[0002]
[0003] 其中X、R、R1、R2、D、E1、E2、E3、E4、G1、G2、G3和G4具有下文给出的含义，所述化合物为有价值的药物活性化合物。它们为组织蛋白酶A的
抑制剂并可用于
治疗以下
疾病，所述疾病为例如动脉粥样硬化、心
力衰竭、肾病、肝病或炎性疾病。本发明还涉及制备式I化合物的方法、它们的用途和含有它们的药物组合物。
[0004] 组织蛋白酶A(EC＝3.4.16.5；基因符号CTSA)是一种蛋白酶，也称为溶酶体羧肽酶A或保护蛋白。它属于丝
氨酸羧肽酶的家族，其仅包括两个
哺乳动物类代表，即类维生素A诱导的丝氨酸羧肽酶和卵黄羧肽酶类蛋白。在细胞内，组织蛋白酶A残基在溶酶体内与β-半乳糖苷酶和神经氨酸酶组成高分子量复合物。组织蛋白酶A与这些糖苷酶的相互作用对它们进入溶酶体的正确途径是必须的，并防止它们发生溶酶体内
水解。CTSA基因的多种突变引起的组织蛋白酶A的
缺陷会导致β-半乳糖苷酶和神经氨酸酶的继发缺陷，其表现为明显的常
染色体隐性遗传溶酶体蓄积病：半乳糖唾液酸苷贮积症(galactosialidosis)(参见A.d’Azzo等,"The Metabolic and Molecular Bases of Inherited Disease",卷2(1995),2835-2837)。鉴定的CTSA基因突变多数是错义突变，会影响蛋白的折叠或
稳定性。它们均未出现在酶的活性位点(G.Rudenko等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 95(1998),621-625)。因此，溶酶体蓄积紊乱可以用催化量的无活性的组织蛋白酶A突变体来矫正(N.J.Galjart等,
J.Biol.Chem.266(1991),14754-14762)。组织蛋白酶A的结构功能因此可以与催化活性分开。这也通过以下观察而被强调：与CTSA基因缺陷的小鼠不同，携带有催化量的CTSA基因的非活性突变体不会出现人类半乳糖唾液酸贮积症疾病的迹象(R.J.Rottier等,
Hum.Mol.Genet.7(1998),1787-1794；V.Seyrantepe等,Circulation 117(2008),1973-
1981)。
[0005] 组织蛋白酶A对多种自然存在的生物活性肽在酸性pH下表现出羧肽酶活性，在中性pH下表现出脱酰胺酶和酯酶活性。体外实验表明，组织蛋白酶A能将血管紧张素I转化为血管紧张素1-9，将缓激肽转化为缓激肽1-8，其为缓激肽B1受体的配体。它能水解内皮素-
1、神经激肽和催产素，以及去酰胺底物P(参见M.Hiraiwa,Cell.Mol.Life Sci.56(1999),
894-907)。尿液中检测出高组织蛋白酶A活性，说明其负责肾小管缓激肽的降解(M.Saito等,Int.J.Tiss.Reac.17(1995),181-190)。然而，该酶仍可由血小板和淋巴细胞释放，并在
抗原呈递细胞中表达，可能与抗原呈递过程有关(W.L.Hanna等,J.Immunol.153(1994),
4663-4672；H.Ostrowska,Thromb.Res.86(1997),393-404；M.Reich等,Immunol.Lett.(网上公布Nov.30,2009))。人类器官的免疫组织化学在肾小管细胞、支气管上皮细胞、睾丸Leydig细胞和脑的大型神经元细胞中显著表达(O.Sohma等,Pediatr.Neurol.20(1999),
210-214)。其在单个细胞分化为巨噬细胞的过程中上调(N.M.Stamatos等,FEBS J.272
(2005),2545-2556)。除了结构和酶功能，组织蛋白酶A表现出与神经氨酸酶和可选地叠接的β-半乳糖苷酶结合，形成在
纤维细胞、平滑肌细胞、成软骨细胞、白细胞和某些癌症细胞类型中表达的细胞表
面层粘连蛋白和弹性蛋白受体复合物(A.Hinek,Biol.Chem.377
(1996),471-480)。
[0006] 已经在
高血压动物模型中证明了组织蛋白酶A对局部缓激肽水平的调节的重要性。组织蛋白酶A活性的药理抑制增强了肾中缓激肽水平并阻止了盐分诱导的高血压的发生(H.Ito等,Br.J.Pharmacol.126(1999),613-620)。反义寡核苷酸抑制组织蛋白酶A的表达也可说明这一点(I.Hajashi等,Br.J.Pharmacol.131(2000),820-826)。不仅在高血压
中，在多种其它心
血管疾病和其它疾病中，缓激肽也表现出了益处(参见J.Chao等,
Biol.Chem.387(2006),665-75；P.Madeddu等,Nat.Clin.Pract.Nephrol.3(2007),208-
221)。因此组织蛋白酶A抑制剂的主要适应症包括动脉粥样硬化、心力衰竭、心肌梗塞、心肌肥大、血管肥厚、左心室功能不全(尤其是心肌梗塞后的左心室功能不全)，例如肾纤维化、肾衰竭和肾功能不足等肾病；例如肝纤维化和肝硬化等肝病；如肾病等糖尿病并发症；以及对心脏、肾等的器官的器官保护。
[0007] 如上所述，组织蛋白酶A抑制剂可以阻止缓激肽B1受体配体缓激肽1-8的产生(M.Saito等,Int.J.Tiss.Reac.17(1995),181-190)。这为组织蛋白酶A抑制剂对
疼痛尤其是神经痛及
炎症的治疗提供了机会，如缓激肽B1受体拮抗剂所示(参见F.Marceau等,
Nat.Rev.Drug Discov.3(2004),845-852)。组织蛋白酶A抑制剂可以进一步用于抗血小板剂，如组织蛋白酶A抑制剂厄比内酯B(一种丙内酯衍生物)在高血压动物中可以抑制血小板聚集的实验所证明(H.Ostrowska等,J.Cardiovasc.Pharmacol.45(2005),348-353)。
[0008] 另外，与其它丝氨酸蛋白酶(如前列腺蛋白、弹性蛋白酶或者蛋白裂解酶等)相同，组织蛋白酶A可以刺激阿米洛利-敏感性上皮钠通道(ENaC)，因此参与透过表皮膜的流量的调节(参见C.Planes等,Curr.Top.Dev.Biol.78(2007),23-46)。因此，用组织蛋白酶A抑制剂，可以改善呼吸疾病，例如囊胞性纤维症、慢性支气管炎、慢性阻塞性
肺病、哮喘、
呼吸道感染和肺癌等。肾脏中的组织蛋白酶A调节可以用来利尿，因此会诱导低血压现象。组织蛋白酶A抑制剂还对
心房颤动具有有益效果，其报道于J.Med.Chem.2012,55,no.17,7636-7649。
[0009] 除了上面提到的化合物厄比内酯B，在JP 2005/145839中提到的某些二肽苯丙氨酸衍生物也发现了对组织蛋白酶A的抑制作用。在WO2011/092187、WO2012/101197、WO2012/
101199、WO2013/014204、WO2013/014205、WO2013/072327、WO2013/072328中也披露了对组织蛋白酶A具有抑制活性的化合物。对以下化合物有需求：其抑制组织蛋白酶A且为上述疾病或其它组织蛋白酶A起作用的疾病的治疗提供机会。本发明可以满足这个需求，通过提供如下面式I所示的
氧取代的3-杂芳酰基氨基-丙酸衍生物。
[0010] 存在一些具有3-杂芳酰基氨基-丙酸部分的化合物，如所述。例如，在WO 2006/076202中提及了调节类固醇核受体活性的胺衍生物，其在胺官能团的氮
原子上带有杂芳酰基团和一个更广义定义的其它基团。US 2004/0072802中提及了广义定义的β-氨基酸衍生物，其在β-氨基上带有乙酰基团，是基质金属蛋白酶和/或
肿瘤坏死因子的抑制剂。在涉及血小板ADP受体P2Y12的拮抗剂和抑制血小板聚集的WO 2009/080226和WO 2009/080227中，提到了吡唑酰基氨基取代的
羧酸衍生物，但是在
碳原子上还携带了羧酸衍生基团来连接吡唑酰基氨基基团。WO 2004/056815中提到其它吡唑酰基氨基取代的化合物，其氨基的氮原子连接在环系统，其为凝血酶因子Xa和/或因子VIIa的抑制剂。
[0011] 本发明主题为呈任意立体异构形式或任意比例的立体异构形式的混合物的式I化合物或其生理学上可接受的盐或上述任意者的生理学上可接受的
溶剂化物：
[0012]
[0013] 其中含义为：
[0014] X为S或O；
[0015] D为N或-C(R3)＝；
[0016] R为H、(C1-C6)-烷基、(C3-C8)-环烷基；
[0017] R1为H、(C1-C6)-烷基、(C3-C8)-环烷基、(C1-C6)-亚烷基-(C3-C8)-环烷基；其中烷基任选被一个或多个F原子取代；
[0018] R3为H、甲基或乙基；
[0019] R2为氢或(C1-C6-)-烷基；
[0020] E1为N或-C(R4)＝；
[0021] E2为N或-C(R5)＝；
[0022] E3为N或-C(R6)＝；
[0023] E4为N或-C(R7)＝；其中E1、E2、E3或E4均不为N或它们中的一个为N；
[0024] R4为H或O-(C1-C6)-烷基；
[0025] R5为H、F、Cl、CF3、(C1-C6)-烷基、(C1-C6)-环烷基；
[0026] R6为H或-O-CH2-苯基；
[0027] R7为H；
[0028] G1为N或-C(R8)＝；
[0029] G2为N或-C(R9)＝；
[0030] G3为N或-C(R10)＝；
[0031] G4为N或-C(R11)＝；其中G1、G2、G3或G4均不为N或它们中的一个为N；
[0032] 或G3和G4为-C(R10)＝和-C(R11)＝，其中R10和R11形成4至7元饱和碳环或杂环，所述杂环具有一个或两个氧原子；其任选被(C1-C3)-烷基单或二取代；
[0033] R8为H、F、Cl、(C1-C6)-烷基、O-(C1-C6)-烷基、CF3或OCF3；
[0034] R9为H、F、Cl、OH、O-(C1-C6)-烷基、CH2OH、CO-NH2、(C1-C6)-烷基、O-(C1-C6)-烷基、CF3或OCF3；
[0035] R10为H、F、Cl、OH、(C1-C6)-烷基、CH2OH、CO-O-(C1-C6)-烷基、SO2-(C1-C6)-烷基、CN、O-(C1-C6)-烷基、CF3、CH2-CN、C(CH3)2)-CN、(C1-C6)-烷基-OH、-O-(C1-C6)-烷基-OH、-O-CH2-CO-(C1-C6)-烷基或OCF3；
[0036] R11为H、F、Cl、OH、O-(C1-C6)-烷基、CH2OH、CO-(C1-C6)-甲基、CO-N(R20R21)、CO-O-(C1-C6)-烷基、CN、(C1-C6)-烷基、O-(C1-C6)-烷基或OCF3；其中R20和R21彼此独立地为H或(C1-C3)-烷基或与它们所连接的氮一起形成5或6元饱和环。
[0037] 针对通过引入D、X、E1、E2、E3和E4或G1、G2、G3和G4的含义由式I获得的各式，在本发明一个实施方案中，式I化合物为式I-1至I-20中任意一个或多个化合物，例如呈任意立体异构形式或任意比例的立体异构形式的混合物的式I-1化合物或式I-2化合物或式I-3化合物或式I-4化合物或式I-5化合物或式I-6化合物或式I-7化合物或式I-8化合物或式I-9化合物或式I-10化合物或式I-11化合物或式I-12化合物或式I-13化合物或式I-14化合物或式
I-15化合物或式I-16化合物或式I-17化合物或式I-18化合物或式I-19化合物或式I-20化
合物或其生理学上可接受的盐或上述任意者的生理学上可接受的
溶剂化物，其中在式I-1至I-20化合物中，基团D、R、R1、R2、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、E1、E2、E3、E4、G1、G2、G3和G4如在通式I化合物中定义或如在上述或下述任意实施方案中定义。
[0038]
[0039]
[0040]
[0041]
[0042] 本发明另一个实施方案为式I-1、I-2、I-3、I-4、I-5、I-11、I-12、I-13、I-14或I-15化合物，基团D、R、R1、R2、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、E1、E2、E3、E4如在通式I化合物中定义或如在上述或下述任意实施方案中定义，
[0043] 其中
[0044] G1为-C(R8)＝；
[0045] G2为-C(R9)＝；
[0046] G3为-C(R10)＝；
[0047] G4为-C(R11)＝。
[0048] 本发明另一个实施方案为式I-1、I-2、I-3、I-4、I-5、I-11、I-12、I-13、I-14或I-15化合物，基团D、R、R1、R2、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、E1、E2、E3、E4如在通式I化合物中定义或如在上述或下述任意实施方案中定义，其中
[0049] G1为N；
[0050] G2为-C(R9)＝；
[0051] G3为-C(R10)＝；
[0052] G4为-C(R11)＝。
[0053] 本发明另一个实施方案为式I-1、I-2、I-3、I-4、I-5、I-11、I-12、I-13、I-14或I-15化合物，基团D、R、R1、R2、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、E1、E2、E3、E4如在通式I化合物中定义或如在上述或下述任意实施方案中定义，其中
[0054] G1为-C(R8)＝；
[0055] G2为N；
[0056] G3为-C(R10)＝；
[0057] G4为-C(R11)＝。
[0058] 本发明另一个实施方案为式I-1、I-2、I-3、I-4、I-5、I-11、I-12、I-13、I-14或I-15化合物，基团D、R、R1、R2、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、E1、E2、E3、E4如在通式I化合物中定义或如在上述或下述任意实施方案中定义，其中
[0059] G1为-C(R8)＝；
[0060] G2为-C(R9)＝；
[0061] G3为N；
[0062] G4为-C(R11)＝。
[0063] 本发明另一个实施方案为式I-1、I-2、I-3、I-4、I-5、I-11、I-12、I-13、I-14或I-15化合物，基团D、R、R1、R2、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、E1、E2、E3、E4如在通式I化合物中定义或如在上述或下述任意实施方案中定义，其中
[0064] G1为-C(R8)＝；
[0065] G2为-C(R9)＝；
[0066] G3为-C(R10)＝；
[0067] G4为N。
[0068] 本发明另一个实施方案为式I-6、I-7、I-8、I-9、I-10、I-16、I-17、I-18、I-19或I-20化合物，基团D、R、R1、R2、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、G1、G2、G3和G4如在通式I化合物中定义或如在上述或下述任意实施方案中定义，其中
[0069] E1为-C(R4)＝；
[0070] E2为-C(R5)＝；
[0071] E3为-C(R6)＝；
[0072] E4为-C(R7)＝。
[0073] 本发明另一个实施方案为式I-6、I-7、I-8、I-9、I-10、I-16、I-17、I-18、I-19或I-20化合物，基团D、R、R1、R2、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、G1、G2、G3和G4如在通式I化合物中定义或如在上述或下述任意实施方案中定义，其中
[0074] E1为N；
[0075] E2为-C(R5)＝；
[0076] E3为-C(R6)＝；
[0077] E4为-C(R7)＝。
[0078] 本发明另一个实施方案为式I-6、I-7、I-8、I-9、I-10、I-16、I-17、I-18、I-19或I-20化合物，基团D、R、R1、R2、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、G1、G2、G3和G4如在通式I化合物中定义或如在上述或下述任意实施方案中定义，其中
[0079] E1为-C(R4)＝；
[0080] E2为N；
[0081] E3为-C(R6)＝；
[0082] E4为-C(R7)＝。
[0083] 本发明另一个实施方案为式I-6、I-7、I-8、I-9、I-10、I-16、I-17、I-18、I-19或I-20化合物，基团D、R、R1、R2、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、G1、G2、G3和G4如在通式I化合物中定义或如在上述或下述任意实施方案中定义，其中
[0084] E1为-C(R4)＝；
[0085] E2为-C(R5)＝；
[0086] E3为N；
[0087] E4为-C(R7)＝。
[0088] 本发明另一个实施方案为式I-6、I-7、I-8、I-9、I-10、I-16、I-17、I-18、I-19或I-20化合物，基团D、R、R1、R2、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11、G1、G2、G3和G4如在通式I化合物中定义或如在上述或下述任意实施方案中定义，其中
[0089] E1为-C(R4)＝；
[0090] E2为-C(R5)＝；
[0091] E3为-C(R6)＝；
[0092] E4为N。
[0093] 本发明另一个实施方案为式I-1或I-11化合物：
[0094]
[0095] 其中基团D、R、R1、R2、R4、R5、R6、R7、R8、R9、R10、R11如在通式I化合物中定义或如在上述或下述任意实施方案中定义，其中
[0096] G1为-C(R8)＝；
[0097] G2为-C(R9)＝；
[0098] G3为-C(R10)＝；
[0099] G4为-C(R11)＝。
[0100] 本发明一个实施方案为式I化合物，其中
[0101] R为氢、甲基或乙基。
[0102] 本发明一个实施方案为式I化合物，其中
[0103] R1为H、甲基、乙基、CF3、-CH2-环丙基或-CH2-C(CH3)3。
[0104] 本发明一个实施方案为式I化合物，其中
[0105] R1为H、甲基、乙基、-CH2-环丙基或-CH2-C(CH3)3。
[0106] 本发明一个实施方案为式I化合物，其中
[0107] R1为甲基或乙基。
[0108] 本发明一个实施方案为式I化合物，其中
[0109] R2为氢或(C1-C6-)-烷基。
[0110] 本发明一个实施方案为式I化合物，其中
[0111] R2为氢。
[0112] 本发明一个实施方案为式I化合物，其中
[0113] R4为H或O-甲基。
[0114] 本发明一个实施方案为式I化合物，其中
[0115] R5为H、F、Cl、CF3、(C1-C6)-烷基、环丙基。
[0116] 本发明一个实施方案为式I化合物，其中
[0117] R6为H。
[0118] 本发明一个实施方案为式I化合物，其中
[0119] R8为H、F、Cl、甲基、O-甲基、CF3或OCF3。
[0120] 本发明一个实施方案为式I化合物，其中
[0121] R8为H、F、Cl、甲基或O-甲基。
[0122] 本发明一个实施方案为式I化合物，其中
[0123] R9为H、F、Cl、OH、O-丙基、CH2OH、CO-NH2、甲基、O-甲基、CF3或OCF3。
[0124] 本发明一个实施方案为式I化合物，其中
[0125] R9为H、F、Cl、OH、O-丙基、CH2OH、CO-NH2、甲基、O-甲基。
[0126] 本发明一个实施方案为式I化合物，其中
[0127] R10为H、F、Cl、OH、(C1-C6)-烷基、CH2OH、CO-O-(C1-C6)-烷基、SO2-(C1-C6)-烷基、CN、O-(C1-C6)-烷基、CF3或OCF3。
[0128] 本发明一个实施方案为式I化合物，其中
[0129] R10为H、F、Cl、OH、异丙基、叔丁基、CH2OH、CO-O-甲基、SO2-甲基、CN、甲基、O-甲基、CF3或OCF3。
[0130] 本发明一个实施方案为式I化合物，其中
[0131] R10为H、F、Cl、OH、甲基、异丙基、叔丁基、CH2OH、CO-O-甲基、O-甲基。
[0132] 本发明一个实施方案为式I化合物，其中
[0133] R11为H、F、Cl、OH、O-甲基、O-异丙基、CH2OH、CO-甲基、CO-N(甲基)2、CO-吡咯烷基、CO-O-甲基、CN、甲基或OCF3。
[0134] 本发明一个实施方案为式I化合物，其中
[0135] R11为H、F、Cl、OH、甲基、O-异丙基、CH2OH、CO-甲基、CO-N(甲基)2、CO-O-甲基、O-甲基。
[0136] 本发明一个实施方案为式I化合物，其中
[0137] G3和G4为-C(R10)＝和-C(R11)＝，其中R10和R11形成5或6元饱和碳环或杂环，所述杂环具有一个或两个氧原子；其任选被卤素和/或(C1-C3)-烷基单或二取代。
[0138] 本发明一个实施方案为式I化合物，其中
[0139] G1为-C(R8)＝；
[0140] G2为-C(R9)＝；
[0141] G3为-C(R10)＝；
[0142] G4为-C(R11)＝；
[0143] 其中R10和R11形成5或6元饱和碳环或杂环，所述杂环具有一个或两个氧原子；其任选被(C1-C3)-烷基单或二取代，形成选自以下的二环结构：
[0144]
[0145] 本发明一个实施方案为式I化合物，其中
[0146] G1为-C(R8)＝；
[0147] G2为-C(R9)＝；
[0148] G3为-C(R10)＝；
[0149] G4为-C(R11)＝；
[0150] 其中R10和R11形成5元饱和碳环或杂环，所述杂环具有一个或两个氧原子，其任选被(C1-C3)-烷基单或二取代，形成选自以下的二环结构：
[0151]
[0152] 本发明一个实施方案为式I化合物，其中
[0153] G1为-C(R8)＝；
[0154] G2为-C(R9)＝；
[0155] G3为-C(R10)＝；
[0156] G4为-C(R11)＝；
[0157] 其中R10和R11形成6元饱和碳环或杂环，所述杂环具有一个或两个氧原子，其任选被(C1-C3)-烷基单或二取代，形成选自以下的二环结构：
[0158]
[0159] 本发明另一个实施方案为式I化合物，其中
[0160] G1为-C(R8)＝；
[0161] G2为-C(R9)＝；
[0162] G3和G4为-C((甲基)2)-CH2-O-；
[0163] R8为H；
[0164] R9为H。
[0165] 本发明另一个实施方案为式I化合物，其中
[0166] X为S；
[0167] D为-C(R3)＝；
[0168] R为氢或甲基或乙基；
[0169] R3为H、甲基或乙基。
[0170] 本发明另一个实施方案为式I化合物，其中
[0171] X为O；
[0172] D为-C(R3)＝；
[0173] R为氢或甲基或乙基；
[0174] R3为H、甲基或乙基。
[0175] 本发明另一个实施方案为式I化合物，其中
[0176] X为O；
[0177] D为N；
[0178] R为氢或甲基或乙基；
[0179] R3为H、甲基或乙基。
[0180] 烷基，即饱和的
烃基，可为直链或支链的。其也适用于这些基团被取代或作为另一基团的一部分的情况，例如烷基-O-(烷基氧基、烷氧基)或HO-取代的烷基(羟基烷基)。根据各自的定义，烷基的碳原子数例如可为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10，或1、2、3、4、5、6、7或8，或1、2、3、4、5或6，或1、2、3或4，或1、2或3，或1或2，或1。在本发明一个实施方案中，所述式I化合物中存在的(C1-C10)-烷基为(C1-C8)-烷基，在另一实施方案中为(C1-C6)-烷基，在另一实施方案中为(C1-C4)-烷基，在另一实施方案中为(C1-C3)-烷基，在另一实施方案中为(C1-C2)-烷基，在另一实施方案中为(C2-C3)-烷基，在另一实施方案中为甲基。在本发明一个实施方案中，所述式I化合物的任意
位置上存在的(C1-C8)-烷基为(C1-C6)-烷基，在另一实施方案中为(C1-C4)-烷基，在另一实施方案中为(C1-C3)-烷基，在另一实施方案中为(C1-C2)-烷基，在另一实施方案中为(C2-C3)-烷基，在另一实施方案中为甲基，其中所述式I化合物中存在的任意(C1-C8)-烷基可独立于各(C1-C8)-烷基而定义为这些实施方案的任一组。在本发明一个实施方案中，所述式I化合物的任意位置上存在的(C1-C6)-烷基为(C1-C4)-烷基，在另一实施方案中为(C1-C3)-烷基，在另一实施方案中为(C1-C2)-烷基，在另一实施方案中为(C2-C3)-烷基，在另一实施方案中为甲基，其中所述式I化合物中存在的任意(C1-C6)-烷基独立于各(C1-C6)-烷基而定义为这些实施方案的任一组。在本发明一个实施方案中，所述式I化合物的任意位置上存在的(C1-C4)-烷基为(C1-C3)-烷基，在另一实施方案中为(C1-C2)-烷基，在另一实施方案中为(C2-C3)-烷基，在另一实施方案中为甲基，其中所述式I化合物中存在的任意(C1-C4)-烷基可独立于各(C1-C4)-烷基而定义为这些实施方案的任一组。
烷基的实例为甲基、乙基、丙基(包括丙基(即正丙基)和异丙基)、丁基(包括丁基(即正丁基)、仲丁基、异丁基和叔丁基)、戊基(包括戊基(即正戊基)、1-甲基丁基、异戊基、新戊基和叔戊基)、己基(包括己基(即正己基)、3,3-二甲基丁基和异己基)、庚基(包括庚基(即正庚基))、辛基(包括辛基(即正辛基))、壬基(包括壬基(即正壬基))，以及癸基(包括癸基(即正癸基))。烷基-O-基团的实例为甲氧基、乙氧基、丙氧基(即正丙氧基)、异丙氧基、丁氧基(即正丁氧基)、异丁氧基、叔丁氧基、戊氧基(即正戊氧基)。烷基-S(O)m-的实例为甲基硫基-(CH3-S-)、甲亚磺酰基-(CH3-S(O)-)、甲磺酰基(CH3-S(O)2-)、乙基硫基-(CH3-CH2-S-)、乙亚磺酰基-(CH3-CH2-S(O)-)、乙磺酰基(CH3-CH2-S(O)2-)、1-甲基乙基硫基-((CH3)2CH-S-)、1-甲基乙亚磺酰基-((CH3)2CH-S(O)-)、1-甲基乙磺酰基((CH3)2CH-S(O)2-)。在本发明一个实施方案中，数值m选自0和2，其中所有数值m彼此独立且可相同或不同。在另一实施方案中，数值m在任一情况下独立于其它情况为0。在另一实施方案中，数值m在任一情况下独立于其它情况为2。
[0181] 取代的烷基可在任意位置上被取代，条件是各化合物足够稳定且适于作为药物活性化合物。具体基团和式I化合物足够稳定且适于作为药物活性化合物这一前提条件，一般适用于所述式I化合物中所有基团的定义。在本发明一个实施方案中，所述式I化合物中任一烷基以及其它基团(例如环烷基和杂环基)中的单个碳原子，例如，独立于任意其它的碳原子，携带不超过一个通过氧原子、氮原子或硫原子连接的取代基，例如HO-、(C1-C4)-烷基-O-或(C1-C4)-烷基-S(O)m-取代基。任选地被一个或多个氟取代基取代的烷基，既可不被取代(即不携带氟取代基)，也可被取代，例如被1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个氟取代基，或被1、2、3、4、5、6或7个氟取代基，或被1、2、3、4或5个氟取代基，或被1、2或3个氟取代基取代，其可位于任意位置。例如，在氟-取代的烷基中，一个或多个甲基可各携带三个氟取代基，且存在为三氟甲基，和/或一个或多个亚甲基基团(CH2)可各携带两个氟取代基，且存在为二氟亚甲基。上述关于氟取代基团的阐释也适用于所述基团另外携带其它取代基和/或为另一基团的一部分的情况，例如烷基-O-基团。氟-取代的烷基的实例为三氟甲基、2-氟乙基、1-氟乙基、1,1-二氟乙基、2,2,2-三氟乙基、五氟乙基、3,3,3-三氟丙基、2,2,3,3,3-五氟丙基、4,4,4-三氟丁基和七氟异丙基。氟-取代的烷基-O-基团的实例为三氟甲氧基、2,2,2-三氟乙氧基、五氟乙氧基和3,3,3-三氟丙氧基。氟-取代的烷基-S(O)m-基团的实例为三氟甲基硫基-(CF3-S-)、三氟甲亚磺酰基-(CF3-S(O)-)和三氟甲磺酰基(CF3-S(O)2-)。
[0182] (C3-C7)-环烷基中的环碳原子数可为3、4、5、6或7。环烷基的实例为环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环庚基。任选被一个或多个(C1-C4)-烷基取代基取代的环烷基，可不被取代(即不携带烷基取代基)，或被取代，例如被1、2、3或4个，或被1或2个相同或不同的(C1-C4)-烷基取代基取代，例如被甲基取代，其取代基可位于任意位置。所述烷基-取代的环烷基的实例为1-甲基环丙基、2,2-二甲基环丙基、1-甲基环戊基、2,3-二甲基环戊基、1-甲基环己基、4-甲基环己基、4-异丙基环己基、4-叔丁基环己基和3,3,5,5-四甲基环己基。任选被一个或多个氟取代基取代的环烷基，可不被取代(即不携带氟取代基)，或被取代，例如被1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11个氟取代基，或被1、2、3、4、5或6个氟取代基，或被1、2、3或4个氟取代基，或被1或2个氟取代基取代。氟取代基可位于环烷基的任意位置且还可位于所述的环烷基上的烷基取代基上。氟-取代的环烷基的实例为1-氟环丙基、2,2-二氟环丙基、3,
3-二氟环丁基、1-氟环己基、4,4-二氟环己基和3,3,4,4,5,5-六氟环己基。环烷基还可同时被氟和烷基取代。
[0183] 卤素为氟、氯、溴或碘。在本发明一个实施方案中，卤素在所述式I化合物中每一次出现时都独立于其它出现的情形，为氟、氯或溴，在另一实施方案中为氟或氯，在另一实施方案中为氟。
[0184] 氧代取代基，即通过双键连接的氧原子，当连接至碳原子时，代替与其结合的母体系统中碳原子上的两个氢原子。因此，如果CH2基团被氧代取代，则其变为羰基(C(O)或C＝O)。氧代团不能作为芳环中碳原子上的取代基。
[0185] 本发明包括式I化合物的所有立体异构形式，例如所有对映异构体和非对映异构体，包括顺式/反式异构体。本发明还包括两种或更多种立体异构形式的混合物，例如对映异构体和/或非对映异构体(包括顺式/反式异构体)的所有比例的混合物。式I化合物中包含的不对称中心(例如在未取代或取代的烷基中)都可彼此独立地具有S构型或R构型。本发明涉及对映异构体(包括左旋对映体和右旋对映体)，其呈对映异构体纯的形式和对映异构体基本纯的形式(例如，两种对映异构体的摩尔比为99:1或更大)和呈外消旋体形式和呈两种对映异构体的所有比例的混合物形式。本发明还涉及非对映异构体，其呈非对映异构体纯的形式和非对映异构体基本纯的形式和呈两种或更多种非对映异构体的所有比例的混
合物形式。本发明还包括式I化合物的所有顺式/反式异构体，其呈纯的形式和基本纯的形式(例如顺式/反式异构体的摩尔比为99:1或更大)和呈顺式异构体和反式异构体的所有比例混合物形式。顺/反异构可出现在取代的环中。如果需要，单独的立体异构体可如下制备：
根据常规方法对混合物进行拆分，例如通过色谱法或结晶，或在合成中使用立体化学均一的起始化合物，或通过立体选择性反应。任选地，可在分离立体异构体前进行衍生化。立体异构体的混合物的分离可在式I化合物的阶段进行或在合成过程中的中间体的阶段进行。
本发明还包括式I化合物的所有互变异构形式。
[0186] 式I化合物的生理学上可接受的盐(包括可药用盐)通常包括无毒盐组分。它们可包含无机盐组分或有机盐组分。上述盐可例如由包含酸性基团(例如羧基(羟基羰基或HO-C(O)-))的式I化合物和无毒的无机或有机
碱形成。合适的碱为例如碱
金属化合物或碱土金属化合物(如氢氧化钠、氢氧化
钾、碳酸钠或
碳酸氢钠)或氨、有机氨基化合物和氢氧化季铵。用于制备盐的式I化合物与碱的反应通常根据常规方法在溶剂或稀释剂中进行。因此，酸性基团的盐的实例为钠盐、
钾盐、镁盐、
钙盐或铵盐，所述铵盐也可在氮原子上带有一个或多个有机基团。包含碱性基团即可质子化基团(例如氨基或碱性杂环)的式I化合物可以以其与生理学上可接受的酸形成的
酸加成盐的形式存在，例如以与以下酸形成的盐的形式存在：
盐酸、
氢溴酸、
磷酸、
硫酸、乙酸、苯
甲酸、甲磺酸、
对甲苯磺酸，所述酸加成盐通常可根据常规方法在溶剂或稀释剂中通过式I化合物与酸反应来制备。如果式I化合物在分子中同时包含酸性和碱性基团，则本发明除了所提及的盐形式之外还包括内盐(内铵盐或两性离子类化合物)。本发明还包括式I化合物的所有以下盐，所述盐因生理学耐受性低而不适于直接用作药物，但适于作为中间体而用于化学反应或用于制备生理学上可接受的盐(例如通过阴离子交换或阳离子交换)。本发明还包括式I化合物和它们的盐的所有溶剂化物，包括生理学上可接受的溶剂化物，例如水合物，即与水的加合物，以及与醇的加合物，所述醇例如(C1-C4)-烷醇，以及活性
代谢物；和式I化合物的前药，即在体外可能不必然显示出药理活性但在体内转化为药理活性的式I化合物的化合物，例如通过代谢水解而转化为式I化合物的化合物，如其中羧基以酯化形式或酰胺形式存在的化合物。
[0187] 本发明主题是所有式I化合物，其中任意一个或多个结构要素，例如基团、取代基和数值如各要素的任一具体实施方案或定义所
指定，或具有本文提及的各要素的实例中的一种或多种具体含义，其中所述要素的1个或多个具体实施方案和/或定义和/或具体含义的组合也是本发明主题。所述式I化合物、所有它们的立体异构形式和任意比例的立体异构形式混合物，以及它们的生理学上可接受的盐，以及它们中任一者的生理学上可接受的溶剂化物，也是本发明主题。
[0188] 本发明主题还为式I化合物，其选自本文公开的任意具体式I化合物，或为本文公开的任一具体式I化合物，无论其作为游离化合物和/或具体的盐而公开；或为其生理学上可接受的盐或上述任意者的生理学上可接受的溶剂化物，其中所述式I化合物的任意立体异构形式或任意比例的立体异构形式的混合物均为本发明主题。
[0189] 本发明另一主题是新的起始化合物和所述式I化合物的合成中形成的中间体，它们的任意立体异构形式或任意比例的立体异构形式的混合物，以及它们的盐，以及它们的任一者的溶剂化物，以及它们的作为合成中间体或起始化合物的用途。所有的一般释义、实施方案的说明和数字的定义以及关于所述式I化合物上述给出的基团相应地适用于所述中间体和起始化合物。本发明主题尤其为在本文描述的新的具体起始化合物和中间体。独立地，无论它们描述为游离化合物和/或具体的盐，它们都为本发明主题同时为游离化合物的形式及其它们的盐的形式，此外，如果描述为具体盐，其为该具体盐的形式。
[0190] 所述式I化合物抑制组织蛋白酶A，在如下所述的药理学试验和本领域技术人员熟知的其它试验中证实。所述式I化合物和它们的生理学上可接受的盐和溶剂化物因此为有价值的药物活性化合物。所述式I化合物和它们的生理学上可接受的盐和溶剂化物可用于治疗：心血管疾病，例如心力衰竭(包括收缩性心力衰竭、舒张性心力衰竭、糖尿病性心力衰竭和射血残留性心力衰竭)、心肌症、心肌梗塞、左心室功能不全(包括心肌梗塞后左心室功能不全)、心脏肥大、心肌重构(包括梗死后或
心脏手术后心肌重构)、
心脏瓣膜病、血管肥厚、血管重构(包括血管硬化)、高血压(包括肺高血压、
门静脉高血压、收缩期高血压)、动脉粥样硬化、周围动脉闭塞性疾病(PAOD)、
再狭窄、血栓和血管通透性障碍、
局部缺血和/或
再灌注损伤(包括心脏的局部缺血和/或再灌注损伤和
视网膜的局部缺血和/或再灌注损伤)；炎症和炎性疾病，例如类
风湿性关节炎和骨关节炎；肾病，例如肾
乳头坏死和肾衰竭包括局部缺血/再灌注后肾衰竭；肺疾病，例如囊胞性纤维症、慢性支气管炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、哮喘、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、呼吸道感染和肺癌；免疫性疾病；糖尿病并发症，包括糖尿病性肾病和糖尿病性心肌症；纤维增生性疾病，例如肺纤维化(包括特发性肺纤维化)、心肌纤维化、血管纤维化、血管周围纤维化、肾脏纤维化(包括肾小管间质纤维化)、纤维性
皮肤病症(包括瘢痕瘤形成)；胶原性疾病和硬皮病；以及肝纤维化、肝病，例如肝硬化；疼痛，例如神经病理性疼痛、糖尿病性疼痛和炎症痛；黄斑变性、神经变性疾病或精神疾病或用于心肌保护包括心肌梗塞后心肌保护和心脏外科手术后心肌保护；或例如用于肾功能保护。所述式I化合物和它们的生理学上可接受的盐和溶剂化物可用作利尿剂(单独治疗或与已有利尿剂组合)。所述式I化合物和它们的生理学上可接受的盐和溶剂化物也可用于治疗和/或
预防心房颤动。疾病的治疗可被理解为
机体的现存病理改变或障碍或现存症状的治疗，目的在于减轻、缓解或治愈，以及在易感和需要该预防的人或动物中预防或防止机体的病理改变或障碍或症状，目的在于预防或抑制它们的出现，或在出现时使之减弱。
例如，在由于他们的病史而易感心肌梗塞的病人中，通过预防或防止性药物治疗，可防止心肌梗塞的出现或复发或使其程度降低或后遗症减少，或在易感哮喘发作的病人中，通过预防或防止性药物治疗，可防止所述发作或使其严重性降低。疾病的治疗可同时为急性情况和慢性情况。所述式I化合物的功效可在下面描述的药理学试验和其它本领域技术人员熟知的试验中证实。
[0191] 所述式I化合物和它们的生理学上可接受的盐和溶剂化物因此可用于动物，尤其是哺乳动物尤其人类，以其本身或互相的混合物或其药物组合物的形式用作药物或药品。
本发明主题也为所述式I化合物和它们的生理学上可接受的盐和溶剂化物作为药物、以及药物组合物和药品的用途，所述药物包含有效量的至少一种式I化合物和/或其生理学上可接受的盐和/或溶剂化物其中作为活性成分，以及药理可接受的载体，即一种或多种药理无害的或无危险的载剂和/或赋形剂，以及任选地一种或多种其它药物活性化合物。本发明主题也为所述式I化合物和它们的生理学上可接受的盐和溶剂化物在用于治疗上述或下述提到的疾病中的用途，包括治疗任一提到的疾病，例如治疗心力衰竭、心肌梗塞、心脏肥大、糖尿病性肾病、糖尿病性心肌症、心肌纤维化或局部缺血和/或再灌注损伤，或用于心肌保护，所述式I化合物和它们的生理学上可接受的盐和溶剂化物在制备用于治疗上述或下述提到的疾病的药物中的用途，包括治疗任一提到的疾病，例如治疗心力衰竭、心肌梗塞、心脏肥大、糖尿病性肾病、糖尿病性心肌症、心肌纤维化或局部缺血和/或再灌注损伤，或用于心肌保护，其中所述疾病的治疗包含它们的如上述提到的治疗和预防，以及它们在制备用于抑制组织蛋白酶A的药物中的用途。本发明主题也为治疗上述或下述提到的疾病的方法，包括治疗任一提到的疾病，例如治疗心力衰竭、心肌梗塞、心脏肥大、糖尿病性肾病、糖尿病性心肌症、心肌纤维化或局部缺血和/或再灌注损伤，或用于心肌保护，其包含向需要其的人或动物
给药有效量的至少一种式I化合物和/或其生理学上可接受的盐和/或溶剂化物。所述式I化合物和药物组合物和包含其的药品可肠道给药，例如通过口服、舌下或直肠给药，
肠胃外给药，例如通过静脉、肌内、皮下或腹膜内注射或输注，或通过另一类型给药，例如局用、经皮、透皮、关节内或眼部给药。
[0192] 所述式I化合物和它们的生理学上可接受的盐和溶剂化物还可与其它药物活性化合物组合使用，其中在所述组合使用中，所述式I化合物和/或它们的生理学上可接受的盐和/或溶剂化物和一种或多种其它药物活性化合物可存在于一个相同药物组合物中，或用于分别、同时或相继给药的两个或更多个药物组合物中。所述其它药物活性化合物的实例为利尿剂、促水排泄药、血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂、血管紧张素受体阻断剂、肾素抑制剂、β阻断剂、地高辛、
醛固
酮受体拮抗剂、NO供体、
硝酸盐、肼屈嗪、肌力剂(ionotropes)、抗利尿
激素受体拮抗剂、可溶性的
鸟苷酸环化酶激活剂、
他汀类药物、过氧化物酶体增殖子-激活受体-α(PPAR-α)激活剂、过氧化物酶体增殖子-激活受体-γ(PPAR-γ)激活剂、罗格列酮、吡格列酮、二甲双胍、磺酰脲、胰高血糖素样肽1(GLP-1)激动剂、二肽基肽酶IV(DPPIV)抑制剂、胰岛素、抗
心律失常药、内皮素受体拮抗剂、钙拮抗剂、磷酸二酯酶抑制剂、5型磷酸二酯酶(PDE5)抑制剂、因子II/因子IIa抑制剂、因子IX/因子IXa抑制剂、因子X/因子Xa抑制剂、因子XIII/因子XIIIa抑制剂、肝素、糖蛋白IIb/IIIa拮抗剂、P2Y12受体拮抗剂、氯吡格雷、香豆素、环氧合酶抑制剂、乙酰水杨酸、RAF激酶抑制剂和p38丝裂原-激活的蛋白激酶抑制剂。本发明主题也为本文公开的任一种或多种所述式I化合物和它们的生理学上可接受的盐和溶剂化物，与任一种或多种(例如一种或两种)提到的其它药物活性化合物的所述组合使用。
[0193] 根据本发明药物组合物和药品通常含有从约0.5至约90重量％的式I化合物和/或生理学上可接受的盐和/或溶剂化物，以及所述式I的活性成分和/或它的生理学上可接受的盐和/或溶剂化物的含量通常为从约0.2mg到约1.5g，尤其是从约0.2mg到约1g，尤其是从约0.5mg到约0.5g，例如从约1mg到约0.3g，以每单位
剂量计。取决于药物组合物的类型和其它具体情况，用量可偏离所示剂量。该药物组合物和药品产物的生产可以以本身已知的方法进行。对此，将所述式I化合物和/或它们的生理学上可接受的盐和/或溶剂化物与一种或多种固体或液体载剂和/或赋形剂一起混合，若需要也可与一种或多种其它药物活性化合物组合，例如上述提到那些，以及形成剂量和给药所合适的形式，然后其可用于人药或兽药。
[0194] 作为媒介物(其也可被看作是填充剂或膨胀剂)及赋形剂，是不以不希望的方式与所述式I化合物反应的合适的有机和无机物质。可含于药物组合物和药品中的赋形剂或添加剂类型的实例，可提及
润滑剂、
防腐剂、
增稠剂、稳定剂、崩解剂、湿润剂、获得储蓄效应的
试剂、乳化剂、盐(例如影响渗透压的盐)、缓冲物质、
着色剂、
调味剂和芳香物质。媒介物和赋形剂的实例为水、
植物油、蜡、醇(例如
乙醇、异丙醇、1,2-丙二醇、苄醇、甘油、多元醇、聚乙二醇或聚丙二醇)、三乙酸甘油、聚乙烯吡咯烷酮、凝胶、
纤维素、碳水化合物(例如乳糖或
淀粉如玉米淀粉)、
氯化钠、
硬脂酸及其盐(例如硬脂酸镁)、滑石、羊毛脂、凡士林，或其混合物，例如生理盐水，或水与一种或多种
有机溶剂的混合物，例如水与醇的混合物。对于口服和直肠使用，可以使用剂型例如片剂、
薄膜包衣片、糖衣片、颗粒剂、硬和软明胶胶囊、栓剂、溶液剂(包括油性、醇性或水性溶液剂)、糖浆剂、汁剂(juice)或滴剂，以及混悬液或乳剂。对于肠胃外使用，可以使
用例如通过注射或输注，剂型例如溶液剂，例如水性溶液剂。对于局部使用，可以使用剂型例如
软膏剂、乳膏剂、糊剂、洗剂、凝胶剂、喷雾剂、
泡沫剂、气雾剂、溶液剂或粉末剂。其它合适的剂型为，例如，埋植剂和贴剂和采用吸入的形式。所述式I化合物和它们的生理学上可接受的盐还可被冻干且所得到的冻干物可用于例如生产注射成分。
尤其对于局部使用，脂质体组分也是合适的。药物组合物和药品也可含有一种或多种其它活性成分，例如一种或多种维生素。
[0195] 通常，所述式I化合物的剂量取决于具体案例的情况下并由医师根据通常惯例和操作调节。取决于例如给药的式I化合物及其效能和作用时间、个别症状的本质和严重性、性别、年龄、体重和受治疗的人或动物的个别响应性、治疗是否为急性或慢性或预防性，或是否有其它药物活性化合物与式I化合物一同给药。一般地，如果对体重约75kg的成人给药，给药从约0.1mg到约100mg每公斤每天，尤其从约1mg到约20mg每公斤每天，例如从约1mg到约10mg每公斤每天(在各情况下，体重以mg/kg计)的剂量。可给药每日剂量，其为单剂量或分为数个个别剂量(例如2、3或4个个别剂量)的形式。还可持续给药，例如通过持续注射或输注。依据个体表现的特殊情况，有必要上调或下调以上指明的剂量。
[0196] 所述式I化合物不仅在人药和兽药中作为药物活性化合物，其还可用作生物化学研究的辅助或作为科学工具或用于诊断，例如若希望抑制组织蛋白酶A，其可用于生物学样本的体外诊断。所述式I化合物和它们的盐还可用作中间体，例如用于制备其它药物活性物质。
[0198] 缩写
[0199] ACN 乙腈
[0200] DCM 二氯甲烷
[0201] DMF N,N-二甲基甲酰胺
[0202] DMSO 二甲基亚砜
[0203] EA 乙酸乙酯
[0204] EDIA N-乙基-二异丙胺
[0205] FA 甲酸
[0206] MOH 甲醇
[0207] NEM N-乙基-吗啉
[0208] TFA 三氟乙酸
[0209] THF 四氢呋喃
[0210] TOTU O-(氰基(乙氧基羰基)亚甲基氨基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓
[0212] 当含有碱性基团的实施例化合物通过制备型高效液相色谱(HPLC)在反相(RP)柱材料上纯化时，通常洗脱液为含有三氟乙酸的水和含有三氟乙酸的乙腈的梯度混合物，这些化合物部分地以它们与三氟乙酸的酸加成盐的形式存在，取决于例如
蒸发或冻干条件等后处理的细节。在实施例化合物的名称及结构式中，不具体指明其含有的三氟乙酸。同样得到其它实施例化合物的酸性组分，其为酸加成盐的形式，通常不在名称和结构式中指明。
[0213] 所制备的化合物通常通过
光谱数据和色谱数据表征，尤其是质谱(MS)和HPLC保留时间(Rt；以分钟计)，其通过分析型HPLC/MS联用(LC/MS)，和/或
核磁共振(NMR)光谱获得表征。除非另有说明，否则1H-NMR光谱在500MHz，在298K以D6-DMSO作为溶剂记录。在NMR表征中，由图示描绘的光谱图确定化学位移δ(ppm)、氢原子(H)的数量，以及峰的多重性(s：单峰，d：双重峰，dd：两组双重峰，t：三重峰，q：四重峰，m：多重峰)。在MS表征中，通常给出了分子离子[M]峰的
质量数(m/z)，例如[M+]，或相关离子例如离子[M+1]，例如[(M+1)+]，即质子化的分子离子[(M+H)+]，或离子[M-1]，例如[(M-1)￣]，即去质子化的分子离子[(M-H)￣]，其取决于所用
离子化方法形成。通常，离子化方法为电喷雾离子化(ES)。使用的LC/MS方法的具体情况如下所述。
[0214] 方法LC1
[0215] 柱：Waters UPLC BEH C18,50×2.1mm,1.7μm；流速：0.9ml/min；55℃；洗脱剂A:水+0.05％FA；洗脱剂B:ACN+0.035％FA；梯度：98％A+2％B至5％A+95％B，2.0分钟内；然后5％A+95％B，0.6分钟；然后95％A+5％B，0.1分钟内；然后95％A+5％B，0.3分钟；MS离子化方法：ES+
[0216] 方法LC2
[0217] 柱：Waters XBridge C18,50×4.6mm,2.5μm；流速：1.7ml/min；40℃；洗脱剂A:水+0.05％TFA；洗脱剂B:ACN+0.05％TFA；梯度：95％A+5％B，0.2分钟；然后5％A+95％B，2.2分钟内；然后5％A+95％B，0.8分钟；然后95％A+5％B，0.1分钟内；然后95％A+5％B，0.7分钟；
+
MS离子化方法：ES
[0218] 方法LC3
[0219] 柱：Waters XBridge C18,50×4.6mm,2.5μm；流速：1.7ml/min；40℃；洗脱剂A:水+0.1％TFA；洗脱剂B:ACN+0.1％TFA；梯度：97％A+3％B，0.2分钟；然后40％A+60％B，3.5分钟内；然后2％A+98％B，0.5分钟内；然后2％A+98％B，0.5分钟；然后97％A+3％B，0.2分钟内；
然后97％A+3％B，0.3分钟；MS离子化方法：ES+
[0220] 试验
[0221] 一般而言，式I化合物根据以下一般方案中的一种合成：
[0222]
[0223] 方案A和一般操作A：
[0224] 将0.3mmol硼酸置于反应管中，加入溶于2ml DMF的0.2mmol中间体A和溶于1ml水的0.8mmol Cs2CO3并将反应管用氩气
净化。加入0.02mmol Pd[PPh3]Cl2后，将反应混合物在
95℃加热过夜。
[0225] 将反应混合物用2N HCl调节为pH＝5，加入15ml EtOAc和5ml 5％NaCl溶液，分离有机相并经Na2SO4干燥。将溶剂
真空除去并使粗产物进行HPLC色谱法。收率范围为10至95％。
[0226]
[0227] 方案B和一般操作B
[0228] 将0.3mmol硼酸置于反应管中，加入溶于2ml DMF的0.2mmol中间体D和溶于1ml水的0.8mmol Cs2CO3并将反应管用氩气净化。加入0.02mmol Pd[PPh3]Cl2后，将反应混合物在
95℃加热过夜。
[0229] 将反应混合物用2N HCl调节为pH＝5，加入15ml EtOAc和5ml 5％NaCl溶液，分离有机相并经Na2SO4干燥。将溶剂真空除去，将粗产物溶于2ml EtOH并加入0.5ml 1N NaOH。在室温搅拌过夜后，除去溶剂并使分离出的物质进行HPLC色谱法。收率范围为10至95％
[0230] 上述Suzuki反应可通过本领域技术人员熟知的以及描述于例如M.Mora et.al.Current Organic Chemistry 2012,1128-1150中的所有操作来进行。
[0231] 可使用除了DMF之外的溶剂，如异丙醇、甲苯、二噁烷、THF、乙腈、水和它们的任意组合，反应也可使用
离子液体。钯盐和配体的任意组合或任意现有的钯催化剂系统可应用于这些反应中。也可使用
聚合物结合的Pd-催化剂或聚合物-结合的配体。可使用作为碱的Na2CO3、K2CO3、AgCO3或CsF来替代Cs2CO3。反应
温度的范围为40℃至150℃且可通
过热加热或通过使用
微波反应器达5分钟至48小时的时间而达到。
[0232] 在方案B中，可分离来自第一步的Suzuki偶联的产物，然后通过酯水解形成最终产物；或可以一锅法操作同时进行两个反应而不分离酯物质。可使用本领域技术人员已知的任意其它酯来替代方案B中的乙酯。可使用对于Suzuki反应的任意其它适当的离去基团来替代方案B中的三氟甲磺酸酯基。
[0233] 中间体A根据一般方案C合成，其通过将金属化的五元杂环F加入至芳族酸衍生物E中，E可为芳族酸酯、芳族酰氯或芳族羧酸的Weinreb酰胺E。使所得的酮G进行Wittig反应并将Wittig缩合产物H通过使用Zn/HOAc而还原并将酯残基转化为游离酸A。
[0234] 在金属化步骤中，可使用Grignard试剂如MeMgBr、异丙基-MgBr或异丙基-MgCl*LiCl替代n-BuLi、t-BuLi或MeLi。为了便于加入至中间体E，可需要进行金属转移为另外的
金属离子如
铜或锌。
[0235] 对于Wittig反应，可使用其它强碱替代NaH，如NaOtBu或KOtBu或磷腈碱。且可使用Zn在含水HCl(含水HCl的浓度范围为0.01M至12M)中或在稀H2SO4中进行还原。
[0236] 中间体E可为可商购得到的或可由可商购得到的羧酸经一步制备。
[0237]
[0238] 方案C
[0239] 在某些情况下，基团Y可表示形成芳族醛中间体E-H的氢原子。加入金属化的杂环F后，可通过使用MnO2或其它
氧化剂如KMnO4、CrO3和H2O2将相应的醇I氧化为预期的中间体G。
[0240]
[0241] 方案D
[0242] 在方案C中所述的合成的一种可替代的方法中，化学构件E中的残基Hal可被苄基氧基残基替代，从而得到化学构件M。当使用Pd/C和H2进行Wittig缩合产物O的CC-双键的还原时同
时移去苄基残基。将新形成的芳族羟基转化为三氟甲磺酸酯，得到中间体P，其为对于钯催化的交联的适当起始物质。
[0243] 起始物质M可由具有游离羟基取代基的芳族羧酸酯如J获得。羟基取代基用苄基溴、苄基氯或苄基碘或能够进行与芳族羟基进行亲核取代反应的任意其它苄基衍生物进行烷基化。取决于中间体L对金属化反应的
反应性，L可通过本领域技术人员熟知的标准操作转化为相应的衍生物M。
[0244]
[0245] 方案E
[0246] 合成中间体P1：
[0247] 3-(5-甲基噻唑-2-基)-3-(6-(三氟甲基磺酰基氧基)吡啶-2-基)丙酸乙酯
[0248]
[0249] 步骤1：合成6-羟基吡啶-2-羧酸甲酯
[0250]
[0251] 在室温向6-羟基吡啶-2-羧酸(13.0g,93.5mmol)在甲醇(150mL)中的溶液中加入HCl在二噁烷中的溶液(4N,10mL)。将所得的混合物在室温搅拌48小时。将反应混合物浓缩得到6-羟基吡啶-2-羧酸甲酯(13g,90％)，其为白色固体。
[0252] 合成6-(苄基氧基)吡啶-2-羧酸甲酯
[0253]
[0254] 将6-羟基吡啶-2-羧酸甲酯(3.06g,20.0mmol)、(溴甲基)苯(6.84g,40.0mmol)和碳酸
银(11g,40mmol)在甲苯(150mL)中的混合物在80℃搅拌过夜。冷却并过滤后，将滤液减压浓缩。将残留物经
硅胶柱色谱法纯化(用石油醚/乙酸乙酯(20:1)洗脱)得到6-(苄基氧
基)吡啶-2-羧酸甲酯(2.6g,53％)，其为白色固体。
[0255] 合成(6-(苄基氧基)吡啶-2-基)(5-甲基噻唑-2-基)甲酮
[0256]
[0257] 历时20分钟在-78℃在氮气气氛下向正丁基锂(2.5M在己烷中,16mL,40mmol)在无水THF(120mL)中的溶液中逐滴加入5-甲基噻唑(4.17g,40mmol)。将混合物在-78℃搅拌2小时并历时20分钟逐滴加入6-(苄基氧基)吡啶-2-羧酸甲酯(4.7g,20mmol)在THF(30mL)中的溶液。在-78℃搅拌1小时后，将混合物用HCl(1N)
酸化为pH约6并用乙酸乙酯萃取。将有机层浓缩，然后用MTBE稀释。将白色析出物经过滤收集。浓缩剩余的滤液。将残留物经硅胶色谱法纯化(用石油醚/乙酸乙酯(10/1)洗脱)。得到总计6.2g(6-(苄基氧基)吡啶-2-基)(5-甲基噻唑-2-基)甲酮(85％收率)，其为白色固体。
[0258] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.00(d,J＝7.2Hz,1H),7.89(s,1H),7.82(t,J＝8.0Hz,1H),7.51-7.36(m,5H),7.01(d,J＝8.0Hz,1H),5.56(s,2H),2.60(s,3H)。
[0259] 合成(Z)-3-(6-(苄基氧基)吡啶-2-基)-3-(5-甲基噻唑-2-基)
丙烯酸乙酯
[0260]
[0261] 在-78℃向NaH(60％,1.3g,33mmol)在无水THF(200mL)中的混悬液中加入2-(二乙氧基磷酰基)乙酸乙酯(7.5g,33mmol)。在-78℃搅拌1小时后，历时30分钟逐滴加入(6-(苄基氧基)吡啶-2-基)(5-甲基噻唑-2-基)甲酮(3.47g,11.2mmol)在THF(30mL)中的溶液。在-
20至-30℃搅拌2小时后，将混合物用HCl(0.5N)酸化，然后用乙酸乙酯萃取。将有机层干燥并浓缩。将残留物用MTBE和石油醚洗涤得到(Z)-3-(6-(苄基氧基)吡啶-2-基)-3-(5-甲基噻唑-2-基)丙烯酸乙酯(6.2g,85％收率)，其为白色固体。
[0262] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.58-7.25(m,8H),6.80(d,J＝8.4Hz,1H),6.75(d,J＝7.2Hz,1H),5.44(s,2H),4.15(q,J＝3.2Hz,2H),2.54(s,3H),1.21(t,J＝3.2Hz,3H).
[0263] 合成3-(6-羟基吡啶-2-基)-3-(5-甲基噻唑-2-基)丙酸乙酯
[0264]
[0265] 将(Z)-3-(6-(苄基氧基)吡啶-2-基)-3-(5-甲基噻唑-2-基)丙烯酸乙酯(8.0g,21mmol)、乙酸(1.5mL)、H2O(3mL)和Pd/C(10％,4g)在乙醇(90mL)和THF(60mL)中的混合物在氢气气氛下在室温搅拌过夜。经
硅藻土填料过滤并蒸发溶剂后，将残留物用MTBE和石油醚洗涤得到产物(3g)，其为白色固体。将滤液与TFA(20mL)混合并将所得的混合物回流2小时。冷却后，将混合物用
水处理并用乙酸乙酯萃取。将有机层干燥并浓缩。将残留物用MTBE和石油醚洗涤得到3-(6-羟基吡啶-2-基)-3-(5-甲基噻唑-2-基)丙酸乙酯(1.4g,总计
71％)，其为白色固体。
[0266] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.40(s,1H),7.34-7.30(m,1H),6.46(dd,J＝9.2,1.2Hz,1H),6.14(d,J＝6.0Hz,1H),4.63(t,J＝7.2Hz,1H),4.13-4.07(m,2H),3.25-3.19(m,1H),
3.05-2.97(m,1H),2.43(s,3H),1.19(t,J＝3.2Hz,3H)。
[0267] 合成3-(5-甲基噻唑-2-基)-3-(6-(三氟甲基磺酰基氧基)吡啶-2-基)丙酸乙酯
[0268]
[0269] 历时30分钟在-78℃向3-(6-羟基吡啶-2-基)-3-(5-甲基噻唑-2-基)丙酸乙酯(3.45g,11.8mmol)在DCM(200mL)中的溶液中逐滴加入三氟甲磺酸酐(5.00g,17.7mmol)和
DIPEA(5.00mL,23.6mmol)。将所得的混合物在-78℃搅拌30分钟并温热至室温过夜。将混合物冷却至0℃并用水(100mL)处理。将有机层经Na2SO4干燥并浓缩。将油状残留物用乙醚处理并将固体滤出。将滤液浓缩得到3-(5-甲基噻唑-2-基)-3-(6-(三氟甲基磺酰基氧基)吡啶-
2-基)丙酸乙酯(4.6g,93％)，其为棕色油状物。
[0270] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.83(t,J＝7.6Hz,1H),7.42(d,J＝7.6Hz,1H),7.33(s,1H),7.05(d,J＝8.4Hz,1H),5.02-4.99(m,1H),4.08(q,J＝3.2Hz,2H),3.41-3.35(m,1H),
3.22-3.16(m,1H),2.41(s,3H),1.18(t,J＝3.2Hz,3H)。
[0271] 合成中间体P2：
[0272] 3-(5-甲基噻唑-2-基)-3-(5-(三氟甲基磺酰基氧基)吡啶-3-基)丙酸乙酯
[0273]
[0274] 合成5-羟基烟酸甲酯
[0275]
[0276] 历时5分钟向5-羟基烟酸(10g,71.9mmol)在MeOH(100mL)中的搅拌的溶液中逐滴加入亚磺酰氯(1mL)。将所得的混合物在室温搅拌过夜。向所得的溶液中加入100mL
NaHCO3。将析出物过滤并用MeOH洗涤几次得到8.5g(75％收率)，其无需进一步纯化即用于下一步中。
[0277] 合成5-(苄基氧基)烟酸甲酯
[0278]
[0279] 历时5分钟在0℃向5-羟基烟酸甲酯(8.5g,55.6mmol)和K2CO3(11.5g,83.3mmol)在DMF(20mL)中的搅拌的溶液中逐滴加入(溴甲基)苯(8mL,66.7mmol)。将所得的混合物在室温搅拌2小时。将混合物用水(100mL)淬灭并用EA(100mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥。过滤并蒸发溶剂后，将残留物经硅胶柱色谱法纯化(用石油醚/乙酸乙酯(4:1)洗脱)得到5-(苄基氧基)烟酸甲酯(4g,30.7％)，其为黄色油状物。
[0280] 合成(5-(苄基氧基)吡啶-3-基)(5-甲基噻唑-2-基)甲酮
[0281]
[0282] 历时10分钟在-78℃在氮气气氛下向5-甲基噻唑(3.3g,33mmol)在无水THF(20mL)中的搅拌的混合物中逐滴加入正丁基锂(33mmol,13.2mL在己烷中的溶液)。将混合物在-78℃和-60℃之间搅拌1.5小时，然后冷却至-78℃。历时10分钟逐滴加入5-(苄基氧基)烟酸甲酯(4.0g,16.5mmol)在THF(10mL)中的溶液。将所得的混合物在-78℃搅拌30分钟并在搅拌下温热至室温过夜。将混合物冷却至0℃并用水(50mL)处理。将所得的混合物用HCl(1N)调节为pH约6并用EA(100mL×3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将残留物经硅胶柱色谱法纯化(用石油醚/EtOAc(3:1)洗脱)得到(5-(苄基氧基)吡啶-3-基)(5-甲基噻唑-2-基)甲酮(3.2g,42％)，其为黄色凝胶状物。
[0283] 合成(Z)-3-(5-(苄基氧基)吡啶-3-基)-3-(5-甲基噻唑-2-基)丙烯酸乙酯
[0284]
[0285] 在-78℃向NaH(60％,1.2g,30.9mmol)在无水THF(20mL)中的混悬液中加入2-(二乙氧基磷酰基)乙酸乙酯(6.9g,30.9mmol)。在-78℃搅拌1小时后，历时30分钟逐滴加入(5-(苄基氧基)吡啶-3-基)(5-甲基噻唑-2-基)甲酮(3.2g,10.3mmol)在THF(5mL)中的溶液。将混合物在-78℃搅拌30分钟，然后在搅拌下温热至室温过夜。将混合物冷却至0℃并用水
(50mL)处理，将pH值用HCl(0.5N)调节为6并用EA(50mL×3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将残留物经硅胶色谱法纯化(用石油醚/EtOAc(3:1)洗脱)得到(Z)-
3-(5-(苄基氧基)吡啶-3-基)-3-(5-甲基噻唑-2-基)丙烯酸乙酯(3.1g,80.0％)，其为黄色凝胶状物。
[0286] 合成3-(5-羟基吡啶-3-基)-3-(5-甲基噻唑-2-基)丙酸乙酯
[0287]
[0288] 在氢气气氛下向(Z)-3-(5-(苄基氧基)吡啶-3-基)-3-(5-甲基噻唑-2-基)丙烯酸乙酯(3.1g,8.2mmol)、HOAc(1.0mL)和H2O(2.0mL)在EtOH(20mL)和THF(10mL)中的混合物中加入Pd/C(10％,无水,820mg)。将混合物在室温在氢气气氛下搅拌48小时。经硅藻土填料过滤并蒸发溶剂后，将残留物经硅胶色谱法纯化(用石油醚/EtOAc(3:1)洗脱)得到3-(5-羟基吡啶-3-基)-3-(5-甲基噻唑-2-基)丙酸乙酯(2.2g,92％)，其为黄绿色凝胶状物。
[0289] 合成3-(5-甲基噻唑-2-基)-3-(5-(三氟甲基磺酰基氧基)吡啶-3-基)丙酸乙酯
[0290]
[0291] 历时5分钟在-78℃向3-(5-羟基吡啶-3-基)-3-(5-甲基噻唑-2-基)丙酸乙酯(2.2g,7.5mmol)和Et3N(1.52g,15.1mmol)在DCM(20mL)中的搅拌的溶液中逐滴加入三氟甲磺酸酐(2.3g,15.1mmol)。将所得的混合物在-78℃搅拌30分钟并在搅拌下温热至室温过
夜。将混合物冷却至0℃，用水(50mL)处理并用DCM(50mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。将残留物经硅胶柱色谱法纯化(用石油醚/乙酸乙酯(4:
1)洗脱)得到3-(5-甲基噻唑-2-基)-3-(5-(三氟甲基磺酰基氧基)吡啶-3-基)丙酸乙酯
(900mg,28.0％)，其为黄色油状物。
[0292] 1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.71(d,J＝1.2Hz,1H),8.58(d,J＝2.4Hz,1H),7.96(s,1H),7.43(s,1H),5.02(t,1H),4.10-4.05(m,2H),3.43-3.37(m,1H),3.22-3.15(m,1H),
2.45(s,3H),1.18-1.14(m,3H)。
[0293] 合成中间体P3：
[0294] 3-(2-甲氧基-5-三氟甲磺酰基氧基-苯基)-3-(5-甲基-噻唑-2-基)丙酸乙酯
[0295]
[0296] 5-(苄基氧基)-2-羟基
苯甲酸甲酯
[0297]
[0298] 历时30分钟向K2CO3(32.8g,238mmol)在甲醇(180mL)和CHCl3(350mL)中的回流混悬液中逐滴加入2,5-二羟基苯甲酸甲酯(10.0g,59.5mmol)和溴甲基苯(7.10mL,59.5mmol)在甲醇/CHCl3(50mL/25mL)中的混合物。将所得的混合物再回流搅拌4小时。冷却并过滤后，将
滤饼用CHCl3(20mL)洗涤。将合并的滤液减压浓缩。将残留物重新溶于CHCl3(200mL)中，用HCl(1N)(100mL×2)洗涤。然后将有机相用盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩。将残留物经硅胶柱色谱法纯化(用石油醚/EtOAc(8:1)洗脱)得到5-(苄基氧基)-2-羟基苯甲
酸甲酯(10.6g,69.0％)，其为白色固体。
[0299] 1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ10.09(s,1H),7.43(d,J＝7.2Hz,2H),7.40-7.36(m,2H),7.34-7.32(2H,m),7.23(dd,J＝9.2,3.2Hz,1H),6.93(d,J＝9.2Hz,1H),5.06(s,2H),
3.88(s,3H)。NOESY也显示出预期产物。
[0300] 5-(苄基氧基)-2-甲氧基苯甲酸甲酯
[0301]
[0302] 历时5分钟向5-(苄基氧基)-2-羟基苯甲酸甲酯(10.6g,41.1mmol)和K2CO3(11.3g,82.2mmol)在DMF(100mL)中的混合物中逐滴加入碘甲烷(2.60mL,49.3mmol)。将所得的混合物在室温搅拌过夜。将反应混合物倒入水(400mL)中，过滤并收集固体。将固体溶于EtOAc(300mL)中，用水(50mL)和盐水(100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩得到5-(苄基氧基)-2-甲氧基苯甲酸甲酯(10.4g,98％)，其为黄色固体。
[0303] (5-(苄基氧基)-2-甲氧基苯基)(5-甲基噻唑-2-基)甲酮
[0304]
[0305] 历时20分钟在-78℃在氮气气氛下向5-甲基噻唑(3.80g,38.2mmol)在无水THF(200mL)中的搅拌的混合物中逐滴加入正丁基锂(2.5M在己烷中,15.3mL,38.2mmol)。将混合物在-78℃和-60℃之间搅拌1.5小时，然后冷却至-78℃。历时30分钟逐滴加入5-(苄基氧基)-2-甲氧基苯甲酸甲酯(10.4g,38.2mmol)在THF(50mL)中的溶液。将所得的混合物在-78℃搅拌30分钟并在搅拌下温热至室温过夜。将混合物冷却至0℃并用水(50mL)处理。将所得的混合物用HCl(1N)调节为pH约6。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将残留物经硅胶柱色谱法纯化(用石油醚/EtOAc(3:1)洗脱)得到(5-(苄基氧基)-2-甲氧基苯基)(5-甲基噻唑-2-基)甲酮(2.5g,19％)，其为黄色凝胶状物。回收到3.0g起始物质5-(苄基氧基)-2-甲氧基苯甲酸甲酯。
[0306] 合成(Z)-3-(5-(苄基氧基)-2-甲氧基苯基)-3-(5-甲基噻唑-2-基)丙烯酸乙酯
[0307]
[0308] 在-78℃向NaH(60％,884mg,22.1mmol)在无水THF(120mL)中的混悬液中加入2-(二乙氧基磷酰基)乙酸乙酯(4.96g,22.1mmol)。在-78℃搅拌1小时后，历时30分钟逐滴加入(5-(苄基氧基)-2-甲氧基苯基)(5-甲基噻唑-2-基)甲酮(2.50g,7.37mmol)在THF(30mL)中的溶液。将混合物在-78℃搅拌30分钟，然后在搅拌下温热至室温过夜。将混合物冷却至0℃并用水(50mL)处理，将pH值用HCl(0.5N)调节为6。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将残留物经硅胶色谱法纯化(用石油醚/EtOAc(3:1)洗脱)得到(Z)-3-(5-(苄基氧基)-
2-甲氧基苯基)-3-(5-甲基噻唑-2-基)丙烯酸乙酯(1.75g,58.0％)，其为黄色凝胶状物。
[0309] 合成3-(5-羟基-2-甲氧基苯基)-3-(5-甲基噻唑-2-基)丙酸乙酯
[0310]
[0311] 在氮气气氛下向(Z)-3-(5-(苄基氧基)-2-甲氧基苯基)-3-(5-甲基噻唑-2-基)丙烯酸乙酯(4.0g,9.8mmol)、HOAc(2.0mL)和H2O(5.0mL)在EtOH(100mL)和THF(60mL)中的混合物中加入Pd/C(10％,无水,5.0g)。将混合物在室温在氢气气氛下搅拌48小时。经硅藻土填料过滤并蒸发溶剂后，将残留物经硅胶色谱法纯化(用石油醚/EtOAc(3:1)洗脱)得到3-(5-羟基-2-甲氧基苯基)-3-(5-甲基噻唑-2-基)丙酸乙酯(1.9g,60％)，其为黄绿色凝胶状物。
[0312] 3-(2-甲氧基-5-(三氟甲基磺酰基氧基)苯基)-3-(5-甲基噻唑-2-基)丙酸乙酯
[0313]
[0314] 历时30分钟在-78℃向3-(5-羟基-2-甲氧基苯基)-3-(5-甲基噻唑-2-基)丙酸乙酯(4.50g,14.0mmol)和DIPEA(4.8mL,28mmol)在DCM(150mL)中的搅拌的溶液中逐滴加入三氟甲磺酸酐(4.74g,16.8mmol)。将所得的混合物在-78℃搅拌30分钟并在搅拌下温热至室温过夜。将混合物冷却至0℃并用水(50mL)处理。将有机层用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥并浓缩。将残留物经硅胶柱色谱法纯化(用石油醚/乙酸乙酯(4:1)洗脱)得到3-(2-甲氧基-
5-(三氟甲基磺酰基氧基)苯基)-3-(5-甲基噻唑-2-基)丙酸乙酯(4.63g,73.0％)，其为黄色油状物。
[0315] 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.41(dd,J＝9.1,3.1Hz,1H),7.37(d,J＝1.2Hz,1H),7.35(d,J＝3.1Hz,1H),7.18(d,J＝9.2Hz,1H),5.07(dd,J＝8.3,7.1Hz,1H),3.99(q,J＝
7.1Hz,2H),3.86(s,3H),3.32(dd,J＝16.3,6.9Hz,1H),3.02(dd,J＝16.3,6.9Hz,1H),2.35(d,J＝1.0Hz,3H),1.08(dd,J＝9.2,5.1Hz,3H)。
[0316] 合成中间体P4：
[0317] 3-(2-甲氧基-5-三氟甲磺酰基氧基-苯基)-3-(噻唑-2-基)丙酸乙酯
[0318] 合成如针对合成中间体P3所述进行，使用1,3-噻唑替代5-甲基-1,3-噻唑作为起始物质。
[0319] 合成中间体P5
[0320] 3-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)-3-(6-(三氟甲基磺酰基氧基)吡啶-2-基)丙酸乙酯
[0321]
[0322] 6-羟基吡啶-2-羧酸甲酯
[0323]
[0324] 在室温向6-羟基吡啶-2-羧酸(13.0g,93.5mmol)在甲醇(150mL)中的溶液中加入HCl在二噁烷中的溶液(4N,10mL)。将所得的混合物在室温搅拌48小时。将反应混合物浓缩得到6-羟基吡啶-2-羧酸甲酯(13.0g,90％)，其为白色固体。
[0325] 6-(苄基氧基)吡啶-2-羧酸甲酯
[0326]
[0327] 将6-羟基吡啶-2-羧酸甲酯(3.06g,20mmol)、(溴甲基)苯(6.84g,40mmol)和碳酸银(11g,40mmol)在甲苯(150mL)中的溶液在80℃搅拌过夜。冷却并过滤并将滤液减压浓缩。
将残留物经硅胶色谱法纯化(用石油醚:乙酸乙酯＝20:1洗脱)得到6-(苄基氧基)吡啶-2-
羧酸甲酯(2.6g,53％)，其为白色固体。
[0328] 6-(苄基氧基)吡啶-2-羧酸
[0329]
[0330] 向6-(苄基氧基)吡啶-2-羧酸甲酯(6g,24.7mmol)在THF(75mL)和水(15mL)中的溶液中加入LiOH·H2O(3.12g,74mmol)。将反应溶液在室温搅拌过夜。后处理得到6-(苄基氧基)吡啶-2-羧酸(5g,100％)，其为白色泡沫状物。
[0331] [6-(苄基氧基)吡啶-2-基](5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)甲酮
[0332]
[0333] 在室温向6-(苄基氧基)吡啶-2-羧酸(2.28g,10mmol)在乙腈(20mL)中的溶液中加入SOCl2(5mL)并将反应混合物缓慢加热至回流且保持20分钟。冷却并浓缩后，向残留的酰氯中加入二氯甲烷(30mL)，随后在室温加入(N-异氰基亚氨基)三苯基膦(3.12g,10mmol)。2小时后，加入乙酸(1.2g,20mmol)，然后逐滴加入三乙胺(2.02g,20mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液。将溶液再搅拌8小时并用水淬灭。将有机层用盐水洗涤，干燥并真空浓缩。将残留物经快速柱色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯＝8；1)得到[6-(苄基氧基)吡啶-2-基](5-甲基-
1,3,4-噁二唑-2-基)甲酮(200mg,7％)，其为棕色油状物。
[0334] 3-(6-(苄基氧基)吡啶-2-基)-3-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)丙烯酸乙酯
[0335]
[0336] 将[6-(苄基氧基)吡啶-2-基](5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)甲酮(2.2g,7.5mmol)和(三苯基亚膦基)乙酸乙酯(2.6g,7.5mmol)在苯(15mL)中的混合物在100℃搅拌48小时。
将溶液蒸发并将残留物经柱色谱法纯化(硅胶,EA/PE＝1:8)得到3-(6-(苄基氧基)吡啶-2-基)-3-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)丙烯酸乙酯(2.3g,84％)，其为棕色油状物。
[0337] 3-(6-羟基吡啶-2-基)-3-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)丙酸乙酯
[0338]
[0339] 向3-(6-(苄基氧基)吡啶-2-基)-3-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)丙烯酸乙酯(2.2g,6.0mmol)在EtOH(30mL)、THF(30mL)和AcOH(1mL)中的溶液中加入Pd/C(220mg,
10％)。将系统抽空，然后用氢气回填，如此进行3次。将混合物溶液在室温在氢气气氛下搅拌过夜。将混合物过滤并将滤液真空蒸发得到3-(6-羟基吡啶-2-基)-3-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)丙酸乙酯(1.4g,84％)。
[0340] 3-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)-3-(6-(三氟甲基磺酰基氧基)吡啶-2-基)丙酸乙酯
[0341]
[0342] 将3-(6-羟基吡啶-2-基)-3-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)丙酸乙酯(1.0g,3.6mmol)和DIPEA(1.4g,10.8mmol)在DCM(40mL)中的混合物在-78℃搅拌0.5小时。然后在-
78℃逐滴加入三氟甲磺酸酐(1.5g,5.4mmol)在DCM(6mL)中的溶液。将混合物溶液在-78℃搅拌1小时，然后温热至室温过夜。将混合物真空浓缩得到残留物，将其经柱色谱法纯化(洗脱剂为12％EA在PE中的溶液)得到3-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)-3-(6-(三氟甲基磺酰
基氧基)吡啶-2-基)丙酸乙酯(1.47g,99％)，其为黄色液体。
[0343] 合成中间体P6
[0344] 3-(3-氯-5-{[(三氟甲基)磺酰基]氧基}苯基)-3-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)丙酸乙酯
[0345]
[0346] 3-氯-5-羟基苯甲酸甲酯
[0347]
[0348] 在室温向3-氯-5-羟基苯甲酸(1.72g,10mmol)在甲醇(20mL)中的溶液中加入浓H2SO4(0.5mL)。然后将所得的混合物回流6小时。将反应混合物浓缩并向残留物中加入
NaHCO3溶液和乙酸乙酯。分离有机层，干燥并浓缩得到3-氯-5-羟基苯甲酸甲酯(1.8g,
97％)，其为棕色固体，其无需进一步纯化即在下一步中使用。
[0349] 3-(苄基氧基)-5-氯苯甲酸甲酯
[0350]
[0351] 将3-氯-5-羟基苯甲酸甲酯(12.75g,68.5mmol)、(溴甲基)苯(11mL,82.2mmol)和碳酸钾(19g,137mmol)在丙酮(300mL)中的溶液回流2小时。冷却并过滤并将滤液减压浓缩。
将残留物经硅胶色谱法纯化(用石油醚:乙酸乙酯＝20:1洗脱)得到3-(苄基氧基)-5-氯苯
甲酸甲酯(18g,95％)，其为浅黄色油状物。
[0352] 3-(苄基氧基)-5-氯苯甲酸
[0353]
[0354] 在室温向3-(苄基氧基)-5-氯苯甲酸甲酯(5g,18mmol)在甲醇(60mL)和水(20mL)中的溶液中加入NaOH(2.18g,54mmol)。将混合物回流过夜。后处理得到3-(苄基氧基)-5-氯苯甲酸(4.8g,100％)，其为白色固体。
[0355] [3-(苄基氧基)-5-氯苯基](5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)甲酮
[0356]
[0357] 在室温向3-(苄基氧基)-5-氯苯甲酸(1.31g,5mmol)在乙腈(20mL)中的溶液中加入SOCl2(2.5mL)，然后缓慢加热至回流且保持20分钟。冷却并浓缩后，向残留的酰氯中加入二氯甲烷(25mL)，随后在室温加入(N-异氰基亚氨基)三苯基膦(1.51g,5mmol)。2小时后，加入乙酸(600mg,10mmol)，然后逐滴加入三乙胺(1.01g,10mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶
液。将溶液再搅拌8小时并用盐水洗涤，干燥并在旋转
蒸发器上浓缩。将残留物经快速柱色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯＝10/1)得到[3-(苄基氧基)-5-氯苯基](5-甲基-1,3,4-噁二
唑-2-基)甲酮(700mg,42％)，其为棕色油状物。
[0358] 3-(3-(苄基氧基)-5-氯苯基)-3-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)丙烯酸乙酯
[0359]
[0360] 将[3-(苄基氧基)-5-氯苯基](5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)甲酮(700mg,2.13mmol)和(三苯基亚膦基)乙酸乙酯(800mg,2.13mmol)在苯(20mL)中的溶液回流过夜。
浓缩后，将所得的残留物经快速柱色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯＝10/1至4/1)得到3-(3-(苄基氧基)-5-氯苯基)-3-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)丙烯酸乙酯(780mg,93％)，其为棕色油状物。
[0361] 3-(3-氯-5-羟基苯基)-3-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)丙酸乙酯
[0362]
[0363] 在氮气气氛下向3-(3-(苄基氧基)-5-氯苯基)-3-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)丙烯酸乙酯(700mg,1.76mmol)在乙醇(20mL)中的混合物中加入Pd/C(10％,200mg)。将混合物在室温在氢气气氛下搅拌过夜。经硅藻土填料过滤后，将滤液浓缩得到粗3-(3-氯-5-羟基苯基)-3-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)丙酸乙酯(650mg,100％)，其为黄色油状物。
[0364] 3-(3-氯-5-{[(三氟甲基)磺酰基]氧基}苯基)-3-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)丙酸乙酯
[0365]
[0366] 在-78℃向3-(3-氯-5-羟基苯基)-3-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)丙酸乙酯(600mg,2mmol)在DCM(30mL)中的溶液中逐滴加入三氟甲磺酸酐(846mg,3mmol)和DIPEA
(516mg,4mmol)。将所得的混合物在-78℃搅拌30分钟并温热至室温过夜。将混合物冷却至0℃并用水(20mL)淬灭，然后将有机层经Na2SO4干燥并浓缩。向油状残留物中加入乙醚，将固体过滤并将滤液浓缩。将所得的残留物经快速柱色谱法纯化(石油醚:乙酸乙酯＝3/1)得到
3-(3-氯-5-{[(三氟甲基)磺酰基]氧基}苯基)-3-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)丙酸乙酯
(375mg,42％)，其为黄色油状物。
[0367] 合成中间体P7
[0368] 3-(2-甲基噻唑-5-基)-3-(3-(三氟甲基磺酰基氧基)苯基)丙酸乙酯
[0369]
[0370] (Z)-3-(3-(苄基氧基)苯基)-3-(2-甲基噻唑-5-基)丙烯酸乙酯
[0371]
[0372] 向(3-(苄基氧基)苯基)(2-甲基噻唑-5-基)甲酮(1.9g,6.1mmol)在苯(20mL)中的溶液中加入A040-3-b(2.1g,6.1mmol)。将所得的混合物回流过夜。将反应混合物冷却至室温并用水(50mL)和EA(100mL)稀释。分离有机层并将水层用EA(2×100mL)洗涤。将合并的有机层经Na2SO4干燥。过滤并蒸发溶剂后，将粗残留物经硅胶色谱纯化(4:1PE/EA)得到澄清油状物(1.6g,70％)。
[0373] 3-(3-羟基苯基)-3-(2-甲基噻唑-5-基)丙酸乙酯
[0374]
[0375] 在氮气气氛下向(Z)-3-(3-(苄基氧基)苯基)-3-(2-甲基噻唑-5-基)丙烯酸乙酯(1.6g,4.22mmol)、HOAc(1.0mL)和H2O(2.0mL)在EtOH(20mL)和THF(10mL)中的混合物中加入Pd/C(10％,无水,1.6g)。将混合物在室温在氢气气氛下搅拌48小时。经硅藻土填料过滤并蒸发溶剂后，将残留物经硅胶色谱法纯化(用石油醚/EtOAc(3:1)洗脱)得到3-(3-羟基苯基)-3-(2-甲基噻唑-5-基)丙酸乙酯(1.1g,90％)，其为黄色油状物。
[0376] 3-(2-甲基噻唑-5-基)-3-(3-(三氟甲基磺酰基氧基)苯基)丙酸乙酯
[0377]
[0378] 历时5分钟在-78℃向3-(3-羟基苯基)-3-(2-甲基噻唑-5-基)丙酸乙酯(1.1g,3.4mmol)和Et3N(0.7g,6.8mmol)在DCM(10mL)中的搅拌的溶液中逐滴加入三氟甲磺酸酐
(1.9g,6.8mmol)。将所得的混合物在-78℃搅拌30分钟并在搅拌下温热至室温过夜。将混合物冷却至0℃并用水(50mL)处理。将有机层用盐水(50mL)洗涤，经Na2SO4干燥。过滤并蒸发溶剂后，将残留物经硅胶柱色谱法纯化(用石油醚/乙酸乙酯(4:1)洗脱)得到3-(2-甲基噻唑-
5-基)-3-(3-(三氟甲基磺酰基氧基)苯基)丙酸乙酯(450mg,32％)，其为黄色油状物。
[0379] 合成中间体P8
[0380] 3-(3-氟-5-(三氟甲基磺酰基氧基)苯基)-3-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)丙酸乙酯
[0381]
[0382] 3-(苄基氧基)-5-氟苯甲酸苄酯
[0383]
[0384] 将起始物质(10g,64.1mmol)、K2CO3(26.5g,192.3mmol)和BnBr(24.1g,141.0mmol)在DMF(150mL)中的混合物在室温搅拌12小时。反应完成后，向混合物中加入水(200mL)，用EA(150mL×3)萃取。将合并的有机层用LiCl水溶液、盐水洗涤，经Na2SO4干燥。过滤并蒸发溶剂后，将残留物经硅胶色谱法纯化(EA/PE＝1:30)得到产物(17g,78.9％)，其为无色油状物。
[0385] 3-(苄基氧基)-5-氟苯甲酸
[0386]
[0387] 向起始物质(17g,50.6mmol)在MeOH(50mL)中的溶液中加入NaOH水溶液(50mL,2.0mmol/L)。将反应溶液搅拌并加热至50℃过夜。反应完成后，加入40mL HCl(3N)。将混合物用EA(100mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤并经Na2SO4干燥。过滤并蒸发溶剂后，得到产物(12.5g,99.6％)。
[0388] 3-(苄基氧基)-5-氟苯甲酰氯
[0389]
[0390] 向起始物质(4.5g,18.3mmol)在MeCN(40mL)中的混合物中加入10mL SOCl2。将混合物搅拌并加热至80℃且保持0.5小时。冷却后，将溶液蒸发且残留物(4.6g,粗)直接在下一步中使用。
[0391] (3-(苄基氧基)-5-氟苯基)(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)甲酮
[0392]
[0393] 将起始物质(4.6g,17.4mmol)、Ph3P＝N-CN(5.3g,17.5mmol)在CH2Cl2(40mL)中的混合物在室温搅拌2小时。加入乙酸(2.1g,34.8mmol)。加入后，逐滴加入NEt3(3.5g,34.8mmol)在5mL CH2Cl2中的溶液。将混合物在室温搅拌过夜。反应完成后，将溶液蒸发并将残留物经柱色谱法纯化(硅胶,EA/PE＝1:10)得到产物(3.0g,55.2％)，其为黄色油状物。
[0394] 3-(3-(苄基氧基)-5-氟苯基)-3-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)丙烯酸乙酯
[0395]
[0396] 将起始物质(3.0g,9.6mmol)和2(3.3g,9.6mmol)在苯(20mL)中的混合物在100℃搅拌48小时。冷却后，将挥发物真空除去并将残留物经柱色谱法纯化(硅胶,EA/PE＝1:8)得到产物(2.8g,76.0％)，其为红色油状物。
[0397] 3-(3-氟-5-羟基苯基)-3-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)丙酸乙酯
[0398]
[0399] 向起始物质(5.0g,13.1mmol)在EtOH(100mL)中的溶液中加入THF(100mL)、AcOH(2mL)和Pd/C(500mg)。将系统抽空，然后用氢气回填，如此进行3次。将混合物溶液在室温在氢气气氛下搅拌过夜。反应完成后，将混合物经硅藻土填料过滤并将滤液真空蒸发。得到产物(4.0g)，其收率为96.3％。
[0400] 3-(3-氟-5-(三氟甲基磺酰基氧基)苯基)-3-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)丙酸乙酯
[0401]
[0402] 将起始物质(2.4g,8.16mmol)和DIPEA(3.2g,24.5mmol)在CH2Cl2(90mL)中的混合物在-78℃搅拌0.5小时。在-78℃逐滴加入Tf2O(4.6g,16.3mmol)在CH2Cl2(10mL)中的溶液。
将混合物溶液在-78℃搅拌1小时，然后温热至室温过夜。将挥发物真空除去得到残留物，将其经柱色谱法纯化(洗脱剂为12％EA在PE中的溶液)得到产物(2.2g,63.2％)，其为黄色液体。
[0403] 中间体P9：3-(5-(三氟甲基磺酰基氧基)苯基)-3-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)丙酸乙酯
[0404]
[0405] 该中间体类似于中间体P8起始于3-羟基-苯甲酸合成。
[0406] 合成中间体A1
[0407] 3-(3-溴-5-氯-苯基)-3-(5-甲基-噻唑-2-基)丙酸
[0408]
[0409] (3-溴-5-氯-苯基)-(5-甲基-噻唑-2-基)-甲酮
[0410]
[0411] 历时10分钟在-78℃在氮气气氛下向5-甲基噻唑(4,37g,44,1mmol)在无水THF(30L)中的搅拌的混合物中逐滴加入正丁基锂(44,1mmol,17,64ml在己烷中的溶液)。将混合物在-78℃和-60℃之间搅拌30分钟，然后冷却至-78℃。历时10分钟逐滴加入3-溴-5-氯-苯甲酸甲酯(11.0g,44,1mmol)在THF(20mL)中的溶液。将所得的混合物在-78℃搅拌30分钟并在搅拌下温热至室温过夜。将混合物冷却至0℃并用水(50mL)处理。将所得的混合物用HCl(1N)调节为pH约6并用EtOAc(100mL×3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将残留物经硅胶柱色谱法纯化(用石油醚/EtOAc混合物洗脱)得到(3-溴-5-氯-苯基)-(5-甲基-噻唑-2-基)-甲酮(14g,收率＝100％)，其为固体。
[0412] (Z)-3-(3-溴-5-氯-苯基)-3-(5-甲基-噻唑-2-基)-丙烯酸乙酯
[0413]
[0414] 在-78℃向NaH(60％,1.77g,44,2mmol)在无水THF(30mL)中的混悬液中加入2-(二乙氧基磷酰基)乙酸乙酯(10.12g,44.2mmol)。在-78℃搅拌1小时后，历时30分钟逐滴加入
14g(44,2mmol)(3-溴-5-氯-苯基)-(5-甲基-噻唑-2-基)-甲酮在THF(10mL)中的溶液。将混合物在-78℃搅拌30分钟，然后在搅拌下温热至室温过夜。将混合物冷却至0℃并用水
(50mL)处理，将pH值用HCl(0.5N)调节为6并用EA(50mL×3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将残留物经硅胶色谱法纯化(用石油醚/EtOAc混合物洗脱)得到
(Z)-3-(3-溴-5-氯-苯基)-3-(5-甲基-噻唑-2-基)-丙烯酸乙酯，其为凝胶状物(18g,收率＝106％)。该物质无需进一步纯化即在下一步中使用。
[0415] 3-(3-溴-5-氯-苯基)-3-(5-甲基-噻唑-2-基)丙酸乙酯
[0416]
[0417] 将18g(46,55mmol)(Z)-3-(3-溴-5-氯-苯基)-3-(5-甲基-噻唑-2-基)-丙烯酸乙酯溶于250ml乙醚和80ml AcOH中。历时60分钟加入3当量(140mmol)锌粉。将所得的混合物搅拌过夜，用100ml EtOAc稀释并经硅藻土填料过滤。将溶剂真空除去，将残留物吸收于EtOAc中，用盐水洗涤并经MgSO4干燥。蒸发溶剂后，得到17g(收率＝99％)粗产物，其在最后一步中使用。
[0418] 3-(3-溴-5-氯-苯基)-3-(5-甲基-噻唑-2-基)丙酸
[0419]
[0420] 将17g(43.73mmol)3-(3-溴-5-氯-苯基)-3-(5-甲基-噻唑-2-基)丙酸乙酯溶于30ml THF/MeOH/H2O＝2:1:1混合物中并加入LiOH(2当量)。在室温搅拌过夜后，将溶剂真空除去并将粗物质用30ml EtOAc和pH＝4的30ml水处理。分离有机相，经Na2SO4干燥并将溶剂真空除去。将粗物质由庚烷/EtOAc混合物重结晶得到9,2g(收率＝58％)3-(3-溴-5-氯-苯基)-3-(5-甲基-噻唑-2-基)丙酸。
[0421] 根据上述操作，可制备下述其它中间体：
[0422] A1a：3-(4-苄基氧基-3-溴-苯基)-3-(5-甲基-噻唑-2-基)丙酸，使用4-苄基氧基-3-溴-苯甲酸甲酯作为起始物质。
[0423] A4：3-(3-溴-5-氟-苯基)-3-(5-甲基-噻唑-2-基)丙酸，使用3-溴-5-氟-苯甲酸甲酯作为起始物质。
[0424] A6：3-(3-溴-苯基)-3-(5-甲基-噻唑-2-基)丙酸，使用苯甲酸甲酯作为起始物质。
[0425] A7：3-(3-溴-苯基)-3-(4,5-二甲基-噻唑-2-基)丙酸，使用苯甲酸甲酯和4,5-二甲基-1,3-噻唑作为起始物质。
[0426] C2：3-(3-溴-苯基)-3-(噻唑-2-基)丙酸，该物质可由ZereneX商购获得(CAS号:1082829-38-6)，但也可相应地起始于苯甲酸甲酯和1,3-噻唑作为起始物质来制备。
[0427] 合成中间体A2
[0428] 3-(3-溴-5-三氟甲基-苯基)-3-(5-甲基-[1,3,4]噁二唑-2-基)丙酸
[0429]
[0430] (3-溴-5-三氟甲基-苯基)-(5-甲基-[1,3,4]噁二唑-2-基)-甲醇
[0431]
[0432] 在-5℃将2.79g(33.2mmol)2-甲基-1,3,4-噁二唑溶于45ml THF中，在20分钟内加入33.2mmol(25.54ml)异丙基氯化镁-氯化锂复合物同时将温度保持<0℃。将混合物在0℃保持30分钟，然后加入0.8当量(6.7g)3-溴-5-三氟甲基-
苯甲醛并使所得的混合物达到RT并再搅拌60分钟。然后通过加入10ml饱和NH4Cl溶液停止反应。加入50ml MTBE，分离有机相，用盐水洗涤并经MgSO4干燥。将溶剂真空除去且粗物质(9g)无需进一步纯化即在下一步中使用。
[0433] (3-溴-5-三氟甲基-苯基)-(5-甲基-[1,3,4]噁二唑-2-基)-甲酮
[0434]
[0435] 将来自第一步的粗物质溶于100ml CH2Cl2中并加入20g MnO2。将所得的混合物在室温搅拌60分钟并过滤。蒸发溶剂后，得到9.06g(98％)粗物质，其无需进一步纯化即在下一步中使用。
[0436] (Z)-3-(3-溴-5-三氟甲基-苯基)-3-(5-甲基-[1,3,4]噁二唑-2-基)-丙烯酸乙酯
[0437]
[0438] 在-78℃向NaH(60％,1.13g,28,35mmol)在无水THF(20mL)中的混悬液中加入2-(二乙氧基磷酰基)乙酸乙酯(6.49g,28,35mmol)。在-78℃搅拌1小时后，历时30分钟逐滴加入(3-溴-5-三氟甲基-苯基)-(5-甲基-[1,3,4]噁二唑-2-基)-甲酮(9.047g,27mmol)在
20ml THF中的溶液。将混合物在-78℃搅拌30分钟，然后温热至室温，随后搅拌过夜。将混合物冷却至0℃并用水(50mL)处理，将pH值用HCl(0.5N)调节为6并用EtOAc(50mL×3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将残留物经硅胶色谱法纯化(用石油醚/
EtOAc混合物洗脱)得到9g预期产物(收率:90％)。
[0439] 合成3-(3-溴-5-三氟甲基-苯基)-3-(5-甲基-[1,3,4]噁二唑-2-基)丙酸乙酯
[0440]
[0441] 将11.2g(27.64mmol)(Z)-3-(3-溴-5-三氟甲基-苯基)-3-(5-甲基-[1,3,4]噁二唑-2-基)-丙烯酸乙酯溶于200ml乙酸中并历时30分钟缓慢加入14.1g锌粉(215.6mmol,
7.8mmol)。在加入锌粉的过程中不允许反应混合物的温度达到>30℃。将所得的混合物搅拌过夜。过滤后，加入200ml EtOAc和200ml水且分离有机相并用盐水洗涤。除去溶剂后，将粗物质经硅胶柱色谱法纯化(使用庚烷/EtOAc＝3:1作为洗脱剂)。分离到3.97g 3-(3-溴-5-三氟甲基-苯基)-3-(5-甲基-[1,3,4]噁二唑-2-基)丙酸乙酯(收率＝35％)。
[0442] 合成3-(3-溴-5-三氟甲基-苯基)-3-(5-甲基-[1,3,4]噁二唑-2-基)丙酸
[0443]
[0444] 将3.97g(9,75mmol)3-(3-溴-5-三氟甲基-苯基)-3-(5-甲基-[1,3,4]噁二唑-2-基)丙酸乙酯溶于10ml乙醇中并加入6.34ml 2N NaOH溶液。将混合物在室温搅拌4小时，除去乙醇并将残留物吸收于30ml EtOAc和20ml水中。相分离后，将有机相经Mg2SO4干燥并将溶剂真空除去得到3.3g(收率＝89％)预期产物3-(3-溴-5-三氟甲基-苯基)-3-(5-甲基-[1,
3,4]噁二唑-2-基)丙酸。
[0445] 根据上述操作，制备下述其它中间体：
[0446] A8：3-(3-溴-5-氯-苯基)-3-(5-甲基-[1,3,4]噁二唑-2-基)丙酸，使用3-溴-5-氯-苯甲醛作为起始物质。
[0447] A9：3-(3-溴-5-氟-苯基)-3-(5-甲基-[1,3,4]噁二唑-2-基)丙酸，使用3-溴-5-氟-苯甲醛作为起始物质。
[0448] A10：3-(5-溴-吡啶-3-基)-3-(5-甲基-[1,3,4]噁二唑-2-基)丙酸，使用5-溴-吡啶-3-甲醛作为起始物质。
[0449] A14：3-(5-溴-吡啶-2-基)-3-(5-甲基-[1,3,4]噁二唑-2-基)丙酸，使用4-溴-吡啶-2-甲醛作为起始物质。
[0450]
[0451] 3-(5-溴-吡啶-3-基)-3-(5-甲基-[1,3,4]噁二唑-2-基)丙酸的可替代操作如下列出：
[0452]
[0453] 合成2-(5-溴吡啶-3-基)乙酸甲酯
[0454]
[0455] 向化合物2-(5-溴吡啶-3-基)乙酸(1,15g,69.8mmol)在MeOH(180mL)中的溶液中加入SOCl2(15mL)。将所得的混合物回流过夜。反应完成后，将挥发物真空除去。将残留物在乙酸乙酯(100mL)和水(20mL)之间分配。将有机层用饱和NaHCO3(30mL×3)、盐水(20mL×2)洗涤并经Na2SO4干燥。过滤并蒸发溶剂后，得到14g A034-2，其为黄色固体，收率为88％。
[0456] 合成2-(5-溴吡啶-3-基)
琥珀酸4-丁酯·1-甲酯
[0457]
[0458] 在-78℃将起始物质(14g,61.2mmol)在THF(100mL)中的溶液逐滴加入至LDA在THF中的溶液(2M,36mL)中。将所得的混合物由此搅拌2小时，然后历时10分钟加入溴乙酸叔丁酯(13g,67mmol)在THF(10mL)中的溶液。在-78℃将反应混合物再搅拌2小时并缓慢温热至0℃。将反应混合物用饱和NH4Cl水溶液(100mL)淬灭。将有机相用乙酸乙酯(200mL×3)萃取。
合并有机层并经Na2SO4干燥。过滤并蒸发溶剂后，将所得的残留物经色谱法纯化(SiO2,PE:
EA＝15:1)得到中间体(15g)，其为黄色油状物，收率为75％。
[0459] 合成2-(5-溴吡啶-3-基)-4-丁氧基-4-氧代丁酸
[0460]
[0461] 将氢氧化锂(5.5g,131mmol)加入至起始物质(15g,44mmol)在MeOH/THF/H2O(1:1:1,270mL)中的溶液中。将所得的混合物在室温搅拌过夜。反应完成后，将挥发物真空除去并逐滴加入HCl水溶液(2N)以调节溶液为pH＝4。将溶液用二氯甲烷(100mL×3)萃取并合并有机萃取物，经Na2SO4干燥。过滤并蒸发溶剂后，得到粗产物(11g)，其为红色油状物。
[0462] 合成4-(2-乙酰基肼基)-3-(5-溴吡啶-3-基)-4-氧代丁酸丁酯
[0463]
[0464] 将起始物质(2g,6.07mmol)和DIPEA(1.6g,12.15mmol)依次加入至乙酰肼(450mg,6.07mmol)在DMF(30mL)中的溶液中。加入HATU(2.4g,6.07mmol)。将反应混合物在室温搅拌
1小时。将反应混合物用水(150mL)淬灭并用乙酸乙酯(100mL×3)萃取。将有机萃取物经
Na2SO4干燥。过滤并蒸发溶剂后，将残留物经硅胶柱色谱法纯化(用石油醚/乙酸乙酯(4:1)洗脱)得到产物(1.4g,60％)，其为黄色固体。
[0465] 合成3-(5-溴吡啶-3-基)-3-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)丙酸丁酯
[0466]
[0467] 将起始物质(1.4g,3.64mmol)和Burgess试剂(2.6g,10.9mmol)在THF(5mL)中的混合物在微波中在150℃加热30分钟。冷却后，将反应混合物用水(50mL)淬灭并用乙酸乙酯(50mL×3)萃取。将有机萃取物经Na2SO4干燥。过滤并蒸发溶剂后，将残留物经硅胶柱色谱法纯化(用石油醚/乙酸乙酯(4:1)洗脱)得到产物(800mg,60％)，其为黄色固体。
[0468] 合成3-(5-溴吡啶-3-基)-3-(5-甲基-1,3,4-噁二唑-2-基)丙酸
[0469]
[0470] 将氢氧化锂(600mg,14.2mmol)加入至起始物质(800mg,2.18mmol)在MeOH/THF/H2O(1:1:1,21mL)中的溶液中。将所得的混合物在室温搅拌2小时。将反应混合物酸化为pH＝4并用二氯甲烷(10mL×5)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥。过滤并蒸发溶剂后，将残留物经硅胶柱色谱法纯化(用石油醚/乙酸乙酯(2:1)洗脱)得到产物(350mg,52％)，其为白色固体。
[0471] C1：3-(3-溴-苯基)-3-(5-甲基-[1,3,4]噁二唑-2-基)丙酸，该中间体可由Aurora Building Blocks商购得到(CAS号:1082916-80-0)，但也可使用3-溴-苯甲醛获得。
[0472] C2：3-(3-溴-苯基)-3-(噻唑-2-基)丙酸，该中间体可由ZereneX商购得到。
[0473] 合成中间体A3
[0474] 3-(3-溴-5-氟-苯基)-3-(噁唑-2-基)-丙酸
[0475]
[0476] 合成3-溴-5-氟-苯甲酰氯
[0477]
[0478] 将10g 3-溴-5-氟-苯甲酸混悬于100ml DCM中，加入0.5ml DMF和4.5ml草酰氯(1.15当量)并将所得的混合物在室温搅拌100分钟。真空除去溶剂并将苯甲酰氯经蒸馏分离。
[0479] 合成(3-溴-5-氟-苯基)-(噁唑-2-基)-甲酮
[0480]
[0481] 历时10分钟在-78℃在氮气气氛下向1,3-噁唑(3.46g,50mmol)在无水THF(50mL)中的搅拌的混合物中逐滴加入正丁基锂(1.1当量,20.01ml在己烷中的溶液)。在-78℃搅拌
30分钟后，在30分钟内加入氯化锌(0.1mmol,2.2当量)在5-甲基-四氢呋喃中的2M溶液并在加入过程中使混合物达到-20℃。然后将混合物在0℃搅拌40分钟，加入CuI(8.66g,
45.5mmol)并继续再搅拌10分钟。将3-溴-5-氟-苯甲酰氯(45.5mmol,8.66g)溶于50ml THF中并加入至金属化的1,3-噁唑中。继续搅拌直到经LCMS观察到转化完成并加入50ml水和
50ml 0.5M
柠檬酸溶液。将来自反应混合物的固体物质滤出并用5-甲基-THF洗涤。分离有机相，用盐水洗涤并经MgSO4干燥。获得10.8g粗物质(收率＝88％)并直接用于下一步中。
[0482] 将混合物在-78℃和-60℃之间搅拌30分钟，然后冷却至-78℃。历时10分钟逐滴加入3-溴-5-氯-苯甲酸甲酯(11.0g,44.1mmol)在THF(20mL)中的溶液。将所得的混合物在-78℃搅拌30分钟并在搅拌下温热至室温过夜。将混合物冷却至0℃并用水(50mL)处理。将所得的混合物用HCl(1N)调节为pH约6并用EtOAc(100mL×3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将残留物经硅胶柱色谱法纯化(用石油醚/EtOAc混合物洗脱)得到(3-溴-5-氯-苯基)-(5-甲基-噻唑-2-基)-甲酮(14g,收率＝100％)，其为固体。
[0483] 合成(Z)-3-(3-溴-5-氟-苯基)-3-(噁唑-2-基)-丙烯酸乙酯
[0484]
[0485] 在-78℃向NaH(60％,1.6g,40mmol)在无水THF(30mL)中的混悬液中加入2-(二乙氧基磷酰基)乙酸乙酯(9.15g,40mmol)。在-78℃搅拌1小时后，历时30分钟逐滴加入(3-溴-
5-氟-苯基)-(噁唑-2-基)-甲酮(10.8g,40mmol)在20mlTHF中的溶液。将混合物在-78℃搅拌30分钟，然后温热至室温，随后搅拌过夜。将混合物冷却至0℃并用水(50mL)处理，将pH值用HCl(0.5N)调节为6并用EtOAc(50mL×3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤并减压浓缩。将残留物经硅胶色谱法纯化(用石油醚/EtOAc混合物洗脱)得到9,5g预期产物(收率:
61％)。
[0486] 合成3-(3-溴-5-氟-苯基)-3-(噁唑-2-基)-丙酸乙酯
[0487]
[0488] 将9.5g(27.93mmol)(Z)-3-(3-溴-5-氟-苯基)-3-(噁唑-2-基)-丙烯酸乙酯溶于200ml乙酸中并历时30分钟缓慢加入9.5g锌粉(11Ea)。在加入锌粉的过程中不允许反应混合物的温度达到>30℃。将所得的混合物搅拌过夜。过滤后，加入200ml EtOAc和200ml水，分离有机相并用盐水洗涤。除去溶剂后，将粗物质经硅胶柱色谱法纯化(使用庚烷/EtOAc＝3:
1作为洗脱剂)。分离到9.50g 3-(3-溴-5-氟-苯基)-3-(噁唑-2-基)-丙酸乙酯(收率＝
615)。
[0489] 合成3-(3-溴-5-氟-苯基)-3-(噁唑-2-基)-丙酸
[0490]
[0491] 将9.50g(27,76mmolmmol)3-(3-溴-5-氟-苯基)-3-(噁唑-2-基)-丙酸乙酯溶于30ml乙醇中并加入20.82ml 2N NaOH溶液。将混合物在室温搅拌4小时，除去乙醇并将残留物吸收于30ml EtOAc和20ml水中。相分离后，将有机相经Mg2SO4干燥并将溶剂真空除去得到
8.35g(收率＝58％)预期产物3-(3-溴-5-氟-苯基)-3-(噁唑-2-基)-丙酸。
[0492] 根据该操作，制备下述其它中间体：
[0493] A3a：3-(3-溴-5-氯-苯基)-3-(噁唑-2-基)-丙酸
[0494]
[0495] 使用3-溴-5-氯-苯甲酸作为起始物质。
[0496] A5：3-(3-溴-苯基)-3-(噁唑-2-基)-丙酸
[0497]
[0498] 使用3-溴苯甲酸作为起始物质。
[0499] 合成中间体A11
[0500] 3-(3-溴苯基)-3-(5-甲基-1,3,4-噻二唑-2-基)丙酸
[0501]
[0502] 2-(3-溴苯基)乙酸甲酯
[0503]
[0504] 向起始物质(12.0g,55.8mmol)在MeOH(200mL)中的溶液中加入SOCl2(2mL)。将反应溶液搅拌并加热至回流过夜。反应完成后，加入200mL水和30mL NaHCO3水溶液。将混合物用EA(150mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤并经Na2SO4干燥。过滤并蒸发溶剂后，得到产物(11.0g,86.1％)。
[0505] 2-(3-溴苯基)琥珀酸4-叔丁酯·1-甲酯
[0506]
[0507] 在-78℃将起始物质(11.0g,48.0mmol)在THF(100mL)中的溶液逐滴加入至LDA在THF中的溶液(2M,24mL)中。将所得的混合物由此搅拌2小时，然后历时10分钟加入溴乙酸叔丁酯(10.3g,52.8mmol)在THF(20mL)中的溶液。将反应混合物在-78℃搅拌2小时并缓慢温热至0℃。将反应混合物用饱和NH4Cl水溶液(50mL)淬灭。将有机相用乙酸乙酯(100mL×3)萃取。合并有机层并经Na2SO4干燥。过滤并蒸发溶剂后，将所得的残留物经柱色谱法纯化(硅胶,PE:EA＝20:1)得到目标产物(14.4g,87.5％)，其为黄色油状物。
[0508] 2-(3-溴苯基)-4-叔丁氧基-4-氧代丁酸
[0509]
[0510] 将氢氧化锂(2.6g,109.2mmol)加入至起始物质(12.5g,36.4mmol)在MeOH/THF/H2O(1:1:1,500mL)中的溶液中。将所得的混合物在室温搅拌过夜。反应完成后，将挥发物真空除去并逐滴加入HCl水溶液(6N)以调节溶液为pH＝4。将溶液用EA(150mL×3)萃取并合并有机层，经Na2SO4干燥。过滤并蒸发溶剂后，得到粗产物(12.0g,99％)，其为黄色油状物。
[0511] 4-(2-乙酰基肼基)-3-(3-溴苯基)-4-氧代丁酸叔丁酯
[0512]
[0513] 将HATU(10.4g,27.3mmol)和DIPEA(7.04g,54.6mmol)依次加入至起始物质(6.0g,18.2mmol)在DMF(90mL)中的溶液中，然后加入乙酰肼(1.6g,21.8mmol)。将反应混合物在室温搅拌过夜。将反应混合物用水(150mL)淬灭并用乙酸乙酯(100mL×3)萃取。将有机萃取物经Na2SO4干燥。过滤并蒸发溶剂后，将残留物经反相色谱法纯化[A:CH3CN；B:NH4HCO3/H2O(0.01％),A:在22分钟内20％-95％,RT＝12-15min]得到产物(5.8g,82.7％)，其为黄色油状物。
[0514] 3-(3-溴苯基)-3-(5-甲基-1,3,4-噻二唑-2-基)丙酸叔丁酯
[0515]
[0516] 将Lawesson试剂(10.4g,25.7mmol)加入至起始物质(4.5g,11.7mmol)在THF(150mL)中的溶液中。将所得的混合物在室温搅拌1小时，然后加热至回流且保持3小时。将反应混合物用水(200mL)淬灭并用EA(200mL×3)萃取。合并有机层并经Na2SO4干燥。过滤并蒸发溶剂后，将残留物经反相色谱法纯化[A:CH3CN；B:NH4HCO3/H2O(0.01％),A:在22分钟内
20％-95％,RT＝10-12min]得到产物(3.8g,84.8％)，其为黄色油状物。
[0517] 3-(3-溴苯基)-3-(5-甲基-1,3,4-噻二唑-2-基)丙酸
[0518]
[0519] 将氢氧化锂(1.3g,55.0mmol)加入至A041-6(4.2g,11.0mmol)在THF/H2O(1:1,100mL)中的溶液中。将所得的混合物在室温搅拌过夜。反应完成后，将挥发物真空除去并逐滴加入HCl水溶液(6N)以调节溶液为pH＝4。将溶液用EA(100mL×3)萃取并合并有机层，经Na2SO4干燥。过滤并蒸发溶剂后，得到产物(3.64g,99％)，其为黄色固体。
[0520] 合成中间体A12
[0521] 3-(3-溴苯基)-3-(5-甲基噁唑-2-基)丙酸
[0522]
[0523] 3-(3-溴苯基)-4-氧代-4-(2-氧代丙基氨基)丁酸叔丁酯
[0524]
[0525] 将HATU(18.0g,47.4mmol)和DIPEA(10.2g,79mmol)依次加入至起始物质(5.2g,15.8mmol)在DMF(80mL)中的溶液中，随后加入2(4.3g,39.5mmol)。将反应混合物在室温搅拌过夜。将反应混合物用水(100mL)淬灭并用乙酸乙酯(100mL×3)萃取。将合并的有机萃取物经Na2SO4干燥。过滤并蒸发溶剂后，将残留物经反相色谱法纯化[A:CH3CN；B:NH4HCO3/H2O(0.01％),A:在22分钟内20％-95％,RT＝13-14min]得到产物(5.3g,87.3％)，其为黄色油状物。
[0526] 3-(3-溴苯基)-3-(5-甲基噁唑-2-基)丙酸叔丁酯
[0527]
[0528] 向起始物质(2.1g,5.5mmol)在THF(20mL)中的溶液中加入Burgess试剂(3.9g,16.5mmol)。将混合物溶液搅拌并在微波下加热至150℃且保持30分钟。反应完成后，将挥发物真空除去并将残留物经反相色谱法纯化[A:CH3CN；B:NH4HCO3.H2O(0.01％),A:在15分钟内20％-95％,RT＝8.6-9.7min]得到产物(1.85g,92％)，其为黄色油状物。
[0529] 3-(3-溴苯基)-3-(5-甲基噁唑-2-基)丙酸
[0530]
[0531] 将氢氧化锂(1.8g,76.5mmol)加入至起始物质(5.6g,15.3mmol)在THF/H2O(1:1,150mL)中的溶液中。将所得的混合物在室温搅拌过夜。反应完成后，将挥发物真空除去并逐滴加入HCl水溶液(6N)以调节溶液为pH＝4。将溶液用EA(150mL×3)萃取并合并有机层，经Na2SO4干燥。过滤并蒸发溶剂后，得到产物(4.15g,87.5％)，其为灰白色固体。
[0532] 合成中间体A13：
[0533] 3-(3-溴-5-氟-苯基)-3-(5-甲基噁唑-2-基)丙酸
[0534]
[0535] 该中间体类似于中间体A12使用2-(3-溴-5-氟-苯基)琥珀酸4-叔丁酯·1-甲酯合成。后者类似于合成A11所述的操作并起始于2-(3-溴-5-氟-苯基)乙酸甲酯合成。
[0536] 合成新的硼酸B：
[0537] 6-甲氧基-2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基硼酸
[0538]
[0539] 2-(3-甲氧基苯氧基)乙酸甲酯
[0540]
[0541] 向3-甲氧基
苯酚(20g,161.3mmol)和Cs2CO3(52.4g,161.3mmol)在DMF(200mL)中的混合物中加入溴乙酸甲酯(24.5g,161.3mmol)。将反应混合物在室温在氩气下搅拌过夜。将无机析出物滤出并将滤液减压浓缩。将残留物在水(200mL)和CH2Cl2(200mL×3)之间分配。将合并的有机溶液经Na2SO4干燥并蒸发得到产物(28g,90％)。
[0542] 1-(3-甲氧基苯氧基)-2-甲基丙-2-醇
[0543]
[0544] 向在
冰水浴中冷却的2-(3-甲氧基苯氧基)乙酸甲酯(28g,143mmol)在乙醚(200mL)中的溶液中逐滴加入甲基溴化镁(143mmol,3M在乙醚中)在乙醚中的溶液。1小时
后，将反应混合物倒入500mL 2N HCl中。将混合物用EA(200mL×3)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥。过滤并蒸发溶剂后，得到中间体(25g,90％)。
[0545] 6-甲氧基-2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃
[0546]
[0547] 历时30分钟向五氧化二磷(55.1g,383mmol)在甲磺酸(100mL)中的溶液中逐滴加入1-(3-甲氧基苯氧基)-2-甲基丙-2-醇(25g,127.6mmol)。将反应混合物在室温搅拌3小
时。将反应混合物倒入500mL冰水中并用乙醚(200mL×3)萃取。将合并的萃取物干燥并蒸
发。将残留物经硅胶柱色谱法纯化(用石油醚/乙醚(9:1)洗脱)得到6-甲氧基-2,2-二甲基-
2,3-二氢苯并呋喃(5.5g,25％)，其为黄色油状物。
[0548] 6-甲氧基-2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基硼酸
[0549]
[0550] 历时30分钟在-78℃将s-BuLi(35mL,1.3M在环己烷中)逐滴加入至TMEDA(6.6mL)中，加入20mL THF以保持搅拌。20分钟后，将6-甲氧基-2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃
(5.4g,30.3mmol)在THF(30mL)中的溶液缓慢加入至锂溶液中。将溶液在-78℃搅拌1.5小时并加入硼酸三甲酯(18mL)。将混合物温热至室温并在室温搅拌过夜。将溶液酸化为pH＝5-6并用乙酸乙酯萃取。将有机层浓缩并将所得的残留物经柱色谱法纯化(硅胶,二氯甲烷/石油醚＝3/1)得到粗产物，将其与石油醚一起用
超声波处理。将白色析出物过滤并干燥得到
6-甲氧基-2,2-二甲基-2,3-二氢苯并呋喃-7-基硼酸(3.55g,53％)，其为白色固体。
[0551] 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.58(brs,2H),7.07(d,J＝8.0Hz,1H),6.36(d,J＝8.4Hz,1H),3.68(s,3H),2.87(s,2H),1.38(s,6H)。
[0552] 2-(2-甲氧基-5-(甲基磺酰基)苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷
[0553]
[0554] 2-溴-4-(甲基磺酰基)苯酚
[0555]
[0556] 在-15℃向4-(甲基磺酰基)苯酚(5g,29.1mmol)在乙醚(100mL)中的溶液中缓慢加入乙酸(5mL)。向该冷的溶液中缓慢加入Br2(5.1g,32.0mmol)并将反应混合物在-10℃搅拌
1小时，然后温热至室温并再搅拌10小时。反应完成后，加入100mL饱和NaHCO3水溶液并将混合物用EA(50mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤并经Na2SO4干燥。过滤并蒸发溶剂后，得到2-溴-4-(甲基磺酰基)苯酚(3.2g,43.6％)，其为白色固体。
[0557] 2-溴-1-甲氧基-4-(甲基磺酰基)苯
[0558]
[0559] 在0℃向2-溴-4-(甲基磺酰基)苯酚(3.2g,12.7mmol)在DMF(35mL)中的溶液中加入K2CO3(5.3g,38.1mmol)。将反应混合物在0℃搅拌0.5小时并向该冷的溶液中缓慢逐滴加入CH3I(2.7g,19.1mmol)。将反应混合物在室温搅拌过夜。反应完成后，加入80mL冰水。将混合物用EA(60mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤并经Na2SO4干燥。过滤并蒸发溶剂后，将所得的残留物经柱色谱法纯化(硅胶,乙酸乙酯/石油醚＝1:4)得到2-溴-1-甲氧基-4-
(甲基磺酰基)苯(2.12g,63.0％)，其为黄色固体。
[0560] 2-(2-甲氧基-5-(甲基磺酰基)苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷
[0561]
[0562] 将2-溴-1-甲氧基-4-(甲基磺酰基)苯(2.12g,8mmol)、4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-八甲基-2,2’-联(1,3,2-二氧硼杂环戊烷)(2.65g,10.4mmol)、乙酸钾(2.4g,24mmol)和[1,1’-二(二苯基膦基)二茂
铁]二氯化钯(II)(600mg)在1,4-二噁烷(50mL)中的混合物加热至
80℃过夜。冷却后，将混合物过滤。将滤液浓缩并将所得的残留物经柱色谱法纯化(硅胶,二氯甲烷/石油醚＝3/1)得到2-(2-甲氧基-5-(甲基磺酰基)苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-
二氧硼杂环戊烷(200mg,8％)，其为白色固体。
[0563] 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.01-7.98(m,2H),7.21(d,J＝8.8Hz,1H),3.85(s,3H),3.15(s,3H),1.32(s,12H)。
[0564] 2-甲氧基-6-(吡咯烷-1-羰基)苯基硼酸
[0565]
[0566] (3-甲氧基苯基)(吡咯烷-1-基)甲酮
[0567]
[0568] 将3-甲氧基苯甲酸(13.5g,88.8mmol)、吡咯烷(9mL,133mmol)、HATU(33g,88.8mmol)和DIEA(30mL,172mmol)在DMF(100mL)中的溶液在室温搅拌2小时。向溶液中加入水并用乙酸乙酯(200mL×3)萃取。将有机层干燥并浓缩。将残留物经硅胶色谱法纯化(用石油醚:乙酸乙酯＝2:1至1:1洗脱)得到(3-甲氧基苯基)(吡咯烷-1-基)甲酮(23g,100％)，其为黄色油状物。
[0569] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.30-7.26(m,1H),7.05(m,2H),6.94-6.92(m,1H),3.80(s,3H),3.59(t,J＝6.8Hz,2H),3.40(t,J＝6.8Hz,2H),1.94-1.83(m,4H)。
[0570] 2-甲氧基-6-(吡咯烷-1-羰基)苯基硼酸
[0571]
[0572] 在30分钟内在-78℃将s-BuLi(70mL,1.3M在环己烷中)逐滴加入至TMEDA(15.3g,131.9mmol)中。搅拌20分钟后，将(3-甲氧基苯基)(吡咯烷-1-基)甲酮(16g,78mmol)在THF(40mL)中的溶液缓慢加入至锂溶液中。将溶液在-78℃搅拌1.5小时并加入硼酸三甲酯
(36mL,322.6mmol)。将混合物温热至室温并在室温搅拌过夜。将溶液酸化为pH＝5-6并将析出物过滤。将滤饼用水和乙酸乙酯洗涤得到2-甲氧基-6-(吡咯烷-1-羰基)苯基硼酸(5.5g,
28％)，其为白色固体。
[0573] 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.49(d,J＝8.0Hz,1H),7.38(t,J＝8.0Hz,1H),7.12(d,J＝8.0Hz,1H0,7.01(brs,2H),4.08(t,J＝6.0Hz,2H),3.84-3.74(m,5H),2.11-2.07(m,
2H),1.94-1.91(m,2H)。
[0574] 合成2-[4-甲氧基-3-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼杂环戊烷-2-基)-苯基]-2-甲基-丙腈
[0575]
[0576] 合成2-(3-溴-4-甲氧基-苯基)-2-甲基-丙腈
[0577]
[0578] 在0℃将NaH(3.7g,93mmol)缓慢加入至THF(100mL)中，随后加入(3-溴-4-甲氧基-苯基)-乙腈(7g,31mmol)。将溶液在0℃搅拌1小时，然后加入MeI(26.4g,186mmol)。将该反应混合物在室温搅拌过夜。加入水(10mL)并将混合物用EA萃取。将有机层用盐水洗涤，经EA干燥并浓缩得到2-(3-溴-4-甲氧基-苯基)-2-甲基-丙腈，其为无色油状物(9g,85％)。
[0579]
[0580] 向2-(3-溴-4-甲氧基-苯基)-2-甲基-丙腈(7.8g,31mmol)在DME(100mL,通过用氮气净化脱气)中的溶液中加入4,4,5,5,4’,4’,5’,5’-八甲基-[2,2’]联[[1,3,2]二氧硼杂环戊基](9.4g,37.2mmol)、KOAc(9.1g,93mmol)和PdCl2(dppf)(2.6g,3.1mmol)。将混合物在110℃在氮气气氛下搅拌2小时。将混合物过滤，浓缩并经硅胶色谱法纯化得到2-[4-甲氧基-3-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼杂环戊烷-2-基)-苯基]-2-甲基-丙腈，其为白色固体(4.1g,44％)。
[0581] 合成(S)-3-(5’-异丙基-2’-甲氧基-联苯-3-基)-3-(5-甲基-[1,3,4]噁二唑-2-基)丙酸和(R)-3-(5’-异丙基-2’-甲氧基-联苯-3-基)-3-(5-甲基-[1,3,4]噁二唑-2-基)丙酸
[0582]
[0583] 将12.83g(66.11mmol)5-异丙基-2-甲氧基苯硼酸、48.97g(150.3mmol)和18.7g(60.1mmol)3-(3-溴-苯基)-3-(5-甲基-[1,3,4]噁二唑-2-基)丙酸与3mmol二(三苯基膦)
二氯化钯(II)一起在200ml DMF和30ml水中在100℃加热10小时。将反应混合物用浓NH4Cl溶液(200ml)稀释并用甲基-四氢呋喃萃取。将有机相经硅藻土和100g SiO2过滤并真空除去溶剂。将所得的粗物质3-(5’-异丙基-2’-甲氧基-联苯-3-基)-3-(5-甲基-[1,3,4]噁二唑-2-基)丙酸直接用于下一步中(收率＝57％,28g)。
[0584] 使外消旋的3-(5’-异丙基-2’-甲氧基-联苯-3-基)-3-(5-甲基-[1,3,4]噁二唑-2-基)丙酸在
手性柱上进行色谱法(使用庚烷-甲醇梯度)以分离纯的对映异构体(S)-3-
(5’-异丙基-2’-甲氧基-联苯-3-基)-3-(5-甲基-[1,3,4]噁二唑-2-基)丙酸和(R)-3-(5’-异丙基-2’-甲氧基-联苯-3-基)-3-(5-甲基-[1,3,4]噁二唑-2-基)丙酸。将手性碳原子的构型(S)指定为在应用的手性柱上具有最短的保留时间的对映异构体且将手性碳原子的构型(R)指定为在应用的手性柱上具有最长的保留时间的对映异构体。
[0585] 2-[2-(2,2-二甲基-丙氧基)-5-异丙基-苯基]-4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼杂环戊烷
[0586]
[0587] 一般合成方案：
[0588]
[0589] 步骤1：合成2-溴-4-异丙基-苯酚(2)
[0590] 在冰/水浴中向4-异丙基苯酚(1)(15g,110mmol)在CCl4(150mL)中的溶液中分几批加入NBS(21.6g,121mmol)。将混合物在室温搅拌过夜。加入DCM(300ml)。将有机层用水(100ml×3)洗涤，经Na2SO4干燥并过滤，蒸发并经硅胶色谱法纯化(PE至PE:EA＝50:1)得到
2，其为黄色油状物(10g,42％)。
[0591] 步骤2：合成甲苯-4-磺酸2,2-二甲基-丙酯(4)
[0592] 在冰/水浴中向3(10.0g,114mmol)在吡啶(70mL)中的搅拌的溶液中加入TsCl(32.5g,170mmol)在吡啶(50ml)中的溶液。将混合物在室温搅拌过夜。将混合物浓缩并加入水(200ml)。然后将其用EA(200ml×3)萃取。将合并的有机层用HCl(1N,150ml)、NaHCO3(水溶液,150ml)、水(150ml)和盐水(150ml)洗涤，经MgSO4干燥，过滤，浓缩并经硅胶色谱法纯化(PE至PE:EA＝50:1)得到4，其为白色固体(16.0g,58％)。
[0593] 步骤3：2-溴-1-(2,2-二甲基-丙氧基)-4-异丙基-苯(5)
[0594] 向2(10.0g,45.6mmol)和4(15.7g,65.1mmol)在HMPA中的混悬液中加入KOH(3.9g,70mmol)。将混合物在100℃剧烈搅拌72小时。将混合物倒入水(300ml)中。然后将其用EA(200ml×3)萃取。将合并的有机层用HCl(1N,200ml)、NaHCO3(水溶液,200ml)、水(200ml)和盐水(200ml)洗涤，经MgSO4干燥，过滤，浓缩并经硅胶色谱法纯化(PE至PE:EA＝50:1)得到
5，其为浅黄色油状物(7.8g,59％)。
[0595] 步骤4：合成2-[2-(2,2-二甲基-丙氧基)-5-异丙基-苯基]-4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼杂环戊烷
[0596] 向5(7.8g,27.3mmol)在DME(100mL)中的溶液中加入6(8.6g,33.6mmol)、KOAc(8.3g,84.2mmol)和PdCl2(dppf)(2.3g,2.8mmol)。将混合物用氮气净化并在100℃在氮气气氛下搅拌16小时。将混合物过滤，浓缩并经硅胶色谱法纯化(PE至PE:EA＝100:1)得到
7.5g浅黄色固体。加入PE(8ml)。将混合物过滤得到2-[2-(2,2-二甲基-丙氧基)-5-异丙基-苯基]-4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼杂环戊烷，其为白色固体(3.1g,36％)。
[0597] 1H NMR(CDCl3):1,03(s,9H),1,21(d,6H),1,34(s,12H),2,85(m,1H),6,73(d,1H),7,22(m,1H),7,47(d,1H)。
[0598] 1-[4-甲氧基-3-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼杂环戊烷-2-基)-苯基]-2-甲基-丙-2-醇
[0599]
[0600] 一般合成方案：
[0601]
[0602] 步骤1：合成(3-溴-4-甲氧基-苯基)-乙酸甲酯(2)
[0603] 在冰/水浴中向1(9.7g,54mmol)和AlCl3(7g,54mmol)在DCM(100mL)中的溶液中缓慢加入Br2(9.4g,59.4mmol)。将混合物在0℃搅拌20分钟，然后倒入冰水(100mL)中。将产物用DCM萃取。将有机层用饱和Na2S2O3、盐水洗涤，经Na2SO4干燥并过滤。蒸发溶剂得到产物，其为无色油状物(12.1g,80％)。
[0604] 步骤2：合成1-(3-溴-4-甲氧基-苯基)-2-甲基-丙-2-醇(3)
[0605] 在冰/水浴中向2(12.1g,47mmol)在THF(100mL)中的搅拌的溶液中加入CH3MgBr(3M的乙醚溶液,47mL,141mmol)并将混合物在室温搅拌3小时。然后将混合物重新冷却至0℃并用饱和
氯化铵水溶液缓慢淬灭。将有机溶液用盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩。将粗产物经硅胶色谱法纯化(PE:EA＝20:1至PE:EA＝10:1)得到3，其为黄色油状物(6g,96％)。
[0606] 步骤3：合成1-[4-甲氧基-3-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼杂环戊烷-2-基)-苯基]-2-甲基-丙-2-醇
[0607] 向3(6.0g,23.2mmol)在DME(100mL,通过用氮气净化脱气)中的溶液中加入5(7.5g,30mmol)、KOAc(6.7g,69mmol)和PdCl2(dppf)(1.9g,2.3mmol)。将混合物在110℃在氮气气氛下搅拌16小时。将混合物过滤，浓缩并经硅胶色谱法纯化(PE:EA＝10:1至PE:EA＝
4:1)得到1-[4-甲氧基-3-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼杂环戊烷-2-基)-苯基]-2-甲
基-丙-2-醇，其为白色固体(3.5g,50％)。
[0608] 1H-NMR(CDCl3):1,22(s,6H)；1,35(s,12H),2,71(s,2H),3,82(s,3H),6,81(d,1H)；7,25(m,1H),7,49(d,1H)。
[0609] 4-[4-甲氧基-3-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼杂环戊烷-2-基)-苯基]-2-甲基-丁-2-醇
[0610]
[0611] 一般合成方案：
[0612]
[0613] 步骤1：合成3-(4-甲氧基-苯基)丙酸甲酯(2)
[0614] 向1(10.0g,60mmol)和K2CO3(21.0g,150mmol)在DMF中的混悬液中加入CH3I(26g,180mmol)。将混合物在室温搅拌过夜。加入EA(500m)。将混合物用水(150ml×2)和盐水
(100ml)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩得到2，其为浅黄色油状物(12.0g)。
[0615] 步骤2：合成3-(3-溴-4-甲氧基-苯基)丙酸甲酯(3)
[0616] 在冰/盐浴中向2(12.0g,61.9mmol)在DCM(150ml)中的溶液中加入AlCl3(8.3g,61.9mmol)。然后逐滴加入Br2(9.9g,61.9mmol)。将混合物在0℃搅拌20分钟。将反应混合物倒入冰/水(200ml)中并用DCM(150ml×3)萃取。将合并的有机层用Na2S2O3(水溶液,150ml)和盐水(150ml)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩得到3，其为浅黄色油状物(16.8g)。
[0617] 步骤3：合成4-(3-溴-4-甲氧基-苯基)-2-甲基-丁-2-醇(4)
[0618] 在冰/水浴中向3(16.8g,61.5mmol)在THF(100ml)中的溶液中逐滴加入CH3MgBr(3M,37ml)。然后将其在室温搅拌3小时。加入NH4Cl(水溶液,150ml)以淬灭反应。加入EA(300ml)并分离水层。将有机层用盐水(150ml)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，浓缩并经硅胶色谱法纯化(PE:EA＝20:1至PE:EA＝8:1)得到4，其为无色油状物(10.0g)。
[0619] 步骤4：合成4-[4-甲氧基-3-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼杂环戊烷-2-基)-苯基]-2-甲基-丁-2-醇
[0620] 向4(10.0g,36.8mmol)在DME(100mL)中的溶液中加入5(11.2g,44.1mmol)、KOAc(10.8g,110mmol)和PdCl2(dppf)(3.1g,3.7mmol)。将混合物用氮气净化并在100℃在氮气气氛下搅拌16小时。将混合物过滤，浓缩并经硅胶色谱法纯化(PE:EA＝50:1至PE:EA＝5:1)得到8.7g无色油状物。加入PE/EA(100:1,40ml)并在室温放置2天。将混合物过滤得到
00238，其为白色固体(3.8g)。
[0621] 1H NMR(CDCl3):1,28(s,6H)；1,36(s,12H),1,76(m,2H),2,64(m,2H),3,81(s,3H)；6,79(d,1H),7,23(m,1H),7,50(d,1H)。
[0622] 1-[4-甲氧基-3-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼杂环戊烷-2-基)-苯氧基]-2-甲基-丙-2-醇
[0623]
[0624] 一般合成方案：
[0625]
[0626] 步骤1：合成1-(3-溴-4-甲氧基-苯氧基)-丙-2-酮(3)
[0627] 向1(8.0g,40mmol)和K2CO3(6.0g,44mmol)在丙酮中的混悬液中加入2(4.1g,44mmol)。将混合物在60℃搅拌8小时同时保持轻微回流。将混合物倒入水中，用EA萃取。将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩得到3，其为油状物(12.8g,80％)。
[0628] 步骤2：合成1-(3-溴-4-甲氧基-苯氧基)-2-甲基-丙-2-醇(4)
[0629] 在冰/水浴中向3(10.3g,40mmol)在THF(120mL)中的搅拌的溶液中加入CH3MgBr(3M的乙醚溶液,20mL,60mmol)并将混合物在室温搅拌3小时。然后将混合物重新冷却至0℃并用饱和氯化铵水溶液缓慢淬灭。将有机溶液用盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩。将粗产物经硅胶色谱法纯化(PE:EA＝10:1至PE:EA＝8:1)得到4，其为黄色油状物(7.2g,92％)。
[0630] 步骤3：合成1-[4-甲氧基-3-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼杂环戊烷-2-基)-苯氧基]-2-甲基-丙-2-醇
[0631] 向3(7.2g,26.2mmol)在DME(100mL,通过用氮气净化脱气)中的溶液中加入5(8.0g,31.4mmol)、KOAc(7.7g,78.6mmol)和PdCl2(dppf)(2.2g,2.6mmol)。将混合物在110℃在氮气气氛下搅拌16小时。将混合物过滤，浓缩并经硅胶色谱法纯化(PE:EA＝7:1至PE:
EA＝4:1)得到00239，其为白色固体(3.1g,37％)。
[0632] 1H-NMR:1,33(s,6H),1,35(s,12H)；3,77(s,2H)；3,79(s,3H)；6,80(d,1H)；6,95(m,1H)；7,24(d,1H)。
[0633] 1-[4-甲氧基-3-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼杂环戊烷-2-基)-苯氧基]-3,3-二甲基-丁-2-酮
[0634]
[0635] 一般合成方案：
[0636]
[0637] 步骤1：合成1-(3-溴-4-甲氧基-苯氧基)-3,3-二甲基-丁-2-酮(3)
[0638] 向1(5.0g,25mmol)和K2CO3(3.8g,27.5mmol)在丙酮(50mL)中的混悬液中加入2(4.9g,27.5mmol)。将混合物在60℃搅拌8小时同时保持轻微回流。将混合物倒入水中，用EA萃取。将有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩得到3，其为无色油状物(7.4g,
90％)。
[0639] 步骤2：合成1-[4-甲氧基-3-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼杂环戊烷-2-基)-苯氧基]-3,3-二甲基-丁-2-酮
[0640] 向3(6.7g,22.3mmol)在DME(100mL,通过用氮气净化脱气)中的溶液中加入4(6.3g,24.6mmol)、KOAc(6.5g,66.9mmol)和PdCl2(dppf)(1.9g,2.23mmol)。将混合物在110℃在氮气气氛下搅拌2小时。将混合物过滤，浓缩并经硅胶色谱法纯化(PE:EA＝30:1至PE:
EA＝6:1)得到白色固体(4.0g,51％)。
[0641] 1H-NMR(CDCl3):1,25(s,9H)；1,34(s,12H),3,78(s,3H),4,82(s,2H)；6,79(d,1H)；6,97(m,1H)；7,18(d,1H)。
[0642] 2-[4-甲氧基-3-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼杂环戊烷-2-基)-苯基]-2-甲基-丙腈
[0643]
[0644] 一般合成方案：
[0645]
[0646] 步骤1：合成2-(3-溴-4-甲氧基-苯基)-2-甲基-丙腈(2)
[0647] 在0℃将NaH(3.7g,93mmol)缓慢加入至THF(100mL)中，随后加入1(7g,31mmol)。将溶液在0℃搅拌1小时，然后加入MeI(26.4g,186mmol)。将该反应混合物在室温搅拌过夜。加入水(10mL)并将混合物用EA萃取。将有机层用盐水洗涤，经EA干燥并浓缩得到2，其为无色油状物(9g,85％)。
[0648] 步骤2：合成2-[4-甲氧基-3-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧硼杂环戊烷-2-基)-苯基]-2-甲基-丙腈
[0649] 向2(7.8g,31mmol)在DME(100mL,通过用氮气净化脱气)中的溶液中加入3(9.4g,37.2mmol)、KOAc(9.1g,93mmol)和PdCl2(dppf)(2.6g,3.1mmol)。将混合物在110℃在氮气气氛下搅拌2小时。将混合物过滤，浓缩并经硅胶色谱法纯化得到白色固体(4.1g,44％)。
[0650] 1H-NMR(CDCl3):1,36(s,12H),1,72(s,6H),3,84(s,3H),6,85(d,1H)；7,51(m,1H)；7,68(d,1H)。
[0651] 如在合成实施例中类似地制备列于表1中的式I的实施例化合物。
[0652] 表1.式I的实施例化合物
[0653]
[0654]
[0655]
[0656]
[0657]
[0658]
[0659]
[0660]
[0661]
[0662]
[0663]
[0664]
[0665]
[0666]
[0667]
[0668]
[0669]
[0670]
[0671] (1)质谱表征；除非另有指明，否则观察到[(M+H)+]离子的质量数。
[0672] (2)组织蛋白酶A抑制活性在下述药理学试验"组织蛋白酶A抑制活性"中确定。
[0673] 药理学试验
[0674] a)组织蛋白酶A抑制活性
[0675] 用重组人组织蛋白酶L(R&D Systems，#952-CY)将重组人组织蛋白酶A(残基29-480，其中C-端为10-His标记；R&D Systems，#1049-SE)经蛋白水解活化。简言之，在37℃将
10μg/ml的组织蛋白酶A与1μg/ml的组织蛋白酶L在活化缓冲液(25mM 2-(吗啉-4-基)-乙磺酸(MES)，pH 6.0，其含有5mM二硫苏糖醇(DTT))中培养15分钟。然后通过加入半胱氨酸蛋白酶抑制剂E-64(N-(反式-环氧琥珀酰基)-L-亮氨酸-4-胍基丁基酰胺；Sigma-Aldrich，#
E3132；溶解于活化缓冲液/DMSO中)至最终浓度10μM，终止组织蛋白酶L活性。
[0676] 在多孔酶联分析板(multiple assay plate)上，将活化的组织蛋白酶A稀释于分析缓冲液(25mM MES，pH 5.5，含有5mM DTT)中并与待测化合物(溶解于含有(v/v)3％DMSO的分析缓冲液)中，或者，在对照实验中与媒介物混合。作为底物在室温培养15分钟后，将带有 Bodipy FL(4,4-二氟-5,7-二甲基-4-硼-3a,4a-二氮杂-对称-二环戊二烯并苯
(s-indacene)-3-丙酰基)标记的缓激肽(JPT Peptide Technologies GmbH；溶解于分析缓冲液中)加入至该混合物中。组织蛋白酶A的最终浓度为833ng/ml且标记的缓激肽的最终浓度为2μM。在室温培养15分钟后，通过加入终止缓冲液(130mM 2-(4-(2-羟基-乙基)-哌嗪-
1-基)-乙磺酸，pH 7.4，其含有(v/v)0.013％的Triton 0.13％包被试剂3
(Coating试剂3，Caliper Life Sciences)，6.5％DMSO和20μM抑酯酶免疫酮B(Sigma，#E0886))终止该反应。
[0677] 然后通过在 3000Drug Discovery系统(12-Sipper-Chip；Caliper Life Sciences)上的微流控毛细管
电泳分离未裂解的底物和产物并通过测定各峰面积将其定
量。通过用产物峰面积除以底物和产物的峰面积之和计算底物的转化率，酶活性和待测化合物的抑制作用因此得以定量。由在多种浓度下的待测化合物观察到的抑制组织蛋白酶A活性的百分比，计算抑制浓度IC50(即抑制50％的酶活性的浓度)。多种实施例化合物的IC50值在表1中给出，其中"A"是指IC50值小于0.1μM，"B"是指IC50值介于0.1μM和1μM之间，以及"C"是指IC50值介于1μM和30μM之间。
[0678] B)体内抗心肌肥大和肾保护活性
[0679] 可例如在单侧肾
切除的DOCA-盐敏感的大鼠模型中研究本发明化合物的体内药理学活性。简言之，在该模型中对体重150g至200g的Sprague Dawley大鼠进行左侧单
肾切除术(UNX)。手术后以及随后各周开始时，通过皮下注射将30mg/kg体重的DOCA(
醋酸脱氧皮质酮)给予大鼠。向经DOCA处理的肾切除的大鼠(UNX/DOCA大鼠)提供含有1％氯化钠的水。
UNX/DOCA大鼠出现了高血压、内皮功能异常、心肌肥大和纤维化以及肾功能异常。在由UNX/DOCA大鼠随机分组组成的测试组(UNX/DOCA测试)和安慰剂组(UNX/DOCA安慰剂组)中，通过在早6点和晚6点通过灌胃法分两部分剂量口服每日剂量的待测化合物(例如10mg/kg体重，溶解于媒介物中)或仅给予媒介物治疗大鼠。在由未进行UNX和DOCA给药的动物组成的对照组(对照)中，动物接受了正常的饮水并且仅用媒介物治疗。治疗5周后，通过尾套法(tail cuff method)非侵入性地测量收缩期血压(SBP)和心率(HR)。对于蛋白尿和肌酸肝的测定，在代谢笼中收集24小时的尿液。内皮功能在离体的胸主动脉环中测定，如文献所述(W.Linz等人，JRAAS(Journal of the renin-angiotensin-aldosterone system)7(2006)，155-
161)。在离体的心脏中测量心肌肥大和纤维化、心脏重量、左心室重量以及羟基脯氨酸和脯氨酸的关系。
