其用作供治疗有需要哺乳动物的疾病或病症用的药剂。
214.根据前述权利要求中任一项所述的纳米粒子组合物在制造用于治疗有需要哺乳
动物的疾病或病症的药剂中的用途。
215.根据前述权利要求中任一项所述使用的方法、用途或纳米粒子组合物，其中所述疾病或病症以功能失常或异常的蛋白质或多肽活性为特征。
216.根据前述权利要求中任一项所述使用的方法、用途或纳米粒子组合物，其中所述疾病或病症选自由以下组成的组：感染性疾病、癌症和增生性疾病、遗传性疾病、自体免疫性疾病、糖尿病、神经退化性疾病、心血管和肾血管疾病以及代谢性疾病。
217.根据前述权利要求中任一项所述使用的方法、用途或纳米粒子组合物，其中所述哺乳动物是人。
218.根据前述权利要求中任一项所述使用的方法、用途或纳米粒子组合物，其中所述纳米粒子组合物经静脉内、肌肉内、皮内、皮下、鼻内或通过吸入施用。
219.根据前述权利要求中任一项所述使用的方法、用途或纳米粒子组合物，其中所述纳米粒子组合物是皮下施用的。
220.根据前述权利要求中任一项所述使用的方法、用途或纳米粒子组合物，其中将约
0.001mg/kg至约10mg/kg剂量的所述治疗剂和/或预防剂施用给所述哺乳动物，或其中所述药剂包含0.001mg/kg至约10mg/kg的所述治疗剂和/或预防剂。
221.一种将治疗剂和/或预防剂特异性递送至哺乳动物器官的方法，所述方法包括向哺乳动物施用根据前述权利要求中任一项所述的纳米粒子组合物，所述施用包括使所述哺乳动物器官与所述纳米粒子组合物接触，由此将所述治疗剂及/或预防剂递送至所述器官。
222.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述哺乳动物是人。
223.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述纳米粒子组合物经静脉内、肌肉内、皮内、皮下、鼻内或通过吸入施用。
224.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中将约0.001mg/kg至约10mg/kg剂量的所述治疗剂和/或预防剂施用给所述哺乳动物。
225.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其还包括在所述接触或施用步骤之前用一种或多种其它化合物预治疗所述哺乳动物，其中预治疗包括将所述一种或多种其它化合物施用给所述哺乳动物。
226.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在所述接触或施用步骤之前两周或更短时间、一周或更短时间、24小时或更短时间，对所述哺乳动物进行预治疗。
227.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在所述接触或施用步骤之前约一小时，对所述哺乳动物进行预治疗。
228.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述一种或多种其它化合物选自由以下组成的组：抗炎化合物、类固醇、他汀类药物、雌二醇、BTK抑制剂、S1P1激动剂、糖皮质激素受体调节剂(GRM)以及抗组织胺。
229.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述一种或多种其它化合物选自由以下组成的组：地塞米松、甲氨蝶呤、对乙酰氨基酚、H1受体阻断剂和H2受体阻断剂。

说明书全文

用于细胞内递送治疗剂的化合物和组合物

[0001] 相关申请

[0002] 本申请要求2017年3月15日提交的美国临时申请号62/471,937；和2017年3月22日提交的62/475,140的优先权和权益，各案的完整内容以引用的方式并入本文中。

[0003] 以引用的方式并入序列表

[0004] 本申请是与电子格式的序列表一起提交的。序列表是以题为“MRNA032001WOSequenceListing.txt”的文件提供，该文件于2018年2月26日创建，大小是
715比特。所述电子格式序列表的信息是以引用的方式整体并入本文中。

技术领域

[0005] 本公开提供新型化合物、包含这些化合物的组合物以及涉及脂质纳米粒子组合物将一种或多种治疗剂和/或预防剂递送至哺乳动物细胞或器官和/或在哺乳动物细胞或器官中产生多肽的方法。除新型脂质外，本公开的脂质纳米粒子组合物还可以包括呈特定比例的一种或多种阳离子性和/或可离子化氨基脂质、包括多不饱和脂质在内的磷脂、PEG脂质、结构性脂质、和/或治疗剂和/或预防剂。

[0006] 发明背景

[0007] 生物活性物质如小分子药物、蛋白质和核酸的有效靶向递送提出了一个持久的医学难题。确切地说，将核酸递送至细胞因这些物种的相对不稳定性和低细胞渗透性而变得困难。因此，需要开发有助于将治疗剂和/或预防剂如核酸递送至细胞的方法和组合物。

[0008] 经证实，含脂质的纳米粒子组合物、脂质体和脂质体复合物(lipoplex)作为运输媒介物，有效地将生物活性物质如小分子药物、蛋白质和核酸运送至细胞和/或细胞内隔室中。这些组合物一般包含一种或多种“阳离子性”和/或氨基(可离子化)脂质、包括多不饱和脂质在内的磷脂、结构性脂质(例如固醇)和/或含聚乙二醇的脂质(PEG脂质)。阳离子性和/或可离子化脂质包括例如可容易地质子化的含胺脂质。尽管已经展示多种此类含脂质的纳米粒子组合物，但安全性、功效和特异性仍有待改良。

发明内容

[0009] 本公开提供新型化合物和涉及这些化合物的方法。

[0010] 本公开第一方面涉及式(I)的化合物：

[0011] 或其N-氧化物，

[0012] 或其盐或异构体，其中：

[0013] R1选自由以下组成的组：C5-30烷基、C5-20烯基、-R*YR”、-YR”和-R”M’R’；

[0014] R2和R3独立地选自由以下组成的组：H、C1-14烷基、C2-14烯基、-R*YR”、-YR”和-R*OR”，或R2和R3连同其所连接的原子一起形成杂环或碳环；

[0015] R4选自由以下组成的组：氢、C3-6碳环、-(CH2)nQ、-(CH2)nCHQR、-(CH2)oC(R10)2(CH2)n-oQ、-CHQR、-CQ(R)2和未被取代的C1-6烷基，其中Q选自碳环、杂环、-OR、-O(CH2)nN(R)2、-C(O)OR、-OC(O)R、-CX3、-CX2H、-CXH2、-CN、-N(R)2、-C(O)N(R)2、-N(R)C(O)R、-N(R)S(O)2R、-N(R)C(O)N(R)2、-N(R)C(S)N(R)2、-N(R)R8、-N(R)S(O)2R8、-O(CH2)nOR、-N(R)C(＝NR9)N(R)2、-N(R)C(＝CHR9)N(R)2、-OC(O)N(R)2、-N(R)C(O)OR、-N(OR)C(O)R、-N(OR)S(O)2R、-N(OR)C(O)OR、-N(OR)C(O)N(R)2、-N(OR)C(S)N(R)2、-N(OR)C(＝NR9)N(R)2、-N(OR)C(＝CHR9)N(R)2、-C(＝NR9)N(R)2、-C(＝NR9)R、-C(O)N(R)OR和–C(R)N(R)2C(O)OR，各o独立地选自1、2、3和4，并且各n独立地选自1、2、3、4和5；

[0016] 各R5独立地选自由OH、C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；

[0017] 各R6独立地选自由OH、C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；

[0018] M和M’独立地选自-C(O)O-、-OC(O)-、-OC(O)-M”-C(O)O-、-C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)-、-C(O)-、-C(S)-、-C(S)S-、-SC(S)-、-CH(OH)-、-P(O)(OR’)O-、-S(O)2-、-S-S-、芳基和杂芳基，其中M”是键、C1-13烷基或C2-13烯基；

[0019] R7选自由C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；

[0020] R8选自由C3-6碳环和杂环组成的组；

[0021] R9选自由以下组成的组：H、CN、NO2、C1-6烷基、-OR、-S(O)2R、-S(O)2N(R)2、C2-6烯基、C3-6碳环和杂环；

[0022] R10选自由以下组成的组：H、OH、C1-3烷基和C2-3烯基；

[0023] 各R独立地选自由C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；

[0024] 各R’独立地选自由以下组成的组：C1-18烷基、C2-18烯基、-R*YR”、-YR”、(CH2)qOR*和H，

[0025] 并且各q独立地选自1、2和3；

[0026] 各R”独立地选自由C3-15烷基和C3-15烯基组成的组；

[0027] 各R*独立地选自由C1-12烷基和C2-12烯基组成的组；

[0028] 各Y独立地是C3-6碳环；

[0029] 各X独立地选自由以下组成的组：F、Cl、Br和I；并且

[0030] m选自5、6、7、8、9、10、11、12和13。

[0031] 本公开另一方面涉及式(III)的化合物：

[0032] 或其N-氧化物，

[0033] 或其盐或异构体，其中

[0034] R1选自由以下组成的组：C5-30烷基、C5-20烯基、-R*YR”、-YR”和-R”M’R’；

[0035] R2和R3独立地选自由以下组成的组：H、C1-14烷基、C2-14烯基、-R*YR”、-YR”和-R*OR”，或R2和R3连同其所连接的原子一起形成杂环或碳环；

[0036] R4选自由以下组成的组：氢、C3-6碳环、-(CH2)nQ、-(CH2)nCHQR、-(CH2)oC(R10)2(CH2)n-oQ、-CHQR、-CQ(R)2和未被取代的C1-6烷基，其中Q选自碳环、杂环、-OR、-O(CH2)nN(R)2、-C(O)OR、-OC(O)R、-CX3、-CX2H、-CXH2、-CN、-N(R)2、-C(O)N(R)2、-N(R)C(O)R、-N(R)S(O)2R、-N(R)C(O)N(R)2、-N(R)C(S)N(R)2、N(R)R8、-N(R)S(O)2R8、-O(CH2)nOR、-N(R)C(＝NR9)N(R)2、-N(R)C(＝CHR9)N(R)2、-OC(O)N(R)2、-N(R)C(O)OR、-N(OR)C(O)R、-N(OR)S(O)2R、-N(OR)C(O)OR、-N(OR)C(O)N(R)2、-N(OR)C(S)N(R)2、-N(OR)C(＝NR9)N(R)2、-N(OR)C(＝CHR9)N(R)2、-C(＝NR9)N(R)2、-C(＝NR9)R、-C(O)N(R)OR和–C(R)N(R)2C(O)OR，各o独立地选自1、2、3和4，并且各n独立地选自1、2、3、4和5；

[0037] Rx选自由以下组成的组：C1-6烷基、C2-6烯基、-(CH2)rOH和-(CH2)rNR2，

[0038] 其中r选自1、2、3、4、5和6；

[0039] 各R5独立地选自由OH、C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；

[0040] 各R6独立地选自由OH、C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；

[0041] M和M’独立地选自-C(O)O-、-OC(O)-、-OC(O)-M”-C(O)O-、-C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)-、-C(O)-、-C(S)-、-C(S)S-、-SC(S)-、-CH(OH)-、-P(O)(OR’)O-、-S(O)2-、-S-S-、芳基和杂芳基，其中M”是键、C1-13烷基或C2-13烯基；

[0042] R7选自由C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；

[0043] R8选自由C3-6碳环和杂环组成的组；

[0044] R9选自由以下组成的组：H、CN、NO2、C1-6烷基、-OR、-S(O)2R、-S(O)2N(R)2、C2-6烯基、C3-6碳环和杂环；

[0045] R10选自由以下组成的组：H、OH、C1-3烷基和C2-3烯基；

[0046] 各R独立地选自由以下组成的组：C1-3烷基、C2-3烯基、(CH2)qOR*和H，

[0047] 并且各q独立地选自1、2和3；

[0048] 各R’独立地选自由以下组成的组：C1-18烷基、C2-18烯基、-R*YR”、-YR”和H；

[0049] 各R”独立地选自由C3-15烷基和C3-15烯基组成的组；

[0050] 各R*独立地选自由C1-12烷基和C2-12烯基组成的组；

[0051] 各Y独立地是C3-6碳环；

[0052] 各X独立地选自由以下组成的组：F、Cl、Br和I；并且

[0053] m选自5、6、7、8、9、10、11、12和13。

[0054] 在一些实施方案中，一小组式(I)的化合物包括这样一些化合物，在这些化合物中，当R4是-(CH2)nQ、-(CH2)nCHQR、–CHQR或-CQ(R)2时，则(i)在n是1、2、3、4或5时，Q不是-N(R)2；，或(ii)在n是1或2时，Q不是5、6或7元杂环烷基。

[0055] 例如，当R4是-(CH2)nQ、-(CH2)nCHQR、-(CH2)oC(R10)2(CH2)n-oQ、–CHQR或-CQ(R)2时，则(i)在n是1、2、3、4或5时，Q不是-N(R)2；或(ii)在n是1或2时，Q不是5、6或7元杂环烷基。

[0056] 在另一个实施方案中，另一小组式(I)的化合物包括这样一些化合物，在这些化合物中

[0057] R1选自由以下组成的组：C5-30烷基、C5-20烯基、-R*YR”、-YR”和-R”M’R’；

[0058] R2和R3独立地选自由以下组成的组：H、C1-14烷基、C2-14烯基、-R*YR”、-YR”和-R*OR”，或R2和R3连同其所连接的原子一起形成杂环或碳环；

[0059] R4选自由以下组成的组：氢、C3-6碳环、-(CH2)nQ、-(CH2)nCHQR、-(CH2)oC(R10)2(CH2)n-oQ、-CHQR、-CQ(R)2和未被取代的C1-6烷基，其中Q选自C3-6碳环、具有一个或多个选自N、O和S的杂原子的5至14元杂芳基、-OR、-O(CH2)nN(R)2、-C(O)OR、-OC(O)R、-CX3、-CX2H、-CXH2、-CN、-C(O)N(R)2、-N(R)C(O)R、-N(R)S(O)2R、-N(R)C(O)N(R)2、-N(R)C(S)N(R)2、-CRN(R)2C(O)OR、-N(R)R8、-N(R)S(O)2R8、-O(CH2)nOR、-N(R)C(＝NR9)N(R)2、-N(R)C(＝CHR9)N(R)2、-OC(O)N(R)2、-N(R)C(O)OR、-N(OR)C(O)R、-N(OR)S(O)2R、-N(OR)C(O)OR、-N(OR)C(O)N(R)2、-N(OR)C(S)N(R)2、-N(OR)C(＝NR9)N(R)2、-N(OR)C(＝CHR9)N(R)2、-C(＝NR9)N(R)2、-C(＝NR9)R、-C(O)N(R)OR以及具有一个或多个选自N、O和S的杂原子的5至14元杂环烷基，其被一个或多个选自以下的取代基取代：氧代(＝O)、OH、氨基、单烷基或二烷基氨基和C1-3烷基，各o独立地选自1、2、3和4，并且各n独立地选自1、2、3、4和5；

[0060] 各R5独立地选自由OH、C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；

[0061] 各R6独立地选自由OH、C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；

[0062] M和M’独立地选自-C(O)O-、-OC(O)-、-OC(O)-M”-C(O)O-、-C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)-、-C(O)-、-C(S)-、-C(S)S-、-SC(S)-、-CH(OH)-、-P(O)(OR’)O-、-S(O)2-、-S-S-、芳基和杂芳基，其中M”是键、C1-13烷基或C2-13烯基；

[0063] R7选自由C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；

[0064] R8选自由C3-6碳环和杂环组成的组；

[0065] R9选自由以下组成的组：H、CN、NO2、C1-6烷基、-OR、-S(O)2R、-S(O)2N(R)2、C2-6烯基、C3-6碳环和杂环；

[0066] R10选自由以下组成的组：H、OH、C1-3烷基和C2-3烯基；

[0067] 各R独立地选自由以下组成的组：C1-3烷基、C2-3烯基、(CH2)qOR*和H；

[0068] 各R’独立地选自由以下组成的组：C1-18烷基、C2-18烯基、-R*YR”、-YR”和H，[0069] 并且各q独立地选自1、2和3；

[0070] 各R”独立地选自由C3-15烷基和C3-15烯基组成的组；

[0071] 各R*独立地选自由C1-12烷基和C2-12烯基组成的组；

[0072] 各Y独立地是C3-6碳环；

[0073] 各X独立地选自由以下组成的组：F、Cl、Br和I；并且

[0074] m选自5、6、7、8、9、10、11、12和13，

[0075] 或其N-氧化物，或其盐或异构体。

[0076] 在又另一个实施方案中，另一小组式(I)的化合物包括这样一些化合物，在这些化合物中

[0077] R1选自由以下组成的组：C5-30烷基、C5-20烯基、-R*YR”、-YR”和-R”M’R’；

[0078] R2和R3独立地选自由以下组成的组：H、C1-14烷基、C2-14烯基、-R*YR”、-YR”和-R*OR”，或R2和R3连同其所连接的原子一起形成杂环或碳环；

[0079] R4选自由以下组成的组：氢、C3-6碳环、-(CH2)nQ、-(CH2)nCHQR、-(CH2)oC(R10)2(CH2)n-oQ、-CHQR、-CQ(R)2和未被取代的C1-6烷基，其中Q选自C3-6碳环、5至14元杂环具有一个或多个选自N、O和S的杂原子、-OR、-O(CH2)nN(R)2、-C(O)OR、-OC(O)R、-CX3、-CX2H、-CXH2、-CN、-C(O)N(R)2、-N(R)C(O)R、-N(R)S(O)2R、-N(R)C(O)N(R)2、-N(R)C(S)N(R)2、-CRN(R)2C(O)OR、-N(R)R8、-N(R)S(O)2R8、-O(CH2)nOR、-N(R)C(＝NR9)N(R)2、-N(R)C(＝CHR9)N(R)2、-OC(O)N(R)2、-N(R)C(O)OR、-N(OR)C(O)R、-N(OR)S(O)2R、-N(OR)C(O)OR、-N(OR)C(O)N(R)2、-N(OR)C(S)N(R)2、-N(OR)C(＝NR9)N(R)2、-N(OR)C(＝CHR9)N(R)2、-C(＝NR9)R、-C(O)N(R)OR和-C(＝NR9)N(R)2，各o独立地选自1、2、3和4，并且各n独立地选自1、2、3、4和5；并且当Q是5至14元杂环且(i)R4是-(CH2)nQ，其中n是1或2，或(ii)R4是-(CH2)nCHQR，其中n是1，或(iii)R4是-CHQR和-CQ(R)2时，则Q是5至14元杂芳基或8至14元杂环烷基；

[0080] 各R5独立地选自由OH、C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；

[0081] 各R6独立地选自由OH、C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；

[0082] M和M’独立地选自-C(O)O-、-OC(O)-、-OC(O)-M”-C(O)O-、-C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)-、-C(O)-、-C(S)-、-C(S)S-、-SC(S)-、-CH(OH)-、-P(O)(OR’)O-、-S(O)2-、-S-S-、芳基和杂芳基，其中M”是键、C1-13烷基或C2-13烯基；

[0083] R7选自由C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；

[0084] R8选自由C3-6碳环和杂环组成的组；

[0085] R9选自由以下组成的组：H、CN、NO2、C1-6烷基、-OR、-S(O)2R、-S(O)2N(R)2、C2-6烯基、C3-6碳环和杂环；

[0086] R10选自由以下组成的组：H、OH、C1-3烷基和C2-3烯基；

[0087] 各R独立地选自由以下组成的组：C1-3烷基、C2-3烯基、(CH2)qOR*和H，

[0088] 并且各q独立地选自1、2和3；

[0089] 各R’独立地选自由以下组成的组：C1-18烷基、C2-18烯基、-R*YR”、-YR”和H；

[0090] 各R”独立地选自由C3-15烷基和C3-15烯基组成的组；

[0091] 各R*独立地选自由C1-12烷基和C2-12烯基组成的组；

[0092] 各Y独立地是C3-6碳环；

[0093] 各X独立地选自由以下组成的组：F、Cl、Br和I；并且

[0094] m选自5、6、7、8、9、10、11、12和13，

[0095] 或其N-氧化物，或其盐或异构体。

[0096] 在又另一个实施方案中，另一小组式(I)的化合物包括这样一些化合物，在这些化合物中

[0097] R1选自由以下组成的组：C5-30烷基、C5-20烯基、-R*YR”、-YR”和-R”M’R’；

[0098] R2和R3独立地选自由以下组成的组：H、C1-14烷基、C2-14烯基、-R*YR”、-YR”和-R*OR”，或R2和R3连同其所连接的原子一起形成杂环或碳环；

[0099] R4选自由以下组成的组：氢、C3-6碳环、-(CH2)nQ、-(CH2)nCHQR、-(CH2)oC(R10)2(CH2)n-oQ、-CHQR、-CQ(R)2和未被取代的C1-6烷基，其中Q选自C3-6碳环、具有一个或多个选自N、O和S的杂原子的5至14元杂芳基、-OR、-O(CH2)nN(R)2、-C(O)OR、-OC(O)R、-CX3、-CX2H、-CXH2、-CN、-C(O)N(R)2、-N(R)C(O)R、-N(R)S(O)2R、-N(R)C(O)N(R)2、-N(R)C(S)N(R)2、-CRN(R)2C(O)OR、-N(R)R8、-N(R)S(O)2R8、-O(CH2)nOR、-N(R)C(＝NR9)N(R)2、-N(R)C(＝CHR9)N(R)2、-OC(O)N(R)2、-N(R)C(O)OR、-N(OR)C(O)R、-N(OR)S(O)2R、-N(OR)C(O)OR、-N(OR)C(O)N(R)2、-N(OR)C(S)N(R)2、-N(OR)C(＝NR9)N(R)2、-N(OR)C(＝CHR9)N(R)2、-C(＝NR9)R、-C(O)N(R)OR，各o独立地选自1、2、3和4和-C(＝NR9)N(R)2，并且各n独立地选自1、2、3、4和5；

[0100] 各R5独立地选自由OH、C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；

[0101] 各R6独立地选自由OH、C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；

[0102] M和M’独立地选自-C(O)O-、-OC(O)-、-OC(O)-M”-C(O)O-、-C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)-、-C(O)-、-C(S)-、-C(S)S-、-SC(S)-、-CH(OH)-、-P(O)(OR’)O-、-S(O)2-、-S-S-、芳基和杂芳基，其中M”是键、C1-13烷基或C2-13烯基；

[0103] R7选自由C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；

[0104] R8选自由C3-6碳环和杂环组成的组；

[0105] R9选自由以下组成的组：H、CN、NO2、C1-6烷基、-OR、-S(O)2R、-S(O)2N(R)2、C2-6烯基、C3-6碳环和杂环；

[0106] R10选自由以下组成的组：H、OH、C1-3烷基和C2-3烯基，

[0107] 各R独立地选自由以下组成的组：C1-3烷基、C2-3烯基、(CH2)qOR*和H，

[0108] 并且各q独立地选自1、2和3；

[0109] 各R’独立地选自由以下组成的组：C1-18烷基、C2-18烯基、-R*YR”、-YR”和H；

[0110] 各R”独立地选自由C3-15烷基和C3-15烯基组成的组；

[0111] 各R*独立地选自由C1-12烷基和C2-12烯基组成的组；

[0112] 各Y独立地是C3-6碳环；

[0113] 各X独立地选自由以下组成的组：F、Cl、Br和I；并且

[0114] m选自5、6、7、8、9、10、11、12和13，

[0115] 或其N-氧化物，或其盐或异构体。

[0116] 在又另一个实施方案中，另一小组式(I)的化合物包括这样一些化合物，在这些化合物中

[0117] R1选自由以下组成的组：C5-30烷基、C5-20烯基、-R*YR”、-YR”和-R”M’R’；

[0118] R2和R3独立地选自由以下组成的组：H、C1-14烷基、C2-14烯基、-R*YR”、-YR”和-R*OR”，或R2和R3连同其所连接的原子一起形成杂环或碳环；

[0119] R4选自由以下组成的组：氢、C3-6碳环、-(CH2)nQ、-(CH2)nCHQR、-(CH2)oC(R10)2(CH2)n-oQ、-CHQR、-CQ(R)2和未被取代的C1-6烷基，其中Q选自碳环、-OR、-O(CH2)nN(R)2、-C(O)OR、-OC(O)R、-CX3、-CX2H、-CXH2、-CN、-C(O)N(R)2、-N(R)C(O)R、-N(R)S(O)2R、-N(R)C(O)N(R)2、-N(R)C(S)N(R)2、N(R)R8、-N(R)S(O)2R8、-O(CH2)nOR、-N(R)C(＝NR9)N(R)2、-N(R)C(＝CHR9)N(R)2、-OC(O)N(R)2、-N(R)C(O)OR、-N(OR)C(O)R、-N(OR)S(O)2R、-N(OR)C(O)OR、-N(OR)C(O)N(R)2、-N(OR)C(S)N(R)2、-N(OR)C(＝NR9)N(R)2、-N(OR)C(＝CHR9)N(R)2、-C(＝NR9)N(R)2、-C(＝NR9)R、-C(O)N(R)OR和–C(R)N(R)2C(O)OR，各o独立地选自1、2、3和4，并且各n独立地选自1、2、3、4和5；

[0120] 各R5独立地选自由以下组成的组：OH、C1-3烷基、C2-3烯基和H；

[0121] 各R6独立地选自由以下组成的组：OH、C1-3烷基、C2-3烯基和H；

[0122] M和M’独立地选自-C(O)O-、-OC(O)-、-OC(O)-M”-C(O)O-、-C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)-、-C(O)-、-C(S)-、-C(S)S-、-SC(S)-、-CH(OH)-、-P(O)(OR’)O-、-S(O)2-、-S-S-、芳基和杂芳基，其中M”是键、C1-13烷基或C2-13烯基；

[0123] R7选自由C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；

[0124] R8选自由C3-6碳环和杂环组成的组；

[0125] R9选自由以下组成的组：H、CN、NO2、C1-6烷基、-OR、-S(O)2R、-S(O)2N(R)2、C2-6烯基、C3-6碳环和杂环；

[0126] R10选自由以下组成的组：H、OH、C1-3烷基和C2-3烯基；

[0127] 各R独立地选自由C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；

[0128] 各R’独立地选自由以下组成的组：C1-18烷基、C2-18烯基、-R*YR”、-YR”、(CH2)qOR*和H，

[0129] 并且各q独立地选自1、2和3；

[0130] 各R”独立地选自由C3-15烷基和C3-15烯基组成的组；

[0131] 各R*独立地选自由C1-12烷基和C2-12烯基组成的组；

[0132] 各Y独立地是C3-6碳环；

[0133] 各X独立地选自由以下组成的组：F、Cl、Br和I；并且

[0134] m选自5、6、7、8、9、10、11、12和13。

[0135] 在又另一个实施方案中，另一小组式(I)的化合物包括这样一些化合物，在这些化合物中

[0136] R1选自由以下组成的组：C5-30烷基、C5-20烯基、-R*YR”、-YR”和-R”M’R’；

[0137] R2和R3独立地选自由以下组成的组：H、C2-14烷基、C2-14烯基、-R*YR”、-YR”和-R*OR”，或R2和R3连同其所连接的原子一起形成杂环或碳环；

[0138] R4是-(CH2)nQ或-(CH2)nCHQR，其中Q是-N(R)2，并且n选自3、4和5；

[0139] 各R5独立地选自由C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；

[0140] 各R6独立地选自由C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；

[0141] M和M’独立地选自-C(O)O-、-OC(O)-、-OC(O)-M”-C(O)O-、-C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)-、-C(O)-、-C(S)-、-C(S)S-、-SC(S)-、-CH(OH)-、-P(O)(OR’)O-、-S(O)2-、-S-S-、芳基和杂芳基，其中M”是键、C1-13烷基或C2-13烯基；

[0142] R7选自由C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；

[0143] 各R独立地选自由C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；

[0144] 各R’独立地选自由以下组成的组：C1-18烷基、C2-18烯基、-R*YR”、-YR”和H；

[0145] 各R”独立地选自由C3-15烷基和C3-15烯基组成的组；

[0146] 各R*独立地选自由C1-12烷基和C1-12烯基组成的组；

[0147] 各Y独立地是C3-6碳环；

[0148] 各X独立地选自由以下组成的组：F、Cl、Br和I；并且

[0149] m选自5、6、7、8、9、10、11、12和13，

[0150] 或其N-氧化物，或其盐或异构体。

[0151] 在又另一个实施方案中，另一小组式(I)的化合物包括这样一些化合物，在这些化合物中

[0152] R1选自由以下组成的组：C5-30烷基、C5-20烯基、-R*YR”、-YR”和-R”M’R’；

[0153] R2和R3独立地选自由以下组成的组：C1-14烷基、C2-14烯基、-R*YR”、-YR”和-R*OR”，或R2和R3连同其所连接的原子一起形成杂环或碳环；

[0154] R4选自由以下组成的组：-(CH2)nQ、-(CH2)nCHQR、-CHQR和-CQ(R)2，其中Q是-N(R)2，并且n选自1、2、3、4和5；

[0155] 各R5独立地选自由C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；

[0156] 各R6独立地选自由C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；

[0157] M和M’独立地选自-C(O)O-、-OC(O)-、-OC(O)-M”-C(O)O-、-C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)-、-C(O)-、-C(S)-、-C(S)S-、-SC(S)-、-CH(OH)-、-P(O)(OR’)O-、-S(O)2-、-S-S-、芳基和杂芳基，其中M”是键、C1-13烷基或C2-13烯基；

[0158] R7选自由C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；

[0159] 各R独立地选自由C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；

[0160] 各R’独立地选自由以下组成的组：C1-18烷基、C2-18烯基、-R*YR”、-YR”和H；

[0161] 各R”独立地选自由C3-15烷基和C3-15烯基组成的组；

[0162] 各R*独立地选自由C1-12烷基和C1-12烯基组成的组；

[0163] 各Y独立地是C3-6碳环；

[0164] 各X独立地选自由以下组成的组：F、Cl、Br和I；并且

[0165] m选自5、6、7、8、9、10、11、12和13，

[0166] 或其N-氧化物，或其盐或异构体。

[0167] 在一些实施方案中，一小组式的化合物(III)包括这样一些化合物，在这些化合物中，当R4是-(CH2)nQ、-(CH2)nCHQR、–CHQR或-CQ(R)2时，则(i)在n是1、2、3、4或5时，Q不是-N(R)2；或(ii)在n是1或2时，Q不是5、6或7元杂环烷基。

[0168] 在另一个实施方案中，另一小组式的化合物(III)包括这样一些化合物，在这些化合物中

[0169] R1选自由以下组成的组：C5-30烷基、C5-20烯基、-R*YR”、-YR”和-R”M’R’；

[0170] R2和R3独立地选自由以下组成的组：H、C1-14烷基、C2-14烯基、-R*YR”、-YR”和-R*OR”，或R2和R3连同其所连接的原子一起形成杂环或碳环；

[0171] R4选自由以下组成的组：氢、C3-6碳环、-(CH2)nQ、-(CH2)nCHQR、-(CH2)oC(R10)2(CH2)n-oQ、-CHQR、-CQ(R)2和未被取代的C1-6烷基，其中Q选自C3-6碳环、具有一个或多个选自N、O和S的杂原子的5至14元杂芳基、-OR、-O(CH2)nN(R)2、-C(O)OR、-OC(O)R、-CX3、-CX2H、-CXH2、-CN、-C(O)N(R)2、-N(R)C(O)R、-N(R)S(O)2R、-N(R)C(O)N(R)2、-N(R)C(S)N(R)2、-CRN(R)2C(O)OR、-N(R)R8、-N(R)S(O)2R8、-O(CH2)nOR、-N(R)C(＝NR9)N(R)2、-N(R)C(＝CHR9)N(R)2、-OC(O)N(R)2、-N(R)C(O)OR、-N(OR)C(O)R、-N(OR)S(O)2R、-N(OR)C(O)OR、-N(OR)C(O)N(R)2、-N(OR)C(S)N(R)2、-N(OR)C(＝NR9)N(R)2、-N(OR)C(＝CHR9)N(R)2、-C(＝NR9)N(R)2、-C(＝NR9)R、-C(O)N(R)OR以及具有一个或多个选自N、O和S的杂原子的5至14元杂环烷基，其被一个或多个选自以下的取代基取代：氧代(＝O)、OH、氨基、单烷基或二烷基氨基和C1-3烷基，各o独立地选自1、2、3和4，并且各n独立地选自1、2、3、4和5；

[0172] Rx选自由以下组成的组：C1-6烷基、C2-6烯基、-(CH2)rOH和-(CH2)rNR2，

[0173] 其中r选自1、2、3、4、5和6；

[0174] 各R5独立地选自由OH、C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；

[0175] 各R6独立地选自由OH、C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；

[0176] M和M’独立地选自-C(O)O-、-OC(O)-、-OC(O)-M”-C(O)O-、-C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)-、-C(O)-、-C(S)-、-C(S)S-、-SC(S)-、-CH(OH)-、-P(O)(OR’)O-、-S(O)2-、-S-S-、芳基和杂芳基，其中M”是键、C1-13烷基或C2-13烯基；

[0177] R7选自由C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；

[0178] R8选自由C3-6碳环和杂环组成的组；

[0179] R9选自由以下组成的组：H、CN、NO2、C1-6烷基、-OR、-S(O)2R、-S(O)2N(R)2、C2-6烯基、C3-6碳环和杂环；

[0180] R10选自由以下组成的组：H、OH、C1-3烷基和C2-3烯基；

[0181] 各R独立地选自由以下组成的组：C1-3烷基、C2-3烯基、(CH2)qOR*和H；

[0182] 各R’独立地选自由以下组成的组：C1-18烷基、C2-18烯基、-R*YR”、-YR”和H，[0183] 并且各q独立地选自1、2和3；

[0184] 各R”独立地选自由C3-15烷基和C3-15烯基组成的组；

[0185] 各R*独立地选自由C1-12烷基和C2-12烯基组成的组；

[0186] 各Y独立地是C3-6碳环；

[0187] 各X独立地选自由以下组成的组：F、Cl、Br和I；并且

[0188] m选自5、6、7、8、9、10、11、12和13，

[0189] 或其N-氧化物，或其盐或异构体。

[0190] 在又另一个实施方案中，另一小组式的化合物(III)包括这样一些化合物，在这些化合物中

[0191] R1选自由以下组成的组：C5-30烷基、C5-20烯基、-R*YR”、-YR”和-R”M’R’；

[0192] R2和R3独立地选自由以下组成的组：H、C1-14烷基、C2-14烯基、-R*YR”、-YR”和-R*OR”，或R2和R3连同其所连接的原子一起形成杂环或碳环；

[0193] R4选自由以下组成的组：氢、C3-6碳环、-(CH2)nQ、-(CH2)nCHQR、-(CH2)oC(R10)2(CH2)n-oQ、-CHQR、-CQ(R)2和未被取代的C1-6烷基，其中Q选自C3-6碳环、5至14元杂环具有一个或多个选自N、O和S的杂原子、-OR、-O(CH2)nN(R)2、-C(O)OR、-OC(O)R、-CX3、-CX2H、-CXH2、-CN、-C(O)N(R)2、-N(R)C(O)R、-N(R)S(O)2R、-N(R)C(O)N(R)2、-N(R)C(S)N(R)2、-CRN(R)2C(O)OR、-N(R)R8、-N(R)S(O)2R8、-O(CH2)nOR、-N(R)C(＝NR9)N(R)2、-N(R)C(＝CHR9)N(R)2、-OC(O)N(R)2、-N(R)C(O)OR、-N(OR)C(O)R、-N(OR)S(O)2R、-N(OR)C(O)OR、-N(OR)C(O)N(R)2、-N(OR)C(S)N(R)2、-N(OR)C(＝NR9)N(R)2、-N(OR)C(＝CHR9)N(R)2、-C(＝NR9)R、-C(O)N(R)OR和-C(＝NR9)N(R)2，各o独立地选自1、2、3和4，并且各n独立地选自1、2、3、4和5；并且当Q是5至14元杂环且(i)R4是-(CH2)nQ，其中n是1或2，或(ii)R4是-(CH2)nCHQR，其中n是1，或(iii)R4是-CHQR和-CQ(R)2时，则Q是5至14元杂芳基或8至14元杂环烷基；

[0194] Rx选自由以下组成的组：C1-6烷基、C2-6烯基、-(CH2)rOH和-(CH2)rNR2，

[0195] 其中r选自1、2、3、4、5和6；

[0196] 各R5独立地选自由OH、C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；

[0197] 各R6独立地选自由OH、C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；

[0198] M和M’独立地选自-C(O)O-、-OC(O)-、-OC(O)-M”-C(O)O-、-C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)-、-C(O)-、-C(S)-、-C(S)S-、-SC(S)-、-CH(OH)-、-P(O)(OR’)O-、-S(O)2-、-S-S-、芳基和杂芳基，其中M”是键、C1-13烷基或C2-13烯基；

[0199] R7选自由C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；

[0200] R8选自由C3-6碳环和杂环组成的组；

[0201] R9选自由以下组成的组：H、CN、NO2、C1-6烷基、-OR、-S(O)2R、-S(O)2N(R)2、C2-6烯基、C3-6碳环和杂环；

[0202] R10选自由以下组成的组：H、OH、C1-3烷基和C2-3烯基；

[0203] 各R独立地选自由以下组成的组：C1-3烷基、C2-3烯基、(CH2)qOR*和H，

[0204] 并且各q独立地选自1、2和3；

[0205] 各R’独立地选自由以下组成的组：C1-18烷基、C2-18烯基、-R*YR”、-YR”和H；

[0206] 各R”独立地选自由C3-15烷基和C3-15烯基组成的组；

[0207] 各R*独立地选自由C1-12烷基和C2-12烯基组成的组；

[0208] 各Y独立地是C3-6碳环；

[0209] 各X独立地选自由以下组成的组：F、Cl、Br和I；并且

[0210] m选自5、6、7、8、9、10、11、12和13，

[0211] 或其N-氧化物，或其盐或异构体。

[0212] 在又另一个实施方案中，另一小组式的化合物(III)包括这样一些化合物，在这些化合物中

[0213] R1选自由以下组成的组：C5-30烷基、C5-20烯基、-R*YR”、-YR”和-R”M’R’；

[0214] R2和R3独立地选自由以下组成的组：H、C1-14烷基、C2-14烯基、-R*YR”、-YR”和-R*OR”，或R2和R3连同其所连接的原子一起形成杂环或碳环；

[0215] R4选自由以下组成的组：氢、C3-6碳环、-(CH2)nQ、-(CH2)nCHQR、-(CH2)oC(R10)2(CH2)n-oQ、-CHQR、-CQ(R)2和未被取代的C1-6烷基，其中Q选自C3-6碳环、具有一个或多个选自N、O和S的杂原子的5至14元杂芳基、-OR、-O(CH2)nN(R)2、-C(O)OR、-OC(O)R、-CX3、-CX2H、-CXH2、-CN、-C(O)N(R)2、-N(R)C(O)R、-N(R)S(O)2R、-N(R)C(O)N(R)2、-N(R)C(S)N(R)2、-CRN(R)2C(O)OR、-N(R)R8、-N(R)S(O)2R8、-O(CH2)nOR、-N(R)C(＝NR9)N(R)2、-N(R)C(＝CHR9)N(R)2、-OC(O)N(R)2、-N(R)C(O)OR、-N(OR)C(O)R、-N(OR)S(O)2R、-N(OR)C(O)OR、-N(OR)C(O)N(R)2、-N(OR)C(S)N(R)2、-N(OR)C(＝NR9)N(R)2、-N(OR)C(＝CHR9)N(R)2、-C(＝NR9)R、-C(O)N(R)OR，各o独立地选自1、2、3和4和-C(＝NR9)N(R)2，各o独立地选自1、2、3和4，并且各n独立地选自1、2、3、4和5；

[0216] Rx选自由以下组成的组：C1-6烷基、C2-6烯基、-(CH2)rOH和-(CH2)rNR2，

[0217] 其中r选自1、2、3、4、5和6；

[0218] 各R5独立地选自由OH、C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；

[0219] 各R6独立地选自由OH、C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；

[0220] M和M’独立地选自-C(O)O-、-OC(O)-、-OC(O)-M”-C(O)O-、-C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)-、-C(O)-、-C(S)-、-C(S)S-、-SC(S)-、-CH(OH)-、-P(O)(OR’)O-、-S(O)2-、-S-S-、芳基和杂芳基，其中M”是键、C1-13烷基或C2-13烯基；

[0221] R7选自由C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；

[0222] R8选自由C3-6碳环和杂环组成的组；

[0223] R9选自由以下组成的组：H、CN、NO2、C1-6烷基、-OR、-S(O)2R、-S(O)2N(R)2、C2-6烯基、C3-6碳环和杂环；

[0224] R10选自由以下组成的组：H、OH、C1-3烷基和C2-3烯基；

[0225] 各R独立地选自由以下组成的组：C1-3烷基、C2-3烯基、(CH2)qOR*和H，

[0226] 并且各q独立地选自1、2和3；

[0227] 各R’独立地选自由以下组成的组：C1-18烷基、C2-18烯基、-R*YR”、-YR”和H；

[0228] 各R”独立地选自由C3-15烷基和C3-15烯基组成的组；

[0229] 各R*独立地选自由C1-12烷基和C2-12烯基组成的组；

[0230] 各Y独立地是C3-6碳环；

[0231] 各X独立地选自由以下组成的组：F、Cl、Br和I；并且

[0232] m选自5、6、7、8、9、10、11、12和13，

[0233] 或其N-氧化物，或其盐或异构体。

[0234] 在又另一个实施方案中，另一小组式的化合物(III)包括这样一些化合物，在这些化合物中

[0235] R1选自由以下组成的组：C5-30烷基、C5-20烯基、-R*YR”、-YR”和-R”M’R’；

[0236] R2和R3独立地选自由以下组成的组：H、C1-14烷基、C2-14烯基、-R*YR”、-YR”和-R*OR”，或R2和R3连同其所连接的原子一起形成杂环或碳环；

[0237] R4选自由以下组成的组：氢、C3-6碳环、-(CH2)nQ、-(CH2)nCHQR、-(CH2)oC(R10)2(CH2)n-oQ、-CHQR、-CQ(R)2和未被取代的C1-6烷基，其中Q选自碳环、-OR、-O(CH2)nN(R)2、-C(O)OR、-OC(O)R、-CX3、-CX2H、-CXH2、-CN、-C(O)N(R)2、-N(R)C(O)R、-N(R)S(O)2R、-N(R)C(O)N(R)2、-N(R)C(S)N(R)2、N(R)R8、-N(R)S(O)2R8、-O(CH2)nOR、-N(R)C(＝NR9)N(R)2、-N(R)C(＝CHR9)N(R)2、-OC(O)N(R)2、-N(R)C(O)OR、-N(OR)C(O)R、-N(OR)S(O)2R、-N(OR)C(O)OR、-N(OR)C(O)N(R)2、-N(OR)C(S)N(R)2、-N(OR)C(＝NR9)N(R)2、-N(OR)C(＝CHR9)N(R)2、-C(＝NR9)N(R)2、-C(＝NR9)R、-C(O)N(R)OR和–C(R)N(R)2C(O)OR，各o独立地选自1、2、3和4，并且各n独立地选自1、2、3、4和5；

[0238] Rx选自由以下组成的组：C1-6烷基、C2-6烯基、-(CH2)rOH和-(CH2)rNR2，

[0239] 其中r选自1、2、3、4、5和6；

[0240] 各R5独立地选自由OH、C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；

[0241] 各R6独立地选自由OH、C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；

[0242] M和M’独立地选自-C(O)O-、-OC(O)-、-OC(O)-M”-C(O)O-、-C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)-、-C(O)-、-C(S)-、-C(S)S-、-SC(S)-、-CH(OH)-、-P(O)(OR’)O-、-S(O)2-、-S-S-、芳基和杂芳基，其中M”是键、C1-13烷基或C2-13烯基；

[0243] R7选自由C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；

[0244] R8选自由C3-6碳环和杂环组成的组；

[0245] R9选自由以下组成的组：H、CN、NO2、C1-6烷基、-OR、-S(O)2R、-S(O)2N(R)2、C2-6烯基、C3-6碳环和杂环；

[0246] R10选自由以下组成的组：H、OH、C1-3烷基和C2-3烯基；

[0247] 各R独立地选自由C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；

[0248] 各R’独立地选自由以下组成的组：C1-18烷基、C2-18烯基、-R*YR”、-YR”、(CH2)qOR*和H，

[0249] 并且各q独立地选自1、2和3；

[0250] 各R”独立地选自由C3-15烷基和C3-15烯基组成的组；

[0251] 各R*独立地选自由C1-12烷基和C2-12烯基组成的组；

[0252] 各Y独立地是C3-6碳环；

[0253] 各X独立地选自由以下组成的组：F、Cl、Br和I；并且

[0254] m选自5、6、7、8、9、10、11、12和13。

[0255] 在又另一个实施方案中，另一小组式的化合物(III)包括这样一些化合物，在这些化合物中

[0256] R1选自由以下组成的组：C5-30烷基、C5-20烯基、-R*YR”、-YR”和-R”M’R’；

[0257] R2和R3独立地选自由以下组成的组：H、C2-14烷基、C2-14烯基、-R*YR”、-YR”和-R*OR”，或R2和R3连同其所连接的原子一起形成杂环或碳环；

[0258] R4是-(CH2)nQ或-(CH2)nCHQR，其中Q是-N(R)2，并且n选自3、4和5；

[0259] Rx选自由以下组成的组：C1-6烷基、C2-6烯基、-(CH2)rOH和-(CH2)rNR2，

[0260] 其中r选自1、2、3、4、5和6；

[0261] 各R5独立地选自由C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；

[0262] 各R6独立地选自由C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；

[0263] M和M’独立地选自-C(O)O-、-OC(O)-、-OC(O)-M”-C(O)O-、-C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)-、-C(O)-、-C(S)-、-C(S)S-、-SC(S)-、-CH(OH)-、-P(O)(OR’)O-、-S(O)2-、-S-S-、芳基和杂芳基，其中M”是键、C1-13烷基或C2-13烯基；

[0264] R7选自由C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；

[0265] 各R独立地选自由C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；

[0266] 各R’独立地选自由以下组成的组：C1-18烷基、C2-18烯基、-R*YR”、-YR”和H；

[0267] 各R”独立地选自由C3-15烷基和C3-15烯基组成的组；

[0268] 各R*独立地选自由C1-12烷基和C1-12烯基组成的组；

[0269] 各Y独立地是C3-6碳环；

[0270] 各X独立地选自由以下组成的组：F、Cl、Br和I；并且

[0271] m选自5、6、7、8、9、10、11、12和13，

[0272] 或其N-氧化物，或其盐或异构体。

[0273] 在又另一个实施方案中，另一小组式的化合物(III)包括这样一些化合物，在这些化合物中

[0274] R1选自由以下组成的组：C5-30烷基、C5-20烯基、-R*YR”、-YR”和-R”M’R’；

[0275] R2和R3独立地选自由以下组成的组：C1-14烷基、C2-14烯基、-R*YR”、-YR”和-R*OR”，或R2和R3连同其所连接的原子一起形成杂环或碳环；

[0276] R4选自由以下组成的组：-(CH2)nQ、-(CH2)nCHQR、-CHQR和-CQ(R)2，其中Q是-N(R)2，并且n选自1、2、3、4和5；

[0277] Rx选自由以下组成的组：C1-6烷基、C2-6烯基、-(CH2)rOH和-(CH2)rNR2，

[0278] 其中r选自1、2、3、4、5和6；

[0279] 各R5独立地选自由C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；

[0280] 各R6独立地选自由C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；

[0281] M和M’独立地选自-C(O)O-、-OC(O)-、-OC(O)-M”-C(O)O-、-C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)-、-C(O)-、-C(S)-、-C(S)S-、-SC(S)-、-CH(OH)-、-P(O)(OR’)O-、-S(O)2-、-S-S-、芳基和杂芳基，其中M”是键、C1-13烷基或C2-13烯基；

[0282] R7选自由C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；

[0283] 各R独立地选自由C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；

[0284] 各R’独立地选自由以下组成的组：C1-18烷基、C2-18烯基、-R*YR”、-YR”和H；

[0285] 各R”独立地选自由C3-15烷基和C3-15烯基组成的组；

[0286] 各R*独立地选自由C1-12烷基和C1-12烯基组成的组；

[0287] 各Y独立地是C3-6碳环；

[0288] 各X独立地选自由以下组成的组：F、Cl、Br和I；并且

[0289] m选自5、6、7、8、9、10、11、12和13，

[0290] 或其N-氧化物，或其盐或异构体。

[0291] 在某些实施方案中，一小组式(I)的化合物包括式(IA)的化合物：

[0292]

[0293] 或其N-氧化物，或其盐或异构体，其中l选自1、2、3、4和5；m选自5、6、7、8和9；M1是键或M’；R4是氢、未被取代的C1-3烷基、-(CH2)oC(R10)2(CH2)n-oQ或-(CH2)nQ，其中Q是OH、-NHC(S)N(R)2、-NHC(O)N(R)2、-N(R)C(O)R、-N(R)S(O)2R、-N(R)R8、-NHC(＝NR9)N(R)2、-NHC(＝CHR9)N(R)2、-OC(O)N(R)2、-N(R)C(O)OR、杂芳基或杂环烷基；M和M’独立地选自-C(O)O-、-OC(O)-、-OC(O)-M”-C(O)O-、-C(O)N(R’)-、-P(O)(OR’)O-、-S-S-、芳基和杂芳基；并且R2和R3独立地选自由H、C1-14烷基和C2-14烯基组成的组。例如，m是5、7或9。例如，Q是OH、-NHC(S)N(R)2或-NHC(O)N(R)2。例如，Q是-N(R)C(O)R或-N(R)S(O)2R。

[0294] 在某些实施方案中，一小组式(I)的化合物包括式(IB)的化合物：

[0295] 或其N-氧化物，或其盐或异构体，其中所有变量均如本文所定义。例如，m选自5、6、7、8和9；M和M’独立地选自-C(O)O-、-OC(O)-、-OC(O)-M”-C(O)O-、-C(O)N(R’)-、-P(O)(OR’)O-、-S-S-、芳基和杂芳基；并且R2和R3独立地选自由H、C1-14烷基和C2-14烯基组成的组。例如，m是5、7或9。

[0296] 在某些实施方案中，一小组式(I)的化合物包括式(II)的化合物：

[0297] 或其N-氧化物、或其盐或异构体，其中l选自1、2、3、4和5；M1是键或M’；R4是氢、未被取代的C1-3烷基、-(CH2)oC(R10)2(CH2)n-oQ，或-(CH2)nQ，其中n是2、3或4，并且Q是OH、-NHC(S)N(R)2、-NHC(O)N(R)2、-N(R)C(O)R、-N(R)S(O)2R、-N(R)R8、-NHC(＝NR9)N(R)2、-NHC(＝CHR9)N(R)2、-OC(O)N(R)2、-N(R)C(O)OR、杂芳基或杂环烷基；M和M’独立地选自-C(O)O-、-OC(O)-、-OC(O)-M”-C(O)O-、-C(O)N(R’)-、-P(O)(OR’)O-、-S-S-、芳基和杂芳基；并且R2和R3独立地选自由H、C1-1烷基和C2-14烯基组成的组。

[0298] 在某些实施方案中，一小组式(I)的化合物包括式(IIa)、(IIb)、(IIc)或(IIe)的化合物：

[0299]

[0300]

[0301] 或其N-氧化物，或其盐或异构体，其中R4是如本文所描述。

[0302] 在某些实施方案中，一小组式(I)的化合物包括式(IId)的化合物：

[0303]

[0304] 或其N-氧化物，或其盐或异构体，其中n是2、3或4；并且m、R’、R”和R2至R6如本文所描述。例如，R2和R3各自可以独立地选自由C5-14烷基和C5-14烯基组成的组。

[0305] 在另一个实施方案中，一小组式(I)的化合物包括式(IIf)的化合物：

[0306]

[0307] 或其N-氧化物，或其盐或异构体，其中n是2、3或4；并且m、M、M”、R’、R”和R2至R6如本文所描述。例如，R2和R3各自可以独立地选自由C5-14烷基和C5-14烯基组成的组，并且n选自2、3和4。

[0308] 在另一个实施方案中，一小组式(I)的化合物包括式(IIg)的化合物：

[0309]

[0310] 或其N-氧化物，或其盐或异构体，其中l、m、M、M1、R’、R2和R3如本文所描述。例如，R2和R3各自可以独立地选自由C5-14烷基和C5-14烯基组成的组，l选自1、2、3、4和5并且m选自5、6、7、8和9。另一方面，本公开的特征在于一种纳米粒子组合物，该组合物包括含如本文所描述的化合物(例如根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物)的脂质组分。

[0311] 又另一方面，本公开的特征在于一种药物组合物，该组合物其包含根据前述方面的纳米粒子组合物和药学上可接受的载体。例如，所述药物组合物被冷藏或冷冻以便储存和/或运输(例如在4℃或更低温度，如在约-150℃与约0℃之间或在约-80℃与约-20℃之间(例如约-5℃、-10℃、-15℃、-20℃、-25℃、-30℃、-40℃、-50℃、-60℃、-70℃、-80℃、-90℃、-130℃或-150℃)温度下储存)。例如，所述药物组合物呈溶液形式以便在例如约约-20℃、-30℃、-40℃、-50℃、-60℃、-70℃或-80℃下储存和/或运输。

[0312] 另一方面，本公开提供一种将治疗剂和/或预防剂(例如mRNA)递送至细胞(例如哺乳动物细胞)的方法。这一方法包括向受试者(例如哺乳动物，如人)施用纳米粒子组合物的步骤，所述纳米粒子组合物包括：(i)脂质组分，其包括磷脂(如多不饱和脂质)、PEG脂质、结构性脂质以及式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物；和(ii)治疗剂和/或预防剂，其中施用包含使所述细胞与所述纳米粒子组合物接触，由此将所述治疗剂和/或预防剂递送至所述细胞。

[0313] 另一方面，本公开提供一种在细胞(例如哺乳动物细胞)中产生所关注多肽的方法。该方法包括使所述细胞与纳米粒子组合物接触的步骤，所述纳米粒子组合物包括：(i)脂质组分，其包括磷脂(如多不饱和脂质)、PEG脂质、结构性脂质以及式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物；和(ii)编码所关注多肽的mRNA，由此所述mRNA能够在所述细胞中翻译以产生所述多肽。

[0314] 另一方面，本公开提供一种治疗有需要哺乳动物(例如人)的疾病或病症的方法。该方法包括向所述哺乳动物施用治疗有效量的纳米粒子组合物的步骤，所述纳米粒子组合物包括：(i)脂质组分，其包括磷脂(如多不饱和脂质)、PEG脂质、结构性脂质以及式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物；和(ii)治疗剂和/或预防剂(例如mRNA)。在一些实施方案中，所述疾病或病症是以功能失常或异常的蛋白质或多肽活性为特征。例如，该疾病或病症选自由以下组成的组：罕见病、感染性疾病、癌症和增生性疾病、遗传性疾病(例如囊肿性纤维化)、自体免疫性疾病、糖尿病、神经退化性疾病、心血管和肾血管疾病，以及代谢性疾病。

[0315] 另一方面，本公开提供一种用于治疗有需要哺乳动物(例如人)的疾病或病症的纳米粒子组合物。所述纳米粒子组合物包括：(i)脂质组分，其包括磷脂(如多不饱和脂质)、PEG脂质、结构性脂质以及式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物；和(ii)治疗剂和/或预防剂(例如mRNA)。在一些实施方案中，所述疾病或病症是以功能失常或异常的蛋白质或多肽活性为特征。例如，该疾病或病症选自由以下组成的组：罕见病、感染性疾病、癌症和增生性疾病、遗传性疾病(例如囊肿性纤维化)、自体免疫性疾病、糖尿病、神经退化性疾病、心血管和肾血管疾病，以及代谢性疾病。

[0316] 另一方面，本公开提供一种用于制造供治疗有需要哺乳动物(例如人)的疾病或病症用的药剂的纳米粒子组合物。所述纳米粒子组合物包括：(i)脂质组分，其包括磷脂(如多不饱和脂质)、PEG脂质、结构性脂质以及式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物；和(ii)治疗剂和/或预防剂(例如mRNA)。在一些实施方案中，所述疾病或病症是以功能失常或异常的蛋白质或多肽活性为特征。例如，该疾病或病症选自由以下组成的组：罕见病、感染性疾病、癌症和增生性疾病、遗传性疾病(例如囊肿性纤维化)、自体免疫性疾病、糖尿病、神经退化性疾病、心血管和肾血管疾病，以及代谢性疾病。

[0317] 另一方面，本公开提供纳米粒子组合物在制造用于治疗有需要哺乳动物(例如人)的疾病或病症的药剂中的用途。所述纳米粒子组合物包括：(i)脂质组分，其包括磷脂(如多不饱和脂质)、PEG脂质、结构性脂质以及式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物；和(ii)治疗剂和/或预防剂(例如mRNA)。在一些实施方案中，所述疾病或病症是以功能失常或异常的蛋白质或多肽活性为特征。例如，该疾病或病症选自由以下组成的组：罕见病、感染性疾病、癌症和增生性疾病、遗传性疾病(例如囊肿性纤维化)、自体免疫性疾病、糖尿病、神经退化性疾病、心血管和肾血管疾病，以及代谢性疾病。

[0318] 另一方面，本公开提供一种将治疗剂和/或预防剂递送(例如特异性递送)至哺乳动物器官(例如肝、脾、肺或股骨)的方法。这一方法包括向受试者(例如哺乳动物)施用纳米粒子组合物的步骤，所述纳米粒子组合物包括：(i)脂质组分，其包括磷脂(如多不饱和脂质)、PEG脂质、结构性脂质以及式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物；和(ii)治疗剂和/或预防剂(例如mRNA)，其中施用包含使所述细胞与所述纳米粒子组合物接触，由此将所述治疗剂和/或预防剂递送至目标器官(例如肝、脾、肺或股骨)。

[0319] 另一方面，本公开的特征在于一种用于将治疗剂和/或预防剂(例如mRNA)增进地递送至目标组织(例如肝、脾、肺或股骨)的方法。这一方法包括向受试者(例如哺乳动物)施用纳米粒子组合物的步骤，所述组合物包括：(i)脂质组分，其包括式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物、磷脂、结构性脂质以及PEG脂质；和(ii)治疗剂和/或预防剂，所述施用包括使所述目标组织与所述纳米粒子组合物接触，由此将所述治疗剂和/或预防剂递送至所述目标组织。

[0320] 又另一方面，本公开的特征在于一种降低免疫原性的方法，该方法包括将本公开的纳米粒子组合物引入细胞中，其中如与包含参考脂质而非式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物的参考组合物所诱导的细胞中细胞免疫响应的诱导相比较，所述纳米粒子组合物减少诱导所述细胞对所述纳米粒子组合物的细胞免疫响应。例如，细胞免疫响应是先天性免疫响应、适应性免疫响应或两种。

[0321] 本公开还包括合成式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物的方法以及制备纳米粒子组合物的方法，所述组合物包括含式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物的脂质组分。附图说明

[0322] 图1显示在施用包括MC3的纳米粒子组合物之前用甲氨蝶呤(methotrexate)或地塞米松(dexamethasone)预治疗非人类灵长类动物的结果。

[0323] 图2显示通过60分钟输注向未治疗食蟹猕猴静脉内施用0.01mpk剂量的各种纳米粒子组合物之后测量的hEPO mRNA表达量。

[0324] 图3-6分别显示了在向大鼠静脉内施用各种剂量的包括化合物26、18、25和MC3的各种纳米粒子组合物后测量的hEPO表达量的结果。

[0325] 图7显示在0.005mpk与2mpk之间的各种剂量的包括化合物26、18、25和MC3的纳米粒子组合物的曲线下面积(AUC)。

[0326] 图8显示在以下各种时间点向小鼠肌肉内施用0.01mpk包括MC3、化合物168-170和173-175的各种纳米粒子组合物后测量的荧光素酶表达量的结果：3小时(左侧区块)、6小时(中间区块)和24小时(右侧区块)。本图中的编号1-7分别对应于MC3、化合物168-170和173-
175。

[0327] 图9显示在以下各种时间点向小鼠肌肉内施用0.01mpk包括MC3、化合物18、25、30、108-112、60和122的各种纳米粒子组合物后测量的hEPO表达量的结果：3小时(左侧区块)、6小时(中间区块)和24小时(右侧区块)。本图中的编号1-11分别对应于MC3、化合物18、25、
30、108-112、60和122。

[0328] 图10显示在静脉内施用包括MC3或本文所公开的各种化合物的各种纳米粒子组合物后测量的荧光素酶表达量(总通量)的结果。本图中的编号1-12分别对应于化合物18、MC3、化合物48-50、54、111、60、75、68、66、128、65、130、133-135、147、96和151。

[0329] 图11A和11B显示通过60分钟输注向未治疗的食蟹猕猴静脉内施用0.1mpk(图11A)或0.3mpk(图11B)剂量的包括MC3和化合物18的各种纳米粒子组合物之后测量的抗血细胞凝集素(抗HA)抗体表达量的结果。

[0330] 图12A-12C是一系列图，概述了在向小鼠静脉内施用含本公开化合物的纳米粒子组合物后(图12A)3小时、(图12B)6小时和(图12C)24小时的荧光素酶表达量。总光通量值是通过活体发光成像(body luminescent imaging，BLI)获取。在这些图中，编号1-14分别是指含有化合物160、98、161-165、171、172、183-186和MC3的组合物。

[0331] 图13A-13C是一系列图，概述了在向小鼠静脉内施用含本公开化合物的纳米粒子组合物后(图13A)3小时、(图13B)6小时和(图13C)24小时的荧光素酶表达量。总光通量值是通过活体发光成像(BLI)获取。磷酸盐缓冲生理盐水(PBS)用作对照。结果在对数标度上呈现。在这些图中，编号1-15分别是指含有MC3、化合物18、111、168-170、174、175、178、179、181、182、218、198的组合物以及PBS。

[0332] 图14A-14C是一系列图，概述了在向小鼠静脉内施用含本公开化合物的纳米粒子组合物后6小时离体(图14A)肝、(图14B)脾和(图14C)肾的荧光素酶表达量。总光通量值是通过活体发光成像(BLI)获取。磷酸盐缓冲生理盐水(PBS)用作对照。在这些图中，编号1-15分别是指含有MC3、化合物18、111、168-170、174、175、178、179、181、182、218、198的组合物以及PBS。

[0333] 图15A和15B是一对图，显示了在给予本公开化合物相较于给予MC3的CD-1小鼠以及相较于未接受任何治疗的小鼠(未治疗的测试受试者)的脾中的活化B细胞频率。PBS用作对照。图15A显示CD19+细胞的百分比。图15B显示CD19+CD69+CD86+细胞的百分比。编号1-16是指含表达荧光素酶的mRNA和以下各物的组合物：1：MC3；2：化合物18；3：化合物111；4：化合物168；5：化合物169；6：化合物170；7：化合物174；8：化合物175；9：化合物178；10：化合物179；11：化合物181；12：化合物182；13：化合物218；14：化合物198；15：PBS；16：未治疗的受试者。

[0334] 图16A和16B是一对图，显示了在给予本公开化合物相较于给予MC3的CD-1小鼠以及相较于未接受任何治疗的小鼠(未治疗的测试受试者)的脾中的活化B细胞频率。PBS用作对照。图16A显示CD19+细胞的百分比。图16B显示CD19+CD69+CD86+细胞的百分比。编号1-14是指含表达荧光素酶的mRNA和以下各物的组合物：1：化合物147；2：化合物184；3：化合物232；4：化合物189；5：化合物200；6：化合物233；7：化合物234；8：化合物235；9：化合物237；
10：化合物239；11：化合物243；12：MC3；13：PBS；14：未治疗的受试者。

[0335] 图17是显示在静脉内施用纳米粒子组合物后3小时(左侧区块)、6小时(中间区块)和24小时(右侧区块)测量的CD1小鼠中的hEPO mRNA表达量的图。编号1-13是指含表达hEPO的mRNA和以下各物的组合物：1：化合物147；2：化合物184；3：化合物232；4：化合物189；5：化合物200；6：化合物233；7：化合物234；8：化合物235；9：化合物237；10：化合物239；11：化合物243；12：MC3；13：PBS。

[0336] 图18A和18B显示在向CD-1小鼠肌肉内施用0.01mpk各种纳米粒子组合物后测量的荧光素酶表达量的结果。图18A是显示在施用后6小时的总通量的柱形图。每一柱形上方的编号指示相对于MC3的表达比率。图18B显示在施用后3小时、6小时和24小时的总通量。图中的编号1-11是指含有以下各物的组合物：1：MC3；2：化合物143；3：化合物49；4：化合物113；5：化合物61；6：化合物72；7：化合物75；8：化合物71；9：化合物128；10：化合物156；11：化合物157。

[0337] 图19A和19B显示在向CD-1小鼠皮下施用0.05mpk各种纳米粒子组合物后测量的荧光素酶表达量的结果。图19A是显示在施用后6小时的总通量的柱形图。每一柱形上方的编号指示相对于MC3的表达比率。图19B显示在施用后3小时、6小时和24小时的总通量。图中的编号1-12是指含有以下各物的组合物：1：PBS；2：MC3；3：化合物25；4：化合物30；5：化合物20；6：化合物110；7：化合物112；8：化合物113；9：化合物72；10：化合物75；11：化合物122；
12：化合物24。

[0338] 图20A-20C是一系列图，概述了在向CD-1小鼠施用含本公开化合物的纳米粒子组合物后24小时离体(图20A)脾、(图20B)肝和(图20C)注射部位处的荧光素酶表达量。总光通量值是通过活体发光成像(BLI)获取。磷酸盐缓冲生理盐水(PBS)用作对照。图中的编号1-12是指含有以下各物的组合物：1：PBS；2：MC3；3：化合物25；4：化合物30；5：化合物20；6：化合物110；7：化合物112；8：化合物113；9：化合物72；10：化合物75；11：化合物122；12：化合物
24。

[0339] 图21A-21J是一系列图，示出了由包含本公开的脂质的组合物诱导的细胞因子表达量。图21A：G-CSF(12)；图21B：IFN-λ(38)；图21C：MCP-1(51)；图21D：IFN-α(30)；图21E：IL-6(28)；图21F：IL-12p70(39)；图21G：IL-10(22)；图21H：MIP-1β(72)；图21I：TNF-α(45)；
图21J：RANTES(44)。图中的编号1-12是指含有以下各物的组合物：1：PBS；2：MC3；3：化合物
25；4：化合物30；5：化合物20；6：化合物110；7：化合物112；8：化合物113；9：化合物72；10：化合物75；11：化合物122；12：化合物24。

[0340] 图22A-22C是一系列图，概述了在向小鼠皮下施用含本公开化合物的纳米粒子组合物后(图22A)3小时、(图22B)6小时和(图22C)24小时的荧光素酶表达量。总光通量值是通过活体发光成像(BLI)获取。磷酸盐缓冲生理盐水(PBS)用作对照。图中的编号1-12是指含有以下各物的组合物：1：PBS；2：MC3；3：化合物168；4：化合物23；5：化合物19；6：化合物108；7：化合物109；8：化合物111；9：化合物60；10：化合物61；11：化合物69；12：化合物128。

[0341] 图23显示在以下各种时间点向小鼠皮下施用0.05mpk包括本公开化合物的纳米粒子组合物后测量的hEPO表达量的结果。3小时(左侧区块)、6小时(中间区块)和24小时(右侧区块)。本图中的编号1-11分别对应于MC3、PBS以及化合物18、25、48、49、111、60、168、207和233。

[0342] 图24显示在以下各种时间点向小鼠肌肉内施用0.01mpk包括本公开化合物的纳米粒子组合物后测量的荧光素酶表达量的结果。3小时(左侧区块)、6小时(中间区块)和24小时(右侧区块)。本图中的编号1-9分别对应于MC3以及化合物178、181、182、218、198、200、233和239。

[0343] 图25显示在向CD-1小鼠静脉内施用0.5mpk含化合物18或MC3以及修饰过的mRNA的纳米粒子组合物后，在施用后3小时、6小时和24小时测量的hEPO表达量的结果，在所述mRNA中，每个尿苷被N1-甲基假尿苷置换或其中每个尿苷被5-甲氧基尿苷置换。图中的编号1-4是指含有以下各物的组合物：1：每个尿苷被5-甲氧基尿苷置换的修饰过的mRNA，和MC3；2：每个尿苷被N1-甲基假尿苷置换的修饰过的mRNA，和MC3；3：每个尿苷被5-甲氧基尿苷置换的修饰过的mRNA，和化合物18；4：每个尿苷被N1-甲基假尿苷置换的修饰过的mRNA，和化合物18。

[0344] 图26的图显示了在给予含化合物18或MC3和修饰过的mRNA的纳米粒子组合物的小鼠脾细胞中的B细胞活化，在所述mRNA中，每个尿苷被N1-甲基假尿苷置换或其中每个尿苷被5-甲氧基尿苷置换。PBS用作对照。图中的编号1-5是指含有以下各物的组合物：1：每个尿苷被5-甲氧基尿苷置换的修饰过的mRNA，和MC3；2：每个尿苷被N1-甲基假尿苷置换的修饰过的mRNA，和MC3；3：每个尿苷被5-甲氧基尿苷置换的修饰过的mRNA，和化合物18；4：每个尿苷被N1-甲基假尿苷置换的修饰过的mRNA，和化合物18；5：PBS。

[0345] 图27是显示在皮下施用0.5mpk各种纳米粒子组合物后3小时(左侧区块)、6小时(中间区块)和24小时(右侧区块)测量的CD1小鼠中的hEPO mRNA表达量的图。编号1-9是指含表达hEPO的mRNA和以下各物的组合物：1：PBS；2：化合物18；3：化合物30；4：化合物96；5：化合物151；6：化合物98；7：化合物163；8：化合物164；9：化合物165。

[0346] 图28A-28J是一系列图，示出了在向CD-1小鼠皮下施用包含本公开脂质和修饰过的表达hEPO的mRNA的组合物后6小时测量的由这些组合物诱导的细胞因子表达量，在所述mRNA中，每个尿苷被N1-甲基假鸟苷置换。图28A：G-CSF；图28B：IFN-λ；图28C：IFN-α；图28D：IL-12p70；图28E：IP-10；F：IL-6；图28G：MCP-1；图28H：MIP-1β；图28I：RANTES；图28J：TNF-α。图中的编号1-9是指含有以下各物的组合物：1：PBS；2：化合物18；3：化合物30；4：化合物
96；5：化合物151；6：化合物98；7：化合物163；8：化合物164；9：化合物165。

[0347] 图29A–29C是一系列图，示出了氨基脂质的效率和清除率的优化。图29A是在静脉内施用含0.5mg/kg hEPO mRNA的脂质后6小时在CD-1小鼠(n＝6)中测量的新型LNP与MC3 LNP的全身荧光素酶生物发光比较。图中显示了血清hEPO浓度；误差条指示新型脂质表达量相对于MC3表达量的比率的标准偏差。*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001，n.s.＝无统计显著性。编号1-9是指含有以下各物的组合物：1：化合物281；2：化合物138；3：化合物136；4：化合物6；5：化合物18；6：化合物29；7：化合物14；8：化合物25；以及9：化合物26。图29B概述了在从施用0.2mg/kg剂量含hEPO mRNA的LNP的Sprague Dawley大鼠(每个时间点n＝3只)得到的肝组织中测量的化合物18和化合物25与MC3的含量比较。对于化合物18和化合物25AUC相对于MC3，p<0.05。图29C是显示在Sprague Dawley大鼠中hEPO表达量的图。hEPO血清浓度是在静脉内施用1mg/kg剂量含化合物18、化合物25、化合物26或MC3和hEPO mRNA的LNP后测量(n＝3)。

[0348] 图30A-30C是一系列图，显示了在多次给药后化合物18的药物动力学和表达谱。图30A是在向CD-1小鼠(每个时间点n＝3只)每周给予静脉内施用的含0.05mg/kg mRNA的三次团注剂量后MC3和化合物18的组织分布的比较。图30B显示在向CD-1小鼠(n＝8只)每周给予静脉内施用的包括0.5mg/kg含hEPO mRNA的LNP的团注剂量后6小时的hEPO血清浓度。图30C示出了在向CD-1小鼠(n＝3只)每周给予含0.25mg/kg mRNA的剂量后化合物18和其主要代谢物化合物166的肝组织清除情况。

[0349] 图31A-31C是一系列图，示出了在食蟹猕猴研究中本公开的脂质纳米粒子的表达谱。图31A示出了在以MC3或化合物18递送0.01mg/kg hEPO mRNA后的hEPO血清浓度。通过60分钟输注(n＝3)，静脉内施用脂质纳米粒子。对于化合物18AUC相对于MC3，p<0.05。图31B显示在通过60分钟输注(n＝3)静脉内施用以MC3或化合物18LNP递送0.3mg/kg抗体mRNA后人IgG流感A抗体血清浓度，对于化合物18AUC相对于MC3，p<0.05。图31C显示在每周通过60分钟输注(n＝4)静脉内施用以化合物18LNP递送0.2mg/kg hEPO mRNA后的hEPO血清浓度。

[0350] 图32A-32C是一系列图，概述了在大鼠和非人类灵长类动物中一个月毒性评价的结果。磷酸盐缓冲生理盐水(PBS)用作对照。图32A显示了通过10分钟输注静脉内施用的Sprague Dawley大鼠中的血清丙氨酸氨基转移酶水平，每周给药，持续5周。在第五剂后24小时测量血清水平(n＝10)。在PBS与每次剂量水平之间未观察到统计差异。图32B显示了通过10分钟输注静脉内施用的Sprague Dawley大鼠中的血清天冬氨酸氨基转移酶水平，每周给药，持续5周。在第五剂后24小时测量血清水平(n＝10)。*p<0.05，在PBS与0.05和2.0mg/kg剂量之间无统计差异。图32C显示通过每周60分钟输注静脉内施用1mg/kg mRNA的食蟹猕猴中的血清丙氨酸氨基转移酶水平。在第五剂后24小时测量血清水平(n＝4)。在给药前PBS与化合物18的第30天水平之间未观察到统计差异。图32D显示通过每周60分钟输注静脉内施用1mg/kg mRNA的食蟹猕猴中的血清天冬氨酸氨基转移酶水平。在第五剂后24小时测量血清水平(n＝4)。在给药前PBS与化合物18的第30天水平之间未观察到统计差异。

[0351] 图33A和33B是一对图，概述了在大鼠和非人类灵长类动物中一个月毒性评价的结果。图33A显示了在第1天和第29天施用1mg/kg mRNA的食蟹猕猴中的C5b9血清浓度(n＝4)。在所有时间点，在PBS与化合物18之间未观察到统计差异。图33B显示了在第1天和第29天施用1mg/kg mRNA的食蟹猕猴中的MCP-1血清浓度。n＝4，*p<0.05，在任何其它时间点，在PBS与化合物18之间无统计差异。

[0352] 图34A-34C是本公开的脂质纳米粒子的内体逃逸效率的一系列固定细胞图像。用包封有荧光素酶mRNA的被罗丹明(Rhodamine)标记的MC3和化合物18LNP转染HeLa细胞，并在4小时孵育后进行加工以进行单分子FISH(smFISH，红色)，此外，向细胞中电穿孔放入未经过配制的mRNA。自胞吞细胞器流出至细胞溶质中的mRNA分子以绿色显示(图像分析覆盖图)。通过计算每个细胞的细胞溶质mRNA的数量与内化LNP的数量之间的比率来评价内体逃逸效率。图34A是显示电穿孔过的HeLa细胞的图像。图34B是显示MC3处理过的HeLa细胞的图像。图34C是显示化合物18处理过的HeLa细胞的图像。

[0353] 图35A和35B是比较MC3与化合物18的组织分布的一对图。图35A显示在向CD-1小鼠(每个时间点n＝3只)三次静脉内施用0.05mg/kg mRNA后MC3和化合物18的组织分布。图35B显示在向食蟹猕猴(n＝2只)施用0.2mg/kg mRNA后12小时，MC3和化合物18的组织分布。

[0354] 图36是示出在通过60分钟输注静脉内以包含MC3或化合物18的组合物施用0.1mg/kg人IgG mRNA的食蟹猕猴中的人IgG表达量的图(n＝3)。

[0355] 图37是示出大鼠肝和肝酶中MC3单细胞坏死的一系列图。上图是施用0.3mg/kg不含mRNA的脂质纳米粒子(LNP)(右)和PBS(磷酸盐缓冲生理盐水)作为对照的大鼠的肝的一对图像。下图是在施用0.3mg/kg包含mRNA和MC3的LNP后，肝中ALT(左)和AST(右)的表达量的一对图。ALT和AST升高且病理学分析显示坏死迹象。

[0356] 图38是显示在29天过程内重复给药后NHP中的mRNA水平的图。

[0357] 图39A和39B是显示在施用含化合物18的LNP的ApoE基因敲除小鼠和LDLr基因敲除小鼠中的hEPO表达量的一对图。图39A显示在ApoE基因敲除小鼠中的hEPO表达量。图39B显示在LDLr基因敲除小鼠中的hEPO表达量。

具体实施方式

[0358] 本公开涉及新型脂质和包括新型脂质的脂质纳米粒子组合物。本公开还提供了将治疗剂和/或预防剂递送至哺乳动物细胞的方法，确切地说，将治疗剂和/或预防剂递送至哺乳动物器官，在哺乳动物细胞中产生所关注多肽并治疗有需要哺乳动物的疾病或病症的方法。例如，在细胞中产生所关注多肽的方法包括使包含mRNA的纳米粒子组合物与哺乳动物细胞接触，由此该mRNA可以被翻译以产生所关注多肽。将治疗剂和/或预防剂递送至哺乳动物细胞或器官的方法可以包括向受试者施用包括该治疗剂和/或预防剂的纳米粒子组合物，其中所述施用包括使所述细胞或器官与所述组合物接触，由此将所述治疗剂和/或预防剂递送至所述细胞或器官。

[0359] 脂质

[0360] 本公开提供了包括中心胺部分和至少一个生物可降解基团的脂质。本文所述的脂质可以有利地用于脂质纳米粒子组合物中以将治疗剂和/或预防剂递送至哺乳动物细胞或器官。例如，本文所述的脂质聚具有极低或不具有免疫原性。例如，式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)中任一个的脂质化合物的免疫原性低于参考脂质(例如MC3、KC2或DLinDMA)。例如，包含本文所公开的脂质和治疗剂或预防剂的配制物的治疗指数高于包含参考脂质(例如MC3、KC2或DLinDMA)和相同治疗剂或预防剂的相应配制物。

[0361] 在本发明的第一方面，本文所述的化合物具有式(I)：

[0362]

[0363] 或其N-氧化物，或其盐或异构体，其中：

[0364] R1选自由以下组成的组：C5-30烷基、C5-20烯基、-R*YR”、-YR”和-R”M’R’；

[0365] R2和R3独立地选自由以下组成的组：H、C1-14烷基、C2-14烯基、-R*YR”、-YR”和-R*OR”，或R2和R3连同其所连接的原子一起形成杂环或碳环；

[0366] R4选自由以下组成的组：氢、C3-6碳环、-(CH2)nQ、-(CH2)nCHQR、-(CH2)oC(R10)2(CH2)n-oQ、-CHQR、-CQ(R)2和未被取代的C1-6烷基，其中Q选自碳环、杂环、-OR、-O(CH2)nN(R)2、-C(O)OR、-OC(O)R、-CX3、-CX2H、-CXH2、-CN、-N(R)2、-C(O)N(R)2、-N(R)C(O)R、-N(R)S(O)2R、-N(R)C(O)N(R)2、-N(R)C(S)N(R)2、-N(R)R8、-N(R)S(O)2R8、-O(CH2)nOR、-N(R)C(＝NR9)N(R)2、-N(R)C(＝CHR9)N(R)2、-OC(O)N(R)2、-N(R)C(O)OR、-N(OR)C(O)R、-N(OR)S(O)2R、-N(OR)C(O)OR、-N(OR)C(O)N(R)2、-N(OR)C(S)N(R)2、-N(OR)C(＝NR9)N(R)2、-N(OR)C(＝CHR9)N(R)2、-C(＝NR9)N(R)2、-C(＝NR9)R、-C(O)N(R)OR和–C(R)N(R)2C(O)OR，各o独立地选自1、2、3和4，并且各n独立地选自1、2、3、4和5；

[0367] 各R5独立地选自由OH、C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；

[0368] 各R6独立地选自由OH、C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；

[0369] M和M’独立地选自-C(O)O-、-OC(O)-、-OC(O)-M”-C(O)O-、-C(O)N(R’)-，

[0370] -N(R’)C(O)-、-C(O)-、-C(S)-、-C(S)S-、-SC(S)-、-CH(OH)-、-P(O)(OR’)O-、-S(O)2-、-S-S-、芳基和杂芳基，其中M”是键、C1-13烷基或C2-13烯基；

[0371] R7选自由C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；

[0372] R8选自由C3-6碳环和杂环组成的组；

[0373] R9选自由以下组成的组：H、CN、NO2、C1-6烷基、-OR、-S(O)2R、-S(O)2N(R)2、C2-6烯基、C3-6碳环和杂环；

[0374] R10选自由以下组成的组：H、OH、C1-3烷基和C2-3烯基；

[0375] 各R独立地选自由以下组成的组：C1-3烷基、C2-3烯基、(CH2)qOR*和H，

[0376] 并且各q独立地选自1、2和3；

[0377] 各R’独立地选自由以下组成的组：C1-18烷基、C2-18烯基、-R*YR”、-YR”和H；

[0378] 各R”独立地选自由C3-15烷基和C3-15烯基组成的组；

[0379] 各R*独立地选自由C1-12烷基和C2-12烯基组成的组；

[0380] 各Y独立地是C3-6碳环；

[0381] 各X独立地选自由以下组成的组：F、Cl、Br和I；并且

[0382] m选自5、6、7、8、9、10、11、12和13；并且其中当R4是-(CH2)nQ、-(CH2)nCHQR、–CHQR或-CQ(R)2时，则(i)在n是1、2、3、4或5时，Q不是-N(R)2；，或(ii)在n是1或2时，Q不是5、6或7元杂环烷基。

[0383] 本公开另一方面涉及式(III)的化合物：

[0384] 或其N-氧化物，

[0385] 或其盐或异构体，其中

[0386] 或其盐或异构体，其中

[0387] R1选自由以下组成的组：C5-30烷基、C5-20烯基、-R*YR”、-YR”和-R”M’R’；

[0388] R2和R3独立地选自由以下组成的组：H、C1-14烷基、C2-14烯基、-R*YR”、-YR”和-R*OR”，或R2和R3连同其所连接的原子一起形成杂环或碳环；

[0389] R4选自由以下组成的组：氢、C3-6碳环、-(CH2)nQ、-(CH2)nCHQR、-(CH2)oC(R10)2(CH2)n-oQ、-CHQR、-CQ(R)2和未被取代的C1-6烷基，其中Q选自碳环、杂环、-OR、-O(CH2)nN(R)2、-C(O)OR、-OC(O)R、-CX3、-CX2H、-CXH2、-CN、-N(R)2、-C(O)N(R)2、-N(R)C(O)R、-N(R)S(O)2R、-N(R)C(O)N(R)2、-N(R)C(S)N(R)2、N(R)R8、-N(R)S(O)2R8、-O(CH2)nOR、-N(R)C(＝NR9)N(R)2、-N(R)C(＝CHR9)N(R)2、-OC(O)N(R)2、-N(R)C(O)OR、-N(OR)C(O)R、-N(OR)S(O)2R、-N(OR)C(O)OR、-N(OR)C(O)N(R)2、-N(OR)C(S)N(R)2、-N(OR)C(＝NR9)N(R)2、-N(OR)C(＝CHR9)N(R)2、-C(＝NR9)N(R)2、-C(＝NR9)R、-C(O)N(R)OR和–C(R)N(R)2C(O)OR，各o独立地选自1、2、3和4，并且各n独立地选自1、2、3、4和5；

[0390] Rx选自由以下组成的组：C1-6烷基、C2-6烯基、-(CH2)rOH和-(CH2)rNR2，

[0391] 其中r选自1、2、3、4、5和6；

[0392] 各R5独立地选自由OH、C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；

[0393] 各R6独立地选自由OH、C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；

[0394] M和M’独立地选自-C(O)O-、-OC(O)-、-OC(O)-M”-C(O)O-、-C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)-、-C(O)-、-C(S)-、-C(S)S-、-SC(S)-、-CH(OH)-、-P(O)(OR’)O-、-S(O)2-、-S-S-、芳基和杂芳基，其中M”是键、C1-13烷基或C2-13烯基；

[0395] R7选自由C1-3烷基、C2-3烯基和H组成的组；

[0396] R8选自由C3-6碳环和杂环组成的组；

[0397] R9选自由以下组成的组：H、CN、NO2、C1-6烷基、-OR、-S(O)2R、-S(O)2N(R)2、C2-6烯基、C3-6碳环和杂环；

[0398] R10选自由以下组成的组：H、OH、C1-3烷基和C2-3烯基；

[0399] 各R独立地选自由以下组成的组：C1-3烷基、C2-3烯基、(CH2)qOR*和H，

[0400] 并且各q独立地选自1、2和3；

[0401] 各R’独立地选自由以下组成的组：C1-18烷基、C2-18烯基、-R*YR”、-YR”和H；

[0402] 各R”独立地选自由C3-15烷基和C3-15烯基组成的组；

[0403] 各R*独立地选自由C1-12烷基和C2-12烯基组成的组；

[0404] 各Y独立地是C3-6碳环；

[0405] 各X独立地选自由以下组成的组：F、Cl、Br和I；并且

[0406] m选自5、6、7、8、9、10、11、12和13。

[0407] 在某些实施方案中，一小组式(I)的化合物包括式(IA)的化合物：

[0408]

[0409] 或其N-氧化物，或其盐或异构体，其中l选自1、2、3、4和5；m选自5、6、7、8和9；M1是键或M’；R4是氢、未被取代的C1-3烷基、-(CH2)oC(R10)2(CH2)n-oQ，或-(CH2)nQ，其中Q是OH、-NHC(S)N(R)2、-NHC(O)N(R)2、-N(R)C(O)R、-N(R)S(O)2R、-N(R)R8、-NHC(＝NR9)N(R)2、-NHC(＝CHR9)N(R)2、-OC(O)N(R)2、-N(R)C(O)OR、杂芳基或杂环烷基；M和M’独立地选自-C(O)O-、-OC(O)-、-OC(O)-M”-C(O)O-、-C(O)N(R’)-、-P(O)(OR’)O-、-S-S-、芳基和杂芳基；并且R2和R3独立地选自由H、C1-14烷基和C2-14烯基组成的组。例如，m是5、7或9。例如，Q是OH、-NHC(S)N(R)2，或-NHC(O)N(R)2。例如，Q是-N(R)C(O)R或-N(R)S(O)2R。

[0410] 在某些实施方案中，一小组式(I)的化合物包括式(IB)的化合物：

[0411] 或其N-氧化物，或其盐或异构体，其中所有变量均如本文所定义。例如，m选自5、6、7、8和9；M和M’独立地选自-C(O)O-、-OC(O)-、-OC(O)-M”-C(O)O-、-C(O)N(R’)-、-P(O)(OR’)O-、-S-S-、芳基和杂芳基；并且R2和R3独立地选自由H、C1-14烷基和C2-14烯基组成的组。例如，m是5、7或9。在某些实施方案中，一小组式(I)的化合物包括式(II)的化合物：

[0412] 或其N-氧化物、或其盐或异构体，其中l选自1、2、3、4和5；M1是键或M’；R4是氢、未被取代的C1-3烷基、-(CH2)oC(R10)2(CH2)n-oQ或-(CH2)nQ，其中n是2、3或4，并且Q是OH、-NHC(S)N(R)2、-NHC(O)N(R)2、-N(R)C(O)R、-N(R)S(O)2R、-N(R)R8、-NHC(＝NR9)N(R)2、-NHC(＝CHR9)N(R)2、-OC(O)N(R)2、-N(R)C(O)OR、杂芳基或杂环烷基；M和M’独立地选自-C(O)O-、-OC(O)-、-OC(O)-M”-C(O)O-、-C(O)N(R’)-、-P(O)(OR’)O-、-S-S-、芳基和杂芳基；并且R2和R3独立地选自由H、C1-14烷基和C2-14烯基组成的组。

[0413] 式(I)或(IA)中任一个的化合物当适用时包括一个或多个以下特征。

[0414] 在一些实施方案中，M1是M’。

[0415] 在一些实施方案中，M和M’独立地是-C(O)O-或-OC(O)-。

[0416] 在一些实施方案中，M和M’中的至少一个是-C(O)O-或-OC(O)-。

[0417] 在某些实施方案中，M和M’中的至少一个是-OC(O)-。

[0418] 在某些实施方案中，M是-OC(O)-并且M’是-C(O)O-.在一些实施方案中，M是-C(O)O-并且M’是-OC(O)-。在某些实施方案中，M和M’各自是-OC(O)-。在一些实施方案中，M和M’各自是-C(O)O-。

[0419] 在某些实施方案中，M和M’中的至少一个是-OC(O)-M”-C(O)O-。

[0420] 在一些实施方案中，M和M’独立地是-S-S-。

[0421] 在一些实施方案中，M和M’中的至少一个是-S-S。

[0422] 在一些实施方案中，M和M’之一是-C(O)O-或-OC(O)-并且另一个是-S-S-。例如，M是-C(O)O-或-OC(O)-且M’是-S-S-，或M’是-C(O)O-或-OC(O)-且M是-S-S-。

[0423] 在一些实施方案中，M和M’之一是-OC(O)-M”-C(O)O-，其中M”是键、C1-13烷基或C2-13烯基。在其它实施方案中，M”是C1-6烷基或C2-6烯基。在某些实施方案中，M”是C1-4烷基或C2-4烯基。

[0424] 在一些实施方案中，l是1、3或5。

[0425] 在一些实施方案中，R4是氢。

[0426] 在一些实施方案中，R4不是氢。

[0427] 在一些实施方案中，R4是未被取代的甲基或-(CH2)nQ，其中Q是OH、-NHC(S)N(R)2、-NHC(O)N(R)2、-N(R)C(O)R或-N(R)S(O)2R。

[0428] 在一些实施方案中，Q是OH。

[0429] 在一些实施方案中，Q是-NHC(S)N(R)2。

[0430] 在一些实施方案中，Q是-NHC(O)N(R)2。

[0431] 在一些实施方案中，Q是-N(R)C(O)R。

[0432] 在一些实施方案中，Q是-N(R)S(O)2R。

[0433] 在一些实施方案中，Q是-O(CH2)nN(R)2。

[0434] 在一些实施方案中，Q是-O(CH2)nOR。

[0435] 在一些实施方案中，Q是-N(R)R8。

[0436] 在一些实施方案中，Q是-NHC(＝NR9)N(R)2。

[0437] 在一些实施方案中，Q是-NHC(＝CHR9)N(R)2。

[0438] 在一些实施方案中，Q是-OC(O)N(R)2。

[0439] 在一些实施方案中，Q是-N(R)C(O)OR。

[0440] 在一些实施方案中，n是2。

[0441] 在一些实施方案中，n是3。

[0442] 在一些实施方案中，n是4。

[0443] 在一些实施方案中，M1不存在。

[0444] 在一些实施方案中，至少一个R5是羟基。例如，一个R5是羟基。

[0445] 在一些实施方案中，至少一个R6是羟基。例如，一个R6是羟基。

[0446] 在一些实施方案中，R5和R6之一是羟基。例如，一个R5是羟基并且各R6是氢。例如，一个R6是羟基并且各R5是氢。

[0447] 在一些实施方案中，Rx是C1-6烷基。在一些实施方案中，Rx是C1-3烷基。例如，Rx是甲基。例如，Rx是乙基。例如，Rx是丙基。

[0448] 在一些实施方案中，Rx是-(CH2)rOH，并且r是1、2或3。例如，Rx是甲酰基。例如，Rx是乙酰基。例如，Rx是丙酰基。

[0449] 在一些实施方案中，Rx是-(CH2)rNR2，r是1、2或3并且各R是H或甲基。例如，Rx是甲氨基、甲基甲氨基或二甲基甲氨基。例如，Rx是氨基甲基、甲基氨基甲基或二甲基氨基甲基。例如，Rx是氨基乙基、甲基氨基乙基或二甲基氨基乙基。例如，Rx是氨基丙基、甲基氨基丙基或二甲基氨基丙基。

[0450] 在一些实施方案中，R’是C1-18烷基、C2-18烯基、-R*YR”或-YR”。

[0451] 在一些实施方案中，R2和R3独立地是C3-14烷基或C3-14烯基。

[0452] 在一个实施方案中，式(I)的化合物具有式(IIa)，

[0453]

[0454] 或其N-氧化物，或其盐或异构体，其中R4是如本文所描述。

[0455] 在另一个实施方案中，式(I)的化合物具有式(IIb)，

[0456]

[0457] 或其N-氧化物，或其盐或异构体，其中R4是如本文所描述。

[0458] 在另一个实施方案中，式(I)的化合物具有式(IIc)或(IIe)：

[0459]

[0460] 或其N-氧化物，或其盐或异构体，其中R4是如本文所描述。

[0461] 在另一个实施方案中，式(I)的化合物具有式(IIf)：

[0462] 或其N-氧化物，或其盐或异构体，

[0463] 其中M是-C(O)O-或–OC(O)-、M”是C1-6烷基或C2-6烯基，R2和R3独立地选自由C5-14烷基和C5-14烯基组成的组，并且n选自2、3和4。

[0464] 在另一个实施方案中，式(I)的化合物具有式(IId)，

[0465]

[0466] 或其N-氧化物，或其盐或异构体，其中n是2、3或4；并且m、R’、R”以及R2至R6如本文所描述。例如，R2和R3各自可以独立地选自由C5-14烷基和C5-14烯基组成的组。

[0467] 在另一个实施方案中，式(I)的化合物具有式(IIg)，

[0468] 或其N-氧化物，或其盐或异构体，其中l选自1、2、3、4和5；m选自5、6、7、8和9；M1是键或M’；M和M’独立地选自-C(O)O-、-OC(O)-、-OC(O)-M”-C(O)O-、-C(O)N(R’)-、-P(O)(OR’)O-、-S-S-、芳基和杂芳基；并且R2和R3独立地选自由H、C1-14烷基和C2-14烯基组成的组。例如，M”是C1-6烷基(例如C1-4烷基)或C2-6烯基(例如C2-4烯基)。例如，R2和R3独立地选自由C5-14烷基和C5-14烯基组成的组。

[0469] 式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)和(III)中任一个的化合物当适用时包括一个或多个以下特征。

[0470] 在一些实施方案中，R4选自由以下组成的组：C3-6碳环、-(CH2)nQ、-(CH2)nCHQR、-(CH2)oC(R10)2(CH2)n-oQ、-CHQR和-CQ(R)2，其中Q选自

[0471] C3-6碳环、具有一个或多个选自N、O、S和P的杂原子的5至14元芳香族或非芳香族杂环、-OR、-O(CH2)nN(R)2、-C(O)OR、-OC(O)R、-CX3、-CX2H、-CXH2、-CN、-N(R)2、-N(R)S(O)2R8、-C(O)N(R)2、-N(R)C(O)R、-N(R)S(O)2R、-N(R)C(O)N(R)2、-N(R)C(S)N(R)2和-C(R)N(R)2C(O)OR，各o独立地选自1、2、3和4，并且各n独立地选自1、2、3、4和5。

[0472] 在另一个实施方案中，R4选自由以下组成的组：C3-6碳环、-(CH2)nQ、-(CH2)nCHQR、-(CH2)oC(R10)2(CH2)n-oQ、-CHQR和-CQ(R)2，其中Q选自C3-6碳环、具有一个或多个选自N、O和S的杂原子的5至14元杂芳基、-OR、-O(CH2)nN(R)2、-C(O)OR、-OC(O)R、-CX3、-CX2H、-CXH2、-CN、-C(O)N(R)2、-N(R)S(O)2R8、-N(R)C(O)R、-N(R)S(O)2R、-N(R)C(O)N(R)2、-N(R)C(S)N(R)2、-C(R)N(R)2C(O)OR以及具有一个或多个选自N、O和S的杂原子的5至14元杂环烷基，其被一个或多个选自氧代(＝O)、OH、氨基和C1-3烷基的取代基取代，各o独立地选自1、2、3和4，并且各n独立地选自1、2、3、4和5。

[0473] 在另一个实施方案中，R4选自由以下组成的组：C3-6碳环、-(CH2)nQ、-(CH2)nCHQR、-(CH2)oC(R10)2(CH2)n-oQ、-CHQR和-CQ(R)2，其中Q选自C3-6碳环、5至14元杂环具有一个或多个选自N、O和S的杂原子、-OR、-O(CH2)nN(R)2、-C(O)OR、-OC(O)R、-CX3、-CX2H、-CXH2、-CN、-C(O)N(R)2、-N(R)S(O)2R8、-N(R)C(O)R、-N(R)S(O)2R、-N(R)C(O)N(R)2、-N(R)C(S)N(R)2、-C(R)N(R)2C(O)OR，各o独立地选自1、2、3和4，并且各n独立地选自1、2、3、4和5；并且当Q是5至14元杂环且(i)R4是-(CH2)nQ，其中n是1或2，或(ii)R4是-(CH2)nCHQR，其中n是1，或(iii)R4是-CHQR和-CQ(R)2时，则Q是5至14元杂芳基或8至14元杂环烷基。

[0474] 在另一个实施方案中，R4选自由以下组成的组：C3-6碳环、-(CH2)nQ、-(CH2)nCHQR、-(CH2)oC(R10)2(CH2)n-oQ、-CHQR和-CQ(R)2，其中Q选自C3-6碳环、具有一个或多个选自N、O和S的杂原子的5至14元杂芳基、-OR、-O(CH2)nN(R)2、-C(O)OR、-OC(O)R、-CX3、-CX2H、-CXH2、-CN、-C(O)N(R)2、-N(R)S(O)2R8、-N(R)C(O)R、-N(R)S(O)2R、-N(R)C(O)N(R)2、-N(R)C(S)N(R)2、-C(R)N(R)2C(O)OR，各o独立地选自1、2、3和4，并且各n独立地选自1、2、3、4和5。

[0475] 在另一个实施方案中，R4是-(CH2)nQ，其中Q是-N(R)S(O)2R8且n选自1、2、3、4和5。在另一个实施方案中，R4是-(CH2)nQ，其中Q是-N(R)S(O)2R8，其中R8是C3-6碳环，如C3-6环烷基，并且n选自1、2、3、4和5。例如，R4是-(CH2)3NHS(O)2R8且R8是环丙基。

[0476] 在另一个实施方案中，R4是-(CH2)oC(R10)2(CH2)n-oQ，其中Q是-N(R)C(O)R，n选自1、2、3、4和5，并且o选自1、2、3和4。在另一个实施方案中，R4是-(CH2)oC(R10)2(CH2)n-oQ，其中Q是-N(R)C(O)R，其中R是C1-C3烷基且n选自1、2、3、4和5，并且o选自1、2、3和4。在另一个实施方案中，R4是-(CH2)oC(R10)2(CH2)n-oQ，其中Q是-N(R)C(O)R，其中R是C1-C3烷基，n是3，并且o是1。在一些实施方案中，R10是H、OH、C1-3烷基或C2-3烯基。例如，R4是3-乙酰胺基-2,2-二甲基丙基。

[0477] 在一些实施方案中，一个R10是H且一个R10是C1-3烷基或C2-3烯基。在另一个实施方案中，各R10是C1-3烷基或C2-3烯基。在另一个实施方案中，各R10是C1-3烷基(例如甲基、乙基或丙基)。例如，一个R10是甲基且一个R10是乙基或丙基。例如，一个R10是乙基且一个R10是甲基或丙基。例如，一个R10是丙基且一个R10是甲基或乙基。例如，各R10是甲基。例如，各R10是乙基。例如，各R10是丙基。

[0478] 在一些实施方案中，一个R10是H且一个R10是OH。在另一个实施方案中，各R10是OH。

[0479] 在另一个实施方案中，R4是未被取代的C1-4烷基，例如未被取代的甲基。

[0480] 在另一个实施方案中，R4是氢。

[0481] 在某些实施方案中，本公开提供一种具有式(I)的化合物，其中R4是-(CH2)nQ或-(CH2)nCHQR，其中Q是-N(R)2，并且n选自3、4和5。

[0482] 在某些实施方案中，本公开提供一种具有式(I)的化合物，其中R4选自由以下组成的组：-(CH2)nQ、-(CH2)nCHQR、-CHQR和-CQ(R)2，其中Q是-N(R)2，并且n选自1、2、3、4和5。

[0483] 在某些实施方案中，本公开提供一种具有式(I)的化合物，其中R2和R3独立地选自由以下组成的组：C2-14烷基、C2-14烯基、-R*YR”、-YR”和-R*OR”，或R2和R3连同其所连接的原子一起形成杂环或碳环，并且R4是-(CH2)nQ或-(CH2)nCHQR，其中Q是-N(R)2，并且n选自3、4和5。

[0484] 在某些实施方案中，R2和R3独立地选自由以下组成的组：C2-14烷基、C2-14烯基、-R*YR”、-YR”和-R*OR”，或R2和R3连同其所连接的原子一起形成杂环或碳环。

[0485] 在一些实施方案中，R1选自由C5-20烷基和C5-20烯基组成的组。

[0486] 在其它实施方案中，R1选自由-R*YR”、-YR”和-R”M’R’组成的组。

[0487] 在某些实施方案中，R1选自-R*YR”和-YR”。在一些实施方案中，Y是环丙基。在一些实施方案中，R*是C8烷基或C8烯基。在某些实施方案中，R”是C3-12烷基。例如，R”可以是C3烷基。例如，R”可以是C4-8烷基(例如C4、C5、C6、C7或C8烷基)。

[0488] 在一些实施方案中，R是(CH2)qOR*，q选自1、2和3，并且R*是被一个或多个选自由氨基、C1-C6烷基氨基和C1-C6二烷基氨基组成的组的取代基取代的C1-12烷基。例如，R是(CH2)qOR*，q选自1、2和3，并且R*是被C1-C6二烷基氨基取代的C1-12烷基。例如，R是(CH2)qOR*，q选自1、2和3，并且R*是被C1-C6二烷基氨基取代的C1-3烷基。例如，R是(CH2)qOR*，q选自1、2和3，并且R*是被二甲基氨基(例如二甲基氨基乙基)取代的C1-3烷基。

[0489] 在一些实施方案中，R1是C5-20烷基。在一些实施方案中，R1是C6烷基。在一些实施方案中，R1是C8烷基。在其它实施方案中，R1是C9烷基。在某些实施方案中，R1是C14烷基。在其它实施方案中，R1是C18烷基。

[0490] 在一些实施方案中，R1是C21-30烷基。在一些实施方案中，R1是C26烷基。在一些实施方案中，R1是C28烷基。在某些实施方案中，R1是

[0491] 在一些实施方案中，R1是C5-20烯基。在某些实施方案中，R1是C18烯基。在一些实施方案中，R1是亚油基。

[0492] 在某些实施方案中，R1是分支的(例如癸-2-基、十一烷-3-基、十二烷-4-基、十三烷-5-基、十四烷-6-基、2-甲基十一烷-3-基、2-甲基癸-2-基、3-甲基十一烷-3-基、4-甲基十二烷-4-基或十七烷-9-基)。在某些实施方案中，R1是

[0493] 在某些实施方案中，R1是未被取代的C5-20烷基或C5-20烯基。在某些实施方案中，R’是被取代的C5-20烷基或C5-20烯基(例如被C3-6碳环如1-环丙基壬基取代基，或被OH或烷氧基取代)。例如，R1是

[0494] 在其它实施方案中，R1是-R”M’R’。在某些实施方案中，M’是-OC(O)-M”-C(O)O-。例如，R1是其中x是介于1与13之间的整数(例如选自3、4、5和6)，s是介于1与13之间的整数(例如选自1、2和3)，并且t是介于2与14之间的整数(例如选自4、5和6)。
例如，x选自3、4、5和6，s选自1、2和3，并且t选自4、5和6。

[0495] 在其它实施方案中，R1不是–(CHR5R6)m–M–CR2R3R7。

[0496] 在一些实施方案中，R’选自-R*YR”和–YR”。在一些实施方案中，Y是C3-8环烷基。在一些实施方案中，Y是C6-10芳基。在一些实施方案中，Y是环丙基。在一些实施方案中，Y是环己基。在某些实施方案中，R*是C1烷基。

[0497] 在一些实施方案中，R”选自由C3-12烷基和C3-12烯基组成的组。在一些实施方案中，邻近Y的R”是C1烷基。在一些实施方案中，邻近Y的R”是C4-9烷基(例如C4、C5、C6、C7或C8或C9烷基)。

[0498] 在一些实施方案中，R”是被取代的C3-12(例如被例如羟基取代的C3-12烷基)。例如，R”是

[0499] 在一些实施方案中，R’选自C4烷基和C4烯基。在某些实施方案中，R’选自C5烷基和C5烯基。在一些实施方案中，R’选自C6烷基和C6烯基。在一些实施方案中，R’选自C7烷基和C7烯基。在一些实施方案中，R’选自C9烷基和C9烯基。

[0500] 在一些实施方案中，R’是在一些实施方案中，R’是并且M’是–OC(O)-。在其它实施
方案中，R’是并且M’是–C(O)O-。

[0501] 在其它实施方案中，R’选自C11烷基和C11烯基。在其它实施方案中，R’选自C12烷基、C12烯基、C13烷基、C13烯基、C14烷基、C14烯基、C15烷基、C15烯基、C16烷基、C16烯基、C17烷基、C17烯基、C18烷基和C18烯基。在某些实施方案中，R’是直链C4-18烷基或C4-18烯基。在某些实施方案中，R’是分支链(例如癸-2-基、十一烷-3-基、十二烷-4-基、十三烷-5-基、十四烷-6-基、2-甲基十一烷-3-基、2-甲基癸-2-基、3-甲基十一烷-3-基、4-甲基十二烷-4-基或十七烷-
9-基)。在某些实施方案中，R’是

[0502] 在某些实施方案中，R’是未被取代的C1-18烷基。在某些实施方案中，R’是被取代的C1-18烷基(例如被例如烷氧基如甲氧基，或C3-6碳环如1-环丙基壬基，或C(O)O-烷基或OC(O)-烷基如C(O)OCH3或OC(O)CH3取代的C1-15烷基)。例如，R’是

[0503] 在某些实施方案中，R’是分支链C1-18烷基。例如，R’是

[0504] 在一些实施方案中，R”选自由C3-15烷基和C3-15烯基组成的组。在一些实施方案中，R”是C3烷基、C4烷基、C5烷基、C6烷基、C7烷基或C8烷基。在一些实施方案中，R”是C9烷基、C10烷基、C11烷基、C12烷基、C13烷基、C14烷基或C15烷基。

[0505] 在一些实施方案中，M’是-C(O)O-。在一些实施方案中，M’是-OC(O)-。在一些实施方案中，M’是-OC(O)-M”-C(O)O-。

[0506] 在其它实施方案中，M’是芳基或杂芳基。例如，M’可以选自由苯基、噁唑和噻唑组成的组。

[0507] 在一些实施方案中，M是-C(O)O-。在一些实施方案中，M是-OC(O)-。在一些实施方案中，M是-C(O)N(R’)-。在一些实施方案中，M是-P(O)(OR’)O-。在一些实施方案中，M是-OC(O)-M”-C(O)O-。

[0508] 在其它实施方案中，M是芳基或杂芳基。例如，M可以选自由苯基、噁唑和噻唑组成的组。

[0509] 在一些实施方案中，M与M’相同。在其它实施方案中，M与M’不同。

[0510] 在一些实施方案中，M”是键。在一些实施方案中，M”是C1-13烷基或C2-13烯基。在一些实施方案中，M”是C1-6烷基或C2-6烯基。在某些实施方案中，M”是直链烷基或烯基。在某些实施方案中，M”是分支链的，例如-CH(CH3)CH2-。

[0511] 在一些实施方案中，各R5是H。在某些此类实施方案中，各R6也是H。

[0512] 在一些实施方案中，R7是H。在其它实施方案中，R7是C1-3烷基(例如甲基、乙基、丙基或异丙基)。

[0513] 在一些实施方案中，R2和R3独立地是C5-14烷基或C5-14烯基。

[0514] 在一些实施方案中，R2与R3相同。在一些实施方案中，R2和R3是C8烷基。在某些实施方案中，R2和R3是C2烷基。在其它实施方案中，R2和R3是C3烷基。在一些实施方案中，R2和R3是C4烷基。在某些实施方案中，R2和R3是C5烷基。在其它实施方案中，R2和R3是C6烷基。在一些实施方案中，R2和R3是C7烷基。

[0515] 在其它实施方案中，R2与R3不同。在某些实施方案中，R2是C8烷基。在一些实施方案中，R3是C1-7(例如C1、C2、C3、C4、C5、C6或C7烷基)或C9烷基。

[0516] 在一些实施方案中，R7和R3是H。

[0517] 在某些实施方案中，R2是H。

[0518] 在一些实施方案中，m是5、7或9。

[0519] 在一些实施方案中，R4选自-(CH2)nQ和-(CH2)nCHQR。

[0520] 在一些实施方案中，Q选自由以下组成的组：-OR、-OH、-O(CH2)nN(R)2、-OC(O)R、-CX3、-CN、-N(R)C(O)R、-N(H)C(O)R、-N(R)S(O)2R、-N(H)S(O)2R、-N(R)C(O)N(R)2、-N(H)C(O)N(R)2、-N(H)C(O)N(H)(R)、-N(R)C(S)N(R)2、-N(H)C(S)N(R)2、-N(H)C(S)N(H)(R)、-C(R)N(R)2C(O)OR、-N(R)S(O)2R8,碳环和杂环。

[0521] 在某些实施方案中，Q是-N(R)R8、-N(R)S(O)2R8、-O(CH2)nOR、-N(R)C(＝NR9)N(R)2、-N(R)C(＝CHR9)N(R)2、-OC(O)N(R)2或-N(R)C(O)OR。

[0522] 在某些实施方案中，Q是-N(OR)C(O)R、-N(OR)S(O)2R、-N(OR)C(O)OR、-N(OR)C(O)N(R)2、-N(OR)C(S)N(R)2、-N(OR)C(＝NR9)N(R)2或-N(OR)C(＝CHR9)N(R)2。

[0523] 在某些实施方案中，Q是硫脲或其电子等排体，例如或-NHC(＝NR9)N(R)2。

[0524] 在某些实施方案中，Q是-C(＝NR9)N(R)2。例如，当Q是-C(＝NR9)N(R)2时，n是4或5。例如，R9是-S(O)2N(R)2。

[0525] 在某些实施方案中，Q是-C(＝NR9)R或-C(O)N(R)OR，例如-CH(＝N-OCH3)、-C(O)NH-OH、-C(O)NH-OCH3、-C(O)N(CH3)-OH或-C(O)N(CH3)-OCH3。

[0526] 在某些实施方案中，Q是-OH。

[0527] 在某些实施方案中，Q是被取代或未被取代的5至10元杂芳基，例如Q是三唑、咪唑、嘧啶、嘌呤、2-氨基-1,9-二氢-6H-嘌呤-6-酮-9-基(或鸟嘌呤-9-基)、腺嘌呤-9-基、胞嘧啶-1-基或尿嘧啶-1-基，其各自任选被一个或多个选自烷基、OH、烷氧基、-烷基-OH、-烷基-O-烷基的取代基取代，并且所述取代基可以进一步被取代。在某些实施方案中，Q是被取代的5至14元杂环烷基，例如被一个或多个选自氧代(＝O)、OH、氨基、单烷基或二烷基氨基以及C1-3烷基的取代基取代。例如，Q是4-甲基哌嗪基、4-(4-甲氧基苯甲基)哌嗪基、异吲哚啉-2-基-1,3-二酮、吡咯烷-1-基-2,5-二酮或咪唑烷-3-基-2,4-二酮。

[0528] 在某些实施方案中，Q是-NHR8，其中R8是任选被一个或多个选自以下的取代基取代的C3-6环烷基：氧代(＝O)、氨基(NH2)、单烷基或二烷基氨基、C1-3烷基和卤代。例如，R8是环丁烯基，例如3-(二甲基氨基)-环丁-3-烯-4-基-1,2-二酮。在其它实施方案中，R8是任选被一个或多个选自以下的取代基取代的C3-6环烷基：氧代(＝O)、硫代(＝S)、氨基(NH2)、单烷基或二烷基氨基、C1-3烷基、杂环烷基和卤代，其中所述单烷基或二烷基氨基、C1-3烷基和杂环烷基进一步被取代。例如，R8是被氧代、氨基和烷基氨基中的一个或多个取代的环丁烯基，其中所述烷基氨基进一步被例如以下一个或多个取代：C1-3烷氧基、氨基、单烷基或二烷基氨基和卤代。例如，R8是3-(((二甲基氨基)乙基)氨基)环丁-3-烯基-1,2-二酮。例如，R8是被氧代和烷基氨基中的一个或多个取代的环丁烯基。例如，R8是3-(乙基氨基)环丁-3-烯-1,2-二酮。例如，R8是被氧代、硫代和烷基氨基中的一个或多个取代的环丁烯基。例如，R8是3-(乙基氨基)-4-硫氧代环丁-2-烯-1-酮或2-(乙基氨基)-4-硫氧代环丁-2-烯-1-酮。例如，R8是被硫代和烷基氨基中的一个或多个取代的环丁烯基。例如，R8是3-(乙基氨基)环丁-3-烯-1,2-二硫酮。例如，R8是被氧代和二烷基氨基中的一个或多个取代的环丁烯基。例如，R8是3-(二乙基氨基)环丁-3-烯-1,2-二酮。例如，R8是被氧代、硫代和二烷基氨基中的一个或多个取代的环丁烯基。例如，R8是2-(二乙基氨基)-4-硫氧代环丁-2-烯-1-酮或3-(二乙基氨基)-4-硫氧代环丁-2-烯-1-酮。例如，R8是被硫代和二烷基氨基中的一个或多个取代的环丁烯基。例如，R8是3-(二乙基氨基)环丁-3-烯-1,2-二硫酮。例如，R8是被氧代和烷基氨基或二烷基氨基中的一个或多个取代的环丁烯基，其中烷基氨基或二烷基氨基进一步被例如一个或多个烷氧基取代。例如，R8是3-(双(2-甲氧基乙基)氨基)环丁-3-烯-1,2-二酮。例如，R8是被氧代和杂环烷基中的一个或多个取代的环丁烯基。例如，R8是被氧代和哌啶基、哌嗪基或吗啉基中的一个或多个取代的环丁烯基。例如，R8是被氧代和杂环烷基中的一个或多个取代的环丁烯基，其中杂环烷基进一步被例如一个或多个C1-3烷基取代。例如，R8是被氧代和杂环烷基中的一个或多个取代的环丁烯基，其中杂环烷基(例如哌啶基、哌嗪基或吗啉基)进一步被甲基取代。

[0529] 在某些实施方案中，Q是-NHR8，其中R8是任选被一个或多个选自以下的取代基取代的杂芳基：氨基(NH2)、单烷基或二烷基氨基、C1-3烷基和卤代。例如，R8是噻唑或咪唑。

[0530] 在某些实施方案中，Q是-NHC(＝NR9)N(R)2，其中R9是CN、C1-6烷基、NO2、-S(O)2N(R)2、-OR、-S(O)2R或H。例如，Q是-NHC(＝NR9)N(CH3)2、-NHC(＝NR9)NHCH3、-NHC(＝NR9)NH2。在一些实施方案中，Q是-NHC(＝NR9)N(R)2，其中R9是CN并且R是被单烷基或二烷基氨基取代的C1-3烷基，例如R是((二甲基氨基)乙基)氨基。在一些实施方案中，Q是-NHC(＝NR9)N(R)2，其中R9是C1-6烷基、NO2、-S(O)2N(R)2、-OR、-S(O)2R或H并且R是被单烷基或二烷基氨基取代的C1-3烷基，例如R是((二甲基氨基)乙基)氨基。

[0531] 在某些实施方案中，Q是-NHC(＝CHR9)N(R)2，其中R9是NO2、CN、C1-6烷基、-S(O)2N(R)2、-OR、-S(O)2R或H。例如，Q是-NHC(＝CHR9)N(CH3)2、-NHC(＝CHR9)NHCH3或-NHC(＝CHR9)NH2。

[0532] 在某些实施方案中，Q是-OC(O)N(R)2、-N(R)C(O)OR、-N(OR)C(O)OR，如-OC(O)NHCH3、-N(OH)C(O)OCH3、-N(OH)C(O)CH3、-N(OCH3)C(O)OCH3、-N(OCH3)C(O)CH3、-N(OH)S(O)2CH3或-NHC(O)OCH3。

[0533] 在某些实施方案中，Q是-N(R)C(O)R，其中R是任选被C1-3烷氧基或S(O)tC1-3烷基取代的烷基，其中t是0、1或2。

[0534] 在某些实施方案中，Q是未被取代或被取代的C6-10芳基(如苯基)或C3-6环烷基。

[0535] 在一些实施方案中，n是1。在其它实施方案中，n是2。在其它实施方案中，n是3。在某些其它实施方案中，n是4。例如，R4可以是-(CH2)2OH。例如，R4可以是-(CH2)3OH。例如，R4可以是-(CH2)4OH。例如，R4可以是苯甲基。例如，R4可以是4-甲氧基苯甲基。

[0536] 在一些实施方案中，R4是C3-6碳环。在一些实施方案中，R4是C3-6环烷基。例如，R4可以是任选被例如OH、卤代、C1-6烷基等取代的环己基。例如，R4可以是2-羟基环己基。

[0537] 在一些实施方案中，R是H。

[0538] 在一些实施方案中，R是被单烷基或二烷基氨基取代的C1-3烷基，例如R是((二甲基氨基)乙基)氨基。

[0539] 在一些实施方案中，R是被一个或多个选自由C1-3烷氧基、氨基和C1-C3二烷基氨基组成的组的取代基取代的C1-6烷基。

[0540] 在一些实施方案中，R是未被取代的C1-3烷基或未被取代的C2-3烯基。例如，R4可以是-CH2CH(OH)CH3、-CH(CH3)CH2OH或-CH2CH(OH)CH2CH3。

[0541] 在一些实施方案中，R是被取代的C1-3烷基，例如CH2OH。例如，R4可以是-CH2CH(OH)CH2OH、-(CH2)3NHC(O)CH2OH、-(CH2)3NHC(O)CH2OBn、-(CH2)2O(CH2)2OH、-(CH2)3NHCH2OCH3、-(CH2)3NHCH2OCH2CH3、CH2SCH3、CH2S(O)CH3、CH2S(O)2CH3或-CH(CH2OH)2。

[0542] 在一些实施方案中，R4选自以下基团中的任一个：

[0543]

[0544]

[0545]

[0546] 在一些实施方案中，R4选自以下基团中的任一个：

[0547]

[0548]

[0549] 在一些实施方案中，式(III)的化合物还包含阴离子。如本文所描述，并且阴离子可以是能够与胺反应形成铵盐的任何阴离子。实例包括但不限于氯离子、溴离子、碘离子、氟离子、乙酸根、甲酸根、三氟乙酸根、二氟乙酸根、三氯乙酸根和磷酸根。

[0550] 在一些实施方案中，本文所描述各式中任一个的化合物适于制备供肌肉内施用的纳米粒子组合物。

[0551] 在一些实施方案中，R2和R3连同其所连接的原子一起形成杂环或碳环。在一些实施方案中，R2和R3连同其所连接的原子一起形成具有一个或多个选自N、O、S和P的杂原子的5至14元芳香族或非芳香族杂环。在一些实施方案中，R2和R3连同其所连接的原子一起形成任选被取代的芳香族或非芳香族C3-20碳环(例如C3-18碳环、C3-15碳环、C3-12碳环或C3-10碳环)。在一些实施方案中，R2和R3连同其所连接的原子一起形成C3-6碳环。在其它实施方案中，R2和R3连同其所连接的原子一起形成C6碳环，如环己基或苯基。在某些实施方案中，所述杂环或C3-6碳环被一个或多个烷基取代(例如在同一环原子处或者在相邻或不相邻的环原子处)。例如，R2和R3连同其所连接的原子一起可以形成带有一个或多个C5烷基取代的环己基或苯基。
在某些实施方案中，由R2和R3形成的杂环或C3-6碳环被碳环基团取代。例如，R2和R3连同其所连接的原子一起可以形成环己基或苯基，该基团被环己基取代。在一些实施方案中，R2和R3连同其所连接的原子一起形成C7-15碳环，如环庚基、环十五烷基或萘基。

[0552] 在一些实施方案中，R4选自-(CH2)nQ和-(CH2)nCHQR。在一些实施方案中，Q选自由以下组成的组：-OR、-OH、-O(CH2)nN(R)2、-OC(O)R、-CX3、-CN、-N(R)C(O)R、-N(H)C(O)R、-N(R)S(O)2R、-N(H)S(O)2R、-N(R)C(O)N(R)2、-N(H)C(O)N(R)2、-N(R)S(O)2R8、-N(H)C(O)N(H)(R)、-N(R)C(S)N(R)2、-N(H)C(S)N(R)2、-N(H)C(S)N(H)(R)和杂环。在其它实施方案中，Q选自由以下组成的组：咪唑、嘧啶和嘌呤。

[0553] 在一些实施方案中，R2和R3连同其所连接的原子一起形成杂环或碳环。在一些实施方案中，R2和R3连同其所连接的原子一起形成C3-6碳环，如苯基。在某些实施方案中，所述杂环或C3-6碳环被一个或多个烷基取代(例如在同一环原子处或者在相邻或不相邻的环原子处)。例如，R2和R3连同其所连接的原子一起可以形成带有一个或多个C5烷基取代的苯基。

[0554] 在一些实施方案中，至少一个存在的R5和R6是C1-3烷基，例如甲基。在一些实施方案中，邻近M的R5和R6之一是C1-3烷基，例如甲基，并且另一个是H。在一些实施方案中，邻近M的R5和R6之一是C1-3烷基，例如甲基，并且另一个是H，并且M是–OC(O)-或–C(O)O-。

[0555] 在一些实施方案中，R5和R6中至多一个在存在时是C1-3烷基，例如甲基。在一些实施方案中，邻近M的R5和R6之一是C1-3烷基，例如甲基，并且另一个是H。在一些实施方案中，邻近M的R5和R6之一是C1-3烷基，例如甲基，并且另一个是H，并且M是–OC(O)-或–C(O)O-。

[0556] 在一些实施方案中，R5和R6在每次出现时是H。

[0557] 在一些实施方案中，式(I)的化合物选自由以下组成的组：

[0558]

[0559]

[0560]

[0561]

[0562]

[0563]

[0564]

[0565]

[0566]

[0567] 在其它实施方案中，式(I)的化合物选自由以下组成的组：

[0568]

[0569] 在一些实施方案中，式(I)的化合物选自由以下组成的组：

[0570]

[0571]

[0572]

[0573]

[0574]

[0575]

[0576]

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[0602]

[0603]

[0604]

[0605]

[0606]

[0607]

[0608]

[0609]

[0610]

[0611]

[0612]

[0613]

[0614]

[0615] 以及其N-氧化物、其盐和异构体。

[0616] 在一些实施方案中，本公开的脂质包含化合物340：

[0617]

[0618] 根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的脂质的中心胺部分可以在生理pH下质子化。因此，脂质可以在生理pH下带正电荷或部分正电荷。这些脂质可以称为阳离子性或可离子化(氨基)脂质。脂质还可以是两性离子性的，即，同时带正电荷和负电荷的中性分子。

[0619] 如本文所使用，术语“烷基”或“烷基基团”意思指包括一个或多个碳原子(例如一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个、十七个、十八个、十九个、二十个或更多个碳原子)的任选被取代的直链或分支链饱和烃。标记“C1-14烷基”意思指包括1-14个碳原子的任选被取代的直链或分支链饱和烃。除非另外具体说明，否则本文所述的烷基是指未取代和被取代的烷基两种。

[0620] 如本文所使用，术语“烯基”或“烯基基团”意思指包括两个或更多个碳原子(例如两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个、十七个、十八个、十九个、二十个或更多个碳原子)和至少一个双键的任选被取代的直链或分支链烃。标记“C2-14烯基”意思指包括2-14个碳原子和至少一个碳-碳双键的任选被取代的直链或分支链烃。烯基可以包括一个、两个、三个、四个或更多个碳-碳双键。例如，C18烯基可以包括一个或多个双键。包括两个双键的C18烯基可以是亚油基。除非另外具体说明，否则本文所述的烯基是指未取代和被取代的烯基两种。

[0621] 如本文所使用，术语“炔基”或“炔基基团”意思指包括两个或更多个碳原子(例如两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个、十一个、十二个、十三个、十四个、十五个、十六个、十七个、十八个、十九个、二十个或更多个碳原子)和至少一个碳-碳三键的任选被取代的直链或分支链烃。标记“C2-14炔基”意思指包括2-14个碳原子和至少一个碳-碳三键的任选被取代的直链或分支链烃。炔基可以包括一个、两个、三个、四个或更多个碳-碳三键。例如，C18炔基可以包括一个或多个碳-碳三键。除非另外具体说明，否则本文所述的炔基是指未取代和被取代的炔基两种。

[0622] 如本文所使用，术语“碳环”或“碳环基团”意思指包括一个或多个由碳原子构成的环的任选被取代的单环或多环系统。环可以是三元、四元、五元、六元、七元、八元、九元、十元、十一元、十二元、十三元、十四元、十五元、十六元、十七元、十八元、十九元或二十元环。标记“C3-6碳环”意思指包括具有3-6个碳原子的单环的碳环。碳环可以包括一个或多个碳-碳双键或三键并且可以是非芳香族或芳香族环(例如环烷基或芳基)。碳环的实例包括环丙基、环戊基、环己基、苯基、萘基和1,2-二氢萘基。如本文所使用，术语“环烷基”意思指非芳香族碳环并且可以包括或可不包括任何双键或三键。除非另外具体说明，否则本文所述的碳环是指未取代和被取代的碳环基团两种，即，任选被取代的碳环。

[0623] 如本文所使用，术语“杂环”或“杂环基团”意思指包括一个或多个环且至少一个环包括至少一个杂原子的任选被取代的单环或多环系统。杂原子可以是例如氮、氧或硫原子。环可以是三元、四元、五元、六元、七元、八元、九元、十元、十一元、十二元、十三元或十四元环。杂环可以包括一个或多个双键或三键并且可以是非芳香族或芳香族环(例如杂环烷基或杂芳基)。杂环的实例包括咪唑基、咪唑烷基、噁唑基、噁唑烷基、噻唑基、噻唑烷基、吡唑烷基、吡唑基、异噁唑烷基、异噁唑基、异噻唑烷基、异噻唑基、吗啉基、吡咯基、吡咯烷基、呋喃基、四氢呋喃基、噻吩基、吡啶基、哌啶基、喹啉基和异喹啉基。如本文所使用，术语“杂环烷基”意思指非芳香族杂环并且可以包括或可不包括任何双键或三键。除非另外具体说明，否则本文所述的杂环是指未取代和被取代的杂环基团两种，即，任选被取代的杂环。

[0624] 如本文所使用，“生物可降解基团”是可有助于加快脂质在哺乳动物个体中代谢的基团。生物可降解基团可以选自由但不限于以下组成的组：-C(O)O-、-OC(O)-、-C(O)N(R’)-、-N(R’)C(O)-、-C(O)-、-C(S)-、-C(S)S-、-SC(S)-、-CH(OH)-、-P(O)(OR’)O-、-S(O)2-、芳基和杂芳基。如本文所使用，“芳基”是包括一个或多个芳香族环的任选被取代的碳环基团。芳基的实例包括苯基和萘基。如本文所使用，“杂芳基”是包括一个或多个芳香族环的任选被取代的杂环基团。杂芳基的实例包括吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噁唑基和噻唑基。芳基和杂芳基都可以任选被取代。例如，M和M’可以选自由任选被取代的苯基、噁唑和噻唑组成的非限制性组。在本文各式中，M和M’可以独立地选自以上生物可降解基团的清单。除非另外具体说明，否则本文所述的芳基或杂芳基是指未取代和被取代的基团两种，即，任选被取代的芳基或杂芳基。

[0625] 除非另外具体说明，否则烷基、烯基和环基(例如碳环基和杂环基)可以任选被取代。可选取代基可以选自由但不限于以下组成的组：卤素原子(例如氯基、溴基、氟基或碘基)、羧酸(例如-C(O)OH)、醇(例如羟基,-OH)、酯(例如-C(O)OR或-OC(O)R)、醛(例如-C(O)H)、羰基(例如-C(O)R，或由C＝O表示)、酰基卤(例如-C(O)X，其中X是选自溴、氟、氯和碘的卤基)、碳酸酯基(例如-OC(O)OR)、烷氧基(例如-OR)、缩醛(例如-C(OR)2R””，其中各OR是相同或不同的烷氧基并且R””是烷基或烯基)、磷酸根(例如P(O)43-)、硫基(例如-SH)、亚砜(例如-S(O)R)、亚磺酸(例如-S(O)OH)、磺酸(例如-S(O)2OH)、硫醛(例如-C(S)H)、硫酸根(例如S(O)42-)、磺酰基(例如-S(O)2-)、酰胺(例如-C(O)NR2或-N(R)C(O)R)、叠氮基(例如-N3)、硝基(例如-NO2)、氰基(例如-CN)、异氰基(例如-NC)、酰氧基(例如-OC(O)R)、氨基(例如-NR2、-NRH或-NH2)、氨甲酰基(例如-OC(O)NR2、-OC(O)NRH或-OC(O)NH2)、磺酰胺(例如-S(O)2NR2、-S(O)2NRH、-S(O)2NH2、-N(R)S(O)2R、-N(H)S(O)2R、-N(R)S(O)2H或-N(H)S(O)2H)、烷基、烯基和环基(例如碳环基或杂环基)。在前述任一种中，R是如本文所定义的烷基或烯基。在一些实施方案中，取代基本身可以进一步被例如一个、两个、三个、四个、五个或六个如本文所定义的取代基取代。例如，C1-6烷基可以进一步被一个、两个、三个、四个、五个或六个如本文所述的取代基取代。

[0626] 含有氮的本公开化合物可以通过用氧化剂(例如3-氯过氧苯甲酸(mCPBA)和/或过氧化氢)处理而转化成N-氧化物，由此得到本公开的其它化合物。因此，当价态和结构允许时，考虑所有显示并且要求的含氮化合物都包括所示化合物和其N-氧化物衍生物(可以表示为N→O或N+-O-)。此外，在其它情况下，本公开化合物中的氮可以被转化成N-羟基或N-烷氧基化合物。例如，N-羟基化合物可以通过用氧化剂如m-CPBA氧化母体胺来制备。当价态和结构允许时，还考虑所有显示并且要求的含氮化合物包括所示化合物和其N-羟基(即，N-OH)和N-烷氧基(即，N-OR，其中R是被取代或未取代的C1-C6烷基、C1-C6烯基、C1-C6炔基、3-14元碳环或3-14元杂环)衍生物。

[0627] 约、近似地：如本文所使用，术语“近似地”和“约”当用于一个或多个所关注值时是指与所述参考值类似的值。在某些实施方案中，除非另外规定或另外从上下文显而易见，否则术语“近似地”或“约”是指在所述参考值任一方向(大于或小于)的25％、20％、19％、18％、17％、16％、15％、14％、13％、12％、11％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、
1％或更低百分比范围内的一系列值(这一值将超过可能值的100％的情形除外)。例如，当用于纳米粒子组合物的脂质组分中给定化合物的量时，“约”可以指所述值的+/-10％。例如，包括具有约40％给定化合物的脂质组分的纳米粒子组合物可以包括30-50％的所述化合物。

[0628] 如本文所使用，术语“化合物”意图包括所描绘结构的所有异构体和同位素。“同位素”是指具有相同原子数但因核中的中子数量不同而具有不同质量数的原子。例如，氢的同位素包括氚和氘。另外，本公开的化合物、盐或复合物可以与溶剂或水分子组合制备以通过常规方法形成溶剂化物和水合物。

[0629] 如本文所使用，术语“接触”意思指在两个或更多个实体之间建立物理连接。例如，使哺乳动物细胞与纳米粒子组合物接触意味着，使哺乳动物细胞和纳米粒子共有物理连接。使细胞与外部实体在体内和离体接触的方法是生物领域中众所周知的。例如，使纳米粒子组合物与处于哺乳动物体内的哺乳动物细胞接触可以通过不同施用途径(例如静脉内、肌肉内、皮内和皮下)进行并且可以涉及不同量的纳米粒子组合物。此外，纳米粒子组合物可以接触超过一个哺乳动物细胞。

[0630] 如本文所使用，术语“递送”意思指将实体提供至目标。例如，将治疗剂和/或预防剂递送至受试者可涉及将包括该治疗剂和/或预防剂的纳米粒子组合物施用给该受试者(例如通过静脉内、肌肉内、皮内或皮下途径)。将纳米粒子组合物施用给哺乳动物或哺乳动物细胞可涉及使一个或多个细胞与该纳米粒子组合物接触。

[0631] 如本文所使用，术语“增进地递送”意思指通过纳米粒子将治疗剂和/或预防剂递送至所关注的目标组织(例如哺乳动物肝)高于(例如高至少1.5倍、高至少2倍、高至少3倍、高至少4倍、高至少5倍、高至少6倍、高至少7倍、高至少8倍、高至少9倍、高至少10倍)通过对照纳米粒子将治疗剂和/或预防剂递送至所关注的目标组织(例如MC3、KC2或DLinDMA)的水平。特定组织中纳米粒子的递送水平可以通过将组织中产生的蛋白质的量与所述组织的重量相比较，将组织中治疗剂和/或预防剂的量与所述组织的重量相比较，将组织中产生的蛋白质的量与所述组织中总蛋白质的量相比较或将组织中治疗剂和/或预防剂的量与所述组织中总治疗剂和/或预防剂的量相比较来测量。应了解，不必测定所治疗的受试者体内纳米粒子向目标组织的增进地递送，该递送可以在代用品如动物模型(例如大鼠模型)中测定。在某些实施方案中，包括根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物的纳米粒子组合物具有实质上相同的递送增进水平，不管施用途径如何。例如，本文所公开的某些化合物当用于静脉内或肌肉内递送治疗剂和/或预防剂时展现出类似的递送增进作用。在其它实施方案中，本文所公开的某些化合物(例如式(IA)或(II)的化合物，如化合物18、25、30、60、108-112或122)当用于肌肉内递送治疗剂和/或预防剂时展现的递送增进水平要高于静脉内递送时展现的水平。

[0632] 如本文所使用，术语“特异性递送(specific delivery/specifically deliver/specifically delivering)”、意思指通过纳米粒子将治疗剂和/或预防剂递送至所关注的目标组织(例如哺乳动物肝)高于(例如高至少1.5倍、高至少2倍、高至少3倍、高至少4倍、高至少5倍、高至少6倍、高至少7倍、高至少8倍、高至少9倍、高至少10倍)递送至非目标组织(例如哺乳动物脾)。特定组织中纳米粒子的递送水平可以通过将组织中产生的蛋白质的量与所述组织的重量相比较，将组织中治疗剂和/或预防剂的量与所述组织的重量相比较，将组织中产生的蛋白质的量与所述组织中总蛋白质的量相比较或将组织中治疗剂和/或预防剂的量与所述组织中总治疗剂和/或预防剂的量相比较来测量。例如，对于肾血管靶向，如果在全身施用治疗剂和/或预防剂后，递送至肾的每1g组织的治疗剂和/或预防剂量是递送至肝或脾的治疗剂和/或预防剂量的1.5倍、2倍、3倍、5倍、10倍、15倍或20倍，则相较于肝和脾，该治疗剂和/或预防剂被特异性提供至哺乳动物肾。应了解，不必测定所治疗的受试者体内纳米粒子向目标组织的特异性递送，该递送可以在代用品如动物模型(例如大鼠模型)中测定。

[0633] 如本文所使用，“包封效率”是指变为纳米粒子组合物的一部分的治疗剂和/或预防剂的量与用于制备纳米粒子组合物中的治疗剂和/或预防剂的初始总量的比率。例如，如果在最初提供至组合物中的总计100mg治疗剂和/或预防剂中有97mg治疗剂和/或预防剂被包封于纳米粒子组合物中，则可以得出包封效率是97％。如本文所使用，“包封”可以指完全、大部分或部分封装、密封、包围或包装。

[0634] 如本文所使用，核酸序列的“表达”是指mRNA翻译成多肽或蛋白质和/或多肽或蛋白质的翻译后修饰。

[0635] 如本文所使用，术语“体外”是指在人工环境，例如在试管或反应容器中、细胞培养物中、皮氏培养皿(Petri dish)等中发生而非在生物体(例如动物、植物或微生物)内部发生的事件。

[0636] 如本文所使用，术语“体内”是指在生物体(例如动物、植物或微生物，或其细胞或组织)内部发生的事件。

[0637] 如本文所使用，术语“离体”是指在生物体(例如动物、植物或微生物，或其细胞或组织)外部发生的事件。离体事件可以在相对于自然(例如体内)环境改变最小的环境中发生。

[0638] 如本文所使用，术语“异构体”意思指化合物的任何几何异构体、互变异构体、两性离子、立体异构体、对映异构体或非对映异构体。化合物可以包括一个或多个手性中心和/或双键，并因此呈立体异构体，如双键异构体(即，几何E/Z异构体)或非对映异构体(例如对映异构体(即，(+)或(-))或顺式/反式异构体)形式存在。本公开涵盖本文所描述的化合物的任何和所有异构体，包括立体异构纯形式(例如几何异构纯、对映异构纯或非对映异构纯)以及对映异构体和立体异构体混合物，例如外消旋物。化合物的对映异构体和立体异构体混合物以及将其拆分成其组成对映异构体或立体异构体的方式是众所周知的。

[0639] “互变异构体”是平衡存在并且易于从一种异构体转化成另一种异构体的两种或更多种结构异构体之一。这一转化引起氢原子的形式迁移伴随相邻共轭双键的变换。互变异构体以在溶液中互变异构体集的混合物形式存在。在可能发生互变异构化的溶液中，将达到互变异构体的化学平衡。互变异构体的确切比率取决于若干因素，包括温度、溶剂和pH值。可通过互变异构化相互转换的互变异构体的概念称为互变异构。

[0640] 在可能存在的各种类型互变异构中，有两种是常常观察到的。在酮基-烯醇互变异构中，电子和氢原子同时发生移位。环-链互变异构是由于糖链分子中的醛基(-CHO)与同一分子中的一个羟基(-OH)反应而赋予其如由葡萄糖所展现的环状(环形)形式引起。

[0641] 常见的互变异构对有：杂环(例如在核碱基，如鸟嘌呤、胸腺嘧啶和胞嘧啶中)中的酮-烯醇、酰胺-腈、内酰胺-内酰亚胺、酰胺-亚氨酸互变异构，以及亚胺-烯胺和烯胺-烯胺。双取代胍中的互变异构的实例显示于下。

[0642]

[0643] 应了解，本公开的化合物可以用不同互变异构体描绘。还应了解，当化合物具有互变异构形式时，所有互变异构形式都意图包括在本公开的范围内，并且这些化合物的命名不排除任何互变异构体形式。

[0644] 如本文所使用，“脂质组分”是包括一种或多种脂质的纳米粒子组合物的组分。例如，脂质组分可以包括一种或多种阳离子性/可离子化脂质、聚乙二醇化脂质、结构性脂质或其它脂质，如磷脂。

[0645] 如本文所使用，“连接子”是连接两个部分的部分例如帽物种的两个核苷之间的连接。连接子可以包括一个或多个基团，包括但不限于磷酸酯基(例如磷酸酯基、硼烷磷酸酯基、硫代磷酸酯基、硒代磷酸酯基和膦酸酯基)、烷基、酰胺酸酯基或甘油。例如，帽类似物的两个核苷可以在其5’位置通过三磷酸酯基或通过包括两个磷酸酯部分和一个硼烷磷酸酯部分你的链连接。

[0646] 如本文所使用，“施用方法”可以包括静脉内、肌肉内、皮内、皮下或将组合物递送至受试者的其它方法。施用方法的选择应靶向递送(例如特异性递送)至身体的特定区域或系统。

[0647] 如本文所使用，“修饰过的”意思指非天然的。例如，RNA可以是修饰过的RNA。也就是说，RNA可以包括一个或多个非天然存在的核碱基、核苷、核苷酸或连接子。“修饰过的”物种在本文中还可以称为“改变的”物种。物种可以在化学上、结构上或功能上进行修饰或改变。例如，修饰过的核碱基物种可以包括一个或多个非天然存在的取代。

[0648] 如本文所使用，“N:P比率”是脂质中可离子化(在生理pH范围内)氮原子与RNA中磷酸酯基的摩尔比，例如包括脂质组分和RNA的纳米粒子组合物中的比率。

[0649] 如本文所使用，“纳米粒子组合物”是包含一种或多种脂质的组合物。纳米粒子组合物典型地是约微米级或更小的大小并且可以包括脂质双层。纳米粒子组合物涵盖脂质纳米粒子(LNP)、脂质体(例如脂质囊泡)和脂质复合物。例如，纳米粒子组合物可以是具有直径为500nm或更小的脂质双层的脂质体。

[0650] 如本文所使用，“天然存在”意思指在自然界中存在，而无人工辅助。

[0651] 如本文所使用，“患者”是指可能寻求或要求治疗、需要治疗、正接受治疗、即将接受治疗的受试者，或在针对特定疾病或病况的经过训练的专业人员的护理下的受试者。

[0652] 如本文所使用，“PEG脂质”或“聚乙二醇化脂质”是指包含聚乙二醇组分的脂质。

[0653] 短语“药学上可接受的”在本文中用于指在合理的医学判断范围内、适于与人类和动物组织接触使用而无过度毒性、刺激、过敏反应或其它问题或并发症，并且与合理的效益/风险比相符的化合物、材料、组合物和/或剂型。

[0654] 如本文所使用，短语“药学上可接受的赋形剂”是指在患者体内大体上无毒并且无炎性反应的除本文所描述的化合物外的任何成分(例如能够使活性化合物悬浮、形成复合物或溶解的媒剂)。赋形剂可以包括例如：抗黏附剂、抗氧化剂、黏合剂、包衣、压缩助剂、崩解剂、染料(色素)、缓和剂、乳化剂、填充剂(稀释剂)、成膜剂或包衣、调味剂、香料、助流剂(流动增强剂)、润滑剂、防腐剂、印刷墨水、吸附剂、悬浮剂或分散剂、甜味剂以及水合用水。示例性赋形剂包括但不限于：丁基化羟基甲苯(BHT)、碳酸钙、磷酸氢二钙、硬脂酸钙、交联羧甲基纤维素钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、柠檬酸、交联聚维酮(crospovidone)、半胱氨酸、乙基纤维素、明胶、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乳糖、硬脂酸镁、麦芽糖醇、甘露糖醇、甲硫氨酸、甲基纤维素、对羟基苯甲酸甲酯、微晶纤维素、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚维酮、预胶化淀粉、对羟基苯甲酸苯酯、视黄醇棕榈酸酯、虫胶、二氧化硅、羧甲基纤维素钠、柠檬酸钠、羟基乙酸淀粉钠、山梨糖醇、淀粉(玉米)、硬脂酸、蔗糖、滑石、二氧化钛、维生素A、维生素E(α-生育酚)、维生素C、木糖醇以及本文所公开的其它物种。

[0655] 在本说明书中，化合物的结构式在一些情况下为便利而呈现某些异构体，但本公开包括所有异构体，如几何异构体、基于不对称碳的光学异构体、立体异构体、互变异构体等，应了解，并非所有异构体都具有相同活性水平。此外，这些式所呈现的化合物还可能存在晶体多态性。应注意，其任何晶体形式、晶体形式混合物或酸酐或水合物都被包括在本公开的范围内。

[0656] 术语“晶体多晶型”、“多晶型”或“晶体形式”意思指晶体结构，在这些结构中，一种化合物(或其盐或溶剂化物)可以结晶成不同晶体堆积布置，所有这些布置都具有相同元素组成。不同晶体形式通常具有不同的X射线衍射模式、红外光谱、熔点、密度硬度、晶体形状、光学和电特性、稳定性和溶解性。再结晶溶剂、结晶速率、储存温度以及其它因素可能会使一种晶体形式占主导。所述化合物的晶体多晶型可以通过在不同条件下结晶来制备。

[0657] 组合物还可以包括一种或多种化合物的盐。盐可以是药学上可接受的盐。如本文所使用，“药学上可接受的盐”是指所公开化合物的衍生物，其中母体化合物通过将现有酸或碱部分转化成其盐形式(例如通过使游离碱性基团与适合有机酸反应)而改变。药学上可接受的盐的实例包括但不限于碱性残基如胺的无机或有机酸盐；酸性残基如羧酸的碱金属或有机盐等。代表性酸加成盐包括但不限于乙酸盐、己二酸盐、褐藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙烷磺酸盐、反丁烯二酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢溴酸盐、盐酸盐、氢碘酸盐、2-羟基-乙烷磺酸盐、乳糖醛酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、顺丁烯二酸盐、丙二酸盐、甲烷磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟碱酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐、十一烷酸盐、戊酸盐等。代表性碱金属或碱土金属盐包括但不限于钠、锂、钾、钙、镁盐等；以及无毒铵、季铵和胺阳离子，包括但不限于铵、四甲基铵、四乙基铵、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、乙胺等。本公开的药学上可接受的盐包括例如由无毒无机或有机酸形成的母体化合物的常规无毒盐。本公开的药学上可接受的盐可以由含有碱性或酸性部分的母体化合物通过常规化学方法合成。一般而言，这些盐可以通过使这些化合物的游离酸或碱形式与化学计算量的量的适当碱或酸在水中或在有机溶剂中，或在这两种的混合物中反应来制备；一般优选非水性介质，如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈。适合盐的清单见于Remington’s Pharmaceutical Sciences,第17版,Mack Publishing Company,Easton,Pa.,1985,第1418页,Pharmaceutical Salts:Properties,Selection,and Use,P.H.Stahl和C.G.Wermuth(编辑),Wiley-VCH,2008；和Berge等人,Journal of Pharmaceutical Science,66,1-19(1977)，其各自以引用的方式整体并入本文中。

[0658] 如本文所使用，“磷脂”是包括磷酸酯部分和一个或多个碳链，如不饱和脂肪酸链的脂质。磷脂可以包括一个或多个多键(例如双键或三键)(例如一处或多处不饱和)。特定的磷脂可有助于与膜融合。例如，阳离子性磷脂可以与膜(例如细胞膜或细胞内膜)的一种或多种带负电的磷脂相互作用。磷脂与膜融合可以使含脂质的组合物中的一种或多种成分穿过膜，由此允许例如将该一种或多种成分递送至细胞。

[0659] 如本文所使用，“多分散指数”是描述一个系统的粒度分布的均质性的一种比率。较小的值，例如小于0.3，指示较窄的粒度分布。

[0660] 如本文所使用，术语“多肽”或“所关注多肽”是指典型地由天然产生(例如分离或纯化)或合成产生的肽键接合的氨基酸残基的聚合物。

[0661] 如本文所使用，“RNA”是指可能天然存在或非天然存在的核糖核酸。例如，RNA可以包括修饰过的和/或非天然存在的组分，如一个或多个核碱基、核苷、核苷酸或连接子。RNA可以包括帽结构、链终止核苷、茎环、聚腺苷酸序列和/或聚腺苷酸化信号。RNA可以具有编码所关注多肽的核苷酸序列。例如，RNA可以是信使RNA(mRNA)。翻译编码特定多肽的mRNA，例如在哺乳动物细胞内部体内翻译mRNA可以产生编码的多肽。RNA可以选自由以下组成的非限制性组：小干扰RNA(siRNA)、不对称干扰RNA(aiRNA)、微RNA(miRNA)、Dicer-底物RNA(dsRNA)、小发夹RNA(shRNA)、mRNA、单链向导RNA(sgRNA)、cas9 mRNA及其混合物。

[0662] 如本文所使用，“单一单位剂量”是以一次剂量/一次/单一途径/单一接触点，即单一施用事件施用的任何治疗剂的剂量。

[0663] 如本文所使用，“分次剂量”是将单一单位剂量或总每日剂量分成两次或更多次剂量。

[0664] 如本文所使用，“总每日剂量”是在24小时时间段内给予或规定的量。该剂量可以作为单一单位剂量施用。

[0665] 如本文所使用，在纳米粒子组合物情况下“大小”或“平均大小”是指纳米粒子组合物的平均直径。

[0666] 如本文所使用，术语“受试者”或“患者”是指可以施用根据本公开的组合物以例如用于实验、诊断、预防和/或治疗目的的任何生物体。典型受试者包括动物(例如哺乳动物如小鼠、大鼠、兔、非人类灵长类动物以和人类)和/或植物。

[0667] 如本文所使用，“目标细胞”是指一个或多个所关注细胞。这些细胞可以见于生物体的体外、体内、原位或者组织或器官中。生物体可以是动物，优选是哺乳动物，更优选是人并且最优选是患者。

[0668] 如本文所使用，“目标组织”是指递送治疗剂和/或预防剂将引起所希望的生物和/或药理学作用的任一种或多种所关注的组织类型。所关注的目标组织的实例包括特定组织、器官和系统或其组群。在特定应用中，目标组织可以是肾、肺、脾、血管(冠状动脉内或股动脉内)中的血管内皮或肿瘤组织(例如通过肿瘤内注射)。“非目标组织”是指所编码蛋白质的表达不会引起所希望的生物和/或药理学作用的任一种或多种组织类型。在特定应用中，非目标组织可以包括肝和脾。

[0669] 术语“治疗剂”或“预防剂”是指当施用给受试者时具有治疗、诊断和/或预防作用和/或引起所希望的生物和/或药理学作用的任何试剂。治疗剂又称为“活性物”或“活性剂”。这些试剂包括但不限于细胞毒素、放射性离子、化学治疗剂、小分子药物、蛋白质和核酸。

[0670] 如本文所使用，术语“治疗有效量”意思指当施用给罹患或易患感染、疾病、病症和/或病况的受试者时足以治疗该感染、疾病、病症和/或病况，改善其症状、诊断、防止和/或延迟其发作而递送的试剂(例如核酸、药物、组合物、治疗剂、诊断剂、预防剂等)的量。

[0671] 如本文所使用，“转染”是指将一个物种(例如RNA)引入细胞中。转染可以例如在体外、离体或体内发生。

[0672] 如本文所使用，术语“治疗”是指部分或完全地减轻、改良、改善、缓解特定感染、疾病、病症和/或病况的一种或多种症状或特征，延迟其发作，抑制其进展，降低其严重程度和/或减少其发生。例如，“治疗”癌症可以指抑制肿瘤存活、生长和/或扩散。治疗可以施用给未展现疾病、病症和/或病况的病征的受试者和/或仅展现疾病、病症和/或病况的早期病征的受试者以实现降低发展与该疾病、病症和/或病况相关的病理学的风险。

[0673] 如本文所使用，“ζ电势”是指例如纳米粒子组合物中脂质的电动电势。

[0674] 纳米粒子组合物

[0675] 本公开的特征还在于纳米粒子组合物，其包括含如本文所描述的根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物的脂质组分。

[0676] 在一些实施方案中，当例如通过动态光散射(DLS)、透射电子显微术、扫描电子显微术或另一方法所测量，纳米粒子组合物的最大尺寸是1μm或更短(例如1μm、900nm、800nm、700nm、600nm、500nm、400nm、300nm、200nm、175nm、150nm、125nm、100nm、75nm、50nm或更短)。
纳米粒子组合物包括例如脂质纳米粒子(LNP)、脂质体、脂质囊泡和脂质复合物。在一些实施方案中，纳米粒子组合物是包括一个或多个脂质双层的囊泡。在某些实施方案中，纳米粒子组合物包括通过水性隔室隔开的两个或更多个同心双层。脂质双层可以被功能化和/或彼此交联。脂质双层可以包括一种或多种配体、蛋白质或通道。

[0677] 纳米粒子组合物包含至少一种根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物的脂质组分。例如，纳米粒子组合物的脂质组分可以包括化合物1-280中的一种或多种。纳米粒子组合物还可以包括多种其它组分。例如，纳米粒子组合物的脂质组分除包含根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的脂质外，还包括一种或多种其它脂质。

[0678] 阳离子性/可离子化脂质

[0679] 纳米粒子组合物除包括根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的脂质外，还包括一种或多种阳离子性和/或可离子化脂质(例如在生理pH下可以带正电荷或部分正电荷的脂质)。阳离子性和/或可离子化脂质可以选自由以下组成的非限制性组：3-(双十二烷基氨基)-N1,N1,4-三-十二烷基-1-哌嗪乙胺(KL10)、N1-[2-(双十二烷基氨基)乙基]-N1,N4,N4-三-十二烷基-1,4-哌嗪二乙胺(KL22)、
14,25-双十三烷基-15,18,21,24-四氮杂-三十八烷(KL25)、1,2-二亚油基氧基-N,N-二甲基氨基丙烷(DLin-DMA)、2,2-二亚油基-4-二甲基氨基甲基-[1,3]-二氧杂环戊烷(DLin-K-DMA)、4-(二甲基氨基)丁酸三十七碳-6,9,28,31-四烯-19-基酯(DLin-MC3-DMA)、2,2-二亚油基-4-(2-二甲基氨基乙基)-[1,3]-二氧杂环戊烷(DLin-KC2-DMA)、1,2-二油氧基-N,N-二甲基氨基丙烷(DODMA)、2-({8-[(3β)-胆固-5-烯-3-基氧基]辛基}氧基)-N,N-二甲基-3-[(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基氧基]丙-1-胺(Octyl-CLinDMA)、(2R)-2-({8-[(3β)-胆固-5-烯-3-基氧基]辛基}氧基)-N,N-二甲基-3-[(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基氧基]丙-1-胺(Octyl-CLinDMA(2R))以及(2S)-2-({8-[(3β)-胆固-5-烯-3-基氧基]辛基}氧基)-N,N-二甲基-3-[(9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基氧基]丙-1-胺(Octyl-CLinDMA
(2S))。除这些外，阳离子性脂质还可以是包括环状胺基的脂质。

[0680] PEG脂质

[0681] 纳米粒子组合物的脂质组分可以包括一种或多种PEG或PEG改性的脂质。这些物种可以替代地称为聚乙二醇化脂质。PEG脂质是用聚乙二醇改性的脂质。PEG脂质可以选自由以下组成的非限制性组：PEG改性的磷脂酰乙醇胺、PEG改性的磷脂酸、PEG改性的神经酰胺(PEG-CER)、PEG改性的二烷基胺、PEG改性的二酰基甘油(PEG-DEG)、PEG改性的二烷基甘油以及其混合物。例如，PEG脂质可以是PEG-c-DOMG、PEG-DMG、PEG-DLPE、PEG-DMPE、PEG-DPPC或PEG-DSPE脂质。

[0682] 结构性脂质

[0683] 纳米粒子组合物的脂质组分可以包括一种或多种结构性脂质。结构性脂质可以选自由但不限于以下组成的组：胆固醇、粪固醇、谷固醇、麦角固醇、菜油固醇、豆固醇、菜籽固醇、番茄碱(tomatidine)、番茄素(tomatine)、熊果酸、α-生育酚以及其混合物。在一些实施方案中，结构性脂质是胆固醇。在一些实施方案中，结构性脂质包括胆固醇和皮质类固醇(如泼尼松龙(prednisolone)、地塞米松、泼尼松(prednisone)和氢化可的松(hydrocortisone))或其组合。

[0684] 磷脂

[0685] 纳米粒子组合物的脂质组分可以包括一种或多种磷脂，如一种或多种(多)不饱和脂质。磷脂可以组装成一个或多个脂质双层。一般来说，磷脂可以包括磷脂部分和一个或多个脂肪酸部分。例如，磷脂可以是根据式(IV)的脂质：

[0686]

[0687] 其中Rp表示磷脂部分并且R1和R2表示具有或不具有不饱和的脂肪酸部分，这些脂肪酸部分可以是相同或不同的。磷脂部分可以选自由以下组成的非限制性组：磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、磷脂酰丝氨酸、磷脂酸、2-溶血磷脂酰胆碱和鞘磷脂。脂肪酸部分可以选自由以下组成的非限制性组：月桂酸、肉豆蔻酸、肉豆蔻烯酸、棕榈酸、棕榈油酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、α-亚麻酸、芥酸、植烷酸、花生酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、山萮酸、二十二碳五烯酸和二十二碳六烯酸。还涵盖包括带有修饰和取代的天然物种的非天然物种，所述修饰和取代包括分支、氧化、环化和炔烃。例如，磷脂可以用一种或多种炔烃(例如一个或多个双键被三键置换的烯基)官能化或与该一种或多种炔烃交联。在适当反应条件下，炔基在暴露于叠氮化物时可能经历铜催化的环加成反应。这些反应可用于使纳米粒子组合物的脂质双层官能化以促进膜渗透或细胞识别，或将纳米粒子组合物与有用组分如靶向或成像部分(例如染料)偶联。

[0688] 可用于这些组合物和方法中的磷脂可以选自由以下组成的非限制性组：1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DSPC)、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(DOPE)、1,2-二亚油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DLPC)、1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-磷酸胆碱(DMPC)、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(DOPC)、1,2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱
(DPPC)、1,2-双十一烷酰基-sn-甘油-磷酸胆碱(DUPC)、1-棕榈酰基-2-油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(POPC)、1,2-二-O-十八碳烯基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(18:0Diether PC)、1-油酰基-2-胆固醇基半琥珀酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(OChemsPC)、1-十六烷基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(C16 Lyso PC)、1,2-二亚麻酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱、1,2-二花生四烯酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱、1,2-双二十二碳六烯酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱、1,2-二植烷酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(ME 16.0 PE)、1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、1,2-二亚油酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、1,2-二亚麻酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、1,2-二花生四烯酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、1,2-双二十二碳六烯酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺、1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸-rac-(1-甘油)钠盐(DOPG)、二棕榈酰基磷脂酰甘油(DPPG)、棕榈酰基油酰基磷脂酰乙醇胺(POPE)、二硬脂酰基-磷脂酰-乙醇胺(DSPE)、二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)、二肉豆蔻酰基磷酸乙醇胺(DMPE)、1-硬脂酰基-2-油酰基-硬脂酰乙醇胺(SOPE)、1-硬脂酰基-2-油酰基-磷脂酰胆碱(SOPC)、鞘磷脂、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酸、棕榈酰基油酰基磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰乙醇胺(LPE)以及其混合物。在一些实施方案中，纳米粒子组合物包括DSPC。在某些实施方案中，纳米粒子组合物包括DOPE。在一些实施方案中，纳米粒子组合物包括DSPC和DOPE两种。

[0689] 佐剂

[0690] 在一些实施方案中，包括一种或多种本文所描述的脂质的纳米粒子组合物还可以包括一种或多种佐剂，例如吡喃葡萄糖基脂质佐剂(GLA)、CpG寡聚脱氧核糖核苷酸(例如A类或B类)、多聚(I:C)、氢氧化铝和Pam3CSK4。

[0691] 治疗剂

[0692] 纳米粒子组合物可以包括一种或多种治疗剂和/或预防剂。本公开的特征在于将治疗剂和/或预防剂递送至哺乳动物细胞或器官、在哺乳动物细胞中产生所关注多肽以及治疗有需要哺乳动物的疾病或病症的方法，这些方法包括向哺乳动物施用包括治疗剂和/或预防剂的纳米粒子组合物和/或使哺乳动物细胞与该纳米粒子组合物接触。

[0693] 治疗剂和/或预防剂包括生物活性物质并且替代地称为“活性剂”。治疗剂和/或预防剂可以是在递送至细胞或器官后在该细胞或器官中或者其它身体组织或系统中引起所希望的变化的物质。此类物种可用于治疗一种或多种疾病、病症或病况。在一些实施方案中，治疗剂和/或预防剂是可用于治疗特定疾病、病症或病况的小分子药物。可用于纳米粒子组合物的药物的实例包括但不限于抗赘生剂(例如长春新碱(vincristine)、多柔比星(doxorubicin)、米托蒽醌(mitoxantrone)、喜树碱(camptothecin)、顺铂(cisplatin)、博莱霉素(bleomycin)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、甲氨蝶呤和链脲佐菌素(streptozotocin))、抗肿瘤剂(例如放线菌素D(actinomycin D)、长春新碱、长春碱
(vinblastine)、胞嘧啶阿拉伯糖苷(cytosine arabinoside)、蒽环霉素(anthracycline)、烷化剂、铂类化合物、抗代谢物以及核苷类似物，如甲氨蝶呤以及嘌呤和嘧啶类似物)、抗感染剂、局部麻醉剂(例如地布卡因(dibucaine)和氯丙嗪(chlorpromazine))、β-肾上腺素能阻断剂(例如普萘洛尔(propranolol)、第莫洛(timolol)和拉贝洛尔(labetalol))、抗高血压剂(例如可乐定(clonidine)和肼酞嗪(hydralazine))、抗抑郁剂(例如丙咪嗪
(imipramine)、阿米替林(amitriptyline)和多虑平(doxepin))、抗痉挛剂(例如苯妥英(phenytoin))、抗组胺(例如苯海拉明(diphenhydramine)、氯苯那敏(chlorpheniramine)和异丙嗪(promethazine))、抗生素/抗细菌剂(例如庆大霉素(gentamycin)、环丙沙星(ciprofloxacin)和头孢西丁(cefoxitin))、抗真菌剂(例如咪康唑(miconazole)、特康唑(terconazole)、益康唑(econazole)、异康唑(isoconazole)、布康唑(butaconazole)、克霉唑(clotrimazole)、伊曲康唑(itraconazole)、制霉菌素(nystatin)、奈替芬(naftifine)和两性霉素B(amphotericin B))、抗寄生虫剂、激素、激素拮抗剂、免疫调节剂、神经递质拮抗剂、抗青光眼药、维生素、镇静剂以及成像剂。

[0694] 在一些实施方案中，治疗剂和/或预防剂是细胞毒素、放射性离子、化学治疗剂、疫苗、引起免疫响应的化合物和/或另一治疗剂和/或预防剂。细胞毒素或细胞毒性剂包括对细胞有害的任何试剂。实例包括但不限于紫杉酚(taxol)、细胞松弛素B(cytochalasin B)、短杆菌肽D(gramicidin D)、溴化乙锭(ethidium bromide)、依米丁(emetine)、丝裂霉素(mitomycin)、依托泊苷(etoposide)、替尼泊苷(teniposide)、长春新碱、长春碱、秋水仙碱(colchicine)、多柔比星、柔红霉素(daunorubicin)、二羟基蒽二酮(dihydroxy anthracin dione)、米托蒽醌、光辉霉素(mithramycin)、放线菌素D、1-去氢睾酮、糖皮质激素、普鲁卡因(procaine)、丁卡因(tetracaine)、利多卡因(lidocaine)、普萘洛尔、嘌呤霉素、类美登素(maytansinoid)如美登醇(maytansinol)、拉奇霉素(rachelmycin)(CC-1065)，以及其类似物或同系物。放射性离子包括但不限于碘(例如碘125或碘131)、锶89、磷、钯、铯、铱、磷酸根、钴、钇90、钐153和镨。疫苗包括能够提供针对与感染性疾病如流感、麻疹、人乳头瘤病毒(HPV)、狂犬病、脑膜炎、百日咳、破伤风、瘟疫、肝炎和肺结核相关的一种或多种病况的免疫性的化合物和制剂并且可以包括编码感染性疾病源性抗原和/或表位的mRNA。疫苗还可以包括引导针对癌细胞的免疫响应的化合物和制剂并且可以包括编码肿瘤细胞源性抗原、表位和/或新表位的mRNA。引起免疫响应的化合物可以包括疫苗、皮质类固醇(例如地塞米松)和其它物种。在一些实施方案中，通过包括根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物(例如化合物3、18、20、25、26、29、30、60、108-112或122)的组合物肌肉内施用能够引起免疫响应的疫苗和/或化合物。其它治疗剂和/或预防剂包括但不限于抗代谢物(例如甲氨蝶呤、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、阿糖胞苷和5-氟尿嘧啶达卡巴嗪(dacarbazine))、烷化剂(例如氮芥(mechlorethamine)、噻替哌(thiotepa)、苯丁酸氮芥(chlorambucil)、拉奇霉素(CC-1065)、美法兰(melphalan)、卡莫司汀(carmustine，BSNU)、罗莫司丁(lomustine，CCNU)、环磷酰胺、白消安(busulfan)、二溴甘露醇、链脲佐菌素、丝裂霉素C和顺二氯二胺络铂(II)(DDP)、顺铂)、蒽环霉素(例如柔红霉素(以前称为道诺霉素(daunomycin))和多柔比星)、抗生素(例如更生霉素
(dactinomycin)(以前称为放线菌素)、博莱霉素、光辉霉素(mithramycin)和安曲霉素(anthramycin，AMC))以及抗有丝分裂剂(例如长春新碱、长春碱、紫杉酚和类美登素)。

[0695] 在其它实施方案中，治疗剂和/或预防剂是蛋白质。可用于本公开中的纳米粒子中的治疗性蛋白质包括但不限于庆大霉素、阿米卡星(amikacin)、胰岛素、促红细胞生成素(EPO)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、因子VIR、黄体激素释放激素(LHRH)类似物、干扰素、肝素、乙型肝炎表面抗原、伤寒疫苗和霍乱疫苗。

[0696] 多核苷酸和核酸

[0697] 在一些实施方案中，治疗剂是多核苷酸或核酸(例如核糖核酸或脱氧核糖核酸)。术语“多核苷酸”的最广泛含义包括呈寡核苷酸链或可以并入寡核苷酸链中的任何化合物和/或物质。根据本公开使用的示例性多核苷酸包括但不限于以下一种或多种：脱氧核糖核酸(DNA)；核糖核酸(RNA)，包括信使mRNA(mRNA)、其杂交体；RNAi诱导因子；RNAi因子；
siRNA；shRNA；miRNA；反义RNA；核糖酶；催化性DNA；诱导三股螺旋形成的RNA；适体；载体等。
在一些实施方案中，治疗剂和/或预防剂是RNA。可用于本文所描述的组合物和方法中的RNA可以选自由但不限于以下组成的组：shortmer、antagomir、反义RNA、核糖酶、小干扰RNA(siRNA)、不对称干扰RNA(aiRNA)、微RNA(miRNA)、Dicer-底物RNA(dsRNA)、小发夹RNA(shRNA)、转运RNA(tRNA)、信使RNA(mRNA)及其混合物。在某些实施方案中，RNA是mRNA。

[0698] 在某些实施方案中，治疗剂和/或预防剂是mRNA。mRNA可以编码任何所关注多肽，包括任何天然或非天然存在或以其它方式修饰的多肽。由mRNA编码的多肽可以具有任何大小并且可以具有任何二级结构或活性。在一些实施方案中，由mRNA编码的多肽当在细胞中表达时可以具有治疗作用。

[0699] 在其它实施方案中，治疗剂和/或预防剂是siRNA。siRNA能够选择性降低所关注基因的表达或下调该基因的表达。例如，siRNA的选择可以使得在将包括该siRNA的纳米粒子组合物施用给有需要受试者后使与特定疾病、病症或病况有关的基因沉默。siRNA可以包含与编码所关注基因或蛋白质的mRNA序列互补的序列。在一些实施方案中，siRNA可以是免疫调节性siRNA。

[0700] 在某些实施方案中，治疗剂和/或预防剂是sgRNA和/或cas9 mRNA。sgRNA和/或cas9 mRNA可以用作基因编辑工具。例如，sgRNA-cas9复合物可以影响细胞基因的mRNA翻译。

[0701] 在一些实施方案中，治疗剂和/或预防剂是shRNA或者其编码载体或质粒。shRNA可以在将适当构建体递送至核中后在目标细胞内部产生。与shRNA相关的构建体和机制是相关领域中众所周知的。

[0702] 可用于本公开中的核酸和多核苷酸典型地包括编码所关注多肽的相连核苷的第一区域(例如编码区)、位于第一区域的5′-末端的第一侧接区域(例如5′-UTR)、位于第一区域的3′-末端的第二侧接区域(例如3′-UTR)、至少一个5′-帽区域以及3′-稳定化区域。在一些实施方案中，核酸或多核苷酸还包括聚腺苷酸区域或Kozak序列(例如在5′-UTR中)。在一些情况下，多核苷酸可以含有能够从该多核苷酸切除的一个或多个内含子核苷序列。在一些实施方案中，多核苷酸或核酸(例如mRNA)可以包括5’帽结构、链终止核苷酸、茎环、聚腺苷酸序列和/或聚腺苷酸化信号。核酸的任一个区域都可以包括一种或多种替代性组分(例如替代性核苷)。例如，3′-稳定化区域可以含有替代性核苷，如L-核苷、倒置胸苷或2′-O-甲基核苷和/或编码区、5′-UTR、3′-UTR或帽区可以包括替代性核苷，如5-取代的尿苷(例如5-甲氧基尿苷)、1-取代的假尿苷(例如1-甲基-假尿苷或1-乙基-假尿苷)和/或5-取代的胞苷(例如5-甲基-胞苷)。

[0703] 一般来说，多核苷酸的最短长度可以是足以编码二肽的多核苷酸序列的长度。在另一个实施方案中，多核苷酸序列的长度足以编码三肽。在另一个实施方案中，多核苷酸序列的长度足以编码四肽。在另一个实施方案中，多核苷酸序列的长度足以编码五肽。在另一个实施方案中，多核苷酸序列的长度足以编码六肽。在另一个实施方案中，多核苷酸序列的长度足以编码七肽。在另一个实施方案中，多核苷酸序列的长度足以编码八肽。在另一个实施方案中，多核苷酸序列的长度足以编码九肽。在另一个实施方案中，多核苷酸序列的长度足以编码十肽。

[0704] 可以由替代性多核苷酸序列编码的二肽的实例包括但不限于肌肽和鹅肌肽。

[0705] 在一些情况下，多核苷酸的长度超过30个核苷酸。在另一个实施方案中，多核苷酸分子的长度超过35个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少40个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少45个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少55个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少50个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少60个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少80个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少90个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少100个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少120个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少140个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少
160个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少180个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少200个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少250个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少300个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少350个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少400个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少450个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少500个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少600个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少700个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少800个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少900个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少1000个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少1100个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少1200个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少1300个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少1400个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少1500个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少1600个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少1800个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少2000个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少
2500个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少3000个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少4000个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少5000个核苷酸或超过5000个核苷酸。

[0706] 核酸和多核苷酸可以包括一种或多种天然存在的组分，包括经典核苷酸A(腺苷)、G(鸟苷)、C(胞苷)、U(尿苷)或T(胸苷)中的任一个。在一个实施方案中，包含(a)5’-UTR、(b)开放阅读框(ORF)、(c)3’-UTR、(d)聚腺苷酸尾及(以上a、b、c或d)的任何组合的所有或基本上所有核苷酸都包含天然存在的经典核苷酸A(腺苷)、G(鸟苷)、C(胞苷)、U(尿苷)或T(胸苷)。

[0707] 核酸和多核苷酸可以包括一种或多种如本文所描述的替代性组分，由此赋予有用的特性，包括增加稳定性和/或缺乏对引入该多核苷酸的细胞的先天免疫响应的显著诱导作用。例如，替代性多核苷酸或核酸展现引入了该多核苷酸或核酸的细胞的降解相对于相应未变化多核苷酸或核酸有所减少。这些替代性物种可以增加蛋白质制造的效率、多核苷酸的细胞内滞留和/或接触的细胞的可变性，并且具有降低的免疫原性。

[0708] 多核苷酸和核酸可以是天然存在的或非天然存在的。多核苷酸和核酸可以包括一种或多种修饰过的(例如改变的或替代性)核碱基、核苷、核苷酸或其组合。可用于纳米粒子组合物中的核酸和多核苷酸可以包括任何有用的修饰或改变，如针对核碱基、糖或核苷间键联(例如连接性磷酸酯/磷酸二酯键联/磷酸二酯主链)的修饰或改变。在某些实施方案中，改变(例如一个或多个改变)分别存在于核碱基、糖和核苷间键联中。根据本公开的改变可以是核糖核酸(RNA)变为脱氧核糖核酸(DNA)的改变，例如呋喃核糖基环的2′-OH被取代成2′-H、苏糖核酸(TNA)、乙二醇核酸(GNA)、肽核酸(PNA)、锁核酸(LNA)或其杂交体。其它改变如本文所描述。

[0709] 多核苷酸和核酸沿该分子的完整长度可以或可不均一地改变。例如，一种或多种或者所有类型的核苷酸(例如嘌呤或嘧啶，或A、G、U、C中的任一种或多种或全部)在多核苷酸或核酸中，或在其给定的预定序列区域中可以或可不均一地改变。在一些情况下，多核苷酸中(或其给定序列区域中)的所有核苷酸X都被改变，其中X可以是核苷酸A、G、U、C中的任一个，或是组合A+G、A+U、A+C、G+U、G+C、U+C、A+G+U、A+G+C、G+U+C或A+G+C中的任一个。

[0710] 不同的糖改变和/或核苷间键联(例如主链结构)可以存在于多核苷酸中的各种位置处。本领域的普通技术人员应理解，核苷酸类似物或其它改变可以位于多核苷酸的任何位置，以使得该多核苷酸的功能基本上不降低。改变还可以是5′-或3′-末端改变。在一些实施方案中，所述多核苷酸包括3′-末端的改变。所述多核苷酸可以含有约1％至约100％替代性核苷酸(与总体核苷酸含量相关，或与一种或多种类型的核苷酸，即A、G、U或C中的任一个或多个相关)或任何中间百分比(例如1％至20％、1％至25％、1％至50％、1％至60％、1％至70％、1％至80％、1％至90％、1％至95％、10％至20％、10％至25％、10％至50％、10％至
60％、10％至70％、10％至80％、10％至90％、10％至95％、10％至100％、20％至25％、20％至50％、20％至60％、20％至70％、20％至80％、20％至90％、20％至95％、20％至100％、
50％至60％、50％至70％、50％至80％、50％至90％、50％至95％、50％至100％、70％至
80％、70％至90％、70％至95％、70％至100％、80％至90％、80％至95％、80％至100％、90％至95％、90％至100％以及95％至100％)。应了解，任何残留百分比归于经典核苷酸(例如A、G、U或C)的存在。

[0711] 多核苷酸可以含有最少0且最多100％的替代性核苷是，或任何中间百分比，如至少5％替代性核苷酸、至少10％替代性核苷酸、至少25％替代性核苷酸、至少50％替代性核苷酸、至少80％替代性核苷酸或至少90％替代性核苷酸。例如，多核苷酸可以含有替代性嘧啶，如替代性尿嘧啶或胞嘧啶。在一些实施方案中，多核苷酸中至少5％、至少10％、至少25％、至少50％、至少80％、至少90％或100％的尿嘧啶被替代性尿嘧啶(例如5-取代的尿嘧啶)置换。替代性尿嘧啶可以被具有单一独特结构的化合物置换，或可以被具有不同结构(例如2、3、4或更多个独特结构)的多种化合物置换。在一些情况下，多核苷酸中至少5％、至少10％、至少25％、至少50％、至少80％、至少90％或100％的胞嘧啶被替代性胞嘧啶(例如
5-取代的胞嘧啶)置换。替代性胞嘧啶可以被具有单一独特结构的化合物置换，或可以被具有不同结构(例如2、3、4或更多个独特结构)的多种化合物置换。

[0712] 在一些情况下，核酸基本上不会在引入了多核苷酸(例如mRNA)的细胞中诱导先天性免疫响应。诱导的先天性免疫响应的特征包括1)促炎性细胞因子的表达增加、2)细胞内PRR(RIG-I、MDA5等)活化，和/或3)蛋白质翻译终止或减少。

[0713] 核酸可以任选地包括其它因子(例如RNAi诱导因子、RNAi因子、siRNA、shRNA、miRNA、反义RNA、核糖酶、催化性DNA、tRNA、诱导三股螺旋形成的RNA、适体和载体)。在一些实施方案中，核酸可以包括具有一个或多个替代性核苷或核苷酸(即，替代性mRNA分子)的一个或多个信使RNA(mRNA)。

[0714] 在一些实施方案中，核酸(例如mRNA)分子、与其相关的式、组合物或方法包括含如以下中所描述的特征的一种或多种多核苷酸：WO2002/098443、WO2003/051401、WO2008/052770、WO2009127230、WO2006122828、WO2008/083949、WO2010088927、WO2010/037539、WO2004/004743、WO2005/016376、WO2006/024518、WO2007/095976、WO2008/014979、WO2008/
077592、WO2009/030481、WO2009/095226、WO2011069586、WO2011026641、WO2011/144358、WO2012019780、WO2012013326、WO2012089338、WO2012113513、WO2012116811、
WO2012116810、WO2013113502、WO2013113501、WO2013113736、WO2013143698、
WO2013143699、WO2013143700、WO2013/120626、WO2013120627、WO2013120628、
WO2013120629、WO2013174409、WO2014127917、WO2015/024669、WO2015/024668、WO2015/
024667、WO2015/024665、WO2015/024666、WO2015/024664、WO2015101415、WO2015101414、WO2015024667、WO2015062738、WO2015101416，全部以引用的方式并入本文中。

[0715] 核碱基替代物

[0716] 替代性核苷和核苷酸可以包括替代性核碱基。核酸的核碱基是有机碱基，如嘌呤或嘧啶或其衍生物。核碱基可以是经典碱基(例如腺嘌呤、鸟嘌呤、尿嘧啶、胸腺嘧啶和胞嘧啶)。这些核碱基可以被改变或完全地置换以提供特性增强，例如稳定性如对核酸酶的抗性增加的多核苷酸分子。非经典或修饰过的碱基可以包括例如一个或多个取代或修饰，包括但不限于烷基、芳基、卤代、氧代、羟基、烷氧基和/或硫代取代；一个或多个稠合或开环；氧化和/或还原。

[0717] 替代性核苷酸碱基配对不仅涵盖标准腺嘌呤-胸腺嘧啶、腺嘌呤-尿嘧啶或鸟嘌呤-胞嘧啶碱基对，而且还涵盖在核苷酸和/或包括非标准或替代性碱基在内的替代性核苷酸之间形成的碱基对，其中氢键供体和氢键受体的布置允许在非标准碱基与标准碱基之间或在两个互补非标准碱基结构之间形成氢键。此类非标准碱基配对的一个实例是在替代性核苷酸肌苷与腺嘌呤、胞嘧啶或尿嘧啶之间的碱基配对。

[0718] 在一些实施方案中，核碱基是替代性尿嘧啶。具有替代性尿嘧啶的示例性核碱基和核苷包括假尿苷(ψ)、吡啶-4-酮核糖核苷、5-氮杂-尿嘧啶、6-氮杂-尿嘧啶、2-硫代-5-氮杂-尿嘧啶、2-硫代-尿嘧啶(s2U)、4-硫代-尿嘧啶(s4U)、4-硫代-假尿苷、2-硫代-假尿苷、5-羟基-尿嘧啶(ho5U)、5-氨基烯丙基-尿嘧啶、5-卤代-尿嘧啶(例如5-碘代-尿嘧啶或5-溴代--尿嘧啶)、3-甲基-尿嘧啶(m3U)、5-甲氧基-尿嘧啶(mo5U)、尿嘧啶5-氧基乙酸(cmo5U)、尿嘧啶5-氧基乙酸甲酯(mcmo5U)、5-羧基甲基-尿嘧啶(cm5U)、1-羧基甲基-假尿苷、5-羧基羟基甲基-尿嘧啶(chm5U)、5-羧基羟基甲基-尿嘧啶甲酯(mchm5U)、5-甲氧基羰基甲基-尿嘧5 5 2
啶(mcm U)、5-甲氧基羰基甲基-2-硫代-尿嘧啶(mcm s U)、5-氨基甲基-2-硫代-尿嘧啶(nm5s2U)、5-甲基氨基甲基-尿嘧啶(mnm5U)、5-甲基氨基甲基-2-硫代-尿嘧啶(mnm5s2U)、5-甲基氨基甲基-2-硒代-尿嘧啶(mnm5se2U)、5-氨甲酰基甲基-尿嘧啶(ncm5U)、5-羧基甲基氨基甲基-尿嘧啶(cmnm5U)、5-羧基甲基氨基甲基-2-硫代-尿嘧啶(cmnm5s2U)、5-丙炔基-尿嘧
5
啶、1-丙炔基-假尿嘧啶、5-牛磺酸甲基-尿嘧啶(τm U)、1-牛磺酸甲基-假尿苷、5-牛磺酸甲基-2-硫代-尿嘧啶(τm5s2U)、1-牛磺酸甲基-4-硫代-假尿苷、5-甲基-尿嘧啶(m5U，即具有核碱基脱氧胸腺嘧啶)、1-甲基-假尿苷(m1ψ)、1-乙基-假尿苷(Et1ψ)、5-甲基-2-硫代-尿嘧啶(m5s2U)、1-甲基-4-硫代-假尿苷(m1s4ψ)、4-硫代-1-甲基-假尿苷、3-甲基-假尿苷(m3ψ)、2-硫代-1-甲基-假尿苷、1-甲基-1-脱氮-假尿苷、2-硫代-1-甲基-1-脱氮-假尿苷、二氢尿嘧啶(D)、二氢假尿苷、5,6-二氢尿嘧啶、5-甲基-二氢尿嘧啶(m5D)、2-硫代-二氢尿嘧啶、2-硫代-二氢假尿苷、2-甲氧基-尿嘧啶、2-甲氧基-4-硫代-尿嘧啶、4-甲氧基-假尿苷、4-甲氧基-2-硫代-假尿苷、N1-甲基-假尿苷、3-(3-氨基-3-羧基丙基)尿嘧啶(acp3U)、1-甲基-3-(3-氨基-3-羧基丙基)假尿苷(acp3ψ)、5-(异戊烯基氨基甲基)尿嘧啶(inm5U)、5-(异戊烯基氨基甲基)-2-硫代-尿嘧啶(inm5s2U)、5,2′-O-二甲基-尿苷(m5Um)、2-硫代-2′-O-甲基-尿
2 5
苷(sUm)、5-甲氧基羰基甲基-2′-O-甲基-尿苷(mcmUm)、5-氨甲酰基甲基-2′-O-甲基-尿苷(ncm5Um)、5-羧基甲基氨基甲基-2′-O-甲基-尿苷(cmnm5Um)、3,2′-O-二甲基-尿苷(m3Um)以及5-(异戊烯基氨基甲基)-2′-O-甲基-尿苷(inm5Um)、1-硫代-尿嘧啶、脱氧胸苷、5-(2-甲氧羰基乙烯基)-尿嘧啶、5-(氨甲酰基羟基甲基)-尿嘧啶、5-氨甲酰基甲基-2-硫代-尿嘧啶、5-羧基甲基-2-硫代-尿嘧啶、5-氰基甲基-尿嘧啶、5-甲氧基-2-硫代-尿嘧啶和5-[3-(1-E-丙烯基氨基)]尿嘧啶。

[0719] 在一些实施方案中，核碱基是替代性胞嘧啶。具有替代性胞嘧啶的示例性核碱基和核苷包括5-氮杂-胞嘧啶、6-氮杂-胞嘧啶、假异胞苷、3-甲基-胞嘧啶(m3C)、N4-乙酰基-胞嘧啶(ac4C)、5-甲酰基-胞嘧啶(f5C)、N4-甲基-胞嘧啶(m4C)、5-甲基-胞嘧啶(m5C)、5-卤代-胞嘧啶(例如5-碘代-胞嘧啶)、5-羟基甲基-胞嘧啶(hm5C)、1-甲基-假异胞苷、吡咯并胞嘧啶、吡咯并假异胞苷、2-硫代-胞嘧啶(s2C)、2-硫代-5-甲基-胞嘧啶、4-硫代-假异胞苷、4-硫代-1-甲基-假异胞苷、4-硫代-1-甲基-1-脱氮-假异胞苷、1-甲基-1-脱氮-假异胞苷、泽布拉林(zebularine)、5-氮杂-泽布拉林、5-甲基-泽布拉林、5-氮杂-2-硫代-泽布拉林、
2-硫代-泽布拉林、2-甲氧基-胞嘧啶、2-甲氧基-5-甲基-胞嘧啶、4-甲氧基-假异胞苷、4-甲氧基-1-甲基-假异胞苷、赖胞苷(lysidine)(k2C)、5,2′-O-二甲基-胞苷(m5Cm)、N4-乙酰基-2′-O-甲基-胞苷(ac4Cm)、N4,2′-O-二甲基-胞苷(m4Cm)、5-甲酰基-2′-O-甲基-胞苷(f5Cm)、N4,N4,2′-O-三甲基-胞苷(m42Cm)、1-硫代-胞嘧啶、5-羟基-胞嘧啶、5-(3-叠氮基丙基)-胞嘧啶以及5-(2-叠氮基乙基)-胞嘧啶。

[0720] 在一些实施方案中，核碱基是替代性腺嘌呤。具有替代性腺嘌呤的示例性核碱基和核苷包括2-氨基-嘌呤、2,6-二氨基嘌呤、2-氨基-6-卤代-嘌呤(例如2-氨基-6-氯-嘌呤)、6-卤代-嘌呤(例如6-氯-嘌呤)、2-氨基-6-甲基-嘌呤、8-叠氮基-腺嘌呤、7-脱氮-腺嘌呤、7-脱氮-8-氮杂-腺嘌呤、7-脱氮-2-氨基-嘌呤、7-脱氮-8-氮杂-2-氨基-嘌呤、7-脱氮-2,6-二氨基嘌呤、7-脱氮-8-氮杂-2,6-二氨基嘌呤、1-甲基-腺嘌呤(m1A)、2-甲基-腺嘌呤(m2A)、N6-甲基-腺嘌呤(m6A)、2-甲基硫代-N6-甲基-腺嘌呤(ms2m6A)、N6-异戊烯基-腺嘌呤(i6A)、2-甲基硫代-N6-异戊烯基-腺嘌呤(ms2i6A)、N6-(顺式-羟基异戊烯基)腺嘌呤(io6A)、2-甲基硫代-N6-(顺式-羟基异戊烯基)腺嘌呤(ms2io6A)、N6-甘氨酰基氨甲酰基-腺嘌呤(g6A)、N6-苏氨酰基氨甲酰基-腺嘌呤(t6A)、N6-甲基-N6-苏氨酰基氨甲酰基-腺嘌呤(m6t6A)、2-甲基硫代-N6-苏氨酰基氨甲酰基-腺嘌呤(ms2g6A)、N6,N6-二甲基-腺嘌呤(m62A)、N6-羟基正缬氨酰基氨甲酰基-腺嘌呤(hn6A)、2-甲基硫代-N6-羟基正缬氨酰基氨甲酰基-腺嘌呤(ms2hn6A)、N6-乙酰基-腺嘌呤(ac6A)、7-甲基-腺嘌呤、2-甲基硫代-腺嘌呤、2-甲氧基-腺嘌呤、N6,2′-O-二甲基-腺苷(m6Am)、N6,N6,2′-O-三甲基-腺苷(m62Am)、1,
2′-O-二甲基-腺苷(m1Am)、2-氨基-N6-甲基-嘌呤、1-硫代-腺嘌呤、8-叠氮基-腺嘌呤、N6-(19-氨基-五氧杂十九烷基)-腺嘌呤、2,8-二甲基-腺嘌呤、N6-甲酰基-腺嘌呤以及N6-羟基甲基-腺嘌呤。

[0721] 在一些实施方案中，核碱基是替代性鸟嘌呤。具有替代性鸟嘌呤的示例性核碱基和核苷包括肌苷(I)、1-甲基-肌苷(m1I)、丫苷(imG)、甲基丫苷(mimG)、4-脱甲基-丫苷(imG-14)、异丫苷(imG2)、怀丁苷(yW)、过氧怀丁苷(o2yW)、羟基怀丁苷(OHyW)、修饰不足的羟基怀丁苷(OHyW*)、7-脱氮-鸟嘌呤,辫苷(Q)、环氧辫苷(oQ)、半乳糖基-辫苷(galQ)、甘露糖基-辫苷(manQ)、7-氰基-7-脱氮-鸟嘌呤(preQ0)、7-氨基甲基-7-脱氮-鸟嘌呤(preQ1)、古嘌苷(G+)、7-脱氮-8-氮杂-鸟嘌呤、6-硫代-鸟嘌呤、6-硫代-7-脱氮-鸟嘌呤、6-硫代-7-脱氮-8-氮杂-鸟嘌呤、7-甲基-鸟嘌呤(m7G)、6-硫代-7-甲基-鸟嘌呤、7-甲基-肌苷、6-甲氧基-鸟嘌呤、1-甲基-鸟嘌呤(m1G)、N2-甲基-鸟嘌呤(m2G)、N2,N2-二甲基-鸟嘌呤(m22G)、N2,7-二甲基-鸟嘌呤(m2,7G)、N2、N2,7-二甲基-鸟嘌呤(m2,2,7G)、8-氧代-鸟嘌呤、7-甲基-8-氧代-鸟嘌呤、1-甲基-6-硫代-鸟嘌呤、N2-甲基-6-硫代-鸟嘌呤、N2,N2-二甲基-6-硫代-鸟嘌呤、N2-甲基-2′-O-甲基-鸟苷(m2Gm)、N2,N2-二甲基-2′-O-甲基-鸟苷(m22Gm)、1-甲基-2′-O-甲基-鸟苷(m1Gm)、N2,7-二甲基-2′-O-甲基-鸟苷(m2,7Gm)、2′-O-甲基-肌苷(Im)、1,2′-O-二甲基-肌苷(m1Im)、1-硫代-鸟嘌呤以及O-6-甲基-鸟嘌呤。

[0722] 核苷酸的替代性核碱基可以独立地是嘌呤、嘧啶、嘌呤或嘧啶类似物。例如，核碱基可以是腺嘌呤、胞嘧啶、鸟嘌呤、尿嘧啶或次黄嘌呤的替代物。在另一个实施方案中，核碱基还可以包括例如天然存在的碱基和其合成衍生物，包括吡唑并[3,4-d]嘧啶；5-甲基胞嘧啶(5-me-C)；5-羟甲基胞嘧啶；黄嘌呤；次黄嘌呤；2-氨基腺嘌呤；腺嘌呤和鸟嘌呤的6-甲基和其它烷基衍生物；腺嘌呤和鸟嘌呤的2-丙基和其它烷基衍生物；2-硫代尿嘧啶、2-硫代胸腺嘧啶和2-硫代胞嘧啶；5-丙炔基尿嘧啶和胞嘧啶；6-偶氮尿嘧啶、胞嘧啶和胸腺嘧啶；5-尿嘧啶(假尿嘧啶)；4-硫代尿嘧啶；8-卤代(例如8-溴)、8-氨基、8-硫醇、8-硫代烷基、8-羟基和其它8-取代的腺嘌呤和鸟嘌呤；5-卤代，特别是5-溴、5-三氟甲基和其它5-取代的尿嘧啶和胞嘧啶；7-甲基鸟嘌呤和7-甲基腺嘌呤；8-氮杂鸟嘌呤和8-氮杂腺嘌呤；脱氮鸟嘌呤、7-脱氮鸟嘌呤、3-脱氮鸟嘌呤、脱氮腺嘌呤、7-脱氮腺嘌呤、3-脱氮腺嘌呤；吡唑并[3,4-d]嘧啶；咪唑并[1,5-a]1,3,5三嗪酮；9-脱氮嘌呤；咪唑并[4,5-d]吡嗪；三唑并[4,5-d]嘧啶；
吡嗪-2-酮；1,2,4-三嗪；哒嗪；或1,3,5三嗪。在使用缩写A、G、C、T或U描绘核苷酸时，各字母是指代表性碱基和/或其衍生物，例如A包括腺嘌呤或腺嘌呤类似物，例如7-脱氮腺嘌呤。

[0723] 糖的改变

[0724] 核苷包括糖分子(例如5-碳或6-碳糖，如戊糖、核糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖、半乳糖或其脱氧衍生物)与核碱基的组合，而核苷酸是含核苷和磷酸酯基或替代性基团(硼烷磷酸酯基、硫代磷酸酯基、硒代磷酸酯基、膦酸酯基、烷基、酰胺酸酯基和甘油基)的核苷。核苷或核苷酸可以是经典物种，例如包括经典核碱基、糖并且在核苷酸情况下包括磷酸酯基的核苷或核苷酸，或可以是包括一种或多种替代性组分的替代性核苷或核苷酸。例如，替代性核苷和核苷酸可以在核苷或核苷酸的糖上被改变。在一些实施方案中，替代性核苷或核苷酸包括以下结构：

[0725]

[0726] 在式IV、V、VI和VII中的每一个中，

[0727] m和n各自独立地是0至5的整数，

[0728] U和U’各自独立地是O、S、N(RU)nu或C(RU)nu，其中nu是0至2的整数并且各RU独立地是H、卤代或任选被取代的烷基；

[0729] R1′、R2′、R1″、R2″、R1、R2、R3、R4和R5各自在存在时独立地是H、卤代、羟基、硫醇、任选被取代的烷基、任选被取代的烷氧基、任选被取代的烯基氧基、任选被取代的炔基氧基、任选被取代的氨基烷氧基、任选被取代的烷氧基烷氧基、任选被取代的羟基烷氧基、任选被取代的氨基、叠氮基、任选被取代的芳基、任选被取代的氨基烷基、任选被取代的氨基烯基、任选被取代的氨基炔基，或不存在；其中R3与R1′、R1″、R2′、R2″或R5中的一个或多个的组合(例如R1′与R3的组合、R1″与R3的组合、R2′与R3的组合、R2″与R3的组合或R5与R3的组合)可以接合在一起形成任选被取代的亚烷基或任选被取代的亚杂烷基，并且连同其所连接的碳一起提供任选被取代的杂环基(例如双环、三环或四环杂环基)；其中R5与R1′、R1″、R2′或R2″中的一个或多1′ 5 1″ 5 2′ 5 2″ 5
个的组合(例如R 与R的组合、R 与R的组合、R 与R的组合或R 与R的组合)可以接合在
一起形成任选被取代的亚烷基或任选被取代的亚杂烷基，并且连同其所连接的碳一起提供任选被取代的杂环基(例如双环、三环或四环杂环基)；并且其中R4与R1′、R1″、R2′、R2″、R3或R5中的一个或多个的组合可以接合在一起形成任选被取代的亚烷基或任选被取代的亚杂烷基，并且连同其所连接的碳一起提供任选被取代的杂环基(例如双环、三环或四环杂环基)；
m′和m″各自独立地是0至3(例如0至2、0至1、1至3或1至2)的整数；

[0730] Y1、Y2和Y3各自独立地是O、S、Se、—NRN1—、任选被取代的亚烷基或任选被取代的亚杂烷基，其中RN1是H、任选被取代的烷基、任选被取代的烯基、任选被取代的炔基、任选被取代的芳基，或不存在；

[0731] 各Y4独立地是H、羟基、硫醇、硼基、任选被取代的烷基、任选被取代的烯基、任选被取代的炔基、任选被取代的烷氧基、任选被取代的烯基氧基、任选被取代的炔基氧基、任选被取代的硫代烷氧基、任选被取代的烷氧基烷氧基或任选被取代的氨基；

[0732] 各Y5独立地是O、S、Se、任选被取代的亚烷基(例如亚甲基)或任选被取代的亚杂烷基；并且

[0733] B是修饰或未修饰的核碱基。在一些实施方案中，2′-羟基(OH)可以被多个不同取代基修饰或置换。在2′-位处的示例性取代包括但不限于H、叠氮基、卤代(例如氟代)、任选被取代的C1-6烷基(例如甲基)；任选被取代的C1-6烷氧基(例如甲氧基或乙氧基)；任选被取代的C6-10芳氧基；任选被取代的C3-8环烷基；任选被取代的C6-10芳基-C1-6烷氧基、任选被取代的C1-12(杂环基)氧基；糖(例如核糖、戊糖或本文所描述的任一种)；聚乙二醇(PEG)、-O(CH2CH2O)nCH2CH2OR，其中R是H或任选被取代的烷基，并且n是0至20(例如0至4、0至8、0至10、0至16、1至4、1至8、1至10、1至16、1至20、2至4、2至8、2至10、2至16、2至20、4至8、4至10、4至
16和4至20)的整数；“锁”核酸(LNA)，其中2′-羟基通过C1-6亚烷基或C1-6亚杂烷基桥连接至同一糖核糖的4′-碳，其中示例性桥包括亚甲基、亚丙基、醚或氨基桥；如本文所定义的氨基烷基；如本文所定义的氨基烷氧基；如本文所定义的氨基；以及如本文所定义的氨基酸。

[0734] 一般来说，RNA包括糖基核糖，该糖是含氧的5元环。示例性非限制性替代性核苷酸包括核糖中的氧被置换(例如被S、Se或亚烷基如亚甲基或亚乙基置换)；双键加成(例如以用环戊烯基或环己烯基置换核糖)；核糖的环收缩(例如形成4元环丁烷或氧杂环丁烷环)；核糖的环扩增(例如形成具有额外碳或杂原子的6元或7元环，如对于脱水己糖醇、阿卓糖醇、甘露糖醇、环己烷基、环己烯基和吗啉代(另外具有氨基磷酸酯主链))；多环形式(例如三环和“未锁定”形式，如乙二醇核酸(GNA)(例如R-GNA或S-GNA，其中核糖被连接至磷酸二酯键的乙二醇单元置换)、苏糖核酸(TNA，其中核糖被α-L-呋喃苏糖基-(3′→2′)置换)，以及肽核酸(PNA，其中2-氨基-乙基甘氨酸键联置换核糖和磷酸二酯主链)。

[0735] 在一些实施方案中，糖基含有一个或多个碳，这些碳具有核糖中相应碳的相对立体化学构型。因此，多核苷酸分子可以包括含例如阿拉伯糖或L-核糖作为糖的核苷酸。

[0736] 在一些实施方案中，多核苷酸包括至少一个核苷，其中糖是L-核糖、2′-O-甲基核糖、2′-氟-核糖、阿拉伯糖、己糖醇、LNA或PNA。

[0737] 核苷间键联的改变

[0738] 替代性核苷酸可以在核苷间键联(例如磷酸酯主链)上被改变。在本文中，在多核苷酸主链的情况下，短语“磷酸酯”与“磷酸二酯”可互换使用。主链磷酸酯基可以通过用不同取代基置换一个或多个氧原子来改变。

[0739] 替代性核苷酸可以包括未改变的磷酸酯部分被如本文所描述的另一核苷间键联的完全置换。替代性磷酸酯基的实例包括但不限于硫代磷酸酯、硒代磷酸酯、硼烷磷酸酯(boranophosphate)、硼烷磷酸酯(boranophosphate ester)、磷酸氢酯、氨基磷酸酯、二氨基磷酸酯、烷基或芳基膦酸酯以及磷酸三酯。硫代磷酸酯具有非连接氧被硫置换。磷酸酯连接子还可以通过用氮(桥连氨基磷酸酯)、硫(桥连硫代磷酸酯)和碳(桥连亚甲基膦酸酯)置换连接性氧来改变。

[0740] 替代性核苷和核苷酸可以包括用硼烷部分(BH3)、硫(硫代)、甲基、乙基和/或甲氧基置换一个或多个非桥连氧。作为一个非限制性实例，在同一位置(例如α、β或γ位)处的两个非桥连氧可以被硫(硫代)和甲氧基置换。

[0741] 提供在磷酸酯部分的α位处一个或多个氧原子的置换(例如α-硫代磷酸酯)可通过非天然硫代磷酸酯主链键联而赋予RNA和DNA稳定性(如针对核酸外切酶和核酸内切酶的稳定性)。硫代磷酸酯DNA和RNA具有增加的核酸酶抗性并且随后在细胞环境中具有较长半衰期。

[0742] 可以根据本公开使用的其它核苷间键联，包括不含磷原子的核苷间键联在本文中有描述。

[0743] 内部核糖体进入位点

[0744] 多核苷酸可以含有内部核糖体进入位点(IRES)。IRES可以充当唯一的核糖体结合位点，或可以用作多个mRNA核糖体结合位点之一。含有超过一个功能性核糖体结合位点的多核苷酸可以编码若干肽或多肽，这些肽或多肽独立地被核糖体(例如多顺反子mRNA)翻译。当提供的多核苷酸具有IRES时，另外任选地提供第二可翻译区。可以根据本公开使用的IRES序列的实例包括但不限于来自细小RNA病毒(例如FMDV)、昆虫病毒(CFFV)、脊髓灰质炎病毒(PV)、脑心肌炎病毒(ECMV)、口蹄疫病毒(FMDV)、丙型肝炎病毒(HCV)、猪瘟病毒(CSFV)、鼠类白血病病毒(MLV)、猿免疫缺陷病毒(SIV)或蟋蟀麻痹病毒(CrPV)的那些。

[0745] 5′-帽结构

[0746] 多核苷酸(例如mRNA)可以包括5′-帽结构。多核苷酸的5′-帽结构参与核输出并增加多核苷酸稳定性，而且结合mRNA帽结合蛋白(CBP)，CBP通过与聚腺苷酸结合蛋白缔合形成成熟环状mRNA物种来实现细胞中多核苷酸的稳定性和翻译能力。所述帽还帮助在mRNA剪接期间移除5′附近的内含子。

[0747] 内源多核苷酸分子可以经历5′-端戴帽，在该多核苷酸的末端鸟苷帽残基与5′-末端转录的有义核苷酸之间形成5′-ppp-5′-三磷酸酯键联。接着，这一5′-鸟苷酸化帽可以被甲基化以产生N7-甲基-鸟苷酸化残基。在所述多核苷酸的5′末端和/或末端前面转录的核苷酸的糖核糖也可能任选地被2′-O-甲基化。通过水解并裂解鸟苷酸化帽进行的5′-脱帽可以靶向降解多核苷酸分子，如mRNA分子。

[0748] 改变多核苷酸可以产生不可水解的帽结构，由此防止脱帽并因此增加多核苷酸半衰期。由于帽结构水解需要裂解5′-ppp-5′磷酸二酯键联，故在戴帽反应期间可以使用替代性核苷酸。举例而言，根据制造商的说明，来自New England Biolabs(Ipswich,MA)的牛痘病毒戴帽酶可以用于α-硫代鸟苷核苷酸以在5′-ppp-5′帽中产生硫代磷酸酯键联。其它替代性鸟苷核苷酸也可以使用，如α-甲基膦酸酯和硒代磷酸酯核苷酸。

[0749] 其它改变包括但不限于多核苷酸(如以上所述)的5′-末端和/或5′-末端前核苷酸的核糖在该糖的2′-羟基上发生的2′-O-甲基化。可以使用多种不同的5′-帽结构以产生多核苷酸，如mRNA分子的5′-帽。

[0750] 5′-帽结构包括国际专利公布号WO2008127688、WO 2008016473和WO 2011015347中所描述的那些，各案的帽结构都以引用的方式并入本文中。

[0751] 帽类似物，在本文中又称为合成帽类似物、化学帽、化学帽类似物或者结构或功能性帽类似物不同于呈天然化学结构的天然(即，内源性、野生型或生理性)5′-帽结构，同时保持帽功能。帽类似物可以通过化学方式(即，非酶促方式)或酶促方式合成和/或连接至多核苷酸。

[0752] 举例而言，抗反向帽类似物(ARCA)帽含有通过5′-5′-三磷酸酯基团连接的两个鸟苷，其中一个鸟苷含有N7-甲基和3′-O-甲基(即，N7,3′-O-二甲基-鸟苷-5′-三磷酸酯-5′-鸟苷，即m7G-3′mppp-G，可以等效地称为3′O-Me-m7G(5′)ppp(5′)G)。另一个未改变的鸟苷的3′-O原子变得连接至戴帽多核苷酸(例如mRNA)的5′-末端核苷酸。N7-甲基化且3′-O-甲基化的鸟苷提供了戴帽多核苷酸(例如mRNA)的末端部分。

[0753] 另一示例性帽是mCAP，类似于ARCA，但在鸟苷上具有2′-O-甲基(即，N7,2′-O-二甲基鸟苷-5′-三磷酸酯-5′-鸟苷，即m7Gm-ppp-G)。

[0754] 帽可以是二核苷酸帽类似物。作为一个非限制性实例，二核苷酸帽类似物可以在不同磷酸酯位置处用硼烷磷酸酯基或硒代磷酸酯基修饰，如美国专利第8,519,110号中所描述的二核苷酸帽类似物，该案的帽结构以引用的方式并入本文中。

[0755] 替代地，帽类似物可以是本领域中已知和/或本文所描述的N7-(4-氯苯氧基乙基)取代的二核苷酸帽类似物。N7-(4-氯苯氧基乙基)取代的二核苷酸帽类似物的非限制性实例包括N7-(4-氯苯氧基乙基)-G(5′)ppp(5′)G和N7-(4-氯苯氧基乙基)-m3′-OG(5′)ppp(5′)G帽类似物(参见例如Kore等人,Bioorganic&Medicinal Chemistry 2013 21:4570-4574中所描述的各种帽类似物以及合成帽类似物的方法；其帽结构以引用的方式并入本文中)。在其它情况下，可用于本公开的多核苷酸中的帽类似物是4-氯/溴苯氧基乙基类似物。

[0756] 尽管帽类似物允许在体外转录反应中同时对多核苷酸戴帽，但仍有多达20％转录物未被戴帽。这一点以及帽类似物与由内源性细胞转录机器产生的多核苷酸的内源性5′-帽结构的结构差异可能导致翻译能力减弱和细胞稳定性降低。

[0757] 替代性多核苷酸还可以在转录后使用酶戴帽，以便产生更真实的5′-帽结构。如本文所使用，短语“更真实”是指在结构上或功能上紧密地反映或模拟内源性或野生型特征的特征。也就是说，“更真实”的特征比现有技术的合成特征或类似物更佳地代表内源性、野生型、天然或生理性细胞功能和/或功能，或在一个或多个方面胜过相应内源性、野生型、天然或生理性特征。可用于本公开的多核苷酸中的更真实的5′-帽结构的非限制性实例是相较于本领域中已知的合成5′-帽结构(或野生型、天然或生理性5′-帽结构)具有增强的帽结合蛋白结合、增加的半衰期、降低的对5′-核酸内切酶敏感性和/或减少的5′-脱帽等的那些。例如，重组牛痘病毒戴帽酶和重组2′-O-甲基转移酶可以在多核苷酸的5′-末端核苷酸与鸟苷帽核苷酸之间产生典型的5′-5′-三磷酸酯键联，其中该帽鸟苷含有N7-甲基化且所述多核苷酸的5′-末端核苷酸含有2′-O-甲基。此类结构称为帽1结构。这一帽产生相较于例如本领域中已知的其它5′帽类似物结构增高的翻译能力、细胞稳定性以及减少的细胞促炎性细胞因子活化作用。其它示例性帽结构包括7mG(5′)ppp(5′)N,pN2p(帽0)、7mG(5′)ppp(5′)NlmpNp(帽1)、7mG(5′)-ppp(5′)NlmpN2mp(帽2)和m(7)Gpppm(3)(6,6,2′)Apm(2′)Apm(2′)Cpm(2)(3,2′)Up(帽4)。

[0758] 由于替代性多核苷酸可以在转录后戴帽，并且由于这一过程更为有效，故接近100％的替代性多核苷酸可以被戴帽。这与在体外转录反应过程中将帽类似物与多核苷酸关联时的约80％形成对比。

[0759] 5′-末端帽可以包括内源性帽或帽类似物。5′-末端帽可以包括鸟苷类似物。有用的鸟苷类似物包括肌苷、N1-甲基-鸟苷、2′-氟-鸟苷、7-脱氮-鸟苷、8-氧代-鸟苷、2-氨基-鸟苷、LNA-鸟苷和2-叠氮基-鸟苷。

[0760] 在一些情况下，多核苷酸含有修饰过的5′-帽。5′-帽上的修饰可以增加多核苷酸的稳定性，增加多核苷酸的半衰期，并且可以增加多核苷酸翻译效率。修饰过的5′-帽可以包括但不限于以下一个或多个修饰：在戴帽鸟苷三磷酸酯(GTP)的2′位和/或3′位处的修饰、糖环氧(产生碳环)被亚甲基部分(CH2)置换、在帽结构的三磷酸酯桥部分处的修饰或在核碱基(G)部分处的修饰。

[0761] 5′-UTR

[0762] 提供的5′-UTR可以作为与多核苷酸(例如mRNA)的侧接区域。5′-UTR可以与多核苷酸中所见的编码区同源或不同源。多个5′-UTR可以被包括在侧接区域中并且可以具有相同或不同序列。侧接区域的任何部分，包括没有部分，可以经历密码子优化并且任何部分可以在密码子优化之前和/或之后独立地含有一个或多个不同的结构或化学改变。

[0763] 美国临时申请第61/775,509号中的表21，以及美国临时申请第61/829,372号中的表21和表22中显示了替代性多核苷酸(例如mRNA)的起始和终止位点的清单，各案以引用的方式并入本文中。在表21中，各5′-UTR(5′-UTR-005至5′-UTR 68511)是相对于其天然或野生型(同源)转录物通过其起始和终止位点标识(ENST；ENSEMBL数据库中使用的标识符)。

[0764] 为了改变多核苷酸(例如mRNA)的一种或多种特性，与替代性多核苷酸(例如mRNA)的编码区不同源的5′-UTR可以经历工程改造。接着，可以将这些多核苷酸(例如mRNA)施用至细胞、组织或生物体并且可以测量结果如蛋白质水平、定位和/或半衰期以评价不同源的5′-UTR可能对替代性多核苷酸(mRNA)造成的有益作用。可以利用5′-UTR的变体，在这些变体中，在末端添加或移除一个或多个核苷酸，包括A、T、C或G。5′-UTR还可以经历密码子优化，或以本文所描述的任何方式改变。

[0765] 5′-UTR、3′-UTR和翻译增强子元件(TEE)

[0766] 多核苷酸(例如mRNA)的5′-UTR可以包括至少一个翻译增强子元件。术语“翻译增强子元件”是指增加多肽或由多肽产生的蛋白质的量的序列。作为一个非限制性实例，TEE可以位于转录启动子与起始密码子之间。在5′-UTR中具有至少一个TEE的多核苷酸(例如mRNA)可以在5′-UTR处包括帽。另外，至少一个TEE可以位于多核苷酸(例如mRNA)的5′-UTR中，经历帽依赖性或不依赖于帽的翻译。

[0767] 在一个方面，TEE是UTR中的保守元件，这些元件可以促进多核苷酸的翻译活性，如但不限于帽依赖性或不依赖于帽的翻译。Panek等人(Nucleic Acids Research,2013,1-10)先前已显示在包括人类在内的14个物种间这些序列的保守性。

[0768] 在一个非限制性实例中，已知的TEE可以在Gtx同源异型结构域蛋白质的5′-前导序列中(Chappell等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 101:9590-9594,2004，其TEE以引用的方式并入本文中)。

[0769] 在另一个非限制性实例中，TEE公开于美国专利公布第2009/0226470号和第2013/0177581号、国际专利公布第WO2009/075886号、第WO2012/009644号和第WO1999/024595号，以及美国专利第6,310,197号和第6,849,405号中，各案的TEE序列以引用的方式并入本文中。

[0770] 在又另一个非限制性实例中，TEE可以是内部核糖体进入位点(IRES)、HCV-IRES或IRES元件，如但不限于美国专利第7,468,275号、美国专利公布第2007/0048776号和第2011/0124100号，以及国际专利公布第WO2007/025008号和第WO2001/055369号，各案的IRES序列以引用的方式并入本文中。IRES元件可以包括但不限于Chappell等人
(Proc.Natl.Acad.Sci.USA 101:9590-9594,2004)和Zhou等人(PNAS 102:6273-6278,
2005)以及美国专利公布第2007/0048776号和第2011/0124100号，及国际专利公布第
WO2007/025008号中所描述的Gtx序列(例如Gtx9-nt、Gtx8-nt、Gtx7-nt)，各案的IRES序列以引用的方式并入本文中。

[0771] “翻译增强子多核苷酸”是包括一个或多个本文所例示和/或本领域中所公开的特定TEE(参见例如美国专利第6,310,197号、第6,849,405号、第7,456,273号、第7,183,395号；美国专利公布第20090/226470号、第2007/0048776号、第2011/0124100号、第2009/0093049号、第2013/0177581号；国际专利公布第WO2009/075886号、第WO2007/025008号、第WO2012/009644号、第WO2001/055371号、第WO1999/024595号；以及欧洲专利第2610341号和第2610340号)或其变体、同源物或功能性衍生物。在多核苷酸(例如mRNA)中可以存在特定TEE的一个或多个拷贝。翻译增强子多核苷酸中的TEE可以组织于一个或多个序列区段中。
一个序列区段可以带有一个或多个本文所例示的特定TEE，且各TEE是以一个或多个拷贝存在。当在翻译增强子多核苷酸中存在多个序列区段时，这些序列区域可以是同源或不同源的。因此，翻译增强子多核苷酸中的多个序列区段可以带有相同或不同类型的本文所例示的特定TEE、各特定TEE的相同或不同数量的拷贝和/或在各序列区段内相同或不同的TEE组织。

[0772] 多核苷酸(例如mRNA)可以包括至少一个TEE，该TEE在国际专利公布第WO1999/024595号、第WO2012/009644号、第WO2009/075886号、第WO2007/025008号、第WO1999/
024595号；欧洲专利公布第2610341号和第2610340号；美国专利第6,310,197号、第6,849,
405号、第7,456,273号、第7,183,395号；以及美国专利公布第2009/0226470号、第2011/
0124100号、第2007/0048776号、第2009/0093049号和第2013/0177581号，各案的TEE序列以引用的方式并入本文中。TEE可以位于多核苷酸(例如mRNA)的5′-UTR中。

[0773] 多核苷酸(例如mRNA)可以包括至少一个与美国专利公布第2009/0226470号、第2007/0048776号、第2013/0177581号和第2011/0124100号；国际专利公布第WO1999/024595号、第WO2012/009644号、第WO2009/075886号和第WO2007/025008号；欧洲专利公布第
2610341号和第2610340号；美国专利第6,310,197号、第6,849,405号、第7,456,273号、第7,
183,395号中所描述的TEE具有至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少
75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％同一性的TEE，各案的TEE序列以引用的方式并入本文中。

[0774] 多核苷酸(例如mRNA)的5′-UTR可以包括至少1个、至少2个、至少3个、至少4个、至少5个、至少6个、至少7个、至少8个、至少9个、至少10个、至少11个、至少12个、至少13个、至少14个、至少15个、至少16个、至少17个、至少18个、至少19个、至少20个、至少21个、至少22个、至少23个、至少24个、至少25个、至少30个、至少35个、至少40个、至少45个、至少50个、至少55个或超过60个TEE序列。多核苷酸(例如mRNA)的5′-UTR中的TEE序列可以是相同或不同TEE序列。TEE序列可以呈重复一次、两次或超过三次的如ABABAB、AABBAABBAABB或ABCABCABC，或其变体等模式。在这些模式中，每个字母A、B或C在核苷酸水平上表示不同的TEE序列。

[0775] 在一些情况下，5′-UTR可以包括用于分隔两个TEE序列的间隔子。作为一个非限制性实例，间隔子可以是含15个核苷酸的间隔子和/或本领域中已知的其它间隔子。作为另一个非限制性实例，5′-UTR可以包括在5′-UTR中重复至少一次、至少两次、至少3次、至少4次、至少5次、至少6次、至少7次、至少8次、至少9次或超过9次的TEE序列-间隔子模块。

[0776] 在其它情况下，分隔两个TEE序列的间隔子可以包括本领域中已知可调控本公开的多核苷酸(例如mRNA)的翻译的其它序列，如但不限于miR序列(例如miR结合位点和miR 种子序列)。作为一个非限制性实例，用于分隔两个TEE序列的每个间隔子可以包括不同miR序列或miR序列的组分(例如miR种子序列)。

[0777] 在一些情况下，在多核苷酸(例如mRNA)的5′-UTR中的TEE包括至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少99％或超过99％的以下各案中所公开的TEE序列：美国专利公布第2009/0226470号、第
2007/0048776号、第2013/0177581号和第2011/0124100号；国际专利公布第WO1999/024595号、第WO2012/009644号、第WO2009/075886号和第WO2007/025008号；欧洲专利公布第
2610341号和第2610340号；以及美国专利第6,310,197号、第6,849,405号、第7,456,273号和第7,183,395号，各案的TEE序列以引用的方式并入本文中。在另一个实施方案中，在本公开的多核苷酸(例如mRNA)的5′-UTR中的TEE可以包括美国专利公布第2009/0226470号、第
2007/0048776号、第2013/0177581号和第2011/0124100号；国际专利公布第WO1999/024595号、第WO2012/009644号、第WO2009/075886号和第WO2007/025008号；欧洲专利公布第
2610341号和第2610340号；以及美国专利第6,310,197号、第6,849,405号、第7,456,273号和第7,183,395号中所公开的TEE序列的5-30个核苷酸的片段、5-25个核苷酸的片段、5-20个核苷酸的片段、5-15个核苷酸的片段、5-10个核苷酸的片段；各案的TEE序列以引用的方式并入本文中。

[0778] 在某些情况下，在本公开的多核苷酸(例如mRNA)的5′-UTR中的TEE可以包括至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少
90％、至少95％、至少99％或超过99％的以下各案中所公开的TEE序列：Chappell等人(Proc.Natl.Acad.Sci.USA 101:9590-9594,2004)和Zhou等人(PNAS 102:6273-6278,
2005)；Wellensiek等人(Genome-wide profiling of human cap-independent
translation-enhancing elements,Nature Methods,2013；DOI:10.1038/NMETH.2522)中所公开的增补表1和增补表2；各案的TEE序列以引用的方式并入本文中。在另一个实施方案中，在本公开的多核苷酸(例如mRNA)的5′-UTR中的TEE可以包括Chappell等人
(Proc.Natl.Acad.Sci.USA 101:9590-9594,2004)和Zhou等人(PNAS 102:6273-6278,
2005)；Wellensiek等人(Genome-wide profiling of human cap-independent
translation-enhancing elements,Nature Methods,2013；DOI:10.1038/NMETH.2522)中所公开的增补表1和增补表2中所公开的TEE序列的5-30个核苷酸的片段、5-25个核苷酸的片段、5-20个核苷酸的片段、5-15个核苷酸的片段、5-10个核苷酸的片段；各案的TEE序列以引用的方式并入本文中。

[0779] 在一些情况下，在多核苷酸(例如mRNA)的5′-UTR中使用的TEE是IRES序列，如但不限于美国专利第7,468,275号和国际专利公布第WO2001/055369号中所描述的那些，各案的TEE序列以引用的方式并入本文中。

[0780] 在一些情况下，在多核苷酸(例如mRNA)的5′-UTR中使用的TEE可以通过美国专利公布第2007/0048776号和第2011/0124100号以及国际专利公布第WO2007/025008号和第WO2012/009644号中所描述的方法鉴别，各案的方法以引用的方式并入本文中。

[0781] 在一些情况下，在本公开的多核苷酸(例如mRNA)的5′-UTR中使用的TEE可以是美国专利第7,456,273号和第7,183,395号、美国专利公布第2009/0093049号以及国际公布第WO2001/055371号中所描述的转录调控元件，各案的TEE序列以引用的方式并入本文中。转录调控元件可以通过本领域中已知的方法，如但不限于美国专利第7,456,273号和第7,183,395号、美国专利公布第2009/0093049号以及国际公布第WO2001/055371号中所描述的方法鉴别，各案的方法以引用的方式并入本文中。

[0782] 在又其它情况下，在多核苷酸(例如mRNA)的5′-UTR中使用的TEE是如美国专利第7,456,273号和第7,183,395号、美国专利公布第2009/0093049号以及国际公布第WO2001/
055371号中所描述的多核苷酸或其部分，各案的TEE序列以引用的方式并入本文中。

[0783] 包括至少一个本文所述的TEE的5′-UTR可以被并入单顺反子序列，如但不限于载体系统或多核苷酸载体中。作为一个非限制性实例，载体系统和多核苷酸载体可以包括美国专利第7,456,273号和第7,183,395号、美国专利公布第2007/0048776号、第2009/0093049号和第2011/0124100号以及国际公布第WO2007/025008号和第WO2001/055371号中所描述的那些，各案的TEE序列以引用的方式并入本文中。

[0784] 本文所描述的TEE可以位于多核苷酸(例如mRNA)的5′-UTR和/或3′-UTR中。位于3′-UTR中的TEE可以与位于和/或所描述的并入5′-UTR中的TEE相同和/或不同。

[0785] 在一些情况下，多核苷酸(例如mRNA)的3′-UTR可以包括至少1个、至少2个、至少3个、至少4个、至少5个、至少6个、至少7个、至少8个、至少9个、至少10个、至少11个、至少12个、至少13个、至少14个、至少15个、至少16个、至少17个、至少18个、至少19个、至少20个、至少21个、至少22个、至少23个、至少24个、至少25个、至少30个、至少35个、至少40个、至少45个、至少50个、至少55个或超过60个TEE序列。本公开的多核苷酸(例如mRNA)的3′-UTR中的TEE序列可以是相同或不同TEE序列。TEE序列可以呈重复一次、两次或超过三次的如ABABAB、AABBAABBAABB或ABCABCABC，或其变体等模式。在这些模式中，每个字母A、B或C在核苷酸水平上表示不同的TEE序列。

[0786] 在一种情况下，3′-UTR可以包括用于分隔两个TEE序列的间隔子。作为一个非限制性实例，间隔子可以是含15个核苷酸的间隔子和/或本领域中已知的其它间隔子。作为另一个非限制性实例，3′-UTR可以包括在3′-UTR中重复至少一次、至少两次、至少3次、至少4次、至少5次、至少6次、至少7次、至少8次、至少9次或超过9次的TEE序列-间隔子模块。

[0787] 在其它情况下，分隔两个TEE序列的间隔子可以包括本领域中已知可调控本公开的多核苷酸(例如mRNA)的翻译的其它序列，如但不限于本文所描述的miR序列(例如miR结合位点和miR种子序列)。作为一个非限制性实例，用于分隔两个TEE序列的每个间隔子可以包括不同miR序列或miR序列的组分(例如miR种子序列)。

[0788] 在又其它情形中，并入miR序列和/或TEE序列将改变茎环区的形状，由此可以增加和/或减少翻译。(参见例如Kedde等人,A Pumilio-induced RNA structure switch in p27-3′UTR controls miR-221 and miR-22accessibility.Nature Cell Biology.2010)。

[0789] 茎环

[0790] 多核苷酸(例如mRNA)可以包括茎环，如但不限于组蛋白茎环。茎环可以是长度为约25个或约26个核苷酸的核苷酸序列，如但不限于国际专利公布第WO2013/103659号中所描述的那些，该案以引用的方式并入本文中。组蛋白茎环相对于编码区可以位于3′-端(例如在编码区的3′-末端处)。作为一个非限制性实例，茎环可以位于本文所述的多核苷酸的3′-端。在一些情况下，多核苷酸(例如mRNA)包括超过一个茎环(例如两个茎环)。茎环序列的实例描述于国际专利公布第WO2012/019780号和第WO201502667号中，其茎环序列以引用的方式并入本文中。在一些情况下，多核苷酸包括茎环序列CAAAGGCTCTTTTCAGAGCCACCA(SEQ ID NO:1)。在其它情况下，多核苷酸包括茎环序列CAAAGGCUCUUUUCAGAGCCACCA(SEQ ID NO:2)。

[0791] 茎环可以位于多核苷酸的另一个末端区域中。作为一个非限制性实例，茎环可以位于另一个末端区域中的不翻译区(例如3′-UTR)内。

[0792] 在一些情况下，包括组蛋白茎环的多核苷酸，如但不限于mRNA，可以通过添加3′-稳定化区(例如包括至少一个链终止核苷的3′-稳定化区)实现稳定。不希望受理论束缚，添加至少一个链终止核苷可以减慢多核苷酸的降解并因此可以增加该多核苷酸的半衰期。

[0793] 在其它情况下，包括组蛋白茎环的多核苷酸，如但不限于mRNA，可以通过改变多核苷酸的3′-区，由此可以防止和/或抑制寡聚(U)的添加来实现稳定(参见例如国际专利公布第WO2013/103659号)。

[0794] 在又其它情况下，包括组蛋白茎环的多核苷酸，如但不限于mRNA，可以通过添加以3′-脱氧核苷、2′,3′-双脱氧核苷、3′-O-甲基核苷、3′-O-乙基核苷、3′-阿拉伯糖苷以及本领域中已知和/或本文所描述的其它替代性核苷封端的寡聚核苷酸来实现稳定。

[0795] 在一些情况下，本公开的多核苷酸可以包括组蛋白茎环、聚腺苷酸区和/或5′-帽结构。组蛋白茎环可以在聚腺苷酸区之前和/或之后。包括组蛋白茎环和聚腺苷酸区序列的多核苷酸可以包括本文所描述的链终止核苷。

[0796] 在其它情况下，本公开的多核苷酸可以包括组蛋白茎环和5′-帽结构。5′-帽结构可以包括但不限于本文所描述和/或本领域中已知的那些。

[0797] 在一些情况下，保守的茎环区可以包括本文所描述的miR序列。作为一个非限制性实例，茎环区可以包括本文所描述的miR序列的种子序列。在另一个非限制性实例中，茎环区可以包括miR-122种子序列。

[0798] 在某些情况下，保守的茎环区可以包括本文所描述的miR序列并且还可以包括TEE序列。

[0799] 在一些情况下，并入miR序列和/或TEE序列将改变茎环区的形状，由此可以增加和/或减少翻译。(参见例如Kedde等人,A Pumilio-induced RNA structure switch in p27-3′UTR controls miR-221 and miR-22accessibility.Nature Cell Biology.2010，以全文引用的方式并入本文中)。

[0800] 多核苷酸可以包括至少一个组蛋白茎环和聚腺苷酸区或聚腺苷酸化信号。编码至少一个组蛋白茎环和聚腺苷酸区或聚腺苷酸化信号的多核苷酸序列的非限制性实例描述于国际专利公布第WO2013/120497号、第WO2013/120629号、第WO2013/120500号、第WO2013/120627号、第WO2013/120498号、第WO2013/120626号、第WO2013/120499号和第WO2013/
120628号中，各案的序列以引用的方式并入本文中。在某些情况下，编码组蛋白茎环和聚腺苷酸区或聚腺苷酸化信号的多核苷酸可以编码病原体抗原或其片段，如国际专利公布第WO2013/120499号和第WO2013/120628号中所描述的多核苷酸序列，两案的序列以引用的方式并入本文中。在其它情况下，编码组蛋白茎环和聚腺苷酸区或聚腺苷酸化信号的多核苷酸可以编码治疗性蛋白质，如国际专利公布第WO2013/120497号和第WO2013/120629号中所描述的多核苷酸序列，两案的序列以引用的方式并入本文中。在一些情况下，编码组蛋白茎环和聚腺苷酸区或聚腺苷酸化信号的多核苷酸可以编码肿瘤抗原或其片段，如国际专利公布第WO2013/120500号和第WO2013/120627号中所描述的多核苷酸序列，两案的序列以引用的方式并入本文中。在其它情况下，编码组蛋白茎环和聚腺苷酸区或聚腺苷酸化信号的多核苷酸可以编码致敏性抗原或自体免疫性自体抗原，如国际专利公布第WO2013/120498号和第WO2013/120626号中所描述的多核苷酸序列，两案的序列以引用的方式并入本文中。

[0801] 聚腺苷酸区

[0802] 多核苷酸或核酸(例如mRNA)可以包括聚腺苷酸序列和/或聚腺苷酸化信号。聚腺苷酸序列可以完全或主要由腺嘌呤核苷酸或其类似物或衍生物构成。聚腺苷酸序列可以是位于核酸3’不翻译区附近的尾。

[0803] 在RNA加工期间，通常将长链腺嘌呤核苷酸(聚腺苷酸区)添加至信使RNA(mRNA)分子以增加该分子的稳定性。转录后，立即将转录物的3′-端裂解成游离3′-羟基。接着，聚腺苷酸聚合酶将腺嘌呤核苷酸链添加至RNA。该过程称为聚腺苷酸化，添加长度介于100个与250个残基之间的聚腺苷酸区。

[0804] 独特聚腺苷酸区长度可以为本公开的替代性多核苷酸提供某些益处。

[0805] 一般来说，本公开的聚腺苷酸区的长度是至少30个核苷酸长。在另一个实施方案中，聚腺苷酸区是至少35个核苷酸长。在另一个实施方案中，长度是至少40个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少45个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少55个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少60个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少70个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少80个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少90个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少100个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少
120个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少140个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少160个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少180个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少200个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少250个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少300个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少350个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少400个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少450个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少500个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少600个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少700个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少800个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少900个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少1000个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少1100个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少1200个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少1300个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少1400个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少1500个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少1600个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少
1700个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少1800个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少1900个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少2000个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少2500个核苷酸。在另一个实施方案中，长度是至少3000个核苷酸。

[0806] 在一些情况下，在本文所描述的替代性多核苷酸分子上的聚腺苷酸区可以是80个核苷酸、120个核苷酸、160个核苷酸长。

[0807] 在其它情况下，在本文所描述的替代性多核苷酸分子上的聚腺苷酸区可以是20、40、80、100、120、140或160个核苷酸长。

[0808] 在一些情况下，聚腺苷酸区是相对于整个替代性多核苷酸的长度设计。这一设计可以基于该替代性多核苷酸的编码区的长度、该替代性多核苷酸(如mRNA)的特定特征或区域的长度，或基于由该替代性多核苷酸表达的最终产物的长度。当相对于替代性多核苷酸的任一特征(例如除包括聚腺苷酸区的mRNA部分外)时，该聚腺苷酸区的长度可以比该额外特征长10、20、30、40、50、60、70、80、90或100％。聚腺苷酸区还可以被设计作为其所属替代性多核苷酸的一部分。在这一情况下，聚腺苷酸区可以是构建体总长度或不含聚腺苷酸区的构建体的总长度的10、20、30、40、50、60、70、80或90％或更高百分比。

[0809] 在某些情况下，可以使用多核苷酸(例如mRNA)与聚腺苷酸区的工程改造的结合位点和/或偶联增强表达。工程改造的结合位点可以是感应序列，这些序列可以作为多核苷酸(例如mRNA)局部微环境的配体的结合位点操作。作为一个非限制性实例，多核苷酸(例如mRNA)可以包括至少一个工程改造的结合位点以改变聚腺苷酸结合蛋白(PABP)和其类似物的结合亲和力。并入至少一个工程改造的结合位点可以增加PABP和其类似物的结合亲和力。

[0810] 另外，多个不同的多核苷酸(例如mRNA)可以使用在聚腺苷酸区3′-末端处的替代性核苷酸经3′-端一起连接至PABP(聚腺苷酸结合蛋白)。可以在相关细胞系中进行转染实验并且可以在转染后12小时、24小时、48小时、72小时和第7天通过ELISA进行测定。作为一个非限制性实例，可以使用转染实验评价由添加至少一个工程改造的结合位点引起的对PABP或其类似物结合亲和力的影响。

[0811] 在某些情况下，可以使用聚腺苷酸区调节翻译起始。不希望受理论束缚，聚腺苷酸区募集PABP，募集的PABP又可以与翻译起始复合物相互作用并因此可能对蛋白质合成至关重要。

[0812] 在一些情况下，聚腺苷酸区也可以用于本公开中以防止3′-5′-核酸外切酶消化。

[0813] 在一些情况下，多核苷酸(例如mRNA)可以包括多聚A-G四联体。G-四联体是由四个鸟嘌呤核苷酸构成的环状氢键结的阵列，其可以由DNA和RNA中富含G的序列形成。在这一实施方案中，G-四联体被并入聚腺苷酸区的末端。可以在各种时间点测定由此得到的多核苷酸(例如mRNA)的稳定性、蛋白质产生以及包括半衰期在内的其它参数。已发现，多聚A-G四联体使蛋白质产量相当于使用仅120个核苷酸的聚腺苷酸区所见的至少75％。

[0814] 在一些情况下，多核苷酸(例如mRNA)可以包括聚腺苷酸区并且可以通过添加3′-稳定化区实现稳定。带有聚腺苷酸区的多核苷酸(例如mRNA)还可以包括5′-帽结构。

[0815] 在其它情况下，多核苷酸(例如mRNA)可以包括多聚A-G四联体。带有多聚A-G四联体的多核苷酸(例如mRNA)还可以包括5′-帽结构。

[0816] 在一些情况下，可以用于使包括聚腺苷酸区或多聚A-G四联体的多核苷酸(例如mRNA)稳定的3′-稳定化区可以是但不限于国际专利公布第WO2013/103659号中所描述的那些，该案的聚腺苷酸区或多聚A-G四联体以引用的方式并入本文中。在其它情况下，可以用于本公开的3′-稳定化区包括链终止核苷，如3′-脱氧腺苷(虫草素(cordycepin))、3′-脱氧尿苷、3′-脱氧胞嘧啶、3′-脱氧鸟苷、3′-脱氧胸腺嘧啶、2′,3′-双脱氧核苷，如2′,3′-双脱氧腺苷、2′,3′-双脱氧尿苷、2′,3′-双脱氧胞嘧啶、2′,3′-双脱氧鸟苷、2′,3′-双脱氧胸腺嘧啶、2′-脱氧核苷或O-甲基核苷。

[0817] 在其它情况下，包括聚腺苷酸区或多聚A-G四联体的多核苷酸，如但不限于mRNA，可以通过改变多核苷酸的3′-区，由此可以防止和/或抑制寡聚(U)的添加来实现稳定(参见例如国际专利公布第WO2013/103659号)。

[0818] 在又其它情况下，包括聚腺苷酸区或多聚A-G四联体的多核苷酸，如但不限于mRNA，可以通过添加以3′-脱氧核苷、2′,3′-双脱氧核苷、3′-O-甲基核苷、3′-O-乙基核苷、
3′-阿拉伯糖苷以及本领域中已知和/或本文所描述的其它替代性核苷封端的寡聚核苷酸来实现稳定。

[0819] 链终止核苷

[0820] 核酸可以包括链终止核苷。例如，链终止核苷可以包括在其糖基的2’和/或3’位处脱氧的那些核苷。此类物种可以包括3'-脱氧腺苷(虫草素)、3'-脱氧尿苷、3'-脱氧胞嘧啶、3'-脱氧鸟苷、3'-脱氧胸腺嘧啶和2',3'-双脱氧核苷，如2',3’-双脱氧腺苷、2',3'-双脱氧尿苷、2',3'-双脱氧胞嘧啶、2',3'-双脱氧鸟苷和2',3'-双脱氧胸腺嘧啶。

[0821] 其它组分

[0822] 纳米粒子组合物可以包括一种或多种除前述部分中所描述的那些外的组分。例如，纳米粒子组合物可以包括一个或多个疏水性小分子，如维生素(例如维生素A或维生素E)或固醇。

[0823] 纳米粒子组合物还可以包括一个或多个渗透性增强分子、碳水化合物、聚合物、表面改变剂或其它组分。渗透性增强分子可以是例如美国专利申请公布第2005/0222064号所描述的分子。碳水化合物可以包括简单糖(例如葡萄糖)和多糖(例如糖原以及其衍生物和类似物)。

[0824] 聚合物可以被包括在纳米粒子组合物中和/或用于囊封或部分囊封纳米粒子组合物。聚合物可以是生物可降解和/或生物相容的。聚合物可以选自但不限于聚胺、聚醚、聚酰胺、聚酯、聚氨基甲酸酯、聚脲、聚碳酸酯、聚苯乙烯、聚酰亚胺、聚砜、聚氨酯、聚乙炔、聚乙烯、聚乙烯亚胺、聚异氰酸酯、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、聚丙烯腈和聚芳香酯。例如，聚合物可以包括聚(己内酯)(PCL)、乙烯乙酸乙烯酯聚合物(EVA)、聚(乳酸)(PLA)、聚(L-乳酸)(PLLA)、聚(羟基乙酸)(PGA)、聚(乳酸-共-羟基乙酸)(PLGA)、聚(L-乳酸-共-羟基乙酸)(PLLGA)、聚(D,L-丙交酯)(PDLA)、聚(L-丙交酯)(PLLA)、聚(D,L-丙交酯-共-己内酯)、聚(D,L-丙交酯-共-己内酯-共-乙交酯)、聚(D,L-丙交酯-共-PEO-共-D,L-丙交酯)、聚(D,L-丙交酯-共-PPO-共-D,L-丙交酯)、聚氰基丙烯酸烷酯、聚氨酯、聚L-赖氨酸(PLL)、甲基丙烯酸羟基丙酯(HPMA)、聚乙二醇、聚L-谷氨酸、聚(羟基酸)、聚酐、聚原酸酯、聚(酯酰胺)、聚酰胺、聚(酯醚)、聚碳酸酯、聚烯烃如聚乙烯和聚丙烯、聚烷二醇如聚(乙二醇)(PEG)、聚氧化烯(PEO)、聚对苯二甲酸烷二酯如聚(对苯二甲酸乙二酯)、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯醚、聚乙烯基酯如聚(乙酸乙烯酯)、聚乙烯基卤化物如聚(乙烯基氯)(PVC)、聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)、聚硅氧烷、聚苯乙烯(PS)、聚氨酯、衍生化纤维素如烷基纤维素、羟基烷基纤维素、纤维素醚、纤维素酯、硝基纤维素、羟丙基纤维素、羧甲基纤维素、丙烯酸聚合物如聚((甲基)丙烯酸甲酯)(PMMA)、聚((甲基)丙烯酸乙酯)、聚((甲基)丙烯酸丁酯)、聚((甲基)丙烯酸异丁酯)、聚((甲基)丙烯酸己酯)、聚((甲基)丙烯酸异癸酯)、聚((甲基)丙烯酸月桂酯)、聚((甲基)丙烯酸苯酯)、聚(丙烯酸甲酯)、聚(丙烯酸异丙酯)、聚(丙烯酸异丁酯)、聚(丙烯酸十八烷酯)以及其共聚物和混合物、聚二噁烷酮和其共聚物、聚羟基烷酸酯、聚反丁烯二酸丙二酯、聚甲醛、泊洛沙姆(poloxamer)、聚氧胺、聚(原酸)酯、聚(丁酸)、聚(戊酸)、聚(丙交酯-共-己内酯)、三亚甲基碳酸酯、聚(N-丙烯酰基吗啉)(PAcM)、聚(2-甲基-2-噁唑啉)(PMOX)、聚(2-乙基-2-噁唑啉)(PEOZ)以及聚甘油。

[0825] 表面改变剂可以包括但不限于阴离子性蛋白质(例如牛血清白蛋白)、表面活性剂(例如阳离子性表面活性剂，如二甲基双十八烷基溴化铵)、糖或糖衍生物(例如环糊精)、核酸、聚合物(例如肝素、聚乙二醇和泊洛沙姆)、粘液溶解剂(例如乙酰半胱氨酸、艾蒿、菠萝蛋白酶(bromelain)、木瓜蛋白酶、大青(clerodendrum)、溴己新(bromhexine)、羧甲司坦(carbocisteine)、依普拉酮(eprazinone)、美司钠(mesna)、氨溴索(ambroxol)、索布瑞醇(sobrerol)、多米奥醇(domiodol)、来托司坦(letosteine)、司替罗宁(stepronin)、硫普罗宁(tiopronin)、凝溶胶蛋白(gelsolin)、胸腺肽(thymosin)β4、链球菌DNA酶α(dornase alfa)、奈替克新(neltenexine)和厄多司坦(erdosteine))和DNA酶(例如rhDNA酶)。表面改变剂可以被安置在纳米粒子组合物的纳米粒子内和/或表面上(例如通过涂布、吸附、共价连接或其它方法)。

[0826] 纳米粒子组合物还可以包含一种或多种官能化脂质。例如，脂质可以用炔基官能化，该炔基当在适当反应条件下暴露于叠氮化物时可能经历环加成反应。确切地说，脂质双层可以通过这一方式，用一个或多个可有效地促进膜渗透、细胞识别或成像的基团官能化。纳米粒子组合物的表面还可以与一种或多种有用抗体偶联。可用于靶向细胞递送、成像和膜渗透的官能团和偶联物是本领域中众所周知的。

[0827] 除这些组分外，纳米粒子组合物可以包括可用于药物组合物中的任何物质。例如，纳米粒子组合物可以包括一种或多种药学上可接受的赋形剂或辅助成分，如但不限于一种或多种溶剂、分散介质、稀释剂、分散助剂、悬浮助剂、造粒助剂、崩解剂、填充剂、助流剂、液体媒剂、粘合剂、表面活性剂、等渗剂、增稠剂或乳化剂、缓冲剂、润滑剂、油、防腐剂和其它物种。还可以包括赋形剂，如蜡、黄油、着色剂、包衣、调味剂和芳香剂。药学上可接受的赋形剂是本领域中众所周知的(参见例如Remington’s The Science and Practice of Pharmacy,第21版,A.R.Gennaro；Lippincott,Williams&Wilkins,Baltimore,MD,2006)。

[0828] 稀释剂的实例可以包括但不限于碳酸钙、碳酸钠、磷酸钙、磷酸二钙、硫酸钙、磷酸氢钙、磷酸钠、乳糖、蔗糖、纤维素、微晶纤维素、高岭土、甘露糖醇、山梨糖醇、肌醇、氯化钠、干淀粉、玉米淀粉、粉末状糖和/或其组合。造粒剂和分散剂可以选自由以下组成的非限制性清单：马铃薯淀粉、玉米淀粉、木薯淀粉、羟基乙酸淀粉钠、粘土、海藻酸、瓜尔胶、柑桔渣、琼脂、膨润土、纤维素和木制品、天然海绵、阳离子交换树脂、碳酸钙、硅酸盐、碳酸钠、交联聚(乙烯吡咯烷酮)(交联聚维酮)、羧甲基淀粉钠(羟基乙酸淀粉钠)、羧甲基纤维素、交联羧甲基纤维素(croscarmellose)钠、甲基纤维素、预胶凝淀粉(淀粉1500)、微晶淀粉、不溶于水的淀粉、羧甲基纤维素钙、硅酸铝镁月桂基硫酸钠、季铵化合物和/或其组合。

[0829] 表面活性剂和/或乳化剂可以包括但不限于天然乳化剂(例如阿拉伯胶、琼脂、海藻酸、海藻酸钠、黄芪胶、角叉菜(chondrux)、胆固醇、黄原胶、果胶、明胶、蛋黄、酪蛋白、羊毛脂、胆固醇、蜡和卵磷脂)、胶质粘土(例如膨润土[硅酸铝]和 [硅酸铝镁])、长链氨基酸衍生物、高分子量醇(例如硬脂醇、鲸蜡醇、油醇、三醋精单硬脂酸酯、乙二醇二硬脂酸酯、甘油单硬脂酸酯和丙二醇单硬脂酸酯、聚乙烯醇)、卡波姆(carbomers)(例如羧基聚亚甲基、聚丙烯酸、丙烯酸聚合物和羧基乙烯基聚合物)、角叉菜胶、纤维素衍生物(例如羧基甲基纤维素钠、粉末状纤维素、羟甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素)、脱水山梨糖醇脂肪酸酯(例如聚氧乙烯脱水山梨糖醇单月桂酸酯[
20]、聚氧乙烯脱水山梨糖醇[ 60]、聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯[
80]、脱水山梨糖醇单棕榈酸酯[ 40]、脱水山梨糖醇单硬脂酸酯[
60]、脱水山梨糖醇三硬脂酸酯[ 65]、甘油单油酸酯、脱水山梨糖醇单油酸
酯[ 80])、聚氧乙烯酯(例如聚氧乙烯单硬脂酸酯[ 45]、聚氧乙烯氢化蓖
麻油、聚乙氧基化蓖麻油、聚氧亚甲基硬脂酸酯和 )、蔗糖脂肪酸酯、聚乙二醇
脂肪酸酯(例如 )、聚氧乙烯醚(例如聚氧乙烯月桂基醚[ 30])、聚
(乙烯基-吡咯烷酮)、二乙二醇单月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯、油酸钠、油酸钾、油酸乙酯、油酸、月桂酸乙酯、月桂基硫酸钠、 F 68、 188、鲸蜡烷三甲
基溴化铵、绿化鲸蜡基吡啶、苯扎氯铵(benzalkonium chloride)、多库酯钠(docusate sodium)和/或其组合。

[0830] 粘合剂可以是淀粉(例如玉米淀粉和淀粉糊浆)；明胶；糖(例如蔗糖、葡萄糖、右旋糖、糊精、糖蜜、乳糖、乳糖醇、甘露糖醇)；天然和合成胶状物(例如阿拉伯胶、海藻酸钠、爱尔兰苔藓提取物、panwar胶、印度树胶、依莎贝果壳粘胶(mucilage of isapol husks)、羧甲基纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、微晶纤维素、乙酸纤维素、聚(乙烯基-吡咯烷酮)、镁硅酸铝和松木阿拉伯半乳聚糖(larch arabogalactan))；海藻酸盐；聚氧化乙烯；聚乙二醇；无机钙盐；硅酸；聚甲基丙烯酸酯；蜡；水；醇；和其组合，或任何其它适合的粘合剂。

[0831] 防腐剂的实例可以包括但不限于抗氧化剂、螯合剂、抗微生物防腐剂、抗真菌防腐剂、醇类防腐剂、酸性防腐剂和/或其它防腐剂。抗氧化剂的实例包括但不限于α生育酚、抗坏血酸、抗坏血基棕榈酸酯、丁基化羟基苯甲醚、丁基化羟基甲苯、单硫代甘油、偏亚硫酸氢钾、丙酸、没食子酸丙酯、抗坏血酸钠、亚硫酸氢钠、偏亚硫酸氢钠和/或亚硫酸钠。螯合剂的实例包括乙二胺四乙酸(EDTA)、柠檬酸单水合物、依地酸二钠(disodium edetate)、依地酸二钾、依地酸、反丁烯二酸、苹果酸、磷酸、依地酸钠、酒石酸和/或依地酸三钠。抗微生物防腐剂的实例包括但不限于苯扎氯铵、苄索氯铵(benzethonium chloride)、苯甲醇、溴硝醇(bronopol)、西曲溴胺(cetrimide)、鲸蜡基氯化吡啶、氯己定(chlorhexidine)、氯丁醇、氯甲酚(chlorocresol)、氯二甲苯酚(chloroxylenol)、甲酚(cresol)、乙醇、甘油、海克替啶(hexetidine)、伊咪脲(imidurea)、苯酚、苯氧基乙醇、苯乙醇、硝酸苯汞(phenylmercuric nitrate)、丙二醇和/或硫柳汞(thimerosal)。抗真菌防腐剂的实例包括但不限于对羟基苯甲酸丁酯、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、苯甲酸、羟基苯甲酸、苯甲酸钾、山梨酸钾、苯甲酸钠、丙酸钠和/或山梨酸。醇类防腐剂的实例包括但不限于乙醇、聚乙二醇、苯甲醇、苯酚、酚类化合物、双酚、氯丁醇、羟基苯甲酸酯和/或苯乙醇。酸性防腐剂的实例包括但不限于维生素A、维生素C、维生素E、β-胡萝卜素、柠檬酸、乙酸、脱氢抗坏血酸、抗坏血酸、山梨酸和/或植酸。其它防腐剂包括但不限于生育酚、生育酚乙酸酯、甲磺酸地特肟(deteroxime mesylate)、西曲溴铵、丁基化羟基苯甲醚(BHA)、丁基化羟基甲苯(BHT)、乙二胺、月桂基硫酸钠(SLS)、月桂基醚硫酸钠(SLES)、亚硫酸氢钠、偏亚硫酸氢钠、亚硫酸氢钾、偏亚硫酸氢钾、GLYDANT 对羟基苯甲酸甲酯、115、 II、NEOLONETM、KATHONTM和/或

[0832] 缓冲剂的实例包括但不限于柠檬酸盐缓冲溶液、乙酸盐缓冲溶液、磷酸盐缓冲溶液、氯化铵、碳酸钙、氯化钙、柠檬酸钙、葡乳醛酸钙(calcium glubionate)、葡庚糖酸钙、葡糖酸钙、d-葡糖酸、甘油磷酸钙、乳酸钙、乳糖酸钙、丙酸、乙酰丙酸钙、戊酸、磷酸二钙、磷酸、磷酸三钙、三碱式磷酸钙、乙酸钾、氯化钾、葡糖酸钾、钾混合物、磷酸二钾、磷酸一钾、磷酸钾混合物、乙酸钠、碳酸氢钠、氯化钠、柠檬酸钠、乳酸钠、磷酸二钠、磷酸一钠、磷酸钠混合物、氨丁三醇(tromethamine)、氨基磺酸盐缓冲液(例如HEPES)、氢氧化镁、氢氧化铝、海藻酸、无热原质水、等渗生理盐水、林格氏溶液(Ringer's solution)、乙醇和/或其组合。润滑剂可以选自由以下组成的非限制性组：硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸、二氧化硅、滑石、麦芽、山嵛酸甘油酯、氢化植物油、聚乙二醇、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠、亮氨酸、月桂基硫酸镁、月桂基硫酸钠和其组合。

[0833] 油的实例包括但不限于杏仁油、杏桃仁油、鳄梨油、巴巴苏油、佛手柑油、黑醋栗油、琉璃苣油、杜松油、洋甘菊油、芥花油、葛缕子油、巴西棕榈油、蓖麻油、肉桂油、可可脂、椰子油、鳕鱼肝油、咖啡油、玉米油、棉籽油、鸸鹋油、尤加利油(eucalyptus)、月见草油、鱼油、亚麻籽油、草叶油、葫芦油、葡萄籽油、榛子油、海索油(hyssop)、肉豆蔻酸异丙酯、荷荷巴油、石栗油、杂薰衣草油、薰衣草油、柠檬油、山苍子油、澳洲坚果油、锦葵油、芒果籽油、池花籽油、貂油、肉豆蔻油、橄榄油、橙油、大西洋胄胸鲷油(orange roughy)、棕榈油、棕榈仁油、桃仁油、花生油、罂粟籽油、南瓜籽油、菜籽油、米糠油、迷迭香油、红花油、檀木油、山茶花油、香薄荷油、沙棘油、芝麻油、乳木果油、硅酮、大豆油、向日葵油、茶树油、蓟油、山茶油、延兰草油、核桃油和小麦胚芽油，以及硬脂酸丁酯、辛酸甘油三酯、癸酸甘油三酯、环甲基硅酮、癸二酸二乙酯、二甲基硅酮360、西甲硅油(simethicone)、肉豆蔻酸异丙酯、矿物油、辛基十二烷醇、油醇、硅油和/或其组合。

[0834] 配制物

[0835] 纳米粒子组合物可以包括脂质组分和一种或多种另外的组分，如治疗剂和/或预防剂。纳米粒子组合物可以被设计用于一种或多种特定应用或目标。纳米粒子组合物的成分可以基于特定应用或目标，和/或基于一种或多种成分的功效、毒性、费用、使用便利性、可用率或其它特征选择。类似地，纳米粒子组合物的特定配制物可以根据例如特定成分组合的功效和毒性，针对特定应用或目标选择。

[0836] 纳米粒子组合物的脂质组分可以包括例如根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的脂质、磷脂(如不饱和脂质，例如DOPE或DSPC)、PEG脂质和结构性脂质。所提供的脂质组分的成分可以呈特定比率。

[0837] 在一些实施方案中，纳米粒子组合物的脂质组分包括根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的脂质、磷脂、PEG脂质和结构性脂质。在某些实施方案中，纳米粒子组合物的脂质组分包括约30mol％至约60mol％的式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物；约0mol％至约30mol％磷脂；约18.5mol％至约48.5mol％结构性脂质；以及约0mol％至约10mol％PEG脂质，条件是总mol％不超过100％。在一些实施方案中，纳米粒子组合物的脂质组分包括约35mol％至约55mol％的式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物；约5mol％至约25mol％磷脂；约30mol％至约40mol％结构性脂质；以及约0mol％至约10mol％PEG脂质。在一个特定实施方案中，所述脂质组分包括约50mol％所述化合物、约10mol％磷脂、约38.5mol％结构性脂质和约1.5mol％PEG脂质。在另一个特定实施方案中，所述脂质组分包括约40mol％所述化合物、约20mol％磷脂、约
38.5mol％结构性脂质和约1.5mol％PEG脂质。在一些实施方案中，磷脂可以是DOPE或DSPC。
在其它实施方案中，PEG脂质可以是PEG-DMG和/或结构性脂质可以是胆固醇。

[0838] 纳米粒子组合物可以被设计用于一种或多种特定应用或目标。例如，纳米粒子组合物可以被设计用于将治疗剂和/或预防剂如RNA递送至哺乳动物体内的特定细胞、组织、器官或系统或其组合。为了增加对特定身体目标的选择性，可以改变纳米粒子组合物的物理化学特性。例如，可以基于不同器官的开窗尺寸调整粒度。纳米粒子组合物中所包括的治疗剂和/或预防剂也可以基于一个或多个所希望的递送目标选择。例如，可以针对特定适应症、病况、疾病或病症和/或针对递送至特定细胞、组织、器官或系统或其组合(例如局部或特异性递送)选择治疗剂和/或预防剂。在某些实施方案中，纳米粒子组合物可以包括编码所关注多肽的mRNA，所述mRNA能够在细胞内翻译以产生所关注多肽。此类组合物可以被设计用于特异性递送至特定器官。在一些实施方案中，组合物可以被设计用于特异性递送至哺乳动物肝。

[0839] 纳米粒子组合物中治疗剂和/或预防剂的量可以取决于纳米粒子组合物的尺寸、组成、所希望的目标和/或应用或其它特性，以及治疗剂和/或预防剂的特性。例如，可用于纳米粒子组合物中的RNA的量可以取决于RNA的尺寸、序列和其它特征。纳米粒子组合物中治疗剂和/或预防剂与其它成分(脂质)的相对量也可以变化。在一些实施方案中，纳米粒子组合物中脂质组分与治疗剂和/或预防剂的wt/wt比率可以是约5:1至约60:1，如5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1、12:1、13:1、14:1、15:1、16:1、17:1、18:1、19:1、20:1、25:1、30:1、
35:1、40:1、45:1、50:1和60:1。例如，脂质组分与治疗剂和/或预防剂的wt/wt比率可以是约
10:1至约40:1。在某些实施方案中，wt/wt比率是约20:1。纳米粒子组合物中治疗剂和/或预防剂的量可以例如使用吸收光谱法(例如紫外-可见光谱法)测量

[0840] 在一些实施方案中，纳米粒子组合包括一种或多种RNA，并且选择的所述一种或多种RNA、脂质和其量可以提供特定N:P比。所述组合物的N:P比是指一种或多种脂质中氮原子的摩尔比与RNA中磷酸酯基的数量的比率。一般来说，较低N:P比是优选的。选择的所述一种或多种RNA、脂质和其量可以提供约2:1至约30:1，如2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、12:1、14:1、16:1、18:1、20:1、22:1、24:1、26:1、28:1或30:1的N:P比。在某些实施方案中，N:P比可以是约2:1至约8:1。在其它实施方案中，N:P比是约5:1至约8:1。例如，N:P比可以是约5.0:1、约5.5:1、约5.67:1、约6.0:1、约6.5:1或约7.0:1。例如，N:P比可以是约5.67:
1。

[0841] 物理特性

[0842] 纳米粒子组合物的特征可以取决于其组分。例如，包括胆固醇作为结构性脂质的纳米粒子组合物可以具有与包括不同结构性脂质的纳米粒子组合物不同的特征。类似地，纳米粒子组合物的特征可以取决于其组分的绝对或相对量。例如，包括较高摩尔分数磷脂的纳米粒子组合物可以具有与包括较低摩尔分数磷脂的纳米粒子组合物不同的特征。特征还可以取决于制备纳米粒子组合物的方法和条件而变化。

[0843] 纳米粒子组合物可以通过多种方法表征。例如，可以使用显微术(例如透射电子显微术或扫描电子显微镜捡查)检查纳米粒子组合物的形态和尺寸分布。动态光散射或电势分析法(例如电势滴定法)可以用于测量ζ电势。动态光散射还可以用于测定粒度。还可以使用仪器如Zetasizer Nano ZS(Malvern Instruments Ltd,Malvern,Worcestershire,UK)测量纳米粒子组合物的多个特征，如粒度、多分散指数和ζ电势。

[0844] 如例如通过动态光散射(DLS)所测量，纳米粒子组合物的平均尺寸可以在数十纳米与数百纳米之间。例如，所述平均尺寸可以是约40nm至约150nm，如约40nm、45nm、50nm、55nm、60nm、65nm、70nm、75nm、80nm、85nm、90nm、95nm、100nm、105nm、110nm、115nm、120nm、
125nm、130nm、135nm、140nm、145nm或150nm。在一些实施方案中，纳米粒子组合物的平均尺寸可以是约50nm至约100nm、约50nm至约90nm、约50nm至约80nm、约50nm至约70nm、约50nm至约60nm、约60nm至约100nm、约60nm至约90nm、约60nm至约80nm、约60nm至约70nm、约70nm至约150nm、约70nm至约130nm、约70nm至约100nm、约70nm至约90nm、约70nm至约80nm、约80nm至约150nm、约80nm至约130nm、约80nm至约100nm、约80nm至约90nm、约90nm至约150nm、约
90nm至约130nm或约90nm至约100nm。在某些实施方案中，纳米粒子组合物的平均尺寸可以是约70nm至约130nm或约70nm至约100nm。在一个特定实施方案中，平均尺寸可以是约80nm。
在其它实施方案中，平均尺寸可以是约100nm。在其它实施方案中，平均尺寸可以是约
120nm。

[0845] 纳米粒子组合物可以相对均质的。多分散指数可以用于指示纳米粒子组合物的均质性，例如纳米粒子组合物的粒度分布。较小(例如小于0.3)多分散指数一般指示较窄的粒度分布。纳米粒子组合物的多分散指数可以是约0至约0.25，如0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.10、0.11、0.12、0.13、0.14、0.15、0.16、0.17、0.18、0.19、
0.20、0.21、0.22、0.23、0.24或0.25。在一些实施方案中，纳米粒子组合物的多分散指数可以是约0.10至约0.20。

[0846] 纳米粒子组合物的ζ电势可以用于指示该组合物的电动电势。例如，ζ电势可以描述纳米粒子组合物的表面电荷。具有相对较低电荷，即带正电或带负电的纳米粒子组合物一般是所希望的，因为带较高电荷的物种可能与体内的细胞、组织和其它元件发生不希望的相互作用。在一些实施方案中，纳米粒组合物的ζ电势可以是约-10mV至约+20mV、约-10mV至约+15mV、约-10mV至约+10mV、约-10mV至约+5mV、约-10mV至约0mV、约-10mV至约-5mV、约-5mV至约+20mV、约-5mV至约+15mV、约-5mV至约+10mV、约-5mV至约+5mV、约-5mV至约0mV、约
0mV至约+20mV、约0mV至约+15mV、约0mV至约+10mV、约0mV至约+5mV、约+5mV至约+20mV、约+
5mV至约+15mV或约+5mV至约+10mV。

[0847] 治疗剂和/或预防剂的包封效率描述了在制备后被包封在纳米粒子组合物中或以其它方式与纳米粒子组合物结合的治疗剂和/或预防剂的量相对于所提供的初始量的比率。较高的包封效率是理想的(例如接近100％)。包封效率可以例如通过比较在用一种或多种有机溶剂或洗涤剂分裂纳米粒子组合物前后含纳米粒子组合物的溶液中治疗剂和/或预防剂的量来测量。荧光可以用于测量溶液中治疗剂和/或预防剂(例如RNA)的量。对于本文所述的纳米粒子组合物，治疗剂和/或预防剂的包封效率可以是至少50％，例如50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、
99％或100％。在一些实施方案中，包封效率可以是至少80％。在某些实施方案中，包封效率可以是至少90％。

[0848] 纳米粒子组合物可以任选地包含一种或多种包衣。例如，纳米粒子组合物可以被配制成具有包衣的胶囊、膜片或片剂形式。包括本文所描述的组合物的胶囊、膜片或片剂可以具有任何有用尺寸、拉伸强度、硬度或密度。

[0849] 药物组合物

[0850] 纳米粒子组合物可以被配制作为药物组合物整体或部分。药物组合物可以包括一种或多种纳米粒子组合物。例如，药物组合物可以包括含一种或多种不同治疗剂和/或预防剂的一种或多种纳米粒子组合物。药物组合物还可以包括一种或多种药学上可接受的赋形剂或辅助成分，如本文所描述的那些。有关配制和制造药物组合物的总体指导方针可见于例如Remington’s The Science and Practice of Pharmacy,第21版,A.R.Gennaro；Lippincott,Williams&Wilkins,Baltimore,MD,2006。常规赋形剂和辅助成分可以用于任何药物组合物中，除非任何常规赋形剂或辅助成分可以与纳米粒子组合物的一种或多种组分不相容。如果赋形剂或辅助成分与纳米粒子组合物的一种组分的组合可能引起任何不希望的生物作用或其它有害作用，则其可能与该组分不相容。

[0851] 在一些实施方案中，一种或多种赋形剂或辅助成分可以占包括纳米粒子组合物的药物组合物的总质量或体积超过50％。例如，该一种或多种赋形剂或辅助成分可以占药物组合物50％、60％、70％、80％、90％或更高百分比。在一些实施方案中，药学上可接受的赋形剂是至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％纯。在一些实施方案中，赋形剂被批准用于人类和兽医使用。在一些实施方案中，赋形剂获得美国食品与药物管理局(United States Food and Drug Administration)批准。在一些实施方案中，赋形剂是药物级的。在一些实施方案中，赋形剂满足美国药典(USP)、欧洲药典(EP)、英国药典和/或国际药典的标准。

[0852] 取决于所治疗受试者的特性、体格和/或状况且另外取决于打算施用所述组合物的途径，所述一种或多种纳米粒子组合物、所述一种或多种药学上可接受的赋形剂和/或根据本公开的药物组合物的任何其它成分的相对量将变化。举例来说，药物组合物可以包含在0.1％与100％(wt/wt)之间的一种或多种纳米粒子组合物。

[0853] 在某些实施方案中，本公开的纳米粒子组合物和/或药物组合物被冷藏或冷冻储存和/或运输(例如在4℃或更低温度下，如在约-150℃与约0℃之间或在约-80℃与约-20℃之间(例如约-5℃、-10℃、-15℃、-20℃、-25℃、-30℃、-40℃、-50℃、-60℃、-70℃、-80℃、-90℃、-130℃或-150℃)的温度下储存)。例如，包含式(I)、(IA)、(IB)、(II)和(IIa)-(IIg)中任一个的化合物的药物组合物是在例如约-20℃、-30℃、-40℃、-50℃、-60℃、-70℃或-
80℃下冷藏储存和/或运输的溶液。在某些实施方案中，本公开还涉及一种增加包含式(I)、(IA)、(IB)、(II)和(IIa)-(IIg)中任一个的化合物的纳米粒子组合物和/或药物组合物的稳定性的方法，该方法是通过在在4℃或更低温度下，如在约-150℃与约0℃之间或在约-80℃与约-20℃之间，例如约-5℃、-10℃、-15℃、-20℃、-25℃、-30℃、-40℃、-50℃、-60℃、-
70℃、-80℃、-90℃、-130℃或-150℃温度下储存所述纳米粒子组合物和/或药物组合物实现。例如，本文所公开的纳米粒子组合物和/或药物组合物例如在4℃或更低温度(例如在约
4℃与-20℃之间)下稳定保持约至少1周、至少2周、至少3周、至少4周、至少5周、至少6周、至少1个月、至少2个月、至少4个月、至少6个月、至少8个月、至少10个月、至少12个月、至少14个月、至少16个月、至少18个月、至少20个月、至少22个月或至少24个月。在一个实施方案中，配制物在约4℃下稳定保持至少4周。在某些实施方案中，本公开的药物组合物包含本文所公开的纳米粒子组合物和药学上可接受的载体，该载体选自以下一种或多种：Tris、乙酸盐(例如乙酸钠)、柠檬酸盐(例如柠檬酸钠)、生理盐水、PBS和蔗糖。在某些实施方案中，本公开的药物组合物的pH值在约7与8之间(例如6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、
7.7、7.8、7.9或8.0，或在7.5与8之间或在7与7.8之间)。例如，本公开的药物组合物包含本文所公开的纳米粒子组合物、Tris、生理盐水和蔗糖，并且其pH值是约7.5-8，适于在例如约-20℃下储存和/或运输。例如，本公开的药物组合物包含本文所公开的纳米粒子组合物和PBS，并且其pH值是约7-7.8，适于在例如约4℃或更低温度下储存和/或运输。在本公开的上下文中，“稳定性”、“稳定化”和“稳定”是指本文所公开的纳米粒子组合物和/或药物组合物对在给定制造、制备、运输、储存和/或使用条件下，例如当施加应力如剪切力、冷冻/解冻应力等时的化学或物理变化(例如降解、粒度变化、聚集、包封变化等)的抗性。

[0854] 纳米粒子组合物和/或包括一种或多种纳米粒子组合物的药物组合物可以被施用给任何患者或受试者，包含可以得益于通过将治疗剂和/或预防剂递送至一个或多个特定细胞、组织、器官或系统或其组合所提供的治疗作用的患者或受试者。尽管本文所提供的关于纳米粒子组合物和包括纳米粒子组合物的药物组合物的描述主要针对适于施用给人类的组合物，但熟练技术人员应了解，这些组合物一般适于施用给任何其他哺乳动物。应充分了解，可以对适于施用给人类的组合物进行改良以便使这些组合物适于施用给各种动物，并且普通熟练兽医药理学家只需要常规实验(如果存在的话)就可以设计和/或执行此类改良。预期可施用这些组合物的受试者包括但不限于人类、其他灵长类动物和其他哺乳动物，包括在商业相关的哺乳动物，如牛、猪、马、绵羊、猫、狗、小鼠和/或大鼠。

[0855] 包括一种或多种纳米粒子组合物的药物组合物可以通过已知或药理学领域以后将开发的任何方法制备。一般来说，这些制备方法包括使活性成分与赋形剂和/或一种或多种其它辅助成分结合，接着在需要和/或必要时，将产物分成、成形成和/或包装成所希望的单一剂量单元或多剂量单元。

[0856] 根据本公开的药物组合物可以整体、以单一单位剂量和/或以多个单一单位剂量形式制备、包装和/或销售。如本文所使用，“单位剂量”是包含预定量活性成分(例如纳米粒子组合物)的药物组合物的个别量。活性成分的量一般等于将施用给受试者的活性成分的剂量及/或此类剂量的便利部分，如此类剂量的一半或三分之一。

[0857] 药物组合物可以被制备成适于多种施用途径和方法的多种形式。例如，药物组合物可以被制备成液体剂型(例如乳液、微乳液、纳米乳液、溶液、悬浮液、糖浆和酏剂)、可注射形式、固体剂型(例如胶囊、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂)、供表面和/或透皮施用的剂型(例如油膏、糊剂、乳膏、洗液、凝胶、散剂、溶液、喷雾剂、吸入剂和贴片)、悬浮液、散剂和其它形式。

[0858] 供口服和肠胃外施用的液体剂型包括但不限于药学上可接受的乳液、微乳液、纳米乳液、溶液、悬浮液、糖浆和/或酏剂。除活性成分外，液体剂型还可以包含本领域中常用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂；增溶剂和乳化剂，如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苯甲酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油(尤其棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和脱水山梨糖醇脂肪酸酯，及其混合物。除惰性稀释剂外，口服组合物还可以包括其它治疗剂和/或预防剂、其它试剂如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、调味剂和/或芳香剂。在供肠胃外施用的某些实施方案中，将组合物与增溶剂如醇、油、改性油、二醇、聚山梨酸酯、环糊精、聚合物和/或其组合混合。

[0859] 可以根据已知技术，使用适合的分散剂、润湿剂和/或悬浮剂来配制可注射制剂，例如无菌可注射水性或油性悬浮液。无菌可注射制剂可以是于无毒肠胃外可接受的稀释剂和/或溶剂中的无菌可注射溶液、悬浮液和/或乳液，例如于1,3-丁二醇中的溶液。可以采用的可接受的媒剂和溶剂有水、林格氏溶液、U.S.P.和等渗氯化钠溶液。通常采用无菌不挥发性油作为溶剂或悬浮介质。出于此目的，可以采用任何温和的不挥发性油，包括合成单酸甘油酯或二酸甘油酯。脂肪酸如油酸可以被用于制备可注射制剂。

[0860] 可注射配制物可以例如通过滤过细菌截留过滤器，和/或通过并入呈无菌固体组合物形式的灭菌剂来进行灭菌，所述无菌固体组合物在使用前能够溶解或分散于无菌水或其它无菌可注射介质中。

[0861] 为延长活性成分的作用，通常需要减缓由皮下或肌肉内注射引起的活性成分吸收。这可以利用具有弱水溶性的结晶或无定形材料的液体悬浮液实现。药物的吸收速率则取决于其溶解速率，而其溶解速率又可取决于晶体尺寸和结晶形式。替代地，通过将肠胃外施用的药物形式溶解或悬浮于油媒剂中来实现该药物的延缓吸收。通过在生物可降解聚合物如聚丙交酯-聚乙交酯中形成药物的微包封基质来制得可注射储槽形式。取决于药物与聚合物的比率和所用特定聚合物的性质，可以控制药物的释放速率。其它生物可降解聚合物的实例包括聚(原酸酯)和聚(酐)。也可以通过将所述药物包入与身体组织可相容的脂质体或微乳液中来制备储槽式可注射配制物。

[0862] 供直肠或阴道施用的组合物典型地是栓剂，这些栓剂可以通过将组合物与适合非刺激性赋形剂如可可脂、聚乙二醇或栓剂蜡混合来制备，所述栓剂蜡在周围温度下是固体但在体温下是液体，并因此在直肠或阴道腔内熔融并释放活性成分。

[0863] 供口服的固体剂型包括胶囊、片剂、丸剂、膜片、散剂和颗粒剂。在这些固体剂型中，将活性成分与至少一种惰性、药学上可接受的赋形剂如柠檬酸钠或磷酸氢二钙，和/或以下各物混合：填充剂或增量剂(例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇及硅酸)、粘合剂(例如羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖及阿拉伯胶)、保湿剂(例如甘油)、崩解剂(例如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐及碳酸钠)、溶解延迟剂(例如石蜡)、吸收加速剂(例如季铵化合物)、润湿剂(例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯)、吸附剂(例如高岭土和膨润土、硅酸盐)和润滑剂(例如硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠)，以及其混合物。在胶囊、锭剂和丸剂的情况下，这些剂型还可以包含缓冲剂。

[0864] 可以使用如乳糖或奶糖以及高分子量聚乙二醇等作为赋形剂，将类似类型的固体组合物用作软和硬填充明胶胶囊中的填充物。固体剂型片剂、糖衣丸、胶囊、丸剂及颗粒剂可以用包衣和外壳制备，如肠溶包衣和本领域中众所周知的其它包衣。这些剂型可以任选地含有遮光剂并且还可以具有使其只在或优先在肠道某一部分中任选地以延缓的方式释放活性成分的组合物。可以使用的包埋组合物的实例包括聚合物质和蜡。可以使用如乳糖或奶糖以及高分子量聚乙二醇等作为赋形剂，将类似类型的固体组合物用作软和硬填充明胶胶囊中的填充物。

[0865] 供表面或透皮施用组合物的剂型包括油膏、糊剂、乳膏、洗液、凝胶、散剂、溶液、喷雾剂、吸入剂和/或贴片。一般来说，活性成分在无菌条件下与药学上可接受的赋形剂和/或可能需要的任何所需防腐剂或缓冲剂混合。此外，本公开涵盖使用透皮贴片，这些贴片通常具有对身体提供化合物的受控传递的附加优势。这些剂型可以例如通过将化合物溶解或分散于适当介质中来制备。替代地或另外地，可以通过提供速率控制膜，和/或通过将化合物分散于聚合物基质和/或凝胶中来控制速率。

[0866] 适用于递送本文所描述的皮内药物组合物的装置包括短针装置，如美国专利4,886,499、5,190,521、5,328,483、5,527,288、4,270,537、5,015,235、5,141,496和5,417,
662中所描述的那些。皮内组合物可以通过限制针刺入皮肤的有效穿透深度的装置，如PCT公布WO 99/34850中所描述的装置和其功能等效物施用。喷射注射装置是适合的，这些装置通过液体喷射注射器和/或通过刺入角质层并喷射达到真皮的针将液体组合物递送至真皮。喷射注射装置描述于例如美国专利5,480,381、5,599,302、5,334,144、5,993,412、5,
649,912、5,569,189、5,704,911、5,383,851、5,893,397、5,466,220、5,339,163、5,312,
335、5,503,627、5,064,413、5,520,639、4,596,556、4,790,824、4,941,880、4,940,460；以及PCT公布WO 97/37705和WO 97/13537中。冲击式粉末/粒子递送装置也是适合的，这些装置使用压缩气体加速呈粉末形式的疫苗穿过皮肤外层进入真皮。替代地或另外地，可以在皮内施用的经典曼托法中使用常规注射器。

[0867] 适于表面施用的配制物包括但不限于液体和/或半液体制剂如擦剂、洗液、水包油和/或油包水乳液如乳膏、油膏和/或糊剂，和/或溶液和/或悬浮液。可表面施用的配制物可以例如包含约1％至约10％(wt/wt)活性成分，不过活性成分的浓度可以高达该活性成分于溶剂中的溶解度限值。供表面施用的配制物还可以包含一种或多种本文所描述的其它成分。

[0868] 药物组合物可以呈适于通过口腔实现肺施用的配制物形式制备、包装和/或销售。此类配制物可以包含干燥粒子，这些粒子包含活性成分。这些组合物便利地呈干燥粉末形式以使用包含干粉储槽的装置施用，推进剂流可以引导该装置施配粉末；和/或使用自推进溶剂/粉末施配容器，如在密封容器中包含活性成分溶解和/或悬浮于低沸点推进剂中的装置施用。干粉组合物可以包括固体细粉状稀释剂如糖，并且便利地以单位剂型提供。

[0869] 低沸点推进剂一般包括在大气压下沸点低于65℉的液体推进剂。一般来说，推进剂可以构成50％至99.9％(wt/wt)的组合物，且活性成分可以构成0.1％至20％(wt/wt)的组合物。推进剂还可以包含其它成分如液体非离子性和/或固体阴离子性表面活性剂和/或固体稀释剂(其粒度与包含活性成分的粒子大致相同)。

[0870] 被配制成肺部递送的药物组合物可以提供呈溶液和/或悬浮液液滴形式的活性成分。这些配制物可以呈含活性成分的任选无菌的水性和/或稀醇溶液和/或悬浮液形式制备、包装和/或销售，并且可以便利地使用任何喷雾和/或雾化装置施用。这些配制物还可以包含一种或多种其它成分，包括但不限于调味剂如糖精钠、挥发性油、缓冲剂、表面活性剂和/或防腐剂如羟基苯甲酸甲酯。由这一施用途径提供的液滴的平均直径可以在约1nm至约200nm范围内。

[0871] 本文描述为可用于肺部递送的配制物可用于鼻内递送药物组合物。适于鼻内施用的另一配制物是包含活性成分且平均粒子是约0.2μm至500μm的粗粉。此类配制物是以鼻吸方式，即通过经鼻孔从靠近鼻的粉末容器快速吸入来施用。

[0872] 适于鼻施用的配制物可以例如包含少至约0.1％(wt/wt)且高达100％(wt/wt)的活性成分，并且可以包含一种或多种本文所描述的其它成分。药物组合物可以呈适于经颊施用的配制物形式制备、包装和/或销售。这些配制物可以例如呈使用常规方法制备的片剂和/或口含片的形式，并且可以含例如0.1％至20％(wt/wt)的活性成分，其余部分包含口服可溶解和/或可降解的组合物和任选地一种或多种本文所描述的其它成分。替代地，适于经颊施用的配制物可以包括含活性成分的粉末状和/或烟雾状和/或雾状溶液和/或悬浮液。此类粉末状、烟雾状和/或烟雾状配制物当分散时可以具有在约0.1nm至约200nm范围内的平均粒度和/或液滴尺寸，并且还可以包含一种或多种本文所描述的任何其它成分。

[0873] 药物组合物可以呈适于眼部施用的配制物形式制备、包装和/或销售。这些配制物可以例如呈滴眼液形式，其包括例如活性成分于水性或油性液体赋形剂中的0.1/1.0％(wt/wt)溶液和/或悬浮液。这些滴液还可以包含缓冲剂、盐和/或一种或多种本文所描述的任何其它成分。适用的其它可经眼施用的配制物包括含呈微晶形式和/或呈脂质体制剂形式的活性成分的那些。滴耳液和/或滴眼液被涵盖在本公开的范围内。

[0874] mRNA疗法

[0875] 以mRNA作为药物形态有可能递送跨膜和细胞内蛋白质，即标准生物试剂因其无法跨过细胞膜而无法接近的目标。(参见Sahin ,U.,KarikóK.,TüreciNat.Rev.Drug.Discov.2014,13,759-780，其内容以全文引用的方式并入本文中)。使mRNA类疗法成为现实的一个主要难题是最佳递送媒剂的鉴别。由于mRNA具有较大尺寸、化学不稳定性和潜在的免疫原性，故mRNA需要一种递送媒剂，该媒剂能够防止核酸内切酶和核酸外切酶影响，以及保护货物不受免疫哨兵攻击。就这一点来说，脂质纳米粒子(LNP)已经被鉴别为主要选择。(参见Hajj,K.A.,Whitehead,K.A.Nat.Rev.Mater.2017,2,1-17，其内容以全文引用的方式并入本文中)。这一方法在近期通过展示安全且有效地递送配制于LNP中的mRNA类疫苗而得到证实。(参见Bahl,K.等人,Mol.Ther.2017,25,1316-1327，其内容以全文引用的方式并入本文中)。

[0876] 有关脂质纳米粒子递送系统的关键性能标准是使细胞摄取最大并能够使mRNA从内体高效地释放。同时，LNP必须提供稳定药物产品并且能够以治疗相关水平安全地给予。LNP是多组分系统，这些系统典型地由氨基脂质、磷脂、胆固醇和PEG-脂质组成。实现高效递送核酸货物和粒子稳定性特性需要每种组分。被认为能驱动细胞摄取、内体逃逸和耐受性的关键组分是氨基脂质。胆固醇和PEG-脂质促进药物产品在体内和在货架上保持稳定，而磷脂提供与LNP的进一步融合，因此有助于驱动内体逃逸并实现细胞溶质中核酸的生物可用性。

[0877] 在过去数十年里，已经开发出若干氨基脂质系列进行寡聚核苷酸递送。(参见Stanton M.G.,Murphy-Benenato,K.E.RNA Therapeutics.Topics in Medicinal
Chemistry,2017,第27卷,A.Garner编,(Springer,Cham)第237-253页，其内容以全文引用的方式并入本文中)。该文献突出显示氨基脂质的结构与由此引起的LNP递送效率和耐受性之间的直接关联。氨基脂质MC3(DLin-MC3-DMA)是临床上最先进的寡聚核苷酸递送系统，因为在MC3类LNP中配制的siRNA已经进展至关于转甲状腺素蛋白介导的淀粉样变性治疗的第III期。(参见Coelho,T.等人,N.Engl.J.Med.2013,369,819-829.；Butler,J.S.等人,
Amyloid 2016,23,109-118，其各自的内容以全文引用的方式并入本文中)。近来，有文献报导已经展示MC3类LNP递送mRNA的有效性。(参见Nanbhan,J.F.等人,Sci.Rep.2016,6,
20019，其内容以全文引用的方式并入本文中)。此类LNP当静脉内递送时迅速地得到载脂蛋白E(ApoE)调理，使其能够被低密度脂蛋白受体(LDLr)细胞摄取。(参见Akinc,A.等人,Mol.Ther.2010,18,1357-1364，其内容以全文引用的方式并入本文中。)然而，仍存在MC3的较长组织半衰期可能引起不良副作用，从而阻碍其用于长期疗法的问题。(参见Maier M.A.等人,Mol.Ther.2013,21,1570-1578，其内容以全文引用的方式并入本文中)。此外，众多的文献证据表明，长期给予脂质纳米粒子会产生若干毒副作用，包括补体活化相关类过敏反应(CARPA)和肝损伤(参见Szebeni J.Mol.Immunol.2014,61,163-173，其内容以全文引用的方式并入本文中)。因此，为利用mRNA疗法对于人类潜在作用，需要递送效率增加且代谢和毒性谱允许长期给予人类的一类LNP。

[0878] 治疗众多疾病的能力需要在不同剂量水平下长期安全给药的灵活性。通过系统性优化氨基脂质结构，将本公开化合物鉴别为兼顾化学稳定性、由内体逃逸改良引起的递送效率提高、快速体内代谢和净毒性谱的化合物(实施例26)。这些特征的组合将提供可以长期给药而不会活化免疫系统的药物候选物。初始啮齿动物筛选允许鉴别出具有良好递送效率和药物动力学的主导脂质。在非人类灵长类动物中进一步剖析在单次和重复给药后主导LNP的递送效率。最后，在一个月的重复剂量毒性研究中，在大鼠和非人类灵长类动物中评价优化的LNP。不希望受理论束缚，本公开的新型可离子化脂质允许在急慢性疾病中安全且有效地使用mRNA类疗法。

[0879] 在细胞中产生多肽的方法

[0880] 本公开提供了在哺乳动物细胞中产生所关注多肽的方法。产生多肽的方法涉及使细胞与包括编码所关注多肽的mRNA的纳米粒子组合物接触。在细胞与纳米粒子组合物接触后，mRNA可以被吸收至细胞中并翻译产生所关注多肽。

[0881] 一般来说，使哺乳动物细胞与包括编码所关注多肽的mRNA的纳米粒子组合物接触的步骤可以在体外、离体、培养物中或在体外执行。与细胞接触的纳米粒子组合物的量，和/或其中mRNA的量可以取决于所接触的细胞或组织的类型、施用方式、纳米粒子组合物和其中mRNA的物理化学特征(例如尺寸、电荷和化学组成)以及其它因素。一般来说，有效量的纳米粒子组合物将允许在细胞中高效地产生多肽。有关效率的度量可以包括多肽翻译(由多肽表达量指示)、mRNA降解水平和免疫响应指标。

[0882] 使包括mRNA的纳米粒子组合物与细胞接触的步骤可能涉及或引起转染。包括在纳米粒子组合物的脂质组分中的磷脂可以例如通过与细胞或细胞内膜相互作用和/或融合来促进转染和/或增加转染效率。转染可以允许mRNA在细胞内翻译。

[0883] 在一些实施方案中，本文所描述的纳米粒子组合物可以用于治疗应用。例如，纳米粒子组合物中包括的mRNA可以编码治疗性多肽(例如在可翻译区中)并在接触和/或进入(转染至)细胞后产生治疗性多肽。在其它实施方案中，纳米粒子组合物中包括的mRNA可以编码能改善或增加受试者免疫性的多肽。例如，mRNA可以编码粒细胞集落刺激因子或曲妥珠单抗(trastuzumab)。

[0884] 在某些实施方案中，纳米粒子组合物中包括的mRNA可以编码重组多肽，该重组多肽可以置换大体上不存在于与纳米粒子组合物接触的细胞中的一种或多种多肽。该一种或多种大体上不存在的多肽可能因编码基因或其调控路径的基因突变而缺乏。替代地，由mRNA翻译产生的重组多肽可以拮抗存在于细胞中、在细胞表面上或由细胞分泌的内源性蛋白质的活性。可能需要拮抗性重组多肽抵抗由内源性蛋白质的活性所引起的有害作用，如由突变引起的活性或定位改变。又替代地，由mRNA翻译产生的重组多肽可以间接地或直接地拮抗存在于细胞中、在细胞表面上或由细胞分泌的生物部分的活性。受拮抗的生物部分可以包括但不限于脂质(例如胆固醇)、脂蛋白(例如低密度脂蛋白)、核酸、碳水化合物和小分子毒素。由mRNA翻译产生的重组多肽可以被工程改造成定位于细胞内，如在特定隔室如核内，或可以被工程改造成由细胞分泌或转位至细胞质膜中。

[0885] 在一些实施方案中，使细胞与包括mRNA的纳米粒子组合物接触可以降低细胞对外源性核酸的先天性免疫响应。细胞可以与包括第一量的含可翻译区的第一外源性mRNA的第一纳米粒子组合物接触并且可以测定该细胞对该第一外源性mRNA的先天性免疫响应的水平。随后，所述细胞可以与包括第二量的第一外源性mRNA的第二组合物接触，该第二量是低于第一量的第一外源性mRNA。替代地，第二组合物可以包括第一量的第二外源性mRNA，该第二外源性mRNA不同于第一外源性mRNA。使细胞与第一和第二组合物接触的步骤可以重复一次或多次。另外，还可以任选地测定在细胞中产生(例如翻译)多肽的效率，并且该细胞可以反复地与第一和/或第二组合物的再接触，直至实现目标蛋白质产生效率。

[0886] 将治疗剂递送至细胞和器官的方法

[0887] 本公开提供了将治疗剂和/或预防剂递送至哺乳动物细胞或器官的方法。将治疗剂和/或预防剂递送至细胞涉及将包括该治疗剂和/或预防剂的纳米粒子组合物施用给受试者，其中该组合物的施用涉及使该细胞与该组合物接触。例如，蛋白质、细胞毒性剂、放射性离子、化学治疗剂或核酸(如RNA，例如mRNA)可以被递送至细胞或器官。在治疗剂和/或预防剂是mRNA的情况下，在细胞与纳米粒子组合物接触后，可翻译的mRNA可以在细胞中翻译产生所关注多肽。不过，大体上不能翻译的mRNA也可以递送至细胞。大体上不能翻译的mRNA可以用作疫苗和/或可以阻隔细胞的翻译组分以减少其它物种在细胞中的表达。

[0888] 在一些实施方案中，纳米粒子组合物可以靶向特定类型或类别的细胞(例如特定器官或其系统的细胞)。例如，包括所关注治疗剂和/或预防剂的纳米粒子组合物可以特异性递送至哺乳动物肝、肾、脾、股骨或肺。向特定类别细胞、器官或系统或其组合的特异性递送表明，例如在将纳米粒子组合物施用给哺乳动物后，相对于其它目标，有较高比例的包括治疗剂和/或预防剂的纳米粒子组合物被递送至所关注目的地(例如组织)。在一些实施方案中，特异性递送可以使每1g目标目的地的组织(例如所关注组织，如肝)的治疗剂和/或预防剂的量相较于另一目的地(例如脾)有超过2倍、5倍、10倍、15倍或20倍增加。在一些实施方案中，所关注组织选自由以下组成的组：肝、肾、肺、脾、股骨、眼组织(例如通过眼内、视网膜下或玻璃体内注射)、血管中的血管内皮(例如冠状动脉内或股动脉内)或肾，以及肿瘤组织(例如通过肿瘤内注射)。

[0889] 作为靶向或特异性递送的另一个实例，可以在纳米粒子组合物中包括在细胞表面上编码蛋白质结合搭配物(例如抗体或其功能性片段、骨架蛋白质或肽)或受体的mRNA。mRNA可以另外或替代地用于引导脂质、碳水化合物或其它生物部分的合成和细胞外定位。
替代地，纳米粒子组合物中的其它治疗剂和/或预防剂或成分(例如一种或多种脂质)可以基于其对特定受体(例如低密度脂蛋白受体)的亲和力选择，以使得纳米粒子组合物能更容易地与包括这些受体的目标细胞群相互作用。例如，配体可以包括但不限于特定结合对的成员、抗体、单克隆抗体、Fv片段、单链Fv(scFv)片段、Fab’片段、F(ab’)2片段、单结构域抗体、骆驼化抗体和其片段、人类化抗体和其片段，以及其多价形式；多价结合试剂，包括单特异性或双特异性抗体如二硫键稳定的Fv片段、串联scFv、双功能抗体、三功能抗体或四功能抗体；以及适体、受体和融合蛋白。

[0890] 在一些实施方案中，配体可以是表面结合抗体，该抗体可以允许调谐细胞靶向特异性。由于可以产生针对所希望靶向位点的所关注表位的高特异性抗体，故这一点尤其有用。在一个实施方案中，在细胞表面上表达多种抗体，并且每个抗体可以对所希望的目标具有不同特异性。这些方法可以增加靶向相互作用的亲合力和特异性。

[0891] 生物领域中的技术人员例如可以基于所希望的细胞定位或功能选择配体。例如，雌激素受体配体，如他莫昔芬(tamoxifen)可以使细胞靶向雌激素依赖性乳癌细胞，这些细胞在细胞表面上具有较多数量的雌激素受体。配体/受体相互作用的其它非限制性实例包括CCR1(例如用于治疗类风湿关节炎中发炎的关节组织或脑，和/或多发性硬化症)、CCR7、CCR8(例如靶向淋巴结组织)、CCR6、CCR9、CCR10(例如用于靶向肠组织)、CCR4、CCR10(例如用于靶向皮肤)、CXCR4(例如用于广泛移行增强)、HCELL(例如用于治疗炎症和炎症性病症、骨髓)、α4β7(例如用于靶向肠粘膜)以及VLA-4NCAM-1(例如靶向内皮)。一般来说，参与靶向(例如癌转移)的任何受体都可以被用于本文所描述的方法和组合物中。

[0892] 目标细胞可以包括但不限于肝细胞、上皮细胞、造血细胞、上皮细胞、内皮细胞、肺细胞、骨骼细胞、干细胞、间充质细胞、神经细胞、心脏细胞、脂肪细胞、血管平滑肌细胞、心肌细胞、骨骼肌细胞、β细胞、垂体细胞、滑膜衬里细胞、卵巢细胞、睾丸细胞、成纤维细胞、B细胞、T细胞、网织红细胞、白细胞、粒细胞和肿瘤细胞。

[0893] 在一些实施方案中，纳米粒子组合物可以靶向肝细胞。经显示，载脂蛋白如载脂蛋白E(apoE)与含中性或接近中性的脂质的纳米粒子组合物在体内结合，且已知其与在肝细胞表面上所发现的受体如低密度脂蛋白受体(LDLR)结合。因此，将含带中性或接近中性的电荷的脂质组分的纳米粒子组合物施用给受试者可以在受试者体内获取apoE并且随后可以将治疗剂和/或预防剂(例如RNA)以靶向方式递送至包括LDLR的肝细胞。

[0894] 治疗疾病和病症的方法

[0895] 纳米粒子组合物可以用于治疗疾病、病症或病况。确切地说，这些组合物可以用于治疗以遗失或异常蛋白质或多肽活性为特征的疾病、病症或病况。例如，包含编码遗失或异常多肽的mRNA的纳米粒子组合物可以被施用或递送至细胞。该mRNA随后翻译可以产生所述多肽，由此减少或消除由该多肽的不存在或异常活性引起的问题。由于翻译可以迅速地发生，故这些方法和组合物可以用于治疗急性疾病、病症或病况如败血症、中风和心肌梗塞。纳米粒子组合物中包括的治疗剂和/或预防剂还能够改变给定物种的转录速率，由此影响基因表达。

[0896] 可以被施用组合物的以功能失常或异常蛋白质或多肽活性为特征的疾病、病症和/或病况包括但不限于罕见病、感染性疾病(呈疫苗和治疗剂形式)、癌症和增生性疾病、遗传疾病(例如囊肿性纤维化)、自体免疫疾病、糖尿病、神经退化性疾病、心血管和肾血管疾病、以及代谢性疾病。有多种疾病、病症和/或病况可以通过蛋白质活性遗失(或大体上降低使得无法出现适当蛋白质功能)表征。这些蛋白质可能不存在，或者其可能基本上无功能。功能失常的蛋白质的具体实例是囊肿性纤维化跨膜传导调控蛋白(CFTR)基因的错义突变变体，这些突变变体产生CFTR蛋白质的功能失常的蛋白质变体，由此引起囊肿性纤维化。本公开提供了一种通过施用纳米粒子组合物来治疗受试者的此类疾病、病症和/或病况的方法，所述纳米粒子组合物包括RNA和脂质组分，该脂质组分包括根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的脂质、磷脂(任选是不饱和的)、PEG脂质和结构性脂质，其中RNA可以是编码拮抗或以其它方式克服受试者细胞中存在的异常蛋白质活性的多肽的mRNA。

[0897] 本公开提供的方法涉及施用含一种或多种治疗剂和/或预防剂的纳米粒子组合物和包含这些纳米粒子组合物的药物组合物。对于本公开的特征和实施方案，术语治疗剂和预防剂可以在本文中互换使用。治疗性组合物或成像、诊断或预防性组合物可以使用任何合理量和任何施用途径施用给受试者，所述合理量和施用途径可有效实现疾病、病症和/或病况的预防、治疗、诊断或成像和/或用于任何其它目的。施用至给定受试者的具体量可以取决于受试者的物种、年龄和一般状况；施用目的；具体组合物；施用模式等而变化。根据本公开的组合物可以被配制成单位剂型以便利剂量的施用和均一性。然而，应了解，本公开组合物的总每日用量将由主治医师在合理医学判断的范围内确定。用于任何特定患者的特定治疗有效、预防有效或其它适当剂量水平(例如用于成像)将取决于多种因素，包括所治疗病症(如果存在的话)的严重程度和属性；所用一种或多种治疗剂和/或预防剂；所用特定组合物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；所用特定药物组合物的施用时间、施用途径和排泄速率；治疗持续时间；与所用特定药物组合物组合使用或同时使用的药物；以及医学领域中众所周知的类似因素。

[0898] 含一种或多种治疗剂和/或预防剂的纳米粒子组合物可以通过任何途径施用。在一些实施方案中，包括本文所描述的一种或多种纳米粒子组合物的组合物，包括预防性、诊断或成像组合物是通过多种途径中的一个或多个施用，包括口服、静脉内、肌肉内、动脉内、髓内、鞘内、实质内、皮下、室内、透皮或皮内、间皮(interdermal)、直肠、阴道内、腹膜内、眼内、视网膜下、玻璃体内、表面(例如通过粉末油膏、乳膏、凝胶、洗液和/或滴液)、粘膜、鼻、颊、肠、玻璃体、肿瘤内、舌下、鼻内；通过气管内滴注、支气管滴注和/或吸入；呈经口喷雾和/或粉末、鼻喷雾和/或气雾剂形式、和/或通过门静脉导管施用。在一些实施方案中，组合物可以通过静脉内、肌肉内、皮内、动脉内、肿瘤内、皮下、眼内、视网膜下、玻璃体内、实质内或通过任何其它肠胃外施用途径或通过吸入施用。然而，考虑到药物递送科学中可能的进展，本公开涵盖通过任何适当途径递送或施用本文所描述的组合物。一般来说，最适当的施用途径将取决于多种因素，包括含一种或多种治疗剂和/或预防剂的纳米粒子组合物的性质(例如其在各种身体环境如血流和胃肠道中的稳定性)、患者的状况(例如无论患者是否能耐受特定施用途径)等。

[0899] 在某些实施方案中，施用的根据本公开的组合物的剂量水平可足以在给定剂量内递送约0.0001mg/kg至约10mg/kg、约0.001mg/kg至约10mg/kg、约0.005mg/kg至约10mg/kg、约0.01mg/kg至约10mg/kg、约0.05mg/kg至约10mg/kg、约0.1mg/kg至约10mg/kg、约1mg/kg至约10mg/kg、约2mg/kg至约10mg/kg、约5mg/kg至约10mg/kg、约0.0001mg/kg至约5mg/kg、约0.001mg/kg至约5mg/kg、约0.005mg/kg至约5mg/kg、约0.01mg/kg至约5mg/kg、约0.05mg/kg至约5mg/kg、约0.1mg/kg至约5mg/kg、约1mg/kg至约5mg/kg、约2mg/kg至约5mg/kg、约0.0001mg/kg至约2.5mg/kg、约0.001mg/kg至约2.5mg/kg、约0.005mg/kg至约2.5mg/kg、约
0.01mg/kg至约2.5mg/kg、约0.05mg/kg至约2.5mg/kg、约0.1mg/kg至约2.5mg/kg、约1mg/kg至约2.5mg/kg、约2mg/kg至约2.5mg/kg、约0.0001mg/kg至约1mg/kg、约0.001mg/kg至约
1mg/kg、约0.005mg/kg至约1mg/kg、约0.01mg/kg至约1mg/kg、约0.05mg/kg至约1mg/kg、约
0.1mg/kg至约1mg/kg、约0.0001mg/kg至约0.25mg/kg、约0.001mg/kg至约0.25mg/kg、约
0.005mg/kg至约0.25mg/kg、约0.01mg/kg至约0.25mg/kg、约0.05mg/kg至约0.25mg/kg，或约0.1mg/kg至约0.25mg/kg治疗剂和/或预防剂(例如mRNA)，其中1mg/kg(mpk)剂量提供每1公斤受试者体重1mg治疗剂和/或预防剂。在一些实施方案中，可以施用含约0.001mg/kg至约10mg/kg剂量治疗剂和/或预防剂(例如mRNA)的纳米粒子组合物。在其它实施方案中，可以施用约0.005mg/kg至约2.5mg/kg剂量的治疗剂和/或预防剂。在某些实施方案中，可以施用约0.1mg/kg至约1mg/kg剂量。在其它实施方案中，可以施用约0.05mg/kg至约0.25mg/kg剂量。剂量可以每天以相同或不同量施用一次或多次，以获得所希望的mRNA表达和/或治疗、诊断、预防或成像作用水平。所希望的剂量以例如一天三次、一天二次、一天一次、每隔一天一次、每三天一次、每周一次、每两周一次、每三周一次或每四周一次递送。在某些实施方案中，所希望的剂量可以使用多次施用(例如二次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次、十一次、十二次、十三次、十四次或更多次施用)递送。在一些实施方案中，可以例如在手术程序之前或之后或在急性疾病、病症或病况的情况下施用单次剂量。

[0900] 包括一种或多种治疗剂和/或预防剂的纳米粒子组合物可以与一种或多种其它治疗剂、预防剂、诊断剂或成像剂组合使用。“与……组合”不打算表明这些试剂必须在相同时间施用和/或被配制成一起递送，不过这些递送方法都在本公开的范围内。例如，包括一种或多种不同治疗剂和/或预防剂的一种或多种纳米粒子组合物可以组合施用。组合物可以在一种或多种其它所希望的治疗剂或医疗程序的同时、之前或之后施用。一般说来，每种试剂将以关于该试剂所确定的剂量和/或时程施用。在一些实施方案中，本公开涵盖递送组合物或其成像、诊断或预防组合物与改善其生物利用率、降低和/或改良其代谢、抑制其排泄和/或改善其在体内的分布的试剂的组合。

[0901] 另外，应理解，组合使用的治疗性、预防性、诊断性或成像活性剂可以用单一组合物一起施用或用不同组合物分开施用。一般说来，预期组合使用的试剂的用量将以不超过其独立使用的水平。在一些实施方案中，组合使用的水平可以低于独立使用的水平。

[0902] 用于组合方案中的疗法(治疗剂或程序)的特定组合应考虑所希望的治疗剂和/或程序的相容性以及希望获得的治疗作用。还应理解，所用疗法可以针对同一病症实现所希望的作用(例如可用于治疗癌症的组合物可以与化学治疗剂同时施用)，或这些疗法可以实现不同作用(例如控制任何不良作用，如输注相关反应)。

[0903] 纳米粒子组合物可以与增加该组合物的有效性和/或治疗窗的试剂组合使用。此类试剂可以是例如抗炎化合物、类固醇(例如皮质类固醇)、他汀类(statin)、雌二醇、BTK抑制剂、S1P1激动剂、糖皮质激素受体调节剂(GRM)或抗组胺。在一些实施方案中，纳米粒子组合物可以与地塞米松、甲氨蝶呤、对乙酰氨基酚、H1受体阻断剂或H2受体阻断剂组合使用。在一些实施方案中，治疗有需要受试者或将治疗剂和/或预防剂递送至受试者(例如哺乳动物)的方法可涉及在施用纳米粒子组合物之前，用一种或多种试剂预治疗该受试者。例如，可以用有用量(例如10mg、20mg、30mg、40mg、50mg、60mg、70mg、80mg、90mg、100mg或任何其它有用量)的地塞米松、甲氨蝶呤、对乙酰氨基酚、H1受体阻断剂或H2受体阻断剂预治疗受试者。预治疗可以在施用纳米粒子组合物之前24小时或更短时间(例如24小时、20小时、16小时、12小时、8小时、4小时、2小时、1小时、50分钟、40分钟、30分钟、20分钟或10分钟)进行并且可以按例如递增剂量进行一次、两次或更多次。

[0904] 本领域技术人员将认识到，或能够仅使用常规实验确定本文所描述的根据本公开的具体实施方案的许多等效内容。本公开的范围不意图局限于以上描述，而是如所附权利要求书中所陈述。

[0905] 除非作相反指示或自上下文另外显而易见，否则在权利要求书中，如“一个(种)”和“所述”等词可以表示一个(种)或超过一个(种)。除非作相反指示或自上下文另外显而易见，否则在一组一个或多个成员之间包括“或”的权利要求或描述视为满足该组成员中的一个、超过一个或全部存在于、被用于或以其它方式涉及给定产物或方法。本公开包括该组中仅一个成员存在于、被用于或以其它方式涉及给定产物或方法的实施方案。本公开包括超过一个或所有组成员存在于、被用于或以其它方式涉及给定产物或方法的实施方案。除非另外说明，否则如本文所使用，表述“A、B或C中的一个或多个”、“一个或多个A、B或C”、“A、B和C中的一个或多个”、“一个或多个A、B和C”、“选自A、B和C”、“选自由A、B和C组成的组”等可互换使用并且全部都是指从由A、B和/或C组成的组选出，即一个或多个A、一个或多个B、一个或多个C或其任何组合。

[0906] 还应注意，术语“包含”意图是开放性的且允许但不需要包括其它要素或步骤。当在本文中使用术语“包含”时，由此也涵盖并公开术语“主要由……组成”和“由……组成”。在说明书通篇，当将组合物描述为具有、包括或包含特定组分时，预期组合物也主要由或由所述组分组成。类似地，当方法或工艺被描述为具有、包括或包含特定工艺步骤时，这些工艺也主要由或由所述工艺步骤组成。另外，应了解，步骤的次序或执行某些操作的次序是不重要的，只要本发明保持可操作即可。此外，两个或两个以上步骤或操作可以同时进行。

[0907] 在给定范围的情况下，终点包括在内。此外，应了解，除非另外指示或自上下文和本领域普通技术人员的理解另外显而易见，以范围表示的值可以采用在本公开不同实施方案中所陈述的范围内的任何特定值或子范围，除非上下文另外明确规定，否则精确至该范围下限单位的十分之一。

[0908] 本公开的合成工艺可以容许多个官能团，因此可以使用各种被取代的起始物质。这些工艺大体上提供了在整个工艺结束或快结束时所希望的最终化合物，不过在某些情况下可能需要将该化合物进一步转化成其药学上可接受的盐。

[0909] 本公开的化合物可以使用可商购的起始物质、文献中已知的化合物，或由易于制备的中间物，通过采用标准合成方法和本领域技术人员已知或技术人员根据本文的传授内容显而易见的程序，以多种方式制备。用于制备有机分子的标准合成方法和程序以及官能团转化和操作可以从相关科学文献或从本领域的标准教科书获得。尽管不局限于任一或若干来源，但以引用的方式并入本文中的经典教科书，如Smith,M.B.,March,J.,March’s Advanced Organic Chemistry:Reactions,Mechanisms,and Structure,第5版,John Wiley&Sons:New York,2001；Greene,T.W.,Wuts,P.G.M.,Protective Groups in Organic Synthesis,第3版,John Wiley&Sons:New York,1999；R.Larock,Comprehensive Organic Transformations,VCH Publishers(1989)；L.Fieser和M.Fieser,Fieser and Fieser’s Reagents for Organic Synthesis,John Wiley and Sons(1994)；以及L.Paquette编辑,Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis,John Wiley and Sons(1995)，是有用的并且是本领域技术人员已知的公认的有机合成参考教科书。以下有关合成方法的描述被设计用于说明而非限制用于制备本公开化合物的通用程序。

[0910] 具有本文所描述各式的本公开化合物可以根据以下方案1、2和3中所说明的程序，由可商购的起始物质或可以使用文献程序制备的起始物质制备。各方案中的变量(例如R1、R2和R3等如本文所定义)。本领域的普通技术人员应注意到，在本文所描述的反应工序和合成方案期间，某些步骤的次序可以变化，如保护基的引入和移除。

[0911] 本领域的普通技术人员将认识到，可能需要使用保护基保护某些基团免受反应条件影响。保护基还可以用于区别分子中的类似官能团。保护基的清单以及引入和移除这些基团的方法可见于Greene,T.W.,Wuts,P.G.M.,Protective Groups in Organic Synthesis,第3版,John Wiley&Sons:New York,1999。

[0912] 优选的保护基包括但不限于：

[0913] 对于羟基部分：TBS、苯甲基、THP、Ac；

[0914] 对于羧酸：苯甲酯、甲酯、乙酯、烯丙基酯；

[0915] 对于胺：Fmoc,Cbz,BOC,DMB,Ac,Bn,Tr,Ts、三氟乙酰基、邻苯二甲酰亚胺、亚苯甲基胺；

[0916] 对于二醇：Ac(×2)、TBS(×2)或当连在一起时是丙酮；

[0917] 对于硫醇：Ac；

[0918] 对于苯并咪唑：SEM、苯甲基、PMB、DMB；

[0919] 对于醛：二烷基缩醛，如二甲氧基乙缩醛或二乙基乙酰基。

[0920] 在本文所描述的反应方案中，可以制造出多种立体异构体。当未指示特定立体异构体时，这应理解为意思指可以由该反应制造的所有可能的立体异构体。本领域普通技术人员应认识到，所述反应可以被优化以优先得到一种异构体，或可以设计出新的方案以制造单一异构体。如果制造出混合物，则可以使用如制备型薄层色谱法、制备型HPLC、制备型手性HPLC或制备型SFC等技术分离异构体。

[0921] 方案1

[0922]

[0923] 如以上方案1中所说明，8-溴辛酸与醇a1(例如十七烷-9-醇)反应以得到酯b1(例如8-溴辛酸十七烷-9-基酯)。步骤1可以在有机溶剂(例如二氯甲烷)中，在例如N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳化二亚胺二盐酸盐、N,N-二异丙基乙胺和DMAP存在下进行。步骤1可以在室温下进行18小时。接下来，酯b1与2-氨基乙-1-醇反应以得到胺c1(例如8-((2-羟乙基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯)。步骤2可以在乙醇中，在例如约60℃温度下进行。接着，胺c1与溴烷基R1-Br(例如1-溴十四烷)反应以得到化合物d1(例如8-((2-羟基乙基)(十四烷基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯)。步骤3可以在乙醇中，在N,N-二异丙基乙胺存在下进行。

[0924] 方案2

[0925]

[0926]

[0927] 如以上方案2中所述，酸a2(t是在1与7之间的整数；例如8-溴辛酸)与醇b2(例如壬-1-醇)反应以得到酯c2(例如8-溴辛酸壬酯)。步骤1可以在有机溶剂(例如二氯甲烷)中，在例如N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳化二亚胺二盐酸盐、N,N-二异丙基乙胺和DMAP存在下进行。醇e2(例如十七烷-9-醇)可以通过使醛d2(例如壬醛)与格氏试剂R3-MgX(例如n-C8H17MgBr)经步骤2反应来获得。接下来，8-溴辛酸与醇e2(例如十七烷-9-醇)反应以得到酯f2(例如8-溴辛酸十七碳-9-基酯)。步骤3可以在有机溶剂(例如二氯甲烷)中，在例如N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳化二亚胺二盐酸盐、N,N-二异丙基乙胺和DMAP存在下进行。接下来，酯f2与2-氨基乙-1-醇反应以得到胺g2(例如8-((2-羟乙基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯)。步骤4可以在乙醇中，在i-Pr2EtN存在下进行。接着，胺g2与酯c2(例如8-溴辛酸壬酯)反应以得到化合物h2(例如8-((2-羟乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯)。步骤5可以在例如高温(如在约70-90℃，例如约80℃)下，在有机溶剂(例如CPME与MeCN的混合物)中，在碱(如无机碱(例如K2CO3)或非亲核性有机碱(例如i-Pr2EtN))和催化剂(例如碘如KI或NaI)存在下进行。

[0928] 方案3

[0929]

[0930] 如以上方案3中所述，卤代烷醇(t是在1与12之间的整数，例如6-溴己-1-醇)与起始物质a3(s是在1与6之间的整数，例如4-(己氧基)-4-氧代丁酸)反应以得到卤代二酯b3(例如琥珀酸6-溴己酯己酯)。化合物a3可以通过醇(例如己-1-醇)与酸酐(例如琥珀酸酐、二氢-2H-吡喃-2,6(3H)-二酮、3-(叔丁氧基)-3-氧代丙酸、4-(叔丁氧基)-3-甲基-4-氧代丁酸或4-(叔丁氧基)-2-甲基-4-氧代丁酸)反应得到。步骤1可以在有机溶剂(例如二氯甲烷)中，在例如N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳化二亚胺二盐酸盐、N,N-二异丙基乙胺和DMAP存在下进行。接下来，卤代二酯b3与胺c3(u是在5与13之间的整数，v是在1与5之间的整数，例如8-((2-羟基乙基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯)反应以得到产物d3。步骤2可以在高温(例如约90℃)下，在有机溶剂(例如CPME与MeCN的混合物)中，在碱(如无机碱(例如K2CO3))和催化剂(例如碘化物如KI)以及醚溶剂(例如环戊基甲基醚)存在下进行。

[0931] 本领域的普通技术人员将认识到，在以上方案中，某些步骤的次序可以互换。

[0932] 在某些方面，本公开还包括合成式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)中任一个的化合物的方法以及用于合成该化合物的中间物。

[0933] 在一些实施方案中，合成式(I)化合物的方法包括使式(X2)的化合物：与R1-Br反应以得到式(I)化合物，其中各变量如本文所定义。例
如，m是5、6、7、8或9，优选地是5、7或9。例如，R5、R6和R7各自是H。例如，M是-C(O)O-或-OC(O)-。例如，R4是未被取代的C1-3烷基，或-(CH2)nQ，其中n是2、3或4并且Q是OH、-NHC(S)N(R)2、-NHC(O)N(R)2、-N(R)C(O)R或-N(R)S(O)2R。例如，式(X2)化合物与R1-Br的反应是在碱(如无机碱(例如K2CO3)或非亲核性有机碱(例如i-Pr2EtN))存在下进行。例如，该反应是在无机碱(例如K2CO3)和催化剂(例如碘化物如KI或NaI)存在下进行。例如，反应是在高温下，例如在约50-100℃、70-90℃或约80℃下进行。

[0934] 所述方法还可以包括使式(X1)的化合物：与R4NH2反应以得到式(X2)化合物，其中各变量如本文所定义。

[0935] 在一些实施方案中，中间物包括具有式(X1)和(X2)中的任一个的那些：其中各变量如本文所
定义。例如，中间物包括8-溴辛酸十七烷-9-基酯和8-((2-羟基乙基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯，以及其形态形式(例如结晶形式)。

[0936] 此外，还应了解，在现有技术范围内的本公开的任何特定实施方案可明确地排除在任何一个或多个权利要求外。由于这些实施方案被认为是本领域普通技术人已知的，故可将其排除在外，即使在本文中未明确陈述该排除。

[0937] 所有引用的来源，例如本文所引用的参考文献、公布、数据库、数据库条目和技术都以引用的方式并入本申请中，即使在引述中未明确陈述。在引用源与本申请的陈述出现矛盾的情况下，应以本申请的陈述为准。

[0938] 实施例

[0939] 实施例1：合成根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)或(IIg)的化合物

[0940] A.一般考虑

[0941] 除非另外指出，否则使用的所有溶剂和试剂都是商购得到并且以原样使用。1H NMR谱是在300K下使用Bruker Ultrashield 300MHz仪器在CDCl3中记录。化学位移是关于1H以相对于TMS(0.00)的百万分率(ppm)报导。硅胶色谱法是在ISCO CombiFlash Rf+Lumen仪器上，使用ISCO RediSep Rf Gold快速柱(粒度：20-40微米)执行。反相色谱法是在ISCO CombiFlash Rf+Lumen仪器上，使用RediSep Rf Gold C18高效柱执行的。所有最终化合物都通过用反相UPLC-MS(滞留时间、RT，以分钟计)，使用配备DAD和ELSD以及ZORBAX快速高分离度(Rapid Resolution High Definition，RRHD)SB-C18 LC柱(2.1mm，50mm，1.8μm)的Waters Acquity UPLC仪器，并以1.2mL/min在65至100％梯度的乙腈/含0.1％TFA的水经5分钟分析而测定为超过85％纯度。注射体积是5μL并且柱温度是80℃。检测是使用Waters SQD质谱仪(Milford,MA,USA)和蒸发光散射检测器，基于电喷雾电离(ESI)以正离子模式进行。

[0942] 以下描述的程序可用于合成化合物1-280。

[0943] 本文采用了以下缩写：

[0944] THF：四氢呋喃

[0945] MeCN：乙腈

[0946] LAH：氢化铝锂

[0947] DCM：二氯甲烷

[0948] DMAP： 4-二甲基氨基吡啶

[0949] LDA：二异丙基氨基锂

[0950] rt：室温

[0951] DME： 1,2-二甲氧基乙烷

[0952] n-BuLi：正丁基锂

[0953] CPME：环戊基甲基醚

[0954] i-Pr2EtN： N,N-二异丙基乙胺

[0955] B.化合物2：8-((2-羟基乙基)(十四烷基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[0956] 代表性程序1

[0957]

[0958] 8-溴辛酸十七烷-9-基酯(方法A)

[0959]

[0960] 向8-溴辛酸(1.04g，4.6mmol)和十七烷-9-醇(1.5g，5.8mmol)于二氯甲烷(20mL)中的溶液中添加N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳化二亚胺盐酸盐(1.1g，5.8mmol)、N,N-二异丙基乙基胺(3.3mL，18.7mmol)和DMAP(114mg，0.9mmol)。在室温下搅拌反应物18小时。将反应物用二氯甲烷稀释并用饱和碳酸氢钠洗涤。将有机层分离并用盐水洗涤，并经MgSO4干燥。过滤有机层并在真空中蒸发。将残余物通过硅胶色谱法(0-10％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到8-溴辛酸十七烷-9-基酯(875mg，1.9mmol，41％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm4.89(m,1H)；3.42(m,2H)；2.31(m,2H)；1.89(m,2H)；1.73-1.18(br.m,36H)；0.88(m,6H)。

[0961] 8-((2-羟基乙基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(方法B)

[0962]

[0963] 在62℃下，将8-溴辛酸十七烷-9-基酯(3.8g，8.2mmol)和2-氨基乙-1-醇(15mL，248mmol)于乙醇(3mL)中的溶液搅拌18小时。在真空中浓缩反应混合物并将残余物溶解于乙酸乙酯和水中。将有机层分离并用水、盐水洗涤，并经Na2SO4干燥。将混合物过滤并在真空中蒸发。将残余物通过硅胶色谱法(0-100％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到8-((2-羟基乙基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(3.1g，7mmol，85％)。
UPLC/ELSD:RT＝2.67min。对于C27H55NO3，MS(ES):m/z(MH+)442.68

[0964] 1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.89(p,1H)；3.67(t,2H)；2.81(t,2H)；2.65(t,2H)；2.30(t,2H)；2.05(br.m,2H)；1.72-1.41(br.m,8H)；1.40-1.20(br.m,30H)；0.88(m,6H)。

[0965] 8-((2-羟基乙基)(十四烷基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(方法C)

[0966]

[0967] 化学式：C41H83NO3

[0968] 分子量：638.12

[0969] 在65℃下，将8-((2-羟基乙基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(125mg，0.28mmol)、1-溴十四烷(94mg，0.34mmol)和N,N-二异丙基乙基胺(44mg，0.34mmol)于乙醇中的溶液搅拌18小时。将反应物冷却至室温并真空蒸发溶剂。将残余物溶解于乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠中。将有机层分离，经Na2SO4干燥并在真空中蒸发。将残余物通过硅胶色谱法(0-100％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到8-((2-羟基乙基)(十四烷基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(89mg，0.14mmol，50％)。UPLC/ELSD:RT＝3.61min。对于C41H83NO3，MS(ES):m/z(MH+)638.91。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.86(p,1H)；3.72-3.47(br.m,2H)；2.78-2.40(br.m,5H)；2.28(t,2H)；1.70-1.40(m,10H)；1.38-1.17(br.m,54H)；
0.88(m,9H)。

[0970] 合成中间物：

[0971] 中间物A：2-辛基癸酸

[0972]

[0973] 将二异丙基胺(2.92mL，20.8mmol)于THF(10mL)中的溶液冷却至-78℃并添加n-BuLi的溶液(7.5mL，18.9mmol，2.5M的己烷溶液)。使反应物升温至0℃。在0℃下，向癸酸(2.96g，17.2mmol)和NaH(754mg，18.9mmol，60％w/w)于THF(20mL)中的溶液中添加LDA的溶液并在室温下搅拌混合物30分钟。此后，添加1-碘代辛烷(5g，20.8mmol)并在45℃下加热反应混合物6小时。用1N HCl(10mL)猝灭反应物。将有机层经MgSO4干燥，过滤并在真空中蒸发。将残余物通过硅胶色谱法(0-20％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到2-辛基癸酸(1.9g，6.6mmol，38％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 2.38(br.m,1H)；1.74-1.03(br.m,28H)；0.91(m,6H)。

[0974] 中间物B：2-辛基癸酸7-溴庚酯

[0975]

[0976] 2-辛基癸酸7-溴庚酯是使用方法A，由2-辛基癸酸和7-溴庚-1-醇合成的。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.09(br.m,2H)；3.43(br.m,2H)；2.48-2.25(br.m,1H)；1.89(br.m,2H)；1.74-1.16(br.m,36H)；0.90(m,6H)。

[0977] 中间物C：(2-己基环丙基)甲醇

[0978]

[0979] 使二乙基锌(20mL，20mmol，1M的己烷溶液)于二氯甲烷(20mL)中的溶液冷却至-40℃，保持5分钟。接着，逐滴添加二碘甲烷(3.22mL，40mmol)于二氯甲烷(10mL)中的溶液。在-40℃下搅拌反应物1小时后，添加三氯乙酸(327mg，2mmol)和DME(1mL，9.6mmol)于二氯甲烷(10mL)中的溶液。使反应物升温至-15℃并在此温度下搅拌1小时。接着，将(Z)-壬-2-烯-1-醇(1.42g，10mmol)于二氯甲烷(10mL)中的溶液添加至-15℃溶液中。接着，使反应物缓慢升温至室温并搅拌18小时。之后，添加饱和NH4Cl(200mL)并将反应物用二氯甲烷萃取(3×)，用盐水洗涤，并经Na2SO4干燥。将有机层过滤，真空蒸发且残余物通过硅胶色谱法(0-50％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到(2-己基环丙基)甲醇(1.43g，9.2mmol，92％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 3.64(m,2H)；1.57-1.02(m,12H)；0.99-0.80(m,4H)；0.72(m,1H),0.00(m,
1H)。

[0980] C.化合物1：8-((2-羟基乙基)(十八烷基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[0981]

[0982] 化学式：C45H91NO3

[0983] 分子量：694.23

[0984] 化合物1是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.86min。对于C45H91NO3，MS(ES):m/z(MH+)694.93。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.86(m,
1H)；3.77-3.47(br.m,2H)；2.78-2.37(br.m,5H)；2.28(t,2H)；1.73-1.40(br.m,10H)；
1.38-1.18(br.m,62H)；0.88(m,9H)。

[0985] D.化合物3：8-((2-羟基乙基)(壬基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[0986]

[0987] 化学式：C36H73NO3

[0988] 分子量：567.98

[0989] 化合物3是根据通用程序和以上描述的代表性程序1和代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.36min。对于C36H73NO3，MS(ES):m/z(MH+)568.80。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.86(p,1H)；3.72-3.45(br.m,2H)；2.79-2.34(br.m,5H)；2.28(t,2H)；1.70-1.38(m,10H)；
1.38-1.16(br.m,44H)；0.88(m,9H)。

[0990] E.化合物4：8-((2-羟基乙基)(辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[0991]

[0992] 化学式：C35H71NO3

[0993] 分子量：553.96

[0994] 化合物4是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝2.99min。对于C35H71NO3，MS(ES):m/z(MH+)554.777。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.86(p,
1H)；3.71(br.s,2H)；2.70(br.s,5H)；2.26(t,2H)；1.48-1.59(br.m.,10H)；1.24(m,42H)；
0.86(t,9H)。

[0995] F.化合物5：8-(己基(2-羟基乙基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[0996]

[0997] 化学式：C33H67NO3

[0998] 分子量：525.90

[0999] 化合物5是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.10min。对于C33H67NO3，MS(ES):m/z(MH+)526.73。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.86(p,
1H)；3.67-3.48(br.m,2H)；2.74-2.39(br.m,5H)；2.28(t,2H)；1.68-1.39(br.m,10H)；
1.38-1.16(br.m,38H)；0.88(m,9H)。

[1000] G.化合物6：8-((2-羟基乙基)((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1001]

[1002] 化学式：C45H87NO3

[1003] 分子量：690.20

[1004] 化合物6是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.77min。对于C45H87NO3，MS(ES):m/z(MH+)690.84。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 5.37(m,
4H)；4.86(br.m,1H)；3.53(br.m；2H)；2.78(br.m,2H)；2.58(br.m,2H)；2.45(br.m,4H)；
2.28(m,2H)；2.05(m,4H)；1.68-1.15(br.m,57H)；0.89(m,9H)。

[1005] H.化合物7：8-((3-羟基丙基)(壬基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1006]

[1007] 化学式：C37H75NO3

[1008] 分子量：582.01

[1009] 化合物7是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝+ 1
3.24min。对于C37H75NO3，MS(ES):m/z(MH)582.987。H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.84(p,
1H)；3.76(t,2H)；2.42-2.66(br.s,5H)；2.25(t,2H)；1.47-1.68(br.m,12H)；1.24(m,42H)；
0.86(t,9H)。

[1010] I.化合物8：8-((3-(1H-咪唑-1-基)丙基)(壬基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1011] 步骤1：8-((3-氯丙基)(壬基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1012]

[1013] 化学式：C37H74ClNO2

[1014] 分子量：600.45

[1015] 向8-((3-羟基丙基)(壬基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(0.53g，0.91mmol)于4mL DCM中的0℃溶液中添加甲磺酰氯(0.070mL，0.91mmol)，随后添加三乙胺(0.13mL，0.91mmol)。使反应物缓慢升温至室温并搅拌过夜。通过添加水(约10mL)猝灭反应物。用DCM萃取混合物三次并将汇集的有机物用盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并真空浓缩。将粗油状物通过硅胶色谱法纯化，得到8-((3-氯丙基)(壬基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(0.23g，
42％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.84(p,1H)；3.58(t,2H)；2.51(br.s,2H)；2.35(br.s,
2H)；2.26(2,2H)；1.86(br.s,2H)；1.40-1.60(br.m,12H)；1.24(br.m,42H)；0.86(t,9H)。

[1016] 步骤2：8-((3-(1H-咪唑-1-基)丙基)(壬基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1017]

[1018] 化学式：C40H77N3O2

[1019] 分子量：632.08

[1020] 在一个圆底烧瓶中，将8-((3-氯丙基)(壬基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(50mg，0.083mmol)与咪唑(17mg，0.25mmol)、K2CO3(35mg，0.25mmol)于MeCN(0.5mL)合并。所述烧瓶配备冷凝器并放入82℃加热套中，并将其搅拌24小时。之后，使反应物冷却至室温，过滤并在真空中浓缩滤液。粗油状物通过硅胶色谱法(0-100％[DCM、20％MeOH、1％NH4OH]/MeOH)纯化，得到呈澄清油状物的所希望的产物(39mg，74％)。UPLC/ELSD:RT＝2.92min。对于C40H77N3O2，MS(ES):m/z(MH+)633.994。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 7.46(s,1H)；7.05(s,
1H)；6.91(s,1H)；4.84(dt,1H)；4.02(br.s,2H)；2.47(br.s,4H)；2.26(t,2H)；2.00(br.s,
2H)；1.47-1.59(br.m,10H)；1.24(br.m,44H)；0.86(t,9H)。

[1021] J.化合物9：8-((2-乙酰氧基乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1022]

[1023] 化学式：C46H89NO6

[1024] 分子量：752.22

[1025] 向8-((2-羟基乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(100mg，0.14mmol)和乙酸(8mg，0.13mmol)于二氯甲烷(1mL)中的溶液中添加N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳化二亚胺盐酸盐(31mg，0.16mmol)、N,N-二异丙基乙基胺(73mg，0.56mmol)和DMAP(3mg，0.02mmol)。在室温下搅拌反应物18小时。将反应物用二氯甲烷稀释并用饱和碳酸氢钠洗涤。分离有机层并用盐水洗涤，并经MgSO4干燥。过滤有机层并在真空中蒸发。将残余物通过硅胶色谱法(0-100％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到8-((2-乙酰氧基乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯
(63mg，0.08mmol)。UPLC/ELSD:RT＝3.63min。对于C46H89NO6，MS(ES):m/z(MH+)753.07。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.87(p,1H)；4.17-3.99(m,4H)；2.67(m,2H)；2.43(m,3H)；2.29(m,4H)；2.05(s,3H)；1.71-1.17(br.m,63H)；0.88(m,9H)。

[1026] K.化合物10：8-((2-羟基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1027]

[1028] 化学式：C45H89NO5

[1029] 分子量：724.209

[1030] 化合物10是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.73min。对于C45H89NO5，MS(ES):m/z(MH+)725.10。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.86(p,
1H)；4.05(t,2H)；3.80-3.54(br.m,1H)；2.61-2.13(br.m,9H)；1.69-1.03(br.m,67H)；0.88(m,9H)。

[1031] L.化合物11：(R)-8-((2-羟基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1032]

[1033] 化学式：C45H89NO5

[1034] 分子量：724.21

[1035] 化合物11是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝5.21min。对于C45H89NO5，MS(ES):m/z(MH+)725.02。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.86(p,
1H)；4.05(t,2H)；3.72(br.m,1H)；2.65-2.10(br.m,8H)；1.71-0.99(br.m,68H)；0.88(m,
9H)。

[1036] M.化合物12：(S)-8-((2-羟基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1037]

[1038] 化学式：C45H89NO5

[1039] 分子量：724.21

[1040] 化合物12是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝5.30min。对于C45H89NO5，MS(ES):m/z(MH+)725.10。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.86(p,
1H)；4.05(t,2H)；3.71(br.m,1H)；2.64-2.10(br.m,8H)；1.71-1.03(br.m,68H)；0.88(m,
9H)。

[1041] N.化合物13：8-((2-羟基丁基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1042]

[1043] 化学式：C46H91NO5

[1044] 分子量：738.24

[1045] 化合物13是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.89min。对于C46H91NO5，MS(ES):m/z(MH+)739.21。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.86(p,
1H)；4.05(t,2H)；3.58-3.38(br.m,1H)；2.65-2.15(br.m,9H)；1.72-1.12(br.m,66H)；0.98(t,3H)；0.88(m,9H)。

[1046] O.化合物14：8-((2-(二甲基氨基)乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1047]

[1048] 化学式：C46H92N2O4

[1049] 分子量：737.252

[1050] 化合物14是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.51min。对于C46H92N2O4，MS(ES):m/z(MH+)738.23。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.84(p,
1H)；4.04(t,2H)；2.95(m,2H)；2.78(m,6H)；2.44(s,6H)；2.28(m,4H)；1.70-1.41(br.m,
14H)；1.41-1.14(br.m,48H)；0.87(m,9H)。

[1051] P.化合物15：8-((2-甲氧基乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1052]

[1053] 化学式：C45H89NO5

[1054] 分子量：724.21

[1055] 化合物15是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.90min。对于C45H89NO5，MS(ES):m/z(MH+)725.19。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.86(p,
1H)；4.05(t,2H)；3.43(m,2H)；3.34(s,3H)；2.61(m,2H)；2.43(m,3H)；2.29(m,4H)；1.70-
1.15(br.m,63H)；0.88(m,9H)。

[1056] Q.化合物16：8-((3-甲氧基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1057]

[1058] 化学式：C46H91NO5

[1059] 分子量：738.236

[1060] 化合物16是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.90min。对于C46H91NO5，MS(ES):m/z(MH+)739.13。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.89(p,
1H)；4.08(t,2H)；3.42(m,2H)；3.35(s,3H)；2.55-2.21(m,9H)；1.81-1.18(br.m,65H)；0.88(m,9H)。

[1061] R.化合物17：8-((2-(2-(二甲基氨基)乙氧基)乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1062]

[1063] 化学式：C48H96N2O5

[1064] 分子量：781.305

[1065] 化合物17是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.72min。对于C48H96N2O5，MS(ES):m/z(MH+)782.27。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.88(p,
1H)；4.08(t,2H)；3.57(m,4H)；2.72(m,2H)；2.52(m,5H)；2.38-2.13(br.m,12H)；1.73-1.19(br.m,61H)；0.90(m,9H)。

[1066] S.化合物18：8-((2-羟基乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1067]

[1068] 化学式：C44H87NO5

[1069] 分子量：710.18

[1070] 化合物18是根据通用程序和以上描述的代表性程序1或根据以下方案合成的：

[1071]

[1072] UPLC/ELSD:RT＝3.59min。对于C44H87NO5，MS(ES):m/z(MH+)710.89。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.86(m,1H)；4.05(t,2H)；3.53(br.m,2H)；2.83-2.36(br.m,5H)；
2.29(m,4H)；0.96-1.71(m,64H)；0.88(m,9H)。

[1073] T.化合物19：8-((3-羟基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1074]

[1075] 化学式：C45H89NO5

[1076] 分子量：724.21

[1077] 化合物19是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝4.51min。对于C45H89NO5，MS(ES):m/z(MH+)725.19。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.86(p,
1H)；4.05(t,2H)；3.80(m,2H)；2.92-2.36(br.m,5H)；2.29(m,4H)；1.89-1.42(br.m,16H)；
1.42-1.02(br.m,50H)；0.88(m,9H)。

[1078] U.化合物20：8-((4-羟基丁基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1079]

[1080] 化学式：C46H91NO5

[1081] 分子量：738.24

[1082] 化合物20是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.84min。对于C46H91NO5，MS(ES):m/z(MH+)739.21。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.86(p,
1H)；4.05(t,2H)；3.77-3.45(br.m,2H)；2.63-2.20(br.m,8H)；1.82-1.40(br.m,18H)；
1.40-1.15(br.m,51H)；0.88(m,9H)。

[1083] V.化合物21：8-((2-氰基乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1084]

[1085] 化学式：C45H86N2O4

[1086] 分子量：719.19

[1087] 化合物21是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝+ 1
4.04min。对于C45H86N2O4，MS(ES):m/z(MH)720.18。H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.88(p,
1H)；4.07(t,2H)；2.81(m,2H)；2.44(m,5H)；2.30(m,4H)；1.73-1.18(br.m,63H)；0.89(m,
9H)。

[1088] W.化合物22：8-((2-羟基环己基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1089]

[1090] 化学式：C48H93NO5

[1091] 分子量：764.27

[1092] 化合物22是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝4.54min。对于C48H93NO5，MS(ES):m/z(MH+)765.21。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.86(p,
1H)；4.05(t,2H)；2.89-2.34(br.m,4H)；2.28(m,4H)；2.00(m,1H)；1.86-0.99(br.m,72H)；
0.88(m,9H)。

[1093] X.化合物23：10-((2-羟基乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)癸酸十七烷-9-基酯

[1094]

[1095] 化学式：C46H91NO5

[1096] 分子量：738.24

[1097] 化合物23是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.75min。对于C46H91NO5，MS(ES):m/z(MH+)739.13。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.86(m,
1H)；4.05(m,2H)；3.72-3.46(br.m,2H)；2.81-2.35(br.m,5H)；2.29(m,4H)；1.71-1.40(br.m,13H)；1.40-1.15(br.m,55H)；0.88(m,9H)。

[1098] Y.化合物24：(Z)-8_((2-羟基乙基)(8-(壬-2-烯-1-基氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1099]

[1100] 化学式：C44H85NO5

[1101] 分子量：708.17

[1102] 化合物24是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝+ 1
3.54min。对于C44H85NO5，MS(ES):m/z(MH)708.95。H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 5.74-5.44(br.m,2H)；4.86(m,1H)；4.62(m,2H)；3.71-3.40(br.m,2H)；2.81-2.37(br.m,5H)；2.29(m,
4H)；2.09(m,2H)；1.70-1.14(br.m,58H)；0.88(m,9H)。

[1103] Z.化合物25：8-((2-羟基乙基)(6-氧代-6-(十一烷氧基)己基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1104]

[1105] 化学式：C44H87NO5

[1106] 分子量：710.182

[1107] 化合物25是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.66min。对于C44H87NO5，MS(ES):m/z(MH+)711.00。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.86(m,
1H)；4.05(t,2H)；3.68-3.46(br.m,2H)；2.77-2.37(br.m,5H)；2.29(m,4H)；1.74-1.41(br.m,14H)；1.39-1.18(m,50H)；0.88(m,9H)。

[1108] AA.化合物26：8-((2-羟基乙基)(4-(壬氧基)-4-氧代丁基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1109]

[1110] 化学式：C40H79NO5

[1111] 分子量：654.07

[1112] 化合物26是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝4.29min。对于C40H79NO5，MS(ES):m/z(MH+)655.07。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.86(p,
1H)；4.06(t,2H)；3.79(br.m,2H)；2.91-2.20(br.m,10H)；1.98-1.03(br.m,55H)；0.88(m,
9H)。

[1113] AB.化合物27：8-((6-(十七烷-9-基氧基)-6-氧代己基)(2-羟基乙基)氨基)辛酸壬酯

[1114]

[1115] 化学式：C42H83NO5

[1116] 分子量：682.13

[1117] 化合物27是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝+ 1
3.57min。对于C42H83NO5，MS(ES):m/z(MH)683.12。H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.86(m,
1H)；4.05(m,2H)；3.70-3.45(br.m,2H)；2.78-2.35(br.m,5H)；2.29(m,4H)；1.73-1.41(m,
13H)；1.41-1.16(m,47H)；0.88(m,9H)。

[1118] AC.化合物28：8-((8-((2-己基环丙基)甲氧基)-8-氧代辛基)(2-羟基乙基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1119]

[1120] 化学式：C45H87NO5

[1121] 分子量：722.19

[1122] 化合物28是根据通用程序和以上描述的代表性程序1，使用中间物C合成的。UPLC/ELSD:RT＝5.17min。对于C45H87NO5，MS(ES):m/z(MH+)722.97。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.86(p,1H)；4.17(m,1H)；3.93(m,1H)；3.61(br.m,2H)；2.97-2.37(br.m,6H)；2.35-2.21(m,4H)；1.74-0.97(br.m,60H)；0.94-0.79(m,10H)；0.74(m,1H)；0.01(m,1H)。

[1123] AD.化合物29：8,8'-((2-羟基乙基)氮烷二基)二辛酸二(十七烷-9-基)酯

[1124]

[1125] 化学式：C52H103NO5

[1126] 分子量：822.40

[1127] 化合物29是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.98min。对于C52H103NO5，MS(ES):m/z(MH+)823.19。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.86(m,
2H)；3.72-3.44(br.m,2H)；2.83-2.34(br.m,5H)；2.28(m,4H)；1.69-1.39(br.m,16H)；
1.39-1.16(br.m,62H)；0.88(m,12H)。

[1128] AE.化合物30：2-辛基癸酸7-((2-羟基乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)庚酯[1129]

[1130] 化学式：C44H87NO5

[1131] 分子量：710.18

[1132] 化合物30是根据通用程序和以上描述的代表性程序1，使用中间物B合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.55min。对于C44H87NO5，MS(ES):m/z(MH+)711.16。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.06(m,4H)；3.69-3.44(br.m,2H)；2.71-2.39(br.m,5H)；2.29(m,3H)；1.70-1.16(br.m,
64H)；0.88(m,9H)。

[1133] AF.化合物31：(Z)-8-((2-羟基乙基)(十八碳-9-烯-1-基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1134]

[1135] 化学式：C45H89NO3

[1136] 分子量：692.21

[1137] 化合物31是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.83min。对于C45H89NO3，MS(ES):m/z(MH+)693.20。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 5.37(m,
2H)；4.89(p,1H)；3.58(br.m,2H)；2.72-2.43(br.m,5H)；2.30(m,2H),2.05(m,4H)；1.71-
1.03(br.m,63H),0.90(m,9H)。

[1138] AG.化合物32：8-((2-羟基乙基)(8-氧代-8-(十五烷-7-基氧基)辛基)氨基)辛酸壬酯

[1139]

[1140] 化学式：C42H83NO5

[1141] 分子量：682.13

[1142] 化合物32是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.45min。对于C42H83NO5，MS(ES):m/z(MH+)683.20。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.89(p,
1H)；4.08(t,2H)；3.60(br.m,2H)；2.85-2.40(br.m,5H)；2.31(m,4H),1.78-1.01(m,59H),
0.90(m,9H)。

[1143] AH.化合物33：8-((2-羟基乙基)(8-氧代-8-(十四烷-6-基氧基)辛基)氨基)辛酸壬酯

[1144]

[1145] 化学式：C41H81NO5

[1146] 分子量：668.10

[1147] 化合物33是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.39min。对于C41H81NO5，MS(ES):m/z(MH+)669.09。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.89(p,
1H)；4.08(t,2H)；3.84-3.54(br.m,2H)；2.99-2.41(br.m,5H)；2.31(m,4H),1.76-1.02(br.m,57H),0.90(m,9H)。

[1148] AI.化合物34：8-((2-羟基乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十二烷-4-基酯

[1149]

[1150] 化学式：C39H77NO5

[1151] 分子量：640.05

[1152] 化合物34是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.21min。对于C39H77NO5，MS(ES):m/z(MH+)641.05。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.91(p,
1H)；4.08(t,2H)；3.67(br.m,2H)；3.03-2.44(br.m,5H)；2.30(m,4H),1.75-1.00(br.m,
53H),0.90(m,9H)。

[1153] AJ.化合物35：8-((2-羟基乙基)(8-氧代-8-(十一烷-3-基氧基)辛基)氨基)辛酸壬酯

[1154]

[1155] 化学式：C38H75NO5

[1156] 分子量：626.02

[1157] 化合物35是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝+ 1
3.16min。对于C38H75NO5，MS(ES):m/z(MH)627.11。H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.83(p,
1H)；4.08(t,2H)；3.63(br.m,2H)；2.81-2.39(br.m,5H)；2.31(m,4H),1.74-1.01(br.m,
51H),0.90(m,9H)。

[1158] AK.化合物36：8-((2-羟基乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸癸烷-2-基酯

[1159]

[1160] 化学式：C37H73NO5

[1161] 分子量：611.99

[1162] 化合物36是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.05min。对于C37H73NO5，MS(ES):m/z(MH+)613.00。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.91(p,
1H)；4.08(t,2H)；3.55(m,2H)；2.60(m,2H)；2.47(m,4H)；2.29(m,4H),1.731-1.01(m,51H),
0.90(m,6H)。

[1163] AL.化合物47：8-((2-羟基乙基)(8-(2-辛基环丙基)辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1164]

[1165] 化学式：C46H91NO3

[1166] 分子量：706.24

[1167] 化合物47是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.92min。对于C46H91NO3，MS(ES):m/z(MH+)707.39。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.86(p,
1H)；3.56(br.m,2H)；2.72-2.38(br.m,5H)；2.28(t,2H)；1.70-1.02(br.m,67H),0.88(m,
9H)；0.71-0.49(m,4H)；-0.33(m,1H)。

[1168] AM.化合物48：8-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(2-羟基乙基)氨基)辛酸癸-2-基酯

[1169]

[1170] 化学式：C45H89NO5

[1171] 分子量：724.21

[1172] 化合物48是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.60min。对于C45H89NO5，MS(ES):m/z(MH+)725.10。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.91(m,
2H)；3.59(br.m,2H)；2.79-2.37(br.m,5H)；2.29(m,4H)；1.74-1.13(m,66H)；0.90(m,9H)。

[1173] AN.化合物49：8-((2-羟基乙基)(8-氧代-8-(十一烷-3-基氧基)辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1174]

[1175] 化学式：C46H91NO5

[1176] 分子量：738.24

[1177] 化合物49是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.68min。对于C46H91NO5，MS(ES):m/z(MH+)739.21。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.89(m,
2H)；3.56(br.m,2H)；2.68-2.39(br.m,5H)；2.30(m,4H)；1.71-1.19(m,66H)；0.90(m,12H)。

[1178] AO.化合物50：8-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(2-羟基乙基)氨基)辛酸十二烷-4-基酯

[1179]

[1180] 化学式：C47H93NO5

[1181] 分子量：752.26

[1182] 化合物50是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.73min。对于C47H93NO5，MS(ES):m/z(MH+)753.23。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.89(m,
2H)；3.60(br.m,2H)；2.75-2.43(br.m,5H)；2.30(m,4H)；1.71-1.44(m,16H)；1.28(m,51H)；
0.90(m,12H)。

[1183] AP.化合物51：8-((4-丁氧基-4-氧代丁基)(2-羟基乙基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1184]

[1185] 化学式：C35H69NO5

[1186] 分子量：583.94

[1187] 化合物51是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝+ 1
3.05min。对于C35H69NO5，MS(ES):m/z(MH)584.87。H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.89(p,
1H)；4.10(t,2H)；3.61(br.m,2H)；2.81-2.21(br.m,9H)；1.87(br.m,2H),1.70-1.04(m,
43H),0.98-0.82(m,9H)。

[1188] AQ.化合物52：8-((2-羟基乙基)(4-氧代-4-(戊氧基)丁基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1189]

[1190] 化学式：C36H71NO5

[1191] 分子量：597.97

[1192] 化合物52是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.11min。对于C36H71NO5，MS(ES):m/z(MH+)598.90。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.89(p,
1H)；4.09(t,2H)；3.61(br.m,2H)；2.89-2.22(br.m,9H)；1.87(br.m,2H),1.73-1.43(m,
11H),1.28(m,34H)；0.90(m,9H)。

[1193] AR.化合物53：8-((4-(己氧基)-4-氧代丁基)(2-羟基乙基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1194]

[1195] 化学式：C37H73NO5

[1196] 分子量：611.99

[1197] 化合物53是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.22min。对于C37H73NO5，MS(ES):m/z(MH+)612.92。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.86(p,
1H)；4.06(t,2H)；3.55(br.m,2H)；2.68-2.38(br.m,5H)；2.28(m,4H)；1.79(br.m,2H)；
1.71-0.96(m,48H)；0.88(m,9H)。

[1198] AS.化合物54：8-((4-(庚氧基)-4-氧代丁基)(2-羟基乙基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1199]

[1200] 化学式：C38H75NO5

[1201] 分子量：626.02

[1202] 化合物54是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.28min。对于C38H75NO5，MS(ES):m/z(MH+)626.94。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.89(p,
1H)；4.09(t,2H)；3.60(br.m,2H)；2.77-2.42(br.m,5H)；2.32(m,4H)；1.84(br.m,2H)；
1.75-1.03(m,49H)；0.90(m,9H)。

[1203] AT.化合物55：8-((4-((2-己基环丙基)甲氧基)-4-氧代丁基)(2-羟基乙基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1204]

[1205] 化学式：C41H79NO5

[1206] 分子量：666.09

[1207] 化合物55是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.37min。对于C41H79NO5，MS(ES):m/z(MH+)667.04。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.83(p,
1H)；4.15(m,1H)；3.95(m,1H)；3.53(br.m,2H)；2.66-2.39(br.m,5H)；2.34-2.19(m,4H)；
1.78(br.m,2H)；1.66-0.98(m,50H)；0.85(m,10H)；0.70(m,1H)；0.00(m,1H)。

[1208] AU.化合物56：8-((2-羟基乙基)(8-氧代-8-(十三烷-7-基氧基)辛基)氨基)辛酸壬酯

[1209]

[1210] 化学式：C40H79NO5

[1211] 分子量：654.07

[1212] 化合物56是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.28min。对于C40H79NO5，MS(ES):m/z(MH+)654.99。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.89(p,
1H)；4.08(t,2H)；3.60(br.m,2H)；2.77-2.40(br.m,5H)；2.30(m,4H)；1.78-0.99(m,55H)；
0.90(m,9H)。

[1213] AV.化合物57：8-((2-羟基乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸壬烷-5-基酯

[1214]

[1215] 化学式：C36H71NO5

[1216] 分子量：597.97

[1217] 化合物57是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝2.88min。对于C36H71NO5，MS(ES):m/z(MH+)598.98。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.89(p,
1H)；4.08(t,2H)；3.59(br.m,2H)；2.82-2.37(br.m,5H)；2.31(m,4H)；1.73-1.03(m,47H)；
0.91(m,9H)。

[1218] AW.化合物58：8-((2-羟基乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸庚-4-基酯[1219]

[1220] 化学式：C34H67NO5

[1221] 分子量：569.91

[1222] 化合物58是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝2.67min。对于C34H67NO5，MS(ES):m/z(MH+)570.93。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.93(p,
1H)；4.08(t,2H)；3.57(br.m,2H)；2.69-2.42(br.m,5H)；2.30(m,4H)；1.72-1.04(m,43H)；
0.93(m,9H)。

[1223] AX.化合物59：8-((2-羟基乙基)(8-氧代-8-(戊烷-3-基氧基)辛基)氨基)辛酸壬酯

[1224]

[1225] 化学式：C32H63NO5

[1226] 分子量：541.86

[1227] 化合物59是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝2.39min。对于C32H63NO5，MS(ES):m/z(MH+)542.80。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.78(p,
1H)；4.08(t,2H)；3.57(br.m,2H)；2.71-2.39(br.m,5H)；2.31(m,4H)；1.77-1.05(m,39H)；
0.90(m,9H)。

[1228] AY.化合物60：8-((2-羟基乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸(5Z,12Z)-十七烷-5,12-二烯-9-基酯

[1229] (5Z,12Z)-十七烷-5,12-二烯-9-醇

[1230]

[1231] 化学式：C17H32O

[1232] 分子量：252.44

[1233] 向(Z)-1-溴辛-3-烯(6.2g，32.4mmol)于THF(45mL)中的溶液中添加镁屑(0.843g，34.7mmol)。将反应物加热至45℃，保持3小时。将反应物冷却至0℃并逐滴添加溶于THF(5mL)中的甲酸乙酯(2.4g，32.4mmol)。使反应物升温至室温并搅拌30分钟。将反应物冷却至0℃并用水(15mL)和6N HCl(15mL)猝灭。搅拌反应物，直至所有Mg都溶解。添加水(25mL)并用己烷(3X25 mL)猝灭混合物。将合并的有机层用盐水洗涤，分离，经Na2SO4干燥，过滤，并真空蒸发。将残余物溶解于EtOH(20mL)中，添加KOH的水溶液(1.76g于8mL水)并使其搅拌15分钟。真空蒸发EtOH。将残余物用水(20mL)稀释，用6N HCl(20mL)酸化并用己烷(3×)萃取。
将合并的有机层用盐水洗涤，分离，经Na2SO4干燥，过滤，并真空蒸发。将残余物通过硅胶色谱法，用(0-5％)EtOAc/己烷纯化，得到(5Z,12Z)-十七烷-5,12-二烯-9-醇(2.3g，9.1mmol，
28％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 5,41(m,4)；3.66(m,1H)；2.13(m,8H)；1.51(m,5H)；
1.36(m,8H)；0.92(m,6H)。

[1234] 8-((2-羟基乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸(5Z,12Z)-十七烷-5,12-二烯-9-基酯

[1235]

[1236] 化学式：C44H83NO5

[1237] 分子量：706.15

[1238] 化合物60是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.36min。对于C44H83NO5，MS(ES):m/z(MH+)707.10。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 5.37(m,
4H)；4.92(p,1H)；4.08(t,2H)；3.57(br.m,2H)；2.73-2.38(br.m,5H)；2.31(m,4H)；2.04(m,
8H)；1.73-1.01(m,47H)；0.92(m,9H)。

[1239] AZ.化合物61：8-((2-羟基乙基)(6-氧代-6-(十一烷氧基)己基)氨基)辛酸(5Z,12Z)-十七烷-5,12-二烯-9-基酯

[1240]

[1241] 化学式：C44H83NO5

[1242] 分子量：706.15

[1243] 化合物61是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.39min。对于C44H83NO5，MS(ES):m/z(MH+)707.10。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 5.37(m,
4H)；4.92(p,1H)；4.08(t,2H)；3.58(br.m,2H)；2.70-2.41(br.m,5H)；2.32(m,4H)；2.04(m,
8H)；1.77-1.03(m,47H)；0.92(m,9H)。

[1244] BA.化合物65：8-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(2-羟基乙基)氨基)辛酸1-环丙基壬酯

[1245]

[1246] 化学式：C47H91NO5

[1247] 分子量：750.247

[1248] 化合物65是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.72min。对于C47H91NO5，MS(ES):m/z(MH+)750.9。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.89(m,1H)；
4.28(m,1H)；3.54(m,2H)；2.59(m,2H)；2.46(m,4H)；2.29(m,4H),1.73-1.18(m,61H)；0.90(m,10H)；0.62-0.33(m,3H)；0.28(m,1H)。

[1249] BB.化合物66：8-((2-羟基乙基)(8-氧代-8-((4-戊基环己基)氧基)辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1250]

[1251] 化学式：C46H89NO5

[1252] 分子量：736.220

[1253] 化合物66是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.72min。对于C46H89NO5，MS(ES):m/z(MH+)736.9。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 5.00(m,
0.5H)；4.89(m,1H)；4.68(m,0.6H)；3.56(m,2H),2.61(br.m,2H)；2.48(m,4H)；2.30(m,4H)；
1.98(m,1H)；1.82(m,2H)；1.73-1.14(m,61H)；1.04(m,1H)；0.90(m,9H)。

[1254] BC.化合物67：8-((2-羟基乙基)(4-氧代-4-((4-戊基环己基)氧基)丁基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1255]

[1256] 化学式：C42H81NO5

[1257] 分子量：680.112

[1258] 化合物67是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.56min。对于C42H81NO5，MS(ES):m/z(MH+)680.8。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 5.01(m,
0.4H)；4.89(m,1H)；4.68(m,0.6H)；3.59(m,2H),2.72-2.43(br.m,6H)；2.30(m,4H)；1.98(m,1H)；1.83(m,4H)；1.69-1.44(m,10H)；1.28(m,41H)；1.03(m,1H)；0.90(m,9H)。

[1259] BD.化合物68：8-((2-羟基乙基)(6-氧代-6-((4-戊基环己基)氧基)己基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1260]

[1261] 化学式：C44H85NO5

[1262] 分子量：708.166

[1263] 化合物68是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.66min。对于C44H85NO5，MS(ES):m/z(MH+)708.9。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 5.00(m,
0.5H)；4.89(m,1H)；4.68(m,0.6H)；3.55(m,2H),2.66-2.39(br.m,6H)；2.30(m,4H)；1.97(m,1H)；1.83(m,2H)；1.73-1.41(m,15H)；1.41-1.17(m,42H)；1.04(m,1H)；0.90(m,9H)。

[1264] BE.化合物69：8-((2,3-二羟基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1265]

[1266] 化学式：C45H89NO6

[1267] 分子量：740.21

[1268] 化合物69是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.60min。对于C45H89NO6，MS(ES):m/z(MH+)741.0。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.89(p,1H)；
4.08(t,2H)；3.76(br.m,2H)；3.51(m,1H)；2.57(m,6H)；2.31(m,4H)；1.71-1.41(m,14H)；
1.41-1.12(m,48H)；0.90(m,9H)。

[1269] BF.化合物70：8-((4-(癸烷-2-基氧基)-4-氧代丁基)(2-羟基乙基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1270]

[1271] 化学式：C41H81NO5

[1272] 分子量：667.61

[1273] 化合物70是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.44min。对于C41H81NO5，MS(ES):m/z(MH+)668.9。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.91(m,2H)；
3.57(m,2H)；2.71-2.40(m,5H)；2.30(m,4H),1.80(m,2H)；1.71-1.40(m,11H)；1.39-1.05(m,45H)；0.90(m,9H)。

[1274] BG.化合物71：8-((2-羟基乙基)(4-氧代-4-(十四烷-6-基氧基)丁基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1275]

[1276] 化学式：C45H89NO5

[1277] 分子量：724.209

[1278] 化合物71是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝+ 1
3.72min。对于C45H89NO5，MS(ES):m/z(MH)724.9。H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.89(m,2H)；
3.56(m,2H)；2.70-2.41(m,6H)；2.33(m,4H),1.80(m,2H)；1.69-1.41(m,13H)；1.28(m,
48H)；0.90(m,12H)。

[1279] BH.化合物72：8-((2-羟基乙基)(4-氧代-4-(十一烷-3-基氧基)丁基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1280]

[1281] 化学式：C42H83NO5

[1282] 分子量：682.13

[1283] 化合物72是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.57min。对于C42H83NO5，MS(ES):m/z(MH+)683.0。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.86(m,2H)；
3.58(br.m,2H)；2.75-2.41(br.m,5H)；2.30(m,4H),1.81(br.m,2H)；1.70-1.42(m,13H)；
1.40-1.18(m,42H)；0.90(m,12H)。

[1284] BI.化合物73：8-((2-羟基乙基)(4-氧代-4-(十五烷-7-基氧基)丁基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1285]

[1286] 化学式：C46H91NO5

[1287] 分子量：738.236

[1288] 化合物73是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.80min。对于C46H91NO5，MS(ES):m/z(MH+)739.09。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.89(m,
2H)；3.59(br.m,2H)；2.81-2.43(br.m,6H)；2.31(m,4H)；1.83(m,2H)；1.69-1.42(m,12H)；
1.28(m,50H)；0.90(m,12H)。

[1289] BJ.化合物74：8-((4-(十二烷-4-基氧基)-4-氧代丁基)(2-羟基乙基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1290]

[1291] 化学式：C43H85NO5

[1292] 分子量：696.155

[1293] 化合物74是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.68min。对于C43H85NO5，MS(ES):m/z(MH+)696.9。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.89(m,2H)；
3.56(m,2H)；2.70-2.41(m,6H)；2.30(m,4H),1.80(m,2H)；1.70-1.40(m,12H)；1.28(m,
44H)；0.90(m,12H)。

[1294] BK.化合物75：8-((2-羟基乙基)(6-氧代-6-(十一烷-3-基氧基)己基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1295]

[1296] 化学式：C44H87NO5

[1297] 分子量：710.18

[1298] 化合物75是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.67min。对于C44H87NO5，MS(ES):m/z(MH+)711.1。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.86(m,2H)；
3.57(m,2H)；2.72-2.40(br.m,5H)；2.30(m,4H)；1.70-1.42(m,16H)；1.28(m,45H)；0.90(m,
12H)。

[1299] BL.化合物79：8-((2-羟基乙基)(8-氧代-8-((4-戊基环己基)氧基)辛基)氨基)辛酸壬酯

[1300]

[1301] 化学式：C38H73NO5

[1302] 分子量：624.00

[1303] 化合物79是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.10min。对于C38H73NO5，MS(ES):m/z(MH+)624.8。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 5.00(br.m,
0.5H)；4.68(m,0.5H)；4.08(t,2H)；3.56(m,2H)；2.72-2.38(m,6H)；2.31(m,4H),1.97(m,
1H)；1.82(m,2H)；1.73-0.95(m,48H),0.90(m,6H)。

[1304] BM.化合物80：8-((2-羟基乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸[1,1'-联(环己烷)]-4-基酯

[1305]

[1306] 化学式：C39H73NO5

[1307] 分子量：636.02

[1308] 化合物80是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.10min。对于C39H73NO5，MS(ES):m/z(MH+)636.9。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 5.01(br.m,
0.5H)；4.65(m,0.5H)；4.08(t,2H)；3.56(m,2H)；2.69-2.36(m,6H)；2.31(m,4H)；2.07-0.84(m,57H)。

[1309] BN.化合物81：8-((2-羟基乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸环十五烷基酯

[1310]

[1311] 化学式：C42H81NO5

[1312] 分子量：680.11

[1313] 化合物81是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.36min。对于C42H81NO5，MS(ES):m/z(MH+)681.0。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.91(p,1H)；
4.08(t,2H)；3.57(br.m,2H)；2.74-2.39(m,6H)；2.30(m,4H),1.73-1.03(m,62H),0.90(m,
3H)。

[1314] BO.化合物94：8-(苯甲基(8-壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1315] 8-(苯甲基氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1316]

[1317] 化学式：C32H57NO2

[1318] 分子量：487.81

[1319] 在室温下，将8-溴辛酸十七烷-9-基酯(250mg，0.542mmol)于苯基甲胺(1.2mL，10.83mmol)中的溶液搅拌6小时。将反应物冷却至室温并真空蒸发溶剂。将残余物溶解于乙酸乙酯中并用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤。将有机层分离并用盐水洗涤，经Na2SO4干燥并在真空中蒸发。残余物通过硅胶色谱法(20-100％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到8-(苯甲基氨基)辛酸十七烷-9-基酯(200mg，0.41mmol，76％)。
UPLC/ELSD:RT＝2.87min。对于C32H57NO2，MS(ES):m/z(MH+)488.4。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:
ppm 7.35-7.25(br.m,5H)；4.89(p,1H)；3.81(s,2H)；2.65(t,2H)；2.29(t,2H)；1.65-1.51(br.m,8H)；1.28(m,30H)；0.90(m,6H)。

[1320] 8-(苯甲基(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1321]

[1322] 化学式：C49H89NO4

[1323] 分子量：756.25

[1324] 将8-(苯甲基氨基)辛酸十七烷-9-基酯(200mg，0.41mmol)、8-溴辛酸壬酯(172mg，0.49mmol)和N,N-二异丙基乙基胺(100μL，0.57mmol)的溶液溶解于乙醇中并在62℃下搅拌
48小时。将反应物冷却至室温并真空蒸发溶剂。将残余物溶解于乙酸乙酯中并用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤。分离有机层并用盐水洗涤，经Na2SO4干燥并在真空中蒸发。残余物通过硅胶色谱法(0-100％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到8-(苯甲基(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(138mg，0.18mmol，45％)。
UPLC/ELSD:RT＝3.78min。对于C49H89NO4，MS(ES):m/z(MH+)757.0。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:
ppm 7.33-7.23(br.m,5H)；4.89(p,1H)；4.08(t,2H)；3.55(s,2H)；2.40(m,4H)；2.30(m,
4H)；1.64-1.28(br.m,62H)；0.90(m,9H)。

[1325] BP.化合物96：癸酸7-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(2-羟基乙基)氨基)庚酯

[1326]

[1327] 化学式：C44H87NO5

[1328] 分子量：710.182

[1329] 化合物96是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝2.74min。对于C44H87NO5，MS(ES):m/z(MH+)711.0。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.89(m,1H)；
4.08(t,2H)；3.61(m,2H)；2.88-2.37(br.m,6H)；2.31(m,4H),1.79-1.04(m,62H)；0.90(m,
9H)。

[1330] BQ.化合物98：癸酸8-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(2-羟基乙基)氨基)辛-2-基酯

[1331] 辛-1,7-二醇

[1332]

[1333] 化学式：C8H18O2

[1334] 分子量：146.230

[1335] 在N2下，在0℃下将7-氧代辛酸(4g，25.29mmol)于THF(10mL)中的溶液添加至LAH于THF中的搅拌溶液中(70mL)。使混合物升温至室温并在室温下搅拌4小时，之后将10mL饱和Na2SO4.10H2O(水溶液)缓慢添加至所述溶液中。白色固体析出。再添加固体Na2SO4.10H2O并通过硅藻土塞过滤混合物。将滤液用EtOAc稀释并用盐水洗涤。分离有机层，经Na2SO4干燥，过滤，并真空蒸发。残余物通过硅胶色谱法，用(0-40％)EtOAc/己烷纯化，得到辛-1,7-二醇(2.97g，20.31mmol，80％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm3.81(m,1H)；3.66(t,2H)；1.66-1.31(m,12H)；1.22(d,3H)。

[1336] 8-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)辛-2-醇

[1337]

[1338] 化学式：C24H36O2Si

[1339] 分子量：384.635

[1340] 在0℃下，向辛-1,7-二醇(1g，6.84mmol)于DCM(75mL)中的溶液中添加咪唑(0.94g，13.81mmol)，随后缓慢添加叔丁基(氯)二苯基硅烷(2.14mL，8.21mmol)于DCM中的溶液(使用滴液漏斗)。在0℃下搅拌反应物1.5小时。用饱和NH4Cl(水溶液)猝灭反应物。用DCM(3×50mL)萃取水层3次。有机层经无水MgSO4干燥并过滤，并蒸发溶剂。粗产物通过快速硅胶柱色谱法，用0-10％EtOAc/己烷纯化，得到8-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)辛-2-醇(2.29g，5.95mmol，87％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 7.69(m,4H)；7.42(m,6H)；3.80(m,
1H)；3.68(t,2H)；1.59(m,2H)；1.50-1.26(m,9H)；1.21(d,3H)；1.07(s,9H)。

[1341] 癸酸8-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)辛-2-基酯

[1342]

[1343] 化学式：C34H54O3Si

[1344] 分子量：538.888

[1345] 癸酸8-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)辛-2-基酯是根据方法A合成的。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 7.69(m,4H)；7.42(m,6H)；4.92(m,1H)；3.67(t,2H)；2.29(t,2H)；1.67-1.42(m,6H)；1.41-1.17(m,21H)；1.07(s,9H)；0.90(m,3H)。

[1346] 癸酸8-羟基辛-2-基酯

[1347]

[1348] 化学式：C18H36O3

[1349] 分子量：300.483

[1350] 向癸酸8-[(叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基]辛-2-基酯(1.08g，2mmol)于THF中的溶液中添加TBAF(8.02mL，1M的THF溶液，8.02mmol)并在室温下搅拌混合物3小时。真空蒸发有机溶剂。将残余物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3、随后盐水洗涤。将有机层分离，经Na2SO4干燥，过滤，并真空蒸发。将残余物通过硅胶色谱法，用(0-40％)EtOAc/己烷纯化，得到癸酸8-羟基辛-2-基酯(0.55g,1.82mmol，91％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.91(m,1H)；3.66(t,2H)；2.29(t,2H)；1.72-1.17(m,28H)；0.90(m,3H)。

[1351] 癸酸8-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(2-羟基乙基)氨基)辛-2-基酯

[1352]

[1353] 化学式：C45H89NO5

[1354] 分子量：724.209

[1355] 化合物98是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.55min。对于C45H89NO5，MS(ES):m/z(MH+)725.0。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.89(m,2H)；
3.58(br.m,2H)；2.77-2.40(m,6H)；2.29(m,4H)；1.72-1.41(m,14H)；1.28(m,51H)；0.90(m,
9H)。

[1356] BR.化合物101：8-((2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1357] 8-((2-氯乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1358]

[1359] 化学式：C44H86ClNO4

[1360] 分子量：728.63

[1361] 在0℃下，向8-((2-羟基乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(1100mg，1.55mmol)于二氯甲烷(25mL)中的溶液中一次性添加N-氯代琥珀酰亚胺。在0℃下搅拌反应物1小时，随后在室温下搅拌1小时。添加90mL己烷并在室温下搅拌反应物20分钟。通过硅胶塞过滤出白色固体并用己烷洗涤三次。真空浓缩有机层。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.89(p,1H)；4.08(t,2H)；3.57(m,2H)；2.85(m,2H)；2.54(m,4H)；2.33-2.27(m,4H)；1.66-1.28(br.m,62H)；0.90(m,9H)。

[1362] 8-((2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1363]

[1364] 化学式：C49H97N3O4

[1365] 分子量：792.33

[1366] 将1-甲基哌嗪(15mg，0.151mmol)、8-((2-氯乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(110mg，0.151mmol)、K2CO3(42mg，0.302mmol)和KI(3mg，0.0151mmol)的溶液溶解于1:1THF:MeCN(1mL:1mL)中。在65℃下搅拌反应物18小时。将反应物冷却至室温，过滤并用己烷和EtOAc洗涤。将有机滤液转移至分液漏斗中并用水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。残余物通过硅胶色谱法[0-100％(1％NH4OH、
20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷]纯化，得到8-((2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(36mg，0.045mmol，30％)。UPLC/ELSD:
RT＝3.25min。对于C49H97N3O4，MS(ES):m/z(MH+)792.8。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.88(p,1H)；4.08(t,2H)；2.57-2.45(br.m,20H)；2.31(m,3H)；1.64-1.28(br.m,62H)；0.90(m,
9H)。

[1367] BS.化合物103：8-((2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1368] 8-((2-氯乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1369]

[1370] 化学式：C44H86ClNO4

[1371] 分子量：728.63

[1372] 在0℃下，向8-((2-羟基乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(1100mg，1.55mmol)于二氯甲烷(25mL)中的搅拌溶液中一次性添加N-氯代琥珀酰亚胺。在0℃下搅拌反应物1小时，随后在室温下搅拌1小时。添加90mL己烷并在室温下搅拌反应物
20分钟。通过硅胶塞过滤出白色固体并用己烷洗涤三次。真空浓缩有机层。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.89(p,1H)；4.08(t,2H)；3.57(m,2H)；2.85(m,2H)；2.54(m,4H)；2.33-2.27(m,4H)；1.66-1.28(br.m,62H)；0.90(m,9H)。

[1373] 8-((2-吗啉代乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1374]

[1375] 化学式：C48H94N2O5

[1376] 分子量：779.29

[1377] 将吗啉(13mg，0.151mmol)、8-((2-氯乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(110mg，0.151mmol)、K2CO3(42mg，0.302mmol)和KI(3mg，0.0151mmol)的溶液溶解于1:1THF:MeCN(1mL:1mL)中。在65℃下搅拌反应物18小时。将反应物冷却至室温，过滤并用己烷和EtOAc洗涤。将有机滤液转移至分液漏斗中并用水和盐水洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。残余物通过硅胶色谱法[0-100％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷]纯化，得到8-((2-(4-甲基哌嗪-1-基)乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(58mg，0.074mmol，49％)。UPLC/ELSD:RT＝3.53min。对于C48H94N2O5，MS(ES):m/z(MH+)779.8。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.86(p,1H)；4.05(t,2H)；3.70(m,4H)；2.59-2.54(m,2H)；2.48-2.38(m,10H)；2.31-2.25(m,4H)；1.64-1.26(br.m,62H)；0.88(m,9H)。

[1378] BT.化合物108：8-((3-乙酰胺基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1379]

[1380] 化学式：C47H92N2O5

[1381] 分子量：765.26

[1382] 在0℃下，向8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(400mg，0.553mmol)和三乙胺(0.15mL，1.10mmol)于10mL二氯甲烷中的溶液中逐滴添加乙酰氯(47μL，0.66mmol)，并使反应混合物升温至室温，保持16小时。MS显示产物，并将混合物用二氯甲烷稀释并用饱和碳酸氢钠和盐水洗涤。随后，用硫酸钠干燥，浓缩滤液并通过ISCO(SiO2:MeOH/CH2Cl2/1％NH4OH 0至5％)纯化，得到呈无色油状物的产物(300mg，71％)。LC/UV(202nm):RT＝9.14min。MS(APCI):m/z(MH+)765.7。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 7.41(bs,1H)；4.85(p,1H,J＝6.0Hz)；4.04(t,2H,J＝6.6Hz)；3.40-3.25(m,2H)；2.53-2.23(m,
10H)；1.91(s,3H)；1.65-1.16(m,64H)；0.86(m,9H)。

[1383] BU.化合物109：8-((3-(甲基磺酰胺基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1384]

[1385] 化学式：C46H92N2O6S

[1386] 分子量：801.31

[1387] 将甲烷磺酰氯(51μL，0.66mmol)逐滴添加至8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(400mg，0.553mmol)和三乙胺(0.15mL，1.10mmol)于10mL二氯甲烷中的0℃溶液中，并使反应混合物升温至室温，保持16小时。MS显示产物，并用二氯甲烷稀释混合物并用饱和碳酸氢钠和盐水洗涤。经硫酸钠干燥后，浓缩滤液并通过ISCO(SiO2:MeOH/CH2Cl2/1％NH4OH 0至5％)纯化，得到呈无色油状物的产物(296mg，88％)。LC/UV(214nm):RT＝11.51min。MS(APCI):m/z(MH+)801.7。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.85(p,1H,J＝6.0Hz)；4.04(t,2H,J＝6.6Hz)；3.22(t,2H,J＝5.8Hz)；2.88(s,3H)；2.53-2.23(m,10H)；1.73-1.16(m,64H)；0.87(m,9H)。

[1388] BV.化合物110：8-((3-(3,3-二甲基脲基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1389]

[1390] 化学式：C48H95N3O5

[1391] 分子量：794.30

[1392] 在0℃下，向8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(400mg，0.553mmol)、二甲基氨基吡啶(7mg，0.0553mmol)和三乙胺(0.15mL，1.10mmol)于10mL二氯甲烷中的溶液中逐滴添加二甲基氨基甲酰氯(56μL，0.61mmol)，并在室温下搅拌反应混合物16小时。MS显示产物。将混合物用二氯甲烷稀释并用饱和碳酸氢钠和盐水洗涤。
之后，将其用硫酸钠干燥，浓缩滤液并通过ISCO(SiO2:MeOH/CH2Cl2/1％NH4OH 0至5％)纯化，得到呈无色油状物的产物(267mg，60％)。LC/UV(202nm):RT＝9.81min。MS(APCI):m/z+ 1
(MH)794.7。H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 6.13(t,1H,J＝4.5Hz)；4.85(p,1H,J＝6.0Hz)；
4.04(t,2H,J＝6.6Hz)；3.32-3.26(m,2H)；2.85(s,6H)；2.52-2.23(m,10H)；1.67-1.18(m,
64H)；0.87(m,9H)。

[1393] BW.化合物111：8-((3-(3,3-二甲基硫代脲基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1394]

[1395] 化学式：C48H95N3O4S

[1396] 分子量：810.37

[1397] 在0℃下，向8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(400mg，0.553mmol)和三乙胺(0.15mL，1.10mmol)于10mL二氯甲烷中的溶液中逐滴添加硫代光气(51μL，0.664mmol)，并在室温下搅拌反应混合物6小时。之后，将反应物冷却至0℃，并添加二甲基胺于THF中的溶液(2.0M，0.55mL，1.10mmol)。接着，在室温下搅拌反应物16小时。MS显示产物，并将混合物用二氯甲烷稀释并用饱和碳酸氢钠和盐水洗涤。经硫酸钠干燥后，浓缩滤液并通过ISCO(SiO2:MeOH/CH2Cl2/1％NH4OH 0至5％)纯化，得到呈褐色油状物的产物(346mg，77％)。LC/UV(202nm):RT＝9.89min。MS(APCI):m/z(MH+)810.7。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm8.12(bs,1H)；4.85(p,1H,J＝6.0Hz)；4.04(t,2H,J＝6.6Hz)；3.74-
3.64(m,2H)；3.20(s,6H)；2.62-2.23(m,10H)；1.77-1.17(m,64H)；0.87(m,9H)。

[1398] BX.化合物112：8-((3-(3-甲基脲基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1399]

[1400] 化学式：C47H93N3O5

[1401] 分子量：780.28

[1402] 向8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(400mg，0.553mmol)于10mL二氯甲烷中的0℃溶液中添加异氰酸甲酯(38mg，0.664mmol)，并在室温下搅拌反应混合物16小时。MS显示产物。将混合物用二氯甲烷稀释并用饱和碳酸氢钠和盐水洗涤。之后，将其用硫酸钠干燥，浓缩滤液并通过ISCO(SiO2:MeOH/CH2Cl2/1％NH4OH 0至
5％)纯化，得到呈无色油状物的产物(320mg，70％)。LC/UV(202nm):RT＝9.63min。MS(APCI):m/z(MH+)780.7。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 5.54(bs,1H)；4.85(p,1H,J＝
6.0Hz)；4.76(bs,1H)；4.04(t,2H,J＝6.6Hz)；3.23(t,2H,J＝5.8Hz)；2.74(d,3H,J＝
2.0Hz)；2.47(t,2H,J＝6.0Hz)；2.37(t,4H,J＝7.4Hz)；2.31-2.23(m,4H)；1.68-1.17(m,
64H)；0.87(m,9H)。

[1403] BY.化合物113：8-((3-(3-甲基硫代脲基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1404]

[1405] 化学式：C49H93N3O4S

[1406] 分子量：795.69

[1407] 向8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(400mg，0.553mmol)于10mL二氯甲烷中的0℃溶液中添加异硫代氰酸甲酯(45μL，0.664mmol)，并在室温下搅拌反应混合物16小时。MS显示产物。将混合物浓缩并通过ISCO(SiO2:MeOH/CH2Cl2/
1％NH4OH 0至5％)纯化，得到呈无色油状物的产物(312mg，70％)。LC/UV(202nm):RT＝
9.96min。MS(APCI):m/z(MH+)796.7。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.85(p,1H,J＝6.0Hz)；
4.04(t,2H,J＝6.6Hz)；3.51(bs,2H)；2.93(bs,3H)；2.52(t,2H,J＝6.0Hz)；2.41(t,4H,J＝
7.8Hz)；2.31-2.23(m,4H)；1.68-1.17(m,66H)；0.86(m,9H)。

[1408] BZ.化合物114：8-((3-(2,4-二氧代-3,4-二氢嘧啶-1(2H)-基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1409]

[1410] 化学式：C49H91N3O6

[1411] 分子量：818.28

[1412] 在密封管中，在100℃下将8-((3-氯丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(500mg，0.67mmol)、尿嘧啶(300mg，2.67mmol)和1,8-二氮杂双环十一碳-7-烯(150μL，1.07mmol)于3mL DMF中的混合物加热16小时。将反应混合物浓缩至干并使其在二氯甲烷与水之间分配。将有机层用盐水洗涤。之后，将其用硫酸钠干燥，浓缩滤液并通过ISCO(SiO2:MeOH/CH2Cl2/1％NH4OH 0至5％)纯化，得到呈黄色油状物的产物(268mg，49％)。LC/UV(202nm):RT＝8.91min。MS(APCI):m/z(MH+)818.7。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 8.19(bs,1H)；7.24(d,1H,J＝7.7Hz)；5.64(d,1H,J＝7.7Hz)；4.85(p,1H,J＝6.0Hz)；4.04(t,
2H,J＝6.6Hz)；3.76(t,2H,J＝7.0Hz)；2.45-2.24(m,10H)；1.81(p,2H,J＝6.6Hz)；1.68-
1.17(m,62H)；0.87(m,9H)。

[1413] CA.化合物115：8-((3-(4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1414]

[1415] 化学式：C49H92N4O5

[1416] 分子量：817.30

[1417] 向胞嘧啶(82mg，0.74mmol)于1mL DMF中的悬浮液中添加NaH(30mg，0.74mmol)并在室温下搅拌反应混合物30分钟。接着添加8-((3-氯丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(500mg，0.67mmol)于2mL DMF中的溶液并在密封管中，在100℃下加热混合物16小时。MS显示产物。将反应物用饱和碳酸氢钠猝灭并用己烷萃取(2X)。将合并的有机层用水和盐水洗涤。之后，将其用硫酸钠干燥，浓缩滤液并通过ISCO(SiO2:MeOH/CH2Cl2/1％NH4OH 0至5％)纯化，得到呈黄色油状物的产物(310mg，56％)。LC/UV(202nm):RT＝8.32min。MS(APCI):m/z(MH+)817.7。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 7.34(d,1H,J＝7.1Hz)；5.61(d,1H,J＝7.1Hz)；5.44(bs,2H)；4.85(p,1H,J＝6.0Hz)；4.04(t,2H,J＝
6.6Hz)；3.79(t,2H,J＝7.0Hz)；2.42-2.22(m,9H)；1.84(t,2H,J＝6.6Hz)；1.68-1.17(m,
63H)；0.86(m,9H)。

[1418] CB.化合物116：8-((3-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1419]

[1420] 化学式：C50H92N6O4

[1421] 分子量：841.32

[1422] 在密封管中，在90℃下将8-((3-氯丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(500mg，0.67mmol)、腺嘌呤(135mg，1.0mmol)和1,8-二氮杂双环十一碳-7-烯(137μL，1.0mmol)于2mL DMF中的混合物加热16小时。将反应混合物浓缩至干并使其在二氯甲烷与水之间分配。有机层用盐水洗涤。之后，将其用硫酸钠干燥，浓缩滤液并通过ISCO(SiO2:MeOH/CH2Cl2/1％NH4OH 0至5％)纯化，得到呈黄色油状物的产物(325mg，57％)。LC/UV(202nm):RT＝8.47min。MS(APCI):m/z(MH+)841.7。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm8.36(s,1H)；7.80(s,1H)；5.51(bs,2H)；4.85(p,1H,J＝6.0Hz)；4.24(t,2H,J＝7.0Hz)；4.04(t,2H,J＝6.6Hz)；2.45-2.24(m,10H)；2.01(p,2H,J＝6.9Hz)；1.68-1.17(m,62H)；0.86(m,9H)。

[1423] CC.化合物118：8-((2-羟基乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸3,4-二戊基苯酯

[1424] 5-甲氧基-2-(戊-1-炔-1-基)苯甲醛(参见例如Bioorg.Med.Chem.Lett.2013,23,1365)

[1425]

[1426] 化学式：C13H14O2

[1427] 分子量：202.25

[1428] 在氮气下，将2-溴-5-甲氧基苯甲醛(4.30g，20mmol)、1-戊炔(3.0mL，30mmol)、双(三苯基膦基)氯化钯(702mg，1mmol)、CuI(380mg，2.0mmol)和三乙胺(5.6mL，40mmol)于60mL THF中的混合物加热至50℃，保持16小时。TLC显示起始物质消失。将反应混合物浓缩至干。将残余物溶解于二氯甲烷中并用水和盐水洗涤。经硫酸钠干燥后，浓缩滤液且将残余物通过ISCO(SiO2:EtOAc/己烷0至5％)纯化，得到呈深褐色油状物的产物(3.00g，74％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 10.49(s,1H)；7.42(d,1H,J＝8.5Hz)；7.36(d,1H,J＝2.8Hz)；
7.07(dd,1H,J＝8.5Hz,2.8Hz)；3.84(s,3H)；2.44(t,2H,J＝7.0Hz)；1.62(m,2H)；1.05(t,
3H,J＝7.2Hz)。

[1429] 4-甲氧基-2-(戊-1-烯-1-基)-1-(戊-1-炔-1-基)苯

[1430]

[1431] 化学式：C17H22O

[1432] 分子量：242.36

[1433] 在0℃下，向丁基三苯基膦溴化物(8.88g，22.2mmol)于75mL THF中的悬浮液中添加叔丁醇钾(2.50g，22.2mmol)。30分钟之后，接着将5-甲氧基-2-(戊-1-炔-1-基)苯甲醛(3.00g，14.8mmol)于25mL THF中的溶液缓慢添加至橙色悬浮液中。使反应混合物升温至室温并搅拌60小时。添加饱和氯化铵溶液并用乙醚(2X)猝灭混合物，并用盐水洗涤合并的有机层。经硫酸钠干燥后，浓缩滤液且将残余物通过ISCO(SiO2:EtOAc/己烷0至5％)纯化，得到呈褐色油状物的产物(3.46g，96％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 7.33(d,0.5H,J＝8.5Hz)；7.26(d,0.5H,J＝8.5Hz)；6.99(d,0.5H,J＝2.8Hz)；6.88-6.80(m,1H)；6.73-6.61(m,1.5H)；6.25(dt,0.5H,J＝15.9Hz,6.9Hz)；5.73(dt,0.5H,J＝11.5Hz,7.4Hz)；3.80(s,
3H)；2.45-2.37(m,2H)；2.31-2.18(m,2H)；1.71-1.41(m,4H)；1.09-0.90(m,6H)。

[1434] 4-甲氧基-1,2-二戊基苯

[1435]

[1436] 化学式：C17H28O

[1437] 分子量：248.41

[1438] 在氢气球下，将4-甲氧基-2-(戊-1-烯-1-基)-1-(戊-1-炔-1-基)苯(3.46g，14.3mmol)和Pd/C(10％，300mg)于60mL EtOH中的混合物搅拌60小时。TLC显示完全反应。将反应混合物通过硅藻土过滤并浓缩，得到呈黄色油状物的产物(3.70g，定量)，不经纯化即用于下一步骤。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 7.05(d,1H,J＝8.2Hz)；6.72-6.55(m,2H)；
3.78(s,3H)；2.59-2.50(m,4H)；1.62-1.48(m,4H)；1.39-1.28(m,8H)；0.93-0.86(m,6H)。

[1439] 3,4-二戊基苯酚

[1440]

[1441] 化学式：C16H26O

[1442] 分子量：234.38

[1443] 在-78℃下，向4-甲氧基-1,2-二戊基苯(3.40g，13.7mmol)于75mL二氯甲烷中的溶液中逐滴添加BBr3(1.65mL，17.1mmol)，且接着使反应物经3小时升温至室温。TLC显示完全反应。通过饱和碳酸氢钠添加猝灭反应物，接着将其用二氯甲烷(2X)进行萃取。将合并的有机层用盐水洗涤并经硫酸钠干燥。浓缩之后，将残余物通过ISCO(SiO2:EtOAc/己烷0至30％)纯化，得到呈褐色油状物的产物(3.35g，97％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 6.99(d,
1H,J＝8.0Hz)；6.64-6.59(m,2H)；4.45(bs,1H)；2.55-2.47(m,4H)；1.66-1.43(m,4H)；
1.39-1.28(m,8H)；0.93-0.86(m,6H)。

[1444] 8-溴辛酸3,4-二戊基苯酯

[1445]

[1446] 化学式：C24H39BrO2

[1447] 分子量：439.48

[1448] 向8-溴辛酸(2.23g,10mmol)和3,4-二戊基苯酚(2.34g，10mmol)于二氯甲烷(50mL)中的溶液中添加N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳化二亚胺盐酸盐(1.92g，
10mmol)和DMAP(244mg，2mmol)。在室温下搅拌反应物18小时。将反应物用二氯甲烷稀释并用饱和碳酸氢钠萃取。分离有机层并用盐水洗涤，经硫酸钠干燥。过滤有机层并真空蒸发。
将残余物通过ISCO(SiO2:EtOAc/己烷0至10％)纯化，得到呈褐色油状物的产物(4.30g，
98％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm7.11(d,1H,J＝7.7Hz)；6.84-6.77(m,2H)；3.41(t,2H,J＝6.9Hz)；2.60-2.49(m,6H)；1.92-1.69(m,4H)；1.62-1.29(m,18H)；0.90(m,6H)。

[1449] 8-((2-羟基乙基)氨基)辛酸壬酯

[1450]

[1451] 化学式：C19H39NO3

[1452] 分子量：329.53

[1453] 在室温下，将8-溴辛酸壬酯(2.50g，7.15mmol)和2-氨基乙醇(4.3mL，71.5mmol)于10mL EtOH中的混合物搅拌60小时。用己烷和水分配反应混合物，并用盐水洗涤有机层。经硫酸钠干燥后，浓缩滤液并通过ISCO(SiO2:MeOH/CH2Cl2/1％NH4OH 0至20％)纯化，得到呈白色固体的产物(1.57g，66％)。MS(APCI):m/z(MH+)330.3。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm
4.04(t,2H,J＝6.6Hz)；3.63(t,2H,J＝5.2Hz)；2.77(t,2H,J＝5.1Hz)；2.61(t,2H,J＝
7.1Hz)；2.28(t,2H,J＝7.4Hz)；1.99(bs,2H)；1.67-1.20(m,4H)；1.62-1.29(m,17H)；0.87(m,6H)。

[1454] 8-((2-羟基乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸3,4-二戊基苯酯

[1455]

[1456] 化学式：C43H77NO5

[1457] 分子量：688.09

[1458] 在密封管中，将8-((2-羟基乙基)氨基)辛酸壬酯(500mg，1.52mmol)、8-溴辛酸3,4-二戊基苯酯(1.00g，2.27mmol)和N,N-二异丙基乙基胺(0.40mL，2.27mmol)于叔丁醇(3mL)中的溶液加热至60℃，保持60小时。将反应物冷却至室温并真空蒸发溶剂。将残余物通过ISCO(SiO2:MeOH/CH2Cl2/1％NH4OH 0至5％)纯化，得到混合物(365mg)，接着混合物通过ISCO(EtOAc/己烷/0.5％Et3N 0至50％)纯化，得到呈无色油状物的产物(80mg)。LC/UV(214nm):RT＝10.23min。MS(APCI):m/z(MH+)688.6。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 7.11(d,
1H,J＝8.0Hz)；6.84-6.77(m,2H)；4.04(t,2H,J＝6.6Hz)；3.51(t,2H,J＝5.5Hz)；2.60-
2.38(m,12H)；2.28(t,2H,J＝7.4Hz)；1.79-1.19(m,37H)；0.92-0.82(m,9H)。

[1459] CD.化合物119：8-((2-羟基乙基)(8-氧代-8-(4-戊基苯氧基)辛基)氨基)辛酸壬酯

[1460] 8-溴辛酸4-戊基苯酯

[1461]

[1462] 化学式：C19H29BrO2

[1463] 分子量：369.34

[1464] 向8-溴辛酸(2.00g，8.96mmol)和4-戊基苯酚(3.07mL g，17.9mmol)于二氯甲烷(50mL)中的溶液中添加N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳化二亚胺盐酸盐(1.72g，8.96mmol)和DMAP(220mg，1.79mmol)。在室温下搅拌反应物60小时。将反应物用二氯甲烷稀释并用饱和碳酸氢钠萃取。分离有机层并用盐水洗涤，并经硫酸钠干燥。过滤有机层并真空蒸发。将残余物通过ISCO(SiO2:EtOAc/己烷0至10％)纯化，得到呈无色油状物的产物
1
(3.12g，94％)。H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 7.16(d,2H,J＝8.5Hz)；6.96(d,2H,J＝
8.5Hz)；3.41(t,2H,J＝6.9Hz)；2.61-2.49(m,4H)；1.92-1.69(m,4H)；1.65-1.25(m,10H)；
0.88(m,3H)。

[1465] 8-((2-羟基乙基)(8-氧代-8-(4-戊基苯氧基)辛基)氨基)辛酸壬酯

[1466]

[1467] 化学式：C38H67NO5

[1468] 分子量：617.96

[1469] 在密封管中，将8-((2-羟基乙基)氨基)辛酸壬酯(500mg，1.52mmol)、8-溴辛酸4-戊基苯酯(840mg，2.28mmol)和N,N-二异丙基乙基胺(0.40mL，2.28mmol)于叔丁醇(3mL)中的溶液加热至60℃，保持48小时。将反应物冷却至室温并真空蒸发溶剂。将残余物通过ISCO(SiO2:MeOH/CH2Cl2/1％NH4OH 0至5％)纯化，得到混合物(360mg)，接着混合物通过ISCO(EtOAc/己烷/0.5％Et3N 0至50％)纯化，得到呈无色油状物的产物(95mg)。LC/UV(214nm):RT＝9.63min。MS(APCI):m/z(MH+)618.5。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 7.11(d,1H,J＝
8.0Hz)；6.84-6.77(m,2H)；4.04(t,2H,J＝6.6Hz)；3.51(t,2H,J＝5.5Hz)；2.60-2.38(m,
12H)；2.28(t,2H,J＝7.4Hz)；1.79-1.19(m,37H)；0.92-0.82(m,9H)。

[1470] CE.化合物120：8-((2-羟基乙基)(8-氧代-8-(3-戊基苯氧基)辛基)氨基)辛酸壬酯

[1471] 3-戊基苯酚(参考：Tetrahedron Lett.2013,54,52)

[1472]

[1473] 化学式：C11H16O

[1474] 分子量：164.25

[1475] 在-78℃下，向叔丁醇钾(6.73g，60mmol)于15mL戊烷中的悬浮液中依序添加四甲基乙二胺(9.0mL，60mmol)和BuLi(2.5M的己烷溶液，24mL，60mmol)，并缓慢添加间甲酚(2.6mL，25mmol)于10mL戊烷中的溶液。使反应混合物升温至-20℃，保持3小时。添加30mL THF并将反应物冷却至-60℃。缓慢添加丁基溴(4.8mL，45mmol)，并使混合物升温至室温并搅拌16小时。冷却至0℃之后，用4M HCl将反应混合物酸化至约pH 3，接着用乙醚萃取。将合并的有机层用盐水洗涤并经硫酸钠干燥。浓缩之后，残余物通过ISCO(EtOAc/己烷0至5％)纯化，得到产物与起始物质的混合物，真空蒸馏，得到呈无色油状物的产物(1.23g，65％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 7.14(t,1H,J＝7.7Hz)；6.75(d,1H,J＝7.7Hz)；6.67-6.61(m,
2H)；4.62(s,1H)；2.55(t,2H,J＝7.7Hz)；1.67-1.52(m,2H)；1.38-1.24(m,4H)；0.88(t,3H,J＝6.9Hz)。

[1476] 8-溴辛酸3-戊基苯酯

[1477]

[1478] 化学式：C19H29BrO2

[1479] 分子量：369.34

[1480] 向8-溴辛酸(1.84g，8.20mmol)和3-戊基苯酚(1.23g，7.49mmol)于二氯甲烷(40mL)中的溶液中添加N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳化二亚胺盐酸盐(1.58g，
8.20mmol)和DMAP(183mg，1.50mmol)。在室温下搅拌反应物16小时。将反应物用二氯甲烷稀释并用饱和碳酸氢钠萃取。分离有机层并用盐水洗涤，经硫酸钠干燥。过滤有机层并真空蒸发。残余物通过ISCO(SiO2:EtOAc/己烷0至10％)纯化，得到呈无色油状物的产物(2.23g，
80％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 7.26(t,1H,J＝8.5Hz)；7.03(d,1H,J＝7.6Hz)；6.91-
6.84(m,2H)；3.41(t,2H,J＝6.9Hz)；2.61-2.49(m,4H)；1.92-1.69(m,4H)；1.65-1.25(m,
12H)；0.88(t,3H,J＝6.9Hz)。

[1481] 8-((2-羟基乙基)(8-氧代-8-(3-戊基苯氧基)辛基)氨基)辛酸壬酯

[1482]

[1483] 化学式：C38H67NO5

[1484] 分子量：617.96

[1485] 在密封管中，在60℃下将8-((2-羟基乙基)氨基)辛酸壬酯(500mg，1.52mmol)、8-溴辛酸3-戊基苯酯(840mg，2.28mmol)和N,N-二异丙基乙基胺(0.40mL，2.28mmol)于叔丁醇(3mL)中的溶液搅拌16小时。将反应物冷却至室温并真空蒸发溶剂。残余物通过ISCO(SiO2:MeOH/CH2Cl2/1％NH4OH 0至5％)纯化，得到混合物(247mg)，接着将混合物通过ISCO(EtOAc/己烷/0.5％Et3N 0至50％)纯化，得到呈无色油状物的产物(150mg)。LC/UV(202nm):RT＝+ 1
7.45min。MS(APCI):m/z(MH)618.5。H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 7.26(t,1H,J＝8.5Hz)；
7.03(d,1H,J＝7.6Hz)；6.91-6.84(m,2H)；4.05(t,2H,J＝6.6Hz)；3.51(t,2H,J＝5.5Hz)；
2.64-2.38(m,10H)；2.28(t,2H,J＝7.8Hz)；1.79-1.19(m,41H)；0.91-0.82(m,6H)。

[1486] CF.化合物121：8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯8-((3-氯丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1487]

[1488] 化学式：C45H88ClNO4

[1489] 分子量：742.65

[1490] 在0℃下，向8-((3-羟基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(8.00g，11.0mmol)和三乙胺(2.0mL，14.4mmol)于二氯甲烷(200mL)中的溶液中逐滴添加甲烷磺酰氯(1.07mL，13.8mmol)，并使反应混合物达到室温，保持16小时。TLC和MS显示完全反应。将反应混合物用二氯甲烷稀释并用饱和碳酸氢钠和盐水洗涤。经硫酸钠干燥后，在真空下移除溶剂，得到呈褐色油状物的产物(7.30g，89％)。NMR显示含有少量甲磺酸酯和所希+ 1望的氯化物的粗品。该粗品不经纯化即用于下一步骤。MS(APCI):m/z(MH)742.6。H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.86(p,1H,J＝6.0Hz)；4.05(t,2H,J＝6.9Hz)；3.58(t,2H,J＝
6.6Hz)；2.58-2.22(m,9H)；1.92-1.16(m,65H)；0.87(m,9H)。

[1491] 8-((3-叠氮基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1492]

[1493] 化学式：C45H88N4O4

[1494] 分子量：749.22

[1495] 在密封管中，将8-((3-氯丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(4.20g，5.66mmol)和叠氮化钠(1.75g，28.28mmol)于20mL DMF中的混合物加热至100℃，保持16小时。之后，将其冷却至室温，用水稀释反应混合物并用己烷萃取。用水和盐水洗涤合并的有机层，接着经硫酸钠干燥。在过滤和浓缩之后，将残余物通过ISCO(SiO2:MeOH/CH2Cl2/1％NH4OH 0至5％)纯化，得到呈褐色油状物的产物(3.66g，86％)。MS(APCI):m/z(MH+)749.7。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.85(p,1H,J＝6.0Hz)；4.04(t,2H,J＝6.7Hz)；3.32(t,2H,J＝6.9Hz)；2.58-2.22(m,10H)；1.72-1.19(m,64H)；0.87(m,9H)。

[1496] 8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1497]

[1498] 化学式：C45H90N2O4

[1499] 分子量：723.23

[1500] 在氢气球下，将8-((3-叠氮基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(3.66g，4.89mmol)和Pd/C(10％,400mg)于150mL EtOH中的混合物搅拌16小时。MS显示完全反应。通过硅藻土过滤反应混合物，并浓缩滤液，并通过ISCO(SiO2:MeOH/CH2Cl2/1％NH4OH 0至20％)纯化，得到呈褐色油状物的产物(3.08g，87％)。LC/UV(202nm):RT＝
8.39min。MS(APCI):m/z(MH+)723.7。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.85(p,1H,J＝6.0Hz)；
4.04(t,2H,J＝6.6Hz)；2.70(t,2H,J＝6.9Hz)；2.46-2.24(m,10H)；1.65-1.16(m,66H)；
0.87(m,9H)。

[1501] CG.化合物122：8-((6-(癸烷-2-基氧基)-6-氧代己基)(2-羟基乙基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1502]

[1503] 化学式：C43H85NO5

[1504] 分子量：696.16

[1505] 化合物122是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.58min。对于C43H85NO5，MS(ES):m/z(MH+)697.1。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.91(m,2H)；
3.62(m,2H)；2.81-2.42(br.m,5H)；2.30(m,4H)；1.73-1.43(m,14H)；1.28(m,48H)；0.90(m,
9H)。

[1506] CH.化合物123：8-(甲基(8-壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1507]

[1508] 化学式：C26H53NO2

[1509] 分子量：411.72

[1510] 在室温下，将8-溴辛酸十七烷-9-基酯(200mg，0.433mmol)于甲胺(10mL，19.92mmol，2M的THF溶液)中的溶液搅拌18小时。在真空中浓缩反应混合物。残余物通过硅胶色谱法(10-100％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到8-(甲基氨基)辛酸十七烷-9-基酯(113mg，0.27mmol，63％)。UPLC/ELSD:RT＝2.76min。对于C26H53NO2，MS(ES):m/z(MH+)412.4。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.92(p,1H)；2.62(t,2H)；
2.48(s,3H)；2.32-2.27(m,2H)；1.66-1.52(br.m,8H)；1.28(m,30H)；0.90(m,6H)。

[1511] 8-(甲基(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1512]

[1513] 化学式：C43H85NO4

[1514] 分子量：680.16

[1515] 将8-(甲基氨基)辛酸十七烷-9-基酯(113mg，0.27mmol)、8-溴辛酸壬酯(115mg，0.33mmol)和N,N-二异丙基乙基胺(67μL，0.38mmol)以及碘化钾(5mg，0.027mmol)的溶液溶解于乙醇中并在62℃下搅拌48小时。将反应物冷却至室温并真空蒸发溶剂。残余物通过硅胶色谱法(0-100％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到8-(甲基(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(75mg，0.11mmol，41％)。UPLC/ELSD:RT＝3.84min。对于C43H85NO4，MS(ES):m/z(MH+)681.0。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm
4.88(p,1H)；4.08(t,2H)；2.88-2.67(br.m,7H)；2.34-2.27(m,4H)；1.80(m,4H)；1.63-1.52(br.m,10H)；1.37-1.28(br.m,48H)；0.90(m,9H)。

[1516] CI.化合物124：8,8'-(甲基氮烷二基)二辛酸二(十七烷-9-基)酯

[1517]

[1518] 化学式：C51H101NO4

[1519] 分子量：792.37

[1520] 在室温下，将8-溴辛酸十七烷-9-基酯(500mg，1.08mmol)于甲胺(11mL，21.67mmol，2M的THF溶液)中的溶液搅拌6小时。在真空中浓缩反应混合物。残余物通过硅胶色谱法(20-100％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到8,
8'-(甲基氮烷二基)二辛酸二(十七烷-9-基)酯(26mg，0.03mmol，3％)。UPLC/ELSD:RT＝
4.03min。对于C51H101NO4，MS(ES):m/z(MH+)793.3。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.89(p,
2H)；2.32-2.24(m,11H)；1.66-1.28(br.m,76H)；0.90(m,12H)。

[1521] CJ.化合物125：3-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)丙酸

[1522] 8-((8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1523]

[1524] 化学式：C42H83NO4

[1525] 分子量：666.13

[1526] 在-78℃下，向草酰氯(0.25mL，3.0mmol)于3mL二氯甲烷中的溶液中逐滴添加DMSO(0.43mL，6.0mmol)于2mL二氯甲烷中的溶液，接着立即添加8-((3-羟基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(1.45g，2.0mmol)于二氯甲烷(10mL)中的溶液。在此温度下将其搅拌30分钟之后，添加三乙胺(1.45mL，10.4mmol)并使反应混合物升温至室温。
TLC和MS显示完全反应(M+1:722.7)，并将反应混合物用水稀释并用己烷(2×)萃取。用盐水洗涤合并的有机层。经硫酸钠干燥后，浓缩滤液且残余物通过ISCO(SiO2:EtOAc/己烷/
0.5％Et3N 0至50％)纯化，得到呈褐色油状物的产物(810mg，61％)。MS(APCI):m/z(MH+)
666.7。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.85(p,1H,J＝6.0Hz)；4.05(t,2H,J＝6.9Hz)；2.56(t,4H,J＝7.1Hz)；2.31-2.24(m,4H)；1.67-1.19(m,63H)；0.87(m,9H)。

[1527] 8-((3-(苯甲氧基)-3-氧代丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1528]

[1529] 化学式：C52H93NO6

[1530] 分子量：828.32

[1531] 在室温下，将8-((8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(798mg，1.2mmol)和丙烯酸苯甲酯(293mg，1.8mmol)于二氯甲烷(20mL)中的溶液搅拌16小时。TLC和MS显示几乎无反应，添加10mL MeOH并在室温下搅拌反应混合物16小时。MS显示含少量甲基酯的产物(M+1:829.8,752.7)。将反应混合物浓缩至干并通过ISCO(SiO2:EtOAc/己烷0至
35％)纯化，得到呈无色油状物的产物(280mg，28％)。MS(APCI):m/z(MH+)829.8。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 7.36-7.32(m,5H)；5.10(s,2H)；4.85(p,1H,J＝6.0Hz)；4.04(t,2H,J＝6.9Hz)；2.78(t,2H,J＝6.9Hz)；2.46(t,2H,J＝7.0Hz)；2.36(t,4H,J＝6.9Hz)；2.30-
2.24(m,4H)；1.67-1.19(m,62H)；0.87(m,9H)。

[1532] 3-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)丙酸

[1533]

[1534] 化学式：C45H87NO6

[1535] 分子量：738.19

[1536] 在氢气球下，将8-((3-(苯甲氧基)-3-氧代丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(280mg，0.34mmol)和Pd/C(10％，28mg)于20mL EtOAc中的混合物搅拌1小时。MS显示完全反应。过滤反应混合物并浓缩滤液。将残余物通过ISCO(SiO2:MeOH/CH2Cl2 0至10％)纯化，得到呈无色油状物的产物(230mg，91％)。LC/UV(214nm):RT＝12.38min。MS+ 1
(APCI):m/z(MH)838.7。H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.85(p,1H,J＝6.0Hz)；4.04(t,2H,J＝6.6Hz)；2.85(t,2H,J＝6.0Hz)；2.65(t,4H,J＝7.7Hz)；2.48(t,2H,J＝6.0Hz)；2.32-
2.24(m,4H)；1.67-1.17(m,63H)；0.87(m,9H)。

[1537] CK.化合物126：8-(甲基(4-(壬氧基)-4-氧代丁基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1538]

[1539] 化学式：C39H77NO4

[1540] 分子量：624.05

[1541] 将8-(甲基氨基)辛酸十七烷-9-基酯(103mg，0.25mmol)、4-溴丁酸壬酯(88mg，0.30mmol)和N,N-二异丙基乙基胺(61μL，0.35mmol)的溶液溶解于乙醇中并在62℃下搅拌
48小时。将反应物冷却至室温并真空蒸发溶剂。将残余物溶解于乙酸乙酯中并用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤。分离有机层并用盐水洗涤，经Na2SO4干燥并在真空中蒸发。残余物通过硅胶色谱法(0-100％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到8-(甲基(4-(壬氧基)-4-氧代丁基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(90mg，0.14mmol，58％)。UPLC/ELSD:RT＝3.58min。对于C39H77NO4，MS(ES):m/z(MH+)624.8。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm
4.89(p,1H)；4.08(t,2H)；2.38-2.24(br.m,11H)；1.82(m,2H)；1.64-1.28(br.m,52H)；0.90(m,9H)。

[1542] CL.化合物127：8-((9-((双(壬氧基)磷酰基)氧基)壬基)(2-羟基乙基)氨基)辛酸壬酯

[1543]

[1544] 化学式：C46H94NO7P

[1545] 分子量：804.232

[1546] 化合物127是以与化合物131相同的方式并根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.58min。对于C46H94NO7P，MS(ES):m/z(MH+)805.1。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.05(m,8H)；3.55(m,2H)；2.59(m,2H)；2.46(m,4H)；2.31(t,2H),1.67(m,11H)；1.29(m,55H)；0.90(m,9H)。

[1547] CM.化合物128：8-((6-((1-环丙基壬基)氧基)-6-氧代己基)(2-羟基乙基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1548]

[1549] 化学式：C45H87NO5

[1550] 分子量：722.193

[1551] 化合物128是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.67min。对于C45H87NO5，MS(ES):m/z(MH+)722.9。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.89(m,1H)；
4.30(m,1H)；3.56(m,2H)；2.72-2.39(m,6H)；2.30(m,4H),1.76-1.17(m,58H)；0.90(m,
10H)；0.61-0.35(m,3H)；0.28(m,1H)。

[1552] CN.化合物129：6-((8-(二辛基氨基)-8-氧代辛基)(2-羟基乙基)氨基)己酸十一烷酯

[1553]

[1554] 化学式：C43H86N2O4

[1555] 分子量：695.171

[1556] 化合物129是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.45min。对于C43H86N2O4，MS(ES):m/z(MH+)695.9。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.08(t,
2H)；3.54(m,2H),3.28(m,4H)；2.59(m,2H)；2.47(m,4H)；2.32(q,4H)；1.73-1.19(m,58H)；
0.90(m,9H)。

[1557] CO.化合物130：8-((8-(二辛基氨基)-8-氧代辛基)(2-羟基乙基)氨基)辛酸癸烷-2-基酯

[1558]

[1559] 化学式：C44H88N2O4

[1560] 分子量：709.198

[1561] 化合物130是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.46min。对于C44H88N2O4，MS(ES):m/z(MH+)709.9。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.90(m,
1H)；3.70(br.m,2H),3.35-3.15(m,4H)；2.96-2.41(br.m,6H)；2.29(m,4H)；1.74-1.43(m,
14H)；1.41-1.115(m,47H)；0.90(m,9H)。

[1562] CP.化合物131：8-((7-((双(辛氧基)磷酰基)氧基)庚基)(2-羟基乙基)氨基)辛酸壬酯

[1563] 磷酸7-溴庚酯二辛酯

[1564]

[1565] 化学式：C23H48BrO4P

[1566] 分子量：499.511

[1567] 在0℃下，向POCl3(1.91mL，20.5mmol)于DCM(20mL)中的溶液中缓慢添加Et3N(2.85mL，20.4mmol)，随后添加7-溴庚-1-醇(4.0g，20.5mmol)。在0℃下搅拌反应物4小时。
添加辛-1-醇(7.10mL，45.11mmol)和Et3N(8.9mL，63.8mmol)于DCM中的溶液并在室温下搅拌反应物16小时。用DCM稀释反应物并用饱和NaHCO3洗涤。分离有机层，经Na2SO4干燥，过滤，并真空蒸发。残余物通过ISCO，用(0-30％)EtOAc/己烷纯化，得到磷酸7-溴庚酯二辛酯(0.58g，1.16mmol，6％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.03(m,6H)；3.43(t,2H)；1.88(m,
2H)；1.70(m,6H)；1.54-1.23(m,26H)；0.90(m,6H)。

[1568] 8-((7-((双(辛氧基)磷酰基)氧基)庚基)(2-羟基乙基)氨基)辛酸壬酯

[1569]

[1570] 化学式：C42H86NO7P

[1571] 分子量：748.124

[1572] 化合物131是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.22min。对于C42H86NO7P，MS(ES):m/z(MH+)750.0。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.05(m,
8H)；3.51(m,2H)；2.60(br.m,2H)；2.46(m,4H)；2.31(t,2H)；1.76-1.15(m,58H)；0.90(m,
9H)。

[1573] CQ.化合物132：8-((7-((双(辛氧基)磷酰基)氧基)庚基)(2-羟基乙基)氨基)辛酸癸烷-2-基酯

[1574]

[1575] 化学式：C43H88NO7P

[1576] 分子量：762.15

[1577] 化合物132是以与化合物131相同的方式并根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.27min。对于C43H88NO7P，MS(ES):m/z(MH+)764.00。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.91(m,1H)；4.03(m,6H)；3.56(m,2H)；2.73-2.38(br.m,6H)；2.29(t,2H)；1.79-1.16(m,61H)；0.90(m,9H)。

[1578] CR.化合物133：双(2-己基癸酸)((2-羟基乙基)氮烷二基)双(壬烷-9,1-二基)酯[1579]

[1580] 化学式：C52H103NO5

[1581] 分子量：822.398

[1582] 化合物133是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.91min。对于C52H103NO5，MS(ES):m/z(MH+)824.0。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.09(t,
4H)；3.60(m,2H)；2.74–2.42(br.m,6H)；2.33(m,3H)；1.72-1.17(m,76H)；0.90(m,12H)。

[1583] CS.化合物134：2-己基癸酸9-((2-羟基乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)壬酯

[1584]

[1585] 化学式：C44H87NO5

[1586] 分子量：710.182

[1587] 化合物134是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.48min。对于C44H87NO5，MS(ES):m/z(MH+)712.0。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.08(m,4H)；
3.55(m,2H)；2.67–2.39(br.m,6H)；2.31(m,3H)；1.71-1.19(m,62H)；0.90(m,12H)。

[1588] CT.化合物135：2-辛基癸酸7-((8-(癸烷-2-基氧基)-8-氧代辛基)(2-羟基乙基)氨基)庚酯

[1589]

[1590] 化学式：C45H89NO5

[1591] 分子量：724.209

[1592] 化合物135是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.63min。对于C45H89NO5，MS(ES):m/z(MH+)726.0。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.91(m,1H)；
4.08(t,2H)；3.57(m,2H)；2.73–2.40(br.m,6H)；2.29(m,3H)；1.71-1.16(m,66H)；0.90(m,
9H)。

[1593] CU.化合物136：8-((2-羟基乙基)((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)氨基)辛酸壬酯

[1594] 代表性程序2：

[1595] 8-溴辛酸壬酯(方法A)

[1596]

[1597] 向8-溴辛酸(5g，22mmol)和壬-1-醇(6.46g，45mmol)于二氯甲烷(100mL)中的溶液中添加N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳化二亚胺盐酸盐(4.3g，22mmol)和DMAP(547mg，4.5mmol)。在室温下搅拌反应物18小时。用二氯甲烷稀释反应物并用饱和碳酸氢钠洗涤。分离有机层并用盐水洗涤，经MgSO4干燥。过滤有机层并真空蒸发。残余物通过硅胶色谱法(0-
10％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到8-溴辛酸壬酯(6.1g，17mmol，77％)。

[1598] 1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.06(t,2H)；3.40(t,2H)；2.29(t,2H)；1.85(m,2H)；1.72-0.97(m,22H)；0.88(m,3H)。

[1599] 8-((2-羟基乙基)氨基)辛酸壬酯

[1600]

[1601] 在62℃下，将8-溴辛酸壬酯(1.2g，3.4mmol)和2-氨基乙-1-醇(5mL，83mmol)于乙醇(2mL)中的溶液搅拌18小时。真空浓缩反应混合物并用乙酸乙酯和水萃取残余物。将有机层分离并用水和盐水洗涤，并经Na2SO4干燥。过滤有机层并在真空中蒸发。残余物通过硅胶色谱法(0-100％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到8-((2-羟基乙基)氨基)辛酸壬酯(295mg，0.9mmol，26％)。

[1602] UPLC/ELSD:RT＝1.29min。对于C19H39NO3，MS(ES):m/z(MH+)330.42

[1603] 1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.07(t,2H)；3.65(t,2H)；2.78(t,2H)；2.63(t,2H)；2.32-2.19(m,4H)；1.73-1.20(m,24H)；0.89(m,3H)

[1604] 8-((2-羟基乙基)((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)氨基)辛酸壬酯

[1605]

[1606] 化学式：C37H71NO3

[1607] 分子量：577.98

[1608] 在回流下，将8-((2-羟基乙基)氨基)辛酸壬酯(150mg，0.46mmol)、(6Z,9Z)-18-溴十八碳-6,9-二烯(165mg，0.5mmol)和N,N-二异丙基乙基胺(65mg，0.5mmol)于乙醇(2mL)中的溶液搅拌48小时。将反应物冷却至室温并真空蒸发溶剂。残余物通过硅胶色谱法(0-10％MeOH/二氯甲烷)纯化，得到呈HBr盐形式的8-((2-羟基乙基)((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)氨基)辛酸壬酯(81mg，0.14mmol，30％)。

[1609] UPLC/ELSD:RT＝3.24min。对于C37H71NO3，MS(ES):m/z(MH+)578.64

[1610] 1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 10.71(br.,1H)；5.36(br.m,4H)；4.04(m,4H)；3.22-2.96(br.m,5H)；2.77(m,2H)；2.29(m,2H)；2.04(br.m,4H)；1.86(br.m,4H)；1.66-1.17(br.m,40H)；0.89(m,6H)

[1611] CV.化合物137：12-(十二烷基(2-羟基乙基)氨基)十二烷酸甲酯

[1612] 12-溴十二烷酸甲酯

[1613]

[1614] 化学式：C13H25BrO2

[1615] 分子量：293.25

[1616] 向12-溴十二烷酸(2.5g，8.95mmol)于THF(7mL)中的溶液中添加甲醇(7.2mL，179mmol)。逐滴添加硫酸(0.50mL，8.95mmol)并在65℃下将反应物搅拌两小时。用5％NaHCO3和盐水洗涤反应混合物。有机层经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩。通过硅胶色谱法(0-20％EtOAc/己烷)纯化，得到12-溴十二烷酸甲酯(2.40g，92％)。

[1617] 1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 3.69(s,3H)；3.44(t,2H)；2.33(t,2H)；1.88(br.m,2H)；1.64(br.m,2H)；1.45(br.m,2H)；1.31(br.m,12H)。

[1618] 12-(十二烷基(2-羟基乙基)氨基)十二烷酸甲酯

[1619]

[1620] 化学式：C27H55NO3

[1621] 分子量：441.74

[1622] 向12-((2-羟基乙基)氨基)十二烷酸甲酯(413mg，1.51mmol)(从合成12,12'-((2-羟基乙基)氮烷二基)双十二烷酸酯分离)于MeCN(5mL)中的溶液中添加1-溴十二烷(452mg，1.81mmol)、K2CO3(418mg，3.02mmol)和KI(25mg，0.151mmol)。在82℃下搅拌反应物16小时。
将反应混合物冷却至室温，用H2O稀释，并用EtOAc萃取。用盐水洗涤合并的有机层，经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩。通过硅胶色谱法(0-100％[DCM、20％MeOH、1％NH4OH]/MeOH)纯化，得到12-(十二烷基(2-羟基乙基)氨基)十二烷酸甲酯(409mg，61％)。

[1623] UPLC/ELSD:RT＝2.39min。对于C27H55NO3，MS(ES):m/z(MH+)442.60

[1624] 1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 3.69(s,3H)；3.61(t,2H)；2.68(t,2H)；2.54(t,4H)；2.32(t,2H)；1.64(m,2H)；1.50(br.m,4H)；1.28(br.m,32H)；0.90(t,3H)。

[1625] CW.化合物138：8,8'-((2-羟基乙基)氮烷二基)二辛酸二壬酯

[1626] 代表性程序3：

[1627] 8,8'-((2-羟基乙基)氮烷二基)二辛酸二壬酯

[1628]

[1629] 化学式：C36H71NO5

[1630] 分子量：597.97

[1631] 在63℃下，将8-溴辛酸壬酯(200mg，0.6mmol)和2-氨基乙-1-醇(16mg，0.3mmol)以及N,N-二异丙基乙基胺(74mg，0.6mmol)于THF/CH3CN(1:1)(3mL)中的溶液搅拌72小时。将反应物冷却至室温并真空蒸发溶剂。用乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠萃取残余物。分离有机层，经Na2SO4干燥并真空蒸发。残余物通过硅胶色谱法(0-10％MeOH/二氯甲烷)纯化，得到8,8'-((2-羟基乙基)氮烷二基)二辛酸二壬酯(80mg，0.13mmol，43％)。

[1632] UPLC/ELSD:RT＝3.09min。对于C36H71NO5，MS(ES):m/z(MH+)598.85

[1633] 1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.05(m,4H)；3.57(br.m,2H)；2.71-2.38(br.m,6H)；2.29(m,4H),1.71-1.01(br.m,49H),0.88(m,6H)。

[1634] CX.化合物139：8,8'-((2-羟基乙基)氮烷二基)二辛酸二((Z)-壬-2-烯-1-基)酯[1635] 化合物139是遵循代表性程序3合成的。

[1636]

[1637] 化学式：C36H67NO5

[1638] 分子量：593.93

[1639] UPLC/ELSD:RT＝2.88min。对于C36H67NO5，MS(ES):m/z(MH+)594.78

[1640] 1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 5.60(m,2H)；5.50(m,2H)；4.59(m,4H)；3.96(br.m,2H)；3.20-2.94(br.m,5H)；2.28(m,4H)；2.07(m,4H)；1.80(br.m 4H)；1.59(br.m,6H)；
1.43-1.14(br.m,28H),0.85(m,6H)。

[1641] CY.化合物140：6,6'-((2-羟基乙基)氮烷二基)二己酸二((Z)-十一碳-2-烯-1-基)酯

[1642] 化合物140是遵循代表性程序3合成的。

[1643]

[1644] 化学式：C36H67NO5

[1645] 分子量：593.93

[1646] UPLC/ELSD:RT＝2.87min。对于C36H67NO5，MS(ES):m/z(MH+)594.74

[1647] 1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 5.73-5.44(m,4H)；4.62(m,4H)；3.55(m,2H)；2.73-2.39(br.m,6H)；2.39(m,4H)；2.09(m,4H)；1.64(m,4H)；1.55-1.14(br.m,33H)；0.88(m,
6H)。

[1648] CZ.化合物141：6,6'-((2-羟基乙基)氮烷二基)二己酸双十一烷酯

[1649] 化合物141是遵循代表性程序3合成的。

[1650]

[1651] 化学式：C36H71NO5

[1652] 分子量：597.97

[1653] UPLC/ELSD:RT＝3.03min。对于C36H71NO5，MS(ES):m/z(MH+)598.63

[1654] 1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.05(m,4H)；3.53(m,2H)；2.95(br.m,1H)；2.65-2.35(m,6H)；2.30(m,4H)；1.73-1.54(m,8H)；1.54-1.15(m,40H)；0.88(m,6H)。

[1655] DA.化合物142：12,12'-((2-羟基乙基)氮烷二基)双十二烷酸酯

[1656] 12,12'-((2-羟基乙基)氮烷二基)双十二烷酸酯

[1657]

[1658] 化学式：C28H55NO5

[1659] 分子量：485.75

[1660] 向12-溴十二烷酸甲酯(1.5g，5.12mmol)于MeCN(11mL)中的溶液中添加乙醇胺(0.310mL，5.12mmol)、K2CO3(1.42g，10.2mmol)和KI(85mg，0.512mmol)。在82℃下搅拌反应物16小时。将反应混合物冷却至室温，过滤，并用己烷洗涤固体。用己烷萃取滤液，并真空浓缩合并的滤液。通过硅胶色谱法(0-100％[DCM、20％MeOH、1％NH4OH]/MeOH)纯化，得到12,
12'-((2-羟基乙基)氮烷二基)双十二烷酸酯(563mg，45％)。

[1661] UPLC/ELSD:RT＝1.81min。对于C28H55NO5，MS(ES):m/z(MH+)486.63

[1662] 1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 3.69(s,6H)；3.59(br.m,2H)；2.75-2.40(br.m,6H)；2.32(t,4H)；1.64(m,4H)；1.48(br.m,4H)；1.29(br.m,28H)。

[1663] DB.化合物143：8-((2-羟基乙基)(7-((2-辛基癸基)氧基)-7-氧代庚基)氨基)辛酸壬酯

[1664] 2-辛基癸酸

[1665]

[1666] 化学式：C18H36O2

[1667] 分子量：284.48

[1668] 将二异丙基胺(2.92mL，20.8mmol)于THF(10mL)中的溶液冷却至-78℃并添加n-BuLi的溶液(7.5mL，18.9mmol，2.5M的己烷溶液)。使反应物升温至0℃。在0℃下，向癸酸(2.96g，17.2mmol)和NaH(754mg，18.9mmol，60％w/w)于THF(20mL)中的溶液中添加LDA的溶液并在室温下搅拌混合物30分钟。之后，添加1-碘代辛烷(5g，20.8mmol)并在45℃下加热反应混合物6小时。用1N HCl(10mL)猝灭反应物。将有机层经MgSO4干燥，过滤并真空蒸发。残余物通过硅胶色谱法(0-20％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到2-辛基癸酸(1.9g，6.6mmol)。

[1669] 1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 2.38(br.m,1H)；1.74-1.03(br.m,28H)；0.91(m,6H)。

[1670] 2-辛基癸-1-醇

[1671]

[1672] 化学式：C18H38O

[1673] 分子量：270.50

[1674] 在氮气下，在0℃下将2-辛基癸酸(746mg，2.6mmol)于无水THF(12mL)中的溶液添加至LAH(5.2mL，5.2mmol，1M的THF溶液)于无水THF(6mL)中的搅拌溶液中。使反应物升温至室温并在室温下搅拌12小时。添加饱和Na2SO4*10H2O溶液(10mL)。通过硅藻土塞过滤固体。真空蒸发滤液且残余物通过硅胶色谱法(0-20％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到2-辛基癸-1-醇(635mg，2.3mmol)。

[1675] 1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 3.54(d,2H)；1.56-1.21(br.m,30H)；0.91(t,6H)。

[1676] 7-溴庚酸2-辛基癸酯

[1677]

[1678] 7-溴庚酸2-辛基癸酯是根据方法A合成的。

[1679] 1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 3.96(d,2H)；3.40(t,2H)；2.31(t,2H)；1.86(m,2H)；1.71-1.19(m,35H)；0.88(m,6H)。

[1680] 8-((2-羟基乙基)(7-((2-辛基癸基)氧基)-7-氧代庚基)氨基)辛酸壬酯是使用代表性程序2合成的。

[1681]

[1682] 化学式：C44H87NO5

[1683] 分子量：710.182

[1684] UPLC/ELSD:RT＝5.23min。对于C44H87NO5，MS(ES):m/z(MH+)711.08

[1685] 1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.05(t,2H)；3.96(d,2H)；3.58(br.m,2H)；2.79-2.36(br.m,5H)；2.30(m,4H)；1.72-1.01(br.m,63H)；0.88(m,9H)。

[1686] DC.化合物144：8-((8-(二辛基氨基)-8-氧代辛基)(2-羟基乙基)氨基)辛酸壬酯[1687] 8-溴-N,N-二辛基辛酰胺

[1688]

[1689] 化学式：C24H48BrNO

[1690] 分子量：446.56

[1691] 向8-溴辛酸(1g，2.2mmol)和DMF(1滴)于二氯甲烷中的溶液中逐滴添加草酰氯(0.416mL，2.5mmol)。在室温下搅拌反应物1小时。蒸发溶剂并将残余物添加至二辛基胺(1.14g，4.8mmol)和DMAP(100mg，0.8mmol)的溶液中。将三乙胺逐滴添加至反应物中并搅拌反应物18小时。蒸发溶剂并将残余物溶解于乙酸乙酯和饱和NaHCO3中。分离有机层并用水和盐水洗涤。有机层经Na2SO4干燥，过滤并在真空中蒸发。残余物通过硅胶色谱法(0-100％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到8-溴-N,N-二辛基辛酰胺和氯-N,N-二辛基辛酰胺的混合物(736mg，1.6mmol)。

[1692] UPLC/ELSD:RT＝4.02min。对于C24H48BrNO，MS(ES):m/z(MH+)446.53

[1693] 1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 3.55(t,0.6H)；3.42(t,1.4H)；3.36-3.15(m,4H)；2.31(t,2H)；1.96-1.18(m,34H)；0.91(m,6H)。

[1694] 8-((8-(二辛基氨基)-8-氧代辛基)(2-羟基乙基)氨基)辛酸壬酯是利用代表性程序2合成的。

[1695]

[1696] 化学式：C43H86N2O4

[1697] 分子量：695.17

[1698] UPLC/ELSD:RT＝4.24min。对于C43H86N2O4，MS(ES):m/z(MH+)696.16

[1699] 1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.05(t,2H)；3.57(br.m,2H)；3.35-3.14(m,4H)；2.80-.2.20(m,10H)；1.74-1.00(br.m,59H)；0.88(m,9H)。

[1700] DD.化合物145：8-((2-羟基乙基)(8-(甲基(辛基)氨基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1701]

[1702] 化学式：C44H88N2O4

[1703] 分子量：709.198

[1704] 化合物145是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝2.17min。对于C44H88N2O4，MS(ES):m/z(MH+)710.0。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.89(m,
1H)；3.55(m,2H)；3.37(t,1H)；3.27(t,1H)；2.98(s,1.5H)；2.93(s,1.5H)；2.59(m,2H)；
2.47(m,4H)；2.30(m,4H),1.75-1.20(m,60H)；0.90(m,9H)。

[1705] DE.化合物146：8-((2-羟基乙基)(6-(甲基(辛基)氨基)-6-氧代己基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1706]

[1707] 化学式：C42H84N2O4

[1708] 分子量：681.144

[1709] 化合物146是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝2.01min。对于C42H84N2O4，MS(ES):m/z(MH+)682.0。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.88(m,
1H)；3.55(m,2H)；3.37(t,1H)；3.26(t,1H)；2.98(s,1.5H)；2.93(s,1.5H)；2.59(m,2H)；
2.48(m,4H)；2.31(m,4H),1.76-1.18(m,56H)；0.90(m,9H)。

[1710] DF.化合物147：10-((2-羟基乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)癸酸十三烷-7-基酯

[1711]

[1712] 化学式：C42H83NO5

[1713] 分子量：682.128

[1714] 化合物147是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝2.16min。对于C42H83NO5，MS(ES):m/z(MH+)683.0。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.89(m,1H)；
4.08(m,2H)；3.55(m,2H)；2.59(m,2H)；2.46(m,4H)；2.30(m,4H),1.72-1.18(m,58H)；0.90(m,9H)。

[1715] DG.化合物148：8-((2-羟基乙基)(8-((2-甲氧基壬基)氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1716] 1-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)壬-2-醇

[1717]

[1718] 化学式：C25H38O2Si

[1719] 分子量：398.662

[1720] 在室温下，将TBDPSCl(8.58g，31.2mmol)添加至壬-1,2-二醇(5.0g，31.2mmol)和咪唑(4.24g，62.4mmol)于DMF中的混合物中。在室温下搅拌反应物过夜。将反应物用水(150mL)稀释并用EtOAc/己烷(1:1)(4×)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，分离，用Na2SO4干燥，过滤，并真空蒸发。残余物通过ISCO，用(0-10％)EtOAc/己烷纯化，得到1-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)壬-2-醇(7.75g，19.4mmol)。1H NMR(300MHz,DMSO)δ:ppm 7.63(m,4H)；7.43(m,6H)；4.51(d,1H)；3.54(m,2H)；3.43(m,1H)；1.57(m,1H)；1.24(m,11H)；1.00(s,9H)；0.85(m,3H)。

[1721] 8-溴辛酸2-甲氧基壬酯

[1722]

[1723] 化学式：C18H35BrO3

[1724] 分子量：379.379

[1725] 8-溴辛酸2-甲氧基壬酯是遵循方法A以代表性程序1合成的。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.19(m,1H)；4.04(m,1H)；3.42(m,6H)；2.36(t,2H)；1.87(m,2H)；1.73-1.22(m,20H)；0.93(m,3H)。

[1726] 8-((2-羟基乙基)(8-((2-甲氧基壬基)氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1727]

[1728] 化学式：C45H89NO6

[1729] 分子量：740.208

[1730] 化合物148是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝+ 12.48min。对于C45H89NO6，MS(ES):m/z(MH)741.0。H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.89(m,1H)；
4.19(m,1H)；4.04(m,1H)；3.57(m,2H)；3.42(s,3H)；3.37(m,1H)；2.73-2.41(m,6H)；2.33(m,4H),1.73-1.19(m,61H)；0.90(m,9H)。

[1731] DH.化合物149：10-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(甲基)氨基)癸酸庚酯[1732]

[1733] 化学式：C43H85NO4

[1734] 分子量：680.156

[1735] 化合物149是以与化合物123类似的方式并根据通用程序和以上描述的代表性程+ 1序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝2.55min。对于C43H85NO4，MS(ES):m/z(MH )681.0。H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.89(m,1H)；4.08(t,2H)；2.42-2.14(m,11H)；1.73-1.17(m,62H)；
0.90(m,9H)。

[1736] DI.化合物150：12-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(甲基)氨基)十二烷酸戊酯

[1737]

[1738] 化学式：C43H85NO4

[1739] 分子量：680.156

[1740] 化合物150是以与化合物123类似的方式并根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝2.47min。对于C43H85NO4，MS(ES):m/z(MH+)681.0。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.89(m,1H)；4.08(t,2H)；2.42-2.16(m,10H)；1.73-1.20(m,63H)；0.90(m,9H)。

[1741] DJ.化合物151：2-辛基癸酸7-((7-(癸酰氧基)庚基)(2-羟基乙基)氨基)庚酯

[1742]

[1743] 化学式：C44H87NO5

[1744] 分子量：710.182

[1745] 化合物151是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝2.83min。对于C44H87NO5，MS(ES):m/z(MH+)711.0。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.07(m,4H)；
3.57(m,2H)；2.63(br.m,2H)；2.50(m,4H)；2.31(m,3H),1.71-1.19(m,62H)；0.90(m,9H)。

[1746] DK.化合物152：(Z)-8-((2-羟基乙基)(10-辛基十八碳-8-烯-1-基)氨基)辛酸壬酯

[1747] N-甲氧基-N-甲基-2-辛基癸酰胺

[1748]

[1749] 化学式：C20H41NO2

[1750] 分子量：327.553

[1751] 向2-辛基-癸酸(11.1g，39.02mmol)和DMF(0.05mL，3.9mmol)于DCM(100mL)中的溶液中逐滴添加草酰氯(3.63mL，42.92mmol)。在室温下搅拌反应物2小时。真空蒸发溶剂和挥发性物质。将所得残余物(粗品2-辛基癸酰氯)(11.82g，39.02mmol)溶解于DCM(100mL)和N,O-二甲基羟基胺盐酸盐(4g，40.97mmol)中并添加4-二甲基氨基吡啶(0.48g，3.9mmol)。使混合物冷却至0℃并缓慢添加三乙胺(19.04mL，136.57mmol)。使反应物升温至室温并搅拌1小时。真空蒸发溶剂。用EtOAc稀释残余物并用饱和NaHCO3、随后盐水洗涤。分离有机层，经Na2SO4干燥，过滤，并真空蒸发。残余物通过硅胶色谱法，用(0-40％)EtOAc/己烷纯化，得到N-甲氧基-N-甲基-2-辛基癸酰胺(7.10g，21.68mmol，56％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 3.70(s,3H)；3.22(s,3H)；2.82(br.m,1H)；1.62(m,2H)；1.51-1.19(m,26H)；0.90(m,6H)。

[1752] 2-辛基癸醛

[1753]

[1754] 化学式：C18H36O

[1755] 分子量：268.485

[1756] 在-45℃下，将N-甲氧基-N-甲基-2-辛基癸酰胺(7.1g，21.68mmol)于无水THF(2ml)中的溶液添加至LAH(27.53mL，1M的THF溶液，27.53mmol)于无水THF(5ml)中的悬浮液中。在-45℃下搅拌所得悬浮液1小时，之后使其升温至室温并搅拌0.5小时。将反应物再冷却至-45℃并用饱和十水硫酸钠水溶液(2mL)猝灭。在室温下搅拌混合物20分钟并通过硅藻土塞过滤。用盐水洗涤滤液。分离有机层，经硫酸钠干燥，过滤并真空蒸发。残余物通过硅胶色谱法，用(0-10％)EtOAc/己烷纯化，得到2-辛基癸醛(4.45g，16.57mmol，76％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 9.58(d,1H)；2.23(m,1H)；1.63(m,2H)；1.53-1.19(m,26H)；0.90(m,
6H)。

[1757] (Z)-10-辛基十八碳-8-烯-1-醇

[1758]

[1759] 化学式：C26H52O

[1760] 分子量：380.701

[1761] 在冰浴中将(8-羟基辛基)三苯基膦溴化物(3.68g，7.81mmol)于THF(16mL)和HMPA中的溶液冷却并添加NaHMDS(19.52mL，1M，19.52mmol)。缓慢添加溶于THF(5mL)中的2-辛基癸醛(1.05g，3.9mmol)并使反应物升温至30℃。16小时后，用20mL水稀释反应物并用2N HCl酸化。用EtOAc(3×50mL)萃取反应物。合并的有机萃取液经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过硅胶色谱法，用(0-50％)EtOAc/己烷纯化，得到(Z)-10-辛基十八碳-8-烯-1-醇(0.5g，1.30mmol，33％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 5.24(m,1H)；4.90(m,1H)；3.53(t,
2H)；2.14(m,1H)；1.89(m,2H)；1.45(m,3H)；1.33-0.95(m,36H)；0.77(m,6H)。

[1762] (Z)-1-溴-10-辛基十八碳-8-烯

[1763]

[1764] 化学式：C26H51Br

[1765] 分子量：443.598

[1766] 在0℃下，向PPh3(0.29g，1.11mmol)和(8Z)-10-辛基十八碳-8-烯-1-醇(0.4g，1.05mmol)于DCM(10mL)中的溶液中一次性添加NBS(0.22g，1.22mmol)。在0℃下搅拌反应物
1小时，接着使其升温至室温并搅拌1小时。添加300mL己烷并通过二氧化硅塞过滤混合物，并真空蒸发。添加200mL己烷并通过二氧化硅塞过滤混合物，并真空蒸发，得到(Z)-1-溴-
10-辛基十八碳-8-烯(0.39g，0.88mmol，83％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 5.24(m,1H)；
4.90(m,1H)；3.53(t,2H)；2.14(m,1H)；1.89(m,2H)；1.45(m,3H)；1.33-0.95(m,36H)；0.77(m,6H)。

[1767] (Z)-8-((2-羟基乙基)(10-辛基十八碳-8-烯-1-基)氨基)辛酸壬酯

[1768]

[1769] 化学式：C45H89NO3

[1770] 分子量：693.211

[1771] 化合物152是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.00min。对于C45H89NO3，MS(ES):m/z(MH+)694.0。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 5.36(m,1H)；
5.03(m,1H)；4.07(t,2H)；3.54(t,2H)；2.59(t,2H)；2.46(m,4H)；2.30(m,3H)；2.01(m,2H)；
1.63(m,4H)；1.53-1.03(m,58H)；0.90(m,9H)。

[1772] DL.化合物153：8-((2-羟基乙基)(10-辛基十八烷基)氨基)辛酸壬酯

[1773]

[1774] 化学式：C45H91NO3

[1775] 分子量：694.227

[1776] 在烧瓶中装入Pd(OH)2(20mg)并用N2吹扫。添加8-[(2-羟基乙基)[(8Z)-10-辛基十八碳-8-烯-1-基]氨基]辛酸壬酯(100mg，0.14mmol)于EtOH(1mL)中的溶液。用H2吹扫反应物并保持在H2(气球)下，同时在室温下搅拌16小时。之后，用N2吹扫反应物。通过硅藻土塞过滤反应物并用EtOH(50mL)洗涤。真空蒸发滤液。将残余物溶解于EtOAc中并用水洗涤。分离有机层，经Na2SO4干燥，过滤，并真空蒸发。残余物通过硅胶色谱法，用(0-50％)(1％，20％MeOH于DCM中)/DCM纯化，得到8-((2-羟基乙基)(10-辛基十八烷基)氨基)辛酸壬酯(0.069g，0.099mmol，69％)。UPLC/ELSD:RT＝3.21min。对于C45H91NO3，MS(ES):m/z(MH+)
695.08。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.08(t,2H)；3.56(t,2H)；2.62(m,2H)；2.48(m,4H)；
2.31(m,2H)；1.64(m,4H)；1.54-1.16(m,66H)；0.90(m,9H)。

[1777] DM.化合物154：8-((2-(2-羟基乙氧基)乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1778]

[1779] 化学式：C46H91NO6

[1780] 分子量：754.235

[1781] 化合物154是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.54min。对于C46H91NO6，MS(ES):m/z(MH+)755.0。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.88(m,1H)；
4.62(m,1H)；4.08(t,2H)；3.79-3.56(m,6H)；2.64(m,2H)；2.47(m,4H)；2.31(m,4H),1.73-
1.20(m,61H)；0.90(m,9H)。

[1782] DN.化合物155：8-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(2-羟基乙基)氨基)辛酸叔丁酯

[1783] 8-溴辛酸叔丁酯

[1784]

[1785] 化学式：C12H23BrO2

[1786] 分子量：279.218

[1787] 在0℃下，向8-溴辛酸(2g，8.96mmol)于DCM(20mL)中的溶液中逐滴添加三氟乙酸酐(2.77mL，19.9mmol)。2.5小时后，缓慢添加tBuOH(3.1mL，32.27mmol)。1小时后，使反应物升温至室温并使其搅拌2.5小时。用水猝灭反应物并用二乙醚萃取。分离有机层，经MgSO4干燥，过滤，并真空蒸发。残余物通过硅胶色谱法，用(0-10％)EtOAc/己烷纯化，得到8-溴辛酸叔丁酯(1.5g，5.37mmol，60％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 3.42(t,2H)；2.23(t,2H)；1.87(m,2H)；1.60(m,2H)；1.47(s,11H)；1.35(m,4H)。

[1788] 8-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(2-羟基乙基)氨基)辛酸叔丁酯

[1789]

[1790] 化学式：C39H77NO5

[1791] 分子量：640.047

[1792] 化合物155是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝+ 13.18min。对于C39H77NO5，MS(ES):m/z(MH)641.0。H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.89(m,1H)；
3.58(br.m,2H)；2.75-2.36(br.m,6H)；2.26(m,4H)；1.71-1.40(m,22H)；1.28(m,35H)；0.90(m,6H)。

[1793] DO.化合物156：8-((1,3-二羟基丙烷-2-基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1794]

[1795] 化学式：C45H89NO6

[1796] 分子量：740.208

[1797] 化合物156是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.53min。对于C45H89NO6，MS(ES):m/z(MH+)741.0。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.88(m,1H)；
4.08(t,2H)；3.67(br.m,4H)；3.04(m,1H)；2.65(m,4H)；2.32(m,4H),1.72-1.44(m,15H)；
1.28(m,48H)；0.90(m,9H)。

[1798] DP.化合物157：8-((1-羟基丙烷-2-基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1799]

[1800] 化学式：C45H89NO5

[1801] 分子量：724.209

[1802] 化合物157是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.56min。对于C45H89NO5，MS(ES):m/z(MH+)725.0。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.89(m,1H)；
4.08(t,2H)；3.45-3.17(br.m,2H)；2.94(br.m,1H)；2.55-2.22(m,8H)；1.70-1.17(m,62H)；
0.90(m,12H)。

[1803] DQ.化合物158：8-((2-羟基乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸叔丁酯

[1804]

[1805] 化学式：C31H61NO5

[1806] 分子量：527.831

[1807] 化合物158是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝2.23min。对于C31H61NO5，MS(ES):m/z(MH+)528.0。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.08(t,2H)；
3.55(br.m,2H)；2.60(br.m,2H)；2.47(m,4H)；2.31(t,2H)；2.22(t,2H)；1.64(br.m,6H)；
1.53-1.23(m,37H)；0.90(m,3H)。

[1808] DR.化合物159：8-((2-羟基乙基)(2-((2-羟基乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)乙基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1809]

[1810] 化学式：C48H96N2O6

[1811] 分子量：797.304

[1812] 化合物159是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.15min。对于C48H96N2O6，MS(ES):m/z(MH+)798.0。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.88(m,
1H)；4.07(t,2H)；3.62(br.m,4H)；2.72–2.47(br.m,12H)；2.31(m,4H)；1.72-1.42(m,14H)；
1.28(m,47H)；0.90(m,12H)。

[1813] DS.化合物160：8-((2-羟基乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸1,5-双(2-丁基环丙基)戊烷-3-基酯

[1814] 2-(2-丁基环丙基)乙-1-醇

[1815]

[1816] 化学式：C9H18O

[1817] 分子量：142.242

[1818] 2-(2-丁基环丙基)乙-1-醇是以与中间物C相同的方式合成的。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm:3.94(t,2H)；1.93(m,1H)；1.59(m,7H)；1.39(m,1H)；1.12(m,3H)；0.90(m,3H)；0.00(m,1H)。

[1819] 1-(2-溴乙基)-2-丁基环丙烷

[1820]

[1821] 化学式：C9H17Br

[1822] 分子量：205.139

[1823] 1-(2-溴乙基)-2-丁基环丙烷是以与(Z)-1-溴-10-辛基十八碳-8-烯相同的方式1
合成的。H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm:3.64(t,2H)；2.18(m,1H)；1.92(m,1H)；1.47(m,6H)；
0.96(m,6H)；0.00(m,1H)。

[1824] 1,5-双(2-丁基环丙基)戊-3-醇

[1825]

[1826] 化学式：C19H36O

[1827] 分子量：280.496

[1828] 1,5-双(2-丁基环丙基)戊-3-醇是以与(5Z,12Z)-十七烷-5,12-二烯-9-醇相同的方式合成的。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm:3.96(t,1H)；1.64(m,21H)；1.16(m,6H)；0.91(m,6H)；0.03(m,2H)。

[1829] 8-((2-羟基乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸1,5-双(2-丁基环丙基)戊烷-3-基酯

[1830]

[1831] 化学式：C46H87NO5

[1832] 分子量：734.204

[1833] 化合物160是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.51min。对于C46H87NO5，MS(ES):m/z(MH+)735.0。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.97(m,1H)；
4.08(t,2H)；3.56(br.m,2H)；2.75-2.37(br.m,6H)；2.31(m,4H)；1.74-1.05(m,54H)；0.92(m,9H)；0.67(m,6H)；0.31(m,2H)。

[1834] DT.化合物161：8-((2-羟基乙基)(10-(辛酰氧基)癸烷-2-基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1835] 10-(苯甲氧基)癸-2-醇

[1836]

[1837] 化学式：C17H28O2

[1838] 分子量：264.409

[1839] 在N2下，在0℃下，将10-(苯甲氧基)癸-2-酮(3.5g，13.34mmol)于THF(10mL)中的溶液添加至LAH于THF中的搅拌溶液(10mL)中。使混合物升温至室温并搅拌2小时，之后，缓慢添加10mL饱和Na2SO4.10H2O(水溶液)溶液。白色固体沉淀。再添加固体Na2SO4.10H2O并通过硅藻土塞过滤混合物。用EtOAc稀释滤液并用盐水洗涤。分离有机层，经Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩。残余物通过硅胶色谱法，用(0-40％)EtOAc/己烷纯化，得到10-(苯甲氧基)癸-2-醇(3.2g，12.1mmol，91％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm7.32(m,5H)；4.53(s,2H)；3.80(m,1H)；3.49(t,2H)；1.64(m,2H)；1.55-1.25(m,132H)；1.21(d,3H)。

[1840] 辛酸9-羟基癸酯

[1841]

[1842] 化学式：C18H36O3

[1843] 分子量：300.483

[1844] 辛酸9-羟基癸酯是遵循方法A合成的。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.08(t,2H)；3.80(m,1H)；2.30(t,2H)；1.64(m,4H)；1.52-1.17(m,23H)；0.90(m,3H)。

[1845] 8-((2-羟基乙基)(10-(辛酰氧基)癸烷-2-基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1846]

[1847] 化学式：C45H89NO5

[1848] 分子量：724.209

[1849] 化合物161是以与化合物152类似的方式并根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.46min。对于C45H89NO5，MS(ES):m/z(MH+)725.0。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.89(m,1H)；4.08(t,2H)；3.49(br.m,2H)；2.77-2.55(m,2H)；2.54-2.23(m,7H)；1.71-1.20(m,63H)；0.91(m,12H)。

[1850] DU.化合物162：2-辛基癸酸7-((2-羟基乙基)(10-(辛酰氧基)癸烷-2-基)氨基)庚酯

[1851]

[1852] 化学式：C45H89NO5

[1853] 分子量：724.209

[1854] 化合物162是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.49min。对于C45H89NO5，MS(ES):m/z(MH+)725.0。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 3.99(m,4H)；
2.72-2.48(m,2H)；2.48-2.17(m,6H)；1.55(m,8H)；1.44-1.10(m,56H)；0.92-0.75(m,12H)。

[1855] DV.化合物163：2-辛基癸酸7-((2-羟基乙基)(7-甲基-8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)庚酯

[1856] 8-甲氧基辛酸

[1857]

[1858] 化学式：C9H18O3

[1859] 分子量：174.240

[1860] 在0℃下，向无水MeOH(80mL)中添加KOH(7.54g，134.46mmol)并搅拌30分钟。添加8-溴辛酸(10g，44.82mmol)于无水MeOH(70mL)中的溶液并使所得溶液回流18小时。在真空下移除MeOH并用1N HCl酸化残余物，并用二乙醚萃取。将有机层用盐水洗涤，分离，经Na2SO4干燥，过滤，并真空蒸发。残余物通过硅胶色谱法，用(0-50％)EtOAc/己烷纯化，得到8-甲氧基辛酸(6.3g，36.16mmol，81％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 3.35(m,5H)；2.37(t,2H)；
1.61(m,4H)；1.36(m,6H)。

[1861] 8-甲氧基-2-甲基辛酸

[1862]

[1863] 化学式：C10H20O3

[1864] 分子量：188.267

[1865] 在0℃下，向NaH于THF(100mL)中的悬浮液中逐滴添加在THF(30mL)中的8-甲氧基辛酸(5.6g，32.14mmol)。在室温下搅拌反应物30分钟。将反应物冷却至0℃并逐滴添加LDA(17.86mL，2M的THF溶液，35.71mmol)。添加完成后，在45℃下搅拌反应物2小时。将反应物冷却至室温并缓慢添加溶于THF(15mL)中的碘甲烷(2.45mL，39.28mmol)。在45℃下搅拌反应物16小时。用1N HCl(20mL)猝灭反应物。真空蒸发猝灭的反应物以移除挥发性物质。将残余物溶解于己烷/EtOAc(1:1)中并用1N HCl(100mL×2)，随后盐水洗涤。将有机层分离，经硫酸钠干燥，过滤并真空蒸发。残余物通过硅胶色谱法，用(0-15％)EtOAc/己烷纯化，得到8-甲氧基-2-甲基辛酸(3.25g，17.26mmol，54％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 3.35(m,5H)；2.49(m,1H)；1.70(m,1H)；1.59(m,2H)；1.36(m,7H)；1.21(d,3H)。

[1866] 8-羟基-2-甲基辛酸

[1867]

[1868] 化学式：C9H18O3

[1869] 分子量：174.240

[1870] 在-78℃下，向8-甲氧基-2-甲基辛酸(1g，5.31mmol)于DCM(20mL)中的溶液中逐滴添加三溴化硼(13.28mL，1M的DCM溶液，13.28mmol)。使反应物升温至室温并在室温下搅拌2小时。将反应物倒入冰中并用DCM萃取。分离有机层，经Na2SO4干燥，过滤，并真空蒸发。残余物通过硅胶色谱法，用(0-40％)EtOAc/己烷纯化，得到8-羟基-2-甲基辛酸(0.77g，4.41mmol，83％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 3.43(t,2H)；2.50(m,1H)；1.94-1.64(m,
4H)；1.56-1.26(m,7H)；1.20(d,3H)。

[1871] 8-羟基-2-甲基辛酸壬酯

[1872]

[1873] 化学式：C18H36O3

[1874] 分子量：300.483

[1875] 在N2下，将8-羟基-2-甲基辛酸(0.75g，4.31mmol)、壬-1-醇(6.22g，43.1mmol)、4-二甲基氨基吡啶(0.11g，0.86mmol)于DCM(20mL)中的溶液添加至(3-{[(乙基亚氨基)亚甲基]氨基}丙基)二甲基胺盐酸盐(0.83g，4.31mmol)中。在室温下搅拌反应物16小时。将反应物用DCM稀释并用饱和NaHCO3、随后盐水洗涤。分离有机层，经Na2SO4干燥，过滤，并真空蒸发。将残余物通过硅胶色谱法，用(0-20％)EtOAc/己烷纯化，得到8-羟基-2-甲基辛酸壬酯(0.68g，2.26mmol，53％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.08(t,2H)；3.42(t,2H)；2.45(m,1H)；1.87(m,2H)；1.75-1.57(m,4H)；1.52-1.22(m,19H)；1.15(d,3H)；0.91(m,3H)。

[1876] 2-辛基癸酸7-((2-羟基乙基)(7-甲基-8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)庚酯

[1877]

[1878] 化学式：C45H89NO5

[1879] 分子量：724.209

[1880] 化合物163是以与化合物152类似的方式，根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.50min。对于C45H89NO5，MS(ES):m/z(MH+)725.0。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.08(t,4H)；3.55(m,2H)；2.67(m,2H)；2.53-2.24(m,6H)；1.72-1.10(m,
65H)；0.90(m,9H)。

[1881] DW.化合物164：8-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(2-羟基乙基)氨基)-2-甲基辛酸壬酯

[1882]

[1883] 化学式：C45H89NO5

[1884] 分子量：724.209

[1885] 化合物164是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.51min。对于C45H89NO5，MS(ES):m/z(MH+)725.0。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.89(m,
1H)；4.08(t,2H)；3.55(m,2H)；2.69-2.38(m,8H)；2.30(t,2H)；1.74-1.09(m,65H)；0.90(m,
9H)。

[1886] DX.化合物165：2-辛基癸酸7-((7-(癸酰氧基)辛基)(2-羟基乙基)氨基)庚酯

[1887]

[1888] 化学式：C45H89NO5

[1889] 分子量：724.209

[1890] 化合物165是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.55min。对于C45H89NO5，MS(ES):m/z(MH+)725.0。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.91(m,
1H)；4.08(t,2H)；3.55(m,2H)；2.68-2.39(m,8H)；2.29(m,3H)；1.72-1.15(m,64H)；0.90(m,
9H)。

[1891] DY.化合物166：8-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(2-羟基乙基)氨基)辛酸[1892]

[1893] 化学式：C35H69NO5

[1894] 分子量：583.939

[1895] 向8-{[8-(叔丁氧基)-8-氧代辛基](2-羟基乙基)氨基}辛酸十七烷-9-基酯(0.11g，0.17mmol)于DCM中的溶液中添加三氟乙酸(0.06mL，0.69mmol)并在室温下搅拌反应物40小时。真空蒸发挥发性物质。将残余物溶解于乙酸乙酯和水中并用乙酸乙酯萃取。分离有机层，用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩。残余物通过硅胶色谱法(0-50％)(1％，20％MeOH于DCM中)/DCM纯化，得到呈无色液体的8-{[8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基](2-羟基乙基)氨基}辛酸(0.023g，0.04mmol)。UPLC/ELSD:RT＝2.72min。对于C35H69NO5，MS(ES):m/z(MH+)585.0。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.87(m,1H)；3.98(m,2H)；3.25-3.05(m,6H)；2.32(m,4H)；1.82-1.45(m,12H)；1.45-1.19(m,37H)；0.89(m,6H)。

[1896] DZ.化合物167：8-((2-羟基乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸

[1897]

[1898] 化学式：C27H53NO5

[1899] 分子量：471.723

[1900] 化合物167是遵循与化合物166相同的程序合成的。UPLC/ELSD:RT＝1.57min。对于C27H53NO5，MS(ES):m/z(MH+)472.0。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.08(m,2H)；4.00(m,2H)；3.44-2.98(m,10H)；2.35(t,4H)；1.85-1.55(m,10H)；1.33(m,23H)；0.90(m,3H)。

[1901] EA.化合物168：(Z)-8-((3-(2-氰基-3,3-二甲基胍基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1902]

[1903] 化学式：C49H95N5O4

[1904] 分子量：818.33

[1905] 向8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(220mg，0.3mmol)于5mL 2-丙醇中的溶液中添加三乙胺(0.04mL，0.3mmol)，随后添加氰基亚胺碳酸二苯酯(72mg，0.3mmol)并在室温下搅拌混合物两小时。向反应混合物中添加2M二甲基胺的THF溶液(0.75mL，1.5mmol)并将所得溶液加热至75℃，保持18小时。再添加2M二甲基胺/THF溶液(0.75mL，1.5mmol)并将温度增加至85℃。六小时后，LC/MS确定反应完成，因此将溶液在真空下减少，用DCM稀释并用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤一次。使有机相干燥(MgSO4)，过滤并真空蒸发滤液。将残余物通过硅胶色谱法(0-50％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈无色糊浆状物的(Z)-8-((3-(2-氰基-3,3-二甲基胍基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(119.2mg，0.14mmol，49％)。UPLC/ELSD:RT＝3.52min。对于C49H95N5O4，MS(ES):m/z(MH+)819.0。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm
7.62(br.s.,1H)；4.86(quint.,1H,J＝6Hz)；4.05(t,2H,J＝7.5Hz)；3.68(d,2H,J＝3Hz)；
2.99(s,6H)；2.59(br.s,2H)；2.43(br.s,3H)；2.28(m,4H)；1.71(br.s,2H)；1.62(m,8H)；
1.49(m,5H)；1.26(br.m,50H)；0.88(t,9H,J＝7.5Hz)。

[1906] EB.化合物169：8-((3-((2-(二甲基氨基)-3,4-二氧代环丁-1-烯-1-基)氨基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1907] 3-(二甲基氨基)-4-甲氧基环丁-3-烯-1,2-二酮

[1908]

[1909] 化学式：C7H9NO3

[1910] 分子量：155.15

[1911] 向3,4-二甲氧基-3-环丁烯-1,2-二酮(1g，7mmol)于100mL二乙醚中的溶液中添加2M二甲基胺的THF溶液(3.8mL，7.6mmol)并几乎立即形成沉淀。在室温下搅拌混合物24小时，接着过滤。用二乙醚洗涤过滤固体并空气干燥。将过滤固体溶解于热MeOH中，过滤，使滤液冷却至室温，接着冷却至0℃，得到沉淀。通过过滤分离沉淀，用冷MeOH洗涤，空气干燥，接着真空干燥，得到呈浅黄色固体的3-(二甲基氨基)-4-甲氧基环丁-3-烯-1,2-二酮(0.42g，
2.7mmol，39％)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ:ppm 4.28(s,3H)；3.21(s,3H)；3.05(s,3H)。

[1912] 8-((3-((2-(二甲基氨基)-3,4-二氧代环丁-1-烯-1-基)氨基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1913]

[1914] 化学式：C51H95N3O6

[1915] 分子量：846.34

[1916] 向8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(220mg，0.3mmol)于10mL乙醇中的溶液中添加3-(二甲基氨基)-4-甲氧基环丁-3-烯-1,2-二酮
(47mg，0.3mmol)并在室温下搅拌所得无色溶液20小时，之后，LC/MS确定无起始胺残留。在真空中浓缩溶液且残余物通过硅胶色谱法(0-50％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈无色糊浆状物的8-((3-((2-(二甲基氨基)-3,4-二氧代环丁-1-烯-1-基)氨基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(135mg，
0.16mmol，53％)。UPLC/ELSD:RT＝3.51min。对于C51H95N3O6，MS(ES):m/z(MH+)847.3。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 7.86(br.s.,1H)；4.86(quint.,1H,J＝6Hz)；4.05(t,2H,J＝6Hz)；
3.92(d,2H,J＝3Hz)；3.20(s,6H)；2.63(br.s,2H)；2.42(br.s,3H)；2.28(m,4H)；1.74(br.s,2H)；1.61(m,8H)；1.50(m,5H)；1.41(m,3H)；1.25(br.m,47H)；0.88(t,9H,J＝
7.5Hz)。

[1917] EC.化合物170：(E)-8-((3-((1-(甲基氨基)-2-硝基乙烯基)氨基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1918]

[1919] 化学式：C48H94N4O6

[1920] 分子量：823.30

[1921] 向8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(220mg，0.3mmol)于5mL甲醇中的溶液中添加1-甲基硫代-1-甲基氨基-2-硝基乙烯(45mg，
0.3mmol)，将所得溶液加热至70℃并搅拌24小时，之后，LC/MS确定无起始胺残留。将溶液用DCM稀释并用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤一次。使有机相干燥(MgSO4)，过滤并真空蒸发滤液。
残余物通过硅胶色谱法(0-50％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈浅黄色糊浆状物的(E)-8-((3-((1-(甲基氨基)-2-硝基乙烯基)氨基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(90mg，0.11mmol，36％)。UPLC/ELSD:
RT＝3.33min。对于C48H94N4O6，MS(ES):m/z(MH+)824.3。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 10.15(d,1H,J＝9Hz)；8.26(d,1H,J＝27Hz)；6.55(d,1H,J＝9Hz)；4.86(quint.,1H,J＝6Hz)；
4.05(t,2H,J＝6Hz)；3.32(br.s,1H)；3.24(br.s,1H)；2.81(dd,3H,J＝3Hz,12Hz)；2.63(br.s,1H)；2.47(br.s,4H)；2.28(m,4H)；1.77(br.s,2H)；1.62(m,5H)；1.59(m,6H)；1.49(m,3H)；1.43(m,3H)；1.26(br.m,46H)；0.88(t,9H,J＝7.5Hz)。

[1922] ED.化合物171：8-((9-羟基-9-甲基十八烷基)(2-羟基乙基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1923] ((癸-9-烯-1-基氧基)甲基)苯

[1924]

[1925] 化学式：C17H26O

[1926] 分子量：246.394

[1927] 向氢化钠(3.88g，96.99mmol)于THF(100mL)中的悬浮液中缓慢添加9-癸烯-1-醇(10g，63.99mmol)。30分钟之后，添加苯甲基溴(10.57mL，88.9mmol)。在室温下搅拌反应物18小时。用水猝灭反应物。真空蒸发溶剂。将残余物用EtOAc稀释并用饱和NaHCO3、随后盐水洗涤。分离有机层，用Na2SO4干燥，过滤，并真空蒸发。残余物通过硅胶色谱法，用(0-20％)
1
EtOAc/己烷纯化，得到((癸-9-烯-1-基氧基)甲基)苯(8.5g，34.5mmol，54％)。H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm7.32(m,5H)；5.83(m,1H)；4.98(m,2H)；4.53(s,2H)；3.49(t,2H)；
2.06(m,2H)；1.64(m,2H)；1.46-1.26(br.m,10H)。

[1928] 10-(苯甲氧基)癸-2-酮

[1929]

[1930] 化学式：C17H26O2

[1931] 分子量：262.393

[1932] 向氯化钯(0.09g，0.52mmol)和苯醌(3.09g，28.57mmol)于DMF/水(7:1，12.8mL)中的溶液中缓慢添加[(癸-9-烯-1-基氧基)甲基]苯(6.4g，25.98mmol)并在室温下搅拌深褐色溶液3天。将混合物溶解于2N HCl(50mL)并用乙醚(3×50mL)萃取。用2N NaOH(3×50mL)洗涤合并的有机相并经MgSO4干燥。在真空下移除溶剂且残余物通过硅胶色谱法(0-40％)乙酸乙酯/己烷纯化，得到10-(苯甲氧基)癸-2-酮(3.44g，13.11mmol，50％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 7.36(m,5H)；4.52(s,2H)；3.48(t,2H)；2.43(t,2H)；2.15(s,3H)；1.61(m,4H)；1.45-1.24(br.m,8H)。

[1933] 1-(苯甲氧基)-9-甲基十八烷-9-醇

[1934]

[1935] 化学式：C26H46O2

[1936] 分子量：390.652

[1937] 在0℃下，向10-(苯甲氧基)癸-2-酮(1g，3.81mmol)于THF(30mL)中的溶液中逐滴添加溴(壬基)镁(4.57mL，1M的二乙醚溶液，4.57mmol)。使反应物升温至室温并搅拌4小时。用水(2mL)猝灭反应物，添加二乙醚(200mL)并通过二氧化硅塞过滤所得白色固体。用乙醚萃取滤液。用水，随后盐水洗涤有机层。分离有机层，经Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩。残余物通过硅胶色谱法，用(0-40％)EtOAc/己烷纯化，得到1-(苯甲氧基)-9-甲基十八烷-9-醇(0.99g)。产物不纯，但不经进一步纯化即用于下一步骤。

[1938] 9-甲基十八烷-1,9-二醇

[1939]

[1940] 化学式：C19H40O2

[1941] 分子量：300.527

[1942] 在N2下，向烧瓶中装入1-(苯甲氧基)-9-甲基十八烷-9-醇(1g，2.56mmol)、Pd(OH)2(100mg)和EtOH。将反应物用H2吹扫并保持在H2(气球)下，同时在室温下搅拌16小时。用N2吹扫反应物。通过硅藻土塞过滤反应物并用EtOAc(200mL)洗涤硅藻土。真空蒸发滤液。将残余物溶解于EtOAc中并用水洗涤。分离有机层，经Na2SO4干燥，过滤，并真空蒸发。残余物通过硅胶色谱法，用EtOAc/己烷(0-40％)纯化，得到9-甲基十八烷-1,9-二醇(0.65g,2.16mmol，1
84％)。H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 3.66(t,2H)；1.59(m,2H)；1.49-1.22(br.m,29H)；1.17(s,3H)；0.90(m,3H)。

[1943] 1-溴-9-甲基十八烷-9-醇

[1944]

[1945] 化学式：C19H39BrO

[1946] 分子量：363.42

[1947] 1-溴-9-甲基十八烷-9-醇是以与(Z)-1-溴-10-辛基十八碳-8-烯相同的方式合1
成。H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 3.43(t,2H)；1.88(m,2H)；1.53-1.23(br.m,28H)；1.17(s,
3H)；0.91(m,3H)。

[1948] 8-((9-羟基-9-甲基十八烷基)(2-羟基乙基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1949]

[1950] 化学式：C46H93NO4

[1951] 分子量：724.253

[1952] 化合物171是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.56min。对于C46H93NO4，MS(ES):m/z(MH+)725.0。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.89(m,
1H)；3.55(m,2H)；2.60(m,2H)；2.47(m,4H)；2.30(t,2H)；1.74-1.21(m,69H)；1.17(s,3H)；
0.90(m,9H)。

[1953] EE.化合物172：(R)-8-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(2-羟基乙基)氨基)辛酸癸-2-基酯

[1954]

[1955] 化学式：C45H89NO5

[1956] 分子量：724.209

[1957] 化合物172是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.53min。对于C45H89NO5，MS(ES):m/z(MH+)725.0。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.91(m,
2H)；3.54(m,2H)；2.59(m,2H)；2.46(m,4H)；2.30(m,4H)；1.70-1.19(m,66H)；0.90(m,9H)。

[1958] EF.化合物173：8-((3-(N-甲基甲基磺酰胺基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1959]

[1960] 化学式：C47H94N2O6S

[1961] 分子量：815.34

[1962] 向8-((3-氯丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(200mg，0.27mmol)和N-甲基甲烷磺酰胺(50uL，0.54mmol)于4mL无水DMF中的溶液中添加碳酸铯(130mg，0.40mmol)，将所得混合物加热至60℃并搅拌24小时，之后，LC/MS确定无起始氯化物残留。使混合物冷却至室温，用50％饱和碳酸氢钠水溶液稀释并用DCM萃取两次。合并有机物，用水洗涤一次，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩得到黄色油状物。残余物通过硅胶色谱法(0-50％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈浅黄色油状物的8-((3-(N-甲基甲基磺酰胺基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(85mg，0.11mmol，39％)。UPLC/ELSD:RT＝3.57min。对于C47H94N2O6S，MS(ES):m/z(MH+)
816.1。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.86(quint.,1H,J＝6Hz)；4.05(t,2H,J＝6Hz)；3.15(t,2H,J＝7.5Hz)；2.85(s,3H)；2.79(3,3H)；2.40(br.m,5H)；2.28(m,4H)；1.72(br.m,2H)；
1.64-1.49(m,13H)；1.26(br.m,50H)；0.88(t,9H,J＝7.5Hz)。

[1963] EG.化合物174：8-((3-(2,5-二氧代咪唑烷-1-基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1964]

[1965] 化学式：C48H91N3O6

[1966] 分子量：806.27

[1967] 向8-((3-氯丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(200mg，0.27mmol)和乙内酰脲(50mg，0.54mmol)于4mL无水DMF中的溶液中添加碳酸铯(130mg，
0.40mmol)，将所得混合物加热至60℃并搅拌24小时，之后，LC/MS确定无起始氯化物残留。
使混合物冷却至室温，用50％饱和碳酸氢钠水溶液稀释并用DCM萃取两次。合并有机物，用水洗涤一次，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。残余物通过硅胶色谱法(0-50％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈浅黄色油状物的8-((3-(2,5-二氧代咪唑烷-1-基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(35mg，0.05mmol，
18％)。UPLC/ELSD:RT＝3.52min。对于C48H91N3O6，MS(ES):m/z(MH+)807.2。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 5.27(br.s,1H)；4.86(quint.,1H,J＝6Hz)；4.05(t,2H,J＝6Hz)；3.95(s,
2H)；3.55(t,2H,J＝7.5Hz)；2.50–2.34(br.m,5H)；2.26(m,4H)；1.77(br.s,2H)；1.64-1.49(m,15H)；1.26(br.m,48H)；0.88(t,9H,J＝7.5Hz)。

[1968] EH.化合物175：8-((3-((甲基氨甲酰基)氧基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1969]

[1970] 化学式：C47H92N2O6

[1971] 分子量：781.26

[1972] 在0℃下，向8-((3-羟基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(200mg，0.27mmol)和三乙胺(60uL，0.41mmol)于5mL无水DCM中的溶液逐滴中添加异氰酸甲酯(22uL，0.35mmol)。移除冷却浴并在室温下搅拌溶液2小时，之后LC/MS确定无起始醇残留。用三滴甲醇猝灭反应物，在氮气流中减少混合物且残余物通过硅胶色谱法(0-50％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈无色油状物的8-((3-((甲基氨甲酰基)氧基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(115mg，0.15mmol，53％)。UPLC/ELSD:RT＝3.54min。对于C47H92N2O6，MS(ES):m/z(MH+)782.3。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.86(quint.,1H,J＝6Hz)；4.62(br.s,1H)；4.05(m,4H)；2.79(d,
3H,J＝3Hz)；2.47(br.s,2H)；2.37(br.m,3H)；2.27(m,4H)；1.73(br.s,2H)；1.61(m,7H)；
1.50(br.m,4H)；1.40(br.m,4H)；1.25(br.m,48H)；0.87(t,9H,J＝7.5Hz)。

[1973] EI.化合物176：8-((3-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1974]

[1975] 化学式：C49H92N2O6

[1976] 分子量：805.28

[1977] 向8-((3-氯丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(200mg，0.27mmol)和琥珀酰亚胺(50mg，0.54mmol)于4mL无水DMSO中的溶液中添加碳酸铯(130mg，
0.40mmol)，将所得混合物加热至80℃并搅拌48小时，之后，LC/MS确定无起始氯化物残留。
使混合物冷却至室温，用50％饱和碳酸氢钠水溶液稀释并用DCM萃取三次。合并有机物，用水洗涤一次，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。残余物通过硅胶色谱法(0-50％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化两次，得到呈浅黄色油状物的8-((3-(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(44mg，
0.05mmol，19％)。UPLC/ELSD:RT＝3.56min。对于C49H92N2O6，MS(ES):m/z(MH+)806.1。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.86(quint.,1H,J＝6Hz)；4.05(t,2H,J＝6Hz)；3.52(t,2H,J＝
7.5Hz)；2.69(s,4H)；2.42–2.25(br.m,9H)；1.71–1.58(m,10H)；1.50(br.d,4H,J＝3Hz)；
1.26(br.m,51H)；0.88(t,9H,J＝7.5Hz)。

[1978] EJ.化合物177：8-((3-(4-(叔丁氧基甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1979]

[1980] 化学式：C52H100N4O5

[1981] 分子量：861.40

[1982] 向8-((3-叠氮基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(500mg，0.67mmol)和叔丁基炔丙基醚(100uL，0.73mmol)于4mL THF中的溶液中添加无水硫酸铜(II)(5mg，0.03mmol)和抗坏血酸钠(14mg，0.07mmol)于1mL水中的悬浮液中并在室温下搅拌混合物24小时，之后，LC/MS确定无起始叠氮化物残留。将混合物用饱和碳酸氢钠水溶液稀释并用DCM萃取三次。合并有机物，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。残余物通过硅胶色谱法(0-50％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈浅黄色油状物的8-((3-(4-(叔丁氧基甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(485mg，0.56mmol，84％)。UPLC/ELSD:RT＝3.63min。对于
C52H100N4O5，MS(ES):m/z(MH+)862.2。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 7.50(s,1H)；4.86(quint.,1H,J＝6Hz)；4.59(s,2H)；4.36(t,2H,J＝7.5Hz)；4.05(t,2H,J＝6Hz)；2.36(br.m,5H)；2.28(m,4H)；2.02(br.m,2H)；1.62(br.m,8H)；1.50(br.d,4H,J＝3Hz)；1.28(br.m,60H)；0.88(t,9H,J＝7.5Hz)。

[1983] EK.化合物178：8-((3-(2-甲氧基乙酰胺基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1984]

[1985] 化学式：C48H94N2O6

[1986] 分子量：795.29

[1987] 在0℃下，向8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(200mg，0.27mmol)和三乙胺(60uL，0.41mmol)于5mL无水DCM中的溶液中逐滴添加甲氧基乙酰氯(30uL，0.33mmol)。移除冷却浴并在室温下搅拌溶液24小时，之后，LC/MS确定无起始胺残留。将混合物用50％饱和碳酸氢钠水溶液稀释并用DCM萃取两次。合并有机物，用水洗涤一次，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。残余物通过硅胶色谱法(0-50％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈无色油状物的8-((3-(2-甲氧基乙酰胺基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(50mg，0.06mmol，23％)。UPLC/ELSD:RT＝3.56min。对于C48H94N2O6，MS(ES):m/z(MH+)796.2。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 7.53(s,1H)；4.86(quint.,1H,J＝6Hz)；4.05(t,2H,J＝6Hz)；3.87(s,2H)；3.39(m,5H)；
2.47(br.s,2H)；2.36(br.m,3H)；2.27(m,4H)；1.61(m,8H)；1.46(br.m,9H)；1.26(br.m,
48H)；0.88(t,9H,J＝7.5Hz)。

[1988] EL.化合物179：8-((3-(1H-1,2,3-三唑-1-基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1989] 8-((8-(壬氧基)-8-氧代辛基)(3-(4-(三甲基甲硅烷基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)丙基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1990]

[1991] 化学式：C50H98N4O4Si

[1992] 分子量：847.44

[1993] 向8-((3-叠氮基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(200mg，0.27mmol)和乙炔基三甲基硅烷(41uL，0.29mmol)于2mL THF中的溶液中添加无水硫酸铜(II)(2mg，0.01mmol)和抗坏血酸钠(5mg，0.02mmol)于0.5mL水中的悬浮液中并在室温下搅拌混合物20小时，之后，LC/MS确定无起始叠氮化物残留。用饱和碳酸氢钠水溶液稀释混合物并用DCM萃取三次。合并有机物，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。残余物通过硅胶色谱法(0-50％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈浅黄色油状物的8-((8-(壬氧基)-8-氧代辛基)(3-(4-(三甲基甲硅烷基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)丙
1
基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(150mg，0.18mmol，66％)，H-NMR确定其为2:1的TMS/脱TMS产物混合物。以原样使用。UPLC/ELSD:RT＝3.63min。对于C50H98N4O4Si，MS(ES):m/z(MH+)
848.3。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 7.55(s,1H)；4.86(quint.,1H,J＝6Hz)；4.45(t,2H,J＝7.5Hz)；4.05(t,2H,J＝6Hz)；3.42(br.s,1H)；2.28(m,5H)；1.65–1.45(br.m,14H)；1.25(br.m,48H)；0.87(t,9H,J＝7.5Hz)；0.33(s,6H)。

[1994] 8-((3-(1H-1,2,3-三唑-1-基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[1995]

[1996] 化学式：C47H90N4O4

[1997] 分子量：775.26

[1998] 向(150mg，0.18mmol)于5mL THF中的溶液中添加1M四丁基氟化铵溶液的THF溶液(0.21mL，0.21mmol)并在室温下搅拌溶液24小时，之后，反应进展至约25％。将所述溶液加热至55℃并搅拌24小时，随后LC/MS确定反应完成。将溶液用饱和碳酸氢钠水溶液稀释并用DCM萃取两次。将有机物合并，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。残余物通过硅胶色谱法(0-50％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈无色油状物的8-((3-(1H-1,2,3-三唑-1-基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(53mg，0.07mmol，39％)。UPLC/ELSD:RT＝3.55min。对于C47H90N4O4，MS(ES):m/z(MH+)776.2。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 7.69(s,1H)；7.55(s,1H)；4.86(quint.,1H,J＝6Hz)；4.44(t,
2H,J＝7.5Hz)；4.05(t,2H,J＝6Hz)；2.37(br.m,5H)；2.28(m,4H)；2.05(br.m,2H)；1.61(br.m,8H)；1.49(br.m,4H)；1.26(br.m,51H)；0.88(t,9H,J＝7.5Hz)。

[1999] EM.化合物181：8-((3-((甲氧基羰基)氨基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2000]

[2001] 化学式：C47H92N2O6

[2002] 分子量：781.26

[2003] 在0℃下，向8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(200mg，0.27mmol)和三乙胺(60uL，0.41mmol)于5mL无水DCM中的溶液中逐滴添加氯甲酸甲酯(27uL，0.33mmol)。移除冷却浴并在室温下搅拌溶液24小时，之后LC/MS确定无起始胺残留。将混合物用50％饱和碳酸氢钠水溶液稀释并用DCM萃取两次。合并有机层，用水洗涤一次，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。残余物通过硅胶色谱法(0-50％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈无色油状物的8-((3-((甲氧基羰基)氨基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(120mg，0.15mmol，54％)。UPLC/ELSD:RT＝3.55min。对于C47H92N2O6，MS(ES):m/z(MH+)782.1。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 6.11(br.s,1H)；4.86(quint.,1H,J＝6Hz)；4.05(t,2H,J＝6Hz)；3.64(s,3H)；3.25(br.d,
2H,J＝6Hz)；2.46(br.s,2H)；2.38–2.24(m,7H)；1.61(br.t,9H,J＝7.5Hz)；1.50(m,4H)；
1.42(br.m,3H)；1.26(br.m,49H)；0.88(t,9H,J＝7.5Hz)。

[2004] EN.化合物182：8-((3-((2-(甲基氨基)-3,4-二氧代环丁-1-烯-1-基)氨基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2005] 3-甲氧基-4-(甲基氨基)环丁-3-烯-1,2-二酮

[2006]

[2007] 化学式：C6H7NO3

[2008] 分子量：141.13

[2009] 向3,4-二甲氧基-3-环丁烯-1,2-二酮(1g，7mmol)于100mL二乙醚中的溶液中添加2M甲基胺的THF溶液(3.8mL，7.6mmol)且几乎立即形成沉淀。在室温下搅拌混合物24小时，接着过滤，用二乙醚洗涤过滤固体并空气干燥。将过滤固体溶解于热EtOAc中，过滤，使滤液冷却至室温，接着冷却至0℃，得到沉淀。将这通过过滤分离，用冷EtOAc洗涤，空气干燥，接着真空干燥，得到呈白色固体的3-甲氧基-4-(甲基氨基)环丁-3-烯-1,2-二酮(0.70g，
5mmol，73％)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ:ppm 8.50(br.d,1H,J＝69Hz)；4.27(s,3H)；3.02(sdd,3H,J＝42Hz,4.5Hz)。

[2010] 8-((3-((2-(甲基氨基)-3,4-二氧代环丁-1-烯-1-基)氨基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2011]

[2012] 化学式：C50H93N3O6

[2013] 分子量：832.31

[2014] 向8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(200mg，0.28mmol)于10mL乙醇中的溶液中添加3-甲氧基-4-(甲基氨基)环丁-3-烯-1,2-二酮
(39mg，0.28mmol)并在室温下搅拌所得无色溶液20小时，之后，LC/MS确定无起始胺残留。在真空中浓缩溶液且残余物通过硅胶色谱法(0-100％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈粘性白色固体的8-((3-((2-(甲基氨基)-3,4-二氧代环丁-1-烯-1-基)氨基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(138mg，
0.17mmol，60％)。UPLC/ELSD:RT＝3.min。对于C51H95N3O6，MS(ES):m/z(MH+)833.4。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 7.86(br.s.,1H)；4.86(quint.,1H,J＝6Hz)；4.05(t,2H,J＝6Hz)；
3.92(d,2H,J＝3Hz)；3.20(s,6H)；2.63(br.s,2H)；2.42(br.s,3H)；2.28(m,4H)；1.74(br.s,2H)；1.61(m,8H)；1.50(m,5H)；1.41(m,3H)；1.25(br.m,47H)；0.88(t,9H,J＝
7.5Hz)。

[2015] EO.化合物183：8-((2-羟基乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸1,3-双(己氧基)丙烷-2-基酯

[2016] (((1,3-双(己氧基)丙烷-2-基)氧基)甲基)苯

[2017]

[2018] 化学式：C22H38O3

[2019] 分子量：350.543

[2020] 在N2下，向NaH(1.76g，43.9mmol)于THF(40mL)中的浆液中添加2-(苯甲氧基)丙烷-1,3-二醇(2g，10.98mmol)并在40℃下搅拌混合物2小时。之后，添加于DMF(2ml)中的1-溴己烷(4.35g，26.34mmol)和催化量的KI。使反应物回流16小时。真空蒸发溶剂。用EtOAc稀释残余物并用饱和NaHCO3、随后盐水洗涤。分离有机层，经Na2SO4干燥，过滤，并真空蒸发。残余物通过硅胶色谱法，(0-40％)EtOAc/己烷纯化，得到(((1,3-双(己氧基)丙烷-2-基)氧基)甲基)苯(1.7g，4.75mmol，43％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 7.34(m,5H)；4.73(s,2H)；3.75(m,1H)；3.61-3.40(m,8H)；1.59(m,4H)；1.32(m,12H)；0.91(m,6H)。

[2021] 1,3-双(己氧基)丙-2-醇

[2022]

[2023] 化学式：C15H32O3

[2024] 分子量：260.418

[2025] 1,3-双(己氧基)丙-2-醇是使用与9-甲基十八烷-1,9-二醇相同的方式合成的。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 3.96(m,1H)；3.48(m,8H)；2.37(br.S,1H)；1.64(m,2H)；1.60(m,4H)；1.32(m,12H)；0.91(m,6H)。

[2026] 8-((2-羟基乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸1,3-双(己氧基)丙烷-2-基酯

[2027]

[2028] 化学式：C42H83NO7

[2029] 分子量：714.126

[2030] 化合物183是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.17min。对于C42H83NO7，MS(ES):m/z(MH+)715.0。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 5.15(m,1H)；
4.08(t,2H)；3.66-3.34(m,10H)；2.71-2.41(m,6H)；2.34(m,4H)；1.74-1.20(m,50H)；0.91(m,9H)。

[2031] EP.化合物184：8-((2-羟基乙基)(8-((2-甲基壬基)氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2032] 8-溴辛酸2-甲基壬酯

[2033]

[2034] 化学式：C18H35BrO2

[2035] 分子量：363.380

[2036] 在N2下，向8-溴辛酸(3.83g，17.18mmol)、2-甲基壬-1-醇(2.72g，17.18mmol)、4-二甲基氨基吡啶(0.42g，3.44mmol)于DCM(25mL)中的溶液中添加(3-{[(乙基亚氨基)亚甲基]氨基}丙基)二甲基胺盐酸盐(3.29g，17.18mmol)。在室温下搅拌反应物16小时。将反应物用DCM稀释并用饱和NaHCO3、随后盐水洗涤。分离有机层，经Na2SO4干燥，过滤，并真空蒸发。残余物通过硅胶色谱法，用(0-20％)EtOAc/己烷纯化，得到8-溴辛酸2-甲基壬酯(5.1g，14.04mmol，82％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 3.98(m,2H)；3.43(t,2H)；2.33(t,2H)；
1.93-1.74(m,3H)；1.72-1.09(m,20H)；0.93(m,6H)。

[2037] 8-((2-羟基乙基)(8-((2-甲基壬基)氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2038]

[2039] 化学式：C45H89NO5

[2040] 分子量：724.209

[2041] 化合物184是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.60min。对于C45H89NO5，MS(ES):m/z(MH+)725.0。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.89(m,1H)；
3.92(m,2H)；3.57(m,2H)；2.70-2.41(m,6H)；2.31(m,4H)；1.79(m,1H)；1.70-1.07(m,60H)；
0.93(m,12H)。

[2042] EQ.化合物185：6-((2-羟基乙基)(6-氧代-6-(十一烷氧基)己基)氨基)己酸二十一烷-11-基酯

[2043]

[2044] 化学式：C46H91NO5

[2045] 分子量：738.236

[2046] 化合物185是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.72min。对于C46H91NO5，MS(ES):m/z(MH+)739.0。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.88(m,1H)；
4.08(t,2H)；3.55(m,2H)；2.60(m,2H)；2.48(m,4H)；2.32(m,4H)；1.72-1.41(m,15H)；1.28(m,52H)；0.90(m,9H)。

[2047] ER.化合物186：10-((2-羟基乙基)(10-氧代-10-(十三烷-7-基氧基)癸基)氨基)癸酸庚酯

[2048]

[2049] 化学式：C42H83NO5

[2050] 分子量：682.128

[2051] 化合物186是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.31min。对于C42H83NO5，MS(ES):m/z(MH+)739.0。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.89(m,1H)；
4.08(t,2H)；3.55(m,2H)；2.58(m,2H)；2.47(m,4H)；2.30(m,4H)；1.71-1.18(m,58H)；0.90(m,9H)。

[2052] ES.化合物189：10-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(2-羟基乙基)氨基)癸酸庚酯

[2053]

[2054] 化学式：C44H87NO5

[2055] 分子量：710.182

[2056] 化合物189是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝+ 13.47min。对于C44H87NO5，MS(ES):m/z(MH)710.98。H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.89(m,
1H)；4.08(t,2H)；3.55(m,2H)；2.61(m,2H)；2.47(m,4H)；2.31(m,4H)；1.70-1.20(m,62H)；
0.90(m,9H)。

[2057] ET.化合物194：8-((3-异丁酰胺基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2058]

[2059] 化学式：C49H96N2O5

[2060] 分子量：793.32

[2061] 在0℃下，向8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(150mg，0.21mmol)和三乙胺(90uL，0.62mmol)于5mL无水DCM中的溶液中逐滴添加异丁酰氯(35uL，0.31mmol)。30分钟后，移除冷却浴并在室温下搅拌溶液90分钟，之后，LC/MS确定无起始胺残留。将混合物用50％饱和碳酸氢钠水溶液稀释并用DCM萃取两次。合并有机物，用水洗涤一次，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。残余物通过硅胶色谱法(0-50％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈无色油状物的8-((3-异丁酰胺基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(65mg，0.08mmol，39％)。UPLC/ELSD:RT＝3.65min。对于C49H96N2O5，MS(ES):m/z(MH+)794.3。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 7.53(s,1H)；4.86(quint.,1H,J＝6Hz)；4.05(t,2H,J＝6Hz)；3.87(s,2H)；3.39(m,5H)；
2.47(br.s,2H)；2.36(br.m,3H)；2.27(m,4H)；1.61(m,8H)；1.46(br.m,9H)；1.26(br.m,
48H)；0.88(t,9H,J＝7.5Hz)。

[2062] EU.化合物197：8-((3-(2-(苯甲氧基)乙酰胺基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2063]

[2064] 化学式：C54H98N2O6

[2065] 分子量：871.39

[2066] 在0℃下，向8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(300mg，0.41mmol)和三乙胺(145uL，1mmol)于10mL无水DCM中的溶液中逐滴添加苯甲氧基乙酰氯(82uL，0.52mmol)。移除冷却浴并在室温下搅拌溶液24小时，之后，LC/MS确定无起始胺残留。将混合物用50％饱和碳酸氢钠水溶液稀释并用DCM萃取两次。合并有机物，用水洗涤一次，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。残余物通过硅胶色谱法(0-50％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈无色油状的8-((3-(2-(苯甲氧基)乙酰胺基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(179mg，0.21mmol，50％)。UPLC/ELSD:RT＝3.66min。对于C54H98N2O6，MS(ES):m/z(MH+)872.4。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:
ppm 7.55(s,1H)；7.33(m,5H)；4.86(quint.,1H,J＝6Hz)；4.55(s,2H)；4.05(t,2H,J＝
6Hz)；3.97(s,2H)；3.35(quart.,2H,J＝6Hz)；2.46(br.m,2H)；2.28(m,7H)；1.65-1.48(m,
15H)；1.26(br.m,50H)；0.88(t,9H,J＝7.5Hz)。

[2067] EV.化合物198：8-((3-(2-羟基乙酰胺基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2068]

[2069] 化学式：C47H92N2O6

[2070] 分子量：781.26

[2071] 在氮气下，向8-((3-(2-(苯甲氧基)乙酰胺基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(130mg，0.15mmol)于5mL乙醇中的溶液中添加10wt.％钯/碳(约20，催化量)，用乙醇洗涤烧瓶侧壁且烧瓶装备氢气球。抽空烧瓶并回填氢气三次，接着在室温下搅拌24小时，之后，LC/MS确定无起始醚残留。用氮气吹扫烧瓶，通过硅藻土过滤混合物，用乙醇洗涤过滤固体并浓缩滤液。残余物通过硅胶色谱法(0-50％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈无色油状物的8-((3-(2-羟基乙酰胺基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(55mg，0.07mmol，47％)。UPLC/ELSD:RT＝3.46min。对于C47H92N2O6，MS(ES):m/z(MH+)782.2。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 7.73(br.s,1H)；4.86(quint.,1H,J＝6Hz)；4.05(m,4H)；3.40(quart.,2H,J＝6Hz)；2.50(m,2H)；2.37(t,4H,J＝6Hz)；2.28(m,4H)；1.63(m,8H)；1.46(br.m,8H)；1.26(br.m,49H)；
0.88(t,9H,J＝7.5Hz)。

[2072] EW.化合物200：(E)-8-((3-(3-甲基-2-硝基胍基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2073] 甲基(E/Z)-N-甲基-N'-硝基异硫脲

[2074]

[2075] 化学式：C3H7N3O2S

[2076] 分子量：149.17

[2077] 向2-甲基-1-硝基-2-硫代假脲(1.0g，7.4mmol)和碳酸铯(2.5g，7.8mmol)于8mL无水DMF中的悬浮液中添加碘甲烷(0.69mL，11.1mmol)并在室温下搅拌混合物24小时。将黄色混合物用水稀释并用EtOAc萃取两次。将有机物合并，用50％饱和碳酸氢钠水溶液洗涤三次，用盐水洗涤一次，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩，得到黄色固体。将其溶解于热水中，过滤溶液并将滤液冷却至4℃，保持三天。通过过滤分离所得固体，用水洗涤，空气干燥，接着真空干燥，得到呈浅黄色固体的甲基(E/Z)-N-甲基-N'-硝基异硫脲(85mg，0.57mmol，8％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 10.02(br.s,1H)；3.12(d,1H,J＝6Hz)；2.53(s,3H)。

[2078]

[2079] 化学式：C47H93N5O6

[2080] 分子量：824.29

[2081] 向8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(200mg，0.28mmol)于5mL甲醇中的溶液中添加甲基(E/Z)-N-甲基-N'-硝基异硫脲(45mg，0.3mmol)，将所得溶液加热至70℃并搅拌24小时，之后，LC/MS确定无起始胺残留。用DCM稀释溶液并用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤一次。使有机相干燥(MgSO4)，过滤并真空蒸发滤液。残余物通过硅胶色谱法(0-50％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈浅黄色糊浆状物的(E)-8-((3-(3-甲基-2-硝基胍基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(75mg，0.09mmol，33％)。UPLC/ELSD:RT＝3.55min。对于C47H93N5O6，MS(ES):m/z(MH+)825.3。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 9.26(br.s,1H)；8.27(br.s,1H)；
4.86(quint.,1H,J＝6Hz)；4.05(t,2H,J＝6Hz)；3.42(br.s,2H)；2.86(d,3H,J＝6Hz)；
2.60-2.40(br.m,5H)；2.28(m,4H)；1.73(br.s,2H)；1.65–1.40(m,16H)；1.26(br.m,47H)；
0.88(t,9H,J＝7.5Hz)。

[2082] EX.化合物207：8-((3-胍基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2083] 6-((叔丁氧基羰基)氨基)-2,2-二甲基-11-(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)-4-氧代-3-氧杂-5,7,11-三氮杂十九碳-6-烯-19-酸十七烷-9-基酯

[2084]

[2085] 化学式：C56H108N4O8

[2086] 分子量：965.50

[2087] 在0℃下，向8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(300mg，0.41mmol)和三乙胺(230uL，1.66mmol)于10mL无水DCM中的溶液中一次性添加1,3-双(叔丁氧基羰基)-2-(三氟甲基磺酰基)胍(325mg，0.83mmol)并使所得溶液逐渐升温至室温，同时搅拌过夜。LC/MS显示无起始物质残留，因此用DCM稀释溶液，用50％饱和碳酸氢钠水溶液洗涤，使有机层干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。残余物通过硅胶色谱法(0-50％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈无色油状物的6-((叔丁氧基羰基)氨基)-2,2-二甲基-11-(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)-4-氧代-3-氧杂-5,7,11-三氮杂十九碳-6-烯-19-酸十七烷-9-基酯(310mg，0.32mmol，77％)，纯度为约95％。最大的单一杂质具有对应于失去一个Boc基团的产物的质量。以原样使用。UPLC/ELSD:RT＝3.90min。
+ 1
对于C56H108N4O8，MS(ES):m/z(MH)966.0。H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 11.49(s,1H)；8.55(br.s.,1H)；4.86(quint.,1H,J＝6Hz)；4.05(t,2H,J＝7.5Hz)；3.45(quart.,2H,J＝6Hz)；
2.46(m,2H)；2.36(m,4H)；2.27(m,4H)；1.61(m,8H)；1.50(m,22H)；1.40(m,4H)；1.25(br.m,
48H)；0.88(t,9H,J＝7.5Hz)。

[2088]

[2089] 化学式：C46H92N4O4

[2090] 分子量：765.27

[2091] 向6-((叔丁氧基羰基)氨基)-2,2-二甲基-11-(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)-4-氧代-3-氧杂-5,7,11-三氮杂十九碳-6-烯-19-酸十七烷-9-基酯(310mg，0.32mmol)于10mL DCM中的溶液中添加三氟乙酸(500uL，过量)并在室温下搅拌溶液48小时，之后，LC/MS确定无起始物质残留。浓缩溶液，将残余物与DCM共蒸馏两次并通过硅胶色谱法(0-50％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈无色油状物的8-((3-胍基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(210mg，0.27mmol，84％)。
+ 1
UPLC/ELSD:RT＝3.16min。对于C46H92N4O4，MS(ES):m/z(MH)766.3。H NMR(300MHz,CDCl3)δ:
ppm 10.92(br.s,1H)；8.82(br.s,1H)；7.25(br.s,2H)；4.85(quint.,1H,J＝6Hz)；4.05(t,
2H,J＝6Hz)；3.38(br.s,2H)；3.15(br.s,2H)；3.00(br.s,4H)；2.29(m,4H)；2.05(br.s,
2H)；1.91(br.s,3H)；1.70–1.45(br.m,12H)；1.26(br.m,47H)；0.88(t,9H,J＝7.5Hz)。

[2092] EY.化合物218：8-((3-(4-(羟基甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2093]

[2094] 化学式：C48H92N4O5

[2095] 分子量：805.29

[2096] 向8-((3-(4-(叔丁氧基甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(190mg，0.22mmol)于4mL DCM中的溶液中添加三氟乙酸(675uL，过量)并在室温下搅拌溶液72小时，之后，LC/MS确定无起始物质残留。浓缩溶液，将残余物与DCM共蒸馏两次并通过硅胶色谱法(0-50％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈无色油状物的8-((3-(4-(羟基甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(113mg，0.14mmol，64％)。+ 1
UPLC/ELSD:RT＝3.41min。对于C48H92N4O5，MS(ES):m/z(MH)806.1。H NMR(300MHz,CDCl3)δ:
ppm 7.54(s,1H)；4.86(quint.,1H,J＝6Hz)；4.80(s,2H)；4.40(t,2H,J＝7.5Hz)；4.05(t,
2H,J＝6Hz)；2.38(br.m,5H)；2.28(m,5H)；2.04(br.m,2H)；1.61(br.m,7H)；1.50(br.d,4H,J＝3Hz)；1.26(br.m,51H)；0.88(t,9H,J＝7.5Hz)(未观察到羟基质子)。

[2097] EZ.化合物232：8-((2-羟基乙基)(6-氧代-6-((4-戊基环己基)氧基)己基)氨基)辛酸壬酯

[2098]

[2099] 化学式：C36H69NO5

[2100] 分子量：595.950

[2101] 化合物232是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝2.84min。对于C36H69NO5，MS(ES):m/z(MH+)596.84。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 5.01(m,
0.5H)；4.68(m,0.5H)；4.08(t,2H)；3.56(m,2H),2.67-2.55(br.m,2H)；2.55-2.40(br.m,
4H)；2.31(m,4H)；1.97(m,1H)；1.82(m,2H)；1.73-1.15(m,43H)；1.02(m,1H)；0.90(m,6H)。

[2102] FA.化合物233：(Z)-8-((3-(3,3-二甲基-2-(甲基磺酰基)胍基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2103] (甲基磺酰基)亚氨基碳酸二苯酯

[2104]

[2105] 化学式：C14H13NO4S

[2106] 分子量：291.32

[2107] 在100mL RBF中，在搅拌下，使2.0g(7.4mmol)二氯二苯氧基甲烷和1.56g(16.4mmol)甲烷磺酰胺悬浮于15mL乙酸乙酯中，得到白色混合物。将其加热至回流(85℃)并搅拌24小时，之后，LC/MS仅观察到产物。使混合物冷却至室温，浓缩，将残余物悬浮于DCM中并过滤。用DCM洗涤过滤固体，合并滤液并浓缩。残余物通过硅胶色谱法(0-40％EtOAc/己烷)纯化，汇集含产物的级分并浓缩，得到浅黄色固体。将其用己烷研磨，过滤，用己烷洗涤过滤固体并空气干燥，得到呈白色固体的(甲基磺酰基)亚氨基碳酸二苯酯(0.84g，
2.88mmol，39％)。UPLC/ELSD:RT＝0.50min。对于C14H13NO4S，MS(ES):m/z(MH+)292.2。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 7.45-7.37(m,4H)；7.30(m,2H)；7.21(m,4H)；3.01(s,3H)。

[2108] (Z)-8-((3-(3,3-二甲基-2-(甲基磺酰基)胍基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2109]

[2110] 化学式：C49H98N4O6S

[2111] 分子量：871.41

[2112] 向8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(200mg，0.28mmol)于5mL 2-丙醇中的溶液中添加三乙胺(40uL，0.28mmol)，随后添加(甲基磺酰基)亚氨基碳酸二苯酯(81mg，0.28mmol)并在室温下搅拌白色混合物三小时，之后，LC/MS确定无起始胺残留。向溶液中添加2.0M二甲基胺的THF溶液(0.75mL，1.5mmol)，将浅黄色溶液加热至80℃并搅拌24小时。LC/MS确定无起始物质残留，因此使溶液冷却至室温，在氮气流中浓缩并将残余物溶解于DCM中。用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤溶液一次，接着干燥(MgSO4)，过滤并浓缩滤液，得到黄色油状物。将其通过硅胶色谱法(0-50％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈无色油状物的(Z)-8-((3-(3,3-二甲基-2-(甲基磺酰基)胍基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(80mg，0.09mmol，
33％)。UPLC/ELSD:RT＝3.53min。对于C49H98N4O6S，MS(ES):m/z(MH+)872.1。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 7.22(br.s,1H)；4.86(quint.,1H,J＝12.3Hz,5.9Hz,)；4.05(t,2H,J＝6.7Hz)；3.40(br.d,2H,J＝5.4Hz)；2.97(s,9H)；2.52(br.s,2H)；2.39(br.s,3H)；2.29(m,4H)；1.69-1.49(m,15H)；1.45-1.15(m,50H)；0.87(t,9H,J＝5.8Hz)

[2113] FB.化合物234：2-辛基癸酸8-((2-羟基乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛烷-2-基酯

[2114] 2-辛基癸酸8-羟基辛烷-2-基酯

[2115]

[2116] 化学式：C26H52O3

[2117] 分子量：412.699

[2118] 化合物2-辛基癸酸8-羟基辛烷-2-基酯是根据关于癸酸8-羟基辛烷-2-基酯的通用程序合成的。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.93(m,1H)；3.66(t,2H)；2.29(m,1H)；1.69-1.16(m,42H)；0.90(m,6H)。

[2119] 2-辛基癸酸8-溴辛烷-2-基酯

[2120]

[2121] 化学式：C26H51BrO2

[2122] 分子量：475.596

[2123] 化合物2-辛基癸酸8-溴辛烷-2-基酯是根据关于(Z)-1-溴-10-辛基十八碳-8-烯的通用程序合成的。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.94(m,1H)；3.42(t,2H)；2.30(m,1H)；1.87(m,2H)；1.69-1.16(m,39H)；0.90(m,6H)。

[2124] 2-辛基癸酸8-((2-羟基乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛烷-2-基酯

[2125]

[2126] 化学式：C45H89NO5

[2127] 分子量：724.209

[2128] 化合物234是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.61min。对于C45H89NO5，MS(ES):m/z(MH+)725.08。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.93(m,
1H)；4.08(t,2H)；3.71(br.m,2H)；3.00-2.50(br.m,6H)；2.32(m,3H)；1.73-1.15(m,65H)；
0.90(m,9H)。

[2129] FC.化合物235：8-((8-(壬氧基)-8-氧代辛基)(3-丙酰胺基丙基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2130] 乙酸9-羟基癸酯

[2131]

[2132] 化学式：C12H24O3

[2133] 分子量：216.321

[2134] 乙酸9-羟基癸酯是根据关于癸酸8-羟基辛烷-2-基酯的通用程序合成的。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.07(t,2H)；3.80(m,1H)；2.07(s,3H)；1.76(m,2H)；1.54-1.16(m,16H)。

[2135] 6-羟基己酸10-乙酰氧基癸烷-2-基酯

[2136]

[2137] 化学式：C18H34O5

[2138] 分子量：330.465

[2139] 6-羟基己酸10-乙酰氧基癸烷-2-基酯是根据关于癸酸8-羟基辛烷-2-基酯的通用程序合成的。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.07(t,2H)；3.80(m,1H)；2.07(s,3H)；1.76(m,2H)；1.76(m,2H)；1.54-1.42(m,8H)；1.41-1.17(m,16H)。

[2140] 6-溴己酸10-乙酰氧基癸烷-2-基酯

[2141]

[2142] 化学式：C18H33BrO4

[2143] 分子量：393.362

[2144] 6-溴己酸10-乙酰氧基癸烷-2-基酯是根据关于(Z)-1-溴-10-辛基十八碳-8-烯的通用程序合成。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.93(m,1H)；4.07(t,2H)；3.43(t,2H)；2.32(t,2H)；2.07(s,3H)；1.90(m,2H)；1.76-1.42(m,8H)；1.41-1.17(m,13H)。

[2145] 8-((6-((10-乙酰氧基癸烷-2-基)氧基)-6-氧代己基)(2-羟基乙基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2146]

[2147] 化学式：C45H87NO7

[2148] 分子量：754.191

[2149] 化合物235是根据通用程序和以上描述的代表性程序1合成的。UPLC/ELSD:RT＝3.33min。对于C45H87NO7，MS(ES):m/z(MH+)755.10。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.91(m,
2H)；4.07(t,2H)；3.56(m,2H)；2.67-2.41(m,6H)；2.30(t,4H)；2.07(s,3H)；1.73-1.08(m,
61H)；0.90(m,6H)。

[2150] FD.化合物236：8-((8-(壬氧基)-8-氧代辛基)(3-丙酰胺基丙基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2151]

[2152] 化学式：C48H94N2O5

[2153] 分子量：779.29

[2154] 在0℃下，向8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(160mg，0.22mmol)和三乙胺(95uL，0.66mmol)于5mL无水DCM中的溶液中逐滴添加丙酰氯(30uL，0.33mmol)。30分钟后，移除冷却浴并在室温下搅拌溶液30分钟，之后，LC/MS确定无起始胺残留。将混合物用50％饱和碳酸氢钠水溶液稀释并用DCM萃取两次。将有机物合并，用水洗涤一次，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩滤液。将残余物通过硅胶色谱法(0-50％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈无色油状物的8-((8-(壬氧基)-8-氧代辛基)(3-丙酰胺基丙基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(90mg，0.12mmol，52％)。UPLC/ELSD:RT＝3.59min。对于C48H94N2O5，MS(ES):m/z(MH+)780.1。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 7.29(br.s,1H)；4.86(quint.,1H,J＝12.4Hz,5.2Hz)；4.05(t,2H,J＝6.7Hz)；3.34(quart.,2H,J＝11.3Hz,5.9Hz)；2.63-2.33(m,6H)；2.31-2.25(m,4H)；2.16(quart.,2H,J＝15.1Hz,7.6Hz)；1.61(br.t,8H,J＝6.8Hz)；1.55-1.38(br.m,9H)；1.35-1.20(br.m,
47H)；1.14(t,3H,J＝7.6Hz)；0.87(t,9H,J＝6.4Hz)。

[2155] FE.化合物244：8-((2-乙酰胺基乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2156] 8-((2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2157]

[2158] 化学式：C49H96N2O6

[2159] 分子量：809.32

[2160] 向8-((8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(1.0g，1.5mmol)和N-Boc-甘氨醛(0.36g，2.25mmol)于10mL无水THF中的溶液中添加MgSO4(约0.5g，过量)并在室温下搅拌白色混合物30分钟。经五分钟向混合物中分批添加三乙酰氧基硼氢化钠(0.67g，3.0mmol)并在室温下搅拌所得白色混合物过夜。LC/MS确定无起始物质残留，因此通过添加约5mL饱和碳酸氢钠水溶液猝灭反应。用水稀释所得混合物，用DCM萃取三次，合并有机层，用水洗涤一次，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩滤液，得到黄色油状物。将其通过硅胶色谱法(0-
40％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈浅黄色油状物的8-((2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(930mg，1.15mmol，77％)。UPLC/ELSD:RT＝3.66min。对于C49H96N2O6，MS(ES):m/z(MH+)
809.6。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.88(quint。1H,J＝11.9Hz,6.0Hz)；4.07(t,2H,J＝
6.7Hz)；2.60-2.25(m,8H)；1.70-1.55(m,6H)；1.53-1.43(m,22H)；1.37-1.22(m,48H)；0.90(t,9H,J＝6.8Hz)

[2161] 8-((2-氨基乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2162]

[2163] 化学式：C44H88N2O4

[2164] 分子量：709.20

[2165] 在0℃下，向8-((2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(820mg，1.0mmol)于20mL DCM中的溶液中添加4N HCl的1,4-二噁烷溶液(2.5mL，10mmol)，使所得黄色溶液升温至室温并搅拌三小时，之后，LC/MS确定无起始物质残留。将红/褐色溶液用DCM稀释并用饱和碳酸氢钠水溶液和盐水的1:1混合物洗涤。分离各相并用DCM萃取水相两次。将有机层合并，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩滤液，得到褐色油状物。将其通过硅胶色谱法(0-100％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈褐色油状物的8-((2-氨基乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(520mg，0.73mmol，72％)。UPLC/ELSD:RT＝3.15min。对于C44H88N2O4，MS(ES):m/z1
(MH+)709.5。H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.86(quint.,1H,J＝12.4Hz,5.9Hz)；4.05(t,
2H,J＝6.7Hz)；2.74(t,2H,J＝6.0Hz)；2.52-2.35(m,5H)；2.31-2.25(m,4H)；1.75-1.67(br.s,5H)；1.61(br.t,6H,J＝6.8Hz)；1.55-1.37(br.m,8H)；1.36-1.16(br.m,46H)；0.88(t,9H,J＝6.1Hz)。

[2166] 8-((2-乙酰胺基乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2167]

[2168] 化学式：C46H90N2O5

[2169] 分子量：751.24

[2170] 向8-((8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(1.0g，1.5mmol)和N-Boc-甘氨醛(0.36g，2.25mmol)于10mL无水THF中的溶液中添加MgSO4(约0.5g，过量)并在室温下搅拌白色混合物30分钟。经五分钟向混合物中分批添加三乙酰氧基硼氢化钠(0.67g，3.0mmol)并在室温下搅拌所得白色混合物过夜。LC/MS确定无起始物质残留，因此通过添加约5mL饱和碳酸氢钠水溶液猝灭反应。用水稀释所得混合物，用DCM萃取三次，合并有机物，用水洗涤一次，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩滤液，得到黄色油状物。将其通过硅胶色谱法(0-
40％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈浅黄色油状物的8-((2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(930mg，1.15mmol，77％)。UPLC/ELSD:RT＝3.66min。对于C49H96N2O6，MS(ES):m/z(MH+)
809.6。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.88(quint。1H,J＝11.9Hz,6.0Hz)；4.07(t,2H,J＝
6.7Hz)；2.60-2.25(m,8H)；1.70-1.55(m,6H)；1.53-1.43(m,22H)；1.37-1.22(m,48H)；0.90(t,9H,J＝6.8Hz)

[2171] FF.化合物246：8-((2-(甲基磺酰胺基)乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2172]

[2173] 化学式：C45H90N2O6S

[2174] 分子量：787.28

[2175] 向8-((2-氨基乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(160mg，0.23mmol)于4mL无水DCM中的溶液中添加三乙胺(63uL，0.45mmol)并将溶液冷却至0℃。向其中添加甲烷磺酰氯(24uL，0.32mmol)，使溶液升温至室温并搅拌四小时。LC/MS确定无起始物质残留，因此用DCM稀释溶液，用50％饱和碳酸氢钠水溶液洗涤一次，干燥(MgSO4)，过滤，并浓缩滤液，得到黄色油状物。将其通过硅胶色谱法(0-40％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈黄色油状物的8-((2-(甲基磺酰胺基)乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(130mg，0.165mmol，73％)。UPLC/ELSD:RT＝3.48min。对于C45H90N2O6S，MS(ES):m/z(MH+)787.6。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm
4.86(quint。1H,J＝12.4Hz,5.2Hz)；4.05(t,2H,J＝6.8Hz)；3.14(br.s,2H)；2.95(s,3H)；
2.61(br.s,2H)；2.42(br.s,3H)；2.32-2.25(m,4H)；1.61(br.t,6H,J＝7.0Hz)；1.55-1.38(m,8H)；1.37-1.14(m,50H)；0.88(t,9H,J＝6.1Hz)。

[2176] FG.化合物247：(Z)-8-((2-(2-氰基-3,3-二甲基胍基)乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2177]

[2178] 化学式：C48H93N5O4

[2179] 分子量：804.30

[2180] 向8-((2-氨基乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(160mg，0.23mmol)于4mL 2-丙醇中的溶液中添加三乙胺(31uL，0.23mmol)，随后添加氰基亚胺碳酸二苯酯(54mg，0.23mmol)并在室温下搅拌白色混合物两小时，之后，该混合物变为无色溶液。LC/MS确定无起始物质残留并且仅观察到单苯基异脲(MW＝853.3)。向其中添加2M二甲基胺的甲醇溶液(1.1mL，2.2mmol)，将所得浅黄色溶液加热至55℃并搅拌20小时，之后，LC/MS确定无异脲中间物残留。将反应物冷却至室温，浓缩，将残余物溶解于DCM中，用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩滤液，得到黄色油状物。将其通过硅胶色谱法(0-40％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈无色油状物的(Z)-8-((2-(2-氰基-3,3-二甲基胍基)乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(75mg，0.09mmol，41％)。UPLC/ELSD:RT＝3.46min。对于C48H93N5O4，MS(ES):m/z
1 1
(MH+)804.6。H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 5.80(br.s,1H)；4.86(quint。H,J＝12.5Hz,
6.2Hz)；4.05(t,2H,J＝6.7Hz)；3.60(br.s,2H)；3.01(s,6H)；2.59(br.s,2H)；2.40(br.s,
3H)；2.32-2.25(m,4H)；1.68-1.45(m,12H)；1.38-1.12(m,51H)；0.88(t,9H,J＝6.0Hz)。

[2181] FH.化合物251：8-((3-((2-氨基-3,4-二氧代环丁-1-烯-1-基)氨基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2182]

[2183] 化学式：C49H91N3O6

[2184] 分子量：818.28

[2185] 向8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(220mg，0.28mmol)于8mL乙醇中的溶液中添加3-氨基-4-甲氧基环丁-3-烯-1,2-二酮[JACS,88(7),
1533-1536(1966)](35mg，0.28mmol)，将所得无色溶液加热至40℃并搅拌20小时，之后，LC/MS确定无起始胺残留。在真空中浓缩溶液且残余物通过硅胶色谱法(0-100％(1％NH4OH、
20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈粘性白色固体的8-((3-((2-氨基-3,4-二氧代环丁-1-烯-1-基)氨基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-
9-基酯(175mg，0.21mmol，77％)。UPLC/ELSD:RT＝3.38min。对于C49H91N3O6，MS(ES):m/z(MH
1
+)818.6。H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 6.43(br.s.,1H)；4.85(quint.,1H,J＝12.6Hz,
5.8Hz)；4.05(t,2H,J＝6.7Hz)；3.65(br.s,2H)；2.78-2.38(m,5H)；2.29(m,4H)；1.84(br.s,2H)；1.68-1.41(m,14H)；1.40-1.14(m,51H)；0.88(t,9H,J＝6.0Hz)。

[2186] FI.化合物252：8-((3-(2-(甲基硫代)乙酰胺基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2187]

[2188] 化学式：C48H94N2O5S

[2189] 分子量：811.35

[2190] 向8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(1.0g，1.38mmol)和(甲基硫代)乙酸(Matrix Scientific,Columbia,SC)(150uL，1.66mmol)于
20mL无水DCM中的溶液中添加4-(二甲基氨基)吡啶(42mg，0.35mmol)，随后添加1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐(HATU；790mg，
2.1mmol)且最后添加N,N-二异丙基乙基胺(740uL，4.1mmol)并在室温下搅拌所得混合物过夜。LC/MS确定无起始胺残留，因此用DCM稀释黄色溶液，用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次，用盐水洗涤一次，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩滤液，得到黄色油状物。将其通过硅胶色谱法(0-50％甲醇/DCM)纯化，得到呈黄色油状物的8-((3-(2-(甲基硫代)乙酰胺基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(1.0g，1.23mmol，89％)。UPLC/ELSD:RT＝
3.54min。对于C48H94N2O5S，MS(ES):m/z(MH+)811.56。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 7.79(br.s,1H)；4.86(quint.,1H,J＝12.5Hz,6.2Hz)；4.05(t,2H,J＝6.7Hz)；3.40(br.s,2H)；
3.17(s,2H)；2.96(br.s,2H)；2.66-2.34(br.m,3H)；2.28(m,4H)；2.15(s,3H)；1.88-1.41(m,16H)；1.39-1.18(br.m,49H)；0.88(t,9H,J＝5.8Hz)。

[2191] FJ.化合物255：8-((4-乙酰胺基丁基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2192] (4,4-二乙氧基丁基)氨基甲酸苯甲酯

[2193]

[2194] 化学式：C16H25NO4

[2195] 分子量：295.38

[2196] 向4-氨基丁醛缩二乙醇(Aldrich,St.Louis,MO)(1g，6.2mmol)于25mL乙醚中的溶液中添加25mL水，随后添加碳酸钾(2.6g，18.6mmol)并在剧烈搅拌下，将所得无色两相冷却至0℃。经十分钟向其中逐滴添加氯甲酸苄酯(0.88mL，6.2mmol)并使所得混合物缓慢升温至室温过夜。分离各相并用乙醚萃取水相。合并有机物，用10％柠檬酸水溶液洗涤两次，接着用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，并浓缩滤液，得到无色油状物。将其通过硅胶色谱法(0-50％EtOAc/己烷)纯化，得到呈无色油状物的(4,4-二乙氧基丁基)氨基甲酸苯甲酯(1.56g，
5.3mmol，85％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 7.32(m,5H)；5.09(s,2H)；4.88(s,1H)；4.48(t,2H,J＝5.3Hz)；3.70-3.55(m,2H)；3.54-3.40(m,2H)；3.22(quart.；2H,J＝12.5Hz,
6.2Hz)；1.71-1.51(m,4H)；1.20(t,6H,J＝7.0Hz)。

[2197] (4-氧代丁基)氨基甲酸苯甲酯

[2198]

[2199] 化学式：C12H15NO3

[2200] 分子量：221.26

[2201] 向(4,4-二乙氧基丁基)氨基甲酸苯甲酯(1.56g，5.3mmol)于25mL丙酮中的溶液中添加1N HCl水溶液(25mL，25mmol)，得到混浊混合物，该混合物迅速变为澄清溶液。在室温下将其搅拌过夜，之后，TLC确定无起始缩醛残留。用Et2O萃取溶液两次，合并有机物，用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤一次，用盐水洗涤一次，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩滤液，得到无色油状物。将其通过硅胶色谱法(0-50％EtOAc/己烷)纯化，得到呈无色液体的(4-氧代丁基)氨基甲酸苯甲酯(0.82g，5.3mmol，70％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 7.36(m,5H)；5.52(br.d,1H,J＝12.0Hz)；5.15(s,2H)；3.68-3.52(m,1H)；3.44-3.30(m,1H)；2.18-1.79(m,4H)(未观察到醛质子)。

[2202] 8-((4-(((苯甲氧基)羰基)氨基)丁基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2203]

[2204] 化学式：C54H98N2O6

[2205] 分子量：871.39

[2206] 向8-((8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(1.65g，2.5mmol)和(4-氧代丁基)氨基甲酸苯甲酯(0.82g，3.71mmol)于15mL无水THF中的溶液中添加无水MgSO4(约0.5g，过量)并在室温下搅拌白色混合物30分钟。经五分钟向混合物中分批添加三乙酰氧基硼氢化钠(1.1g，4.9mmol)并在室温下搅拌所得白色混合物过夜。LC/MS确定无起始物质残留，因此通过添加约5mL饱和碳酸氢钠水溶液猝灭反应溶液。用水稀释所得混合物，用DCM萃取三次，合并有机层，用水洗涤一次，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩滤液，得到黄色油状物。将其通过硅胶色谱法(0-40％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈浅黄色油状物的8-((4-(((苯甲氧基)羰基)氨基)丁基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(1.43g，1.64mmol，66％)。UPLC/ELSD:RT＝3.54min。对于C54H98N2O6，MS(ES):m/z(MH+)871.52。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 7.34(m,5H)；5.51(m,1H)；5.15(m,2H)；5.09(s,2H)；4.86(quint.,1H,J＝12.3Hz,6.2Hz)；4.05(t,2H,J＝
6.8Hz)；3.60(m,1H)；3.38(m,1H)；3.20(br.d,2H,J＝3.8Hz)；2.40(br.s,4H)；2.27(m,4H)；
2.15-1.75(m,4H)；1.61(br.t,6H,J＝6.3Hz)；1.55-1.43(m,8H)；1.37-1.15(m,46H)；0.88(t,9H,J＝5.8Hz)。

[2207] 8-((4-氨基丁基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2208]

[2209] 化学式：C46H92N2O4

[2210] 分子量：737.25

[2211] 在搅拌下，将8-((4-(((苯甲氧基)羰基)氨基)丁基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(1.42g，1.63mmol)溶解于20mL乙醇中，得到浅黄色溶液。用氮气吹扫反应容器并添加10wt.％钯/碳(约200mg，催化量)，用5mL乙醇洗涤容器侧壁并且再用氮气吹扫容器。所述烧瓶配备氢气球，抽空并回填氢气三次。在室温下搅拌所得深色混合物五小时，之后，LC/MS确定无起始物质残留。用氮气吹扫烧瓶，通过硅藻土过滤混合物，用乙醇洗涤过滤固体并浓缩滤液，得到混浊的白色油状物。将其通过硅胶色谱法(0-100％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈无色油状物的8-((4-氨基丁基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(706mg，0.96mmol，59％)。UPLC/ELSD:RT＝3.09min。对于C46H92N2O4，MS(ES):m/z(MH+)737.43。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.86(quint.,1H,J＝12.2Hz,6.2Hz)；4.05(t,2H,J＝6.7Hz)；2.71(t,1H,J＝
6.4Hz)；2.48-2.34(m,6H)；2.33-2.23(m,4H)；1.95(br.s,2H)；1.61(br.t,6H,J＝6.6Hz)；
1.55-1.38(m,12H)；1.37-1.17(m,49H)；0.88(t,9H,J＝5.9Hz)。

[2212] 8-((4-乙酰胺基丁基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2213]

[2214] 化学式：C48H94N2O5

[2215] 分子量：779.29

[2216] 向8-((4-氨基丁基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(220mg，0.3mmol)于4mL无水DCM中的溶液中添加三乙胺(125uL，0.9mmol)并将溶液冷却至0℃。向其中添加乙酸酐(42uL，0.45mmol)并使溶液升温至室温，同时搅拌过夜。LC/MS确定无起始物质残留，因此用DCM稀释溶液，用50％饱和碳酸氢钠水溶液洗涤一次，干燥(MgSO4)，过滤，并浓缩滤液，得到黄色油状物。将其通过硅胶色谱法(0-50％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈无色油状物的8-((4-乙酰胺基丁基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(160mg，0.20mmol，69％)。UPLC/ELSD:RT＝3.50min。对于C48H94N2O5，MS(ES):m/z(MH+)779.66。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 6.33(br.s,1H)；4.86(quint.,1H,J＝12.3Hz,6.2Hz)；4.05(t,2H,J＝6.7Hz)；3.23(quart.,2H,J＝11.9Hz,
6.1Hz)；2.46-2.33(m,5H)；2.32-2.22(m,4H)；1.95(s,3H)；1.68-1.56(m,6H)；1.54-1.36(m,12H)；1.35-1.15(m,49H)；0.87(t,9H,J＝5.8Hz)。

[2217] FK.化合物256：8-(十七烷-9-基氧基)-N-(3-(2-(甲基亚磺酰基)乙酰胺基)丙基)-N-(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)-8-氧代辛-1-胺氧化物

[2218]

[2219] 化学式：C48H94N2O7S

[2220] 分子量：843.35

[2221] FL.化合物257：8-(十七烷-9-基氧基)-N-(3-(2-(甲基磺酰基)乙酰胺基)丙基)-N-(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)-8-氧代辛-1-胺氧化物

[2222]

[2223] 化学式：C48H94N2O8S

[2224] 分子量：859.35

[2225] 在0℃下，向8-((3-(2-(甲基硫代)乙酰胺基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(350mg，0.43mmol)于5mL DCM中的溶液中一次性添加间氯过氧苯甲酸(50重量％；300mg，0.84mmol)。移除冰浴并在室温下搅拌所得黄色溶液24小时，之后，LC/MS确定无起始物质残留。将溶液用DCM稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩滤液，得到浅黄色油状物。将其通过硅胶色谱法(0-75％(1％NH4OH、
20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到两组级分。浓缩洗脱的第一组，得到呈无色油状物的8-(十七烷-9-基氧基)-N-(3-(2-(甲基磺酰基)乙酰胺基)丙基)-N-(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)-8-氧代辛-1-胺氧化物(60mg，0.07mmol，16％)。UPLC/ELSD:RT＝
3.44min。对于C48H94N2O8S(化合物257)，MS(ES):m/z(MH+)859.62。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:
ppm 10.95(br.s,1H)；4.86(quint.,1H,J＝12.3Hz,5.9Hz)；4.05(t,2H,J＝6.7Hz)；3.93(s,2H)；3.38(br.d,3H,J＝5.2Hz)；3.15(m,6H)；2.62-2.36(m,1H)；2.34-2.21(m,4H)；2.02(t,2H,J＝6.1Hz)；1.86-1.55(m,10H)；1.54-1.43(m,5H)；1.41-1.14(m,48H)；0.88(t,9H,J＝6.0Hz)。

[2226] 浓缩第二组洗脱的级分，得到呈蜡状白色固体的8-(十七烷-9-基氧基)-N-(3-(2-(甲基亚磺酰基)乙酰胺基)丙基)-N-(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)-8-氧代辛-1-胺氧化物(75mg，0.09mmol，20％)。UPLC/ELSD:RT＝3.42min。对于C48H94N2O7S(化合物256)，MS(ES):m/z(MH+)843.71。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 10.15(br.s,1H)；4.86(quint.,1H,J＝
12.5Hz,6.3Hz)；4.05(t,2H,J＝6.6Hz)；3.57(m,2H)；3.44-3.25(m,3H)；3.14(t,3H,J＝
8.2Hz)；2.72(s,3H)；2.54-2.34(m,1H)；2.33-2.24(m,4H)；2.04(t,2H,J＝5.6Hz)；1.88-
1.71(m,2H)；1.69-1.55(m,8H)；1.54-1.43(m,4H)；1.41-1.14(m,49H)；0.88(t,9H,J＝
6.0Hz)。

[2227] FM.化合物258：8-((3-(2-(甲基亚磺酰基)乙酰胺基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2228]

[2229] 化学式：C48H94N2O6S

[2230] 分子量：827.35

[2231] 向8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(400mg，0.55mmol)和甲烷亚磺酰基乙酸[J.Med.Chem.,38(3),508-525(1995)](81mg，0.66mmol)于
10mL无水DCM中的溶液中添加4-(二甲基氨基)吡啶(17mg，0.14mmol)，随后添加1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸盐(HATU；315mg，
0.83mmol)且最后添加N,N-二异丙基乙基胺(300uL，1.66mmol)并在室温下搅拌所得混合物过夜。LC/MS确定无起始胺残留，因此用DCM稀释深橙色溶液，用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次，用盐水洗涤一次，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩滤液，得到深黄色油状物。将其通过硅胶色谱法(0-50％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈黄色油状物的8-((3-(2-(甲基亚磺酰基)乙酰胺基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(190mg，0.23mmol，41％)。UPLC/ELSD:RT＝3.44min。对于C48H94N2O6S，MS(ES):
1
m/z(MH+)827.56。H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 7.74(br.s,1H)；4.86(quint.,1H,J＝
12.5Hz,6.1Hz)；4.05(t,2H,J＝6.7Hz)；3.60(d,1H,J＝13.7Hz)；3.36(m,3H)；2.71(s,3H)；
2.60-2.48(br.s,2H)；2.47-2.34(br.s,3H)；2.28(m,4H)；1.76-1.55(m,8H)；1.54-1.38(m,
8H)；1.37-1.15(br.m,49H)；0.88(t,9H,J＝5.9Hz)。

[2232] FN.化合物259：(Z)-8-((4-(2-氰基-3,3-二甲基胍基)丁基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2233]

[2234] 化学式：C50H97N5O4

[2235] 分子量：832.36

[2236] 向8-((4-氨基丁基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(235mg，0.32mmol)于4mL 2-丙醇中的溶液中添加三乙胺(44uL，0.32mmol)，随后添加氰基亚胺碳酸二苯酯(76mg，0.32mmol)并在室温下搅拌白色混合物九十分钟，之后该混合物变为无色溶液。LC/MS确定无起始物质残留并且仅观察到单苯基异脲(MW＝881.4)。向其中添加2M二甲基胺的甲醇溶液(1.6mL，3.2mmol)，将所得浅黄色溶液加热至55℃并搅拌20小时，之后，LC/MS确定无异脲中间物残留。将反应物冷却至室温，浓缩，将残余物溶解于DCM中，用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩滤液，得到黄色油状物。将其通过硅胶色谱法(0-60％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈无色油状物的(Z)-8-((4-(2-氰基-3,3-二甲基胍基)丁基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(130mg，0.16mmol，49％)。UPLC/ELSD:RT＝3.43min。对于C50H97N5O4，MS(ES):m/z(MH+)832.48。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 5.50(br.s,1H)；4.86(quint.,1H,J＝12.2Hz,
6.2Hz)；4.05(t,2H,J＝6.7Hz)；3.48(quart.,2H,J＝11.4Hz,5.7Hz)；3.02(s,6H)；2.49(br.s,6H)；2.32-2.22(m,4H)；1.70-1.55(m,8H)；1.54-1.45(m,6H)；1.44-1.15(m,52H)；
0.87(t,9H,J＝5.8Hz)。

[2237] FO.化合物260：(Z)-8-((3-(3,3-二甲基-2-氨磺酰基胍基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2238] 氨磺酰基亚氨基碳酸二苯酯

[2239]

[2240] 化学式：C13H12N2O4S

[2241] 分子量：292.31

[2242] 在干燥氮气下，向二氯二苯氧基甲烷(1g，3.7mmol)于10mL无水乙腈中的溶液中添加磺酰胺(0.72g，7.4mmol)并在室温下搅拌浅黄色混合物72小时。浓缩所得混合物，用DCM研磨残余物，过滤，并浓缩滤液。残余物在二氧化硅上通过硅胶色谱法(0-60％EtOAc/己烷)纯化，得到呈无色油状的氨磺酰基亚氨基碳酸二苯酯(295mg，1.01mmol，27％)，静置时凝固得到透明白色固体。UPLC/ELSD:RT＝0.31min。对于C13H12N2O4S，MS(ES):m/z(M-SO2NH2)213.97。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ:ppm 7.54-7.29(dt,10H,J＝44.5Hz,7.5Hz)；7.19(s,
2H)。

[2243] (Z)-8-((3-(3,3-二甲基-2-氨磺酰基胍基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2244]

[2245] 化学式：C48H97N2O6S

[2246] 分子量：872.39

[2247] 向8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(250mg，0.35mmol)于5mL 2-丙醇中的溶液中添加三乙胺(48uL，0.35mmol)，随后添加氨磺酰基亚氨基碳酸二苯酯(101mg，0.35mmol)并在室温下搅拌混合物两小时，之后，LC/MS确定无起始物质残留且仅观察到对应于单苯基异脲中间物(MW＝921.4)的峰。向反应混合物中添加2M二甲基胺的甲醇溶液(1mL，2mmol)并将所得浅黄色溶液加热至55℃，保持18小时。LC/MS确定反应完成，因此在真空下减少溶液，用DCM稀释并用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤一次。使有机相干燥(MgSO4)，过滤并浓缩滤液，得到混浊浅黄色油状物。将其通过硅胶色谱法(0-50％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈浅黄色糊浆状的(Z)-8-((3-(3,3-二甲基-2-氨磺酰基胍基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(155mg，0.18mmol，51％)。UPLC/ELSD:RT＝3.34min。对于C48H97N5O6S，MS(ES):
m/z(MH+)872.58。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 7.02(br.s,1H)；4.86(quint.,1H,J＝
12.4Hz,6.4Hz,)；4.48(br.s,2H)；4.05(t,2H,J＝6.7Hz)；3.36(quart.,2H,J＝11.5Hz,
5.5Hz)；2.97(s,6H)；2.54(br.s,2H)；2.41(br.s,3H)；2.28(m,4H)；1.79-1.68(m,2H)；
1.67-1.55(m,6H)；1.54-1.45(m,4H)；1.44-1.37(m,2H)；1.36-1.14(m,51H)；0.87(t,9H,J＝5.8Hz)。

[2248] FP.化合物261：8-((3-羟基丙基)(6-氧代-6-(十一烷氧基)己基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2249]

[2250] 化学式：C45H89NO5

[2251] 分子量：724.21

[2252] 在干燥氮气下，向8-((3-羟基丙基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(740mg，1.62mmol)和6-溴己酸十一烷酯(570mg(1.62mmol)于16mL无水乙腈中的溶液中添加碘化钾(300mg，1.79mmol)，随后添加粉末状碳酸钾(900mg，6.5mmol)并用4mL无水环戊基甲基醚稀释混合物。将所得白色混合物加热至90℃并搅拌24小时，接着使其冷却至室温，过滤，用DCM洗涤过滤固体并浓缩滤液。使残余物悬浮于50％饱和碳酸氢钠水溶液中并用DCM萃取两次。合并有机物，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩滤液，得到黄色油状物。将其通过硅胶色谱法(0-50％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈浅黄色油状物的8-((3-羟基丙基)(6-氧代-6-(十一烷氧基)己基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(780mg，1.08mmol，
66％)。UPLC/ELSD:RT＝3.55min。对于C45H89NO5，MS(ES):m/z(MH+)724.39。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 5.60(br.s,1H)；4.86(quint.,1H,J＝12.2Hz,6.2Hz,)；4.05(t,2H,J＝
6.7Hz)；3.78(t,2H,J＝4.9Hz)；2.62(t,2H,J＝5.2Hz)；2.40(quint.,4H,J＝8.3Hz,
5.2Hz)；2.28(quart.,4H,J＝15.0Hz,7.7Hz)；1.73-1.55(m,8H)；1.54-1.39(m,8H)；1.38-
1.12(m,48H)；0.87(t,9H,J＝5.9Hz)。

[2253] FQ.化合物263：8-((3-(2-甲氧基乙酰胺基)丙基)(6-氧代-6-(十一烷氧基)己基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2254] 8-((3-氯丙基)(6-氧代-6-(十一烷氧基)己基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2255]

[2256] 化学式：C45H88CINO4

[2257] 分子量：742.65

[2258] 在0℃下，向8-((3-羟基丙基)(6-氧代-6-(十一烷氧基)己基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(700mg，0.97mmol)和三乙胺(202uL，1.45mmol)于无水DCM中的溶液中添加甲烷磺酰氯(90uL，1.16mmol)并使所得溶液升温至室温过夜，之后，LC/MS确定无起始物质残留。将溶液用DCM稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤一次，用盐水洗涤一次，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩滤液，得到呈浅黄色油状物/固体混合物的8-((3-氯丙基)(6-氧代-6-(十一烷氧基)己基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(720mg，大致定量)，1H-NMR确定其含有部分相应甲磺酸酯。该物质不经进一步纯化即使用。UPLC/ELSD:RT＝3.61min。对于C45H88ClNO4，MS(ES):m/z(M-Cl)
706.68。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.86(quint.,1H,J＝12.1Hz,5.9Hz,)；4.05(t,2H,J＝6.7Hz)；3.59(t,2H,J＝6.5Hz)；2.51(t,2H,J＝6.8Hz)；2.40-2.23(m,7H)；1.86(t.,2H,J＝6.0Hz)；1.70-1.45(m,12H)；1.44-1.37(m,4H)；1.36-1.15(m,47H)；0.88(t,9H,J＝
5.9Hz)。

[2259] 8-((3-叠氮基丙基)(6-氧代-6-(十一烷氧基)己基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2260]

[2261] 化学式：C45H88N4O4

[2262] 分子量：749.22

[2263] 在高压Pyrex容器中，向8-((3-氯丙基)(6-氧代-6-(十一烷氧基)己基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(720mg，0.97mmol)于10mL无水DMF中的溶液中添加叠氮化钠(250mg，3.9mmol)，用氮气吹扫容器并用特氟龙螺旋盖密封。将反应物加热至100℃并搅拌过夜，之后，TLC确定无起始氯化物残留。将反应物冷却至室温，用水稀释溶液并用己烷萃取3次。合并有机层，用水洗涤一次，用盐水洗涤一次，干燥(MgSO4)，过滤，并浓缩滤液，得到浅黄色油状物。将其通过硅胶色谱法(0-20％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈黄色油状物的8-((3-叠氮基丙基)(6-氧代-6-(十一烷氧基)己基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(550mg，0.73mmol，75％)。UPLC/ELSD:RT＝3.61min。对于C45H88N4O4，MS(ES):m/z(MH+)749.32。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.86(quint.,1H,J＝12.5Hz,
6.2Hz,)；4.06(t,2H,J＝6.7Hz)；3.33(t,2H,J＝6.4Hz)；2.46(t,2H,J＝6.3Hz)；2.42-2.34(m,3H)；2.28(quart.,4H,J＝14.3Hz,7.1Hz)；1.77-1.55(m,8H)；1.54-1.38(m,8H)；1.37-
1.14(m,49H)；0.88(t,9H,J＝5.7Hz)。

[2264] 8-((3-氨基丙基)(6-氧代-6-(十一烷氧基)己基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2265]

[2266] 化学式：C45H90N2O4

[2267] 分子量：723.23

[2268] 用氮气吹扫含有8-((3-叠氮基丙基)(6-氧代-6-(十一烷氧基)己基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(550mg，0.73mmol)于8mL乙醇中的搅拌的分散液的烧瓶并添加10wt.％钯/碳(约50mg，催化量)，得到黑色混合物。将容器侧壁用2mL乙醇洗涤并再用氮气吹扫烧瓶。所述烧瓶配备氢气球，抽空并回填氢气三次，并在室温下搅拌两小时，之后，LC/MS确定无起始叠氮化物残留。用氮气吹扫烧瓶，通过硅藻土过滤混合物，用乙醇洗涤过滤固体并浓缩滤液，得到黄色油状物。将其通过硅胶色谱法(0-100％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈无色油状物的8-((3-氨基丙基)(6-氧代-6-(十一烷氧基)己基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(375mg，0.52mmol，71％)。UPLC/ELSD:RT＝3.17min。对于C45H90N2O4，MS(ES):m/z(MH+)723.57。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 6.91(br.s,2H)；4.86(quint.,1H,J＝12.3Hz,6.1Hz,)；4.05(t,2H,J＝6.8Hz)；3.06(t,2H,J＝5.5Hz)；2.65(t,2H,J＝5.8Hz)；2.48(quint.,4H,J＝9.7Hz,5.3Hz)；2.29(quart.,4H,J＝17.1Hz,9.6Hz)；
1.89-1.72(m,2H)；1.70-1.55(m,6H)；1.54-1.39(m,8H)；1.38-1.13(m,48H)；0.87(t,9H,J＝5.8Hz)。

[2269] 8-((3-(2-甲氧基乙酰胺基)丙基)(6-氧代-6-(十一烷氧基)己基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2270]

[2271] 化学式：C48H94N2O6

[2272] 分子量：795.29

[2273] 在0℃下，向8-((3-氨基丙基)(6-氧代-6-(十一烷氧基)己基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(170mg，0.23mmol)和三乙胺(100uL，0.7mmol)于4mL无水DCM中的溶液中逐滴添加甲氧基乙酰氯(32uL，0.35mmol)，搅拌所得混合物并使其升温至室温过夜。LC/MS确定无起始胺残留，因此用DCM稀释黄色溶液，用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次，用盐水洗涤一次，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩滤液，得到黄色油状物。将其通过硅胶色谱法(0-50％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈黄色油状物的8-((3-(2-甲氧基乙酰胺基)丙基)(6-氧代-6-(十一烷氧基)己基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(42mg，0.05mmol，
22％)。UPLC/ELSD:RT＝3.44min。对于C48H94N2O6，MS(ES):m/z(MH+)795.25。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 7.50(s,1H)；4.86(quint.,1H,J＝12.0Hz,6.2Hz)；4.05(t,2H,J＝6.7Hz)；
3.87(s,2H)；3.40(m,5H)；2.98(br.s,1H)；2.54-2.34(m,4H)；2.28(quart.,4H,J＝14.7Hz,
7.4Hz)；1.69-1.39(m,14H)；1.38-1.13(m,51H)；0.88(t,9H,J＝5.9Hz)。

[2274] FR.化合物264：8-((3-(2-乙氧基乙酰胺基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2275]

[2276] 化学式：C49H96N2O6

[2277] 分子量：809.32

[2278] 化合物264是由8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(400mg，0.55mmol)，以与化合物178类似的方式，不过使用乙氧基乙酰氯(Alfa Aesar,Tewksbury,MA)(92uL，0.83mmol)替代甲氧基乙酰氯来制备的。在水性后处理后，残余物通过硅胶色谱法(0-50％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈黄色油状无的8-((3-(2-乙氧基乙酰胺基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(140mg，0.55mmol，31％)。UPLC/ELSD:RT＝3.51min。对于C49H96N2O6，MS(ES):m/z(MH+)809.43。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 7.48(s,1H)；4.86(quint.,1H,J＝12.6Hz,6.1Hz)；4.05(t,2H,J＝6.7Hz)；3.91(s,2H)；3.55(quart.,2H,J＝13.8Hz,7.0Hz)；3.36(d,
2H,J＝5.8Hz)；2.53-2.43(m,2H)；2.41-2.32(br.m,3H)；2.31-2.23(m,4H)；1.70-1.56(m,
8H)；1.55-1.37(m,8H)；1.36-1.14(m,52H)；0.88(t,9H,J＝7.5Hz)。

[2279] FS.化合物265：(Z)-8-((3-(2-氰基-3,3-二甲基胍基)丙基)(6-氧代-6-(十一烷氧基)己基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2280]

[2281] 化学式：C49H95N5O4

[2282] 分子量：818.33

[2283] 化合物265是以与化合物168类似的方式，不过改用8-((3-氨基丙基)(6-氧代-6-(十一烷氧基)己基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(170mg，0.23mmol)制备的。在水性后处理后，残余物通过硅胶色谱法(0-50％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈无色糊浆状物的(Z)-8-((3-(2-氰基-3,3-二甲基胍基)丙基)(6-氧代-6-(十一烷氧基)己基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(40mg，0.05mmol，21％)。UPLC/ELSD:RT＝3.52min。对于C49H95N5O4，MS(ES):m/z(MH+)818.78。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 7.52(br.s.,1H)；4.86(quint.,1H,J＝12.6Hz,6.3Hz)；4.06(t,2H,J＝6.7Hz)；3.68(d,2H,J＝
4.3Hz)；3.00(s,6H)；2.59(br.s,2H)；2.44(br.s,3H)；2.29(quart.,4H,J＝13.4Hz,
7.1Hz)；1.80-1.58(m,8H)；1.56-1.38(m,6H)；1.37-1.13(m,51H)；0.88(t,9H,J＝5.9Hz)。

[2284] FT.化合物267：8-((3-(2-甲氧基丙酰胺基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2285]

[2286] 化学式：C49H96N2O6

[2287] 分子量：809.32

[2288] 化合物267是由8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(300mg，0.42mmol)，以与化合物252类似的方式，不过使用2-甲氧基丙酸(Ark Pharm,Arlington Heights,IL)(66mg，0.62mmol)代替(甲基硫代)乙酸制备的。在水性后处理后，残余物通过硅胶色谱法(0-50％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈浅黄色油状物的8-((3-(2-甲氧基丙酰胺基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(45mg，0.06mmol，54％)。UPLC/ELSD:RT＝3.48min。对于C49H96N2O6，MS(ES):m/z(MH+)809.60。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 7.43(s,1H)；4.86(quint.,1H,J＝12.2Hz,6.2Hz)；4.05(t,2H,J＝6.7Hz)；3.71(quart.,1H,J＝13.4Hz,
6.7Hz)；3.36(m,5H)；2.58-2.47(m,2H)；2.45-2.35(m,3H)；2.34-2.24(m,4H)；1.76-1.41(m,16H)；1.40-1.15(m,52H)；0.87(t,9H,J＝5.7Hz)。

[2289] FU.化合物268：8-((3-(2-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2290]

[2291] 化学式：C50H98N2O6

[2292] 分子量：823.34

[2293] 化合物268是由8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(250mg，0.35mmol)，以与化合物252类似的方式，不过使用2-甲氧基-2-甲基丙酸(Enamine,Monmouth Jct.,NJ)(63mg，0.52mmol)代替(甲基硫代)乙酸制备的。在水性后处理后，残余物通过硅胶色谱法(0-50％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈浅黄色油状物的8-((3-(2-甲氧基-2-甲基丙酰胺基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(35mg，0.04mmol，12％)。UPLC/ELSD:RT＝3.58min。对于C50H98N2O6，MS(ES):m/z(MH+)823.62。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 8.96(s,
1H)；7.49(t,1H,J＝6.7Hz)；4.86(quint.,1H,J＝12.1Hz,6.1Hz)；4.07(t,2H,J＝6.6Hz)；
3.44-3.37(m,5H)；3.20-2.98(m,5H)；2.37-2.26(m,4H)；2.17-2.02(m,2H)；1.80-1.69(m,
3H)；1.68-1.60(m,6H)；1.57-1.47(m,4H)；1.46-1.17(m,55H)；0.90(t,9H,J＝5.9Hz)。

[2294] FV.化合物269：琥珀酸6-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(2-羟基乙基)氨基)己酯己酯

[2295] 4-(己氧基)-4-氧代丁酸

[2296]

[2297] 化学式：C10H18O4

[2298] 分子量：202.25

[2299] 将琥珀酸酐(5g，49.4mmol)于1-己醇(6.3mL，49.4mmol)中的浆液加热至80℃并搅拌20小时，之后，该混合物变为无色溶液。使其冷却至室温，用EtOAc稀释，用1N HCl溶液洗涤两次，用盐水洗涤一次，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩滤液，得到呈无色液体的4-(己基氧基)-4-氧代丁酸(9.87g，48.8mmol，99％)，不经进一步纯化即使用。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 10.59(br.s.,1H)；4.10(quart.,2H,J＝11.9Hz,5.2Hz)；2.65(m,4H)；1.62(quint.,2H,J＝13.0Hz,6.9Hz)；1.30(m,6H)；0.89(t,3H,J＝6.7Hz)(未观察到羧酸根质子)。

[2300] 琥珀酸6-溴己酯己酯

[2301]

[2302] 化学式：C16H29BrO4

[2303] 分子量：365.31

[2304] 在干燥氮气下，向4-(己氧基)-4-氧代丁酸(1.0g，4.9mmol)和6-溴-1-己醇(0.75mL，5.2mmol)于20mL无水DCM中的溶液中添加1-乙基-3-(二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(1.67g，7.4mmol)，随后添加4-(二甲基氨基)吡啶(0.3g，2.47mmol)且最后添加N,N-二异丙基乙基胺(2.6mL，14.8mmol)，得到浅黄色溶液。在室温下将其搅拌24小时，之后，TLC显示几乎完全反应。将溶液用DCM稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液(浓稠乳液)洗涤一次，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩滤液，得到无色液体/白色固体混合物。该混合物通过硅胶色谱法(0-25％EtOAc/己烷)纯化，得到呈浅黄色液体的琥珀酸6-溴己酯己酯(0.92g，2.5mmol，
51％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.11-4.06(m,4H)；3.41(t,2H,J＝6.7Hz)；2.62(s,
4H)；1.87(quint.,2H,J＝13.9Hz,7.2Hz)；1.69-1.57(m,4H)；1.50-1.30(m,10H)；0.89(t,
3H,J＝6.3Hz)。

[2305] 琥珀酸6-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(2-羟基乙基)氨基)己酯己酯

[2306]

[2307] 化学式：C43H83NO7

[2308] 分子量726.14

[2309] 在干燥氮气下，向8-((2-羟基乙基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(300mg，0.61mmol)和琥珀酸6-溴己酯己酯(223mg，0.61mmol)于8mL无水乙腈中的溶液中添加碘化钾(115mg，0.68mmol)，随后添加粉末状碳酸钾(340mg，2.4mmol)并用2mL无水环戊基甲基醚稀释混合物。将所得白色混合物加热至90℃并搅拌24小时，接着使其冷却至室温，过滤，用DCM洗涤过滤固体并浓缩滤液。使残余物悬浮于50％饱和碳酸氢钠水溶液中并用DCM萃取两次。合并有机物，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩滤液，得到黄色油状物。将其通过硅胶色谱法(0-30％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈无色油状物的琥珀酸6-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(2-羟基乙基)氨基)己酯己酯(40mg，0.06mmol，
9％)。UPLC/ELSD:RT＝3.15min。对于C43H83NO7，MS(ES):m/z(MH+)726.36。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.86(quint.,1H,J＝12.2Hz,6.1Hz,)；4.08(t,4H,J＝6.6Hz)；3.52(t,2H,J＝5.0Hz)；2.96(br.s,1H)；2.62(s,4H)；2.57(t,2H,J＝4.9Hz)；2.44(t.,4H,J＝6.4Hz)；
2.27(t.,2H,J＝7.4Hz)；1.70-1.56(m,6H)；1.54-1.37(m,8H)；1.36-1.15(m,40H)；0.87(t,
9H,J＝5.9Hz)。

[2310] FW.化合物238：8-((4-(二甲基氨基)-4-氧代丁基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2311]

[2312] 化学式：C48H94N2O5

[2313] 分子量：779.29

[2314] 向冷却至-15℃的4-溴丁酰氯(1.6g，8.62mmol)于15mL无水THF中的溶液中添加2M二甲基胺的THF溶液(12mL，24mmol)，搅拌所得混合物并使其升温至室温。通过过滤移除沉淀固体并浓缩滤液，得到粗4-溴-N,N-二甲基丁酰胺。将其溶解于20mL的1:1乙腈/甲基环戊基醚混合物中，添加8-((8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(1g，1.5mmol)、碳酸钾(0.8g，6mmol)、碘化钾(0.3g，1.8mmol)，将混合物加热至80℃并搅拌过夜。将反应物冷却至室温，过滤并浓缩滤液。残余物通过硅胶色谱法(4:1己烷/丙酮，等度洗脱)纯化，得到呈浅黄色油状物的8-((4-(二甲基氨基)-4-氧代丁基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(180mg，0.23mmol，15％)。对于C48H94N2O5，MS(CI):m/z(MH+)
779.7。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.83(quint.,1H,J＝6Hz)；4.03(t,2H,J＝7.5Hz)；3-
2.7(m,10H)；2.5(t,2H,J＝7.5Hz)；2.26(m,4H)；2(m,2H)；1.7-1.4(m,14H)；1.4-1.2(m,
50H)；0.8(m,9H)。

[2315] FX.化合物239：8-((4-(甲基氨基)-4-氧代丁基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2316]

[2317] 化学式：C47H92N2O5

[2318] 分子量：765.26

[2319] 化合物239是由8-((8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(0.8g，1.2mmol)，以与化合物238类似的方式，不过使用2M甲基胺的甲醇溶液(8mL，16mmol)代替2M二甲基胺的THF溶液制备的。在过滤并浓缩反应混合物后，残余物通过硅胶色谱法(4:1己烷/丙酮，等度洗脱)纯化，得到呈浅黄色油状物的8-((4-(甲基氨基)-4-氧代丁基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(400mg，0.52mmol，43％)。对于C47H92N2O5，MS(CI):m/z(MH+)765.6。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.83(quint.,1H,J＝6Hz)；4.04(t,2H,J＝6Hz)；3.6(s,3H)；2.4-2.2(m,12H)；1.8-1.4(m,14H)；1.4-1.2(m,50H)；0.8(m,9H)；(未观察到酰胺质子)。

[2320] FY.化合物240：8-((4-(甲氧基(甲基)氨基)-4-氧代丁基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2321] 4-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)丁酸

[2322]

[2323] 化学式：C46H89NO6

[2324] 分子量：752.22

[2325] 在0℃下，将高碘酸(7.3g，32mmol)于100mL乙腈中的混合物剧烈搅拌15分钟。向其中添加8-((4-羟基丁基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(10.75g，14.6mmol)于30mL乙腈中的溶液，随后添加氯铬酸吡啶鎓(0.16g，0.73mmol)。使所得混合物升温至室温，保持4小时，之后，LC/MS显示大部分起始醇残留。再向混合物中添加氯铬酸吡啶鎓(0.16g，0.73mmol)并继续搅拌1小时。LC/MS显示在再添加氯铬酸吡啶鎓后形成较多产物，然而此反应步骤较慢。将反应混合物用EtOAc稀释，用水/盐水(1:1)混合物、饱和碳酸氢钠水溶液且最后用盐水洗涤。在干燥(MgSO4)并浓缩之后，获得13g粗物质，NMR测定其含有
20％起始醇以及一些醛中间物。将该粗物质溶解于120mL的1:1乙腈/TBME中，添加高碘酸(13.0g，57mmol)和氯铬酸吡啶鎓(0.16g，0.73mmol)并在室温下搅拌混合物3小时。再添加氯铬酸吡啶鎓(0.16g，0.73mmol)并在室温下搅拌混合物16小时，之后，LC/MS显示几乎无起始醇残留。将反应混合物用EtOAc稀释，用水/盐水(1:1)混合物、饱和碳酸氢钠水溶液且最后用盐水洗涤。使有机层干燥(MgSO4)，过滤并浓缩滤液。残余物通过硅胶色谱法(0-6％接着10％甲醇/二氯甲烷)纯化，得到呈褐色油状物的4-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)丁酸(8.80g，11.7mmol，80％)。对于C46H89NO6，MS(CI):
m/z(MH+)752.6。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.84(quint.,1H,J＝6.3Hz)；4.03(t,2H,J＝
6.8Hz)；3.12(m,2H)；3.00(m,4H)；2.52(m,2H)；2.27(m,4H)；2.08(m,2H)；1.81(br.m,4H)；
1.60(m,6H)；1.48(m,4H)；1.24(br.m,48H)；0.86(t,9H,J＝6.9Hz)；未观察到羧酸根质子。

[2326] 8-((4-(甲氧基(甲基)氨基)-4-氧代丁基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2327]

[2328] 化学式：C48H94N2O6

[2329] 分子量：795.29

[2330] 在0℃下，向4-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)丁酸(1.00g，1.33mmol)于40mL二氯甲烷中的溶液中添加羰基二咪唑(259mg，1.6mmol)，移除冷却浴并在室温下搅拌混合物30分钟。在冷却至0℃之后，添加N,O-二甲基羟基胺盐酸盐(156mg，1.6mmol)和三乙胺(0.23mL，1.6mmol)并在室温下搅拌所得混合物16小时。LC/MS确定不到10％的起始酸残留，因此用己烷稀释反应混合物，用水和盐水洗涤一次。使有机层干燥(MgSO4)，过滤并浓缩滤液。残余物通过硅胶色谱法(0-6％接着10％甲醇/二氯甲烷)纯化，得到0.77g含有一些起始酸的混合物。该物质再通过硅胶色谱法(0-40％，接着60％丙酮/己烷)纯化，得到呈无色油状物的8-((4-(甲氧基(甲基)氨基)-4-氧代丁基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(210mg，0.26mmol，20％)。HPLC/UV(214nm):RT＝9.78min。对于C48H94N2O6，MS(CI):m/z(MH+)795.7。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:
ppm 4.85(quint.,1H,J＝6.3Hz)；4.04(t,2H,J＝6.8Hz)；3.67(s,3H)；3.17(s,3H)；2.41(m,6H)；2.27(m,6H)；1.74(m,2H)；1.60(m,8H)；1.48(m,4H)；1.40(m,2H)；1.24(br.m,48H)；
0.86(t,9H,J＝6.8Hz)。

[2331] FZ.化合物241：8-((4-(甲氧基氨基)-4-氧代丁基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2332]

[2333] 化学式：C47H92N2O6

[2334] 分子量：781.26

[2335] 向4-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)丁酸(1.00g，1.33mmol)和O-甲基羟基胺盐酸盐(178mg，2.13mmol)于20mL二氯甲烷中的混合物中添加1-乙基-3-(二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(460mg，2.39mmol)，随后添加三乙胺(0.30mL，2.13mmol)并在室温下搅拌混合物16小时。LC/MS确定仅少量起始酸残留，因此用己烷稀释反应混合物，用水和盐水洗涤一次。使有机层干燥(MgSO4)，过滤并浓缩滤液。残余物通过硅胶色谱法(0-6％，接着10％甲醇/二氯甲烷)纯化，得到0.63g含有一些起始酸的混合物。该物质再通过硅胶色谱法(0-40％接着80％丙酮/己烷)纯化，得到呈无色油状物的8-((4-(甲氧基氨基)-4-氧代丁基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(0.56g，0.71mmol，53％)。HPLC/UV(214nm):RT＝9.49min。对于C47H92N2O6，MS(CI):m/z(MH+)
781.6。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.85(quint.,1H,J＝6.3Hz)；4.04(t,2H,J＝6.8Hz)；
3.73(s,3H)；2.48(m,2H)；2.42(m,4H)；2.28(m,6H)；1.73(m,4H)；1.60(m,6H)；1.48(m,6H)；
1.24(br.m,48H)；0.87(t,9H,J＝7.1Hz)；未观察到异羟肟酸根质子。

[2336] GA.化合物242：8-((4-(羟基(甲基)氨基)-4-氧代丁基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2337]

[2338] 化学式：C47H92N2O6

[2339] 分子量：781.26

[2340] 在0℃下，向4-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)丁酸(1.08g，1.43mmol)于25mL二氯甲烷中的溶液中添加草酰氯(121μL，1.43mmol)，随后添加5滴DMF，移除冷却浴并在室温下搅拌反应混合物16小时。在0℃下，向所得溶液中添加N-甲基羟基胺盐酸盐(0.36g，4.3mmol)和DMAP(355mg，0.29mmol)，随后添加三乙胺(1.0mL，7.2mmol)，使反应物升温至室温并搅拌16小时。LC/MS确定仅少量起始酸残留，因此用己烷稀释反应混合物，用水和盐水洗涤一次。使有机层干燥(MgSO4)，过滤并浓缩滤液。残余物通过硅胶色谱法(0-50％，接着80％丙酮/己烷)纯化，得到呈黄色油状物的8-((4-(羟基(甲基)氨基)-4-氧代丁基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(0.61g，0.78mmol，54％)。HPLC/UV(214nm):RT＝9.69min。对于C47H92N2O6，MS(CI):m/z(MH+)781.6。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.85(quint.,1H,J＝6.0Hz)；4.04(t,2H,J＝6.9Hz)；3.21(s,
3H)；2.55(m,4H)；2.44(m,4H)；2.27(m,4H)；1.96(m,2H)；1.60(m,8H)；1.47(m,6H)；1.24(br.m,48H)；0.87(t,9H,J＝7.1Hz)；未观察到异羟肟酸根质子。

[2341] GB.化合物243：8-((4-氨基-4-氧代丁基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2342]

[2343] 化学式：C46H90N2O5

[2344] 分子量：751.24

[2345] 在0℃下，向4-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)丁酸(1.0g，1.33mmol)于25mL二氯甲烷中的溶液中添加草酰氯(120μL，1.33mmol)，随后添加5滴DMF，移除冷却浴并在室温下搅拌反应混合物16小时。将所得溶液冷却至0℃，使氨气鼓泡通过5分钟，并在0℃下保持反应两小时。LC/MS确定仅少量起始酸残留，因此用二氯甲烷稀释反应混合物并用盐水洗涤。使有机层干燥(MgSO4)，过滤并浓缩滤液。残余物通过硅胶色谱法(0-40％，接着80％丙酮/己烷)纯化，得到呈褐色油状物的8-((4-氨基-4-氧代丁基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(0.30g，0.40mmol，30％)。HPLC/UV(214nm):RT＝9.09min。对于C46H90N2O5，MS(CI):m/z(MH+)751.6。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 6.73(bs,1H)；5.22(bs,1H)；4.85(quint.,1H,J＝6.3Hz)；4.04(t,2H,J＝
6.6Hz)；2.45(m,2H)；2.37(m,4H)；2.27(m,6H)；1.75(m,2H)；1.60(m,8H)；1.50(m,4H)；1.40(m,2H)；1.24(br.m,48H)；0.87(t,9H,J＝6.5Hz)。

[2346] GC.化合物248：(Z)-8-((3-(3,3-二甲基-2-硝基胍基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2347] S-甲基-N-硝基-N′-邻苯二甲酰基异硫脲

[2348]

[2349] 化学式：C10H7N3O4S

[2350] 分子量：265.24

[2351] 在0℃下，经25分钟向S-甲基-N-硝基异硫脲(5.0g，37mmol)于70mL吡啶中的溶液中逐滴添加邻苯二甲酰氯(14.5g，10.3mL，72mmol)。在0℃下搅拌溶液30分钟，在此期间形成沉淀。将混合物倒入600mL冰冷的2N盐酸溶液，过滤所得固体，用水洗涤并空气干燥。自乙醇使固体沉淀，得到呈白色固体的S-甲基-N-硝基-N′-邻苯二甲酰基异硫脲(6.23g，23.5mmol，64％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 7.97-7.95(m,2H)；7.87-7.86(m,2H)；2.66(s,3H)。

[2352] 甲基N,N-二甲基-N′-硝基异硫脲

[2353]

[2354] 化学式：C4H9N3O2S

[2355] 分子量：163.20

[2356] 在0℃下，经25分钟向S-甲基-N-亚硝基-N′-邻苯二甲酰基异硫脲(1.5g，5.68mmol)于10mL二氯甲烷中的溶液中逐滴添加2M二甲基胺的THF溶液(2.84mL，5.68mmol)于5mL甲醇中的溶液。在室温下搅拌反应混合物3小时，浓缩，将残余物溶解于二氯甲烷中并通过硅胶色谱法(4:1己烷/乙酸乙酯，等度洗脱)纯化，得到呈蜡状白色固体的甲基N,N-二
1
甲基-N′-硝基异硫脲(678mg，4.15mmol，73％)。H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 3.25(s,6H)；
2.53(s,3H)。

[2357] (Z)-8-((3-(3,3-二甲基-2-硝基胍基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2358]

[2359] 化学式：C48H95N5O6

[2360] 分子量：838.32

[2361] 向8-((氨基丙基)(8-壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(500mg，0.69mmol)于20mL甲醇中的溶液中添加甲基–N,N-二甲基-N′-硝基异硫脲(118mg，
0.73mmol)，将反应混合物加热至回流并搅拌5小时。LC/MS确定无起始胺残留，因此移除溶剂且残余物通过硅胶色谱法(洗脱剂二氯甲烷、甲醇、1％氢氧化铵)纯化，得到520mg不纯物质。将其再通过硅胶色谱法(先用0-100％乙酸乙酯/己烷，接着0-50％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈浅黄色油状物的(Z)-8-((3-(3,3-二甲基-2-硝基胍基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(220mg，
0.26mmol，38％)。HPLC/UV 214nm:RT＝9.48min。对于C48H95N5O6，MS(CI):m/z(MH+)838.7。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm4.87-4.83(m,1H)；4.04(t,2H,J＝6.7Hz)；3.51(t,2H,J＝
5.2Hz)；3.05(s,6H)；2.66(bs,1H)；2.48(bs,2H)；2.28(dt,4H,J＝7.4Hz,3.8Hz)；1.62-
1.58(m,8H)；1.48-1.30(m,8H)；1.29-1.24(m,52H)；0.86(t,9H,J＝6.6Hz)。

[2362] GD.化合物249：(E)-8-((3-(2-氰基-3-甲基胍基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2363]

[2364] 化学式：C48H93N5O4

[2365] 分子量：804.30

[2366] 化合物249是由8-((3-氨基丙基)(8-壬氧基)-8-氧代辛基)氨基辛酸十七烷-9-基酯(400mg，0.55mmol)，以与化合物168类似的方式，不过使用2M甲基胺的甲醇溶液(1.4mL，2.8mmol)代替2M二甲基胺的THF溶液制备的。在水性后处理后，残余物通过硅胶色谱法(二氯甲烷、甲醇/1％NH4OH)纯化，得到呈浅黄色油状物的(E)-8-((3-(2-氰基-3-甲基胍基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(260mg，0.32mmol，58％)。HPLC/UV
214nm:RT＝9.83min。对于C48H93N5O4，MS(CI):m/z(MH+)804.7。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm
4.87-4.83(m,1H)；4.04(t,2H,J＝6.7Hz)；3.29(m,2H)；2.77(d,3H,J＝4.6Hz)；2.52(m,
1H)；2.44-2.39(m,3H)；2.28(dt,4H,J＝7.4Hz,3.6Hz)；1.65-1.57(m,16H)；1.50-1.41(m,
3H)；1.30-1.24(m,48H)；0.86(t,9H,J＝6.4Hz)。

[2367] GE.化合物250：(Z)-8-((3-((1-(二甲基氨基)-2-硝基乙烯基)氨基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2368] (E)-N,N-二甲基-1-(甲基硫代)-2-硝基乙烯-1-胺

[2369]

[2370] 化学式：C5H10N2O2S

[2371] 分子量：162.21

[2372] 在0℃下，向(2-硝基乙烯-1,1-二基)双(甲基硫烷)(EP 5984A1)(1.0g，6.1mmol)于乙腈中的溶液中添加2M二甲基胺的四氢呋喃溶液(3mL，6mmol)并在室温下搅拌反应混合物3小时。在真空下移除溶剂且粗产物通过硅胶色谱法(己烷，乙酸乙酯)纯化，得到呈略带红色的黄色油状物的(E)-N,N-二甲基-1-(甲基硫代)-2-硝基乙烯-1-胺(200mg，20％)，其含有N,N,N′,N′-四甲基-2-硝基乙烯-1,1-二胺，其不经进一步纯化即使用。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 6.67(s,1H)；3.20(s,6H)；2.46(s,3H)。

[2373] (Z)-8-((3-((1-(二甲基氨基)-2-硝基乙烯基)氨基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2374]

[2375] 化学式：C49H96N4O6

[2376] 分子量：837.33

[2377] 向8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(500mg，0.69mmol)于20mL甲醇中的溶液中添加(E)-N,N-二甲基-1-(甲基硫代)-2-硝基乙烯-1-胺(112mg，0.69mmol)，将反应混合物加热至回流并搅拌5小时。移除溶剂且所述化合物通过硅胶色谱法纯化两次[柱1：己烷/乙酸乙酯，接着二氯甲烷，甲醇/1％NH4OH，柱2：己烷/乙酸乙酯，接着二氯甲烷，甲醇/1％NH4OH]，得到呈黄色油状物的(Z)-8-((3-((1-(二甲基氨基)-
2-硝基乙烯基)氨基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(104mg，
0.12mmol,18％)。HPLC/UV 214nm:RT＝8.69min。对于C48H96N4O6，MS(CI):m/z(MH+)837.7。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 9.56(bs,1H)；6.49(s,1H)；4.87-4.83(m,1H)；4.04(t,2H,J＝
6.7Hz)；3.34-3.32(m,2H)；2.92(s,6H)；2.49(m,2H)；2.37-2.33(m,4H)；2.27(dt,4H,J＝
7.4Hz,3.8Hz)；1.77-1.75(m,2H)；1.62-1.48(m,8H)；1.34-1.24(m,54H)；0.86(t,9H,J＝
6.5Hz)。

[2378] GF.化合物254：4-亚氨基-9-(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)-2-氧杂-3,5,9-三氮杂十七烷-17-酸十七烷-9-基酯

[2379] 7-(叔丁氧基羰基)-2,2-二甲基-11-(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)-4-氧代-6-(1H-吡唑-1-基)-3-氧杂-5,7,11-三氮杂十九碳-5-烯-19-酸十七烷-9-基酯

[2380]

[2381] 化学式：C59H109N5O8

[2382] 分子量：1016.55

[2383] 向(8-((3-羟基丙基)(8-(壬氧基)辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(500mg，0.69mmol)于10mL无水四氢呋喃中的溶液中添加三苯基膦(271.8mg，1.04mmol)和(((叔丁氧基羰基)氨基)(1H-吡唑-1-基)亚甲基)氨基甲酸叔丁酯(Aldrich Chemical Co.,
St.Louis,MO；214.3mg，0.69mmol)并将反应混合物冷却至0℃。向其中逐滴添加偶氮二甲酸二异丙酯(0.2mL，1.04mmol)，移除冷却浴并在室温下搅拌反应混合物24小时。LC/MS确定无起始醇残留，因此移除溶剂且残余物通过硅胶色谱法(0-40％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到呈无色油状物的7-(叔)-丁氧基羰基)-2,2-二甲基-11-(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)-4-氧代-
6-(1H-吡唑-1-基)-3-氧杂-5,7,11-三氮杂十九碳-5-烯-19-酸十七烷-9-基酯(227mg，
0.22mmol，32％)。对于C59H109N5O8，MS(CI):m/z(MH+)1016.8。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm
7.93(s,1H)；7.67(s,1H)；6.40(s,1H)；4.87-4.83(m,1H)；4.04(t,2H,J＝6.7Hz)；3.69-
3.67(m,2H)；2.45(t,2H,J＝7.0Hz)2.35-2.23(m,8H)；1.88-1.84(m,2H)；1.57-1.49(m,
10H)；1.38-1.24(m,70H)；0.86(t,9H,J＝6.5Hz)。

[2384] 7-(叔丁氧基羰基)-6-(甲氧基氨基)-2,2-二甲基-11-(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)-4-氧代-3-氧杂-5,7,11-三氮杂十九碳-5-烯-19-酸十七烷-9-基酯

[2385]

[2386] 化学式：C57H110N4O9

[2387] 分子量：995.53

[2388] 向7-(叔丁氧基羰基)-2,2-二甲基-11-(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)-4-氧代-6-(1H-吡唑-1-基)-3-氧杂-5,7,11-三氮杂十九碳-5-烯-19-酸十七烷-9-基酯(227mg，
0.22mmol)于30mL的1:1环戊基甲基醚/乙腈混合物中的溶液中添加O-甲基羟基胺盐酸盐(93.3mg，1.12mmol)，随后添加N,N-二异丙基乙基胺(0.2mL，1.12mmol)，将反应混合物加热至85℃并搅拌24小时。LC/MS确定反应进展至约80％，因此再添加O-甲基羟基胺盐酸盐(93.3mg，1.12mmol)，随后添加N,N-二异丙基乙基胺(144.4mg，0.2mL，1.12mmol)并在85℃下再搅拌反应混合物24小时。LC/MS确定无起始物质残留，因此移除溶剂且残余物通过硅胶色谱法(1:1己烷/乙酸乙酯，等度洗脱)纯化，得到呈无色油状物的7-(叔丁氧基羰基)-6-(甲氧基氨基)-2,2-二甲基-11-(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)-4-氧代-3-氧杂-5,7,11-三氮杂十九碳-5-烯-19-酸十七烷-9-基酯(189mg，0.19mmol，85％)。对于C57H110N4O9，MS(CI):m/
1
z(MH+)995.8。H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 7.31(s,1H)；4.87-4.83(m,1H)；4.04(t,2H,J＝
6.7Hz)；3.83(s,3H)；3.42(t,2H,J＝7.5Hz)；2.48-2.32(m,6H)；2.26(dt,4H,J＝7.4Hz,
3.8Hz)；1.62-1.55(m,8H)；1.50-1.43(m,20H)；1.39-1.24(m,54H)；0.86(t,9H,J＝6.4Hz)。

[2389] 4-亚氨基-9-(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)-2-氧杂-3,5,9-三氮杂十七烷-17-酸十七烷-9-基酯

[2390]

[2391] 化学式：C47H94N4O5

[2392] 分子量：795.29

[2393] 在0℃下，向7-(叔丁氧基羰基)-6-(甲氧基氨基)-2,2-二甲基-11-(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)-4-氧代-3-氧杂-5,7,11-三氮杂十九碳-5-烯-19-酸十七烷-9-基酯(189mg，
0.19mmol)于1mL乙酸乙酯中的溶液中逐滴添加4M盐酸的1,4-二噁烷溶液(8mL，32mmol)并在室温下搅拌反应混合物3天。LC/MS确定无起始物质残留并且仅观察到完全脱除保护基的产物。浓缩反应物，将残余物溶解于乙酸乙酯中并用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤溶液一次，接着用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩滤液。残余物通过硅胶色谱法(二氯甲烷，甲醇/
1％NH4OH)纯化，得到4-亚氨基-9-(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)-2-氧杂-3,5,9-三氮杂十七烷-17-酸十七烷-9-基酯(120mg，0.15mmol，80％)。对于C47H94N4O5，MS(CI):m/z(MH+)795.7。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.87-4.83(m,1H)；4.04(t,2H,J＝6.7Hz)；3.64(s,3H)；3.15(bs,2H)；2.51-2.49(m,2H)；2.42-2.38(m,4H)；2.27(dt,4H,J＝7.4Hz,3.7Hz)；1.65-1.55(m,8H)；1.49-1.41(m,8H)；1.29-1.24(m,50H)；0.86(t,9H,J＝6.4Hz)。

[2394] GG.化合物266：(E)-8-((3-(2-氰基胍基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2395]

[2396] 化学式：C47H91N5O4

[2397] 分子量：790.28

[2398] 化合物266是由8-((3-氨基丙基)(8-壬氧基)-8-氧代辛基)氨基辛酸十七烷-9-基酯(400mg，0.55mmol)，以与化合物168类似的方式制备的，不过使用7M氨的甲醇溶液(2mL，14mmol)代替2M二甲基胺的THF溶液并在密封管中进行反应。在水性后处理后，残余物通过硅胶色谱法(二氯甲烷，甲醇/1％NH4OH)纯化，得到呈浅黄色油物的(E)-8-((3-(2-氰基胍基)丙基)(8-(壬氧基l)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(170mg，0.21mmol，39％)。
HPLC/UV 214nm:RT＝9.26min。对于C47H91N5O4，MS(CI):m/z(MH+)790.7。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppmδ4.87-4.83(m,1H)；4.04(t,2H,J＝6.7Hz)；3.29-3.27(m,2H)；2.51-2.48(m,
2H)；2.43-2.38(m,4H)；2.31-2.25(m,4H)；1.68-1.55(m,8H)；1.50-1.48(m,4H)；1.40-1.37(m,4H)；1.30-1.23(m,50H)；0.86(t,9H,J＝6.6Hz)；未观察到一个胍质子。

[2399] GH.化合物274：(E)-8-((3-(2-硝基胍基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2400]

[2401] 化学式：C46H91N5O6

[2402] 分子量：810.26

[2403] 向8-((氨基丙基)(8-壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(530mg，0.73mmol)于20mL甲醇中的溶液中添加甲基-N′-硝基异硫脲(104mg，0.77mmol)，将反应混合物加热至回流并搅拌4小时。LC/MS确定无起始物质残留并观察到两个产物峰，这些峰对应于两种硝基胍区域异构体(Z和E)。Z异构体的量随反应时间而降低，因为该异构体转化成更稳定的E异构体。移除溶剂且粗化合物通过硅胶色谱法(起初是己烷，0-100％乙酸乙酯/己烷，接着0-50％甲醇/1％NH4OH/二氯甲烷)纯化，得呈无色油状物的(E)-8-((3-(2-硝基胍基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(160mg，0.20mmol，27％)。
HPLC/UV 214nm:RT＝9.53min。对于C46H91N5O6，MS(CI):m/z(MH+)810.7。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 8.41(bs,1H)；4.87-4.83(m,1H)；4.04(t,2H,J＝6.6Hz)；3.36-3.34(m,2H)；
2.51-2.41(m,6H)；2.28(dt,4H,J＝7.6Hz,3.7Hz)；1.78(bs,2H)；1.63-1.58(m,8H)；1.50-
1.38(m,6H)；1.30-1.23(m,50H)；0.86(t,9H,J＝6.8Hz)。

[2404] 还分离出呈浅黄色油状物的(Z)-8-((3-(2-硝基胍基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(65mg，0.08mmol，11％)，静置后缓慢转化成E异构体。HPLC/UV 214nm:RT＝10.66min。对于C46H91N5O6，MS(CI):m/z(MH+)810.6。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.87-4.80(m,1H)；4.04(t,2H,J＝6.7Hz)；3.36-3.34(m,2H)；2.48(bs,4H)；2.30-2.24(m,4H)；2.16-2.15(m,1H)；1.79(bs,1H)；1.62-1.42(m,15H)；1.30-1.24(m,52H)；0.86(t,
9H,J＝6.6Hz)。

[2405] GI.化合物275：(Z)-癸-3-烯酸7-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(2-羟基乙基)氨基)庚酯

[2406]

[2407] 化学式：C12H18O3

[2408] 分子量：210.27

[2409] 向1-辛炔-3-醇(2.15mL，14.4mmol)和丙炔酸甲酯(1.2mL，14.4mmol)于100mL无水DCM中的溶液中添加三乙胺(0.2mL，1.4mmol)并在室温下搅拌浅黄色溶液20小时，之后，TLC确定无起始醇残留。浓缩溶液且残余物通过硅胶色谱法(0-20％EtOAc/己烷)纯化，得到呈无色液体的(E)-3-(辛-1-炔-3-基氧基)丙烯酸甲酯(2.92g，13.9mmol，97％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 7.61(d,1H,J＝12.5Hz)；5.38(d,1H,J＝12.5Hz)；4.53(td,1H,J＝6.6Hz,2.0Hz)；3.70(s,3H)；2.58(d,1H,J＝2.0Hz)；1.91-1.75(m,2H)；1.52-1.41(m,2H)；
1.37-1.26(m,4H)；0.90(t,3H,J＝6.9Hz)。

[2410]

[2411] 化学式：C10H18O2

[2412] 分子量：170.25

[2413] 在5mL 微波小瓶中合并840mg(4mmol)(E)-3-(辛-1-炔-3-基氧基)丙烯酸甲酯和2mL水，得到无色双层。密封小瓶并使混合物经历微波照射，在175℃下保持90分钟。用DCM洗涤所得双层两次，合并有机物，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩滤液，得到深橙色油状物。将该油状物溶解于己烷中并通过硅胶色谱法(0-20％EtOAc/己烷)纯化，得到呈橙色油状物的(Z)-癸-3-烯酸(155mg，0.91mmol，23％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 11.03(br.s,1H)；5.70-
5.44(m,2H)；3.14(d,2H,J＝6.6Hz)；2.04(q.,2H,J＝6.8Hz)；1.43-1.13(m,8H)；0.88(t,
3H,J＝6.8Hz)。通过1D选择性梯度NOEsy实验，在2.07ppm(C-5质子)和3.16ppm(C-2质子)下照射确定(Z)-几何结构。

[2414]

[2415] 化学式：C17H31BrO2

[2416] 分子量：347.34

[2417] 向(Z)-癸-3-烯酸(220mg，1.29mmol)和7-溴-1-庚醇(250uL，1.42mmol)于10mL无水DCM中的溶液中添加1-乙基-3-(二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(440mg，1.94mmol)，随后添加DMAP(80mg，0.65mmol)且最后添加N,N-二异丙基乙基胺(680uL，3.88mmol)。在室温下搅拌所得橙色溶液24小时，之后，TLC显示无起始酸残留。将溶液用DCM稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液(浓稠乳液)洗涤一次，用10％柠檬酸水溶液洗涤一次，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩滤液，得到黄色油状物。将其通过硅胶色谱法(0-15％EtOAc/己烷)纯化，得到呈浅黄色液体的(Z)-癸-3-烯酸7-溴庚酯(250mg，0.72mmol，56％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 5.65-5.49(m,2H)；4.07(t,2H,J＝6.7Hz)；3.40(t,2H,J＝6.8Hz)；3.08(d,2H,J＝5.5Hz)；
2.04(q.,2H,J＝6.8Hz)；1.92-1.79(m,2H)；1.70-1.56(m,2H)；1.51-1.20(m,14H)；0.88(t,
3H,J＝6.3Hz)。

[2418]

[2419] 化学式：C44H85NO5

[2420] 分子量：708.17

[2421] 化合物285是由8-((2-羟基乙基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(350mg，0.71mmol)，以与化合物284类似的方式，不过使用(Z)-癸-3-烯酸7-溴庚酯(250mg，0.72mmol)代替丙二酸5-溴戊酯辛酯制备的。在水性后处理后，所得黄色油状物通过硅胶色谱法(0-40％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈无色油状物的(Z)-癸-3-烯酸7-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(2-羟基乙基)氨基)庚酯(205mg，0.29mmol，
41％)。

[2422] UPLC/ELSD:RT＝3.35min。对于C44H85NO5，MS(ES):m/z(MH+)708.75。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 5.64-5.48(m,2H)；4.86(quint.,1H,J＝6.2Hz)；4.07(t,2H,J＝
6.7Hz)；3.55(t,2H,J＝5.0Hz)；3.40(t,2H,J＝6.8Hz)；3.08(d,2H,J＝5.6Hz)；2.61(t,2H,J＝4.1Hz)；2.47(t,4H,J＝6.8Hz)；2.27(t,2H,J＝7.5Hz)；2.04(q.,2H,J＝6.8Hz)；1.70-
1.55(m,4H)；1.54-1.40(m,6H)；1.39-1.13(m,45H)；0.87(t,9H,J＝6.5Hz)。

[2423] GJ.化合物276：8-((3-(3-甲氧基丙酰胺基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2424]

[2425] 化学式：C49H96N2O6

[2426] 分子量：809.32

[2427] 化合物276是由8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(250mg，0.35mmol)，以与化合物178类似的方式，不过使用3-甲氧基丙酰氯(Oakwood Chemical,Estill,SC)(57uL，0.52mmol)代替甲氧基乙酰氯制备的。在水性后处理后，残余物通过硅胶色谱法(0-40％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈黄色油状物的8-((3-(3-甲氧基丙酰胺基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(140mg，0.55mmol，31％)。UPLC/ELSD:RT＝3.48min。对于C49H96N2O6，MS(ES):m/z(MH+)809.78。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 7.48(s,1H)；4.86(quint.,1H,J＝12.6Hz,6.1Hz)；4.05(t,2H,J＝6.7Hz)；3.91(s,2H)；3.55(quart.,2H,J＝13.8Hz,7.0Hz)；
3.36(d,2H,J＝5.8Hz)；2.53-2.43(m,2H)；2.41-2.32(br.m,3H)；2.31-2.23(m,4H)；1.70-
1.56(m,8H)；1.55-1.37(m,8H)；1.36-1.14(m,52H)；0.88(t,9H,J＝7.5Hz)。

[2428] GK.化合物277：戊二酸4-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(2-羟基乙基)氨基)丁酯庚酯

[2429] 步骤1：5-(庚氧基)-5-氧代戊酸

[2430]

[2431] 化学式：C12H22O4

[2432] 分子量：230.30

[2433] 将5g(41.6mmol)戊二酸酐于7.2mL(50mmol)1-庚醇中的浆液加热至90℃并搅拌20小时，之后，该混合物变为无色溶液。使其冷却至室温，用饱和碳酸氢钠水溶液(约50mL)稀释并用二乙醚萃取三次。用4N HCl水溶液将水层调至约pH 3并用EtOAc萃取所得混浊混合物三次。合并EtOAc相，用盐水洗涤一次，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩滤液，得到呈无色液体的5-(庚氧基)-5-氧代戊酸(7.36g，31.9mmol，77％)，不经进一步纯化即用于下一步骤。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 11.40(br.s.,1H)；4.06(t.,2H,J＝6.8Hz)；2.41(m,4H)；1.95(quint.,2H,J＝14.5Hz,7.3Hz)；1.61(m,2H)；1.28(m,8H)；0.88(t,3H,J＝5.8Hz)。

[2434] 步骤2：戊二酸4-溴丁酯庚酯

[2435]

[2436] 化学式：C16H29BrO4

[2437] 分子量：365.31

[2438] 在干燥氮气下，向5-(庚氧基)-5-氧代戊酸(1.5g，6.5mmol)和4-溴-1-丁醇(0.82mL，6.8mmol)于20mL无水DCM中的溶液中添加1-乙基-3-(二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(2.2g，9.8mmol)，随后添加4-(二甲基氨基)吡啶(0.4g，3.26mmol)且最后添加N,N-二异丙基乙基胺(3.4mL，19.5mmol)，得到浅黄色溶液。在室温下搅拌该溶液24小时，之后，LC/MS显示无起始酸残留。将溶液用DCM稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液(浓稠乳液)洗涤两次，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩滤液，得到黄色油状物。将该油状物通过硅胶色谱法(0-20％EtOAc/己烷)纯化，得到呈浅黄色油状物的戊二酸4-溴丁酯庚酯(0.34g，0.93mmol，14％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.11-4.06(m,4H)；3.41(t,2H,J＝6.7Hz)；2.62(s,4H)；1.87(quint.,2H,J＝13.9Hz,7.2Hz)；1.69-1.57(m,4H)；1.50-1.30(m,10H)；0.89(t,3H,J＝
6.3Hz)。

[2439] 步骤3：戊二酸4-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(2-羟基乙基)氨基)丁酯庚酯

[2440]

[2441] 化学式：C43H83NO7

[2442] 分子量：726.14

[2443] 在干燥氮气下，向8-((2-羟基乙基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(300mg，0.61mmol)和琥珀酸6-溴己酯己酯(223mg(0.61mmol)于8mL无水乙腈中的溶液中添加碘化钾(115mg，0.68mmol)，随后添加粉末状碳酸钾(340mg，2.4mmol)并用2mL无水环戊基甲基醚稀释混合物。将所得白色混合物加热至90℃并搅拌24小时，接着使其冷却至室温，过滤，用DCM洗涤过滤固体并浓缩滤液。使残余物悬浮于50％饱和碳酸氢钠水溶液中并用DCM萃取两次。合并有机物，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩滤液，得到黄色油状物。将其通过硅胶色谱法(0-30％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈无色油状物的戊二酸4-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(2-羟基乙基)氨基)丁酯庚酯(140mg，0.19mmol，
32％)。UPLC/ELSD:RT＝3.22min。对于C43H83NO7，MS(ES):m/z(MH+)726.63。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.86(quint.,1H,J＝12.2Hz,6.1Hz,)；4.07(quart.,4H,J＝12.1Hz,6.0Hz)；
3.53(t,2H,J＝5.0Hz)；2.88(br.s,1H)；2.58(t,2H,J＝4.7Hz)；2.47(quart.,4H,J＝
16.8Hz,7.0Hz)；2.37(t.,4H,J＝7.0Hz)；2.27(t,2H,J＝7.4Hz)；1.94(quint.,2H,J＝
14.7Hz,7.3Hz)；1.70-1.55(m,6H)；1.54-1.37(m,8H)；1.36-1.15(m,38H)；0.87(t,9H,J＝
6.1Hz)。

[2444] GL.化合物278：8-((3-(环丙烷磺酰胺基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2445]

[2446] 化学式：C48H94N2O6S

[2447] 分子量：827.35

[2448] 化合物278是由8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(250mg，0.35mmol)，以与化合物109类似的方式，不过使用环丙烷磺酰氯(Oakwood Chemical,Estill,SC)(54uL，0.52mmol)代替甲烷磺酰氯制备的。在水性后处理后，残余物通过硅胶色谱法(0-40％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈浅黄色油状物的8-((3-(环丙烷磺酰胺基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(125mg，0.15mmol，44％)。

[2449] UPLC/ELSD:RT＝3.45min。对于C49H94N2O6S，MS(ES):m/z(MH+)827.82。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 6.95(br.s,1H)；4.86(quint.,1H,J＝12.4Hz,6.2Hz)；4.05(t,2H,J＝6.8Hz)；3.48(quart.,1H,J＝14.1Hz,7.0Hz)；3.26(t,2H,J＝5.6Hz)；2.63-2.47(br.m,2H)；2.45-2.32(br.m,4H)；2.31-2.21(m,4H)；1.77-1.68(m,2H)；1.61(br.t,6H,J＝
6.8Hz)；1.55-1.39(m,8H)；1.38-1.17(m,48H)；1.16-1.10(m,2H)；0.98-0.92(m,2H)；0.88(t,9H,J＝6.0Hz)。

[2450] GM.化合物279：(Z)-6-(氰基亚氨基)-2-甲基-11-(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)-2,5,7,11-四氮杂十九碳-19-酸十七烷-9-基酯

[2451]

[2452] 化学式：C51H100N6O4

[2453] 分子量：861.40

[2454] 化合物279是由8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(250mg，0.35mmol)，以与化合物168类似的方式，不过使用纯N,N-二甲基亚乙基-1,2-二胺(160uL，1.4mmol)代替二甲基胺的THF溶液制备。在水性后处理后，残余物通过硅胶色谱法(0-100％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈浅黄色油状物的(Z)-6-(氰基亚氨基)-2-甲基-11-(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)-2,5,7,11-四氮杂十九碳-19-酸十七烷-9-基酯(110mg，0.13mmol，37％)。UPLC/ELSD:RT＝3.10min。对于C51H100N6O4，MS(ES):m/z(MH+)861.94。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 5.91(br.s.,1H)；4.86(quint.,1H,J＝6.2Hz)；4.05(t,2H,J＝6.8Hz)；3.28-3.18(m,4H)；2.53-2.40(m,7H)；2.32-2.22(m,10H)；1.75-1.55(m,8H)；1.49-1.43(m,8H)；1.32-1.26(br.m,50H)；0.88(t,
9H,J＝6.1Hz)。

[2455] GN.化合物280：8-((3-((2-((2-(二甲基氨基)乙基)氨基)-3,4-二氧代环丁-1-烯-1-基)氨基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2456]

[2457] 化学式：C9H14N2O3

[2458] 分子量：198.22

[2459] 经五分钟向3,4-二甲氧基-3-环丁烯-1,2-二酮(500mg，3.45mmol)于60mL二乙醚中的溶液中迅速地逐滴添加0.42mL(3.8mmol)N,N-二甲基亚乙基-1,2-二胺于10mL乙醚中的溶液并在室温下搅拌所得混合物24小时，接着过滤，用二乙醚洗涤过滤固体并空气干燥。将过滤固体溶解于己烷中，过滤，用EtOAc稀释滤液，得到混浊并使混合物冷却至室温，接着将其冷却至0℃，得到沉淀。将沉淀通过过滤分离，用己烷洗涤，空气干燥，接着真空干燥，得到呈白色固体的3-((2-(二甲基氨基)乙基)氨基)-4-甲氧基环丁-3-烯-1,2-二酮(255mg，
1.29mmol，37％)。所述化合物在室温下以两种旋转异构体形式存在于氯仿中。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 6.35(br.s,0.65H)；6.09(br.s,0.35H)；4.39(s,3H)；3.73(br.s,
0.75H)；3.46(br.s,1.25H)；2.50(m,2H)；2.25(s,6H)。

[2460]

[2461] 化学式：C53H100N4O6

[2462] 分子量：889.41

[2463] 化合物280是由8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(300mg，0.42mmol)，以与化合物169类似的方式制备的，不过使用3-((2-(二甲基氨基)乙基)氨基)-4-甲氧基环丁-3-烯-1,2-二酮(160uL，1.4mmol)代替3-(二甲基氨基)-4-甲氧基环丁-3-烯-1,2-二酮并将溶液加热至40℃。在氮气流中减少溶液且残余物通过硅胶色谱法(0-100％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈黄色糊浆状物的8-((3-((2-((2-(二甲基氨基)乙基)氨基)-3,4-二氧代环丁-1-烯-1-基)氨基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(105mg，0.12mmol，28％)。UPLC/+ 1ELSD:RT＝3.16min。对于C53H100N4O6，MS(ES):m/z(MH)890.06。H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm
7.58(br.s.,1H)；6.20(br.s,1H)；4.86(quint.,1H,J＝5.9Hz)；4.05(t,2H,J＝6.7Hz)；
3.76-3.60(m,4H)；2.63(br.s,2H)；2.54-2.44(m,6H)；2.28(m,10H)；1.74(br.s,2H)；1.61(m,6H)；1.49(m,8H)；1.25(br.m,48H)；0.88(t,9H,J＝6.0Hz)。

[2464] GO.化合物281：8-((3-(3-甲氧基-2,2-二甲基丙酰胺基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2465]

[2466] 化学式：C51H100N2O6

[2467] 分子量：837.37

[2468] 化合物281是由8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(250mg，0.35mmol)，以与化合物252类似的方式制备的，不过使用3-甲氧基-2,2-二甲基丙酸(Enamine LLC,Monmouth Junction,NJ)(63mg，0.52mmol)代替(甲基硫代)乙酸。在水性后处理后，残余物通过硅胶色谱法(0-50％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈无色油状物的8-((3-(3-甲氧基-2,2-二甲基丙酰胺基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(125mg，0.15mmol，43％)。UPLC/ELSD:RT＝3.63min。对于C51H100N2O6，MS(ES):m/z(MH+)837.99。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 9.26(s,1H)；7.39(t,1H,J＝6.3Hz)；4.85(quint.,1H,J＝6.3Hz)；4.05(t,2H,J＝6.8Hz)；3.42-
3.32(m,7H)；3.12-2.98(m,5H)；2.33-2.23(m,4H)；2.04(br.s,2H)；1.75-1.53(br.m,14H)；
1.51-1.10(m,54H)；0.88(t,9H,J＝6.1Hz)。

[2469] GP.化合物282：8-((3-((1-氨基-2-硝基乙烯基)氨基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2470]

[2471] 化学式：C47H92N4O6

[2472] 分子量：809.28

[2473] 在密封管中，在80℃下将8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(500mg，0.69mmol)和(2-硝基乙烯-1,1-二基)双(甲基硫烷)(125mg，0.76mmol)于甲醇(5mL)中的溶液搅拌5小时。接着，添加氨水溶液(7N的甲醇溶液，5mL，
35mmol)并在80℃下再加热反应混合物2小时。移除溶剂且粗物质通过硅胶色谱法(SiO2:
EtOAc/己烷0至100％，接着含1％氢氧化铵的甲醇/二氯甲烷0至20％)纯化，得到呈黄色油状物的(E)-8-((3-((1-氨基-2-硝基乙烯基)氨基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(80mg，12％)。HPLC/UV(214nm):RT＝8.78min。对于C47H92N4O6，MS(CI):
m/z(MH+)809.6。1H NMR(300MHz,CDCl3):δppm 6.49(s,1H)；4.87-4.83(m,1H)；4.04(t,2H,J＝6.7Hz)；3.36(m,2H)；2.49-2.39(m,6H)；2.27(dt,4H,J＝4.3Hz,7.2Hz)；1.77-1.75(m,
2H)；1.62-1.48(m,15H)；1.34-1.24(m,50H)；0.86(t,9H,J＝6.5Hz)。

[2474] GQ.化合物283：8-((3-(甲基氨基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2475]

[2476] 化学式：C46H92N2O4

[2477] 分子量：737.25

[2478] 向8-((3-氯丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(400mg，0.54mmol)于2mL 2-丙醇中的溶液中添加碘化钠(10mg，催化量)，随后添加4mL(8mmol)的2M甲基胺的THF溶液，得到黄色溶液。将其加热至55℃并搅拌三天，之后LC/MS确定无起始氯化物残留。在氮气流中浓缩混合物且残余物通过硅胶色谱法(0-50％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得呈浅黄色油状物的8-((3-(甲基氨基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(220mg，0.30mmol，55％)。UPLC/ELSD:RT＝2.98min。对于C46H92N2O4，MS(ES):m/z(MH+)737.70。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.86(quint.,1H,J＝6.1Hz)；4.05(t,2H,J＝6.7Hz)；2.72(t,2H,J＝6.5Hz)；2.51(t,2H,J＝
6.1Hz)；2.46(s,3H)；2.40(t,4H,J＝6.3Hz)；2.32-2.23(m,4H)；1.76-1.55(m,8H)；1.54-
1.36(m,8H)；1.35-1.12(br.m,49H)；0.87(t,9H,J＝5.9Hz)。

[2479] GR.化合物284：丙二酸5-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(2-羟基乙基)氨基)戊酯辛酯

[2480]

[2481] 化学式：C15H28O4

[2482] 分子量：272.39

[2483] 在干燥氮气下，在搅拌下向丙二酸单叔丁酯(Oakwood Products,Inc.,Estill,SC)(1.5g，9.2mmol)和1-辛醇(1.6mL，10.1mmol)于20mL无水DCM中的溶液中添加1-乙基-3-(二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(3.1g，13.8mmol)，随后添加4-(二甲基氨基)吡啶(0.34g，2.7mmol)且最后添加N,N-二异丙基乙基胺(4.8mL，27.5mmol)，得到无色溶液。将其在室温下搅拌24小时，之后，LC/MS显示无起始酸残留。将黄色溶液用DCM稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次，用10％柠檬酸水溶液洗涤两次，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩滤液，得到黄色油状物，该油状物通过硅胶色谱法(0-15％EtOAc/己烷)纯化，得到呈无色液体的丙二1
酸叔丁酯辛酯(1.86g，6.8mmol，74％)。H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.11-4.06(m,4H)；
3.41(t,2H,J＝6.7Hz)；2.62(s,4H)；1.87(quint.,2H,J＝7.2Hz)；1.69-1.57(m,4H)；1.50-
1.30(m,10H)；0.89(t,3H,J＝6.3Hz)。

[2484]

[2485] 化学式：C11H20O4

[2486] 分子量：216.28

[2487] 在0℃下，在搅拌下向丙二酸叔丁酯辛酯(1.5g，5.5mmol)于10mL DCM中的溶液中迅速地逐滴添加三氟乙酸(5mL，过量)，得到无色溶液。使所得无色溶液升温至室温并搅拌24小时，之后，TLC确定反应未完成。将溶液加热至45℃并搅拌三小时，之后，TLC确定无起始物质残留。使浅黄色溶液冷却至室温，浓缩，且残余物通过硅胶色谱法(0-30％EtOAc/己烷)纯化，得到呈无色液体的3-(辛氧基)-3-氧代丙酸(0.9g，4.2mmol，75％)。1H-NMR(500MHz,CDCl3)δppm4.19(t,2H,J＝6.8Hz)；3.44(s,2H)；1.66(quint.,2H,J＝7.1Hz)；1.40-1.19(m,10H)；0.88(t,3H,J＝7.0Hz)；未观察到羧酸根质子。

[2488]

[2489] 化学式：C16H29BrO4

[2490] 分子量：365.31

[2491] 在干燥氮气下，在搅拌下向3-(辛氧基)-3-氧代丙酸(900mg，4.2mmol)和5-溴-1-戊醇(0.58mL，4.4mmol)于20mL无水二氯甲烷中的溶液中添加1-乙基-3-(二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(1.4g，6.2mmol)，随后添加4-(二甲基氨基)吡啶(250mg，2.1mmol)且最后添加N,N-二异丙基乙基胺(2.2mL，12.5mmol)。在室温下搅拌无色溶液24小时，之后TLC显示无起始酸残留。将溶液用DCM稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液(浓稠乳液)洗涤两次，用10％柠檬酸水溶液洗涤一次，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩滤液，得到黄色油状物。将其通过硅胶色谱法(0-20％EtOAc/己烷)纯化，得到呈无色液体的丙二酸5-溴戊酯辛酯(810mg，2.2mmol，53％)。UPLC/ELSD:RT＝2.17min。对于C16H29BrO4，MS(ES):m/z(M+Na+)387.24。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.15(dt,4H,J＝8.2Hz,6.6Hz)；3.41(t,2H,J＝6.8Hz)；3.37(s,
2H)；1.95-1.85(m,2H)；1.74-1.59(m,4H)；1.57-1.47(m,2H)；1.39-1.20(m,10H)；0.88(t,
3H,J＝6.6Hz)。

[2492]

[2493] 化学式：C43H83NO7

[2494] 分子量：726.14

[2495] 在干燥氮气下，向8-((2-羟基乙基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(400mg，0.81mmol)和琥珀酸6-溴己酯己酯(300mg，0.81mmol)于8mL无水乙腈中的溶液中添加碘化钾(150mg，0.9mmol)，随后添加粉末状碳酸钾(450mg，3.3mmol)并用2mL无水环戊基甲基醚稀释混合物。将所得白色混合物加热至90℃并搅拌24小时，接着使其冷却至室温，过滤，用DCM洗涤过滤固体并浓缩滤液。使残余物悬浮于50％饱和碳酸氢钠水溶液中并用DCM萃取两次。合并有机层，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩滤液，得到黄色油状物。该油状物通过硅胶色谱法(0-40％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈无色油状物的丙二酸5-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(2-羟基乙基)氨基)戊酯辛酯(225mg，
0.31mmol，38％)。UPLC/ELSD:RT＝3.24min。对于C43H83NO7，MS(ES):m/z(MH+)726.87。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.86(quint.,1H,6.1Hz,)；4.14(td,4H,J＝6.7Hz,2.9Hz)；3.57(m,
2H)；3.37(s,2H)；2.63(br.s,2H)；2.51(br.s,4H)；2.27(t,2H,J＝7.4Hz)；1.73-1.56(m,
6H)；1.55-1.42(m,8H)；1.41-1.16(m,43H)；0.88(t,9H,J＝6.1Hz)。

[2496] GS.化合物285：(Z)-癸-3-烯酸7-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(2-羟基乙基)氨基)庚基酯

[2497]

[2498] 化学式：C12H18O3

[2499] 分子量：210.27

[2500] 向1-辛炔-3-醇(2.15mL，14.4mmol)和丙炔酸甲酯(1.2mL，14.4mmol)于100mL无水DCM中的溶液中添加三乙胺(0.2mL，1.4mmol)并在室温下搅拌浅黄色溶液20小时，之后，TLC确定无起始醇残留。浓缩溶液且残余物通过硅胶色谱法(0-20％EtOAc/己烷)纯化，得到呈无色液体的(E)-3-(辛-1-炔-3-基氧基)丙烯酸甲酯(2.92g，13.9mmol，97％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 7.61(d,1H,J＝12.5Hz)；5.38(d,1H,J＝12.5Hz)；4.53(td,1H,J＝6.6Hz,2.0Hz)；3.70(s,3H)；2.58(d,1H,J＝2.0Hz)；1.91-1.75(m,2H)；1.52-1.41(m,2H)；
1.37-1.26(m,4H)；0.90(t,3H,J＝6.9Hz)。

[2501]

[2502] 化学式：C10H18O2

[2503] 分子量：170.25

[2504] 在5mL微波小瓶中合并840mg(4mmol)(E)-3-(辛-1-炔-3-基氧基)丙烯酸甲酯和2mL水，得到无色双层。密封小瓶并使混合物经历微波照射，在175℃下保持90分钟。用DCM洗涤所得双层两次，合并有机物，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩滤液，得到深橙色油状物。将其溶解于己烷中并通过硅胶色谱法(0-20％EtOAc/己烷)纯化，得到呈橙色油状物的(Z)-癸-3-烯酸(155mg，0.91mmol，23％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 11.03(br.s,1H)；5.70-5.44(m,2H)；3.14(d,2H,J＝6.6Hz)；2.04(q.,2H,J＝6.8Hz)；1.43-1.13(m,8H)；0.88(t,3H,J＝
6.8Hz)。1D选择性梯度NOEsy实验，以2.07ppm(C-5质子)和3.16ppm(C-2质子)照射确定(Z)-几何结构。

[2505]

[2506] 化学式：C17H31BrO2

[2507] 分子量：347.34

[2508] 向(Z)-癸-3-烯酸(220mg，1.29mmol)和7-溴-1-庚醇(250uL，1.42mmol)于10mL无水DCM中的溶液中添加1-乙基-3-(二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(440mg，1.94mmol)，随后添加DMAP(80mg，0.65mmol)且最后添加N,N-二异丙基乙基胺(680μL，3.88mmol)。在室温下搅拌所得橙色溶液24小时，之后，TLC显示无起始酸残留。将溶液用DCM稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液(浓稠乳液)洗涤一次，用10％柠檬酸水溶液洗涤一次，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩滤液，得到黄色油状物。将其通过硅胶色谱法(0-15％EtOAc/己烷)纯化，得到呈浅黄色液体的(Z)-癸-3-烯酸7-溴庚酯(250mg，0.72mmol，56％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 5.65-5.49(m,2H)；4.07(t,2H,J＝6.7Hz)；3.40(t,2H,J＝6.8Hz)；3.08(d,2H,J＝5.5Hz)；
2.04(q.,2H,J＝6.8Hz)；1.92-1.79(m,2H)；1.70-1.56(m,2H)；1.51-1.20(m,14H)；0.88(t,
3H,J＝6.3Hz)。

[2509]

[2510] 化学式：C44H85NO5

[2511] 分子量：708.17

[2512] 化合物285是由8-((2-羟基乙基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(350mg，0.71mmol)，以与化合物284类似的方式，不过使用(Z)-癸-3-烯酸7-溴庚酯(250mg，0.72mmol)代替丙二酸5-溴戊酯辛酯制备。在水性后处理后，所得黄色油状物通过硅胶色谱法(0-40％(1％NH4OH、
20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈无色油状物的(Z)-癸-3-烯酸7-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(2-羟基乙基)氨基)庚酯(205mg，0.29mmol，41％)。
UPLC/ELSD:RT＝3.35min。对于C44H85NO5，MS(ES):m/z(MH+)708.75。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:
ppm 5.64-5.48(m,2H)；4.86(quint.,1H,J＝6.2Hz)；4.07(t,2H,J＝6.7Hz)；3.55(t,2H,J＝5.0Hz)；3.40(t,2H,J＝6.8Hz)；3.08(d,2H,J＝5.6Hz)；2.61(t,2H,J＝4.1Hz)；2.47(t,
4H,J＝6.8Hz)；2.27(t,2H,J＝7.5Hz)；2.04(q.,2H,J＝6.8Hz)；1.70-1.55(m,4H)；1.54-
1.40(m,6H)；1.39-1.13(m,45H)；0.87(t,9H,J＝6.5Hz)。

[2513] GT.化合物286：8-((3-乙酰胺基-2,2-二甲基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2514]

[2515] 化学式：C52H102N2O6

[2516] 精确质量：850.77

[2517] 8-((3-((叔丁氧基羰基)氨基)-2,2-二甲基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯是由8-((8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯
(500mg，0.75mmol)，以与化合物244类似的方式制备的，不过使用(2,2-二甲基-3-氧代丙基)氨基甲酸叔丁酯(Enamine LLC,Monmouth Junction,NJ)(231mg，1.13mmol)代替N-Boc-甘氨醛，需要三当量三乙酰氧基硼氢化钠并在50℃下进行反应三天。在水性后处理后，所得黄色油状物通过硅胶色谱法(0-50％甲醇/DCM)纯化并汇集含产物的级分，并浓缩，得到无色油状物/白色固体混合物。将其通过硅胶色谱法(0-25％EtOAc/己烷)纯化，得到呈浅黄色油状物的8-((3-((叔丁氧基羰基)氨基)-2,2-二甲基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(85mg，0.1mmol，13％)。UPLC/ELSD:RT＝3.65min。对于C52H102N2O6，MS(ES):m/z(MH+)852.01。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 6.32(br.s,1H)；4.86(quint.,1H,J＝6.1Hz)；4.05(t,2H,J＝6.8Hz)；2.99(d,2H,J＝4.6Hz)；2.37(t,4H,J＝7.4Hz)；2.32-
2.19(m,6H)；1.69-1.55(m,6H)；1.54-1.37(m,16H)；1.36-1.15(m,49H)；0.91-0.84m,15H)。

[2518]

[2519] 化学式：C47H94N2O4

[2520] 分子量：751.28

[2521] 在搅拌下，向冷却至0℃的8-((3-((叔丁氧基羰基)氨基)-2,2-二甲基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(85mg，0.1mmol)于2mL DCM中的溶液中添加2M氯化氢的二乙醚溶液(0.5mL，过量)，得到无色溶液。使其升温至室温，接着将其加热至40℃并搅拌两小时，之后，LC/MS确定无起始物质残留。使溶液冷却至室温并在氮气流中浓缩，将残余物再溶解于乙醚中，浓缩并在高真空下放置过夜，得到呈无色泡沫状固体的8-((3-氨基-2,2-二甲基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(79.3mg，
0.096mmol，96％)(假定呈二盐酸盐形式)。不经进一步纯化即使用。UPLC/ELSD:RT＝
3.12min。对于C47H94N2O4，MS(ES):m/z(MH+)751.97。

[2522]

[2523] 化学式：C49H96N2O5

[2524] 分子量：793.32

[2525] 在搅拌下，向冷却至0℃的8-((3-氨基-2,2-二甲基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(假定呈二盐酸盐形式)(79mg，0.096mmol)和三乙胺(41uL，0.29mmol)于2mL无水DCM中的溶液中逐滴添加乙酸酐(13uL，0.15mmol)。15分钟后，移除冷却浴并在室温下搅拌所得混合物两小时。LC/MS确定无起始胺残留，因此将黄色溶液用DCM稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次，用盐水洗涤一次，干燥(MgSO4)，过滤并浓缩滤液，得到黄色油状物。将其通过硅胶色谱法(0-50％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈浅黄色油状物的8-((3-乙酰胺基-2,2-二甲基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(56mg，0.07mmol，73％)。UPLC/ELSD:RT＝
3.52min。对于C49H96N2O5，MS(ES):m/z(MH+)793.95。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 8.06(t,
1H,J＝4.2Hz)；4.86(quint.,1H,J＝6.2Hz)；4.05(t,2H,J＝6.8Hz)；3.13(d,2H,J＝
4.6Hz)；2.41(t,4H,J＝7.4Hz)；2.35-2.21(m,6H)；1.94(s,3H)；1.69-1.56(m,6H)；1.55-
1.39(m,8H)；1.38-1.13(m,48H)；0.95-0.82m,15H)。

[2526] GU.化合物287：(Z)-6-(氰基亚氨基)-2,5-二甲基-11-(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)-2,5,7,11-四氮杂十九碳-19-酸十七烷-9-基酯

[2527]

[2528] 化学式：C52H102N6O4

[2529] 分子量：875.43

[2530] 化合物287是由8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(250mg，0.35mmol)，以与化合物168类似的方式制备，不过使用N,N,N’-三甲基亚乙基-1,2-二胺(90uL，0.69mmol)代替二甲基胺溶液并在70℃下进行第二步骤两天。在水性后处理后，所得混浊浅黄色油状物通过硅胶色谱法(0-100％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈无色油状物的(Z)-6-(氰基亚氨基)-2,5-二甲基-11-(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)-2,5,7,11-四氮杂十九碳-19-酸十七烷-9-基酯(172mg，
0.35mmol，57％)。UPLC/ELSD:RT＝3.00min。对于C52H102N6O4，MS(ES):m/z(MH+)876.20。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 8.68(br.s.,1H)；4.86(quint.,1H,J＝6.2Hz)；4.05(t,2H,J＝
6.8Hz)；3.54-3.43(m,2H)；3.31(t,2H,J＝4.8Hz)；3.03(s,3H)；2.55-2.44(m,4H)；2.44-
2.33(br.s,3H)；2.32-2.23(m,10H)；1.74-1.55(m,8H)；1.54-1.37(m,8H)；1.36-1.18(m,
49H)；0.87(t,9H,J＝6.8Hz)。

[2531] GV.化合物288：(Z)-9-(氰基亚氨基)-2-甲基-14-(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)-5-氧杂-2,8,10,14-四氮杂二十二烷-22-酸十七烷-9-基酯

[2532]

[2533] 化学式：C53H104N6O5

[2534] 分子量：905.45

[2535] 化合物288是由8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(250mg，0.35mmol)，以与化合物168类似的方式制备的，不过使用2-(2-氨基乙氧基)-N,N-二甲基乙-1-胺(110uL，0.76mmol)代替二甲基胺溶液并在75℃下进行第二步骤两天。在水性后处理后，所得浅黄色油状物通过硅胶色谱法(0-100％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈无色油状物的(Z)-9-(氰基亚氨基)-2-甲基-14-(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)-5-氧杂-2,8,10,14-四氮杂二十二烷-22-酸十七烷-9-基酯
(147mg，0.16mmol，47％)。UPLC/ELSD:RT＝3.07min。对于C53H104N6O5，MS(ES):m/z(MH+)
906.05。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 6.95(br.s.,1H)；6.18(br.s,1H)；4.86(quint.,1H,J＝6.2Hz)；4.05(t,2H,J＝6.8Hz)；3.56(t,4H,J＝5.6Hz)；3.37(q,2H,J＝5.0Hz)；3.26(q,
2H,J＝5.6Hz)；2.52(q,4H,J＝6.2Hz)；2.44(t,4H,J＝7.6Hz)；2.35-2.20(m,10H)；1.75-
1.55(m,8H)；1.54-1.38(m,8H)；1.37-1.15(m,48H)；0.87(t,9H,J＝6.4Hz)。

[2536] GW.化合物289：8-((8-(壬氧基)-8-氧代辛基)(3-(噻唑-2-基氨基)丙基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2537]

[2538] 化学式：C53H99N3O6S

[2539] 分子量：906.45

[2540] 在0℃下，向8-((3-羟基丙基)(8-壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(1.0g，1.38mmol)于含氨基甲酸叔丁酯噻唑-2-基酯(276mg，1.38mol)和三苯基膦(544mg，2.07mmol)的四氢呋喃(20mL)中的溶液中逐滴添加偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD)(0.4mL，
2.07mmol)并在室温下搅拌反应混合物过夜。在真空下移除溶剂，得到粗产物，该产物通过硅胶色谱法(0-50％EtOAc/己烷)纯化，得到呈无色油状物的8-((3-((叔丁氧基羰基)(噻唑-2-基)氨基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(512mg，
0.56mmol，41％)(含有DIAD副产物作为杂质)。对于C53H99N3O6S，MS(APCI):m/z(MH+)906.7。1H NMR(300MHz,CDCl3):δppm 7.39(d,1H,J＝3.6Hz)；6.89(d,1H,J＝3.6Hz)；4.87-4.80(m,
1H)；4.04(t,2H,J＝6.6Hz)；2.51-2.48(m,2H)；2.41-2.37(m,4H)；2.26(dt,4H,J＝7.5Hz,
3.7Hz)；1.84-1.79(m,2H)；1.62-1.57(m,12H)；1.49-1.41(m,5H,)；1.39-1.24(m,56H)；
0.86(t,9H,J＝6.6Hz)。

[2541]

[2542] 化学式：C48H91N3O4S

[2543] 分子量：806.33

[2544] 在0℃下，向8-((3-((叔丁氧基羰基)(噻唑-2-基)氨基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(512mg，0.56mmol)于二氯甲烷(15mL)中的溶液中逐滴添加三氟乙酸(10mL)并在室温下搅拌反应混合物过夜。将其在0℃下通过饱和碳酸氢钠溶液猝灭。用饱和碳酸氢钠溶液、0.1N氢氧化钠溶液和盐水洗涤有机层。在用无水硫酸钠干燥之后，将有机层过滤，并在真空下移除溶剂，得到粗产物，该粗产物通过硅胶色谱法(0-100％EtOAc/己烷)纯化，得到呈浅黄色油状物的8-((8-(壬氧基)-8-氧代辛基)(3-(噻唑-2-基氨基)丙基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(280mg，0.34mmol，61％)。HPLC/UV(214nm):RT＝7.01min。对于C48H91N3O4S，MS(APCI):m/z(MH+)806.6。1H NMR(300MHz,CDCl3):δppm 7.09(d,
1H,J＝3.6Hz)；6.96(bs,1H)；6.42(d,1H,J＝3.9Hz)；4.87-4.83(m,1H)；4.04(t,2H,J＝
6.7Hz)；3.39-3.35(m,2H)；2.54(t,2H,J＝5.7Hz)；2.40-2.35(m,4H)；2.26(dt,4H,J＝
3.7Hz,7.5Hz)；1.77-1.73(m,2H)；1.61-1.57(m,6H)；1.48-1.43(m,8H)；1.29-1.24(m,
48H)；0.86(t,9H,J＝6.6Hz)。

[2545] GX.化合物290：8-((3-((2-((2-甲氧基乙基)氨基)-3,4-二氧代环丁-1-烯-1-基)氨基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2546]

[2547] 化学式：C52H97N3O7

[2548] 分子量：876.36

[2549] 在0℃下，向8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(500mg，0.69mmol)于二乙醚(50mL)中的溶液中添加3,4-二甲氧基环丁-3-烯-1,2-二酮(148mg，1.04mmol)并在室温下搅拌反应混合物2小时。LCMS显示无起始物质。接着，添加2-甲氧基乙-1-胺(0.6mL，6.9mmol)于四氢呋喃(3.5mL)中的溶液并在室温下搅拌反应混合物过夜。浓缩反应混合物并通过硅胶色谱法(0-100％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈浅黄色油状物的8-((3-((2-((2-甲氧基乙基)氨基)-3,4-二氧代环丁-1-烯-1-基)氨基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(350mg，58％)。HPLC/UV(254nm):6.91min。对于C52H97N3O7，MS(CI):m/z(MH+)876.6。1H NMR(300MHz,CDCl3):δppm 7.10(bs,1H)；6.20(bs,1H)；4.86-4.82(m,1H)；4.04(t,2H,J＝
6.7Hz)；3.76-3.68(m,4H)；3.52(t,2H,J＝4.8Hz)；3.35(s,3H)；2.53(t,2H,J＝6.0Hz)；
2.39-2.36(m,4H)；2.31-2.25(m,4H)；1.75-1.71(m,2H)；1.66-1.55(m,6H)；1.50-1.48(m,
4H)；1.40-1.38(m,4H)；1.29-1.24(m,48H)；0.86(t,9H,J＝6.6Hz)。

[2550] GY.化合物291：8-((3-((3,4-二氧代-2-(哌啶-1-基)环丁-1-烯-1-基)氨基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2551]

[2552] 化学式：C54H99N3O6

[2553] 分子量：886.40

[2554] 化合物291是以与化合物290类似的方式，但使用哌啶代替2-甲氧基乙-1-胺制备的。浅黄色油状物，290mg，47％。HPLC/UV(254nm):RT＝6.70min。对于C54H99N3O6，MS(CI):m/z(MH+)886.7。1H NMR(300MHz,CDCl3):δppm 8.01(bs,1H)；4.87-4.83(m,1H)；4.04(t,2H,J＝6.7Hz)；3.93-3.92(m,2H)；3.59(bs,4H)；2.63-2.60(m,2H)；2.39(m,4H)；2.31-2.24(m,
4H)；1.72-1.54(m,17H)；1.49-1.48(m,5H)；1.38-1.24(m,48H)；0.86(t,9H,J＝6.6Hz)。

[2555] GZ.化合物292：8-((3-((2-(乙基氨基)-3,4-二氧代环丁-1-烯-1-基)氨基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2556]

[2557] 化学式：C51H95N3O6

[2558] 分子量：846.34

[2559] 化合物292是以与化合物290类似的方式，但使用乙基胺代替2-甲氧基乙-1-胺制备的。浅黄色粘性固体，135mg，23％。HPLC/UV(254nm):RT＝6.81min。对于C51H95N3O6，MS(CI):m/z(MH+)846.6。1H NMR(300MHz,CDCl3):δppm 6.20(bs,1H)；4.86-4.82(m,1H)；4.04(t,2H,J＝6.7Hz)；3.69-3.56(m,4H)；2.56(t,2H,J＝5.5Hz)；2.44-2.39(m,4H)；2.31-2.25(m,4H)；1.76-1.72(m,2H)；1.70-1.52(m,9H)；1.51-1.44(m,5H)；1.42-1.38(m,4H)；1.28-1.24(m,48H)；0.86(t,9H,J＝6.6Hz)。

[2560] HA.化合物293：8-((3-((2-(二乙基氨基)-3,4-二氧代环丁-1-烯-1-基)氨基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2561]

[2562] 化学式：C53H99N3O6

[2563] 分子量：874.39

[2564] 化合物293是以与化合物290类似的方式，但使用二乙基胺代替2-甲氧基乙-1-胺制备的。黄色油状物，315mg，52％。HPLC/UV(254nm):RT＝6.63min。对于C53H99N3O6，MS(CI):m/z(MH+)874.7。1H NMR(300MHz,CDCl3):δppm 7.52(bs,1H)；4.87-4.83(m,1H)；4.04(t,2H,J＝6.7Hz)；3.93-3.91(m,2H)；3.53(m,4H,),2.62-2.59(m,2H)；2.41-2.39(m,4H)；2.30-
2.24(m,4H)；1.72(m,2H)；1.61-1.58(m,11H)；1.50-1.48(m,5H)；1.40-1.37(m,4H)；1.29-
1.20(m,48H)；0.86(t,9H,J＝6.7Hz)。

[2565] HB.化合物294：8-((3-((2-吗啉代-3,4-二氧代环丁-1-烯-1-基)氨基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2566]

[2567] 化学式：C53H97N3O7

[2568] 分子量：888.37

[2569] 化合物294是以与化合物290类似的方式，但使用吗啉代替2-甲氧基乙-1-胺制备的。浅黄色油状物，297mg，48％。HPLC/UV(254nm):RT＝6.67min。对于C53H97N3O7，MS(CI):m/z(MH+)888.6。1H NMR(300MHz,CDCl3):δppm 8.12(bs,1H)；4.87-4.83(m,1H)；4.04(t,2H,J＝6.7Hz)；3.92-3.91(m,2H)；3.77-3.73(m,4H)；3.67-3.66(m,4H)；2.62-2.60(m,2H)；2.41-
2.36(m,4H)；2.31-2.25(m,4H)；1.72-1.71(m,2H)；1.63-1.58(m,10H)；1.50-1.48(m,4H)；
1.29-1.24(m,48H)；0.86(t,9H,J＝6.6Hz)。

[2570] HC.化合物295：8-((3-((2-(双(2-甲氧基乙基)氨基)-3,4-二氧代环丁-1-烯-1-基)氨基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2571]

[2572] 化学式：C55H103N3O8

[2573] 分子量：934.44

[2574] 化合物295是以与化合物290类似的方式，但使用双(2-甲氧基乙基)胺代替2-甲氧基乙-1-胺制备的。黄色油状物，215mg，33％。HPLC/UV(254nm):RT＝6.73min。对于C55H103N3O8，MS(CI):m/z(MH+)934.7。1H NMR(300MHz,CDCl3):δppm 6.74(t,1H,J＝5.9Hz)；
4.87-4.83(m,1H)；4.04(t,2H,J＝6.7Hz)；3.77-3.71(m,4H)；3.57-3.56(m,4H)；3.35(s,
6H)；2.50-2.47(m,2H)；2.40-2.36(m,4H)；2.30-2.24(m,4H)；1.77(t,2H,J＝6.7Hz)；1.62-
1.52(m,8H)；1.50-1.42(m,4H)；1.40-1.36(m,4H)；1.29-1.24(m,48H)；0.86(t,9H,J＝
6.6Hz)。

[2575] HD.化合物296：8-((3-((2-(4-甲基哌嗪-1-基)-3,4-二氧代环丁-1-烯-1-基)氨基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2576]

[2577] 化学式：C54H100N4O6

[2578] 分子量：901.42

[2579] 化合物296是以与化合物290类似的方式，但使用N-甲基哌嗪代替2-甲氧基乙-1-胺制备的。黄色油状物，210mg，34％。HPLC/UV(254nm):RT＝6.28min。对于C54H100N4O6，MS(APCI):m/z(MH+)901.7。1H NMR(300MHz,CDCl3):δppm 8.05(bs,1H)；4.87-4.82(m,1H)；4.04(t,2H,J＝6.7Hz)；3.91-3.90(m,2H)；3.70(bs,4H)；2.71(m,2H)；2.48-2.45(m,8H)；
2.31(s,3H)；2.28-2.26(m,4H)；1.71-1.58(m,10H)；1.52-1.48(m,6H),1.30-1.24(m,48H)；
0.86(t,9H,J＝6.6Hz)。

[2580] HE.化合物297：8-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(甲基)氨基)-7-羟基辛酸壬酯

[2581] 步骤1：辛-7-烯酸壬酯

[2582]

[2583] 化学式：C17H32O2

[2584] 分子量：268.44

[2585] 向辛-7-烯酸(2g，14.065mmol)、4-(二甲基氨基)吡啶(0.344g，2.813mmol)和1-壬醇(2.435g，16.878mmol)于DCM(70mL)中的溶液中添加EDC(2.696g，14.065mmol)。在室温下搅拌反应物16小时。将反应物用DCM稀释并用饱和碳酸氢钠水溶液萃取。将有机层分离，用盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤并真空蒸发。残余物通过硅胶色谱法(0-20％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到辛-7-烯酸壬酯(2.1g，7.82mmol，56％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δppm 5.83(m,1H)；4.98(m,2H)；4.08(t,2H)；2.32(t,2H)；2.08(m,2H)；1.65(m,4H)；1.50-1.19(m,16H)；
0.90(m,3H)。

[2586] 步骤2：6-(环氧乙烷-2-基)己酸壬酯

[2587]

[2588] 化学式：C17H32O3

[2589] 分子量：284.44

[2590] 在0℃下，向辛-7-烯酸壬酯(2.07g，7.71mmol)于DCM(38mL)中的溶液中添加3-氯过氧苯甲酸(2.129g，8.64mmol)于DCM(38mL)中的溶液。2小时之后，使反应物升温至室温并搅拌16小时。用DCM稀释反应物并用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤。将有机层分离，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并真空蒸发。残余物通过硅胶色谱法(0-100％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到6-(环氧乙烷-2-基)己酸壬酯(1.1g，3.86mmol，50％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.08(t,2H)；2.92(m,1H)；2.77(t,1H)；2.48(m,1H)；2.33(t,2H)；1.71-1.26(m,22H)；0.91(m,3H)。

[2591] 步骤3：8-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(甲基)氨基)-7-羟基辛酸壬酯[2592]

[2593] 化学式：C43H85NO5

[2594] 分子量：696.15

[2595] 向高压管中添加6-(环氧乙烷-2-基)己酸壬酯(0.173g，0.61mmol)、8-(甲基氨基)辛酸十七烷-9-基酯(0.25g，0.61mmol)和催化量的高氯酸锂(0.003g，0.03mmol)。密封容器并将反应物加热至100℃，保持60分钟。将反应物冷却至室温，溶解于己烷中并通过硅胶色谱法(0-40％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到8-{[8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基](甲基)氨基}-7-羟基辛酸壬酯(0.097g，0.14mmol，23％)。LC/ELSD:RT＝3.33min。对于C43H85NO5，MS(ES):m/z(MH+)697.11。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.89(m,1H)；4.08(t,2H)；3.66(br.m,2H)；2.50(br.,m,1H)；2.43-2.20(m,10H)；1.76-1.19(m,60H)；0.90(m,9H)。

[2596] HF.化合物298：8-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(2-羟基乙基)氨基)-7-羟基辛酸壬酯

[2597]

[2598] 化学式：C44H87NO6

[2599] 分子量：726.18

[2600] 化合物298是以与化合物297类似的方式，使用8-((2-羟基乙基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯代替8-(甲基氨基)辛酸十七烷-9-基酯制备。产量是0.121g(0.167mmol，29％)。LC/ELSD:RT＝3.32min。对于C44H87NO6，MS(ES):m/z(MH+)727.12。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:
ppm 4.89(m,1H)；4.08(t,2H)；3.66(br.m,3H)；2.79(m,1H)；2.69-2.24(m,10H)；1.74-1.22(m,60H)；0.90(m,9H)(未观察到伯羟基质子)。

[2601] HG.化合物299：7-羟基-8-(甲基(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2602] 步骤1：辛-7-烯酸十七烷-9-基酯

[2603]

[2604] 化学式：C25H48O2

[2605] 分子量：380.66

[2606] 辛-7-烯酸十七烷-9-基酯是以与辛-7-烯酸壬酯相同的方式，使用十七烷-9-醇和辛-7-烯酸合成的。产量是2.15g(5.65mmol，80％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 5.83(m,1H)；5.08-4.81(m,3H)；2.31(t,2H)；2.06(m,2H)；1.73-1.15(m,34H)；0.90(m,6H)。

[2607] 步骤2：6-(环氧乙烷-2-基)己酸十七烷-9-基酯

[2608]

[2609] 化学式：C25H48O3

[2610] 分子量：396.66

[2611] 6-(环氧乙烷-2-基)己酸十七烷-9-基酯是以与6-(环氧乙烷-2-基)己酸壬酯相同的方式，使用辛-7-烯酸十七烷-9-基酯合成的。产量是1.45g(3.66mmol，69％)。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.89(p,1H)；2.92(m,1H)；2.77(t,1H)；2.48(m,1H)；2.32(t,2H)；1.74-1.21(m,36H)；0.90(m,6H)。

[2612] 步骤3：8-(甲基氨基)辛酸壬酯

[2613]

[2614] 化学式：C18H37NO2

[2615] 分子量：299.49

[2616] 向含有8-溴辛酸壬酯(1g，2.86mmol)的烧瓶中添加2M甲基胺(42.9mL，85.87mmol)于THF中的溶液。在室温下搅拌反应物16小时。接着真空浓缩。将残余物用乙酸乙酯稀释并用饱和碳酸氢钠溶液洗涤。分离有机层，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并真空蒸发。残余物通过硅胶色谱法(0-20％MeOH/DCM)纯化，得到8-(甲基氨基)辛酸壬酯(0.625g，2.86mmol，73％)。LC/ELSD:RT＝1.19min。对于C18H37NO2，MS(ES):m/z(MH+)300.17。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.08(t,2H)；2.60(t,2H)；2.46(s,3H)；2.31(t,2H)；1.91-1.45(m,
7H)；1.33(m,18H)；0.90(m,3H)。

[2617] 步骤4：7-羟基-8-(甲基(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2618]

[2619] 化学式：C43H85NO5

[2620] 分子量：696.16

[2621] 化合物299是以与化合物297相同的方式，使用8-(甲基氨基)辛酸壬酯和6-(环氧乙烷-2-基)己酸十七烷-9-基酯合成的。产量是0.152mg(0.218mmol，39％)。LC/ELSD:RT＝3.25min。对于C43H85NO5，MS(ES):m/z(MH+)697.85。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.89(m,
1H)；4.08(t,2H)；3.66(br.m,1H)；2.52(br.,m,1H)；2.31(br.m,10H)；1.75-1.20(m,60H)；
0.90(m,9H)(未观察到羟基质子)。

[2622] HH.化合物300：8-((3-(2-氰基-3,3-二甲基胍基)丙基)(8-氧代-8-(十一烷-3-基氧基)辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2623] 步骤1：8-溴辛酸十一烷-3-基酯

[2624]

[2625] 化学式：C19H37BrO2

[2626] 分子量：377.41

[2627] 在0℃下，向3-十一烷醇(4.14g，24mmol)、8-溴辛酸(8.01g，36mmol)和DMAP(0.58g，4.8mmol)于二氯甲烷(50mL)中的溶液中添加EDCI(6.9g，36mmol)并在室温下搅拌反应混合物过夜。TLC显示反应完成。将反应混合物冷却至0℃并经20分钟极慢添加盐酸溶液(10mL浓盐酸、90mL水、7.5g氯化钠)。接着，添加乙腈(100mL)和己烷(100mL)，分离各层并干燥有机层，并且在真空下移除，得到油状物。将该油状物溶解于己烷(100mL)中并用乙腈(100mL)和5％碳酸氢钠水溶液(100mL)的混合物洗涤。分离己烷层并通过硅藻土过滤，用己烷洗涤滤饼并真空浓缩滤液，得到呈无色油状物的8-溴辛酸十一烷-3-基酯(8.76g，97％)。1H NMR(300MHz,CDCl3):δppm4.82-4.76(m,1H)；3.39(t,2H,J＝6.7Hz)；2.44(t,0.3H,J＝
7.4Hz,对于CH2Cl)；2.28(t,2H,J＝7.5Hz,对于CH2Br)；1.88-1.79(m,2H)；1.70-1.42(m,
6H)；1.38-1.17(m,18H)；0.88-0.82(m,6H)。

[2628] 步骤2：8-((3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2629]

[2630] 化学式：C33H66N2O4

[2631] 分子量：554.90

[2632] 将8-溴辛酸十七烷-9-基酯(69.2g，0.15mol)和(3-氨基丙基)氨基甲酸叔丁酯(130.6g，0.75mol)于500mL乙醇中的溶液加热至65℃过夜。浓缩反应混合物，且粗品通过硅胶色谱法(0-20％甲醇/DCM)纯化，得到呈浅黄色油状物的8-((3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(62g，74％)。对于C33H66N2O4，MS(CI):m/z(MH+)555.5。1H NMR(300MHz,CDCl3):δppm 5.15(bs,1H)；4.85(quint.,1H,J＝6.0Hz)；3.17(m,2H)；2.65(t,
2H,J＝6.6Hz)；2.56(t,2H,J＝6.8Hz)；2.26(t,2H,J＝7.6Hz)；1.68-1.56(m,6H)；1.46(m,
5H)；1.43(s,9H)；1.24(m,30H)；0.86(t,6H,J＝6.6Hz)。

[2633] 步骤3：8-((3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙基)(8-氧代-8-(十一烷-3-基氧基)辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2634]

[2635] 化学式：C52H102N2O6

[2636] 分子量：851.40

[2637] 在86℃下，将8-((3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(6.0g，12mmol)和8-溴辛酸十一烷-3-基酯(4.27g，11mmol)于含碳酸钾(6.02g，43mmol)和碘化钾(1.97g，12mmol)的环戊基甲基醚(50mL)和乙腈(50mL)中的溶液加热18小时。冷却至室温之后，通过硅藻土过滤反应混合物，用乙酸乙酯洗涤滤饼，并真空浓缩滤液，得到粗产物，该粗产物通过硅胶色谱法(0-100％EtOAc/己烷)纯化，得到呈油状物的8-((3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙基)(8-氧代-8-(十一烷-3-基氧基)辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(6.8g，
74％)。对于C52H102N2O6，MS(CI):m/z(MH+)851.7。1H NMR(300MHz,CDCl3):δppm 5.66(m,1H)；
4.87-4.80(m,2H)；3.17(m,2H)；2.42(t,2H,J＝6.3Hz)；2.35-2.24(m,8H)；1.64-1.56(m,
12H)；1.53-1.44(m,9H)；1.44-1.36(m,3H)；1.42(s,9H)；1.32-1.12(m,42H)；0.86(t,12H,J＝6.4Hz)。

[2638] 步骤4：8-((3-氨基丙基)(8-氧代-8-(十一烷-3-基氧基)辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2639]

[2640] 化学式：C47H94N2O4

[2641] 分子量：751.28

[2642] 在0℃下，向8-((3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙基)(8-氧代-8-(十一烷-3-基氧基)辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(6.8g，7.99mmol)于二氯甲烷(30mL)中的溶液中逐滴添加三氟乙酸(10mL)并在室温下搅拌反应混合物过夜。在0℃下用饱和碳酸氢钠水溶液猝灭反应。用饱和碳酸氢钠水溶液、0.1N氢氧化钠溶液和盐水洗涤有机层。用无水硫酸钠干燥之后，在真空下移除溶剂，得到呈油状物的8-((3-氨基丙基)(8-氧代-8-(十一烷-3-基氧基)辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(5.7g，97％)。对于C47H94N2O4，MS(CI):m/z(MH+)751.7。1H NMR(300MHz,CDCl3):δppm 4.87-4.79(m,2H)；2.70(t,2H,J＝6.8Hz)；2.42-2.33(m,6H)；2.27(dt,4H,J＝2.8Hz,7.4Hz)；1.68-1.46(m,22H)；1.44-1.35(m,4H)；1.34-1.16(m,42H)；
0.88-0.84(m,12H)。

[2643] 步骤5：8-((3-(2-氰基-3,3-二甲基胍基)丙基)(8-氧代-8-(十一烷-3-基氧基)辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2644]

[2645] 化学式：C51H99N5O4

[2646] 分子量：846.38

[2647] 化合物300是以与化合物168类似的方式，不过使用8-((3-氨基丙基)(8-氧代-8-(十一烷-3-基氧基)辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(500mg，0.66mmol)代替8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯制备。在水性后处理后，残余物通过硅胶色谱法(0-50％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈无色油状物的8-((3-(2-氰基-3,3-二甲基胍基)丙基)(8-氧代-8-(十一烷-3-基氧基)辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(240mg，43％)。HPLC/UV(254nm):RT＝8.60min。对于C51H99N5O4，MS(CI):m/z(MH+)846.7。1H NMR(300MHz,CDCl3):δppm 7.59(bs,1H)；4.87-4.80(m,2H)；3.70-3.64(m,2H)；3.03(s,6H)；2.69-2.42(m,4H)；2.28(dd,4H,J＝3.0Hz,7.4Hz)；
1.71-1.42(m,26H)；1.36-1.16(m,42H)；0.88-0.84(m,12H)。

[2648] HI.化合物301：8-((3-((2-(甲基氨基)-3,4-二氧代环丁-1-烯-1-基)氨基)丙基)(8-氧代-8-(十一烷-3-基氧基)辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2649]

[2650] 化学式：C52H97N3O6

[2651] 分子量：860.36

[2652] 化合物301是以与化合物182类似的方式，不过使用8-((3-氨基丙基)(8-氧代-8-(十一烷-3-基氧基)辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(500mg，0.66mmol)代替8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯制备。在水性后处理后，残余物通过硅胶色谱法(0-50％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈白色蜡状固体的8-((3-((2-(甲基氨基)-3,4-二氧代环丁-1-烯-1-基)氨基)丙基)(8-氧代-8-(十一烷-3-基氧基)辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(180mg，32％)。HPLC/UV(254nm):RT＝6.77min。对于C52H97N3O6，MS(CI):m/z(MH+)860.7。1H NMR(300MHz,CDCl3):δppm 4.86-
4.79(m,2H)；3.66(bs,2H)；3.25(d,3H,J＝4.9Hz)；2.56-2.52(m,2H)；2.42-2.37(m,4H)；
2.28(dd,4H,J＝2.7Hz,7.4Hz)；1.78-1.68(m,3H)；1.64-1.50(m,16H)；1.48-1.38(m,6H)；
1.32-1.18(m,43H)；0.88-0.84(m,12H)。

[2653] HJ.化合物302：8-((3-(3,3-二甲基硫代脲基)丙基)(8-氧代-8-(十一烷-3-基氧基)辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2654]

[2655] 化学式：C50H99N3O4S

[2656] 分子量：838.42

[2657] 化合物302是以与化合物111类似的方式，不过使用8-((3-氨基丙基)(8-氧代-8-(十一烷-3-基氧基)辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(500mg，0.66mmol)代替8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯制备。在水性后处理后，残余物通过硅胶色谱法(0-50％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈黄色油状物的8-((3-(3,3-二甲基硫代脲基)丙基)(8-氧代-8-(十一烷-3-基氧基)辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(140mg，25％)。HPLC/UV(254nm):RT＝6.03min。对于C50H99N3O4S，MS(CI):m/z(MH+)838.7。1H NMR(300MHz,CDCl3):δppm 4.87-4.80(m,2H)；3.83(bs,2H)；3.27(s,6H)；2.91-2.64(m,4H)；2.27(dd,4H,J＝3.1Hz,7.5Hz)；1.68-1.42(m,27H)；1.38-
1.12(m,42H)；0.88-0.84(m,12H)。

[2658] HK.化合物303：8-((3-((1-(甲基氨基)-2-硝基乙烯基)氨基)丙基)(8-氧代-8-(十一烷-3-基氧基)辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2659]

[2660] 化学式：C50H98N4O6

[2661] 分子量：851.36

[2662] 化合物303是以与化合物170类似的方式，不过使用8-((3-氨基丙基)(8-氧代-8-(十一烷-3-基氧基)辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(500mg，0.66mmol)代替8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯制备。在水性后处理后，残余物通过硅胶色谱法(0-50％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈油状物的8-((3-((1-(甲基氨基)-2-硝基乙烯基)氨基)丙基)(8-氧代-8-(十一烷-3-基氧基)辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(270mg，40％)。HPLC/UV(254nm):RT＝8.19min。对于C50H98N4O6，MS(CI):m/z(MH+)851.6。1H NMR(300MHz,CDCl3,25℃):δppm 10.15(bs,1H)；8.36,8.22(bs,1H)；6.55(s,0.5H)；6.53(s,0.5H)；4.85-4.80(m,2H)；3.32-3.23(m,2H)；
2.85(d,1.5H,J＝4.9Hz)；2.74-2.72(m,1.5H)；2.64(m,1H)；2.46-2.44(m,5H)；2.28(dd,
4H,J＝2.7Hz,7.4Hz)；1.76(m,2H)；1.68-1.38(m,22H)；1.31-1.18(m,42H)；0.88-0.84(m,
12H)。1H NMR(300MHz,CDCl3,60℃):δppm 10.15(bs,1H)；7.70(bs,1H)；6.51(s,1H)；4.86-
4.80(m,2H)；3.27(m,2H)；2.82(bs,3H)；2.64-2.39(m,6H)；2.28(m,4H)；1.76(m,2H)；1.68-
1.38(m,22H)；1.31-1.18(m,42H)；0.88-0.84(m,12H)。

[2663] HL.化合物304：8-((3-(2-甲氧基乙酰胺基)丙基)(8-氧代-8-(十一烷-3-基氧基)辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2664]

[2665] 化学式：C50H98N2O6

[2666] 分子量：823.34

[2667] 化合物303是以与化合物170类似的方式，不过使用8-((3-氨基丙基)(8-氧代-8-(十一烷-3-基氧基)辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(500mg，0.66mmol)代替8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯制备的。在水性后处理后，残余物通过硅胶色谱法(0-50％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈油状物的8-((3-(2-甲氧基乙酰胺基)丙基)(8-氧代-8-(十一烷-3-基氧基)辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(290mg，53％)。HPLC/UV(210nm):RT＝8.52min。对于C50H98N2O6，MS(CI):m/z(MH+)823.7。1H NMR(300MHz,CDCl3):δppm 7.59-7.56(m,1H)；4.87-4.80(m,2H)；3.86(s,2H)；3.38(s,3H)；3.38-3.32(m,2H)；2.48-2.32(m,6H)；2.27(dd,4H,J＝2.7Hz,
7.5Hz)；1.68-1.36(m,24H)；1.34-1.18(m,42H)；0.88-0.83(m,12H)。

[2668] HM.化合物305：癸酸7-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(3-(2-甲氧基乙酰胺基)丙基)氨基)庚酯

[2669]

[2670] 化学式：C48H94N2O6

[2671] 分子量：795.29

[2672] 化合物305是以与化合物178类似的方式，但使用癸酸7-((3-氨基丙基)(8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)氨基)庚酯代替8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯制备。浅黄色油状物，230mg，42％。HPLC/UV(210nm):RT＝5.76min。对于C48H94N2O6，MS(CI):m/z(MH+)795.6。1H NMR(300MHz,CDCl3):δppm 7.57(bs,1H)；4.87-
4.83(m,1H)；4.04(t,2H,J＝6.7Hz)；3.86(s,2H)；3.38(s,3H)；3.38-3.31(m,2H)；2.35-
2.42(m,2H)；2.35-2.33(m,4H)；2.27(dd,2H,J＝2.9Hz,7.4Hz)；1.68-1.52(m,11H)；1.50-
1.38(m,11H)；1.34-1.18(m,44H)；0.86(t,9H,J＝6.5Hz)。

[2673] HN.化合物306：8-((3-(3,3-二甲基硫代脲基)丙基)(6-氧代-6-(十一烷氧基)己基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2674] 步骤1：8-((3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙基)(6-氧代-6-(十一烷氧基)己基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2675]

[2676] 化学式：C50H98N2O6

[2677] 分子量：823.34

[2678] 在86℃下，将8-((3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(5.55g，10mmol)、6-溴己酸十一烷酯(5.24g，15mmol)于含有碳酸钾(5.53g，40mmol)和碘化钾(2.49g，15mmol)的环戊基甲基醚(80mL)和乙腈(80mL)中的溶液加热18小时。冷却至室温之后，通过硅藻土过滤反应混合物，用乙酸乙酯洗涤滤饼，并真空浓缩滤液，得到粗产物，该粗产物通过硅胶色谱法(0-50％EtOAc/己烷，接着1:1丙酮/己烷)纯化，得到呈油状物的8-((3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙基)(6-氧代-6-(十一烷基氧基)己基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(6.2g，73％)。对于C50H98N2O6，MS(CI):m/z(MH+)823.7。1H NMR(300MHz,CDCl3):δppm
5.64(bs,1H)；4.85(quint,1H,J＝6.3Hz)；4.04(t,2H,J＝6.7Hz)；3.17(m,2H)；2.42(t,2H,J＝6.8Hz)；2.35-2.24(m,8H)；1.64-1.56(m,8H)；1.53-1.44(m,8H)；1.42(s,9H)；1.24(m,
48H)；0.86(t,9H,J＝6.6Hz)。

[2679] 步骤2：8-((3-氨基丙基)(6-氧代-6-(十一烷氧基)己基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2680]

[2681] 化学式：C45H90N2O4

[2682] 分子量：723.23

[2683] 在0℃下，向8-((3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙基)(6-氧代-6-(十一烷氧基)己基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(6.2g，7.53mmol)于二氯甲烷(75mL)中的溶液中逐滴添加三氟乙酸(5.8mL)并在室温下搅拌反应混合物过夜。在0℃下，用饱和碳酸氢钠水溶液猝灭反应。用饱和碳酸氢钠水溶液、0.1N氢氧化钠溶液和盐水洗涤有机层。用无水硫酸钠干燥之后，在真空下移除溶剂，得到呈黄色油状物的8-((3-氨基丙基)(6-氧代-6-(十一烷基氧基)己基)氨+ 1基)辛酸十七烷-9-基酯(5.57g，定量)。对于C45H90N2O4，MS(CI):m/z(MH)723.7。H NMR(300MHz,CDCl3):δppm 4.85(quint,1H,J＝6.3Hz)；4.04(t,2H,J＝6.6Hz)；2.85(t,2H,J＝
6.3Hz)；2.53(t,2H,J＝6.8Hz)；2.45-2.37(m,4H)；2.28(t,2H,J＝7.4Hz)；2.26(t,2H,J＝
7.4Hz)；1.70-1.55(m,8H)；1.54-1.40(m,8H)；1.24(m,50H)；0.86(t,9H,J＝6.6Hz)。

[2684] 步骤3：8-((3-(3,3-二甲基硫代脲基)丙基)(6-氧代-6-(十一烷氧基)己基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2685]

[2686] 化学式：C48H95N3O4S

[2687] 分子量：810.37

[2688] 化合物306是以与化合物111类似的方式，不过使用8-((3-氨基丙基)(6-氧代-6-(十一烷氧基)己基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(500mg，0.66mmol)代替8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯制备的。在水性后处理后，残余物通过硅胶色谱法(0-50％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈黄色油状物的8-((3-(3,3-二甲基硫代脲基)丙基)(6-氧代-6-(十一烷氧基)己基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(320mg，57％)。HPLC/UV(210nm):RT＝5.98min。对于C48H95N3O4S，MS(CI):m/z(MH+)810.6。1H NMR(300MHz,CDCl3):δppm 8.03(bs,1H)；4.85(quint,1H,J＝6.3Hz)；4.04(t,2H,J＝6.6Hz)；3.70(m,2H)；3.20(s,6H)；2.57(m,2H)；2.42(m,4H)；2.28(m,4H)；1.71(m,2H)；1.62(m,6H)；1.54-1.40(m,8H)；1.24(m,48H)；0.86(t,9H,J＝6.6Hz)。

[2689] HO.化合物307：癸酸7-((3-(2-氰基-3,3-二甲基胍基)丙基)(8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)氨基)庚酯

[2690]

[2691] 化学式：C49H95N5O4

[2692] 分子量：818.33

[2693] 化合物307是以与化合物168类似的方式，但使用癸酸7-((3-氨基丙基)(8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)氨基)庚酯代替8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯制备的。无色油状物，160mg，28％。HPLC/UV(214nm):RT＝5.88min。+ 1
对于C49H95N5O4，MS(CI):m/z(MH)818.7。H NMR(300MHz,CDCl3):δppm 4.87-4.83(m,1H)；
4.04(t,2H,J＝6.7Hz)；3.68-3.64(m,2H)；3.02(s,6H)；2.79-2.48(m,4H,)；2.27(dd,4H,J＝1.6Hz,7.4Hz)；1.89(bs,1H)；1.68-1.42(m,21H)；1.38-1.16(m,45H)；0.86(t,9H,J＝
6.7Hz)。

[2694] HP.化合物308：癸酸7-((3-(3,3-二甲基硫代脲基)丙基)(8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)氨基)庚酯

[2695]

[2696] 化学式：C48H95N3O4S

[2697] 分子量：810.37

[2698] 化合物308是以与化合物111类似的方式，但使用癸酸7-((3-氨基丙基)(8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)氨基)庚酯代替8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯制备。黄色油状物，150mg，27％。HPLC/UV(254nm):RT＝6.77min。对于C48H95N3O4S，MS(CI):m/z(MH+)810.6。1H NMR(300MHz,CDCl3):δppm 8.20(bs,1H)；4.87-4.83(m,1H)；4.04(t,2H,J＝6.7Hz)；3.73(bs,2H)；3.23(s,6H)；2.68-2.38(m,4H,)；2.30-
2.25(m,4H)；1.68-1.42(m,22H)；1.38-1.14(m,44H)；0.86(t,9H,J＝6.5Hz)。

[2699] HQ.化合物309：癸酸7-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(3-((2-(甲基氨基)-3,4-二氧代环丁-1-烯-1-基)氨基)丙基)氨基)庚酯

[2700]

[2701] 化学式：C50H93N3O6

[2702] 分子量：832.31

[2703] 化合物309是以与化合物182类似的方式，但使用癸酸7-((3-氨基丙基)(8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)氨基)庚酯代替8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯制备。白色蜡状固体，190mg，28％。HPLC/UV(254nm):RT＝6.71min。+ 1
对于C50H93N3O6，MS(CI):m/z(MH)832.6。H NMR(300MHz,CDCl3):δppm 4.86-4.82(m,1H)；
4.04(t,2H,J＝6.7Hz)；3.64(bs,2H)；3.25(d,3H,J＝4.9Hz)；2.53(t,2H,J＝5.6Hz)；2.42-
2.37(m,4H)；2.28(t,4H,J＝7.5Hz)；1.76-1.71(m,2H)；1.64-1.58(m,10H)；1.52-1.38(m,
9H)；1.30-1.18(m,44H)；0.86(t,9H,J＝6.5Hz)。

[2704] HR.化合物310：癸酸7-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(3-((1-(甲基氨基)-2-硝基乙烯基)氨基)丙基)氨基)庚酯

[2705]

[2706] 化学式：C48H94N4O6

[2707] 分子量：823.30

[2708] 化合物310是以与化合物170类似的方式，但使用癸酸7-((3-氨基丙基)(8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)氨基)庚酯代替8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯制备的。褐色油状物，195mg，28％。HPLC/UV(214nm):RT＝6.15min。对于C48H94N4O6，MS(CI):m/z(MH+)823.7。1H NMR(300MHz,CDCl3,25℃):δppm 10.14(bs,1H)；
8.32(s,0.5H)；8.18(s,0.5H)；6.55(s,0.5H)；,6.53(s,0.5H)；4.87-4.83(m,1H)；4.04(t,
2H,J＝6.7Hz)；3.33-3.23(m,2H)；2.86(d,1.5H,J＝5.2Hz)；2.73(bs,1.5H)；2.65(m,1H)；
2.48(m,5H)；2.27(t,4H,J＝7.5Hz)；1.77(m,2H)；1.67-1.58(m,10H)；1.49-1.43(m,8H)；
1.30-1.14(m,44H)；0.86(t,9H,J＝6.7Hz)。1H NMR(300MHz,CDCl3,60℃):δppm 10.14(bs,
1H)；7.70(bs,1H)；6.51(s,1H)；4.87-4.83(m,1H)；4.04(t,2H,J＝6.7Hz)；3.28(bs,2H)；
2.83(bs,3H)；2.65-2.41(m,6H)；2.27(t,4H,J＝7.5Hz)；1.77(m,2H)；1.67-1.58(m,10H)；
1.49-1.43(m,8H)；1.30-1.14(m,44H)；0.86(t,9H,J＝6.7Hz)。

[2709] HS.化合物311：8-((3-(2-氰基-3,3-二甲基胍基)丙基)(8-((2-甲基壬基)氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2710]

[2711] 化学式：C50H97N5O4

[2712] 分子量：832.36

[2713] 化合物311是以与化合物168类似的方式，但使用8-((3-氨基丙基)(8-((2-甲基壬基)氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯代替8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯制备的。无色油状物，350mg，62％。HPLC/UV(214nm):RT＝6.04min。对于C50H97N5O4，MS(CI):m/z(MH+)832.7。1H NMR(300MHz,CDCl3):δppm 7.62(bs,
1H)；4.87-4.80(m,1H)；3.94(dd,1H,J＝5.9Hz,10.5Hz)；3.83(dd,1H,J＝6.8Hz,10.7Hz)；
3.70-3.64(m,2H)；2.99(s,6H)；2.69-2.38(m,4H)；2.28(dd,4H,J＝7.6Hz,15.1Hz)；1.80-
1.52(m,7H)；1.52-1.16(m,58H)；0.91-0.82(m,12H)。

[2714] HT.化合物312：8-((3-(2-甲氧基乙酰胺基)丙基)(8-((2-甲基壬基)氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2715]

[2716] 化学式：C49H96N2O6

[2717] 分子量：809.32

[2718] 化合物312是以与化合物178类似的方式，但使用8-((3-氨基丙基)(8-((2-甲基壬基)氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯代替8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯制备的。无色油状物，300mg，55％。HPLC/UV(210nm):RT＝6.02min。对于C49H96N2O6，MS(CI):m/z(MH+)809.7。1H NMR(300MHz,CDCl3):δppm 7.56(bs,
1H)；4.89-4.81(m,1H)；3.94(dd,1H,J＝5.7Hz,10.4Hz)；3.83(dd,1H,J＝6.8Hz,10.7Hz)；
3.86(s,2H)；3.38(s,3H)；3.38-3.32(m,2H)；2.46(m,2H)；2.37-2.24(m,8H)；1.78-1.72(m,
1H)；1.68-1.52(m,8H)；1.528-1.18(m,54H)；0.91-0.82(m,12H)。

[2719] HU.化合物313：(Z)-8-((3-((2-(甲基氨基)-3,4-二氧代环丁-1-烯-1-基)氨基)丙基)(8-(壬-2-烯-1-基氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2720] 步骤1：8-溴辛酸(Z)-壬-2-烯-1-基酯

[2721]

[2722] 化学式：C17H31BrO2

[2723] 分子量：347.34

[2724] 在0℃下，向顺式-2-壬烯-1-醇(10.0g，70mmol)、8-溴辛酸(23.43g，105mmol)和DMAP(1.72g，14mmol)于二氯甲烷中的溶液中添加EDCI(20.23g，105mmol)并在室温下搅拌反应混合物过夜。TLC显示反应完成。将反应混合物冷却至0℃并经20分钟极慢添加盐酸溶液(10mL浓盐酸、90mL水、7.5g氯化钠)。接着，添加乙腈(100mL)和己烷(100mL)，分离各层并使有机层干燥(Na2SO4)并且在真空下移除，得到油状物。将其溶解于己烷(100mL)中并用乙腈(100mL)和5％碳酸氢钠水溶液(100mL)的混合物洗涤。分离己烷层并通过硅藻土过滤，用己烷洗涤滤饼并浓缩滤液，得到呈无色油状物的8-溴辛酸(Z)-壬-2-烯-1-基酯(19.98g，82％)。1H NMR(300MHz,CDCl3):δppm 5.65-5.59(m,1H)；5.53-5.49(m,1H)；4.61(d,2H,J＝
6.8Hz)；3.92(t,2H,J＝6.7Hz)；2.44(t,0.5H,J＝7.4Hz,对于CH2Cl)；2.29(t,2H,J＝
7.4Hz,对于CH2Br)；2.08(dd,2H,J＝6.6Hz,13.7Hz)；1.88-1.79(m,2H)；1.70-1.56(m,2H)；
1.50-1.16(m,14H)；0.87(t,3H,J＝6.7Hz)。

[2725] 步骤2：(Z)-8-((3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙基)(8-(壬-2-烯-1-基氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2726]

[2727] 化学式：C50H96N2O6

[2728] 分子量：821.33

[2729] 在70℃下，将8-((3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(6.0g，12mmol)、8-溴辛酸(Z)-壬-2-烯-1-基酯(4.49g，13mmol)和N,N-二异丙基乙基胺(2.8mL，16mmol)于乙醇(50mL)中的溶液加热3天。在真空下移除溶剂，得到粗产物，该粗产物通过硅胶色谱法(0-100％EtOAc/己烷)纯化，得到呈浅黄色油状物的(Z)-8-((3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙基)(8-(壬-2-烯-1-基氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯
+ 1
(5.2g，60％)。对于C50H96N2O6，MS(CI):m/z(MH)821.7。H NMR(300MHz,CDCl3):δppm 5.72-
5.58(m,2H)；5.56-5.48(m,1H)；4.87-4.83(m,1H)；4.60(d,2H,J＝6.6Hz)；3.20-3.12(m,
2H)；2.42(t,2H,J＝6.3Hz)；2.35-2.24(m,9H)；2.12-2.02(m,4H)；1.68-1.56(m,8H)；1.42(s,9H)；1.50-1.12(m,47H)；0.88-0.84(m,9H)。

[2730] 步骤3：(Z)-8-((3-氨基丙基)(8-(壬-2-烯-1-基氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2731]

[2732] 化学式：C45H88N2O4

[2733] 分子量：721.21

[2734] 在0℃下，向(Z)-8-((3-((叔丁氧基羰基)氨基)丙基)(8-(壬-2-烯-1-基氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(5.2g，6.33mmol)于二氯甲烷(20mL)中的溶液中逐滴添加三氟乙酸(8mL)并在室温下搅拌反应混合物过夜。在0℃下，通过添加饱和碳酸氢钠水溶液猝灭反应。将有机层用饱和碳酸氢钠水溶液、0.1N氢氧化钠溶液、盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并在真空下移除溶剂，得到呈油状物的(Z)-8-((3-氨基丙基)(8-(壬-2-烯-1-基氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(4.2g，93％)。对于C45H88N2O4，MS(APCI):m/z(MH+)721.6。1H NMR(300MHz,CDCl3):δppm 5.68-5.58(m,1H)；5.54-5.46(m,1H)；4.89-4.82(m,1H)；4.60(d,2H,J＝6.6Hz)；2.72(t,2H,J＝6.8Hz)；2.44(t,2H,J＝7.4Hz)；2.40-2.34(m,4H)；2.27(dt,4H,J＝7.5Hz,15.2Hz)；2.11-2.03(m,2H)；1.84-1.72(m,4H)；1.68-1.55(m,6H)；1.54-1.46(m,6H)；1.44-1.16(m,44H)；0.86(t,9H,J＝6.5Hz)。

[2735] 步骤4：(Z)-8-((3-((2-(甲基氨基)-3,4-二氧代环丁-1-烯-1-基)氨基)丙基)(8-(壬-2-烯-1-基氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2736]

[2737] 化学式：C50H91N3O6

[2738] 分子量：830.29

[2739] 化合物313是以与化合物182类似的方式，不过使用(Z)-8-((3-氨基丙基)(8-(壬-2-烯-1-基氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(500mg，0.66mmol)代替8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯制备的。在水性后处理后，残余物通过硅胶色谱法(0-50％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈白色蜡状固体的(Z)-8-((3-((2-(甲基氨基)-3,4-二氧代环丁-1-烯-1-基)氨基)丙基)(8-(壬-2-烯-1-基氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(200mg，29％)。
HPLC/UV(254nm):RT＝6.56min。对于C50H91N3O6，MS(CI):m/z(MH+)830.6。1H NMR(300MHz,CDCl3):δppm 5.68-5.59(m,1H)；5.54-5.48(m,1H)；4.86-4.80(m,1H)；4.60(d,2H,J＝
6.8Hz)；3.72-3.58(m,2H)；3.25(d,3H,J＝4.9Hz)；2.59-2.52(m,2H)；2.46-2.38(m,4H)；
2.29(dd,4H,J＝7.2Hz,14.6Hz)；2.08(dd,2H,J＝6.8Hz,14.0Hz)；1.82-1.68(m,3H)；1.64-
1.56(m,5H)；1.52-1.12(m,52H)；0.86(t,9H,J＝6.7Hz)。

[2740] HV.化合物314：8-((3-((1-(甲基氨基)-2-硝基乙烯基)氨基)丙基)(8-(((Z)-壬-2-烯-1-基)氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2741]

[2742] 化学式：C48H92N4O6

[2743] 分子量：821.29

[2744] 化合物314是以与化合物170类似的方式，不过使用(Z)-8-((3-氨基丙基)(8-(壬-2-烯-1-基氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯代替8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯制备的。在水性后处理后，残余物通过硅胶色谱法(0-50％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈黄色油状物的8-((3-((1-(甲基氨基)-2-硝基乙烯基)氨基)丙基)(8-(((Z)-壬-2-烯-1-基)氧基)-
8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(190mg，28％)。HPLC/UV(254nm):RT＝6.30min。对于+ 1
C48H92N4O6，MS(CI):m/z(MH)821.7。H NMR(300MHz,CDCl3,25℃):δppm 10.13(bs,1H)；
8.36,8.22(bs,1H)；6.54(s,0.5H)；6.52(s,0.5H)；5.65-5.59(m,1H)；5.52-5.48(m,1H)；
4.87-4.81(m,1H)；4.60(d,2H,J＝6.6Hz)；3.38-3.22(m,2H)；2.85(d,1.5H,J＝5.2Hz)；
2.73-2.72(m,1.5H)；2.63(m,1H)；2.46(m,5H)；2.28(dd,4H,J＝7.5Hz,14.9Hz)；2.08(dd,
2H,J＝7.1Hz,14.0Hz)；1.76(m,2H)；1.68-1.56(m,6H)；1.52-1.12(m,50H)；0.86(t,9H,J＝
6.6Hz)。1H NMR(300MHz,CDCl3,60℃):δppm 10.15(bs,1H)；7.70(bs,1H)；6.51(s,1H)；
5.65-5.59(m,1H)；5.52-5.48(m,1H)；4.87-4.81(m,1H)；4.60(d,2H,J＝6.6Hz)；3.27(bs,
2H)；2.81(bs,3H)；2.62-2.41(m,6H)；2.28(dd,4H,J＝7.5Hz,14.9Hz)；2.08(dd,2H,J＝
7.1Hz,14.0Hz)；1.76(m,2H)；1.68-1.56(m,6H)；1.52-1.12(m,50H)；0.86(t,9H,J＝
6.6Hz)。

[2745] HW.化合物315：8-((3-((Z)-2-氰基-3,3-二甲基胍基)丙基)(8-(((Z)-壬-2-烯-1-基)氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2746]

[2747] 化学式：C49H93N5O4

[2748] 分子量：816.31

[2749] 化合物315是以与化合物168类似的方式，但使用(Z)-8-((3-氨基丙基)(8-(壬-2-烯-1-基氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯代替8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯制备的。在水性后处理后，残余物通过硅胶色谱法(0-50％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈无色油状物的8-((3-((Z)-2-氰基-3,3-二甲基胍基)丙基)(8-(((Z)-壬-2-烯-1-基)氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(150mg，26％)。HPLC/UV(254nm):RT＝6.55min。对于
C49H93N5O4，MS(CI):m/z(MH+)816.7。1H NMR(300MHz,CDCl3):δppm 7.66(bs,1H)；5.68-5.58(m,1H)；5.56-5.44(m,1H)；4.87-4.81(m,1H)；4.61(d,2H,J＝6.8Hz)；3.72-3.64(m,2H)；
2.98(s,6H)；2.59-2.54(m,2H)；2.44-2.38(m,4H)；2.28(dd,4H,J＝7.5Hz,15.2Hz)；2.08(dd,2H,J＝7.1Hz,14.0Hz)；1.68-1.58(m,7H)；1.52-1.42(m,5H)；1.38-1.12(m,46H)；
0.88-0.84(m,9H)。

[2750] HX.化合物316：(Z)-8-((3-(2-甲氧基乙酰胺基)丙基)(8-(壬-2-烯-1-基氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2751]

[2752] 化学式：C48H92N2O6

[2753] 分子量：793.27

[2754] 化合物316是以与化合物178类似的方式，但使用(Z)-8-((3-氨基丙基)(8-(壬-2-烯-1-基氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯代替8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯制备的。在水性后处理后，残余物通过硅胶色谱法(0-50％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈无色油状物的(Z)-8-((3-(2-甲氧基乙酰胺基)丙基)(8-(壬-2-烯-1-基氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(220mg，40％)。HPLC/UV(210nm):RT＝5.73min。对于C48H92N2O6，MS(CI):m/z(MH+)793.7。1H NMR(300MHz,CDCl3):δppm 7.59-7.56(m,1H)；5.68-5.58(m,1H)；5.54-5.48(m,1H)；4.87-4.81(m,1H)；4.60(d,2H,J＝6.8Hz)；3.86(s,2H)；3.37(s,3H)；3.37-3.31(m,
2H)；2.46(t,2H,J＝6.3Hz)；2.37-2.24(m,8H)；2.08(dd,2H,J＝7.1Hz,13.7Hz)；1.68-1.58(m,5H)；1.50-1.40(m,8H)；1.38-1.18(m,45H)；0.86(t,9H,J＝6.7Hz)。

[2755] HY.化合物317：8-((3-((2-(甲基氨基)-3,4-二氧代环丁-1-烯-1-基)氨基)丙基)(6-氧代-6-(十一烷氧基)己基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2756]

[2757] 化学式：C50H93N3O6

[2758] 分子量：832.31

[2759] 化合物317是以与化合物182类似的方式，但使用8-((3-氨基丙基)(6-氧代-6-(十一烷氧基)己基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯代替8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯制备的。在水性后处理后，残余物通过硅胶色谱法(0-50％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈白色蜡状固体的8-((3-((2-(甲基氨基)-3,4-二氧代环丁-1-烯-1-基)氨基)丙基)(6-氧代-6-(十一烷氧基)己基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(180mg，32％)。HPLC/UV(254nm):RT＝11.45min。对于C50H93N3O6，MS(CI):m/z(MH+)832.7。1H NMR(300MHz,CDCl3):δppm 4.86-4.79(m,1H)；4.06(t,2H,J＝6.8Hz)；3.66(bs,2H)；3.26(d,3H,J＝4.9Hz)；2.56-2.52(m,2H)；2.40-2.25(m,8H)；1.78-1.68(m,2H)；1.64-1.55(m,8H)；1.48-1.38(m,8H)；1.24(m,48H)；0.86(t,9H,J＝
6.6Hz)。

[2760] HZ.化合物318：8-((3-((1-(甲基氨基)-2-硝基乙烯基)氨基)丙基)(6-氧代-6-(十一烷氧基)己基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2761]

[2762] 化学式：C48H94N4O6

[2763] 分子量：823.30

[2764] 化合物318是以与化合物170类似的方式，但使用8-((3-氨基丙基)(6-氧代-6-(十一烷氧基)己基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯代替8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯制备的。在水性后处理后，残余物通过硅胶色谱法(0-50％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈黄色油状物的8-((3-((1-(甲基氨基)-2-硝基乙烯基)氨基)丙基)(6-氧代-6-(十一烷氧基)己基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(270mg，40％)，270mg，40％。HPLC/UV(254nm):RT＝8.74min。对于C48H94N4O6，MS(CI):m/z(MH+)823.7。1H NMR(300MHz,CDCl3,25℃):δppm 10.15(bs,1H)；8.21,8.13(bs,1H)；6.55(s,0.5H)；6.53(s,0.5H)；4.85(quint,1H,J＝6.3Hz)；4.04(t,2H,J＝6.6Hz)；3.32-3.23(m,2H)；2.85(d,1.5H,J＝4.9Hz)；2.74-2.72(m,1.5H)；2.64(m,1H)；
2.46(m,5H)；2.28(m,4H)；1.76(m,2H)；1.66-1.53(m,6H)；1.53-1.40(m,8H)；1.24(m,48H)；
0.86(t,9H,J＝6.6Hz)。1H NMR(300MHz,CDCl3,50℃):δppm 10.15(bs,1H)；7.79(bs,1H)；
6.52(s,1H)；4.85(m,1H)；4.05(t,2H,J＝6.6Hz)；3.29(m,2H)；2.84(bs,3H)；2.64-2.44(m,
6H)；2.28(m,4H)；1.76(m,2H)；1.61(m,6H)；1.53-1.40(m,8H)；1.24(m,48H)；0.86(m,9H)。

[2765] IA.化合物319：(Z)-8-((3-(3,3-二甲基硫代脲基)丙基)(8-(壬-2-烯-1-基氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2766]

[2767] 化学式：C48H93N3O4S

[2768] 分子量：808.35

[2769] 化合物319是以与化合物111类似的方式，但使用(Z)-8-((3-氨基丙基)(8-(壬-2-烯-1-基氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯代替8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯制备。在水性后处理后，残余物通过硅胶色谱法(0-
50％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈黄色油状物的(Z)-8-((3-(3,3-二甲基硫代脲基)丙基)(8-(壬-2-烯-1-基氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(110mg，20％)。HPLC/UV(254nm):RT＝6.67min。对于C48H93N3O4S，MS(CI):m/z(MH+)808.6。1H NMR(300MHz,CDCl3):δppm 7.72(bs,1H)；5.64-5.58(m,1H)；5.53-5.48(m,
1H)；4.86-4.80(m,1H)；4.60(d,2H,J＝6.8Hz)；3.78-3.77(m,2H)；3.26(s,6H)；2.91-2.64(m,4H)；2.27(dd,4H,J＝7.6Hz,15.3Hz)；2.08(dd,4H,J＝6.7Hz,13.8Hz)；1.68-1.42(m,
12H)；1.38-1.12(m,46H)；0.88-0.84(m,9H)。

[2770] IB.化合物320：8-((3-((1-(甲基氨基)-2-硝基乙烯基)氨基)丙基)(8-((2-甲基壬基)氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2771]

[2772] 化学式：C49H96N4O6

[2773] 分子量：837.33

[2774] 化合物320是以与化合物170类似的方式，但使用8-((3-氨基丙基)(8-((2-甲基壬基)氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯代替8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯制备。黄色油状物，380mg，56％。HPLC/UV(254nm):RT＝6.85min。对于C49H96N4O6，MS(CI):m/z(MH+)837.7。1H NMR(300MHz,CDCl3,25℃):δppm 10.13(bs,1H)；8.36(s,0.5H)；8.22(s,0.5H)；6.55(s,0.5H)；6.53(s,0.5H)；4.87-4.81(m,1H)；
3.94(dd,1H,J＝5.7Hz,10.4Hz)；3.83(dd,1H,J＝6.8Hz,10.7Hz)；3.38-3.23(m,2H)；2.85(d,1.5H,J＝5.1Hz)；2.72(d,1.5H,J＝4.1Hz)；2.63(m,1H)；2.46(m,5H)；2.28(dd,4H,J＝
7.4Hz,15.1Hz)；1.76(m,3H)；1.68-1.58(m,6H)；1.52-1.12(m,54H)；0.91-0.84(m,12H)。1H NMR(300MHz,CDCl3,50℃):δppm 10.15(bs,1H)；7.89(bs,1H)；6.51(s,1H)；4.87-4.81(m,
1H)；3.94(dd,1H,J＝5.7Hz,10.4Hz)；3.83(dd,1H,J＝6.8Hz,10.7Hz)；3.25(bs,2H)；2.87-
2.72(m,3H)；2.63(m,1H)；2.46(m,5H)；2.28(dd,4H,J＝7.4Hz,15.1Hz)；1.76(m,3H)；1.68-
1.58(m,6H)；1.52-1.12(m,54H)；0.91-0.84(m,12H)。

[2775] IC.化合物321：8-((3-((2-(甲基氨基)-3,4-二氧代环丁-1-烯-1-基)氨基)丙基)(8-((2-甲基壬基)氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2776]

[2777] 化学式：C51H95N3O6

[2778] 分子量：846.34

[2779] 化合物321是以与化合物182类似的方式，但使用8-((3-氨基丙基)(8-((2-甲基壬基)氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯代替8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯制备的。白色蜡状固体，240mg，41％。HPLC/UV(ELSD):RT+ 1＝7.10min。对于C51H95N3O6，MS(CI):m/z(MH)846.7。H NMR(300MHz,CDCl3):δppm 4.86-
4.80(m,1H)；3.93(dd,1H,J＝6.0Hz,10.7Hz)；3.83(dd,1H,J＝6.8Hz,10.7Hz)；3.68-3.58(m,2H)；3.25(d,3H,J＝4.9Hz)；2.55-2.52(m,2H)；2.42-2.37(m,4H)；2.29(dd,4H,J＝
7.7Hz,15.1Hz)；1.80-1.68(m,3H)；1.66-1.56(m,10H)；1.52-1.38(m,9H)；1.32-1.12(m,
42H)；0.91-0.82(m,12H)。

[2780] ID.化合物322：8-((3-(3,3-二甲基硫代脲基)丙基)(8-((2-甲基壬基)氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2781]

[2782] 化学式：C49H97N3O4S

[2783] 分子量：824.39

[2784] 化合物322是以与化合物111类似的方式，但使用8-((3-氨基丙基)(8-((2-甲基壬基)氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯代替8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯制备的。黄色油状物，150mg，27％。HPLC/UV(254nm):RT＝7.27min。对于C49H97N3O4S，MS(CI):m/z(MH+)824.7。1H NMR(300MHz,CDCl3):δppm 7.60(bs,
1H)；4.87-4.82(m,1H)；3.94(dd,1H,J＝5.7Hz,10.7Hz)；3.86-3.80(m,3H)；3.27(s,6H)；
3.04-2.74(m,4H)；2.28(dd,4H,J＝7.6Hz,15.1Hz)；1.80-1.72(m,3H)；1.68-1.42(m,12H)；
1.38-1.18(m,50H)；0.91-0.82(m,12H)。

[2785] IE.化合物323：2-辛基癸酸7-((3-(2-甲氧基乙酰胺基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)庚酯

[2786]

[2787] 化学式：C48H94N2O6

[2788] 分子量：795.29

[2789] 化合物323是以与化合物178类似的方式，但使用2-辛基癸酸7-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)庚酯代替8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯制备的。黄色油状物，220mg，40％。HPLC/UV(214nm):RT＝6.00min。对于+ 1C48H94N2O6，MS(CI):m/z(MH)795.7。H NMR(300MHz,CDCl3):δppm 7.52(m,1H)；4.05-4.02(m,4H)；3.86(s,2H)；3.38(s,3H)；3.38-3.32(m,2H)；2.52-2.25(m,9H)；1.72-1.53(m,
12H)；1.44-1.12(m,52H)；0.86(t,9H,J＝6.7Hz)。

[2790] IF.化合物324：2-辛基癸酸7-((3-(2-氰基-3,3-二甲基胍基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)庚酯

[2791]

[2792] 化学式：C49H95N5O4

[2793] 分子量：818.33

[2794] 化合物324是以与化合物168类似的方式，但使用2-辛基癸酸7-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)庚酯代替8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯制备的。无色油状物，370mg，65％。HPLC/UV(214nm):RT＝6.04min。对于C49H95N5O4，MS(CI):m/z(MH+)818.7。1H NMR(300MHz,CDCl3):δppm 7.64(m,1H)；4.06-4.02(m,4H)；3.68-3.62(m,2H)；2.98(s,6H)；2.59-2.56(m,2H)；2.44-2.39(m,4H)；2.32-2.26(m,3H)；1.72-1.53(m,12H)；1.44-1.12(m,52H)；0.86(t,9H,J＝6.7Hz)。

[2795] IG.化合物325：2-辛基癸酸7-((3-((1-(甲基氨基)-2-硝基乙烯基)氨基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)庚酯

[2796]

[2797] 化学式：C48H94N4O6

[2798] 分子量：823.30

[2799] 化合物325是以与化合物170类似的方式，但使用2-辛基癸酸7-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)庚酯代替8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯制备。黄色油状物，355mg，52％。HPLC/UV(214nm):RT＝5.76min。对于C48H94N4O6，MS(CI):m/z(MH+)823.7。1H NMR(300MHz,CDCl3,25℃):δppm 10.15(bs,1H)；8.37-8.24(m,1H)；6.55(s,0.5H)；6.53(s,0.5H)；4.06-4.04(m,4H)；3.34-3.24(m,2H)；
2.90-2.85(m,1.5H)；2.74-2.73(m,1.5H)；2.64(m,1H)；2.47(bs,4H)；2.34-2.26(m,3H)；
1
1.77(m,2H)；1.68-1.53(m,10H)；1.44-1.12(m,53H)；0.86(t,9H,J＝6.6Hz)。H NMR
(300MHz,CDCl3,50℃):δppm 10.15(bs,1H)；7.89(bs,1H)；6.52(s,1H)；4.06-4.04(m,4H)；
3.29(bs,2H)；2.87(m,3H)；2.64-2.40(m,6H)；2.34-2.26(m,3H)；1.79(m,2H)；1.64-1.54(m,10H)；1.44-1.12(m,52H)；0.86(t,9H,J＝6.6Hz)。

[2800] IH.化合物326：2-辛基癸酸7-((3-((2-(甲基氨基)-3,4-二氧代环丁-1-烯-1-基)氨基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)庚酯

[2801]

[2802] 化学式：C50H93N3O6

[2803] 分子量：832.31

[2804] 化合物326是以与化合物182类似的方式，但使用2-辛基癸酸7-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)庚酯代替8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯制备的。白色蜡状固体，330mg，57％。HPLC/UV(254nm):RT＝7.01min。对于C50H93N3O6，MS(CI):m/z(MH+)832.6。1H NMR(300MHz,CDCl3):δppm 6.90(bs,1H)；4.05-4.01(m,4H)；3.63(bs,2H)；3.25(d,3H,J＝4.9Hz)；2.53(t,2H,J＝5.6Hz)；2.40(t,4H,J＝
7.4Hz)；2.33-2.26(m,3H)；1.74-1.71(m,2H)；1.68-1.52(m,11H)；1.48-1.12(m,52H)；0.86(t,9H,J＝6.7Hz)。

[2805] II.化合物327：2-辛基癸酸7-((3-(3,3-二甲基硫代脲基)丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)庚酯

[2806]

[2807] 化学式：C48H95N3O4S

[2808] 分子量：810.37

[2809] 化合物327是以与化合物111类似的方式，但使用2-辛基癸酸7-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)庚酯代替8-((3-氨基丙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯制备。黄色油状物，200mg，36％。HPLC/UV(254nm):RT＝6.95min。对于C48H95N3O4S，MS(CI):m/z(MH+)810.6。1H NMR(300MHz,CDCl3):δppm 8.08(bs,1H)；4.06-4.02(m,4H)；3.72(bs,2H)；3.23(s,6H)；2.72-2.38(m,4H)；2.34-2.25(m,3H)；1.71-1.55(m,12H)；1.44-1.12(m,54H)；0.86(t,9H,J＝6.7Hz)。

[2810] IJ.化合物328：8-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(3-羟基丙基)氨基)辛酸十二烷-4-基酯

[2811] 步骤1：8-((3-羟基丙基)氨基)辛酸十二烷-4-基酯

[2812]

[2813] 化学式：C23H47NO3

[2814] 分子量：385.63

[2815] 向8-溴辛酸十二烷-4-基酯(2.5g，6.4mmol)于乙醇(100mL)中的溶液中添加丙醇胺(9.8mL，130mmol)并在50℃下搅拌反应过夜。使溶液回到室温并真空浓缩。将粗物质溶解于DCM中并用5％NaHCO3洗涤两次，经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩。通过硅胶色谱法(0-100％(DCM 20％MeOH 1％NH4OH)/DCM)纯化，得到呈透明无色油状物的8-((3-羟基丙基)氨基)辛酸十二烷-4-基酯(2.08g，84.5％)。UPLC/ELSD:RT＝1.58min。对于C23H47NO3，MS(ES):m/z(MH+)386.42。1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.90(m,1H)；3.83(t,2H)；3.31(br,1H)；2.90(t,2H)；2.62(t,2H)；2.29(t,2H)；1.85-1.05(br.m,30H)；0.91(m,6H)(未观察到羟基质子)。

[2816] 步骤2：8-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(3-羟基丙基)氨基)辛酸十二烷-4-基酯

[2817]

[2818] 化学式：C48H95NO5

[2819] 分子量：766.29

[2820] 使8-[(3-羟基丙基)氨基]辛酸十二烷-4-基酯(2.08g，5.39mmol)、8-溴辛酸十七烷-9-基酯(2.61g，5.66mmol)、碳酸钾(1.49g，10.8mmol)和碘化钾(179mg，1.08mmol)悬浮于MeCN(60mL)中并在82℃下搅拌混合物12小时。将反应物冷却至室温，经硅藻土垫过滤，并真空浓缩。通过硅胶色谱法(0-50％(DCM 20％MeOH 1％NH4OH)/DCM)纯化，得到呈透明浅黄色油状物的8-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(3-羟基丙基)氨基)辛酸十二烷-4-基酯(3.26g，78.9％)。UPLC/ELSD:RT＝3.53min。对于C48H95NO5，MS(ES):m/z(MH+)766.97。1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.90(m,2H)；3.82(t,2H)；2.76(t,2H)；2.54(t,4H)；2.30(t,4H)；1.85-1.05(br.m,68H)；0.90(m,12H)(未观察到羟基质子)。

[2821] IK.化合物329：8-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(1-羟基丙烷-2-基)氨基)辛酸十二烷-4-基酯

[2822] 步骤1：8-((1-羟基丙烷-2-基)氨基)辛酸十二烷-4-基酯

[2823]

[2824] 化学式：C23H47NO3

[2825] 分子量：385.63

[2826] 以与化合物328步骤1相同的方式，由8-溴辛酸十二烷-4-基酯(500mg，1.28mmol)和2-氨基丙醇(2.00mL，25.5mmol)在乙醇(15mL)中合成8-((1-羟基丙烷-2-基)氨基)辛酸十二烷-4-基酯。产量(343mg，69.6％)。UPLC/ELSD:RT＝1.66min。对于C23H47NO3，MS(ES):m/z(MH+)386.50。1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.91(m,1H)；3.64-3.16(br.m,2H)；2.76(br.m,2H)；2.53(br.m,1H)；2.30(t,2H)；2.05-1.15(br.m,29H)；1.06(d,3H)；0.91(m,6H)(未观察到羟基质子)。

[2827] 步骤2：8-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(1-羟基丙烷-2-基)氨基)辛酸十二烷-4-基酯

[2828]

[2829] 化学式：C48H95NO5

[2830] 分子量：766.29

[2831] 以与化合物328步骤2相同的方式，由8-[(1-羟基丙烷-2-基)氨基]辛酸十二烷-4-基酯(343mg，0.889mmol)、8-溴辛酸十七烷-9-基酯(431mg，0.934mmol)、碳酸钾(246mg，1.78mmol)和碘化钾(30mg，0.18mmol)在MeCN(12mL)中合成8-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(1-羟基丙烷-2-基)氨基)辛酸十二烷-4-基酯。产量(395mg，58.0％)。UPLC/+ 1
ELSD:RT＝3.54min。对于C48H95NO5，MS(ES):m/z(MH)766.97。H-NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm
4.90(m,2H)；3.60-2.10(br.m,11H)；1.81-1.05(br.m,66H)；0.90(m,15H)(未观察到羟基质子)。

[2832] IL.化合物330：8-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(3-(甲基磺酰胺基)丙基)氨基)辛酸十二烷-4-基酯

[2833] 步骤1：8-((3-氯丙基)(8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十二烷-4-基酯

[2834]

[2835] 化学式：C48H94ClNO4

[2836] 分子量：784.73

[2837] 向8-{[8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基](3-羟基丙基)氨基}辛酸十二烷-4-基酯(3.16g，4.12mmol)和三乙胺(750μL，5.4mmol)于DCM(50mL)中的0℃溶液中添加甲烷磺酰氯(400μL，5.2mmol)于DCM(4mL)中的溶液，并使反应回到室温并搅拌4小时。将反应用水猝灭并用DCM萃取3次。将合并的有机物用5％NaHCO3、盐水洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩，得到透明橙色油状物。该物质不经进一步纯化即使用(3.15g，97.3％)。UPLC/ELSD:RT＝3.50min。对于C48H94ClNO4，MS(ES):m/z(MH+)784.93。1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.90(m,2H)；4.55-4.20(br.m,2H)；3.70-3.40(br.m,2H)；3.15-2.15(br.m,8H)；2.00-1.05(br.m,68H)；0.90(m,12H)。

[2838] 步骤2：8-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(3-(甲基磺酰胺基)丙基)氨基)辛酸十二烷-4-基酯

[2839]

[2840] 化学式：C49H98N2O6S

[2841] 分子量：843.39

[2842] 向8-[(3-氯丙基)[8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基]氨基]辛酸十二烷-4-基酯(300mg，0.382mmol)和甲烷磺酰胺(364mg，3.82mmol)于DMF(7mL)中的溶液中添加碳酸铯(186mg，0.573mmol)并在60℃下搅拌反应12小时。将反应物冷却至室温，用50％NaHCO3稀释，并用DCM萃取两次。用水洗涤合并的有机层，经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩。通过硅胶色谱法(0-50％(DCM 20％MeOH 1％NH4OH)/DCM)纯化，得到8-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(3-(甲基磺酰胺基)丙基)氨基)辛酸十二烷-4-基酯(79mg，25％)。UPLC/ELSD:RT＝3.44min。对于C49H98N2O6S，MS(ES):m/z(MH+)844.06。1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.90(m,2H)；3.26(t,2H)；2.92(s,3H)；2.68-2.20(br.m,10H)；1.85-1.05(br.m,68H)；0.90(m,12H)(未观察到磺酰胺质子)。

[2843] IM.化合物331：8-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(3-(N-甲基甲基磺酰胺基)丙基)氨基)辛酸十二烷-4-基酯

[2844]

[2845] 化学式：C50H100N2O6S

[2846] 分子量：857.42

[2847] 以与化合物330步骤2相同的方式，由8-[(3-氯丙基)[8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基]氨基]辛酸十二烷-4-基酯(300mg，0.382mmol)、N-甲基甲烷磺酰胺(83mg，0.77mmol)和碳酸铯(186mg，0.573mmol)在DMF(7mL)中合成8-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(3-(N-甲基甲基磺酰胺基)丙基)氨基)辛酸十二烷-4-基酯。产量(213mg，
65.0％)。UPLC/ELSD:RT＝3.45min。对于C50H100N2O6S，MS(ES):m/z(MH+)858.00。1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.90(m,2H)；3.18(t,2H)；2.87(s,3H)；2.81(s,3H)；2.58-2.22(br.m,10H)；1.80-1.05(br.m,68H)；0.90(m,12H)。

[2848] IN.化合物332：8-((3-乙酰胺基丙基)(8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十二烷-4-基酯

[2849]

[2850] 化学式：C50H98N2O5

[2851] 分子量：807.34

[2852] 以与化合物330步骤2相同的方式，由8-[(3-氯丙基)[8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基]氨基]辛酸十二烷-4-基酯(300mg，0.382mmol)、乙酰胺(226mg，3.82mmol)和碳酸铯(125mg，0.382mmol)在DMF(7mL)中合成8-((3-乙酰胺基丙基)(8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十二烷-4-基酯。产量(74mg，24％)。UPLC/ELSD:RT＝3.47min。对于+ 1C50H98N2O5，MS(ES):m/z(MH)807.98。H-NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.90(m,2H)；3.34(m,
2H)；2.64-2.22(br.m,10H)；1.95(s,3H)；1.80-1.10(br.m,68H)；0.90(m,12H)(未观察到乙酰胺质子)。

[2853] IO.化合物333：8-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(3-(3-甲基硫代脲基)丙基)氨基)辛酸十二烷-4-基酯

[2854]

[2855] 化学式：C50H99N3O4S

[2856] 分子量：838.42

[2857] 以与化合物330步骤2相同的方式，由8-[(3-氯丙基)[8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基]氨基]辛酸十二烷-4-基酯(300mg，0.382mmol)、N-甲基硫脲(345mg，3.82mmol)和碳酸铯(187mg，0.573mmol)在DMF(7mL)中合成8-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(3-(3-甲基硫代脲基)丙基)氨基)辛酸十二烷-4-基酯。产量(29mg，9.0％)。1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.90(m,2H)；3.04(t,2H)；2.88(s,3H)；2.60-2.20(br.m,10H)；1.90-1.05(br.m,70H)；0.90(m,12H)。

[2858] IP.化合物334：8-((2,3-二羟基丙基)(8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十二烷-4-基酯

[2859] 步骤1：8-((2,3-二羟基丙基)氨基)辛酸十二烷-4-基酯

[2860]

[2861] 化学式：C23H47NO4

[2862] 分子量：401.63

[2863] 以与化合物328步骤1相同的方式，由8-溴辛酸十二烷-4-基酯(500mg，1.28mmol)和3-氨基丙烷-1,2-二醇(2.33g，1.97mmol)在乙醇(15mL)中合成8-((2,3-二羟基丙基)氨基)辛酸十二烷-4-基酯。产量(359mg，70.0％)。UPLC/ELSD:RT＝1.49min。对于C23H47NO4，MS(ES):m/z(MH+)402.49。1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.90(m,1H)；3.76(m,2H)；3.65(m,1H)；2.96-2.52(br.m,7H)；2.30(t,2H)；1.75-1.10(br.m,28H)；0.90(m,6H)。

[2864] 步骤2：8-((2,3-二羟基丙基)(8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十二烷-4-基酯

[2865]

[2866] 化学式：C48H95NO6

[2867] 分子量：782.29

[2868] 以与化合物328步骤2相同的方式，由8-[(2,3-二羟基丙基)氨基]辛酸十二烷-4-基酯(359mg，0.894mmol)、8-溴辛酸十七烷-9-基酯(454mg，0.983mmol)、碳酸钾(247mg，1.79mmol)和碘化钾(30mg，0.18mmol)在MeCN(10mL)中合成8-((2,3-二羟基丙基)(8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十二烷-4-基酯。产量(412mg，58.9％)。UPLC/ELSD:
+ 1
RT＝3.39min。对于C48H95NO6，MS(ES):m/z(MH)782.97。H-NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.90(m,2H)；3.77(m,2H)；3.51(m,1H)；2.74-2.38(br.m,6H)；2.30(t,4H)；1.75-1.10(br.m,
66H)；0.90(m,12H)(未观察到羟基质子)。

[2869] IQ.化合物335：8-((2-((2-氨基乙基)氨基)乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2870] 步骤1：(2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙基)(2-羟基乙基)氨基甲酸叔丁酯(J.Med.Chem.,2003,46(26),5712-5724)

[2871]

[2872] 化学式：C14H28N2O5

[2873] 分子量：304.39

[2874] 在0℃下，向2-((2-氨基乙基)氨基)乙醇(2.0g，20mmol)于四氢呋喃(40mL)中的溶液中添加二碳酸二叔丁酯(9.2g，40mmol)于四氢呋喃(10mL)中的溶液并在室温下搅拌反应混合物过夜。移除溶剂并将残余物溶解于乙酸乙酯中。用盐水洗涤溶液，用无水硫酸钠干燥并在真空下移除溶剂，得到粗产物，通过硅胶色谱法(0-40％EtOAc/己烷)纯化，得到(2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙基)(2-羟基乙基)氨基甲酸叔丁酯(3.8g，65％)。1H NMR(300MHz,CDCl3):δppm 5.03-4.88(m,1H)；3.71(bs,2H)；3.34-3.11(m,7H)；1.45(s,9H)；1.41(s,9H)。

[2875] 步骤2：(2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙基)(2-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(J.Med.Chem.,2003,46(26),5712-5724)

[2876]

[2877] 化学式：C22H31N3O6

[2878] 分子量：433.51

[2879] 在0℃下，向(2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙基)(2-羟基乙基)氨基甲酸叔丁酯(2.3g，7.56mmol)、邻苯二甲酰亚胺(1.21g，8.24mmol)和三苯基膦(2.16g，8.24mmol)于四氢呋喃(50mL)中的溶液中逐滴添加偶氮二甲酸二异丙酯(DIAD)(1.62mL，8.24mmol)并在室温下搅拌反应混合物三天。移除溶剂，得到粗产物，通过硅胶色谱法(0-50％EtOAc/己烷)纯化，得到呈泡沫状白色固体的(2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙基)(2-(1,3-二氧代异吲哚啉-
2-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(2.75g，84％)。1H NMR(300MHz,CDCl3):δppm 7.82(m,2H)；
7.72-7.69(m,2H)；5.16(bs,1H)；3.83-3.79(m,2H)；3.50-3.49(m,2H)；3.33-3.28(m,4H)；
1.40(s,9H)；1.21(s,9H)。

[2880] 步骤3：(2-氨基乙基)(2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(J.Med.Chem.,2003,46(26),5712-5724)

[2881]

[2882] 化学式：C14H29N3O4

[2883] 分子量：303.40

[2884] 将单水合肼(0.7mL，12.69mmol)添加至(2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙基)(2-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(2.75g，6.35mmol)于甲醇(50mL)中的溶液中并在回流下搅拌反应混合物18小时。将其冷却至室温，通过玻璃烧结漏斗过滤混合物，用甲醇洗涤滤饼并浓缩滤液，得到粗产物，通过硅胶色谱法(0-100％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到(2-氨基乙基)(2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(1.6g，83％)。1H NMR(300MHz,CDCl3):δppm 5.50-5.20(m,1H)；3.29-3.24(m,6H)；2.84-2.82(m,2H)；1.44(s,9H)；1.41(s,9H)(未观察到伯胺质子)。

[2885] 步骤4：8-(叔丁氧基羰基)-2,2-二甲基-4-氧代-3-氧杂-5,8,11-三氮杂十九碳-19-酸十七烷-9-基酯

[2886]

[2887] 化学式：C39H77N3O6

[2888] 分子量：684.06

[2889] 在65℃下，将8-溴辛酸十七烷-9-基酯(0.97g，2.11mmol)和(2-氨基乙基)(2-((叔丁氧基羰基)氨基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(1.6g，5.27mmol)于乙醇(20mL)中的溶液加热18小时。在真空下移除溶剂且粗产物通过硅胶色谱法(0-100％EtOAc/己烷，接着(0-100％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到呈油状物的8-(叔丁氧基羰基)-2,2-二甲基-4-氧代-3-氧杂-5,8,11-三氮杂十九碳-19-酸十七烷-9-基酯(670mg，50％)。对于C39H77N3O6，MS(ES):m/z(MH+)684.5。1H NMR(300MHz,CDCl3):δppm 5.46-
5.26(bs,1H)；4.88-4.82(m,1H)；3.59(bs,2H)；3.42-3.28(m,4H)；3.10-2.70(m,3H)；2.25(t,2H,J＝7.5Hz)；1.78-1.57(m,4H)；1.45(s,9H)；1.41(s,9H)；1.41-1.27(m,4H)；1.26-
1.22(m,32H)；0.86(t,6H,J＝6.7Hz)。

[2890] 步骤5：8-(叔丁氧基羰基)-2,2-二甲基-11-(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)-4-氧代-3-氧杂-5,8,11-三氮杂十九碳-19-酸十七烷-9-基酯

[2891]

[2892] 化学式：C56H109N3O8

[2893] 分子量：952.50

[2894] 向8-(叔丁氧基羰基)-2,2-二甲基-4-氧代-3-氧杂-5,8,11-三氮杂十九碳-19-酸十七烷-9-基酯(670mg，0.98mmol)于环戊基甲基醚(10mL)中的溶液中添加8-溴辛酸壬酯(358mg，1.029mmol)于乙腈(10mL)中的溶液，随后添加碳酸钾(546mg，3.92mmol)和碘化钾(179mg，1.07mmol)。将反应混合物加热至90℃，保持2天。接着使其冷却至室温，通过硅藻土过滤，用乙酸乙酯充分洗涤滤饼并浓缩滤液，得到粗产物，该粗产物通过硅胶色谱法(0至100％EtOAc/己烷)纯化，得到8-(叔丁氧基羰基)-2,2-二甲基-11-(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)-4-氧代-3-氧杂-5,8,11-三氮杂十九碳-19-酸十七烷-9-基酯(560mg，60％)。对于C56H109N3O8，MS(ES):m/z(MH+)952.8。1H NMR(300MHz,CDCl3):δppm 6.65(bs,0.5H)；5.70(bs,0.5H)；4.88-4.82(m,1H)；4.04(t,2H,J＝6.7Hz)；3.32-3.12(m,6H)；2.68-2.48(m,
2H)；2.44-2.34(m,4H)；2.29-2.22(m,4H)；1.68-1.54(m,8H)；1.52-1.38(m,10H)；1.44(s,
18H)；1.38-1.12(m,44H)；0.86(t,9H,J＝6.8Hz)。

[2895] 步骤6：8-((2-((2-氨基乙基)氨基)乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯

[2896]

[2897] 化学式：C46H93N3O4

[2898] 分子量：752.27

[2899] 在0℃下，向8-(叔丁氧基羰基)-2,2-二甲基-11-(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)-4-氧代-3-氧杂-5,8,11-三氮杂十九碳-19-酸十七烷-9-基酯(560mg，0.59mmol)于二氯甲烷(10mL)中的溶液中添加三氟乙酸(3mL)并在室温下搅拌反应混合物过夜。用饱和碳酸氢钠水溶液猝灭反应。将有机层用1N氢氧化钠溶液、盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并在真空下移除溶剂，得到粗产物，该粗产物通过硅胶色谱法(0-100％含4％氨水的甲醇/DCM)纯化，得到呈无色油状物的8-((2-((2-氨基乙基)氨基)乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯(256mg，58％)。HPLC/UV(ELSD):RT＝6.70min。对于C46H93N3O4，MS(ES):m/z(MH+)752.7。1H NMR(300MHz,CDCl3):δppm 4.87-4.82(m,1H)；4.03(t,2H,J＝6.6Hz)；2.78(t,2H,J＝5.9Hz)；2.63(dd,4H,J＝5.9Hz,13.9Hz)；2.50(t,2H,J＝6.0Hz)；2.36(t,4H,J＝
7.3Hz)；2.26(dt,4H,J＝3.8Hz,7.5Hz)；1.68-1.54(m,7H)；1.52-1.42(m,8H)；1.42-1.36(m,7H)；1.36-1.12(m,43H)；0.86(t,9H,J＝6.6Hz)。

[2900] IR.化合物336：碘化8-(十七烷-9-基氧基)-N-(3-羟基丙基)-N-甲基-N-(8-(壬基氧基)-8-氧代辛基)-8-氧代辛-1-铵

[2901]

[2902] 化学式：C46H92INO5

[2903] 分子量：866.15

[2904] 向8-[(3-羟基丙基)[8-(壬氧基)-8-氧代辛基]氨基]辛酸十七烷-9-基酯(0.21g，0.29mmol)于二氯乙烷(2mL)和乙腈(3mL)的混合物中的溶液中添加碘甲烷(0.02mL，
0.29mmol)。在室温下搅拌反应物两小时。蒸发溶剂。用DCM稀释残余物并用饱和NaHCO3萃取。分离有机层，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并真空蒸发。残余物通过快速色谱法(0-
100％(1％NH4OH、20％MeOH于二氯甲烷中的混合物)/二氯甲烷)纯化，得到碘化8-(十七烷-
9-基氧基)-N-(3-羟基丙基)-N-甲基-N-(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)-8-氧代辛-1-铵
(0.152g，0.29mmol，70％)。LC/ELSD:RT＝3.29min。对于C46H92NO5+，MS(ES):m/z(M+)738.85。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.87(m,1H)；4.08(t,2H)；3.91-3.68(br.m,4H)；3.38(br.m,
4H)；3.26(s,3H)；2.33(m,4H)；2.07(br.m,3H)；1.90-1.18(m,62H)；0.90(m,9H)。

[2905] IS.化合物337：碘化8-(十七烷-9-基氧基)-N-(2-羟基乙基)-N-甲基-N-(8-(壬基氧基)-8-氧代辛基)-8-氧代辛-1-铵

[2906]

[2907] 化学式：C45H90INO5+

[2908] 分子量：852.12

[2909] 化合物337是以与化合物336相同的方式，使用8-((2-羟基乙基)(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯和碘甲烷合成。产量是95mg(0.111mmol，15％)。LC/ELSD:RT＝3.37min。对于C45H90NO5+，MS(ES):m/z(M+)724.91。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.87(m,1H)；4.20(br.m,2H)；4.07(t,2H)；3.74(br.m,2H)；3.50(br.m,4H)；3.33(s,3H)；
2.33(m,4H)；1.87-1.17(br.m,62H)；0.90(m,9H)。

[2910] IT.化合物338：碘化8-(十七烷-9-基氧基)-N,N-二甲基-N-(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)-8-氧代辛-1-铵

[2911]

[2912] 化学式：C44H88INO4

[2913] 分子量：822.09

[2914] 化合物338是以与化合物336相同的方式，使用8-(甲基(8-(壬氧基)-8-氧代辛基)氨基)辛酸十七烷-9-基酯和碘甲烷合成的。产量是202mg(0.29mmol，39％)。LC/ELSD:RT＝3.33min。对于C44H88NO4+，MS(ES):m/z(M+)694.89。1H NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.87(p,
1H)；4.07(t,2H)；3.56(br.m,4H)；3.41(s,6H)；2.32(m,4H)；1.85-1.17(br.m,62H)；0.90(m,9H)。

[2915] IU.化合物339：8-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(甲基)氨基)辛酸十二烷-4-基酯

[2916] 步骤1：8-(甲基氨基)辛酸十二烷-4-基酯

[2917]

[2918] 化学式：C21H43NO2

[2919] 分子量：341.58

[2920] 向2M的甲基胺(1.19g，38.3mmol)于THF(19mL)中的溶液中添加8-溴辛酸十二烷-4-基酯(500mg，1.28mmol)并在室温下搅拌反应物48小时。将溶液在真空中浓缩，溶解于EtOAc中并用水、盐水洗涤3次，经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩。通过硅胶色谱法(0-
50％(DCM 20％MeOH 1％NH4OH)/DCM)纯化，得到8-(甲基氨基)辛酸十二烷-4-基酯(326mg，
74.7％)。UPLC/ELSD:RT＝1.55min。对于C21H43NO2，MS(ES):m/z(MH+)342.23。1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.90(m,1H)；2.58(t,2H)；2.45(s,3H)；2.30(t,2H)；1.80-1.05(br.m,29H)；0.92(m,6H)。

[2921] 步骤2：8-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(甲基)氨基)辛酸十二烷-4-基酯[2922]

[2923] 化学式：C46H91NO4

[2924] 分子量：722.24

[2925] 以与化合物328步骤2相同的方式，由8-(甲基氨基)辛酸十二烷-4-基酯(326mg，0.954mmol)、8-溴辛酸十七烷-9-基酯(485mg，1.05mmol)、碳酸钾(264mg，1.91mmol)和碘化钾(32mg，0.19mmol)在MeCN(10mL)中合成8-((8-(十七烷-9-基氧基)-8-氧代辛基)(甲基)氨基)辛酸十二烷-4-基酯。产量(392mg，56.9％)。UPLC/ELSD:RT＝3.48min。对于C46H91NO4，MS(ES):m/z(MH+)722.94。1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 4.90(m,2H)；2.55-2.05(br.m,
11H)；1.75-1.10(br.m,66H)；0.90(m,12H)。

[2926] IV.化合物340：2-(二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)氨基)乙-1-醇

[2927]

[2928] 化学式：C38H71NO

[2929] 分子量：557.99

[2930] 向(6Z,9Z)-18-溴十八碳-6,9-二烯(4g，12.1mmol)于MeCN(26mL)中的溶液中添加乙醇胺(0.334mL，5.52mmol)、K2CO3(3.36g，24.3mmol)和KI(92mg，0.552mmol)。在82℃下搅拌反应物48小时。将反应混合物冷却至室温，过滤，并用己烷洗涤固体。用己烷萃取滤液，并真空浓缩合并的滤液。通过ISCO二氧化硅快速色谱法(0-20％MeOH/DCM)纯化，得到2-(二((9Z,12Z)-十八碳-9,12-二烯-1-基)氨基)乙-1-醇。产量(1.9g，62％)。

[2931] UPLC/ELSD:RT＝6.80min。对于C38H71NO，MS(ES):m/z(MH+)557.94

[2932] 1H-NMR(300MHz,CDCl3)δ:ppm 5.35(m,8H)；3.52(t,2H)；2.77(t,4H)；2.57(t,2H)；2.43(t,4H)；2.04(q,8H)；1.48-1.18(br.m,36H)；0.89(t,6H)。

[2933] 实施例2：纳米粒子组合物的产生

[2934] A.纳米粒子组合物的产生

[2935] 为了研究用于将治疗剂和/或预防剂递送至细胞的安全且有效的纳米粒子组合物，制备并测试一系列配制物。确切地说，对纳米粒子组合物的脂质组分中的特定成分和其比率进行优化。

[2936] 纳米粒子可以通过混合方法如微流体化和T型接头混合两种流体流制得，所述两种流体流之一含有治疗剂和/或预防剂且另一种具有脂质组分。

[2937] 通过在乙醇中合并根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的脂质、磷脂(如DOPE或DSPC，可从Avanti Polar Lipids(Alabaster,AL)获得)、PEG脂质(如1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油甲氧基聚乙二醇，又称为PEG-DMG，可从Avanti Polar Lipids(Alabaster,AL)获得)和结构性脂质(如胆固醇，可从Sigma-Aldrich(Taufkirchen,Germany)获得；或皮质类固醇(如泼尼松龙、地塞米松、泼尼龙和氢化可的松)；或其组合)，制备出浓度为约50mM的脂质组合物。溶液应在例如-20℃下冷藏储存。合并脂质得到所希望的摩尔比(参见例如表23)并用水和乙醇稀释至在约5.5mM与约25mM之间的最终脂质浓度。

[2938] 通过将脂质溶液与包括治疗剂和/或预防剂以在约5:1与约50:1之间的脂质组分比治疗剂和/或预防剂wt:wt比率组合，制备出包含治疗剂和/或预防剂和脂质组分的纳米粒子组合物。使用NanoAssemblr微流体化基系统，将脂质溶液以在约10ml/min与约18ml/min之间的流动速率迅速地注入治疗剂和/或预防剂溶液中，制造出悬浮液，其中水比乙醇比率在约1:1与约4:1之间。

[2939] 对于包含RNA的纳米粒子组合物，在pH值介于3与4之间的50mM柠檬酸钠缓冲液中稀释在去离子水中浓度是0.1mg/ml的RNA溶液，由此形成储备溶液。

[2940] 纳米粒子组合物可以通过透析加工以移除乙醇并实现缓冲液交换。使用分子量截止值是10kDa的Slide-A-Lyzer盒(Thermo Fisher Scientific Inc.,Rockford,IL)将配制物针对pH 7.4的磷酸盐缓冲生理盐水(PBS)透析两次，PBS体积是初始产物的200倍。第一次透析是在室温下进行3小时。接着，在4℃下透析配制物过夜。使所得到的纳米粒子悬浮液经0.2μm无菌过滤器(Sarstedt,Nümbrecht,Germany)过滤至玻璃小瓶中并用钳口盖密封。大体上获得0.01mg/ml至0.10mg/ml的纳米粒子组合物溶液。

[2941] 以上描述的方法诱导纳米沉淀和粒子形成。可以使用替代性方法获得相同纳米沉淀，这些方法包括但不限于T型接头和直接注射。

[2942] B.纳米粒子组合物的表征

[2943] 可以使用Zetasizer Nano ZS(Malvern Instruments Ltd,Malvern,Worcestershire,UK)测定纳米粒子组合物的粒度、多分散指数(PDI)和ζ电势，粒度是在1×PBS中测定且ζ电势是在15mM PBS中测定的。

[2944] 可以使用紫外-可见光谱法测定纳米粒子组合物中治疗剂和/或预防剂(例如RNA)的浓度。将100μL在1×PBS中稀释的配制物添加至900μL的4:1(v/v)甲醇和氯仿混合物中。混合后，记录下该溶液在DU800分光光度计(Beckman Coulter,Beckman Coulter,Inc.,Brea,CA)上例如230nm与330nm之间的吸光度光谱。纳米粒子组合物中治疗剂和/或预防剂的浓度可以基于该组合物中使用的治疗剂和/或预防剂的消光系数以及在例如260nm 波长下的吸光度与在例如330nm波长下的基线值之间的差异计算。

[2945] 对于包含RNA的纳米粒子组合物，可以使用QUANT-ITTM RNA测定(Invitrogen Corporation Carlsbad,CA)评价纳米粒子组合物对RNA的包封情况。在TE缓冲溶液(10mM Tris-HCl、1mM EDTA，pH 7.5)中将样品稀释至约5μg/mL的浓度。将50μL稀释过的样品转移至聚苯乙烯96孔板上并向各孔中添加50μL TE缓冲液或50μL 2％Triton X-100溶液。在37℃温度下孵育板15分钟。将试剂以1:100稀释于TE缓冲液
中，并向各孔中添加100μL该溶液。可以使用荧光板读取器(Wallac Victor
1420Multilabel Counter；Perkin Elmer,Waltham,MA)在例如约480nm激发波长和例如约
520nm发射波长下测量荧光强度。从各样品的荧光度值中减去试剂空白的荧光度值并通过用完全样品(未添加Triton X-100)的荧光强度除以被破坏的样品(由添加Triton X-100引起)的荧光度值来测定游离RNA的百分比。

[2946] C.体内配制物研究

[2947] 为了监测各种纳米粒子组合物如何将治疗剂和/或预防剂有效地递送至目标细胞，制备出包括特定治疗剂和/或预防剂(例如修饰过的或天然存在的RNA，如mRNA)的不同纳米粒子组合物并将其施用至啮齿动物群。向小鼠静脉内、肌肉内、动脉内或肿瘤内施用包括纳米粒子组合物的单次剂量，其中该纳米粒子组合物的配制物如实施例3中所提供的那些。在一些情况下，可以使小鼠吸入剂量。剂量规格可以在0.001mg/kg至10mg/kg范围内，其中10mg/kg描述对于每1公斤小鼠体重，在纳米粒子组合物中包括10mg治疗剂和/或预防剂的剂量。同时，可以采用包含PBS的对照组合物。

[2948] 在将纳米粒子组合物施用给小鼠后，可以通过酶联免疫吸附测定(ELISA)、生物发光成像或其它方法测量特定配制物和其剂量的剂量递送曲线、剂量响应和毒性。对于包含mRNA的纳米粒子组合物，还可以评价蛋白质表达的时程。从啮齿动物收集的待评价的样品可以包括血液、血清和组织(例如来自肌肉内注射部位的肌肉组织以及内部组织)；样品收集可能涉及处死动物。

[2949] 包含mRNR的纳米粒子组合物可用于评价用于递送治疗剂和/或预防剂的各种配制物的功效和有用性。由施用包含mRNA的组合物诱导的高水平蛋白质表达将指示较高的mRNA翻译和/或纳米粒子组合物mRNA递送效率。由于非RNA组分被认为无法影响翻译机器本身，故高水平蛋白质表达很可能指示给定纳米粒子组合物递送治疗剂和/或预防剂的效率高于其它纳米粒子组合物或不存在纳米粒子组合物的情形。

[2950] 实施例3：样品配制

[2951] 包含治疗剂和/或预防剂的纳米粒子组合物可以根据如本文所描述的根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物的选择、其它脂质的选择、脂质组分中各脂质的量以及脂质组分与治疗剂和/或预防剂的wt:wt比率优化。

[2952] 初始研究的执行是为了比较包含根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的各种化合物的纳米粒子组合物的递送效率。阳离子性脂质MC3是本领域当前的标准品。因此，使用包含约50mol％MC3、约10mol％DSPC、约38.5mol％胆固醇和约1.5mol％PEG-DMG的标准MC3配制物作为本研究的基础。根据实施例1和2中所描述的那些方法或通过与实施例1和2中所描述的方法类似的方法制备出包含DSPC作为磷脂、胆固醇作为结构性脂质、PEG-DMG作为PEG脂质、RNA以及选自化合物1-159、168-
170和173-175的根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物的纳米粒子组合物。脂质比率是50:10:38.5:1.5mol％的根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的脂质:
DSPC:胆固醇:PEG-DMG。所用RNA是编码荧光素酶(Luc)或hEPO的mRNA，其中各尿苷被置换为N1-甲基假尿苷。表1A-1E概述了所述配制物的内容物和特征。

[2953] 如表1A-1E中所示，根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物的选择明显影响组合物的尺寸(例如直径)、多分散指数和包封效率(EE)。组合物的尺寸在约53nm与237nm之间。包含化合物5、35、36、51、59、131、132、137-139、145、148、155和158的组合物产生最大粒子，而包含化合物9、21、29、30、65、
7175、94、107、114-116、119、124、133、149、150、152、174和175的组合物产生最小粒子。对于包括除化合物21、94、107、132、148、155和158外的每种测试化合物的组合物，多分散指数在
0.04与0.99之间变化，而包封效率超过75％。关于化合物1、6、18、19、24、26、28、29、49、50、
55、60、61、65-70、72、74、75、101、109-116、118、119、121、122、124、126、128、130、149、152、
153、156、159、169、170和174观察到最高包封效率。

[2954] 表1A.包含根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物的纳米粒子组合物的特征。

[2955]

[2956]

[2957]

[2958]

[2959] n.d.＝未测定

[2960] 表1B.包含根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物的纳米粒子组合物的特征。

[2961]

[2962]

[2963] #＝用hEPO mRNA配制

[2964] 表1C.包含根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物的供皮下施用的纳米粒子组合物的特征。

[2965]

[2966] 表1D.包含根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物的供皮下施用的纳米粒子组合物的特征。

[2967]

[2968]

[2969] #＝用hEPO mRNA配制

[2970] 表1E.包含根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物的供皮下施用的纳米粒子组合物的特征。

[2971]

[2972] 实施例4：由样品配制物诱导的Luc表达

[2973] 利用生物发光研究评价表1A中所呈现的纳米粒子组合物的功效。将0.5mg/kg(mpk)剂量的配制物静脉内施用给小鼠(n＝6只)并在3小时、6小时和24小时的时间点测量生物发光。评价标准MC3配制物且在一些情况下评价对照(例如PBS对照)以供比较。从表2中显而易见，在3小时的时候，包含化合物4、28、32、48、66、128和135的组合物具有最高总通量，且化合物2、3、18、19、20、24、26、25、27、31、33、47、49、50、53-55、60、61、65-68、70、72、
74、75、96、111、122、130、133、134、143、147、148、150、151和153在3小时的时候的总通量高于或等于MC3配制物的总通量。这些组合物在6小时和24小时的时间点展示较高总通量。包含化合物9、17、57、58、59、121、125、137、140、141和158的组合物在所有测量时间点时具有明显较低的通量。一般来说，通量随着时间进展而降低至初始通量的不到10％。这些结果表明，本文所描述的化合物可用于转染应用中。

[2974] 表2.由施用包含根据式(I)、(IA)、(IIB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)或(IIg)的化合物的纳米粒子组合物所诱导的荧光素酶的表达。

[2975]

[2976]

[2977]

[2978] n.d.＝未测定

[2979] 对于若干脂质，另外测量相对于由施用包含MC3的配制物所诱导的总通量的由施用包含给定脂质的配制物所诱导的总通量(以曲线下面积AUC测量)。如表3A(静脉内施用)中所示，在6小时的时候测量的由包含化合物48和49的配制物所诱导的通量是由MC3配制物所诱导的通量的十倍。包含化合物50、54和55的配制物展示的通量也高于MC3配制物。如表3B中所示，通过肌肉内施用(i.m.)，在6小时的时候测量的由包含化合物108和168的配制物所诱导的通量是由MC3配制物所诱导的通量的十四倍和十六倍。结果也示于图8中。如表3C(静脉内施用)中所示，在6小时的时候测量的由包含化合物66、133-135和147的配制物所诱导的通量明显高于由MC3配制物所诱导的通量。如表3D中所示，在6小时测量的由包含化合物96、148和151的配制物所诱导的总通量明显高于由MC3配制物所诱导的通量。

[2980] 表3A.在施用包含根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物的配制物相对于施用包含MC3的配制物后的荧光素酶表达。

[2981]

[2982]

[2983] 表3B.在施用包含根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物的配制物相对于施用包含MC3的配制物后荧光素酶表达。

[2984]

[2985] ND＝未测定

[2986] 表3C.在施用包含根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物的配制物相对于施用包含MC3的配制物后荧光素酶表达。

[2987]

[2988] Avg.＝平均；

[2989] 表3D.在静脉内施用包含根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物的配制物相对于施用包含MC3的配制物后荧光素酶表达和脂质清除率。

[2990]

[2991]

[2992] 表3E.在静脉内施用包含根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物的配制物相对于施用包含MC3的配制物后荧光素酶表达和脂质清除率。

[2993]

[2994] 表3F.在静脉内、肌肉内、肿瘤内和皮下施用包含根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物的配制物相对于施用包含MC3的配制物后荧光素酶表达和脂质清除率。

[2995]

[2996]

[2997]

[2998] 表3G.在静脉内、肌肉内、肿瘤内和皮下施用包含根据式(I)、(IA)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)或(IIf)的化合物的配制物相对于施用包含MC3的配制物后荧光素酶表达和脂质清除率。

[2999]

[3000] 表3H.在肌肉内施用包含根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物的配制物相对于施用包含MC3的配制物后荧光素酶表达。

[3001]

[3002]

[3003] 表3I.在肌肉内施用包含根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物的配制物相对于施用包含MC3的配制物后hEPO表达。

[3004]

[3005] 实施例5：在不同器官中由样品配制物诱导的Luc表达

[3006] 通过测量在施用给定组合物后肝、肺、脾和股骨中修饰过的荧光素酶的表达，进一步评价表1A中所呈现的纳米粒子组合物的功效。将0.5mpk剂量的配制物静脉内施用给小鼠(n＝3)并在6小时后测量生物发光。同时测试标准MC3配制物和PBS对照。从表4中显而易见，几乎所有物种在肝中的通量高于其它组织。包含3、28、33、48、96和135的组合物在肝中的通量最高且包含化合物2、4、6、7、18、20、24-27、30-32、34、47、49、50、53-56、60、65、67、68、74、75、111、113、122、128、130、133、134、143、147-151、153和157的组合物在肝中的通量与MC3配制物相当。包含化合物58、59、137和141的组合物在肝中的通量最低。包含化合物4、7、33、
34、48、53、108、129、130和148的组合物在脾中诱导的通量最高，且包含化合物9、59、124和
141的组合物在脾中的通量最低。在肺和股骨中观察到类似的结果。

[3007] 表4.在施用包含根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物的纳米粒子组合物后6小时各种器官中荧光素酶的表达。

[3008]

[3009]

[3010]

[3011] n.d.＝未测定

[3012] 实施例6A：在肌肉内施用后由样品配制物诱导的表达

[3013] 制备出同时包含修饰过的荧光素酶(Luc)mRNA和H10 mRNA的样品配制物并经肌肉内施用，同时评价由此引起的表达和免疫原性。制备出包含根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物的配制物并以0.001和0.01mpk剂量(例如0.0005mpk剂量的包含Luc mRNA的配制物和包含H10 mRNA的配制物，或
0.005mpk剂量的包含Luc mRNA的配制物和包含H10 mRNA的配制物)施用。如表5A中所示，化合物20在两种剂量水平下展现最高表达。较低剂量的化合物20显示的表达与较高剂量MC3相当。包含其它化合物的配制物也显示出表达相对于MC3的多倍增强。

[3014] 表5A.在肌肉内施用包含根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物的纳米粒子组合物后6小时测量的总通量(p/s)。

[3015]

[3016] n.d.＝未测定

[3017] 实施例6B：在肌肉内施用后由样品配制物诱导的表达

[3018] 制备出包括修饰过的荧光素酶(Luc)mRNA的样品配制物并经肌肉内施用，并且同时评价由此引起的表达和免疫原性。制备出包含根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物的配制物并以0.01mpk剂量施用。如表5B中所示，化合物108展现最高表达。包含其它化合物的配制物也显示出表达相对于MC3的多倍增强。

[3019] 表5B.在肌肉内施用包含根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物的纳米粒子组合物后6小时测量的总通量(p/s)。

[3020]

[3021] 表6中比较了在静脉内和肌肉内施用后测量的通量。通量是以相对于所测量的MC3配制物的值的倍数增加呈现的。包含化合物20的配制物在肌肉内施用后展示Luc表达的最大倍数增加，而包含化合物18和26的那些配制物在静脉内施用后展示最高倍数增加。值得注意的是，表6中所包括的静脉内数据是在比肌肉内数据高的剂量下测量的。

[3022] 表6.在静脉内或肌肉内施用包含根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物的纳米粒子组合物后测量的相对通量。

[3023]

[3024] n.d.＝未测定

[3025] 实施例7：由样品配制物诱导的细胞因子产生

[3026] 将外来物质引入哺乳动物体内会诱导先天性免疫响应，由此促进细胞因子产生。这些针对例如包含治疗剂和/或预防剂的纳米粒子组合物的此类免疫响应是不合需要的。
因此，测量对某些细胞因子的诱导以评价纳米粒子组合物的功效。在6小时时，在静脉内施用0.5mpk剂量的表1A中呈现的纳米粒子组合物后，测量小鼠体内各种细胞因子的浓度。同时测试标准MC3配制物和PBS对照。从表7中显而易见，包含化合物1、3、9、19和26的组合物的IL-6诱导作用最大，而包含化合物3、4、7、20和26的组合物的IP-10诱导作用最大。包含化合物4、11、12和28的组合物的IL-6诱导作用最低。包含化合物10、11、12、13、15、17和18的组合物的IP-10诱导作用最低。

[3027] 表7.在施用包含根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物的纳米粒子组合物后6小时的细胞因子诱导作用。

[3028]

[3029] 实施例8：由样品配制物诱导的补体活化补体活化有助于从生物体清除病原体。由于受试者身体将纳米粒子组合物识别为外来侵袭者并非所希望的，故在施用此类组合物后较低的补体系统活化是优选的。复合物sC5b-9是补体系统活化的标记物。因此，使人体细胞在体外与根据表1A的纳米粒子组合物接触并评价sC5b-9水平。表8显示了包含化合物1、6、9、18、24、25、29和30的纳米粒子组合物相对于生理盐水的sC5b-9水平的倍数增加。包含化合物6和18的组合物使sC5b-9水平相对于生理盐水略有增加，而包含化合物1、9、24、29和30的组合物使sC5b-9水平相对于生理盐水略有降低。

[3030] 表8.在施用包含根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物的纳米粒子组合物后sC5b-9水平的倍数增加。

[3031]

[3032] 实施例9：临床化学和血液学

[3033] 将2mpk剂量的包含不同脂质的纳米粒子组合物的样品配制物静脉内施用给大鼠。评价在给药后48小时各种临床标记物的表达并与通过施用MC3配制物或磷酸盐缓冲生理盐水(PBS)诱导的表达相比较。

[3034] 表9.通过施用包含根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物的纳米粒子组合物所诱导的临床标记物的水平。

[3035]

[3036] 实施例10：由样品配制物诱导的hEPO表达

[3037] 大体上先根据体内Luc表达来评价包含不同脂质的纳米粒子组合物的样品配制物。另外，使用编码hEPO的mRNA评价若干此类组合物的活性。根据实施例2制备包含化合物
6、18、25、30、108-112、60和122、或MC3的纳米粒子配制物。如以上表10和1B中所示，各组合物具有类似的粒度和包封效率。

[3038] 表10.包含根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物的纳米粒子组合物的特征。

[3039]

[3040] 在3小时、6小时和24小时的时候，测量静脉内施用0.5mpk剂量纳米粒子组合物的小鼠中hEPO的表达和细胞因子诱导。由此得到的hEPO和细胞因子水平概述于表11A中。在各时间点，包含化合物6和18的组合物产生的hEPO浓度高于MC3配制物。在3小时、6小时和24小时的时候，测量被肌肉内施用0.01mpk剂量来自表1B的纳米粒子组合物的小鼠中hEPO的表达。由此得到的hEPO水平概述于表11B中。在6小时时间点，包含化合物18、25、30、108-112、60和122的组合物产生的hEPO浓度高于MC3配制物。(另参见图9。)表11A.包含根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物的纳米粒子组合物的评价。

[3041]

[3042] 表11B.包含根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物的纳米粒子组合物的评价。

[3043]

[3044] 表12基于表达和通量水平比较了包含根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物的纳米粒子组合物与包含MC3的组合物。从表12中显而易见，化合物6和18在hEPO表达和平均总通量方面都胜过MC3。因此，这些脂质可用于纳米粒子组合物治疗剂。

[3045] 表12.包含根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物的纳米粒子组合物的比较。

[3046]

[3047]

[3048] 实施例11：大鼠中由样品配制物诱导的hEPO表达和肝中的残留脂质水平

[3049] 在6小时的时候，测量静脉内施用2.0mpk剂量纳米粒子组合物的大鼠中hEPO的表达和细胞因子诱导。

[3050] 在48小时的时候，收集肝组织进行脂质定量。向预称重的组织，添加Milli-Q水(900μL水/100mg组织)。使用Omni探针均质器使组织均质化直至均匀。将50μL样品和基质校准标准品等分至96孔板中。对50μL空白基质等分作为基质空白和对照空白。将400μL IS加标溶液手动添加至除基质空白外的所有样品中。将400μL的50:50ACN:IPA手动添加至基质空白中。覆盖板并涡旋样品，并且以>3000rpm离心5分钟。将200μL样品转移至清洁的96孔板中进行分析。在Waters Acquity UPLC上，使用Higgins Analytical Clipeus C8柱(5μM，30×2.1mm)和70-95％或60-95％梯度(流动相A：含5mM甲酸铵的50:50:1H2O:MeOH:甲酸；流动相B：含5mM甲酸铵的100:1MeOH:甲酸)，以1.2mL/min经1.3分钟分析样品(柱温55℃)。检测是使用Sciex API5500质谱仪，基于电喷雾电离(ESI)以正离子模式进行的。

[3051] 表13.由在大鼠中施用2mpk包含根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)或(IIg)的化合物的纳米粒子组合物6小时所诱导的hEPO表达。

[3052]

[3053]

[3054] 表14.在施用包含根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物的hEPO纳米粒子组合物后6小时的细胞因子诱导。

[3055]

[3056] 表15.施用了包含根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物的纳米粒子组合物48小时后大鼠中的肝水平。

[3057]

[3058] 在6小时的时候，测量静脉内施用0.2mpk或2.0mpk剂量纳米粒子组合物的大鼠中hEPO的表达。表16概述了如上文所描述，使用各种纳米粒子组合物的hEPO表达水平与使用MC3配制物的hEPO表达水平的比率以及在施用后48小时测量的肝中的脂质水平。表17和18概述了在施用化合物28、33、53和54之后48小时测量的肝和脾中的脂质水平。肝和脾水平表示所计算的每组3只大鼠的平均值。如表17和18中所示，在48小时后，有不到10％的化合物28、33、53和54保留在肝中，而有超过60％的MC3保留。

[3059] 表16.hEPO的表达比率及48小时后肝中残留的脂质水平。

[3060]

[3061] *假定300g大鼠和15g肝

[3062] 表17.在施用0.2mpk剂量的包含根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物的组合物48小时后大鼠中的肝水平。

[3063]

[3064] 表18.在施用2mpk剂量的包含根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物的组合物48小时后大鼠中的肝水平。

[3065]

[3066] 表19A概述了在向大鼠静脉内施用0.2和2mpk包含化合物48、49和50的配制物和hEPO mRNA后测量的hEPO表达、IP-10诱导、肝和脾水平以及丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)。hEPO浓度是在施用后6小时测量，而细胞因子诱导以及肝和脾水平是在施用后48小时测量。hEPO和IP-10浓度以pg/ml表示，而肝水平以ng/g为单位提供。ALT和AST水平以国际单位提供。

[3067] 表19A.在施用包含根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物的组合物后测量的hEPO表达、IP-10诱导和肝水平。

[3068]

[3069] 表19B.在施用包含根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物的组合物后测量的hEPO表达和肝水平。

[3070]

[3071]

[3072] 实施例12：在大鼠中样品配制物的剂量响应

[3073] 在2、4、6、8、24和48小时时间点测量通过向大鼠静脉内施用各种剂量的纳米粒子组合物诱导的hEPO表达。图3-6分别概述了在向大鼠静脉内施用各种剂量包含化合物26、18、25和MC3的配制物后测量的hEPO表达。48小时后，肝中化合物26的脂质水平是约19％。

[3074] 图7显示了在不同剂量下包含化合物18、25和26以及MC3的组合物的曲线下面积：0.005mpk、0.01mpk、0.025mpk、0.05mpk、0.1mpk、0.25mpk、0.5mpk、1mpk或2mpk。

[3075] 实施例13：大鼠中样品配制物的药物动力学

[3076] 在各种时间点，测量在静脉内施用0.2mpk剂量的纳米粒子组合物的大鼠的肝和脾中hEPO的表达和脂质水平。选择化合物18和25与MC3相比较。脂质是根据上述标准MC3配制物进行配制的。对大鼠静脉内施用单次0.2mpk剂量并在施用后0.25、0.5、1、2、4、8、24和48小时监测表达。

[3077] 表20.通过在大鼠中施用纳米粒子组合物诱导的hEPO表达，6小时，0.2mpk

[3078]

[3079]

[3080] 表21.通过在大鼠中施用纳米粒子组合物诱导的肝中脂质水平，6小时，0.2mpk[3081]

[3082] 表22.通过在大鼠中施用纳米粒子组合物诱导的脾中脂质水平，6小时，0.2mpk[3083]

[3084] 实施例14：脂质:治疗剂比率优化

[3085] 可以根据功效和耐受性考虑，优化纳米粒子组合物中脂质组分与治疗剂和/或预防剂的相对量。对于包含RNA作为治疗剂和/或预防剂的组合物，N:P比可以用作有用的度量。

[3086] 由于纳米粒子组合物的N:P比控制表达和耐受性，故N:P比较低且具有较强表达的纳米粒子组合物是合乎需要的。N:P比根据纳米粒子组合物中脂质与RNA的比率而变化。因此，包含约50mol％根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物、约10mol％磷脂(例如DOPE或DSPC)、约38.5mol％结构性脂质(例如胆固醇)和约1.5mol％PEG脂质(例如PEG-DMG)的脂质配制物中的总脂质与RNA的wt/wt比在10:1、15:1、20:1、32:1、40:1、50:1和60:1之间变化。假定有单个质子化氮原子，计算各纳米粒子组合物的N:P比。同时测量各组合物的包封效率(EE)、尺寸和多分散指数。

[3087] 一般来说，总脂质:RNA比率较高的组合物产生较小粒子及较高包封效率，这两项都是所希望的。然而，这些配制物的N:P比一般超过4。本领域中的当前标准，如以上描述的MC3配制物的N:P比是5.67。因此，应达到N:P比、尺寸和包封效率之间的平衡。

[3088] 为了研究具有不同N:P比的纳米粒子组合物的功效，检查在静脉内施用低剂量(0.05mg/kg)或高(0.5mg/kg)剂量纳米粒子组合物后小鼠体内荧光素酶(Luc)或人促红细胞生成素(hEPO)的表达。在施用后3、6和/或24小时测量所表达的Luc或hEPO的浓度。

[3089] 实施例15：根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物的含量的优化。

[3090] 由于较小的粒子和较高的包封效率一般是合乎需要的，故根据这些参数优化纳米粒子组合物的脂质组分中各种成分的相对量。

[3091] 选择根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物进行优化。在包含DOPE或DSPC作为磷脂的组合物中根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物的相对量在30mol％与60mol％之间变化，由此确定配制物中根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物的最佳量。在NanoAssemblr微流体基系统上，使用标准方法，在脂质-mRNA溶液中3:1的水比乙醇比率以及mRNA溶液中12mL/min的脂质溶液注射速率下，制备配制物。这一方法诱导纳米沉淀和粒子形成。也可以使用替代性方法获得相同纳米沉淀，这些方法包括但不限于T型接头和直接注射。

[3092] 产生最小粒子和最高包封效率的配制物一般是优选的，不过，基于给定应用(例如目标器官的开窗尺寸)，较大或较小的粒度都是合乎需要的。另外，评价组合物的Luc或hEPO表达水平和细胞因子分布。

[3093] 实施例16：磷脂的优化

[3094] 改变纳米粒子组合物的脂质组分中磷脂的相对量以进一步优化配制物。选择根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物用于纳米粒子组合物中并选择DOPE和DSPC作为磷脂。也可以评价其它磷脂。制备纳米粒子组合物，其中相对磷脂含量在0mol％与30mol％之间变化。评价组合物的尺寸、包封效率、Luc或hEPO表达水平和细胞因子分布。

[3095] 实施例17：结构性脂质的优化

[3096] 改变纳米粒子组合物的脂质组分中结构性脂质的相对量以进一步优化配制物。选择根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物用于纳米粒子组合物中并选择胆固醇作为结构性脂质。也可以评价其它结构性脂质。制备纳米粒子组合物，其中相对结构性脂质含量在18.5mol％与48.5mol％之间变化。评价组合物的尺寸、包封效率、Luc或hEPO表达水平和细胞因子分布。

[3097] 实施例18：PEG脂质的优化

[3098] 改变纳米粒子组合物的脂质组分中PEG脂质的相对量以进一步优化配制物。选择根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物用于纳米粒子组合物中并选择PEG-DMG作为PEG脂质。也可以评价其它PEG脂质。制备纳米粒子组合物，其中相对PEG脂质含量在0mol％与10mol％之间变化。评价组合物的尺寸、包封效率、Luc或hEPO表达水平和细胞因子分布。

[3099] 可用于优化纳米粒子组合物配制物的示例性配制物示于表23中。

[3100] 表23.包含根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物的示例性配制物。

[3101]

[3102] 实施例19：粒度的优化

[3103] 不同身体器官的开窗尺寸通常不同；例如，已知肾的开窗尺寸要小于肝。因此，将治疗剂和/或预防剂靶向递送至(例如特异性递送至)一个特定器官或一组器官可能需要施用不同粒度的纳米粒子组合物。为了研究此作用，使用Nanoassemblr仪器制备具有多种粒度的纳米粒子组合物，其配制物如表23中所包括的那些。纳米粒子组合物包含编码Luc的RNA。随后，将每一不同尺寸的纳米粒子组合物施用给小鼠以评价粒度对递送选择性的影响。可以使用生物发光测量两个或更多个器官或者两组或更多组器官中的Luc表达以评价各器官中的相对表达。

[3104] 实施例20：预治疗后施用

[3105] 向受试者施用纳米粒子组合物可能引起炎症、输注相关反应以及提示低耐受性的其它不想要的作用。这些作用可由不希望的免疫活性引起。

[3106] 为了对抗负面作用，将纳米粒子组合物与一种或多种物质(例如共用药物或其它治疗剂和/或预防剂)共施用给受试者。可能有用的其它治疗剂和/或预防剂包括类固醇(例如皮质类固醇)、抗组胺、H1受体阻断剂、H2受体阻断剂、抗炎化合物、他汀类、BTK抑制剂、S1P1激动剂、糖皮质激素受体调节剂(GRM)以及雌二醇。用选自地塞米松和对乙酰氨基酚的一种或多种其它治疗剂对非人灵长类动物进行预治疗。在施用纳米粒子组合物之前24小时、1小时或24小时和1小时施用所述其它治疗剂。样品方案概述于表24中。测量细胞因子分布、炎症和其它参数并进行比较以评价预治疗的有效性。

[3107] 表24.预治疗研究的样品方案

[3108]

[3109]

[3110] 例如，有用的治疗剂治疗过程可能涉及在施用1.3mpk剂量水平的纳米粒子组合物前一天和当天(前一小时)，施用其它治疗剂和/或预防剂。其它治疗剂和/或预防剂可配制成通过多种不同途径递送。例如，可经口递送地塞米松。一般来说，其它治疗剂和/或预防剂是以临床上批准或典型剂量水平施用的。

[3111] 实施例21：向非人灵长类动物施用

[3112] 在食蟹猕猴中评价纳米粒子组合物用于非人灵长类动物的耐受性和功效。每周一次向猴施用含编码hEPO的mRNA的优化的纳米粒子组合物，持续四周。在每次施用前以及在每次施用后2、6、12、24、48、72和120小时，使用基于ELISA的技术测量hEPO蛋白质水平、mRNA和细胞因子分布。

[3113] 使用含编码hEPO的mRNA的标准MC3配制物评价预治疗对非人灵长类动物的作用。研究设计概述于表25中。每周一次以5ml/kg/h剂量率向雄性猴施用纳米粒子组合物，持续四周并用甲氨蝶呤或地塞米松预治疗。

[3114] 表25.有关在食蟹猕猴中进行的预治疗研究的方案

[3115]

[3116]

[3117] 预治疗研究的结果示于图1中。如所示，在无任何预治疗存在下，最大表达水平在研究过程中降低近70％。甲氨蝶呤未赋予任何特定有益作用。然而，预施用地塞米松使蛋白质表达相较于不包含预治疗的治疗过程有所增加。值得注意的是，观察到用地塞米松预治疗的动物中血浆/血清蛋白质表达随时间的降低最小。这些结果表明，皮质类固醇如地塞米松预治疗改善了包含例如根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物的纳米粒子组合物的耐受性和功效。

[3118] 另外，使用包含化合物18的样品配制物研究纳米粒子组合物用于非人灵长类动物的耐受性和功效。所述配制物是根据以上描述的标准MC3配制物制备的并包含hEPO mRNA。通过经60分钟静脉内输注向灵长类动物施用单次剂量的0.05mpk(第1组)、0.3mpk(第2组)或1.0mpk(第3组)。每次剂量施用三只灵长类动物。在给药前以及治疗后2、6、24、48和96小时测量hEPO的表达(表26)。同时测定药物动力学参数，包括Tmax、Cmax和AUC，并呈现于表27中。表28包括补体活化指标的水平，而表29包括细胞因子诱导数据。

[3119] 表26.在向非人灵长类动物施用纳米粒子组合物后各种时间点测量的hEPO表达。

[3120]

[3121] 表27.在向非人灵长类动物施用纳米粒子组合物后测量的药物动力学参数。

[3122]

[3123] 表28.在向非人灵长类动物施用纳米粒子组合物后各种时间点测量的补体活化指标。

[3124]

[3125] 表29.在向非人灵长类动物施用纳米粒子组合物后各种时间点测量的细胞因子诱导。

[3126]

[3127]

[3128] 一般来说，配制物以与MC3配制物类似的方式耐受剂量响应作用。在高剂量组中，天冬氨酸氨基转移酶(AST)在第2天增加并在到第5天时恢复至基线。不过，丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平没有增加。一般来说，较低的剂量具有更好耐受性。高剂量诱导体温升高和弓背姿势，这与关于施用较高剂量MC3配制物的灵长类动物所观察到的行为类似。在高剂量组中，动物体内的白细胞计数略有升高，不过，所有组都显示在第5天网织红细胞计数明显增加，指示较强的药理学响应。补体活化和细胞因子释放(IL-6和MCP-1)与剂量相关且在低剂量和中等剂量组中24小时内可逆并在高剂量组中到第5天时可逆。hEPO水平高于在向非人灵长类动物施用相当剂量的MC3配制物后测量的那些。

[3129] 实施例22：向非人灵长类动物施用

[3130] 另外，使用包含化合物18、25、26和48以及MC3的样品配制物研究纳米粒子组合物用于非人灵长类动物的耐受性和功效以确定这些化合物在蛋白质表达方面是否有不同。所述配制物是根据以上描述的标准MC3配制物制备并包含hEPO mRNA。表30包括测试组合物的详情，而表31概述在小鼠和大鼠中Luc和hEPO mRNA的相对表达。表达是在施用后6小时测量。

[3131] 表30.包含根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物的纳米粒子组合物的特征。

[3132]

[3133] n.d.＝未测定

[3134] 表31.包含根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物的纳米粒子组合物的比较。

[3135]

[3136]

[3137] n.d.＝未测定

[3138] 图2显示通过60分钟输注向未治疗食蟹猕猴静脉内施用0.01mpk剂量之后测量的hEPO mRNA表达。从图中显而易见，所有测试配制物引起的表达在施用后6小时最高，且包含化合物18的配制物引起的表达最高。

[3139] 表32概述了在向非人灵长类动物施用0.01mpk剂量配制物后测量的药物动力学参数。

[3140] 表32.向非人灵长类动物施用包括根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物的配制物后测量的药物动力学参数。

[3141]

[3142] 实施例23：向非人灵长类动物施用

[3143] 使用标准MC3配制物以及含化合物18且包含编码抗血凝素(抗HA)抗体的mRNA的纳米粒子组合物验证hEPO表达研究的结果。通过经60分钟静脉内输注向食蟹猕猴施用0.1mpk或0.3mpk单次剂量的含化合物18(参见表33；根据实施例2制备)且包含编码抗HA抗体的mRNA的纳米粒子组合物。

[3144] 表33

[3145]脂质 EE(％) 直径(nm) PDI
化合物18 79.3 76.8 0.16

[3146] 抗HA(抗血凝素)抗体表达的结果显示于表34和图11中。

[3147] 表34

[3148]

[3149] 利用含化合物18的纳米粒子组合物所观察到的蛋白质表达是MC3对应物的五倍，且在0.1与0.3mpk之间发现利用化合物18的明显剂量响应(例如0.3mpk AUC是由0.1mpk剂量得到的AUC的约三倍)。

[3150] 实施例24：治疗疾病和病症的方法

[3151] 选择使用具有较高耐受性(例如引起较低免疫响应)和功效(例如有助于治疗剂和/或预防剂的高效和有效包封以及药剂向所希望目标的递送)的纳米粒子组合物配制物。
基于受试者的状况选择所使用的治疗剂和/或预防剂以配制纳米粒子组合物。例如，编码血管内皮生长因子A(VEGF-A)的mRNA可以选择用来促进血管生成，由此治疗动脉粥样硬化性肾血管疾病，而能够敲低载脂蛋白B(apoB)的siRNA可以选择用来治疗代谢性疾病或病症，如血脂异常。

[3152] 在用纳米粒子组合物治疗之前一小时或数小时，用较低剂量的地塞米松预治疗需要治疗的受试者。优选向受试者静脉内施用纳米粒子组合物，但肌肉内、皮内、皮下、鼻内或吸入施用途径也是可接受的。治疗以约0.001mg/kg至约10mg/kg剂量的治疗剂和/或预防剂提供并根据受试者的需求，每天、每周、每两周或每月重复治疗。

[3153] 实施例25：皮下施用

[3154] 研究在皮下施用后本公开的脂质对蛋白质表达的影响。对雌性CD-1小鼠皮下施用0.5mpk含本公开脂质和表达荧光素酶或hEPO的mRNA的配制物。在注射后3、6和24小时，通过全身发光成像(BLI)获得表达水平，并在24小时后离体评价肝、脾和注射部位处的表达水平。发现反向酯胜过MC3，例如达到6.5倍(化合物30)。另参见表35和36，以及图19和27。

[3155] 表35概述了如上所描述，使用本公开的各种纳米粒子组合物的荧光素酶表达水平，以及在皮下施用后使用本公开的各种纳米粒子组合物的荧光素酶表达水平与使用MC3配制物的荧光素酶表达水平的比较。

[3156] 表36概述了如上文所描述，在皮下施用后，使用本公开的各种纳米粒子组合物的hEPO表达水平与使用含MC3或化合物18的配制物的hEPO表达水平的比较。

[3157] 表35.在皮下施用包含根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)中的一种的化合物的组合物后测量的荧光素酶表达水平。

[3158]

[3159]

[3160] 表36.在皮下施用包含根据式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIa)、(IIb)、(IIc)、(IId)、(IIe)、(IIf)、(IIg)或(III)的化合物的配制物相对于施用包含MC3或化合物18的配制物后hEPO表达。

[3161]

[3162] 实施例26：在非人灵长类动物中具有改善的内体逃逸以及持续效率和安全性的新型氨基脂质的开发

[3163] 材料和方法

[3164] mRNA合成：在体外通过来自线性化DNA模板的T7聚合酶介导的转录，合成在本文所描述的实验中所使用的mRNA，所述模板中并入5'和3'非翻译区(UTR)，包括聚腺苷酸尾。将mRNA纯化并使其再悬浮于所希望浓度的柠檬酸盐缓冲液中。将供体甲基基团S-腺苷甲硫氨酸(SAM)添加至甲基化的戴帽RNA(帽-0)中，产生帽-1以增加mRNA翻译效率。

[3165] 脂质合成：如实施例1中所描述，合成在本文所描述的实验中测试的脂质化合物。

[3166] LNP配制物的制备：将脂质以50:10:38.5:1.5(可离子化脂质:DSPC:胆固醇:PEG-脂质)摩尔比溶解于乙醇中。使用微流体化混合器，将脂质混合物与6.25mM含mRNA的乙酸钠缓冲液(pH 5)以3:1(水溶液:乙醇)比率合并。在透析盒中，针对磷酸盐缓冲生理盐水(pH 7.4)透析配制物至少18小时。通过离心过滤对配制物进行浓缩，使其穿过0.22μm过滤器并在4℃下储存待用。测试所有配制物的粒度、RNA包封和内毒素并发现粒度在80nm–100nm之间，且有超过90％包封和<1EU/mL内毒素。经由TNS测定法来测定LNP配制物的表观pKa。

[3167] TNS测定法：制备主缓冲液储备液(10mM磷酸钠、10mM硼酸钠、10mM柠檬酸钠、150mM氯化钠)并用于制备各种pH值的缓冲液以测定LNP配制物的表观pKa。使用氢氧化钠(1M)和盐酸(1M)，由主缓冲液储备液制备pH值介于约3与12之间的21种独特缓冲液。接下来，制备300μM 6-(对甲苯胺基)-2-萘磺酸钠盐(TNS试剂)于DMSO中的储备液，并将LNP与mRNA浓度为0.04mg/mL的所需配制物缓冲液混合。这一测定在1×PBS和20mM Tris w/8％蔗糖缓冲液中得到验证。将各种pH值的缓冲溶液添加至96孔板中，每一pH值一式三份。向各孔中添加
3.26μL的mRNA浓度为0.04mg/mL的LNP样品以及2.0μL的300μM TNS试剂溶液。在小心混合后，读取由此得到的每块板的荧光值以产生荧光值随缓冲液pH变化的S形曲线。这一曲线的拐点的对数值是LNP配制物的表观pKa。

[3168] 体内研究

[3169] 将LNP施用给动物：使用加热灯使动物温和升温3分钟，随后使用29g的3/10cc胰岛素注射器(小鼠)或27g的1mL注射器(大鼠)通过尾静脉将稀释于磷酸盐缓冲生理盐水(PBS)中的mRNA-LNP静脉内注射(5mL/kg)至雌性CD-1小鼠(体重18至22g)和雄性Sprague-Dawley大鼠(体重225-250g)中。

[3170] 小鼠全身和离体器官生物发光成像：在成像时间点前15分钟，向CD-1小鼠腹膜内(IP)注射200μL在即将使用前于PBS中稀释至15mg/mL浓度的Xenolight D-荧光素K+盐。在施用荧光素的25分钟内完成器官的离体成像。所有图像通过所关注区域定量以得到总通量。

[3171] 血液收集和hEPO分析.通过尾静脉从小鼠或大鼠收集血液并使用hEPO ELISA测定法测定hEPO浓度。

[3172] NHP研究：使用2-4岁龄且重2–6kg的未治疗食蟹猕猴进行非人灵长类动物研究。在任一动物研究中使用未治疗随机化或设盲方法。利用资源平衡方法测定样品规模。对于注射，使用插入末梢静脉中的临时留置导管，通过60分钟静脉内输注施用含mRNA-LNP的磷酸盐缓冲生理盐水(PBS)。

[3173] 针对NHP样品的hEPO ELISA：使用人促红细胞生成素免疫测定法测量人Epo水平。使用非人灵长类动物细胞因子试剂盒测量细胞因子水平。

[3174] 针对NHP样品的人IgG分析：将10.0μL基质等分试样转移至低蛋白质结合96孔板中。添加25.0μL等分的操作内标溶液，并用上样缓冲液稀释样品等分试样。使用蛋白质A磁珠分离人IgG和其内标。洗涤后，使用Rapigest使捕捉的蛋白质变性，使用DTT还原，使用碘代乙酸烷基化并用胰蛋白酶消化。通过HPLC和MS/MS检测，使用正离子电喷雾分析最终提取物。使用线性1/浓度2加权的最小二乘法回归算法定量未知样品。

[3175] 血清ALT和AST水平：使用Modular Analytics分析仪分析样品。

[3176] 血清C5b9水平：使用ELISA方法进行C5b9样品分析。所用试剂盒是来自BD Bioscience的人C5b-9ELISA套盒和试剂套盒B。对1/100稀释的研究样品进行单次分析。

[3177] 用于测量mRNA水平的bDNA：使用来自Affymetrix的 2.0试剂系统试剂盒进行mRNA样品分析(bDNA方法)。在分析之前，使用QuantiGene样品处理试剂盒(血液样品)裂解研究样品。一式两份分析稀释度介于1/100与1/1250000之间的研究样品。

[3178] 通过LC-MS/MS定量脂质：在添加19eq.(w/v)水(DF＝20)后，将肝样品均质化。使蛋白质沉淀并针对在相配空白中制备的校准标准品进行分析。用LC-MS/MS系统实现色谱分离和定量。注入样品并通过HPLC分离。使用以正离子模式操作的三重四极杆MS/MS系统检测信号。

[3179] 代谢物鉴别：将化合物18(10μM)与人血浆(29.0mg蛋白质/孵育)一起在孵育混合物(200μL最终孵育体积)中孵育，所述孵育混合物由50/50v/v纯血浆(未稀释)/底物于50mM磷酸盐缓冲液(pH 7.4)中的溶液组成。从雄性和雌性供体获得血浆并加入K2EDTA抗凝血剂。通过将底物溶液添加至人血浆中来起始反应，并在四个指定时间点(0、30、60和90分钟)，通过添加600μL终止试剂(乙腈)停止反应。对终止的孵育样品离心(例如在10℃下，10,000×g，10分钟)并通过LC-MS/MS分析上清液级分以表征由化合物18形成的代谢物。利用阳性对照普鲁卡因(5μM)再进行孵育以确定测试系统的能力。通过LC-MS/MS分析样品。

[3180] 用于定量内体逃逸效率的基于显微术的测定：使用包封萤火虫荧光素酶化学修饰的体外转录的mRNA的被荧光标记的LNP(0.1％罗丹明DOPE)(Rhod-Luc LNP)定量LNP摄取，并且单分子FISH(smFISH)允许定量胞质mRNA分子的数量。使用ATCC DMEM培养基将HeLa细胞涂铺于96孔板中，并在达到80％汇合后，将细胞与胞浆和核检测标记一起孵育，随后用每孔25ng(mRNA)的Rhod-Luc LNP转染，体积是100μl。将细胞与LNP一起孵育4小时，接着将样品固定于4％多聚甲醛中，并在利用共聚焦成像的高含量筛选系统(Opera Phenix高含量筛选系统)中成像。

[3181] 同时，向细胞中电穿孔放入未配制的荧光素酶mRNA。将电穿孔的细胞接种于邻近LNP处理孔的孔中，同时将整个板固定。在对板中有关LNP摄取的图像后，处理样品以进行smFISH杂交。使用共聚焦成像使板成像并使用对象分析，使用电穿孔的样品作为基准以定量经LNP处理的样品中单分子胞质mRNA的数量(R，由胞吞细胞器释放)。用胞吞标记物EEA1(早期内体)和Lamp1(溶酶体)共染色确定基于强度的分析结果。

[3182] 将Rhod-Luc LNP直接沉积于玻璃上并使用与用于LNP处理的细胞相同的获取设置成像。以罗丹明通道中每个细胞的荧光强度总和(CellInt)与玻璃上单个LNP对象的平均荧光强度(LNPInt)之间的比率计算细胞内LNP摄取(每个细胞中LNP的数量，L)。使用内体逃逸率(EER)比较本研究中使用的两种配制物(化合物18和MC3)的内体逃逸效率，EER定义为胞质mRNA数量与内化LNP的数量之间的比率(R/L)。

[3183] 统计分析：使用普通单因素ANOVA比较平均值并针对多种比较(Dunnett用于比较多种条件与单一参照物，或用于比较条件对)进行事后检验。使用梯形法则计算曲线下面积(AUC)并计算z值。对于所有测试，双尾P值<0.05被视为统计学显著的，并且在图中显示为*<0.05、**<0.005或***<0.001。使用Prism 7.0b。

[3184] 脂质尾的优化

[3185] 对较宽化学空间进行初始筛选，将乙醇胺鉴别为氨基脂质头基，该脂质头基可有效地驱动mRNA包封并提供具有优良物理化学特性的LNP。将乙醇胺头基与二亚油酸脂质尾(化合物281)组合产生具有较高荧光素酶mRNA包封效率、较小粒度和较低多分散指数的LNP。具有化合物281的LNP的表面pKa(粒子的表观值)在所显示的最利于siRNA递送的范围内。(参见Semple,S.C.等人,Nature Biotech.2010.28,172-176；Jayaraman,M.等人,Angew.Chem.Int.Ed.2012,51,8529-8533，各案的完整内容以全文引用的方式并入本文中)。为了评价新氨基脂质的效率，在小鼠中使用荧光素酶mRNA作为报告基因，在体内测试使用新型化合物的LNP。在每次实验中包括MC3 LNP作为对照，由此能够比较各实验间的LNP。荧光素酶活性测量值也能够确定蛋白质的生物分布。将0.5mg/kg(mRNA剂量)基于化合物281的LNP静脉内递送至小鼠产生的荧光素酶活性比MC3 LNP对照低两倍(图29A)。全身成像展示，大部分蛋白质表达出现在肝中。肝组织中脂质的清除率与MC3类似，其中在给药后
24小时，66％的初始剂量残留在小鼠肝组织中(表37)。

[3186] 测试脂质尾中酯键联对组织清除率的影响(化合物138和136)。先前已报导，酯键联引起体内酯酶进行的代谢(参见Fukami,T.等人,Drug Metab.Pharmacokinet.2012,27,466-477，其内容以全文引用的方式并入本文中)。经显示，这一策略改善基于MC3的脂质结构的脂质清除率。(参见Maier M.A.,Mol.Ther.2013,21,1570-1578，其内容以全文引用的方式并入本文中)首先，通过测量在室温和37℃下乙醇的稳定性，评价脂质的化学稳定性(表39)。观察到所有测试脂质纯度有不到1％变化。用化合物138形成的LNP较大，且表面pKa>7。观察到这些LNP的快速组织清除，并在24小时的时候未检测到脂质(表37)。移除一个酯官能团(化合物136)得到物理化学特征改善且LNP表面pKa较低的LNP。

[3187] 当引入分支链酯(化合物6)时，观察到蛋白质表达的改善。观察到与MC3 LNP相当的表达，但清除率比化合物138和136要慢(67％脂质残留，表37)。用含伯酯的脂质尾(化合物18)替代亚油酸尾使得表达增加(是MC3的3倍)和最佳的组织清除率(在24小时的时候未检测到脂质，表37)。为进一步增加表达，引入另一分支链酯(化合物29)，但该酯使表面pKa减小至6.00并产生较低荧光素酶活性。此外，所述化合物还具有明显较慢的组织清除率，在24小时的时候有68％残留。

[3188] 化合物14是醇官能团被二甲胺替代的一个代表性实例。由此产生物理化学特性与化合物18相当，但递送效率完全丧失的LNP(图29A)。

[3189] 进一步研究脂质尾结构活性关系，特别是伯酯的位置，以及其对递送效率和组织清除率的影响(比较化合物18、化合物25和26，表37)。在小鼠中，使用荧光素酶mRNA，在静脉内递送0.5mg/kg剂量化合物25和化合物26之后观察到高于MC3的表达，其中化合物26提供该系列中最高的荧光素酶活性(图29A)。使用编码人促红细胞生成素(hEPO)的mRNA在Sprague Dawley大鼠中获得类似结果(图29C)。当在大鼠研究终止时(给药后48小时)测定肝中母氨基脂质水平时，发现清除率降低，因为伯酯更接近于氮(<1％化合物18、化合物25，以及20％化合物26，表37)。化合物18和化合物25提供递送效率与药物动力学的较佳平衡。

[3190] 不希望受理论束缚，发现氨基脂质的多个结构基序对于含mRNA的脂质纳米粒子的高效体内性能至关重要，包括脂质尾中酯的表面电荷、结构和位置以及头基的位置。能够进行高水平蛋白质表达的脂质展示较快组织清除率，并引起支持慢性治疗适应症所希望的毒性谱。观察到粒子表面pKa的变化，这可通过表达效率追踪。测定平均值6.6是最佳的。然而，在最佳pKa范围内不是高效递送唯一要求，因为化合物14展示较低的荧光素酶表达水平(表37)。引入伯酯将提供展示较快体内组织清除率的脂质，与利用基于MC3的系列所观察的结果类似。利用化合物18进行的代谢物鉴别研究指示，伯酯水解是脂质代谢中的第一个步骤。
为了高效地进行这一水解，需要平衡酯的立体性质和电子性质。较多取代的酯(化合物29)和亲电子性较弱的酯(化合物26)分别展示较慢的肝清除率。乙醇胺头基、在一个脂质尾中C8位置处的伯酯以及在第二个脂质尾中的仲酯的组合看来实现了体内脂质清除率与蛋白质表达的较佳平衡。

[3191] 药物动力学研究

[3192] 进行大鼠药物动力学研究，以将化合物18和化合物25与MC3相比较(图29B)。相较于MC3在48小时的时候仍以高浓度存在，化合物18和化合物25在24小时的时候自肝组织高效地清除。肝组织中化合物18的清除率要快于化合物25，相应肝组织半衰期为5.8小时对6.9小时(对于全PK参数，参见表40)。相对于MC3>50小时的半衰期，这一较快清除率要明显得多。在脾和血浆中还观察到化合物18和化合物25有利的体内脂质降解(表40)。

[3193] 基于半衰期测量值，预期针对治疗适应症重复给予含mRNA的MC3基LNP将导致组织中MC3的积累。由此研究每周给药是否能维持化合物18的有利的单剂量药物动力学。在第1天、第8天和第15天给予0.05mg/kg mRNA后，测量多个小鼠组织中MC3和化合物18的清除率(图30A)。在给予MC3 LNP后，在肝、脾、血浆、肾、心脏和肺中检测到脂质，其中肝和脾含有最大浓度(图30A，关于组织的全部图，参见图35A)。在每次剂量后观察到MC3积累。肝和脾中的化合物18水平最高，但明显低于MC3水平。另外，在血浆、肺和肾中检测到化合物18，但在心脏中未检测到(图35A)。在小鼠中静脉内递送含0.5mg/kg hEPO mRNA的化合物18基LNP时观察到一致的表达水平(图30B)，展示重复给药的可能性。

[3194] 另外，使用化合物18进行体外代谢物鉴别研究。这些研究显示，化合物18的初始代谢步骤是伯酯水解成化合物166(表41和42)。在第1天、第8天和第15天给予0.25mg/kg mRNA后，测量小鼠肝组织中母体化合物18和主要代谢物化合物166的消失情况。从图30C可以看出，观察到母体化合物18和代谢物化合物166都较快地清除。

[3195] 在非人灵长类动物中的表达

[3196] NHP对LNP基系统的临床响应与啮齿动物极其类似(DeRosa,F.,Guild,B.,Karve,S.,Smith,L.,Love,K.,Dorkin,J.R.等人,Therapeutic efficacy in a hemophilia B model using a biosynthetic mRNA liver depot system.Gene Ther.2016,23,699–707)。为了将由啮齿动物得到的观察结果转化成非人灵长类动物(NHP)，在NHP中测试脂质。
为此目的，将评价在小鼠和大鼠中施用单次剂量含化合物18的LNP后所观察到的表达改善是否也能在NHP中实现。图31显示用两种不同的mRNA货物(cargo)获得的结果。通过60分钟静脉内输注递送0.01mg/kg的剂量的hEPO-编码mRNA。观察到相对于MC3 LNP对照高五倍的hEPO蛋白质暴露(图31A)。类似地，使用编码抗人IgG流感A抗体的第二mRNA货物，观察到相较于MC3 LNP的5倍表达增加和明显剂量响应(图31B和图36)。独立研究评价了在单次剂量后NHP中的脂质积累情况。与在啮齿动物中得到的结果一致，在给药后12小时，在多个组织中发现MC3残留物，且在肝和脾中检测到最高水平残留。相比之下，化合物18是以明显较低水平存在的(图35B)。这些初步数据展示了在NHP中化合物18的递送效率改善和快速消除的转化。

[3197] 这些实验展示了跨物种转化性。在物种间进行的多项表达和药物动力学(PK)研究在小鼠、大鼠和非人灵长类动物中显示出类似的型态。在灵长类动物中静脉内递送含mRNA的化合物18基LNP引起多种蛋白质的高效表达(图31A和31B)以及与在啮齿动物中所观察到的相对于MC3的类似表达改善。此外，在NHP中也观察到组织中较快的脂质清除率。利用化合物18LNP在给药5周内展示高效表达(图31C)。

[3198] 在非人灵长类动物中进行的毒理学研究

[3199] 在灵长类动物中评价重复给药实验中由本公开LNP提供的表达水平。每周一次，通过60分钟静脉内输注将含0.2mg/kg剂量的hEPO mRNA的化合物18基LNP递送至食蟹猕猴(n＝4只)，持续5周。在实验过程中观察到一致的暴露(图31C)，与在啮齿动物中的观察结果相符。

[3200] 接下来，在体内测试化合物18基LNP的耐受性和安全性。使用标准一个月研究在Sprague Dawley大鼠和食蟹猕猴中对化合物18基LNP进行完整毒理学评价，其中对于每一物种以三种剂量水平每周给药。向大鼠给予0.05、0.5和2mg/kg且向非人灵长类动物给予0.1、0.3和1mg/kg。与MC3基LNP系统有关的LNP相关毒性一般伴随免疫(细胞因子和补体活化)和肝损伤。在大鼠中，利用化合物18未发现不良事件。图32和33突出显示了第30天的丙氨酸转移酶(ALT，图32A)和天冬氨酸氨基转移酶(AST，图32B)的水平，ALT和AST水平是肝损伤的两个指标。任一酶在任何剂量水平下都相对于PBS对照具有最小升高，并且这一趋势对于所测量的所有临床化学、血液学和免疫标记物都一致。这与含mRNA的MC3基LNP的毒性谱形成鲜明对比，其中在0.3mg/kg剂量mRNA下，ALT和AST升高且病理学显示坏死迹象(图37)(Sedic,M.,Senn,J.J.,Lynn,A.,Laska,M.,Smith,M.,Platz,S.J.等人,Safety
Evaluation of Lipid Nanoparticle-Formulated Modified mRNA in the Sprague-
Dawley Rat and Cynomologus Monkey.Vet.Pathol.2017,55,341-354.，其内容以全文引用的方式并入本文中)。

[3201] 食蟹猕猴在所有剂量水平下也显示出最小发现。在每次给药后测量循环mRNA水平展示在实验过程中的一致暴露(图37)。对于1mg/kg剂量，在第30天的ALT(图32C)和AST(图32D)水平与对照水平相同。观察到包括补体和细胞因子在内的免疫活化标记物的最小升高。如图33A中所示，在第1次剂量或第5次剂量后，未观察到C5b9(终末补体活化产物)水平的显著变化。图33B显示，观察到单核细胞化学趋化蛋白(MCP-1)略高于基线的变化。

[3202] 优化新型氨基脂质系列使大鼠和非人灵长类动物的耐受性相较于MC3有显著改善，部分原因是代谢谱的改善。在分别给予2mg/kg和1mg/kg剂量的大鼠和食蟹猕猴中，在每周给药达五周后，未检测到肝损伤或补体活化的迹象。这些数据显示，重复给予含mRNA的本公开脂质纳米粒子可维持循环LNP水平，而无任何毒性迹象。

[3203] 内体逃逸效率的评价

[3204] 研究递送效率，尤其是例如摄取和/或内体逃逸相对于MC3的改善。在ApoE基因敲除小鼠和LDLr基因敲除小鼠中利用化合物18基LNP进行的表达研究显示表达几乎完全损失，表明这一氨基脂质系列具有与MC3类似的摄取机制并以ApoE介导的LDLr依赖性方式起作用(图38)。(参见Akinc,A.等人,Mol.Ther.2010,18,1357-1364，其内容以全文引用的方式并入本文中)。为了更好地了解内体逃逸效率，使用罗丹明标记的LNP开展基于细胞的体外测定以定量细胞摄取，并使用单分子荧光原位杂交(FISH)检测流出胞吞隔室的mRNA。从图34中可以看出，用化合物18基LNP处理的细胞具有的细胞器聚集的mRNA(红色)的量明显低于用MC3基LNP处理的细胞。同时，在化合物18基LNP处理的细胞中单分子胞质mRNA物体的密度较高。为定量地比较两种LNP配制物的内体逃逸效率，在单细胞水平上，计算胞质mRNA的数量与内化LNP的数量之间的比率(表38)。结果显示在LNP中化合物18的效率相较于MC3的6倍增加(分别为比率0.76和0.13)。

[3205] 先前估计不到2％的被细胞摄取的siRNA基LNP将其货物释放至胞质中。(参见Gilleron,J.等人,Nature Biotech.2013.31,638-646，其内容以全文引用的方式并入本文中)。使用单分子荧光显微术，在体外系统中定量内体逃逸效率(以每个细胞中胞质mRNA的数量与内化LNP的数量之间比率计算)。经显示，化合物18的效率相较于MC3增加6倍(分别为比率0.76和0.13)。由于这些配制物每个粒子包封约5个mRNA分子，故此处报导的内体逃逸比率分别转化成化合物18和MC3的15％和2.5％内体逃逸效率。

[3206] 研究结果概述于表37-42中。表37显示了纳米粒子的物理化学特征。内体逃逸效率呈现于表38中。脂质纯度概述于表39中。表40显示小鼠药物动力学参数。与人肝细胞或人血浆一起孵育的化合物18的代谢谱分析和表征结果分别概述于表41和42中。

[3207] 表37.脂质纳米粒子物理化学特征和脂质组织清除率a

[3208]

[3209] aN.T.＝未测试，在一个测定操作内±SD。b多分散指数。c在团注0.5mg/kg剂量mRNA后24小时CD-1小鼠肝中的初始脂质剂量百分比，n＝5±S.D。d在团注2mg/kg剂量mRNA后48小时Sprague Dawley大鼠肝中的初始脂质剂量百分比。en＝2。fn＝3±S.D。

[3210] 表38.内体逃逸效率a

[3211]

[3212] aN.A.＝不适用。b所分析的细胞的数量＝1439±SEM。c所分析的细胞的数量＝1412±SEM。

[3213] 表39：脂质纯度

[3214]

[3215] 表40.小鼠药物动力学参数

[3216]

[3217] 各个血浆和组织浓度数据的PK分析是使用未验证的程序进行的(Phoenix7.0版(Pharsight Corp.,Mountain View,CA))。动力学参数是使用非房室
模型估计的(血浆(200-202)，均一重量，血管外给药和稀疏取样)。AUC是使用线性梯形法则计算的。得出的所有参数都以3个有效数字报导，但达到峰值浓度的时间(Tmax)和半衰期(HL)除外，这两个值是以一位小数报导。对血浆浓度数据或得出的药物动力学参数未进行进一步统计分析。

[3218] 表41：与人肝细胞一起孵育长达240分钟的化合物18(10μM)的代谢物谱分析和表征数据(106个细胞/毫升)

[3219]

[3220]

[3221] +：检测到；ND：未检测到

[3222] 表42：与人血浆一起孵育长达90分钟的化合物18(10μM)的代谢物谱分析和表征数据(29.0mg蛋白质/孵育)

[3223]

[3224] +：检测到；ND：未检测到

[3225] 等效内容

[3226] 应了解，尽管已经结合本公开的详细说明描述本公开，但前述说明意图示出而不是限制本公开的范围，该范围是由所附权利要求书的范围界定。其它方面、优势和变化在所附权利要求书的范围。

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