本发明涉及生物技术和药物化学领域。特别地，本发明涉及生物 活性多肽的经口腔粘膜递送。

药学活性多肽已知可用于医用领域中的各种治疗中。生物技术的 发展已经使得可以大规模地生产天然多肽和重组多肽，用于制造制药 工业产品。然而，已知一些多肽由于它们对在消化道内分解的敏感性， 对于口服胃肠道给药途径而言是差的候选物。因此，多肽治疗典型地 经过非肠道途径例如输注或注射途径来进行。
已经开发了使用具有增强经粘膜吸收的组合物的剂型来进行包括 多肽在内的药物的经粘膜给药。例如，Igari等人的美国专利5,725,852 和5,482,706描述了多肽与胞苷二磷酸胆碱一起进行粘膜给药。用于经 粘膜递送多肽的另一个方法例如描述在Acharya等人的美国专利 6,210,699中，其使用未增塑的聚乙烯基吡咯烷酮作为粘膜粘附剂。多 肽的经阴道吸收由Fujii等人在美国专利5,238,917中描述，其中吸收促 进剂包括聚氧乙烯烷基苯基醚和胆酸。
公知的是，经口腔粘膜吸收与诸如以下的一些优点有关：自我给 药能力，血浆浓度和疗效的更快起效，和避免活性成分的首过代谢效 应。已经开发了多种剂型用于一些活性成分跨粘膜进行经口腔粘膜(例 如舌下、经颊、牙龈、腭和食道的粘膜组织)递送。这些剂型已被设 计用于活性成分的快速崩解和高浓度以实现在口腔内的吸收。
还研究了多肽的经口腔粘膜给药。例如，多肽的经颊给药由Heiber 等人在美国专利5,863,555和5,766,620中描述，其中高血糖素样促胰 岛素多肽与渗透增强剂诸如胆汁盐一起进行经颊给药。
经过特别地配制用于某些阿片剂诸如芬太尼的经口腔粘膜吸收的 一种口服剂量形式已在商标名称下采用 技术被开发(得自CIMA LABS，Inc.，Eden Prairie，Minnesota)。该技 术描述于例如美国专利6,200,604和6,974,590中，以及美国专利申请 公报2005/0169989(2004年12月30日提交的序列号No.1/026,132)； 2005/0142197(2004年12月30日提交的序列号No.1/026,327)； 2005/0142198(2004年12月30日提交的序列号No.1/027,353)；和 2005/0163838(2004年12月30日提交的序列号No.11/026,759)中。这 一具体技术采用赋形剂制剂，其包含pH调节物质和泡腾对以促进活性 成分枸橼酸芬太尼的经粘膜转运。然而，目前正在进行其它的可从 的口腔泡腾剂型给药中受益的药学活性化合物的识 别。
在药物领域中，仍然需要一种剂型，该剂型接替并改善包括多肽 在内的大分子跨口腔粘膜组织的递送。还需要这样的制剂，该制剂可 有效地实现包括多肽在内的更大分子结构的经粘膜递送。
发明概述
本发明提供了增强多肽跨口腔粘膜组织的经粘膜吸收并提供多肽 的有效治疗相对快速起效的组合物。已经发现可以制备增强多肽经粘 膜吸收的组合物，为接受者提供治疗血浆浓度。还已发现泡腾经粘膜 剂型与胆汁盐诸如牛磺胆酸(钠)盐的组合当根据本发明进行配制时可 显著增强多肽吸收。泡腾组合物与胆汁盐的组合对多肽跨口腔粘膜的 转运具有协同效应，从而获得了大于其各自的吸收增强效应的总和的 生物利用度。
本发明提供了用于经口腔粘膜吸收的组合物，其包含生物活性多 肽；胆盐；和包括泡腾对的泡腾赋形剂组分。该组合物还可例如任选 地包含pH调节物质作为泡腾赋形剂组分的一部分或作为经口腔粘膜 组合物的一部分。在一些实施方案中，该组合物包括固体经口剂型如 片剂。
本发明还提供了增强生物活性多肽的经粘膜吸收的方法，包括对 接受者给予组合物，该组合物包含：生物活性多肽；胆盐；和包括泡 腾对的泡腾赋形剂组分；该组合物还可任选地包含pH调节物质。
本发明还提供了对接受者给予生物活性多肽的方法，包括：a)提 供组合物，该组合物包含：生物活性多肽；胆盐；包括泡腾对的泡腾 赋形剂组分；和pH调节物质；b)将该组合物置于接受者的口腔内与粘 膜组织接触；和c)允许该组合物原地停留与粘膜组织接触历时组合物 足以溶出并递送治疗有效量的生物活性多肽跨粘膜的时段。
本发明提供了在接受者中治疗糖尿病的方法，包括对接受者给予 经口腔粘膜组合物。该组合物包含治疗有效量的胰岛素、泡腾赋形剂 组分；和胆盐。
本发明还提供了在接受者中治疗癌的方法，包括对接受者给予经 口腔粘膜组合物。该组合物包含治疗有效量的IFN-γ、泡腾赋形剂组分； 和胆盐。
本发明还提供了在接受者中治疗病毒感染或细菌感染的方法，包 括对接受者给予经口腔粘膜组合物。该组合物包含治疗有效量的 IFN-γ、泡腾赋形剂组分；和胆盐。
本发明还提供了在接受者中治疗糖尿病或肥胖症或控制血糖的方 法，包括对接受者给予经口腔粘膜组合物。该组合物包含治疗有效量 的胰淀素、泡腾赋形剂组分；和胆盐。
本发明还提供了在接受者中治疗精神病学疾病或病症的方法，包 括对接受者给予经口腔粘膜组合物。该组合物包含治疗有效量的胰淀 素、泡腾赋形剂组分；和胆盐。
附图说明
进一步通过以下附图说明本发明-哪个附图都不被认为一定限制 了本发明。
图1-15是柱状图，显示使用体外上皮细胞培养组织的多种多肽与 不同赋形剂组合物的组合的比较渗透性。
图1是显示根据本发明的一些实施方案，单独的胰淀素、胰淀素 与胆盐的组合、胰淀素与泡腾组合物的组合、以及胰淀素与胆盐和泡 腾组合物二者的组合的体外渗透性的柱状图。通过荧光检测测量荧光 标记的胰淀素。
图2是显示根据本发明的一些实施方案，单独的大马哈鱼降钙素、 大马哈鱼降钙素与胆盐的组合、大马哈鱼降钙素与泡腾组合物的组合、 以及大马哈鱼降钙素与胆盐和泡腾组合物二者的组合的体外渗透性的 柱状图。通过荧光检测测量荧光标记的大马哈鱼降钙素。
图3是显示根据本发明的一些实施方案，单独的GLP-1、GLP-1 与胆盐的组合、GLP-1与泡腾组合物的组合、以及GLP-1与胆盐和泡 腾组合物二者的组合的体外渗透性的柱状图。通过荧光检测测量荧光 标记的GLP-1。
图4是显示根据本发明的一些实施方案，单独的胰岛素、胰岛素 与胆盐的组合、胰岛素与泡腾组合物的组合、以及胰岛素与胆盐和泡 腾组合物二者的组合的体外渗透性的柱状图。通过荧光检测测量荧光 标记的胰岛素。
图5是显示根据本发明的一些实施方案，单独的高血糖素、高血 糖素与胆盐的组合、高血糖素与泡腾组合物的组合、以及高血糖素与 胆盐和泡腾组合物二者的组合的体外渗透性的柱状图。通过荧光检测 测量荧光标记的高血糖素。
图6是显示根据本发明的一些实施方案，单独的PTH、PTH与胆 盐的组合、PTH与泡腾组合物的组合、以及PTH与胆盐和泡腾组合物 二者的组合的体外渗透性的柱状图。通过荧光检测测量荧光标记的 PTH。
图7是显示根据本发明的一些实施方案，单独的缩宫素、缩宫素 与胆盐的组合、缩宫素与泡腾组合物的组合、以及缩宫素与胆盐和泡 腾组合物二者的组合的体外渗透性的柱状图。通过荧光检测测量荧光 标记的缩宫素。
图8是显示根据本发明的一些实施方案，单独的Arg-加压素(去氨 加压素)、去氨加压素与胆盐的组合、去氨加压素与泡腾组合物的组合、 以及去氨加压素与胆盐和泡腾组合物二者的组合的体外渗透性的柱状 图。通过荧光检测测量荧光标记的去氨加压素。
图9是显示根据本发明的一些实施方案，单独的PYY、PYY与胆 盐的组合、PYY与泡腾组合物的组合、以及PYY与胆盐和泡腾组合物 二者的组合的体外渗透性的柱状图。通过荧光检测测量荧光标记的 PYY。
图10是显示根据本发明的一些实施方案，单独的大马哈鱼降钙素、 大马哈鱼降钙素与胆盐的组合、大马哈鱼降钙素与泡腾组合物的组合、 以及大马哈鱼降钙素与胆盐和泡腾组合物二者的组合的体外渗透性的 柱状图。通过ELISA试剂盒和技术测量大马哈鱼降钙素。
图11是显示根据本发明的一些实施方案，单独的去氨加压素(Arg- 加压素)、去氨加压素与胆盐的组合、去氨加压素与泡腾组合物的组合、 以及去氨加压素与胆盐和泡腾组合物二者的组合的体外渗透性的柱状 图。通过LC/MS/MS测量去氨加压素。
图12是显示根据本发明的一些实施方案，单独的干扰素α-2b、干 扰素α-2b与胆盐的组合、干扰素α-2b与泡腾组合物的组合、以及干扰 素α-2b与胆盐和泡腾组合物二者的组合的体外渗透性的柱状图。通过 ELISA试剂盒和技术测量干扰素α-2b。
图13是显示在不同条件下的胰岛素(In-FITC)对单独给予相同浓 度的胰岛素的渗透性的体外增强比(ER)的柱状图。所述条件是根据本发 明的一些实施方案的胰岛素与胆盐组合、胰岛素与泡腾组合物组合以 及胰岛素与胆盐和泡腾组合物二者组合。供试的各种胆盐包括牛磺胆 酸(钠)盐(TC)，羟乙酸盐(GC)，甘氨脱氧胆酸盐(GDC)，牛磺脱氧胆酸 盐(TDC)，胆酸盐(C)，牛磺鹅去氧胆酸盐(TCDC)和牛磺熊去氧胆酸盐 (TUDC)。通过荧光检测测量In-FITC。
图14是显示根据本发明的一些实施方案，单独的IGF-1、IGF-1 与胆盐的组合、IGF-1与泡腾组合物的组合、以及IGF-1与胆盐(在不 同浓度下)和泡腾组合物二者的组合的体外渗透性的柱状图。通过 ELISA试剂盒和技术测量IGF-1。
图15是显示根据本发明的一些实施方案，单独的HRPO-b、 HRPO-b与胆盐的组合、HRPO-b与泡腾组合物的组合、以及HRPO-b 与胆盐和泡腾组合物二者的组合的体外渗透性的柱状图。通过由 HRPO-b引起的特异性底物转化所导致的光密度增加来测量HRPO-b。
发明详述
本文使用的术语“经口腔粘膜”在药物递送和吸收的背景下是指 药物经由与口腔有关的一种或多种粘膜组织例如舌下、颊、牙龈、腭、 食道区域的口粘膜组织的蠕动前的摄取阶段。更具体地说，该术语意 在是指活性成分的主要递送途径通过口腔粘膜组织发生。广义的术语 “经粘膜”是指通过粘膜组织(包括口腔、直肠或阴道的粘膜组织) 所实现的递送和吸收。
本文使用的术语“约”是指给定值±10％的值的范围及其功能等 价物，除非另有具体说明不是这样。例如，术语“约50毫克”包括50 ±10％，或为45毫克到55毫克。
本文使用的术语“生物活性多肽”是指多肽、肽和蛋白质，并且 是指具有任何长度的氨基酸的聚合物形式，其可包括被编码的和未编 码的氨基酸，经过化学或生物化学修饰或衍生化的氨基酸，和具有改 性肽主链的多肽。该术语包括融合蛋白，包括但不限于具有异源氨基 酸序列的融合蛋白，具有异源和同源前导序列、有或没有N-末端甲硫 氨酸残基的融合蛋白；进行免疫标记的蛋白质；等等。可用于本发明 的生物活性多肽包括但不限于细胞因子、生长因子、造血因子、激素、 酶、抗体、抗原、过敏原等。生物活性多肽共有与基础多肽有关的生 物活性。生物活性多肽可具有任何长度，例如，约5到约20个氨基酸； 约10到约60个氨基酸；约25到约75个氨基酸；约50到约150个氨 基酸；约75到约250个氨基酸；约100到约400个氨基酸；约200到 约600个氨基酸，和更大长度。
本文使用的术语“治疗有效量”是指被要求对于所给给药途径而 言产生所给活性成分预计要实现的生理效应和与所给活性成分有关的 生理效应而被确定的量(根据确立的药代动力学方法和技术进行测 量)。
本文使用的术语“经口剂型”当以一般含义被使用时包括经口可 崩解的/可分解的片剂，胶囊，锭剂，凝胶剂，霜剂，薄膜剂，喷雾剂， 等等。本发明的经口剂型意在包括作为固体经口剂型的本发明的药物 组合物，其包含生物活性多肽以及促进和增强活性成分经口腔粘膜吸 收的赋形剂制剂。
本文使用的术语“基本上”，除非另有说明，否则是指满足所述 测量中的所述标准使得本领域技术人员可理解要实现的益处或所需的 条件或性质被满足的特定的性质、特征或变量。
通常，本发明的药物组合物包含与胆盐组合的泡腾组合物，并包 括生物活性多肽作为活性成分。本发明的组合物还可包含pH调节物 质。在一些实施方案中，在剂型中所用的成分的组合，即活性成分和 赋形剂，一起起作用以增强活性成分的经粘膜吸收，例如，根据本发 明的Cmax：剂量的比，和/或所实现的剂量降低。在一些实施方案中，泡 腾组合物和作为泡腾赋形剂组分的一部分的pH调节物质连同胆盐诸 如牛磺胆酸钠的使用，为多肽的递送和/或摄取提供了显著优点。在一 些实施方案中，泡腾组合物和pH调节物质被一起使用以增加多肽的递 送和/或摄取。
本发明的组合物可以以下形式被制备和/或给予：粉末形式或固体 经口剂型如片剂。还可能递送液体形式的本发明的组合物。不管组合 物是何种形式，该组合物可以被给予和/或递送到特定的口腔位置，其 中所述组合物当接触到唾液时在所述口腔粘膜位置处溶出。在一些实 施方案中，该组合物在约1分钟到约30分钟的时段内溶出。活性成分 在至少其中被给予有该组合物的区域内被转运跨越或横跨口腔粘膜。 在一些实施方案中，该组合物包含泡腾赋形剂制剂、胆盐和药学活性 多肽，并且可被给予和/或递送到舌下、颊、牙龈、腭和/或食道位置的 口粘膜组织。
在一些实施方案中，生物活性多肽被转运跨越粘膜组织并被吸收 以实现其生物效应。
可使用与各种多肽有关的多种直接的和间接的生物活性用于大范 围的治疗或疗法；这些疗法包括但不限于，抗生素治疗，造血治疗， 抗过敏治疗，激素治疗，多肽增补治疗，诊断性检测，抗抑郁和精神 病治疗，抗癌治疗，抗心律失常治疗，血管扩张治疗，血管收缩治疗， 抗高血压治疗，糖尿病的预防和控制，抗凝血治疗，食欲抑制活性， 血糖控制(blood glucose control)，血糖控制(glycemic control)，饱胀感， 抗感染治疗，骨质疏松治疗，疫苗等等。这些治疗或疗法当适当的多 肽成功地转运跨越粘膜并进入接受者的血流内时可被实现。
适当的生物活性多肽包括但不限于：胰淀素、大马哈鱼由来的降 钙素(s-CT)，胰高血糖素样肽1(GLP-1)，高血糖素，甲状旁腺激素 (PTH1)，缩宫素，去氨加压素(8D-Arg加压素)，胰岛素，蛋白质 YY(PYY)，细胞因子和淋巴因子诸如IFNα、IFNβ、IFNγ等等。关于 各种多肽的列举可见于Igari等人的美国专利5,725,852，该文献全文被 并入本文作为参考。
可用于本发明的生物活性多肽包括可转运跨越或透过口腔粘膜组 织并进入血流以递送其相关效果的那些多肽。在一些实施方案中，多 肽具有约500道尔顿到约200,000道尔顿(200kDa)或更大的分子量。在 一些实施方案中，多肽具有约1000道尔顿到约20,000道尔顿的分子量。 在一些实施方案中，多肽具有约3000道尔顿到约30,000道尔顿的分子 量；在其它实施方案中，多肽具有约5000道尔顿到60,000道尔顿的分 子量。
在一些实施方案中，本申请还提供了用于经粘膜递送较大的非肽 基化合物和分子以及多肽-药物缀合物的方法和组合物。
本发明的组合物包括至少一种胆盐。组合物的这一部分在以下简 称组合物的“胆盐组分”。本文使用的“胆盐”是指由其相应的胆汁 酸形成的阳离子盐形式，例如胆汁酸牛磺胆酸是牛磺胆酸(钠)盐作为胆 盐。可用于本发明的胆盐包括但不限于选自以下的胆盐：牛磺胆酸钠 (TC)，甘胆酸钠(GC)，甘氨脱氧胆酸钠(GDC)，牛磺脱氧胆酸钠(TDC)， 胆酸钠(C)，牛磺鹅去氧胆酸钠(TCDC)和牛磺熊去氧胆酸钠(TUDC)及 其组合。在一些实施方案中，使用胆盐牛磺胆酸的钠盐即牛磺胆酸钠。 尽管用于说明本发明的目的钠就是所述的阳离子，但是还可能使用其 它的阳离子来形成胆盐。
胆盐的使用量可根据被选择的具体胆盐的不同而异。在一些实施 方案中，胆盐的量相对低，并且处于为实现本发明的益处所需的最低 有效浓度到对应于最大可接受的毒性的量的范围内。最小的和最大的 胆盐量参数可根据不同胆盐的不同而异。对于牛磺胆酸钠，其可用于 本发明的量可为约0.05％w/v到约10％w/v，或为约0.5％w/v到约 2.0％w/v。在一些实施方案中，使用约1.0％w/v的牛磺胆酸钠。
根据本发明制备的药物组合物包含泡腾组合物作为渗透增强剂。 本发明组合物的这一部分在本文还被称作“泡腾赋形剂组分”。在一 些实施方案中，泡腾赋形剂组分包括泡腾对。泡腾对可以是被水或唾 液活化的酸和碱；因此，当暴露于水或唾液下时，例如，当在口内溶 出时，泡腾对的活化导致产生二氧化碳。在一些实施方案中，泡腾赋 形剂组分除了泡腾对之外还包括pH调节物质。在本发明中可使用各种 的泡腾组合物或泡腾赋形剂组分。例如，可使用在美国专利5,178,878 和美国专利5,503,846中所述的泡腾组合物和泡腾赋形剂组分，所述文 献全文被并入本文作为参考。
在一些实施方案中，泡腾赋形剂组分包括作为被水或唾液活化的 材料的泡腾对，其通常以吸收很少的水分或无吸收水分的无水状态被 保持，或为稳定的水合形式。在一些实施方案中，泡腾对包括至少一 种食品级酸和至少一种食品级的反应性碱(其可为碳酸盐或碳酸氢盐)。
用于泡腾赋形剂组合物中的适当的酸包括食品级的酸、酸酐和酸 盐。食品级的酸包括但不限于柠檬酸、酒石酸、苹果酸、富马酸、己 二酸、抗坏血酸和琥珀酸，及其酸酐或盐。使用的盐可为食品级的钠、 钾和钙的盐，例如磷酸二氢钠和磷酸氢二钠，以及酸式柠檬酸盐和酸 式硫酸二钠。
可根据本发明使用的碱包括但不限于碳酸氢钠、碳酸氢钾等等。 碳酸钠、碳酸钾、碳酸镁等等还可作为泡腾对的一部分被使用，但是 还可作为泡腾组合物内的pH调节物质。
在一些实施方案中，泡腾赋形剂组分的量是有效量并且根据除为 实现片剂在口内崩解所必需的那些性质以外的性质来确定。在一些实 施方案中，泡腾赋形剂组分被用作用于增强经过口腔内的颊、舌下或 牙龈途径被给药的活性成分跨越粘膜的传递。因此，在一些实施方案 中，泡腾赋形剂组分的量基于总制剂重量为约5到约85％，约15到60％， 约30到45％，和约35到40％。在一些实施方案中，酸和碱的相对比 例根据特定成分的不同而异，例如，根据酸是否是单、二或三质子形 式，相对摩尔重量等的不同而异。
在一些实施方案中，pH调节物质是除了泡腾对的组分之一以外的 并且与所述泡腾对的组分之一是不同的成分。对离子化状态的改变敏 感的多肽可以通过为其在口腔内溶出和传递跨越口腔内组织实施适当 条件而被给予。在一些实施方案中，如果对于具体药物而言的理想条 件是碱性，则加入充分过量的适当的强酸作为泡腾赋形剂组分的一部 分或者可能不需要pH调节物质。在一些实施方案中，pH调节物质例 如无水碳酸钠被选择，其单独并与泡腾对无关地起作用。
可使用各种pH调节物质以提供活性成分的进一步的渗透增强。在 一些实施方案中，适当的pH调节物质的选择根据要给予的药物、特别 根据药物发生离子化或非离子化的pH以及离子化形式或非离子化形 式是否促进跨粘膜传递的不同而异。
在一些实施方案中，pH调节物质是任何这样的物质，该物质能够 调节用于促进跨粘膜转运的局部化pH在一般为约3到约10、或约4 到约9的范围内。pH是在口腔粘膜被置于接受者口内时与口腔粘膜接 触面表面处小环境内的“局部化pH”。
在一些实施方案中，局部化pH可以通过最初表征片剂在使用体外 pH测量法时所显示的动力学pH改变来测定。该方法包括在适当大小 的试管或其它类似的容器中使用0.5-10毫升的磷酸盐缓冲盐水。通过 将9.0克氯化钠、0.6克磷酸钠一水合物和0.78克磷酸氢二钠(无水)溶 解在约1000毫升去离子水中并通过在搅拌下加入1N氢氧化钠调节室 温下的pH为7.0±0.05来准备一升体积的经缓冲的盐水溶液。调节将 需要约0.5毫升。所用介质的量根据片剂大小和剂量的不同而异。例如， 1毫升的体积可用于重200毫克的片剂。当接触到介质时，使用微型复 合pH电极监控溶液的pH曲线(作为时间的函数)。
在一些实施方案中，可被用作本发明的pH调节物质的材料包括碳 酸盐、碳酸氢盐、磷酸盐、磷酸氢盐和磷酸二氢盐。适当的碳酸盐包 括但不限于碳酸钠、碳酸钾或碳酸钙。适当的磷酸盐包括但不限于磷 酸钙或磷酸钠。在一些实施方案中，pH调节物质是碳酸钠。在一些实 施方案中，pH调节物质当以适当的量被提供时，与不含pH调节物质的 相同制剂相比，提供了局部化pH的改变，该局部化pH改变至少约0.5个 pH单位，1.0个pH单位，或约2.0个pH单位。
在一些实施方案中，pH调节物质的量随着所用pH调节物质的类 型、来自泡腾对的过量酸或碱的量、任何其余成分的性质以及活性成 分的不同而异。在一些实施方案中，pH调节物质的量基于总制剂重量 为约0.5到约25％，约2到约20％，约5到约15％，和约7到约12％。
当组合物为片剂固体剂型时，在一些实施方案中，所述组合物还 包括填充剂、崩解剂和润滑剂中的一种或多种。可使用任何类型的填 充剂或任何量的填充剂，只要所得剂型可实现本文所述的结果即可。 在一些实施方案中，填充剂是糖和糖醇，并且这些可包括非直接压缩 型填充剂和直接压缩型填充剂。在一些实施方案中，非直接压缩型填 充剂当经历配制时，其具有使得其不可实际用于无加强或调节的高速 制片方法的流动和/或压缩特征。例如，制剂的流动性可能不足够好， 因此可能需要加入助流剂诸如二氧化硅。
在一些实施方案中，直接压缩型填充剂不要求类似的考虑并且一 般地具有使得其可用于直接压缩用途的压缩性和流动性特征。在一些 实施方案中，非直接压缩型填充剂可被赋予直接压缩型填充剂的性质。 在一些实施方案中，非直接压缩型填充剂当与直接压缩型填充剂相比 时倾向于具有相对较小的粒度。在一些实施方案中，填充剂诸如喷雾 干燥型甘露醇具有相对较小的粒子，但是根据它们如何经历进一步加 工而一般地是可直接压缩的。在一些实施方案中，填充剂是较大的非 直接压缩型填充剂。
用于本发明的适当的填充剂包括但不限于甘露醇、乳糖、山梨醇、 葡萄糖、蔗糖、木糖醇和葡萄糖。在一些实施方案中，填充剂是喷雾 干燥型甘露醇。填充剂的使用量基于制剂的重量可为约10到约80％，约 25到约80％，或约35到约60％。
在组合物中还可使用崩解剂。在一些实施方案中，崩解剂可允许 剂量减少和/或增加Cmax：剂量的比。在一些实施方案中，崩解剂包括还 具有崩解剂性质的粘合剂。适当的崩解剂包括但不限于微晶纤维素、 交联聚乙烯基吡咯烷酮(PVP-XL)、淀粉羟乙酸钠、交联羧甲纤维素钠、 交联羟基丙基纤维素等等。在一些实施方案中，崩解剂的选择可根据 在所给出的系统内在使用所述崩解剂时是否可以获得所需结果而定。
在一些实施方案中，崩解剂是淀粉羟乙酸盐。在一些实施方案中， 崩解剂是淀粉羟乙酸钠。淀粉羟乙酸钠的实例是EXPLOTABTM(标准 级，得自Roquette of Lestrem，France)。
在一些实施方案中，崩解剂的量根据诸如剂型大小、其它成分的 性质和量等因素的不同而异。在一些实施方案中，崩解剂的量基于最 终制剂的重量为约0.25重量％到约20重量％，约0.5重量％到约15重量％， 约0.5重量％到约10重量％，或约1重量％到约8重量％。
在一些实施方案中，本发明还包括制片用或脱模用的润滑剂。适 当的润滑剂包括但不限于硬脂酸镁、硬脂酸、硬脂酸钙或其组合。在 一些实施方案中，润滑剂是硬脂酸镁。在一些实施方案中，润滑剂的 量低于制剂重量的1重量％。在一些实施方案中，润滑剂的量低于约0.5 重量％。在一些实施方案中，润滑剂的量可大于约1.0重量％、大于1.5 重量％，和为约1.5重量％到约3重量％。在一些实施方案中，硬脂酸镁 是润滑剂并且其用量为约2重量％。
在一些实施方案中，本发明的组合物包括其它的以一般已知的量 存在的常规赋形剂，只要它们不显著降低由本发明所提供的优异性质 即可。这些另外的赋形剂可包括但不限于粘合剂、甜味剂、着色剂、 芳香剂、助流剂、润滑剂、崩解剂、防腐剂等等。
在一些实施方案中，本发明的组合物可被制备为固体经口腔粘膜 剂型例如片剂。根据本发明制备的泡腾片剂可相对硬质或软质。例如， 包含本发明组合物的片剂可以根据在美国专利5,178,878中所述方法制 备，所述文献全文被并入本文作为参考。当根据这一技术被制备时， 该剂型可具有小于约15牛顿的硬度。活性成分可用保护性包衣进行包 衣或可没有包衣。当制备软质易碎的片剂时，它们可被包装在泡罩包 装诸如在美国专利6,155,423中所述的包装中。在一些实施方案中，可 根据美国专利6,024,981中所述方法制备具有大于约15牛顿的硬度的硬 质剂型。另外，粉末状态的程度例如粒度的重现性和/或稠度可影响结 果。
总体的剂型尺寸和大小、活性成分的剂量可不同。总体的剂型的 形状或构造诸如片剂可不同。剂型构造可根据其在给药期间的预定区 域例如颊、牙龈或舌下的不同而异。在一些实施方案中，由本发明实 现的原地崩解或溶出时间(停留时间)是足够递送治疗有效量的药学活 性多肽跨粘膜的时段。该时段可小于约30分钟，乃至小于约20分钟。 在一些实施方案中，停留时间可为约5分钟到10分钟，根据患者应答和 组合物成分的不同而异。
片剂剂型可使用本领域技术人员容易获知的常规的制片设备和技 术来制备。在一些实施方案中，根据本发明制得的片剂经过干法混合 和直接压片。在一些实施方案中，片剂可从颗粒制备。可使用于法造 粒技术。例如，可使用粒状甘露醇作为填充剂。作为制备过程的一部 分，在一些实施方案中，可能希望在进行最后的混合和压缩之前进行 组合物的一部分的造粒或预混合。被选择的材料经过预先选择以提供 预定的剂量和含量均匀性。因此，在一些实施方案中，可选择适当的 量的泡腾对、pH调节物质和崩解剂，并以预定的量被提供，并被配制 成所需剂型。在一些实施方案中，当使用润滑剂诸如硬脂酸镁时，它 们在混合时段接近结束时被加入，例如，在最终的混合停止之前的几 分钟被加入。
在一些方面，本发明还包括对接受者给予生物活性多肽的方法， 包括：
a)提供药学活性多肽、泡腾组合物和胆盐的经口腔粘膜组合物；
b)将经口腔粘膜组合物置于接受者口腔内的粘膜组织位置处；和
c)允许组合物原地溶出历时足够允许剂型溶出并递送治疗有效量 的多肽跨粘膜的时段。
术语“提供”意在包括从包装或容器中取出组合物或其剂型，和/ 或进行剂型的其它分配。正如以上的讨论，根据本发明被制得的剂型 可存在于被接受者获得的泡罩包装中。本文使用的术语“接受者”意 在包括哺乳动物，包括人在内。接受者或其它个体可将组合物置于颊 和上牙龈或下牙龈之间，或置于舌下。在一些实施方案中，组合物可 被提供有所述组合物不应该被吸吮、咀嚼或吞咽的说明书。
治疗方法
可采用本公开的经口腔粘膜组合物实施许多治疗方法，所述治疗 方法包括用于以下的方法：糖尿病控制，血糖控制，肥胖症的治疗(例 如，通过诱导饱胀感或其它方法)，癌的治疗，感染的治疗，和精神病 学病症的治疗。因此，在一些方面，本发明提供了在接受者中治疗糖 尿病的方法。该方法包括对接受者给予经口腔粘膜组合物。在一些实 施方案中，该组合物包含治疗有效量的胰岛素、泡腾赋形剂组分；和 胆盐。
在一些方面，本发明提供了在接受者中治疗癌的方法。该方法包 括对接受者给予经口腔粘膜组合物。在一些实施方案中，该组合物包 含治疗有效量的IFN-γ、泡腾赋形剂组分；和胆盐。
在一些方面，本发明提供了在接受者中治疗病毒感染或细菌感染 的方法。该方法包括对接受者给予经口腔粘膜组合物。在一些实施方 案中，该组合物包含治疗有效量的IFN-γ、泡腾赋形剂组分；和胆盐。
在一些方面，本发明提供了在接受者中治疗糖尿病、肥胖症或精 神病学疾病或病症或控制血糖水平的方法。该方法包括对接受者给予 经口腔粘膜组合物，该经口腔粘膜组合物包含治疗有效量的胰淀素、 泡腾赋形剂组分；和胆盐。在一些实施方案中，精神病学疾病或病症 是情绪障碍、焦虑症或精神分裂症。
进一步通过以下实施例说明本发明，哪个实施例都不被认为一定 限制了本发明。
实施例
实施例1
体外渗透性试验
如下进行体外渗透性试验。从一端用0.6平方厘米的不含细胞的 丙烯酸类和聚碳酸酯膜嵌片密封的丙烯酸类嵌片开始，将经培养的人 颊癌细胞(SqCC/Y1细胞)在培养基中在膜表面上生长历时24小时。从 嵌片顶部除去培养基(″空气吸扬″法)，其中细胞继续接受来自嵌片下方 的培养基的营养物。在这些条件下，细胞生长历时7到10天，从而使 细胞在聚碳酸酯膜上生长达到多层汇合，从而使细胞密度增加达到与 颊粘膜组织类似的多层组织样屏障物。
用不含碳酸氢钠的Krebs-Ringer缓冲溶液(KRB)冲洗嵌片并通过 测量跨上皮电阻(TEER)检查均匀性来进行试验。当必需的平均电阻是 350ohms或更大时，选择用于渗透性试验的嵌片，从而确保一致的渗 透性屏障物厚度和分布。
将嵌片分组(例如n＝3)，具有在试验活性药物成分(即多肽)的具体 制剂时所用的密切类似的平均TEER值(组的值)。例如，对于所给出的 胆盐，样品组如下所示：
1)单独的多肽；
2)多肽与胆盐的组合；
3)多肽与泡腾赋形剂组合物(赋形剂配方1)粉末的组合；
4)多肽与胆盐(不同浓度)和泡腾赋形剂组合物(赋形剂配方1)粉末 的组合。
将嵌片置于具有限定体积的KRB的细胞培养孔中并在37℃在振 动台上以100rpm的设置培养。因此，将细胞暴露于单独的或与所述的 各种赋形剂制剂组合的所给出的活性成分(多肽)下。
在1小时内每10分钟从底外侧流体中取得样品，并用等体积的 KRB替换被除去的流体。在1小时结束时，重新获得嵌片内的剩余流 体并保存起来，嵌片用KRB冲洗，并且再次测量TEER值。记录了在 开始步骤TEER和最终步骤TEER之间的TEER差。
然后，使用MTS毒性试验来评价嵌片的治疗的细胞毒性，并且还 记录了样品中的治疗效果。MTS毒性试验测量了活细胞将MTS四唑化 合物转化为甲臢的能力，甲臢在490nm处吸收紫外光。吸光度的量与 活细胞数成正比。
使用各种技术分析了得自底外侧孔的样品的活性成分(多肽)。计算 了孔中活性成分的量并作取样损失方面的校正。从这些数据，计算了 渗透细胞障碍物的活性成分的量并且计算了表观渗透系数(Papp)：
Papp＝S/(A*C)
其中
S＝渗透曲线在线性区域内的斜率(mg/sec)；
A＝被细胞覆盖的嵌片的面积(cm2)；
C＝供体活性药物成分的浓度(mg/ml)。
增强比(ER)等于使用吸收增强剂的Papp除以未使用吸收增强剂的 Papp的比。因此，使用这一技术用于以下所提供的每一种渗透性增强 组合物。
实施例1A赋形剂制剂的制备
赋形剂配方1(EF1)
第一赋形剂组分包括制备干粉形式的泡腾组合物。在一些实施方 案中，使用的泡腾组合物是如下表中所示的赋形剂制剂粉末：
表1 泡腾赋形剂组分200毫克安慰剂片剂
  成分：   量(mg)   重量％   甘露醇EZ   98   49％   碳酸氢钠   42   21％   柠檬酸   30   15％   碳酸钠   20   10％   淀粉羟乙酸钠   6   3％   硬脂酸镁   4   2％   总计：   200mg   100％
赋形剂配方2(EF2)
基于赋形剂配方1制备了可供选择的泡腾组合物，不同之处在于 仅使用了泡腾对和pH调节物质。该制剂被制备成与赋形剂配方1具有 相同重量即200毫克：
表2 泡腾赋形剂组分92毫克安慰剂粉末
  成分：   量(mg)   重量％   碳酸氢钠   42   45.7％   柠檬酸   30   32.6％   碳酸钠   20   21.7％   总计：   92mg   100％
实施例1B 活性成分和胆盐组分
第二活性组分包括被制备在溶液形式中的胆盐牛磺胆酸钠与生物 活性多肽的组合。例如，干燥形式的牛磺胆酸钠和多肽成分可被重构 在经缓冲的盐水溶液中。一种经缓冲的盐水溶液的组成例如如下所示： Krebs Ringer缓冲液(D-葡萄糖1.8g/L，氯化镁(无水)0.0468g/L，氯化 钾0.34g/L，氯化钠7.0g/L，磷酸氢二钠(无水)0.1g/L，磷酸-钠(无 水)0.18g/L；pH调节到7.4；未使用碳酸氢钠。
因此，在一些实施方案中，本发明的组合物包括依次沉积的上述 组分的组合，即粉末形式的泡腾赋形剂组分、和在溶液中的包含胆盐 和生物活性多肽的活性组分。双组分组合物可依次沉积(在粉末组合物 之后是液体组合物)到粘膜组织上。
实施例1C 包含多肽的固体经口腔粘膜剂型的制备
在一些实施方案中，作为对实施例1A和1B中所述组合物的替代， 本发明的组合物可被制成固体经口腔粘膜剂型如压缩片剂。该片剂剂 型可通过将粉末形式的泡腾组合物或泡腾赋形剂组合物、胆盐和生物 活性多肽混合、然后在压片机上压缩粉末混合物以形成所得的固体片 剂被制得。在一些实施方案中，片剂形式的固体剂型可采用本领域技 术人员容易获知的常规技术和设备来制备。
使用荧光标记的多肽的体外试验
当使用体外渗透性试验时，使用的多肽通常是被缀合到荧光部分 上的那些多肽。特别地，使用的荧光部分选自FAM(5(6)羧基荧光素) 和FITC(异硫氰酸荧光素)。荧光缀合型多肽允许对任何所给出的包括 相同部分的多肽采用单一敏感试验技术，而与多肽的分子量无关。这 又使得能够采用单一试验来评价较大种类和范围的多肽，而无需为每 种特定的多肽开发特定的试验。
经过和未经过增强的荧光标记的多肽的渗透性通过体外渗透性试 验来测量。测量了每种多肽样品透过细胞/组织进入底外侧流体中的多 肽的量并计算了表观渗透系数(Papp)。胆盐(牛磺胆酸盐)和泡腾粉末的 组合的Papp与使用单独多肽获得的Papp、使用多肽与泡腾组合物(不 含胆盐)的组合获得的Papp、使用多肽与胆盐(牛磺胆酸钠)(不含泡腾 组合物)的组合获得的Papp，以确定当组合使用时在两种增强剂组分 之间是否具有协同作用。当在试验中使用单独的牛磺胆酸盐时，牛磺 胆酸盐粉末被直接沉积到细胞表面上以避免对细胞造成毒性效应。
实施例2胰淀素的比较性体外渗透性
评价了多肽胰淀素的体外渗透性。胰淀素与血糖控制和糖尿病治 疗有关。FAM-标记的胰淀素是具有4259.86道尔顿分子量的37个氨基 酸的肽。使用上面描述的细胞培养模型，测量了以下制剂的胰淀素 -FAM的渗透性：
表3 比较性的胰淀素-FAM制剂
 KRB中成分：   只有Am   Am+EF 1   Am+TC   Am+EF 1+TC  胰淀素-FAM   100pM/ml   100pM/ml   100pM/ml   100pM/ml  EF1   -   40mg/ml   -   40mg/ml  牛磺胆酸钠   -   -   10mg/ml   10mg/ml
Am＝胰淀素；EF1＝赋形剂配方1；TC＝牛磺胆酸钠。KRB＝Krebs Ringer缓冲溶液。
结果示于图1中。从图中数据可看出，作为活性多肽的胰淀素与 在给定浓度下的单独的胆盐一起似乎不可观地增加在体外模型中多肽 跨粘膜组织的吸收。同样地，单独的泡腾赋形剂组分(实施例1A中所 述的赋形剂配方1)与多肽胰淀素-FAM一起似乎不可观地增加跨粘膜 组织吸收。
然而，泡腾组分与1％胆盐的组合似乎增强多肽跨粘膜组织的转运 /渗透。当一起使用时，牛磺胆酸盐和泡腾赋形剂组分以及多肽的组合 产生的渗透结果大于胆盐和泡腾组分各自单独的渗透效果的总和。
实施例3比较性的s-CT体外渗透性
评价了与钙代谢和骨质疏松症的治疗有关的多肽大马哈鱼由来的 降钙素(s-CT)的体外渗透性。已经报道了其是饱胀感激素。FAM-标记 的s-CT是具有3441.1道尔顿分子量的25个氨基酸的肽片段(8-32)。使 用上面描述的细胞培养模型，测量了以下制剂的s-CT-FAM的渗透性：
表4 比较性的s-CT-FAM制剂
  成分(在KRB中)：   只有s-CT   s-CT+EF 1   s-CT+TC   s-CT+EF 1+TC   s-CT-FAM   100pM/ml   100pM/ml   100pM/ml   100pM/ml   EF 1   -   40mg/ml   -   40mg/ml   牛磺胆酸钠   -   -   10mg/ml   10mg/ml
s-CT＝大马哈鱼由来的降钙素；EF1＝赋形剂配方1；TC＝牛磺胆酸 钠。KRB＝Krebs Ringer缓冲溶液。
结果示于图2中。从图中数据可看出，作为活性多肽的s-CT-FAM 与在给定浓度下的单独的胆盐一起似乎不可观地增加在体外模型中多 肽跨粘膜组织的渗透性。同样地，单独的泡腾赋形剂组分(实施例1A 中所述的赋形剂配方1)与多肽s-CT-FAM一起似乎不可观地增加跨粘 膜组织吸收。
然而，泡腾组分与1％胆盐的组合似乎增强多肽跨粘膜组织的转运 /渗透性。当一起使用时，牛磺胆酸盐和泡腾赋形剂组分以及多肽的组 合产生的渗透结果似乎大于胆盐和泡腾组分各自单独的渗透效果的总 和。
实施例4比较性的GLP-1-FAM的体外渗透性
评价了胰高血糖素样肽1(亦称GLP-1)的体外渗透性。GLP-1 与2型糖尿病的治疗以及饱胀感控制和体重减轻有关。GLP-1-FAM是 具有4071.71的分子量的30个氨基酸的肽。使用上面描述的细胞培养 模型，测量了以下制剂的GLP-1-FAM的渗透性：
表5 比较性的GLP-1-FAM制剂
  成分(在KRB中)：   只有GLP1   GLP1+EF 1   GLP1+TC   GLP1+EF 1+TC   GLP-1-FAM   100pM/ml   100pM/ml   100pM/ml   100pM/ml   EF 1   -   40mg/ml   -   40mg/ml   牛磺胆酸钠   -    -   10mg/ml   10mg/ml
GLP1＝GLP-1；EF1＝赋形剂配方1；TC＝牛磺胆酸钠。KRB＝Krebs Ringer缓冲溶液。
结果示于图3中。从图中数据可看出，作为活性多肽的GLP-1-FAM 与在给定浓度下的单独的胆盐一起似乎不可观地增加在体外模型中多 肽跨粘膜组织的渗透性。同样地，单独的泡腾赋形剂组分(实施例1A 中所述的赋形剂配方1)与多肽GLP-1-FAM一起似乎不可观地增加跨粘 膜组织吸收。
然而，泡腾组分与1％胆盐的组合确实似乎增强多肽跨粘膜组织的 转运/渗透性。当一起使用时，牛磺胆酸盐和泡腾赋形剂组分以及多肽 的组合产生的渗透结果似乎大于胆盐和泡腾组分各自单独的渗透效果 的总和。
实施例5比较性的胰岛素-FITC的体外渗透性
评价了胰岛素的体外渗透性。胰岛素是具有5808道尔顿的分子量 的51个氨基酸的多肽并与糖尿病的治疗有关。用于试验的胰岛素被缀 合到荧光部分FITC(异硫氰酸荧光素)上。使用上面描述的细胞培养模 型，测量了以下制剂的胰岛素-FAM的渗透性：
表6 比较性的胰岛素-FITC制剂
  成分(在KRB中)：   只有In   In+EF 1   In+TC   In+EF 1+TC   In-FITC   50pM/ml   50pM/ml   50pM/ml   50pM/ml   EF 1   -   40mg/ml   -   40mg/ml   牛磺胆酸钠   -   -   10mg/ml   10mg/ml
In＝胰岛素；EF1＝赋形剂配方1；TC＝牛磺胆酸钠。KRB＝Krebs Ringer缓冲溶液。
结果示于图4中。从图中数据可看出，作为活性多肽的胰岛素-FITC 与在给定浓度下的单独的胆盐一起似乎不可观地增加在体外模型中多 肽跨粘膜组织的渗透性。同样地，单独的泡腾赋形剂组分(实施例1A 中所述的赋形剂配方1)与多肽胰岛素一起似乎不可观地增加跨粘膜组 织吸收。
然而，泡腾组分与1％胆盐的组合似乎增强多肽跨粘膜组织的转运 /渗透性。当一起使用时，牛磺胆酸盐和泡腾赋形剂组分以及多肽的组 合产生的渗透结果似乎大于胆盐和泡腾组分各自单独的渗透效果的总 和。
实施例6比较性的高血糖素-FITC的体外渗透性
评价了与急性低血糖病的治疗有关的高血糖素的体外渗透性。高 血糖素-FAM是具有1709.63道尔顿分子量的11个氨基酸的肽。使用 上面描述的细胞培养模型，测量了以下制剂的渗透性：
表7 比较性的高血糖素-FAM制剂
 成分(在KRB中)：   只有Gluc   Gluc+EF 1   Gluc+TC   Gluc+EF 1+TC  Gluc-FAM   100pM/ml   100pM/ml   100pM/ml   100pM/ml  EF 1   -   40mg/ml   -   40mg/ml  牛磺胆酸钠   -    -   10mg/ml   10mg/ml
Gluc＝高血糖素；EF1＝赋形剂配方1；TC＝牛磺胆酸钠。KRB＝Krebs Ringer缓冲溶液。
结果示于图5中。从图中数据可看出，作为活性多肽的高血糖素 -FAM与在给定浓度下的单独的胆盐一起似乎不可观地增加在体外模 型中多肽跨粘膜组织的渗透性。同样地，单独的泡腾赋形剂组分(实施 例1A中所述的赋形剂配方1)与多肽高血糖素-FAM一起似乎不可观地 增加跨粘膜组织吸收。
然而，泡腾组分与1％胆盐的组合确实似乎增强多肽跨粘膜组织的 转运/渗透性。当一起使用时，牛磺胆酸盐和泡腾赋形剂组分以及多肽 的组合产生的渗透结果大于胆盐和泡腾组分单独的渗透效果的总和。
实施例7比较性的PTH体外渗透性
评价了甲状旁腺激素(PTH)的体外渗透性。PTH是与骨质疏松症的 治疗有关的38个氨基酸的肽。PTH-FAM具有5174.2道尔顿的分子量。 使用上面描述的细胞培养模型，测量了以下制剂的PTH-FAM的渗透 性：
表8 比较性的PTH-FAM制剂
 成分(在KRB中)：   只有PTH   PTH+EF 1   PTH+TC   PTH+EF 1+TC  PTH-FAM   100pM/ml   100pM/ml   100pM/ml   100pM/ml  EF 1   -   40mg/ml   -   40mg/ml  牛磺胆酸钠   -   -   10mg/ml   10mg/ml
PTH＝甲状旁腺激素；EF1＝赋形剂配方1；TC＝牛磺胆酸钠。 KRB＝Krebs Ringer缓冲溶液.
结果示于图6中。从图中数据可看出，作为活性多肽的PTH-FAM 与在给定浓度下的单独的胆盐一起似乎不可观地增加在体外模型中多 肽跨粘膜组织的渗透性。同样地，单独的泡腾赋形剂组分(实施例1A 中所述的赋形剂配方1)与多肽PTH-FAM一起似乎不可观地增加跨粘 膜组织吸收。
然而，泡腾组分与1％胆盐的组合确实似乎增强多肽跨粘膜组织的 转运/渗透性。当一起使用时，牛磺胆酸盐和泡腾赋形剂组分以及多肽 的组合产生的渗透结果似乎大于胆盐和泡腾组分各自单独的渗透效果 的总和。
实施例8比较性的缩宫素-FITC的体外渗透性
评价了与子宫收缩有关的激素缩宫素的体外渗透性。缩宫素-FAM 是具有约1365.18道尔顿的分子量的9个氨基酸的肽。使用上面描述的 细胞培养模型，测量了以下制剂的缩宫素-FAM的渗透性：
表9 比较性的缩宫素-FAM制剂
 成分(在KRB中)：   只有Oxy   Oxy+EF 1   Oxy+TC   Oxy+EF 1+TC  Oxy-FAM   100pM/ml   100pM/ml   100pM/ml   100pM/ml  EF1   -   40mg/ml   -   40mg/ml  牛磺胆酸钠   -   -   10mg/ml   10mg/ml
Oxy＝缩宫素；EF1＝赋形剂配方1；TC＝牛磺胆酸钠。KRB＝Krebs Ringer缓冲溶液。
结果示于图7中。从图中数据可看出，作为活性多肽的缩宫素-FAM 与在给定浓度下的单独的胆盐一起似乎不可观地增加在体外模型中多 肽跨粘膜组织的渗透性。同样地，单独的泡腾赋形剂组分(实施例1A 中所述的赋形剂配方1)与多肽缩宫素-FAM一起似乎不可观地增加跨 粘膜组织吸收。
然而，泡腾组分与1％胆盐的组合确实似乎增强多肽跨粘膜组织的 转运/渗透性。当一起使用时，牛磺胆酸盐和泡腾赋形剂组分以及多肽 的组合产生的渗透结果似乎大于胆盐和泡腾组分各自单独的渗透效果 的总和。
实施例9比较性的去氨加压素-FAM的体外渗透性
评价了8D-Arg加压素(AVP)(亦称去氨加压素)的体外渗透性。 去氨加压素与血管收缩和利尿疗法有关。去氨加压素-FAM是具有 1442.25的分子量的9个氨基酸的肽。使用上面描述的细胞培养模型， 测量了以下制剂去氨加压素-FAM的渗透性：
表10 比较性的AVP-FAM制剂
 成分(在KRB中)：   只有AVP   AVP+EF 1   AVP+TC   AVP+EF 1+TC  AVP-FAM   100pM/ml   100pM/ml   100pM/ml   100pM/ml  EF 1   -   40mg/ml   -   40mg/ml  牛磺胆酸钠   -   -   10mg/ml   10mg/ml
AVP＝8-Arg加压素；EF1＝赋形剂配方1；TC＝牛磺胆酸钠。 KRB＝Krebs Ringer缓冲溶液。
结果示于图8中。从图中数据可看出，作为活性多肽的去氨加压 素-FAM或AVP-FAM与在给定浓度下的单独的胆盐一起似乎不可观地 增加在体外模型中多肽跨粘膜组织的渗透性。同样地，单独的泡腾赋 形剂组分(实施例1A中所述的赋形剂配方1)与多肽去氨加压素-FAM一 起似乎不可观地增加跨粘膜组织吸收。
然而，泡腾组分与1％胆盐的组合确实似乎增强多肽跨粘膜组织的 转运/渗透性。当一起使用时，牛磺胆酸盐和泡腾赋形剂组分以及多肽 的组合产生的渗透结果似乎大于胆盐和泡腾组分各自单独的渗透效果 的总和。
实施例10比较性的PYY-FAM的体外渗透性
评价PYY或蛋白质YY的体外渗透性。PYY是与肥胖症治疗有关 的34个氨基酸的肽。PYY-FAM的分子量为4407.71。使用上面描述的 细胞培养模型，测量了以下制剂的PYY-FAM的渗透性：
表11 比较性的PYY-FAM制剂
 成分(在KRB中)：   只有PYY   PYY+EF 1   PYY+TC   PYY+EF 1+TC  PYY-FAM   100pM/ml   100pM/ml   100pM/ml   100pM/ml  EF 1   -   40mg/ml   -   40mg/ml  牛磺胆酸钠   -    -   10mg/ml   10mg/ml
PYY＝肽YY；EF1＝赋形剂配方1；TC＝牛磺胆酸钠。KRB＝Krebs Ringer缓冲溶液。
结果示于图9中。从图中数据可看出，作为活性多肽的PYY-FAM 与在给定浓度下的单独的胆盐一起似乎不可观地增加在体外模型中多 肽跨粘膜组织的吸收。同样地，单独的泡腾赋形剂组分(实施例1A中 所述的赋形剂配方1)与多肽PYY-FAM一起似乎不可观地增加跨粘膜 组织吸收。
然而，泡腾组分与1％胆盐的组合确实似乎增强多肽跨粘膜组织的 转运/渗透性。当一起使用时，牛磺胆酸盐和泡腾赋形剂组分以及多肽 的组合产生的渗透结果似乎大于胆盐和泡腾组分各自单独的渗透效果 的总和。
还采用了不使用荧光标记的多肽的其它方法以证实本发明的协同 渗透增强效应。
实施例11通过ELISA进行s-CT分析
通过超敏ELISA试剂盒DSL-10-3600(得自Diagnostic Systems Laboratories，Inc.，Webster，Texas)测量大马哈鱼降钙素或s-CT。使用这 一技术，s-CT被塑料结合型抗体所捕获并采用当与酶特异性底物进行 培养时提供光密度的酶连接型特异性抗体显色。因此，测量了随时间 穿过经培养的颊细胞的s-CT的量并用于计算表观渗透系数(Papp)。
结果示于图10中。从图中数据可看出，作为活性多肽的s-CT与 单独的胆盐(牛磺胆酸钠)的组合，或多肽与单独的泡腾组合物(实施例 1A中所述的泡腾赋形剂配方2并被称作EF 2)的组合，似乎不在体外 模型中显示多肽s-CT跨粘膜组织的渗透的增加。
然而，多肽s-CT、泡腾制剂和1％或2％胆盐的组合确实似乎表现 出多肽跨粘膜组织的渗透/转运的增强。当一起使用时，牛磺胆酸盐和 泡腾赋形剂组分以及多肽的组合产生的渗透结果似乎大于多肽与单独 的所述胆盐所获得的单独的渗透效果和多肽与单独的所述泡腾制剂所 获得的单独的渗透效果的总和。
实施例12 通过HPLC-MS-MS进行去氨加压素分析
开发了液相色谱(LC)-质谱(MS)技术来测量随时间穿过经培养的 颊细胞的去氨加压素的量。然后使用该数据计算表观渗透系数(Papp)。 使用编纂比较性试验信息，制备了图11。
作为活性多肽的去氨加压素(8-Arg加压素并在图中以DP表示)与 在给定浓度下的胆盐(牛磺胆酸钠)的组合，或者与单独的泡腾制剂(实 施例1A中所述的赋形剂配方2并且还称作EF 2)的组合似乎不可观地 增加多肽在体外模型中跨粘膜组织的渗透。然而，多肽(DP)、泡腾制剂 和1％或2％胆盐的组合确实似乎表现出多肽跨粘膜组织的转运/渗透性 有明显增强。因此，用于肽量化的LC/MS/MS技术一般地支持和确证 了如上文所述的采用荧光标记的多肽技术所获得到结果。
实施例13 通过ELISA进行IFNα-2b分析
本发明试验了作为生物活性多肽的重组人干扰素α-2b(IFNα)(分 子量为19,271道尔顿并具有166个氨基酸，并具有比放射性为260× 106IU/mg蛋白质)(INTRONTM A，得自Schering Corp.，Kenilworth，New Jersey)。IFNα是参予与病毒感染有关的免疫功能的细胞因子。使用 ELISA技术(ELISA试剂盒41110-2，得自PBL Interferon Source，Inc.， Piscataway，New Jersey)测量活性多肽。在该分析中，测量了随时间穿 过经培养的颊细胞的IFNα的量并用于计算表观渗透系数(Papp)。结果 如图12所示。
从图中可见，作为生物活性多肽的IFNα与单独的胆盐的组合以 及与单独的泡腾组合物(实施例1A中所述的赋形剂配方1并还被称作 EF1)的组合确实似乎不可观地增加IFNα在体外模型中跨粘膜组织的 渗透。然而，IFNα、1％或2％胆盐和泡腾组合物的组合确实似乎产生 多肽跨粘膜组织有明显增强。牛磺胆酸盐和泡腾制剂以及IFNα的组合 产生的渗透结果似乎大于由单独的胆盐和单独的泡腾组合物所获得的 单独渗透效果的总和。这些得自ELISA技术的结果一般地支持和确证 了通过上述的荧光标记的多肽渗透试验所获得的结果。
增强的颊多肽渗透的体内试验
麻醉的狗模型规程
使用麻醉的狗模型来评价根据本发明制备的多肽组合物的经粘膜 渗透。筛选成熟的杂种大型品种(15-35千克)狗用于具有合格的医学状 况。对于试验，将狗麻醉，将其右侧或左侧放置并经头静脉插管。在 水平位置将特氟隆环附着于颊粘膜以形成储库。在有或者没有增强剂 组分的条件下将生物活性多肽沉积在环周围的颊粘膜上。根据实验而 定，活性多肽以溶液、干粉或固体剂型(片剂)的形式被沉积。在2 小时内每10分钟采集血样，根据规程而定，另外采集样本达到4小时。 包含活性多肽的组合物在第60分钟从储库中被除去，储库被清洗两次。
在2小时，使狗从麻醉中恢复并且从其颊粘膜上除去环。在从麻 醉中恢复后，随后从清醒的狗中采集血样。使血样凝结，并通过离心 分离血浆，将血浆在-20℃或-80℃冷冻，这根据规程的不同而异，直到 进行活性多肽含量分析之前为止。
实施例14
A.去氨加压素经口腔粘膜渗透
通过各种给药形式：溶液、粉末和压缩片剂评价了去氨加压素(去 氨-Cys1-D-Arg加压素或D-Arg加压素)的向血流内的颊渗透。使用单 独的泡腾组合物EF 1(实施例1A)，使用胆盐(牛磺胆酸钠)，使用胆盐 和泡腾组合物的组合试验了去氨加压素。另外，使用泡腾赋形剂成分 (EF 1和实施例1A)、以及基础泡腾制剂EF 2(实施例1A)试验了去氨加 压素。
去氨加压素片剂的制备
如下制备用于实验的包含去氨加压素的片剂：将200毫克的实施 例1A的泡腾制剂(EF 1)与20毫克的牛磺胆酸钠混合。将该混合物直接 加入到冻干去氨加压素的小瓶中。将带有粉末的小瓶混合30分钟，然 后使用装备有5/16”圆直径、斜缘D-尺寸机床的Piccola 8站压片机压 缩成片剂。将得自单独小瓶的粉末沉积在各冲模中并在约3kN压力下 进行手工压缩。已经制备了几个供试片剂，其仅包含泡腾组合物和胆 盐，以确定在制备包含活性多肽的片剂之前的最佳压缩条件。最终获 得的片剂在-20℃下在干燥条件下被保持直到用于研究之前为止。
因此根据上述规程在狗中对所制备的片剂进行了试验。当在该研 究中使用片剂时，将片剂直接置于狗颊粘膜上并用水在1分钟内进行 水合。按序取得血样并提取血浆。使用血浆样品的LC/MS/MS分析来 测量去氨加压素。
下表包含被评价的制剂信息以及得自体内试验的生物利用度结 果。
表12a 比较性的体内制剂和结果
  制剂   只有DP   (溶液)   DP+EF1   (溶液)   DP+TC   (溶液)   DP+EF2   +TC   (溶液)   DP+EF1   +TC   (粉末)   DP+EF1   +TC   (片剂)   去氨   加压素   830μg-   415μg/ml，2ml   830μg-   415μg/ml，2ml   830μg-   415μgml， 2ml   830μg-   415μg/ml-2ml   830μg   830μg   EF 1   -   200mg   (粉末)    -    -   200mg   (粉末)   200mg   EF 2   -     -    -   93mg   (粉末)    -    -   TC   -     -   20mg   (粉末)    -   20mg   (粉末)   20mg   加入的   盐水   2ml   2ml   2ml   2ml   2ml   2ml   结果   f平均   数)   首次被   观察到   未观察到   -   未观察到   未观察到   17.5±5.0min   10min   10min   Cmax   未观察到   未观察到   未观察到   9.3±1.6ng/ml   16.0±1.0ng/ml   9.5±3.1ng/ml   Tmax   未观察到   未观察到   未观察到   103±15min   75.0±7.1min   90.0±14.1min
DP＝去氨加压素；TC＝牛磺胆酸钠；EF1＝赋形剂配方1；EF2＝赋 形剂配方2。
从上面数据可见，作为生物活性多肽的去氨加压素与在给定浓度 下胆盐的组合，或者与泡腾制剂的组合，似乎不可观地增加多肽在体 内模型中跨粘膜组织的渗透。然而，胆盐与泡腾制剂的组合似乎增强 多肽跨粘膜组织的转运/渗透。牛磺胆酸盐和泡腾组合物以及多肽的组 合似乎产生渗透结果，而当与去氨加压素一起使用单独的胆盐或单独 的泡腾组合物时，未观察到结果。
另外，尽管不希望束缚于任何理论，当泡腾制剂与牛磺胆酸组合 使用时在增强去氨加压素渗透方面也似乎可能是有效的，并且因此可 表明，较宽的泡腾组合物(赋形剂配方1)的核心泡腾配方部分(赋形剂配 方2)，二者都在实施例1A中被描述，当与牛磺胆酸盐配对使用时是协 同作用的有效部分。
B.大马哈鱼降钙素经口腔粘膜渗透
使用包含s-Ct和0％、2.5％、5.0％和10％的胆盐(牛磺胆酸钠)的泡 腾压缩片剂，试验了大马哈鱼降钙(s-Ct)进入麻醉的狗的血流中的颊渗 透。使用与上面关于去氨加压素所述类似的技术和设备制备了片剂。 下表包含被评价的制剂信息和片剂。
表12b.
  制剂   无NaTC   2.5％NaTC   5％NaTC   10％NaTC   大马哈鱼降钙素   1.00   1.00   1.00   1.00   牛磺胆酸钠   0.00   5.00   10.00   20.00   氯化钠   2.17   1.63   1.09   0.00   甘露醇60   80.83   76.37   71.91   63.00   碳酸氢钠   42.00   42.00   42.00   42.00   柠檬酸   30.00   30.00   30.00   30.00   碳酸钠   20.00   20.00   20.00   20.00   交聚维酮   20.00   20.00   20.00   20.00   硬脂酸镁   4.00   4.00   4.00   4.00   总计   200.00   200.00   200.00   200.00
使用关于在狗中试验去氨加压素的规程在麻醉的狗中试验了片 剂。如下表所阐明的，在麻醉的狗中，当NaTC被加入到泡腾制剂中时， 通过AUC的较大增加(使用梯形法则计算)证明了s-Ct的经粘膜渗透 性有改善。尽管在狗之间存在吸收差异，但是对于每个单独的狗而言， 数据具有一致性。通过向泡腾制剂中加入2.5％或更高的NaTC可获得 渗透性的较大改善。
表12C.不同量的NaTC的AUC(pg min/mL)对泡腾片剂(所有片 剂包含sCt和EF1)中sCt的渗透性的体内影响
  狗   无NaTC   2.5％NaTC   5％NaTC   10％NaTC   10％NaTC重复   90   21,000   100,000   190,000   95   11,000   130,000   255,000   101   80,000   200,000   300,000   320,000   103   95,000   230,000   300,000   380,000
实施例15
A.比较性的体内胰岛素(溶液)渗透研究
在以溶液形式被施加到狗颊粘膜的组合物中试验了人重组胰岛素 进入血流的颊渗透。试验了单独的胰岛素与泡腾制剂EF1(实施例1A)， 与胆盐的组合，以及与胆盐和泡腾制剂EF1和EF2的组合。用于该研 究的规程牵涉“葡萄糖钳夹”类型规程，从而随着时间输注以保持血 糖水平相对稳定所必需的量的5％的葡萄糖。记录了使用的葡萄糖的总 量作为被吸收的功能性生物活性胰岛素的量的间接测量值。另外，使 用ELISA试剂盒(KAQ 1251，得自Biosource，Camarillo，California)测试 血浆样品的胰岛素水平来直接测量被吸收的胰岛素。测量了随时间穿 过颊组织的胰岛素的量。使用赋形剂配方1(EF 1)以及泡腾制剂赋形剂 配方2(EF 2)测量了胰岛素。供试制剂和结果概括在下表中。
表13 比较性的体内胰岛素制剂和结果
  制剂   只有In   (溶液)   In+EF1   (溶液)   In+EF2   (溶液)   In+TC   (溶液)   In+EF1   +TC   (溶液)   IN+EF2   +TC   (溶液)   胰岛素   1IU/kg/ml   1IU/kg/ml   1IU/kg/ml   1IU/kg/ml   1IU/kg/ml   1IU/kg/ml   EF1    -   200mg   (粉末)    -    -   200mg   (粉末)    -   EF2    -   -   93mg   (粉末)    -    -   93mg   (粉末)   TC    -   -   -   20mg   (粉末)   20mg   (粉末)   20mg   (粉末)   盐水   2ml   2ml   2ml   2ml   2ml   2ml   结果   (平均数)   首次观察   的In   60min.   20±14   min.   15±10min   未观察到   13±5min.   10min.   Cmax   549±776   ng/ml   524±252   ng/ml   582±347   ng/ml   未观察到   1814±638   ng/ml   1754±773   ng/ml   Tmax   80min   75±21   min   70±12min   未观察到   58±5min   60min   使用的葡   萄糖   1164±1435   mg   235±469   mg   292±584   mg   167±18   mg   7273±4959   mg   9406±9429   mg
In＝胰岛素；EF1＝赋形剂配方1；EF2＝泡腾组合物赋形剂配方2； TC＝牛磺胆酸钠。
B.比较性的体内胰岛素(片剂)渗透研究
根据以下配方将粉末形式的胰岛素配制成片剂：
表14 比较性的胰岛素片剂(200毫克)制剂
  成分：   只有In   (片剂)   In+EF1   (片剂)   In+TC   (片剂)   In+EF1+TC   (片剂)   胰岛素(In)   2.86mg   2.86mg   2.86mg   2.86mg   牛磺胆酸钠   (TC)   -   -   20mg   20mg   甘露醇   173.14mg   81.14mg   153.14mg   61.14mg   碳酸氢钠   -   42mg    -   42mg   柠檬酸   -   30mg    -   30mg   碳酸钠   -   20mg    -   20mg   交聚维酮   20mg   20mg   20mg   20mg   硬脂酸镁   4mg   4mg   4mg   4mg   总计：   200mg   200mg   200mg   200mg
In＝胰岛素；EF1＝赋形剂配方1；TC＝牛磺胆酸钠。
使用与上面关于去氨加压素所述类似的技术和设备制备了片剂， 并且使用如上所述的麻醉的狗模型规程在狗中试验了片剂。对于体内 狗研究，将片剂直接置于颊粘膜上并与水在1分钟内进行水合。收集 血浆样品并使用ELISA试剂盒进行分析，分析了数据并获得了平均结 果。结果概括在下表中：
表15 胰岛素片剂(200毫克)的体内渗透性数据
  制剂   只有In   (片剂)   In+EF1   (片剂)   In+TC   (片剂)   In+EF1+TC   (片剂)   首次观察到In   35±21min   10min   15±7min   10min   Cmax   428±18pg/ml   1260±53pg/ml   439±204pg/ml   3503±1505pg/ml   Tmax   90±42min   65±7min   55±7min   67±12min   使用的葡萄糖   0   0   0   20639±7607mg
In＝胰岛素；EF1＝赋形剂配方1；TC＝牛磺胆酸钠。
实施例16比较性的胆盐数据
进行了实验以确定可在本发明中行得通的最有效的胆盐。最初在 细胞培养试验(体外)中测量胆盐候选物的毒性水平。制备并试验了被溶 解在Krebs-Ringer缓冲溶液中并进行连续2倍稀释的胆盐的溶液。对 样品进行MTS毒性试验(可由本领域技术人员容易地获知)。使用获得 的Tox 50值，测定了胆盐与规定量的赋形剂配方1粉末的组合的增强 能力。以2X、1X、1/2X和1/4X Tox 50量制备了样品并评价了其单独 的以及与约5到6μg的上述泡腾赋形剂制剂(赋形剂配方1)的渗透性增 强能力。因此，比较了与泡腾赋形剂组分的增强能力和协同能力。
筛选经过如此试验的胆盐的广泛集合，用于在本发明的背景下与 泡腾赋形剂制剂组合时的预期增强性质。因此，基于预期评价结果选 择了以下的胆盐：牛磺胆酸钠(TC)，甘胆酸钠(GC)，甘氨脱氧胆酸钠 (GDC)，牛磺脱氧胆酸钠(TDC)，胆酸钠(C)，牛磺鹅去氧胆酸钠(TCDC) 和牛磺熊去氧胆酸钠(TUDC)，及其组合。
增强比(ER)是使用增强剂治疗的表观渗透系数除以使用单独的活 性成分的表观渗透系数的比。对于每种供试的胆盐实施了这一技术和 计算。
结果示于图13中。从图中数据可知，对于每种供试的七种胆盐， 根据本发明的组合物的活性多肽(胰岛素)与胆盐和泡腾赋形剂组分二 者的组合，似乎产生由ER所显示的实质上更高的渗透性效果，这与分 别使用渗透增强剂(即，单独的胆盐或单独的泡腾赋形剂)相比。
从图13中可知，使用多肽与单独的胆盐的组合的制剂，使用多肽 与单独的泡腾赋形剂组分的组合的制剂，似乎都不能实现渗透性水平 到多肽(胰岛素)与胆盐和泡腾赋形剂组分二者的最终组合所实现的程 度。这一结果似乎是一致性的，与制剂中使用的胆盐无关。
实施例17 通过ELISA进行IGF-1分析
评价了胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的体外渗透性。IGF-1由具有3 个内部二硫键的70个氨基酸组成。其具有约7600道尔顿的分子量。 IGF-1是具有多种作用的复合生长因子。使用上面描述的细胞培养模 型，测量了IGF-1的渗透性。通过ELISA试剂盒(DG-100，R&D Systems， Minneapolis MN)测量了IGF-1。使用这一技术，IGF-CT被塑料结合型 抗体所捕获并采用当与酶特异性底物进行培养时提供光密度的酶连接 型特异性抗体显色。因此，测量了随时间穿过经培养的颊细胞的IGF-1 的量并用于计算表观渗透系数(Papp)。
结果示于图14中。从图中数据可看出，作为活性多肽的IGF-1与 单独的胆盐(牛磺胆酸钠)的组合，或多肽与单独的泡腾组合物(实施例 1A中所述的泡腾赋形剂配方2并被称作EF 2)的组合，似乎不在体外 模型中显示多肽IGF-1跨粘膜组织的渗透的增加。
然而，多肽IGF-1、EF2和1％胆盐的组合确实似乎表现出多肽跨 粘膜组织的渗透/转运的增强。当一起使用时，牛磺胆酸盐和泡腾赋形 剂组分制剂以及多肽的组合产生的渗透结果似乎大于多肽与单独的所 述胆盐组合所获得的单独的渗透效果和多肽与单独的所述泡腾制剂组 合所获得的单独的渗透效果的总和。这些使用ELISA技术的结果一般 地支持和确证了通过上述的荧光标记的多肽渗透试验所获得的结果。
实施例18通过酶活性进行辣根过氧化酶分析
获得了用生物素(Sigma Chemicals，St.Louis MO)标记的辣根过氧 化酶(HRPO-b)。HRPO-b是具有约34,000道尔顿的分子量的308个氨 基酸。其是在生物鉴定诸如ELISA中使用的常见的酶。其使用涂有链 霉亲和素的磁珠使其与样品的其它组分纯化分开。通过在450nM的 O.D下分析过氧化物酶底物(R&D Systems，Minneapolis MN)的转化测 量经过洗涤的磁珠上的HRPO-b的酶活性。因此，测量了随时间穿过 经培养的颊细胞的HRPO-b的量并用于计算表观渗透系数(Papp)。
结果示于图15中。从图中数据可看出，作为活性多肽的HRPO-b 自身，与单独的胆盐(牛磺胆酸钠)的组合，或该多肽与单独的泡腾组合 物(实施例1A中所述的泡腾赋形剂配方2并被称作EF 2)的组合，似 乎不在体外模型中显示多肽HRPO-b跨粘膜组织的渗透的增加。
然而，多肽IGF-b、EF2和1％胆盐的组合确实似乎表现出多肽跨 粘膜组织的渗透/转运的增强。当一起使用时，牛磺胆酸盐和泡腾赋形 剂组分制剂以及多肽的组合产生的渗透结果似乎大于多肽与单独的所 述胆盐组合所获得的单独的渗透效果和多肽与单独的所述泡腾制剂组 合所获得的单独的渗透效果的总和。这些使用原初酶活性一般地支持 和确证了通过上述的荧光标记的多肽渗透试验所获得的结果。
上文所述的实验数据似乎支持了在本发明组合物的泡腾组分成 分、胆盐和生物活性多肽成分之间的协同的相互作用。尽管不束缚于 任何理论，据信泡腾赋形剂制剂与胆盐成分以促进多肽跨粘膜转运(作 为药物递送途径)的方式相互作用。另一个可能的解释可以是，泡腾组 分和胆盐的单独效果的组合对粘膜组织产生了更大的总的净细胞渗透 性。
工业实用性
本发明可用于将各种多肽经由经口腔粘膜递送途径递送到接受 者。另外，本发明可用于医药、药物或营养领域中。
已经在上文中参考多种和特定的实施方案和技术描述了本发明。 然而，本领域普通技术人员可理解的是，可对这些实施方案和技术进 行合理的变化和改变，而不显著脱离由权利要求书所定义的本发明的 精神或范围。