一种含延龄草甾体皂苷类有效成分片剂的制备方法及其在制备各类药物中的应用
阅读：199发布：2021-03-15
专利汇可以提供一种含延龄草甾体皂苷类有效成分片剂的制备方法及其在制备各类药物中的应用专利检索，专利查询，专利分析的服务。并且本 发明 涉及一种含延龄草甾体皂苷类有效成分片剂的制备方法及其在制备各类药物中的应用。以延龄草甾体皂苷类有效成分为 原料药 物制成片剂，每片中含偏诺皂 苷元 -3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D- 葡萄糖 苷、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷中的一种或多种有效成分5-300mg的普通压制片、包衣片、 肠溶衣 片、分散片、缓释片、 控释 片等片剂制剂，上述片剂制剂可用于制备各类药物，上述片剂制剂主要用于制备 治疗 心脑血管系统 疾病 及其心脑血管病后遗症的药物。，下面是一种含延龄草甾体皂苷类有效成分片剂的制备方法及其在制备各类药物中的应用专利的具体信息内容。
1.一种含延龄草甾体皂苷类有效成分片剂的制备方法及其在制备各类药物中的应用，其特征在于，包括如下组分：偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷中的一种或多种有效成分，加入适当辅料，按适当比例混合均匀，混匀压片，制成每片中含偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→
2)]-β-D-葡萄糖苷中的一种或多种有效成分5-300mg的普通压制片、包衣片、糖衣片、薄膜衣片、肠溶衣片、泡腾片、咀嚼片、多层片、分散片、舌下片、口含片、植入片、溶液片、长效片、微囊片、阴道片、速释片、缓释片和控释片的片剂制剂，上述片剂制剂可用于制备各类药物，上述片剂制剂主要用于制备治疗心脑血管系统疾病及其心脑血管病后遗症的药物。
2.一种含延龄草甾体皂苷类有效成分片剂的制备方法及其在制备心脑血管系统疾病药物中的应用，其特征在于，包括如下组分：偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷中的一种或多种有效成分为0.25-15g，乳糖为3-
8g，糊精为3-12g，微晶纤维素为3-8g，硬脂酸镁为0.2-0.5g，按适当比例混合均匀，湿法制粒，最后加入硬脂酸镁混匀压片，制成每片中含偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→
2)-β-D-葡萄糖苷、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→
2)]-β-D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→
4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷中的一种或多种有效成分5-300mg，上述片剂制剂主要用于制备治疗心脑血管系统疾病及其心脑血管病后遗症的药物。
3.根据权利要求2所述一种含延龄草甾体皂苷类有效成分片剂的制备方法及其在制备心脑血管系统疾病药物中的应用，其特征在于，所涉及的心脑血管系统疾病是由心肌缺血、脑缺血、脑缺血再灌注损伤、动脉粥样硬化、微栓塞、血流动力学改变、血液成分的改变、颈内动脉系统短暂性脑缺血发作、椎-基底动脉系统短暂性脑缺血发作、脂肪栓塞、血管痉挛、冠心病和心绞痛形成心脑血管系统疾病中的任意一种。
4.根据权利要求2所述一种含延龄草甾体皂苷类有效成分片剂的制备方法及其在制备心脑血管系统疾病药物中的应用，其特征在于，所涉及的心脑血管系统疾病后遗症是由心肌梗死、短暂性或急性心肌缺血发作、短暂性脑缺血发作、血栓形成性脑梗死、脑栓塞、腔隙性脑梗死、高血压脑病、慢性起病的缺血性脑病形成的心脑血管病后遗症，特别是对长期心肌缺血、长期脑缺血或多次梗塞脑缺血形成的血管性痴呆或阿尔默茨海默病。
5.根据权利要求1和2所述一种含延龄草甾体皂苷类有效成分片剂的制备方法及其在制备各类药物或心脑血管系统疾病药物中的应用，其特征在于，偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷的有效成分来源主要为百合科延龄草属植物延龄草Trillium tschonoskii Maxim.、吉林延龄草Trillium
kamtschaticum Pall.ex Pursh.(或白花延龄草Trillium camschatcense Ker Gawl.)和西藏延龄草Trillium govanianum Wall.ex Royle.的根及根茎或果实或全草。
6.根据权利要求1和2所述一种含延龄草甾体皂苷类有效成分片剂的制备方法及其在制备各类药物或心脑血管系统疾病药物中的应用，其特征在于，偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷的有效成分来源也可为百合科重楼属植物云南重楼(滇重楼)Paris polyphylla Smith var.yunnanensis(Franch.)Hand.-Mazz.、七叶一枝花(华重楼)Paris polyphylla Smith var.chinensis(Franch.)Hara.、狭叶重楼Paris polyphylla var.stenophylla Franch.、巴山重楼Paris bashanensis F.T.Wang&Tang.、凌云重楼Paris cronquistii(Takht.)H.Li.、金线重楼Paris delavayi Franch.、海南重楼Paris dunniana H.Lév.、球药隔重楼Paris fargesii Franch.、长柱重楼Paris forrestii(Takht.)H.Li.、禄劝花叶重楼Paris luquanensis H.Li.、毛重楼Paris mairei H.Lév.、花叶重楼Paris marmorata Stearn.、四叶重楼Paris quadrifolia L.、皱叶重楼Paris rugosa H.Li&Kurita.、黑籽重楼Paris thibetica Franch.、北重楼Paris verticillata M.Bieb.、南重楼Paris vietnamensis(Takht.)H.Li.的根茎或全草。
7.根据权利要求1和2所述一种含延龄草甾体皂苷类有效成分片剂的制备方法及其在制备各类药物或心脑血管系统疾病药物中的应用，其特征在于，延龄草甾体皂苷类有效成分偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷(pennogenin-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranoside)、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷(pennogenin-3-O-α-L-
rhamnopyranosyl-(1→4)-[α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)]-β-D-glucopyranoside)和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷(pennogenin-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→4)-α-L-rhamnopyranosyl-(1→4)-[α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)]-β-D-glucopyranoside)的制备方法，其特征在于步骤如下：
(1).将延龄草药材粉碎成粗粉，用0-100％乙醇浸泡，加入4-12倍量溶剂加热回流提取若干次，过滤，合并滤液；
(2).上述滤液减压浓缩至0.5-1.5g生药材/ml，冷藏过夜，析胶，过滤，滤液上大孔吸附树脂进行梯度洗脱，回收有机溶剂，得浸膏上硅胶柱；
(3).上硅胶柱后依次用三氯甲烷：甲醇或二氯甲烷：甲醇或三氯甲烷：甲醇：水或二氯甲烷：甲醇：水梯度洗脱，以上述延龄草甾体皂苷类3种有效成分单体作为对照品TLC或HPLC检测，合并相应流份；
(4).将上述延龄草甾体皂苷类有效成分中偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→
2)-β-D-葡萄糖苷、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→
2)]-β-D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→
4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷的相应流份减压浓缩蒸干，用适量乙醇溶解，过滤，减压回收乙醇至含醇量为10-40％之间，析胶，过滤，滤液中加入适量的聚酰胺，搅拌0.5-3小时，静置4-24小时，过滤，滤液中加入适量活性炭，搅拌0.5-3小时，静置4-24小时，过滤，滤液用喷雾干燥或冷冻干燥法进行干燥，收集喷雾干燥粉或冻干粉，用10-95％乙醇结晶并重结晶，即得。
一种含延龄草甾体皂苷类有效成分片剂的制备方法及其在制
备各类药物中的应用
技术领域
[0001] 本发明涉及一种含延龄草甾体皂苷类有效成分片剂的制备方法及其在制备各类药物中的应用，属于中医药制备技术领域。
背景技术
[0002] 延龄草为百合科延龄草属植物延龄草Trillium tschonoskii Maxim.，俗名头顶一颗珠、芋儿七、狮儿七等，是传统的名贵中药，有延年益寿的功效。主治头晕目眩、失眠、跌打损伤、外伤出血、神经衰弱、高血压病、脑震荡后遗症等疾病，是恩施土家族著名民间药之一。目前国内外对延龄草属植物的药理活性研究表明延龄草有较强的抗炎、免疫调节、改善大鼠学习记忆功能和抗衰老等作用。发明人通过系统的体内外实验研究证实偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→
4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→
4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷中的一种或多种有效成分具有治疗心肌缺血、脑缺血再灌注损伤、心脑缺血后遗症(老年痴呆或阿尔默茨海默病)的显著药理疗效，上述有效成分可作为原料药物制备片剂治疗心脑血管系统疾病及其心脑缺血性后遗症。
4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→
4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷中的一种或多种有效成分具有治疗心肌缺血、脑缺血再灌注损伤、心脑缺血后遗症(老年痴呆或阿尔默茨海默病)的显著药理疗效，上述有效成分可作为原料药物制备片剂治疗心脑血管系统疾病及其心脑缺血性后遗症。
[0003] 发明人将上述原料药物制成每片中含偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→
2)]-β-D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→
4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷中的一种或多种有效成分5-300mg的普通压制片、包衣片、糖衣片、薄膜衣片、肠溶衣片、泡腾片、咀嚼片、多层片、分散片、舌下片、口含片、植入片、溶液片、长效片、微囊片、阴道片、速释片、缓释片和控释片等片剂制剂，上述片剂制剂可用于制备各类药物，上述片剂制剂主要用于制备治疗心脑血管系统疾病及其心脑血管病后遗症的药物。
2)]-β-D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→
4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷中的一种或多种有效成分5-300mg的普通压制片、包衣片、糖衣片、薄膜衣片、肠溶衣片、泡腾片、咀嚼片、多层片、分散片、舌下片、口含片、植入片、溶液片、长效片、微囊片、阴道片、速释片、缓释片和控释片等片剂制剂，上述片剂制剂可用于制备各类药物，上述片剂制剂主要用于制备治疗心脑血管系统疾病及其心脑血管病后遗症的药物。
发明内容
[0004] 本发明目的是提供一种含延龄草甾体皂苷类有效成分片剂的制备方法及其在制备各类药物中的应用。
[0005] 本发明采用了下述技术方案。
[0006] 延龄草甾体皂苷类有效成分中偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷即重楼皂苷Ⅵ(pennogenin-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranoside)、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→
2)]-β-D-葡萄糖苷(pennogenin-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→4)-[α-L-
rhamnopyranosyl-(1→2)]-β-D-glucopyranoside)和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷即重楼皂苷Ⅶ(pennogenin-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→4)-α-L-rhamnopyranosyl-(1→4)-[α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)]-β-D-glucopyranoside)的制备方法，其特征在于步骤如下：
2)]-β-D-葡萄糖苷(pennogenin-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→4)-[α-L-
rhamnopyranosyl-(1→2)]-β-D-glucopyranoside)和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷即重楼皂苷Ⅶ(pennogenin-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→4)-α-L-rhamnopyranosyl-(1→4)-[α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)]-β-D-glucopyranoside)的制备方法，其特征在于步骤如下：
[0009] (3).上硅胶柱后依次用三氯甲烷：甲醇或二氯甲烷：甲醇或三氯甲烷：甲醇：水或二氯甲烷：甲醇：水梯度洗脱，以上述延龄草甾体皂苷类有效成分中偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷的3种甾体皂苷作为对照品TLC或HPLC检测，合并相应流份；
[0010] (4).将上述延龄草甾体皂苷类有效成分中偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→
4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷的相应流份减压浓缩蒸干，用适量乙醇溶解，过滤，减压回收乙醇至含醇量为10-40％之间，析胶，过滤，滤液中加入适量的聚酰胺，搅拌0.5-3小时，静置4-24小时，过滤，滤液中加入适量活性炭，搅拌0.5-3小时，静置4-24小时，过滤，滤液用喷雾干燥或冷冻干燥法进行干燥，收集喷雾干燥粉或冻干粉，用10-95％乙醇结晶并重结晶，即得。
4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷的相应流份减压浓缩蒸干，用适量乙醇溶解，过滤，减压回收乙醇至含醇量为10-40％之间，析胶，过滤，滤液中加入适量的聚酰胺，搅拌0.5-3小时，静置4-24小时，过滤，滤液中加入适量活性炭，搅拌0.5-3小时，静置4-24小时，过滤，滤液用喷雾干燥或冷冻干燥法进行干燥，收集喷雾干燥粉或冻干粉，用10-95％乙醇结晶并重结晶，即得。
[0011] 更具体地，步骤(1)中，加入4-12倍量溶剂加热回流提取2-4次，每次1-3小时。
[0012] 更具体地，步骤(2)中，于0-4℃冷藏过夜。
[0013] 更具体地，步骤(2)中，减压浓缩温度为45-80℃。
[0014] 更具体地，步骤(2)中，滤液经大孔吸附树脂富集，依次用乙醇水由0-50％洗脱，再用乙醇水由50-95％洗脱得到各洗脱部位，主要收集乙醇水为60-85％的洗脱部位，回收洗脱液得浸膏上硅胶柱。
[0015] 进一步优选，步骤(3)中主要收集三氯甲烷：甲醇：水为65：35：1或60：30：1的洗脱流份。
[0016] 以前述方法制备的延龄草甾体皂苷类有效成分为原料药物制成片剂，包括如下组分：偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷中的一种或多种有效成分，加入适当辅料，按适当比例混合均匀，混匀压片，制成每片中含偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷中的一种或多种有效成分5-300mg的普通压制片、包衣片、糖衣片、薄膜衣片、肠溶衣片、泡腾片、咀嚼片、多层片、分散片、舌下片、口含片、植入片、溶液片、长效片、微囊片、阴道片、速释片、缓释片和控释片的片剂制剂，上述片剂制剂可用于制备各类药物，上述片剂制剂主要用于制备治疗心脑血管系统疾病及其心脑血管病后遗症的药物。
[0017] 一种含延龄草甾体皂苷类有效成分片剂的制备方法及其在制备心脑血管系统疾病中的应用，其特征在于包括如下组分：偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷中的一种或多种有效成分为0.25-15g，乳糖为3-8g，糊精为3-12g，微晶纤维素为3-8g，硬脂酸镁为0.2-0.5g，按适当比例混合均匀，湿法制粒，最后加入硬脂酸镁混匀压片，制成每片中含偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷中的一种或多种有效成分5-300mg，上述片剂制剂可用于制备各类药物，上述片剂制剂主要用于制备治疗心脑血管系统疾病及其心脑血管病后遗症的药物。
[0018] 处方1(50片)，成分含偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷中的一种或多种有效成分为5g，乳糖为5g，糊精为8g，微晶纤维素为5g，硬脂酸镁为0.2g。按照常规片剂的操作方法，以上混合均匀，湿法制粒，最后加入硬脂酸镁混匀压片，制成每片含偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷中的一种或多种有效成分100mg。
[0019] 处方2(50片)，成分含偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷中的一种或多种有效成分为250mg，乳糖为3g，糊精为12g，微晶纤维素为8g，硬脂酸镁为0.2g。按照常规片剂的操作方法，以上混合均匀，湿法制粒，最后加入硬脂酸镁混匀压片，制成每片含偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷中的一种或多种有效成分5mg。
[0020] 处方3(50片)，成分含偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷中的一种或多种有效成分为15g，乳糖为8g，糊精为3g，微晶纤维素为3g，硬脂酸镁为0.5g。按照常规片剂的操作方法，以上混合均匀，湿法制粒，最后加入硬脂酸镁混匀压片，制成每片含偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷中的一种或多种有效成分300mg。
[0021] 所涉及的心脑血管系统疾病是由心肌缺血、脑缺血、脑缺血再灌注损伤、动脉粥样硬化、微栓塞、血流动力学改变、血液成分的改变、颈内动脉系统短暂性脑缺血发作、椎-基底动脉系统短暂性脑缺血发作、脂肪栓塞、血管痉挛、冠心病和心绞痛形成心脑血管系统疾病中的任意一种。
[0022] 所涉及的心脑血管系统疾病后遗症是由心肌梗死、短暂性或急性心肌缺血发作、短暂性脑缺血发作、血栓形成性脑梗死、脑栓塞、腔隙性脑梗死、高血压脑病、慢性起病的缺血性脑病形成的心脑血管病后遗症，特别是对长期心肌缺血、长期脑缺血或多次梗塞脑缺血形成的血管性痴呆或阿尔默茨海默病。
[0023] 化学研究表明，中国的延龄草属和重楼属药材中主要含有甾体皂苷类、倍半萜类、苯丙素苷类和酚酸类成分为主，其中延龄草属和重楼属中甾体皂苷类成分类型基本一致，特别是延龄草属和重楼属药材都主要含有效成分偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷即重楼皂苷Ⅵ(pennogenin-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranoside)、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→
2)]-β-D-葡萄糖苷(pennogenin-3-O-α-L-rhamno-pyranosyl-(1→4)-[α-L-
rhamnopyranosyl-(1→2)]-β-D-glucopyranoside)和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷即重楼皂苷Ⅶ(pennogenin-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→4)-α-L-rhamnopyranosyl-(1→4)-[α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)]-β-D-glucopyranoside)。因此，上述3种甾体皂苷类有效成分来源主要为百合科延龄草属植物延龄草Trillium tschonoskii Maxim.、吉林延龄草
Trillium kamtschaticum Pall.ex Pursh.(或白花延龄草Trillium camschatcense Ker Gawl.)和西藏延龄草Trillium govanianum Wall.ex Royle.的根及根茎或果实或全草。或上述3种甾体皂苷类有效成分来源也可为百合科重楼属植物云南重楼(滇重楼)Paris
polyphylla Smith var.yunnanensis(Franch.)Hand.-Mazz.、七叶一枝花(华重楼)Paris polyphylla Smith var.chinensis(Franch.)Hara.、狭叶重楼Paris polyphylla
var.stenophylla Franch.、巴山重楼Paris bashanensis F.T.Wang&Tang.、凌云重楼Paris cronquistii(Takht.)H.Li.、金线重楼Paris delavayi Franch.、海南重楼Paris dunniana H.Lév.、球药隔重楼Paris fargesii Franch.、长柱重楼Paris forrestii
(Takht.)H.Li.、禄劝花叶重楼Paris luquanensis H.Li.、毛重楼Paris mairei H.Lév.、花叶重楼Paris marmorata Stearn.、四叶重楼Paris quadrifolia L.、皱叶重楼Paris rugosa H.Li&Kurita.、黑籽重楼Paris thibetica Franch.、北重楼Paris verticillata M.Bieb.、南重楼Paris vietnamensis(Takht.)H.Li.的根茎或全草。
2)]-β-D-葡萄糖苷(pennogenin-3-O-α-L-rhamno-pyranosyl-(1→4)-[α-L-
rhamnopyranosyl-(1→2)]-β-D-glucopyranoside)和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷即重楼皂苷Ⅶ(pennogenin-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→4)-α-L-rhamnopyranosyl-(1→4)-[α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)]-β-D-glucopyranoside)。因此，上述3种甾体皂苷类有效成分来源主要为百合科延龄草属植物延龄草Trillium tschonoskii Maxim.、吉林延龄草
Trillium kamtschaticum Pall.ex Pursh.(或白花延龄草Trillium camschatcense Ker Gawl.)和西藏延龄草Trillium govanianum Wall.ex Royle.的根及根茎或果实或全草。或上述3种甾体皂苷类有效成分来源也可为百合科重楼属植物云南重楼(滇重楼)Paris
polyphylla Smith var.yunnanensis(Franch.)Hand.-Mazz.、七叶一枝花(华重楼)Paris polyphylla Smith var.chinensis(Franch.)Hara.、狭叶重楼Paris polyphylla
var.stenophylla Franch.、巴山重楼Paris bashanensis F.T.Wang&Tang.、凌云重楼Paris cronquistii(Takht.)H.Li.、金线重楼Paris delavayi Franch.、海南重楼Paris dunniana H.Lév.、球药隔重楼Paris fargesii Franch.、长柱重楼Paris forrestii
(Takht.)H.Li.、禄劝花叶重楼Paris luquanensis H.Li.、毛重楼Paris mairei H.Lév.、花叶重楼Paris marmorata Stearn.、四叶重楼Paris quadrifolia L.、皱叶重楼Paris rugosa H.Li&Kurita.、黑籽重楼Paris thibetica Franch.、北重楼Paris verticillata M.Bieb.、南重楼Paris vietnamensis(Takht.)H.Li.的根茎或全草。
[0024] 本发明公开了一种含偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷中的一种或多种有效成分的片剂制备方法，其特征是包括如下组分：偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷中的一种或多种有效成分为0.25-15g，乳糖为3-8g，糊精为3-12g，微晶纤维素为3-8g，硬脂酸镁为0.2-0.5g，按适当比例混合均匀，湿法制粒，最后加入硬脂酸镁混匀压片，制成每片中含偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷中的一种或多种有效成分5-300mg，因拥有共同的偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷等结构单元，而在人体中具有类似的治疗功效，可用于制备各类药物，上述片剂制剂主要用于制备治疗心脑血管系统疾病及其心脑血管病后遗症的药物。
[0025] 本发明的优点是：提供了一种延龄草甾体皂苷类有效成分的提取与制备方法和片剂制剂的制备方法，以有效成分偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷中的一种或多种为原料药物制备片剂制剂，所制备的片剂制剂可用于制备治疗心脑血管系统疾病及其心脑血管病后遗症药物。
[0026] 延龄草甾体皂苷类有效成分中偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷在体内外对由心肌缺血、脑缺血、脑缺血再灌注损伤、动脉粥样硬化、微栓塞、血流动力学改变、血液成分的改变、颈内动脉系统短暂性脑缺血发作、椎-基底动脉系统短暂性脑缺血发作、脂肪栓塞、血管痉挛、冠心病和心绞痛导致心脑血管系统疾病具有良好的治疗作用和较强的生物活性。
[0027] 延龄草甾体皂苷类有效成分中偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷在治疗异质性及多因性老年痴呆以及阿尔茨海默病时，主要针对病因病机的对症治疗，达到标本兼治。
[0028] 延龄草皂苷类物质中偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷的制备方法主要通过从天然药物中提取，为纯天然组分与单体，具有良好的生物相容性，具有开发一类新药的巨大潜力，有较好的应用市场前景。可开发片剂制剂进行临床应用。附图说明
[0029] 图1为偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷的分子结构式；
[0030] 图2为偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷的分子结构式；
[0031] 图3为偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷的分子结构式。
具体实施方式
[0032] 下面结合实施例对本发明作进一步描述。
[0033] 实施例1
[0034] 延龄草甾体皂苷类有效成分中偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷和和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷的制备方法，其中：将延龄草药材粉碎成粗粉，用60％乙醇浸泡1小时，8倍量溶剂加热回流提取3次，每次2小时，过滤，合并滤液。上述滤液与
65℃减压浓缩至1.0g生药材/ml，0-4℃冷藏过夜，析胶，过滤，滤液再用正丁醇等有机溶剂萃取，回收有机溶剂，得浸膏，加入浸膏量的100-200目硅胶拌匀，50℃减压挥干溶剂，研匀，干法上样，上常压硅胶柱(200-300目，硅胶量为浸膏的20倍)，上样后依次用三氯甲烷：甲醇：水梯度洗脱，主要收集三氯甲烷：甲醇：水为65：35：1的流份，以上述延龄草甾体皂苷类有效成分中偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷的3种甾体皂苷作为对照品TLC或HPLC检测，合并相应流份。上述流份于65℃减压浓缩蒸干，用适量乙醇溶解，过滤，减压回收乙醇至含醇量为30％，0--4℃冷藏过夜，析胶，过滤，滤液中加入生药量8％的聚酰胺，搅拌2小时，静置12小时，过滤，滤液中加入生药量4％的活性炭，搅拌2小时，静置12小时，过滤，滤液用冷冻干燥法进行干燥，收集冻干粉，用95％乙醇结晶并重结晶，即得。采用上述方法制备延龄草甾体皂苷类有效成分中偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷的得率为1.5-2.6g/kg,经HPLC检测纯度为
98.8％；偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷的得率为0.8-1.9g/kg,经HPLC检测纯度为97.5％；偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷的得率依次分别为的得率为0.3-0.9g/kg,经HPLC检测纯度为96.2％；色谱条件
色谱柱(4.6mm×150mm，3μm)，流动相为乙腈-水(10％-100％梯度洗脱)，检测波长为203nm，流速为1.0ml/min，柱温30℃,进样量20μl。
65℃减压浓缩至1.0g生药材/ml，0-4℃冷藏过夜，析胶，过滤，滤液再用正丁醇等有机溶剂萃取，回收有机溶剂，得浸膏，加入浸膏量的100-200目硅胶拌匀，50℃减压挥干溶剂，研匀，干法上样，上常压硅胶柱(200-300目，硅胶量为浸膏的20倍)，上样后依次用三氯甲烷：甲醇：水梯度洗脱，主要收集三氯甲烷：甲醇：水为65：35：1的流份，以上述延龄草甾体皂苷类有效成分中偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷的3种甾体皂苷作为对照品TLC或HPLC检测，合并相应流份。上述流份于65℃减压浓缩蒸干，用适量乙醇溶解，过滤，减压回收乙醇至含醇量为30％，0--4℃冷藏过夜，析胶，过滤，滤液中加入生药量8％的聚酰胺，搅拌2小时，静置12小时，过滤，滤液中加入生药量4％的活性炭，搅拌2小时，静置12小时，过滤，滤液用冷冻干燥法进行干燥，收集冻干粉，用95％乙醇结晶并重结晶，即得。采用上述方法制备延龄草甾体皂苷类有效成分中偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷的得率为1.5-2.6g/kg,经HPLC检测纯度为
98.8％；偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷的得率为0.8-1.9g/kg,经HPLC检测纯度为97.5％；偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷的得率依次分别为的得率为0.3-0.9g/kg,经HPLC检测纯度为96.2％；色谱条件
色谱柱(4.6mm×150mm，3μm)，流动相为乙腈-水(10％-100％梯度洗脱)，检测波长为203nm，流速为1.0ml/min，柱温30℃,进样量20μl。
[0035] 实施例2
[0036] 延龄草甾体皂苷类有效成分中偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷的制备方法为：将延龄草药材粉碎成粗粉，用70％乙醇浸泡1.5小时，10倍量溶剂加热回流提取3次，每次3小时，过滤，合并滤液。上述滤液与70℃减压浓缩至1g生药材/ml，0-4℃冷藏过夜，析胶，过滤，滤液上AB-8型号大孔吸附树脂富集，依次用水、30％乙醇、60％乙醇和85％乙醇洗脱，得到各洗脱部位，其中85％的洗脱部位以甾体皂苷类成分为主，甾体皂苷总含量大于90％，回收洗脱液得浸膏上硅胶柱，上样后依次用三氯甲烷：甲醇：水梯度洗脱，主要收集三氯甲烷：甲醇：水为60：30：1的洗脱流份，以上述延龄草甾体皂苷类有效成分中偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷的3种甾体皂苷作为对照品TLC或HPLC检测，合并相应流份。上述流份于65℃减压浓缩蒸干，用95％乙醇溶解，过滤，结晶并重结晶，即得。采用上述方法制备延龄草甾体皂苷类有效成分中偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷的得率为1.5-2.6g/kg,经HPLC检测纯度为99.1％；偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷的得率为0.8-1.9g/kg,经HPLC检测纯度为98.3％；偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷的得率依次分别为的得率为0.3-0.9g/kg,经HPLC检测纯度为98.1％；色谱条件 色谱柱(4.6mm×150mm，3μm)，流动相为乙
腈-水(10％-100％梯度洗脱)，检测波长为203nm，流速为1.0ml/min，柱温30℃,进样量20μl。
腈-水(10％-100％梯度洗脱)，检测波长为203nm，流速为1.0ml/min，柱温30℃,进样量20μl。
[0037] 实施例3
[0038] 延龄草甾体皂苷类有效成分中偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷的制备方法为：将延龄草药材粉碎成粗粉，用50％乙醇浸泡1.0小时，10倍量溶剂加热回流提取3次，每次2小时，过滤，合并滤液。上述滤液与70℃减压浓缩至1g生药材/ml，0-4℃冷藏过夜，析胶，过滤，滤液上D-101型型号大孔吸附树脂富集，依次用水、30％乙醇、50％乙醇和85％乙醇洗脱，得到各洗脱部位，其中85％的洗脱部位以甾体皂苷类成分为主，回收洗脱液得浸膏上硅胶柱，上样后依次用三氯甲烷：甲醇：水梯度洗脱，主要收集三氯甲烷：甲醇：水为65：35：1的洗脱流份，以上述延龄草甾体皂苷类有效成分中偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷的3种甾体皂苷作为对照品TLC或HPLC检测，合并相应流份。上述流份于65℃减压浓缩蒸干，用95％乙醇溶解，过滤，结晶并重结晶，即得。采用上述方法制备延龄草甾体皂苷类有效成分中偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷的得率为1.5-2.6g/kg,经HPLC检测纯度为97.6％；偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷的得率为0.8-1.9g/kg,经HPLC检测纯度为96.2％；偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷的得率依次分别为的得率为0.3-0.9g/kg,经HPLC检测纯度为95.8％；色谱条件 XB-C18色谱柱(4.6mm×150mm，3μm)，流动相为乙腈-水(10％-100％梯度
洗脱)，检测波长为203nm，流速为1.0ml/min，柱温30℃,进样量20μl。
洗脱)，检测波长为203nm，流速为1.0ml/min，柱温30℃,进样量20μl。
[0039] 实施例4
[0040] 原料与制剂制备：
[0041] 实施例一、实施例二或实施例三中的方法制备的延龄草甾体皂苷类有效成分中偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷为原料药物，或者其他方式或方法获得的延龄草甾体皂苷类有效成分中偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷为原料药物进行下列制剂制备。
[0042] 1.片剂制备
[0043] 处方1(50片)，成分含偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷中的一种或多种有效成分为5g，乳糖为5g，糊精为8g，微晶纤维素为5g，硬脂酸镁为0.2g。按照常规片剂的操作方法，以上混合均匀，湿法制粒，最后加入硬脂酸镁混匀压片，制成每片含偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷中的一种或多种有效成分100mg。
[0044] 处方2(50片)，成分含偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷中的一种或多种有效成分为250mg，乳糖为3g，糊精为12g，微晶纤维素为8g，硬脂酸镁为0.2g。按照常规片剂的操作方法，以上混合均匀，湿法制粒，最后加入硬脂酸镁混匀压片，制成每片含偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷中的一种或多种有效成分5mg。
[0045] 处方3(50片)，成分含偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷中的一种或多种有效成分为15g，乳糖为8g，糊精为3g，微晶纤维素为3g，硬脂酸镁为0.5g。按照常规片剂的操作方法，以上混合均匀，湿法制粒，最后加入硬脂酸镁混匀压片，制成每片含偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷中的一种或多种有效成分300mg。
[0046] 实施例5
[0047] 发明人采用冠脉结扎致大鼠心肌缺血实验模型，从心电图、心肌梗死范围、血清肌酸激酶(CK)及血清乳酸脱氢酶(LDH)的活力等方面研究证实以延龄草甾体皂苷类有效成分偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷为原料药物对心肌缺血导致的心脑血管系统疾病具有显著的防治作用和较强的生物活性。临床上可开发片剂制剂进行应用。
[0048] 1药品与试剂：偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷(Y2T)、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷(Y3T)、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷(Y4T)均为白色粉末，由笔者实验室自行分离得到，质量分数大于98％。
[0049] 2实验方法：
[0050] 2.1动物分组及给药：大鼠90只，按体重随机分为假手术组、模型组、阳性组(地奥心血康胶囊浓度为6mg/ml)、Y2T高剂量组(29.14mg/kg)、Y2T中剂量组(14.57mg/kg)、Y3T高剂量组(17.14mg/kg)、Y3T中剂量组(8.86mg/kg)、Y4T高剂量组(26.86mg/kg)、Y4T中剂量组(14.28mg/kg)，每组10只老鼠。给药量为10ml/kg，假手术组、模型组灌予等量蒸馏水，每天1次，连续14天。
[0051] 2.2模型制备：于末次给药1h后，腹腔注射3％戊巴比妥钠45mg/kg麻醉动物，将动物仰卧位固定于鼠台上，剪开喉部皮肤，钝性分离皮下筋膜、肌肉，找到气管，行气管插管术，并接动物呼吸机辅助呼吸。于胸部去毛、消毒、沿左锁骨中线纵行切开皮肤约2cm，在第4、5肋间钝性分离肌层，打开胸腔，用自制圆形取心环掏出心脏。在肺动脉圆锥与左心耳下缘可以看见左冠脉前降支起始部，距左心耳下缘1～2mm处，用6/0缝合线结扎。进针深度控制在2mm左右，宽度约为2mm，结扎后将心脏放回胸腔，排除胸腔里的空气后迅速用止血钳关闭胸腔。假手术组只穿线不予结扎。
[0052] 2.3观察指标：
[0053] 2.3.1 Ⅱ导联心电图动物麻醉仰卧位固定于鼠台上，四肢皮下插入心电图针状电极，记录正常Ⅱ导联心电图及冠脉结扎后半小时心电图(结扎后心电图ST段弓背明显抬高，且结扎心肌色泽变浅可代表结扎成功)，观察结扎后心电图、30min ST段及T波的变化。
[0054] 2.3.2心肌梗塞范围腹主动脉取血后，迅速取出心脏，用PBS缓冲液冲洗干净心脏内余血，用滤纸吸去水分，于-20℃冰箱内冷冻8min后取出心脏，迅速将左心室结扎线下部分心肌平行切成厚度约为2mm的片状，片状心肌恢复室温后置现配的1％TTC缓冲液中避光染色，并37℃恒温水浴15min，期间振荡4次以便充分染色。然染色后将心肌组织置于10％福尔马林中浸泡24h，正常心肌被染为红色，梗塞区心肌不着色。将心肌组织按顺序排好拍照，使用Image Pro Plus6.0医学图像分析系统对拍照的心肌梗死区面积进行分析，使用count and measure abjects工具计算梗死区面积及整个心肌面积，梗死范围＝梗死区面积/整个心肌总面积×100％。
[0055] 2.3.3 CK、LDH活力的检测心肌梗塞3h后腹主动脉取血6ml，静置2h后4000r/min离心20min取上清液。试剂盒检测CK、LDH的活力。
[0056] 2.4统计处理方法
[0058] 3实验结果：
[0059] 3.1延龄草甾体皂苷对心肌缺血大鼠Ⅱ导联心电图ST段及T波变化的影响
[0060] 结果见表1、表2。与假手术组相比，模型组大鼠在冠脉结扎后5、10、15、30min心电图ST段、T波均显著升高。与模型组相比较，阳性药组、Y2T(Y3T、Y4T)高、中剂量组均可显著对抗结扎冠脉导致大鼠ST段、T波的升高(p<0.05或p<0.01)。
[0061] 表1延龄草甾体皂苷对心肌缺血大鼠II导联心电图ST段的影响( n＝8)
[0062]
[0063] 注：与假手术组比较，##P<0.01；与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。
[0064] 表2延龄草甾体皂苷对心肌缺血大鼠II导联心电图T波的影响( n＝8)
[0065]
[0066] 注：与假手术组比较，##P<0.01；与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。
[0067] 3.2延龄草甾体皂苷对心肌缺血大鼠心肌梗塞范围的影响
[0068] 结果见表3。与假手术组相比较，模型组大鼠心肌梗塞范围显著升高；与模型组相比较，阳性药组、Y2T(Y3T、Y4T)高、中剂量组均能显著降低心肌梗塞范围(p<0.01或p<0.05)，说明阳性药组、Y2T(Y3T、Y4T)高、中剂量组均能增加缺血区血液供应，降低心肌缺血性损害。
[0069] 表3延龄草甾体皂苷对心肌缺血大鼠心肌梗塞范围的影响( n＝8)
[0070]
[0071]
[0072] 注：与假手术组比较，##P<0.01；与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。
[0073] 3.3延龄草甾体皂苷对心肌缺血大鼠血清酶CK、LDH的影响
[0074] 结果见表4。与假手术组相比较，模型组大鼠在结扎冠脉后血清中CK、LDH活力显著升高；与模型组相比较，阳性药组、Y2T(Y3T、Y4T)高、中剂量组血清中CK、LDH活性显著降低(p<0.05或p<0.01)，提示阳性药组、Y2T(Y3T、Y4T)高、中剂量组对心肌的缺血损伤有保护作用。
[0075] 表4延龄草甾体皂苷对心肌缺血大鼠血清酶CK、LDH活力的影响( n＝8)
[0076]
[0077] 注：与假手术组比较，##P<0.01；与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。
[0078] 4实验小结：
[0079] 本实验研究发现，大鼠左冠脉前降支结扎后，心电图ST段、T波均显著升高，心肌梗塞范围显著增加，血清中CK、LDH活力明显升高，提示心肌缺血造模成功。偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷(Y2T)、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷(Y3T)和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷(Y4T)的高、中剂量组均能显著降低模型大鼠ST段和T波的异常抬高，显减少心肌缺血大鼠的心肌梗塞范围，抑制血清中CK、LDH的活力，提示延龄草甾体皂苷有效成分偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷(Y2T)、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷(Y3T)和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→
4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷(Y4T)的高、中剂量组对冠脉结扎所致心肌缺血有一定的防治作用，可用于治疗由心肌缺血导致的心脑血管系统疾病的药理疗效。
4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷(Y4T)的高、中剂量组对冠脉结扎所致心肌缺血有一定的防治作用，可用于治疗由心肌缺血导致的心脑血管系统疾病的药理疗效。
[0080] 实施例6
[0081] 本发明以延龄草药材或重楼药材中获得的甾体皂苷类有效成分偏诺皂苷元、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖为原料药物，对由心脑血管系统疾病导致的脑缺血再灌注损伤的大鼠模型进行药效学研究，证实上述甾体皂苷对由心肌缺血、脑动脉粥样硬化、微栓塞、血流动力学改变、血液成分的改变、颈内动脉系统短暂性脑缺血发作、椎-基底动脉系统短暂性脑缺血发作、脂肪栓塞、脑血管痉挛等导致的脑缺血再灌注损伤疾病具有显著药理疗效，具有开发治疗心脑血管系统疾病一类新药的巨大潜力。可开发片剂制剂进行临床应用。
[0082] 1材料与方法
[0083] 1.1实验动物SPF级健康SD雄性大鼠120只，体重240～280g，购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司，动物许可证编号为SCXK(湘)2016-0002。
[0084] 1.2药品与试剂偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷即重楼皂苷Ⅵ(简称Y2T)、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷(Y3T)、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖即重楼皂苷Ⅶ(Y4T)、偏诺皂苷元(Y苷元)均由本实验室自行制备(纯度均大于98.8％)；尼莫地平片购于亚宝药业集团股份有限公司(批号：170107)；脑心通胶囊购于陕西步长制药有限公司(批号20170320)。
[0085] 1.3脑缺血再灌注模型的建立参考Zea longa的方法，采用大脑中动脉阻塞法制备局灶性脑缺血再灌注模型。大鼠称重，腹腔注射10％水合氯醛(0.35m L/100g)，麻醉后固定。常规消毒手术视野区皮肤，纵向切开颈中部皮肤2cm，钝性分离皮下组织与肌肉，暴露右侧颈总动脉CCA，小心剪开包裹颈总动脉及迷走神经的鞘膜，并继续分离右颈内动脉ICA及右颈外动脉ECA。在CCA近心端、远心端分别穿线，近心端系紧，结扎颈总动脉CCA，远心端系一松结备用。分离ECA、ICA，并在ECA穿线结扎，用动脉夹夹闭ICA。距颈总动脉分叉处约4mm剪一“V”型小口，插入栓线，用备用的丝线打一正结，松开ICA的动脉夹，然后调整线栓角度，使线栓弧度水平向外，轻轻将线栓送入颅内，轻缓推进直至感觉到阻力，插入深度在18.0～20.0mm，即完成了大脑中动脉阻塞所致大脑局灶性脑缺血的制备。分层缝合肌肉与皮肤(部分栓线留体外)。于2h后轻轻地向外拔出栓线1cm左右至略感阻力即可进行再灌注4h，剪断皮肤外露的栓线。手术后保温，常规饲养。假损伤组不插入线栓，其余同模型组。
[0086] 1.4动物分组及给药SD大鼠随机分为12组：假损伤组，模型组，尼莫地平组(10mg/kg)，脑心通组(2010mg/kg)，Y2T中剂量组(60mg/kg)，Y2T高剂量组(90mg/kg)，Y3T中剂量组(60mg/kg)，Y3T高剂量组(90mg/kg)，Y4T中剂量组(60mg/kg)，Y4T高剂量组(90mg/kg)，Y苷元中剂量组(37mg/kg)，Y苷元高剂量组(54mg/kg)，连续灌胃给药8天，第8天灌胃1h后，制备缺血再灌注模型。假损伤组和模型组给予等体积的生理盐水。
[0087] 1.5评价指标
[0088] 1.5.1一般情况观察实验过程中每天观察并记录饮食、饮水情况及精神状态。
[0089] 1.5.2神经功能评分参照Zea Longa 5分制评分标准对大鼠神经功能进行盲评：0分，没有神经功能缺损；1分，对侧前爪不能完全伸展，为对侧前肢内收、屈曲；2分，行走时大鼠向对侧转圈、划圈，将大鼠置于地面时，推动患侧肩向对侧移动时，阻力明显降低；3分，行走时大鼠身体向左侧(瘫痪侧)倾倒；4分，意识丧失，不能自发行走；5分，死亡。评分在1～3者，确定大鼠造模成功，纳入模型组。
[0090] 1.5.3大鼠脑指数的测定脑缺血再灌注评分后，大鼠麻醉，取出全脑，生理盐水冲洗，去除嗅球、小脑及脑干，滤纸吸干水分，称重。脑指数＝脑湿重(g)/体质量(100g)，可反映血脑屏障结构损伤的情况。
[0091] 1.5.4大鼠脑梗死体积的测定将脑组织称重后，立即放置-20℃冰箱中快速冷冻20min，用手术刀片由前向后行冠状位切片，共5片，每片约2mm厚，置2％2，3，5-三苯基氯化四氮唑(TTC)溶液中，37℃避光染色30min，15min后翻面。经染色正常脑组织呈玫瑰红色，而梗塞区呈苍白色，界限清晰。染色后再用4％多聚甲醛固定30min，拍照，用图像处理软件计算脑梗灶体积的百分比。
[0092] 1.6统计方法实验结果以 表示，采用SAS软件统计分析。采用单因素方差分析，组间两两比较，采用最小显著差法检验。
[0093] 2结果
[0094] 2.1一般情况各给药组灌胃期间，大鼠精神状态良好，饮食睡眠正常，体质量与其余组大鼠无明显差异性。
[0095] 2.2各给药组对脑缺血再灌注损伤模型大鼠神经功能缺损症状评分的影响
[0096] 假损伤组没有神经功能缺损；模型组神经功能缺损明显；尼莫地平组、脑心通组、Y2T中剂量组、Y3T中(高)剂量组神经功能缺损评分均较模型组显著降低，差异显著(P＜0.01)；而Y2T高剂量组、Y4T高剂量组、Y苷元中剂量组神经功能缺损评分较模型组也明显降低(P＜0.05)。见表5。
[0097] 表5各给药组对脑缺血再灌注损伤模型大鼠神经功能缺损评分的影响
[0098]
[0099] 注：与模型组比较，*p﹤0.05，**p﹤0.01；n＝10
[0100] 2.3各给药组对脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑指数的影响
[0101] 模型组大鼠脑指数明显升高，与假损伤组比较有显著性差异(P＜0.01)；脑心通组、Y2T中剂量组、Y4T中(高)剂量组较模型组大鼠脑指数明显降低，差异显著(P＜0.01)；Y3T中(高)剂量组较模型组大鼠脑指数也明显降低(P＜0.05)；而其余各组较模型组大鼠脑指数改善的不明显。见表6。
[0102] 表6各给药组对脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑指数的影响
[0103]
[0104] 注：与模型组比较，*p﹤0.05，**p﹤0.01；n＝10
[0105] 2.4各给药组对脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑梗死体积的影响
[0106] TTC染色结果显示(正常脑组织呈玫瑰红色，而梗塞组织呈苍白色，界限清晰)，假损伤组未见梗死灶，模型组出现明显梗死灶。尼莫地平组、Y2T中(高)剂量组、Y4T中(高)剂量组、Y苷元高剂量组较模型组梗死灶体积缩小，差异显著(P＜0.01)；而脑心通组、Y3T中(高)剂量组、Y苷元中剂量组较模型组梗死灶体积也明显缩小(P＜0.05)。见表7。
[0107] 表7各给药组对脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑梗死体积的影响
[0108]
[0109] 注：与模型组比较，*p﹤0.05，**p﹤0.01；n＝10
[0110] 实施例7
[0111] 本发明以延龄草药材或重楼药材中具有抗脑缺血再灌注损伤的甾体皂苷类有效成分偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖为原料药物，根据心脑血管系统疾病(主要为短暂性脑缺血发作、血栓形成性脑梗死、脑栓塞、腔隙性脑梗死、高血压脑病、慢性起病的缺血性脑病形成的脑血管病后遗症)导致的脑血管病后遗的临床表现与病因病机原理，构建长期脑缺血或多次梗塞脑缺血导致的血管性痴呆或阿尔默茨海默病模型，即利用腹腔注射半乳糖促老化与反复结扎双侧颈总动脉致脑低灌注脑缺血及鼠脑室一次性注射凝聚态Aβ蛋白制作异质性及多因性阿尔茨海默病(Heterogeneitys/Multi-factors'Alzheimer's Disease，H/MAD)模型，应用H/MAD模型证实偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷具有改善脑血管病后遗的显著药理疗效，具有开发治疗心脑血管系统疾病一类新药的巨大潜力。临床上可开发片剂制剂进行应用。
[0112] 1.药品与试剂 偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷(Y2T)、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷(Y3T)、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷(Y4T)均为白色粉末，由笔者实验室自行分离得到，质量分数98％。盐酸多奈哌齐(卫材药业有限公司，国药准字H20050978，批号131246A)；D-半乳糖(Sigma公司，批号Lot#060M00631V)；Aβ25-35(Sigma公司，批号Lot#053M4804V)；T-AOC、TChE、CAT、SOD、MDA和GSH-PX检测试剂盒(南京建成生物工程研究所，批号20150512)。
[0113] 2.动物的分组、造模及给药 将大鼠随机分为9组，每组12只：空白组、H/MAD模型组、盐酸多奈哌齐组、Y2T高剂量组、Y2T中剂量组、Y3T高剂量组、Y3T中剂量组、Y4T高剂量组、Y4T中剂量组。空白组不予处理；模型组与给药组大鼠每天腹腔注射D-半乳糖(50mg·kg-1)，造成亚急性衰老，4W后先进行双侧颈总动脉反复结扎间段性的阻断血流，造成脑缺血性再灌注损伤病灶。手术完成后，将大鼠喂养3天，取未死亡的状态良好的大鼠再脑内注射凝聚态Aβ25-35。模型组于脑内注射手术后第3天开始每日灌胃2％聚山梨酯水溶液1次；盐酸多奈哌齐组按1mg·kg-1每日灌胃盐酸多奈哌齐的聚山梨酯水溶液1次；Y2T高(中)剂量组、Y3T高(中)剂量组、Y4T(中)剂量组分别按34.38mg·kg-1、17.19mg·kg-1、20.51mg·kg-1、10.25mg·kg-1、15.19mg·kg-1、7.59mg·kg-1灌胃Y2T、Y3T、Y4T的聚山梨酯水溶液，每天1次，给药6天。
[0114] 3.Morris水迷宫实验 与空白组比较，模型组大鼠潜伏期延长、过台次减少，在第四象限逗留时间短，差异显著(P＜0.01)；与模型组比较，给药盐酸多奈哌齐组、延龄草甾体皂苷Y2T和Y3T各组能缩短潜伏期、增加过台次数，在第四象限逗留时间延长(P＜0.05或P＜0.01)，说明盐酸多奈哌齐、延龄草甾体皂苷Y2T和Y3T各给药组治疗效果明显，而延龄草甾体皂苷Y4T治疗效果不明显。结果见表8。
[0115] 表8延龄草甾体皂苷对H/MAD模型大鼠空间探索试验结果( n＝10)
[0116]
[0117]
[0118] 与空白组比较，#p﹤0.01；与模型组比较，*p﹤0.05，**p﹤0.01
[0119] 4.延龄草甾体皂苷对H/MAD模型大鼠血清中T-AOC、TChE和CAT含量的影响
[0120] 与空白组比较，模型组大鼠血清中T-AOC、CAT含量明显降低，TChE活力增强，差异显著(P＜0.01)；与模型组比较，延龄草甾体皂苷Y4T使T-AOC的活力恢复的不明显，差异不显著，能提高CAT含量，降低TChE含量(P＜0.05)；给药盐酸多奈哌齐组、延龄草甾体皂苷Y2T和Y3T各组能提高T-AOC、CAT含量，降低TChE活力，与模型组相比具有显著差异(P＜0.05或P＜0.01)，说明盐酸多奈哌齐、延龄草甾体皂苷Y2T和Y3T各给药组治疗效果明显，能使H/MAD模型大鼠脑内T-AOC的活力恢复，抗氧化酶CAT含量上升，降低TChE含量，增强清除自由基的能力，拮抗氧化反应，同时防止神经递质的减少，起到防治AD的作用。结果见表9。
[0121] 表9延龄草甾体皂苷对H/MAD模型大鼠血清中T-AOC、TChE和CAT含量的影响( n＝10)
[0122]
[0123]
[0124] 与空白组比较，#p﹤0.01；与模型组比较，*p﹤0.05，**p﹤0.01
[0125] 5.延龄草甾体皂苷对H/MAD模型大鼠血清中SOD、MDA和GSH-PX含量的影响
[0126] 与空白组比较，模型组大鼠SOD、GSH-PX明显降低(P＜0.01)，而MDA水平显著升高(P＜0.01)；与模型组比较，盐酸多奈哌齐组、延龄草甾体皂苷Y2T和Y3T各组能使MDA水平明显下降(P＜0.01)，而SOD、GSH-PX明显上升(P＜0.01)，说明给药盐酸多奈哌齐、延龄草甾体皂苷Y2T和Y3T治疗有效；与模型组比较，延龄草甾体皂苷Y4T使MDA水平下降的不明显，差异不显著，但可以提高SOD、GSH-PX的活力(P＜0.05)。结果见表10。
[0127] 表10延龄草甾体皂苷对H/MAD模型大鼠血清中SOD、MDA、GSH-PX含量的影响( n＝10)
[0128]
[0129] 与空白组比较，#p﹤0.01；与模型组比较，*p﹤0.05，**p﹤0.01
[0130] 本实验通过测定H/MAD模型大鼠血清中T-AOC、TChE、CAT、SOD、MDA和GSH-PX的含量，来了解机体受氧自由基的损伤及机体清除自由基能力的强弱，为其作用机制的研究提供依据。结果显示，造模后，大鼠脑组织内自由基产生增加，发生了明显的脂质过氧化反应，偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷(Y2T)、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷(Y3T)(尤其是各中剂量组)能使H/MAD模型大鼠行为学活动能力有所恢复，能使血清中T-AOC的活力恢复，抗氧化酶CAT含量上升，能明显提高SOD、GSH-PX的活力水平(P＜0.05或P＜0.01)，增强机体清除自由基的能力；能降低TChE的含量，防止神经递质的减少，同时又能降低MDA的含量(P＜0.05或P＜0.01)以减少机体受自由基损伤的程度，表现出良好的抗氧化损伤作用，而偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷(Y4T)的治疗作用不明显。
[0131] 实施例8
[0132] 中国延龄草属或重楼属药材中甾体皂苷类化合物偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)-β-D-葡萄糖苷即重楼皂苷Ⅵ(Y2T)、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷(Y3T)和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷即重楼皂苷Ⅶ(Y4T)的波谱数据信息与解析。
[0133] 1.偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-葡萄糖苷即重楼皂苷Ⅵ(pennogenin-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranoside)，无色针晶(甲醇)，分子式为C39H62O13，ESI-MS[M+H]+峰m/z:739.4245。Liebermann-Burchard反应和Molish反应均呈阳性为甾体皂苷。1H-NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:0.73(3H,s,CH3-18)，0.74(3H,d,J＝6.0Hz,CH3-27)，0.78(3H,d,J＝6.8Hz,CH3-21)，0.95(3H,brs,CH3-19)，1.08(3H,d,J＝6.0Hz,Rha-CH3-6″)，5.34(1H,d,J＝4.4Hz,H-6)，5.03(1H,d,J＝0.8Hz,Rha-H-1″)，
4.93(1H,d,J＝6.0Hz,Glc-H-1′)；13C-NMR(DMSO-d6,100MHz)δ:36.9(C-1),30.8(C-2),77.7(C-3),37.6(C-4),140.3(C-5)，121.3(C-6)，31.5(C-7)，31.2(C-8)，51.9(C-9)，36.3(C-
10)，22.4(C-11)，31.4(C-12)，43.6(C-13)，49.5(C-14)，29.7(C-15)，88.9(C-16)，88.3(C-
17)，16.6(C-18)，17.7(C-19)，44.3(C-20)，17.1(C-21)，108.7(C-22)，31.6(C-23)，28.0(C-24)，29.0(C-25)，65.8(C-26)，9.3(C-27)，98.1(C-1′)，76.5(C-2′)，76.3(C-3′)，71.9(C-4′)，76.0(C-5′)，60.9(C-6′)，100.0(C-1″)，70.6(C-2″)，70.5(C-3″)，70.2(C-4″)，
67.9(C-5＂)，19.0(C-6″)。分子结构式见图1。
4.93(1H,d,J＝6.0Hz,Glc-H-1′)；13C-NMR(DMSO-d6,100MHz)δ:36.9(C-1),30.8(C-2),77.7(C-3),37.6(C-4),140.3(C-5)，121.3(C-6)，31.5(C-7)，31.2(C-8)，51.9(C-9)，36.3(C-
10)，22.4(C-11)，31.4(C-12)，43.6(C-13)，49.5(C-14)，29.7(C-15)，88.9(C-16)，88.3(C-
17)，16.6(C-18)，17.7(C-19)，44.3(C-20)，17.1(C-21)，108.7(C-22)，31.6(C-23)，28.0(C-24)，29.0(C-25)，65.8(C-26)，9.3(C-27)，98.1(C-1′)，76.5(C-2′)，76.3(C-3′)，71.9(C-4′)，76.0(C-5′)，60.9(C-6′)，100.0(C-1″)，70.6(C-2″)，70.5(C-3″)，70.2(C-4″)，
67.9(C-5＂)，19.0(C-6″)。分子结构式见图1。
[0134] 2.偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷(pennogenin-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→4)-[α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)]-β-D-glucopyranoside)，白色针晶(甲醇)，mp259-261℃，分子式为C45H71O17，ESI-MS[M++ 1
H]峰m/z:885.4827。Liebermann-Burchard反应和Molish反应均呈阳性为甾体皂苷。H-NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:0.73(3H,s,CH3-18)，0.74(3H,d,J＝6.0Hz,CH3-27)，0.78(3H,d,J＝
6.8Hz,CH3-21)，0.95(3H,brs,CH3-19)，1.08(3H,d,J＝6.0Hz,Rha-CH3-6″)，1.10(3H,d,J＝
6.0Hz,Rha-CH3-6″′)，5.33(1H,d,J＝4.4Hz,H-6)，5.02(1H,brs,Rha-H-1″),4.92(1H,d,J
13
＝6.4Hz,Glc-H-1′)，4.70(1H,d,J＝2.0Hz,Rha-H-1″′)；C-NMR(DMSO-d6,100MHz)δ:36.8(C-1)，30.8(C-2)，76.9(C-3)，37.6(C-4)，140.2(C-5)，121.3(C-6)，31.5(C-7)，31.2(C-
8)，51.9(C-9)，36.3(C-10)，22.4(C-11)，31.4(C-12)，43.6(C-13)，49.5(C-14)，29.7(C-
15)，88.9(C-16)，88.3(C-17)，16.6(C-18)，17.8(C-19)，44.3(C-20)，17.1(C-21)，108.7(C-22)，31.6(C-23)，28.0(C-24)，29.0(C-25)，65.8(C-26)，9.3(C-27)，98.1(Glc-C-1′)，
76.2(C-2′)，76.1(C-3′)，71.9(C-4′)，75.2(C-5′)，60.0(C-6′)，100.3(Rha-C-1″)，70.7(C-2″)，70.5(C-3″)，70.4(C-4″)，67.9(C-5″)，19.0(C-6″)，100.5(Rha-C-1″′)，71.9(C-
2″′)，70.5(C-3″′)，76.7(C-4″′)，68.6(C-5″′)，17.7(C-6″′)。分子结构式见图2。
H]峰m/z:885.4827。Liebermann-Burchard反应和Molish反应均呈阳性为甾体皂苷。H-NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:0.73(3H,s,CH3-18)，0.74(3H,d,J＝6.0Hz,CH3-27)，0.78(3H,d,J＝
6.8Hz,CH3-21)，0.95(3H,brs,CH3-19)，1.08(3H,d,J＝6.0Hz,Rha-CH3-6″)，1.10(3H,d,J＝
6.0Hz,Rha-CH3-6″′)，5.33(1H,d,J＝4.4Hz,H-6)，5.02(1H,brs,Rha-H-1″),4.92(1H,d,J
13
＝6.4Hz,Glc-H-1′)，4.70(1H,d,J＝2.0Hz,Rha-H-1″′)；C-NMR(DMSO-d6,100MHz)δ:36.8(C-1)，30.8(C-2)，76.9(C-3)，37.6(C-4)，140.2(C-5)，121.3(C-6)，31.5(C-7)，31.2(C-
8)，51.9(C-9)，36.3(C-10)，22.4(C-11)，31.4(C-12)，43.6(C-13)，49.5(C-14)，29.7(C-
15)，88.9(C-16)，88.3(C-17)，16.6(C-18)，17.8(C-19)，44.3(C-20)，17.1(C-21)，108.7(C-22)，31.6(C-23)，28.0(C-24)，29.0(C-25)，65.8(C-26)，9.3(C-27)，98.1(Glc-C-1′)，
76.2(C-2′)，76.1(C-3′)，71.9(C-4′)，75.2(C-5′)，60.0(C-6′)，100.3(Rha-C-1″)，70.7(C-2″)，70.5(C-3″)，70.4(C-4″)，67.9(C-5″)，19.0(C-6″)，100.5(Rha-C-1″′)，71.9(C-
2″′)，70.5(C-3″′)，76.7(C-4″′)，68.6(C-5″′)，17.7(C-6″′)。分子结构式见图2。
[0135] 3.偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-O-β-D-吡喃葡萄糖苷即重楼皂苷Ⅶ(pennogenin-3-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→4)-O-α-L-rhamnopyranosyl-(1→4)-O-[α-L-rhamnopyranosyl-(1→2)]-O-β-D-glucopyranoside)，白色针晶(甲醇)，mp259-261℃，C51H80O21，ESI-MS[M+Na]+峰m/z:1053.5272。Liebermann-Burchard反应和Molish反应均呈阳性为甾体皂苷。1H-NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:0.73(3H,s,CH3-18)，0.74(3H,d,J＝6.0Hz,CH3-27)，0.78(3H,d,J＝6.8Hz,CH3-21)，0.95(3H,brs,CH3-19)，1.08(3H,d,J＝6.0Hz,Rha-CH3-6″)，1.10(3H,d,J＝
6.0Hz,Rha-CH3-6″′)，1.12(3H,d,J＝6.0Hz,Rha-CH3-6″″)，5.32(1H,d,J＝4.0Hz,H-6)，
5.06(1H,brs,Rha-H-1″″),5.02(1H,brs,Rha-H-1″),4.86(1H,d,J＝4.0Hz,Glc-H-1′)，
13
4.67(1H,d,J＝1.2Hz,Rha-H-1″′)；C-NMR(DMSO-d6,100MHz)δ:36.9(C-1)，30.8(C-2)，
77.8(C-3)，37.6(C-4)，140.2(C-5)，121.3(C-6)，31.5(C-7)，31.2(C-8)，51.9(C-9)，36.3(C-10)，22.4(C-11)，31.4(C-12)，43.6(C-13)，49.5(C-14)，29.7(C-15)，88.9(C-16)，88.3(C-17)，16.6(C-18)，17.8(C-19)，44.3(C-20)，17.1(C-21)，108.7(C-22)，31.6(C-23)，
28.0(C-24)，29.0(C-25)，66.7(C-26)，9.3(C-27)，98.2(Glc-C-1′)，76.2(C-2′)，76.0(C-
3′)，71.9(C-4′)，75.3(C-5′)，65.8(C-6′)，100.0(Rha-C-1″)，70.7(C-2″)，70.6(C-3″)，
70.4(C-4″)，67.9(C-5″)，19.0(C-6″)，100.3(Rha-C-1″′)，71.9(C-2″′)，70.6(C-3″′)，
77.0(C-4″′)，68.9(C-5″′)，17.7(C-6″′)，101.0(Rha-C-1″″)，71.3(C-2″″)，71.3(C-3″″)，
76.0(C-4″″)，69.7(C-5″″)，18.1(C-6″″)。分子结构式见图3。
6.0Hz,Rha-CH3-6″′)，1.12(3H,d,J＝6.0Hz,Rha-CH3-6″″)，5.32(1H,d,J＝4.0Hz,H-6)，
5.06(1H,brs,Rha-H-1″″),5.02(1H,brs,Rha-H-1″),4.86(1H,d,J＝4.0Hz,Glc-H-1′)，
13
4.67(1H,d,J＝1.2Hz,Rha-H-1″′)；C-NMR(DMSO-d6,100MHz)δ:36.9(C-1)，30.8(C-2)，
77.8(C-3)，37.6(C-4)，140.2(C-5)，121.3(C-6)，31.5(C-7)，31.2(C-8)，51.9(C-9)，36.3(C-10)，22.4(C-11)，31.4(C-12)，43.6(C-13)，49.5(C-14)，29.7(C-15)，88.9(C-16)，88.3(C-17)，16.6(C-18)，17.8(C-19)，44.3(C-20)，17.1(C-21)，108.7(C-22)，31.6(C-23)，
28.0(C-24)，29.0(C-25)，66.7(C-26)，9.3(C-27)，98.2(Glc-C-1′)，76.2(C-2′)，76.0(C-
3′)，71.9(C-4′)，75.3(C-5′)，65.8(C-6′)，100.0(Rha-C-1″)，70.7(C-2″)，70.6(C-3″)，
70.4(C-4″)，67.9(C-5″)，19.0(C-6″)，100.3(Rha-C-1″′)，71.9(C-2″′)，70.6(C-3″′)，
77.0(C-4″′)，68.9(C-5″′)，17.7(C-6″′)，101.0(Rha-C-1″″)，71.3(C-2″″)，71.3(C-3″″)，
76.0(C-4″″)，69.7(C-5″″)，18.1(C-6″″)。分子结构式见图3。
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