本发明涉及一种治疗心脑血管疾病的药物组合物及其制备方法和质控方法，属于药品的技术领域。
技术背景在人类死亡原因中，全世界每年大约有1700万人死于心脑血管疾病，占总死亡人数的50％以上，位居第一；在人类疾病中，心脑血管病的复发率高达87％，位居第一；在人类疾病中，心脑血管疾病的致残率高达50％，位居第一，这一严峻事实已受到社会各界高度注视，目前临床用于治疗心脑血管疾病的中西药已经很多，化学药物用于症状控制，疗效确切，但顾此失彼，且副作用和不良反应多见；中药以注射剂和口服制剂为主，中药注射剂虽然一定程度上显示出优势，但由于要么质量可控性差，要么固本疗效弱，要么适用范围窄，给临床医生和部分患者带来不利，口服制剂虽然活血化瘀、气血双补、标本兼治，品种繁多，可供选择性较大，但生物利用度低，不能从快治疗心脑血管之急、重症，固本效果更显缓慢。故开发一种既能适用于急、重症抢救，又能适用于平常治疗，标本兼治，生物利用度高的用于控制和治疗心脑血管疾病的药物就显得极为迫切。
黄芪作为传统中药，用于治疗或预防心脑血管疾病已历史悠久，近年来更是受到药界人士的青睐；双嘧达莫具有较强的抗血小板聚集的作用，主要用于心脑血管疾病的治疗。目前单味黄芪制剂均以药材入药，由于如药材质量好坏、提取路线、精制工艺等众多因素的影响，使得临床疗效波动范围比较大，质量可控性也相对较差；因此，使得黄芪制剂在临床上的应用受到了很大程度的限制，广大患者也苦于没有缺乏安全有效的药物治疗。因此，本申请人采用黄芪总皂苷有效部位和双嘧达莫组方，研究筛选出黄芪有效部位与双嘧达莫最优的配伍比例，进一步解决制剂成型性和稳定性问题，进而为患者提供一个新的用药选择。

本发明的目的在于：提供一种治疗心脑血管疾病的药物组合物，该药物组合物由双嘧达莫和黄芪总皂苷、黄芪总多糖的一种或两种组方，成分明确，质量可控，既能抑制血小板聚集，又能益气活血，标本兼治，产生明显协同作用，疗效明显提高；本发明的目的还在于提供该药物组合物不同剂型的制备方法和质控方法；针对现有技术，根据心脑血管疾病如冠心病、脑血栓、老年性痴呆等均因血管窄缩、血流量减少、血瘀等原因致使供血不足引发疾病的原理，在实验筛选的基础上，采用双嘧达莫与黄芪总皂苷、黄芪总多糖的一种或两种配伍做成制剂，优选出最佳的组方及工艺，得到的产品，经药效学试验表明，协同增效，较单独的黄芪制剂，双嘧达莫制剂如双嘧达莫注射液，疗效均有显著提高。
本发明所采用的技术方案是：一种治疗心脑血管疾病的药物组合物是主要由双嘧达莫和黄芪总皂苷或黄芪总多糖或黄芪总皂苷及总多糖组方，按照重量份数计算，它是主要由双嘧达莫1份和黄芪总皂苷0.1～100份或黄芪总多糖0.1～100份或黄芪总皂苷及总多糖0.5～100份组成。优选组方为：按照重量份数计算，它是主要由双嘧达莫1份和黄芪总皂苷0.5～50份或黄芪总多糖0.5～80份或黄芪总皂苷及总多糖0.8～80份组成。最佳组方为：按照重量份数计算，它是主要由双嘧达莫1份和黄芪总皂苷1～10份或黄芪总多糖0.8～50份或黄芪总皂苷及总多糖1～50份制作而成。
所述组合物剂型为直接用于注射给药的注射液、直接供静脉滴注的静脉输液、需稀释后用于静脉滴注的注射用浓溶液和用冷冻干燥法或喷雾干燥法制得的注射用无菌粉末和无菌块状物以及片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸剂、微丸剂、丸剂、软胶囊剂、口服液体制剂、口腔崩解片、分散片剂、膜剂、舌下含片等药剂学上所有可以接受的剂型。优选的剂型包括直接用于注射给药的注射液、直接供静脉滴注的静脉输液、需稀释后用于静脉滴注的注射用浓溶液和用冷冻干燥法或喷雾干燥法制得的注射用无菌粉末和无菌块状物以及滴丸剂、微丸剂、口服液体制剂、口腔崩解片、分散片剂、舌下含片。
所述的组合物制剂可以在将黄芪总多糖、黄芪总皂苷、黄芪总皂苷及总多糖、双嘧达莫中的一种或几种制备成脂质体或前体脂质体的基础上制得。
黄芪有效部位是市售的或采用如下方法制备的：黄芪总皂苷有效部位是这样制备的：取黄芪药材，加入水或乙醇溶液提取，合并提取液，过滤，滤液浓缩得黄芪粗提物，在此基础上采用乙醇沉淀法、水返溶法、柱层析法、萃取法、絮凝沉淀法中的一种或几种联合使用进行适当精制，得黄芪总皂苷有效部位；黄芪总多糖有效部位是这样制备的：取黄芪药材，加入水或乙醇溶液提取，合并提取液，过滤，滤液浓缩得黄芪粗提物，在此基础上采用乙醇沉淀法、水返溶法、柱层析法、萃取法、絮凝沉淀法中的一种或几种联合使用进行适当精制，得黄芪总多糖有效部位。
以重量百分比计算，口服制剂中黄芪有效部位的含量不低于制剂中扣除双嘧达莫量、制剂辅料量和水分量后的总固体量的50％，注射制剂中黄芪有效部位的含量不低于扣除双嘧达莫量、制剂辅料量和水分量后的总固体量的70％；双嘧达莫含量应为制剂标示量的90.0％～110.0％。
注射用无菌块状物这样制备：取双嘧达莫，加注射用水，加酒石酸或枸橼酸搅拌使之溶解，药液备用；取黄芪总皂苷、黄芪总多糖的一种或两种，加注射用水搅拌使溶解，滤过，滤液备用；将上述两药液合并，煮沸后加入0.5％(W/V)的活性炭，保持微沸30分钟，稍冷过滤，滤液调pH值至5.5～7.0，煮沸，冷藏(4℃)过夜，粗滤、精滤；将甘露醇加注射用水配制成100mg/ml溶液，与上述滤液混匀，滤过，加注射用水至规定量，分装，冷冻干燥，预冻温度-45℃，预冻时间10h；开始抽真空，并升温至-40℃，保持8h；并在12～72小时内逐步差速梯度升温至10℃，保持2h，升温至20℃，保持2h，升温至30℃，保持2h，即得。
本发明组合物主要用于制备在治疗病毒性心肌炎、心功能不全、冠心病心绞痛、脑血栓、脑中风、中风后遗症、肝炎、机体免疫力低下、肿瘤等疾病。
所述的治疗心脑血管疾病的药物组合物的质量控制方法包括以下全部或部分内容：(1)指纹图谱测试，包括以以黄芪皂苷类成分特征为主的指纹图谱；(2)黄芪药材、黄芪甲苷、双嘧达莫中全部或部分的鉴别测试方法；(3)黄芪甲苷、总皂苷、总多糖、双嘧达莫中全部或部分成分的含量测试方法。
与现有技术相比，本发明药物组合物由双嘧达莫和黄芪总皂苷、黄芪总多糖的一种或两种组方，纯度高、成分明确，质量可控，同时克服了纯中药制剂疗效波动大，西药不良反应多的缺点，能确保临床疗效稳定和用药安全，黄芪总皂苷或黄芪总多糖或黄芪总皂苷及总多糖配伍双嘧达莫标本兼治，协同增效减毒，比单用黄芪制剂或双嘧达莫制剂疗效均有明显提高。
为证明本发明提供的药物具有有效的效果，申请人进行了一系列实验。
实验例1：对不同配比药效学比较研究1、药物法所致心肌缺血模型试验健康SD大鼠72只，体重200～250g，雌雄兼用，分为9组，分组见下表，每组8只，雌雄各半，按下表所示给予相应药物，连续7天，末次给药后1小时，经用戊巴比妥纳30mg/kg静脉麻醉，背位固定后用泰盟BL-420型生物机能信号系统记录一段正常II导联ECG，然后iv垂体后叶素1ug/kg，在给药后15s、30s、1min、2min、3min、4min、5min、10min、15min、20min分别记录II导联ECG，并以其中任何一时间的T波或ST段升高0.1mv或下降0.05mv作为心肌缺血阳性动物数，结果见表1。
表1  对大鼠垂体后叶素诱发急性心肌缺血的影响
由表1可知，黄芪总皂苷和双嘧达莫不同配比的药物均能明显对抗垂体后叶素所致的心肌缺血，该作用的强弱程度与药物的配比有关。其中以黄芪总皂苷∶双嘧达莫＝1～10∶1的处方药理作用较强且用量较低。
2、对兔血小板聚集性的影响取家兔45只，体重3～5kg，雄性，分为9组，分组见下表，每组5只，按下表所示给予相应药物，给药前自心脏取血测定血小板表面活性和聚集性，于耳缘静脉注射相应药物或等量生理盐水，1小时后复查血小板表面活性或聚集性。结果见表2。
表2  对血小板聚集性的影响
由表2可知，黄芪总皂苷和双嘧达莫不同配比的药物能显著降低血小板表面活性或聚集性作用，该作用的强弱程度与药物的配比有关。
表1、表2表明：黄芪总皂苷配伍双嘧达莫能够产生协同增效作用，药效比单用同剂量双嘧达莫或黄芪总皂苷均有明显提高，双嘧达莫和黄芪总皂苷不同配比的药物均能显著增加疗效，但作用的强弱程度与药物的配比有关；从实验结果分析，黄芪总皂苷和双嘧达莫的最佳配比为：双嘧达莫1份，黄芪总皂苷1～10份。
实验例2：注射剂成型工艺研究2.1pH值对注射液的影响本申请人在研制中发现，适宜的酸碱度是药品稳定的重要因素，为了提高该注射剂的质量，本申请人对不同pH值的注射液40℃放置3个月，分别考察其稳定性。
结果表明，本发明合理的pH值范围为5.5～7.0。
2.2活性炭用量对注射液影响注射剂在生产过程中由于溶剂、原料、容器等带有热原性物质，使注射剂的安全性降低，因此在制备注射剂的过程中需要清除热原性物质。本申请人采用活性炭吸附法，一方面吸附热原性成分，同时助滤和脱色，还可改善制剂的外观性状，因活性炭对其用量进行了考察。
活性炭用量考察表
由表可知，三者均可以满足注射剂的相关要求，但从药液外观来看，选择活性炭用量为0.6％和1.2％的比较合适；从转移率来判断，0.1％用量和0.6％用量略好一点，综合考虑以上因素，以使用药液体积0.6％的活性炭脱色为佳。
2.3冻干支架剂种类的筛选支架剂种类筛选
由表可知，在其他条件相同的情况下，大部分辅料均可制成冻干粉针，但是从成品率、成型状况和样品的复溶性角度综合考察，单独使用甘露醇的效果好于其它几种辅料，即可满足注射剂各项要求，同时尽量减少添加过多辅料。
2.4支架剂用量筛选将不同浓度的甘露醇溶液(60mg/ml、120mg/ml和150mg/ml)与药液以不同比例进行混合，过滤，每支西林瓶装量为3ml，冷冻干燥。冻干条件：-45℃，预冻8h后，开始抽真空，并升温至-40℃，保持10h；升温至-30℃，保持10h；升温至-20℃，保持10h；升温至-10℃，保持5h；升温至0℃，保持5h；升温至15℃，保持3h，结果如表。
表  甘露醇用量筛选
由表可知，不同浓度和不同比例，大部分都可以成型，但当支架剂用量与药液的比例为2∶1时，样品性状好于其它两个比例，所以将甘露醇溶液与药液的比例确定为2∶1；而对于同一比例的样品，以甘露醇浓度为120mg/ml和150mg/ml的样品比较好，综合考虑辅料的用量和临床服用量，最终选择甘露醇浓度为120mg/ml，甘露醇溶液与药液的体积比为2∶1。
实验例3：分散片崩解剂筛选分散片中崩解剂的种类、数量直接影响到制剂的分散均匀性，是衡量分散片质量的主要指标，因此我们选用崩解时间为考核指标对不同的崩解剂进行考察，结果见下表。
崩解剂考核表
从上述试验的结果可以看出，大部分崩解剂都可以改善分散片的崩解时间，均可以达到分散片的要求。但是相比之下，采用交联聚乙烯吡咯烷酮和低取代羟丙基纤维素组合后，崩解效果最佳。
实验例4：微丸辅料筛选微丸中辅料的种类和数量对微丸的成型性影响比较大，因此我们对试验中常用的辅料药用淀粉、糊精、维晶纤维素进行了筛选，以微丸的圆整度为考察指标。
表  辅料的筛选
由表可知，淀粉、糊精、维晶纤维素均可满足微丸要求，但淀粉的制丸效果较佳，因此选用药用淀粉为制作微丸的辅料。
具体的实施方式本发明的实施例1：双嘧达莫1g黄芪总皂苷100g取双嘧达莫，加注射用水，加酒石酸搅拌使之溶解，药液备用；取黄芪总皂苷，加注射用水搅拌使溶解，滤过，滤液备用；将上述两药液合并，煮沸后加入0.5％(W/V)的活性炭，保持微沸30分钟，稍冷过滤，滤液调pH值至5.5～7.0，煮沸，冷藏(4℃)过夜，粗滤、精滤；将甘露醇加注射用水配制成100mg/ml溶液，与上述滤液混匀，滤过，加注射用水至规定量，分装，冷冻干燥，预冻温度-45℃，预冻时间10h；开始抽真空，并升温至-40℃，保持8h；并在12～72小时内逐步差速梯度升温至10℃，保持2h，升温至20℃，保持2h，升温至30℃，保持2h，即得含有100份黄芪总皂苷和1份双嘧达莫的注射用无菌块状物。
本发明的实施例2：双嘧达莫1g黄芪总皂苷50g取双嘧达莫加注射用水，加0.5％酒石酸搅拌使之溶解，药液备用；取黄芪总皂苷，加入适量注射用水搅拌使之溶解，药液备用；将上述两药液混合，按体积加入0.5％的针用活性炭，煮沸，保持微沸20min，稍冷滤过，滤液加注射用水适量，调pH值至5.5～7.0，煮沸，4℃冷藏过夜，加注射用水至全量，粗滤、精滤，分装到安瓿瓶，封口灭菌，即得含有50份黄芪总皂苷和1份双嘧达莫小容量注射液或注射用浓溶液。
本发明的实施例3：双嘧达莫30g黄芪总皂苷60g取双嘧达莫加注射用水，加0.65％酒石酸搅拌使之溶解，药液备用；取黄芪总皂苷，加入适量注射用水溶解，药液备用；将上述两药液合并，加入规定量的葡萄糖或氯化钠，混合溶解后按体积加入0.3％的针用活性炭，煮沸，保持微沸30min，稍冷滤过，滤液加注射用水至适量，调pH值至5.5～7.0，煮沸，4℃冷藏过夜，粗滤、精滤，加注射用水至全量，分装，灭菌，即得含有1份双嘧达莫和2份黄芪总皂苷的葡萄糖或氯化钠静脉输液。
本发明的实施例4：双嘧达莫1g黄芪总皂苷10g取双嘧达莫加注射用水，加0.2％枸橼酸搅拌使之溶解，药液备用；取黄芪总皂苷，加适量注射用水，搅拌使溶解，药液备用；将上述两药液合并，调pH值至5.5～7.0，加注射用水至规定量，混匀，加入0.5％的针用活性炭，煮沸30分钟，粗滤，再用0.45μm和0.22μm微孔滤膜滤过，分装到搪瓷盘中，冷冻干燥，第一阶段的平衡冻结温度为0℃时的平衡时间为1.5小时，即搁板温度与产品温度基本一致的时间；第二阶段冻结温度从0℃到最低共熔温度-16℃时，搁板温度与产品温度平衡时间为2小时；第三阶段继续降温至-40℃，约需2小时，保持此温度2小时，直至产品完全冻牢，即开始抽真空，进入干燥程序，在-40℃恒温下-抽真空，缓慢升温，2～4℃/h，至最低共熔点温度，时间约为12小时，升华干燥完成后，继续在低压条件下，升温干燥以除去残余水分，时间约为14～16小时，保持35℃以上干燥1.5小时，在无菌条件下分装到西林瓶中，即得含有双嘧达莫1份和黄芪总皂苷10份的冻干注射用无菌粉末。
本发明的实施例5：双嘧达莫1g黄芪总多糖50g
取双嘧达莫加注射用水和枸橼酸适量，搅拌使之溶解，药液备用；取黄芪总多糖，加入适量注射用水溶解，药液备用；将上述两药液合并，按体积加入0.5％的活性炭，煮沸，保持微沸30min，稍冷滤过，滤液加注射用水至适量，调pH值至5.5～7.0，煮沸，4℃冷藏过夜，加注射用水至全量，粗滤、精滤，在进风温度为180℃，出风温度为50℃，气流速度为18m·s-1的条件下喷雾干燥，分装，即得含有1份双嘧达莫和50份黄芪总多糖喷雾干燥无菌粉末。
本发明的实施例6：双嘧达莫10g黄芪总皂苷1g将双嘧达莫与黄芪总皂苷混合均匀，加入7％的聚乙烯吡咯烷酮、柠檬黄适量，压制成片，即得含有1份双嘧达莫和0.1份黄芪总皂苷的口崩片。
本发明的实施例7：双嘧达莫5g黄芪总皂苷10g将双嘧达莫5g、黄芪总皂苷10g、PEG4000和聚氧乙烯单硬脂酸酯(3∶1)30g混合均匀，置不锈钢容器内，混匀，加热至全部熔融后，保温30min，机械高速搅拌10min至均匀，转移至滴丸机，以二甲基硅油或液体石蜡为冷却剂，滴制，收集滴丸，除去表面的二甲基硅油或液体石蜡，包装，即得含有1份双嘧达莫和2份黄芪总皂苷的滴丸剂。
本发明的实施例8：双嘧达莫10g黄芪总多糖8g将双嘧达莫与黄芪总多糖混合均匀，按主药∶辅料＝1∶1的比例加入硫酸钙，按主药∶辅料＝2∶1的比例加入交联聚乙烯吡咯烷酮和低取代羟丙基纤维素复合辅料混合均匀，制软材，制粒，干燥，整粒，加入适量滑石粉、微粉硅胶，混和均匀，压片，即得含有1份双嘧达莫和0.8份黄芪总多糖分散片。
本发明的实施例9：双嘧达莫1g黄芪总多糖80g将双嘧达莫与黄芪总多糖混合均匀，加入适量淀粉、糊精，制粒，干燥，加硬脂酸镁，包衣，即得含有1份双嘧达莫和80份黄芪总多糖的片剂。
本发明的实施例10：双嘧达莫6g黄芪总多糖3g将双嘧达莫与黄芪总多糖混合均匀，加入3倍量淀粉和1倍量糊精，混合均匀，制粒，干燥，整粒，装胶囊，即得含有1份双嘧达莫和0.5份黄芪总多糖的胶囊剂。
本发明的实施例11：双嘧达莫2g黄芪总多糖30g将双嘧达莫与黄芪总多糖混合均匀，加入0.8倍重量的植物油和1.5％的蜂蜡，滴制法制丸，压制即得含有1份双嘧达莫和15份黄芪总多糖软胶囊剂。
本发明的实施例12：双嘧达莫4g黄芪总多糖、总皂苷2g将双嘧达莫，黄芪总皂苷、总皂苷混匀，加药用淀粉适量，混匀，滚圆法制丸，包装，即得含有1份双嘧达莫和0.5份黄芪总皂苷、总多糖的微丸剂。
本发明的实施例13：双嘧达莫1g黄芪总皂苷及总多糖1g将黄芪总皂苷及总多糖、双嘧达莫混合均匀，溶于磷酸盐缓冲液(0.1M)中备用，将一定比例的豆磷脂、胆固醇溶于十八胺溶液中，加入上述药物的磷酸盐缓冲液溶液中，水浴式超声仪处理10min，得脂质体混悬液，磷酸盐缓冲液定容，过滤除菌，无菌分装，即得脂质体注射液。
本发明的实施例14：双嘧达莫1g黄芪总皂苷10g将黄芪总皂苷、双嘧达莫混合均匀，溶于磷酸盐缓冲液(0.1M)中备用，将一定比例的豆磷脂、胆固醇溶于十八胺溶液中，加入上述药物的磷酸盐缓冲液溶液中，水浴式超声仪处理10min，得脂质体混悬液，磷酸盐缓冲液定容，过滤除菌，无菌分装，即得脂质体注射液。
本发明的实施例15：双嘧达莫1g黄芪总多糖20g将黄芪总多糖、双嘧达莫混合均匀，溶于磷酸盐缓冲液(0.1M)中备用，将一定比例的豆磷脂、胆固醇溶于十八胺溶液中，加入上述药物的磷酸盐缓冲液溶液中，水浴式超声仪处理8min，得脂质体混悬液，低温冷冻干燥后，过180目筛，无菌分装，即得前体脂质体粉针剂。
以上实施例中的双嘧达莫是可直接购买的市售商品，黄芪总皂苷、黄芪总多糖、黄芪总皂苷及总多糖可以用市售的或是本发明提供的黄芪醇提取物、水提取物、水提醇沉提取物、半仿生提取物、超临界萃取物等等，但是：供口服的黄芪有效部位的含量不低于50％，供注射用的黄芪有效部位的含量不低于70％。