改善胃肠道功能的松花粉组合物及其用途
阅读：1029发布：2020-08-16
专利汇可以提供改善胃肠道功能的松花粉组合物及其用途专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及营养、保健食品及医药制剂领域。本发明的目的在于提供一种效果更为理想的改善胃肠道功能的松花粉组合物。具体是按一定比例组合使用破壁松花粉和未破壁天然松花粉，然后添加药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的剂型。本发明将破壁花粉与天然花粉组合使用，具有协同增效、扩大使用面的作用。破壁松花粉更有利于有效成分的释放和吸收，能提高 机体 对松花粉营养物质的利用，有利于有效成分迅速吸收进入血液，到达病灶发挥药理效应。天然松花粉丰富的膳食 纤维 不仅能改善肠道微生态环境，还能促进消化废物及其他代谢毒素的排除，有利于胃肠道功能的恢复和改善。破壁松花粉与天然松花粉的联用将更有利于松花粉发挥调节胃肠道功能的作用。，下面是改善胃肠道功能的松花粉组合物及其用途专利的具体信息内容。
1.改善胃肠道功能的松花粉组合物，其特征在于：它是包含如下重量配比的活性成分加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的适合临床使用的制剂：
破壁松花粉6-20份，天然松花粉10-30份。
2.根据权利要求1所述的改善胃肠道功能的松花粉组合物，其特征在于：它是包含如下重量配比的活性成分加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂：
破壁松花粉10-14份，天然松花粉14-18份。
3.根据权利要求2所述的改善胃肠道功能的松花粉组合物，其特征在于：它是包含如下重量配比的活性成分加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂：
破壁松花粉12份，天然松花粉16份。
4.根据权利要求1～3任一项所述的改善胃肠道功能的松花粉组合物，其特征在于：
所述天然松花粉为马尾松、油松或其他同属花粉中的一种或多种。
5.根据权利要求1～3任一项所述的改善胃肠道功能的松花粉组合物，其特征在于：
所述破壁松花粉是破壁率95％以上的松花粉。
6.权利要求1～5任一项所述的松花粉组合物在制备改善胃肠道功能或因胃肠道功能失调而引起的相关症状药物或保健品中的用途。
7.根据权利要求6所述的用途，所述改善胃肠道功能是指增强胃动力、促进胃排空、促进肠道蠕动、保护胃肠道粘膜、抑制胃肠道溃疡或改善胃肠道微生态环境；
所述改善因胃肠道功能失调引起的相关症状是指因胃肠道功能紊乱或衰退引起的临床可观察的明显症状。
改善胃肠道功能的松花粉组合物及其用途
技术领域
[0001] 本发明涉及营养、保健食品及医药制剂领域，具体地涉及一种调节胃肠道功能的松花粉组合物及其制备方法。
背景技术
[0002] 胃肠道是重要的消化器官，人体要维持正常生理生化功能、免疫功能、生长发育及新陈代谢等生命活动,就必须依靠胃肠道消化的食物来提供主要能源。胃肠系统通过食物的摄入、转运、消化和吸收以及残余物的排泄等活动为人体供能，此外,胃肠系统尚有部分内分泌和免疫功能。胃肠道系统功能的多样化决定了胃肠道功能的失调和衰退都将引起一些列的明显临床症状。具体来说主要包括三个方面：(1)胃肠动力障碍引起的胃瘫和麻痹性肠梗阻等；(2)正常粘膜保护功能受损引起的溃疡和炎症等；(3)吸收障碍和分泌失调所致腹泻、便秘等。胃肠道功能的正常对于维持机体其他功能具有重要意义，然而随着现代生活节奏的加快、饮食结构的改变以及竞争压力的上升，目前胃肠道疾病发病率正逐年攀升。
[0003] 目前市场上大部分调理胃肠道功能的产品作用点都较单一，如针对胃动力弱、肠道蠕动迟缓、菌群失调、胃肠道溃疡等单独治疗，虽然都有一定疗效，但顾此失彼，无法全方位综合调理。部分产品甚至还有一些严重的毒副作用，如很多润肠通便产品都含有大黄、芦荟、番泻叶等较为烈性的药物，在改善临床症状的同时也会引起一些毒理反应，使用面必然受到一定限制。
[0004] 松花粉是松科植物马尾松、油松或其他同属植物的雄性生殖细胞，是松科植物传宗接代的物质。松花粉含有丰富的蛋白质、21种氨基酸，糖类(碳水化合物)、脂类(尤其是丰富的多不饱和脂肪酸)、近百种活性酶、10多种维生素、50多种常量和微量元素、10多种黄酮以及胡萝卜素、核酸、多糖、植物甾醇、生长素等200多种有效成分，而且营养配比平衡，所含营养物质的全面与均衡在自然界中还没有哪一种天然食品可以与之媲美。随着近年来对松花粉更为深入的研究，松花粉的很多药理作用被发现。根据目前文献资料，松花粉主要有免疫调节、抗疲劳、抗肿瘤、抗自由基、调脂降压、调节血糖、保肝护肝、抗前列腺炎、抗辐射、美容养颜、调理胃肠道等作用。在花粉众多的药理作用中其胃肠道调节作用是尤为突出的，花粉能全方位、多靶点调节胃肠道功能，使胃肠道功能恢复到正常水平，主要表现在以下三个方面：
[0005] 1)增强胃肠动力，促进排空：研究表明松花粉中丰富的消化酶能够增强食欲，提升血清胃泌素水平，增强胃动力，促进胃排空，改善胃肠道消化能力。松花粉还能够刺激肠道平滑肌的运动，促进肠道蠕动，能显著改善便秘症状。
[0006] 2)保护胃肠粘膜，增强营养物质吸收：实验研究表明松花粉能够显著改善胃肠道粘膜受损状况，抑制胃肠道炎症。松花粉中含有的黄酮具有显著的抗氧化应激作用，能降低自由基反应，从而发挥以上作用，此外松花粉中丰富的氨基酸、维生素等物质也有助于受损粘膜的修复和抑制胃肠炎症的发展。
[0007] 3)改善胃肠内环境，减少代谢毒素的积累：胃肠道微环境的失调可能导致多方面的症状，如腹泻、便秘、粉刺、口臭等。松花粉含有丰富的膳食纤维如果胶质、木质素、纤维素，能够刺激肠道蠕动促进排便。不溶性膳食纤维能吸收大量水分，能增加排便体积和粪便水分含量，这些都有利于缓解便秘症状，同时宿便的排除缓解了机体代谢毒素的堆积，能进一步缓解因胃肠功能失调导致的粉刺、口臭等症状。实验研究还表明松花粉能够维持肠道菌群平衡，能显著改善菌群失调引起的腹泻、消化不良等症状。
[0008] 松花粉以其丰富的营养物质及其在调理胃肠道功能方面的全面药理效应，为开发全新的胃肠道调理产品提供了方向。松花粉粒具有较厚的细胞壁，这使得其中有效成分溶出缓慢，体外实验研究表明破壁松花粉中有效成分的溶出明显快于未破壁松花粉。因此，目前市场上大部分松花粉产品都使用破壁花粉为原料，这对于开发花粉其他功能的产品是没有影响的，甚至有一些有益的作用。
[0009] 但是，本发明的发明人长期研究破壁的松花粉对胃肠道功能的调理作用，发现破壁松花粉在调理胃肠道功能方面并不一定是最好的。
发明内容
[0010] 本发明的目的在于提供一种效果更为理想的改善胃肠道功能的松花粉组合物。具体是按一定比例组合使用破壁松花粉和未破壁天然松花粉为主要活性成分，然后添加药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。
[0011] 本发明的技术方案：包含如下重量配比的原料为活性成分制备而成的适合临床使用的制剂：
[0012] 破壁松花粉6-25份，天然松花粉10-30份。
[0013] 所述药学上可接受的辅助性成分，它具有一定生理活性，但该成分的加入不会改变上述药物组合物在疾病治疗过程中的主导地位，而仅仅发挥辅助功效，这些辅助功效仅仅是对该成分已知活性的利用，是医药领域惯用的辅助治疗方式。
[0014] 所述破壁松花粉是破壁率95％以上的松花粉。
[0015] 所述天然松花粉为马尾松、油松及其他同属花粉中的一种或多种。
[0016] 作为本发明优选的方案，它是如包含下重量配比的原料加上药学上可接受的辅料制备而成的适合临床使用的制剂：
[0017] 破壁松花粉10-20份，天然松花粉14-25份。
[0018] 进一步地，它是包含如下重量配比的原料加上药学上可接受的辅料制备而成的适合临床使用的制剂：
[0019] 破壁松花粉12份，天然松花粉16份。
[0020] 其中所述破壁松花粉为破壁马尾松、油松及其他同属花粉经细胞破壁处理后的花粉中一种或多种。
[0021] 所述天然松花粉为马尾松、油松及其他同属花粉未经任何加工处理的纯天然花粉中的一种或多种。
[0022] 作为本发明优选的方案是，所述天然松花粉为天然马尾松花粉，其次为油松花粉。
[0023] 作为本发明优选的方案是，所述破壁松花粉为破壁马尾松花粉，其次为油松花粉。
[0024] 本发明还提供了上述组合物的制备方法，它包括如下操作步骤：
[0025] 取破壁松花粉和天然松花粉按配比组合混匀，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备成药学上常用剂型。
[0026] 本发明还提供了上述松花粉组合物在制备改善胃肠道功能及因胃肠道功能失调而引起的相关症状药物中的用途。
[0027] 进一步地，所述改善胃肠道功能是指增强胃动力、促进胃排空、促进肠道蠕动、保护胃肠道粘膜、抑制胃肠道溃疡、调节胃肠道微生态环境等。
[0028] 更进一步地，改善因胃肠道功能失调引起的相关症状是指因胃肠道功能紊乱或衰退引起的临床可观察的明显症状。如因胃动力不足导致的胀气、逆呕、反酸；因胃肠粘膜损伤而导致的胃肠溃疡、胃肠出血等；因便秘使体内代谢毒素堆积而引起的粉刺、口臭，因胃肠道微生态环境失衡引起的腹泻、腹痛、肠绞痛等。
[0029] 进一步地，所述药物是指增强胃动力、促进胃排空、抑制胃肠溃疡、保护胃肠粘膜、润肠通便、改善肠道微生态的药物。
[0030] 本发明将破壁松花粉与天然松花粉组合使用，具有协同增效、扩大使用面的作用。破壁松花粉更有利于有效成分的释放和吸收，能提高机体对花粉营养物质的利用，有利于有效成分迅速吸收进入血液，到达病灶发挥药理效应。天然松花粉丰富的膳食纤维不仅能改善肠道微生态环境，还能促进消化废物及其他代谢毒素的排除，有利于胃肠道功能的恢复和改善。肠道微生态环境的改善以及代谢废物、毒素的及时清除都有利于胃肠道更好的发挥消化吸收的功能，这样就更有利于松花粉营养物质的吸收利用。因此，破壁松花粉与天然松花粉的联合使用将更有利于松花粉发挥调节胃肠道功能的作用。
具体实施方式
[0032] 本发明提供的改善胃肠道功能的花粉组合物包含如下重量配比的原料制备而成的适合临床使用的制剂：
[0033] 破壁松花粉6-25份，天然松花粉10-30份。
[0034] 所述破壁松花粉是天然松花粉经常规破壁处理，使松花粉的破壁率达到95％以上的松花粉。比如，可以将天然花粉用水漂洗、浸泡2-5小时后烘干至水分6％以下，然后在零下30℃条件下迅速冻结，经低温震荡超微粉碎机进行破壁处理10-20分钟，即可得到破壁率95％以上的破壁松花粉。当然，也可以购买市售的破壁率95％以上的破壁松花粉。
[0035] 另外，本发明也可以控制松花粉的破壁工艺，使得松花粉的破壁率在适当的范围，达到破壁松花粉与未破壁松花粉的比例在本发明的范围，实现本发明的目的。
[0036] 所述天然松花粉为马尾松、油松及其他同属花粉中的一种或多种。
[0037] 作为本发明优选的方案，它是包含如下重量配比的原料制备而成的制剂：
[0038] 破壁松花粉10-20份，天然松花粉14-25份。
[0039] 进一步地，它是包含如下重量配比的原料制备而成的制剂：
[0040] 破壁松花粉12份，天然松花粉16份。
[0041] 其中所述破壁松花粉为马尾松、油松及其他同属花粉经细胞破壁处理后的花粉中一种或多种。
[0042] 所述天然松花粉为马尾松、油松及其他同属花粉中的一种或多种。
[0043] 作为本发明优选的方案是，所述天然松花粉为天然马尾松花粉，其次为油松花粉。
[0044] 作为本发明优选的方案是，所述破壁松花粉为破壁马尾松花粉，其次为油松花粉。
[0045] 本发明所述药学上可接受的辅料包括但不仅限于填充剂(稀释剂)、润滑剂(助流剂或抗粘着剂)、分散剂、湿润剂、粘合剂、调节剂、增溶剂、抗氧剂、抑菌剂、乳化剂、崩解剂等。粘合剂包含糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨醇、黄芪胶、纤维素及其衍生物(如微晶纤维素、羧甲基纤维素钠、乙基纤维素或羟丙甲基纤维素等)、明胶浆、糖浆、淀粉浆或聚乙烯吡咯烷酮等；填充剂包含乳糖、糖粉、糊精、淀粉及其衍生物、纤维素及其衍生物、无机钙盐(如硫酸钙、磷酸钙、磷酸氢钙、沉降碳酸钙等)、山梨醇或甘氨酸等；润滑剂包含微粉硅胶、硬脂酸镁、滑石粉、氢氧化铝、硼酸、氢化植物油、聚乙二醇等；崩解剂包含淀粉及其衍生物(如羧甲基淀粉钠、淀粉乙醇酸钠、预胶化淀粉、改良淀粉、羟丙基淀粉、玉米淀粉等)、聚乙烯吡咯烷酮或微晶纤维素等；湿润剂包含十二烷基硫酸钠、水或醇等；抗氧剂包含亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、二丁基苯酸等；抑菌剂包含0.5％苯酚、0.3％甲酚、0.5％三氯叔丁醇等；调节剂包含盐酸、枸橼酸、氢氧化钾(钠)、枸橼酸钠及缓冲剂(包括磷酸二氧钠和磷酸氢二钠)等；乳化剂包含聚山梨酯-80、没酸山梨坦、普流罗尼克F-68，卵磷酯、豆磷脂等；增溶剂包含吐温-80、胆汁、甘油等。
[0046] 所述药学上可接受的辅助性成分，它具有一定生理活性，但该成分的加入不会改变上述药物组合物在疾病治疗过程中的主导地位，而仅仅发挥辅助功效，这些辅助功效仅仅是对该成分已知活性的利用，是医药领域惯用的辅助治疗方式。比如在本发明的基础上添加具有改善胃肠道菌群结构的微生态制剂、具有保护胃肠粘膜作用的枸橼酸铋钾、三钾二枸橼酸铋等辅助功效成分。
[0047] 本领域技术人员容易想到，本发明组合物的活性成分也可以配合目前常规的治疗胃肠溃疡、便秘、腹泻等药物一起使用。
[0048] 其中，所述剂型为经胃肠道吸收剂型。例如，片剂、散剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂或口服液。
[0049] 本发明还提供了上述松花粉组合物在制备改善胃肠道功能及因胃肠道功能失调而引起的相关症状药物中的用途。
[0050] 进一步地，所述改善胃肠道功能是指增强胃动力、促进胃排空、促进肠道蠕动、保护胃肠道粘膜、抑制胃肠道溃疡、调节胃肠道微生态环境等。
[0051] 更进一步地，改善因胃肠道功能失调引起的相关症状是指因胃肠道功能紊乱或衰退引起的临床可观察的明显症状。如因胃动力不足导致的胀气、逆呕、反酸；因胃肠粘膜损伤而导致的胃肠溃疡、胃肠出血等；因便秘使体内代谢毒素堆积而引起的粉刺、口臭，因胃肠道微生态环境失衡引起的腹泻、腹痛、肠绞痛等。
[0052] 进一步地，所述药物是指增强胃动力、促进胃排空、抑制胃肠溃疡、保护胃肠粘膜、润肠通便、调节肠道微生态的药物。
[0053] 以下是具体实施例。
[0054] 实施例1
[0055] 破壁松花粉6份、天然松花粉11份，以上原料按配比组合混匀，添加微晶纤维素、羧甲基纤维素钠、硬脂酸镁等药学上可接受的辅料制备成片剂。
[0056] 实施例2
[0057] 破壁松花粉12份、天然松花粉14份，按配比组合混匀，加上微粉硅胶、硬脂酸镁等药学上可接受的辅料制备成胶囊。
[0058] 实施例3
[0059] 破壁松花粉8份、天然松花粉12份，按配比组合混匀，加上药学上可接受的辅料制备成混悬型口服液。
[0060] 实施例4
[0061] 破壁松花粉12份、天然松花粉16份，按配比组合混匀，加上药学上可接受的辅料制备成颗粒剂。
[0062] 实施例5
[0063] 破壁松花粉10份、天然松花粉18份，按配比组合混匀，加上药学上可接受的辅料制备成颗粒剂。
[0064] 实施例6
[0065] 破壁松花粉14份、天然松花粉16份，按配比组合混匀，加上药学上可接受的辅料制备成颗粒剂。
[0066] 实施例7
[0067] 破壁松花粉6份、天然松花粉30份，按配比组合混匀，加上药学上可接受的辅料制备成片剂。
[0068] 实施例8
[0069] 破壁松花粉20份、天然松花粉25份，按配比组合混匀，加上药学上可接受的辅料制备成散剂。
[0070] 实施例9
[0071] 破壁松花粉15份、天然松花粉28份，按配比组合混匀，加上药学上可接受的辅料制备成颗粒剂。
[0072] 实施例10
[0073] 破壁松花粉12份、天然松花粉20份，按配比组合混匀，加上药学上可接受的辅料制备成颗粒剂。
[0074] 药效学实验
[0075] 1.对便秘小鼠的影响
[0076] 1.1材料
[0077] 昆明种小鼠(雌雄兼用，体重18-20g)、墨汁、本发明组合物、破壁松花粉、天然松花粉、复方地芬诺酯。
[0078] 1.2方法
[0079] (1)分组：小鼠购回后正常饲养5天进行观察，无异常，选择50只健康小鼠并随机分成5组，即正常组、模型组、破壁松花粉组、天然松花粉组、本发明组合物组(按实施例4制备的破壁+天然松花粉组)。
[0080] (2)用量及给药途径：经口灌胃，其灌胃容积为0.2ml/10g体重，空白对照组给予等量的蒸馏水。隔天称一次动物体重调整灌胃量。按照松花粉常规用量3-6g/天计算，试验中以成人(60kg)每天用量6g计算，折算成小鼠生物等效用量为每日900mg/kg。
[0081] (3)造模：取复方地芬诺酯片50mg(20片)，用研钵研碎呈粉末后加蒸馏水定容至100ml，用于制造便秘模型。实验用量为每鼠灌胃0.2ml/10g体重，即相当于10mg/kg体重。
各实验组除按照模型组处理外分别灌胃实验样品，模型组及正常对照组分别灌胃等量生理盐水。
各实验组除按照模型组处理外分别灌胃实验样品，模型组及正常对照组分别灌胃等量生理盐水。
[0082] (4)测定指标：
[0083] A肠推进功能实验：连续灌胃给予各组小鼠不同受试物14d后，禁食16h，期间自由饮水。便秘模型组和三个试验组分别灌胃给予10mg/kg的复方地芬诺酯。阴性对照组给同体积生理盐水。30min后，三个试验组灌胃给予含有相应受试物的墨汁混悬液，阴性对照组及模型组灌胃空白墨汁，25min后行颈椎脱臼处死动物，迅速取出小鼠的胃及回盲部位的整段小肠，轻轻剥离后不加牵引直铺于自纸上，测量肠管长度为“小肠总长度”，从幽门至墨汁前沿的距离为墨汁推进长度，按下列公式计算小肠推进率(％)：
[0084]
[0085] B小鼠排便实验：灌胃给予小鼠不同受试物，饲养期间观察各组小鼠粪便性状。灌胃后14d，禁食饮水16小时。便秘模型组和三个试验组灌胃给予10mg/kg复方地芬诺酯，对照组给予同体积生理盐水。30min后，各试验组灌胃给予含相应受试物的墨汁混悬液，阴性对照组及模型组灌胃给予空白墨汁。动物均单笼饲养正常饮水进食。从墨汁灌胃开始计时，记录每只动物拍首粒黑便时间、5h内排便粒数及重量。
[0086] 1.3试验结果及分析
[0087] 表1不同处理松花粉对小鼠小肠推进率的影响(n＝10)
[0088]组别 小肠总长度 墨汁推进长度 墨汁推进率
正常组 58.68±8.24 35.12±5.74 60.16±8.50
模型组 59.84±4.21 25.46±5.76 42.38±8.86##
破壁松花粉组 57.62±6.55 28.44±6.66 53.31±7.06*
天然松花粉组 54.82±3.55 33.08±4.23 59.47±4.31**
本发明组合物组 56.04±4.30 42.68±6.32 76.86±6.88**
## * **
正常组 58.68±8.24 35.12±5.74 60.16±8.50
模型组 59.84±4.21 25.46±5.76 42.38±8.86##
破壁松花粉组 57.62±6.55 28.44±6.66 53.31±7.06*
天然松花粉组 54.82±3.55 33.08±4.23 59.47±4.31**
本发明组合物组 56.04±4.30 42.68±6.32 76.86±6.88**
## * **
[0089] 与正常组比较P ＜0.01，与模型组比较P ＜0.05，P ＜0.01
[0090] 表2松花粉对小鼠各排便指标的影响(n＝10)
[0091]组别 首次非便时间 5h内排便粒数 5h内排便重量
正常组 115.6±12.8 24.6±8.8 0.79±0.12
模型组 187±21.7## 11.2±2.3## 0.28±0.11##
破壁花粉组 162±16.2* 20.1±2.8** 0.45±0.14**
天然花粉组 141±11.8** 24.7±1.9** 0.58±0.12**
本发明组合物 123±12.6** 30.5±4.7** 0.69±0.16**
正常组 115.6±12.8 24.6±8.8 0.79±0.12
模型组 187±21.7## 11.2±2.3## 0.28±0.11##
破壁花粉组 162±16.2* 20.1±2.8** 0.45±0.14**
天然花粉组 141±11.8** 24.7±1.9** 0.58±0.12**
本发明组合物 123±12.6** 30.5±4.7** 0.69±0.16**
[0092] 与正常组比较P##＜0.01，与模型组比较P*＜0.05，P**＜0.01
[0093] 由上表1可以看出，模型组小鼠小肠墨汁推进率明显低于正常对照组，表明小鼠便秘模型建立成功，各给药试验组均可增加便秘小鼠小肠墨汁推进率，与模型组比较存在显著或极显著的差异。其中最为显著的是本发明组合物，其次为天然松花粉组，再次为破壁松花粉。表2可以看出，与正常组对比，模型组小鼠首粒黑便时间明显延长，5小时黑便数量及重量明显减少，说明造模成功。三个试验组均观察到可缩短便秘小鼠排首粒黑便的时间，增加5小时排黑便数量及重量，其中以本发明组合物组最为明显。
[0094] 以上观察到的实验结果可能与破壁松花粉的膳食纤维的损耗有关。松花粉中含有的果胶、可溶性多糖、低聚糖等水溶性膳食纤维在肠道内成溶液状态，具有较好的持水力，且溶液被肠道细菌酵解，产生丁酸、丙酸、乙酸等短链脂肪酸，这些短链脂肪酸能降低肠道内环境pH值，刺激肠粘膜蠕动。此外水溶性膳食纤维被肠道菌群发酵后产生的二氧化碳、氢气、甲烷等气体亦能刺激肠蠕动，从而加快粪便排出。松花粉中的木质素、纤维素、半纤维等不溶性膳食纤维具有较强的吸水力和溶胀性，且不易被消化道的消化酶或肠道内微生物酵解，可以形成较多的固体食物残渣增加粪便重量和体积，使粪便柔软，易于排出。粪便重量和体积的增大能机械性地刺激肠壁引起便意，使肠道蠕动加快，从而缩短食物残渣在肠道内通过时间，防止便秘的发生。
[0095] 2.对肠道菌群影响实验
[0096] 2.1材料
[0097] 昆明种小鼠、本发明组合物、破壁松花粉、天然松花粉、大肠杆菌培养基(EMB培养基)、肠球菌培养基(EC培养基)、双歧杆菌(BBL培养基)、乳酸杆菌培养基(MRS培养基)等。
[0098] 2.2方法
[0099] 小鼠适应饲养4d后,开始正式试验。选用健康小鼠40只,随机分为4组(每组10只)，分别为：对照组、破壁松花粉组、天然松花粉组、本发明组合物组。各试验组分别灌胃相应受试物，对照组灌胃等量生理盐水。
[0100] 分别于灌胃前和灌胃第14天,无菌收集新鲜粪样0.1-0.4g,称重后放入干燥灭菌瓶中,以1:100比例,加无菌水,制成均匀悬液,再依次10倍递增稀释成一系列不同稀释度的含菌液至10-9,在4h内完成样品稀释处理。根据预实验的结果,选择3个合适菌液稀释度,分别取lml,于各选择性培养基上,每个稀释度设两个重复。待菌落长出后,对4种肠道菌群进行分析,结果以每克粪便中的菌落的对数表示(loglOnCFU/g)。4种菌均在
37℃下培养48h后计数。其中,双歧杆菌和乳杆菌厌氧培养,各种菌的鉴定技术方法:乳杆菌为镜检G+、形态规则的菌落；双歧杆菌为镜检G+，形态不规则的菌落；肠球菌为镜检G+，
37℃下培养48h后计数。其中,双歧杆菌和乳杆菌厌氧培养,各种菌的鉴定技术方法:乳杆菌为镜检G+、形态规则的菌落；双歧杆菌为镜检G+，形态不规则的菌落；肠球菌为镜检G+，
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