二环和三环吲唑-取代的1,4-二氢吡啶衍生物及其用途
阅读：357发布：2021-03-18
专利汇可以提供二环和三环吲唑-取代的1,4-二氢吡啶衍生物及其用途专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及新的具有蛋白酪 氨 酸激酶抑制活性的二环和三环吲唑-取代的1,4-二氢吡啶衍 生物 ，其制备方法及其用于 治疗 c-Met-介导的 疾病 或c-Met-介导的病症，特别是癌症和其它增殖性疾病的用途。，下面是二环和三环吲唑-取代的1,4-二氢吡啶衍生物及其用途专利的具体信息内容。
1.式(I)化合物或其药学可接受的盐、水合物和/或溶剂化物，
其中
A 为-C(=O)-或-S(=O)2-,
6A 6B 7
D 为-CR R -、-O-或-NR-，其中
6A 6B 7
R , R 和R 独立地为氢或任选被羟基或至多三个氟原子取代的(C1-C4)-烷基，
8A 8B 8A 8B 8C 8D
E 为-CR R -或*-CR R -CR R -**，其中
* 表示与二氢吡啶环连接，
** 表示与D基团连接，
和
8A 8B 8C 8D
R 、R 、R 和R 独立地为氢、氟代或任选被羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、
单-(C1-C4)-烷基氨基或二-(C1-C4)-烷基氨基或至多三个氟原子取代的(C1-C4)-烷基，或
8A 8B
R 和R 与它们连接的碳原子一起结合形成环丙基或环丁基环，
1
R 选自氢、氯代、溴代、(C1-C6)-烷基、(C3-C7)-环烷基、苯基、4-至7-元杂环烷基、
5-至10-元杂芳基和苯并-1,4-二氧杂环己烷基，其中
(i) 所述(C3-C7)-环烷基、苯基、4-至7-元杂环烷基和5-至10-元杂芳基任选被一个或两个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、氯代、溴代、二氟甲基、三氟甲基、(C1-C4)-烷基、氧代、羟基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基、(C3-C6)-环烷基和4-至6-元杂环烷基，
其中所述(C1-C4)-烷氧基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基取代基的烷基又任选被羟基或(C1-C4)-烷氧基取代，
和
(ii) 所述(C1-C6)-烷基任选被一个、两个或三个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、三氟甲基、羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基、(C3-C7)-环烷基、苯基、4-至7-元杂环烷基和5-至10-元杂芳基，
其中所述(C3-C7)-环烷基、苯基、4-至7-元杂环烷基和5-至10-元杂芳基取代基又任选被一个或两个残基取代，所述残基独立地选自氟代、氯代、溴代、二氟甲基、三氟甲基、(C1-C4)-烷基、氧代、羟基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基，
或
1 9A 9B 10
R 为式-NR R 或-OR 的基团，其中
9A 9B
R 和R 独立地选自氢、(C1-C6)-烷基、(C3-C7)-环烷基和4-至7-元杂环烷基，其中(i) 所述(C3-C7)-环烷基和4-至7-元杂环烷基任选被一个或两个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、二氟甲基、三氟甲基、(C1-C4)-烷基、氧代、羟基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基，和
(ii) 所述(C1-C6)-烷基任选被一个、两个或三个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、三氟甲基、羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基、(C3-C7)-环烷基、苯基、4-至7-元杂环烷基和5-至10-元杂芳基，
其中所述(C3-C7)-环烷基、苯基、4-至7-元杂环烷基和5-至10-元杂芳基取代基又任选被一个或两个残基取代，所述残基独立地选自氟代、氯代、溴代、二氟甲基、三氟甲基、(C1-C4)-烷基、氧代、羟基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基，
或
9A 9B
R 和R 与它们连结的氮原子一起结合形成4-至7-元杂环烷基环，其可以含有选自N、O和S的第二环杂原子，并且其任选被一个或两个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、(C1-C4)-烷基、氧代、羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基和(C3-C6)-环烷基，
10
R 选自(C1-C6)-烷基、(C3-C7)-环烷基和4-至7-元杂环烷基，其中
(i) 所述(C3-C7)-环烷基和4-至7-元杂环烷基任选被一个或两个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、二氟甲基、三氟甲基、(C1-C4)-烷基、氧代、羟基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基，和
(ii) 所述(C1-C6)-烷基任选被一个、两个或三个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、三氟甲基、羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基、(C3-C7)-环烷基、苯基、4-至7-元杂环烷基和5-至10-元杂芳基，
其中所述(C3-C7)-环烷基、苯基、4-至7-元杂环烷基和5-至10-元杂芳基取代基又任选被一个或两个残基取代，所述残基独立地选自氟代、氯代、溴代、二氟甲基、三氟甲基、(C1-C4)-烷基、氧代、羟基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基，
2
R 为氢、氟代、氯代或甲基，
3
R 为氢、(C1-C4)-烷基或环丙基，
4
R 为氰基或氨基羰基，
5
R 选自(C1-C6)-烷基、(C3-C7)-环烷基、苯基和5-或6-元杂芳基，其中
(i) 所述(C3-C7)-环烷基、苯基和5-或6-元杂芳基任选被一个或两个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、氯代、溴代、氰基、二氟甲基、三氟甲基、(C1-C4)-烷基、羟基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基，
和
(ii) 所述(C1-C6)-烷基任选被至多三个氟原子或被一个或两个取代基取代，所述取代基独立地选自三氟甲基、羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基、(C3-C7)-环烷基、苯基、4-至7-元杂环烷基和5-或6-元杂芳基， 其中所述(C1-C4)-烷氧基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基取代基的烷基又任选被至多三个氟原子或一个或两个残基取代，所述残基独立地选自三氟甲基、羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基和4-至7-元杂环烷基，
以及其中
所述(C3-C7)-环烷基、苯基、4-至7-元杂环烷基和5-或6-元杂芳基又任选被一个或两个残基取代，所述残基独立地选自氟代、氯代、氰基、三氟甲基、(C1-C4)-烷基、氧代、羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基，
或
5
R 为(C1-C4)-烷氧基羰基、氨基羰基、单-(C1-C4)-烷基氨基羰基 或二-(C1-C4)-烷基氨基羰基，
或
3 5
R 和R 与它们连接的氮和碳原子一起结合形成下式所示的稠环，
其中
11
G 为-CH2-、-C(CH3)2-、-CH(CF3)-、-O-或-NR -，其中
11
R 为氢或(C1-C4)-烷基，
和
12A 12B
R 和R 独立地为氢或氟代，
或
4 5
R 和R 与它们连接的碳原子一起结合形成下式所示的稠和内酯或内酰胺环，
其中
13
M 为-O-或-NR -，其中
13
R 为氢或(C1-C4)-烷基。
2.根据权利要求1的式(I)化合物或其药学可接受的盐、水合物和/或溶剂化物，其中A 为-C(=O)-，
D 为-CH2-、-O-、-NH-或-N(CH3)-，
8A 8B 8A 8B
E 为-CR R -或*-CR R -CH2-**，其中
* 表示与二氢吡啶环连接，
** 表示与D基团连接，
和
8A 8B
R 和R 独立地为氢或甲基，
或
8A 8B
R 和R 与它们连接的碳原子一起结合形成环丙基环，
1
R 选自氢、(C1-C6)-烷基、(C3-C6)-环烷基、苯基、4-至6-元杂环烷基和5-或6-元杂芳基，其中
(i) 所述(C3-C6)-环烷基、苯基、4-至6-元杂环烷基和5-或6-元杂芳基任选被一个或两个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、氯代、二氟甲基、三氟甲基、(C1-C4)-烷基、氧代、羟基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基和4-至6-元杂环烷基，
其中所述(C1-C4)-烷氧基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基取代基的烷基又任选被羟基、甲氧基或乙氧基取代，
和
(ii) 所述(C1-C6)-烷基任选被一个、两个或三个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、三氟甲基、羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基、(C3-C6)-环烷基、4-至6-元杂环烷基和5-或6-元杂芳基，
其中所述(C3-C6)-环烷基、4-至6-元杂环烷基和5-或6-元杂芳基取代基又任选被一个或两个残基取代，所述残基独立地选自氟代、氯代、二氟甲基、三氟甲基、(C1-C4)-烷基、氧代、羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基，或
1 9A 9B 10
R 为式-NR R 或-OR 的基团，其中
9A
R 为氢或任选被一个或两个取代基取代的(C1-C4)-烷基，所述取代基独立地选自羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基，
9B
R 选自氢、(C1-C6)-烷基、(C3-C6)-环烷基和4-至6-元杂环烷基，其中
(i) 所述(C3-C6)-环烷基和4-至6-元杂环烷基任选被一个或两个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、二氟甲基、三氟甲基、(C1-C4)-烷基、氧代、羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基，
和
(ii) 所述(C1-C6)-烷基任选被一个、两个或三个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、三氟甲基、羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基、(C3-C6)-环烷基、4-至6-元杂环烷基和5-或6-元杂芳基，
其中所述(C3-C6)-环烷基、4-至6-元杂环烷基和5-或6-元杂芳基取代基又任选被一个或两个残基取代，所述残基独立地选自氟代、氯代、二氟甲基、三氟甲基、(C1-C4)-烷基、氧代、羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基，或
9A 9B
R 和R 与它们连结的氮原子一起结合形成4-至6-元杂环烷基环，其可以含有选自N和O的第二环杂原子，并且其任选被一个或两个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、(C1-C4)-烷基、氧代、羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基，
10
R 选自(C1-C6)-烷基、(C3-C6)-环烷基和4-至6-元杂环烷基，其中
(i) 所述(C3-C6)-环烷基和4-至6-元杂环烷基任选被一个或两个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、二氟甲基、三氟甲基、(C1-C4)-烷基、氧代、羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基，
和
(ii) 所述(C1-C6)-烷基任选被一个、两个或三个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、三氟甲基、羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基、(C3-C6)-环烷基、4-至6-元杂环烷基和5-或6-元杂芳基，
其中所述(C3-C6)-环烷基、4-至6-元杂环烷基和5-或6-元杂芳基取代基又任选被一个或两个残基取代，所述残基独立地选自氟代、氯代、二氟甲基、三氟甲基、(C1-C4)-烷基、氧代、羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基，
2
R 为氢或氟代，
3
R 为氢或(C1-C4)-烷基，
4
R 为氰基，
5
R 选自(C1-C4)-烷基、环丙基、苯基和5-或6-元杂芳基，其中
(i) 所述环丙基任选被一个或两个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、三氟甲基和甲基，
(ii) 所述苯基和5-或6-元杂芳基任选被一个或两个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、氯代、氰基、二氟甲基、三氟甲基、(C1-C4)-烷基和(C1-C4)-烷氧基，和
(iii) 所述(C1-C4)-烷基任选被至多三个氟原子或一个或两个取代基取代，所述取代基独立地选自(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基、(C3-C6)-环烷基、苯基、4-至6-元杂环烷基和5-元杂芳基，
其中所述(C1-C4)-烷氧基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基取代基的烷基又任选被至多三个氟原子或一个或两个残基取代，所述残基独立地选自(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基和4-至6-元杂环烷基，以及其中
所述(C3-C6)-环烷基、苯基、4-至6-元杂环烷基和5-元杂芳基又任选被一个或两个残基取代，所述残基独立地选自氟代、氯代、氰基、三氟甲基、(C1-C4)-烷基、氧代、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基，
或
3 5
R 和R 与它们连接的氮和碳原子一起结合形成下式所示的稠环，
其中
12A 12B
R 和R 独立地为氢或氟代，
或
4 5
R 和R 与它们连接的碳原子一起结合形成下式所示的稠和内酯环
。
3.根据权利要求1或2的式(I)化合物或其药学可接受的盐、水合物和/或溶剂化物，其中
A 为-C(=O)-，
D 为-O-，
E 为-CH2-、-CH(CH3)-或-C(CH3)2-，
1
R 选自氢、(C1-C4)-烷基、苯基和5-或6-元杂芳基，其中
(i) 所述苯基和5-或6-元杂芳基任选被一个或两个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、氯代、二氟甲基、三氟甲基、(C1-C3)-烷基、(C1-C3)-烷氧基、氨基、单-(C1-C3)-烷基氨基、二-(C1-C3)-烷基氨基和4-至6-元杂环烷基，
其中所述(C1-C3)-烷氧基、单-(C1-C3)-烷基氨基和二-(C1-C3)-烷基氨基取代基的烷基又任选被甲氧基或乙氧基取代，
和
(ii) 所述(C1-C4)-烷基任选被至多三个氟原子或一个或两个取代基取代，所述取代基独立地选自(C1-C3)-烷氧基、氨基、单-(C1-C3)-烷基氨基、二-(C1-C3)-烷基氨基和
4-至6-元杂环烷基，
其中所述4-至6-元杂环烷基取代基又任选被一个或两个残基取代，所述残基独立地选自氟代、三氟甲基、甲基、乙基、氧代、甲氧基、乙氧基、氨基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基和二乙基氨基，
或
1 9A 9B 10
R 为式-NR R 或-OR 的基团，其中
9A
R 为氢或任选被羟基、甲氧基、乙氧基、氨基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基或二乙基氨基取代的(C1-C4)-烷基，
9B
R 为氢或任选被至多三个氟原子或一个或两个取代基取代的(C1-C4)-烷基，所述取代基独立地选自羟基、(C1-C3)-烷氧基、氨基、单-(C1-C3)-烷基氨基、二-(C1-C3)-烷基氨基和4-至6-元杂环烷基，
其中所述4-至6-元杂环烷基取代基又任选被一个或两个残基取代，所述残基独立地选自氟代、三氟甲基、甲基、乙基、氧代、甲氧基、乙氧基、氨基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基和二乙基氨基，
或
9A 9B
R 和R 与它们连结的氮原子一起结合形成4-至6-元杂环烷基环，其可以含有选自N和O的第二环杂原子，并且其任选被一个或两个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、甲基、乙基、氧代、甲氧基、乙氧基、氨基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基和二乙基氨基，
10
R 为任选被至多三个氟原子或一个或两个取代基取代的(C1-C4)-烷基，所述取代基独立地选自羟基、(C1-C3)-烷氧基、氨基、单-(C1-C3)-烷基氨基、二-(C1-C3)-烷基氨基和
4-至6-元杂环烷基，
其中所述4-至6-元杂环烷基取代基又任选被一个或两个残基取代，所述残基独立地选自氟代、三氟甲基、甲基、乙基、氧代、甲氧基、乙氧基、氨基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基和二乙基氨基，
2
R 为氢或氟代，
3
R 为氢或甲基，
4
R 为氰基，
和
5
R 选自(C1-C4)-烷基、苯基、吡啶基、嘧啶基、 唑基和异 唑基，其中
(i) 所述苯基、吡啶基、嘧啶基、 唑基和异 唑基任选被一个或两个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、氯代、二氟甲基、三氟甲基、甲基、乙基、甲氧基和乙氧基，和
(ii) 所述(C1-C4)-烷基任选被至多三个氟原子或被取代基取代，所述取代基选自(C1-C3)-烷氧基、氨基、单-(C1-C3)-烷基氨基、二-(C1-C3)-烷基氨基、苯基、4-至6-元杂环烷基和5-元杂芳基，
其中所述苯基和5-元杂芳基取代基又任选被一个或两个残基取代，所述残基独立地选自氟代、氯代、三氟甲基、甲基、乙基和氨基，
以及其中
所述(C1-C3)-烷氧基、单-(C1-C3)-烷基氨基和二-(C1-C3)-烷基氨基取代基的烷基又任选被至多三个氟原子或被残基取代，所述残基选自甲氧基、乙氧基、氨基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、氮杂环丁烷子基、吡咯烷子基、哌啶子基、哌嗪子基和吗啉代,
以及其中
所述4-至6-元杂环烷基取代基以及所述氮杂环丁烷子基、吡咯烷子基、哌啶子基、哌嗪子基和吗啉代基团又任选被一个或两个残基取代，所述残基独立地选自氟代、甲基、乙基和氧代。
4.根据权利要求1、2或3的式(I)化合物或其药学可接受的盐、水合物和/或溶剂化物，其中
A 为-C(=O)-，
D 为-O-，
E 为-CH2-，
1
R 为氢、甲基或乙基，
2
R 为氢或氟代，
3
R 为氢或甲基，
4
R 为氰基，
和
5
R 为任选被甲氧基、乙氧基或至多三个氟原子取代的(C1-C4)-烷基，
或
为任选被一个或两个取代基取代的苯基，所述取代基独立地选自氟代、氯代、甲基和三氟甲基。
3
5.一种用于制备如权利要求1-4所定义的式(I)化合物的方法，其中 R 为氢，其特征在于式(II)的吲唑基醛，
其中 R1和R2具有权利要求1-4中所指出的含义，
或者
[A] 与式(III)化合物
4 5
或其烯醇钠反应，其中 R 和R 具有权利要求1-4中所指出的含义，
在酸、酸/碱的组合和/或脱水剂存在下反应，以得到式(IV)化合物
1 2 4 5
其中 R、R、R 和R 具有上文所述的含义，
和后者然后与式(V)化合物缩合，
其中 A、D和E 具有权利要求1-4中所指出的含义，
在氨源例如醋酸铵存在下进行，以得到式(I-A)化合物
1 2 4 5
其中 A、D、E、R、R、R 和R 具有上文所述的含义，
或
[B] 与式(V)化合物反应
其中 A、D和E 具有权利要求1-4中所指出的含义，
任选在碱和/或脱水剂存在下反应，以生成式(VI)化合物
其中 A、D、E、R1和R2具有上文所述的含义，
和后者然后与式(VII)化合物缩合，
4 5
其中 R 和R 具有权利要求1-4中所指出的含义，
在酸存在下进行，以得到式(I-A)化合物
1 2 4 5
其中 A、D、E、R、R、R 和 R 具有上文所述的含义，
在适当的情况下，任选随后(i)将化合物(I-A)分离为它们各自的对映体和/或非对映体，优选使用色谱方法，和/或(ii)通过使用相应的溶剂和/或酸或碱处理将化合物(I-A)转化为它们各自的水合物、溶剂化物、盐和/或盐的水合物或溶剂化物。
6.权利要求1-4中任一项所定义的化合物，其用于治疗或预防疾病。
7.权利要求1-4中任一项所定义的化合物在制备用于治疗或预防细胞增殖性疾病的药物组合物中的用途。
8.权利要求7的用途，其中所述细胞增殖性疾病为癌症。
9.药物组合物，其包含权利要求1-4中任一项所定义的化合物，或其药学可接受的盐、水合物和/或溶剂化物，以及药学可接受的赋形剂。
10.权利要求9的药物组合物，其还包含一种或多种附加的治疗剂。
11.权利要求10的药物组合物，其中所述附加的治疗剂为抗肿瘤剂。
12.权利要求9-11中任一项所定义的药物组合物，其用于治疗或预防细胞增殖性疾病。
13.一种治疗或预防哺乳动物中细胞增殖性疾病的方法，其包含给予需要其的哺乳动物治疗有效量的一种或多种权利要求1-4中任一项所定义的化合物，或权利要求9-11中任一项所定义的药物组合物。
14.权利要求13的方法，其中所述细胞增殖性疾病为癌症。
15.权利要求14的方法，其中所述癌症为乳腺、呼吸道、脑、生殖器官、消化道、泌尿道、眼、肝、皮肤、头或颈、甲状腺、甲状旁腺的癌症，或者实体瘤的远程转移。
16.权利要求14的方法，其中权利要求1-4中任一项所定义的化合物或权利要求9-11中任一项所定义的药物组合物与外科手术或放射疗法结合使用。
二环和三环吲唑-取代的1,4-二氢吡啶衍生物及其用途
技术领域
[0001] 本发明涉及新的具有蛋白酪氨酸激酶抑制活性的二环和三环吲唑-取代的1,4-二氢吡啶衍生物，其制备方法及其用于治疗c-Met-介导的疾病或c-Met-介导的病症，特别是癌症和其它增殖性疾病的用途。
背景技术
[0002] 癌症是最常见的分布广泛的疾病之一。在2002年，全世界超过440万人被诊断患有乳腺癌、结肠癌、卵巢癌、肺癌或前列腺癌，并且超过250万人死于这些致病性疾病(Globocan 2002 Report, http://www-dep.iarc.fr/globocan/downloads.htm)。仅在美国，预计在2005年有超过125万的新增病例并且有超过500 000人死于癌症。这些新增病例中的大多数预计是结肠(~100 000)、肺(~170 000)、乳腺(~210 000)和前列腺(~230000)的癌症。预计在未来十年癌症的发病率和流行率都增加约15%，反映在1.4%的平均增长率(American Cancer Society, Cancer Facts and Figures 2005；http://www.cancer.org/docroot/STT/content/STT_1x_Cancer_Facts_Figures_2007.asp)。
[0003] 癌症的发生有许多方式，这是它们的治疗是困难的原因之一。一种方式是细胞通过癌蛋白的转化，癌蛋白通过遗传突变来源于正常细胞蛋白质，转化导致这些蛋白质非生理学活化。许多癌蛋白来源的一个家族的蛋白质是酪氨酸激酶 (例如，src 激酶)，特别是受体酪氨酸激酶 (RTKs)。在过去的二十年中，许多方面的研究已经证实受体酪氨酸激酶 (RTK)-介导的信号在哺乳动物细胞生长的调节中的重要性。近来，临床使用酪氨酸激酶的选择性小分子抑制剂作为抗肿瘤剂(anti-tumourigenic agents)已经取得了成果。
[0004] c-Met 受体也是受体酪氨酸激酶。在二十世纪八十年代初鉴定了其致癌潜能，那时从化学诱导的人骨肉瘤细胞系中分离到突变的Met，所述细胞系含有与其N-末端的二聚体化功能域稠合的Met基因的激酶结构域 [C.S. Cooper等，Nature 311：29-33 (1984)]。
[0005] 细胞Met蛋白是合成为单链190 kd前体的异二聚化跨膜蛋白质[G.A. Rodrigues等，Mol. Cell Biol. 11：2962-70 (1991)]。该前体在氨基酸残基307之后进行细胞内裂解以形成50 kd 的α-链和145 kd的β-链，二者通过二硫化物桥连接。α-链完全是细胞外的，而β-链可以跨越质膜。β-链由N-末端的sema结构域组成，该结构域与α-链一起调节配体结合。β-链外功能域的剩余部分由半胱氨酸富集结构域和四个免疫球蛋白功能区组成，其随后为跨膜区域和细胞内结构域。细胞内结构域含有近膜域、激酶结构域和C-末端结构域，其调节下游信号。一旦配体结合，诱导受体的二聚化，激酶结构域通过近膜区域(Y1003)、激酶 (Y1234和Y1235)的活化环和羧基-末端结构域(Y1349和Y1356)中的酪氨酸自磷酸化步骤的级联活化。磷酸化的Y1349和Y1356包含下游c-Met信号所需的结合接头蛋白的多底物停靠位点 [C. Ponzetto等，Cell 77：261-71 (1994)]。c-Met信号最重要的底物之一是scaffolding 接头蛋白Gab1，其通过异常磷酸酪氨酸结合位点(术语mbs：met结合位点)与Y1349或Y1356结合，导致独特的延长的细胞内信号。另一重要的底物是接头蛋白Grb2。根据细胞环境，这些接头物调节各种例如通过ERK/MAPK、PI3K/Akt、Ras、JNK、STAT、NFκB和β-连环蛋白产生信号的细胞内信号途径的活化。
[0006] c-Met独特地通过肝细胞生长因子(HGF) (还称为分散因子)及其剪接变体活化，这是其已知的唯一生物学活性配体 [L. Naldini等，Oncogene 6：501-4 (1991)]。HGF具有独特的结构，其显示与纤溶酶原家族的蛋白水解酶的相似性。它由非酶活性的氨基-末端结构域组成，氨基-末端结构域之后为四个kringle结构域和丝氨酸蛋白酶同源性结构域。与c-Met相似，HGF被合成为非活性单链前体(前-HGF)，非活性单链前体被丝氨酸蛋白酶(例如，纤溶酶原活化剂和凝血因子)细胞外裂解并转化为二硫化物-连接的活性α-和β-链异二聚体。HGF以高亲和力结合硫酸类肝素蛋白多糖，这使其保持主要与细胞外基质结合并限制其扩散。晶体结构分析表明HGF形成二聚体，其一旦与c-Met结合即诱导受体的二聚化。
[0007] HGF由间质细胞表达，其与特别是在上皮细胞中广泛表达的c-Met结合，在各种组织包括上皮细胞、内皮细胞、神经元细胞和造血细胞中导致多效性。该效应通常包括下列现象的一种或全部：i) 刺激有丝分裂发生；通过对肝细胞的有丝分裂促进活性鉴定出HGF；ii) 刺激侵入和迁移；在独立的实验方法中，基于其细胞运动性(“分散”)的诱导作用，HGF被鉴定为分散因子；和iii) 刺激形态发生(小管发生)。HGF诱导来自犬肾细胞的分枝小管在胶原基质中的形成。此外，来自遗传修饰的小鼠和来自细胞培养实验的证据表明c-Met可以作为存活受体并保护细胞免于细胞凋亡 [N. Tomita等，Circulation 107：1411-1417 (2003)；S. Ding等，Blood 101：4816-4822 (2003)；Q. Zeng等，J. Biol. Chem. 277：
25203-25208 (2002)；N. Horiguchi等，Oncogene 21：1791-1799 (2002)；A. Bardelli等，Embo J. 15：6205-6212 (1996)；P. Longati等，Cell Death Differ. 3：23-28 (1996)；
E.M. Rosen, Symp. Soc. Exp. Biol. 47：227-234 (1993)]。HGF的这些生物学进程的协调执行会产生特异的遗传程序，其被称为“侵袭性生长”。
25203-25208 (2002)；N. Horiguchi等，Oncogene 21：1791-1799 (2002)；A. Bardelli等，Embo J. 15：6205-6212 (1996)；P. Longati等，Cell Death Differ. 3：23-28 (1996)；
E.M. Rosen, Symp. Soc. Exp. Biol. 47：227-234 (1993)]。HGF的这些生物学进程的协调执行会产生特异的遗传程序，其被称为“侵袭性生长”。
[0008] 在正常条件下，c-Met和HGF对于小鼠的胚胎发育，特别是对于胎盘和肝的发育以及对于四肢体节的成肌细胞的定向迁移是必不可少的。c-Met或HGF基因的遗传中断导致相同的表型，这表明它们独特的相互作用。人们对成年生物体中c-Met/HGF的生理学作用了解较少，但实验证据表明它们与伤口愈合、组织再生、造血作用和组织稳态有关。
[0009] 癌蛋白TPR-MET的鉴别是c-Met在肿瘤发生中可能发挥作用的最重要的暗示。附加的重要的证据来源于许多不同的实验方法。人和鼠细胞系中c-Met或HGF的过表达诱导肿瘤发生和转移表型(当在裸鼠中表达时)。c-Met或HGF的转基因过表达诱导小鼠的肿瘤发生。
[0010] 更有趣地，已经在散发性和遗传性乳头状肾癌(HPRC)以及其它癌类型例如肺癌、胃癌、肝癌、头和颈癌、卵巢癌和脑癌中鉴定了c-Met的错义突变或活化受体的突变。重要地，HPRC家族的特异性c-Met突变与疾病隔离，形成c-Met活化和人癌症之间的因果关系[L. Schmidt等，Nat. Genet. 16：68-73 (1997)；B. Zbar等，Adv. Cancer Res. 75：163-201 (1998)]。具有最强转化活性的活化突变位于活化环(D1228N/H和Y1230H/D/C)和邻近的P+1环(M1250T)中。已经发现附加的较弱的突变接近催化环并在激酶结构域的A叶内。此外，在肺肿瘤中已经观察到c-Met近膜域中的某些突变，其不直接活化激酶，而是通过使蛋白质对遍在蛋白化和随后的降解的抵抗来稳定蛋白质[M. Kong-Beltran等，Cancer Res. 66：283-9 (2006)；T.E. Taher等，J. Immunol. 169：3793-800 (2002)；P. Peschard等，Mol. Cell 8：995-1004 (2001)]。有趣地是，c-Met的体细胞突变与各种癌症中增加的侵润性和广泛的转移相关。当种系和体细胞突变的频率较低(低于5%)时，已经观察到其它主要机制，在没有突变的情况下，其通过旁泌性或自身内分泌机制导致c-Met信号脱调节。
在来源于间质细胞的肿瘤例如在生理学上产生HGF的骨肉瘤或横纹肌肉瘤中，以及在外胚层来源的胶质母细胞瘤和乳癌中已经观察到旁泌性活化。
在来源于间质细胞的肿瘤例如在生理学上产生HGF的骨肉瘤或横纹肌肉瘤中，以及在外胚层来源的胶质母细胞瘤和乳癌中已经观察到旁泌性活化。
[0011] 然而，最常见的病例是其中c-Met过表达的癌，正如在结肠、胰、胃、乳腺、前列腺、卵巢和肝的癌中所观察到的那样。例如，通过基因扩增可以发生过表达，正如在胃和肺肿瘤细胞系中所观察到的那样。最近，在获得对EGF 受体抑制作用的抗性的肺肿瘤细胞系中检测到c-Met的过表达 [J.A. Engelmann等，Science 316：1039-1043 (2007)]。某些过表达c-Met的上皮性肿瘤也共表达HGF，导致自分泌c-Met/HGF刺激环并从而规避对间质细胞来源的HGF的需要。
[0012] 一般而言，已经发现无论其具体机制如何，人癌症中c-Met的异常活化通常与预后不良相关 [J.G. Christensen等，Cancer Lett. 225：1-26 (2005)]。
[0013] 总之，已经进行了极多证实c-Met为重要的癌靶点的体外和体内研究，全面的列表可以在 http://www.vai.org/met上查看 [C. Birchmeier等，Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 4：915-25 (2003)]。已经采用许多策略来减弱人肿瘤中异常的Met信号，包括HGF拮抗剂和小分子抑制剂等等。目前许多小分子抑制剂正处于临床研发中，例如ARQ-197 (Arqule)、foretinib (XL-880, Exelixis/GSK)和PH-2341066 (Pfizer)；最近已经对它们进行了综述 [J.J. Cui, Expert Opin. Ther. Patents 17：1035-45 (2007)]。
[0014] 可以用于治疗心血管疾病的内酯-、内酰胺-或环 烷酮-稠合的(annellated)4-杂芳基-1,4-二氢吡啶衍生物已经描述于特别是EP 0 214 437-A2、EP 0
234 517-A1、EP 0 450 420-A2、EP 0 622 365-A1、EP 0 622 366-A1和EP 0 630 895-A1中。在2,3-位含有稠环系统的其它4-杂芳基-1,4-二氢吡啶衍生物及其治疗各种疾病的用途已经披露于WO 00/51986-A1、WO 00/78768-A1、WO 02/10164-A2、WO 2005/025507-A2、WO 2006/ 047537-A1、WO 2006/066011-A2和WO 2007/051062-A2中。近来，具有c-Met 激酶抑制活性的1,4-二氢吡啶-型化合物已经描述于WO 2008/071451-A1中。
234 517-A1、EP 0 450 420-A2、EP 0 622 365-A1、EP 0 622 366-A1和EP 0 630 895-A1中。在2,3-位含有稠环系统的其它4-杂芳基-1,4-二氢吡啶衍生物及其治疗各种疾病的用途已经披露于WO 00/51986-A1、WO 00/78768-A1、WO 02/10164-A2、WO 2005/025507-A2、WO 2006/ 047537-A1、WO 2006/066011-A2和WO 2007/051062-A2中。近来，具有c-Met 激酶抑制活性的1,4-二氢吡啶-型化合物已经描述于WO 2008/071451-A1中。
发明内容
[0015] 因此可见，按照本发明所要解决的技术问题是提供具有c-Met 激酶抑制活性的替代化合物，从而为c-Met-介导的疾病特别是癌症和其它增殖性疾病的治疗提供新的治疗选择。
[0016] 一方面，本发明涉及通式(I)的吲唑-取代的1,4-二氢吡啶衍生物，其中
A 为-C(=O)-或-S(=O)2-，
6A 6B 7
D 为-CR R -、-O-或-NR-，其中
6A 6B 7
R 、R 和R 独立地为氢或任选被羟基或至多三个氟原子取代的(C1-C4)-烷基，
8A 8B 8A 8B 8C 8D
E 为-CR R -或*-CR R -CR R -**，其中
* 表示与二氢吡啶环连接，
** 表示与D基团连接，
和
8A 8B 8C 8D
R 、R 、R 和R 独立地为氢、氟代或任选被羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、
单-(C1-C4)-烷基氨基或二-(C1-C4)-烷基氨基或至多三个氟原子取代的(C1-C4)-烷基，或
8A 8B
R 和R 与它们连接的碳原子一起结合形成环丙基或环丁基环，
1
R 选自氢、氯代、溴代、(C1-C6)-烷基、(C3-C7)-环烷基、苯基、4-至7-元杂环烷基、5-至10-元杂芳基和苯并-1,4-二氧杂环己烷基，其中
(i) 所述(C3-C7)-环烷基、苯基、4-至7-元杂环烷基和5-至10-元杂芳基任选被一个或两个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、氯代、溴代、二氟甲基、三氟甲基、(C1-C4)-烷基、氧代、羟基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基、(C3-C6)-环烷基和4-至6-元杂环烷基，
其中所述(C1-C4)-烷氧基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基取代基的烷基依次任选被羟基或(C1-C4)-烷氧基取代，
和
(ii) 所述(C1-C6)-烷基任选被一个、两个或三个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、三氟甲基、羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基、(C3-C7)-环烷基、苯基、4-至7-元杂环烷基和5-至10-元杂芳基，
其中所述(C3-C7)-环烷基、苯基、4-至7-元杂环烷基和5-至10-元杂芳基取代基依次任选被一个或两个残基取代，所述残基独立地选自氟代、氯代、溴代、二氟甲基、三氟甲基、(C1-C4)-烷基、氧代、羟基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基，
或
1 9A 9B 10
R 为式-NR R 或-OR 的基团，其中
9A 9B
R 和R 独立地选自氢、(C1-C6)-烷基、(C3-C7)-环烷基和4-至7-元杂环烷基，其中(i) 所述(C3-C7)-环烷基和4-至7-元杂环烷基任选被一个或两个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、二氟甲基、三氟甲基、(C1-C4)-烷基、氧代、羟基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基，和
(ii) 所述(C1-C6)-烷基任选被一个、两个或三个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、三氟甲基、羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基、(C3-C7)-环烷基、苯基、4-至7-元杂环烷基和5-至10-元杂芳基，
其中所述(C3-C7)-环烷基、苯基、4-至7-元杂环烷基和5-至10-元杂芳基取代基依次任选被一个或两个残基取代，所述残基独立地选自氟代、氯代、溴代、二氟甲基、三氟甲基、(C1-C4)-烷基、氧代、羟基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基，
或
9A 9B
R 和R 与它们连结的氮原子一起结合形成4-至7-元杂环烷基环，其可以含有选自N、O和S的第二环杂原子，并且其任选被一个或两个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、(C1-C4)-烷基、氧代、羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基和(C3-C6)-环烷基，
10
R 选自(C1-C6)-烷基、(C3-C7)-环烷基和4-至7-元杂环烷基，其中
(i) 所述(C3-C7)-环烷基和4-至7-元杂环烷基任选被一个或两个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、二氟甲基、三氟甲基、(C1-C4)-烷基、氧代、羟基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基，和
(ii) 所述(C1-C6)-烷基任选被一个、两个或三个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、三氟甲基、羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基、(C3-C7)-环烷基、苯基、4-至7-元杂环烷基和5-至10-元杂芳基，
其中所述(C3-C7)-环烷基、苯基、4-至7-元杂环烷基和5-至10-元杂芳基取代基依次任选被一个或两个残基取代，所述残基独立地选自氟代、氯代、溴代、二氟甲基、三氟甲基、(C1-C4)-烷基、氧代、羟基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基，
2
R 为氢、氟代、氯代或甲基，
3
R 为氢、(C1-C4)-烷基或环丙基，
4
R 为氰基或氨基羰基，
5
R 选自(C1-C6)-烷基、(C3-C7)-环烷基、苯基和5-或6-元杂芳基，其中
(i) 所述(C3-C7)-环烷基、苯基和5-或6-元杂芳基任选被一个或两个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、氯代、溴代、氰基、二氟甲基、三氟甲基、(C1-C4)-烷基、羟基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基，
和
(ii) 所述(C1-C6)-烷基任选被至多三个氟原子或一个或两个取代基取代，所
述取代基独立地选自三氟甲基、羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基、(C3-C7)-环烷基、苯基、4-至7-元杂环烷基和5-或6-元杂芳基， 其中所述(C1-C4)-烷氧基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基取代基的烷基依次任选被至多三个氟原子或一个或两个残基取代，所述残基独立地选自三氟甲基、羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基和4-至7-元杂环烷基，
以及其中
所述(C3-C7)-环烷基、苯基、4-至7-元杂环烷基和5-或6-元杂芳基依次任选被一个或两个残基取代，所述残基独立地选自氟代、氯代、氰基、三氟甲基、(C1-C4)-烷基、氧代、羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基，
或
5
R 为(C1-C4)-烷氧基羰基、氨基羰基、单-(C1-C4)-烷基氨基羰基或
二-(C1-C4)-烷基氨基羰基，
或
3 5
R 和R 与它们连接的氮和碳原子一起结合形成下式所示的稠环，
其中
11
G 为-CH2-、-C(CH3)2-、-CH(CF3)-、-O-或-NR -，其中
11
R 为氢或(C1-C4)-烷基，
和
12A 12B
R 和R 独立地为氢或氟代，
或
4 5
R 和R 与它们连接的碳原子一起结合形成下式所示的稠和内酯或内酰胺环，
其中
13
M 为-O-或-NR -，其中
13
R 为氢或(C1-C4)-烷基。
A 为-C(=O)-或-S(=O)2-，
6A 6B 7
D 为-CR R -、-O-或-NR-，其中
6A 6B 7
R 、R 和R 独立地为氢或任选被羟基或至多三个氟原子取代的(C1-C4)-烷基，
8A 8B 8A 8B 8C 8D
E 为-CR R -或*-CR R -CR R -**，其中
* 表示与二氢吡啶环连接，
** 表示与D基团连接，
和
8A 8B 8C 8D
R 、R 、R 和R 独立地为氢、氟代或任选被羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、
单-(C1-C4)-烷基氨基或二-(C1-C4)-烷基氨基或至多三个氟原子取代的(C1-C4)-烷基，或
8A 8B
R 和R 与它们连接的碳原子一起结合形成环丙基或环丁基环，
1
R 选自氢、氯代、溴代、(C1-C6)-烷基、(C3-C7)-环烷基、苯基、4-至7-元杂环烷基、5-至10-元杂芳基和苯并-1,4-二氧杂环己烷基，其中
(i) 所述(C3-C7)-环烷基、苯基、4-至7-元杂环烷基和5-至10-元杂芳基任选被一个或两个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、氯代、溴代、二氟甲基、三氟甲基、(C1-C4)-烷基、氧代、羟基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基、(C3-C6)-环烷基和4-至6-元杂环烷基，
其中所述(C1-C4)-烷氧基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基取代基的烷基依次任选被羟基或(C1-C4)-烷氧基取代，
和
(ii) 所述(C1-C6)-烷基任选被一个、两个或三个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、三氟甲基、羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基、(C3-C7)-环烷基、苯基、4-至7-元杂环烷基和5-至10-元杂芳基，
其中所述(C3-C7)-环烷基、苯基、4-至7-元杂环烷基和5-至10-元杂芳基取代基依次任选被一个或两个残基取代，所述残基独立地选自氟代、氯代、溴代、二氟甲基、三氟甲基、(C1-C4)-烷基、氧代、羟基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基，
或
1 9A 9B 10
R 为式-NR R 或-OR 的基团，其中
9A 9B
R 和R 独立地选自氢、(C1-C6)-烷基、(C3-C7)-环烷基和4-至7-元杂环烷基，其中(i) 所述(C3-C7)-环烷基和4-至7-元杂环烷基任选被一个或两个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、二氟甲基、三氟甲基、(C1-C4)-烷基、氧代、羟基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基，和
(ii) 所述(C1-C6)-烷基任选被一个、两个或三个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、三氟甲基、羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基、(C3-C7)-环烷基、苯基、4-至7-元杂环烷基和5-至10-元杂芳基，
其中所述(C3-C7)-环烷基、苯基、4-至7-元杂环烷基和5-至10-元杂芳基取代基依次任选被一个或两个残基取代，所述残基独立地选自氟代、氯代、溴代、二氟甲基、三氟甲基、(C1-C4)-烷基、氧代、羟基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基，
或
9A 9B
R 和R 与它们连结的氮原子一起结合形成4-至7-元杂环烷基环，其可以含有选自N、O和S的第二环杂原子，并且其任选被一个或两个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、(C1-C4)-烷基、氧代、羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基和(C3-C6)-环烷基，
10
R 选自(C1-C6)-烷基、(C3-C7)-环烷基和4-至7-元杂环烷基，其中
(i) 所述(C3-C7)-环烷基和4-至7-元杂环烷基任选被一个或两个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、二氟甲基、三氟甲基、(C1-C4)-烷基、氧代、羟基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基，和
(ii) 所述(C1-C6)-烷基任选被一个、两个或三个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、三氟甲基、羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基、(C3-C7)-环烷基、苯基、4-至7-元杂环烷基和5-至10-元杂芳基，
其中所述(C3-C7)-环烷基、苯基、4-至7-元杂环烷基和5-至10-元杂芳基取代基依次任选被一个或两个残基取代，所述残基独立地选自氟代、氯代、溴代、二氟甲基、三氟甲基、(C1-C4)-烷基、氧代、羟基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基，
2
R 为氢、氟代、氯代或甲基，
3
R 为氢、(C1-C4)-烷基或环丙基，
4
R 为氰基或氨基羰基，
5
R 选自(C1-C6)-烷基、(C3-C7)-环烷基、苯基和5-或6-元杂芳基，其中
(i) 所述(C3-C7)-环烷基、苯基和5-或6-元杂芳基任选被一个或两个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、氯代、溴代、氰基、二氟甲基、三氟甲基、(C1-C4)-烷基、羟基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基，
和
(ii) 所述(C1-C6)-烷基任选被至多三个氟原子或一个或两个取代基取代，所
述取代基独立地选自三氟甲基、羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基、(C3-C7)-环烷基、苯基、4-至7-元杂环烷基和5-或6-元杂芳基， 其中所述(C1-C4)-烷氧基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基取代基的烷基依次任选被至多三个氟原子或一个或两个残基取代，所述残基独立地选自三氟甲基、羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基和4-至7-元杂环烷基，
以及其中
所述(C3-C7)-环烷基、苯基、4-至7-元杂环烷基和5-或6-元杂芳基依次任选被一个或两个残基取代，所述残基独立地选自氟代、氯代、氰基、三氟甲基、(C1-C4)-烷基、氧代、羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基，
或
5
R 为(C1-C4)-烷氧基羰基、氨基羰基、单-(C1-C4)-烷基氨基羰基或
二-(C1-C4)-烷基氨基羰基，
或
3 5
R 和R 与它们连接的氮和碳原子一起结合形成下式所示的稠环，
其中
11
G 为-CH2-、-C(CH3)2-、-CH(CF3)-、-O-或-NR -，其中
11
R 为氢或(C1-C4)-烷基，
和
12A 12B
R 和R 独立地为氢或氟代，
或
4 5
R 和R 与它们连接的碳原子一起结合形成下式所示的稠和内酯或内酰胺环，
其中
13
M 为-O-或-NR -，其中
13
R 为氢或(C1-C4)-烷基。
[0017] 本发明化合物还可以以它们的盐、水合物和/或溶剂化物的形式存在。
[0018] 用于本发明目的的盐优选为本发明化合物的药学可接受的盐 (例如，参见S. M. Berge等，"Pharmaceutical Salts", J. Pharm. Sci. 1977, 66, 1-19)。
[0019] 药学可接受的盐包括无机酸、羧酸和磺酸的酸加成盐，例如盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、萘二磺酸、乙酸、丙酸、乳酸、酒石酸、苹果酸、柠檬酸、富马酸、马来酸和苯甲酸的盐。
[0020] 药学可接受的盐还包括常用碱的盐，诸如例如并优选碱金属盐(例如钠和钾盐)、碱土金属盐(例如钙和镁盐)和衍生自氨或有机胺的铵盐，例如示例性和优选的有机胺为乙胺、二乙胺、三乙胺、乙基二异丙胺、单乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二环己基胺、二甲基氨基乙醇、二苄胺、N-甲基吗啉、N-甲基哌啶、二氢枞胺、精氨酸、赖氨酸和乙二胺。
[0021] 本发明化合物或它们的盐的水合物为化合物与水的化学计算量的组合物，诸如，例如，半水合物、一水合物或二水合物。
[0022] 本发明化合物或它们的盐的溶剂化物为化合物与溶剂的化学计算量的组合物。
[0023] 本发明化合物可以因为不对称中心的本质或旋转受限而以异构体(对映体，非对映体)的形式存在。任何异构体都可以存在，其中不对称中心为(R)-、(S)-或(R,S)构型。
[0024] 还应当理解，当本发明化合物中存在两个或多个不对称中心时，例示结构的若干非对映体和对映体通常是可能的，而且纯的非对映体和纯的对映体代表着优选的实施方案。这意味着纯的立体异构体、纯的非对映体、纯的对映体及其混合物都在本发明的范围内。
[0025] 由于双键或环周围的取代基的本质而产生的几何异构体可以顺式(= Z-)或反式(= E-)形式存在，而且两种异构形式都包括在本发明的范围内。
[0026] 本发明化合物的所有异构体，无论是否分离、纯的、部分纯的或者以外消旋混合物的形式，都包括在本发明的范围内。所述异构体的纯化和所述异构体混合物的分离可以通过本领域已知的标准技术实现。例如，通过色谱方法或结晶可以将非对映体混合物分离为各个异构体，而且通过在手性相上的色谱方法或通过拆分可以将外消旋体分离为各自的对映体。
[0027] 此外，本发明包括上述化合物的所有可能的互变异构形式。
[0028] 除非另有说明，下列定义适用于贯穿本说明书和权利要求书中所用的取代基和残基：烷基通常表示具有1-6个、优选1-4个、更优选1-3个碳原子的直链或支链饱和烃基。
非限制性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、新戊基、己基、异己基。其同样适用于例如烷氧基、单烷基氨基、二烷基氨基等的基团。
非限制性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、新戊基、己基、异己基。其同样适用于例如烷氧基、单烷基氨基、二烷基氨基等的基团。
[0029] 烷氧基示例性和优选地表示甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基和叔丁氧基。其同样适用于例如烷氧基羰基的基团。
[0030] 烷氧基羰基示例性和优选地表示甲氧基羰基、乙氧基羰基、正丙氧基羰基、异丙氧基羰基、正丁氧基羰基和叔丁氧基羰基。
[0031] 单烷基氨基通常表示具有一个与氮原子相连的烷基残基的氨基基团。非限制性实例包括甲基氨基、乙基氨基、正丙基氨基、异丙基氨基、正丁基氨基、叔丁基氨基。其同样适用于例如单烷基氨基羰基的基团。
[0032] 二烷基氨基通常表示具有两个独立选择的与氮原子相连的烷基残基的氨基基团。非限制性实例包括N,N-二甲基氨基、N,N-二乙基氨基、N,N-二异丙基氨基、N-乙基-N-甲基氨基、N-甲基-N-正丙基氨基、N-异丙基-N-正丙基氨基、N-叔丁基-N-甲基氨基。其同样适用于例如二烷基氨基羰基的基团。
[0033] 单烷基氨基羰基示例性和优选地表示甲基氨基羰基、乙基氨基羰基、正丙基氨基羰基、异丙基氨基羰基、正丁基氨基羰基和叔丁基氨基羰基。
[0034] 二烷基氨基羰基示例性和优选地表示N,N-二甲基氨基羰基、N,N-二乙基氨基羰基、N,N-二异丙基氨基羰基、N-乙基-N-甲基氨基羰基、N-甲基-N-正丙基氨基羰基、N-异丙基-N-正丙基氨基羰基和N-叔丁基-N-甲基氨基羰基。
[0035] 环烷基通常表示具有3-7个、优选3-6个碳原子的单环-或二环饱和烃基。优选为单环环烷基基团。非限制性实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、二环[2.2.1]庚基。
[0036] 杂环烷基通常表示具有总数为4-7个、优选4-6个环原子的单环-或二环饱和杂环基团，所述环原子包括3-6个、优选3-5个碳原子和至多2个独立地选自N、O、S、SO和SO2的杂原子和/或杂基团，其环系统可以通过环碳原子或者，如果可能，通过环氮原子连接。非限制性实例包括氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、吡咯烷基、吡唑烷基、四氢呋喃基、硫杂环戊烷基、二氧噻吩烷基、1,3-二氧杂环戊烷基、1,3- 唑烷基、1,3-噻唑烷基、哌啶基、哌嗪基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、1,3-二氧杂环己烷基， 1,4-二氧杂环己烷基， 吗啉基、硫代吗啉基、1,1-二氧桥硫代吗啉基、全氢氮杂 基、全氢-1,4-二氮杂基、全氢-1,4-氧杂氮杂 基、7-氮杂二环[2.2.1]庚基、3-氮杂二环[3.2.0]庚基、7-氮杂二环[4.1.0]庚基、2,5-二氮杂二环[2.2.1]庚基、2-氧杂-5-氮杂二环[2.2.1]庚基。优选为具有至多2个选自N和O的杂原子的4-至6-元单环杂环烷基基团，例如示例性和优选地氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、1,3-二氧杂环戊烷基、吡咯烷基、四氢吡喃基、1,4-二氧杂环己烷基、哌啶基、哌嗪基和吗啉基。
[0037] 氮杂环丁烷子基(azetidino)、吡咯烷子基(pyrrolidino)、哌啶 子基(piperidino)、哌嗪子基(piperazino)或吗啉代具体是指通过环氮原子与分子的剩余部分连接的各个杂环烷基基团。
[0038] 杂芳基通常表示具有总数为5-10个环原子的单环-或双环芳香杂环基团，所述环原子包括2-9个碳原子和至多3个独立地选自N、O和S的杂原子，其环系统可以通过环碳原子或者，如果可能，通过环氮原子连接。非限制性实例包括呋喃基、吡咯基、噻吩基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、 唑基、异 唑基、异噻唑基、三唑基、 二唑基、噻二唑基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基、三嗪基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并咪唑基、苯并 唑基、苯并噻唑基、苯并三唑基、苯并噻二唑基、吲哚基、异吲哚基、吲唑基、喹啉基、异喹啉基、萘啶基、喹唑啉基、喹喔啉基、酞嗪基、咪唑并吡啶基、吡唑并吡啶基、吡咯并嘧啶基。优选为具有至多2个氮原子的6-元杂芳基基团，例如吡啶基、嘧啶基、哒嗪基和吡嗪基，和具有至多2个选自N、O和S的杂原子的5-元杂芳基基团，例如示例性和优选地噻吩基、呋喃基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、 唑基、异噻唑基和异 唑基。
[0039] 卤素表示氟、氯、溴和碘的基团。优选为氟和氯的基团。
[0040] 氧代表示双键键合的氧原子。
[0041] 在整个该文件中，为了简便起见，优选使用单数语言而不是复数语言，但是除非另有说明，单数语言通常意味着包括复数术语。例如，表述“一种治疗患者中疾病的方法，该方法包含给予患者有效量的式(I)化合物”是指包括同时治疗一种以上的疾病以及给予一种以上的式(I)化合物。
[0042] 在优选的实施方案中，本发明涉及通式(I)化合物，其中 A 为-S(=O)2-，和D 为-CH2-。
[0043] 在另一优选的实施方案中，本发明涉及通式(I)化合物，其中A为-C(=O)-，
和
7
D 为-CH2-、-O-或-NR-，其中
7
R 为氢或(C1-C4)-烷基。
和
7
D 为-CH2-、-O-或-NR-，其中
7
R 为氢或(C1-C4)-烷基。
[0044] 在进一步优选的实施方案中，本发明涉及通式(I)化合物，其中8A 8B
E 为-CR R -，其中
8A 8B
R 和R 独立地为氢或(C1-C4)-烷基，
或
8A 8B
R 和R 与它们连接的碳原子一起结合形成环丙基环。
E 为-CR R -，其中
8A 8B
R 和R 独立地为氢或(C1-C4)-烷基，
或
8A 8B
R 和R 与它们连接的碳原子一起结合形成环丙基环。
[0045] 在另一优选的实施方案中，本发明涉及通式(I)化合物，其中 R4为氰基。
[0046] 在更优选的实施方案中，本发明涉及通式(I)化合物，其中A 为-C(=O)-，
D 为-CH2-、-O-、-NH-或-N(CH3)-，
8A 8B 8A 8B
E 为-CR R -或*-CR R -CH2-**，其中
* 表示与二氢吡啶环连接，
** 表示与D基团连接，
和
8A 8B
R 和R 独立地为氢或甲基，
或
8A 8B
R 和R 与它们连接的碳原子一起结合形成环丙基环，
1
R 选自氢、(C1-C6)-烷基、(C3-C6)-环烷基、苯基、4-至6-元杂环烷基和5-或6-元杂芳基，其中
(i) 所述(C3-C6)-环烷基、苯基、4-至6-元杂环烷基和5-或6-元杂芳基任选被一个或两个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、氯代、二氟甲基、三氟甲基、(C1-C4)-烷基、氧代、羟基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基和4-至6-元杂环烷基，
其中所述(C1-C4)-烷氧基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基取代基的烷基依次任选被羟基、甲氧基或乙氧基取代，
和
(ii) 所述(C1-C6)-烷基任选被一个、两个或三个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、三氟甲基、羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基、(C3-C6)-环烷基、4-至6-元杂环烷基和5-或6-元杂芳基，
其中所述(C3-C6)-环烷基、4-至6-元杂环烷基和5-或6-元杂芳基取代基依次任选被一个或两个残基取代，所述残基独立地选自氟代、氯代、二氟甲基、三氟甲基、(C1-C4)-烷基、氧代、羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基，或
1 9A 9B 10
R 为式-NR R 或-OR 的基团，其中
9A
R 为氢或任选被一个或两个取代基取代的(C1-C4)-烷基，所述取代基独立地选自羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基，
9B
R 选自氢、(C1-C6)-烷基、(C3-C6)-环烷基和4-至6-元杂环烷基，其中
(i) 所述(C3-C6)-环烷基和4-至6-元杂环烷基任选被一个或两个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、二氟甲基、三氟甲基、(C1-C4)-烷基、氧代、羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基，
和
(ii) 所述(C1-C6)-烷基任选被一个、两个或三个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、三氟甲基、羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基、(C3-C6)-环烷基、4-至6-元杂环烷基和5-或6-元杂芳基，
其中所述(C3-C6)-环烷基、4-至6-元杂环烷基和5-或6-元杂芳基取代基依次任选被一个或两个残基取代，所述残基独立地选自氟代、氯代、二氟甲基、三氟甲基、(C1-C4)-烷基、氧代、羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基，或
9A 9B
R 和R 与它们连结的氮原子一起结合形成4-至6-元杂环烷基环，其可以含有选自N和O的第二环杂原子，并且其任选被一个或两个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、(C1-C4)-烷基、氧代、羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基，
10
R 选自(C1-C6)-烷基、(C3-C6)-环烷基和4-至6-元杂环烷基，其中
(i) 所述(C3-C6)-环烷基和4-至6-元杂环烷基任选被一个或两个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、二氟甲基、三氟甲基、(C1-C4)-烷基、氧代、羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基，
和
(ii) 所述(C1-C6)-烷基任选被一个、两个或三个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、三氟甲基、羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基、(C3-C6)-环烷基、4-至6-元杂环烷基和5-或6-元杂芳基，
其中所述(C3-C6)-环烷基、4-至6-元杂环烷基和5-或6-元杂芳基取代基依次任选被一个或两个残基取代，所述残基独立地选自氟代、氯代、二氟甲基、三氟甲基、(C1-C4)-烷基、氧代、羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基，
2
R 为氢或氟代，
3
R 为氢或(C1-C4)-烷基，
4
R 为氰基，
5
R 选自(C1-C4)-烷基、环丙基、苯基和5-或6-元杂芳基，其中
(i) 所述环丙基任选被一个或两个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、三氟甲基和甲基，
(ii) 所述苯基和5-或6-元杂芳基任选被一个或两个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、氯代、氰基、二氟甲基、三氟甲基、(C1-C4)-烷基和(C1-C4)-烷氧基，和
(iii) 所述(C1-C4)-烷基任选被至多三个氟原子或一个或两个取代基取代，所述取代基独立地选自(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基、(C3-C6)-环烷基、苯基、4-至6-元杂环烷基和5-元杂芳基，
其中所述(C1-C4)-烷氧基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基取代基的烷基依次任选被至多三个氟原子或一个或两个残基取代，所述残基独立地选自(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基和4-至6-元杂环烷基，以及其中
所述(C3-C6)-环烷基、苯基、4-至6-元杂环烷基和5-元杂芳基依次任选被一个或两个残基取代，所述残基独立地选自氟代、氯代、氰基、三氟甲基、(C1-C4)-烷基、氧代、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基，
或
3 5
R 和R 与它们连接的氮和碳原子一起结合形成下式所示的稠环
其中
12A 12B
R 和R 独立地为氢或氟代，
或
4 5
R 和R 与它们连接的碳原子一起结合形成下式所示的稠和内酯环，
。
D 为-CH2-、-O-、-NH-或-N(CH3)-，
8A 8B 8A 8B
E 为-CR R -或*-CR R -CH2-**，其中
* 表示与二氢吡啶环连接，
** 表示与D基团连接，
和
8A 8B
R 和R 独立地为氢或甲基，
或
8A 8B
R 和R 与它们连接的碳原子一起结合形成环丙基环，
1
R 选自氢、(C1-C6)-烷基、(C3-C6)-环烷基、苯基、4-至6-元杂环烷基和5-或6-元杂芳基，其中
(i) 所述(C3-C6)-环烷基、苯基、4-至6-元杂环烷基和5-或6-元杂芳基任选被一个或两个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、氯代、二氟甲基、三氟甲基、(C1-C4)-烷基、氧代、羟基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基和4-至6-元杂环烷基，
其中所述(C1-C4)-烷氧基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基取代基的烷基依次任选被羟基、甲氧基或乙氧基取代，
和
(ii) 所述(C1-C6)-烷基任选被一个、两个或三个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、三氟甲基、羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基、(C3-C6)-环烷基、4-至6-元杂环烷基和5-或6-元杂芳基，
其中所述(C3-C6)-环烷基、4-至6-元杂环烷基和5-或6-元杂芳基取代基依次任选被一个或两个残基取代，所述残基独立地选自氟代、氯代、二氟甲基、三氟甲基、(C1-C4)-烷基、氧代、羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基，或
1 9A 9B 10
R 为式-NR R 或-OR 的基团，其中
9A
R 为氢或任选被一个或两个取代基取代的(C1-C4)-烷基，所述取代基独立地选自羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基，
9B
R 选自氢、(C1-C6)-烷基、(C3-C6)-环烷基和4-至6-元杂环烷基，其中
(i) 所述(C3-C6)-环烷基和4-至6-元杂环烷基任选被一个或两个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、二氟甲基、三氟甲基、(C1-C4)-烷基、氧代、羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基，
和
(ii) 所述(C1-C6)-烷基任选被一个、两个或三个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、三氟甲基、羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基、(C3-C6)-环烷基、4-至6-元杂环烷基和5-或6-元杂芳基，
其中所述(C3-C6)-环烷基、4-至6-元杂环烷基和5-或6-元杂芳基取代基依次任选被一个或两个残基取代，所述残基独立地选自氟代、氯代、二氟甲基、三氟甲基、(C1-C4)-烷基、氧代、羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基，或
9A 9B
R 和R 与它们连结的氮原子一起结合形成4-至6-元杂环烷基环，其可以含有选自N和O的第二环杂原子，并且其任选被一个或两个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、(C1-C4)-烷基、氧代、羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基，
10
R 选自(C1-C6)-烷基、(C3-C6)-环烷基和4-至6-元杂环烷基，其中
(i) 所述(C3-C6)-环烷基和4-至6-元杂环烷基任选被一个或两个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、二氟甲基、三氟甲基、(C1-C4)-烷基、氧代、羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基，
和
(ii) 所述(C1-C6)-烷基任选被一个、两个或三个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、三氟甲基、羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基、(C3-C6)-环烷基、4-至6-元杂环烷基和5-或6-元杂芳基，
其中所述(C3-C6)-环烷基、4-至6-元杂环烷基和5-或6-元杂芳基取代基依次任选被一个或两个残基取代，所述残基独立地选自氟代、氯代、二氟甲基、三氟甲基、(C1-C4)-烷基、氧代、羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基，
2
R 为氢或氟代，
3
R 为氢或(C1-C4)-烷基，
4
R 为氰基，
5
R 选自(C1-C4)-烷基、环丙基、苯基和5-或6-元杂芳基，其中
(i) 所述环丙基任选被一个或两个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、三氟甲基和甲基，
(ii) 所述苯基和5-或6-元杂芳基任选被一个或两个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、氯代、氰基、二氟甲基、三氟甲基、(C1-C4)-烷基和(C1-C4)-烷氧基，和
(iii) 所述(C1-C4)-烷基任选被至多三个氟原子或一个或两个取代基取代，所述取代基独立地选自(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基、(C3-C6)-环烷基、苯基、4-至6-元杂环烷基和5-元杂芳基，
其中所述(C1-C4)-烷氧基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基取代基的烷基依次任选被至多三个氟原子或一个或两个残基取代，所述残基独立地选自(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基和4-至6-元杂环烷基，以及其中
所述(C3-C6)-环烷基、苯基、4-至6-元杂环烷基和5-元杂芳基依次任选被一个或两个残基取代，所述残基独立地选自氟代、氯代、氰基、三氟甲基、(C1-C4)-烷基、氧代、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基，
或
3 5
R 和R 与它们连接的氮和碳原子一起结合形成下式所示的稠环
其中
12A 12B
R 和R 独立地为氢或氟代，
或
4 5
R 和R 与它们连接的碳原子一起结合形成下式所示的稠和内酯环，
。
[0047] 在特别优选的实施方案中，本发明涉及通式(I)化合物，其中A 为-C(=O)-，
D 为-O-，
E 为-CH2-、-CH(CH3)-或-C(CH3)2-，
1
R 选自氢、(C1-C4)-烷基、苯基和5-或6-元杂芳基，其中
(i) 所述苯基和5-或6-元杂芳基任选被一个或两个取代基取代，所述取代
基独立地选自氟代、氯代、二氟甲基、三氟甲基、(C1-C3)-烷基、(C1-C3)-烷氧基、氨基、单-(C1-C3)-烷基氨基、二-(C1-C3)-烷基氨基和4-至6-元杂环烷基，
其中所述(C1-C3)-烷氧基、单-(C1-C3)-烷基氨基和二-(C1-C3)-烷基氨基取代基的烷基依次任选被甲氧基或乙氧基取代，
和
(ii) 所述(C1-C4)-烷基任选被至多三个氟原子或一个或两个取代基取代，所述取代基独立地选自(C1-C3)-烷氧基、氨基、单-(C1-C3)-烷基氨基、二-(C1-C3)-烷基氨基和4-至
6-元杂环烷基，
其中所述4-至6-元杂环烷基取代基依次任选被一个或两个残基取代，所述残基独立地选自氟代、三氟甲基、甲基、乙基、氧代、甲氧基、乙氧基、氨基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基和二乙基氨基，
或
1 9A 9B 10
R 为式-NR R 或-OR 的基团，其中
9A
R 为氢或任选被羟基、甲氧基、乙氧基、氨基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基或二乙基氨基取代的(C1-C4)-烷基，
9B
R 为氢或任选被至多3个氟原子或一个或两个取代基取代的(C1-C4)-烷基，所述取代基独立地选自羟基、(C1-C3)-烷氧基、氨基、单-(C1-C3)-烷基氨基、二-(C1-C3)-烷基氨基和4-至6-元杂环烷基，
其中所述4-至6-元杂环烷基取代基依次任选被一个或两个残基取代，所述残基独立地选自氟代、三氟甲基、甲基、乙基、氧代、甲氧基、乙氧基、氨基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基和二乙基氨基，
或
9A 9B
R 和R 与它们连结的氮原子一起结合形成4-至6-元杂环烷基环，其可以含有选自N和O的第二环杂原子，并且其任选被一个或两个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、甲基、乙基、氧代、甲氧基、乙氧基、氨基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基和二乙基氨基，
10
R 为任选被至多3个氟原子或一个或两个取代基取代的(C1-C4)-烷基，所述取代基独立地选自羟基、(C1-C3)-烷氧基、氨基、单-(C1-C3)-烷基氨基、二-(C1-C3)-烷基氨基和
4-至6-元杂环烷基，
其中所述4-至6-元杂环烷基取代基依次任选被一个或两个残基取代，所述残基独立地选自氟代、三氟甲基、甲基、乙基、氧代、甲氧基、乙氧基、氨基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基和二乙基氨基，
2
R 为氢或氟代，
3
R 为氢或甲基，
4
R 为氰基，
和
5
R 选自(C1-C4)-烷基、苯基、吡啶基、嘧啶基、 唑基和异 唑基，其中
(i) 所述苯基、吡啶基、嘧啶基、 唑基和异 唑基任选被一个或两个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、氯代、二氟甲基、三氟甲基、甲基、乙基、甲氧基和乙氧基,和
(ii) 所述(C1-C4)-烷基任选被至多三个氟原子或取代基取代，所述取代基选自(C1-C3)-烷氧基、氨基、单-(C1-C3)-烷基氨基、二-(C1-C3)-烷基氨基、苯基、4-至6-元杂环烷基和5-元杂芳基，
其中所述苯基和5-元杂芳基取代基依次任选被一个或两个残基取代，所述残基独立地选自氟代、氯代、三氟甲基、甲基、乙基和氨基，
以及其中
所述(C1-C3)-烷氧基、单-(C1-C3)-烷基氨基和二-(C1-C3)-烷基氨基取代基的烷基依次任选被至多三个氟原子或残基取代，所述残基选自甲氧基、乙氧基、氨基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、氮杂环丁烷子基、吡咯烷子基、哌啶子基、哌嗪子基和吗啉代,
以及其中
所述4-至6-元杂环烷基取代基以及所述氮杂环丁烷子基、吡咯烷子基、哌啶子基、哌嗪子基和吗啉代基团依次任选被一个或两个残基取代，所述残基独立地选自氟代、甲基、乙基和氧代。
D 为-O-，
E 为-CH2-、-CH(CH3)-或-C(CH3)2-，
1
R 选自氢、(C1-C4)-烷基、苯基和5-或6-元杂芳基，其中
(i) 所述苯基和5-或6-元杂芳基任选被一个或两个取代基取代，所述取代
基独立地选自氟代、氯代、二氟甲基、三氟甲基、(C1-C3)-烷基、(C1-C3)-烷氧基、氨基、单-(C1-C3)-烷基氨基、二-(C1-C3)-烷基氨基和4-至6-元杂环烷基，
其中所述(C1-C3)-烷氧基、单-(C1-C3)-烷基氨基和二-(C1-C3)-烷基氨基取代基的烷基依次任选被甲氧基或乙氧基取代，
和
(ii) 所述(C1-C4)-烷基任选被至多三个氟原子或一个或两个取代基取代，所述取代基独立地选自(C1-C3)-烷氧基、氨基、单-(C1-C3)-烷基氨基、二-(C1-C3)-烷基氨基和4-至
6-元杂环烷基，
其中所述4-至6-元杂环烷基取代基依次任选被一个或两个残基取代，所述残基独立地选自氟代、三氟甲基、甲基、乙基、氧代、甲氧基、乙氧基、氨基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基和二乙基氨基，
或
1 9A 9B 10
R 为式-NR R 或-OR 的基团，其中
9A
R 为氢或任选被羟基、甲氧基、乙氧基、氨基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基或二乙基氨基取代的(C1-C4)-烷基，
9B
R 为氢或任选被至多3个氟原子或一个或两个取代基取代的(C1-C4)-烷基，所述取代基独立地选自羟基、(C1-C3)-烷氧基、氨基、单-(C1-C3)-烷基氨基、二-(C1-C3)-烷基氨基和4-至6-元杂环烷基，
其中所述4-至6-元杂环烷基取代基依次任选被一个或两个残基取代，所述残基独立地选自氟代、三氟甲基、甲基、乙基、氧代、甲氧基、乙氧基、氨基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基和二乙基氨基，
或
9A 9B
R 和R 与它们连结的氮原子一起结合形成4-至6-元杂环烷基环，其可以含有选自N和O的第二环杂原子，并且其任选被一个或两个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、甲基、乙基、氧代、甲氧基、乙氧基、氨基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基和二乙基氨基，
10
R 为任选被至多3个氟原子或一个或两个取代基取代的(C1-C4)-烷基，所述取代基独立地选自羟基、(C1-C3)-烷氧基、氨基、单-(C1-C3)-烷基氨基、二-(C1-C3)-烷基氨基和
4-至6-元杂环烷基，
其中所述4-至6-元杂环烷基取代基依次任选被一个或两个残基取代，所述残基独立地选自氟代、三氟甲基、甲基、乙基、氧代、甲氧基、乙氧基、氨基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基和二乙基氨基，
2
R 为氢或氟代，
3
R 为氢或甲基，
4
R 为氰基，
和
5
R 选自(C1-C4)-烷基、苯基、吡啶基、嘧啶基、 唑基和异 唑基，其中
(i) 所述苯基、吡啶基、嘧啶基、 唑基和异 唑基任选被一个或两个取代基取代，所述取代基独立地选自氟代、氯代、二氟甲基、三氟甲基、甲基、乙基、甲氧基和乙氧基,和
(ii) 所述(C1-C4)-烷基任选被至多三个氟原子或取代基取代，所述取代基选自(C1-C3)-烷氧基、氨基、单-(C1-C3)-烷基氨基、二-(C1-C3)-烷基氨基、苯基、4-至6-元杂环烷基和5-元杂芳基，
其中所述苯基和5-元杂芳基取代基依次任选被一个或两个残基取代，所述残基独立地选自氟代、氯代、三氟甲基、甲基、乙基和氨基，
以及其中
所述(C1-C3)-烷氧基、单-(C1-C3)-烷基氨基和二-(C1-C3)-烷基氨基取代基的烷基依次任选被至多三个氟原子或残基取代，所述残基选自甲氧基、乙氧基、氨基、甲基氨基、乙基氨基、二甲基氨基、二乙基氨基、氮杂环丁烷子基、吡咯烷子基、哌啶子基、哌嗪子基和吗啉代,
以及其中
所述4-至6-元杂环烷基取代基以及所述氮杂环丁烷子基、吡咯烷子基、哌啶子基、哌嗪子基和吗啉代基团依次任选被一个或两个残基取代，所述残基独立地选自氟代、甲基、乙基和氧代。
[0048] 在特别优选的实施方案中，本发明涉及通式(I)化合物，其中A 为-C(=O)-，
D 为-O-，
E 为-CH2-，
1
R 为氢、甲基或乙基，
2
R 为氢或氟代，
3
R 为氢或甲基，
4
R 为氰基，
和
5
R 为任选被甲氧基、乙氧基或至多三个氟原子取代的(C1-C4)-烷基，
或
为任选被一个或两个取代基取代的苯基，所述取代基独立地选自氟代、氯代、甲基和三氟甲基。
D 为-O-，
E 为-CH2-，
1
R 为氢、甲基或乙基，
2
R 为氢或氟代，
3
R 为氢或甲基，
4
R 为氰基，
和
5
R 为任选被甲氧基、乙氧基或至多三个氟原子取代的(C1-C4)-烷基，
或
为任选被一个或两个取代基取代的苯基，所述取代基独立地选自氟代、氯代、甲基和三氟甲基。
[0049] 在残基的各个组合或优选组合中具体所指出的残基的定义还可以根据需要被其它组合的残基定义代替，不论对于该残基所指出的特定组合如何。两种或多种上述优选范围的组合是特别优选的。
[0050] 在另一实施方案中，本发明涉及制备通式(I)化合物的方法，其中 R3为氢，其特征在于，式(II)的吲唑基醛1 2
其中 R 和R 具有上文所述的含义，
或者
[A] 与式(III)化合物
4 5
或其烯醇钠反应，其中 R 和R 具有上文所述的含义，
在酸、酸/碱的组合和/或脱水剂存在下反应，以得到式(IV)化合物，
1 2 4 5
其中 R、R、R 和R 具有上文所述的含义，
和后者然后与式(V)化合物缩合，
其中 A、D和E具有上文所述的含义，
在氨源例如醋酸铵存在下进行，以得到式(I-A)化合物
1 2 4 5
其中 A、D、E、R、R、R 和R 具有上文所述的含义，
或
[B] 与式(V)化合物反应
其中A、D和E具有上文所述的含义，
任选在碱和/或脱水剂存在下反应，以生成式(VI)化合物，
1 2
其中 A、D、E、R 和R 具有上文所述的含义，
和后者然后与式(VII)化合物缩合，
4 5
其中 R 和R 具有上文所述的含义，
在酸存在下进行，以得到式(I-A)化合物，
1 2 4 5
其中 A、D、E、R、R、R 和R 具有上文所述的含义，
在适当的情况下，任选随后(i)将化合物(I-A)分离为它们各自的对映体和/或非对映体，优选使用色谱方法，和/或(ii)通过使用相应的溶剂和/或酸或碱处理将化合物(I-A)转化为它们各自的水合物、溶剂化物、盐和/或盐的水合物或溶剂化物。
其中 R 和R 具有上文所述的含义，
或者
[A] 与式(III)化合物
4 5
或其烯醇钠反应，其中 R 和R 具有上文所述的含义，
在酸、酸/碱的组合和/或脱水剂存在下反应，以得到式(IV)化合物，
1 2 4 5
其中 R、R、R 和R 具有上文所述的含义，
和后者然后与式(V)化合物缩合，
其中 A、D和E具有上文所述的含义，
在氨源例如醋酸铵存在下进行，以得到式(I-A)化合物
1 2 4 5
其中 A、D、E、R、R、R 和R 具有上文所述的含义，
或
[B] 与式(V)化合物反应
其中A、D和E具有上文所述的含义，
任选在碱和/或脱水剂存在下反应，以生成式(VI)化合物，
1 2
其中 A、D、E、R 和R 具有上文所述的含义，
和后者然后与式(VII)化合物缩合，
4 5
其中 R 和R 具有上文所述的含义，
在酸存在下进行，以得到式(I-A)化合物，
1 2 4 5
其中 A、D、E、R、R、R 和R 具有上文所述的含义，
在适当的情况下，任选随后(i)将化合物(I-A)分离为它们各自的对映体和/或非对映体，优选使用色谱方法，和/或(ii)通过使用相应的溶剂和/或酸或碱处理将化合物(I-A)转化为它们各自的水合物、溶剂化物、盐和/或盐的水合物或溶剂化物。
[0051] 处理步骤(II) + (III) → (IV)、(IV) + (V) → (I-A)、(II) + (V) → (VI)和(VI) + (VII) → (I-A)通常在大气压力下在惰性溶剂中在+20℃至溶剂沸点的温度范围下进行。
[0052] 适合该目的的惰性溶剂为，例如，醇例如甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、叔丁醇或正戊醇，烃例如己烷、环己烷、苯、甲苯或二甲苯，卤代烃例如二氯甲烷、三氯甲烷、四氯甲烷、三氯乙烷、1,2-二氯乙烷、氯苯或氯甲苯、醚例如四氢呋喃、1,4-二 烷或1,2-二甲氧基乙烷，或其它溶剂例如乙腈或乙酸。同样可能使用这些溶剂的混合物。反应 (II) + (III) → (IV)和(II) + (V) → (VI)优选在大气压力下在二氯甲烷、甲苯、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇或正戊醇中在各自的回流温度下进行，和反应(IV) + (V) → (I-A)和(VI) + (VII) → (I-A) 优选在大气压力下还在回流温度下在乙酸中进行。
[0053] 反应(II) + (III) → (IV)可以有利地在酸、酸/碱的组合和/或脱水剂，诸如，例如，分子筛，存在下发生。合适的酸催化剂的实例为乙酸、三氟乙酸、甲磺酸或对甲苯磺酸；合适的碱特别为哌啶或吡啶。根据组分的反应性，转化(II) + (V) → (VI)可以在没有其它辅助试剂下进行，或者其可以通过常规的胺碱，例如哌啶，和/或脱水剂，例如分子筛促进。反应(IV) + (V) → (I-A)和(VI) + (VII) → (I-A)通常在酸的存在下进行；优选地，乙酸既用作酸催化剂和又用作溶剂。
[0054] 用于反应(IV) + (V) → (I-A)的合适氨源为，例如，甲酸铵、乙酸铵、氯化铵或硫酸氢铵；优选为乙酸铵 [对于1,4-二氢吡啶类化合物的合成一般，参见，例如，D.M. Stout, A.I. Meyers, Chem. Rev. 1982, 82, 223-243；H. Meier等，Liebigs Ann. Chem. 1977,1888；H. Meier等，同上，1977, 1895；H. Meier等，同上，1976, 1762；F. Bossert等，Angew. Chem. 1981, 93, 755]。
[0055] 具有式(I-B)的本发明化合物，1 2 4 5
其中 E、R、R、R 和R 具有上文所述的含义，
和
1 7 7
D 表示-O-或-NR-，其中 R 具有上文所述的含义，
还可以通过吲唑基醛(II)
其中 R1和R2具有上文所述的含义，
与式(VII)的烯胺
其中 R4和R5具有上文所述的含义，
和式(VIII) 化合物的三组分缩合反应制备
1
其中 E和D 具有上文所述的含义，
1
T 表示(C1-C4)-烷基，
和
A
PG 分别表示合适的羟基-或氨基-保护基，例如乙酰基、三甲基甲硅烷基、四氢吡喃基、叔丁氧基羰基或苄基氧基羰基，
以得到式(IX)的中间体化合物
1 A 1 1 2 4 5
其中 D、E、PG、T、R、R、R 和R 具有上文所述的含义，
其然后脱保护并环化，以生成式(I-B)的目标化合物。
其中 E、R、R、R 和R 具有上文所述的含义，
和
1 7 7
D 表示-O-或-NR-，其中 R 具有上文所述的含义，
还可以通过吲唑基醛(II)
其中 R1和R2具有上文所述的含义，
与式(VII)的烯胺
其中 R4和R5具有上文所述的含义，
和式(VIII) 化合物的三组分缩合反应制备
1
其中 E和D 具有上文所述的含义，
1
T 表示(C1-C4)-烷基，
和
A
PG 分别表示合适的羟基-或氨基-保护基，例如乙酰基、三甲基甲硅烷基、四氢吡喃基、叔丁氧基羰基或苄基氧基羰基，
以得到式(IX)的中间体化合物
1 A 1 1 2 4 5
其中 D、E、PG、T、R、R、R 和R 具有上文所述的含义，
其然后脱保护并环化，以生成式(I-B)的目标化合物。
[0056] 缩合反应(II) + (VII) + (VIII) → (IX) 优选在醇溶剂例如甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇、叔丁醇或正戊醇中进行，任选与酸催化剂例如乙酸组合。该转化一般在大气压力下在+20℃至+150℃、优选+80℃至+120℃的温度范围下进行。
[0057] 在工艺步骤(IX) → (I-B)中保护基PGA的除去一般通过本领域众所周知的标准方法进行[参见，例如，T.W. Greene和P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, Wiley, New York, 1999]。作为羟基-保护基，优选使用乙酰基。在这种情况1
下，脱保护和随后的内酯形成[在(I-B)中D = O]可以在升高的温度下 (例如，+50℃至+120℃)在一锅煮法中，即，不分离脱保护的中间体，通过使用强酸例如氯化氢、溴化氢或三氟乙酸的水溶液处理化合物(IX)完成。
下，脱保护和随后的内酯形成[在(I-B)中D = O]可以在升高的温度下 (例如，+50℃至+120℃)在一锅煮法中，即，不分离脱保护的中间体，通过使用强酸例如氯化氢、溴化氢或三氟乙酸的水溶液处理化合物(IX)完成。
[0058] 对于氮保护，优选使用叔丁氧基羰基 (Boc)作为基团PGA。可以再次使用一锅煮法或者在两个单独的步骤中，使用无水氯化氢或三氟乙酸通过标准处理脱保护，和最后通1 7
过使中间体胺盐暴露于常规的碱中而环化为内酰胺 (I-B) [D = NR]来进行。
过使中间体胺盐暴露于常规的碱中而环化为内酰胺 (I-B) [D = NR]来进行。
[0059] 式(I)化合物，其中 R3 为(C1-C4)-烷基或环丙基，可以如下制备：通过标准方法1
首先将式(I-A)化合物转化为式（X）的吲唑 N-保护的衍生物，
1 2 4 5
其中 A、D、E、R、R、R 和R 具有上文所述的含义，
和
B
PG 表示合适的吲唑-保护基，例如叔丁氧基羰基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基或对甲氧基苄基，
然后使用式(XI)化合物进行二氢吡啶N-烷基化，
3A
R -Z (XI)，
其中
3A
R 表示(C1-C4)-烷基或环丙基，
和
Z 表示离去基团例如卤素、甲磺酸酯、三氟甲磺酸酯或甲苯磺酸酯，
在碱存在下进行，以得到式(XII)化合物，
其中 A、D、E、PGB、R1、R2、R3A、R4和R5具有上文所述的含义，
和随后使用标准方法除去保护基PGB，以得到式(I-C)化合物
1 2 3A 4 5
其中 A、D、E、R、R、R 、R 和R 具有上述含义。
首先将式(I-A)化合物转化为式（X）的吲唑 N-保护的衍生物，
1 2 4 5
其中 A、D、E、R、R、R 和R 具有上文所述的含义，
和
B
PG 表示合适的吲唑-保护基，例如叔丁氧基羰基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基或对甲氧基苄基，
然后使用式(XI)化合物进行二氢吡啶N-烷基化，
3A
R -Z (XI)，
其中
3A
R 表示(C1-C4)-烷基或环丙基，
和
Z 表示离去基团例如卤素、甲磺酸酯、三氟甲磺酸酯或甲苯磺酸酯，
在碱存在下进行，以得到式(XII)化合物，
其中 A、D、E、PGB、R1、R2、R3A、R4和R5具有上文所述的含义，
和随后使用标准方法除去保护基PGB，以得到式(I-C)化合物
1 2 3A 4 5
其中 A、D、E、R、R、R 、R 和R 具有上述含义。
[0060] 在工艺步骤(I-A) → (X)和(XII) → (I-C)中吲唑-保护基PGB的引入和除去一般分别通过本领域众所周知的标准方法进行[参见，例如，T.W. Greene和P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, Wiley, New York, 1999；M. Bodanszky和A. Bodanszky, The Practice of Peptide Synthesis, Springer-Verlag, Berlin,1984]。优选在以上方法中用作保护基的是叔丁氧基羰基 (Boc)、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基 (SEM)或对甲氧基苄基 (PMB)。这些基团的除去优选通过在惰性溶剂例如水、二烷、二氯甲烷或乙酸中与强酸例如氯化氢、溴化氢或三氟乙酸反应来实现；在适当的情况下，还可能不使用额外惰性溶剂来进行除去。如果使用SEM基团用于吲唑保护，可供选择地还可以通过在惰性溶剂例如四氢呋喃中使用氟化物源例如氟化钾或氟化四丁基铵处理来实现裂解。
[0061] 然而，在某些情况下，在进行二氢吡啶N-烷基化步骤时不事先封闭吲唑 N1-氮，以及优选使用色谱方法分离可能得到的产物混合物可能是更有利的。
[0062] 用于烷基化反应(X) + (XI) → (XII)的惰性溶剂为，例如，醚例如乙醚、甲基叔丁基醚、四氢呋喃、1,4-二 烷或1,2-二甲氧基乙烷，烃类例如苯、甲苯、二甲苯、己烷或环己烷，卤代烃类例如二氯甲烷、三氯甲烷、四氯甲烷、1,2-二氯乙烷、三氯乙烷、四氯乙烷、氯苯或氯甲苯或其它溶剂例如乙腈、N,N-二甲基甲酰胺 (DMF)、二甲亚砜 (DMSO)、N,N'-二甲基丙烯脲(DMPU)、N-甲基吡咯烷酮 (NMP)或吡啶。还可能使用这些溶剂的混合物。优选使用二氯甲烷、四氢呋喃、二甲基甲酰胺或其混合物。
[0063] 适用于工艺步骤(X) + (XI) → (XII)的碱特别为碱金属或碱土金属碳酸盐例如碳酸锂、碳酸钠、碳酸钾、碳酸钙或碳酸铯，碱金属氢化物例如氢化钠或氢化钾，空间位阻碱金属醇盐例如叔丁醇钠或叔丁醇钾，空间位阻碱金属氨基化物例如双(三甲基甲硅烷基)氨基锂、双(三甲基甲硅烷基)氨基钠或双(三甲基甲硅烷基)氨基钾或二异丙氨基锂，或者有机胺例如三乙胺、N-甲基吗啉、N-甲基哌啶、N,N-二异丙基乙胺或吡啶。优选使用碳酸钾、碳酸铯、氢化钠或三乙胺。
[0064] 反应(X) + (XI) → (XII)一般在大气压力下在-20℃至+120℃、优选0℃至+80℃的温度范围下进行。
[0065] 具有式(I-D)的本发明化合物1 2 12A 12B
其中 A、D、E、G、R、R、R 和R 具有上文所述的含义，
可以以与上述缩合反应密切类似的方式通过使用式(XIII)化合物代替式(VII)化合物制备
12A 12B
其中 G、R 和R 具有上文所述的含义，
[分别参见转化(VI) + (VII) → (I-A)和(II) + (VII) + (VIII) → (IX)]。相应地应用上文所列的反应参数，例如溶剂和酸催化剂。
其中 A、D、E、G、R、R、R 和R 具有上文所述的含义，
可以以与上述缩合反应密切类似的方式通过使用式(XIII)化合物代替式(VII)化合物制备
12A 12B
其中 G、R 和R 具有上文所述的含义，
[分别参见转化(VI) + (VII) → (I-A)和(II) + (VII) + (VIII) → (IX)]。相应地应用上文所列的反应参数，例如溶剂和酸催化剂。
[0066] 可以由式(XIV)的内酰胺起始制备式(XIII)化合物其中 G、R12A和R12B具有上文所述的含义，
式(XIV)的内酰胺首先通过其式(XV)的内酰亚胺醚衍生物
12A 12B
其中 G、R 和R 具有上文所述的含义，
与式(XVI)的氰基乙酸酯缩合
其中
2
T 表示(C1-C4)-烷基或苄基，
得到式(XVII)化合物
2 12A 12B
其中 G、T、R 和R 具有上文所述的含义，
其通过酯裂解和脱羧基化生成式(XIII)的氰基-烯胺 [参见下文反应方案4]。该中间体通常以粗原料溶液用于随后的反应中，即未进一步分离和纯化。
式(XIV)的内酰胺首先通过其式(XV)的内酰亚胺醚衍生物
12A 12B
其中 G、R 和R 具有上文所述的含义，
与式(XVI)的氰基乙酸酯缩合
其中
2
T 表示(C1-C4)-烷基或苄基，
得到式(XVII)化合物
2 12A 12B
其中 G、T、R 和R 具有上文所述的含义，
其通过酯裂解和脱羧基化生成式(XIII)的氰基-烯胺 [参见下文反应方案4]。该中间体通常以粗原料溶液用于随后的反应中，即未进一步分离和纯化。
[0067] 如果合适，本发明式(I)的其它化合物还可以由通过上述方法获得的式(I)的其1 5
它化合物起始，通过转化各个取代基的官能团，特别是R 和R 下所列的那些来制备。这些转化可以根据本领域技术人员已知的常规方法来进行，并且包括，例如，反应例如亲核或亲电取代反应、过渡金属-介导的偶联反应(例如Suzuki或Heck反应)、氧化、还原、氢化、卤化、烷基化、酰化、胺化、羟基化、醚化、酯化、酯裂解和酯水解、腈的形成、羧酰胺的形成和氨基甲酸酯的形成，以及临时保护基的引入和除去。
它化合物起始，通过转化各个取代基的官能团，特别是R 和R 下所列的那些来制备。这些转化可以根据本领域技术人员已知的常规方法来进行，并且包括，例如，反应例如亲核或亲电取代反应、过渡金属-介导的偶联反应(例如Suzuki或Heck反应)、氧化、还原、氢化、卤化、烷基化、酰化、胺化、羟基化、醚化、酯化、酯裂解和酯水解、腈的形成、羧酰胺的形成和氨基甲酸酯的形成，以及临时保护基的引入和除去。
[0068] 例如，式(I-B1)化合物其中 D1、E、R1和R2具有上文所述的含义，
可以被转化为式(XVIII)的溴代衍生物
其中 D1、E、R1和R2具有上文所述的含义，
通过使用N-溴代琥珀酰亚胺处理，和然后在碱的存在下与醇(R-OH)或胺(R-NH-R')组分分别反应，以生成式(I-B2)和(I-B3)的取代类似物，
1 1 2
其中 D、E、R 和R 具有上文所述的含义，
和
5
R和R'表示在上文R 部分中所定义的任选取代的(C1-C4)-烷基。
可以被转化为式(XVIII)的溴代衍生物
其中 D1、E、R1和R2具有上文所述的含义，
通过使用N-溴代琥珀酰亚胺处理，和然后在碱的存在下与醇(R-OH)或胺(R-NH-R')组分分别反应，以生成式(I-B2)和(I-B3)的取代类似物，
1 1 2
其中 D、E、R 和R 具有上文所述的含义，
和
5
R和R'表示在上文R 部分中所定义的任选取代的(C1-C4)-烷基。
[0069] 式(II)化合物是由文献已知的或者可以通过调整文献中所述的标准方法由容易得到的起始原料制备[参见，例如，G. Luo等，J. Org. Chem. 71, 5392 (2006)，和在WO2007/ 124288-A1、WO 2005/056550-A2、US 2005/0227968-A1和EP 1 510 516-A1中描述的方法]。在一个合成途径中，式(XIX)的母体吲唑基醛
2
其中 R 具有上文所述的含义，
使用标准方法首先在3-位卤化并转化为双保护的式(XX)衍生物
其中 PGB和R2具有上文所述的含义，
X 表示氯代、溴代或碘代，
和
R14 表示(C1-C4)-烷基，或者两个R14残基一起形成-(CH2)2-或-(CH2)3-桥，和然后式(XX)化合物通过合适的过渡金属催化剂，优选使用铜或钯催化剂或者，[C] 与式(XXI)化合物偶联
R1A-H (XXI)，
其中
R1A 分别表示式-NR9AR9B或-OR10的N-或O-连接的R1残基，如上文定义，
以生成式(XXII-A)化合物
B 1A 2 14
其中 PG、R 、R 和R 具有上文所述的含义，
或
[D] 与式(XXIII)化合物偶联
1B
R -Q (XXIII) ，
其中
1B 1
R 表示任选取代的C-连接的R 残基，所述残基选自(C1-C6)-烷基、(C3-C7)-环烷基、苯基、4-至7-元杂环烷基、5-至10-元杂芳基和苯并-1,4-二氧杂环己烷基，如上文定义，
和
15 16
Q 表示 -B(OR )2、-MgHal、-ZnHal或-Sn(R )3基团，其中
Hal 为卤素，尤其是氯代、溴代或碘代，
15 15
R 为氢或(C1-C4)-烷基，或者两个R 残基一起形成-(CH2)2-、-C(CH3)2-C(CH3)2-、-(CH2)3-或-CH2-C(CH3)2-CH2-桥，
和
16
R 为(C1-C4)-烷基，
以得到式(XXII-B)化合物
B 1B 2 14
其中 PG、R 、R 和R 具有上文所述的含义，
和最后使用标准方法依次或同时除去保护基，以分别得到式(II-A)和(II-B)的3-取代的吲唑基醛，
1A 1B 2
其中 R 、R 和R 具有上述含义。
2
其中 R 具有上文所述的含义，
使用标准方法首先在3-位卤化并转化为双保护的式(XX)衍生物
其中 PGB和R2具有上文所述的含义，
X 表示氯代、溴代或碘代，
和
R14 表示(C1-C4)-烷基，或者两个R14残基一起形成-(CH2)2-或-(CH2)3-桥，和然后式(XX)化合物通过合适的过渡金属催化剂，优选使用铜或钯催化剂或者，[C] 与式(XXI)化合物偶联
R1A-H (XXI)，
其中
R1A 分别表示式-NR9AR9B或-OR10的N-或O-连接的R1残基，如上文定义，
以生成式(XXII-A)化合物
B 1A 2 14
其中 PG、R 、R 和R 具有上文所述的含义，
或
[D] 与式(XXIII)化合物偶联
1B
R -Q (XXIII) ，
其中
1B 1
R 表示任选取代的C-连接的R 残基，所述残基选自(C1-C6)-烷基、(C3-C7)-环烷基、苯基、4-至7-元杂环烷基、5-至10-元杂芳基和苯并-1,4-二氧杂环己烷基，如上文定义，
和
15 16
Q 表示 -B(OR )2、-MgHal、-ZnHal或-Sn(R )3基团，其中
Hal 为卤素，尤其是氯代、溴代或碘代，
15 15
R 为氢或(C1-C4)-烷基，或者两个R 残基一起形成-(CH2)2-、-C(CH3)2-C(CH3)2-、-(CH2)3-或-CH2-C(CH3)2-CH2-桥，
和
16
R 为(C1-C4)-烷基，
以得到式(XXII-B)化合物
B 1B 2 14
其中 PG、R 、R 和R 具有上文所述的含义，
和最后使用标准方法依次或同时除去保护基，以分别得到式(II-A)和(II-B)的3-取代的吲唑基醛，
1A 1B 2
其中 R 、R 和R 具有上述含义。
[0070] 适于工艺步骤(XX) + (XXI) → (XXII-A) 和 (XX) + (XXIII) → (XXII-B)的惰性溶剂包括，例如，芳香烃类例如苯、甲苯和二甲苯，醚例如乙醚、二异丙基醚、甲基叔丁基醚、1,2-二甲氧基乙烷、四氢呋喃、1,4-二 烷和双-(2-甲氧基乙基)-醚，或偶极-非质子传递溶剂例如乙腈、二甲亚砜(DMSO)、N,N-二甲基甲酰胺 (DMF)、N,N-二甲基乙酰胺(DMA)、N-甲基吡咯烷酮 (NMP)、N,N'-二甲基丙烯脲(DMPU)和吡啶。使用这些溶剂的混合物也是可能的。优选的溶剂为甲苯、四氢呋喃、1,4-二 烷、N,N-二甲基甲酰胺及其混合物。
[0071] 借助于过渡金属催化剂进行偶联反应(XX) + (XXI) → (XXII-A)和(XX) + (XXIII) → (XXII-B)。适合该目的的特别是铜催化剂例如碘化铜(I)，和钯催化剂例如钯/活性碳、双(二亚苄基丙酮)-钯(0)、三(二亚苄基丙酮)-二钯(0)、四(三苯基膦)-钯(0)、醋酸钯(II)、双(三苯基膦)-氯化钯(II)、双(乙腈)-氯化钯(II) 或 [1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]-氯化钯(II)，任选与附加的膦烷(phosphane)配体组合，诸如，例如，二环己基[2',4',6'-三(1-甲基乙基)联苯-2-基]膦烷(XPHOS)或4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨(Xantphos) [参见，例如，J. Hassan等，Chem. Rev. 102, 1359-1469 (2002)；V. Farina, V. Krishnamurthy和W.J. Scott, 在：The Stille Reaction, Wiley, New York, 1998中]。
[0072] 工艺步骤(XX) + (XXI) → (XXII-A)和(XX) + (XXIII) → (XXII-B)通常在大气压力下在从+20℃至+200℃、优选从+80℃至+180℃的温度范围下进行。然而，还能够在升高的压力或减压下(例如在范围为0.5至5 bar)进行这些反应。此外，所述转化可以有利地通过相伴的微波辐射进行。
[0073] 可供选择地，这种吲唑偶联反应可以在较后的阶段在制备过程中进行，使用式1
(I-A)或(I-C)化合物，例如作为前体，其中R 为氯代或溴代 [参见下文反应方案6]。类似地应用上述用于转化(XX) + (XXI) → (XXII-A)和(XX) + (XXIII) → (XXII-B)的反应参数，例如溶剂和催化剂。在某些情况下，取决于具体的反应条件和试剂，可以直接进行
1
这些偶联反应，即不事先保护吲唑 N-氮。
(I-A)或(I-C)化合物，例如作为前体，其中R 为氯代或溴代 [参见下文反应方案6]。类似地应用上述用于转化(XX) + (XXI) → (XXII-A)和(XX) + (XXIII) → (XXII-B)的反应参数，例如溶剂和催化剂。在某些情况下，取决于具体的反应条件和试剂，可以直接进行
1
这些偶联反应，即不事先保护吲唑 N-氮。
[0074] 式(III)、(V)、(VII)、(VIII)、(XI)、(XIV)、(XVI)、(XIX)、(XXI)和(XXIII)化合物或者是商业上可获得的，从文献已知的，或者可以通过调整文献中描述的标准方法由容易获得的起始原料制备。
[0075] 本发明化合物的制备可以通过下列合成方案1-6举例说明。下文在描述实施例的实验部分中提供更详细的方法。
[0076] 方案1方案2
方案3
方案4
方案5
方案6
[R'' = 氢或上文在R1部分中所定义的取代基]。
方案3
方案4
方案5
方案6
[R'' = 氢或上文在R1部分中所定义的取代基]。
[0077] 使用方法本发明化合物可以用于抑制受体酪氨酸激酶，特别是c-Met 受体酪氨酸激酶的活性或表达。此外，本发明化合物在肝微粒体和/或肝细胞中显示有利的体外清除性质。因此，预期式(I)化合物作为治疗剂是有价值的。
[0078] 因此，在另一实施方案中，本发明提供了在需要这种治疗的患者中治疗与c-Met 激酶活性相关或由其介导的疾病的方法，包含给予患者有效量的上文所定义的式(I)化合物。在某些实施方案中，与c-Met 激酶活性相关的疾病为细胞增殖性疾病，特别是癌症。
[0079] 如本文全文中所述的术语“治疗”(treating)或“治疗”(treatment)是常规使用的，例如，用于对抗、缓解、减少、减轻、改善疾病或紊乱的病症例如癌的目的而对受试者的处理或护理。
[0080] 术语“受试者”或“患者”包括能够患有细胞增殖性疾病或者其它能够由本发明化合物的给药而获益的生物体，例如人类和非人类动物。优选的人类包括患有或者易于患有如本文所述的细胞增殖性疾病或相关状态的人类患者。术语“非人类动物”包括脊椎动物，例如，哺乳动物，例如非人类灵长类动物、羊、 牛、狗、猫，和啮齿动物，例如小鼠，以及非哺乳动物，例如鸡、两栖动物、爬行动物等。
[0081] 术语“与c-Met相关或由c-Met介导的疾病”将包括与c-Met活性相关或涉及c-Met活性的疾病，例如c-Met的活性过强，以及伴有这些疾病的病症。“与c-Met相关或由c-Met介导的疾病”的实例包括因异常大量的c-Met或c-Met中的突变而由c-Met过度刺激导致的疾病，或者因异常大量的c-Met或c-Met中的突变而由异常大量的c-Met活性导致的疾病。
[0082] 术语“c-Met的活性过强”是指正常不表达c-Met的细胞中的c-Met表达，或者正常不具有活性的c-Met的细胞产生的c-Met活性，或者导致不希望的细胞增殖的增加的c-Met表达，或者导致c-Met组成性激活(constitutive activation)的突变。
[0083] 术语 “细胞增殖性疾病”包括涉及细胞的不希望的或不受控制的增殖的疾病。本发明化合物可以用于预防、抑制、阻止、减少、降低、控制等细胞增殖和/或细胞分化，和/或产生细胞调亡。该方法包含给予需要其的受试者，包括哺乳动物（包括人类），有效治疗或预防疾病的量的本发明化合物，或其药学可接受的盐、异构体、多晶型物、代谢物、水合物或溶剂化物。
[0084] 本发明上下文中的细胞增殖或过度-增殖疾病包括，但不限于，例如，牛皮癣、瘢痕疙瘩和影响皮肤的其它增生、子宫内膜异位症、骨骼障碍、血管原性或血管增殖性疾病、肺动脉高压、纤维变性障碍、肾小球系膜细胞增殖性疾病、结肠息肉、多囊性肾病、良性前列腺增生(BPH)，和实体瘤，例如乳腺、呼吸道、脑、生殖器官、消化道、泌尿道、眼、肝脏、皮肤、头和颈、甲状腺、甲状旁腺的癌症，和它们的远程(distant)转移。这些疾病还包括淋巴瘤、肉瘤和白血病。
[0085] 乳腺癌的实例包括，但不限于侵润性导管癌、侵润性小叶癌、原位导管癌，和原位小叶癌。
[0086] 呼吸道癌症的实例包括，但不限于小细胞肺癌和非小细胞肺癌，以及支气管腺瘤和胸膜肺胚细胞瘤。
[0087] 脑癌的实例包括，但不限于脑干和下丘脑神经胶质瘤、小脑和大脑星形细胞瘤、成胶质细胞瘤、成神经管细胞瘤、室管膜细胞瘤，以及神经外胚层瘤和松果体瘤。
[0089] 消化道的肿瘤包括，但不限于肛门、结肠、结肠直肠、食道、胆囊、胃、胰腺、直肠、小肠，和唾液腺的癌症。
[0090] 泌尿道的肿瘤包括，但不限于膀胱癌、阴茎癌、肾癌、肾盂癌、输尿管癌、尿道癌，以及遗传性和散发性乳头状肾癌。
[0091] 眼部癌症包括，但不限于眼内黑素瘤和视网膜母细胞瘤。
[0092] 肝癌的实例包括，但不限于肝细胞癌(有或没有羽层状变化的肝细胞癌)、胆管癌(肝内胆管癌)、和混合的肝细胞胆管癌。
[0093] 皮肤癌包括，但不限于鳞状细胞癌、卡波济氏肉瘤、恶性黑色素瘤、默克尔细胞皮肤癌，和非黑素瘤皮肤癌。
[0095] 淋巴瘤包括，但不限于AIDS相关的淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、霍奇金氏病、和中枢神经系统的淋巴瘤。
[0096] 肉瘤包括，但不限于软组织肉瘤、骨肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、淋巴肉瘤，和横纹肌肉瘤。
[0097] 白血病包括，但不限于急性髓细胞样白血病、急性成淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病，和毛细胞性白血病。
[0098] 可以使用本发明化合物和方法治疗的纤维变性增殖性疾病，即细胞外基质的异常形成包括肺纤维化、动脉粥样硬化、再狭窄、肝硬化、和肾小球系膜细胞增殖性疾病，包括肾病例如肾小球肾炎、糖尿病肾病、恶性肾硬化、血栓性微血管病综合征、移植排斥和肾小球病。
[0099] 可以通过给予本发明化合物治疗的人或其它哺乳动物的其它病症包括肿瘤生长、视网膜病，包括糖尿病性视网膜病、局部缺血性视网膜静脉闭塞、早产儿视网膜病和与年龄相关的黄斑退行性改变、类风湿性关节炎、银屑病，和与表皮下水疱形成相关的大疱性疾病，包括大疱性类天疱疮、多形性红斑和疱疹样皮炎。
[0100] 本发明化合物还可以用于预防和治疗气道和肺部疾病、胃肠道疾病以及膀胱和胆管疾病。
[0101] 上述疾病在人类中已经得到充分地表征，但也以相似病因存在于其它动物，包括哺乳动物中，和可以通过给予本发明的药物组合物进行治疗。
[0102] 式(I)化合物可以作为唯一的药剂给药，或者与一种或多种附加的治疗剂联合给药，其中所述联合不引起不可接受的有害作用。该联合疗法包括给予含有式(I)化合物和一种或多种附加的治疗剂的单一药物剂型制剂，以及以各自单独的药物剂型制剂形式给予式(I)化合物和各种附加的治疗剂。例如，可以将式(I)化合物和治疗剂以单一口服剂型组合物例如片剂或胶囊一起给药到患者，或者将每种药剂以单独的剂型制剂给药。
[0103] 在使用单独的剂型制剂时，式(I)化合物和一种或多种附加的治疗剂可以在基本上相同的时间（例如同时）或者在分开的交错的时间（例如依次）给药。
[0104] 特别地，本发明化合物可以以固定或单独的组合与其它抗肿瘤剂使用，所述抗肿瘤剂为例如烷化剂、抗代谢物、植物来源的抗肿瘤剂、激素治疗剂、拓扑异构酶抑制剂、喜树碱衍生物、激酶抑制剂、靶向药物、抗体、干扰素和/或生物学反应修饰剂、抗血管生成化合物和其它抗肿瘤药物。在这方面，下文为可以与本发明化合物联合使用的第二药剂的实例的非限制性目录：• 烷化剂，包括但不限于，氮芥N-氧化物、环磷酰胺、异磷酰胺、塞替派、雷莫司汀、尼莫司汀、替莫唑胺、六甲蜜胺、apaziquone、brostallicin、苯达莫司汀、卡莫司汀、雌莫司汀、福莫司汀、葡磷酰胺、马磷酰胺、苯达莫司汀和二溴卫矛醇；铂-配位的烷基化化合物，包括但不限于，顺铂、卡铂、依他铂、洛铂、奈达铂、奥沙利铂和沙铂；
• 抗代谢物，包括但不限于，甲氨蝶呤、6-巯基嘌呤核糖苷、巯嘌呤、5-氟尿嘧啶单独或与亚叶酸组合、替加氟、去氧氟尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、阿糖胞苷十八烷基磷酸盐、依诺他滨、吉西他滨、氟达拉滨、5-氮杂胞苷、卡培他滨、克拉屈滨、氯法拉滨、地西他滨、依氟鸟氨酸、ethynylcytidine、阿糖胞苷、羟基脲、美法仑、奈拉滨、诺拉曲塞、ocfosfite、培美曲塞二钠、喷司他丁、pelitrexol、雷替曲塞、triapine、三甲曲沙、阿糖腺苷、长春新碱和长春瑞滨；
• 激素疗法试剂，包括但不限于，依西美坦、醋酸亮丙瑞林、阿那曲唑、度骨化醇、法倔唑、福美坦、11-β羟基类固醇脱氢酶1型抑制剂、17-α羟化酶/17,20 裂解酶抑制剂例如醋酸阿比特龙、5-α还原酶抑制剂例如非那雄胺和依立雄胺、抗雌激素类例如枸橼酸他莫昔芬和氟维司群、Trelstar、托瑞米芬、雷洛昔芬、拉索昔芬、来曲唑、抗雄激素类例如比卡鲁胺、氟他胺、米非司酮、尼鲁米特、康士德和抗孕酮类及其组合；
• 植物来源的抗肿瘤物质，包括，例如，选自有丝分裂抑制剂的那些，例如埃坡霉素，例如沙戈匹隆、ixabepilone和埃坡霉素B、长春碱、长春氟宁、多西他赛和紫杉醇；
• 细胞毒性拓扑异构酶抑制剂，包括但不限于, 阿柔比星、多柔比星、氨萘非特、belotecan、喜树碱、10-羟基喜树碱、9-氨基喜树碱、diflomotecan、伊立替康、托泊替康、edotecarin、epimbicin、依托泊苷、依沙替康、gimatecan、勒托替康、米托蒽醌、pirambicin、pixantrone、卢比替康、索布佐生、tafluposide及其组合；
• 免疫药，包括干扰素类例如干扰素α、干扰素α-2a、干扰素α-2b、干扰素β、干扰素γ-1a和干扰素γ-n1、和其它免疫增强剂例如L19-IL2和其它IL2衍生物、非格司亭、香菇多糖、裂裥多糖、TheraCys、乌苯美司、阿地白介素、阿仑单抗、BAM-002、达卡巴嗪、达克珠单抗、地尼白介素、吉姆单抗、奥佐米星、ibritumomab、咪喹莫特、来格司亭、香菇多糖、黑瘤疫苗(Corixa)、莫拉司亭、沙格司亭、他索纳明、替西白介素、胸腺法新、托西莫单抗、Vimlizin、依帕珠单抗、米妥莫单抗、oregovomab、帕尼单抗和Provenge；
• 生物学反应修饰剂为修饰活的有机体的防御机制或生物学反应例如组织细胞的存活、生长或分化以使它们具有抗肿瘤活性的试剂；这类试剂包括，例如，云芝多糖、香菇多糖、西佐喃、溶链菌、ProMune和乌苯美司；
• 抗血管生成化合物，包括但不限于，阿昔曲丁、aflibercept、血管他丁、aplidine、asentar、阿昔替尼、贝伐单抗、brivanib alaninat、cilengtide、考布他汀、内皮他丁、芬维A胺、溴氯哌喹酮、帕唑帕尼、ranibizumab、rebimastat、recentin、regorafenib、removab、来那度胺、索拉非尼、角鲨胺、舒尼替尼、拉帕替尼、沙利度胺、ukrain、瓦他拉尼和vitaxin；
• 抗体，包括但不限于，曲妥单抗、西妥昔单抗、贝伐单抗、利妥昔单抗、ticilimumab、ipilimumab、lumiliximab、catumaxomab、atacicept、oregovomab和阿仑单抗；
• VEGF 抑制剂，诸如，例如，sorafenib、regorafenib、贝伐单抗、sunitinib、recentin、axitinib、aflibercept、telatinib、brivanib alaninate、vatalanib、pazopanib和ranibizumab；
• EGFR (HER1)抑制剂，诸如，例如，西妥昔单抗、panitumumab、vectibix、gefitinib、erlotinib和Zactima；
• HER2 抑制剂，诸如，例如，lapatinib、tratuzumab和 pertuzumab；
• mTOR 抑制剂，诸如，例如，temsirolimus、西罗莫司/雷帕霉素和依维莫司；
• c-Met 抑制剂；
• PI3K和AKT 抑制剂；
• CDK 抑制剂，例如roscovitine和flavopiridol；
• 纺锤体组装检查点抑制剂和靶向抗有丝分裂剂，例如PLK 抑制剂、Aurora 抑制剂(例如，Hesperadin) 、检查点激酶抑制剂和 KSP 抑制剂；
• HDAC 抑制剂，诸如，例如，panobinostat、vorinostat、MS275、belinostat和LBH589；
• HSP90和HSP70 抑制剂；
• 蛋白酶体抑制剂，例如bortezomib和carfilzomib；
• 丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂，包括MEK 抑制剂和Raf 抑制剂，例如sorafenib；
• 法尼基转移酶抑制剂诸如，例如，tipifarnib；
• 酪氨酸激酶抑制剂，包括例如，dasatinib, nilotibib, regorafenib, bosutinib, sorafenib, 贝伐单抗, sunitinib, cediranib, axitinib, aflibercept, telatinib, 甲磺酸伊马替尼, brivanib alaninate, pazopanib, ranibizumab, vatalanib, 西妥昔单抗, panitumumab, vectibix, gefitinib, erlotinib, lapatinib, tratuzumab, pertuzumab和c-Kit 抑制剂；
• 维生素D 受体激动剂；
• Bcl-2 蛋白质抑制剂，例如obatoclax、奥利默森钠和棉酚；
• 分化抗原簇20 受体拮抗剂，诸如，例如，利妥昔单抗；
• 核糖核苷酸还原酶抑制剂，诸如，例如，吉西他滨；
• 肿瘤坏死细胞凋亡诱导配体受体1 激动剂，诸如，例如，mapatumumab；
• 5-羟色胺受体拮抗剂，诸如，例如，rEV598、xaliprode、盐酸帕洛司琼、格拉司琼、Zindol和AB-1001；
• 整联蛋白抑制剂，包括α5-β1 整联蛋白抑制剂，诸如例如，E7820、JSM 6425、volociximab和内皮他丁；
• 雄激素受体拮抗剂，包括例如，癸酸诺龙、氟甲睾酮、甲睾酮、Prost-aid、andromustine、比卡鲁胺、氟他胺、apo-环丙孕酮、apo-氟他胺、醋酸氯地孕酮、环丙氯地孕酮、Tabi、醋酸环丙氯地孕酮和尼鲁米特；
• 芳香酶抑制剂，诸如，例如，阿那曲唑、来曲唑、睾内酯、依西美坦、氨基氨鲁米特和福美坦；
• 基质金属蛋白酶抑制剂；
• 其它抗癌剂，包括例如，阿利维A酸, 聚肌胞, 阿曲生坦贝沙罗汀, bortezomib, 波生坦, 骨化三醇, 依昔舒林, 福莫司汀, 伊班膦酸, 米替福新, 米托蒽醌, I-门冬酰胺酶, 丙卡巴肼, 达卡巴嗪, 羟基脲, 培门冬酶, 喷司他丁, 他扎罗汀, velcade, 硝酸镓, canfosfamide, darinaparsin和维甲酸。
• 抗代谢物，包括但不限于，甲氨蝶呤、6-巯基嘌呤核糖苷、巯嘌呤、5-氟尿嘧啶单独或与亚叶酸组合、替加氟、去氧氟尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、阿糖胞苷十八烷基磷酸盐、依诺他滨、吉西他滨、氟达拉滨、5-氮杂胞苷、卡培他滨、克拉屈滨、氯法拉滨、地西他滨、依氟鸟氨酸、ethynylcytidine、阿糖胞苷、羟基脲、美法仑、奈拉滨、诺拉曲塞、ocfosfite、培美曲塞二钠、喷司他丁、pelitrexol、雷替曲塞、triapine、三甲曲沙、阿糖腺苷、长春新碱和长春瑞滨；
• 激素疗法试剂，包括但不限于，依西美坦、醋酸亮丙瑞林、阿那曲唑、度骨化醇、法倔唑、福美坦、11-β羟基类固醇脱氢酶1型抑制剂、17-α羟化酶/17,20 裂解酶抑制剂例如醋酸阿比特龙、5-α还原酶抑制剂例如非那雄胺和依立雄胺、抗雌激素类例如枸橼酸他莫昔芬和氟维司群、Trelstar、托瑞米芬、雷洛昔芬、拉索昔芬、来曲唑、抗雄激素类例如比卡鲁胺、氟他胺、米非司酮、尼鲁米特、康士德和抗孕酮类及其组合；
• 植物来源的抗肿瘤物质，包括，例如，选自有丝分裂抑制剂的那些，例如埃坡霉素，例如沙戈匹隆、ixabepilone和埃坡霉素B、长春碱、长春氟宁、多西他赛和紫杉醇；
• 细胞毒性拓扑异构酶抑制剂，包括但不限于, 阿柔比星、多柔比星、氨萘非特、belotecan、喜树碱、10-羟基喜树碱、9-氨基喜树碱、diflomotecan、伊立替康、托泊替康、edotecarin、epimbicin、依托泊苷、依沙替康、gimatecan、勒托替康、米托蒽醌、pirambicin、pixantrone、卢比替康、索布佐生、tafluposide及其组合；
• 免疫药，包括干扰素类例如干扰素α、干扰素α-2a、干扰素α-2b、干扰素β、干扰素γ-1a和干扰素γ-n1、和其它免疫增强剂例如L19-IL2和其它IL2衍生物、非格司亭、香菇多糖、裂裥多糖、TheraCys、乌苯美司、阿地白介素、阿仑单抗、BAM-002、达卡巴嗪、达克珠单抗、地尼白介素、吉姆单抗、奥佐米星、ibritumomab、咪喹莫特、来格司亭、香菇多糖、黑瘤疫苗(Corixa)、莫拉司亭、沙格司亭、他索纳明、替西白介素、胸腺法新、托西莫单抗、Vimlizin、依帕珠单抗、米妥莫单抗、oregovomab、帕尼单抗和Provenge；
• 生物学反应修饰剂为修饰活的有机体的防御机制或生物学反应例如组织细胞的存活、生长或分化以使它们具有抗肿瘤活性的试剂；这类试剂包括，例如，云芝多糖、香菇多糖、西佐喃、溶链菌、ProMune和乌苯美司；
• 抗血管生成化合物，包括但不限于，阿昔曲丁、aflibercept、血管他丁、aplidine、asentar、阿昔替尼、贝伐单抗、brivanib alaninat、cilengtide、考布他汀、内皮他丁、芬维A胺、溴氯哌喹酮、帕唑帕尼、ranibizumab、rebimastat、recentin、regorafenib、removab、来那度胺、索拉非尼、角鲨胺、舒尼替尼、拉帕替尼、沙利度胺、ukrain、瓦他拉尼和vitaxin；
• 抗体，包括但不限于，曲妥单抗、西妥昔单抗、贝伐单抗、利妥昔单抗、ticilimumab、ipilimumab、lumiliximab、catumaxomab、atacicept、oregovomab和阿仑单抗；
• VEGF 抑制剂，诸如，例如，sorafenib、regorafenib、贝伐单抗、sunitinib、recentin、axitinib、aflibercept、telatinib、brivanib alaninate、vatalanib、pazopanib和ranibizumab；
• EGFR (HER1)抑制剂，诸如，例如，西妥昔单抗、panitumumab、vectibix、gefitinib、erlotinib和Zactima；
• HER2 抑制剂，诸如，例如，lapatinib、tratuzumab和 pertuzumab；
• mTOR 抑制剂，诸如，例如，temsirolimus、西罗莫司/雷帕霉素和依维莫司；
• c-Met 抑制剂；
• PI3K和AKT 抑制剂；
• CDK 抑制剂，例如roscovitine和flavopiridol；
• 纺锤体组装检查点抑制剂和靶向抗有丝分裂剂，例如PLK 抑制剂、Aurora 抑制剂(例如，Hesperadin) 、检查点激酶抑制剂和 KSP 抑制剂；
• HDAC 抑制剂，诸如，例如，panobinostat、vorinostat、MS275、belinostat和LBH589；
• HSP90和HSP70 抑制剂；
• 蛋白酶体抑制剂，例如bortezomib和carfilzomib；
• 丝氨酸/苏氨酸激酶抑制剂，包括MEK 抑制剂和Raf 抑制剂，例如sorafenib；
• 法尼基转移酶抑制剂诸如，例如，tipifarnib；
• 酪氨酸激酶抑制剂，包括例如，dasatinib, nilotibib, regorafenib, bosutinib, sorafenib, 贝伐单抗, sunitinib, cediranib, axitinib, aflibercept, telatinib, 甲磺酸伊马替尼, brivanib alaninate, pazopanib, ranibizumab, vatalanib, 西妥昔单抗, panitumumab, vectibix, gefitinib, erlotinib, lapatinib, tratuzumab, pertuzumab和c-Kit 抑制剂；
• 维生素D 受体激动剂；
• Bcl-2 蛋白质抑制剂，例如obatoclax、奥利默森钠和棉酚；
• 分化抗原簇20 受体拮抗剂，诸如，例如，利妥昔单抗；
• 核糖核苷酸还原酶抑制剂，诸如，例如，吉西他滨；
• 肿瘤坏死细胞凋亡诱导配体受体1 激动剂，诸如，例如，mapatumumab；
• 5-羟色胺受体拮抗剂，诸如，例如，rEV598、xaliprode、盐酸帕洛司琼、格拉司琼、Zindol和AB-1001；
• 整联蛋白抑制剂，包括α5-β1 整联蛋白抑制剂，诸如例如，E7820、JSM 6425、volociximab和内皮他丁；
• 雄激素受体拮抗剂，包括例如，癸酸诺龙、氟甲睾酮、甲睾酮、Prost-aid、andromustine、比卡鲁胺、氟他胺、apo-环丙孕酮、apo-氟他胺、醋酸氯地孕酮、环丙氯地孕酮、Tabi、醋酸环丙氯地孕酮和尼鲁米特；
• 芳香酶抑制剂，诸如，例如，阿那曲唑、来曲唑、睾内酯、依西美坦、氨基氨鲁米特和福美坦；
• 基质金属蛋白酶抑制剂；
• 其它抗癌剂，包括例如，阿利维A酸, 聚肌胞, 阿曲生坦贝沙罗汀, bortezomib, 波生坦, 骨化三醇, 依昔舒林, 福莫司汀, 伊班膦酸, 米替福新, 米托蒽醌, I-门冬酰胺酶, 丙卡巴肼, 达卡巴嗪, 羟基脲, 培门冬酶, 喷司他丁, 他扎罗汀, velcade, 硝酸镓, canfosfamide, darinaparsin和维甲酸。
[0105] 在优选的实施方案中，本发明化合物可以与化学疗法(即细胞毒性剂)、抗激素和/或靶向疗法例如其它激酶抑制剂(例如，EGFR 抑制剂)、mTOR 抑制剂和血管发生抑制剂联合使用。
[0106] 本发明化合物还可以与放射疗法和/或外科手术介入结合用于癌症治疗。
[0107] 此外，式(I)化合物可以以其自身或者在组合物中使用，用于研究和诊断中，或者用作为分析参照标准等，这些都是本领域中众所周知的。
[0108] 药物组合物和治疗方法在另一个方面， 本发明提供了包含如上文所定义的式(I)化合物和药学可接受的载体的药物组合物。
[0109] 还在另一个方面，本发明提供了用于制备药物组合物的方法。该方法包括包含将至少一种如上文所定义的式(I)化合物与至少一种药学可接受的载体相结合，和使得到的组合物成为合适的给药形式的步骤。
[0111] 对于这些应用途径，式(I)的活性组分可以以适合的应用形式给药。
[0112] 有用的口服应用形式包括快速和/或以改进的形式释放活性组分的应用形式，诸如，例如片剂(未包衣和包衣片剂，例如具有肠溶衣)、胶囊剂、糖衣片剂、颗粒剂、小丸剂、散剂、乳液剂、混悬剂、溶液剂和气雾剂。
[0113] 可以实施胃肠外应用而避免吸收步骤(静脉内、动脉内、心脏内、脊柱内或腰椎内)或包括吸收(肌内、皮下、皮内、经皮或腹膜内)。有用的胃肠外应用形式包括以溶液剂、混悬剂、乳液剂、冻干剂和无菌粉末形式的注射制剂和输注制剂。
[0114] 适用于其它应用途径的形式包括，例如，可吸入药物形式(包括粉状吸入剂、喷雾剂)、滴鼻剂、溶液剂或喷雾剂、舌、舌下或颊给药的片剂或胶囊剂、栓剂、耳和眼用制剂、阴道用胶囊剂、含水混悬剂(洗剂、震荡合剂)、亲脂性混悬剂、软膏剂、乳膏剂、乳剂、糊剂、扑粉、植入物或支架。
[0115] 在优选的实施方案中，以适用于口服给药的形式提供如上文所定义的包含式(I)化合物的药物组合物。在更优选的实施方案中，以适用于静脉给药的形式提供如上文所定义的包含式(I)化合物的药物组合物。
[0116] 式(I)的活性组分可以按照本身已知的方式转化为所述应用形式。这可以用惰性无毒、药学上合适的赋形剂进行。这些包括，尤其是载体(例如微晶纤维素)、溶剂(例如液体聚乙二醇类)、乳化剂(例如十二烷基硫酸钠)、分散剂(例如聚乙烯吡咯烷酮)、合成和天然生物聚合物(例如白蛋白)、稳定剂(例如抗氧化剂例如抗坏血酸)、着色剂(例如无机色素例如氧化铁)或味道和/或气味矫正剂。
[0117] 在另一实施方案中，本发明提供了治疗需要这种治疗的患者中的细胞增殖性疾病的方法，包含给予患者有效量的如上文所定义的式(I)化合物。在某些实施方案中，细胞增殖性疾病为癌症。
[0118] 还在另一个方面，本发明提供了如上文定义的式(I)化合物用于制备用于治疗或预防细胞增殖性疾病的药物组合物的用途。在某些实施方案中，细胞增殖性疾病为癌症。
[0119] 当本发明化合物作为药物给予人类和动物时，它们可以其自身或者作为药物组合物给药，所述药物组合物含有例如0.1-99.5% (更优选0.5-90%)的活性成分以及与其相结合的药学可接受的载体。
[0120] 无论选择何种给药途径，本发明化合物（其可以以合适的水合物形式应用）和/或本发明的药物组合物可以通过本领域技术人员已知的常规方法配制成药学可接受的剂型。 [0121] 本发明药物组合物中活性成分的实际剂量水平和给药时程可以改变，以便获得对于特定患者、组合物和给药模式达到需要的治疗响应有效的、而对患者无毒性的活性成分的量。示例性的剂量范围为每天0.01-100 mg/kg或每天0.1-150 mg/kg。
[0123] 本发明化合物治疗有效的抗增殖量或预防有效的抗增殖量的确定，可以通过利用已知的技术和观察在类似情况下所获得的结果，由作为本领域技术人员的医师或兽医（“主治医师”）容易地实现。剂量可以根据主治医师所判断的患者的需要、所治疗的症状的严重性和所使用的特定化合物而改变。在确定治疗有效抗增殖量或剂量、和预防有效抗增殖量或剂量中，主治医师会考虑许多因素，包括但不限于：所涉及的具体细胞增殖性疾病；具体药剂的药效学特征及其给药模式和途径；所需要的治疗时程；哺乳动物的种类；其大小、年龄和一般健康；所涉及的具体疾病；疾病的程度或涉及其严重性；个体患者的反应；所给予的具体化合物；给药模式；所给予制剂的生物利用度特征；所选择的剂量方案；同时治疗的种类（即本发明化合物与其它共同给予的疗法的相互作用）；及其其他相关情况。
[0124] 治疗可以使用低于化合物的最佳剂量的较低的剂量起始。此后，剂量可以小幅度增加来增加，直至达到在这种情况下的最佳效果。为了方便起见，如果需要，总的日剂量可以分份并在一天内分成几份给药。可以预期本发明化合物的治疗有效抗增殖量和预防有效抗增殖量从约0.01毫克每千克体重每天（mg/kg/天）至约100mg/kg/天变化。
[0125] 对于本发明而言，本发明化合物的优选剂量是患者可以忍受并且不产生严重副作用的最大剂量。示例性地，本发明化合物可以约0.01 mg/kg至约100 mg/kg体重、约0.01 mg/kg至约10 mg/kg体重或约0.1 mg/kg至约10 mg/kg体重的剂量给药。上文列举的数值的中间的范围也是本发明的一部分。
[0126] 除非另外指明，下文试验和实施例中的百分比按重量计；份数按重量计。用于对于液体/液体溶液所报告的溶剂比例、稀释比例和浓度各自基于体积。
具体实施方式
[0127] A. 实施例缩写和缩略语：
Ac 乙酰基
aq. 含水 (溶液)
br. s 宽单峰 (NMR)
conc. 浓缩的
d 双峰 (NMR)
DCI 直接化学电离 (MS)
dd 双二重峰 (NMR)
DMF N,N-二甲基甲酰胺
DMSO 二甲亚砜
DMSO-d6 二甲亚砜-d6
ee 对映体过量
EI 电子碰撞电离 (MS)
equiv. 当量(诸当量)
ESI 电喷雾电离 (MS)
Et 乙基
EtOAc 乙酸乙酯
GC-MS 气相色谱法-联用质谱法
h 小时(诸小时)
1
H-NMR 质子核磁共振波谱法
HOAc 乙酸
HPLC 高效/高压液相色谱法
LC-MS 液相色谱法-联用质谱法
m 多重峰(NMR)
Me 甲基
MeOH 甲醇
min 分钟(诸分钟)
MS 质谱法
m/z 质荷比
of th. 理论值的 (化学产率)
Ph 苯基
q 四重峰(NMR)
Rf TLC保留因子
RP 反相 (HPLC)
rt 室温
Rt 保留时间 (HPLC)
s 单峰(NMR)
tBu 叔丁基
tBuO 叔丁氧基
TFA 三氟乙酸
THF 四氢呋喃
TLC 薄层色谱法
t 三重峰(NMR)
v/v 体积/体积比
w/v 重量/体积比
w/w 重量/重量比
LC-MS和GC-MS方法：
方法1 (LC-MS)：
仪器：装有 HPLC Waters Alliance 2795的Micromass ZQ；柱：Phenomenex Synergi
2.5µ MAX-RP 100A Mercury，20 mm x 4 mm；洗脱液 A：1 L 水 + 0.5 mL 50%甲酸，洗脱液 B：1 L 乙腈+ 0.5 mL 50%甲酸；梯度：0.0 min 90% A → 0.1 min 90% A → 3.0 min 5% A → 4.0 min 5% A → 4.01 min 90% A；流速：2 mL/min；恒温器：50℃；UV 检测：210 nm。
Ac 乙酰基
aq. 含水 (溶液)
br. s 宽单峰 (NMR)
conc. 浓缩的
d 双峰 (NMR)
DCI 直接化学电离 (MS)
dd 双二重峰 (NMR)
DMF N,N-二甲基甲酰胺
DMSO 二甲亚砜
DMSO-d6 二甲亚砜-d6
ee 对映体过量
EI 电子碰撞电离 (MS)
equiv. 当量(诸当量)
ESI 电喷雾电离 (MS)
Et 乙基
EtOAc 乙酸乙酯
GC-MS 气相色谱法-联用质谱法
h 小时(诸小时)
1
H-NMR 质子核磁共振波谱法
HOAc 乙酸
HPLC 高效/高压液相色谱法
LC-MS 液相色谱法-联用质谱法
m 多重峰(NMR)
Me 甲基
MeOH 甲醇
min 分钟(诸分钟)
MS 质谱法
m/z 质荷比
of th. 理论值的 (化学产率)
Ph 苯基
q 四重峰(NMR)
Rf TLC保留因子
RP 反相 (HPLC)
rt 室温
Rt 保留时间 (HPLC)
s 单峰(NMR)
tBu 叔丁基
tBuO 叔丁氧基
TFA 三氟乙酸
THF 四氢呋喃
TLC 薄层色谱法
t 三重峰(NMR)
v/v 体积/体积比
w/v 重量/体积比
w/w 重量/重量比
LC-MS和GC-MS方法：
方法1 (LC-MS)：
仪器：装有 HPLC Waters Alliance 2795的Micromass ZQ；柱：Phenomenex Synergi
2.5µ MAX-RP 100A Mercury，20 mm x 4 mm；洗脱液 A：1 L 水 + 0.5 mL 50%甲酸，洗脱液 B：1 L 乙腈+ 0.5 mL 50%甲酸；梯度：0.0 min 90% A → 0.1 min 90% A → 3.0 min 5% A → 4.0 min 5% A → 4.01 min 90% A；流速：2 mL/min；恒温器：50℃；UV 检测：210 nm。
[0128] 方法2 (LC-MS)：仪器：装有HPLC Waters UPLC Acquity的Micromass Quattro Premier；柱：Thermo Hypersil GOLD 1.9µ，50 mm x 1 mm；洗脱液 A：1 L水 + 0.5 mL 50%甲酸，洗脱液 B：1 L 乙腈+ 0.5 mL 50%甲酸；梯度：0.0 min 90% A → 0.1 min 90% A → 1.5 min 10% A →
2.2 min 10% A；恒温器：50℃；流速：0.33 mL/min；UV 检测：210 nm。
2.2 min 10% A；恒温器：50℃；流速：0.33 mL/min；UV 检测：210 nm。
[0129] 方法3 (GC-MS)：仪器：Micromass GCT，GC6890；柱：Restek RTX-35，15 m x 200 µm x 0.33 µm；使用氦气恒流：0.88 mL/min；恒温器：70℃；进口：250℃；梯度：70℃，30℃/min → 310℃ (保持3 min)。
[0130] 方法4 (LC-MS)：仪器：Waters Acquity SQD UPLC 系统；柱：Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8µ，50 mm x 1 mm；洗脱液 A：1 L水 + 0.25 mL 99%甲酸，洗脱液 B：1 L 乙腈+ 0.25 mL 99%甲酸；
梯度：0.0 min 90% A → 1.2 min 5% A → 2.0 min 5% A；恒温器：50℃；流速：0.40 mL/min；UV 检测：210-400 nm。
梯度：0.0 min 90% A → 1.2 min 5% A → 2.0 min 5% A；恒温器：50℃；流速：0.40 mL/min；UV 检测：210-400 nm。
[0131] 方法5 (LC-MS)：仪器：装有 HPLC Agilent 1100系列的Micromass Quattro Micro；柱：Thermo Hypersil GOLD 3µ, 20 mm x 4 mm；洗脱液 A：1 L水 + 0.5 mL 50%甲酸，洗脱液 B：1 L 乙腈+ 0.5 mL 50%甲酸；梯度：0.0 min 100% A → 3.0 min 10% A → 4.0 min 10% A →
4.01 min 100% A (流速 2.5 mL/min) → 5.00 min 100% A；恒温器：50℃；流速：2 mL/ min；UV 检测：210 nm。
4.01 min 100% A (流速 2.5 mL/min) → 5.00 min 100% A；恒温器：50℃；流速：2 mL/ min；UV 检测：210 nm。
[0132] 方法6 (LC-MS)：仪器：装有HPLC HP 1100系列的Micromass ZQ；UV DAD；柱：Phenomenex Gemini 3µ,
30 mm x 3.00 mm；洗脱液 A：1 L水 + 0.5 mL 50%甲酸，洗脱液 B：1 L 乙腈+ 0.5 mL 50%甲酸；梯度：0.0 min 90% A → 2.5 min 30% A → 3.0 min 5% A → 4.5 min 5% A；流速：
0.0 min 1 mL/min → 2.5 min/3.0 min/4.5 min 2 mL/min；恒温器：50℃；UV 检测：210 nm。
30 mm x 3.00 mm；洗脱液 A：1 L水 + 0.5 mL 50%甲酸，洗脱液 B：1 L 乙腈+ 0.5 mL 50%甲酸；梯度：0.0 min 90% A → 2.5 min 30% A → 3.0 min 5% A → 4.5 min 5% A；流速：
0.0 min 1 mL/min → 2.5 min/3.0 min/4.5 min 2 mL/min；恒温器：50℃；UV 检测：210 nm。
[0133] 起始原料和中间体：实施例1A
3-甲基-1H-吲唑-5-甲醛(carbaldehyde)
在氩气氛下将四氢呋喃 (600 ml)冷却至-78℃。在该温度下，逐滴加入1.7 M叔丁基锂的正戊烷 (200 ml) 溶液。在-78℃下保持15分钟后，以溶液的温度不超过-70℃的速率逐滴加入22.4 g (106.1 mmol) 5-溴-3-甲基-1H-吲唑的THF (300 ml)溶液。将混合物搅拌30分钟，然后逐滴加入N,N-二甲基甲酰胺 (24.5 ml)。20min后，除去冰浴，继续搅拌1h，然后小心加入水(250 ml)。使用乙酸乙酯 (500 ml)萃取混合物数次。使用饱和的氯化钠水溶液洗涤合并的有机层，通过硫酸钠干燥，减压浓缩得到18.5g 粗的3-甲基-1H-吲唑-5-甲醛，其用于下一步骤而未进一步纯化。
3-甲基-1H-吲唑-5-甲醛(carbaldehyde)
在氩气氛下将四氢呋喃 (600 ml)冷却至-78℃。在该温度下，逐滴加入1.7 M叔丁基锂的正戊烷 (200 ml) 溶液。在-78℃下保持15分钟后，以溶液的温度不超过-70℃的速率逐滴加入22.4 g (106.1 mmol) 5-溴-3-甲基-1H-吲唑的THF (300 ml)溶液。将混合物搅拌30分钟，然后逐滴加入N,N-二甲基甲酰胺 (24.5 ml)。20min后，除去冰浴，继续搅拌1h，然后小心加入水(250 ml)。使用乙酸乙酯 (500 ml)萃取混合物数次。使用饱和的氯化钠水溶液洗涤合并的有机层，通过硫酸钠干燥，减压浓缩得到18.5g 粗的3-甲基-1H-吲唑-5-甲醛，其用于下一步骤而未进一步纯化。
[0134] 实施例2A(2E)-2-[(3-甲 基 -1H-吲 唑-5- 基) 亚 甲 基 (methylidene]-3-氧 代 丁 腈(butanenitrile)
将含有4Å 分子筛的5.0 g (31.2 mmol) 3-甲基-1H-吲唑-5-甲醛(实施例1A)、
3.61 g (34.3 mmol) (1Z)-1-氰基丙-1-烯-2-油酸钠、2.23 ml (39 mmol) 乙酸和0.31 ml (3.12 mmol) 哌啶在干燥的二氯甲烷 (250 ml)中的混合物搅拌回流12h。冷却后，过滤收集形成的沉淀，使用饱和的碳酸氢钠水溶液和水洗涤。将固体溶解于乙醇中，滤除分子筛。减压浓缩滤液，使用乙酸乙酯和饱和的碳酸钠水溶液处理残余物。使用水洗涤有机层，干燥，减压浓缩得到标题化合物 (3.5 g，理论值的50%)，为淡黄色固体，其用于下一步骤而未进一步纯化。
将含有4Å 分子筛的5.0 g (31.2 mmol) 3-甲基-1H-吲唑-5-甲醛(实施例1A)、
3.61 g (34.3 mmol) (1Z)-1-氰基丙-1-烯-2-油酸钠、2.23 ml (39 mmol) 乙酸和0.31 ml (3.12 mmol) 哌啶在干燥的二氯甲烷 (250 ml)中的混合物搅拌回流12h。冷却后，过滤收集形成的沉淀，使用饱和的碳酸氢钠水溶液和水洗涤。将固体溶解于乙醇中，滤除分子筛。减压浓缩滤液，使用乙酸乙酯和饱和的碳酸钠水溶液处理残余物。使用水洗涤有机层，干燥，减压浓缩得到标题化合物 (3.5 g，理论值的50%)，为淡黄色固体，其用于下一步骤而未进一步纯化。
[0135] 实施例3A1-(5-溴-2-氟苯基)-1-丙醇
在0℃下向15 g (73.9 mmol) 5-溴-2-氟苯甲醛的乙醚 (100 ml)溶液中缓慢加入
27.1 ml (81.3 mmol) 溴化乙基镁(3 M乙醚溶液)。在0℃下搅拌3h后，小心加入水(20 ml)，直至形成白色沉淀。滤除固体，使用叔丁基甲基醚洗涤。使用盐水洗涤合并的滤液，通过硫酸钠干燥并减压浓缩。这样得到粗的标题化合物(16.1 g，理论值的93%) 用于下一步骤而未进一步纯化。
在0℃下向15 g (73.9 mmol) 5-溴-2-氟苯甲醛的乙醚 (100 ml)溶液中缓慢加入
27.1 ml (81.3 mmol) 溴化乙基镁(3 M乙醚溶液)。在0℃下搅拌3h后，小心加入水(20 ml)，直至形成白色沉淀。滤除固体，使用叔丁基甲基醚洗涤。使用盐水洗涤合并的滤液，通过硫酸钠干燥并减压浓缩。这样得到粗的标题化合物(16.1 g，理论值的93%) 用于下一步骤而未进一步纯化。
[0136] 实施例4A1-(5-溴-2-氟苯基)-1-丙酮
在室温下将10 g (42.9 mmol) 1-(5-溴-2-氟苯基)-1-丙醇 (实施例3A)、8.75 g (85.8 mmol) 中性氧化铝和18.5 g (85.8 mmol) 氯铬酸吡啶 在二氯甲烷 (100 ml) 中的混合物搅拌4h。然后通过硅胶(200 g，0.06-0.2 mm)过滤混合物，其使用二氯甲烷 (1000 ml)彻底洗涤。使用盐水洗涤合并的滤液，通过硫酸钠干燥并减压浓缩。这样得到粗的标题化合物(8.6 g，理论值的87%) 用于下一步骤而未进一步纯化。
在室温下将10 g (42.9 mmol) 1-(5-溴-2-氟苯基)-1-丙醇 (实施例3A)、8.75 g (85.8 mmol) 中性氧化铝和18.5 g (85.8 mmol) 氯铬酸吡啶 在二氯甲烷 (100 ml) 中的混合物搅拌4h。然后通过硅胶(200 g，0.06-0.2 mm)过滤混合物，其使用二氯甲烷 (1000 ml)彻底洗涤。使用盐水洗涤合并的滤液，通过硫酸钠干燥并减压浓缩。这样得到粗的标题化合物(8.6 g，理论值的87%) 用于下一步骤而未进一步纯化。
[0137] 实施例5A5-溴-3-乙基-1H-吲唑
使用3.25 g (3.16 ml, 64.9 mmol) 水合肼处理7.50 g (32.5 mmol) 1-(5-溴-2-氟苯基)-1-丙酮 (实施例4A)的1-甲基-2-吡咯烷酮(NMP；100 ml)溶液并在回流温度下搅拌16h。冷却后，将混合物倒入冰和水的混合物中。过滤收集沉淀并使用水彻底洗涤，生成4.56 g (理论值的62%) 的标题化合物，为米-褐色固体。
使用3.25 g (3.16 ml, 64.9 mmol) 水合肼处理7.50 g (32.5 mmol) 1-(5-溴-2-氟苯基)-1-丙酮 (实施例4A)的1-甲基-2-吡咯烷酮(NMP；100 ml)溶液并在回流温度下搅拌16h。冷却后，将混合物倒入冰和水的混合物中。过滤收集沉淀并使用水彻底洗涤，生成4.56 g (理论值的62%) 的标题化合物，为米-褐色固体。
[0138] 实施例6A3-乙基-1H-吲唑-5-甲醛
将6.90 g (30.7 mmol) 5-溴-3-乙基-1H-吲唑 (实施例5A) 的THF (300 ml)溶
液冷却至-78℃。在该温度下，缓慢加入1.7 M叔丁基锂的正戊烷 (63.1 ml, 107 mmol) 溶液。在-78℃下将混合物搅拌30分钟，然后缓慢加入N,N-二甲基甲酰胺 (80.0 ml)。除去冰浴，继续搅拌直至达到室温。然后，小心加入水(250 ml)。使用乙酸乙酯(500 ml)萃取混合物数次。使用饱和的氯化钠水溶液洗涤合并的有机层，通过硫酸钠干燥，减压浓缩得到4.5 g (理论值的84%)的粗的标题化合物，其用于下一步骤而未进一步纯化。
将6.90 g (30.7 mmol) 5-溴-3-乙基-1H-吲唑 (实施例5A) 的THF (300 ml)溶
液冷却至-78℃。在该温度下，缓慢加入1.7 M叔丁基锂的正戊烷 (63.1 ml, 107 mmol) 溶液。在-78℃下将混合物搅拌30分钟，然后缓慢加入N,N-二甲基甲酰胺 (80.0 ml)。除去冰浴，继续搅拌直至达到室温。然后，小心加入水(250 ml)。使用乙酸乙酯(500 ml)萃取混合物数次。使用饱和的氯化钠水溶液洗涤合并的有机层，通过硫酸钠干燥，减压浓缩得到4.5 g (理论值的84%)的粗的标题化合物，其用于下一步骤而未进一步纯化。
[0139] 实施例7A(2E)-2-[(3-乙基-1H-吲唑-5-基)亚甲基]-3-氧代丁腈
将含有4Å 分子筛的0.50 g (2.87 mmol) 3-乙基-1H-吲唑-5-甲醛(实施例6A)、
0.33 g (3.16 mmol) (1Z)-1-氰基丙-1-烯-2-油酸钠、0.21 ml (3.6 mmol) 乙酸和0.028 ml (0.29 mmol) 哌啶 在干燥的二氯甲烷 (25 ml) 中的混合物搅拌回流16h。冷却后，过滤收集形成的沉淀，使用饱和的碳酸氢钠水溶液和水洗涤。将固体溶解于乙醇中，滤除分子筛。减压浓缩滤液，使用乙酸乙酯和饱和的碳酸钠水溶液处理残留物。使用水洗涤有机层，干燥，减压浓缩得到标题化合物 (0.60 g，理论值的88%)，为淡黄色固体，其用于随后的步骤而未进一步纯化。
将含有4Å 分子筛的0.50 g (2.87 mmol) 3-乙基-1H-吲唑-5-甲醛(实施例6A)、
0.33 g (3.16 mmol) (1Z)-1-氰基丙-1-烯-2-油酸钠、0.21 ml (3.6 mmol) 乙酸和0.028 ml (0.29 mmol) 哌啶 在干燥的二氯甲烷 (25 ml) 中的混合物搅拌回流16h。冷却后，过滤收集形成的沉淀，使用饱和的碳酸氢钠水溶液和水洗涤。将固体溶解于乙醇中，滤除分子筛。减压浓缩滤液，使用乙酸乙酯和饱和的碳酸钠水溶液处理残留物。使用水洗涤有机层，干燥，减压浓缩得到标题化合物 (0.60 g，理论值的88%)，为淡黄色固体，其用于随后的步骤而未进一步纯化。
[0140] 实施例8A(2E)-2-(1H-吲唑-5-基亚甲基)-3-氧代丁腈
在回流温度下使用反转水分离器将在干燥的二氯甲烷 (500 ml)中的10 g (68.4 mmol) 1H-吲唑-5-甲醛[制备描述于US 2005/0227968-A1 (中间体 1)中]、7.91 g (75.2 mmol) (1Z)-1-氰基丙-1-烯-2-油酸钠、4.89 ml (85.5 mmol) 乙酸和0.68 ml (6.84 mmol) 哌啶搅拌7h。冷却后，过滤收集形成的沉淀，使用二氯甲烷洗涤。真空干燥固体得到粗的标题化合物 (19 g，通过LC-MS测定纯度为75%，理论值的96%)，其用于随后的步骤而未进一步纯化。
在回流温度下使用反转水分离器将在干燥的二氯甲烷 (500 ml)中的10 g (68.4 mmol) 1H-吲唑-5-甲醛[制备描述于US 2005/0227968-A1 (中间体 1)中]、7.91 g (75.2 mmol) (1Z)-1-氰基丙-1-烯-2-油酸钠、4.89 ml (85.5 mmol) 乙酸和0.68 ml (6.84 mmol) 哌啶搅拌7h。冷却后，过滤收集形成的沉淀，使用二氯甲烷洗涤。真空干燥固体得到粗的标题化合物 (19 g，通过LC-MS测定纯度为75%，理论值的96%)，其用于随后的步骤而未进一步纯化。
[0141] 实施例9A5-甲氧基-3,6-二氢-2H-1,4- 嗪
将1.2 g (11.9 mmol) 吗啉-3-酮的二氯甲烷 (70 ml)溶液冷却至0℃，并使用25 g (238 mmol)干燥的碳酸钠处理。 在0℃下搅拌10min后，在0℃下加入6.14 g (41.5 mmol) 四氟硼酸三甲基氧 。使混合物温热至室温并搅拌6h。加入水(100 ml)，分离有机层。使用二氯甲烷萃取水相数次，使用盐水洗涤合并的有机层，通过硫酸钠干燥并减压浓缩。这样获得的粗产物用于下一步骤而未进一步纯化。
将1.2 g (11.9 mmol) 吗啉-3-酮的二氯甲烷 (70 ml)溶液冷却至0℃，并使用25 g (238 mmol)干燥的碳酸钠处理。 在0℃下搅拌10min后，在0℃下加入6.14 g (41.5 mmol) 四氟硼酸三甲基氧 。使混合物温热至室温并搅拌6h。加入水(100 ml)，分离有机层。使用二氯甲烷萃取水相数次，使用盐水洗涤合并的有机层，通过硫酸钠干燥并减压浓缩。这样获得的粗产物用于下一步骤而未进一步纯化。
[0142] 实施例10A(2E/Z)-氰基(吗啉-3-基亚基)乙酸叔丁酯
将0.48 g (4.17 mmol) 5-甲氧基-3,6-二氢-2H-1,4- 嗪(实施例9A)和0.61 g
(4.34 mmol) 氰基乙酸叔丁酯在THF (25 ml)中的混合物搅拌回流12 h。然后将混合物冷却至室温并减压浓缩。通过快速色谱法纯化残留物(硅胶，洗脱液环己烷/乙酸乙酯 3 :
1)生成标题化合物，为白色固体 (0.269 g，理论值的27%)。
将0.48 g (4.17 mmol) 5-甲氧基-3,6-二氢-2H-1,4- 嗪(实施例9A)和0.61 g
(4.34 mmol) 氰基乙酸叔丁酯在THF (25 ml)中的混合物搅拌回流12 h。然后将混合物冷却至室温并减压浓缩。通过快速色谱法纯化残留物(硅胶，洗脱液环己烷/乙酸乙酯 3 :
1)生成标题化合物，为白色固体 (0.269 g，理论值的27%)。
[0143] 实施例11A3-氨基-3-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙-2-烯腈
在惰性气体气氛下将0.258 ml (1.844 mmol) 二异丙基胺在干燥的THF (1.5 ml)中的溶液冷却至-70℃，逐滴加入1.152 ml (1.844 mmol) 正丁基锂 (1.6 M己烷溶液)。然后，在10min内缓慢加入85.6 µl (1.627 mmol) 乙腈在干燥的THF(1.5 ml)中的溶液。
在-70℃下将得到的溶液进一步搅拌30min，然后加入150 mg (1.085 mmol) 2-甲氧基吡啶-5-腈在干燥的THF (1.5 ml) 中的溶液。使混合物温热至室温并搅拌1h，然后缓慢加入水(2 ml)。使用二氯甲烷 (50 ml)萃取混合物数次。通过硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩得到188 mg (理论值的99%)粗的标题化合物，其用于下一步骤而未进一步纯化。
在惰性气体气氛下将0.258 ml (1.844 mmol) 二异丙基胺在干燥的THF (1.5 ml)中的溶液冷却至-70℃，逐滴加入1.152 ml (1.844 mmol) 正丁基锂 (1.6 M己烷溶液)。然后，在10min内缓慢加入85.6 µl (1.627 mmol) 乙腈在干燥的THF(1.5 ml)中的溶液。
在-70℃下将得到的溶液进一步搅拌30min，然后加入150 mg (1.085 mmol) 2-甲氧基吡啶-5-腈在干燥的THF (1.5 ml) 中的溶液。使混合物温热至室温并搅拌1h，然后缓慢加入水(2 ml)。使用二氯甲烷 (50 ml)萃取混合物数次。通过硫酸钠干燥合并的有机层，并减压浓缩得到188 mg (理论值的99%)粗的标题化合物，其用于下一步骤而未进一步纯化。
[0144] 实施例12A5-甲氧基-3-氧代戊腈
在惰性气体气氛下向火焰干燥的烧瓶中装入在干燥的THF (25 ml)中的5 ml (8.0 mmol) 正丁基锂 (1.6 M己烷溶液)并冷却至-78℃。然后，缓慢加入0.368 ml (7 mmol) 乙腈，将得到的混合物在-70℃下搅拌1h。然后，缓慢加入0.585 ml (5.0 mmol) 3-甲氧基丙酸甲酯，保持温度低于-66℃。将反应混合物在-45℃下搅拌2h，然后通过加入盐酸 (2 M, 16 ml)淬灭，保持温度低于-35℃。使得到的澄清溶液温热至室温，然后减压浓缩，高真空干燥残留物。 这样获得粗产物 (1.51 g) 用于下一步骤而未进一步纯化。
在惰性气体气氛下向火焰干燥的烧瓶中装入在干燥的THF (25 ml)中的5 ml (8.0 mmol) 正丁基锂 (1.6 M己烷溶液)并冷却至-78℃。然后，缓慢加入0.368 ml (7 mmol) 乙腈，将得到的混合物在-70℃下搅拌1h。然后，缓慢加入0.585 ml (5.0 mmol) 3-甲氧基丙酸甲酯，保持温度低于-66℃。将反应混合物在-45℃下搅拌2h，然后通过加入盐酸 (2 M, 16 ml)淬灭，保持温度低于-35℃。使得到的澄清溶液温热至室温，然后减压浓缩，高真空干燥残留物。 这样获得粗产物 (1.51 g) 用于下一步骤而未进一步纯化。
[0145] 实施例13A3-溴-1H-吲唑-5-甲醛
在室温下在20min内向20 g (137 mmol) 1H-吲唑-5-甲醛的乙腈(580 ml)溶液中，加入28 g (157 mmol) 1-溴吡咯烷-2,5-二酮。将得到的悬浮液搅拌回流30 min，然后冷却至室温并减压浓缩。将残留物溶解于乙酸乙酯 (1500 ml)中，使用水和盐水洗涤溶液，通过硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。使用乙酸乙酯研制粗产物。过滤后，真空干燥沉淀物生成标题化合物，为白色固体 (30.9 g，理论值的75%)。
在室温下在20min内向20 g (137 mmol) 1H-吲唑-5-甲醛的乙腈(580 ml)溶液中，加入28 g (157 mmol) 1-溴吡咯烷-2,5-二酮。将得到的悬浮液搅拌回流30 min，然后冷却至室温并减压浓缩。将残留物溶解于乙酸乙酯 (1500 ml)中，使用水和盐水洗涤溶液，通过硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。使用乙酸乙酯研制粗产物。过滤后，真空干燥沉淀物生成标题化合物，为白色固体 (30.9 g，理论值的75%)。
[0146] 实施例14A3-氨基-3-(4-氯-3-氟苯基)丙-2-烯腈
使用4-氯-3-氟苄腈(300 mg, 1.85 mmol)按照实施例11A描述的方法制备标题化合物，生成358 mg (理论值的98%)粗产物，其用于下一步骤而未进一步纯化。
使用4-氯-3-氟苄腈(300 mg, 1.85 mmol)按照实施例11A描述的方法制备标题化合物，生成358 mg (理论值的98%)粗产物，其用于下一步骤而未进一步纯化。
[0147] 实施例15A3-氨基-3-(3,5-二氟苯基)丙-2-烯腈
使用3,5-二氟苄腈(500 mg, 3.59 mmol)按照实施例11A描述的方法制备标题化合物，生成640 mg (理论值的99%) 的粗产物，其用于下一步骤而未进一步纯化。
使用3,5-二氟苄腈(500 mg, 3.59 mmol)按照实施例11A描述的方法制备标题化合物，生成640 mg (理论值的99%) 的粗产物，其用于下一步骤而未进一步纯化。
[0148] 实施例16A3-氨基-3-(2,4-二氟苯基)丙-2-烯腈
使用2,4-二氟苄腈(300 mg, 2.1 mmol)按照实施例11A描述的方法制备标题化合物，生成288 mg (理论值的76%) 的粗产物，其用于下一步骤而未进一步纯化。
使用2,4-二氟苄腈(300 mg, 2.1 mmol)按照实施例11A描述的方法制备标题化合物，生成288 mg (理论值的76%) 的粗产物，其用于下一步骤而未进一步纯化。
[0149] 实施例17A6-氟-3-甲基-1H-吲唑-5-甲醛
将30 g (131 mmol) 5-溴-6-氟-3-甲基-1H-吲唑 [制备描述于WO 2005/085227-A1中，实施例104 c]；也是商业可获得的，CAS Reg.-No. 864773-66-0]的THF (525 ml)溶液冷却至-45℃。在-45℃下逐滴加入氯化甲基镁的 THF溶液 (3 M；50.2 ml, 151 mmol)，将得到的溶液在该温度下搅拌40min。使用定量泵，加入253 ml (354 mmol) 2-丁基锂溶液(1.4 M在环己烷中)，以便温度不超过-40℃。将得到的混合物在-40℃下搅拌30min，然后逐滴加入30.2 ml (393 mmol) N,N-二甲基甲酰胺，保持温度为-40℃。将得到的混合物在-40℃下搅拌30min，然后使其温热至室温，并缓慢倾入到冷却至5℃ (冰-水浴)的体积为2.8 L的2 N 盐酸中。使用乙酸乙酯萃取混合物数次。使用盐水洗涤合并的有机层，通过硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残留物溶解于二氯甲烷中，在硅胶上通过色谱法纯化 (洗脱液：戊烷/乙酸乙酯 6 : 4 v/v)得到19.6 g (理论值的78%) 标题化合物，为浅黄色固体。
将30 g (131 mmol) 5-溴-6-氟-3-甲基-1H-吲唑 [制备描述于WO 2005/085227-A1中，实施例104 c]；也是商业可获得的，CAS Reg.-No. 864773-66-0]的THF (525 ml)溶液冷却至-45℃。在-45℃下逐滴加入氯化甲基镁的 THF溶液 (3 M；50.2 ml, 151 mmol)，将得到的溶液在该温度下搅拌40min。使用定量泵，加入253 ml (354 mmol) 2-丁基锂溶液(1.4 M在环己烷中)，以便温度不超过-40℃。将得到的混合物在-40℃下搅拌30min，然后逐滴加入30.2 ml (393 mmol) N,N-二甲基甲酰胺，保持温度为-40℃。将得到的混合物在-40℃下搅拌30min，然后使其温热至室温，并缓慢倾入到冷却至5℃ (冰-水浴)的体积为2.8 L的2 N 盐酸中。使用乙酸乙酯萃取混合物数次。使用盐水洗涤合并的有机层，通过硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残留物溶解于二氯甲烷中，在硅胶上通过色谱法纯化 (洗脱液：戊烷/乙酸乙酯 6 : 4 v/v)得到19.6 g (理论值的78%) 标题化合物，为浅黄色固体。
[0150] 实施例18A(2E)-2-[(6-氟-3-甲基-1H-吲唑-5-基)亚甲基]-3-氧代丁腈
按照对于实施例2A描述的方法，使用2.74 g (15.5 mmol) 6-氟-3-甲基-1H-吲
唑-5-甲醛(实施例17A)和2.6 g (24.8 mmol) (1Z)-1-氰基丙-1-烯-2-油酸钠制备标题化合物，生成1.6 g (理论值的42%) 的粗产物，其用于下一步骤而未进一步纯化。
按照对于实施例2A描述的方法，使用2.74 g (15.5 mmol) 6-氟-3-甲基-1H-吲
唑-5-甲醛(实施例17A)和2.6 g (24.8 mmol) (1Z)-1-氰基丙-1-烯-2-油酸钠制备标题化合物，生成1.6 g (理论值的42%) 的粗产物，其用于下一步骤而未进一步纯化。
[0151] 实施例19A6-氟-1H-吲唑-5-甲醛
将4.8 g (30 mmol) 6-氟-1H-吲唑-5-腈 [商业可获得；制备提供于EP 1 510
516-A1中 (生产实施例82)]在无水甲苯 (150 ml)中的浆状物冷却至-40℃。在惰性气体气氛下，在30min内加入48 ml (72 mmol) 氢化二异丁基铝溶液(1.5 M在甲苯中)，将得到的混合物在-40℃下搅拌3h。然后，加入乙酸乙酯 (30 ml)，将混合物在-40℃下进一步搅拌20min，随后逐滴加入酒石酸水溶液(1 M, 30 ml)。使混合物温热至0℃并在该温度下过滤。使用乙酸乙酯萃取滤液数次，随后使用饱和的碳酸氢钠水溶液和用盐水洗涤合并的有机相，通过硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。这样获得粗产物 (2.60 g，理论值的53%) 用于下一步骤而未进一步纯化。
将4.8 g (30 mmol) 6-氟-1H-吲唑-5-腈 [商业可获得；制备提供于EP 1 510
516-A1中 (生产实施例82)]在无水甲苯 (150 ml)中的浆状物冷却至-40℃。在惰性气体气氛下，在30min内加入48 ml (72 mmol) 氢化二异丁基铝溶液(1.5 M在甲苯中)，将得到的混合物在-40℃下搅拌3h。然后，加入乙酸乙酯 (30 ml)，将混合物在-40℃下进一步搅拌20min，随后逐滴加入酒石酸水溶液(1 M, 30 ml)。使混合物温热至0℃并在该温度下过滤。使用乙酸乙酯萃取滤液数次，随后使用饱和的碳酸氢钠水溶液和用盐水洗涤合并的有机相，通过硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。这样获得粗产物 (2.60 g，理论值的53%) 用于下一步骤而未进一步纯化。
[0152] 实施例20A(2E)-2-[(6-氟-1H-吲唑-5-基)亚甲基]-3-氧代丁腈
以类似于实施例2A中描述的方法由3.7 g (80%纯度, 18.0 mmol) 6-氟-1H-吲
唑-5-甲醛(实施例19A) 和2.08 g (19.84 mmol) (1Z)-1-氰基丙-1-烯-2-油酸钠制备标题化合物，生成2.5 g (理论值的61%)产物，其用于随后的步骤而未进一步纯化。
以类似于实施例2A中描述的方法由3.7 g (80%纯度, 18.0 mmol) 6-氟-1H-吲
唑-5-甲醛(实施例19A) 和2.08 g (19.84 mmol) (1Z)-1-氰基丙-1-烯-2-油酸钠制备标题化合物，生成2.5 g (理论值的61%)产物，其用于随后的步骤而未进一步纯化。
[0153] 实施例21A3-氨基-3-[4-(三氟甲基)苯基]丙-2-烯腈
按照实施例11A描述的方法制备标题化合物，使用4-(三氟甲基)苄腈(500 mg, 2.89 mmol) 生成606 mg (理论值的99%) 的粗产物，其用于下一步骤而未进一步纯化。
按照实施例11A描述的方法制备标题化合物，使用4-(三氟甲基)苄腈(500 mg, 2.89 mmol) 生成606 mg (理论值的99%) 的粗产物，其用于下一步骤而未进一步纯化。
[0154] 制备实施例：实施例1
2-甲基-4-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并(furo)[3,4-b]吡啶-3-腈
方法A：
在110℃下将300 mg (1.332 mmol) (2E)-2-[(3-甲基-1H-吲唑-5-基)亚甲
基]-3-氧代丁腈 (实施例2A)、136 mg (1.332 mmol) 呋喃-2,4(3H,5H)-二酮和123 mg (1.598 mmol)乙酸铵的乙酸 (6.3 ml) 溶液搅拌3 h。然后减压浓缩反应混合物，通过快速色谱法纯化残留物(硅胶；二氯甲烷/甲醇梯度，最终混合物30 : 1 v/v)，生成59 mg (理论值的14%) 外消旋标题化合物。
2-甲基-4-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并(furo)[3,4-b]吡啶-3-腈
方法A：
在110℃下将300 mg (1.332 mmol) (2E)-2-[(3-甲基-1H-吲唑-5-基)亚甲
基]-3-氧代丁腈 (实施例2A)、136 mg (1.332 mmol) 呋喃-2,4(3H,5H)-二酮和123 mg (1.598 mmol)乙酸铵的乙酸 (6.3 ml) 溶液搅拌3 h。然后减压浓缩反应混合物，通过快速色谱法纯化残留物(硅胶；二氯甲烷/甲醇梯度，最终混合物30 : 1 v/v)，生成59 mg (理论值的14%) 外消旋标题化合物。
[0155] 方法B：在回流温度下将100 mg (0.624 mmol) 3-甲基-1H-吲唑-5-甲醛(实施例1A)、54 mg (0.624 mmol) 3-氨基丁-2-烯腈和120 mg (0.624 mmol) 4-(乙酰氧基)-3-氧代丁酸乙酯[制备：US 4,720,572 (实施例1)]的1-丙醇 (2 ml)溶液搅拌过夜。然后，加入浓盐酸 (115 µl)和水 (350 µl)，在100℃下继续搅拌1h。冷却后，通过制备型RP-HPLC直接纯化混合物(乙腈/水 + 0.1% TFA梯度) ，生成103 mg (理论值的51%) 外消旋标题化合物。
[0156] 实施例2 和实施例32-甲基-4-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡
啶-3-腈 (对映体1和 2)
通过HPLC色谱法在手性相上将实施例1的外消旋化合物(125 mg)分离为对映体[柱：
Daicel Chiralpak AS-H, 5 µm, 250 mm x 20 mm；洗脱液：异己烷/乙醇 65 : 35 v/v；
流速：15 ml/min；温度：35℃；UV 检测：220 nm]。
啶-3-腈 (对映体1和 2)
通过HPLC色谱法在手性相上将实施例1的外消旋化合物(125 mg)分离为对映体[柱：
Daicel Chiralpak AS-H, 5 µm, 250 mm x 20 mm；洗脱液：异己烷/乙醇 65 : 35 v/v；
流速：15 ml/min；温度：35℃；UV 检测：220 nm]。
[0157] 实施例2 (对映体1)：产量：49 mg (化学纯度>99%, >99% ee)
Rt = 5.66 min [柱：Daicel Chiralpak AS-H, 5 µm, 250 mm x 4.6 mm；洗脱液：异己烷/乙醇 70 : 30 + 0.2% 二乙胺；流速：1 ml/min；温度：30℃；UV 检测：235 nm]。
Rt = 5.66 min [柱：Daicel Chiralpak AS-H, 5 µm, 250 mm x 4.6 mm；洗脱液：异己烷/乙醇 70 : 30 + 0.2% 二乙胺；流速：1 ml/min；温度：30℃；UV 检测：235 nm]。
[0158] 实施例3 (对映体2)：产量：45 mg (化学纯度>95%, >99% ee)
Rt = 10.10 min [柱：Daicel Chiralpak AS-H, 5 µm, 250 mm x 4.6 mm；洗脱液：异己烷/乙醇 70 : 30 + 0.2% 二乙胺；流速：1 ml/min；温度：30℃；UV 检测：235 nm]。
Rt = 10.10 min [柱：Daicel Chiralpak AS-H, 5 µm, 250 mm x 4.6 mm；洗脱液：异己烷/乙醇 70 : 30 + 0.2% 二乙胺；流速：1 ml/min；温度：30℃；UV 检测：235 nm]。
[0159] 实施例44-(3-乙基-1H-吲唑-5-基)-2-甲基-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡
啶-3-腈
以类似于实施例1中描述的方法由600 mg (2.508 mmol) (2E)-2-[(3-乙
基-1H-吲唑-5-基)亚甲基]-3-氧代丁腈 (实施例7A)、256 mg (2.508 mmol) 呋喃-2,4(3H,5H)-二酮和232 mg (3.010 mmol) 乙酸铵制备标题化合物，在通过快速色谱法纯化后生成98 mg (理论值的12%) 外消旋化合物 (硅胶；二氯甲烷/甲醇梯度，最终混合物30 : 1 v/v)。
啶-3-腈
以类似于实施例1中描述的方法由600 mg (2.508 mmol) (2E)-2-[(3-乙
基-1H-吲唑-5-基)亚甲基]-3-氧代丁腈 (实施例7A)、256 mg (2.508 mmol) 呋喃-2,4(3H,5H)-二酮和232 mg (3.010 mmol) 乙酸铵制备标题化合物，在通过快速色谱法纯化后生成98 mg (理论值的12%) 外消旋化合物 (硅胶；二氯甲烷/甲醇梯度，最终混合物30 : 1 v/v)。
[0160] 实施例5和实施例64-(3-乙基-1H-吲唑-5-基)-2-甲基-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡
啶-3-腈 (对映体1和2)
通过HPLC色谱法在手性相上将实施例4 的外消旋化合物(90 mg)分离为对映体[柱：
Daicel Chiralpak AS-H, 5 µm, 250 mm x 20 mm；洗脱液：异己烷/乙醇 50 : 50 v/v；
流速：15 ml/min；温度：30℃；UV 检测：220 nm]。
啶-3-腈 (对映体1和2)
通过HPLC色谱法在手性相上将实施例4 的外消旋化合物(90 mg)分离为对映体[柱：
Daicel Chiralpak AS-H, 5 µm, 250 mm x 20 mm；洗脱液：异己烷/乙醇 50 : 50 v/v；
流速：15 ml/min；温度：30℃；UV 检测：220 nm]。
[0161] 实施例5 (对映体1)：产量：25 mg (化学纯度>98.5%, >99% ee)
Rt = 3.90 min [柱：Daicel Chiralpak AS-H, 5 µm, 250 mm x 4.6 mm；洗脱液：异己烷/乙醇 50 : 50；流速：1 ml/min；温度：30℃；UV 检测：220 nm]。
Rt = 3.90 min [柱：Daicel Chiralpak AS-H, 5 µm, 250 mm x 4.6 mm；洗脱液：异己烷/乙醇 50 : 50；流速：1 ml/min；温度：30℃；UV 检测：220 nm]。
[0162] 实施例6 (对映体2)：产量：25 mg (化学纯度>94%, >98.8% ee)
Rt = 6.24 min [柱：Daicel Chiralpak AS-H, 5 µm, 250 mm x 4.6 mm；洗脱液：异己烷/乙醇 50 : 50；流速：1 ml/min；温度：30℃；UV 检测：220 nm]。
Rt = 6.24 min [柱：Daicel Chiralpak AS-H, 5 µm, 250 mm x 4.6 mm；洗脱液：异己烷/乙醇 50 : 50；流速：1 ml/min；温度：30℃；UV 检测：220 nm]。
[0163] 实施例72,8,8-三甲基-4-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-5-氧代-1,5,7,8-四氢-4H-吡喃并
[4,3-b]吡啶-3-腈
以类似于实施例1中描述的方法由200 mg (0.888 mmol) (2E)-2-[(3-甲基-1H-吲唑-5-基)亚甲基]-3-氧代丁腈 (实施例2A)、126 mg (0.888 mmol) 5,5-二甲基二氢-2H-吡喃-2,4(3H)-二酮[制备：US 2006/0014826-A1 (中间体 6)]和102 mg (1.332 mmol) 乙酸铵制备标题化合物，通过制备型RP-HPLC (乙腈/水 + 0.1% TFA梯度)纯化后，随后通过快速色谱法 (硅胶；乙酸乙酯/环己烷梯度，最终混合物5 : 1 v/v) 纯化后，生成51 mg (理论值的16%)。
[4,3-b]吡啶-3-腈
以类似于实施例1中描述的方法由200 mg (0.888 mmol) (2E)-2-[(3-甲基-1H-吲唑-5-基)亚甲基]-3-氧代丁腈 (实施例2A)、126 mg (0.888 mmol) 5,5-二甲基二氢-2H-吡喃-2,4(3H)-二酮[制备：US 2006/0014826-A1 (中间体 6)]和102 mg (1.332 mmol) 乙酸铵制备标题化合物，通过制备型RP-HPLC (乙腈/水 + 0.1% TFA梯度)纯化后，随后通过快速色谱法 (硅胶；乙酸乙酯/环己烷梯度，最终混合物5 : 1 v/v) 纯化后，生成51 mg (理论值的16%)。
[0164] 实施例82-甲基-4-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-5-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吡咯并[3,4-b]
吡啶-3-腈
在100℃下将200 mg (0.888 mmol) (2E)-2-[(3-甲基-1H-吲唑-5-基)亚甲
基]-3-氧代丁腈 (实施例2A)、353 mg (0.888 mmol, 约50%纯度) 4-羟基-2-氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯[W.-R. Li等，J. Org. Chem. 2002, 67,
4702-4706]和102 mg (1.332 mmol) 乙酸铵的乙酸 (4 ml) 溶液搅拌45min。减压浓缩反应混合物，首先通过快速色谱法 (硅胶；二氯甲烷/甲醇梯度，最终混合物10 : 1 v/v)纯化残余物，然后通过制备型RP-HPLC (乙腈/水 + 0.1% TFA梯度) 纯化残留物，生成31 mg (理论值的11%)标题化合物。
吡啶-3-腈
在100℃下将200 mg (0.888 mmol) (2E)-2-[(3-甲基-1H-吲唑-5-基)亚甲
基]-3-氧代丁腈 (实施例2A)、353 mg (0.888 mmol, 约50%纯度) 4-羟基-2-氧代-2,5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸叔丁酯[W.-R. Li等，J. Org. Chem. 2002, 67,
4702-4706]和102 mg (1.332 mmol) 乙酸铵的乙酸 (4 ml) 溶液搅拌45min。减压浓缩反应混合物，首先通过快速色谱法 (硅胶；二氯甲烷/甲醇梯度，最终混合物10 : 1 v/v)纯化残余物，然后通过制备型RP-HPLC (乙腈/水 + 0.1% TFA梯度) 纯化残留物，生成31 mg (理论值的11%)标题化合物。
[0165] 实施例92,7,7-三甲基-4-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-5-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-吡咯并
[3,4-b]吡啶-3-腈
在100℃下将200 mg (0.888 mmol) (2E)-2-[(3-甲基-1H-吲唑-5-基)亚甲
基]-3-氧代丁腈 (实施例2A)、226 mg (0.888 mmol, 约50%纯度) 4-羟基-5,5-二甲基-1,5-二 氢-2H-吡咯-2- 酮 [K. Matsuo等，Chem. Pharm. Bull. 1984, 32,
3724-3729]和102 mg (1.332 mmol) 乙酸铵的乙酸 (4 ml) 溶液搅拌15min。减压浓缩反应混合物，并首先通过制备型RP-HPLC (乙腈/水 + 0.1% TFA梯度)纯化残余物，然后通过制备型TLC (洗脱液：二氯甲烷/甲醇 10 : 1)纯化残留物，生成33 mg (理论值的
11%) 标题化合物。
[3,4-b]吡啶-3-腈
在100℃下将200 mg (0.888 mmol) (2E)-2-[(3-甲基-1H-吲唑-5-基)亚甲
基]-3-氧代丁腈 (实施例2A)、226 mg (0.888 mmol, 约50%纯度) 4-羟基-5,5-二甲基-1,5-二 氢-2H-吡咯-2- 酮 [K. Matsuo等，Chem. Pharm. Bull. 1984, 32,
3724-3729]和102 mg (1.332 mmol) 乙酸铵的乙酸 (4 ml) 溶液搅拌15min。减压浓缩反应混合物，并首先通过制备型RP-HPLC (乙腈/水 + 0.1% TFA梯度)纯化残余物，然后通过制备型TLC (洗脱液：二氯甲烷/甲醇 10 : 1)纯化残留物，生成33 mg (理论值的
11%) 标题化合物。
[0166] 实施例107-(1H-吲唑-5-基)-5-甲基-2,3,4,7-四氢噻吩并[3,2-b]吡啶-6-腈-1,1-二氧
化物
将在乙酸 (5 ml)中的127 mg (0.947 mmol) 二氢噻吩-3(2H)-酮-1,1-二氧化物、
266 mg (0.947 mmol) (2E)-2-(1H-吲唑-5-基亚甲基)-3-氧代丁腈 (实施例8A)和
88 mg (1.136 mmol) 乙酸铵加热至回流过夜。冷却后，将混合物蒸发至干，通过制备型RP-HPLC(乙腈/水梯度)纯化残留物，生成16 mg (理论值的5%) 标题化合物。
化物
将在乙酸 (5 ml)中的127 mg (0.947 mmol) 二氢噻吩-3(2H)-酮-1,1-二氧化物、
266 mg (0.947 mmol) (2E)-2-(1H-吲唑-5-基亚甲基)-3-氧代丁腈 (实施例8A)和
88 mg (1.136 mmol) 乙酸铵加热至回流过夜。冷却后，将混合物蒸发至干，通过制备型RP-HPLC(乙腈/水梯度)纯化残留物，生成16 mg (理论值的5%) 标题化合物。
[0167] 实施例115-甲 基 -7-(3- 甲 基-1H- 吲 唑-5- 基)-2,3,4,7- 四 氢 噻 吩 并[3,2-b] 吡啶-6-腈-1,1-二氧化物
将在乙酸 (30 ml) 中的850 mg (6.336 mmol) 二氢噻吩-3(2H)-酮-1,1-二氧化物,
1.78 g (6.336 mmol) (2E)-2-[(3-甲基-1H-吲唑-5-基)亚甲基]-3-氧代丁腈 (实施例2A)和586 mg (7.603 mmol) 乙酸铵加热至回流过夜。冷却后，将混合物蒸发至干，将残留物吸收于乙酸乙酯中，使用水和盐水洗涤。分离有机层，通过硫酸钠干燥。在过滤并蒸发至干后，通过制备型RP-HPLC (乙腈/水梯度) 纯化剩余的固体，生成89 mg (理论值的
4%) 标题化合物。
将在乙酸 (30 ml) 中的850 mg (6.336 mmol) 二氢噻吩-3(2H)-酮-1,1-二氧化物,
1.78 g (6.336 mmol) (2E)-2-[(3-甲基-1H-吲唑-5-基)亚甲基]-3-氧代丁腈 (实施例2A)和586 mg (7.603 mmol) 乙酸铵加热至回流过夜。冷却后，将混合物蒸发至干，将残留物吸收于乙酸乙酯中，使用水和盐水洗涤。分离有机层，通过硫酸钠干燥。在过滤并蒸发至干后，通过制备型RP-HPLC (乙腈/水梯度) 纯化剩余的固体，生成89 mg (理论值的
4%) 标题化合物。
[0168] 实施例122-甲基-4-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-5-氧代-1,4,5,6,7,8-六氢喹啉-3-腈
将在乙酸 (5 ml)中的273 mg (2.442 mmol) 环己烷-1,3-二酮、500 mg (2.222 mmol) (2E)-2-[(3-甲基-1H-吲唑-5-基)亚甲基]-3-氧代丁腈 (实施例2A) 和205 mg (2.664 mmol)乙酸铵加热至50℃过夜。然后，加入额外的乙酸铵 (102 mg, 1.332 mmol)，将混合物加热至回流达24h。冷却后，将混合物蒸发至干，将残留物吸收于乙酸乙酯中，使用水洗涤两次。使用乙酸乙酯萃取合并的水相。合并有机层并通过硫酸钠干燥。在过滤并蒸发至干后，通过制备型RP-HPLC (乙腈/水梯度) 纯化剩余的固体，生成55 mg (理论值的8%) 标题化合物。
将在乙酸 (5 ml)中的273 mg (2.442 mmol) 环己烷-1,3-二酮、500 mg (2.222 mmol) (2E)-2-[(3-甲基-1H-吲唑-5-基)亚甲基]-3-氧代丁腈 (实施例2A) 和205 mg (2.664 mmol)乙酸铵加热至50℃过夜。然后，加入额外的乙酸铵 (102 mg, 1.332 mmol)，将混合物加热至回流达24h。冷却后，将混合物蒸发至干，将残留物吸收于乙酸乙酯中，使用水洗涤两次。使用乙酸乙酯萃取合并的水相。合并有机层并通过硫酸钠干燥。在过滤并蒸发至干后，通过制备型RP-HPLC (乙腈/水梯度) 纯化剩余的固体，生成55 mg (理论值的8%) 标题化合物。
[0169] 实施例132-甲基-4-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-5-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-环戊二烯并[b]
吡啶-3-腈
将在乙醇 (8 ml)中的91 mg (0.936 mmol) 环戊烷-1,3-二酮、150 mg (0.936 mmol)
3-甲基-1H-吲唑-5-甲醛(实施例1A) 和哌啶 (0.1 ml) 加热至回流达1.5h，然后在室温下静置过夜而不进行搅拌。然后将混合物蒸发至干，将剩余的固体溶解于乙酸 (8 ml)中，加入77 mg (0.936 mmol) 3-氨基丁-2-烯腈。将溶液加热至回流达2h。冷却后，再次将混合物蒸发至干，通过制备型RP-HPLC (乙腈/水梯度)纯化剩余的固体，生成34 mg (理论值的12%) 标题化合物。
吡啶-3-腈
将在乙醇 (8 ml)中的91 mg (0.936 mmol) 环戊烷-1,3-二酮、150 mg (0.936 mmol)
3-甲基-1H-吲唑-5-甲醛(实施例1A) 和哌啶 (0.1 ml) 加热至回流达1.5h，然后在室温下静置过夜而不进行搅拌。然后将混合物蒸发至干，将剩余的固体溶解于乙酸 (8 ml)中，加入77 mg (0.936 mmol) 3-氨基丁-2-烯腈。将溶液加热至回流达2h。冷却后，再次将混合物蒸发至干，通过制备型RP-HPLC (乙腈/水梯度)纯化剩余的固体，生成34 mg (理论值的12%) 标题化合物。
[0170] 实施例144-(1H-吲唑-5-基)-2-甲基-5-氧代-4,5,6,7-四氢-1H-环戊二烯并[b]吡啶-3-腈将在乙醇 (8 ml)中的 100 mg (1.026 mmol) 环戊烷-1,3-二酮、150 mg (1.026 mmol) 1H-吲唑-5-甲醛和哌啶 (0.1 ml) 加热至回流达4 h。然后将混合物蒸发至干，将剩余的固体溶解于乙酸(8 ml)中，加入84 mg (1.026 mmol) 3-氨基丁-2-烯腈。将溶液加热至回流达2 h。冷却后，再次将混合物蒸发至干，通过制备型RP-HPLC (乙腈/水梯度) 纯化剩余的固体，生成40 mg (理论值的13%) 标题化合物。
[0171] 实施例158-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-3,4,7,8-四氢-1H,5H-二呋喃并[3,4-b：3',4'-e]吡啶-1,5-二酮
将120 mg (0.75 mmol) 3-甲基-1H-吲唑-5-甲醛(实施例1A)和75 mg (0.75
mmol) 呋喃-2,4(3H,5H)-二酮的1-戊醇(1.5 ml)溶液在回流下搅拌1 h。然后将混合物冷却至室温，加入水 (1.5 ml)，减压浓缩混合物。将残留物溶解于乙酸 (1.5 ml)中，加入111 mg (1.12 mmol) 3-氨基呋喃-2(5H)-酮 [U. Kraatz等，Chem. Ber. 1971, 104,
2458-2466]。在100℃下将得到的溶液搅拌2h，然后冷却至室温并减压浓缩。通过制备型RP-HPLC(乙腈/水梯度)纯化残留物，生成68 mg (理论值的27%)标题化合物。
将120 mg (0.75 mmol) 3-甲基-1H-吲唑-5-甲醛(实施例1A)和75 mg (0.75
mmol) 呋喃-2,4(3H,5H)-二酮的1-戊醇(1.5 ml)溶液在回流下搅拌1 h。然后将混合物冷却至室温，加入水 (1.5 ml)，减压浓缩混合物。将残留物溶解于乙酸 (1.5 ml)中，加入111 mg (1.12 mmol) 3-氨基呋喃-2(5H)-酮 [U. Kraatz等，Chem. Ber. 1971, 104,
2458-2466]。在100℃下将得到的溶液搅拌2h，然后冷却至室温并减压浓缩。通过制备型RP-HPLC(乙腈/水梯度)纯化残留物，生成68 mg (理论值的27%)标题化合物。
[0172] 实施例164-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-5-氧代-2-(三氟甲基)-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-腈
将在1-戊醇(3 ml) 中的100 mg (0.624 mmol) 3-甲基-1H-吲唑-5-甲醛(实施例
1A) 和62.5 mg (0.624 mmol) 呋喃-2,4(3H,5H)-二酮加热直至回流达1h。在加入425 mg (3.120 mmol) 3-氨基-4,4,4-三氟丁-2-烯腈 [A.W. Lutz, 美国专利3,635,977]后，将反应混合物在100℃下进一步搅拌4h。然后，加入浓盐酸 (115 µl)和水(350 µl)，将混合物在100℃下再搅拌1h。冷却后，通过RP-HPLC (乙腈/水 + 0.1% TFA梯度)直接纯化混合物，生成33 mg (理论值的14%) 的标题化合物。
将在1-戊醇(3 ml) 中的100 mg (0.624 mmol) 3-甲基-1H-吲唑-5-甲醛(实施例
1A) 和62.5 mg (0.624 mmol) 呋喃-2,4(3H,5H)-二酮加热直至回流达1h。在加入425 mg (3.120 mmol) 3-氨基-4,4,4-三氟丁-2-烯腈 [A.W. Lutz, 美国专利3,635,977]后，将反应混合物在100℃下进一步搅拌4h。然后，加入浓盐酸 (115 µl)和水(350 µl)，将混合物在100℃下再搅拌1h。冷却后，通过RP-HPLC (乙腈/水 + 0.1% TFA梯度)直接纯化混合物，生成33 mg (理论值的14%) 的标题化合物。
[0173] 实施例171,2-二甲基-4-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]
吡啶-3-腈
将100 mg (0.326 mmol) 2-甲基-4-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-腈 (实施例1) 的DMF (2 ml)溶液冷却至0℃。在该温度下加入128 mg (0.392 mmol) 碳酸铯，在30 min后逐滴加入14 µl (0.229 mmol) 甲基碘。在rt下搅拌过夜后，加入额外的甲基碘 (2 µl)，在rt下继续进一步搅拌3h。再次，加入甲基碘 (6 µl)和少量的碳酸铯，在rt下将反应混合物搅拌过夜，然后加入水(1 ml)。首先通过制备型RP-HPLC (乙腈/水 + 0.1% TFA梯度)，然后通过制备型TLC (洗脱液 : 二氯甲烷/乙醇 20 : 1)直接纯化该溶液，生成11 mg (理论值的11%) 标题化合物。
吡啶-3-腈
将100 mg (0.326 mmol) 2-甲基-4-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-腈 (实施例1) 的DMF (2 ml)溶液冷却至0℃。在该温度下加入128 mg (0.392 mmol) 碳酸铯，在30 min后逐滴加入14 µl (0.229 mmol) 甲基碘。在rt下搅拌过夜后，加入额外的甲基碘 (2 µl)，在rt下继续进一步搅拌3h。再次，加入甲基碘 (6 µl)和少量的碳酸铯，在rt下将反应混合物搅拌过夜，然后加入水(1 ml)。首先通过制备型RP-HPLC (乙腈/水 + 0.1% TFA梯度)，然后通过制备型TLC (洗脱液 : 二氯甲烷/乙醇 20 : 1)直接纯化该溶液，生成11 mg (理论值的11%) 标题化合物。
[0174] 实施例184-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-3-氧代-1,3,4,6,8,9-六氢呋喃并[3',4'：5,6]吡啶并[2,1-c][1,4] 嗪-5-腈
在烧瓶A中，将235 mg (1.469 mmol) 3-甲基-1H-吲唑-5-甲醛(实施例1A) 和150 mg (1.469 mmol) 呋喃-2,4(3H,5H)-二酮在1-戊醇(3 ml)中加热至回流达 1 h，然后冷却至室温。在第二烧瓶B中，将494 mg (2.203 mmol) (2E/Z)-氰基(吗啉-3-亚基)乙酸(ethanoate)叔丁酯 (实施例10A)在6 M 盐酸 (21 ml)中的混合物加热至100℃，保持15 min。在冷却至室温后，减压浓缩烧瓶B中的溶液，将剩余的固体溶解于乙酸 (4 ml)中。将该溶液加入到烧瓶A中，将得到的混合物在100℃下搅拌1.5 h。然后将混合物冷却至室温并减压浓缩。通过快速色谱法纯化残留物(硅胶；甲苯/乙醇梯度，最终混合物10 : 1 v/v) 生成标题化合物，为白色固体 (151 mg, 理论值的29%)。
在烧瓶A中，将235 mg (1.469 mmol) 3-甲基-1H-吲唑-5-甲醛(实施例1A) 和150 mg (1.469 mmol) 呋喃-2,4(3H,5H)-二酮在1-戊醇(3 ml)中加热至回流达 1 h，然后冷却至室温。在第二烧瓶B中，将494 mg (2.203 mmol) (2E/Z)-氰基(吗啉-3-亚基)乙酸(ethanoate)叔丁酯 (实施例10A)在6 M 盐酸 (21 ml)中的混合物加热至100℃，保持15 min。在冷却至室温后，减压浓缩烧瓶B中的溶液，将剩余的固体溶解于乙酸 (4 ml)中。将该溶液加入到烧瓶A中，将得到的混合物在100℃下搅拌1.5 h。然后将混合物冷却至室温并减压浓缩。通过快速色谱法纯化残留物(硅胶；甲苯/乙醇梯度，最终混合物10 : 1 v/v) 生成标题化合物，为白色固体 (151 mg, 理论值的29%)。
[0175] 实施例192-(5-甲氧基吡啶-2-基)-4-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋
喃并[3,4-b]吡啶-3-腈
将172 mg (1.073 mmol) 3-甲基-1H-吲唑-5-甲醛(实施例1A)、188 mg (1.073 mmol) 粗3-氨基-3-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙-2-烯腈 (实施例11A)和242 mg (1.288 mmol) 4-(乙酰氧基)-3-氧代丁酸乙酯[Tetrahedron 1978, 34, 1453-5]的1-丙醇 (4 ml)溶液加热主回流达12h，然后冷却至室温。加入盐酸(3 M, 0.75 ml)，将得到的混合物再次加热至100℃，保持1h。在冷却至室温后，减压浓缩溶液，通过制备型RP-HPLC (乙腈/水梯度)以及随后通过快速色谱法 (硅胶；二氯甲烷/甲醇梯度，最终混合物95 : 5 v/v) 纯化剩余的固体，生成标题化合物，为白色固体 (30.7 mg, 理论值的7%)。
喃并[3,4-b]吡啶-3-腈
将172 mg (1.073 mmol) 3-甲基-1H-吲唑-5-甲醛(实施例1A)、188 mg (1.073 mmol) 粗3-氨基-3-(6-甲氧基吡啶-3-基)丙-2-烯腈 (实施例11A)和242 mg (1.288 mmol) 4-(乙酰氧基)-3-氧代丁酸乙酯[Tetrahedron 1978, 34, 1453-5]的1-丙醇 (4 ml)溶液加热主回流达12h，然后冷却至室温。加入盐酸(3 M, 0.75 ml)，将得到的混合物再次加热至100℃，保持1h。在冷却至室温后，减压浓缩溶液，通过制备型RP-HPLC (乙腈/水梯度)以及随后通过快速色谱法 (硅胶；二氯甲烷/甲醇梯度，最终混合物95 : 5 v/v) 纯化剩余的固体，生成标题化合物，为白色固体 (30.7 mg, 理论值的7%)。
[0176] 实施例202-(2-甲氧基乙基)-4-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并
[3,4-b]吡啶-3-腈
将100 mg (0.624 mmol) 3-甲基-1H-吲唑-5-甲醛(实施例1A), 87 mg (0.69 mmol) 粗5-甲氧基-3-氧代戊腈(pentanenitrile)(实施例12A)、120 mg (0.624 mmol) 4-(乙酰氧基)-3-氧代丁酸乙酯[Tetrahedron 1978, 34, 1453-5]和147 mg (1.87 mmol) 乙酸铵的1-丙醇 (2 ml) 溶液加热至回流达12 h，然后冷却至室温。加入盐酸 (3 M, 0.465 ml)，将得到的混合物再次加热至100℃，保持1h。在冷却至室温后，减压浓缩溶液，通过制备型RP-HPLC (乙腈/水梯度，最终混合物9 : 1 v/v) 纯化剩余的固体，生成标题化合物，为白色固体 (51.2 mg, 理论值的23%)。
[3,4-b]吡啶-3-腈
将100 mg (0.624 mmol) 3-甲基-1H-吲唑-5-甲醛(实施例1A), 87 mg (0.69 mmol) 粗5-甲氧基-3-氧代戊腈(pentanenitrile)(实施例12A)、120 mg (0.624 mmol) 4-(乙酰氧基)-3-氧代丁酸乙酯[Tetrahedron 1978, 34, 1453-5]和147 mg (1.87 mmol) 乙酸铵的1-丙醇 (2 ml) 溶液加热至回流达12 h，然后冷却至室温。加入盐酸 (3 M, 0.465 ml)，将得到的混合物再次加热至100℃，保持1h。在冷却至室温后，减压浓缩溶液，通过制备型RP-HPLC (乙腈/水梯度，最终混合物9 : 1 v/v) 纯化剩余的固体，生成标题化合物，为白色固体 (51.2 mg, 理论值的23%)。
[0177] 实施例214-[3-(2,3-二 氢 -1,4- 苯 并 二 氧 杂 环 己 烯 (benzodioxin)-6- 基)-1H- 吲唑-5-基]-2-甲基-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-腈
在惰性气体气氛下向120 mg (0.323 mmol) 4-(3-溴-1H-吲唑-5-基)-2-甲基-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-腈 (实施例24)和69.8 mg (0.388 mmol)
2,3-二氢-1,4-苯并二氧杂环己烯-6-基硼酸的无水1,4-二 烷(4.5 ml) 脱气溶液中加入37.4 mg (0.032 mmol) 四(三苯基膦)钯(0)和碳酸氢钠水溶液(2 M, 0.77 ml)。
将得到的混合物在95℃下搅拌12h。在冷却至室温并减压浓缩后，将剩余的固体溶解于乙酸乙酯 (20 ml)中。随后使用水和盐水洗涤溶液，通过硫酸钠干燥并减压浓缩。通过制备型RP-HPLC (乙腈/水梯度，最终混合物95 : 5 v/v) 纯化粗产物，生成标题化合物，为白色固体 (26 mg, 理论值的19%)。
在惰性气体气氛下向120 mg (0.323 mmol) 4-(3-溴-1H-吲唑-5-基)-2-甲基-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-腈 (实施例24)和69.8 mg (0.388 mmol)
2,3-二氢-1,4-苯并二氧杂环己烯-6-基硼酸的无水1,4-二 烷(4.5 ml) 脱气溶液中加入37.4 mg (0.032 mmol) 四(三苯基膦)钯(0)和碳酸氢钠水溶液(2 M, 0.77 ml)。
将得到的混合物在95℃下搅拌12h。在冷却至室温并减压浓缩后，将剩余的固体溶解于乙酸乙酯 (20 ml)中。随后使用水和盐水洗涤溶液，通过硫酸钠干燥并减压浓缩。通过制备型RP-HPLC (乙腈/水梯度，最终混合物95 : 5 v/v) 纯化粗产物，生成标题化合物，为白色固体 (26 mg, 理论值的19%)。
[0178] 实施例222- 甲 基 -5- 氧 代 -4-{3-[6-( 丙 -2- 基 氧 基 ) 吡 啶 -3- 基 ]-1H- 吲唑-5-基}-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-腈
在惰性气体气氛下向120 mg (0.323 mmol) 4-(3-溴-1H-吲唑-5-基)-2-甲基-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-腈 (实施例24)和70.2 mg (0.388 mmol) [6-(丙-2-基氧基)吡啶-3-基]硼酸的无水1,4-二 烷(3.5 ml)脱气溶液中加入37.4 mg (0.032 mmol) 四(三苯基膦)钯(0)和碳酸氢钠水溶液(2 M, 0.77 ml)。将得到的混合物在100℃下搅拌12h。在冷却至室温并减压浓缩后，将剩余的固体溶解于乙酸乙酯 (20 ml)中。随后使用水和盐水洗涤溶液，通过硫酸钠干燥并减压浓缩。通过制备型RP-HPLC (乙腈/水梯度，最终混合物95 : 5 v/v) 纯化粗产物，生成标题化合物，为白色固体 (27 mg, 理论值的19%)。
在惰性气体气氛下向120 mg (0.323 mmol) 4-(3-溴-1H-吲唑-5-基)-2-甲基-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-腈 (实施例24)和70.2 mg (0.388 mmol) [6-(丙-2-基氧基)吡啶-3-基]硼酸的无水1,4-二 烷(3.5 ml)脱气溶液中加入37.4 mg (0.032 mmol) 四(三苯基膦)钯(0)和碳酸氢钠水溶液(2 M, 0.77 ml)。将得到的混合物在100℃下搅拌12h。在冷却至室温并减压浓缩后，将剩余的固体溶解于乙酸乙酯 (20 ml)中。随后使用水和盐水洗涤溶液，通过硫酸钠干燥并减压浓缩。通过制备型RP-HPLC (乙腈/水梯度，最终混合物95 : 5 v/v) 纯化粗产物，生成标题化合物，为白色固体 (27 mg, 理论值的19%)。
[0179] 实施例234-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-3-氧代-1,4,6,7,8,9-六氢-3H-呋喃并[3,4-c]喹
嗪-5-腈
将138 mg (0.86 mmol) 3-甲基-1H-吲唑-5-甲醛(实施例1A)、105 mg (1.073
mmol) 哌啶-2-亚基-乙腈(ethanenitrile)[WO 2008/071451, Synth. Prep. 5]和194 mg (1.031 mmol) 4-(乙酰氧基)-3-氧代丁酸乙酯[Tetrahedron 1978, 34, 1453-5]的
1-丙醇 (3 ml) 溶液加热至回流达12 h，然后冷却至室温。加入盐酸 (3 M, 0.60 ml)，将得到的混合物再次加热至100℃，保持1h。在冷却至室温后，减压浓缩溶液，通过制备型TLC (硅胶；洗脱液：二氯甲烷/乙醇 20 : 1 v/v)纯化剩余的固体。通过在乙腈/甲醇/水 (2 : 6 : 1 v/v/v)的混合物中研制进一步纯化产物。过滤收集沉淀，真空干燥生成标题化合物，为白色固体 (18 mg, 理论值的6%)。
嗪-5-腈
将138 mg (0.86 mmol) 3-甲基-1H-吲唑-5-甲醛(实施例1A)、105 mg (1.073
mmol) 哌啶-2-亚基-乙腈(ethanenitrile)[WO 2008/071451, Synth. Prep. 5]和194 mg (1.031 mmol) 4-(乙酰氧基)-3-氧代丁酸乙酯[Tetrahedron 1978, 34, 1453-5]的
1-丙醇 (3 ml) 溶液加热至回流达12 h，然后冷却至室温。加入盐酸 (3 M, 0.60 ml)，将得到的混合物再次加热至100℃，保持1h。在冷却至室温后，减压浓缩溶液，通过制备型TLC (硅胶；洗脱液：二氯甲烷/乙醇 20 : 1 v/v)纯化剩余的固体。通过在乙腈/甲醇/水 (2 : 6 : 1 v/v/v)的混合物中研制进一步纯化产物。过滤收集沉淀，真空干燥生成标题化合物，为白色固体 (18 mg, 理论值的6%)。
[0180] 实施例244-(3-溴-1H-吲唑-5-基)-2-甲基-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡
啶-3-腈
将2.45 g (10.89 mmol) 3-溴-1H-吲唑-5-甲醛(实施例13A)、0.931 g (10.89 mmol) 3-氨基丁-2-烯腈和2.09 g (10.89 mmol) 4-(乙酰氧基)-3-氧代丁酸乙酯[Tetrahedron 1978, 34, 1453-5]的1-丙醇 (50 ml)溶液加热至回流达12 h，然后冷却至室温。加入盐酸 (3 M, 14 ml)，将得到的混合物再次加热到100℃，保持1h。在冷却至室温后，减压浓缩溶液，通过制备型RP-HPLC (乙腈/水梯度，最终混合物95 : 5 v/v)纯化剩余的固体，生成标题化合物，为淡黄色固体 (756 mg, 理论值的19%)。
啶-3-腈
将2.45 g (10.89 mmol) 3-溴-1H-吲唑-5-甲醛(实施例13A)、0.931 g (10.89 mmol) 3-氨基丁-2-烯腈和2.09 g (10.89 mmol) 4-(乙酰氧基)-3-氧代丁酸乙酯[Tetrahedron 1978, 34, 1453-5]的1-丙醇 (50 ml)溶液加热至回流达12 h，然后冷却至室温。加入盐酸 (3 M, 14 ml)，将得到的混合物再次加热到100℃，保持1h。在冷却至室温后，减压浓缩溶液，通过制备型RP-HPLC (乙腈/水梯度，最终混合物95 : 5 v/v)纯化剩余的固体，生成标题化合物，为淡黄色固体 (756 mg, 理论值的19%)。
[0181] 实施例252-(4-氟苯基)-4-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-腈
将241 mg (1.51 mmol) 3-甲基-1H-吲唑-5-甲醛(实施例1A)、244 mg (1.51 mmol)
3-氨基-3-(4-氟苯基)丙-2-烯腈 [J. Heterocyclic Chem. 1998, 35, 805-810]和
340 mg (1.81 mmol) 4-(乙酰氧基)-3-氧代丁酸乙酯[Tetrahedron 1978, 34, 1453-5]的1-丙醇 (4 ml)溶液加热至回流达12 h，然后冷却至室温。加入盐酸 (3 M, 1.05 ml)，将得到的混合物再次加热到100℃，保持1h。在冷却至室温后，减压浓缩溶液，通过制备型RP-HPLC(乙腈/水梯度，最终混合物95 : 5 v/v)纯化剩余的固体，生成标题化合物，为白色固体 (200 mg, 理论值的34%)。
将241 mg (1.51 mmol) 3-甲基-1H-吲唑-5-甲醛(实施例1A)、244 mg (1.51 mmol)
3-氨基-3-(4-氟苯基)丙-2-烯腈 [J. Heterocyclic Chem. 1998, 35, 805-810]和
340 mg (1.81 mmol) 4-(乙酰氧基)-3-氧代丁酸乙酯[Tetrahedron 1978, 34, 1453-5]的1-丙醇 (4 ml)溶液加热至回流达12 h，然后冷却至室温。加入盐酸 (3 M, 1.05 ml)，将得到的混合物再次加热到100℃，保持1h。在冷却至室温后，减压浓缩溶液，通过制备型RP-HPLC(乙腈/水梯度，最终混合物95 : 5 v/v)纯化剩余的固体，生成标题化合物，为白色固体 (200 mg, 理论值的34%)。
[0182] 实施例26和实施例272-(4-氟苯基)-4-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-腈 (对映体1和2)
通过HPLC色谱法在手性相上将实施例25 的外消旋化合物(100 mg)分离为对映体 [柱：Daicel Chiralpak AS-H, 5 µm, 250 mm x 20 mm；洗脱液：异己烷/乙醇 50 : 50 v/v；流速：15 ml/min；温度：30℃；UV 检测：220 nm]：
实施例26 (对映体1)：
产量：38 mg (化学纯度>98.5%, >99.5% ee)
Rt = 4.06 min [柱：Daicel Chiralpak AS-H, 5 µm, 250 mm x 4.6 mm；洗脱液：异己烷/乙醇 50 : 50；流速：1 ml/min；温度：40℃；UV 检测：220 nm]。
通过HPLC色谱法在手性相上将实施例25 的外消旋化合物(100 mg)分离为对映体 [柱：Daicel Chiralpak AS-H, 5 µm, 250 mm x 20 mm；洗脱液：异己烷/乙醇 50 : 50 v/v；流速：15 ml/min；温度：30℃；UV 检测：220 nm]：
实施例26 (对映体1)：
产量：38 mg (化学纯度>98.5%, >99.5% ee)
Rt = 4.06 min [柱：Daicel Chiralpak AS-H, 5 µm, 250 mm x 4.6 mm；洗脱液：异己烷/乙醇 50 : 50；流速：1 ml/min；温度：40℃；UV 检测：220 nm]。
[0183] 实施例27 (对映体2)：产量：51 mg (化学纯度>99.5%, >99.5% ee)
Rt = 8.43 min [柱：Daicel Chiralpak AS-H, 5 µm, 250 mm x 4.6 mm；洗脱液：异己烷/乙醇 50 : 50；流速：1 ml/min；温度：40℃；UV 检测：220 nm]。
Rt = 8.43 min [柱：Daicel Chiralpak AS-H, 5 µm, 250 mm x 4.6 mm；洗脱液：异己烷/乙醇 50 : 50；流速：1 ml/min；温度：40℃；UV 检测：220 nm]。
[0184] 实施例282-(4-氯苯基)-4-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-腈
将245 mg (1.53 mmol) 3-甲基-1H-吲唑-5-甲醛(实施例1A)、300 mg (1.68 mmol)
3-氨基-3-(4-氯苯基)丙-2-烯腈 [J. Heterocyclic Chem. 1998, 35, 805-810] 和
287 mg (1.53 mmol) 4-(乙酰氧基)-3-氧代丁酸乙酯[Tetrahedron 1978, 34, 1453-5] 的1-丙醇 (6 ml)溶液加热至回流达12 h，然后冷却至室温。加入盐酸 (3 M, 1.2 ml)，将得到的混合物再次加热到100℃，保持1h。在冷却至室温后，减压浓缩溶液，通过制备型RP-HPLC(乙腈/水梯度，最终混合物95 : 5 v/v)纯化剩余的固体，生成标题化合物，为淡黄色固体 (248 mg, 理论值的40%)。
将245 mg (1.53 mmol) 3-甲基-1H-吲唑-5-甲醛(实施例1A)、300 mg (1.68 mmol)
3-氨基-3-(4-氯苯基)丙-2-烯腈 [J. Heterocyclic Chem. 1998, 35, 805-810] 和
287 mg (1.53 mmol) 4-(乙酰氧基)-3-氧代丁酸乙酯[Tetrahedron 1978, 34, 1453-5] 的1-丙醇 (6 ml)溶液加热至回流达12 h，然后冷却至室温。加入盐酸 (3 M, 1.2 ml)，将得到的混合物再次加热到100℃，保持1h。在冷却至室温后，减压浓缩溶液，通过制备型RP-HPLC(乙腈/水梯度，最终混合物95 : 5 v/v)纯化剩余的固体，生成标题化合物，为淡黄色固体 (248 mg, 理论值的40%)。
[0185] 实施例292-(4-氯-3-氟苯基)-4-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并
[3,4-b]吡啶-3-腈
将 148 mg (0.93 mmol) 3-甲基-1H-吲唑-5-甲醛(实施例1A)、200 mg (1.02 mmol)
3-氨基-3-(4-氯-3-氟苯基)丙-2-烯腈 (实施例14A)和174 mg (0.93 mmol) 4-(乙酰氧基)-3-氧代丁酸乙酯[Tetrahedron 1978, 34, 1453-5] 的1-丙醇 (3.5 ml)溶液加热至回流达12 h，然后冷却至室温。加入盐酸 (3 M, 0.76 ml)，将得到的混合物再次加热到100℃，保持1h。在冷却至室温后，减压浓缩溶液，通过制备型RP-HPLC (乙腈/水梯度，最终混合物95 : 5 v/v)并随后通过制备型TLC (硅胶；洗脱液：二氯甲烷/甲醇 20 :
1 v/v)纯化剩余的固体，生成标题化合物，为白色固体 (50 mg, 理论值的13%)。
[3,4-b]吡啶-3-腈
将 148 mg (0.93 mmol) 3-甲基-1H-吲唑-5-甲醛(实施例1A)、200 mg (1.02 mmol)
3-氨基-3-(4-氯-3-氟苯基)丙-2-烯腈 (实施例14A)和174 mg (0.93 mmol) 4-(乙酰氧基)-3-氧代丁酸乙酯[Tetrahedron 1978, 34, 1453-5] 的1-丙醇 (3.5 ml)溶液加热至回流达12 h，然后冷却至室温。加入盐酸 (3 M, 0.76 ml)，将得到的混合物再次加热到100℃，保持1h。在冷却至室温后，减压浓缩溶液，通过制备型RP-HPLC (乙腈/水梯度，最终混合物95 : 5 v/v)并随后通过制备型TLC (硅胶；洗脱液：二氯甲烷/甲醇 20 :
1 v/v)纯化剩余的固体，生成标题化合物，为白色固体 (50 mg, 理论值的13%)。
[0186] 实施例302-(3,5-二氟苯基)-4-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并
[3,4-b]吡啶-3-腈
将162 mg (1.01 mmol) 3-甲基-1H-吲唑-5-甲醛(实施例1A)、200 mg (1.11 mmol)
3-氨基-3-(3,5-二氟苯基)丙-2-烯腈 (实施例15A)和190 mg (1.01 mmol) 4-(乙酰氧基)-3-氧代丁酸乙酯[Tetrahedron 1978, 34, 1453-5]的1-丙醇 (4 ml)溶液加热至回流达12 h，然后冷却至室温。加入盐酸 (3 M, 0.80 ml)，将得到的混合物再次加热到
100℃，保持1h。在冷却至室温后，减压浓缩溶液，通过制备型RP-HPLC (乙腈/水梯度，最终混合物95 : 5 v/v)纯化剩余的固体，生成标题化合物，为淡黄色固体 (39 mg, 理论值的10%)。
[3,4-b]吡啶-3-腈
将162 mg (1.01 mmol) 3-甲基-1H-吲唑-5-甲醛(实施例1A)、200 mg (1.11 mmol)
3-氨基-3-(3,5-二氟苯基)丙-2-烯腈 (实施例15A)和190 mg (1.01 mmol) 4-(乙酰氧基)-3-氧代丁酸乙酯[Tetrahedron 1978, 34, 1453-5]的1-丙醇 (4 ml)溶液加热至回流达12 h，然后冷却至室温。加入盐酸 (3 M, 0.80 ml)，将得到的混合物再次加热到
100℃，保持1h。在冷却至室温后，减压浓缩溶液，通过制备型RP-HPLC (乙腈/水梯度，最终混合物95 : 5 v/v)纯化剩余的固体，生成标题化合物，为淡黄色固体 (39 mg, 理论值的10%)。
[0187] 实施例312-(2,4-二氟苯基)-4-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-5-氧代-1,4,5,7-四氢呋喃并
[3,4-b]吡啶-3-腈
将232 mg (1.45 mmol) 3-甲基-1H-吲唑-5-甲醛(实施例1A)、287 mg (1.59 mmol)
3-氨基-3-(2,4-二氟苯基)丙-2-烯腈 (实施例16A)和273 mg (1.45 mmol) 4-(乙酰氧基)-3-氧代丁酸乙酯[Tetrahedron 1978, 34, 1453-5]的1-丙醇 (6 ml)溶液加热至回流达12 h，然后冷却至室温。加入盐酸 (3 M, 0.80 ml)，将得到的混合物再次加热到
100℃，保持1h。在冷却至室温后，减压浓缩溶液，通过制备型RP-HPLC (乙腈/水梯度，最终混合物95 : 5 v/v)并随后通过快速色谱法 (硅胶；二氯甲烷/甲醇梯度，最终混合物
95 : 5 v/v)纯化剩余的固体，生成标题化合物，为淡黄色固体(62 mg, 理论值的10%)。
[3,4-b]吡啶-3-腈
将232 mg (1.45 mmol) 3-甲基-1H-吲唑-5-甲醛(实施例1A)、287 mg (1.59 mmol)
3-氨基-3-(2,4-二氟苯基)丙-2-烯腈 (实施例16A)和273 mg (1.45 mmol) 4-(乙酰氧基)-3-氧代丁酸乙酯[Tetrahedron 1978, 34, 1453-5]的1-丙醇 (6 ml)溶液加热至回流达12 h，然后冷却至室温。加入盐酸 (3 M, 0.80 ml)，将得到的混合物再次加热到
100℃，保持1h。在冷却至室温后，减压浓缩溶液，通过制备型RP-HPLC (乙腈/水梯度，最终混合物95 : 5 v/v)并随后通过快速色谱法 (硅胶；二氯甲烷/甲醇梯度，最终混合物
95 : 5 v/v)纯化剩余的固体，生成标题化合物，为淡黄色固体(62 mg, 理论值的10%)。
[0188] 实施例322-甲基-5-氧代-4-{3-[3-(三氟甲基)苯基]-1H-吲唑-5-基}-1,4,5,7-四氢呋喃
并[3,4-b]吡啶-3-腈
在氩气氛下向120 mg (0.323 mmol) 4-(3-溴-1H-吲唑-5-基)-2-甲基-5-氧
代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-腈 (实施例24)和73.7 mg (0.388 mmol) [3-(三氟甲基)苯基]硼酸的无水1,4-二 烷(4.8 ml) 脱气溶液中加入37.4 mg (0.032 mmol) 四(三苯基膦)钯(0)和碳酸氢钠水溶液(2 M, 0.77 ml)。将得到的混合物在95℃下搅拌12h。在冷却至室温并减压浓缩后，将剩余的固体溶解于乙酸乙酯 (20 ml)中。随后使用水和盐水洗涤溶液，通过硫酸钠干燥并减压浓缩。通过制备型RP-HPLC (第一次运行：乙腈/水梯度，最终混合物95 : 5 v/v；第二次运行：甲醇/水等度(isocratic)75：25 v/v)纯化粗产物，生成标题化合物，为白色固体 (6 mg, 理论值的4%)。
并[3,4-b]吡啶-3-腈
在氩气氛下向120 mg (0.323 mmol) 4-(3-溴-1H-吲唑-5-基)-2-甲基-5-氧
代-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]吡啶-3-腈 (实施例24)和73.7 mg (0.388 mmol) [3-(三氟甲基)苯基]硼酸的无水1,4-二 烷(4.8 ml) 脱气溶液中加入37.4 mg (0.032 mmol) 四(三苯基膦)钯(0)和碳酸氢钠水溶液(2 M, 0.77 ml)。将得到的混合物在95℃下搅拌12h。在冷却至室温并减压浓缩后，将剩余的固体溶解于乙酸乙酯 (20 ml)中。随后使用水和盐水洗涤溶液，通过硫酸钠干燥并减压浓缩。通过制备型RP-HPLC (第一次运行：乙腈/水梯度，最终混合物95 : 5 v/v；第二次运行：甲醇/水等度(isocratic)75：25 v/v)纯化粗产物，生成标题化合物，为白色固体 (6 mg, 理论值的4%)。
[0189] 以类似于对于实施例19所描述的方法制备下列化合物；使用二氯甲烷/甲醇梯度通过制备型硅胶色谱法进行纯化。1)
[0190] 通过制备型RP-HPLC [柱：Sunfire C18, 5 µm, 19 mm x 150 mm；洗脱液：乙腈/水梯度，最终混合物70 : 30 v/v；流速：25 ml/min；温度：30℃；UV 检测：210 nm]进一步纯化后。
[0191] 以类似于对于实施例16所描述的方法制备下列化合物；使用乙腈/水 + 0.1% TFA梯度通过制备型RP-HPLC进行纯化。
[0192] 实施例394-(3-甲基-1H-吲唑-5-基)-5-氧代-2-(丙-2-基)-1,4,5,7-四氢呋喃并[3,4-b]
吡啶-3-腈
在回流温度下将50 mg (0.312 mmol) 3-甲基-1H-吲唑-5-甲醛(实施例1A)、34 mg (0.312 mmol) 3-氨基-4-甲基戊-2-烯腈 [P. Stanetty等，Monatshefte für Chemie
1999, 130, 441-450]和59 mg (0.312 mmol) 4-(乙酰氧基)-3-氧代丁酸乙酯[制备：
US 4,720,572 (实施例1)]的1-丙醇(1 ml)溶液搅拌过夜。然后，加入浓盐酸 (60 µl)和水(175 µl)，在100℃下继续搅拌1h。在冷却至室温后，通过制备型RP-HPLC (乙腈/水 + 0.1% TFA梯度)直接纯化混合物，生成50 mg (理论值的48%) 外消旋标题化合物。
吡啶-3-腈
在回流温度下将50 mg (0.312 mmol) 3-甲基-1H-吲唑-5-甲醛(实施例1A)、34 mg (0.312 mmol) 3-氨基-4-甲基戊-2-烯腈 [P. Stanetty等，Monatshefte für Chemie
1999, 130, 441-450]和59 mg (0.312 mmol) 4-(乙酰氧基)-3-氧代丁酸乙酯[制备：
US 4,720,572 (实施例1)]的1-丙醇(1 ml)溶液搅拌过夜。然后，加入浓盐酸 (60 µl)和水(175 µl)，在100℃下继续搅拌1h。在冷却至室温后，通过制备型RP-HPLC (乙腈/水 + 0.1% TFA梯度)直接纯化混合物，生成50 mg (理论值的48%) 外消旋标题化合物。
[0193] B. 生物学活性的评价本发明化合物的活性的证实可以通过本领域众所周知的体外、离体和体内试验来实现。例如，为了证实本发明化合物的活性，可以使用下列试验。
[0194] c-Met 受体酪氨酸激酶活性试验 (NADH read-out)：使用重组人c-Met蛋白 (Invitrogen, Carlsbad, 加利福尼亚, USA)。作为用于激酶反应的底物，使用肽 KKKSPGEYVNIEFG (JPT, 德国)。对于该试验，将试验化合物的1 µL 51倍在DMSO中的浓溶液吸取到白色384-孔微量滴定板中(Greiner Bio-One, Frickenhausen, 德国)。加入25 µL c-Met (最终浓度为30 nM)和丙酮酸激酶/乳酸脱氢酶(Roche Diagnostics, 曼海姆, 德国；最终浓度为8 mg/L)在试验缓冲液[3-(N-吗啉代)丙磺酸(MOPS), 50 mM, pH 7；MgCl2, 10 mM；牛血清白蛋白(BSA), 0.01%；Triton X 100, 0.01%；DTT, 2 mM]中的溶液，并在室温下将混合物培育5min。然后，通过加入25 µL三磷酸腺苷(ATP, 最终浓度为30 µM)、底物(最终浓度为100 µM)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸 (NADH, 最终浓度为50 µM) 和二硫苏糖醇(DTT, 最终浓度为2 mM)在试验缓冲液中的溶液引发激酶反应，在32℃下将得到的混合物培育100 min的反应时间。
[0195] 随后，通过测量NADH荧光的减少来评价磷酸化底物的量。因此，在荧光读数仪中测量在340nm激发后在465nm的荧光发射，所述荧光读数仪为例如Tecan Ultra (Tecan, Männedorf, 瑞士)。标准化数据（没有抑制剂的酶反应 = 0%抑制；但是没有酶的所有其它试验组分 = 100%抑制）。通常，在相同的微量滴定板上在10 µM-1 nM的范围内以9个不同浓度(10 µM、3.1 µM、1.0 µM、0.3 µM、0.1 µM、0.03 µM、0.01 µM、0.003 µM、0.001 µM；在试验前以51-倍浓母液(stock solutions)的水平通过连续1 : 3稀释制备的稀释系列)测试试验化合物，每个浓度一式两份，并使用内部软件计算IC50值。
[0196] 当在该试验中测试时，本发明化合物显示出抑制c-Met 酪氨酸激酶活性的能力，在IC50值小于10 µM，优选在小于1 µM。
[0197] 一些代表性的IC50值列于下表中：c-Met 受体酪氨酸激酶均相时间分辨荧光试验 (备选形式)：
使用人c-Met (氨基酸960–1390)的N-端His6-标记的重组激酶域，所述人c-Met在昆虫细胞(SF21)中表达并通过Ni-NTA亲和色谱法和连续尺寸排阻色谱法 (Superdex
200) 纯化。或者，可以使用商业可获得的 c-Met (Millipore)。作为对于激酶反应的底物，使用生物素化的聚-Glu,Tyr (4 : 1)共聚物(# 61GT0BLC, Cis Biointernational, Marcoule, 法国)。
使用人c-Met (氨基酸960–1390)的N-端His6-标记的重组激酶域，所述人c-Met在昆虫细胞(SF21)中表达并通过Ni-NTA亲和色谱法和连续尺寸排阻色谱法 (Superdex
200) 纯化。或者，可以使用商业可获得的 c-Met (Millipore)。作为对于激酶反应的底物，使用生物素化的聚-Glu,Tyr (4 : 1)共聚物(# 61GT0BLC, Cis Biointernational, Marcoule, 法国)。
[0198] 对于试验，将50 nL试验化合物的100-倍在DMSO中的浓溶液吸取到黑色小容量的384-孔微量滴定板中 (Greiner Bio-One, Frickenhausen, 德国)。加入2 µL c-Met在试验缓冲液 [25 mM Hepes/NaOH, pH 7.5；5 mM MgCl2；5 mM MnCl2；2 mM 二硫苏糖醇；0.1% (v/v) 吐温20 (Sigma)；0.1% (w/v) 牛血清白蛋白]中的溶液，并将混合物在22℃下培育15min，以使试验化合物在激酶反应开始前与酶预结合。这样，通过加入3 µL三磷酸腺苷(ATP, 16.7 µM；在5 µL测试体积中的最终浓度为10 µM) 和底物(2.27 µg/mL, 在5 µL测试体积中的最终浓度为1.36 µg/mL ~ 30 nM) 在试验缓冲液中的溶液引发激酶反应，并将得到的混合物在22℃下培育30min的反应时间。试验中c-Met的浓度可以根据酶组的活性进行调节并适当地选择以使试验在线性范围内；典型的酶浓度在约0.03 nM (在5 µL测试体积中的最终浓度)的范围内。通过加入5 µL HTRF 检测试剂[40 nM抗生蛋白链菌素-XLent和2.4 nM PT66-Eu-螯合物，铕-螯合标记的抗磷酸酪氨酸抗体(Perkin-Elmer)]在EDTA水溶液[100 mM EDTA, 0.2% (w/v) 牛血清白蛋白在50 mM HEPES/NaOH中, pH
7.5]中的溶液中止反应。
7.5]中的溶液中止反应。
[0199] 将得到的混合物在22℃下培育1h，以使生物素化的磷酸化肽与抗生蛋白链菌素-XLent 和PT66-Eu-螯合物结合。随后，通过测量由PT66-Eu-螯合物向抗生蛋白链菌素-Xlent的共振能量转移评价磷酸化底物的量。因此，在HTRF读数仪中测量在350nm激发后在620 nm和665 nm的荧光发射，例如，Rubystar (BMG Labtechnologies, Offenburg, 德国)或Viewlux (Perkin-Elmer)。将在665 nm和622 nm的发射比例作为磷酸化底物的量的量度。标准化数据（没有抑制剂的酶反应 = 0%抑制；但是没有酶的所有其它试验组分 = 100%抑制）。通常，在相同的微量滴定板上在20 µM-1 nM的范围内以10个不同浓度(20 µM、6.7 µM、2.2 µM、0.74 µM、0.25 µM、82 nM、27 nM、9.2 nM、3.1 nM和1 nM；在试验前以100-倍浓母液的水平通过连续1 : 3稀释制备的稀释系列)测试试验化合物，每个浓度一式两份，并使用内部软件通过4-参数-拟合计算IC50值。
[0200] 当在该试验中测试时，本发明化合物显示出抑制c-Met 酪氨酸激酶活性的能力，在IC50值小于10 µM，优选在小于1 µM。
[0201] 一些代表性的IC50值列于下表中：磷酸化-c-Met 试验：
这是基于细胞的ELISA-样试验[Mesoscale Discovery (MSD), Gaithersburg, MD, USA]，使用没有生长因子刺激的MKN-45肿瘤细胞(胃癌, 购自ATCC)。第一天将细胞涂布于96-孔板中的完全生长培养基(10 000 个细胞/孔)中。第二天，在不含有血清的培养基中使用两小时药物处理后，洗涤细胞，然后将细胞溶解(60 μl/孔，使用MSD推荐的溶解缓冲液)并在-80℃下冷冻。同样在第二天，在4℃下使用MSD封闭溶液A过夜封闭MSD 磷酸化-Met板上的非特异性抗体结合位点。第三天，在冰上解冻冷冻的溶解产物，在使用Tris-缓冲盐水 + 0.05% 吐温20 (TBST)洗涤1次后，将25 µl溶解产物转移到MSD 磷酸化-Met板，振摇1小时。在除去未结合的蛋白后，以在抗体稀释缓冲液中5 nM的最终浓度（按照MSD的方案）向板中加入来自MSD的Sulfa-TAG 抗-Met抗体，振摇1小时。然后在加入1x MSD读数缓冲液前，将板使用TBST缓冲液洗涤3次。然后将板在MSD Discovery 工作站仪器上读板。将包括具有10 μM参照化合物（最小信号）的孔，和没有任何药物处理的DMSO孔（最大信号）的原始数据输入到用于IC50值测定的分析5程序。
这是基于细胞的ELISA-样试验[Mesoscale Discovery (MSD), Gaithersburg, MD, USA]，使用没有生长因子刺激的MKN-45肿瘤细胞(胃癌, 购自ATCC)。第一天将细胞涂布于96-孔板中的完全生长培养基(10 000 个细胞/孔)中。第二天，在不含有血清的培养基中使用两小时药物处理后，洗涤细胞，然后将细胞溶解(60 μl/孔，使用MSD推荐的溶解缓冲液)并在-80℃下冷冻。同样在第二天，在4℃下使用MSD封闭溶液A过夜封闭MSD 磷酸化-Met板上的非特异性抗体结合位点。第三天，在冰上解冻冷冻的溶解产物，在使用Tris-缓冲盐水 + 0.05% 吐温20 (TBST)洗涤1次后，将25 µl溶解产物转移到MSD 磷酸化-Met板，振摇1小时。在除去未结合的蛋白后，以在抗体稀释缓冲液中5 nM的最终浓度（按照MSD的方案）向板中加入来自MSD的Sulfa-TAG 抗-Met抗体，振摇1小时。然后在加入1x MSD读数缓冲液前，将板使用TBST缓冲液洗涤3次。然后将板在MSD Discovery 工作站仪器上读板。将包括具有10 μM参照化合物（最小信号）的孔，和没有任何药物处理的DMSO孔（最大信号）的原始数据输入到用于IC50值测定的分析5程序。
[0202] 细胞磷酸化-c-Met 试验：在37℃下使用5% CO2下将播种于384-孔微量滴定板 (9000 个细胞/孔)中的人胃腺癌细胞(MKN45, 购自ATCC)在25 µl完全生长培养基中培育24h。第二天，在含有0.1% FCS的减少血清的培养基中进行2小时的药物处理后，洗涤并溶解细胞。在使用 Tris-缓冲盐水 + 0.05% 吐温20 (TBST)洗涤1次后，使用预结合的c-Met捕获抗体[购自Mesoscale Discovery (MSD), Gaithersburg, MD, USA]将溶解产物转移到BSA-封闭的板中，振摇1小时。按照MSD方案，在RT下以在抗体稀释缓冲液中5 nM的最终浓度向板中加入Sulfa-TAG 抗-磷酸化-c-Met 检测抗体，振摇1小时。在使用Tris缓冲液洗涤孔后，加入1x读数缓冲液，在Sector Imager 6000 (购自Mesoscale)上测量板。使用Marquardt-Levenberg-Fit由剂量-响应曲线计算IC50值。
[0203] 体外肿瘤细胞增殖试验：用于测试本发明化合物的附着肿瘤细胞增殖试验涉及称为 Cell Titre-Glo的读出装置，Cell Titre-Glo由Promega研发[B.A. Cunningham, "A Growing Issue：Cell Proliferation Assays. Modern kits ease quantification of cell growth", The Scientist 2001, 15 (13), 26；S.P. Crouch等，"The use of ATP bioluminescence as a measure of cell proliferation and cytotoxicity", Journal of Immunological Methods 1993, 160, 81-88]。发光信号的生成对应于所存在的ATP的量，其是与代谢活性（增殖）细胞的数量直接成比例的。
[0204] 以3000个细胞/孔将H460细胞（肺癌，购自ATCC）涂板于96孔板上，在具有10%胎牛血清的完全培养基中，并在37℃下培育24小时。在涂板后24小时，以在最终DMSO浓度为0.2%的系列稀释液中最终浓度范围为10 nM-20 µM加入试验化合物。在加入试验化合物后，在37℃下将细胞在完全生长培养基中培育72小时。第四天，使用Promega Cell ®Titre-Glo Luminescent 试验试剂盒，溶解细胞，向每个孔中加入100 µl底物/缓冲液混合物，混合并在室温下培育8分钟。在发光计上读取样品以测量每个孔的细胞溶解产物中存在的ATP的量，其对应于该孔中活细胞的数量。在24小时培育时读取的值被扣除作为
0天的值。为了测定IC50值，可以使用线性回归分析以测定使用该试验形式导致细胞增殖
50%抑制的药物浓度。可以将该方案应用于感兴趣的不同细胞系，其包括但不限于，CAKI-1、MNK-45、GTL-16、HCC2998、K562、H441、K812、MEG01、SUP15和HCT116。
0天的值。为了测定IC50值，可以使用线性回归分析以测定使用该试验形式导致细胞增殖
50%抑制的药物浓度。可以将该方案应用于感兴趣的不同细胞系，其包括但不限于，CAKI-1、MNK-45、GTL-16、HCC2998、K562、H441、K812、MEG01、SUP15和HCT116。
[0205] 使用肝微粒体的体外清除率测定：®
在37℃下使用改良的Janus 机器人系统 (Perkin-Elmer)以1.5 ml的总体积进行微粒体培育。培育混合物含有0.5 mg/ml微粒体蛋白、~ 1 µM底物、0.05 M磷酸钾缓冲液(pH
7.4)、1 mM EDTA、5 mM 葡萄糖-6-磷酸盐和来自肠系膜明串珠菌的1.5 U/ml葡萄糖-6-磷+
酸脱羟基酶。虽然反应通过加入NADP (最终浓度为1 mM)引发，但是保持FMO-活性。最终乙腈(ACN)浓度为≤ 1%。
在37℃下使用改良的Janus 机器人系统 (Perkin-Elmer)以1.5 ml的总体积进行微粒体培育。培育混合物含有0.5 mg/ml微粒体蛋白、~ 1 µM底物、0.05 M磷酸钾缓冲液(pH
7.4)、1 mM EDTA、5 mM 葡萄糖-6-磷酸盐和来自肠系膜明串珠菌的1.5 U/ml葡萄糖-6-磷+
酸脱羟基酶。虽然反应通过加入NADP (最终浓度为1 mM)引发，但是保持FMO-活性。最终乙腈(ACN)浓度为≤ 1%。
[0206] 根据化合物的代谢稳定性，在2、5、10、20、30和60 min后或在2、10、20、30、50、70和90 min后从培育混合物中取出125 µl的等份，并分配于含有250 µl ACN的96孔板中以中止反应。离心后，通过MSMS (通常为API 2000或API 3000)分析上清液。
[0207] 使用下列等式[J.B. Houston, Biochem. Pharmacol. 1994, 47 (9), 1469-79；R.S. Obach等，J. Pharmacol. Exp. Ther. 1997, 283 (1), 46-58]由肝微粒体中的半衰期数据(t1/2)计算反映底物消耗的体外清除率值(CL)：
CL'内在 [ml/(min·kg)] = (0.693 / 体外 t1/2 [min]) · (肝重量 [g 肝/kg 体质量]) · (微粒体蛋白 [mg] / 肝重量 [g]) / (微粒体蛋白 [mg] / 培育体积 [ml])。
CL'内在 [ml/(min·kg)] = (0.693 / 体外 t1/2 [min]) · (肝重量 [g 肝/kg 体质量]) · (微粒体蛋白 [mg] / 肝重量 [g]) / (微粒体蛋白 [mg] / 培育体积 [ml])。
[0208] 使用非限制性充分搅拌模型估算CL血 值 [K.S. Pang, M. Rowland, J. Pharmacokin. Biopharm. 1977, 5 (6), 625-53]：。
[0209] 对于大鼠，具体的肝重量和肝血流量 (QH) 分别为 32 g/kg 体质量和4.2 L/(h·kg)，对于男人，分别为21 g/kg 体质量和1.32 L/(h·kg)。对于这两个物种，假定肝中具体微粒体蛋白含量为40 mg/g。用于预测其它物种的体内清除率值的物种-特异因子如下所示：使用下式计算Fmax 值(最大可能生物利用度)：
。
。
[0210] 使用肝细胞的体外清除率测定：®
在37℃下使用改良的Janus 机器人系统 (Perkin-Elmer)以1.5 ml的总体积进行肝细胞培育。培育混合物含有1,000,000个活细胞/ml、~ 1 µM 底物和0.05 M 磷酸钾缓冲液 (pH 7.4)。最终乙腈(ACN)浓度为≤ 1%。
在37℃下使用改良的Janus 机器人系统 (Perkin-Elmer)以1.5 ml的总体积进行肝细胞培育。培育混合物含有1,000,000个活细胞/ml、~ 1 µM 底物和0.05 M 磷酸钾缓冲液 (pH 7.4)。最终乙腈(ACN)浓度为≤ 1%。
[0211] 在2、10、20、30、50、70和90 min后从培育混合物中取出125 µl的等份，并典型地分配于含有250 µl ACN的96孔滤板中(0.45 µm 低结合的亲水性PTFE；Millipore, MultiScreen Solvinert)以中止反应。离心后，通过MSMS (典型地为API 2000或API3000)分析滤液。
[0212] 使用下列等式[J.B. Houston, Biochem. Pharmacol. 1994, 47 (9), 1469-79；R.S. Obach等，J. Pharmacol. Exp. Ther. 1997, 283 (1), 46-58]由肝细胞中的半衰期数据(t1/2)计算反映底物消耗的体外清除率值(CL)：
CL'内在 [ml/(min·kg)] = (0.693 / 体外 t1/2 [min]) · (肝重量 [g 肝/kg 体质
8 6
量]) · (细胞数 [1.1 · 10] / 肝重量 [g]) / (细胞数 [1 · 10] / 培育体积 [ml])。
CL'内在 [ml/(min·kg)] = (0.693 / 体外 t1/2 [min]) · (肝重量 [g 肝/kg 体质
8 6
量]) · (细胞数 [1.1 · 10] / 肝重量 [g]) / (细胞数 [1 · 10] / 培育体积 [ml])。
[0213] 使用非限制性充分搅拌的模型估算CL血 值[K.S. Pang, M. Rowland, J. Pharmacokin. Biopharm. 1977, 5 (6), 625-53]：。
[0214] 对于大鼠，具体的肝重量和肝血流量 (QH) 分别为32 g/kg 体质量和4.2 L/(h·kg)，对于狗，为40 g/kg 体质量和2.1 L/(h·kg)，和对于男人，为21 g/kg 体质量和1.32 L/(h·kg)。对于所用的所有物种，假定肝中细胞数为110 000 000个细胞/g 肝。用于预测其它物种的体内清除率值的物种-特异因子如下所示：
使用下式计算Fmax 值(最大可能生物利用度)：
。
使用下式计算Fmax 值(最大可能生物利用度)：
。
[0215] 虽然已经参照具体实施方案公开了本发明，但很明显本领域技术人员可以设计本发明的其它实施方案和变化而不背离本发明的真正精神和范围。权利要求应当解释为包括所有这种实施方案和等价变化。
[0216] C. 与药物组合物相关的实施例本发明的药物组合物可以举例说明如下：
无菌静脉内溶液：
使用无菌可注射水制备本发明所需的化合物的5 mg/ml 溶液，如果需要，调节pH。用无菌5%葡萄糖将所述溶液稀释用于给药1-2 mg/ml，并且作为静脉内输注在约60分钟内给药。
无菌静脉内溶液：
使用无菌可注射水制备本发明所需的化合物的5 mg/ml 溶液，如果需要，调节pH。用无菌5%葡萄糖将所述溶液稀释用于给药1-2 mg/ml，并且作为静脉内输注在约60分钟内给药。
[0217] 用于静脉内给药的冻干粉末：可以使用(i) 100-1000 mg本发明所需的化合物作为冻干粉末、(ii) 32-327 mg/ml 柠檬酸钠，和(iii) 300-3000 mg右旋糖酐40制备无菌制剂。使用无菌可注射盐水或5% 葡萄糖将制剂重构为10至20 mg/ml的浓度，其进一步用盐水或5% 葡萄糖稀释至0.2-0.4 mg/ml，并作为静脉内推注或通过静脉内输注在15-60分钟内给药。
[0218] 肌肉内悬浮剂：可以制备以下溶液或悬浮液用于肌肉内注射：
50 mg/ml本发明所需的水不溶性化合物；5 mg/ml羧甲基纤维素钠；4 mg/mL 吐温80；
9 mg/ml 氯化钠；9 mg/ml 苄醇。
50 mg/ml本发明所需的水不溶性化合物；5 mg/ml羧甲基纤维素钠；4 mg/mL 吐温80；
9 mg/ml 氯化钠；9 mg/ml 苄醇。
[0220] 软明胶胶囊：
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