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螺内酰胺衍生物及其用途

阅读：380发布：2021-01-05

专利汇可以提供螺内酰胺衍生物及其用途专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 提供式(I)的螺内酰胺衍 生物 ：其中R1-R7如 说明书 中定义的；或其药学上可接受的盐；以及药物组合物及其用途。，下面是螺内酰胺衍生物及其用途专利的具体信息内容。

1.式(I)的化合物：
其中：
1 2
R 和R 各自独立地为芳基、杂芳基、烷基、环烷基、酮基环烷基或杂环基，其任选用烷基、环烷基、烷氧基、羟基、卤素、氰基、三氟烷基、氨基、酰基、芳基、杂芳基、杂环基、-C(O)
30 30 31 30 30 31 30 30 31 30
NHR 、-C(O)N(R )R 、-NHC(O)R 、-N(R )C(O)R 、-NHR 、-N(R )R 或-OR 独立地单-、二-或三-取代；其中：
30 31
R 和R 各 自 独 立 地 为C1-C6烷 基 或 C1-C6环 烷 基，其 任 选 用 酰 基、卤素、-CN、-NH2、-NH(C1-C3烷基)、-N(C1-C3烷基)2、C1-C3烷基杂环基、C1-C3烷基氨基甲酸根、-C(O)NH(C1-C3烷基)、-C(O)N(C1-C3烷基)2、-NHC(O)-C1-C3烷基、-N(C1-C3烷基)-C(O)-C1-C3烷基、OH或-O-C1-C6烷基取代；和
各芳基、杂芳基、杂环基取代基任选用C1-3烷基、C3-5环烷基、C1-3烷氧基、羟基、卤素、氰基、三氟烷基或氨基取代；
3 4 5 6
R、R、R 和R 各自独立地为H、C1-3烷基、C3-5环烷基、卤素或羟基；
7
R 为H；或
1 7
R 和R 连同它们所连接的-C(O)N-形成单-或双环4-至12-元杂环烷基或杂芳基，其任选包含1-3个额外的杂原子；或
其药学上可接受的盐。
1 2
2.权利要求1的化合物，其中R 和R 都为芳基。
1 2
3.权利要求1的化合物，其中R 和R 都为杂芳基。
1 2
4.权利要求1的化合物，其中R 为芳基和R 为杂芳基。
1 2
5.权利要求1的化合物，其中R 为杂芳基和R 为芳基。
1 2
6.权利要求1的化合物，其中R 或R 为杂芳基。
1 2
7.权利要求1的化合物，其中R 或R 为芳基。
8.权利要求1的化合物，其中至少一个芳基为苯基。
1 2
9.权利要求1的化合物，其中R 为芳基或杂芳基，并且R 为环烷基、酮基环烷基或杂环基。
10.权利要求1的化合物，其中所述单-、二-或三-取代基独立地选自甲基、甲氧基、二甲基氨基-乙氧基、氨基、甲基氨基、二甲基氨基、氰基、氯、氰基、二甲基氨基、二甲基氨基-乙氧基、甲基、甲基氨基、甲氧基、氟、-C(O)NHCH3、苯基、呋喃基、吡咯烷基、噻吩基和三氟甲基。
11.权利要求10的化合物，其中所述苯基任选用氟取代。
12.权利要求1的化合物，其中所述化合物为：
反式-吡啶-2-羧酸[2-(3-氯-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰
胺；
顺式-吡啶-2-羧酸[2-(3-氯-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰
胺；
反式-6-甲基-吡啶-2-羧酸[2-(3-氯-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
顺式-6-甲基-吡啶-2-羧酸[2-(3-氯-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
吡啶-2-羧酸[(5R,7R)-2-(3-氯-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰
胺；
吡啶-2-羧酸[(5S,7S)-2-(3-氯-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰
胺；
顺式-吡啶-2-羧酸[2-(6-甲基-吡啶-2-基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
3-氯-N-[2-(6-甲基-吡啶-2-基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-苯甲酰
胺；
顺式-吡啶-2-羧酸[2-(3-氰基-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰
胺；
顺式-6-甲基-吡啶-2-羧酸[2-(3-氰基-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
顺式-6-甲基-吡嗪-2-羧酸[2-(3-氰基-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
顺式-6-甲基-吡嗪-2-羧酸[2-(3-氯-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
顺式-吡嗪-2-羧酸[2-(3-氯-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰
胺；
顺式-1-甲基-1H-吡唑-3-羧酸 [2-(3-氯-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
顺式-N-[2-(3-氰基-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]-癸-7-基]-3-氟-苯甲
酰胺；
顺式-N-[2-(3-氰基-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]-癸-7-基]-3-氯-苯甲
酰胺；
顺式-6-甲基-吡啶-2-羧酸[2-(3-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
反式-6-甲基-吡啶-2-羧酸[2-(3-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
顺式-吡啶-2-羧酸[2-(3-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰
胺；
反式-吡啶-2-羧酸[2-(3-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰
胺；
顺式-6-甲基-吡嗪-2-羧酸[2-(3-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
反式-6-甲基-吡嗪-2-羧酸[2-(3-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
顺式-6-甲基-吡啶-2-羧酸[2-(6-甲基-吡啶-2-基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
反式-3-氟-N-[2-(6-甲基-吡啶-2-基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-苯
甲酰胺；
吡啶-2-羧酸[(5R,7R)-2-(3-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰
胺；
3-氟-N-(1-氧代-2-吡啶-2-基-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基)-苯甲酰胺；
顺式-3-氟-N-[2-(6-甲基-吡啶-2-基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-苯
甲酰胺；
3- 氟-N-[(5R,7R)-2-(6- 甲 基- 吡 啶 -2-基 )-1- 氧 代 -2- 氮 杂- 螺 [4.5]癸-7-基]-苯甲酰胺；
顺式-吡啶-2-羧酸[2-(4-甲基-嘧啶-2-基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
顺式 -吡啶 -2-羧酸 [2-(4-氟-吡 啶-2-基)-1-氧 代-2-氮 杂-螺 [4.5]
癸-7-基]-酰胺；
顺式-6-甲基-吡啶-2-羧酸[2-(5-氟-吡啶-2-基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
顺式-6-甲基-吡啶-2-羧酸[2-(4-氟-吡啶-2-基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
顺式 -吡啶 -2-羧酸 [2-(5-氟-吡 啶-2-基)-1-氧 代-2-氮 杂-螺 [4.5]
癸-7-基]-酰胺；
顺式-6-甲基-吡啶-2-羧酸[2-(4-甲基-嘧啶-2-基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
顺式-3-氟-N-[2-(5-氟-吡啶-2-基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-苯
甲酰胺；
顺式-3-氟-N-[2-(4-氟-吡啶-2-基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-苯
甲酰胺；
顺式-3-氟-N-[2-(4-甲基-嘧啶-2-基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-苯
甲酰胺；
顺式-3-氟-N-[2-(6-甲基-吡嗪-2-基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-苯
甲酰胺；
顺式-吡啶-2-羧酸[2-(6-甲基-吡嗪-2-基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
顺式-6-甲基-吡啶-2-羧酸[2-(6-甲基-吡嗪-2-基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
顺式-6-甲基-吡啶-2-羧酸[1-氧代-2-(6-三氟甲基-吡啶-2-基)-2-氮杂-螺
[4.5]癸-7-基]-酰胺；
顺式-6-甲基-吡啶-2-羧酸[2-(3,5-二氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
顺式-6-甲基-吡啶-2-羧酸[2-(6-氰基-吡啶-2-基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
顺式-6-甲基-吡啶-2-羧酸[2-(4-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
6-甲基-吡啶-2-羧酸(1-氧代-2-吡啶-2-基-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基)-酰
胺；
顺式-6-甲基-吡啶-2-羧酸(1-氧代-2-苯基-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基)-酰
胺；
顺式-6-甲基-吡啶-2-羧酸(1-氧代-2-间甲苯基-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基)-酰
胺；
顺式-6-甲基-吡啶-2-羧酸[2-(4-甲基-吡啶-2-基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
顺式-6-甲基-吡啶-2-羧酸[2-(5-甲基-吡啶-2-基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
顺式-6-甲基-吡啶-2-羧酸[2-(3-甲基-吡啶-2-基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
顺式-6-甲基-吡啶-2-羧酸[2-(2-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
顺式-6-甲基-吡啶-4-羧酸[2-(2-甲基-吡啶-4-基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
顺式-N-[2-(6-氰基-吡啶-2-基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-3-氟-苯
甲酰胺；
顺式-吡啶-2-羧酸[2-(3,5-二氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰
胺；
顺式-6-甲基-吡嗪-2-羧酸[2-(3,5-二氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
顺式-吡嗪-2-羧酸[2-(3,5-二氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰
胺；
顺式-2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(5-氟-吡啶-2-基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
顺式-3-氯-N-2-(2-甲基-嘧啶-4-基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-苯
甲酰胺；
顺式-2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(6-甲基-吡嗪-2-基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
顺式-2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(3-氰基-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
顺式-2-甲基-嘧啶-4-羧酸[1-氧代-2-(6-三氟甲基-吡啶-2-基)-2-氮杂-螺
[4.5]癸-7-基]-酰胺；
顺式-6-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(2-甲基-嘧啶-4-基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
顺式-6-甲基-吡啶-2-羧酸[2-(6-甲基-吡啶-3-基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
顺式-6-甲基-吡啶-2-羧酸[2-(5-氟-吡啶-3-基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
顺式-3-氟-N-[2-(2-甲基-嘧啶-4-基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-苯
甲酰胺；
顺式-3-氟-N-[2-(2-甲基-吡啶-4-基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-苯
甲酰胺；
6-甲基-吡啶-2-羧酸[(5R,7R)-2-(3,5-二氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
顺式 -5-氟-吡 啶-2-羧 酸[2-(3-氟-苯 基)-1-氧 代-2-氮 杂-螺 [4.5]
癸-7-基]-酰胺；
顺式-2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(3-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
顺式-嘧啶-4-羧酸[2-(3-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰
胺；
顺式-6-甲基-吡啶-2-羧酸[2-(5-甲基-吡啶-3-基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
顺式-6-甲基-吡啶-2-羧酸[2-(3-甲氧基-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
6-甲基-吡啶-2-羧酸[(5R,7R)-2-(5-氟-吡啶-2-基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
顺式 -吡啶 -2-羧酸 [2-(5-氟-吡 啶-3-基)-1-氧 代-2-氮 杂-螺 [4.5]
癸-7-基]-酰胺；
顺式-吡啶-2-羧酸[2-(3,4-二氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰
胺；
顺式-2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(3,5-二氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
顺式-N-[2-(3-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]-癸-7-基]-异烟酰胺；
顺式-N-[2-(3-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]-癸-7-基]-2-甲基异烟酰
胺；
顺式-嘧啶-4-羧酸[2-(3,5-二氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂螺[4.5]癸-7-基]-酰
胺；
6-甲基-吡啶-2-羧酸[(5R,7R)-2-(4-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
6-甲基-吡啶-2-羧酸[(5S,7S)-2-(3,5-二氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
2-甲基-嘧啶-4-羧酸[(5R,7R)-2-(3,5-二氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
顺式-6-甲基-吡啶-2-羧酸(2-苄基-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基)-酰
胺；
顺式-3-甲基-N-[2-(2-甲基-嘧啶-2-基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-苯
甲酰胺；
顺式-3,5-二氟 -N-[2-(2-甲基-嘧啶-4-基)-1- 氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-苯甲酰胺；
顺式-6-甲基-吡嗪-2-羧酸{2-[6-(4-氟-苯基)-嘧啶-4-基]-1-氧代-2-氮
杂-螺{4.5]癸-7-基}-酰胺；
顺式-6-甲基-吡啶-2-羧酸{2-[6-(4-氟-苯基)-嘧啶-4-基]-1-氧代-2-氮
杂-螺{4.5]癸-7-基}-酰胺；
顺式-3-氟-N-{2-[6-(4-氟-苯基)-嘧啶-4-基]-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基}-苯甲酰胺；
顺式-4-氟-N-[2-(2-甲基-嘧啶-4-基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-苯
甲酰胺；
顺式-3,4-二 氟-N-[2-(2-甲基-嘧啶 -4-基)-1-氧代-2-氮杂 -螺[4.5]
癸-7-基]-苯甲酰胺；
顺式-2-氟-N-[2-(2-甲基-嘧啶-4-基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-苯
甲酰胺；
顺式-2-甲基-N-[2-(2-甲基-嘧啶-4-基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-异
烟酰胺；
顺式-6-羟甲基-吡啶-2-羧酸[2-(3-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
顺式-6-三氟甲基-吡啶-2-羧酸[2-(3-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
N-[(5R,7R)-2-(3-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-2-甲基-异烟
酰胺；
顺式-6-三氟甲基-吡啶-2-羧酸[2-(2-三氟甲基-嘧啶-4-基)-1-氧代-2-氮
杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺；
吡啶-2-羧酸[9,9-二氟-2-(3-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰
胺；
吡啶-2-羧酸[(5R,7S)-9,9-二氟-2-(3-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
吡啶-2-羧酸[(5S,7R)-9,9-二氟-2-(3-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；或
顺式-2-[2-(3-氯-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-2,3-二氢-异吲
哚-1-酮；
吡啶-2-羧酸[(5S,7S)-9,9-二氟-2-(3-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
吡啶-2-羧酸[(5R,7R)-9,9-二氟-2-(3-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
2-甲基-嘧啶-4-羧酸[(5S,7R)-9,9-二氟-2-(3-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺
[4.5]癸-7-基]-酰胺；
2-甲基-嘧啶-4-羧酸[(5R,7S)-9,9-二氟-2-(3-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺
[4.5]癸-7-基]-酰胺；
反式-2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(3,5-二氟-苯基)-9,9-二氟-1-氧代-2-氮杂-螺
[4.5]癸-7-基]-酰胺；
顺式-吡啶-2-羧酸[9,9-二氟-2-(4-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
顺式-6-甲基-吡啶-2-羧酸[9,9-二氟-2-(3-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺
[4.5]癸-7-基]-酰胺；
顺式-6-甲基-吡啶-2-羧酸[9,9-二氟-2-(2-甲基-嘧啶-4-基)-1-氧代-2-氮
杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺；
顺式-6-甲基-吡啶-2-羧酸[9,9-二氟-2-(5-氟-吡啶-2-基)-1-氧代-2-氮
杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺；
顺式-吡啶-2-羧酸[2-(3,5-二氟-苯基)-9,9-二氟-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
顺式-吡啶-2-羧酸[9,9-二氟-2-(5-氟-吡啶-2-基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
顺式-吡啶-2-羧酸[9,9-二氟-2-(2-甲基-嘧啶-4-基)-1-氧代-2-氮杂-螺
[4.5]癸-7-基]-酰胺；
吡啶-2-羧酸[(5S,7R)-2-(3,5-二氟-苯基)-9,9-二氟-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
吡啶-2-羧酸[(5R,7S)-2-(3,5-二氟-苯基)-9,9-二氟-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
顺式-2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(3,5-二氟-苯基)-1,9-二氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
顺式-2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(3,5-二氟-苯基)-9-羟基-1-氧代-2-氮杂-螺
[4.5]癸-7-基]-酰胺；
反式-2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(3,5-二氟-苯基)-9-羟基-1-氧代-2-氮杂-螺
[4.5]癸-7-基]-酰胺；
2-甲基-嘧啶-4-羧酸[(5R,7S,9S)-2-(3,5-二氟-苯基)-9-羟基-9-甲基-1-氧
代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺；
2-甲基-嘧啶-4-羧酸[(5R,7S,9R)-2-(3,5-二氟-苯基)-9-羟基-9-甲基-1-氧
代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺；
N-[(5S,7R)-9,9-二氟-2-(2-甲基-嘧啶-4-基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-3-氟-苯甲酰胺；
N-[(5R,7S)-9,9-二氟-2-(2-甲基-嘧啶-4-基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-3-氟-苯甲酰胺；
反式-2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(3,5-二氟-苯基)-9-氟-1-氧代-2-氮杂-螺
[4.5]癸-7-基]-酰胺；
顺式-3-氟-N-[2-(3-氟-苯基)-1,9-二氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-苯甲
酰胺；
顺式-6-甲基-吡啶-2-羧酸[2-(3-氟-苯基)-1,9-二氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
反式-3-氟-N-[2-(3-氟-苯基)-9-羟基-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-苯
甲酰胺；
反式-6-甲基-吡啶-2-羧酸[2-(3-氟-苯基)-9-羟基-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
6-甲基-吡啶-2-羧酸[(5S,7R)-9,9-二氟-2-(5-氟-吡啶-2-基)-1-氧代-2-氮
杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺；
顺式-N-[9,9-二 氟-2-(2-甲基-嘧啶 -4-基)-1-氧代-2-氮杂- 螺[4.5]
癸-7-基]-3-氟-苯甲酰胺；
顺式-2-甲基-嘧啶-4-羧酸[9,9-二氟-2-(3-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
顺式-3-氟-N-[2-(3-甲氧基-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-苯甲
酰胺；
顺式-3-氟-N-[2-(3-羟基-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-苯甲酰
胺；
顺 式-N-[(5S,7S)-2-(3-二 甲 基 氨 基 -苯 基)-1-氧 代 -2-氮 杂-螺 [4.5]癸-7-基]-3-氟-苯甲酰胺；
顺式-3-氟-N-[2-(4-甲氧基-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-苯甲
酰胺；
顺式-3-氟-N-{2-[3-(3-吗啉-4-基-丙基)-苯基]-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基}-苯甲酰胺；
顺式-3-氟-N-[2-(3-氟-5-甲氧基-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-苯
甲酰胺；
顺式-3-氟-N-{1-氧代-2-[3-(2-氧代-2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-2-氮
杂-螺[4.5]癸-7-基}-苯甲酰胺；
顺式-噻唑-2-羧酸[2-(3-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰
胺；
顺式-N-[2-(4-二甲基氨基-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]-癸-7-基]-3-氟-苯
甲酰胺；
顺式-3-氟-N-(1-氧代-2-噻唑-2-基-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基)-苯甲酰胺；
顺式-噻唑-2-羧酸[(2-(2-甲基-嘧啶-4-基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
顺式-2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(3-氟-5-甲氧基-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺
[4.5]癸-7-基]-酰胺；
顺式-N-[2-(3-氰基-5-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]-癸-7-基]-3-氟-苯
甲酰胺；
顺式-噻唑-2-羧酸[2-(3,5-二氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰
胺；
顺式-2-甲基-噻唑-4-羧酸[2-(3,5-二氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
顺式-戊酸[2-(3,5-二氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺；
顺式-N-[2-(3,5-二氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-丁酰胺；
3-氟 -N-[(5R,7R)-2-(2- 甲 基- 嘧 啶-4- 基 )-1- 氧 代 -2- 氮 杂 - 螺 [4.5]癸-7-基]-苯甲酰胺；
3-氯 -N-[(5R,7R)-2-(2- 甲 基- 嘧 啶-4- 基 )-1- 氧 代 -2- 氮 杂 - 螺 [4.5]癸-7-基]-苯甲酰胺；
顺式-5-氟-吡啶-2-羧酸[(2-(2-甲基-嘧啶-4-基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
顺式-3-氟-N-[-1-氧代-2-(2-三氟甲基-嘧啶-4-基)-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-苯甲酰胺；
顺 式 -N-[2-(2,6- 二 甲 基 - 嘧 啶 -4- 基 )-1- 氧 代 -2- 氮 杂 - 螺 [4.5]癸-7-基]-3-氟-苯甲酰胺；
3-甲基 -N-[(5R,7R)-2-(2-甲基- 嘧啶-4-基)-1- 氧代-2- 氮杂-螺 [4.5]
癸-7-基]-苯甲酰胺；
顺式-3-氟-N-(2-甲基-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基)-苯甲酰胺；
顺式-3-氟-N-(2-乙基-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基)-苯甲酰胺；
顺式-3-氟-N-(2-丙基-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基)-苯甲酰胺；
6-甲基-吡啶-2-羧酸[(5R,7R)-1-氧代-2-(2-三氟甲基-嘧啶-4-基)-2-氮杂-螺
[4.5]癸-7-基]-酰胺；
3-氟-N-[2-(1-甲基-哌啶-4-基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-苯甲酰
胺；
3-氟-N-[2-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-苯
甲酰胺；
2-甲基-6-氧代-1,6-二氢-嘧啶-4-羧酸[(5R,7R)-2-(3,5-二氟-苯基)-1-氧
代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺；或
其药学上可接受的盐。
13.权利要求1的化合物，其中所述化合物为：
吡啶-2-羧酸[9-氟-2-(3-氟-苯基)-9-甲基-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(3,5-二氟-苯基)-9-氟-9-甲基-1-氧代-2-氮杂-螺
[4.5]癸-7-基]-酰胺；
2-甲基-嘧啶-4-羧酸[9-氟-2-(4-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
吡啶-2-羧酸[8,8-二氟-2-(3-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰
胺；
吡啶-2-羧酸[8-氟-2-(3-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰
胺；
吡啶-2-羧酸[2-(3-氟-苯基)-8-羟基-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰
胺；
吡啶-2-羧酸[8-氟-2-(3-氟-苯基)-8-甲基-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
吡啶-2-羧酸[2-(3-氟-苯基)-8-羟基-8-甲基-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(3,5-二氟-苯基)-8,8-二氟-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(3,5-二氟-苯基)-8-氟-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(3,5-二氟-苯基)-8-氟-8-甲基-1-氧代-2-氮杂-螺
[4.5]癸-7-基]-酰胺；
2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(3,5-二氟-苯基)-8-羟基-8-甲基-1-氧代-2-氮杂-螺
[4.5]癸-7-基]-酰胺；
2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(3,5-二氟-苯基)-8-羟基-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
2-甲基-嘧啶-4-羧酸[8,8-二氟-2-(4-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
2-甲基-嘧啶-4-羧酸[8-氟-2-(4-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
2-甲基-嘧啶-4-羧酸[8-氟-2-(4-氟-苯基)-8-甲基-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(4-氟-苯基)-8-羟基-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(4-氟-苯基)-8-羟基-8-甲基-1-氧代-2-氮杂-螺
[4.5]癸-7-基]-酰胺；
吡啶-2-羧酸[4,4-二氟-2-(3-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰
胺；
吡啶-2-羧酸[4-氟-2-(3-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰
胺；
吡啶-2-羧酸[2-(3-氟-苯基)-4-羟基-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰
胺；
吡啶-2-羧酸[4-氟-2-(3-氟-苯基)-4-甲基-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
吡啶-2-羧酸[2-(3-氟-苯基)-4-羟基-4-甲基-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(3,5-二氟-苯基)-4,4-二氟-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(3,5-二氟-苯基)-4-氟-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(3,5-二氟-苯基)-4-氟-4-甲基-1-氧代-2-氮杂-螺
[4.5]癸-7-基]-酰胺；
2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(3,5-二氟-苯基)-4-羟基-4-甲基-1-氧代-2-氮杂-螺
[4.5]癸-7-基]-酰胺；
2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(3,5-二氟-苯基)-4-羟基-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
2-甲基-嘧啶-4-羧酸[4,4-二氟-2-(4-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
2-甲基-嘧啶-4-羧酸[4-氟-2-(4-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
2-甲基-嘧啶-4-羧酸[4-氟-2-(4-氟-苯基)-4-甲基-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(4-氟-苯基)-4-羟基-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；
2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(4-氟-苯基)-4-羟基-4-甲基-1-氧代-2-氮杂-螺
[4.5]癸-7-基]-酰胺；或
其药学上可接受的盐。
14.一种药物组合物，其包含至少一种权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐、和至少一种药学上可接受的载体。
15.权利要求1的化合物在制备用于治疗认知、神经变性、精神病学或神经病学疾病或病症的药物中的用途。
16.权利要求15的用途，其中所述认知或神经变性疾病或病症选自情感障碍、焦虑、精神分裂症、阿尔茨海默病、帕金森病、多发性硬化、亨延顿舞蹈病、肌萎缩侧索硬化、库杰二氏病、创伤引起的神经变性、AIDS-引起的脑病、非AIDS-引起的脑病、脆性X染色体综合征、泛自闭症障碍及其组合。
17.权利要求1的化合物在制备用于治疗胃食道反流疾病或病症的药物中的用途。
18.权利要求1的化合物在制备用于治疗酒精依赖的药物中的用途。

说明书全文

螺内酰胺衍生物及其用途

技术领域

[0001] 本发明提供螺内酰胺衍生物，以及使用该螺内酰胺衍生物的药物组合物和治疗方法。
[0002] 发明背景本发明涉及螺内酰胺衍生物，其用作代谢型谷氨酸受体5 (mGlu5受体或mGluR5)的变构调节剂，以及使用这些化合物的药物组合物和治疗方法。
[0003] 谷氨酸是哺乳动物中枢神经系统中的主要兴奋性神经递质。调节谷氨酸神经传递的一个手段是通过代谢型谷氨酸受体(mGluRs)；另一个手段是离子型受体。目前，八种mGluRs已被克隆并基于序列同源性，优选信号转导途径和药理学分类为三组。mGluRs的第I组包括mGluR1和mGluR5，而第II组包括mGluR2和mGluR3，并且第III组包括mGlu4、6、7和8受体。
[0004] mGlu受体在正常脑功能以及神经病学、精神病学和神经肌肉失调中具有主要作用。mGlu5受体主要位于突触后，并且在边缘脑区中高度表达。mGlu5受体也在丘脑、脊髓和迷走神经系统中表达，以及在神经末梢和C纤维上在皮肤中外围表达。
[0005] mGlu5受体的配体已经显示具有用于末梢和中枢神经系统病症的前景。参见例如G. Jaeschke等，“mGlu5 receptor antagonists and their therapeutic potential”，Expert Opin. Ther. Patents，2008，18，2：123-142。但是就不同的mGluRs亚型而论，靶向正位（orthosteric）结合位点的谷氨酸类似物的一些提议可能受到低的脑渗透性和不充分的选择性的限制。合成激动剂可能导致受体的连续刺激，因为它们经常被设计为是代谢稳定的。这种连续刺激并不一定是理想的，原因是潜在的受体脱敏问题。此外，就受体占有率而论，合成拮抗剂可能导致受体功能的延长阻断，这可能不与中枢神经系统病症的病理学动力学相容。
[0006] 但是，通过变构调节，对mGlu5受体的更加选择性和受控的“微调”作用是可行的。参见例如P. Bach等，“Metabotropic glutamate receptor 5 modulators and their potential therapeutic applications”，Expert Opin. Ther. Patents，2007，17，4：371-381。变构调节表示通过调节剂配体结合至不同于正位初级底物或配体结合位点的受体上的位点。这种配体结合方法导致可能深刻影响蛋白功能的构象变化(例如，G蛋白-偶联受体，例如mGluRs，包括mGluR5)。变构调节mGlu5受体的新颖mGluR5配体可以改善传统中枢神经系统试剂的治疗窗口和/或中枢神经系统病症的治疗。本发明针对这些和其它重要的目标。

发明内容

[0007] 本发明提供式(I)的化合物：其中：
R1和R2各自独立地为芳基、杂芳基、烷基、环烷基、酮基环烷基或杂环基，其任选用烷基、环烷基、烷氧基、羟基、卤素、氰基、三氟烷基、氨基、酰基、芳基、杂芳基、杂环基、-C(O)NHR30、-C(O)N(R30)R31、-NHC(O)R30、-N(R30)C(O)R31、-NHR30、-N(R30)R31或-OR30独立地单-、二-或三-取代；其中：
R30和R31 各 自 独 立 地 为C1-C6烷 基 或 C1-C6环 烷 基，其 任 选 用 酰 基、卤素、-CN、-NH2、-NH(C1-C3烷基)、-N(C1-C3烷基)2、C1-C3烷基杂环基、C1-C3烷基氨基甲酸根、-C(O)NH(C1-C3烷基)、-C(O)N(C1-C3烷基)2、-NHC(O)-C1-C3烷基、-N(C1-C3烷基)-C(O)-C1-C3烷基、OH或-O-C1-C6烷基取代；并且
各芳基、杂芳基、杂环基取代基任选用C1-3烷基、C3-5环烷基、C1-3烷氧基、羟基、卤素、氰基、三氟烷基或氨基取代；
R3、R4、R5和R6各自独立地为H、C1-3烷基、C3-5环烷基、卤素或羟基；
R7为H；或
R1和R7连同它们所连接的-C(O)N-形成单-或双环4-至12-元杂环烷基或杂芳基，
其任选包含1-3个额外的杂原子；或
其药学上可接受的盐。
[0008] 本发明还提供包括至少一种式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、和至少一种药学上可接受的载体的药物组合物。
[0009] 本发明还提供一种治疗疾病或病症的方法，该方法包括向有需求的哺乳动物施用治疗有效量的至少一种本发明的化合物或其药学上可接受的盐，其中疾病或病症为中枢神经系统疾病或病症。在该方法的一些实施方案中，疾病或病症的症状被治疗。
[0010] 附图图1：根据本发明的一个实施方案，式(I)的化合物在小鼠模型中对于情感性疾病和病症的作用。
[0011] 图2：根据本发明的一个实施方案，式(I)的化合物在大鼠模型中对于情感性疾病和病症的作用。
[0012] 图3：根据本发明的一个实施方案，式(I)的化合物在大鼠模型中对于情感性疾病和病症的作用。
[0013] 图4：根据本发明的一个实施方案，式(I)的化合物在大鼠模型中对于情感性疾病和病症的作用。
[0014] 发明详述在一个方面，本发明提供螺内酰胺衍生物。该螺内酰胺衍生物为式(I)的化合物：
其中：
1 2
R 和R 各自独立地为芳基、杂芳基、烷基、环烷基、酮基环烷基或杂环基，其任选用烷基、环烷基、烷氧基、羟基、卤素、氰基、三氟烷基、氨基、酰基、芳基、杂芳基、杂环基、-C(O)
30 30 31 30 30 31 30 30 31 30
NHR 、-C(O)N(R )R 、-NHC(O)R 、-N(R )C(O)R 、-NHR 、-N(R )R 或-OR 独立地单-、二-或三-取代；其中：
30 31
R 和R 各 自 独 立 地 为C1-C6烷 基 或 C1-C6环 烷 基，其 任 选 用 酰 基、卤素、-CN、-NH2、-NH(C1-C3烷基)、-N(C1-C3烷基)2、C1-C3烷基杂环基、C1-C3烷基氨基甲酸根、-C(O)NH(C1-C3烷基)、-C(O)N(C1-C3烷基)2、-NHC(O)-C1-C3烷基、-N(C1-C3烷基)-C(O)-C1-C3烷基、OH或-O-C1-C6烷基取代；并且
各芳基、杂芳基、杂环基取代基任选用C1-3烷基、C3-5环烷基、C1-3烷氧基、羟基、卤素、氰基、三氟烷基或氨基取代；
3 4 5 6
R、R、R 和R 各自独立地为H、C1-3烷基、C3-5环烷基、卤素或羟基；
7
R 为H；或
1 7
R 和R 连同它们所连接的-C(O)N-形成单-或双环4-至12-元杂环烷基或杂芳基，
其任选包含1-3个额外的杂原子；或
其药学上可接受的盐。
[0015] 除非另有说明，单独或作为基团一部分使用的术语“烷基”在本文中定义为1至8个碳原子的直链或支链饱和烃。在一些实施方案中，烷基部分包含8、7、6、5、4、3、2或1个碳原子。当术语“烷基”在本文中没有碳原子范围地出现时，其表示C1-C8的范围。当术语“烷基”在本文中带有碳范围出现时，其表示所鉴定碳范围内的任何数目的烷基，例如C1-C3烷基表示甲基、乙基或丙基。饱和烃烷基部分的实例包括但不限于例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基、正戊基、正己基等化学基团。烷基还表示其中烷基由羟基、氰基、烷氧基、烷基氨基、二烷基氨基、烷基酰胺、二烷基酰胺等取代的烷基部分，包括但不限于-OC1-C4烷基-OH、-OC1-C4烷基-OCH3、-OC1-C4烷基-NHCH3、-OC1-C4烷基-N(CH3)2、-OC1-C4烷基-CONHCH3、-OC1-C4烷基-CON(CH3)2、-OC1-C4烷基-NHCOCH3和-OC1-C4烷基-N(CH3)COCH3。
[0016] 除非另有说明，单独或与其它术语结合使用的术语“烷氧基”在本文中定义为-O-烷基，其中“烷基”如本文前面所定义的。烷氧基部分的实例包括但不限于例如甲氧基、乙氧基、异丙氧基、仲丁氧基、叔丁氧基和同系物、异构体等的化学基团。烷氧基还表示其中烷基由羟基、氰基、烷氧基、烷基氨基、二烷基氨基、烷基酰胺、烷基酰胺等取代的-O-烷基部分，包括但不限于-OC1-C4烷基-OH、-OC1-C4烷基-OCH3、-OC1-C4烷基-NHCH3、-OC1-C4烷基-N(CH3)2、-OC1-C4烷基-CONHCH3、-OC1-C4烷基-CON(CH3)2、-OC1-C4烷基-NHCOCH3和-OC1-C4烷基-N(CH3)COCH3。
[0017] 除非另有说明，单独或与其它术语结合使用的术语“羟烷基”在本文中定义为-烷基-OH，其中“烷基”如本文前面所定义的。非限制性实例包括甲基-OH、乙基-OH、正丙基-OH等。
[0018] 如本文使用的，除非另有说明，单独或与其它术语结合使用的术语“环烷基”在本文中定义为具有3至8个环碳原子的环化烷基，其中“烷基”如在本文中定义的。环烷基部分的实例包括但不限于例如环丙基、环丁基、环戊基和环己基的化学基团。
[0019] 如本文使用的，除非另有说明，单独或与其它术语结合使用的术语“酮基环烷基”在本文中定义为具有与其连接的酮基的环烷基，其中“环烷基”如在本文中定义的。实例包括环戊酮或环己酮。
[0020] 除非另有说明，单独或与其它术语结合使用的术语“卤”或“卤素”在本文中定义为氟、氯、溴或碘。
[0021] 除非另有说明，单独与其它术语结合使用的术语“芳基”在本文中定义为至多14个碳原子的芳族烃，其可以为单个环(单环的)或稠合在一起或共价连接的多个环(例如二环、三环、多环的)。芳基部分的任何合适的环位置可以共价连接至限定的化学结构。芳基部分的实例包括但不限于例如苯基、苄基、1-萘基、2-萘基等的化学基团。如在本文中描述的，芳基可以是未取代或取代的。
[0022] 除非另有说明，单独与其它术语结合使用的术语“杂芳基”在本文中定义为包括一个或多个独立选自氮、氧和硫的杂原子的单环或多环(稠合在一起或共价连接)芳族烃环。杂芳基包括至多14个碳原子和1至6个杂原子。杂芳基的实例包括但不限于吡啶基、哒嗪基、三嗪基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、(1,2,3)-和(1,2,4)-三唑基、吡嗪基、嘧啶基、四唑基、呋喃基、噻吩基、异噁唑基、噻唑基、噁唑基、2-喹啉基、2-喹唑啉基、3-苯基-2-喹啉基等。如在本文中描述的，杂芳基可以是未取代或取代的。
[0023] 除非另有说明，单独与其它术语结合使用的术语“杂环基”在本文中定义为通过从杂环的任一环原子去除氢原子形成的一价基团。
[0024] 除非另有说明，单独与其它术语结合使用的术语“酰基”在本文中定义为式-C(O)-烷基的基团，其中烷基在本文前面描述；即烷基羰基，例如甲酰基、乙酰基等。
[0025] 除非另有说明，单独与其它术语结合使用的术语“氨基烷基”在本文中定义为烷基-氨基，其中术语“烷基”如本文前面所定义的，并且术语“氨基”为-NH2、-NH-或-N<。非限制实例包括-CH3NH-、CH3CH2NH-、(C1-C3烷基)NH-、(C1-C3烷基)2N-等。
[0026] 除非另有说明，单独与其它术语结合使用的术语“烷基氨基”在本文中定义为氨基-烷基，其中术语“烷基”如本文前面所定义的，并且术语“氨基”为-NH2、-NH-或-N<。非限制实例包括-NHCH3、-NHCH2CH3、-NH(C1-C3烷基)、-N(C1-C3烷基)2等。
[0027] 在一些实施方案中，R1和R2都为芳基。在一些实施方案中，R1和R2都为杂芳基。1 2 1 2
在一些实施方案中，R 为芳基和R 为杂芳基。在一些实施方案中，R 为杂芳基和R 为芳基。
1 2 1 2
在一些实施方案中，R 或R 为杂芳基。在一些实施方案中，R 或R 为芳基。
[0028] 在一些实施方案中，R1或R2为烷基。在一些实施方案中，R1或R2为环烷基。在一1 2 1 2
些实施方案中，R 或R 为酮基环烷基。在一些实施方案中，R 或R 为杂环基。
[0029] 在一些实施方案中，至少一个芳基为苯基。在一些实施方案中，至少一个杂芳基为吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基、噻唑基、吡唑基、吲唑基、噻吩基、呋喃基或苯并呋喃基。在一些实施方案中，两个芳基都为苯基。在一些实施方案中，两个杂芳基都选自吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基、噻唑基、吡唑基、吲唑基、吲唑基咪唑基、噻吩基、呋喃基和苯并呋喃基。在一些实施方案中，至少一个杂芳基为吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基、噻唑基、吡唑基、吲唑基、噻吩基、呋喃基、苯并呋喃基、苯并[c]异噁唑基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、二氢噻吩并[3,4-b][1,4]二噁英基、呋喃基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、吲唑基、二氢吲哚基、吲哚基、异喹啉基、异噁唑基、萘啶基、噁唑基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯并[3,2-c]吡啶基、喹啉基、喹喔啉基、噻唑基或噻吩基。
[0030] 在一些实施方案中，R1为芳基或杂芳基，并且R2为环烷基、酮基环烷基或杂环基。2 1
在一些实施方案中，R 为芳基或杂芳基，并且R 为环烷基、酮基环烷基或杂环基。
[0031] 在一些实施方案中，R1或R2为环烷基。在一些实施方案中，至少一个环烷基为环丁基、环己基、环庚基、环戊基或环丙基。在一些实施方案中，环烷基在先前定义的三-取代之外被进一步取代，即环烷基被取代多于先前描述的三次；例如环烷基被氟四-取代。
[0032] 在一些实施方案中，杂芳基为吡啶基，并且吡啶基为如先前定义的单-、二-或三-取代的。在一些这种实施方案中，单-、二-或三-取代基独立地为芳基、杂芳基和杂环基。在一些这种实施方案中，芳基、杂芳基和杂环基取代基被例如卤素或C1-3烷基进一步取代。
[0033] 在一些实施方案中，至少一个芳基或杂芳基如先前描述的被取代。
[0034] 在一些实施方案中，其中单-、二-或三-取代基独立地选自甲基、甲氧基、二甲基氨基-乙氧基、氨基、甲基氨基、二甲基氨基、氰基、氯、氰基、二甲基氨基、二甲基氨基-乙氧基、甲基、甲基氨基、甲氧基、氟、-C(O)NHCH3、苯基、呋喃基、吡咯烷基、噻吩基和三氟甲基。在一些实施方案中，1、2或3个取代基独立地选自甲基、甲氧基、二甲基氨基-乙氧基、氨基、甲基氨基、二甲基氨基、氰基、氯、氟、苯基、呋喃基和噻吩基。
[0035] 在一些实施方案中，至少一个芳基或杂芳基的苯基、呋喃基或噻吩基取代基被至少一个烷基、烷氧基、羟烷基、卤素、氰基或三氟烷基取代。在一些这种实施方案中，苯基被氟取代。
[0036] 在一些实施方案中，R1和R2各自独立地选自以下表1和2的化合物的芳基、杂芳基、烷基、环烷基、酮基环烷基和杂环基。
[0037] 在一些实施方案中，R3、R4、R5和R6各自独立地为H、C1-3烷基、C3-5环烷基、卤素或3 4 5 6
羟基。在一些实施方案中，R、R、R 和R 各自独立地为甲基或氟。
[0038] 在一些实施方案中，R7为氢。在一些实施方案中，R7连同R1与它们所连接的-C(O)N<一起形成任选包含1-3个额外杂原子的单-或二环4-至12-元杂环烷基或杂芳基。
[0039] 在一些实施方案中，式(I)的化合物为以下实验部分中公开的化合物。在一些实施方案中，化合物为来自以下表1或2的一种。
[0040] 本发明的另一个方面为包括药学有效量的根据本发明的化合物、和药学可接受的载体或赋形剂的组合物。
[0041] 本发明的组合物可以适用于任何给药方式，例如口服(包括舌下给药)、借助于植入物、胃肠外(parentally)(包括静脉内、腹膜内、关节内和皮下注射)、直肠、鼻内、局部、眼睛(通过滴眼剂)、阴道和经皮。
[0042] 本发明的化合物可以作为游离碱或以衍生自药学可接受的酸或碱的盐的形式使用。盐没有限制地包括下列：与无机酸的盐，所述无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸和磷酸，和与有机酸的盐，所述有机酸例如乙酸、草酸、柠檬酸、酒石酸、琥珀酸、马来酸、苯甲酸、苯磺酸、富马酸、苹果酸、甲磺酸、双羟萘酸和对-甲苯磺酸。其它盐包括与碱金属或碱土金属的盐，所述碱金属或碱土金属例如钠、钾、钙和镁，或与有机碱的盐，包括季铵盐。药学可接受的无机和有机酸加成盐的其它非限制实例包括[S.M. Berge等，J. Pharm. Sci.1977，66，1：2，和G.S. Paulekuhn等，J. Med. Chem. 2007，50，26：6665-6672]中列出的那些。
[0043] 本发明的化合物也可以以酯、氨基甲酸酯的形式和其它常规前体药物形式使用，其通常将是在体内容易转变为活性部分的化合物的功能衍生物。还包括定义为当将化合物引入生物系统中时产生的活性种类的本发明化合物的代谢物。
[0044] 当本发明的化合物如上所述使用时，其可以与一种或多种药学可接受的赋形剂或载体，例如溶剂、稀释剂等结合。这种药物制剂可以以此类形式口服给药，如片剂、胶囊(包括例如定时释放和持续释放制剂)、丸剂、糖锭、气溶胶、可分散性粉剂、颗粒、溶液、悬浮液(以例如约0.05至约5%的悬浮剂包含例如悬浮剂)、糖浆(以例如约10至约50%的糖或糖代替物包含例如糖或糖代替物，例如阿斯巴甜)、酏剂等，或者以无菌注射溶液、在等渗介质中包含例如约0.05至约5%的悬浮剂的悬浮液或乳液的形式胃肠外给药。这种制剂可以包含与载体结合的例如按重量计约25至约90%，更通常约5%至约60%的活性成分。使用的活性成分(例如本发明的化合物或盐及其前体药物或代谢物)的有效剂量可以变化，这取决于使用的特定化合物、盐、前体药物或代谢物，给药方式，患者的年龄、体重、性别和医学状况，以及正治疗的疾病、病症、体况和/或系统的严重程度。个别哺乳动物的适当给药形式和剂型的选择对于本领域技术人员而言将是显而易见的。这种确定对于本领域普通医师、兽医或临床医生而言是常规的(参见例如Harrison's Principles of Internal Medicine，Anthony Fauci等(编撰)第14版，New York：McGraw Hill (1998))。此外，可以调整给药方案以提供最佳的治疗反应。例如，几个分开剂量可以每天给药，或者剂量可以根据治疗状况的需要所指示地按比例减少。
[0045] 固体载体，例如淀粉、乳糖、磷酸二钙、微晶纤维素、蔗糖和高岭土，液体载体，例如无菌水、聚乙二醇、甘油，非离子表面活性剂和可食用油例如玉米、花生和芝麻油，可以根据活性成分的性质和所需的特定给药形式适当使用。可以有利地包括药物组合物制备中通常使用的助剂。助剂的非限制实例包括矫味剂、着色剂、防腐剂和抗氧化剂例如维生素E、抗坏血酸、BHT和BHA。
[0046] 活性化合物也可以胃肠外或腹膜内给药。作为游离碱、中性化合物或药学可接受的盐的活性化合物的溶液或悬浮液可以在与例如羟基丙基纤维素的表面活性剂适当混合的水中制备。分散体也可以在甘油、液体聚乙二醇及其在油中的混合物中制备。在正常的储存和使用条件下，这些制剂可以含有防腐剂以防止微生物的生长。
[0047] 适用于注射或输注用途的药物形式包括无菌水溶液、悬浮液或分散体，以及用于无菌注射或输注溶液、悬浮液或分散体的临时制备的无菌粉末。在所有情况下，形式必须是无菌的，并且必须是流体的，达到容易注射和输注的程度。其在制造和存储条件下必须是稳定的，并且必须针对微生物的污染行为加以保存。载体可以为溶剂或分散介质，其包含例如水、乙醇和多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇)、其适当的混合物，以及植物油。
[0048] 此外，本发明的活性化合物可以使用本领域技术人员已知的适用于鼻内或经皮输送的载体，鼻内或经皮给药。经皮给药包括穿过体表和包括上皮和粘膜组织的身体通道内膜，使用例如洗剂、乳膏剂、泡沫、糊剂、贴剂、悬浮液、溶液和栓剂(直肠和阴道)的载体系统的所有给药。乳膏和软膏可以为水包油型或油包水型的粘稠液体或半固态乳液。由分散在含有活性成分的石油或亲水性石油中的吸附粉末组成的糊剂也可以是合适的。许多闭合装置可用来将活性成分释放进入血流中，例如覆盖含有活性成分、带有或没有载体的储器，或含有活性成分的基质的半透膜。其它闭合装置是在文献中已知的。当使用经皮输送系统时，剂量给药将是连续的，而不是单一或分开的日剂量。
[0049] 本发明的化合物也可以以脂质体输送系统的形式给药，其中脂质体脂双层由许多磷脂形成。本发明的化合物也可以通过使用例如化合物与其偶联的单克隆抗体的载体来输送。本发明的化合物也可以与其偶联的其它载体为可用于实现活性成分控释的可溶性聚合物或可生物降解聚合物。
[0050] 本领域技术人员应理解一些本发明的化合物可以含有一个或多个不对称中心，并因此可以产生对映异构体和非对映异构体。本发明包括所有的立体异构体，包括个别的非对映异构体和拆分的对映异构纯的立体异构体，以及外消旋物，和立体异构体的所有其它变体，和其混合物和药学上可接受的盐，它们具有指明的活性。旋光异构体可以由本领域技术人员已知的方法以纯的形式获得，所述方法包括但不限于手性色谱分离、非对映盐形成、动力学拆分和不对称合成。还应理解本发明包括具有指明活性的所有可能的区域异构体、内-外异构体及其混合物。这种异构体可以由本领域技术人员已知的方法以纯的形式获得，所述方法包括但不限于柱色谱法、薄层色谱法和高效液相色谱法。本领域技术人员应理解由于受阻旋转，一些本发明的化合物可以是手性的，并产生阻转异构体，其可以由本领域技术人员已知的方法以纯的形式拆分和获得。本领域技术人员还应理解，一些本发明的化合物包括结构异构体，包括互变异构体。
[0051] 本发明中还包括本发明化合物的多晶型物和水合物，及其同位素标记类似物(例2 3 13 15
如 H、H、C、N等)。
[0052] 本发明的另一个方面为一种使用本发明化合物的方法。本发明应理解为包括本发明化合物与可用于本文描述的方法和用途的任何药物组合物的任何组合的所有同时、顺序或单独的应用。
[0053] 在一些实施方案中，该方法包括施用有效量的式(I)的化合物或其盐。在一些实施方案中，该方法包括施用治疗有效量的本文描述的化合物或其盐。
[0054] 如本文使用的，当应用于本发明化合物时，短语“有效量”意图表示足以引起预期的生物效应的量。当应用于本发明的化合物时，短语“治疗有效量”意图表示足以改善、减轻、稳定、逆转、减缓或延迟病症或疾病状况发展，或者病症或疾病症状的化合物量。在一些实施方案中，本发明的方法或用途提供化合物组合的给药。在这种情况下，“有效量”为足以引起预期的生物效应的组合量。
[0055] 在一些实施方案中，该方法包括施用有效量的两种或更多种本文描述的化合物或其盐的组合。特别预期短语“本文描述的两种或更多种化合物或其盐的组合”、或“至少一种本文描述的化合物，或其药学上可接受的盐”、或描述特定化合物的类似语言包括这种化合物以盐、中性或游离碱形式的任何比例和组合的给药；即，包括这种化合物各自以碱形式、各自以中性形式或各自以盐形式、或一种或多种以碱形式和一种或多种以中性形式、或一种或多种以碱形式和一种或多种以盐形式、或一种或多种以中性形式和一种或多种以盐形式，以中性和/或碱性化合物和/或盐的任何比例的给药。
[0056] 如本文使用的，术语“治疗”表示改善或逆转疾病或病症的发展，或改善或逆转此类疾病或病症的一个或多个症状或副作用。例如，“治疗”可以指减缓、中断、控制、减轻、停止或调节疾病或病症的发展或延续。如本文使用的，“治疗”还表示抑制或阻断，如迟延、阻止、限制、阻碍或堵塞，疾病或病症的系统、状况或状态的发展。为了本发明的目的，“治疗”进一步表示获得有利的或所需的临床结果的方法，其中“有利的或所需的临床结果”包括但不限于症状的减轻，病症或疾病程度的减小(或降低)，稳定的(即不恶化)疾病或病症状态，疾病或病症状态的延迟或减缓，疾病或病症状态的改善或减轻，以及疾病或病症的减轻，不论是部分还是全部的，可检测或不可检测的。
[0057] 如本文使用的，术语“预防”表示阻止发生或存在。如本文使用的，术语“给药”指直接施用本发明化合物，或施用会在哺乳动物内形成有效量化合物的本发明化合物的前体药物、衍生物或类似物。
[0058] 本发明还提供一种治疗疾病或病症的方法，该方法包括向有需求的哺乳动物施用治疗有效量的至少一种本发明的化合物或其药学上可接受的盐，其中该疾病或病症为中枢神经系统疾病或病症。
[0059] 本发明还提供本发明化合物，包括其药学上可接受的盐在制备用于治疗中枢神经系统疾病或病症的药物中的用途。本发明进一步提供用于治疗疾病或病症的本发明的化合物。
[0060] 本发明的化合物可以变构调节mGlu5受体。增强或强化对于mGluR5受体的正位配体的亲合性和/或增强或强化正位激动剂的效果的变构调节剂为变构增强剂(或增效剂)或正变构调节剂(PAM)。参见例如May，L.T. Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 2007，47，1-51。降低或削弱对于mGluR5受体的正位配体的亲合性和/或降低或削弱正位激动剂的效果的变构调节剂为变构拮抗剂(或抑制剂)或负变构调节剂(NAM)。同前。沉默变构调节剂(SAM)结合至受体的变构部位，但是没有可测量的固有效果。通过防止变构结合化合物显示其自身的正(PAM)或负(NAM)效果，SAM可以间接显示效果。
[0061] 在一些实施方案中，本发明方法的哺乳动物为人类。
[0062] 在本发明的方法或用途的一些实施方案中，中枢神经系统疾病或病症为认知、神经变性、精神病学或神经病学疾病或病症。在一些此类实施方案中，认知、神经变性、精神病学或神经病学疾病或病症选自情感障碍、焦虑、精神分裂症(包括情感性精神分裂症)、阿尔茨海默病、帕金森病、多发性硬化、亨延顿舞蹈病、肌萎缩侧索硬化、库杰二氏病、创伤引起的神经变性、AIDS-引起的脑病、其它感染-相关的脑病(即非AIDS-引起的脑病)、脆性X染色体综合征、泛自闭症障碍（autism spectrum disorder）及其组合。
[0063] 如本文使用的，短语“情感障碍”指由情绪状态异常表征的若干心理紊乱中的任一种，例如不限于双相情感障碍、抑郁症、循环情感性疾病、精神抑郁症、由于全身性医疗状况的情感障碍、未另外指明的情感障碍以及物质-引起的情感障碍；以及如由Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders，第四版(DSM-IV)(American Psychiatric Association：Arlington，VA，1994)所表征的。
[0064] 如本文使用的，短语“泛自闭症障碍”(ASD)指引起思维、感觉、语言和有关其它的能力严重和普遍损害的病症，其经常首先在幼童时期诊断，以及范围为被称为自闭症(“传统”孤独症)的重型、到未另外指定的普遍性发育障碍(PDD-NOS)、到更温和的形式Asperger综合征。如本文使用的，该短语还包括Rett综合征和童年瓦解性障碍，和如本文使用的，与短语“普遍性发育障碍”(PDD)同义。
[0065] 在一些此类实施方案中，情感障碍为抑郁症(即抑郁障碍)。在一些此类实施方案中，抑郁症选自非典型抑郁症、双相抑郁症、单相抑郁症、严重抑郁症、内因性抑郁症(即没有明显原因的急性抑郁症)、更年期抑郁症(即在中年或老年人中发生的抑郁症)、反应性抑郁症(即由明显创伤性生活事件引起的抑郁症)、产后抑郁症、原发性抑郁症(即没有例如医学疾病或病症的明显身体或心理原因的抑郁症)、精神病性抑郁症和继发性抑郁症(即似乎是由一些其它潜在状况，例如另一种医学疾病或病症引起的抑郁症)。
[0066] 在一些此类实施方案中，焦虑疾病或病症选自广泛性焦虑症、恐慌忧虑、强迫症、社交恐惧症、表现焦虑、创伤后应激障碍、急性应激反应、适应障碍、疑病症、分离焦虑症、广场恐怖、特异恐怖、由于全身性医学状况的焦虑症、物质引起的焦虑症、酒精戒断引起的焦虑及其组合。
[0067] 在一些实施方案中，包括本发明化合物的方法或用途的中枢神经系统疾病或病症包括癫痫疾病或病症。在一些实施方案中，癫痫疾病或病症选自惊厥、癫痫、持续癫痫及其组合。
[0068] 在一些实施方案中，包括本发明化合物的方法或用途的中枢神经系统疾病或病症为疼痛疾病或病症，选自炎性痛、神经性疼痛和偏头痛。在一些实施方案中，神经性疼痛或偏头痛疾病或病症选自异常性疼痛、痛觉过敏、幻痛、与糖尿病神经病有关的神经性疼痛、与偏头痛有关的神经性疼痛及其组合。
[0069] 在一些实施方案中，包括本发明化合物的方法或用途的中枢神经系统疾病或病症包括神经元兴奋过度状态疾病或病症。在一些实施方案中，神经元兴奋过度状态疾病或病症为药物戒断中的神经元兴奋过度状态、中毒中的神经元兴奋过度状态，或其组合。
[0070] 在包括本发明化合物的方法或用途的一些实施方案中，认知神经变性、精神病学或神经病学疾病或病症的至少一种症状得以治疗。
[0071] 在一些实施方案中，认知、神经变性、精神病学或神经病学疾病或病症为抑郁症。在一些此类实施方案中，抑郁症的至少一种症状为感觉消沉，情绪低落，对一些或所有活动丧失兴趣或快乐，食欲改变，体重改变，睡眠模式改变，精力缺乏，疲劳，自我评价低，思考能力、注意力或决断能力削弱，感觉绝望或没有价值，精神运动性激动或迟延，自责，不当罪感，频繁的死亡或自杀想法，计划或企图自杀，或其组合。
[0072] 在一些实施方案中，认知、神经变性、精神病学或神经病学疾病或病症为焦虑症。在一些此类实施方案中，焦虑症的至少一种症状为不安，恐惧，发抖，肌肉痛，失眠，腹部不适，眩晕，易怒，固执，重复思考，强迫，心悸，胸痛，胸部不适，出汗，刺痛感，感觉窒息，担心失控，闪回（flashback），恶梦，侵入式想法，侵入式回忆，回避行为，情感麻木，无法睡眠，焦虑感，过度吃惊反应，过度警觉，勃然大怒，昏厥，脸红，大量出汗，或其组合。
[0073] 在一些实施方案中，认知、神经变性、精神病学或神经病学疾病或病症为精神分裂症。在一些此类实施方案中，精神分裂症的至少一种症状为选自幻觉、错觉、妄想及其组合的阳性症状。在一些此类实施方案中，精神分裂症的症状为选自社交逃避、情感贫乏、快感缺乏、动机减少及其组合的阴性症状。在一些此类实施方案中，精神分裂症的症状为选自注意力严重不足、对象命名严重不足、工作记忆严重不足、长期记忆存储严重不足、执行功能严重不足、信息处理缓慢、神经活动缓慢、长期抑郁及其组合的认知症状。
[0074] 在包括本发明化合物的方法或用途的一些实施方案中，认知、神经变性、精神病学或神经病学疾病或病症为帕金森病。在一些此类实施方案中，帕金森病的至少一种症状为左旋多巴引起的运动障碍，平衡差，帕金森步态，运动徐缓，僵硬，颤动，说话改变，面部表情丧失，写字过小症，吞咽困难，流口水，痛苦，痴呆，意识模糊，睡眠紊乱，便秘，皮肤问题，抑郁，恐惧，焦虑，记忆困难，思考缓慢，性功能障碍，泌尿问题，疲劳，疼痛，能量损失，或其组合。
[0075] 在一些实施方案中，认知、神经变性、精神病学或神经病学疾病或病症为阿尔茨海默病。在一些此类实施方案中，阿尔茨海默病的至少一种症状为记忆损害，注意力损害，判断损害，决策损害，物理环境定位损害，语言损害，速度依赖性活动损害，抽象推理损害，视觉空间能力损害，执行功能损害，行为障碍损害，无兴趣和消极，冷漠，不当穿着，自理差，烦乱，剧烈爆发，攻击行为，抑郁，焦虑，幻觉，错觉，人格改变，情绪改变，痴呆，或其组合。
[0076] 在一些实施方案中，认知、神经变性、精神病学或神经病学疾病或病症为多发性硬化。在一些此类实施方案中，多发性硬化的至少一种症状为视神经炎性视力模糊，眼痛，色觉丧失，失明，重影复视，眼球震颤急性眼动，眼辨距障碍，持续下冲或上冲眼动，核间眼肌麻痹，眼球震颤，复视，运动和声音光幻视，重影，瞳孔传入缺陷，运动轻瘫，单肢轻瘫，下肢轻瘫，轻偏瘫，四肢轻瘫，截瘫，半身不遂，四肢麻痹，四肢瘫痪，强直，发音困难，肌肉萎缩，痉挛，痛性痉挛，张力减退，阵挛，肌阵挛，肌纤维颤搐，多动腿综合征，足下垂功能障碍反射(MRSs，巴宾斯基，霍夫曼（Hoffman）氏，查多克（Chaddock）氏)，感觉倒错，麻木，神经痛，神经性疼痛，神经原痛，莱尔米特（l'hermitte）氏征，本体感受功能障碍，三叉神经痛，共济失调，意向性震颤，辨距不良，前庭性共济失调，眩晕，说话共济失调，张力障碍，轮替运动障碍，频尿，膀胱痉挛，膀胱软垂，逼尿肌-括约肌协同困难，勃起功能障碍，性快感缺失，逆向射精，性冷淡，便秘，排便急迫，抑郁，认知功能障碍，痴呆，情绪动荡，情绪不稳，欣快症，双极性综合征，焦虑，失语，言语困难，疲劳，乌托夫氏症，胃食道反流，睡眠障碍，或其组合。
[0077] 本发明进一步提供一种治疗胃食道反流的方法，该方法包括向需要其的哺乳动物施用治疗有效量的至少一种权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐。本发明进一步提供本发明化合物在制备用于治疗胃食道反流的药物中的用途。本发明进一步提供用于治疗胃食道反流的本发明的化合物。
[0078] 本发明进一步提供一种治疗酒精依赖的方法，该方法包括向需要其的哺乳动物施用治疗有效量的至少一种权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐。本发明进一步提供本发明化合物在制备用于治疗酒精依赖的药物中的用途。本发明进一步提供用于治疗酒精依赖的本发明的化合物。
[0079] 在一些实施方案中，本发明的化合物用于制备用于治疗中枢神经系统疾病或病症的药物。在一些实施方案中，中枢神经疾病或病症如本文先前公开的。
[0080] 本发明的另一个方面为用于生产本发明化合物的方法。
[0081] 本发明化合物的制备本发明的化合物可以没有限制地根据以下所述一般方法之一来制备。例如，以下方案
1-22意图作为本发明的一些实施方案的说明，以及并不暗示由于它们而限制本发明。
[0082] 除非在特定情况中另外说明，以下定义了如本文使用的首字母缩写。
[0083] BINAP = 2,2'-双(二苯基膦基)-1,1'-联二萘，CAS编号（CAS No.）98327-87-8Boc = 叔丁氧羰基BOP = 苯并三唑-1-基-氧基-三-(二甲基氨基)-六氟磷酸鏻，CAS No.56602-33-6
CAN = 硝酸高铈铵，CAS No.16774-21-3
DAST = (二乙基氨基)三氟化硫，CAS No.38078-09-0
DCM = 二氯甲烷或亚甲基氯，CAS No.75-09-2
DIBAL或DIBAL-H = 二异丁基氢化铝，CAS No.1191-15-7
DIEA = N,N-二异丙基乙胺，CAS No.7087-68-5
DMA = N,N-二甲基乙酰胺，CAS No.127-19-5
DMAP = 4-二甲基氨基吡啶，CAS No.1122-58-3
DMC = 2-氯-1,3-二甲基氯化咪唑鎓，CAS No.37091-73-9
DMF = N,N-二甲基甲酰胺，CAS No.68-12-2
DMPU = 1,3-二甲基-3,4,5,6-四氢-2(1H)-嘧啶酮，CAS No.7226-23-5
DMSO = 二甲基亚砜，CAS No.67-68-5
DPPA = 二苯基磷酰基叠氮化物，CAS No.26386-88-9
EDCI = N-乙基-N'-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐，CAS No. 93128-40-6HATU = 2-(1H-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基六氟磷酸脲鎓甲铵
（Methanaminium），CAS No.148893-10-1
HBTU = 2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基六氟磷酸脲鎓，CAS No.94790-37-1HOBt = 1-羟基苯并三唑，CAS No.2592-95-2
LDA = 二异丙基氨基锂溶液，CAS No.4111-54-0
L-Selectride= 三-仲丁基(氢化)硼酸锂，CAS No.38721-51-7
NMP = N-甲基吡咯烷酮，CAS No.872-50-4
PDC = 重铬酸吡啶鎓，CAS No.20039-37-6
PMB = 4-甲氧基苄基
PTSA = 对甲苯磺酸，CAS No.6192-52-5
PyBOP = 苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基六氟磷酸鏻，CAS No.128625-52-5
rt = 室温
RT = LC-MS保留时间
TBAF = 四丁基氟化铵溶液，CAS No.429-41-4
TBSCl = 叔丁基二甲基甲硅烷基氯，CAS No.18162-48-6
TBSOTf = 叔丁基二甲基甲硅烷基三氟甲磺酸酯，CAS No.69739-34-0
TBS = 叔丁基二甲基甲硅烷基
TEA = 三乙胺，CAS No.121-44-8
TFA = 三氟乙酸，CAS No.76-05-1
THF = 四氢呋喃，CAS No.109-99-9
式(I-a)的化合物可以通过方案1中所述的方法，使用常规酰胺化步骤由中间体A和
1 1 1 2 3 4 5 6
RCOCl或RCO2H制备(参见例如方案1的步骤a和b)，其中R、R、R、R、R 和R 如前面所定义的。
[0084] 方案1式(I-a)的化合物也可以通过方案2中所述的方法制备。通过使用铜促进的交叉偶联(参见例如方案2中的步骤a)或通过钯催化的交叉偶联(参见例如方案2的步骤b)的中
2 2
间体B用RX (R 为芳基或杂芳基，X为卤素，例如碘、溴、氯和氟)的N-芳基化，或者在碱
2 2
存在下中间体B用RX(R 为烷基)的N-烷基化(参见例如方案2的步骤c)产生式(I-a)
1 2 3 4 5 6
的化合物，其中R、R、R、R、R 和R 如本文定义的。
[0085] 方案2中间体A-1和A-2可以通过方案3中所述的方法制备。
[0086] 通过使用常规方法的市售3-氧代-环己烷羧酸(化合物1)的酯化(参见例如方案3的步骤a)产生化合物2。通过使用常规方法保护化合物2的羰基(参见例如方案3的步骤b)、随后在碱存在下用烯丙基溴烷基化(参见例如方案3的步骤c)，产生化合物3。化2
合物3的氧化，例如DCM中的臭氧分解产生醛4。通过使用常规方法用胺RNH2还原胺化醛
4(参见方案3的步骤e)，随后在碱存在下环化(参见例如方案3的步骤f)，产生化合物5。
2
在一些情况下(特别是当R 为烷基时)，内酰胺5可以在还原胺化条件下，在没有由碱进一步处理下由醛4直接形成(步骤f)。通过常规方法水解化合物5(参见例如方案3的步骤g)产生酮6，其可以容易地通过用乙酸铵还原胺化转变为中间体A-1和A-2(参见例如方案
2
3中的步骤h)。其中R 如本文定义的反式异构体A-1和顺式异构体A-2可以通过硅胶色谱法或反相HPLC来分离。
[0087] 方案3中间体A-1和A-2也可以通过方案4中所述的方法制备。通过常规方法酯化市售环己烷-1,3-二羧酸(化合物7)(参见例如方案4中的步骤a)产生双-乙酯8。化合物8用
烯丙基溴的烷基化(参见例如方案4中的步骤b)产生化合物9。化合物9的氧化，例如臭氧分解(参见例如方案4的步骤c)或两步氧化(参见例如方案4的步骤d：化合物9首先氧化为二醇，然后进一步氧化为醛)，产生反式醛10作为主要产物。通过使用常规方法用胺R2NH2还原胺化醛10(参见例如方案4的步骤e和f)，产生化合物11，其在通过用碱例如i-PrMgCl的THF溶液在0℃处理环化时产生内酰胺12。在一些情况下，特别是当R2为烷基时，化合物10可以在还原胺化条件下直接转变为内酰胺12。反式内酰胺12可以在碱性条件下差向异构化为顺式内酰胺13 (参见例如方案4的步骤h)。使用常规方法皂化化合物
12和13(参见例如方案4的步骤i)分别产生羧酸14和15。在一些情况下，根据R2和反应时间，化合物11可以在碱性条件例如NaH、EtOH下在0℃至回流下转变为化合物15。通过使用常规方法，化合物14和15的Curtius重排、随后酸解(参见例如方案4的步骤j)分别产生中间体A-1和中间体A-2，其中R2如本文定义的。
[0088] 方案4中间体A-2也可以通过方案5中所述的方法制备。
[0089] 化合物16可以用和方案4中的化合物15一样的方式制备。通过使用常规方法的化合物16的Curtius反应(参见例如方案5的步骤a)产生化合物17。通过使用常规方法去除化合物17中的保护基4-甲氧基苄基或2,4-二甲氧基苄基(参见例如方案5的步骤b)产生化合物18。化合物18也可以由可通过方案4中所述方法制备的化合物19 (中间2
体A-2，R = 4-甲氧基苄基或2,4-二甲氧基苄基)制备。通过使用常规方法去除化合物
19中的保护基4-甲氧基苄基或2,4-二甲氧基苄基(参见例如方案5的步骤b)产生化合物20。通过使用常规方法的化合物20的Boc保护(参见例如方案5的步骤c)产生化合物
18。通过使用铜促进交叉偶联(参见例如方案5的步骤d)或通过钯催化交叉偶联(参见
2 2
例如方案5的步骤e)的化合物18用RX (R 为芳基或杂芳基和X如前面所定义)的N-芳
2 2
基化，或者在碱存在下化合物18用RX (R 为烷基和X如前面所定义)的N-烷基化(参见例如方案5的步骤f)产生化合物21。通过使用常规条件去除Boc基团(参见例如方案5
2
的步骤g)产生中间体A-2，其中R 如本文定义的。
[0090] 方案5中间体A-3和A-4可以通过方案6中所述的方法制备。通过使用Gensler，W.J.等(J. Org. Chem.，1973，38，1726；参见方案6的步骤a)所述的方法还原市售5-羟基-间苯二酸
3
二甲酯(化合物22)产生化合物23。通过使用常规方法氟化23产生单氟化化合物24 (R
4
= F，R = H，参见例如方案6的步骤b)。通过使用常规条件，醇23氧化为其相应的酮，随后
3 4
通过氟化产生二-氟化化合物24 (R、R = F，参见例如方案6的步骤c)。化合物24用烯丙基溴的烷基化(参见例如方案6的步骤d)产生化合物25。化合物25的氧化，例如臭氧分
2
解(参见例如方案6的步骤e)产生反式醛26作为主要产物。通过使用常规方法用胺RNH2还原胺化醛26(参见例如方案6的步骤f)产生化合物27，其在通过用碱例如i-PrMgCl的
2
THF溶液在0℃处理环化时产生内酰胺28。在一些情况下(特别是当R 为烷基时)，化合物
26可以在还原胺化条件下直接转变为内酰胺28。反式内酰胺28可以在碱性条件下差向异构化为顺式内酰胺29 (参见例如方案6的步骤h)。通过使用常规方法的化合物28和29
2
的皂化(参见例如方案6的步骤i)分别产生相应的羧酸30和31。在一些情况下，根据R和反应时间，化合物28可以在碱性条件例如NaH、EtOH下在0℃至回流下转变为化合物31。
化合物30和31的Curtius重排，随后酸解(参见例如方案6中的步骤j)产生中间体A-3
2 4
和A-4，其中R-R 分别如本文定义的。
[0091] 方案6中间体A-5可以通过方案7中所述的方法制备。在碱存在下市售4-氧代-环己
烷-1,3-二羧酸二甲酯(化合物32)用烯丙基溴的烷基化(例如在方案7的步骤a中所示的条件下)可以产生化合物33。通过使用常规方法，例如方案7的步骤b中的那些，33的
3 4
还原随后氟化可以产生单氟化化合物34 (R = F，R = H)。通过使用常规方法，例如方案
3 4
7的步骤c中的那些，化合物33的氟化可以产生二-氟化化合物34 (R、R = F)。化合物
34的氧化，例如臭氧分解(参见例如方案7的步骤d)可以产生醛35。在例如方案7的步骤
2
e和f中所示的那些条件下，用RNH2还原胺化、随后环化可以产生化合物36。在一些情况
2
下(特别是当R 为烷基时)，化合物35可以在还原胺化条件下，在没有步骤f下直接转变为内酰胺36。使用常规方法，例如方案7的步骤g和h中的那些，36的皂化、随后Curtius
2 4
重排和酸解可以产生中间体A-5，其中R-R 如本文定义的。
[0092] 方案7中间体A-6可以通过方案8中所述的方法制备。通过使用常规方法，例如方案8的步骤a中的那些，化合物32与TBSOTf的反应可以产生化合物37。在碱存在下37用烯丙基溴的烷基化(参见例如方案8的步骤b)可以产生化合物38。化合物38的氧化，例如臭氧分
2
解(参见例如方案8的步骤c)可以产生醛39。39用RNH2的还原胺化、随后环化(参见例
2
如方案8中的步骤d和e)可以产生内酰胺40。在一些情况下(特别是当R 为烷基时)，化合物39可以在还原胺化条件下，在没有步骤e下直接转变为内酰胺40。使用常规方法，40的皂化，随后Curtius重排和然后TBS的去保护(参见例如方案8的步骤f、g和h)可以产生化合物41。41的还原、随后氟化(参见例如方案8的步骤i)可以产生单氟化化合物42
3 4
(R = F，R = H)。通过使用常规方法，化合物41的氟化(参见例如方案8的步骤j)可以
3 4
产生二-氟化化合物42 (R、R = F)。使用常规方法的Boc基团的去除(参见例如方案8
2 4
的步骤k)可以产生中间体A-6，其中R-R 如本文定义的。
[0093] 方案8中间体A-7可以通过方案9中所述的方法制备。在碱，例如-78℃下THF中的LDA存
在下，化合物8与市售二苄基氨基-乙醛(化合物43)的反应可以产生化合物44。使用常规方法，用TBS保护化合物44的羟基(参见例如方案9的步骤b)可以产生化合物45。二苄基基团的去除、随后环化(参见例如方案9的步骤c和d)可以产生内酰胺46。使用铜促进交叉偶联(参见例如方案9的步骤e)或钯催化交叉偶联(参见例如方案9的步骤f)
2 2
的化合物46用RX (R 为芳基或杂芳基和X如前面所定义)的N-芳基化，或者在碱存在下
2 2
化合物47用RX (R 为烷基和X如前面所定义)的N-烷基化(参见例如方案9的步骤g)
可以产生化合物47。使用常规方法，化合物47的TBS基团的去除(参见例如方案9中的步骤h)可以产生醇48，其可以使用常规方法例如方案9的步骤j容易地氧化为酮49。使用
5
常规方法的化合物48的氟化(参见例如方案9的步骤i)可以产生单氟化化合物50 (R =
6
F，R = H)。使用常规方法，例如DCM中的DAST，酮49的氟化可以产生二-氟化化合物50
5 6
(R、R = F)。化合物50的皂化(参见例如方案9的步骤k)产生羧酸51，其在使用常规方法进行Curtius重排、随后酸解时(参见例如方案9的步骤k)可以转变为中间体A-7，其中
2 5 6
R、R 和R 如本文定义的。
[0094] 方案9中间体B-1可以通过方案10中所述的方法制备。使用常规酰胺化方法，化合物20用R1CO2H或R1COCl的酰胺化(参见例如方案10的步骤a或b)产生中间体B-1，其中R1如本文定义的。
[0095] 方案101
中间体B-1也可以通过方案11中所述的方法制备。使用常规方法，化合物19用RCO2H
1
或RCOCl的酰胺化(参见例如方案11的步骤a)产生化合物52。使用常规方法，化合物52的保护基4-甲氧基苄基或2,4-二甲氧基苄基的去除(参见例如方案11的步骤b)产生中
1
间体B-1，其中R 如本文定义的。
[0096] 方案112
以类似于中间体B-1的方式，中间体B-2可以由化合物53 (中间体A-3，其中R 为4-甲
1 3 4
氧基苄基或2,4-二甲氧基苄基)通过方案12中所述的方法制备，其中R、R 和R 如本文定义的。
[0097] 方案122
以类似于中间体B-1的方式，中间体B-3可以由化合物55 (中间体A-4，其中R 为4-甲
1 3 4
氧基苄基或2,4-二甲氧基苄基)通过方案13中所述的方法制备，其中R、R 和R 如本文定义的。
[0098] 方案132
以类似于中间体B-1的方式，中间体B-4可以由化合物57 (中间体A-5，其中R 为4-甲
1 3 4
氧基苄基或2,4-二甲氧基苄基)通过方案14中所述的方法制备，其中R、R 和R 如本文定义的。
[0099] 方案142
以类似于中间体B-1的方式，中间体B-5可以由化合物59 (中间体A-6，其中R 为4-甲
1 3 4
氧基苄基或2,4-二甲氧基苄基)通过方案15中所述的方法制备，其中R、R 和R 如本文定义的。
[0100] 方案15以类似于中间体B-1的方式，中间体B-6可以由化合物61 (中间体A-7，其中R2为4-甲氧基苄基或2,4-二甲氧基苄基)通过方案16中所述的方法制备，其中R1、R5和R6如本文定义的。
[0101] 方案16式(I-b)的化合物可以通过方案17中所述的方法制备。使用常规方法，用PMB保护
化合物23的羟基(参见例如方案17的步骤a)可以产生化合物63。在碱存在下，化合物
63用烯丙基溴的烷基化(参见例如方案17的步骤b)可以产生化合物64。化合物64的氧化，例如臭氧分解(参见例如方案17的步骤c)可以产生醛65。使用常规方法(参见例如
2
方案17的步骤d)，醛65用胺RNH2的还原胺化，随后在碱性条件下环化(参见例如方案17
2
的步骤e)可以产生内酰胺66。在一些情况下(例如当R 为烷基时)，内酰胺66可以在还原胺化条件下形成。使用常规条件，皂化、随后Curtius重排和酸解(参见例如方案17的
1 1
步骤f和g)可以产生胺67，其可以在常规条件下通过与RCO2H或RCOCl反应转变为酰胺
68，例如方案17的步骤h。使用常规方法，化合物68的PMB基团的去除(参见例如方案17
3 4
的步骤i)可以产生醇，例如式(I-b)的化合物，其中R 为OH和R 为H。使用常规方法，例
3 4
如DCM中的DAST，该醇的氟化可以产生式(I-b)的化合物，其中R 为F并且R 为H。使用常规方法，醇的氧化(参见例如方案17的步骤k)可以产生酮69。在常规条件下，例如DCM
3 4
中的DAST，69的氟化可以产生式(I-b)的化合物，其中R 和R 为F。使用常规方法，69与MeMgBr的Grignard反应(参见例如方案17的步骤m)可以产生叔醇，例如式(I-b)的化
3 4
合物，其中R 为Me和R 为OH。使用常规条件，例如DCM中的DAST，该醇的氟化可以产生式
3 4 1 2
(I-b)的化合物，其中R 为Me和R 为F。在式(I-b)的化合物的各情况下，R 和R 如本文定义的。
[0102] 方案17以类似于式(I-b)的化合物的方式，式(I-c)的化合物可以由化合物33通过方案18
1 4
中所述的方法制备。在式(I-c)的化合物中，R-R 如本文定义的。
[0103] 方案18式(I-d)的化合物可以通过方案19中所述的方法制备。使用常规方法，化合物41的羰基的还原、随后添加保护基PMB (参见例如方案19的步骤a和b)可以产生化合物76。
在常规条件下，Boc基团的去除、随后酰胺化(参见例如方案19的步骤c和d)可以产生化合物77。使用常规方法，PMB基团的去除(参见例如方案19的步骤e)可以产生醇，例如式
3 4
(I-d)的化合物，其中R 为OH和R 为H。使用常规条件，例如DCM中的DAST，该醇的氟化可
3 4
以产生式(I-d)的化合物，其中R 为F和R 为H。使用常规条件，化合物的氧化(参见例如方案19的步骤f)可以产生酮78。在常规条件下，该酮的氟化(参见例如方案19的步骤
3 4
h)可以产生式(I-d)的化合物，其中R 和R 都为F。在常规条件下，化合物78与MeMgBr的Gringard反应(参见例如方案19的步骤i)可以产生叔醇，例如式(I-d)的化合物，其
3 4
中R 为Me和R 为OH。使用常规方法，例如DCM中的DAST，该叔醇的氟化可以产生式(I-d)
3 4 1 2
的化合物，其中R 为Me和R 为F。在式(I-d)的化合物的各情况下，R 和R 如本文定义的。
[0104] 方案19式(I-e)的化合物可以通过方案20中所述的方法制备。使用常规方法，化合物49中的羰基的还原、随后添加保护基PMB (参见例如方案20的步骤a和b)可以产生化合物79。
在常规条件下，化合物79的皂化、随后Curtius重排和然后酰胺化(参见例如方案20的步骤c、d和e)可以产生化合物80。使用常规方法，PMB的去除(参见例如方案20的步骤f)
5 6
可以产生醇，例如式(I-e)的化合物，其中R 为OH和R 为H。使用常规条件，例如DCM中的
5 6
DAST，该醇的氟化可以产生式(I-e)的化合物，其中R 为F和R 为H。使用常规条件，该化合物的氧化(参见例如方案20的步骤h)可以产生酮81。在常规条件下，该酮的氟化(参
5 6
见例如方案20的步骤i)可以产生式(I-e)的化合物，其中R 和R 都为F。在常规条件下，化合物81与MeMgBr的Grjngard反应(参见例如方案20的步骤j)可以产生叔醇，例如式
5 6
(I-e)的化合物，其中R 为Me和R 为OH。使用常规方法，例如DCM中的DAST，该叔醇的氟
5 6
化可以产生式(I-e)的化合物，其中R 为Me和R 为F。在式(I-e)的化合物的各情况下，
1 2
R 和R 如本文定义的。
[0105] 方案20式(I-f)的化合物可以通过方案21中所述的方法制备。在还原胺化条件下，例如MeOH中的NaBH3CN下，中间体A与化合物82 (W为芳基或杂芳基，和-CO2Me和-CHO在W的两个
2 6
相邻碳上)的反应可以产生式(I-f)的化合物，其中R-R 如本文定义的。
[0106] 方案21式(I-g)的化合物可以通过方案22中所述的方法制备。
[0107] 使用铜促进的交叉偶联(参见方案22中的步骤a)或钯催化的交叉偶联(参见方案22中的步骤b)，中间体B-1用X-Q-OMe (Q为芳基或杂芳基，X如前面所定义)的N-芳基化可以产生化合物82。使用常规条件，例如DCM中的BBr3，去甲基化可以产生化合物83。在碱、例如DMF中的Cs2CO3存在下，在高温下化合物83用R30X的O-烷基化可以产生式(I-g)的化合物，其中R1、R30和Q如本文定义的。
[0108] 方案22式(I-i)的化合物可以通过方案23中所述的方法制备。通过使用常规条件，醇23氧化为其相应的酮、随后通过保护该酮产生化合物84 (参见例如方案23的步骤a)。在碱存在下，化合物84用烯丙基溴的烷基化(参见例如方案23的步骤b)可以产生化合物85。化合物85的氧化，例如臭氧分解(参见例如方案23的步骤c)可以产生醛86。使用常规方法
2
(参见例如方案23的步骤d)，醛86用RNH2的还原胺化，随后在碱性条件下环化(参见例
2
如方案23的步骤e)可以产生内酰胺88。在一些情况下(特别是当R 为烷基时)，内酰胺
88可以在还原胺化条件下形成。反式内酰胺88可以在碱性条件下差向异构化为顺式内酰胺89 (参见例如方案23的步骤f)。使用常规条件，皂化、随后Curtius重排和氢化(参见
1 1
例如方案23的步骤g和h)可以产生胺中间体A-8，其可以通过与RCO2H或RCOCl反应，随后在常规条件下去除酮的保护基转变为酰胺I-h，例如方案23的步骤i。在常规条件，例如
3 4
DCM中的DAST下，酰胺I-h的氟化可以产生式(I-i)的化合物，其中R 和R 为F。使用常规方法，酰胺I-h的酮的还原(参见例如方案23的步骤k)可以产生醇，例如式(I-i)的化
3 4
合物，其中R 为OH和R 为H。使用常规方法，例如DCM中的DAST，该醇的氟化可以产生式
3 4
(I-i)的化合物，其中R 为F和R 为H。使用常规方法，酰胺I-h与MeMgBr的Grignard反
3 4
应(参见例如方案23的步骤l)可以产生叔醇，例如式(I-i)的化合物，其中R 为Me和R
1 2
为OH。在式(I-h和I-i)的化合物的各情况下，R 和R 如本文定义的。
[0109] 方案23式(I-j)的化合物可以通过方案24中所述的方法制备。使用常规方法，化合物91的保护基Boc的去除(参见例如方案24的步骤a)，随后用醛RCHO (R8：烷基、环烷基，或H)和CH2Cl2中的NaBH(OAc)3的还原胺化，可以产生式(I-j)的化合物，其中R1-R6如本文定义的。
[0110] 方案24实验部分
1. 一般方法
除非另外特别说明，实验步骤在以下条件下进行。所有操作在室温(约18℃至约25℃)在氮气气氛下进行。在减压下使用旋转蒸发器，或者在高效溶剂蒸发系统HT-4X (Genevac Inc.，Valley Cottage，NY，美国)中蒸发溶剂。使用的微波炉为Biotage Initiator™合成器(Charlottesville，VA，美国)。反应进程由薄层色谱法(TLC)或液相色谱-质谱法(LC-MS)跟踪，反应时间仅供说明之用给出。硅胶色谱法在具有预装填的硅胶柱体的CombiFlash®系统(Teledyne Isco，Inc.，Lincoln，NE，美国)上进行，或者在Merck硅胶60 (230-400筛目)上进行。所有最终产物的结构和纯度由以下分析方法的至少一种确认：核磁共振(NMR)和LC-MS。NMR谱记录在Bruker Avance™ 300分光光度计(Bruker BioSpin Corp.，Billerica，MA，美国)或Varian UNITY INOVA® 400 (Varian，Inc.，Palo Alto，CA，美国)，使用指明的溶剂。相对于四甲基硅烷(TMS)作为内标，以每百万的份数(ppm)给出化学位移(δ)。偶合常数(J)用赫兹(Hz)表达，用于信号形状的常规缩写为：s =单峰；
d =双重峰；t =三重峰；m =多重峰；br =宽峰；等。除非另有说明，借助于Micromass® Platform II系统或Quattro micro™系统(都购自Waters Corp.，Milford，MA，美国)使+
用电喷射离子化(ESMS)获得质谱，并报告(M+H)。
[0111] 通用LC-MS法：方法A：流动相：A)水/乙腈(99/1)和0.2%甲酸铵；B)乙腈。梯度：20-85% B，0至
1.7 min，85% B，1.7至1.84 min，85-100% B，1.84至1.85 min，100% B，1.85至1.99 min，
100-20% B，1.99至2 min。流速：5.0 mL/min。柱：Inertsil® ODS-3，50×4.6 mm，3 μm粒度。
[0112] 方法B：流动相：A)水/乙腈(99/1)和0.2%甲酸铵；B)乙腈。梯度：30-90% B，0至1.7 min，90% B，1.7至1.84 min，90-100% B，1.84至1.85 min，100% B，1.85至1.99 min，100-20% B，1.99至2 min。流速：5.0 mL/min。柱：Inertsil® C8，50×4.6 mm，3 μm粒度。
[0113] 方法C：流动相：A)水/乙腈(99/1)和0.2%甲酸铵；B)乙腈。梯度：10-85% B，0至1.7 min，85% B，1.7至1.84 min，85-100% B，1.84至1.85 min，100% B，1.85至1.99 min，100-20% B，1.99至2 min。流速：5.0 mL/min。柱：Inertsil® C8，50×4.6 mm，3 μm粒度。
[0114] 方法D：流动相：A)水/乙腈(99/1)和0.2%乙酸；B)乙腈。梯度：0-30% B，0至1.3 min，30-85% B，1.3至1.7 min，85% B，1.7至1.84 min，85-100% B，1.84至1.85 min，100% B，1.85至1.99 min，和100-20% B，1.99至2.00 min。流速：5.0 mL/min。柱：Inertsil® ODS-3，50×4.6 mm，3 μm粒度。
[0115] 方法E：流动相：A)水/乙腈(99/1)和0.2%甲酸铵；B)乙腈。梯度：0-30% B，0至1.3 min，30-85% B，1.3至1.7 min，85% B，1.7至1.84 min，85-100% B，1.84至1.85 min，100% B，1.85至1.99 min，和100-20% B，1.99至2.00 min。流速：5.0 mL/min。柱：
Inertsil® ODS-3，50×4.6 mm，3 μm粒度。
[0116] 2 本发明中间体的制备除非另外说明，所有原料和试剂得自商业供应商，例如Sigma-Aldrich (St.Louis，MO，美国)及其子公司，并在没有进一步纯化下使用。
[0117] 中间体1：7-氨基-2-(3-氯-苯基)-2-氮杂-螺[4.5]癸-1-酮中间体1如下通过上述方案3的方法制备：
步骤1：3-氧代-环己烷羧酸乙酯
向圆底烧瓶中添加3-氧代-1-环己烷羧酸(3.85 g，27.1 mmol)、乙醇(7.91 mL)、对甲苯磺酸(0.097 g，0.56 mmol)和甲苯(65.9 mL)。将混合物用迪安-斯达克分水器回流过夜。使反应混合物冷却，在减压下浓缩产生黄色油形式的4.61 g (100%)的标题化合物，
3-氧代-环己烷羧酸乙酯，将其在没有进一步纯化下用于下一步中。
[0118] 步骤2：7-烯丙基-1,4-二氧杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸乙酯将步骤1中获得的残渣溶于甲苯(100.0 mL)。添加1,2-乙二醇(3.02 mL，54.2 mmol)。
将混合物用迪安-斯达克分水器回流过夜。使混合物冷却，用乙酸乙酯(60 mL)稀释，以及用饱和NaHCO3 (20 mL×2)、水和盐水连续洗涤。通过Na2SO4干燥有机层，并在减压下浓缩。
在高真空下将所得残渣干燥过夜，产生黄色油形式的4.50 g (78%)的被保护酮，1,4-二氧
1
杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸乙酯。H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 4.11(q，J = 7.1 Hz，2H)，
3.90-3.97 (m，4H)，2.58 (tt，J = 15.7，3.8 Hz，1H)，1.88-1.99 (m，2H)，1.75-1.83 (m，
1H)，1.68-1.73 (m，1H)，1.64 (t，J = 2.6 Hz，1H)，1.47-1.59 (m，2H)，1.31-1.45 (m，1H)，
1.24 (t，J = 7.2 Hz，3 H)。
[0119] 然后向圆底烧瓶中添加N,N-二异丙胺(3.97 mL，28.4 mmol)和THF (22.1 mL)。在-20℃冷却该混合物。添加己烷(15.8 mL)中的1.6 M正丁基锂。将粗混合物在0℃搅拌30分钟，然后在-20℃冷却，滴加来自步骤1的1,4-二氧杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸乙酯(4.50 g，21.0 mmol)。将混合物在0℃搅拌30分钟，然后-20℃冷却，添加烯丙基溴(2.00 mL，23.1 mmol)。将混合物缓慢地升至室温并在室温搅拌30分钟。用冰使反应混合物猝灭，用乙酸乙酯(60 mL)稀释，以及用1N的HCl水溶液 (5 mL)、水和盐水连续洗涤。
在Na2SO4上干燥有机层并在减压下浓缩，产生黄色油形式的4.30 g (81%)的标题化合物，
7-烯丙基-1,4-二氧杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸乙酯。其在没有进一步纯化下用于下一步
1
中。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 5.64-5.74 (m，1H)，4.97-5.05 (m，2H)，4.05-4.17 (m，
2H)，3.82-3.99 (m，4H)，2.34-2.41 (m，1H)，2.27 (dt，J = 13.6，2.1 Hz，1H)，2.08-2.16 (m，2H)，1.76-1.88 (m，1H)，1.60-1.72 (m，2H)，1.46-1.54 (m，1H)，1.42 (d，J = 13.6 Hz，
1H)，1.25 (t，J = 7.1 Hz，3H)，1.08-1.16 (m，1H)。
[0120] 步骤3：7-(2-氧代-乙基)-1,4-二氧杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸乙酯通过两种氧化方法制备标题化合物。
[0121] 方法1：用OsO4和NaIO4氧化：将来自步骤2的7-烯丙基-1,4-二氧杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸乙酯(2.00 g，7.86 mmol)溶于THF (30.0 mL)和水(12.0 mL)。添加四氧化锇(0.50 g，1.97 mmol)，随后添加高碘酸钠(4.00 g，18.7 mmol)。将粗混合物在室温下搅拌4小时，用饱和硫代硫酸钠水溶液(100 mL)猝灭。将混合物在室温下搅拌30分钟，用乙酸乙酯(150 mL)稀释。将有机层用水和盐水洗涤，在Na2SO4上干燥并在减压下浓缩，产生黄色油形式的1.0 g (50%)的标题化合物，7-(2-氧代-乙基)-1,4-二氧杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸乙酯。其在没有进一步纯化下用于下一步中。1H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 9.71 (dd，J = 2.0，1.5 Hz，1H)，4.08-4.23 (m，2H)，3.83-3.96 (m，4H)，2.95 (dd，J = 17.0，1.6 Hz，1H)，2.68 (dd，J = 17.1，1.6 Hz，1H)，2.17 (d，J = 13.8 Hz，1H)，1.43-2.00 (m，7H)，1.26 (t，J = 7.0 Hz，3H)。
[0122] 方法2：臭氧分解：将来自步骤2的7-烯丙基-1,4-二氧杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸乙酯(4.1 g，16 mmol)溶于CH2Cl2 (100 mL)。将溶液在-78℃冷却。将用LG-7 (CD实验室，臭氧发生器)产生的臭氧鼓泡通过溶液1.5小时，直到溶液变为浅蓝。然后将氧气鼓泡通过，直到溶液变为无色。在-78℃添加二甲硫(11 mL，150 mmol)。将混合物缓慢升至室温和搅拌过夜。将粗混合物用水(30 mL)猝灭，以及用CH2Cl2 (50 mL×2)萃取水层。将合并的有机层用水和盐水洗涤，在Na2SO4上干燥和在减压下浓缩，产生黄色油形式的3.20 g (77%)的标题化合物，7-(2-氧代-乙基)-1,4-二氧杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸乙酯。其在没有进一步纯化下用于下一步中。
[0123] 步骤4：9-(3-氯-苯基)-1,4-二氧杂-9-氮杂-二螺[4.1.4.3]十四-8-酮将步骤3中获得的残渣(3.20 g，12.5 mmol)溶于THF (20.0 mL)，添加间氯苯胺(1.58 mL，15.0 mmol)和1滴乙酸。将粗混合物在室温搅拌30分钟。然后添加三乙酰氧基硼氢化钠(3.97 g，18.7 mmol)。将混合物在室温搅拌24小时，然后用冰猝灭，用乙酸乙酯(100 mL)稀释。用1N的NaOH水溶液(10 mL)、水和盐水连续洗涤有机层，在Na2SO4上干燥并在减压下浓缩。用硅胶色谱法(首先用CH2Cl2，然后用MeOH/CH2Cl2：1/9洗脱)纯化所得残渣，产生黄色油形式的7-[2-(3-氯-苯基氨基)-乙基]-1,4-二氧杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸
1
乙酯(2.42 g，53%)。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 7.04 (t，J = 8.1 Hz，1H)，6.62-6.65 (m，1H)，6.51 (t，J = 1.9 Hz，1H)，6.38-6.42 (m，1H)，4.09-4.17 (m，2H)，3.96-4.02 (m，
1H)，3.83-3.94 (m，3H)，3.71 (bs，1H)，3.10-3.18 (m，1H)，2.97-3.04 (m，1H)，2.30 (dt，J = 13.6，1.9 Hz，1H)，2.14-2.22 (m，1H)，1.99-2.07 (m，1H)，1.81-1.92 (m，1H)，1.52-1.75 +
(m，4H)，1.49 (d，J = 13.6 Hz，1H)，1.17-1.28 (m，4H)。ESI-MS m/z：368 (M+H)。
[0124] 将油(2.42 g，6.58 mmol)溶于无水THF (37.0 mL)。将溶液在0℃冷却，滴加THF (0.632 mL)中的2M异丙基氯化镁。将混合物在0℃搅拌1小时，然后用冰猝灭，用乙酸乙酯(80 mL)稀释。将有机层用水和盐水洗涤，在Na2SO4上干燥，并在减压下浓缩，产生白色固体形式的2.10 g (99%)的标题化合物，9-(3-氯-苯基)-1,4-二氧杂-9-氮杂-二螺+[4.1.4.3]十四-8-酮，将其在没有进一步纯化下用于下一步中。ESI-MS m/z：322 (M+H)。
[0125] 步骤5：2-(3-氯-苯基)-2-氮杂-螺[4.5]癸烷-1,7-酮向圆底烧瓶中添加来自步骤4的9-(3-氯-苯基)-1,4-二氧杂-9-氮杂-二螺
[4.1.4.3]十四-8-酮(0.45 g，0.84 mmol)，THF (10.2 mL)和2N的HCl水溶液(7.0 mL)。
在室温搅拌过夜之后，将反应混合物用乙酸乙酯(60 mL)稀释。将有机层用水和盐水洗涤，在Na2SO4上干燥，并在减压下浓缩，产生白色固体形式的0.38 g (97%)的标题化合物，
2-(3-氯-苯基)-2-氮杂-螺[4.5]癸烷-1,7-二酮，将其在没有进一步纯化下用于下一
1
步中。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 7.74 (t，J = 2.0 Hz，1H)，7.52 (ddd，J = 8.3，2.2，
1.0 Hz，1H)，7.29 (t，J = 8.1 Ha，1H)，7.13 (ddd，J = 8.1，2.0，1.0 Hz，1H)，3.72-3.81 (m，2H)，2.73 (dd，J = 13.9，1.0 Hz，1H)，2.35-2.50 (m，2H)，2.29 (dt，J = 13.9，1.7 Hz，+
1H)，2.12-2.22 (m，2H)，2.02-2.07 (m，2H)，1.71-1.89 (m，2H)。ESI-MS m/z：278 (M+H)。
[0126] 步骤6：7-氨基-2-甲基-2-氮杂-螺[4.5]癸-1-酮向圆底烧瓶中添加步骤5的2-(3-氯-苯基)-2-氮杂-螺[4.5]癸烷-1,7-二酮
(0.38 g，1.35 mmol)，甲醇(4.92 mL)和乙酸铵(1.25 g，16.2 mmol)。将混合物在室温搅拌1小时。然后添加氰基硼氢化钠(0.085 g，1.35 mmol)。在室温搅拌2小时之后，将反应混合物用冰猝灭并用乙酸乙酯(60 mL)稀释。将有机层用盐水洗涤，在Na2SO4上干燥，并在减压下浓缩，产生白色固体形式的0.35 g (94%)的标题化合物，7-氨基-2-甲基-2-氮杂-螺[4.5]癸-1-酮。标题化合物为两种非对映异构体的混合物(反式/顺式：5/2；在LC-MS法C下，具有0.80分钟的RT的第一峰规定为顺式，具有0.83分钟的RT的第二峰规+
定为反式)。ESI-MS m/z：279 (M+H)。其在没有进一步纯化下使用。
[0127] 中间体2：顺式-7-氨基-2-(3-氯-苯基)-2-氮杂-螺[4.5]癸-1-酮中间体2如下通过上述方案4的方法制备：
步骤1：环己烷-1,3-二羧酸二乙酯
将1,3-环己烷羧酸(60.0 g，348.4 mmol，顺式和反式的混合物)溶于乙醇(600 mL)。
在室温下滴加浓硫酸(10 mL)。将该混合物回流5小时，然后冷却至室温。将溶剂在减压下去除，将所得残渣用乙酸乙酯(1500 mL)稀释。将有机层用冷的饱和NaHCO3水溶液(400 mL)和盐水(2×200 mL)洗涤，在Na2SO4上干燥，在减压下浓缩，产生无色油形式的77.4 g (97%)的标题化合物，环己烷-1,3-二羧酸二乙酯，将其在没有进一步纯化下用于下一步
1
中。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 4.01-4.22 (m，4 H)，2.67 (m，1 H)，2.31 (t，J = 11.71 Hz，1 H)，1.30-2.25 (m，8 H)，1.20-1.31 (m，6 H)。
[0128] 步骤2：1-烯丙基-环己烷-1,3-二羧酸二乙酯将N,N-二异丙胺(31.8 mL，227 mmol)溶于无水THF (260 mL)，然后冷却至-78℃。
添加THF中的BuLi (1.6 M，141.9 mL，227 mmol)。将混合物在0℃搅拌30分钟，然后冷却至-78℃。滴加DMPU (97.7 mL，810 mL)，随后添加THF (60 mL)中的来自步骤1的环己烷-1,3-二羧酸二乙酯(37.0 g，162 mmol)。将混合物在-78℃搅拌1小时，然后添加烯丙基溴(15.4 mL，178 mmol)。将混合物缓慢加热至室温。在室温下搅拌过夜之后，将反应混合物用冰冷的1N的HCl水溶液猝灭，并用乙酸乙酯(300 mL)稀释。将有机层用盐水(2×200 mL)洗涤，在Na2SO4上干燥，并在减压下浓缩，产生橙色油形式的43.5 g (定量收
1
率)的标题化合物，1-烯丙基-环己烷-1,3-二羧酸二乙酯。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ
5.66-5.77 (m，1H)，5.00-5.06 (m，2H)，4.08-4.19 (m，4H)，2.50-1.31 (m，11H)，1.30 (m，
6H)。
[0129] 步骤3：反式-1-(2-氧代-乙基)-环己烷-1,3-二羧酸二乙酯将步骤2的1-烯丙基-环己烷-1,3-二羧酸二乙酯(38.0 g，140 mmol)溶于CH2Cl2
(500 mL)和MeOH (50 mL)，然后冷却至-78℃。将臭氧鼓泡通过溶液6小时，然后将氮气鼓泡通过20分钟。在-78℃滴加二甲硫(104 mL，1.4 mol)。将混合物升至室温并在室温搅拌过夜。将反应混合物在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(己烷/EtOAc，85：15至80：20)纯化所得残渣，产生无色油形式的12.4 g (32%)的标题化合物，反式-1-(2-氧代-乙基)-环己烷-1,3-二羧酸二乙酯。1H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 9.78 (dd，J = 2.40 和1.60 Hz，
1H)，4.20 (q，J = 7.20 Hz，2H)，4.10 (q，J = 7.20 Hz，2H)，2.70-2.48 (m，4H)，2.20 (m，
1H)，2.00 (m，1H)，1.75 (m，1H)，1.60-1.22 (m，10H)。ESI-MS m/z：271 (M+H)+。
[0130] 步骤4：反式-2-(3-氯-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸乙酯向圆底烧瓶中添加来自步骤3的反式-1-(2-氧代-乙基)-环己烷-1,3-二羧酸二
乙酯(9.63 g，35.6 mmol)，1,2-二氯乙烷(109 mL)，间氯苯胺(4.15 mL，39.2 mmol)和乙酸(0.05 mL)。将反应混合物在室温搅拌30分钟。添加三乙酰氧基硼氢化钠(9.00 g，
42.5 mmol)。在室温搅拌1周之后，将反应混合物用冰猝灭，并用乙酸乙酯稀释。将有机层用水和盐水洗涤，在Na2SO4上干燥，并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法纯化所得残渣，产生反式-1-[2-(3-氯-苯基氨基)-乙基]-环己烷-1,3-二羧酸二乙酯(3.20 g，23%)。1H NMR (300 MHz，CDCl3)：δ 7.05 (t，J = 8.0 Hz，1H)，6.64 (ddd，J = 8.0，2.0，1.0 Hz，
1H)，6.51 (t，J = 2.1 Hz，1H)，6.40 (ddd，J = 8.2，2.3，0.9 Hz，1H)，4.08-4.19 (m，4H)，
3.74 (bs，1H)，3.07-3.15 (m，2H)，2.42-2.51 (m，2H)，2.20-2.28 (m，1H)，1.70-2.01 (m，
4H)，1.13-1.35 (m，10 H)。ESI-MS m/z：383 (M+H)+。
[0131] 将该中间体溶于THF (68.0 mL)，和在0℃冷却。滴加异丙基氯化镁(THF中的2M，6.28 mL)。在0℃下搅拌1小时之后，将反应用冰冷的1N的HCl水溶液猝灭，和用乙酸乙酯(60.0 mL)稀释。将有机层用水和盐水洗涤，在Na2SO4上干燥，并在减压下浓缩，产生2.80 g (100%)的标题化合物，反式-2-(3-氯-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸
1
乙酯，将其在没有进一步纯化下用于下一步中。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 7.74 (t，J =
2.0 Hz，1H)，7.51 (ddd，J = 8.3，2.1，1.0 Hz，1H)，7.28 (t，J = 8.2 Hz，1H)，7.11 (ddd，J = 7.9，2.0，0.9 Hz，1H)，4.12 (q，J = 7.0 Hz，2H)，3.70-3.79 (m，2H)，3.16-3.24 (m，1H)，
2.13-2.19 (m，1H)，1.65-2.04 (m，6H)，1.58-1.64 (m，1H)，1.33-1.49 (m，2H)，1.25 (t，J +
= 7.2 Hz，3H)。ESI-MS m/z：336 (M+H)。
[0132] 步骤5：顺式-2-(3-氯-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸将无水乙醇(150 mL)在0℃冷却，添加氢化钠(0.68 g，16.7 mmol)。混合物变为澄清之后，添加无水乙醇(10.0 mL)中的来自步骤4的反式-2-(3-氯-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸乙酯(2.80 g，8.34 mmol)。将混合物回流3小时。然后将其冷却至室温并在减压下浓缩。在LC-MS上 (方法B)观察到具有相同m/z (336)的两个峰：具有1.22分钟的RT的新峰规定为顺式非对映异构体，而具有1.33分钟的RT的峰为原料，反式非对映异构体。将残渣用乙酸乙酯(200 mL)稀释，并用2N的HCl水溶液将其pH调节至
2。将有机层用盐水洗涤，在Na2SO4上干燥，并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法纯化所得残渣，产生白色固体形式的所需顺式酯，然后将其溶于THF (30.0 mL)和水(30.0 mL)。添加氢氧化锂一水合物(3.50 g，83.4 mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜，用乙酸乙酯(200 mL)稀释。用2N的HCl水溶液将混合物的pH调节至2。将有机层用盐水洗涤，在Na2SO4上干燥，并在减压下浓缩，产生白色固体形式的1.04 g (41%)的标题化合物，顺式-2-(3-氯-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸，将其在没有进一步纯化下用于下一步中。
+ +
ESI-MS m/z：308 (M+H)。ESI-MS m/z：306 (M-H)。
[0133] 步骤6：顺式-7-氨基-2-甲基-2-氮杂-螺[4.5]癸-1-酮将来自步骤6的顺式-2-(3-氯-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸
(1.04 g，3.41 mmol)溶于甲苯(17.9 mL)，添加三乙胺(0.571 mL，4.09 mmol)，随后添加二苯基膦叠氮化物(0.809 mL，3.75 mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时，然后在90℃加热2小时。将反应混合物冷却至室温，并倒入冰冷的6N的HCl水溶液(5.69 mL)中。在室温下搅拌1小时之后，分离水层。将HCl水溶液(1M，10.0 mL)加入有机层中，将混合物搅拌10分钟，分离水层。用固体Na2CO3将合并的水层碱化至pH 9，用CH2Cl2 (50 mL×2)萃取。将合并的有机层在Na2SO4上干燥，并在减压下浓缩。用RP-HPLC (梯度：乙腈水溶液，
15-95%，3.9分钟，5分钟循环时间。流速：77 ml/min。流动相添加剂：10 mM的氢氧化铵。
柱：Xbridge Prep C18 OBD (Waters Corp.，Milford，MA，美国)，19×50 mm，5 μm粒度)纯化残渣，产生白色固体形式的0.420 g(44%)的标题化合物，顺式-7-氨基-2-甲基-1-氮杂-螺[4.5]癸-1-酮。LC/MS (方法C)：RT：0.79 min；ESI-MS m/z：279 (M+H)+。
[0134] 中间体3和4：(5R,7R)-7-氨基-2-(3-氯-苯基)-2-氮杂-螺[4.5]癸-1-酮和(5S,7S)-7-氨基-2-(3-氯-苯基)-2-氮杂-螺[4.5]癸-1-酮
通过HPLC (柱：Chiralpak® OD (Diacel Chemical Industries，Inc.，Osaka，日本)，
250×20 mm；流动相：20%异丙醇，80%己烷；流速：14 mL/min；254 nm下的UV)拆分外消旋中间体2 (顺式非对映异构体)(420 mg)，产生两种对映异构体。来自手性HPLC的第一个峰(RT：15.1 min)规定为(5R,7R)-7-氨基-2-(3-氯-苯基)-2-氮杂-螺[4.5]癸-1-酮(140 mg)，和来自手性HPLC的第二个峰(RT：20.7 min)规定为(5S,7S)-7-氨基-2-(3-氯-苯基)-2-氮杂-螺[4.5]癸-1-酮(120 mg)。
[0135] 中间体5：7-氨基-2-(3-氟-苯基)-2-氮杂-螺[4.5]癸-1-酮使用对于中间体1描述的相同的实验步骤，由12.5 mmol的7-(2-氧代-乙基)-1,4-二氧杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸乙酯和15.0 mmol的3-氟苯胺制备中间体5；获得1.30 g的粗标题化合物。标题化合物为顺式和反式非对映异构体的混合物(LC-MS (方法C)：RT
0.70分钟(顺式)和0.73分钟(反式)；顺式/反式：1/2；纯度(顺式+反式)(UV254)：
+
94%)。ESI-MS m/z：263 (M+H)。其在没有进一步纯化下使用。
[0136] 中间体6：顺式-7-氨基-2-(3-氟-苯基)-2-氮杂-螺[4.5]癸-1-酮使用在中间体2的合成中描述的相同的实验步骤，由49.9 mmol的反式-1-(2-氧
代-乙基-环已烷-1,3-二羧酸二乙酯和59.9 mmol的间氟苯胺制备中间体6。当仅一部分中间体用于合成标题化合物时，不提供标题化合物的获得的量和收率。LC-MS (方法C)：
+
RT：0.70 min (顺式)；纯度(UV254)：95%。ESI-MS m/z：263 (M+H)。其在没有进一步纯化下使用。
[0137] 中间体7：7-氨基-2-(6-甲基-吡啶-2-基)-2-氮杂-螺[4.5]癸-1-酮使用中间体1中所述的相同的实验步骤，由3.55 mmol的7-(2-氧代-乙基)-1,4-二
氧杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸乙酯和3.91 mmol的2-氨基-6-甲基吡啶制备中间体7。
+
LC-MS (方法D)：RT：0.84 min(一个峰中的顺式和反式)。ESI-MS m/z：260 (M+H)。其在没有进一步纯化下使用。
[0138] 中间体8：顺式-7-氨基-2-(6-甲基-吡啶-2-基)-2-氮杂-螺[4.5]癸-1-酮使用在中间体2的合成中描述的相同的实验步骤，由3.55 mmol的反式-1-(2-氧代-乙基-环已烷-1,3-二羧酸二乙酯和3.91 mmol的2-氨基-6-甲基吡啶制备中间体
8。LC-MS (方法D): RT: 0.66 min; ESI-MS m/z: 260 (M+H)+。其在没有进一步纯化下使用。
[0139] 中间体9：顺式-7-氨基-2-(3-氰基-苯基)-2-氮杂-螺[4.5]癸-1-酮使用中间体1中所述相同的实验步骤，由1.66 mmol的7-(2-氧代-乙基)-1,4-二氧
杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸乙酯和1.99 mmol的3-氨基-苯并腈制备中间体9，LC-MS (方法A)：分别观察到具有0.40 min (顺式)和0.44 min (反式)的RT的两个峰。ESI-MS +
m/z：270 (M+H)。其在没有进一步纯化下使用。
[0140] 中间体10：顺式-7-氨基-2-(2,4-二甲氧基-苄基)-2-氮杂-螺[4.5]癸-1-酮盐酸盐中间体10如下通过上述方案4的方法制备：
步骤1：环己烷-1,3-二羧酸二乙酯
在室温下向1,3-环己烷羧酸(340 g，2.0 mol，顺式/反式异构体的混合物)在乙醇(3.5 L)中的溶液中滴加硫酸(浓缩，53 mL)，并将混合物回流6.5 h。冷却之后，去除溶剂，将残渣用乙酸乙酯(1 L)稀释并用冷的NaOH水溶液处理，直到pH 9。将有机层用水、盐水洗涤，在Na2SO4上干燥并在真空下浓缩，产生无色油形式的标题产物(466 g，定量)，将其在没有进一步纯化下用于下一步中。
[0141] 步骤2：1-烯丙基-环己烷-1,3-二羧酸二乙酯经1小时20分钟的时间段向N,N-二异丙胺(272 mL，1.94 mol)在无水THF (1.4 L)
中的冷却溶液中添加n-BuLi (己烷中1.6M，1.21 L，1.94 mol)。将混合物在0℃搅拌1小时并再次冷却至-78℃。滴加DMPU (834 mL，6.92 mol)，随后添加来自步骤1的环己烷-1,3-二羧酸二乙酯(316 g，1.38 mol)在THF (400 mL)中的溶液。将混合物在-78℃搅拌2.5小时，然后添加烯丙基溴(132 mL，1.52 mol)。将混合物缓慢升至室温并在室温搅拌过夜。将混合物用冰冷的HCl水溶液(1 N，1 L)猝灭，用乙酸乙酯(30 mL)稀释并萃取。将有机层用水(4×1.5 L)、盐水洗涤，在Na2SO4上干燥并在减压下浓缩，产生稠油形式的371 g的标题化合物，将其在没有进一步纯化下用于下一步中。
[0142] 步骤3：1-(2,3-二羟基-丙基)-环己烷-1,3-二羧酸二乙酯向来自步骤2的1-烯丙基-环己烷-1,3-二羧酸二乙酯(250 g，0.93 mol)在叔丁醇
(2.3 L)和水(2.3 L)中的溶液中添加铁氰酸钾(920 g，2.79 mol)，碳酸钾(386 g，2.79 mol)，锇酸钾二水合物(4.75 g，13 mmol)和奎宁环(0.073 g，7.0 mmol)。将所得深色溶液在室温搅拌过夜，然后用分批添加的亚硫酸钠(1.05 kg，8.37 mol)猝灭。在用乙酸乙酯稀释之后，将其萃取，用水和盐水洗涤，在Na2SO4上干燥，和在减压下浓缩。将所得残渣(224 g)在无延迟和没有进一步纯化下用于下一步中。
[0143] 步骤4：反式-1-(2-氧代-乙基)-环己烷-1,3-二羧酸二乙酯向来自步骤3的1-(2,3-二羟基-丙基)-环己烷-1,3-二羧酸二乙酯(224 g，0.74
mol)在THF (0.74 L)、叔丁醇(1.48 L)和水(1.48 L)中的溶液中添加碳酸氢钠(560 g，
6.66 mol)，随后分批添加高碘酸钠(475 g，2.22 mol)。将所得白色浆体在室温下搅拌2小时。将白色固体滤出并用乙酸乙酯洗涤。将滤液的有机层用亚硫酸钠的饱和水溶液、水和盐水洗涤，在Na2SO4上干燥并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(己烷中的20%乙酸乙酯)纯化所得残渣，产生稠油形式的87 g (35%，步骤1和2的合并收率)的标题化合物。
[0144] 步骤5：反式-1-[2-(3,5-二甲氧基-苄基氨基)-乙基]-环己烷-1,3-二羧酸二乙酯向来自步骤4的反式-1-(2-氧代-乙基)-环己烷-1,3-二羧酸二乙酯(89.0 g，329
mmol)和2,4-二甲氧基苄胺(59.4 mL，395 mmol)在1,2-二氯乙烷(659 mL)中的溶液中添加乙酸(3.80 mL，65.9 mmol)。将混合物在室温下搅拌1.5小时。然后分批添加三乙酰氧基硼氢化钠(102.8 g，461 mmol)，并在室温下再次搅拌2.5小时。将混合物用碎冰猝灭，用二氯甲烷稀释和萃取。将有机层用水和盐水洗涤，在Na2SO4上干燥，并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(溶剂：乙酸乙酯中的10%甲醇)纯化所得残渣，产生黄色胶形式的58.2 g (42%)的标题化合物，1-[2-(3,5-二甲氧基-苄基氨基)-乙基]-环己烷-1,3-二羧酸二
1
乙酯。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 7.07-7.21 (m，1 H)，6.34-6.60 (m，3 H)，4.11 (q，J = 7.0 Hz，4 H)，3.68-3.91 (m，8 H)，2.50-2.79 (m，2 H)，2.27-2.50 (m，2 H)，2.15 (d，J = 12.9 Hz，1 H)，1.97 (s，2 H)，1.55-1.95 (m，4 H)，1.00-1.45 (m，8 H)。
[0145] 步骤6：顺式-2-(2,4-二甲氧基-苄基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸分批向冷却(0℃)乙醇(0.7 L)中添加氢化钠(矿物油中的60%，16.2 g，406 mmol)。
将混合物在室温搅拌30分钟获得透明溶液。然后缓慢添加来自步骤5的1-[2-(3,5-二甲氧基-苄基氨基)-乙基]-环己烷-1,3-二羧酸二乙酯(57.0 g，135 mmol)的乙醇(0.7 L)溶液，将混合物回流16小时。将所得混合物在室温下在减压下浓缩，然后用乙酸乙酯稀释，用1N的HCl溶液洗涤。将有机层用水和盐水洗涤，在Na2SO4上干燥，并在减压下浓缩。
通过硅胶色谱法(溶剂：二氯甲烷中的10%甲醇)纯化残渣，产生20.0 g (43%)的标题化
1
合物，顺式-2-(2,4-二甲氧基-苄基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸。H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 6.98-7.13 (m，1 H)，6.29-6.56 (m，2 H)，4.21-4.56 (m，2 H)，3.79 (d，J = 5.1 Hz，6 H)，2.82-3.33 (m，2 H)，1.28-2.51 (m，11 H)。
[0146] 步骤7：顺式-7-氨基-2-(2,4-二甲氧基-苄基)-2-氮杂-螺[4.5]癸-1-酮向来自步骤6的顺式-2-(2,4-二甲氧基-苄基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸
烷-7-羧酸在甲苯(290 mL)中的溶液中添加三乙胺(9.63 mL，69.1 mmol)，随后添加二苯基磷酰基叠氮化物(13.7 mL，63.3 mL)。将混合物在室温下搅拌1.5小时，然后在90℃加热
3小时。将反应混合物冷却至0℃，用缓慢添加的HCl (6N，50 mL)处理，并在室温下搅拌1小时。将所得混合物用水稀释，并将两层分离。将水层冷却至0℃，用40%的KOH水溶液中和至pH～7，然后用饱和NaHCO3碱化，并用乙酸乙酯萃取，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩，获得4.3 g的粗顺式-7-氨基-2-(2,4-二甲氧基-苄基)-2-氮杂-螺[4.5]癸-1-酮。
将有机层用水、盐水洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩。所得残渣(35 g)的NMR显示其为未水解的顺式-2-(2,4-二甲氧基-苄基)-7-异氰酸根合-2-氮杂-螺[4.5]癸-1-酮(被DPPA
1
污染)。H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 1.02-1.97 (m，10 H)，2.65-3.14 (m，3 H)，3.68-3.82 (m，6 H)，4.20 (d，1 H)，4.39-4.52 (m，1 H)，6.17-6.54 (m，2 H)，6.83-7.09 (m，1 H)。
[0147] 向顺式-2-(2,4-二甲氧基-苄基)-7-异氰酸根合-2-氮杂-螺[4.5]癸-1-酮(34.8 g，被DPPA污染)在THF (313 mL)中的溶液中添加HCl溶液(6N，103 mL)，并在室温下搅拌14小时。在冷却至0℃之后，将其用KOH (40%，直到pH～9)碱化，用EtOAc萃取，用水、盐水洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩。与先前从水层获得的残渣合并，通过色谱法，使1
用二氯甲烷中的10%甲醇纯化获得白色固体形式的11.2 g (61%)的标题化合物。H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 0.94-2.10 (m，10 H)，2.67 (t，J=11.33 Hz，1 H)，2.94-3.25 (m，2 H)，3.71-3.84 (m，6 H)，4.42 (s，2 H)，6.26-6.59 (m，2 H)，7.08 (d，J=8.21 Hz，1 H)。
[0148] 步骤8：顺式-7-氨基-2-(2,4-二甲氧基-苄基)-2-氮杂-螺[4.5]癸-1-酮盐酸盐
在0℃下向来自步骤8的游离碱顺式-7-氨基-2-(2,4-二甲氧基-苄基)-2-氮杂-螺
[4.5]癸-1-酮(11.16 g，35.04 mmol)在二氯甲烷(100 mL)中的溶液中添加HCl溶液(二噁烷中的4 M，25 mL)并在0℃下搅拌30分钟。在～25-30℃下将所得白色浆体在减压下浓缩。将白色固体在减压下在室温下干燥18小时，产生12.73 g (定量收率)的标题化合物，顺式-7-氨基-2-(2,4-二甲氧基-苄基)-2-氮杂-螺[4.5]癸-1-酮盐酸盐。1H NMR (400 MHz，DMSO-d6)：δ 1.09-2.21 (m，10 H)，2.83-3.33 (m，3 H)，3.75 (d，J=5.46 Hz，6 H)，4.27 (s，2 H)，6.48 (dd，J=8.39，2.15 Hz，1 H)，6.56 (d，J=2.34 Hz，1 H)，6.97 (d，J=8.20 Hz，1 H)。MS：m/z 319.13 (M+H)+。元素分析：对于C18H26N2O3.HCl.0.5H2O计算，C，
59.41；H，7.76；N，7.70。实测(found)：C，59.41；H，7.84；N，17.81。
[0149] 步骤7b：顺式-7-氨基-2-(2,4-二甲氧基-苄基)-2-氮杂-螺[4.5]癸-1-酮盐酸盐另外，步骤7可以如下述进行，其取消步骤8。
[0150] 向来自步骤6的顺式-2-(2,4-二甲氧基-苄基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸在甲苯(300 mL)中的溶液中添加三乙胺(9.63 mL，69.1 mmol)，随后添加二苯基磷酰基叠氮化物(12.4 mL，57.6 mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时，然后在90℃加热3.5小时。将反应混合物冷却至室温，并倒入冰冷的6N的HCl水溶液(120 mL)中。将混合物在室温下搅拌过夜。过滤形成的固体，用甲苯(50 mL×2)洗涤，并在烘箱中干燥，产生16.6 g (81%)的标题化合物，顺式-7-氨基-2-(2,4-二甲氧基-苄基)-2-氮杂-螺[4.5]
1
癸-1-酮盐酸盐。H NMR (400 MHz，DMSO-d6)：δ 6.97 (d，J = 8.20 Hz，1 H)，6.56 (d，J = 2.34 Hz，1 H)，6.48 (dd，J = 8.39，2.15 Hz，1 H)，4.27 (s，2 H)，3.75 (d，J = 5.46 +
Hz，6 H)，2.83-3.33 (m，3 H)，1.09-2.21 (m，10 H)。ESI-MS m/z：319.13 (M+H)。元素分析：对于C18H26N2O3.HCl.0.5H2O计算，C，59.41；H，7.76；N，7.70。实测：C，59.41；H，7.84；N，
17.81。将滤液的水层冷却至0℃，用固体K2CO3中和至pH 7，用CH2Cl2萃取。将有机层用盐水洗涤，在Na2SO4上干燥，并在减压下浓缩，产生1.4 g的游离碱顺式-7-氨基-2-(2,4-二
1
甲氧基-苄基)-2-氮杂-螺[4.5]癸-1-酮。H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 7.08 (d，J =
8.2 Hz，1 H)，6.26-6.59 (m，2 H)，4.42 (s，2 H)，3.71-3.84 (m，6 H)，2.94-3.25 (m，2 H)，+
2.67 (t，J = 11.3 Hz，1 H)，0.94-2.10 (m，10 H)。ESI-MS m/z：319.13 (M+H)。
[0151] 中间体11：[顺式-2-(4-甲氧基-苄基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]氨基甲酸叔丁酯步骤1：反式-2-(4-甲氧基-苄基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸乙酯
向来自步骤4的反式-1-(2-氧代-乙基)-环己烷-1,3-二羧酸二乙酯(4.36 g，16.1 mmol)和4-甲氧基苄胺(2.32 g，16.9 mmol)在THF (100 mL)中的溶液中添加三乙酰氧基硼氢化钠(5.13 g，24.2 mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜，然后用冷的饱和NaHCO3水溶液猝灭。用DCM(3×50 mL)萃取水层。将合并的有机层在减压下浓缩。将残渣溶于DCM，用
1N的HCl (2×50 mL)、饱和NaHCO3水溶液和盐水连续洗涤，在MgSO4上干燥，过滤并在减压下浓缩，产生5.10 g (91.6%)的标题化合物，反式-2-(4-甲氧基-苄基)-1-氧代-2-氮
1
杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸乙酯。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 7.14 (d，J = 8.6 Hz，
2H)，6.85 (d，J = 8.7 Hz，2H)，4.40 (d，J = 14.5 Hz，1H)，4.31 (d，J = 14.5 Hz，1H)，
4.11 (q，J = 7.2 Hz，2H)，3.80 (s，3H)，3.24(tt，J = 3.9，10.9 Hz，1H)，3.07-3.15 (m，+
2H)，1.31-2.08 (m，10H)，1.25 (t，J = 7.1 Hz，2H)。ESI-MS m/z：346 (M+H)。其在没有进一步纯化下用于下一步中。
[0152] 步骤2：顺式-2-(4-甲氧基-苄基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸乙酯
在0℃下向来自步骤2的反式-2-(4-甲氧基-苄基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸
烷-7-羧酸乙酯(5.10 g，14.74 mmol)在无水乙醇(80 mL)中的溶液中分批添加NaH (矿物油中的60%；0.968 g)。将反应混合物在65℃搅拌过夜，然后冷却至室温，并在减压下浓缩。将残渣溶于水(20 mL)中，用DCM (3×30 mL)萃取水层。将合并的有机层用饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤，过滤并在减压下浓缩。将所得残渣在硅胶(己烷中的0至50%乙酸乙酯)上进行色谱，产生2.56 g (46%)的标题化合物，顺式-2-(4-甲氧基-苄基)-1-氧
1
代-2-氮杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸乙酯。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 7.14 (d，J =
8.6 Hz，2H)，6.85 (d，J = 8.7 Hz，2H)，4.39 (s，2H)，4.12 (q，J = 7.1 Hz，2H)，3.79 (s，
3H)，3.07-3.20 (m，2H)，2.32 (tt，J = 3.4，12.6 Hz，1H)，1.62-2.01 (m，7H)，1.29-1.52 +
(m，3H)，1.24 (t，J = 7.1 Hz，2H)。ESI-MS m/z：346 (M+H)。
[0153] 用1N的HCl将水层酸化至～pH2，用DCM (3×30 mL)萃取。将合并的有机层在MgSO4上干燥，过滤并浓缩，产生两种非对映异构体的混合物形式的0.79 g (15%)的2-(4-甲氧基-苄基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸。
[0154] 步骤3：顺式-2-(4-甲氧基-苄基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸在室温下向来自步骤2的顺式-2-(4-甲氧基-苄基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸
烷-7-羧酸乙酯(1.76 g，5.10 mmol)在THF(45 mL)中的溶液中添加水(15 mL)中的1.0 M的LiOH。将反应混合物在室温下搅拌过夜，在减压下蒸发THF。将残留水层用乙醚(20 mL)洗涤，用1N的HCl酸化至pH 2。将所得沉淀过滤，用水(3×)洗涤，并在减压下干燥，产生白色固体形式的1.4 g (87%)的标题化合物，顺式-2-(4-甲氧基-苄基)-1-氧代-2-氮
1
杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 7.14 (d，J = 8.6 Hz，2H)，
6.85 (d，J = 8.7 Hz，2H)，4.39 (s，2H)，3.80 (s，3H)，3.08-3.23 (m，2H)，2.36 (tt，J = +
3.4，12.4 Hz，1H)，1.63-2.06 (m，7H)，1.29-1.55 (m，3H)。ESI-MS m/z：318 (M+H)。
[0155] 步骤4：[顺式-2-(4-甲氧基-苄基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-氨基甲酸叔丁酯将来自步骤3的顺式-2-(4-甲氧基-苄基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸
(0.510 g，1.61 mmol)溶于甲苯(20.0 mL)。添加三乙胺(trithylamine)(0.246 mL，1.77 mmol)，随后添加二苯基膦叠氮化物(0.381 mL，1.77 mmol)。将反应混合物在室温下搅拌1小时，然后在90℃加热2小时。将混合物冷却至室温，添加叔丁醇(6.15 mL，64.3 mmol)，并将混合物在90℃加热24小时。将反应混合物冷却至室温并在减压下浓缩。将所得残渣用乙酸乙酯(100 mL)稀释，用饱和的NaHCO3水溶液、水和盐水洗涤，在Na2SO4上干燥，并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(己烷/乙酸乙酯：30/70)纯化残渣，产生0.50 g (80%)的标题化合物，顺式-2-(4-甲氧基-苄基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-氨基甲酸叔
1
丁酯。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 7.13 (d，J = 8.4 Hz，2H)，6.85 (d，J = 8.7 Hz，2H)，
4.71 (bs，1H)，4.38 (m，2H)，3.79 (s，3H)，3.55 (bs，1H)，3.07-3.18 (m，2H)，1.35-1.98 +
(m，18H)，1.13-1.22 (m，1H)。ESI-MS m/z：389 (M+H)。
[0156] 中间体12：(顺式-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基)-氨基甲酸叔丁酯向圆底烧瓶中添加[顺式-2-(4-甲氧基-苄基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-氨基甲酸叔丁酯(中间体11)(0.500 g，1.29 mmol)和乙腈(25 mL)。添加水(10.0 mL)中的硝酸高铈铵(2.12 g，3.86 mmol)。将粗混合物在室温下搅拌1天，然后用CH2Cl2 (100 mL)稀释。将有机层用水和盐水洗涤，在Na2SO4上干燥，并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(CH2Cl2/MeOH：9/1)纯化残渣，产生0.252 g (73%)的标题化合物，顺式-1-氧
1
代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-氨基甲酸叔丁酯。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 6.31 (bs，1H)，4.66 (d，J = 7.0 Hz，1H)，3.48-3.60 (bs，1H)，3.27-3.38 (m，2H)，1.92-2.16 (m，3H)，1.74-1.84 (m，2H)，1.43-1.60 (m，12H)，1.08-1.30 (m，12H)。ESI-MS m/z：269 +
(M+H)。
[0157] 中间体12也如下制备：向圆底烧瓶中添加来自对于中间体10的步骤8的顺式-7-氨基-2-(2,4-二甲氧
基-苄基)-2-氮杂-螺[4.5]癸-1-酮HCl盐(3.00 g，8.46 mmol，中间体10)和三氟乙酸(10.0 mL)。将混合物回流1.5小时，然后冷却至室温并在减压下浓缩。将所得残渣用CH2Cl2 (10 mL)稀释并在减压下浓缩。将该步骤重复两次以去除过量的三氟乙酸。将所得残渣溶于THF (20.0 mL)，添加二碳酸二叔丁酯(2.03 g，9.30 mmol)和三乙胺(3.53 mL，
25.4 mmol)。在室温下搅拌过夜之后，将反应混合物通过Celite®过滤，将滤液在减压下浓+
缩产生标题化合物。LC-MS (方法C)：RT：0.94 min。ESI-MS m/z：269 (M+H)。其在没有进一步纯化下使用。
[0158] 中间体13：顺式-2-(3-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]氨基甲酸叔丁酯
在160℃下通过微波(Biotage)加热(顺式-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基)-氨
基甲酸叔丁酯(0.036 g，0.13 mmol，中间体12)、3-氟碘苯(0.030 g，0.13 mmol)、碘化铜(I)(0.013 g，0.067 mmol)、碳酸钾(0.037 g，0.27 mmol)和N,N'-二甲基-1-乙烷-1,2-二胺(0.012 g，0.13 mmol)在1,4-二噁烷(2.0 mL，26 mmol)中的混合物2小时。将混合物冷却至室温，并经过Celite®的层。将滤液在减压下浓缩。用制备型TLC(己烷/乙酸乙酯：
1/1)纯化残渣，产生0.030 g (62%)的标题化合物，顺式-2-(3-氟-苯基)-1-氧代-2-氮
1
杂-螺[4.5]癸-7-基]-氨基甲酸叔丁酯。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 7.57 (dt，J =
11.4，2.3 Hz，1H)，7.27-7.37 (m，2H)，6.81-6.87 (m，1H)，4.60 (bs，1H)，3.71-3.82 (m，
2H)，3.58 (bs，1H)，1.95-2.22 (m，3H)，1.80-1.90 (m，2H)，1.60-1.70 (m，1H)，1.47-1.57 +
(m，3H)，1.44 (s，9H)，1.12-1.23 (m，1H)。ESI-MS m/z：363 (M+H)。
[0159] 中间体14：顺式-[2-(6-甲基-吡嗪-2-基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]氨基甲酸叔丁酯
使用对于中间体13所述的相同的实验步骤，以0.28 mmol的反应规模，由中间体12和
1
2-氯-6-甲基吡嗪制备中间体14，获得0.040 g (40%)的标题化合物。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 9.51 (s，1H)，8.18 (s，1H)，4.57 (d，J = 7.9 Hz，1H)，3.90-4.05 (m，2H)，3.59 (s，1H)，2.49 (s，3H)，1.96-2.22 (m，3H)，1.81-1.93 (m，2H)，1.47-1.69 (m，4H)，1.44 (s，+
9H)，1.17 (qd，J = 12.4，4.1 Hz，1H)。ESI-MS m/z：361 (M+H)。
[0160] 中间体15：顺式-[2-(3,5-二氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]氨基甲酸叔丁酯使用对于中间体13所述的相同的实验步骤，以0.47 mmol的反应规模，由中间体12和
1
1-溴-3,5-二氟代苯制备中间体15，获得0.030 g (17%)的产物。H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 7.29 (dd，J = 9.8，2.2 Hz，2H)，6.59 (tt，J = 8.9，2.2 Hz，1H)，4.54 (d，J = 8.1 Hz，
1H)，3.68-3.79 (m，2H)，3.58 (bs，1H)，1.96-2.24 (m，3H)，1.80-1.90 (m，2H)，1.40-1.68 +
(m，13H)，1.17 (qd，J = 12.4，4.0 Hz，1H)。ESI-MS m/z：381 (M+H)。
[0161] 中间体16：顺式-[1-氧代-2-(6-三氟甲基-吡啶-2-基)-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]氨基甲酸叔丁酯
使用对于中间体13所述的相同的实验步骤，以0.34 mmol的反应规模，由中间体12和
2-溴-6-(三氟甲基)吡啶制备中间体16。LC-MS (方法C)：RT：1.66 min；ESI-MS m/z：
414 (M+H)+。其在没有进一步纯化下使用。
[0162] 中间体17：顺式-2-(2-甲基-嘧啶-4-基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]氨基甲酸叔丁酯中间体17如下通过上述方案2的方法制备：
在80℃将4-氯-2-甲基嘧啶(0.192 g，1.49 mmol)、(顺式-1-氧代-2-氮杂-螺
[4.5]癸-7-基)-氨基甲酸叔丁酯(0.40 g，1.49 mmol，中间体12)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)氯仿加合物(0.154 g，0.149 mmol)、二碳酸铯(0.680 g，2.09 mmol)和外消旋BINAP (0.278 g，0.447 mmol)在甲苯(5.0 mL)中的混合物加热4小时。将反应混合物冷却至室温。将催化剂过滤出，并将滤液在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(己烷中的0-30%乙酸乙酯)纯化残渣，产生白色固体形式的0.318 g (59%)的标题化合物，顺式-2-(2-甲基-嘧
1
啶-4-基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]氨基甲酸叔丁酯。H NMR (400 MHz，
CDCl3) δ 8.49 (d，J = 5.8 Hz，2H)，8.17 (d，J = 5.8 Hz，1H)，4.52 (bs，1H)，3.92-4.13 (m，2H)，3.58 (bs，1H)，2.64 (s，3H)，1.97-2.17 (m，3H)，1.80-1.92 (m，2H)，1.47-1.63 +
(m，4H)，1.44 (s，9H)，1.11-1.22 (m，1H)。ESI-MS m/z：361 (M+H)。
[0163] 中间体18：顺式-6-甲基-吡啶-2-羧酸(1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基)-酰胺
途径1：中间体18如下通过上述方案10的方法制备：
向圆底烧瓶中添加来自对于中间体10的步骤8的顺式-7-氨基-2-(2,4-二甲氧
基-苄基)-2-氮杂-螺[4.5]癸-1-酮HCl盐(2.00 g，5.64 mmol，中间体10)和三氟乙酸(8.0 mL)。将混合物回流1.5小时，然后冷却至室温并在减压下浓缩。将所得残渣用CH2Cl2 (10 mL)稀释并在减压下浓缩。将该步骤重复两次以去除过量的三氟乙酸。将所得残渣溶于CH2Cl2 (40.0 mL)，添加6-甲基吡啶甲酸(0.773 g，5.64 mmol)和BOP (2.49 g，5.64 mmol)以及CH2Cl2 (5.0 mL)中的三乙胺(3.93 mL，28.2 mmol)。将反应混合物在室温下搅拌4小时，然后在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(CH2Cl2/MeOH：80/20)纯化残渣，产生白色固体形式的1.23 g (76%)的标题化合物，顺式-6-甲基-吡啶-2-羧酸(1-氧代-2-氮+
杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺。ESI-MS m/z：288 (M+H)。
[0164] 途径2：中间体18也如下通过上述方案11的方法制备：步骤1：顺式-6-甲基-吡啶-2-羧酸[2-(4-甲氧基-苄基)-1-氧代-2-氮杂-螺
[4.5]癸-7-基]-酰胺
将[顺式-2-(4-甲氧基-苄基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-氨基甲酸
叔丁酯(0.50 g，1.29 mmol，中间体11)溶于CH2Cl2 (10.0 mL)，以及添加4M的HCl/二噁烷(3.2 mL)。将混合物在室温下搅拌2小时并浓缩。将残渣溶于CH2Cl2 (20.0 mL)，添加6-甲基吡啶甲酸(0.176 g，1.29 mmol)和BOP (0.569 g，1.29 mmol)以及CH2Cl2 (5.0 mL)中的三乙胺(0.538 mL，3.86 mmol)。将反应混合物在室温下搅拌4小时，然后在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(己烷/乙酸乙酯：3/7)纯化残渣，产生0.48 g (91%)的标题化合物，顺式-6-甲基-吡啶-2-羧酸[2-(4-甲氧基-苄基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
1
癸-7-基]-酰胺。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 8.09 (d，J = 8.6 Hz，1H)，7.94 (d，J = 7.1 Hz，1H)，7.68 (t，J = 7.6 Hz，1H)，7.24 (d，J = 7.4 Hz，1H)，7.10-7.12 (m，2H)，
6.80-6.84 (m，2H)，4.33-4.41 (m，2H)，3.98-4.08 (m，1H)，3.77 (s，3H)，3.10-3.19 (m，
2H)，2.55 (s，3H)，1.91-2.09 (m，3H)，1.80-1.86 (m，1H)，1.75-1.79 (m，2H)，1.63-1.71 +
(m，1H)，1.29-1.58 (m，3H)。ESI-MS m/z：408 (M+H)。
[0165] 步骤2：顺式-6-甲基-吡啶-2-羧酸(1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基)-酰胺向圆底烧瓶中添加水(7.2 mL)中的来自步骤1的顺式-6-甲基-吡啶-2-羧酸
[2-(4-甲氧基-苄基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺(0.480 g，1.18 mmol)、乙腈(18.3 mL)和硝酸高铈铵(1.94 g，3.53 mmol)。将反应混合物在室温下搅拌1天，然后用CH2Cl2 (100 mL)稀释。将有机层用水和盐水洗涤，在Na2SO4上干燥，并在减压下浓缩。
通过硅胶色谱法(CH2Cl2/MeOH：4/1)纯化残渣，产生白色固体形式的0.210 g (61%)的标题化合物，顺式-6-甲基-吡啶-2-羧酸(1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺。1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.08 (d，J = 8.6 Hz，1H)，7.96 (d，J = 7.6 Hz，1H)，7.70 (t，J = 7.7 Hz，1H)，7.25 (d，J = 7.6 Hz，1H)，6.23 (s，1H)，4.00-4.10 (m，1H)，3.30-3.39 (m，2H)，2.56 (s，3H)，2.15-2.23 (m，1H)，2.07-2.14 (m，2H)，1.81-1.87 (m，2H)，1.70 (t，J = 12.4 Hz，1H)，1.48-1.64 (m，3H)，1.30-1.38 (m，1H)。ESI-MS m/z：288 (M+H)+。
[0166] 途径3：中间体18也由顺式-7-氨基-2-(2,4-二甲氧基-苄基)-2-氮杂-螺[4.5]癸-1-酮(中间体10)制备。
[0167] 向来自对于中间体10的步骤8的7-氨基-2-(2,4-二甲氧基-苄基)-2-氮杂-螺[4.5]癸-1-酮HCl盐(0.20 g，0.63 mmol)在CH2Cl2 (9.37 mL)中的溶液中添加6-甲基-吡啶-2-羧酸(0.095 g，0.691 mmol)和PyBOP (0.360 g，0.691 mmol)，随后添加三乙胺(0.306 mL，2.20 mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，然后转移至具有CH2Cl2 (30 mL)的125 mL分液漏斗。将有机层用饱和的NH4Cl、饱和的NaHCO3和盐水洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(二氯甲烷中的0至50%乙酸乙酯)纯化残渣，产生顺式-6-甲基-吡啶-2-羧酸[2-2,4-二甲氧基-苄基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基-酰胺，其然后在TFA (0.537 mL)中加热至回流1小时。将反应混合物冷却至室温并浓缩。将残渣溶于CH2Cl2，用饱和NaHCO3和盐水洗涤，在MgSO4上干燥并在减压下浓缩，产生0.15 g (83%)的标题化合物，顺式-6-甲基-吡啶-2-羧酸(1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基)-酰胺，将其在没有进一步纯化下用于下一步中。ESI-MS m/z：288 +
(M+H)。
[0168] 途径4：中间体18也如下通过上述方案11的方法制备：步骤1：顺式-7-氨基-2-(4-甲氧基-苄基)-2-氮杂-螺[4.5]癸-1-酮
将来自对于中间体11的步骤3的顺式-2-(4-甲氧基-苄基)-1-氧代-2-氮杂-螺
[4.5]癸烷-7-羧酸(1.52 g，4.79 mmol)溶于甲苯(22.0 mL)。添加三乙胺(0.801 mL，
5.75 mmol)，随后添加二苯基膦叠氮化物(1.14 mL，5.27 mmol)。将反应混合物在室温下搅拌1小时，然后在90℃加热2小时。将混合物冷却至室温，并缓慢地加入到冰冷6.0 M的HCl的水(8.0 mL)溶液中。将所得双相混合物在室温下剧烈搅拌1小时。将水层分离，用水(50 mL)稀释，用固体Na2CO3碱化至pH 10。将混合物用CH2Cl2 (2×50 mL)萃取。将合并的有机层在Na2SO4上干燥，过滤并在减压下浓缩，产生1.38 g的标题化合物，顺式-7-氨基-2-(4-甲氧基-苄基)-2-氮杂-螺[4.5]癸-1-酮，将其在没有进一步纯化下用于下
1
一步中。H NMR (300 MHz，CDCl3) δ 7.1 (d，J = 8.7 Hz，2H)，6.83 (d，J = 8.7 Hz，2H)，
4.44 (d，J = 14.5 Hz，1H)，4.23 (d， J= 14.5 Hz，1H)，3.00-3.14 (m，2H)，2.83-2.98 (br，+
1H)，1.25-1.94 (m，10 H)。ESI-MS m/z：289 (M+H)。
[0169] 步骤2：顺式-6-甲基-吡啶-2-羧酸[2-(4-甲氧基-苄基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺向来自步骤1的顺式-7-氨基-2-(2,4-二甲氧基-苄基)-2-氮杂-螺[4.5]癸-1-酮
(675 mg，2.34 mmol)在CH2Cl2 (34.9 mL)中的溶液中添加6-甲基吡啶-2-羧酸(353 mg，
2.57 mmol)和PyBOP (1.34 g，2.57 mmol)，随后添加三乙胺(1.14 mL，8.19 mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，然后转移至具有CH2Cl2 (30 mL)的125 mL分液漏斗。将有机层用饱和的NH4Cl水溶液、饱和的NaHCO3水溶液和盐水洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤并在减压下浓缩。通过CombiFlash®系统(12 g硅胶柱体；梯度：己烷中的0至50%乙酸乙酯，经10分钟，然后己烷中的50%乙酸乙酯，20分钟)纯化残渣，产生0.62 g (65%)的标题化合物，顺式-6-甲基-吡啶-2-羧酸[2-(4-甲氧基-苄基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
1
癸-7-基]-酰胺。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 8.10 (d，J = 8.4 Hz，1H)，7.96 (d，J =
7.6 Hz，1H)， 7.71 (t，J = 7.7 Hz，1H)，7.26 (d，J = 7.4 Hz，1H)，7.13 (d，J = 8.6 Hz，
1H)，6.84 (d，J = 8.6 Hz，1H)，4.39 (s，2H)，3.99-4.11 (m，1H)，3.79 (s，3H)，3.10-3.22 +
(m，2H)，2.57 (s，3H)，1.64-2.14 (m，7H)，1.30-1.56 (m，3H)。ESI-MS m/z：408 (M+H)。
[0170] 步骤3：顺式-6-甲基-吡啶-2-羧酸((5S,7S)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基)-酰胺
使用途径2(步骤2)中的合成中间体18中描述的相同实验步骤，中间体18也以1.52 mmol的反应规模，由来自途径4 (步骤2)的顺式-6-甲基-吡啶-2-羧酸[2-(4-甲氧
基-苄基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺制备，通过CombiFlash®系统(4 g硅胶柱体；梯度：DCM中的0至10% MeOH与2N的NH3，经8分钟，然后在DCM中的10% MeOH与2N的NH3，8分钟)获得0.37 g (55%)的标题化合物。ESI-MS m/z：288 (M+H)+。
[0171] 中间体19：顺式-3-氟-N-((5S,7S)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基)-苯甲酰胺使用对于中间体18的途径1中描述的相同实验步骤，以1.19 mmol的反应规模，由中间体10和3-氟苯甲酸制备中间体19，并通过硅胶色谱法(CH2Cl2/MeOH：10/1)纯化，产生+
0.145 g (42 %)的标题化合物。LC-MS (方法C)：RT：0.86 min；ESI-MS m/z：291 (M+H)。
[0172] 使用对于中间体18的途径2中描述的相同实验步骤，也由0.643 mmol的[顺式-2-(4-甲氧基-苄基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-氨基甲酸叔丁酯和1
0.643 mmol的3-氟苯甲酸制备中间体19。H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.45 (bs，1H)，
7.59-7.68 (m，2H)，7.35-7.42 (m，1H)，7.13-7.19 (m，1H)，6.22 (bs，1H)，4.29-4.38 (m，
1H)，3.35-3.45 (m，2H)，2.09-2.18 (m，1H)，1.97-2.04 (m，1H)，1.39-1.93 (m，8H)。ESI-MS +
m/z：291 (M+H)。
[0173] 使用对于中间体18的途径3中描述的相同实验步骤，中间体19也由2.82 mmol的中间体10和2.82 mmol的3-氟苯甲酸制备。LC-MS (方法C)：RT：0.86 min；ESI-MS m/+z：291 (M+H)。其在没有进一步纯化下使用。
[0174] 中间体20：顺式-2-甲基-嘧啶-4-羧酸(1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基)-酰胺
使用对于中间体18的途径1中描述的相同实验步骤，中间体20以2.82 mmol的反应
规模，由中间体10和2-甲基-嘧啶-4-羧酸制备，并通过RP-HPLC纯化系统(梯度：水中乙腈，12-95%，3.5分钟，循环时间为5分钟。在0.6-3.1分钟之间使用18-42%的乙腈的浅梯度，以分离密集洗脱的杂质。流速：100 mL/min。流动相添加剂：39 mM的乙酸铵。柱：
Inertsil® C18，30×50 mm，5 μm粒度(GL Sciences，东京，日本))进行纯化，产生0.330 g (41%)的标题化合物。LC-MS (方法C)：RT：0.63 min；ESI-MS m/z：289 (M+H)。
[0175] 中间体21：顺式-吡啶-2-羧酸(1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基)-酰胺使用对于中间体18的途径1中描述的相同实验步骤，中间体21以2.82 mmol的反应
规模，由中间体10和吡啶甲酸制备，并通过色谱法(CH2Cl2/MeOH：4/1)纯化，产生0.420 g +
(54 %)的标题化合物。LC-MS (方法C)：保留时间RT：0.72 min；ESI-MS m/z：274 (M+H)。
[0176] 中间体22：顺式-嘧啶-4-羧酸(1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基)-酰胺使用对于中间体18的途径1中描述的相同实验步骤，中间体22以0.71 mmol的反应
规模，由中间体10和嘧啶-4-羧酸制备，并通过色谱法(CH2Cl2/MeOH：4/1)纯化，产生0.045 +
g (23 %)的标题化合物。LC-MS (方法D)：RT：1.15 min；ESI-MS m/z：275 (M+H)。
[0177] 中间体23：顺式-2-甲基-N-(1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基)-异烟酰胺使用对于中间体18的途径1中描述的相同实验步骤，中间体23以2.82 mmol的反应规模，由中间体10和2-甲基异烟酸制备，并在RP-HPLC/MS纯化系统(梯度：水中乙腈，
12-95%，3.0分钟，循环时间为5分钟。在0.5-2.0分钟之间使用13-30%的乙腈的浅梯度，以分离密集洗脱的杂质。流速：100 mL/min。流动相添加剂：39 mM的乙酸铵。柱：Inertsil® C18，30×50 mm，5 μm粒度(GL Sciences))上纯化，产生0.300 g (37%)的标题化合物。
LC-MS (方法C)：RT：0.66 min；ESI-MS m/z：288 (M+H)+。
[0178] 中间体24：顺式-9-氨基-7,7-二氟-2-(3-氟-苯基)-2-氮杂-螺[4.5]癸-1-酮
中间体24如下通过上述方案6的方法制备：
步骤1：5-羟基-环己烷-1,3-二羧酸二甲酯
在0℃下向二甲基-5-羟基间苯二酸酯(3.50 g，16.6 mmol)在甲醇(60.0 mL)中的
溶液中添加氧化铝(0.80 g)上的5%铑，随后添加乙酸(0.60 mL，10.6 mmol)。将反应混合物在室温下在氢气(55 psi)下振荡过夜，然后经过Celite®过滤并在减压下浓缩。将残渣通过CombiFlash®系统(12 g硅胶柱体；梯度：DCM中的0至50%乙酸乙酯，经30分钟)纯
1
化，产生3.00 g (83%)的标题化合物，5-羟基-环己烷-1,3-二羧酸二甲酯。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 3.56-3.78 (m，7H)，2.15-2.51 (m，5H)，1.25-1.66 (m，3 H)。
[0179] 步骤2：5-氧代-环己烷-1,3-二羧酸二甲酯在10℃下向来自步骤1的5-羟基-环己烷-1,3-二羧酸二甲酯(3.00 g，13.9 mmol)
和三乙胺(5.80 mL，41.6 mmol)在二甲基亚砜(6.00 mL，84.5 mmol)和DCM (0.60 mL，9.36 mmol)中的混合物中分批添加三氧化硫-吡啶络合物(5.08 g，31.9 mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2小时，然后用水(50 mL)猝灭。将水层用EtOAc(3×50 mL)萃取。将合并的有机层用盐水(2×40 mL)洗涤并在减压下浓缩。将残渣通过CombiFlash®系统(梯度：DCM中的0至50%乙酸乙酯，经30分钟)纯化，产生2.2 g (74%)的标题化合物，5-氧代-环己
1
烷-1,3-二羧酸二甲酯。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 3.72 (s，6H)，2.61-2.75 (m，2H)，
2.31-2.47 (m，3H)，1.83 (ddt，J = 2.9，13.5，34.4 Hz，2H)，1.53 (q，J = 13.2 Hz，1H)。
[0180] 步骤3：5,5-二氟-环己烷-1,3-二羧酸二甲酯在0℃下向二乙基氨基三氟化硫(3.45 mL，26.1 mmol)在DCM (30.0 mL)中的溶液中添加5-氧代-环己烷-1,3-二羧酸二甲酯(2.80 g，13.1 mmol)在DCM (26.0 mL)中的溶液，随后添加乙醇(0.15 mL，2.61 mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，然后小心地用冷的饱和NaHCO3水溶液猝灭。用DCM(×3)萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤并在减压下浓缩。将残渣通过CombiFlash®系统(12 g硅胶柱体；梯度：
DCM中的0至30%乙酸乙酯，经19分钟，然后在DCM中的30%乙酸乙酯，5分钟)纯化，产生
1
2.5 g (81%)的标题化合物，5,5-二氟-环己烷-1,3-二羧酸二甲酯。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 3.73 (s，6H)，2.70-2.80 (m，2H)，2.60-2.68 (m，2H)，2.44-2.55 (m，3H)，1.92 (q，J = 13.5 Hz，1H)。
[0181] 步骤4：1-烯丙基-5,5-二氟-环己烷-1,3-二羧酸二甲酯使用对于中间体2的步骤2中描述的相同实验步骤，从5,5-二氟-环己烷-1,3-二羧
酸二甲酯(10.6 mmol)开始，获得2.5 g (86%)的标题化合物。1H NMR (400 MHz，CDCl3)：
δ 5.57-5.73 (m，1H)，5.02-5.17 (m，2H)，3.64-3.77 (m，6H)，1.58-3.05 (m，9H)。
[0182] 步骤5：反式-5,5-二氟-1-(2-氧代-乙基)-环己烷-1,3-二羧酸二甲酯使用对于中间体2的步骤3中描述的相同实验步骤，从1-烯丙基-5,5-二氟-环己
烷-1,3-二羧酸二甲酯(7.24 mmol)开始，获得1.3 g (65%)的标题化合物。1H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 9.68 (dd，J = 1.2，2.1 Hz，1H),3.69-3.77 (m，6H)，2.95-3.25 (m，1H)，
2.84 (dd，J = 0.9，16.9 Hz，1H)，2.63-2.75 (m，2H)，2.56 (dd，J = 2.1，16.9 Hz，1H)，
2.34-2.45 (m，1H)，1.72-1.90 (m，2H)，1.37 (t，J = 13 Hz，1H)。
[0183] 步骤6：反式-5,5-二氟-1-[2-(3-氟-苯基氨基)-乙基]-环己烷-1,3-二羧酸二甲酯使用对于中间体2的步骤4中描述的相同实验步骤，从反式-5,5-二氟-1-(2-氧
代-乙基)-环己烷-1,3-二羧酸二甲酯(4.67 mmol)开始，获得1.32 g (75%)的标题化
1
合物。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 7.04-7.13 (m，1H)，6.18-6.48 (m，3H)，3.65-3.79 (m，6H)，2.96-3.27 (m，3H)，2.62-2.82 (m，2H)，2.32-2.45 (m，2H)，2.06-2.15 (m，1H)，+
1.57-2.93 (m，3H)，1.20-1.33 (m，1H)。ESI-MS m/z：374 (M+H)。
[0184] 步骤7：反式-9,9-二氟-2-(3-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸甲酯使用中间体2的步骤4中描述的相同实验步骤，从反式-5,5-二氟-1-[2-(3-氟-苯
基氨基)-乙基]-环己烷-1,3-二羧酸二甲酯(3.51 mmol)开始，获得0.55 g的标题化合+
物。LC-MS (方法A)：保留时间RT：1.29 min；ESI-MS m/z：342 (M+H)。其在没有进一步纯化下使用。
[0185] 步骤8：顺式-9,9-二氟-2-(3-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸使用对于中间体2的步骤5中描述的相同实验步骤，从5,5-二氟-1-[2-(3-氟-苯基
氨基)-乙基]-环己烷-1,3-二羧酸二甲酯(1.02 mmol)开始，获得0.27 g (80%)的标题化合物。在差向异构化期间，将所有酯水解为所需的酸。LC-MS (方法A)：RT：0.70 min；
+
纯度(UV254)：91%；ESI-MS m/z：328 (M+H)。其在没有进一步纯化下使用。
[0186] 步骤9：顺式-9-氨基-7,7-二氟-2-(3-氟-苯基)-2-氮杂-螺[4.5]癸-1-酮使用对于中间体2的步骤7中描述的相同实验步骤，从5,5-二氟-1-[2-(3-氟-苯基氨基)-乙基]-环己烷-1,3-二羧酸二甲酯(0.37 mmol)开始，获得少量粗的标题化合物，+
并在没有测定获得量和没有进一步纯化下使用。ESI-MS m/z：299 (M+H)。
[0187] 中间体25：顺式-9-氨基-2-(2,4-二甲氧基-苄基)-7,7-二氟-2-氮杂-螺[4.5]癸-1-酮
中间体25也如下通过上述方案6的方法制备：
步骤1：反式-2-(2,4-二甲氧基-苄基)-9,9-二氟-1-氧代-2-氮杂-螺[2,4.5]癸
烷-7-羧酸乙酯
向反式-5,5-二氟-1-(2-氧代-乙基)-环己烷-1,3-二羧酸二甲酯(4.00 g，14.4
mmol)和2,4-二甲氧基苄胺(2.40 g，14.4 mmol)在THF (50.0 mL)中的溶液中分批添加三乙酰氧基硼氢化钠(4.56 g，21.5 mmol)，并在室温下搅拌过夜。将混合物用冷的饱和NaHCO3猝灭。将水层用EtOAc(3×30 mL)萃取。将合并的有机层用饱和的NaHCO3和盐水洗涤，在MgSO4上干燥，过滤并在减压下浓缩。通过硅胶色谱法(溶剂：己烷中的50%乙酸乙酯)纯化所得残渣，产生1.8 g (32%)的标题化合物，反式-2-(2,4-二甲氧基-苄
1
基)-9,9-二氟-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸甲酯。H NMR (400 MHz，CDCl3)：
δ 7.12-7.07 (m，1H)，6.47-6.40 (m，2H)，4.52 (d，J = 14.3 Hz，1 H)，4.32 (d，J = 14.3 Hz，1 H)，3.80 (s，3H)，3.79 (s，3H)，3.70 (s，3H)，3.48-3.38 (m，1H)，3.12 (dd，J = 7.5，+
5.9 Hz，2H)，2.41-1.67 (m，8H)。ESI-MS m/z：398 (M+H)。
[0188] 步骤2：顺式-2-(2,4-二甲氧基-苄基)-9,9-二氟-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸甲酯在0℃下向反式-2-(2,4-二甲氧基-苄基)-9,9-二氟-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸
烷-7-羧酸甲酯(1.80 g，4.53 mmol)在MeOH(20.0 mL)中的溶液中添加NaH (200 mg，5.00 mmol，矿物油中60%)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，并用冰猝灭。将水层用DCM(3×30 mL)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤和浓缩。通过硅胶色谱法(溶剂：己烷中的30%乙酸乙酯)纯化所得残渣，产生1.25 g (69%)的标题化合物，顺式-2-(2,4-二甲氧基-苄
1
基)-9,9-二氟-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸甲酯。H NMR (400 MHz，CDCl3)：
δ 7.08 (d，J = 8.9 Hz，1 H)，6.46-6.42 (m，2H)，4.48 (d，J = 14.4 Hz，1 H)，4.37 (d，J = 14.3 Hz，1 H)，3.80 (s，3H)，3.79 (s，3H)，3.70 (s，3H)，3.19-3.11 (m，2H)，2.78-1.74 +
(m，9H)。ESI-MS m/z：398 (M+H)。
[0189] 步骤3：顺式-2-(2,4-二甲氧基-苄基)-9,9-二氟-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸在室温下将顺式-2-(2,4-二甲氧基-苄基)-9,9-二氟-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸烷-7-羧酸甲酯(1.25 g，3.14 mmol)和LiOH (0.239 g，10.0 mmol)在水(10 mL)和THF (30 mL)中的溶液搅拌过夜并浓缩液。用1N的HCl将水层酸化直至pH 2，并用DCM (3×30 mL)萃取。将合并的有机层在MgSO4上干燥，过滤并在减压下浓缩，产生1.42 g的标题化合物，顺式-2-(2,4-二甲氧基-苄基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸，将其在没+
有进一步纯化下用于下一步中。ESI-MS m/z：384 (M+H)。
[0190] 步骤4：顺式-9-氨基-2-(2,4-二甲氧基-苄基)-7,7-二氟-2-氮杂-螺[4.5]癸-1-酮向顺式-2-(2,4-二甲氧基-苄基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸(0.700
g，1.82 mmol)在甲苯(15 mL)中的溶液中添加三乙胺(0.34 mL，2.5 mmol)，随后添加二苯基磷酰基叠氮化物(0.47 mL，2.2 mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时，然后在90℃加热2小时。将反应混合物冷却至室温，然后缓慢加入到冰冷的HCl (6N，10 mL)中。在室温下将所得混合物剧烈搅拌2小时。分离两个层。用固体NaCO3将水层碱化至～pH 10，并用DCM (3×30 mL)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤并浓缩，产生0.4 g的标题化合物，顺式-9-氨基-2-(2,4-二甲氧基-苄基)-7,7-二氟-2-氮杂-螺[4.5]+
癸-1-酮，将其在没有进一步纯化下用于下一步中。ESI-MS m/z：355 (M+H)。
[0191] 中间体26：顺式-2-甲基-嘧啶-4-羧酸(9,9-二氟-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基)-酰胺中间体26如下通过上述方案13的方法制备：
步骤1：顺式-2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(2,4-二甲氧基-苄基)-9,9-二氟-1-氧
代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺
在0℃下向2-甲基吡啶-4-羧酸(171 mg，1.24 mmol)在CH2Cl2 (15 mL)中的溶液
中添加EDCI (263 mg，1.69 mmol)和HOBT (152 mg，1.13 mmol)，随后添加顺式-9-氨基-2-(2,4-二甲氧基-苄基)-7,7-二氟-2-氮杂-螺[4.5]癸-1-酮(400 mg，1.13 mmol)。
将反应混合物在室温下搅拌过夜，然后用CH2Cl2 (30 mL)稀释。将有机层用饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤，并在减压下浓缩。将残渣通过CombiFlash®系统(12 g硅胶柱体；梯度：
CH2Cl2中的0至2%的MeOH (2N NH3)，经10分钟)纯化，产生0.4 g (70%)的标题化合物，顺式-2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(2,4-二甲氧基-苄基)-9,9-二氟-1-氧代-2-氮杂-螺
1
[4.5]癸-7-基]-酰胺。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 8.89 (d，J = 5.0 Hz，1 H)，8.00 (d，J = 8.6 Hz，1 H)，7.90 (d，J = 5.1 Hz，1 H)，7.10 (d，J = 8.7 Hz，1 H)，6.48-6.43 (m，2H)，4.45 (s，2H)，4.44-4.34 (m，1H)，3.82 (s，3H)，2.81 (s，3H)，3.25-3.20 (m，2H)，+
2.80 (s，3H)，2.66-2.53 (m，1H)，2.37-1.72 (m，7H)。ESI-MS m/z：475 (M+H)。
[0192] 步骤2：顺式-2-甲基-嘧啶-4-羧酸(9,9-二氟-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基)-酰胺
使用途径2中的合成中间体18 (步骤2)中描述的相同实验步骤，中间体18也以0.8 mmol的反应规模，由顺式-2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(2,4-二甲氧基-苄基)-9,9-二
氟-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺制备，并获得0.3 g的标题化合物，将其+
在没有进一步纯化下用于下一步中。ESI-MS m/z：325 (M+H)。
[0193] 中间体27：顺式-6-甲基-吡啶-2-羧酸(9,9-二氟-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基)-酰胺使用合成中间体26中描述的相同实验步骤，中间体27也由0.635 mmol的顺式-9-氨基-2-(2,4-二甲氧基-苄基)-7,7-二氟-2-氮杂-螺[4.5]癸-1-酮和0.698 mmol的
1
2-甲基吡啶甲酸制备。H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.09 (d，J = 8.4 Hz，1 H)，7.98 (d，J = 7.6 Hz，1 H)，7.73 (t，J = 7.7 Hz，1 H)，7.29 (d，J = 7.8 Hz，1 H)，5.55 (s，1H)，
4.52-4.36 (m，1H)，3.44-3.33 (m，2H)，2.66-2.58 (m，1H)，2.57 (s，3H)，2.34-1.64 (m，+
7H)。ESI-MS m/z：324 (M+H)。
[0194] 中间体28：顺式-吡啶-2-羧酸(9,9-二氟-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基)-酰胺
使用合成中间体26中描述的相同实验步骤，中间体19也由0.254 mmol的顺式-9-氨基-2-(2,4-二甲氧基-苄基)-7,7-二氟-2-氮杂-螺[4.5]癸-1-酮和0.305 mmol的
+
吡啶-2-碳酰氯制备。ESI-MS m/z：310 (M+H)。其在没有进一步纯化下使用。
[0195] 中间体29：顺式-N-(9,9-二氟-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基)-3-氟-苯甲酰胺使用合成中间体26中描述的相同实验步骤，中间体29也由1.29 mmol的顺式-9-氨
基-2-(2,4-二甲氧基-苄基)-7,7-二氟-2-氮杂-螺[4.5]癸-1-酮和1.6 mmol的3-氟苯甲酰氯制备。ESI-MS m/z：327 (M+H)+。其在没有进一步纯化下使用。
[0196] 中间体30：顺式-13-氨基-9-(3,5-二氟苯基)-1,4-二氧杂-9-氮杂-二螺[4.1.4.3]十四-8-酮
中间体30如下通过上述方案23的方法制备：
步骤1：1,4-二氧杂-螺[4.5]癸烷-7,9-二羧酸二甲酯
在装有迪安-斯达克分水器的烧瓶中将5-氧代环己烷-1,3-二羧酸二甲酯(22.8 g，
106.4 mmol)、乙二醇(13.3 g，215 mmol)和对甲苯磺酸一水合物(0.22 g，1.3 mmol)在甲苯(230 mL)中的溶液在回流下加热5小时。将反应冷却至室温，添加水，并将混合物用乙酸乙酯萃取。分离有机层，用NaHCO3溶液和盐水洗涤，在无水Na2SO4上干燥并在减压下浓缩，以产生油，将其用己烷研磨并在冰箱中放置过夜。将沉淀的固体过滤并在真空下干燥，产生白色固体形式的17.1 g (63%)的标题化合物，1,4-二氧杂-螺[4.5]癸烷-7,9-二羧酸二甲酯。1HNMR (400 MHz，CDCl3)，δ: 3.95 (m，4H)，3.7 (s，6H)，2.72-2.62 (m，3H)，
2.32-2.22 (m，1H)，2.02-1.96 (m，2H)，1.6-1.4 (m，3H)。
[0197] 步骤2：7-烯丙基-1,4-二氧杂-螺[4.5]癸烷-7,9-二羧酸二甲酯在-78℃下，向搅拌的无水THF (300 mL)中添加n-BuLi (101 mL，161 mmol)的1.6 M己烷溶液，随后添加二异丙胺(16.2 g，161 mmol)。在-78℃将反应混合物搅拌15分钟，并在0℃搅拌1小时。将混合物再冷却至-78℃，缓慢地添加1,3-二甲基-3,4,5,6-四氢-2-(1H)-嘧啶酮(DMPO)(48 g，372 mmol)，并将所得白色悬浮液搅拌30分钟。添加
1,4-二氧杂螺[4.5]癸烷-7,9-二羧酸二甲酯(32 g，124 mmol)在THF (100 mL)中的溶液，将浅黄色溶液搅拌30分钟，然后添加烯丙基溴(16.6 g，137 mmol)，将反应混合物加热至室温并在室温下搅拌过夜。将反应用饱和NH4Cl水溶液猝灭，并用乙酸乙酯萃取；将有机萃取物合并并用水、盐水洗涤，在无水Na2SO4上干燥并在减压下浓缩，产生粘性油形式的40 g的粗产物。通过在硅胶上的快速柱色谱法(己烷-氯仿-乙酸乙酯8：1：1)纯化，产生无色油形式的23.8 g (65%)的标题化合物，1-烯丙基-5,5-二氟-环己烷-1,3-二羧酸二甲
1
酯。H NMR (400 MHz，CDCl3)，δ： 5.7-5.6 (m，1H)，5.10-5.00 (m，2H)，4.0-3.8 (m，4H)，
3.68 (s，6H)，3.08-2.98 (m，1H)，2.5-2.3 (m，2H)，2.15-2.08 (m，1H)，1.98-1.92 (m，1H)，+
1.65-1.58 (m，1H)，1.45-1.38 (m，1H)，1.28-1.18 (m，1H).ES MS：299.2 (M+1)。
[0198] 步骤3：反式-7-(2-氧代-乙基)-1,4-二氧杂-螺[4.5]癸烷-7,9-二羧酸二甲酯使用对于中间体2的步骤3中描述的相同实验步骤，从1-烯丙基-5,5-二氟-环己
烷-1,3-二羧酸二甲酯(5.00 g，16.8 mmol)开始，获得5.5 g的标题化合物，将其在没有
1
进一步纯化下用于下一步中。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 9.78-9.69 (m，1H)，4.04-3.68 (m，10 H)，3.26-3.15 (m，1H)，2.78-1.31 (m，8H)。
[0199] 步骤4：反式-7-[2-(3,5-二氟-苯基氨基)-乙基]-1,4-二氧杂-螺[4.5]癸烷-7,9-二羧酸二甲酯使用对于中间体2的步骤4中描述的相同实验步骤，从反式-5,5-二氟-1-(2-氧
代-乙基)-环己烷-1,3-二羧酸二甲酯(1.80 g，5.99 mmol)和3,5-二氟苯胺(0.772 g，
1
5.98 mmol)开始，获得0.835 g (75%)的标题化合物。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 6.23 (br，3H)，4.04-3.74 (m，6H)，3.72 (s，3H)，3.70 (s，3H)，3.29-2.97 (m，3H)，2.62-1.18 +
(m，6H)。ESI-MS m/z：414 (M+H)。
[0200] 步骤5：反式-9-(3,5-二氟-苯基)-8-氧代-1,4-二氧杂-9-氮杂-二螺[4.1.4.3]十四烷-13-羧酸甲酯
使用中间体2的步骤4中描述的相同实验步骤，从反式-5,5-二氟-1-[2-(3-氟-苯基氨基)-乙基]-环己烷-1,3-二羧酸二甲酯(0.835 g，2.02 mmol)开始，获得0.7 g (99%)
1
的标题化合物。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 7.38-7.30 (m，2H)，6.64-6.57 (m，1H)，
3.98-3.91 (m，4H)，3.81-3.67 (m，5H)，3.32-3.23 (m，1H)，2.41-1.63 (m，8H)。ESI-MS m/+
z：382 (M+H)。
[0201] 步骤6：顺式-9-(3,5-二氟-苯基)-8-氧代-1,4-二氧杂-9-氮杂-二螺[4.1.4.3]十四烷-13-羧酸甲酯
在0℃下向反式-9-(3,5-二氟-苯基)-8-氧代-1,4-二氧杂-9-氮杂-二螺
[4.1.4.3]十四烷-13-羧酸甲酯(0.68 g，1.78 mmol)在THF(10 mL)中的溶液中添加NaH (矿物油中60%，93 mg，2.3 mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，冷却至0℃，并用冰猝灭。用EtOAc(3×20 mL)萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤和浓缩。通过硅胶上的快速柱色谱(梯度：己烷中的0至50% EtOAc)纯化，产生0.553 g (81%)的标题化合物。
1
H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 7.32-7.27 (m，2H)，6.63-6.56 (m，1H)，3.99-3.69 (m，4H)，
3.74-3.70 (m，2H)，3.69 (s，3H)，2.82-2.72 (m，1H)，2.44-2.35 (m，1H)，2.16-1.60 (m，+
7H)。ESI-MS m/z：382 (M+H)。
[0202] 步骤7：顺式-9-(3,5-二氟-苯基)-8-氧代-1,4-二氧杂-9-氮杂-二螺[4.1.4.3]十四烷-13-羧酸
使用对于中间体2的步骤5中描述的相同实验步骤，从顺式-9-(3,5-二氟-苯
基)-8-氧代-1,4-二氧杂-9-氮杂-二螺[4.1.4.3]十四烷-13-羧酸甲酯(0.553 g，1.45 mmol)开始，获得0.447 g (84%)的标题化合物。其在没有进一步纯化下使用。ESI-MS m/+
z：368 (M+H)。
[0203] 步骤8：顺式-13-氨基-9-(3,5-二氟-苯基)-1,4-二氧杂-9-氮杂-二螺[4.1.4.3]十四-8-酮
向顺式-9-(3,5-二氟-苯基)-8-氧代-1,4-二氧杂-9-氮杂-二螺[4.1.4.3]十四
烷-13-羧酸(0.447 g，1.22 mmol)在甲苯(15 mL)中的溶液中添加三乙胺(0.24 mL，1.58 mmol)，随后添加二苯基磷酰基叠氮化物(0.31 mL，1.46 mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时，然后在90℃加热2小时。将反应混合物冷却至室温，然后添加苯甲醇(0.263 g，2.43 mmol)。将所得混合物在90℃下加热过夜。将溶剂浓缩，将残渣通过硅胶上的快速柱色谱(己烷中的0至70% EtOAc)纯化，产生0.4 g的Cbz-保护的中间体，将其溶于MeOH (80 mL)并通过H-cube@ (Pd/C 10%，10巴，25℃，流速0.5 mL/min)。将所得混合物浓缩产生0.3 g (70%，经2个步骤)的标题化合物。其在没有进一步纯化下用于下一步中。1H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 7.33-7.28 (m，2H)，6.65-6.58 (m，1H)，4.04-3.91 (m，4H)，3.78-3.69 (m，2H)，3.40-3.29 (m，1H)，2.45-1.37 (m，8H)。ESI-MS m/z：339 (M+H)+。
[0204] 中间体31：顺式-13-氨基-9-(3-氟-苯基)-1,4-二氧杂-9-氮杂-二螺[4.1.4.3]十四-8-酮
使用合成中间体30中描述的相同实验步骤，中间体31也由9.30 mmol的顺
式-9-(3-氟-苯基)-8-氧代-1,4-二氧杂-9-氮杂-二螺[4.1.4.3]十四烷-13-羧酸
+
制备。ESI-MS m/z：321 (M+H)。
[0205] 中间体32：顺式-噻唑-2-羧酸(1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基)-酰胺在管形瓶中添加中间体10 (90 mg，0.2 mmol)、三乙胺(76 mg，0.75 mmol)和二氯甲烷(5.0 mL)。将混合物在冰浴中冷却。然后添加噻唑-2-碳酰氯(56 mg，0.38 mmol)。在室温下搅拌2小时之后，然后将混合物用饱和碳酸氢钠洗涤，在Na2SO4上干燥并在减压下浓缩，产生噻唑-2-羧酸[2-(2,4-二甲氧基-苄基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰
1
胺(60 mg，60%)。H NMR (300 MHz，CDCl3)：δ 7.86 (d，J = 3.1 Hz，1H)，7.69-7.79 (m，
1H)，7.54 (d，J = 3.1 Hz，1H)，7.04-7.10 (m，1H)，6.38-6.46 (m，2H)，4.35-4.50 (m，
2H)，4.00-4.18 (m，1H)，3.79 (s 3H)，3.78 (s，3H)，3.12-3.20 (m，2H)，1.24-2.05 (m，+
10H)。ESI-MS m/z：429 (M+H)。将以上获得的残渣用TFA (1.0 mL)处理，并在60℃加热
3小时。然后将混合物分配到二氯甲烷和饱和碳酸氢钠中，在硫酸钠上干燥有机层并真空浓缩，产生标题化合物顺式-噻唑-2-羧酸(1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基)-酰胺。
+
ESI-MS m/z：280 (M+H) (方法A，RT：0.57)。其在没有进一步纯化下用于下一步中。
[0206] 中间体33：顺式-7-氨基-2-(3,5-二氟-苯基)-2-氮杂-螺[4.5]癸-1-酮盐酸盐步骤1：反式-1-[2-(3,5-二氟苯基氨基)-乙基]-环己烷-1,3-二羧酸二乙酯
向反式-1-(2-氧代-乙基)-环己烷-1,3-二羧酸二乙酯(86.4 g，320 mmol)在
1,2-二氯乙烷(640 mL)中的溶液中添加添加乙酸(3.66 mL，64.0 mmol)，随后缓慢添加
3,5-二氟苯胺(57.8 g，448 mmol)在1,2-二氯乙烷(320 mL)中的溶液。将混合物在室温下搅拌1.5小时，然后冷却至0℃，分批添加三乙酰氧基硼氢化钠(94.8 g，447 mmol)，并在室温下继续搅拌14小时。将混合物冷却至0℃并用碎冰猝灭，用二氯甲烷萃取。将有机层分离，用水、盐水洗涤，在Na2SO4上干燥，并在真空下浓缩。将残渣通过硅胶上的柱色谱(己烷/EtOAc：4/1)纯化，产生透明油形式的110.8 g (90%)的标题化合物。1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 5.85-6.23 (m，4 H)，4.01-4.24 (m，4 H)，3.81 (t，J = 5.7 Hz，2 H)，2.97-3.21 (m，2 H)，2.36-2.56 (m，2 H)，2.24 (d，J = 11.7 Hz，1 H)，1.62-2.03 (m，4 H)，1.02-1.42 (m，8 H)。
[0207] 步骤2：顺式-2-(3,5-二氟苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸乙酯向反式-1-[2-(3,5-二氟苯基氨基)-乙基]-环己烷-1,3-二羧酸二乙酯(110.8 g，
289 mmol)在乙醇(725 mL)中的冷却(0℃)溶液中分批添加氢化钠(矿物油中的60%，
34.7 g，867 mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌4小时，然后回流15小时。将所得混合物在室温下在真空下浓缩，用乙酸乙酯稀释，冷却至0℃并用6 N的HCl溶液处理，直到pH～
4。将有机层用水、盐水洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩。将残渣通过硅胶上的柱色谱(己烷/
1
EtOAc：3/1)纯化，产生黄色胶形式的32.7 g (33.5%)的标题化合物。H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 7.23-7.38 (m，2 H)，6.59 (tt，J = 8.7，2.2 Hz，1 H)，4.12 (q，J = 7.0 Hz，
2 H)，3.66-3.80 (m，2 H)，2.27-2.50 (m，0 H)，1.95-2.14 (m，4 H)，1.77-1.94 (m，3 H)，
1.62-1.76 (m，1 H)，1.34-1.53 (m，2 H)，1.25 (t，J = 7.0 Hz，3 H)。
[0208] 分离与顺式-2-(3,5-二氟苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸乙酯一起的反式-2-(3,5-二氟苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸乙酯(12.5 g，13%)、顺式-2-(3,5-二氟苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸(11.0 g，12%)和反式-2-(3,5-二氟苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸(7.97 g，9%)，它们也都为黄色胶的形式。
1
[0209] 反式-2-(3,5-二氟苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸乙酯：HNMR (400 MHz，CDCl3) δ 7.23-7.33 (m，2 H)，6.52-6.64 (m，1 H)，4.12 (q，J = 7.0 Hz，
2 H)，3.65-3.76 (m，2 H)，3.10-3.26 (m，1 H)，2.10-2.19 (m，1 H)，1.84-2.08 (m，5 H)，
1.52-1.75 (m，2 H)，1.28-1.50 (m，2 H)，1.22 (t，J = 7.0 Hz，3 H)。
1
[0210] 顺式-2-(3,5-二氟苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸：H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 7.22-7.36 (m，2 H)，6.52-6.67 (m，1 H)，3.66-3.81 (m，2 H)，2.34-2.52 (m，1 H)，2.00-2.18 (m，3 H)，1.78-1.99 (m，3 H)，1.32-1.76 (m，4 H)。1
[0211] 反式-2-(3,5-二氟苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸：H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 7.20-7.37 (m，2 H)，6.58 (tt，J = 8.8，2.34 Hz，1 H)，3.60-3.81 (m，2 H)，3.13-3.37 (m，1 H)，2.19 (dd，J = 13.5，4.10 Hz，1 H)，1.84-2.12 (m，5 H),1.16-1.78 (m，4 H)。
[0212] 步骤3：顺式-2-(3,5-二氟苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸。
[0213] 向顺式-2-(3,5-二氟苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸乙酯(31.7 g，94.0 mmol)在THF(376 mL)和水(376 mL)中的溶液中添加固体无水氢氧化锂(22.5 g，9.40 mmol)。在室温下将所得浆体搅拌15小时，然后冷却至0℃，用4 N的HCl处理，直到pH～5 (缓慢添加)，并用乙酸乙酯萃取。分离有机层，用水、盐水洗涤，用Na2SO4干燥并在真空下浓缩，产生粘性胶形式的27.8 g的标题化合物，将其在没有进一步纯化下用
1
于下一步中。H NMR (400 MHz，CHLOROFORM-d) δ 7.22-7.36 (m，2 H)，6.52-6.67 (m，
1 H)，3.66-3.81 (m，2 H)，2.34-2.52 (m，1 H)，2.00-2.18 (m，3 H)，1.78-1.99 (m，3 H)，
1.32-1.76 (m，4 H)。
[0214] 步骤4：顺式-7-氨基-2-(3,5-二氟苯基)-2-氮杂-螺[4.5]癸-1-酮HCl盐(参考：09-057-7)。
[0215] 在室温下向顺式-2-(3,5-二氟苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸(5.53 g，17.9 mmol)在甲苯(90 mL)中的悬浮液中添加三乙胺(2.98 mL，21.4 mmol)，随后添加二苯基磷酰基叠氮化物(3.86 mL，17.9 mmol)，并将混合物在室温下搅拌2小时。在90℃将反应混合物加热3.5小时之后，然后冷却至0℃，用6 N的HCl (10 mL，缓慢添加！)处理，并在室温下继续搅拌14小时。将所得白色沉淀过滤，用甲苯洗涤并在真空下干燥，产生白色固体形式的5.05 g (89%)的标题化合物。
1
[0216] H NMR (400 MHz，DMSO-d6) δ 7.42-7.54 (m，2 H)，7.00 (tt，J = 9.2，2.30 Hz，1 H)，3.73-3.81 (m，2 H)，3.04-3.17 (m，1 H)，1.87-2.20 (m，3 H)，1.83 (d，J = 11.7 Hz，1 H)，1.68-1.78 (m，1 H)，1.63 (t，J = 12.5 Hz，1 H)，1.39-1.57 (m，2 H)，1.22-1.38 (m，2 +H)，MS：m/z 281.19 (M+H).HPLC：96.45%。分析：对于C15H18N2O.HCl.0.65H2O计算：C，54.85；
H，6.23；N，8.53。实测：C，54.84；H，6.06；N，8.79。
[0217] 中间体34：7-氨基-2-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-2-氮杂-螺[4.5]癸-1-酮使用中间体33中所述类似的实验步骤，中间体34盐酸盐由3.7 mmol的反式-1-(2-氧代-乙基-环己烷-1,3-二羧酸二乙酯和3.7 mmol的1-甲基-1H-吡唑-3-胺制备。将
中间体34盐酸盐用氢氧化钠碱化，产生标题化合物，其为两种非对映异构体的混合物(顺式/反式：7/2；根据LC-MS方法E，具有1.06分钟的RT的第一峰规定为顺式，具有1.10分钟的RT的第二峰规定为反式)。ESI-MS m/z：249 (M+H)+。其在没有进一步纯化下使用。
[0218] 中间体35：4-[7-(3-氟-苯甲酰基氨基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-2-基]哌啶-1-羧酸叔丁酯步骤1：4-(7-苄氧基羰基氨基-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-2-基)-哌啶-1-羧
酸叔丁酯
使用合成中间体10中描述的相同实验步骤，2-(1-叔丁氧基羰基-哌啶-4-基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸(顺式和反式非对映异构体的混合物)由7.40 mmol的1-(2-氧代-乙基)-环己烷-1,3-二羧酸二乙酯和7.40 mmol的4-氨基-1-Boc-哌啶制备。
[0219] 将2-(1-叔丁氧基羰基-哌啶-4-基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸烷-7-羧酸(1.24 g，3.25 mmol)溶于甲苯(20.0 mL)，添加三乙胺(0.54 mL，3.90 mmol)，随后添加二苯基膦叠氮化物(0.70 mL，3.25 mmol)。将混合物在室温下搅拌1.5小时，然后在90℃加热2小时。添加苯甲醇(2.0 mL，19.5 mmol)，并将混合物在90℃加热过夜。将混合物冷却，在减压下浓缩产生0.85 g (54%)的标题化合物，其为两种非对映异构体的混合物(顺式/反式：1/1；根据LC-MS方法C，具有1.56分钟的RT的第一峰规定为顺式，和具有1.59+
分钟的RT的第二峰规定为反式)。ESI-MS m/z：486 (M+H)。
[0220] 步骤2：4-(7-氨基-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-2-基)-哌啶-1-羧酸叔丁酯
将甲醇(50.0 mL)中的4-(7-苄氧基羰基氨基-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-2-基)-哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.75 g，1.54 mmol)在氢化下在50 psi和室温下振荡
2.5小时。将催化剂滤出，将滤液浓缩产生0.42 g (77%)的标题化合物。LC-MS (方法C)：
RT：0.94 min；ESI-MS m/z：352 (M+H)+。其在没有进一步纯化下用于下一步中。
[0221] 步骤3：4-[7-(3-氟-苯甲酰基氨基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-2-基]-哌啶-1-羧酸叔丁酯将二氯甲烷(5.0 mL)中的4-(7-氨基-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-2-基)-哌
啶-1-羧酸叔丁酯(0.20 g，0.57 mmol)、3-氟苯甲酸(0.080 g，0.56 mmol)、BOP (0.252 g，0.57 mmol)和三乙胺(0.115 g，1.14 mmol)在室温下搅拌过夜。将混合物浓缩，将所得残渣用色谱法(乙酸乙酯)纯化，产生标题化合物，其为两种非对映异构体的混合物(顺式/反式：3/2；根据LC-MS方法C，具有1.47分钟的RT的第一峰规定为顺式，和具有1.50分钟的RT的第二峰规定为反式)。1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.5 (s，0.6 H)，7.60-7.68 (m，1H)，7.36-7.50 (m，2H)，7.14-7.20 (m，1H)，5.92 (d，J = 6.8 Hz，0.4 H)，4.55-4.65 (m，0.4 H)，4.04-4.38 (m，3.6H)，3.20-3.30 (m，2H)，2.71-2.86 (m，2H)，1.28-2.25 (m，
23H)。ESI-MS m/z：474 (M+H)+。
[0222] 中间体36和37：(5R,7R)-7-氨基-2-(3,5-二氟-苯基)-2-氮杂-螺[4.5]癸-1-酮和(5S,7S)-7-氨基-2-(3,5-二氟-苯基)-2-氮杂-螺[4.5]癸-1-酮
通过HPLC (柱：Chiralpak® IC (Chiral Technologies，Inc.)，150×30 mm，5 μM粒度；流动相：30%异丙醇，70% CO2；流速：100 g/min；254 nm下的UV)拆分外消旋中间体33 (顺式非对映异构体)，产生两种对映异构体。来自手性HPLC的第一峰(RT：3.18 min)规定为(5S,7S)-7-氨基-2-(3,5-二氟-苯基)-2-氮杂-螺[4.5]癸-1-酮(270 mg)，和来自手性HPLC的第二峰(RT：6.92 min)规定为(5R,7R)-7-氨基-2-(3,5-二氟-苯基)-2-氮杂-螺[4.5]癸-1-酮(250 mg)。
[0223] 中间体38：顺式-7-氨基2-(6-(4-氟苯基)嘧啶-4-基)-2-氮杂螺[4.5]癸-1-酮
步骤1-4：反式-乙基2-(6-(4-氟苯基)嘧啶-4-基)-1-氧代-2-氮杂螺[4.5]癸
烷-7-羧酸酯
使用合成中间体2中描述的类似步骤(步骤1至4)，反式-乙基2-(6-氯嘧
啶-4-基)-1-氧代-2-氮杂螺[4.5]癸烷-7-羧酸酯由219 mmol的1,3-环己烷羧酸制
备。
[0224] 步骤5：反式-乙基2-(6-(4-氟苯基)嘧啶4-基)-1-氧代-2-氮杂螺[4.5]癸烷-7-羧酸酯在氩气气氛下向反式-乙基2-(6-氯嘧啶-4-基)-1-氧代-2-氮杂螺[4.5]癸
烷-7-羧酸酯(6.75 g，20.03 mmol)、4-氟苯硼酸(3.35 g，24.04 mmol)和碳酸铯(13 g，
40.06 mmol)在1,4-二噁烷(180 mL)中的脱氧溶液中添加Pd2(dba)3 (1.1 g，1.2 mmol)t
和P(Bu)3 (THF中的1M，2.4 mL，2.4 mmol)。将反应物质混合物回流下加热4小时。将反应混合物通过Celite®床过滤，并将滤液浓缩。将粗残渣通过combiflash柱色谱法纯化，产生7.2 g (90.5%)的反式-乙基2-(6-(4-氟苯基)嘧啶-4-基)-1-氧代-2-氮杂螺
+
[4.5]癸烷-7-羧酸酯。ESI-MS m/z：398 (M+H)。
[0225] 步骤6-7：顺式-7-氨基-2-(6-(4-氟苯基)嘧啶-4-基)-2-氮杂螺[4.5]癸-1-酮
使用合成中间体2中描述的类似步骤(步骤5和6)，中间体38由5.03 mmol的反
式-乙基2-(6-(4-氟苯基)嘧啶-4-基)-1-氧代-2-氮杂螺[4.5]癸烷-7-羧酸酯制备。
+
ESI-MS m/z：341 (M+H)。
[0226] 3. 本发明化合物的制备除非另外说明，所有原料和试剂得自商业供应商，例如Sigma-Aldrich Corp.(St.Louis，MO，美国)及其子公司，并在没有进一步纯化下使用。除非指明为绝对立体化学，当表明时，本发明化合物的立体化学已经任意规定，例如式(I)的二-氟-环己烷-螺内酰胺化合物。
[0227] 实施例1和实施例2：分别为反式-吡啶-2-羧酸[2-(3-氯-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺和顺式-吡啶-2-羧酸[2-(3-氯-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺。
[0228] 实施例1和实施例2如下由上述方案1的方法从中间体1制备：将7-氨基-2-(3-氯-苯基)-2-氮杂-螺[4.5]癸-1-酮(0.140 g，0.502 mmol，
中间体1)溶于CH2Cl2 (2.0 mL)，添加吡啶甲酸(0.068 g，0.552 mmol)和BOP (0.244 g，
0.552 mmol)以及CH2Cl2 (1.0 mL)中的三乙胺(0.31 mL，2.21 mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，然后在减压下浓缩。将所得残渣通过制备型TLC (己烷/乙酸乙酯：1/2)纯化，产生两种非对映异构体。极性较小的一种规定为反式，实施例1 (0.097 g，51%)，极性的
1
一种规定为顺式，实施例2 (0.043 g，22%)。反式非对映异构体(实施例1)：H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 8.54 (ddd，J = 4.8，1.7，1.1 Hz，1H)，8.20 (dt，J = 7.6，1.1 Hz，1H)，
8.02 (d，J = 7.6 Hz，1H)，7.84 (td，J = 7.8，1.7 Hz，1H)，7.72 (t，J = 2.0，1.0 Hz，1 H)，7.55 (ddd，J = 8.3，2.1，1.0 Hz，1H)，7.42 (ddd，J = 7.6，4.8，1.2 Hz，1H)，7.27 (t，J = 8.0 Hz，1H)，7.10 (ddd，J = 7.9，2.1，1.0 Hz，1H)，4.63-4.71 (m，1H)，3.67-3.80 (m，
2H)，2.32 (dd，J = 13.3，4.3 Hz，1H)，2.01-2.14 (m，3H)，1.86-1.92 (m，1H)，1.70-1.77 +
(m，2H)，1.63 (dd，J=13.4，8.6 Hz，1H)，1.45-1.58 (m，2H)。ESI-MS m/z：384 (M+H)。顺
1
式非对映异构体(实施例2)：H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 8.55 (ddd，J = 4.8，1.7，1.0 Hz，1H)，8.19 (dt，J = 7.8，1.1 Hz，1H)，8.05 (d，J = 8.7 Hz，1H)，7.84 (td，J = 7.5，
1.5 Hz，1H)，7.73 (t，J = 2.0，1.0 Hz，1 H)，7.55 (ddd，J = 7.7，2.2，1.0 Hz，1H)，7.42 (ddd，J = 7.5，4.7，1.2 Hz，1H)，7.28 (t，J = 8.1 Hz，1H)，7.11 (ddd，J = 8.1，2.0，1.0 Hz，1H)，4.07-4.18 (m，1H)，3.74-3.84 (m，2H)，2.23-2.30 (m，1H)，2.09-2.19 (m，2H)，
1.88-1.98 (m，2H)，1.69-1.79 (m，2H)，1.65-1.65(m，2H)，1.34-1.44 (m，1H)。ESI-MS m/+
z：384 (M+H)。
[0229] 实施例5和实施例6：吡啶-2-羧酸[(5R,7R)-2-(3-氯-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺和吡啶-2-羧酸[(5S,7S)-2-(3-氯-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺。
[0230] 通过HPLC (柱：Chiralpak® AD (Diacel)，250×20 mm；流动相：20%异丙醇，79.9%己烷，0.1%二乙胺；流速：14 mL/min；254 nm下的UV)拆分外消旋实施例2 (30 mg)，产生两种对映异构体。来自手性HPLC的第一峰规定为实施例5，吡啶-2-羧酸[(5R,7R)-2-(3-氯-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]-癸-7-基]酰胺(8 mg)，以及
来自手性HPLC的第二峰规定为实施例6，吡啶-2-羧酸[(5S,7S)-2-(3-氯-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]-癸-7-基]酰胺(7 mg)。
[0231] 实施例5：1H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 8.55 (ddd，J = 4.8，1.7，1.0 Hz，1H)，8.19 (dt，J = 7.8，1.1 Hz，1H)，8.05 (d，J = 8.7 Hz，1H)，7.84 (td，J = 7.5，1.5 Hz，
1H)，7.73 (t，J = 2.0，1.0 Hz，1 H)，7.55 (ddd，J = 7.7，2.2，1.0 Hz，1H)，7.42 (ddd，J = 7.5，4.7，1.2 Hz，1H)，7.28 (t，J = 8.1 Hz，1H)，7.11 (ddd，J = 8.1，2.0，1.0 Hz，1H)，
4.07-4.18 (m，1H)，3.74-3.84 (m，2H)，2.23-2.30 (m，1H)，2.09-2.19 (m，2H)，1.88-1.98 (m，2H)，1.69-1.79 (m，2H)，1.65-1.65(m，2H)，1.34-1.44 (m，1H)。ESI-MS m/z：384 +
(M+H)。
[0232] 实施例6：1H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 8.55 (ddd，J = 4.8，1.7，1.0 Hz，1H)，8.19 (dt，J = 7.8，1.1 Hz，1H)，8.05 (d，J = 8.7 Hz，1H)，7.84 (td，J = 7.5，1.5 Hz，
1H)，7.73 (t，J = 2.0，1.0 Hz，1 H)，7.55 (ddd，J = 7.7，2.2，1.0 Hz，1H)，7.42 (ddd，J = 7.5，4.7，1.2 Hz，1H)，7.28 (t，J = 8.1 Hz，1H)，7.11 (ddd，J = 8.1，2.0，1.0 Hz，1H)，
4.07-4.18 (m，1H)，3.74-3.84 (m，2H)，2.23-2.30 (m，1H)，2.09-2.19 (m，2H)，1.88-1.98 (m，2H)，1.69-1.79 (m，2H)，1.65-1.65(m，2H)，1.34-1.44 (m，1H)。ESI-MS m/z：384 +
(M+H)。
[0233] 以与实施例1和2类似的方式，表1 (以下)中的实施例3-4和12-14由市售6-甲基-吡啶-2-羧酸、6-甲基-吡嗪-2-羧酸、吡嗪-2-羧酸和1-甲基-1H-吡唑-3-羧酸以0.14至0.22 mmol的反应规模制备。
[0234] 以与实施例1和2类似的方式，表1中的实施例17-22以0.22 mmol的反应规模，由中间体5和市售6-甲基-吡啶-2-羧酸、吡啶甲酸和6-甲基-吡嗪-2-羧酸制备。
[0235] 以与实施例1和2类似的方式，表1中的实施例19也以7.62 mmol的反应规模，由市售吡啶甲酸和中间体6制备。
[0236] 以与实施例1和2类似的方式，表1中的实施例7-8和23-24以0.11-0.22 mmol的反应规模，分别由中间体7和市售吡啶甲酸、3-氯苯酸、6-甲基-吡啶-2-羧酸和3-氟苯甲酸制备。
[0237] 以与实施例1和2类似的方式，表1中的实施例27以1.24 mmol的反应规模，由市售3-氟苯甲酸和中间体8制备。
[0238] 实施例27：1H NMR (300 MHz，CDCl3) δ 8.16 (d，J=8.3 Hz，1H)， 7.77 (br，1H)，7.66-7.55 (m，3H)，7.41 (dt，J=5.7，8.3 Hz，1H)，7.23-7.14 (m，1H)，6.91 (d，J=7.4 Hz，
1H)，4.39-4.24 (m，1H)，4.18-3.97 (m，2H)，2.48 (s，3H)，2.18-1.47 (m，10H)。ESI-MS m/+
z：382 (M+H)。
[0239] 以与实施例1和2类似的方式，表1中的实施例9-11和15-16以0.19 mmol的反应规模，分别由中间体9和市售吡啶甲酸、6-甲基-吡啶-2-羧酸、6-甲基-吡嗪-2-羧酸、3-氟苯甲酸和3-氯苯甲酸(chloroorobenzoic acid)制备。
[0240] 实施例15：1H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 8.02-8.04 (m，1H)，7.89-7.93 (m，1H)，7.28-7.60 (m，5H)，7.16-7.22 (m，1H)，4.23-4.34 (m，1H)，3.78-3.89 (m，2H)，1.75-2.27 +
(m，7H)，1.50-1.70 (m，3H)。ESI-MS m/z：392 (M+H)。
[0241] 以与实施例1和2类似的方式，表1中的实施例158以0.2 mmol的反应规模，由中间体34和市售3-氟苯甲酸制备。
[0242] 实施例158：1H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 8.20 (bs，0.8H)，7.60-7.69 (m，1.6 H)，7.44-7.51 (m，0.4H)，7.35-7.42 (m，1H)，7.25-7.29 (m，1H)，7.13-7.20 (m，1H)，6.80-6.83 (m，1H)，5.99 (d，J = 7.0 Hz，0.2 H)，4.65-4.75 (m，0.2H)，4.30-4.40 (m，+
0.8H)，3.80-3.95 (m，5H)，1.35-2.34 (m，10H)。ESI-MS m/z：371 (M+H)。
[0243] 以与实施例1和2类似的方式，表1中的实施例86-88以0.81 mmol的反应规模，由中间体38和市售6-甲基-吡嗪-2-羧酸、6-甲基-吡啶-2-羧酸和3-氟苯甲酸制备。
[0244] 实施例30：顺式-吡啶-2-羧酸[2-(4-氟-吡啶-2-基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺
实施例30如下通过上述方案2的方法由中间体21制备：
将1,4-二噁烷(3.00 mL)中的顺式-吡啶-2-羧酸(1-氧代-2-氮杂-螺
[4.5]癸-7-基)-酰胺(60.0 mg，0.22 mmol，中间体21)、2-氯-4-氟吡啶(28.8 mg，
0.219 mmol)、碳酸钾(60.6 mg，0.438 mmol)、碘化铜(I)(41.7 mg，0.219 mmol)和(1R,2R)-N,N'-二甲基-环己烷-1,2-二胺(31.2 mg，0.219 mmol)放置在密封管中。将反应混合物在80℃加热过夜。将粗混合物冷却至室温，并用DCM (50 mL)稀释。将有机层用氨水/水(1：1，2×15 mL)和盐水洗涤，在MgSO4上干燥，过滤并在减压下浓缩。将残渣通过CombiFlash®系统(4 g硅胶柱体；梯度：DCM中的0至40%乙酸乙酯)纯化，产生24 mg (30%)的标题化合物，顺式-吡啶-2-羧酸[2-(4-氟-吡啶-2-基)-1-氧代-2-氮
1
杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺。H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.55 (ddd，J = 1.0，1.7，
4.8 Hz，1H)，8.30 (dd，J = 8.8，5.7 Hz，1H)， 8.25 (dd，J = 11.6，2.3 Hz，1H)，8.18 (dt，J = 7.8，1.0 Hz，1H)，8.06 (br d，J = 8.2 Hz，1H)，7.84 (td，J = 6.0，2.3 Hz，1H)，6.79 (ddd，J = 7.8，5.7，2.3 Hz，1H)，3.97-4.20 (m，3H)，2.09-2.27 (m，3H)，1.56-2.01 (m，+
6H)，1.33-1.46 (m，1H)。ESI-MS m/z：369 (M+H)。
[0245] 以与实施例30类似的方式，表1 (以下)中的实施例31-32、34和63-64以0.21-0.49 mmol的反应规模，分别由中间体18和市售杂芳基卤2-氯-5-氟吡啶、
2-氯-4-氟吡啶、2-氯-4-甲基嘧啶、5-溴-2-甲基吡啶和3-溴-5-氟吡啶制备。
[0246] 实施例31：1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.47 (dd，J = 9.2，4.1 Hz，1H)，8.24-8.31 (m，1H)，8.22 (d，J = 3.0 Hz，1H)， 8.03 (d，J = 7.7 Hz，1H)，7.77 (t，J =
7.7 Hz，1H)，7.45 (ddd，J = 9.2，7.7，3.0 Hz，1H)，7.31 (d，J = 7.7 Hz，1H)，3.96-4.21 (m，3H)，2.62 (s，3H)，2.10-2.28 (m，3H)，1.58-2.02 (m，6H)，1.36-1.51 (m，1H)。ESI-MS +
m/z：383 (M+H)。
[0247] 实施例32：1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.24 (dd，J = 8.8，5.7 Hz，1H)，8.19 (dd，J = 2.3，11.7 Hz，1H)， 8.12 (br d，J = 7.4 Hz，1H)，7.92 (d，J=7.7 Hz，1H)，7.66 (t，J = 7.7 Hz，1H)，7.21 (d，J = 8.4 Hz，1H)，6.73 (ddd，J = 7.8，5.7，2.3 Hz，1H)，3.90-4.12 (m，3H)，2.52 (s，3H)，2.02-2.20 (m，3H)，1.46-1.94 (m，6H)，1.27-1.41 (m，+
1H)。ESI-MS m/z：383 (M+H)。
[0248] 实施例34：1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.37 (d，J = 5.0 Hz，1H)， 8.06 (br d，J = 7.0 Hz，1H)，7.84 (d，J = 7.7 Hz，1H)，7.58 (t，J = 7.7 Hz，1H)，7.12 (d，J =7.9 Hz，1H)，6.73 (d，J = 5.0 Hz，1H)， 3.76-4.01 (m，3H)，2.54 (s，3H)，2.35 (s，3H)，+
1.92-2.08 (m，3H)，1.37-1.84 (m，6H)，1.19-1.31 (m，1H)。ESI-MS m/z：380 (M+H)。
[0249] 实施例63：1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.60 (d，J = 2.6 Hz，1H)， 8.14 (dd，J = 2.6，8.5 Hz，1H)，8.11 (br d，J = 8.6 Hz，1H)，7.97 (d，J = 7.6 Hz，1H)，7.71 (t，J = 7.7 Hz，1H)，7.26 (d，J = 7.2 Hz，1H)，7.17 (d，J = 8.6 Hz，1H)， 4.06-4.18 (m，1H)，3.77-3.88 (m，2H)，2.57 (s，3H)，2.54 (s，3H)，2.09-2.34 (m，3H)，1.59-1.99 (m，6H)，+
1.33-1.47 (m，1H)。ESI-MS m/z：379 (M+H)。
[0250] 实施例64：1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.51 (br，1H)，8.22-8.29 (m，2H)，8.12 (br d，J = 8.4 Hz，1H)，7.97 (d，J = 7.6 Hz，1H)，7.71 (t，J = 7.7 Hz，1H)，7.27 (d，J = 7.4 Hz，1H)，4.06-4.19 (m，1H)，3.78-3.91 (m，2H)，2.57 (s，3H)，2.10-2.37 (m，3H)，+1.88-1.98 (m，2H)，1.53-1.84 (m，4H)，1.34-1.48 (m，1H)。ESI-MS m/z：383 (M+H)。
[0251] 以与实施例30类似的方式，表1 (以下)中的实施例35-37以0.55 mmol的反应规模，分别由中间体19和市售杂芳基卤2-氯-5-氟吡啶、2-氯-4-氟吡啶和2-氯-4-甲基嘧啶制备。
[0252] 实施例35：1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.45 (dd，J = 4.1，9.2 Hz，1H)， 8.24 (d，J = 3.0 Hz，1H)，7.57-7.64 (m，2H)，7.40-7.51 (m，2H)，7.18-7.25 (m，1H)，4.28-4.40 (m，1H)，3.98-4.16 (m，2H)，2.04-2.22 (m，2H)，1.81-1.98 (m，5H)，1.53-1.67 (m，3H)。+
ESI-MS m/z：386 (M+H)。
[0253] 实施例36：1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.25 (dd，J = 5.7，8.8 Hz，1H)， 8.18 (dd，J = 11.6，2.3 Hz，1H)，7.47-7.56 (m，2H)，7.35 (td，J=8.1，5.6 Hz，1H)，7.09-7.16 (m，1H)，6.76 (ddd，J=7.8，5.7，2.3 Hz，1H)，4.18-4.29 (m，1H)，3.91-4.11 (m，2H)，+1.96-2.13 (m，2H)，1.71-1.89 (m，5H)，1.44-1.59 (m，3H)。ESI-MS m/z：386 (M+H)。
[0254] 实施例37：1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.57 (d，J = 5.0 Hz，1H)， 7.57-7.65 (m，2H)，7.42 (td，J = 8.1，5.6 Hz，1H)，7.16-7.23 (m，1H)，6.95 (d，J = 5.0 Hz，1H)，4.27-4.38 (m，1H)，3.99-4.18 (m，2H)，2.55 (s，3H)，2.04-2.22 (m，2H)，1.87-1.95 (m，+
5H)，1.54-1.68 (m，3H)。ESI-MS m/z：383 (M+H)。
[0255] 以与实施例30类似的方式，表1 (以下)中的实施例57以0.22 mmol的反应规模，由中间体20和市售2-氯-5-氟-吡啶制备。
[0256] 实施例57：1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.85 (d，J = 5.0 Hz，1H)，8.44 (dd，J = 9.2，4.1 Hz，1H)， 8.20 (d，J = 3.0 Hz，1H)，8.08 (br d，J = 8.6 Hz，1H)，7.89 (d，J = 4.9 Hz，1H)，7.44 (ddd，J =9.2，7.6，3.0 Hz，1H)，3.95-4.19 (m，3H)，2.78 (s，3H)，+2.08-2.24 (m，3H)，1.58-1.98 (m，6H)，1.35-1.47 (m，1H)。ESI-MS m/z：384 (M+H)。
[0257] 以与实施例30类似的方式，表1 (以下)中的实施例29、33和74以0.22-0.44 mmol的反应规模，分别由中间体21和市售杂芳基卤：2-氯-4-甲基嘧啶、2-氯-5-氟吡啶和3-溴-5-氟吡啶制备。
[0258] 实施例33：1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.55-8.60 (m，1H)，8.47 (dd，J = 9.4，4.0 Hz，1H)， 8.19-8.24 (m，2H)，8.11 (br d，J = 8.1 Hz，1H)，7.89 (td，J = 7.7，1.7 Hz，1H)，7.42-7.49 (m，2H)，3.98-4.21 (m，3H)，2.11-2.29 (m，3H)，1.59-2.02 (m，6H)，+
1.36-1.48 (m，1H)。ESI-MS m/z：369 (M+H)。
[0259] 实施例74：1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.56-8.60 (m，1H)，8.54 (br，1H)，8.26-8.33 (m，2H)，8.17-8.22 (m，1H)，8.07 (br d，J = 8.8 Hz，1H)， 7.87 (td，J = 7.7，
1.7 Hz，1H)，7.45 (ddd，J=7.6，4.8，1.2 Hz，1H)，4.09-4.21 (m，1H)，3.81-3.95 (m，2H)，
2.20-2.40 (m，2H)，2.11-2.18 (m，1H)，1.90-2.03 (m，2H)，1.56-1.83 (m，4H)，1.37-1.49 +
(m，1H)。ESI-MS m/z：369 (M+H)。
[0260] 实施例42：顺式-6-甲基-吡啶-2-羧酸[2-(3,5-二氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺实施例42如下通过上述方案2的方法由中间体18制备：
将1,4-二噁烷(15.0 mL)中的顺式-6-甲基-吡啶-2-羧酸(1-氧代-2-氮杂-螺
[4.5]癸-7-基)-酰胺(0.450 g，1.56 mmol，中间体18)、1-溴-3,5-二氟-苯(0.363 g，
1.88 mmol)、碳酸钾(0.649 g，4.70 mmol)和N-N'-二甲基-乙烷-1,2-二胺(0.138 g，
1.56 mmol)在微波合成器(Biotage)中，在160℃下加热2小时。将反应混合物冷却至室温，并通过Celite®层过滤。将滤液在减压下浓缩，将所得残渣在反相液相色谱/质谱法(RP-HPLC/MS)纯化系统(梯度：水中的乙腈，28-95%，3.6分钟，循环时间为5分钟。在
0.75-3.4分钟之间使用40-70%乙腈之间的浅梯度，以分离密集洗脱的杂质。流速：100 mL/min。流动相添加剂：39 mM的乙酸铵。柱：Inertsil® C18，30×50 mm，5 μm粒度(GL Sciences))上纯化，产生白色固体形式的0.120 g(20%)的标题化合物，顺式-6-甲基-吡
1
啶-2-羧酸[2-(3,5-二氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺。H NMR
(400 MHz，CDCl3)：δ 8.12 (d，J = 8.1 Hz，1H)，7.97 (d，J = 7.6 Hz，1H)，7.71 (t，J =
7.8 Hz，1H)，7.29-7.32 (m，2H)，7.20 (d，J = 7.8 Hz，1 H)，6.59 (tt，J = 8.8，2.2 Hz，
1H)，4.06-4.16 (m，1H)，3.71-3.81 (m，2H)，2.57 (s，3H)，2.23-2.30 (m，1H)，2.10-2.19 (m，2H)，1.88-1.96 (m，2H)，1.78 (t，J =12.4 Hz，1H)，1.68-1.76 (m，1H)，1.54-1.65 (m，+
2H)，1.35-1.45 (m，1H)。ESI-MS m/z：400 (M+H)。
[0261] 由HPLC (柱：Chiralpak® AD，250×20 mm；流动相：25%异丙醇，75%己烷；流速：14 mL/min；254 nm下的UV)拆分外消旋实施例42 (220 mg，通过再一次重复上述反应累积)，产生两种对映异构体。来自手性HPLC的第一峰规定为实施例67，6-甲基-吡啶-2-羧酸[(5R,7R)-2-(3,5-二氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]-癸-7-基]酰胺(106 mg)，以及来自手性HPLC的第二峰规定为实施例81，6-甲基-吡啶-2-羧酸[(5S,7S)-2-(3,5-二氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]-癸-7-基]酰胺(93 mg)。1
[0262] 实施例67：H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 8.12 (d，J = 8.1 Hz，1H)，7.97 (d，J =7.6 Hz，1H)，7.71 (t，J = 7.8 Hz，1H)，7.29-7.32 (m，2H)，7.20 (d，J = 7.8 Hz，1 H)，6.59 (tt，J = 8.8，2.2 Hz，1H)，4.06-4.16 (m，1H)，3.71-3.81 (m，2H)，2.57 (s，3H)，2.23-2.30 (m，1H)，2.10-2.19 (m，2H)，1.88-1.96 (m，2H)，1.78 (t，J =12.4 Hz，1H)，1.68-1.76 (m，+
1H)，1.54-1.65 (m，2H)，1.35-1.45 (m，1H)。ESI-MS m/z：400 (M+H)。
1
[0263] 实施例81：H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 8.12 (d，J = 8.1 Hz，1H)，7.97 (d，J =7.6 Hz，1H)，7.71 (t，J = 7.8 Hz，1H)，7.29-7.32 (m，2H)，7.20 (d，J = 7.8 Hz，1 H)，6.59 (tt，J = 8.8，2.2 Hz，1H)，4.06-4.16 (m，1H)，3.71-3.81 (m，2H)，2.57 (s，3H)，2.23-2.30 (m，1H)，2.10-2.19 (m，2H)，1.88-1.96 (m，2H)，1.78 (t，J =12.4 Hz，1H)，1.68-1.76 (m，+
1H)，1.54-1.65 (m，2H)，1.35-1.45 (m，1H)。ESI-MS m/z：400 (M+H)。
[0264] 以与实施例42类似的方式，表1 (以下)中的实施例43-52和71-72以0.07-1.56 mmol的反应规模，分别由中间体18和市售6-溴-吡啶-2-腈、1-氟-4-碘-苯、2-溴-吡啶、溴苯、1-碘-3-甲基苯、2-溴-4-甲基吡啶、2-溴-5-甲基吡啶、2-溴-3-甲基吡啶、1-氟-2-碘苯、4-溴-2-甲基吡啶、3-溴-5-甲基吡啶和1-溴-3-甲氧基苯制备。
[0265] 实施例43：1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.70 (dd，J=0.8，8.7 Hz，1H)，8.10 (d，J=8.5 Hz，1H)， 8.00-7.96 (m，1H)，7.79 (dd，J=7.4，8.7 Hz，1H)，7.71 (t，J=7.7 Hz，1H)，7.43 (dd，J=0.8，7.4 Hz，1H)，7.29-7.25 (m，1H)，4.18-3.97 (m，3H)，2.57 (s，3H)，+
2.28-1.34 (m，10H)。ESI-MS m/z：390 (M+H)。
[0266] 实施例44：1H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 8.11 (d，J = 8.6 Hz，1H)，7.97 (d，J = 8.5 Hz，1H)，7.71 (t，J = 7.6 Hz，1H)，7.57-7.63 (m，2H)，7.26 (d，J = 7.6 Hz，1H)，7.02-7.08 (m，2H)，4.06-4.17 (m，1H)，3.74-3.83 (m，2H)，2.57 (s，3H)，2.22-2.30 (m，
1H)，2.10-2.19 (m，2H)，1.86-1.97 (m，2H)，1.54-1.83 (m，4H)，1.34-1.45 (m，1H)。ESI-MS +
m/z：382 (M+H)。
[0267] 实施例45：1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.41 (d，J=8.5 Hz，1H)，8.38-8.35 (m，1H)，8.13 (d，J=8.5 Hz，1H)，7.98 (d，J=7.7 Hz，1H)，7.74-7.66 (m，2H)，7.26 (d，J=7.4 Hz，1H)，7.06-7.01 (m，2H)，4.18-3.97 (m，3H)，2.57 (s，3H)，2.28-1.34 (m，10H)。ESI-MS +
m/z：365 (M+H)。
[0268] 实施例46：1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.12 (d，J= 8.4 Hz，1H)，7.97 (d，J=7.6 Hz，1H)， 7.71 (t，J=7.7 Hz，1H)，7.67-7.62 (m，2H)，7.39-7.34 (m，1H)，7.26 (d，J=7.5 Hz，1H)，7.17-7.11 (m，1H)，4.18-4.06 (m，1H)，3.87-3.76 (m，2H)，2.57 (s，3H)，+2.30-1.33 (m，10H)。ESI-MS m/z：364 (M+H)。
[0269] 实施例47：1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.13 (d，J=8.5 Hz，1H)，7.97 (d，J=7.6 Hz，1H)， 7.71 (d，J=7.7 Hz，1H)， 7.51 (br，1H)，7.39 (d，J=8.2 Hz，1H)，7.28-7.22 (m，2H)，6.96 (d，J=7.5 Hz，1H)，4.18-4.06 (m，1H)，3.86-3.74 (m，2H)，2.57 (s，3H)，2.36 +
(s，3H)，2.28-1.34 (m，10H)。ESI-MS m/z：378 (M+H)。
[0270] 实施例48：1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.25 (s，1H)，8.21 (d，J=5.1 Hz，1H)，8.14 (d，J=6.6 Hz，1H)，7.98 (d，J=7.6 Hz，1H)，7.71 (t，J=7.7 Hz，1H)，7.26 (d，J=7.3 Hz，1H)，6.89-6.85 (m，1H)，4.19-3.97 (m，3H)，2.57 (s，3H)，2.36 (s，3H)，2.24-1.33 (m，+
10H)。ESI-MS m/z：379 (M+H)。
[0271] 以与实施例67和81类似的方式，分别通过手性HPLC，将表1 (以下)中的实施例25、28、73、80、82、95、147、148、152和156与其对应外消旋物：实施例19、27、31、44、76、78、
65、58、84和41分离。
[0272] 实 施例 25：1H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 8.54-8.56 (m，1H)，8.16-8.19 (m，1H)，8.04 (d，J = 8.3 Hz，1H)，7.84 (td，J = 7.9，1.7 Hz，1H)，7.58 (dt，J = 11.3，2.0 Hz，1H)，7.40-7.44 (m，1H)，7.28-7.37 (m，2H)，6.81-6.87 (m，1H)，4.07-4.18 (m，1H)，
3.74-3.85 (m，2H)，2.23-2.30 (m，1H)，2.08-2.19 (m，2H)，1.87-1.98 (m，2H)，1.55-1.80 +
(m，4H)，1.34-1.44 (m，1H)。ESI-MS m/z：368 (M+H)。
[0273] 实施例28：1H NMR (300 MHz，CDCl3) δ 8.16 (d，J=8.3 Hz，1H)， 7.77 (br，1H)，7.66-7.55 (m，3H)，7.41 (dt，J=5.7，8.3 Hz，1H)，7.23-7.14 (m，1H)，6.91 (d，J=7.4 Hz，
1H)，4.39-4.24 (m，1H)，4.18-3.97 (m，2H)，2.48 (s，3H)，2.18-1.47 (m，10H)。ESI-MS m/+
z：382 (M+H)。
[0274] 实施例73：1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.47 (dd，J = 4.0，9.3 Hz，1H)，8.22 (d，J = 3.0 Hz，1H)， 8.16 (br d，J = 8.5 Hz，1H)，8.01 (d，J = 7.7 Hz，1H)，7.74 (t，J = 7.7 Hz，1H)，7.45 (ddd， J= 9.2，7.7，3.0 Hz，1H)，7.29 (d，J = 6.8 Hz，1H)，3.97-4.21 (m，3H)，2.60 (s，3H)，2.11-2.28 (m，3H)，1.56-2.01 (m，6H)，1.35-1.48 (m，1H)。ESI-MS +m/z：383 (M+H)。
[0275] 实施例80：1H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 8.11 (d，J = 8.6 Hz，1H)，7.97 (d，J = 8.5 Hz，1H)，7.71 (t，J = 7.6 Hz，1H)，7.57-7.63 (m，2H)，7.26 (d，J = 7.6 Hz，1H)，7.02-7.08 (m，2H)，4.06-4.17 (m，1H)，3.74-3.83 (m，2H)，2.57 (s，3H)，2.22-2.30 (m，
1H)，2.10-2.19 (m，2H)，1.86-1.97 (m，2H)，1.54-1.83 (m，4H)，1.34-1.45 (m，1H)。ESI-MS +
m/z：382 (M+H)。
[0276] 实施例82：1H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 8.85 (d，J = 5.0 Hz，1H)，8.12 (d，J = 8.3 Hz，1H)，7.89 (d，J = 4.3 Hz，1H)，7.28-7.34 (m，2H)，6.59 (tt，J = 8.8，2.3 Hz，1H)，4.07-4.17 (m，1H)，3.73-3.82 (m，2H)，2.78 (s，3H)，2.06-2.28 (m，3H)，1.89-1.96 +
(m，2H)，1.55-1.85 (m，4H)，1.37-1.48 (m，1H)。ESI-MS m/z：401 (M+H)。
[0277] 实施例95：1H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 8.56 (d，J = 5.0 Hz，1H)，8.20 (bs，1H)，7.60 (bs，1H)，7.54-7.59 (m，1H)，7.49-7.52 (m，1H)，7.30-7.34 (m，2H)，6.84-6.90 (m，1H)，4.28-4.38 (m，1H)，3.76-3.90 (m，2H)，2.59 (s，3H)，2.14-2.23 (m，1H)，+
1.82-2.12 (m，6H)，1.48-1.64 (m，3H)。ESI-MS m/z：382 (M+H)。
[0278] 实施例147：1H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 8.51 (d，J = 6.0 Hz，1H)，8.17 (d，J = 5.8 Hz，1H)，7.80-7.86 (m，2H)，7.06-7.15 (m，3H)，4.23-4.33 (m，1H)，3.94-4.16 (m，2H)，2.65 (s，3H)，2.04-2.20 (m，2H)，1.75-1.96 (m，5H)，1.49-1.65 (m，3H)。ESI-MS m/+
z：383 (M+H)。
[0279] 实施例148：1H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 8.49 (d，J = 6.5 Hz，1H)，8.16 (d，J = 5.8 Hz，1H)，7.82 (t，J = 2.0 Hz，1H)，7.67-7.71 (m，1H)，7.43-7.47 (m，1H)，7.28-7.39 (m，2H)，4.21-4.32 (m，1H)，3.94-4.15 (m，2H)，2.64 (s，3H)，2.04-2.19 (m，+
2H)，1.76-1.98 (m，5H)，1.47-1.66 (m，3H)。ESI-MS m/z：399 (M+H)。
[0280] 实施例152：1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.49 (d，J = 5.9 Hz，1H)，8.16-8.19 (m，1H)，7.60-7.63 (m，1H)，7.55-7.59 (m，1H)，7.29-7.35 (m，2H)，6.75 (s，1H)，4.19-4.29 (m，1H)，4.07-4.15 (m，1H)，3.98-4.02 (m，1H)，2.65 (s，3H)，2.40 (s，3H)，
2.04-2.22 (m，2H)，1.85-2.04 (m，3H)，1.71-1.81 (m，2H)，1.39-1.65 (m，3H)。ESI-MS m/+
z：379 (M+H)。
[0281] 实施例156：1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.65 (d，J = 8.5 Hz，1H)，8.10 (d，J=8.5 Hz，1H)，7.98 (d，J=7.6 Hz，1H)， 7.84 (t，J=7.8 Hz，1H)，7.71 (t，J=7.7 Hz，1H)，7.40 (d，J=7.4 Hz，1H)，7.26 (d，J=7.5 Hz，1H)，4.18-4.02 (m，3H)，2.57 (s，3H)，+
2.28-1.33 (m，10H)。ESI-MS m/z：433 (M+H).
以与实施例42类似的方式，表1 (以下)中的实施例26、53、130、132-136、138-139和142以0.03-1.0 mmol的反应规模，分别由中间体19和市售杂芳基卤：2-溴-吡啶，
6-溴-吡啶-2-腈，1-碘-3-甲氧基-苯，(3-碘-苯基)-二甲基-胺，1-碘-4-甲氧
基-苯，4-[3-(3-溴-苯基)-丙基]-吗啉，1-溴-3-氟-5-甲氧基-苯，2-(3-碘-苯氧基)-1-吡咯烷-1-基-乙酮，(4-碘-苯基)-二甲基-胺，2-溴-噻唑和3-氟-5-碘-苄
腈制备。
[0282] 实施 例130：1H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 8.05-7.83 (m，br，1H)，7.66-7.58 (m，2H)，7.46 (t， J = 2.3Hz，1H)， 7.42-7.35 (m，1H)，7.27-7.23 (m，1H)，7.20-7.13 (m，1H)，7.10-7.05 (m，1H)，6.74-6.70 (m，1H)，4.39-4.28 (m，1H)，3.91-3.74 (m，5H)，+2.22-1.46 (m，10H)，ESI-MS m/z： 397 (M+H)。
[0283] 实施例132：1H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 8.32 (s,br，1H)，7.71-7.60 (m，2H)，7.40-7.32 (m，2H)，7.24-7.11 (m，2H)，6.73-6.67 (m，1H)，6.58-6.53 (m，1H)，4.41-4.30 +
(m，1H)，3.93-3.73 (m，2H)，2.96 (s，6H)，2.19-2.45 (m，10H)。ESI-MS m/z： 401 (M+H)。
[0284] 实施例133：1H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 8.08-7.86 (m，1H)，7.65-7.57 (m，2H)，7.53-7.48 (m，2H)，7.41-7.35 (m，1H)，7.19-7.13 (m，1H)，6.92-6.88 (m，2H)，+
4.40-4.27 (m，1H)，3.87-3.70 (m，5H)，2.21-1.46 (m，10H)。ESI-MS m/z： 397 (M+H)。
[0285] 实施例134：1H NMR (300 MHz，CDCl3)：δ 7.96-7.75 (m，1H)，7.68-7.55 (m，3H)，7.46-7.27 (m，3H)，7.24-7.11 (m，1H)，7.00 (m，1H)，4.44-4.26 (m，1H)，3.97-3.65 +
(m，6H)，2.77-1.47 (m，20H)。ESI-MS m/z： 494 (M+H)。
[0286] 实施例135：1H NMR (300 MHz，CDCl3)：δ 7.82-7.55 (m，3H)，7.45-7.34 (m，1H)，7.22-7.13 (m，2H)，7.04-6.95 (m，1H)，6.49-6.39 (m，1H)，4.39-4.24 (m，1H)，+
3.87-3.71 (m，5H)，2.24-1.46 (m，10H)。ESI-MS m/z： 415 (M+H)。
[0287] 实施例136：1H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 7.93-7.71 (m，br,1H)，7.66-7.56 (m，2H)，7.43-7.35 (m，2H)，7.28-7.26 (m，1H)，7.22-7.13 (m，2H)，6.79-6.75 (m，1H)，4.63 (s，2H)，4.36-4.25 (m，br，1H)，3.90-3.74 (m，2H)，3.51 (t，J = 6.8 Hz，4H)，+
2.22-1.48 (m，14H)。ESI-MS m/z： 494 (M+H)。
[0288] 实施例138：1H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 8.50-8.07 (m，br，1H)，7.69-7.60 (m，2H)，7.48-7.34 (m，3H)，7.21-7.13 (m，1H)，6.74 (d，J = 8.7 Hz，2H)，4.43-4.29 (m，1H)，+
3.91-3.67 (m，2H)，2.95 (m，6H)，2.22-1.46 (m，10H)。ESI-MS m/z： 410 (M+H)。
[0289] 实施例139：1H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 7.65-7.56 (m，2H)，7.50 (d，J = 3.5 Hz，1H)，7.45-7.38 (m，2H)，7.22-7.16 (m，1H)，7.05-(d，J = 3.5 Hz，1H)，4.39-4.29 (m，+1H)，4.24-4.05 (m，2H)，2.32-2.12 (m，2H)，1.98-1.55 (m，8H)。ESI-MS m/z： 374 (M+H)。
[0290] 实施例142：1H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 7.89-7.84 (m，1H)，7.75 (s，br，1H)，7.59-7.52 (m，2H)，7.46-7.38 (m，1H)，7.23-7.07 (m，3H)，4.32-4.20 (m，1H)，3.85-3.77 +
(m，2H)，2.30-1.45 (m，10H)。ESI-MS m/z： 410 (M+H)。
[0291] 以与实施例42类似的方式，表1 (以下)中的实施例59-61、76和141以0.03-4.16 mmol的反应规模，分别由中间体20和市售2-氯-6-甲基吡嗪、3-碘-苄腈、2-溴-6-三氟甲基-吡啶、1,3-二氟-5-碘-苯和1-溴-3-氟-5-甲氧基-苯制备。
[0292] 实施例141：1H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 8.88 (s，br，1H)，8.20-8.06 (m，1H)，7.91 (s，br，1H)，7.15 (s，br，1H)，7.09-7.04 (m，1H)，6.46-6.41 (m，1H)，4.19-4.07 +
(m，1H)，3.85-3.75 (m，5H)，2.81 (s，3H)，2.30-1.36 (m，10H)。ESI-MS m/z： 413 (M+H)。
[0293] 以与实施例42类似的方式，表1 (以下)中的实施例75以0.11 mmol的反应规模，由中间体21和市售4-碘-1,2-二氟-苯制备。
[0294] 以与实施例42类似的方式，表1 (以下)中的实施例79以0.13 mmol的反应规模，由中间体22和市售1-溴-3,5-二氟-苯制备。
[0295] 以与实施例42类似的方式，表1 (以下)中的实施例78以1.04 mmol的反应规模，由中间体23和市售1-碘-3-氟-苯制备。
[0296] 以与实施例42类似的方式，表1 (以下)中的实施例137以0.1 mmol的反应规模，由中间体32和市售1-碘-3-氟-苯制备。
[0297] 实施例137：1H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 7.86 (d，J = 3.1 Hz，1H)，7.60-7.57 (m，1H)，7.56 (d，J = 3.1 Hz，1H)，7.44 (d，br，J = 8 Hz,，1H)，7.38-7.28 (m，2H)，6.87-6.81 (m，1H)，4.18-4.04 (m，1H)，3.85-3.75 (m，2H)，2.27-1.35 (m，10H)。ESI-MS m/+
z： 374.0 (M+H)。
[0298] 实施例62：顺式-6-甲基-吡啶-2-羧酸[2-(2-甲基-嘧啶-4-基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺
实施例62如下通过上述方案2的方法由中间体18制备：
在80℃将甲苯(1.0 mL)中的4-氯-2-甲基嘧啶(0.019 g，0.148 mmol)、顺式-6-甲基-吡啶-2-羧酸(1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基)-酰胺(0.047 g，0.162 mmol，中间体18)、碳酸二铯(0.067 g，0.206 mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)氯仿加合物(0.031 g，0.030 mmol)和外消旋BINAP (0.055 g，0.089 mmol)加热6小时。将粗混合物冷却至室温，并滤出催化剂。将滤液在减压下浓缩，并将所得残渣在RP-HPLC/MS纯化系统(梯度：水中的乙腈，24-95%，3.6分钟，循环时间为5分钟。在0.75-3.4分钟之间使用
40-68%乙腈之间的浅梯度以分离密集洗脱的杂质。流速：100 mL/min。流动相添加剂：48 mM的乙酸铵。柱：Inertsil® C8，30×50 mm，5 μm粒度(GL Sciences))上纯化，产生白色固体形式的0.032 g (57%)的标题化合物，顺式-6-甲基-吡啶-2-羧酸[2-(2-甲基-嘧啶-4-基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺。1H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ
8.47 (d，J = 5.8 Hz，1H)，8.17 (d，J = 5.8 Hz，1H)，8.09 (d，J = 8.9 Hz，1H)，7.96 (d，J = 8.3 Hz，1H)，7.70 (t，J = 7.6 Hz，1H)，7.25 (d，J = 7.6 Hz，1H)，3.94-4.16 (m，3H)，
2.63 (s，3H)，2.55 (s，3H)，2.09-2.24 (m，3H)，1.86-1.97 (m，2H)，1.77 (t，J = 12.4 Hz，
1H)，1.57-1.69 (m，3H)，1.33-1.42 (m，1H)。ESI-MS m/z：380 (M+H)+。
[0299] 以与实施例62类似的方式，表1 (以下)中的实施例65和66、150和151以2.81 mmol的反应规模，分别由中间体19和市售4-氯-2-甲基-嘧啶和4-溴-2-甲基吡啶，4-氯-2-三氟甲基-嘧啶和4-氯-2,6-二甲基-嘧啶制备。
[0300] 实施例65：1H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 8.51 (d，J = 6.0 Hz，1H)，8.17 (d，J = 5.8 Hz，1H)，7.80-7.86 (m，2H)，7.06-7.15 (m，3H)，4.23-4.33 (m，1H)，3.94-4.16 (m，2H)，2.65 (s，3H)，2.04-2.20 (m，2H)，1.75-1.96 (m，5H)，1.49-1.65 (m，3H)。ESI-MS m/+
z：383 (M+H)。
[0301] 实 施 例 66：1H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 8.42 (s，1H)，7.51-7.60 (m，3H)，7.36-7.43 (m，2H)，7.29 (bs，1H)，7.15-7.21 (m，1H)，4.22-4.31 (m 1H)，3.78-3.83 (m，
2H)，2.54 (s，3H)，2.06-2.25 (m，2H)，1.75-1.96 (m，5H)，1.46-1.63 (m，3H)。ESI-MS m/+
z：382 (M+H)。
[0302] 实施例151：1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.73 (d，J = 6.1 Hz，1H)， 8.54 (d，J = 5.8 Hz，1H)，7.50-7.57 (m，2H)，7.37-7.44 (m，1H)，7.16-7.22 (m，1H)，6.96 (s，1H)，4.14-4.29 (m，2H)，3.99-4.07 (m，1H)，2.10-2.25 (m，2H)，1.74-2.01 (m，5H)，1.44-1.67 +
(m，3H)。ESI-MS m/z：437 (M+H)。
[0303] 实施例152：1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.01 (s，1H)， 7.51-7.59 (m，2H)，7.32-7.40 (m，2H)，7.12-7.19 (m，1H)，4.19-4.29 (m，1H)，4.04-4.11 (m，1H)，3.96-3.99 (m，1H)，2.58 (s，3H)，2.43 (s，3H)，2.01-2.16 (m，2H)，1.73-1.93 (m，5H)，1.45-1.62 (m，+
3H)。ESI-MS m/z：397 (M+H)。
[0304] 以与实施例62类似的方式，表1 (以下)中的实施例140以0.1 mmol的反应规模，由中间体32和市售4-氯-2-甲基-嘧啶制备。
[0305] 实施例140：1H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 8.50 (s，br，1H)，8.19 (d，J = 5.8 Hz，1H)，7.86 (d，J = 3.0 Hz，1H)，7.57 (d，J = 3.0 Hz，1H)，7.43-7.35 (m，1H)，3.94-4.18 +
(m，3H)，2.64 (s，3H)，1.35-2.23 (m，10H)。ESI-MS m/z： 372 (M+H)。
[0306] 实施例76：顺式-2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(3,5-二氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺实施例76也如下通过上述方案1的方法由中间体33制备：
在圆底烧瓶中加入顺式-7-氨基-2-(3,5-二氟-苯基)-2-氮杂-螺[4.5]癸-1-酮
HCl (10.8 g，34.1 mmol)，2-甲基嘧啶-4-羧酸(4.71 g，34.1 mmol)和BOP (15.1 g，
34.1 mmol)。添加二氯甲烷(218 mL)，并将混合物在0℃冷却。滴加三乙胺(14.2 mL，102 mmol)。将混合物升至室温并在室温搅拌过夜。将混合物用二氯甲烷(100 mL)和水(50 mL)稀释。将水层用CH2Cl2(100 mL)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，在Na2SO4上干燥，并在减压下浓缩。将所得残渣从乙酸乙酯中结晶，产生8.8 g (77%)的标题化合物，顺式-2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(3,5-二氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺。
1
H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 8.85 (d，J = 5.0 Hz，1H)，8.10 (d，J = 8.1 Hz，1H)，7.89 (d，J = 5.4 Hz，1H)，7.28-7.35 (m，2H)，6.60 (tt，J = 8.8，2.5 Hz，1H)，4.07-4.18 (m，
1H)，3.74-3.80 (m，2H)，2.79 (s，3H)，2.07-2.28 (m，3H)，1.89-1.97 (m，2H)，1.55-1.85 +
(m，4H)，1.37-1.48 (m，1H)。ESI-MS m/z： 401 (M+H)。
[0307] 以与实施例76类似的方式，表1 (以下)中的实施例143-146以0.05-0.07 mmol的反应规模，分别由中间体33和市售噻唑-2-碳酰氯、2-甲基-噻唑-4-羧酸、戊酰和丁酰氯制备。
[0308] 实施例143：1H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 7.86 (d，J = 3.1 Hz，1H)，7.56 (d，J = 3.1 Hz，1H)，7.39 (d，br J = 8.0 Hz，1H)，7.28-7.32 (m，2H)，6.62-6.55 (m，1H)，+4.06-4.17 (m，1H)，3.72-3.81 (m，2H)，1.35-2.28 (m，10H)。ESI-MS m/z：392 (M+H)。
[0309] 实施例144：1H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 7.91 (s，1H)， 7.27-7.37 (m，3H)，6.54-6.61 (m，1H)， 4.03-4.15 (m，1H)， 3.70-3.80 (m，2H)，2.70 (s，3H)，1.30-2.29 (m，+
10H)。ESI-MS m/z：406 (M+H)。
[0310] 实施例145：1H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 7.27-7.31 (m，2H)，6.56-6.63 (m，1H)， 5.83 (m，1H)，3.93-4.05 (m，1H)， 3.70-3.79 (m，2H)，1.22-2.23 (m，16H)，0.91 +
(m，3H)。ESI-MS m/z：365 (M+H)。
[0311] 实施例146：1H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 7.26-7.30 (m，2H)，6.56-6.62 (m，1H)，5.97 (s，1H)，3.95-4.06 (m，1H)，3.71-3.80 (m，2H)，1.21-2.25 (m，14H)，0.93 (t，J = 7.4 Hz，3H)。
[0312] ESI-MS m/z：351 (M+H)+。
[0313] 实 施 例 78：顺 式 -N-[2-(3-氟 - 苯 基 )-1- 氧 代 -2- 氮 杂- 螺 [4.5]癸-7-基]-2-甲基-异烟酰胺实施例78如下也由中间体13制备：
将[2-(3-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-氨基甲酸叔丁酯
(0.010 g，0.028 mmol，中间体13)溶于二氯甲烷 (1.0 mL)，添加1,4-二噁烷(0.7 mL)中的4M的氯化氢。将混合物在室温下搅拌过夜，然后在减压下浓缩。将所得残渣溶于二氯甲烷(1.0 mL)。添加三乙胺(0.015 mL，0.11 mmol)，随后添加2-甲基异烟酸(0.005 g，0.033 mmol)和BOP (0.015 g，0.033 mmol)。将混合物在室温下搅拌4小时，并在减压下浓缩。将残渣在RP-HPLC/MS纯化系统(梯度：水中的乙腈，24-95%，3.6分钟，循环时间为5分钟。在0.75-3.3分钟之间使用28-56%乙腈之间的浅梯度以分离密集洗脱的杂质。流速：100 mL/min。流动相添加剂：48 mM的甲酸铵。柱：Inertsil® C8，30×50 mm，5 μm粒度(GL Sciences))上纯化，产生白色固体形式的0.008 g (80%)的标题化合物，顺
1
式-N-[2-(3-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-2-甲基-异烟酰胺。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 8.56 (d，J = 5.0 Hz，1H)，8.20 (bs，1H)，7.60 (bs，1H)，7.54-7.59 (m，1H)，7.49-7.52 (m，1H)，7.30-7.34 (m，2H)，6.84-6.90 (m，1H)，4.28-4.38 (m，1H)，
3.76-3.90 (m，2H)，2.59 (s，3H)，2.14-2.23 (m，1H)，1.82-2.12 (m，6H)，1.48-1.64 (m，+
3H)。ESI-MS m/z：382 (M+H)。
[0314] 以与实施例78类似的方式，表1中的实施例68-70、77和93-94以0.03-0.16 mmol的反应规模，分别由中间体13和市售5-氟-吡啶-2-羧酸、2-甲基-嘧啶-4-羧酸、嘧啶-4-羧酸、异烟酸、2-甲基异烟酸、6-羟甲基-吡啶-2-羧酸和6-三氟甲基-吡啶-2-羧酸制备。
[0315] 实施例68：1H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 8.38 (d，J = 3.0 Hz，1H)，8.19-8.23 (m，1H)，7.89 (d，J = 8.1 Hz，1H)，7.50-7.60 (m，2H)，7.28-7.38 (m，2H)，6.81-6.87 (m，1H)，4.05-4.16 (m，1H)，3.75-3.85 (m，2H)，2.06-2.29 (m，3H)，1.87-1.97 (m，2H)，+1.33-1.80 (m，5H)。ESI-MS m/z：386 (M+H)。
[0316] 实施例69：1H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 8.85 (d，J = 3.8 Hz，1H)，8.12 (d，J = 8.3 Hz，1H)，7.89 (d，J = 5.0 Hz，1H)，7.56-7.61 (m，1H)，7.28-7.37 (m，2H)，6.82-6.88 (m，1H)，4.07-4.18 (m，1H)，3.77-3.83 (m，2H)，2.78 (s，3H)，2.05-2.27 (m，+
3H)，1.37-1.96 (m，7H)。ESI-MS m/z：383 (M+H)。
[0317] 以与实施例78类似的方式，表1中的实施例38-40以0.06 mmol的反应规模，分别由中间体14和市售羧酸：3-氟苯甲酸，吡啶甲酸和6-甲基-吡啶-2-羧酸制备。
[0318] 实施例38：1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 9.53 (s 1H)，8.22 (s，1H)，7.63-7.56 (m，2H)，7.46-7.39 (m，1H)，7.23-7.16 (m，1H)，4.38-4.27 (m，1H)，4.16-3.93 (m，2H)，+2.50 (s，3H)，2.23-1.52 (m，10H)。ESI-MS m/z：383 (M+H)。
[0319] 以与实施例78类似的方式，表1中的实施例54-56以0.03 mmol的反应规模，分别由中间体15和市售羧酸：吡啶甲酸，6-甲基-吡嗪-2-羧酸和吡嗪-2-羧酸制备。
[0320] 实施例54：1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.54-8.57 (m，1H)，8.15-8.19 (m，1H)，8.05 (d，J = 8.3 Hz，1H)，7.82-7.87 (m，1H)，7.40-7.45 (m，1H)，7.27-7.34 (m，2H)，
6.55-6.62 (m，1H)，4.07-4.18 (m，1H)，3.71-3.82 (m，2H)，2.23-2.31 (m，1H)，2.07-2.20 +
(m，2H)，1.87-1.98 (m，2H)，1.34-1.80 (m，5H)。ESI-MS m/z：386 (M+H)。
[0321] 实施例55：1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 9.18 (s，1H)，8.61 (s，1H)，7.92 (d，J = 8.5 Hz，1H)，7.27-7.34 (m，1H)，6.56-6.63 (m，1H)，4.09-4.20 (m，1H)，3.73-3.81 (m，2H)，2.61 (s，3H)，2.07-2.29 (m，3H)，1.89-1.96 (m，2H)，1.35-1.83 (m，5H)。ESI-MS m/+
z：401 (M+H)。
[0322] 以与实施例78类似的方式，表1中的实施例41以0.05 mmol的反应规模，由中间体16和市售6-甲基-吡啶-2-羧酸制备。
[0323] 实施例41：1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.65 (d，J=8.5 Hz，1H)，8.10 (d，J=8.5 Hz，1H)，7.98 (d，J=7.6 Hz，1H)，7.84 (t，J=7.8 Hz，1H)，7.71 (t，J=7.7 Hz，1H)，7.40 (d，J=7.4 Hz，1H)，7.26 (d，J=7.5 Hz，1H)，4.18-4.02 (m，3H)，2.57 (s，3H)，2.28-1.33 (m，+10H)。ESI-MS m/z：433 (M+H)。
[0324] 以与实施例78类似的方式，表1中的实施例58、84-85、89-92、96和149以0.04-0.08 mmol的反应规模，分别由中间体17和市售羧酸：3-氯苯甲酸，3-甲基-苯甲酸，
3,5-二氟苯甲酸，4-氟苯甲酸，3,4-二氟苯甲酸，2-氟苯甲酸，2-甲基-异烟酸，6-三氟甲基-吡啶-2-羧酸和5-氟-吡啶-2-羧酸制备。
[0325] 实施例58：1H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 8.49 (d，J = 6.5 Hz，1H)，8.16 (d，J = 5.8 Hz，1H)，7.82 (t，J = 2.0 Hz，1H)，7.67-7.71 (m，1H)，7.43-7.47 (m，1H)，7.28-7.39 (m，2H)，4.21-4.32 (m，1H)，3.94-4.15 (m，2H)，2.64 (s，3H)，2.04-2.19 (m，+
2H)，1.76-1.98 (m，5H)，1.47-1.66 (m，3H)。ESI-MS m/z：399 (M+H)。
[0326] 实施例84：1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.49 (d，J = 5.9 Hz，1H)，8.16-8.19 (m，1H)，7.60-7.63 (m，1H)，7.55-7.59 (m，1H)，7.29-7.35 (m，2H)，6.75 (s，1H)，4.19-4.29 (m，1H)，4.07-4.15 (m，1H)，3.98-4.02 (m，1H)，2.65 (s，3H)，2.40 (s，3H)，2.04-2.22 (m，+
2H)，1.85-2.04 (m，3H)，1.71-1.81 (m，2H)，1.39-1.65 (m，3H)。ESI-MS m/z：379 (M+H)。
[0327] 实施例85：1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.53 (d，J = 5.8 Hz，1H)，8.18 (d，J = 6.1 Hz，1H) ，7.62 (s，1H)，7.35-7.40 (m，2H)，6.91-6.98 (m，1H)，4.31 (m，1H)，4.09-4.18 (m，1H)，3.94-4.03 (m，1H)，2.65 (s，3H)，2.02-2.18 (m，2H)，1.50-1.93 (m，+
8H)。ESI-MS m/z：401 (M+H)。
[0328] 实施例89：1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.52 (d，J = 6.0 Hz，1H)，8.17 (d，J =6.0 Hz，1H) ，7.80-7.86 (m，2H)，7.09-7.15 (m，3H)，4.22-4.32 (m，1H)，4.09-4.16 (m，
1H)，3.94-4.02 (m，1H)，2.65 (s，3H)，2.05-2.20 (m，2H)，1.44-2.00 (m，8H)。ESI-MS m/+
z：383 (M+H)。
[0329] 实施例149：1H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 8.48 (d，J = 5.9 Hz，1H)，8.37 (d，J = 2.8 Hz，1H)，8.16-8.22 (m，2H)，7.86 (d，J = 8.6 Hz，1H)，7.50-7.55 (m，1H)，4.04-4.15 (m，2H)，3.94-4.02 (m，1H)，2.63 (s，3H)，2.07-2.24 (m，3H)，1.86-1.97 (m，+
2H)，1.56-1.78 (m，4H)，1.34-1.42 (m，1H)。ESI-MS m/z：384 (M+H)。
[0330] 实施例83：顺式-6-甲基-吡啶-2-羧酸(2-苄基-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基)-酰胺
实施例83如下通过上述方案2的方法由中间体18制备：
在0℃下向顺式-6-甲基-吡啶-2-羧酸(1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基)-酰
胺(0.100 g，0.348 mmol，中间体18)在无水THF (5.0 mL)中的溶液中添加氢化钠(0.015 g，0.383 mmol)。将反应混合物在0℃下搅拌30分钟，然后滴加苄基溴(0.041 mL，0.348 mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜，然后用水猝灭，用乙酸乙酯(100 mL)稀释。将有机层用盐水洗涤，在Na2SO4上干燥，并在减压下浓缩。将所得残渣通过硅胶色谱法(己烷/乙酸乙酯：100/0至0/100)纯化，产生白色固体形式的0.115 g (88%)的标题化合物，顺
1
式-6-甲基-吡啶-2-羧酸(2-苄基-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基)-酰胺。H
NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 8.11 (d，J = 8.6 Hz，1H)，7.97 (d，J = 7.5 Hz，1H)，7.70 (t，J = 7.5 Hz，1H)，7.18-7.33 (m，6H)，4.45 (m，2H)，4.01-4.11 (m，1H)，3.14-3.22 (m，2H)，
2.57 (s，3H)，1.95-2.12 (m，4H)，1.70-1.89 (m，3H)，1.67-1.76 (m，1H)，1.52-1.60 (m，+
1H)，1.45-1.50 (m，1H)，1.32-1.42 (m，1H)。ESI-MS m/z：378 (M+H)。
[0331] 以与实施例83类似的方式，表1中的实施例153-155以0.11 mmol的反应规模，分别由中间体18和市售碘甲烷，碘乙烷和1-碘丙烷制备。
[0332] 实施例153：1H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 8.08 (d，J = 8.6 Hz，1H)，7.95 (d，J = 8.1 Hz，1H)，7.69 (t，J = 7.9 Hz，1H)，7.25 (d，J = 7.8 Hz，1H)，3.99-4.12 (m，1H)，3.28-3.33 (m，2H)，2.84 (s，3H)，2.55 (s，3H)，1.95-2.14 (m，3H)，1.26-1.87 (m，7H)。
+
ESI-MS m/z：302 (M+H)。
[0333] 实施例154：1H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 8.08 (d，J = 8.6 Hz，1H)，7.95 (d，J = 7.3 Hz，1H)，7.69 (t，J = 8.7 Hz，1H)，7.24 (d，J = 8.9 Hz，1H)，4.00-4.11 (m，1H)，3.25-3.37 (m，4H)，2.55 (s，3H)，2.04-2.13 (m，2H)，1.94-2.02 (m，1H)，1.26-1.87 (m，+
7H)，1.09 (t，J = 7.3 Hz，3H)。ESI-MS m/z：316 (M+H)。
[0334] 实施例155：1H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 8.07 (d，J = 8.4 Hz，1H)，7.95 (d，J = 7.6 Hz，1H)，7.69 (t，J = 7.6 Hz，1H)，7.25 (d，J = 8.6 Hz，1H)，4.00-4.11 (m，1H)，3.20-3.33 (m，4H)，2.55 (s，3H)，2.04-2.12 (m，2H)，1.95-2.02 (m，1H)，1.25-1.87 (m，+
9H)，0.87 (t，J = 7.4 Hz，3H)。ESI-MS m/z：330 (M+H)。
[0335] 实施例97：顺式-吡啶-2-羧酸[9,9-二氟-2-(3-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺
实施例97如下通过上述方案1的方法由中间体24制备：
在0℃下向由5,5-二氟-1-[2-(3-氟-苯基氨基)-乙基]-环己烷-1,3-二羧酸二甲
酯(0.37 mmol)和三乙胺(0.141 mL，1.01 mmol)制备的粗顺式-7-氨基-2-(4-甲氧基-苄基)-2-氮杂-螺[4.5]癸-1-酮在DCM (3.37 mL)中的溶液中添加吡啶-2-碳酰氯·HCl (57.3 mg，0.322 mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，然后用DCM (50 mL)稀释，用饱和的NaHCO3水溶液和盐水洗涤，在MgSO4上干燥，过滤并在减压下浓缩。将残渣在反相液相色谱/质谱法(RP-HPLC/MS)纯化系统(梯度：水中的乙腈，27-95%，3.6分钟，循环时间为5分钟。在0.75-3.3分钟之间使用38-68%乙腈的浅梯度。流速：100 mL/min。流动相添加剂：48 mM的甲酸铵。柱：Inertsil® C8，30×50 mm，5 μm粒度(GL Sciences))上纯化，产生27 mg的标题化合物，吡啶-2-羧酸[9,9-二氟-2-(3-氟-苯基)-1-氧代-2-氮
1
杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺 H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 8.57 (d，J = 4.8 Hz，1H)，
8.27 (br d，J = 7.9 Hz，1H)， 8.23 (d，J = 7.8 Hz，1H)，7.94 (dt，J = 7.7，1.6 Hz，1H)，
7.49-7.60 (m，2H)，7.31-7.38 (m，2H)，6.85-6.91 (m，1H)，4.40-4.56 (m，1H)，3.77-3.91 (m，2H)，2.55-2.69 (m，1H)，2.24-2.44 (m，3H)，2.07-2.16 (m，2H)，1.93 (ddt，J = 3.4，+
12.8，34.1 Hz，1H)，1.73 (t，J = 12.7 Hz，1H)。ESI-MS m/z：404 (M+H)。
[0336] 实施例98、99、101和实施例102：分别吡啶-2-羧酸[(5R,7S)-9,9-二氟-2-(3-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺；吡啶-2-羧酸[(5S,7R)-9,9-二氟-2-(3-氟-苯基)-1-氧代-2-氮
杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺；吡啶-2-羧酸[(5S,7S)-9,9-二氟-2-(3-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺；和吡啶-2-羧酸[(5R,7R)-9,9-二氟-2-(3-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺
2
实施例101和102通过方案1的方法，由吡啶-2-碳酰氯和中间体A-3 (R 为3-氟
苯基)制备，所述中间体A-3可以通过上述方案6中的步骤i和j，由反式-9,9-二
氟-2-(3-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4,5]癸烷-7-羧酸甲酯(中间体24的步骤
7)制备。
[0337] 通过HPLC (柱：Chiralpak® AD，250×20 mm (Diacel)；流动相：己烷中的15%异丙醇；流速：14 mL/min；254 nm下的UV)拆分实施例97和反式-非对映异构体实施例101-102的混合物，产生各自非对映异构体的两种对映异构体。来自手性HPLC的第一峰任意规定为实施例99，吡啶-2-羧酸[(5S,7R)-9,9-二氟-2-(3-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺，来自手性HPLC的第二峰任意规定为实施例101，吡啶-2-羧酸[(5S,7S)-9,9-二氟-2-(3-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰
胺，来自手性HPLC的第三峰任意规定为实施例98，吡啶-2-羧酸[(5R,7S)-9,9-二
氟-2-(3-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺，和来自手性HPLC的
第四峰任意规定为实施例102，吡啶-2-羧酸[(5R,7R)-9,9-二氟-2-(3-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺。
[0338] 实施例98：1H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 8.57 (d，J = 4.8 Hz，1H)，8.27 (br d，J = 7.9 Hz，1H)， 8.23 (d，J = 7.8 Hz，1H)，7.94 (dt，J = 7.7，1.6 Hz，1H)，7.49-7.60 (m，2H)，7.31-7.38 (m，2H)，6.85-6.91 (m，1H)，4.40-4.56 (m，1H)，3.77-3.91 (m，2H)，2.55-2.69 (m，1H)，2.24-2.44 (m，3H)，2.07-2.16 (m，2H)，1.93 (ddt，J = 3.4，12.8，34.1 +
Hz，1H)，1.73 (t，J = 12.7 Hz，1H)。ESI-MS m/z：404 (M+H)。
[0339] 实施例99：1H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 8.57 (d，J = 4.8 Hz，1H)，8.27 (br d，J = 7.9 Hz，1H)， 8.23 (d，J = 7.8 Hz，1H)，7.94 (dt，J = 7.7，1.6 Hz，1H)，7.49-7.60 (m，2H)，7.31-7.38 (m，2H)，6.85-6.91 (m，1H)，4.40-4.56 (m，1H)，3.77-3.91 (m，2H)，2.55-2.69 (m，1H)，2.24-2.44 (m，3H)，2.07-2.16 (m，2H)，1.93 (ddt，J = 3.4，12.8，34.1 +
Hz，1H)，1.73 (t，J = 12.7 Hz，1H)。ESI-MS m/z：404 (M+H)。
[0340] 实 施 例 100：顺 式 -2-[2-(3-氯 -苯 基)-1- 氧 代-2- 氮 杂 -螺 [4.5]癸-7-基]-2,3-二氢-异吲哚-1-酮实施例100如下通过上述方案21的方法由中间体1制备：
将7-氨基-2-(3-氯-苯基)-2-氮杂-螺[4.5]癸-1-酮(0.080 g，0.287 mmol，中间
体1)、2-甲酰基苯甲酸甲酯(0.047 g，0.287 mmol)、三乙酰氧基硼氢化钠(0.061 g，0.287 mmol)和一滴乙酸在1,2-二氯乙烷(2.0 mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用冰猝灭，用乙酸乙酯(20.0 mL)稀释。将有机层用水和盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并在减压下浓缩。通过制备型TLC(乙酸乙酯)纯化残渣，产生0.013 g (12%)的标题化合物，顺式-2-[2-(3-氯-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-2,3-二氢-异吲哚-1-酮
和0.032 g (28%)的反式非对映异构体。TLC板上较小极性的点规定为反式，并且极性点
1
规定为顺式，实施例100。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 7.82-7.85 (m,1H)，7.74 (t，J =
2.2 Hz，1H)，7.44-7.56 (m，4H)，7.28 (t，J = 8.2 Hz，1H)，7.12 (ddd，J = 8.1，2.1，1.1 Hz)，4.41-4.49 (m，1H)，4.38 (s，2H)，3.75-3.84 (m，2H)，2.18-2.34 (m，2H)，1.91-2.04 +
(m，3H)，1.55-1.75 (m，5H)。ESI-MS m/z：395 (M+H)。
[0341] (1S,4R)-4,7,7-三甲基-3-氧 代-2-氧杂-双 环[2.2.1]庚烷-1-羧 酸[(5R,7R)-2-(3-氯-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺
为测定本发明化合物的绝对立体化学，(1S,4R)-4,7,7-三甲基-3-氧代-2-氧
杂-双环[2.2.1]庚烷-1-羧酸[(5R,7R)-2-(3-氯-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-酰胺如下通过上述方案1的方法，由中间体3制备：
将(5R,7R)-7-氨基-2-(3-氯-苯基)-2-氮杂-螺[4.5]癸-1-酮(0.130 g，0.467
mmol，中间体3)溶于二氯甲烷(10.0 mL)。添加三乙胺(0.0708 g，0.699 mmol)，随后添加(1S)-(-)-樟脑酰氯(0.101 g，0.466 mmol)。将混合物在室温下搅拌1小时，并在减压下浓缩。将残渣通过硅胶色谱法(乙酸乙酯)纯化，产生白色固体形式的0.20 g (93%)的标题化
1
合物。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 7.72 (t，J = 2.0 Hz，1H)，7.57 (ddd，J = 8.3，2.4，
1.0 Hz，1H)，7.29 (t，J = 8.1 Hz，1H)，7.12 (ddd，J = 8.0，2.0，1.1 Hz，1H)，6.46 (d，J = 8.1 Hz，1H)， 3.90-4.00 (m，1H)，3.73-3.84 (m，2H)，2.48-2.56 (m，1H)，2.08-2.15 (m，
2H)，1.86-1.98 (m，5H)，1.63-1.72 (m，2H)，1.50-1.61 (m，4H)，1.27-1.35 (m，1H)，1.11 +
(s，3H)，1.08 (s，3H)，0.87 (s，3H)。ESI-MS m/z：459 (M+H)。
[0342] (1S,4R)-4,7,7-三甲基-3-氧 代-2-氧杂-双 环[2.2.1]庚烷-1-羧 酸[(5R,7R)-2-(3-氯-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺的单晶在甲醇中生长，且其绝对结构由X射线测定和确认。
[0343] 以与(1S,4R)-4,7,7-三甲基-3-氧代-2-氧杂-双环[2.2.1]庚烷-1-羧酸[(5R,7R)-2-(3-氯-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺类似的方式，
以0.54 mmol的反应规模，(1S,4R)-4,7,7-三甲基-3-氧代-2-氧杂-双环[2.2.1]庚烷-1-羧酸[(5R,7R)-2-(3,5-二氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺
由中间体36和(1S)-(-)-樟脑酸(cammphanic acid)制备。(1S,4R)-4,7,7-三甲基-3-氧代-2-氧杂-双环[2.2.1]庚烷-1-羧酸[(5R,7R)-2-(3,5-二氟-苯基)-1-氧代-2-氮
杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺的单晶在甲醇中生长，且其绝对结构由X射线测定和确认。
[0344] 实施例129：顺式-2-甲基-吡啶-4-羧酸[9,9-二氟-2-(3-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺
实施例129如下通过上述方案2的方法由中间体26制备：
将1,4-二噁烷(10 mL)中的顺式-2-甲基-嘧啶-4-羧酸(9,9-二氟-1-氧代-2-氮
杂-螺[4.5]癸-7-基)-酰胺(300 mg，0.6 mmol)、3-氟碘苯(287 mg，1.29 mmol)、碳酸钾(179 mg，1.29 mmol)、碘化铜(I)(190 mg，0.647 mmol)和(1R,2R)-N,N'-二甲基-环己烷-1,2-二胺(92 mg，0.65 mmol)放置在密封管中。将反应混合物在100℃加热过夜。将粗混合物冷却至室温，用DCM (50 mL)稀释。将有机层用氨水/水(1：1，2×20 mL)和盐水洗涤，在MgSO4上干燥，过滤并在减压下浓缩。将残渣通过CombiFlash®系统(25 g硅胶柱体；梯度：DCM中的0至50%乙酸乙酯)纯化，产生135 mg (35%)的标题化合物，顺式-2-甲基-吡啶-4-羧酸[9,9-二氟-2-(3-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰
1
胺。H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.81 (d，J = 5.0，1H)，7.94 (d， J= 8.2，1H)，7.83 (d，J = 5.0，1H)，7.52-7.46 (m，1H)，7.29-7.24 (m，2H)，6.84-6.78 (m，1H)，4.46-4.32 (m，
1H)，3.83-3.71 (m，2H)，2.62-2.50 (m，1H)，2.35-1.74 (m，6H)，1.69 (t，J = 12.8，1H)。
+
ESI-MS m/z：404 (M+H)。
[0345] 通过HPLC (柱：Chiralpak® AD，250×20 mm (Diacel)；流动相：己烷中的15%异丙醇；流速：14 mL/min；254 nm下的UV)拆分实施例129的两种对映异构体的混合物，产生两种对映异构体。来自手性HPLC的第一峰任意规定为实施例103，2-甲基-吡啶-4-羧酸[(5S,7R)-9,9-二氟-2-(3-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]-癸-7-基]-酰胺，以及来自手性HPLC的第二峰任意规定为实施例104，2-甲基-吡啶-4-羧酸[(5R,7S)-9,9-二氟-2-(3-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]-癸-7-基]-酰胺。
[0346] 以与实施例129类似的方式，表1 (以下)中的实施例105以0.216 mmol的反应规模，由中间体26和市售3,5-二氟碘苯制备。
[0347] 以与实施例129类似的方式，表1 (以下)的实施例106和110-112以0.097-0.233 mmol的反应规模，分别由中间体28和市售4-氟碘苯、3,5-二氟碘苯、2-氯-5-氟吡啶、4-氯-2-甲基嘧啶制备。
[0348] 以与实施例129类似的方式，表1 (以下)的实施例107-109以0.093-0.233 mmol的反应规模，分别由中间体27和市售3-氟碘苯、4-氯-2-甲基嘧啶、2-氯-5-氟吡啶制备。
[0349] 以与实施例129类似的方式，表1 (以下)中的实施例128以0.214 mmol的反应规模，由中间体29和市售4-氯-2-甲基嘧啶制备。
[0350] 以与实施例103和104类似的方式，分别通过手性HPLC将表1 (以下)中的实施例110、109和128分离成其相应的对映异构体：实施例113 (第一峰)和114 (第二峰)，120 (第一峰)和121 (第二峰)，和127 (第一峰)。
[0351] 实施例103：1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.81 (d，J = 5.0，1H)，7.94 (d， J=8.2，1H)，7.83 (d，J = 5.0，1H)，7.52-7.46 (m，1H)，7.29-7.24 (m，2H)，6.84-6.78 (m，
1H)，4.46-4.32 (m，1H)，3.83-3.71 (m，2H)，2.62-2.50 (m，1H)，2.35-1.74 (m，6H)，1.69 +
(t，J = 12.8，1H)。ESI-MS m/z：404 (M+H)。
[0352] 实施例104：1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.81 (d，J = 5.0，1H)，7.94 (d， J=8.2，1H)，7.83 (d，J = 5.0，1H)，7.52-7.46 (m，1H)，7.29-7.24 (m，2H)，6.84-6.78 (m，
1H)，4.46-4.32 (m，1H)，3.83-3.71 (m，2H)，2.62-2.50 (m，1H)，2.35-1.74 (m，6H)，1.69 +
(t，J = 12.8，1H)。ESI-MS m/z：404 (M+H)。
[0353] 实施例105：1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.82 (d，J = 5.0，1H)，8.57 (d，J =5.0，1H)，7.84 (d，J = 5.0，1H)，7.23-7.15 (m，2H)，6.59-6.51 (m，1H)，4.77-4.70 (m，+
1H)，3.71-3.57 (m，2H)，2.74 (s，3H)，2.40-1.97 (m ,8H)。ESI-MS m/z：437 (M+H)。
[0354] 实施例106：1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.58-8.55 (m，1H)，8.22-8.18 (m，1H)，8.10 (d，J = 8.4 Hz，1H)， 7.89 (dt，J = 7.7，1.7 Hz，1H)，7.63-7.57 (m，2H)，7.51-7.46 (m，1H)，7.13-7.06 (m，2H)，4.57-4.43 (m，1H)，3.92-3.75 (m，2H)，2.70-1.81 (m，7H)，+
1.73 (t，J = 12.8，1H)。ESI-MS m/z：404 (M+H)。
[0355] 实施例107：1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.14 (d，J = 8.4 Hz，1H)， 8.00 (d，J = 7.6 Hz，1H)，7.75 (t，J = 7.7 Hz，1H)，7.61-7.56 (m，1H)，7.37-7.33 (m，2H)，7.31 (d，J = 7.6 Hz，1H)，6.92-6.86 (m，1H)，4.55-4.43 (m，1H)，3.93-3.78 (m，2H)，2.70-2.60 (m，1H)，2.58 (s，3H)，2.45-1.84 (m，6H)，1.75 (t，J = 12.7 Hz，1H)。ESI-MS m/z：418 +(M+H)。
[0356] 实施例108：1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.51 (d，J = 5.8 Hz，1H)， 8.14 (d，J = 5.9 Hz，1H)，8.11 (d，J = 8.6 Hz，1H)，7.73 (t，J = 7.7 Hz，1H)，7.29 (d，J = 7.7 Hz，1H)，4.54-4.42 (m，1H)，4.19-3.95 (m，2H)，2.65 (s，3H)，2.63-2.59 (m，1H)，2.56 (s，+3H)，2.40-1.82 (m，6H)， 1.72 (t，J = 12.7 Hz，1H)。ESI-MS m/z：416 (M+H)。
[0357] 实施例109：1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.41 (dd，J = 9.4，4.0 Hz，1H)， 8.23 (d，J = 3.0 Hz，1H)，8.13 (d，J = 8.6 Hz，1H)，8.00 (d，J = 7.7 Hz，1H)，7.75 (t，J =7.7 Hz，1H)，7.50-7.44 (m，1H)，7.31 (d，J = 7.5 Hz，1H)，4.56-4.45 (m，1H)，4.18-3.98 (m，2H)，2.71-2.61 (m，1H)，2.58 (s，3H)，2.43-1.83 (m，6H)，1.76 (t，J = 12.8 Hz，1H)。
+
ESI-MS m/z：419 (M+H)。
[0358] 实施例110：1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.56 (d，J = 3.9 Hz，1H)， 8.19 (d，J = 7.6 Hz，1H)，8.08 (d，J = 7.2 Hz，1H)，7.89 (t，J = 7.7 Hz，1H)，7.50-7.45 (m，1H)，7.33-7.28 (m，2H)，6.64 (tt，J = 8.8，2.2 Hz，1H)，4.56-4.43 (m，1H)，3.89-3.76 (m，
2H)，2.69-2.58 (m，1H)，2.46-1.82 (m，6H)，1.71 (t，J = 12.7 Hz，1H)。ESI-MS m/z：422 +
(M+H)。
[0359] 实施例111：1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.53 (d，J = 4.6 Hz，1H)， 8.41 (dd，J = 9.2，4.0 Hz，1H)，8.23 (d，J = 3.0 Hz，1H)，8.20 (d，J = 7.9 Hz，1H)，8.07 (d，J = 8.4 Hz，1H)，7.88 (dt，J = 7.8，1.6 Hz，1H)，7.50-7.44 (m，2H)，4.56-4.45 (m，1H)，4.17-3.98 (m，2H)，2.71-2.60 (m，1H)，2.42-1.81 (m，6H)，1.74 (t，J = 12.7 Hz，1H)。ESI-MS m/z：+
405 (M+H)。
[0360] 实施例112：1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.58-8.51 (m，2H)，8.22-8.16 (m，2H)，8.08 (d，J = 8.3 Hz，1H)， 7.92-7.86 (m，1H)，7.50-7.45 (m，1H)，4.56-4.43 (m，
1H)，4.22-3.97 (m，2H)，2.69 (s，3H)，2.67-2.60 (m，1H)，2.43-1.82 (m，6H)，1.71 (t，J = +
12.6 Hz，1H)。ESI-MS m/z：402 (M+H)。
[0361] 实施例113：1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.56 (d，J = 3.9 Hz，1H)， 8.19 (d，J = 7.6 Hz，1H)，8.08 (d，J = 7.2 Hz，1H)，7.89 (t，J = 7.7 Hz，1H)，7.50-7.45 (m，1H)，7.33-7.28 (m，2H)，6.64 (tt，J = 8.8，2.2 Hz，1H)，4.56-4.43 (m，1H)，3.89-3.76 (m，
2H)，2.69-2.58 (m，1H)，2.46-1.82 (m，6H)，1.71 (t，J = 12.7 Hz，1H)。ESI-MS m/z：422 +
(M+H)。
[0362] 实施例114：1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.56 (d，J = 3.9 Hz，1H)， 8.19 (d，J = 7.6 Hz，1H)，8.08 (d，J = 7.2 Hz，1H)，7.89 (t，J = 7.7 Hz，1H)，7.50-7.45 (m，1H)，7.33-7.28 (m，2H)，6.64 (tt，J = 8.8，2.2 Hz，1H)，4.56-4.43 (m，1H)，3.89-3.76 (m，
2H)，2.69-2.58 (m，1H)，2.46-1.82 (m，6H)，1.71 (t，J = 12.7 Hz，1H)。ESI-MS m/z：422 +
(M+H)。
[0363] 实施例120：1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.53 (d，J = 5.9 Hz，1H)， 8.15 (d，J = 5.8 Hz，1H)，7.54-7.39 (m，3H)，7.26-7.20 (m，1H)，6.26 (d，J = 7.9 Hz，1H)，4.58-4.47 (m，1H)，4.19-4.01 (m，2H)，2.67 (s，3H)，2.65-2.56 (m，1H)，2.40-2.07 (m，+
5H)，1.96-1.78 (m，1H)，1.67 9t，J = 12.3，1H)。ESI-MS m/z：419 (M+H)。
[0364] 实施例121：1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.53 (d，J = 5.9 Hz，1H)， 8.15 (d，J = 5.8 Hz，1H)，7.54-7.39 (m，3H)，7.26-7.20 (m，1H)，6.26 (d，J = 7.9 Hz，1H)，4.58-4.47 (m，1H)，4.19-4.01 (m，2H)，2.67 (s，3H)，2.65-2.56 (m，1H)，2.40-2.07 (m，+
5H)，1.96-1.78 (m，1H)，1.67 9t，J = 12.3，1H)。ESI-MS m/z：419 (M+H)。
[0365] 实施例127：1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.41 (dd，J = 9.4，4.0 Hz，1H)， 8.23 (d，J = 3.0 Hz，1H)，8.13 (d，J = 8.6 Hz，1H)，8.00 (d，J = 7.7 Hz，1H)，7.75 (t，J =7.7 Hz，1H)，7.50-7.44 (m，1H)，7.31 (d，J = 7.5 Hz，1H)，4.56-4.45 (m，1H)，4.18-3.98 (m，2H)，2.71-2.61 (m，1H)，2.58 (s，3H)，2.43-1.83 (m，6H)，1.76 (t，J = 12.8 Hz，1H)。
+
ESI-MS m/z：419 (M+H)。
[0366] 实施例128：1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.53 (d，J = 5.9 Hz，1H)， 8.15 (d，J = 5.8 Hz，1H)，7.54-7.39 (m，3H)，7.26-7.20 (m，1H)，6.26 (d，J = 7.9 Hz，1H)，4.58-4.47 (m，1H)，4.19-4.01 (m，2H)，2.67 (s，3H)，2.65-2.56 (m，1H)，2.40-2.07 (m，+
5H)，1.96-1.78 (m，1H)，1.67 9t，J = 12.3，1H)。ESI-MS m/z：419 (M+H)。
[0367] 实施例115：顺式-2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(3,5-二氟-苯基)-1,9-二氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺
实施例115如下通过上述方案23的方法由中间体30制备：
向顺式-13-氨基-9-(3,5-二氟-苯基)-1,4-二氧杂-9-氮杂-二螺[4.1.4.3]
十四-8-酮(300 mg，0.887 mmol)和2-甲基嘧啶-4-羧酸(128 mg，1.05 mmol)在DCM (6 mL)中的溶液中添加PYBOP (508 mg，0.975 mmol)和三乙胺(0.27 mL，1.95 mmol)。在室温下将反应混合物搅拌过夜并浓缩。将残渣在硅胶(己烷中的0至70% EtOAc)上进行色谱，产生中间体(300 mg)，将其溶于THF (5 mL)，随后添加水(5 mL)中的3.0 M的HCl。在室温下将反应混合物搅拌过夜并浓缩。将残渣悬浮于DCM (20 mL)，用饱和NaHCO3水溶液猝灭。将水层用DCM(2×20 mL)萃取。将合并的有机层浓缩。将残渣在硅胶(己烷中的0至
80% EtOAc)上进行色谱，产生190 mg (经2个步骤，49%)的标题化合物，顺式-2-甲基-嘧
1
啶-4-羧酸[2-(3,5-二氟-苯基)-1,9-二氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺。H
NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.90 (d，J = 5.0 Hz，1H)， 8.29 (d，J = 8.4 Hz，1H)，7.90 (d，J = 5.0 Hz，1H)，7.33-7.29 (m，2H)，6.65 (tt，J = 8.7，2.2 Hz，1H)，4.62-4.50 (m，1H)，
3.88-3.80 (m，2H)，2.96-2.76 (m，5H)，2.59 (dd，J = 13.6，11.4 Hz，1H)，2.44-2.09 (m，+
5H)。ESI-MS m/z：415 (M+H)。
[0368] 以与实施例115类似的方式，表1 (以下)中的实施例124以1.15 mmol的反应规模，由中间体31和市售6-甲基吡啶甲酸制备。
[0369] 实施例124：1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.32 (d，J = 8.6 Hz，1H)， 8.00 (d，J = 7.7 Hz，1H)，7.75 (t，J = 7.7 Hz，1H)，7.62-7.57 (m，1H)，7.37-7.30 (m，3H)，6.93-6.87 (m，1H)，4.61-4.49 (m，1H)，3.92-3.81 (m，2H)，2.96-2.90 (m，1H)，2.81 (d，J = 14.1 Hz，1H)，2.61 (s，3H)，2.56 (d，J = 12.9 Hz，1H)，2.43-2.07 (m，5H)。ESI-MS m/+
z：396 (M+H)。
[0370] 实施例123：顺式-3-氟-N-[2-(3-氟-苯基)-1,9-二氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-苯甲酰胺实施例123如下通过上述方案23的方法由中间体31制备：
在-78℃下向顺式-13-氨基-9-(3-氟-苯基)-1,4-二氧杂-9-氮杂-二螺[4.1.4.3]
十四-8-酮(370 mg，1.15 mmol)和三乙胺(0.40 mL，2.9 mmol)在DCM (10 mL)中的溶液中添加3-氟苯甲酰氯(220 mg，1.38 mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，用DCM(50 mL )稀释。将有机层用饱和的NaHCO3和盐水洗涤，在MgSO4上干燥，过滤并浓缩。将残渣在硅胶(梯度：己烷中的0至70% EtOAc)上进行色谱，产生中间体(300 mg)，将其溶于THF (5 mL)，随后添加水(5 mL)中的3.0 M的HCl。在室温下将反应混合物搅拌过夜并浓缩。
将残渣悬浮于DCM (20 mL)，并用饱和NaHCO3水溶液猝灭。将水层用DCM(2×20 mL)萃取。
将合并的有机层浓缩。将残渣在硅胶(己烷中的0至80% EtOAc)上进行色谱，产生162 mg (经2个步骤，21%)的标题化合物，顺式-3-氟-N-[2-(3-氟-苯基)-1,9-二氧代-2-氮
1
杂-螺[4.5]癸-7-基]-苯甲酰胺。H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 7.61-7.51 (m，3H)，7.45 (d，J = 8.4 Hz，1H)，7.43-7.33 (m，3H)，7.24-7.18 (m，1H)，6.95-6.89 (m，1H)，4.85-4.74 (m，1H)，3.95-3.83 (m，2H)， 2.86 (dd，J = 14.6，5.6 Hz，1H)，2.80 (d，J = 14.3 Hz，1H)，
2.60 (dd，J = 14.6，7.6 Hz，1H)，2.46 (d，J = 14.3 Hz，1H)，2.33-2.11 (m，4H)。ESI-MS +
m/z：399 (M+H)。
[0371] 实施例116：顺式-2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(3,5-二氟苯基)-9-羟基-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺实施例117：反式-2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(3,5-二氟苯基)-9-羟基-1-氧代-2-氮
杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺
路线1：实施例116和117如下通过上述方案23的方法，由实施例115制备：
在室温下将顺式-2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(3,5-二氟-苯基)-1,9-二氧代-2-氮
杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺(40 mg，0.0965 mmol)和硼氢化钠(7.3 mg，0.193 mmol)在THF (3 mL)中的反应混合物搅拌4小时。将反应混合物用水猝灭并用DCM (3×10 mL)萃取。将合并的有机层在MgSO4上干燥，过滤并浓缩。将残渣通过HPLC纯化，产生两种非对映异构体。来自HPLC的第一峰 (在反相液相色谱/质谱法(RP-HPLC/MS)纯化系统上纯化。梯度：水中的乙腈，18-95%，3.6分钟，循环时间为5分钟。在0.6-3.0分钟之间使用
23-46%乙腈的浅梯度，以分离密集洗脱的杂质。流速：100 mL/min。流动相添加剂：48 mM的甲酸铵。柱：Inertsil C8，30×50 mm，5 μm粒度)规定为实施例116，顺式-2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(3,5-二氟苯基)-9-羟基-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺
(4 mg)，且来自HPLC的第二峰规定为实施例117，反式-2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(3,5-二氟苯基)-9-羟基-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺(6 mg)。
[0372] 实施例116：1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.89 (d，J = 5.0 Hz，1H)， 8.08 (d，J = 8.6 Hz，1H)，7.90 (d，J = 5.0 Hz，1H)，7.33-7.29 (m，2H)，6.67-6.60 (m，1H)，4.30-4.17 (m，1H)，4.01-4.17 (m，1H)，3.90-3.74 (m，2H)，2.80 (s，3H)，2.51-2.42 (m，+
1H)，2.29-2.11 (m，2H)，2.01-1.44 (m，5H)。ESI-MS m/z：417 (M+H)。
[0373] 实施例117：1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.88 (d，J = 5.0 Hz，1H)， 8.53 (d，J = 2.2 Hz，1H)，7.90 (d，J = 4.9 Hz，1H)，7.39-7.30 (m，2H)，6.67-6.58 (m，1H)，4.72-4.59 (m，1H)，4.57-4.44 (m，1H)，3.88-3.74 (m，2H)，2.82 (s，3H)，2.53-2.35 (m，+
2H)，2.16-1.72 (m，6H)。ESI-MS m/z：417 (M+H)。
[0374] 路线2：实施例117也如下制备：在-78℃下向顺式-2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(3,5-二氟-苯基)-1,9-二氧代-2-氮
杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺(20 mg，0.048 mmol)在THF (3 mL)中的溶液中添加THF (0.1 mL，0..1 mmol)中的1.0 M的L-Selectride。在-78℃将反应混合物搅拌1小时，并用冰猝灭。将水层用DCM(3×10 mL)萃取。将合并的有机层在MgSO4上干燥，过滤并浓缩。
将残渣通过HPLC纯化，产生5 mg (25%)的标题化合物。
[0375] 以与实施例117类似的方式(路线2)，表1 (以下)中的实施例125以0.176 mmol的反应规模，由实施例123制备。
[0376] 实施例125：1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.64 (br s，1H)，7.62-7.46 (m，3H)，7.39-7.25 (m，3H)，7.15-7.08 (m，1H)，6.87-6.80 (m，1H)，4.69-4.61 (m，1H)，4.30-4.21 (m，1H)，3.89-3.70 (m，2H)，2.26-2.01 (m，4H)，1.81 (dq，J=14.4，4.6 Hz，2H)， 1.64 (dq，+
J=9.7，4.0 Hz，1H)，1.45 (dq，J=13.4，9.4 Hz，1H)。ESI-MS m/z：401 (M+H)。
[0377] 以与实施例117类似的方式(路线2)，表1 (以下)中的实施例126以0.114 mmol的反应规模，由实施例124制备。
[0378] 实施例126：1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.40 (d，J=8.3 Hz，1H)， 8.00 (d，J=7.5 Hz，1H)，7.73 (t，J=7.7 Hz，1H)，7.67-7.61 (m，1H)，7.39-7.29 (m，2H)，6.90-6.84 (m，1H)，4.72-4.60 (m，1H)，4.53-4.48 (m，1H)，3.88-3.77 (m，2H)，2.60 (s，3H)，+2.53-2.40 (m，2H)，2.21-2.00 (m，3H)，1.83-1.73 (m，3H)。ESI-MS m/z：398 (M+H)。
[0379] 实施例119：顺式-2-甲基-吡啶-4-羧酸[2-(3,5-二氟-苯基)-9-羟基-9-甲基-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺实施例118：反式-2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(3,5-二氟-苯基)-9-羟基-9-甲
基-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺
实施例119和118如下通过上述方案23的方法，由实施例115制备：
在-78℃下将顺式-2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(3,5-二氟-苯基)-1,9-二氧代-2-氮
杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺(30 mg，0.0724 mmol)在THF (3 mL)中的溶液中添加醚(0.05 mL)中的3.0 M的甲基溴化镁。在-78℃下将反应混合物搅拌1小时，并用水猝灭。
将水层用DCM(3×10 mL)萃取。将合并的有机层在MgSO4上干燥，过滤并浓缩。将残渣通过RP-HPLC/MS纯化系统(梯度：水中的乙腈，24-95%，3.6分钟，循环时间为5分钟。在
0.75-3.4分钟之间使用26-56%乙腈之间的浅梯度以分离密集洗脱的杂质。流速：100 mL/min。流动相添加剂：48 mM的甲酸铵。柱：Inertsil® C8，30×50 mm，5 μm粒度)纯化，产生两种非对映异构体。来自HPLC的第一峰规定为实施例119，顺式-2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(3,5-二氟-苯基)-9-羟基-9-甲基-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺
(2 mg)，且来自HPLC的第二峰规定为实施例118，反式-2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(3,5-二氟-苯基)-9-羟基-9-甲基-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺(3 mg)。
[0380] 实施例118：1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.88 (d，J = 4.6 Hz，1H)， 7.95 (d，J = 8.8 Hz，1H)，7.91(d，J = 4.8 Hz，1H)，7.35-7.29 (m，2H)，6.65-6.58 (m，1H)，4.64-4.52 (m，1H)，3.84-3.71 (m，2H)，2.78 (s，3H)，2.60-2.41 (m，2H)，2.18-2.00 (m，2H)，1.92 (d，J = 14.2，1H)，1.74-1.54 (m，3H)，1.38 (s，3H)。ESI-MS m/z：431 (M+H)+。
[0381] 实施例119：1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.88 (d，J = 4.6 Hz，1H)， 7.95 (d，J = 8.8 Hz，1H)，7.91(d，J = 4.8 Hz，1H)，7.35-7.29 (m，2H)，6.65-6.58 (m，1H)，4.64-4.52 (m，1H)，3.84-3.71 (m，2H)，2.78 (s，3H)，2.60-2.41 (m，2H)，2.18-2.00 (m，2H)，1.92 (d，J = 14.2，1H)，1.74-1.54 (m，3H)，1.38 (s，3H)。ESI-MS m/z：431 (M+H)+。
[0382] 实施例122：反式-2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(3,5-二氟-苯基)-9-氟-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺
实施例122如下通过上述方案23的方法由实施例117制备：
在0℃下向反式-2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(3,5-二氟苯基)-9-羟基-1-氧代-2-氮
杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺(粗制，＜0.121 mmol)在DCM (5 mL)中的溶液中添加DAST (20.3 mL，0.154 mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，用饱和NaHCO3水溶液猝灭。将水层用DCM萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤并浓缩。将残渣在硅胶(己烷中的0至70% EtOAc)上进行色谱，产生2 mg的标题化合物，反式-2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(3,5-二氟-苯基)-9-氟-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺。
1
H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.79 (d，J = 5.0 Hz，1H)， 8.00 (d，J = 8.5 Hz，1H)，7.82 (t，J = 5.0 Hz，1H)，7.26-7.21 (m，1H)，6.54 (tt，J = 8.8，2.2 Hz，1H)，5.22-5.05 (m，
1H)，4.55-4.43 (m，1H)，3.79-3.66 (m，2H)，2.71 (s，3H)，2.45-2.25 (m，3H)，2.09-1.92 +
(m，3H)，1.74-1.54 (m，2H)。ESI-MS m/z：419 (M+H)。
[0383] 实施例131：顺式-3-氟-N-[2-(3-羟基-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-苯甲酰胺
实施例131如下通过上述方案22的方法(步骤c)，由实施例130制备：
在含有顺式-3-氟-N-[-2-(3-甲氧基-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]
癸-7-基]-苯甲酰胺(150 mg，0.38 mmol)的管形瓶中添加20 mL的二氯甲烷。将溶液在-70℃冷却。添加2 mL的二氯甲烷中的2 M三溴化硼，将混合物缓慢升至室温并在室温下搅拌40小时。
[0384] 将反应用冷水猝灭，并将有机层分离。将沉淀物用DCM和乙酸乙酯萃取。将有机萃取物合并，在硫酸钠上干燥，并在反相液相色谱/质谱法(RP-HPLC/MS)纯化系统(梯度：水中的乙腈，25-95%，3.6分钟，循环时间为5分钟。在0.75-3.4分钟之间使用27-56%乙腈的浅梯度，以分离密集洗脱的杂质。流速：100 mL/min。流动相添加剂：48 mM乙酸铵。柱：
Inertsil® C18，30×50 mm，5 μm粒度(GL Sciences))上纯化，产生50 mg (26%)的标题
1
化合物。H NMR (400 MHz，CDCl3)：δ 7.60-7.52 (m，3H)，7.43-7.36 (m，1H)， 7.26-7.14 (m，2H)，6.99-6.95 (m，1H)，6.70-6.66 (m，1H)，6.58 (s,br，1H)，4.31-4.20 (m，1H)，+
3.84-3.75 (m，2H)，2.24-1.44 (m，10H)。ESI-MS m/z： 383.0 (M+H)。
[0385] 实施例157：3-氟-N-[2-(1-甲基-哌啶-4-基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-苯甲酰胺
实施例157如下通过上述方案24的方法，由中间体35制备：
将4-[7-(3-氟-苯甲酰基氨基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-2-基]-哌啶-1-羧
酸叔丁酯(0.135 g，0.285 mmol)溶于CH2Cl2 (2.0 mL)。添加1,4-二噁烷(1.0 mL)中的4 M的氯化氢，将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物在减压下浓缩，产生两种非对映异构体的混合物(顺式/反式：3/2；根据LC-MS方法C，具有0.77分钟的RT的第一峰规定+
为顺式，和具有0.81分钟的RT的第二峰规定为反式)。ESI-MS m/z：374 (M+H)。其在没有进一步纯化下用于下一步中。将3-氟-N-(1-氧代-2-哌啶-4-基-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基)-苯甲酰胺(0.050 g，0.13 mmol)溶于CH2Cl2 (2.3 mL)，添加甲醛(0.011 g，
0.13 mmol，37%水溶液)，随后添加三乙酰氧基硼氢化钠(0.043 g，0.20 mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜，然后用冰猝灭。将混合物用CH2Cl2 (20 mL)稀释。将有机层用盐水洗涤，在Na2SO4上干燥，并在减压下浓缩。将残渣在RP-HPLC/MS(梯度：水中的乙腈，5-95%，2.5分钟，循环时间为5分钟。在0.5-2.0分钟之间使用5-20%乙腈的浅梯度。流速：77 mL/min。
流动相添加剂：84 mM的甲酸铵。柱：SunFire C18，19×50 mm，5 μm粒度)上纯化，产生
0.011 g(21%)的标题化合物，3-氟-N-[2-(1-甲基-哌啶-4-基)-1-氧代-2-氮杂-螺
1
[4.5]癸-7-基]-苯甲酰胺。H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 8.5 (s，0.6 H)，7.60-7.69 (m，1H)，7.36-7.50 (m，2H)，7.14-7.20 (m，1H)，5.92 (d，J = 6.8 Hz，0.4 H)，4.55-4.65 (m，0.4 H)，4.27-4.37 (m，0.6 H)，3.91-4.01 (m，1H)，3.21-3.34 (m，2H)，2.85-2.95 (m，+
2H)，2.29 (s，1.8 H)，2.28 (s，1.2H)，1.30-2.24 (m，16H)。ESI-MS m/z：388 (M+H)。
[0386] 实施例159：2-甲基-6-氧代-1,6-二氢-嘧啶-4-羧酸[(5R,7R)-2-(3,5-二氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺实施例159如下通过上述方案1的方法，由中间体36制备：
向中间体36 (5R,7R)-7-氨基-2-(3,5-二氟-苯基)-2-氮杂-螺[4.5]癸-1-酮
(80 mg，0.28 mmol)、三乙胺(0.16 mL，1.14 mmol)在DMF (2.0 mL)中的溶液中添加6-羟基-2-甲基-嘧啶-4-羧酸(49 mg，0.32 mmol)、HOBt (51 mg，0.38 mmol)和EDCI (73 mg，0.38 mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜。用Genevac去除溶剂，将所得残渣用光谱测定(RP-HPLC/MS)纯化系统(梯度：水中的乙腈，25-95%，3.9分钟，循环时间为5分钟。流速：100 mL/min。流动相添加剂：48 mM甲酸铵。柱：Inertsil C18，30×50 mm，5 μm粒度)纯化，产生26 mg (22%)的标题化合物，2-甲基-6-氧代-1,6-二氢-嘧啶-4-羧酸[(5R,7R)-2-(3,5-二氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]酰胺。1H NMR (400 MHz，CDCl3) δ 13.0 (bs，1 H)，7.94 (d，J = 8.4 Hz，1H)，7.25-7.32 (m，2H)，7.14 (s，
1H)，6.56-6.63 (m，1H)，4.02-4.12 (m，1 H)，3.73-3.80 (m，2H)，2.52 (s，3H)，2.04-2.26 (m，3H)，1.86-1.95 (m，2H)，1.34-1.80 (m，5H)。ESI-MS m/z：417 (M+H)+。
[0387] 表1：螺内酰胺衍生物
[0388] 实施例160-162可以通过本文方案23中所述的方法，由化合物23制备，该化合物23可以通过上述方案6中所述的步骤工艺，由市售5-羟基-间苯二酸(化合物22)还原制备。
[0389] 实施例163-177可以通过本文方案19中所述的方法，由化合物41 (R2 = 3-氟苯基或3,5-二氟苯基或4-氟苯基)制备，该化合物41可以通过本文方案8中所述的方法，由市售4-氧代-环己烷-1,3-二羧酸二甲酯(化合物32)制备。
[0390] 实施例178-201可以通过本文方案20中所述的方法，由化合物49 (R2 = 3-氟苯基或3,5-二氟苯基或4-氟苯基)制备，该化合物49可以通过本文方案9中所述的方法，由化合物8制备，该化合物8可以容易地通过上述方案4中所述的步骤工艺，通过市售环己烷-1,3-二羧酸(化合物7)的酯化制备。
[0391] 表2：假定化合物实施例号 结构化学名称
160 吡啶-2-羧酸[9-氟-2-(3-氟-苯基)-9-甲基-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺
161 2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(3,5-二氟-苯基)-9-氟-9-甲基-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺
162 2-甲基-嘧啶-4-羧酸[9-氟-2-(4-氟-苯基)-9-甲基-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺
163 吡啶-2-羧酸[8,8-二氟-2-(3-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺
164 吡啶-2-羧酸[8-氟-2-(3-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺
165 吡啶-2-羧酸[2-(3-氟-苯基)-8-羟基-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺
166 吡啶-2-羧酸[8-氟-2-(3-氟-苯基)-8-甲基-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺
167 吡啶-2-羧酸[2-(3-氟-苯基)-8-羟基-8-甲基-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺
168 2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(3,5-二氟-苯基)-8,8-二氟-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺
169 2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(3,5-二氟-苯基)-8-氟-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺
170 2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(3,5-二氟-苯基)-8-氟-8-甲基-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺
171 2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(3,5-二氟-苯基)-8-羟基-8-甲基-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺
172 2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(3,5-二氟-苯基)-8-羟基-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺
173 2-甲基-嘧啶-4-羧酸[8,8-二氟-2-(4-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺
174 2-甲基-嘧啶-4-羧酸[8-氟-2-(4-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺
175 2-甲基-嘧啶-4-羧酸[8-氟-2-(4-氟-苯基)-8-甲基-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺
176 2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(4-氟-苯基)-8-羟基-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺
177 2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(4-氟-苯基)-8-羟基-8-甲基-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺
178 吡啶-2-羧酸[4,4-二氟-2-(3-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺
179 吡啶-2-羧酸[4-氟-2-(3-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺
180 吡啶-2-羧酸[2-(3-氟-苯基)-4-羟基-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺
181 吡啶-2-羧酸[4-氟-2-(3-氟-苯基)-4-甲基-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺
182 吡啶-2-羧酸[2-(3-氟-苯基)-4-羟基-4-甲基-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺
183 2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(3,5-二氟-苯基)-4,4-二氟-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺
184 2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(3,5-二氟-苯基)-4-氟-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺
185 2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(3,5-二氟-苯基)-4-氟-4-甲基-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺
186 2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(3,5-二氟-苯基)-4-羟基-4-甲基-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺
187 2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(3,5-二氟-苯基)-4-羟基-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺
188 2-甲基-嘧啶-4-羧酸[4,4-二氟-2-(4-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺
189 2-甲基-嘧啶-4-羧酸[4-氟-2-(4-氟-苯基)-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺
190 2-甲基-嘧啶-4-羧酸[4-氟-2-(4-氟-苯基)-4-甲基-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺
200 2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(4-氟-苯基)-4-羟基-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺
201 2-甲基-嘧啶-4-羧酸[2-(4-氟-苯基)-4-羟基-4-甲基-1-氧代-2-氮杂-螺[4.5]癸-7-基]-酰胺[0392] 4. 本发明化合物的药学评价
本发明的化合物已经在体外和体内测试，并且可以在如下所述的分析中体外和体内测试。
[0393] 体外分析放射性配体结合分析
如[J.A.O’Brien等，Mol Pharmacol.，2003，64，731-740]所述进行结合分析，有轻微改变。简言之，在解冻后，使膜匀浆再悬浮于50 mM Tris-HCl，0.9% NaCl结合缓冲剂、pH
3
7.4中，达到40 μg蛋白/孔的最终分析浓度，用于[H] 2-甲基-6-苯基乙炔基-吡啶
3
([H] MPEP)(American Radiolabeled Chemicals，Inc.，St. Louis，MO)过滤结合。温育
3
包括5 nM [H] MPEP、膜和缓冲剂或变化浓度的化合物。在室温下伴随振荡，将样品温育
60分钟。非特异性结合以10 μM MPEP限定。温育之后，将样品经由GF/C过滤器(预浸在
0.25%聚乙烯亚胺(PEI)中)过滤，然后使用Tomtec® Harvester 96® Mach III细胞收集器(Tomtec，Hamden，CT)用0.5 mL冰冷的50 mM Tris-HCl (pH 7.4)洗涤4次。
[0394] IC50值得自抑制曲线，并且Ki值根据[Y. Cheng and W.H.Prusoff Biochem.Pharmacol. 1973，22，3099-3108]中描述的Ki = IC50/(1+[L]/Kd)的Cheng and Prusoff公式计算，其中[L]为放射性配体的浓度，且Kd为受体处的解离常数，其得自饱和等温线。实施例2、4、5、23和25的Ki值分别为250、74、95、190、130 nM。
[0395] 测试负或正变构活性的钙动员分析大鼠代谢型谷氨酸受体5 (rmGluR5)的cDNA和人类代谢型谷氨酸受体5 (hmGluR5)
的cDNA由S.Nakanishi (Kyoto University，Kyoto，日本)慷慨赠送。rmGluR5或hmGluR5在HEK 293细胞系中稳定表达，并在37℃、5% CO2下，在达尔伯克改良伊格尔培养基(DMEM)(Invitrogen，Carlsbad，CA)中生长，所述培养基具有补充物(10%小牛血清，4 mM谷氨酰胺，100单位/mL青霉素，100 μg/mL链霉素和0.75mM G1418)。在分析之前24小时，将细胞接种到用聚D-赖氨酸包被的384孔黑壁微量滴定板中。仅在分析之前，吸出培养基，并在37℃、5% CO2下，用分析缓冲剂(Hank平衡盐水溶液(HBSS))：150 mM NaCl，5 mM KCl，
1 mM CaCl2，1 mM MgCl2，加上20 mM的N-2-羟乙基哌嗪-N'-2-乙磺酸(HEPES)，pH 7.4，
0.1%牛血清白蛋白(BSA)和2.5 mM的羧苯磺胺(probenicid))中的3 μM Fluo-4/0.01%普流尼克酸(pluronic acid)对细胞进行染料-加载(25 μL/孔)1小时。弃去过量的染料之后，将细胞在分析缓冲剂中洗涤，并以等于30 μL/孔的最终容积分层。在荧光成像板读数器(FLIPR) (Molecular Devices，Sunnyvale，CA)中，以488 nm的激发波长和500至
560 nm的发射范围监测基础荧光。调整激光激发能量，使得基础荧光读数为大约10,000相对荧光单位。在待测试化合物存在下，用均在分析缓冲剂中稀释的EC20或EC80浓度的谷氨酸刺激细胞，并在室温下经3分钟时期以规定的间隔(暴露= 0.6秒)测定相对荧光单位。
从所有样品中减去得自阴性对照的基础读数。计算各个孔的最大荧光变化。通过非线性回归(Hill公式)分析得自最大荧光变化的浓度-响应曲线。如果化合物产生EC80谷氨酸响应的浓度依赖性抑制，则由这些浓度-响应曲线可以鉴定负调节剂。使用rmGluR5在上述分析中测试示例化合物实施例1-57的负变构调节：FLIPR最大抑制范围为81%至99%，而FLIPR IC50为2.2 nM至5100 nM的范围。也使用hmGluR5在上述分析中测试各实施例：对于实施例58-96，FLIPR最大抑制范围为73%至95%，而FLIPR IC50为3.3 nM至500 nM的范围；和对于实施例97-99，FLIPR最大抑制范围为88%至93%，而FLIPR IC50为4.3 nM至
440 nM的范围。对于实施例100-160，FLIPR最大抑制范围为47%至93%，而FLIPR IC50为
4.3 nM至440 nM的范围。
[0396] 如果化合物在EC20谷氨酸响应中产生浓度依赖性升高，则由这些浓度-响应曲线可以鉴定正调节剂(PAM)。
[0397] 沉默变构调节剂(SAM)可以基于来自放射配体分析和钙动员分析两者的结果确定。如果基于放射配体分析化合物与受体的变构位点活性结合、但在钙动员分析中没有可测量的固有功效，则该化合物为SAM。
[0398] 体内分析在与[K. Njung'e，K.and S.L. Handley，Pharmacology，Biochemistry and Behavior，
1991，38，63-67]中所述类似的小鼠弹珠埋藏(mouse marble burying，mMB)分析中，实施例5显示30 mpk (sc)下的统计上显著的体内抗焦虑作用。参见图1。
[0399] 更具体地，对于mMB测试，使用重量为25至30 g的成年雄性CD1小鼠(Charles River Laboratories (Kingston，NY))。在测试之前，将所有动物群居饲养在标准群落室中至少一周，使用12：12明/暗循环(在上午6：00时照明)。食品和水不限量供应。在测试之前将动物称重，尾部做标记，并随机分配给处理组。
[0400] 对于各个测试，注射载体或测试化合物之后60分钟，或者注射阳性对照丁螺环酮之后30分钟，将小鼠个别放入包含1.5英寸的Aspen垫草(PWI牌)和两排的10个弹珠(每个测试笼总计20个弹珠)的测试笼中。应用过滤器盖覆盖各测试笼。三十分钟之后，从测试笼中移出小鼠，并使其返回到其圈养笼中。计数完全可见的弹珠(小于2/3被垫草覆盖)的数目，并从20中减去，得到埋藏的弹珠的数目。每组测试十二只小鼠。
[0401] 测试包括多个测试，进行每个测试来评价丁螺环酮盐酸盐(BUS；Sigma Aldrich)(阳性对照)和/或式(I)的化合物。将各化合物在测试之前立即溶解在20%的β-环糊精(式(I)的化合物)或蒸馏水(BUS)中，并以指定的预处理时间(即，30、60或120分钟预处理)通过皮下(SC)或腹膜内(IP)注射以一个或多个剂量(例如3、10和/或30 mg/kg)给药。以每kg体重mg药物(盐形式)测量剂量。使用单因素ANOVA和事后Dunnett检验分析数据。
[0402] 也可以通过[N.A. Moore等，Behavioural Pharmacology.1994，5，196-202]中描述的改进的Geller-Seifter冲突测试来测试体内抗焦虑作用。例如，更具体地，使用啮齿动物操作室(ENV-007CT，Med Associates Inc.(Georgia，VT))和消音室(ENV-018MD，Med Associates Inc.)，每个室装有房间灯、提示灯、通过可编程电击器(ENV-414，Med Associates，Inc.)传递足部电击的格形地面、和食物进料斗。两个杠杆位于食物进料斗的任一侧。大鼠被训练为仅对左侧的杠杆作出响应。使用食物强化(例如Dustless Precision Pellets，45 mg，BioServ，(Frenchtown，NJ))。MED-PCIV软件(Med Associates)用来进行实验进程和数据收集。
[0403] 在开始冲突程序之前，动物被最初训练为以固定比率时间表(FR 1、2、5和10)按压杠杆。一旦动物以FR 10时间表连续2天获得25个奖励，动物开始以三组分冲突时间表训练。三组分如下：(1)不受惩罚的、可变时间间隔30 s (VI30)时间表的食物强化，以便以平均30 s的可变时间程式加强按压杠杆；该时期具有9分钟的持续时间并仅由后房间灯点亮作为信号；(2)随后立即为由完全黑暗作为信号的3分钟暂停期(TO)；记录响应，但既不奖励也不惩罚；(3)受惩罚的、固定比率10 (FR10)时间表的强化，其在3分钟时期期间，基于每第10次按压杠杆同时提供食物和足部电击(0.3 mA，500 ms)；该组分由后房间灯和每个杠杆上方的提示灯点亮作为信号。这些三组分在每日30分钟进程期间按相同的顺序重复两次。
[0404] 当观察到稳定的响应比率(没有显著的上升或下降趋势)5天时，开始测试。在例如星期三和星期五使用拉丁方设计测试动物。动物用作它们自己的对照并接受所有处理。为保持基线性能，动物也在其余的三个工作日进行训练。
[0405] 使用重量为426-567 g的12只成年雄性Sprague-Dawley大鼠(Charles River Laboratories (Kingston，NY))进行测试。将动物成对饲养在保持在受控温度(68-72℉)和12小时明/暗循环(06：00时点灯)下的群落室中。在星期一至星期四的训练/测试之后，动物无限制地给予水，但是食物限于15 g的Bacon Lover's Treats (BioServ)。星期五至星期日，动物无限制地得到Lab Diet 5012 Rat Diet (PMI Nutrition International，LLC，Brentwood，MO)，直到更换笼，并在星期日取出食物。
[0406] 测试包括多个测试，其中进行每个测试来评价参考化合物或式(I)的化合物。参考抗焦虑药可以包括利眠宁、安定和丁螺环酮，其溶于盐水或水中，并通过皮下、腹膜内和/或口服给药。将测试化合物溶于20%的β-环糊精中，并用NaHCO3将pH调节至7。对于每个测试，与载体对照组相比，在测试之前60分钟，使用2 mL/kg的注射体积，通过口服给药以一个或多个剂量(例如10、20、30和/或50 mg/kg)测试待评价的化合物。以每kg体重mg药物(盐形式)测量剂量。使用重复测量ANOVA和事后Dunnett检验分析数据。
[0407] 由Vogel等的[Psychopharmacologia，1971，21，1-7]描述的“Vogel冲突测试”用来检测式(I)的化合物的抗焦虑活性，因为抗焦虑药增加了惩罚的饮水。在测试中，大鼠被剥夺水大约48小时，然后个别放入具有由1 cm间隔的不锈钢棒(0.4 cm)构成的底部的透明Plexiglas®外罩(15×32×34 cm)中。外罩的后壁由不透明Plexiglas®构成，因此使观察者隐蔽于实验动物。在对面壁的中心底部上方5 cm处，金属水出口突入笼中并连接到电击发生器(Apelex：011346型)的一个电极。电击发生器的另一个电极连接到金属格形地面。
[0408] 使大鼠进行探索，直到其发现水出口。然后，每当它喝水时，在其开始舔食之后使其承受2秒的轻微电击(1.7 mA，1 s)。在3分钟测试期间计数惩罚饮水的数目。利用每组10只大鼠以盲法进行测试。测试包括使用参考化合物和如下所述LES测试中制备和给药的式(I)的化合物的多个测试。在达到驯化条件之后，使用如本文中所述的雄性Rj：Wistar (Hans)大鼠。通过使用不配对学生t检验，提供比较处理组和适当的对照来分析数据。
[0409] 实施例82在10 mpk (口服)下在Vogel冲突测试中显示显著活性；并且实施例25在30 mpk (口服)下显示显著活性。分别参见图2和3。实施例147在3、10和30 mpk (口服)下在Vogel冲突测试中显示显著活性；参见图4。
[0410] 可以评价式(I)的化合物的体内抗抑郁作用。使用与[J.F. Cryan等，Neuroscience and Biobehavioral Reviews 2005，29，547-569]中所述类似的强制游泳测试，测量抑郁样行为的评价。用于测试的动物为成年雄性NIH Swiss Webster小鼠(Harlan Laboratories (Frederick，MD))，重量为22至24 g，将其如先前描述的mMB测试中使用的小鼠那样驯化和饲养。
[0411] 对于小鼠强制游泳测试(mFST)，在注射载体或测试化合物之后60分钟，或在注射阳性对照丙咪嗪盐酸盐(IMI；Sigma Aldrich，St.Louis，MO) 30分钟之后，将小鼠个别放入含有11 cm深的自来水(23-25℃)的透明的Pyrex®圆筒(11 cm直径，16.5 cm高)中。用等渗盐水制备丙咪嗪，并如先前mMB测试描述的那样制备测试化合物。使用的剂量可以如先前mMB测试描述的那样。在6分钟进程期间测量漂浮、游泳和挣扎(“攀爬”)所消耗的时间百分比。对游泳进程进行视频监视，并可以使用Biobserve Automated FST装置和软件(Biobserve GmbH，Bonn，德国)实时分析。组规模可以为12至13只小鼠。以每kg体重mg药物(盐形式)测量剂量。使用单因素ANOVA和事后Dunnett检验分析数据。
[0412] 也可以通过使用以下体内行为动物模型的非限制实例评价本发明的化合物的体内作用。以下行为模型并不预期作为可用于测定本发明化合物治疗对应病症或疾病的功效的唯一模型。
[0413] 也可以使用如[Walker and Davis.Biol.Psychiatry，1997，42，461-471]中所述的灯光增强惊吓(LES)反射法，来评价本发明化合物的体内抗焦虑作用。惊吓响应是一种响应高强度意外刺激的骨胳肌群的协调收缩。可以使用大多数感官形态，但是最经常使用声音，因为其容易控制。因此，当出现足够强度的短脉冲(例如115 dB)时，出现无意识的惊吓响应。高水平亮光增加例如大鼠的夜间活动物种的惊吓响应，这种作用不需要任何前置条件。抗焦虑药即减轻焦虑的试剂降低光亮增强的惊吓。
[0414] 对于LES测试，可以使用由市售的隔音惊吓室(例如SR-LAB™ Startle Response System，San Diego Instruments，San Diego，CA)组成的装置。可以通过计算机程序(例如SR-LAB™控制部件)控制所有实验事件和数据记录。将大鼠放入比大鼠稍大的小型Perspex®圆筒中的惊吓室内，其与容纳应变仪的基板连接。例如在惊吓响应期间出现的大鼠的垂直运动导致基板变形，在应变仪中产生与运动大小，即惊吓响应的大小成正比的电流。扬声器直接放置在大鼠上方，以提供背景声和刺激。光源(2500-3500 Lux)位于每个惊吓室内。
[0415] LES测试由两个20分钟进程(首先关灯，然后开灯)组成，其中开始5分钟用于习惯，在此期间在室内提供70 dB强度的背景噪声。在每个习惯期结束时，提供10次110 dB的刺激，使动物习惯。然后，以伪随机顺序提供三个试验类型，各8次。各试验间隔15-25秒。试验类型为100、105或110 dB惊吓，期间在100、105或110 dB下提供40 ms脉冲的白噪声，导致惊吓响应。没有光亮或噪声的5分钟时期分隔两个进程。可以使用的合适的大鼠物种包括雄性Rj：Wister (Hans)大鼠(在测试开始时重180-280 g，每个测试最大重量范围为50 g)(Elevage Janvier，Le Genest-Saint-Isle，法国)。在不限制食物和水测试之前，大鼠应习惯实验室条件至少5天。驯化条件应可与科学文献中描述的和/或本领域技术人员已知的那些条件相类似。
[0416] 从发起惊吓刺激开始，记录惊吓平台的输出40 ms。每个试验记录三个变量：整个记录期间的平均响应，峰值响应和达到峰值响应的时间。通过将暗或亮条件下每个类型的8次试验求平均数、和计算由光亮导致的惊吓振幅(平均和峰值)的增长百分数(LES)来计算每只大鼠的惊吓强度。达到峰值响应的时间为反应时间的量度。
[0417] 使用例如每组12只大鼠非盲法进行测试。测试包括多个测试，其中进行每个测试来评价参考化合物(例如利眠宁)、比较化合物(例如普瑞巴林)和/或本发明的化合物。例如，在测试1中，使用已知的抗焦虑药，例如利眠宁和普瑞巴林，随后测试2使用mGluR5拮抗剂2-甲基-6-(苯基乙炔基)-吡啶(MPEP)，然后测试3使用本发明的化合物进行。另外，每个测试可以同时进行，或者以顺序和同时的一些组合进行。对于每个测试，与载体对照组相比，在测试之前60分钟，通过口服给药一个或多个剂量(例如1、10、30和/或100 mg/kg)测试待评价的化合物。在测试之前，可以通过在蒸馏水中将最高预期剂量冷搅拌10分钟，测试该测试化合物的溶解性。如果可溶，蒸馏水可以用作载体。如果不可溶，测试化合物可以悬浮于蒸馏水中的0.2%羟丙基甲基纤维素(HPMC)中。剂量可以制备为重量比体积(W/V)原液，然后对于溶液中的化合物进行连续稀释(V/V)，或者对于悬浮液中的化合物进行单独称重(W/V)。
[0418] 对于每个测试，通过使用不配对学生t检验比较处理组和载体对照来分析数据。将通过使用配对学生t检验比较每个处理组内暗和亮条件下的惊吓反应强度，来分析每个组中的LES。
[0419] 可以如[D.H. Overstreet and G.Griebel Pharmacol Biochem Behav.，2005，82，1：223-227]中描述的，在FST和社交相互作用测试中使用Flinders敏感系(FSL)大鼠评价抗抑郁作用。更具体地，通过在20% HP-β-环糊精中制备和相对于载体对照，测试多剂量(例如10 mg/kg、30 mg/kg等)的本发明的化合物。除了FSL载体对照组之外，测试Flinders抗性系大鼠的载体对照组。通过IP注射(2 mg/kg注射体积)，每天给予测试化合物共14天。在第15天，第14天注射之后22-24小时，测试动物的社交相互作用和强制游泳测试，如Overstreet and Griebel 2005中所述。每组测试6至8只动物。
[0420] 也可以使用降低HPA轴反馈(David等，2007，SFN meeting in San Diego)的范例评价抗焦虑和抗抑郁作用。该模型基于皮质酮在饮用水中的慢性输送，在小鼠中引起焦虑和抑郁样行为。该模型由持续给药高剂量(35 μg/mL)而不是低剂量(7 μg/mL)的皮质酮4或7周组成。这种治疗在C57Bl6/NTac小鼠品系中引起焦虑和抑郁样行为，如在30分钟空场测试(OF)期间进入场地中心的消耗时间和次数减少所指示，而总的移动不变。此外，服从新抑制喂食(NSF)范例的皮质酮治疗的小鼠的喂食潜伏期增加。因为皮质酮治疗不改变圈养笼(熟悉环境)中的进食，所以喂食潜伏期的改变并非由于食欲改变或潜在代谢异常。重要地，以血浆-浓度形式测量的对急性应激物(6分钟强制游泳测试(FST))的促肾上腺皮质激素(ACTH)和皮质酮(CORT)响应在C57BL/6NTac小鼠中变得钝化。这些结果在CD1品系小鼠中得到证实。用抗抑郁剂丙咪嗪(40 mg/kg/天腹膜内)和氟西汀(18 mg/kg/天腹膜内)治疗3周使在OF、NSF和FST中通过7周皮质酮治疗导致的焦虑和抑郁样作用逆转。
[0421] 在这种测试中，在测试之前使240只8-10周龄的C57Bl/6Ntac品系成年雄性小鼠(Taconic Farms (丹麦))适应设施至少1周(例如在22℃下在12 h (06：00-18：00)亮-暗循环下每笼5只)，自由得到食物和水。
[0422] 将本发明化合物(30或60 mg/kg，每天在食物中)、氟西汀(18 mg/kg，每天在饮用水中)或载体(0.45%的β-环糊精，βCD在饮用水中)给予通过具有载体或皮质酮(35 μg/mL)的饮用水治疗的小鼠。如以下所示治疗7周之后，在以下行为测试中测试小鼠：OF、NSF、FST和蔗糖飞溅梳理测试(sucrose splash grooming test)。通过饮用水给予βCD或皮质酮(35 μg/mL) 3周开始治疗(n =每组200只小鼠)。然后，将继续给予βCD或皮质酮，并如下所示另外4周将小鼠分为8组，每组30只小鼠。
[0423] 1-8周 3-7周载体 (βCD) 载体
载体 (βCD) 氟西汀，18 mg/kg
载体 (βCD) 测试化合物，30 mg/kg
载体 (βCD) 测试化合物，60 mg/kg
35 μg/mL/天皮质酮 载体
35 μg/mL/天皮质酮 氟西汀，18mg/kg
35 μg/mL/天皮质酮 测试化合物，30 mg/kg
35 μg/mL/天皮质酮 测试化合物，60 mg/kg
以这种顺序在行为范例中测试小鼠：OF、NSF、蔗糖飞溅测试，然后是小鼠FST (15只动物/组)。
[0424] 空场测试2
经10分钟进程，在Plexiglas®空场箱43×43 cm (MED associates，Georgia，VT)中量化运动活性。将两组16脉冲调制的红外光束置于相隔2.5 cm的相对壁上，以记录x-y动态移动。将40-W白色灯泡放入房间的中部，在底部水平提供约200-lx照度。活动室与计算机连接，用于以100 ms分辨率采集数据。计算机限定网格线，网格线将各空场划分成为中心和周围区域，4条线的每一个离开每个壁11 cm。从属测量值(Dependant measure)为在中心消耗的总时间，进入中心和次数和在中心走过的距离除以走过的总距离。总的运动活动量化为走过的总距离(cm)。
[0425] 新抑制喂食新抑制喂食(NSF)为引起竞争动机的冲突测试：驱使进食和害怕冒险进入光亮场地的中心。开始进食的潜伏期用作焦虑样行为的指标，因为传统的抗焦虑药物减少潜伏期。
在5-分钟期间内进行NSF，如先前描述的(Santarelli等，2003)。简言之，测试设备由
50×50×20 cm塑料箱组成。底部覆盖大约2 cm的木制垫草。在行为测试之前24小时，从圈养笼中取出所有食物。测试时，将单个食物颗粒(常规食物)放在位于箱中心的白纸平板上。将动物放入迷宫的角落，并立即启动秒表。当小鼠用臀部端坐并用前爪抓取时对所关心的测量值(咀嚼)计分。紧接着该测试之后，将小鼠转移至其圈养笼中，并测量5分钟内消耗的食物量(圈养笼食物消耗)。小鼠在光照期中进行测试。因为已知抗抑郁药对食欲具有不同的作用，所以通过在测试之后使动物立即返回其圈养笼(熟悉的环境)中来评价进食驱动。然后，测量5分钟时间内消耗的食物量。
[0426] 飞溅测试在存在或不存在3-周氟西汀治疗的情况下，在皮质酮方案结束时(第7周末)评价梳理潜伏期。该测试在于在小鼠口鼻部喷洒200 μl的10%蔗糖溶液。然后记录梳理频率。
[0427] 小鼠强制游泳测试如 [Dulawa 等，Neuropsychopharmcol.，2004，29，1321-1330；Holick 等，
Neuropsychopharmcol.，2008，33，2：406-417]中所述的，使用改进的强制游泳测试步骤。
将小鼠个别放入包含保持在23-25℃的18 cm水的玻璃圆筒(高度：25 cm，直径：10 cm)内，并通过直接位于圆筒一侧的三脚架固定的照相机视频录像6分钟。游泳和攀爬的增加分别与大鼠[参见例如Cryan and Lucki Pharmcol.& Exp.Therap.，2000，295，3：1120-1126]和小鼠[参见例如Dulawa等，(2004)；Holick等，(2008)]的血清素能和去甲肾上腺素能系统的活性有关。因此，这里在6分钟测试周期的后4分钟期间对主要行为游泳、不动或攀爬)计分。
[0428] 也可以使用这些附加测试评价抗焦虑样性能：(1) [S.E.File and P.Seth European Journal of Pharmacology，2003.463，35-53]中描述的社交相互作用，和(2) [S.M.Korte and S.F.De Boer European Journal of Pharmacology，2003，463，163-175]中描述的高架十字迷宫。
[0429] 可以通过测量MPTP在大鼠中的神经毒性来评价帕金森病(PD)，如[E.H.Lee等，Chin.J.Physiol.，1992，35，4：317-36]中所述。同样，实验引起的动物中的纹状体DA消耗也是帕金森病的有效模型，如[W.Schultz Prog.Neurobiol.，1982，18，2-3：121-66]中所述。某些物质破坏儿茶酚胺能神经元的能力已经广泛地用于在动物中产生DA缺乏，如[L.E.Annett等，Exp.Neurol.，1994，125，2：228-46]中所述。也可以通过测量由6-羟基多巴胺(6-OHDA)引起的神经毒性评价PD，如[N.Breysse等，J.Neurosci.，2002，22，13：5669-5678；D.Rylander等，J.Pharmacol.Exp.Ther.，2009，330，1：227-235；和L.Chen等，“Chronic，systemic treatment with a metabotropic glutamate receptor 5 antagonist in 6-hydroxydopamine partially lesioned rats reverses abnormal firing of dopaminergic neurons”，Brain Res.，2009，1286，192-200]中所述。
[0430] 可以使用fmr1tm1Cgr 小鼠模型，如[Q.J.Yan等，Neuropharmacol.，2005，49，1053-1066]中所述，和mGluR5表达选择性下降的Fmr1 敲除小鼠，如[G.Dölen等，Neuron，
2007，56，955-962]中所述，评价脆性X染色体综合征。
[0431] 临床前地，也可以评价动物与精神分裂症有关的阻断/衰减。可以通过测量多巴胺(DA)活性的总体活性水平的改变和运动活性的伴随平行改变，如[R.Depoortere等，Neuropsychopharmacology，2003，28，11：1889-902]中所述，D-安非他明(AMPH)和苯环利定(PCP)通过诱发模式精神病或运动过兴奋，如[W. J. Freed等，Neuropharmacology，1984，23，2A：175-81；F. Sams-Dodd Neuropsychopharmacology，1998 19，1：18-25]中所述，评价精神分裂症的动物模型中的阳性症状。例如，Depoortere等，2003已经通过表征具有典型和非典型抗精神病功效的化合物，描述用于评价与阳性症状学和副作用概况有关的运动活性、僵直、攀爬和刻板症的测试。可以如[Y. K. Fung等，Pharmacol. Biochem. Behav.，1986，24，1：139-41和Y. K. Fung等，Steroids，1987，49，4-5：287-94]中所述的，评价阿扑吗啡引起的攀爬、刻板症和僵直(AIC)的衰减。另外，可以通过测量在NMDA拮抗剂，例如PCP的影响下的社交相互作用，评价精神分裂症的阴性症状，如上述F.Sams-Dodd，
1998中描述的。
[0432] 包括阿尔茨海默氏病的记忆的认知症状可以通过此类模型加以评价，如[T. J. Gould等，Behav.Pharmacol.，2002，13，4：287-94，和A. O. Hamm等，Brain，2003，126，Pt2：267-75]中所述的恐惧条件范例，和[J. P. Aggleton等，Behav.Brain Res.，1996，19，
2：133-46]中所述的旋臂测试，而空间参考记忆和学习可以在如[Morris. Learn. Motiv.，
1981，12，239-260；B.Bontempi等，Eur. J. Neurosci.1996，8，11：2348-60]中 所 述 的Morris水迷宫中加以评价。更具体地，在Morris水迷宫测试中，在圆形水箱(150 cm直径和45 cm高度)中充满约30 cm水，并保持在26-28℃，离开周边18 cm处有逃逸平台(15 cm直径)，始终位于水面下1.5 cm的相同位置。通过添加无毒着色剂(例如奶粉)，使水不透明，使得看不见平台。经单独一天对动物进行单独训练进程。训练进程包括在水迷宫中4次连续的试验，每次试验间隔60秒。对于每次试验，将动物在与逃逸平台等距离的两个起点之一处放入水迷宫中，并使其发现逃逸平台。在开始新的试验之前60秒将动物置于逃逸平台上。如果动物在120秒内没有发现平台，则从水中取出动物，并置于平台上60秒。
在4次试验过程中，动物从每个起点以每只动物随机确定的顺序起始水迷宫两次。用于测试驯化条件的合适的动物为例如先前对于LES测试描述的雄性Rj：Wistar (Hans)大鼠。
[0433] 视 频 记 录 试 验，并 使 用 视 频 跟 踪 系 统 (SMART，Panlab，S.L.，Cornellà(Barcelona)，西班牙)分析动物的行为。在每次试验中采用的主要测量是发现平台所走过的距离。采用的其次测量是游泳速度和逃逸潜伏期。每测试组使用例如12只大鼠进行盲法测试。测试包括多个测试，其使用参考化合物和先前描述的LES测试中制备和给药的本发明的化合物。对于每次测试，通过使用单因素ANOVA然后Dunnett检验比较治疗组和载体对照来分析数据。为增加与上述Vogel冲突测试的可比性，在所有测试中，在测试(第1天)之前大约24小时对大鼠禁水；但是，在不禁水的大鼠(第2天)中进行测试。
[0434] 另外，就认知、记忆和海马功能低下而论，可以通过测量卵巢切除(OVX)的雌性大鼠的突触可塑性恢复来加以评价，如[M. Day and M.Good Neurobiol.Learn.Mem.，2005，83，1：13-21]中所述。此外，由于精神分裂症的注意功能改变可以通过[J. L. Muir等，Psychopharmacology (Berl)，1995，118，1：82-92和Robbins等，Ann. N. Y. Acad. Sci.，
1998，846，222-37]中所述的五(5)选择序列反应时间测试(5CSRT)来检查。
[0435] 可以由本领域技术人员已知的任何测试评价人类患者的认知疾病或病症。
[0436] 可以通过如[Kim and Chung，Pain，1992，50，355-363]中所述的神经性疼痛模型(“Chung模型”)来评价止痛活性。大鼠脊神经的紧密结扎伴随痛觉过敏、异常疼痛和自发性疼痛，因此构成人类末梢神经性疼痛的模型。抗痛觉过敏减轻疼痛超敏反应的这些慢性体征。因此，在Chung模型中，将大鼠麻醉(戊巴比妥钠50 mg/kg腹膜内)，并在用氯己定喷雾清洗侧腹之后在L4-S2水平切开，暴露左侧L5神经。将用纯酒精消毒的棉线(标准，非手术质量)放在L5神经周围，在L5神经周围用简单结扎扎紧。然后缝合伤口，喷涂CothiVet® (天胡荽酊剂喷雾)(Neogen® Corp.，Lexington，KY)。使大鼠接受Clamoxyl (0.67 mL/kg)的皮下注射并使其恢复。在手术之后至少2周，当完全建立慢性疼痛状态时，使大鼠的两个后爪连续接受触觉和热刺激。
[0437] 对于触觉刺激，将动物放在格形地面上倒置的丙烯酸塑料箱(18×11.5×13 cm)下。然后用增加的力将电子Von Frey探针(Model 1610，BIOSEB，Vitrolles Cedex，法国)的尖端首先施加于未损伤的后爪，然后施加于受损伤的后爪，自动记录引起缩爪所需的力。将该步骤进行3次，并计算每只爪的平均力。
[0438] 对于热刺激，设备(No.7371，Ugo Basile，Comerio VA，意大利)由放在升高的玻璃地板上的个别丙烯酸塑料箱(17×11×13 cm)组成。将大鼠放入箱中，使其自由习惯102
分钟。然后将可移动红外辐射源(96±10 mW/cm)首先聚焦在未损伤的后爪，然后聚焦在受损伤的后爪，并自动记录缩爪潜伏期。为了防止组织损伤，在45秒之后自动关闭热源。
[0439] 在接受化合物治疗之前，使所有动物经受后爪的触觉刺激，并基于受损伤的后爪的疼痛反应分配至匹配的治疗组。每组使用例如10只禁水的大鼠进行盲法测试。用于测试的合适动物为例如用于先前所述LES测试的雄性Rj：Wistar (Hans)大鼠。测试包括多个测试，其使用参考化合物和本发明的化合物。除了如先前对于LES测试描述的普瑞巴林和MPEP之外，度洛西汀可以用作参考化合物，因为就与糖尿病有关的神经性疼痛和纤维肌痛而论，其是抗痛觉过敏的。如先前描述的LES测试那样制备和给予化合物。可以使用同一批经手术的大鼠重复进行测试，在各治疗之间最少洗净1周。此外，为了增加与上述Vogel冲突测试的可比性，在所有测试中，每次测试之前对大鼠禁水大约48小时。对于每次Chung模型测试，通过使用不配对学生t检验比较治疗组和合适的对照来分析数据。
[0440] 另外，可以使用福尔马林爪测试，在小鼠体内评价止痛/抗炎活性，如[Wheeler-Aceto等，Psychopharmacology，1991，104，35-44)所述的。对于测试，将5%福尔马林(25 μl)足底注射进小鼠的左后爪中。这一处理引起对照动物舔爪。在注射福尔马林之后立即(早期)开始对舔爪所消耗的时间计时5分钟，和在注射福尔马林之后15分钟(后期)开始计时15分钟。
[0441] 使用例如每组10小鼠进行盲法测试。用于测试的合适的动物为例如雄性Rj：NMRI小鼠(Elevage Janvier)，在测试开始时重量为20-30 g (每次实验最大范围= 5 g)。如对于LES测试中使用的动物所述那样使动物驯化。测试包括多个测试，其使用参考化合物(例如吗啡)、比较化合物(例如加巴喷丁和度洛西汀)和本发明的化合物。如先前LES测试中描述的，可以以多剂量评价本发明的化合物，并与载体对照组相比，在福尔马林之前60分钟皮下给药，而在福尔马林之前60分钟口服给予吗啡(64 mg/kg口服)、加巴喷丁(300 mg/kg口服)和度洛西汀(10 mg/kg口服)。通过使用不配对Mann-Whitney U检验比较治疗组和载体对照组来分析数据。
[0442] 可以通过[H.Y.Liu等，J.Neurosci.Res.，2002，70，2：238-48]中所述的实验性自身免疫脑脊髓炎(EAE)模型评价多发性硬化。
[0443] 本领域技术人员将认识到可以对本发明的各方面或实施方案进行各种改变和/或改进，并且可以在不脱离本发明的精神的情况下进行此类改变和/或改进。因此，所附的权利要求意图覆盖所有此类如将落入本发明的精神和范围内的等同变化。
[0444] 本申请中引用的每一篇参考物，包括参考文献、书籍、专利和专利申请在此全部引入作为参考。
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